NO128370B

NO128370B -

Info

Publication number: NO128370B
Application number: NO04540/68A
Authority: NO
Inventors: C Mccarty; J Berry
Original assignee: Procter & Gamble
Priority date: 1967-11-15
Filing date: 1968-11-15
Publication date: 1973-11-05
Also published as: CH534702A; NL6816356A; DE1808834A1; US3557002A; BE723873A; FI49179B; DK132030C; FR1599043A; AT314450B; DE1808834C3; DK132030B; GB1242596A; SE360675B; DE1808834B2; NL162690B; FI49179C; NL162690C

Description

Foreliggende oppfinnelse angår stabiliserte vandige enzymholdige preparater egnet som rense- og vaskemidler og som omfatter:

1 ) fra 65 til 97 vektprosent vann,.

2) fra 0,001' til 1 ,0 vektprosent av et enzym valgt fra gruppen bestående av proteaser, oc-amylaser og blandinger derav, og 3) eventuelt fra..O til 1 5 vektprosent av , et vaske aktivt middel valgt fra gruppen beståend-e av , ikke-ioni s ke og zwitterioniske vaskeaktive midler, og

h) fra 2 til 27 vektprosent av et stabiliserende middel,

og det særegne ved preparatene i henhold til oppfinnelsen er al

stabiliseringsmidlet er monphydroksyalkoholer med den generelle formel"■.<,-•

hvori R^ er hydrogen eller en alkoksygruppe med formelen R-0-, hvor R ér en alkylgruppe med 1-8 karbonatomer og som kan inneholde 0 eller 1 etergruppe, og R2er en alkylengruppe med '1-U karbon- .: atomer.

Andre trekk ved preparatene i henhold til oppfinnelsen fremgår

av patentkravene.

De vandige losninger av enzymer stabiliseres altså med tilsetning av den angitte type monohydroksyalkoholer. Eventuell ytterligere tilsetning av et ikke-ionisk eller zwitterionisk vaskeaktivt middel forbedrer stabiliseringen og gir onskelige overfiateaktive egenskaper til preparatene.

Enzymer selges vanlig i torr pulverisert form. De pulveriserte enzympreparater må beskyttes mot hoye temperaturer og hoye relative fuktigheter da enzymene ellers hurtig vil nedbrytes og/eller deaktiveres. Om dette se f.eks. "Alcalase", en industriell publika-sjon som utgis av Novo Industri A/S, Kobenhavn, Danmark.' Vandige enzympreparater omsettes vanligvis ikke på grunn av at enzymene nedbrytes og/eller deaktiveres hurtig i'vandige omgivelser.

Det er gjort forsok på å stabilisere enzymer i vandige losninger, se f.eks. US-patentskrift 3-296.09<*>+ hvor delvis hydrolysert og opploseliggjort.kollagen og glycerol anvendes for å stabilisere vandige losninger av proteolytiske enzymer. Denne fremgangsmåte for å stabilisere enzymene krever imidlertid store mengder glycerol, f eks. 35 til 60 vektprosent av den totale losning, og .. oker derfor prisen på enzymlosningen betraktelig.

1 US-paténtskrift 3.095-358 foreslås sorbitol- anvendt for å stabilisere-vandige losninger inneholdende enzymer som f.eks. papain og blandinger av protease ogamylase oppnådd fraBacillus Subtilis. Denne metode, krever også store mengder (65 til 90 vektprosent av én80% sorbitollosning) av det stabiliserende middel sorbitol. Det store volum sorbitol som kreves for å stabilisere enzymene i vandige losninger virker som fortynningsmiddel og oker prisen på preparatet betraktelig.

Disse to tidligere forsok er illustrerende for de vesentlige problemer som man stoter på når man forsoker å stabilisere vandige losninger av enzymer: (1) utgifter.. (2) stor fortynning av det vandige produkt med et stabiliserende middel.

De stabiliserte vandige enzymholdige preparater i henhold til foreliggende oppfinnelse eliminerer de problemer som var forbundet med den tidligere kjente teknikk. Mindre enn 30% åv enzympreparatet utgjores av stabiliserende middel, og de stabiliserende midler 'som anvendes er lett tilgjengelige til rimelig pris. De enzymstabiliserende forbindelser som anvendes ved den foreliggende oppfinnelse besitter nyttige losningsmiddelegenskaper og er derfor onskelige når preparatet anvendes.for detergentformål. Alkoholene, f.eks. etanol, er også utmerkede astringerende midler og tjener således en verdifull funksjon når preparatet anvendes som munnvann. Tilsetning av de.ytterligere ikke-ioniske eller zwitterioniske vaskeaktive komponenter forbedrer stabiliteten av enzymene i det vandige preparat, og. forbedrer de vaskeaktive egenskapene for dette.

Fig. 1 illustrerer den stabiliserende virkning av forskjellige konsentrasjoner av de stabiliseringsmidler som anvendes i en vandig losning innfeholdende 1 % "Alcalase"■ ( 6% krystallinsk enzym) og % étoksylert talgalkohol (1 mol talgalkohol etoksylert med 30 mol etylenoksyd) holdt ved en pH på 7,0. Det fremgår klart at-'-enzymstabiliteten kan optimaliseres ved å anvende angjeldende stabiliseringsmidler i de foretrukne effektive mengder. Det er også-klart-at de foretrukne stabiliseringsmidler, d.v.s. metanol; etanol og isopropanol, kan anvendes for maksimalisering av enzym-stabiliteten over lange lagringsperioder.

Granulerte vaskemiddelblandinger inneholdende enzymer er anvendt

i Europa i adskillige år og er nylig tatt i bruk også i andre land. Disse enzymholdige granulerte vaskemiddelblandinger er.særlig effektive for å fjerne flekker fra tekstiler, husholdingsgjenstander

gulver og vegger. Disse granuDarte - vaskemiddelblandinger er imidlertid: brysomme å-,anvende..i ,små renseoperasjoner.som f.eks.-:-flekkf jernihgi'..'■

Denne mangel overvinnes imidlertid med de foreliggende preparater, idet de-vandige enzymholdige ; preparater, er greie å .-anvende som

flekkfjerrier, vaskemiddelådditiv,^vaskemiddel eller, munnvann. I-tillegg er enzympreparatene stabile over lange lagringsperioder.

Preparatene omfatter tre vesentlige komponenter, nemlig vann, enzymer og, stabiliserende-midler. Ikke-ioniske eller zwitter^ioniske vaskeaktive..midler kan tilsettes^preparatene som eventuelle bestanddeler. Disse komponenter og de mengder hvori' de anvendes heri er droftet i det folgende.

Vann omfatter hovedandelen av preparatene og anvendes generelt i mengder som utgjor fra 65 til. 97 vektprosent av-preparatene og fortrinnsvis fra 72 til 95 vektprosent. Avionisert vann foretrekkes, selv om dette ikke er uomgjengelig nodvendig.

Enzymer som er egnet for denne anvendelse og som stabiliseres

i vandig losning omfatter de alkaliske, noytrale og sure proteaser'og a-amylaser. Proteasene i henhold til denne klassifisering

utvinnes vanlig fra kilder som sopp og bakterier. Enzymer utvunnet fra kilder som planter og dyr kan også.anvendes heriy men klassi-fiseres ikke så greit i de nevnte alkaliske, noytrale og-sure underklasser. Disse enzymer er aktive i pB området fra omtrent 3 til omtrent 11 og ved temperaturer fra omtrent h til omtrent 77°C. Optimal aktivitet av disse proteaser utvises generelt i pH området fra omtrent 5,0 til 10,0 og fortrinnsvis fra 6,0 til 9,5.

Proteasene er særlig effektive for nedbryting av proteinsmuss. Proteasene katalyserer hydrolysen av peptidbindingene i proteiner, polypeptider og beslektede forbindelser. Det oppnås derved frie aminogrupper og karboksylgrupper og de langkjedete proteinstruk-turer reduseres til. flere kortere kjeder. Disse kortere kjeder kan'lett fjernes fra deres omgivelser med vånn eller vandige vaskemiddelblandinger..

De alkaliske proteaser er de enzymer som spesielt foretrekkes. Alkaliske.proteaser som foretrekkes omfatter subtilisin, "BPN", elastase, keratinase, karboksypeptidase, aminopeptidase., aspergillopeptidase A og' aspergillopeptidase B. Subtilisin og "BPN" foretrekkes særlig.. De alkaliske. proteaser foretrekkes særlig da de j fremviser optimal aktivitet i pH-området for normale vaskemiddel- , komponenter, d.v.s. fra 7>5til 10,5,- og de alkaliske proteaser fremviser overraskende;stabilitet i preparatene.

De noytrale proteaser som også kan anvendes i preparatene omfatter kollagenase, chymotrypsin og trypsin og de proteolytiske enzymer som isoleres fra streptomyces-artene. Både chymotrypsin og trypsin fremviser optimal aktivitet i det noytrale til alkaliske området.

Eksempler på sure proteaser som egner seg omfatter pepsin, papain

og bromelin. Både papain og bromelin fremviser optimal aktivitet i det sure til noytrale- pH-område.

Videre kan a-amylasene også stabiliseres i preparatene. Samtlige oc-amylaser fremviser optimal aktivitet i det sure'område,

a-amylasene er særlig'godt egnet for nedbryting av stivelses-' molekyler da de angriper a-^^-glykosidbindingene i stivelse. De gjenværende kortere kjeder fjernes lett fra deres omgivelser med vann eller vandige losninger av vaskemidler, a-amylasene kan oppnås fra animalske kilder, korn, og fra kilder som bakterier eller sopp.

Kommersielle enzymblandinger inneholdende de nevnte enzymer kan anvendes. Disse kommersielle enzymblandinger selges vanlig i torr, pulverisert form bestående av fra omtrent 2 til omtrent 80% aktive enzymer i kombinasjon med en inert pulverisert bærer som f.eks. natrium- eller kalsium-sulfat eller natriumklorid som de ræterende 20 til . 98%. Det aktive enzyminnhold i kommersielle enzymblandinger er resultatet av.de anvendte fremstillingsmetoder og er ikke kritisk så lenge de ferdige preparater.oppnår di angitte enzyminnhold. De uloselige inerte materialer fjernes vanlig fra preparatene for å gi disse en god klarhet uten bunnfall.

Store variasjbher av mengden enzymer i de handelsvanlige blandinger kan forekomme, og de. blandinger som vanlig kan fås i handelen kan inneholde fra omtrent 0,001. til omtrent 1 vektprosent enzymer. For'de beste resultater inneholder blandingene fortrinnsvis fra"0,01 til 0,5 .vektprosent enzymer. Når en av de foretrukne enzymblandinger anvendes heri,■inneholder det ferdige preparat fortrinnsvis fra 0,1 til omtrent ^.vektprosent av enzymblandingen som solgt i kommersiell form., f.eks. inneholdende fra 2 til 80% aktive enzymer. Det aktive enzyminnhold i de vandige enzympreparater i . henhold til oppfinnelsen bor .dog utgjore fra 0,001 til 1 vektprosent som skissert i det foregående.

De stabiliserende midler som stabiliserer de enzymer som er beskrevet ovenfor velges som nevnt fra monohydroksyalkoholer av den angitte type.

Spesifikke 'eksempler på passende monohydroksyalkoholer omfatter metanol, etanol, propanol, isopropanol, butanol og isobutanol. Eksempler på alkoksymonohydroksyalkoholer omfatter metoksymetanol, 2-metoksy-e tanol, 3-metoksypropanol, 2-metoks ypropanol, etoksy-metanol, 2-etoksyetanol, 3-etoksypropanol, 2-etoksypropanol, propoksymetanol, 2-propoksyetanol, 3-propoksypropanol, 2-propoksy-propanol, butoksymetanol, 2-butoksyetanol, 3-butoksypropanol, og 2-butoksypropanol.

Foretrukne stabiliseringsmidler for anvendelse heri er metanol, etanol, isopropanol, propanol, 3-propoksypropanol samt dietylen-glykol-monobutyleter. Metanol, etanol og isopropanol foretrekkes særlig. Metanol og stabiliseringsmidler avledet fra metanol, bor ikke anvendes i vandige enzympreparater for innvortes bruk, på grunn av deres giftighet.

De enzymstabiliserende forbindelser som er beskrevet ovenfor kan, som nevnt, anvendes i preparatene i effektive mengder som utgjor fra 2 til 27 vektprosent av preparatene. For imidlertid å oppnå optimale stabiliserende virkninger for lengre lagringsperioder ved hoye temperaturer, bor stabiliseringsmidlene anvendes i de brukskonsentrasjoner som er angitt i den folgende tabell I som skisserer de mengder av metanol, etanol og isopropanol som må være tilstede' i disse vandige enzympreparater for å bibeholde omtrent 50% enzymaktivitet etter lagring ved 37j8°C i 5 uker.

Vannloselige ikke-ioniske og zwitterioniske vaskeaktive midler kan anvendes som eventuelle bestanddeler i preparatene. Disse vaskeaktive midler forbedrer lagringsstabiliteten av de anvendte enzymer og forbedrer bemerkelsesverdig vaske-egenskapene for preparatene. På grunn av disse nyttige egenskaper foretrekkes det å inkludere ikke-ioniske og zwitterioniske vaskeaktive midler i de vandige enzympreparater, særlig den som inneholder oc-amylase. De ikke-ioniske og zwltter-ioniske vaskeaktive midler kan anvendes heri i mengder som utgjor fra 0 til 15 vektprosent, fortrinnsvis fra h til 10 vektprosent av preparatene.

Når det anvendes oc-amylase,. foretrekkes det å anvende omtrent 2 til 15 vektprosent av det ikke-ioniske eller zwitterioniske vaskeaktive middel;

Eksempler på passende ikke-ioniske vaskeaktive midler for anvendelse heri omfatter:

(1) Polyetylerioksydkondensatene av alkylfenoler, f.eks. konden-sasjons produktene av alkylfenoler med en alkylgruppé inneholdende fra 6 til 12 karbonatomer i enten rett eller f orgrenet kjede--konf iguras jon med etylenoksyd, idet'etylenoksydet er tilstede.i . mengder tilsvarende 5 til.25 mol etylenoksyd pr. moi alkylfenol. . Alkylsubstituenten i disse .forbindelser kan f.eks. avledes fra polymerisert propylen, diisobutylen, okten eller nonen.. (2) De ikke-ioniske syntetiske vaskeaktive midler som avledes fra kondenseringen av etylenoksyd med'det produkt som resulterer fra omsetningen mellom propylenoksyd og etylendiamin..Således.er forbindelser- inneholdende fra omtrent kO til omtrent 80 vektprosent polyoksyetylen og med en molekylvekt på fra. omtrent 5000 til omtrent11.000 og som skriver seg fra omsetningen mellom etylenoksyd-grupper og en hydrofob base bestående av reaksjonsproduktet av"etylendiamin og overskudd av propylenoksyd, idet basen har en molekylvekt på omtrent 2500 til 3000, tilfredsstillende. (3) Kondensasjonsproduktet av 1 mol alifatiske alkoholer med fra 8 til 22 karbonatomer, i enten rettkjedet eller forgrenet kjedekonfigurasjon, med fra 5 til h0 mol etylenoksyd, f.eks. et kokosnott-alkoholetylenoksydkondensat med fra 5 til ^0 mol etylenoksyd pr. mol kokosnottalkohol, idet kokosnottalkoholfraksjonen har fra 10 til 1<>>+ karbonatomer. (!+) De usubstituerte amider_ og monoetanol- og dietanol-amider av fettsyrer med acyldeler med fra omtrent 8 til omtrent 22 karbonatomer. Disse acyldeler avledes vanlig fra naturiig forekommende glycerider, som f.eks. kokosnottolje, palmeolje, soyabonneolje, og talg, men kan fremstilles syntetisk, f.eks. ved oksydasjon av petroleum eller ved hydrogenering av karbonmonoksyd ved hjelp av Fischer-Tropsch prosessen. (5) Langkjedete tertiære aminoksyder tilsvarende den folgende generelle formel

hvori R er et alkylradi-kal med fra omtrent 8 til omtrent 22 karbonatomer, R 2 og RJ 3 er hver metyl, etyl eller hydroksyetyl- 1; radikaler, R er etylen, og n er et tall fra 0 til omtrent 10. Pilen.i formelen er en vanlig angivelse, av en halvpolar binding.

Spesifikke eksempler på aminoksyd-vaskeaktive midler omfatter: dimetyl-dodecylaminoksyd og bis-(2-hydroksyetyl)-dodecylaminoksyd. (6) Langkjedete tertiære fosfinoksyder tilsvarende.den folgende geneielle formel RR'R"P-> 0 hvori R er et alkyl-, alkenyl- eller monohydroksyalkylradikal med fra 10 til 22 karbonatomer i kjede-lengden og R<1>og R" er hver alkyl- eller monohydroksyalkyl-grupper inneholdende fra 1 til 3 karbonatomer. Pilen i formelen er en vanlig representasjon av en halvpolar binding. Eksempler på passende f osf inoksyder finnes i US-patentskrif t 3»30<!>+.263 og omfatter dimetyl-dodecylfosfinoksyd og bis-(2-hydroksyetyl)dodecylfosfinoksyd. (7) Langkjedete sulfoksyder med den generelle formel

■hvori R er et alkylradikal inneholdende fra omtrent 10 til omtrent 22 karbonatomer, fra 0 til omtrent 5 eterbindinger og fra 0 til omtrent 2 hydroksylsubstituenter, idet minst en del av Ry er et alkylradikal inneholdende 0 eterbindinp°og inneholdende fra omtrent 10 til omtrent 18 karbonatomer, og.hvori R 6 er et alkylradikal inneholdende fra 1 til 3 karbonatomer og fra 1 til 2 hydroksylgrupper. Spesifikke eksempler på disse sulfoksyder er: dodecylmetylsulfoksyd og 3-hydroksytridecylmetylsulfoksyd.•

De zwitterioniske syntetiske vaskeaktive midler som kan anvendes kan generelt beskrives som derivater av alifatiske kvartære ammonium- fosfonium- og sulfonium-forbindelser, hvori det alifatiske radikal kan være rettkjedet eller forgrenet, og hvori en ay de alifatiske substituenter inneholder fra omtrent 8 til omtrent 22 karbonatomer og en inneholder en anionisk vann-opploseliggjorende gruppe som f.eks. karboksy-, sulfo-i, f osf ato-eller f osf ono-grupper. EkseMpiér?på;; forbindelser som faller innenfor denne definisjon er 3-(N,N-dimetyl-N-heksadecylammonio)propan-1 -sulfonat og 3~(N,N-dimetyl-N-heksade.cylammonio)-2-hydroksypropan-1-sulf onatFor ytterligere.'eksempler' på zwitterioniske syntetiske vaskeaktive ■ midler, se. canadisk patentskrift 708. lh7, side 6 li-njer 1-22;. "Laundering .Fabrics • in. Cold Water.Containing a Synthetic Detergent Composition".

Blandinger av forskjellige ikke-ioniske vaskeaktive.midler eller blandinger av ikke-ioniske vaskeaktive midler og zwitterioniske vaskeaktive midler kan med fordel anvendes...

De forskjellige komponenter i enzympreparatene i henhold til oppfinnelsen kan blandes sammen ihvilken som helst rekkefolge.. Det foretrekkes imidlertid at-alkohol-vannblandingen fremstilles forst og enzymene tilsettes dertil for å forhindre eventuell nedbryting eller deaktivering i losninger som overveiende består av enten vann eller alkohol. Den eller de eventuelle vaskeaktive komponenter kan tilsettes når som helst.

pH i de stabiliserte vandige enzympreparater er vanlig fra omtrent 5,0 til 10,0 og er fortrinnsvis fra omtrent 6,5 til omtrent 8,5. Maksimale stabiliserende påvirkninger oppnås i det foretrukne pH-ornråde. Videre kan pH okes med en base, f. eks. natrium- eller kaliumhydroksyd, eller senkes med en syre som f.eks. saltsyre.

Det foretrekkes også, selv om dette ikke er obligatorisk, at et konserveringsmiddel tilsettes preparatene for å forhindre vekst av bakterier og sopp. Et særlig godt konserveringsmiddel er fenylmerkuriacetat som generelt anvendes i mengder på fra omtrent-10 til omtrent kO deler pr. million av preparatet..Hvilket som neist konserveringsmiddel som er blandbart med komponentene i preparatene kan anvendes.

Enzympreparatene inneholdende vann, stabiliseringsmidler , ■ enzymer

og eventuelt ikke-ioniske og/eller zwitterioniske vaskeaktive midler kan anvendes som en flekkfjerner, vaskemiddeladditiv eller som en-vaskemiddelblanding. Preparatene kan pakkes i flasker av dusjetypen

og greit anvendes for å fjerne relativt små flekker fra.tekstiler eller kan også anvendes i storre mengder som et vaskemiddel-, additiv. Preparatene kan anvendes i stedet for hypoklorit-bleke-midla? da de fjerner mange av de flekker som disse blekemidler fjerner, og som en ytterligere fordel vil de ikke angripe eller nedbryte fluorescerende bestanddeler og hvitemidler. Med tilsetning av de eventuelle ikke-ioniske og/eller zwitterioniske vaskeaktive midler kan preparatet anvendes som det eneste vaske-, middel i en vaske operas jon.

Preparatme er også brukelige som munnvann. Det alkohol-holdige stabiliserende middel, fortrinnsvis etanol, virker som et astringerende middel mens enzymene er effektive for å fjerne dental-belegg, fjåsne matpartikler fra gingivalhulen og fjerne slimbelegg fra munnen.

Eksempler.

De folgende eksempler skal illustrere oppfinnelsen i detalj og

når disse sees i forbindelse med den foregående beskrivelse, vil oppfinnelsen lettere forstås. Alle deler, prosentmengder og forhold som er angitt er basert på vekt med mindre annet er angitt.

De folgende preparater (eksemplene 1-1.7) ble fremstilt og lagret

i lukkede glassflasker i de angitte tidsrom. Eksemplene 1 , 2 og 2h er ikke eksempler på oppf inreLsen, mener bare tatt med for sammenligningsformål.

Fotnoter til eksemplene 1 til og med 27.

1. "IAE^q" - T mol-talgalkohol etoksylert -med 30 mol.etylenoksyd. 2. "Alcalase" - et. kommersielt proteolytisk enzympre.parat méd et krystallinsk .enzyminnhold på omtrent 6%.. 3. Prosent gjenværende aktivitet ble bestemt ved hjelp av "Azocoll"-metoden. Denne metode er basert på frigivelse av et vannloselig farvestoff fra e: vannuopploselig protein-farvestoff-substrat .("Azocoll") ved hjelp av et proteolytisk enzym. Den mengde farvstoff som frigis under noye kontrollerte betingelser måles spektrofotometrisk. Enzymatisk aktivitet beregnes fra den frigitte mengde farvestoff. Initial aktivitet tilsvarer 100%.

h. 30 deler pr. million fenylmerkuriacetat ble tilsatt hvert preparat for å bremse vekst av bakterier og sopp. pH i hver av

■preparatene i eksemplene 1 til 27 ble holdt på 7?0.

5. "HAPS" - 3-(N-N-dimetyl-N-alkylammonio)-2-hydroksypropan-1-sulfonat hvori alkylgruppen er avledet fra en midlere fraksjon av kokosnottalkoholer: 2% C^ Q, 66% C2, 23% C^^og 9% C^^.

Som det lett sees av eksempel 2 vil proteaser ("Alcalase") nedbrytes og/eller deaktiveres hurtig i vandig lbsning når det ikke er tilstede noe stabiliserende middel. Etter 3 ukers lagring ved 38°C er nær 90% av enzymaktiviteten tapt. Mindre enzymaktivitet g.ikk tapt ved de mildere betingelser, d.v.s. 10°C og 26,7°C, men tapet var meget vesentlig selv ved disse mildere betingelser.

Tilsetningen av et ikke ionisk vaskeaktivt middel "TAE^q" til den vandige enzymlosning Eksempel 1 ) synes å bremse nedbrytning og/ eller deaktivering av enzymene ved lave lagringstemperaturer, men ved hoye lagringstemperaturer synes det ikke-ioniske vaskeaktive middel å oke nedbrytingshastigheten og/éller deaktiveringen av enzymene.

Tilsetning av stabilisefingsmidlene i henhold til oppfinnelsen

i eksemplene 3 til 23 og 25 til 27 resulterer generelt i oket enzymstabilitet ved lagringsbetingelser på 10°C. For imidlertid å oppnå vesentlig oket enzymstabilitet ved hoyere temperaturer, må de foretrukne stabiliseringsmidler, dvs. metanol, etanol, propanol, isopropanol eller 3-ProP°ksypr opand. anvendes i de tidligere beskrevne brukskonsentrasjoner. Eksemplene 5, 9, 11, 12 og 13 illustrerer den foretrukne stabiliserende virkning av de særlig foretrukne stabiliseringsmidler metanol, etanol og isopropanol, ved hoyere temperaturer (8 uker ved 38°C lagring).

De folgende stabiliserte vandige enzympreparater (eksemplene 28-75) ble fremstilt.. I hvert eksempel ble vann og stabiliserings-middel grundig blandet, det ikke-ioniske eller zwitterioniske vaskeaktive middel ble tilsatt og enzymene ble tilsatt til slutt. Enzymene ble stabilisert i hvert eksempel ved lagring med hoy temperatur (38°C) og under lagring ved lavere temperatur (10°C). Alle virker bra som flekkfjernere, vaskemiddeladditiver og somvaskemidler i seg selv. De ikke-ioniske ("TAE^q") og de zwitterioniske ("HAPS") additiver forbedrer lagringsstabiliteten i hvert tilfelle. Fotnoter til eksemplene 28-75. 1. "TAE^q" - et mol talgalkohol etoksylert med 30 mol etylenoksyd. 2. "HAPS" 3-(N,N-dimetyl-N-alkylammonio)-2-hydroksy-:propan-1-sulfonat. (Se fotnote 5, eksemplene 1-27).

3. "Alcalase" - (se fotnote 2, eksemplene 1-2 7).

h. "Wallerstein"- a-amylase fra bakterier, porsjonsnummer 1+51+6A. 5. Hvert preparat i eksemplene 28-75 inneholder 30 deler pr. million fenylmerkuriacetat. • pH i disse preparater ble holdt på 7,0.

Eksempel 76.

Et stabilisert vandig enzympreparat ble sammensatt fra folgende komponenter:

pH for dette preparat ble innstilt til 7,0 med natriumhydroksyd.

Dette preparat ble anvendt i en rekke prover for flekkfjerning .

og vasking som angitt i det folgende. Like sterkt tilsmussete toystykker ble vasket i vandige losninger inneholdende 1 1/ k kopp av en kommersiell vaskemiddelblanding ("Tide") i 73 liter vann med hårdhetsfaktor 7 ved 5^-°C i et tidsrom av10 min.

Preparatene i henhold til oppfinnelsen ble anvendt "som de var", d.v.s. uten fortynning i bloteperioder på 5 min.30 min. og 3 timer.

Fra omtrent ■§■ milliliter til omtrent 1 milliliter av preparatet

ble sproytet direkte, på hvert flekket eller tilsmusset område på omtrent 5 til 10 cm 2. De tilsmussede toystykker ble behandlet i de ovenfor angitte tidsrom og ble så vasket som beskrevet ovenfor i den kommersielle vaskemiddelblanding.

Preparatene ble også anvendt som et tilsetningsmiddel til kommersielle vaskemiddelblandinger. Omtrent 1,2 milliliter av preparatene i henhold til oppfinnelsen ble anvendt pr. ^,55 liter vaskevann i disse vaskinger. Resultatene er summert opp nedenunder.

Eksempel 76

1. Naturlig skitne T-skjorter og putetrekk-toystykker...

2. Spesielt syntetisk tilsmussede toystykker..

3. Blodimpregnerte toystykker erholdt fra det sveitsiske proveinstitutt i St. Gallen, Sveits (Eidgenossiche Material Prufungs und Mersuchsanstant FUr Industrie, Banevesen und Gewenke, Unterstrasse 11., St. Gallen, Sveits).

h. Toystykker tilsmusset med fem forskjellige typer flekker.-

5. Rene bomullstoystykker som måler relativ fornyet avsetning.

6. Naturlig tilsmussede prøvestykker av skjortekraver.

Den mulige gradering for protein utledes på folgende måte:

Seksten separate og forskjellige proteinflekker påfores hvert prove-stykke for proteinproven. Hver flekk, etter vaskecyklusen, graderes visuit etter en skala fra 0 til 5» En gradering på 5 indikerer fullstendig fjernelse (den "mulige gradering") mens 0 indikerer ingen fjernelse. Graderinger'mellom 0 og 5 indikerer mellom-liggende partiell fjernelse. Den mulige proteingradering på 80 avledes ved å multiplisere de seksten flekker med 5 mulige punkter pr. flekk. De mulige graderinger for de andre flekker ble beregnet på samme måte. De totale graderinger viser graden av bredspektret renseevne.

Tilsetningen av preparatene i henhold til oppfinnelsen til vaske-vannet inneholdende de kommersielle vaskemidler oker graderingen (vasking med "Tide" + preparatet) like overfor vaskemiddelvaskingen (vasking med "Tide") med omtrent h0% hvilket indikerer en tydelig rensefordel. Ved å anvende en 5-min. blotlegging okes den totale gradering (5-min. blotlegging vasking med "Tide") med over 70% overfor graderingen for vasking med "Tide" mens en 30 min. eller 3 timers blotlegging oker den totale gradering med nesten 100%

i forhold til graderingen for vasking med "Tide".

Eksempel 77

Et munnvannspreparat ble sammensatt av folgende komponenter:"

Enzymene er stabile over lange lagringsperioder ved relativt

hoye temperaturer. Blandingen er nyttig ved fjerning av tann-belegg på tennene, matpartikler fra munnhulen og slimbelegg i munnen.

Eksempel 78

Resultater omtrent tilsvarende resultatene i de foregående eksempler oppnås når de folgende enzymer eller kommersielle enzymblandinger anvendes i stedet for "Alcalase"' eller "Monsanto CRD protease (DA-10)" ved at enzymene stabiliseres i vandig losning: Subtilisin, "BPN", elastase, keratinase, karboksypeptidase, aminopeptidase, aspergillopeptidase A,'aspergillopeptidase B, collagenase, chymotrypsin, trypsin, pepsin, papain, bromelin, "Maxatase", "Protease B->+000" , Protease AP", CRD Protease", "Viokase", "Pronase-P", "Pronase-E", "Pronase-AS", Pronase-AF", "Biophase", "Rapidase P-2000", "Takamine", "BT proteolytisk enzym 2000", "Enzym L-W" , Rhozym P11" konsentrat, "Pectinol", "Rhozym PF", "Rhozym J-25" og "Amprozym 200".

Resultater tilsvarende, som'i de foregående eksempler oppnås når folgende,stabiliseringsmidler anvendes i stedet for dem som er anvendt i de foregående eksempler for stabilisering av enzymene i vandig losning: metanol, etanol, propanol, isopropanol, butanol, isobutanol, metoksymetanol, 2-metoksyetanol, 3-metoksypropanol, 2-metoksypropanol, etoksyrnetanol, 2-etoksyetanol, 3-etoksypropanoi, 2- etoksypropanol, propoksymetanol, 2-propoksyetanol, 3-propoksy-propanol, 2-propoksypropanol, butoksymetanol, 2-butoksyetanol, 3- butoksypropanol, 2-butoksypropanol, etylenglykolmonobutyleter, dietylenglykolmonobutyleter.

Resultater omtrent tilsvarende, resultatene i eksempel 1 til 76 oppnås når folgende ikke-ioniske og zwitterioniske vaskeaktive midler anvendes i stedet for talgalkohol etoksyJert med 30 mol etylenoksyd pr. mol talgalkohol og 3-(N,N-dimetyl-N-middel-fraksj on-kokosnottalkylammonio)-2-hydroksypropan-1 -sulfonat ved at enzymstabiliseringen forbedres: decylfenoletoksylert med 20 mol etylenoksyd pr. mol decylfenol, heksadecansyreamid, heksadekan-syredietanol.-amid, dimetyldodecylaminoksyd, dimatyldodecyl-fosfinoksyd og dodecylmetylsulfoksyd, kondensasjonsproduktet av etylenoksyd med kondensasjonsproduktet av propylenoksyd med'propylenglykol, idet etylenoksyddélen av forbindelsen utgjor ^ 0%

av den totale vekt av forbindelsen og den samlede molekylvekt av forbindelsen er omtrent 1700, kondensasjonsproduktet av etylenoksyd med kondensasjonsproduktet av propylenoksyd og etylendiamin hvori produktet inneholder omtrent 65 vektprosent polyetylenoksyd og den samlede molekylvekt av forbindelsen er omtrent 6000.

I eksemplene 3 til 2h og 26 til 76 stabiliseres enzymene i det vandige preparat når ikke-ionisk eller zwitterionisk vaskeaktivt middel er tilstede i den vandige losning.

Resultater tilsvarende resultatene i eksemplene 3 til 23 og 2h til 77 oppnås når pH for preparatene holdes på 6,5, 8,0 og 8,5 ved at enzymene stabiliseres i lengre tidsrom. Enzym-stabilisering oppnås også i eksemplene 3 til 23 og 2k til 77 når pH i blandingene holdes ved henhv. 5,0, 9,0 og 10,0.

Claims

1. Stabiliserte vandige enzymholdige preparater egnet som rense- og vaskemidler og som omfatter: 1 ) fra 65 til 97 vektprosent vann, 2) fra 6,001 til 1,0 vektprosent av et enzym valgt fra gruppen bestående av proteaser, cc-amylaser og blandinger derav, 3) eventuelt fra 0 til 15 vektprosent av et vaskeaktivt middel valgt fra gruppen bestående av ikke-ioniske og zwitterioniske vaskeaktive midler, og h) fra 2 til 27 vektprosent av et stabiliserende middel,karakterisert vedat stabiliseringsmidlet er monohydroksyalkoholer med den generelle formel

hvori FL er hydrogen eller en alkoksygruppe med formelen R-0-, hvor R er en alkylgruppe med 1-8 karbonatomer og som kan inneholde 0 eller 1 eter-gruppe, og R ? er en alkylengruppe med 1-hkarbonatomer.

2. Preparat som angitt i krav 1 ,karakterisert vedat det stabiliserende middel er valgt fra gruppen bestående av metanol, etanol, isopropanol, propanol og 3~Propoksy-propanol, hvorav metanol anvendes i mengder fra 16 til 27 vektprosent, etanol anvendes i mengder fra 3 til 19 vektprosent, isopropanol anvendes i mengder fra h til 22 vektprosent, propanol anvendes i mengder fra 2 til 8 vektprosent og propoksy-propanol anvendes i mengder fra 8 til 17 vektprosent.