NL8304497A

NL8304497A - Werkwijze voor het afscheiden van l-tryptofaan.

Info

Publication number: NL8304497A
Application number: NL8304497A
Authority: NL
Original assignee: Mitsui Toatsu Chemicals
Priority date: 1984-01-10
Filing date: 1983-12-30
Publication date: 1985-07-16
Also published as: GB8334071D0; GB2152031A; CH659828A5; AU566747B2; FR2557873B1; GB2152031B; DE3400603A1; FR2557873A1; CA1215068A; AU2274983A

Description

* N.0. 32228 *

Werkwijze voor het afscheiden van L-tryptofaan.

De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor het isoleren van L—trypto faan uit een L—tryptofaan en een micro—organisme bevattend reactiemengsel, dat bij de produktie van L-tryptofaan onder toepassing van het micro-organisme is verkregen.

5 Bij omzettingen onder toepassing van micro-organismen is het nood zakelijk de micro-organismen van de reactieprodukten af te scheiden. Er zijn een aantal werkwijzen bekend voor het verwijderen van de micro-organismen uit de reactiemengsels en het isoleren van de reactieprodukten. In de Japanse octrooipublikatie 16460/1963 wordt bijvoorbeeld een 10 werkwijze beschreven, waarbij een oppervlak-actief middel wordt toegevoegd aan een fermentatievloeistof van L-glutaminezuur, het mengsel wordt verhit om het micro-organisme uit te vlokken ai af te zetten en de afscheiding plaats vindt door filtratie na toevoeging van diatomee-'énaarde; en de Japanse ter inzage gelegde octrooipublikatie 29996/1978 15 beschrijft een werkwijze, waarbij een reactiemengsel, zoals een fermentatievloeistof van een aminozuur, over een ultrafiltratiemembraan wordt gefiltreerd ei het produkt vervolgens door kristallisatie wordt geïsoleerd.

Deze werkwijzen blijken voor industriële toepassing echter niet 20 geheel bevredigend te zijn omdat volgens de wijze, waarop het opper-vlak-actieve middel wordt toegepast, het micro-organisme gemakkelijk kan worden verwijderd, maar het oppervlak-actieve middel niet gemakkelijk kan worden afgescheiden ai waarschijnlijk achterblijft in het reactieprodukt en de werkwijze, waarbij het ultrafiltratiemembraan 25 wordt toegepast, geeft moeilijkheden bij het wassen van de gebruikte apparatuur, dat te wijten is aan de aard daarvan.

Derhalve heeft de uitvinding ten doel een werkwijze te verschaffen voor het isoleren van L-tryptofaan uit een reactiemengsel, dat bij de produktie van L-tryptofaan onder toepassing van een micro-organisme is 30 verkregen, waarbij het micro-organisme op effectieve wijze uit het reactiemengsel wordt verwijderd.

Aan de onderhavige uitvinding lagen uitgebreide onderzoekingen ten grondslag teneinde dit doel te bereiken. Aangezien het algemeen bekend is, dat L-tryptofaan bij verhitting in zure oplossing instabiel is, was | 35 het verrassend, dat werd gevonden, dat wanneer een L-tryptofaan en een micro-organisme bevattend reactiemengsel met een anorganisch zuur wordt ingesteld op een pH van 2-5 en dan wordt verhit, L-tryptofaan stabiel is en het micro-organisme wordt gemodificeerd en uitvlokt tot een 8304497 2 .< * grootte* die gemakkelijk kan worden afgefiltfeerd. · ~ ..

Derhalve wordt volgens de onderhavige uitvinding een werkwijzè voor het isoleren van L-tryptofaan uit een L-tryptofaan en een micro-organisme bevattend reactiemengsel, dat bij de produktie van L-trypto-5 faan onder toepassing van het micro-organisme wordt verkregen, verschaft, waarbij de werkwijze wordt gekenmerkt, doordat men het reactiemengsel met een anorganisch zuur instelt op een pH van 2-5 en het verhit, daarna het uitgevlokte micro-organisme afscheidt door (1) filtratie van het reactiemengsel terwijl L-tryptofaan in volledig opgeloste 10 toestand wordt gehouden of (2) toevoegen van een alkali aan het reactiemengsel om daarin aanwezig L-tryptofaan om te zetten in het alkali-metaalzout ervan en vervolgens dit mengsel te filtreren, terwijl het alkalimetaalzout in volledig opgeloste toestand wordt gehouden, en terugwinnen van L-tryptofaan uit het filtraat.

15 Voorbeelden van het "L-tryptofaan en een micro-organisme bevattend reactiemengsel, dat bij de produktie van L-tryptofaan onder toepassing van het micro-organisme wordt verkregen” (soms eenvoudigweg aangeduid als een reactiemengsel), zoals dit in de onderhavige beschrijving wordt aangeduid, zijn een reactiemengsel, verkregen door omzetting van L-se-20 rine en indool bij aanwezigheid van Escherichia coli, een reactiemengsel, verkregen volgens de boven aangegeven werkwijze onder toepassing van DL-serine in plaats van L-serine en Pseudomonas putida (MT-10182) of Pseudomonas punctata (MT-10243) tezamen met Escherichia coli als een serine-racemase; een reactiemengsel, verkregen onder toepassing van an-25 tranilzuur als precursor bij aanwezigheid van Bacillus subtilis en een reactiemengsel, verkregen onder toepassing van indool, pyrodruivezuur en ammoniak bij aanwezigheid van Aerobacter aerogenes.

Deze L-tryptofaan bevattende reactiemengsels bevatten de gebruikte micro-organismen in de opgeloste of gesuspendeerde toestand. Aangezien 30 het volgens de stand van de techniek zeer moeilijk was de micro-organismen af te scheiden van L-tryptofaan, zijn de kosten van de zuive-ringstrap op industriële schaal hoog.

Wanneer het reactiemengsel een met water niet-mengbaar organisch oplosmiddel bevat, is het gewenst het organische oplosmiddel op ge-35 schikte wijze, zoals door scheiding van vloeistoffen of destillatie, voor de toepassing van de werkwijze volgens de uitvinding te verwijderen .

Wanneer het reactiemengsel onder neutrale tot alkalische omstandigheden wordt verhit, kan het micro-organisme in het reactiemengsel 40 niet worden uitgevlokt tot een materiaal dat in filtreerbare toestand 8 3 0 4 4 9 7 4 - % 3 verkeert. Het micro-organisme wordt daarentegen zeer gemafckelfjk uitgevlokt, wanneer het reactiemengsel na de omzetting met een anorganisch zuur wordt ingesteld op een pH van 2-5 en vervolgens wordt verhit (volgens de werkwijze van de uitvinding). Verrassenderwijs wordt L-trypto-5 faan hierbij niet ontleed en kan het uitgevlokte micro-organisme gemakkelijk door filtratie worden verwijderd. Wanneer na het op de boven beschreven wijze uitvlokken van het micro-organisme een alkali aan het reactiemengsel wordt toegevoegd om L-tryptofaan op te lossen, wordt het uitgevlokte micro-organisme nog in de filtreerbare toestand gehouden.

10 Derhalve betreft de werkwijze volgens de uitvinding een voor industriële toepassing geschikte werkwijze, waarbij onder toepassing van een micro-organisme geproduceerd L-tryptofaan op efficiënte wijze van het reactiemengsel kan worden afgescheiden.

Voorbeelden van bij de werkwijze volgens de uitvinding gebruikt 15 anorganisch zuur zijn zwavelzuur, waterstofchloride en fosforzuur. De pH van het L-tryptofaan bevattende reactiemengsel wordt met een dergelijk anorganisch zuur ingesteld op 2-5, bij voorkeur 3-4. Het reactiemengsel, waarvan de pH is ingesteld, wordt vervolgens op een temperatuur van 60-120°C, bij voorkeur 80-105eC verhit. Door deze instelling 20 van de pH en behandeling met warmte wordt het micro-organisme gemodificeerd en uitgevlokt tot een grootte, die gemakkelijk kan worden afgefiltreerd, terwijl L-tryptofaan zonder enige verandering stabiel blijft.

De tijdsduur van de behandeling met warmte is niet op bijzondere 25 wijze beperkt en de behandeling met warmte kan worden beëindigd op een tijdstip, waarop het micro-organisme in een geschikte toestand is uitgevlokt.

Om het oplossen van het L-tryptofaan in het reactiemengsel te bevorderen kan een alcohol als oplosmiddel worden toegevoegd. Alcoholen 30 met een laag molecuulgewicht, zoals methanol, ethanol en isopropanol verdienen als alcohol de voorkeur, waarbij isopropanol bijzondere voorkeur verdient. De alcohol kan in een zodanige hoeveelheid worden gebruikt, dat de concentratie ervan in het reactiemengsel niet meer dan 70 gew.%, bij voorkeur 40-60 gew.% bedraagt. Wanneer het reactiemengsel 35 een met water niet-mengbaar organisch oplosmiddel bevat, wordt een tevoren bepaalde hoeveelheid van de alcohol toegevoegd nadat het met water niet-mengbare organische oplosmiddel is verwijderd.

Volgens een uitvoeringsvorm van de werkwijze volgens de uitvinding wordt na de bovenvermelde instelling van de pH en de behandeling met 40 warmte het uitgevlokte micro-organisme door filtratie van het reactie- 8304407 ———————— 4 mengsel afgescheiden, wat een water bevattende oplossing van L-trypto-faan geeft. Om de teruggewonnen hoeveelheid L-tryptofaan te verhogen, wordt deze filtratie uitgevoerd terwijl L-tryptofaan in het reactie-mengsel zich in de volledig opgeloste toestand bevindt, namelijk ter-5 wijl de concentratie van L-tryptofaan in het reactiemengsel beneden de oplosbaarheid ervan ligt. Derhalve is het gewoonlijk noodzakelijk het reactiemengsel te verhitten en heet te filtreren of het reactiemengsel volledig te verdunnen met water en het te filtreren. Vanuit het oogpunt van de doelmatigheid van de werkwijze verdient het de voorkeur het fil-10 treren in hete toestand onmiddellijk uit te voeren na de instelling van de pH en de behandeling met warmte. Bij de uitvoering van de filtratie kunnen geactiveerde kool en/of een filtratie-hulpmiddel van het sili-ciumdioxide-type worden toegepast.

Volgens een andere uitvoeringsvorm van de werkwijze volgens de 15 uitvinding wordt als een andere methode voor het doen toenemen van de hoeveelheid van het teruggewonnen L-tryptofaan een alkali toegevoegd aan het reactiemengsel na het instellen van de pH ervan op 2-5 en het verhitten ervan om het micro-organisme uit te vlokken. Zo wordt L-tryp-tofaan volledig opgelost als het alkalizout ervan en daarna wordt het 20 reactiemengsel gefiltreerd, waarbij een water bevattende oplossing van L-tryptofaan wordt verkregen. Volgens de werkwijze van deze uitvoeringsvorm is geen hete filtratie of verdunning zoals bij de boven beschreven uitvoeringsvorm vereist en kunnen de kosten van de voor het verhitten benodigde energie worden bespaard of kan een water bevattende 25 oplossing met een hogere L-tryptofaanconcentratie worden behandeld.

Derhalve is deze uitvoeringsvorm in het algemeen voordelig voor toepassing op industri'éle schaal.

Het alkali, dat moet worden toegevoegd aan het reactiemengsel, dat is onderworpen aan de instelling van de pH en de behandeling met hitte, 30 kan elk alkali zijn, dat door reactie met L-tryptofaan een in water oplosbaar zout kan vormen. Voorbeelden zijn ammoniak, natriumhydroxide, kaliumhydroxide, natriumwaterstofcarbonaat en kaliumwaterstofcarbonaat. In de industrie verdient ammoniak de voorkeur wegens de grote oplosbaarheid ervan in de water bevattende oplossing en het gemakkelijk te-35 rugwinnen ervan.

De hoeveelheid van het alkali is gewoonlijk de hoeveelheid, die vereist is om het reactiemengsel te neutraliseren en het in het reactiemengsel aanwezige L-tryptofaan in het alkalizout ervan om te zetten. Er treden geen ernstige nadelen óp wanneer het alkali in overmaat wordt 40 gebruikt. Aangezien echter op het moment van het verwijderen van 8304497 ' t Γ 9 % 5 L-tryptofaankristallen de pH met een -zuur-wordt ingesteld op het iso-elektrische punt ervan teneinde de opbrengst van het geïsoleerde L-tryptofaan te verhogen» heeft de toepassing van een overmaat van het alkali op ongewenste wijze een toename van de hoeveelheid anorganische 5 zouten tot gevolg·

Bij voorkeur wordt het alkali toegevoegd nadat het met warmte behandelde reactiemengsel is afgekoeld tot 0-50°C» in het bijzonder 5-20°C. Wanneer het alkali bij hogere temperaturen wordt toegevoegd» kan het L-tryptofaan ontleding of racemisatie ondergaan.

10 Wanneer als het alkali ammoniakgas wordt gebruikt» verdient het de voorkeur gekoeld ammoniakgas in het reactiemengsel te blazen teneinde de oplosbaarheid van ammoniak in het reactiemengsel te vergroten· Wanneer een anorganische base» zoals natriumhydroxide» wordt gebruikt heeft de toevoeging daarvan bij kamertemperatuur de vorming van een al-15 kalimetaalzout van L-tryptofaan, dat zeer snel oplost, tot gevolg.

Wanneer geactiveerde kool en/of een filtratiehulpmiddel van het siliciumdioxide-type aan het het alkalizout van L-tryptofaan bevattende reactiemengsel wordt toegevoegd en dit wordt gefiltreerd bij aanwezigheid van het toegevoegde filtratiehulpmiddel, worden de micro-organis-20 men gemakkelijk afgescheiden en kan een water bevattende oplossing van het alkalizout van L-tryptofaan worden verkregen.

L-tryptofaan kan worden teruggewonnen door de verkregen water bevattende oplossing van het alkalizout van L-tryptofaan te onderwerpen aan een gebruikelijke kristallisatiemethode, zoals neutralisatie.

25 In de volgende voorbeelden wordt de uitvinding nader toegelicht.

Voorbeeld I

Een entoog van platina met Escherichia coli werd geënt in 50 ml van een kweekmedim met de onderstaande samenstelling (I), en er werd gedurende 20 uren onder schudden bij 30°C gekweekt. Eén liter van de 30 kweekvloeistof werd gecentrifugeerd en de cellen werden verzameld en gebruikt als een bron van tryptofaan-synthetase.

Kweekmedium-samenstelling (I) vleesextract 1,0 gew.% 35 pepton 0,5 gew.% gistextract 0,1 gew.% KH2PO4 0,2 gew.% pH in de beginfase 7,0 40 Een entoog van platina met Pseudomonas putida (IFO 12996) werd ge- 8304497 « 6 ent in 50 ml van een kweekmedium met de volgende samenstelling (II) en er werd gedurende 20 uren onder schudden bij 30°C gekweekt. Eén liter van de kweekvloeistof werd gecentrifugeerd en de cellen werden verzameld en gebruikt als een bron van serine-racemase.

5

Kweekmediumrsamenstelling (II) vleesextract 1,0 gew.% pepton 0,5 gew.%

NaCl 0,5 gew.% 10 pH in de beginfase 7,0

In een kolf van 300 ml, die was voorzien van een roerder, werden 11,3 g DL-serine, 6,0 g ammoniumsulfaat, 10 mg pyridoxalfosfaat en 66 g water gebracht en er werd goed geroerd. Geconcentreerde ammonia werd 15 aan de verkregen water bevattende oplossing toegevoegd on de pH ervan in te stellen op 8,5. Vervolgens werden 6,8 g (vaste stofgehalte 1,7 g) van een natte crème-achtige koek van Escherichia coli en 3,4 g (vaste stofgehalte 0,85 g) van een natte crème-achtige koek van Pseudomonas putida in water gesuspendeerd, waarbij een suspensie met een totaal vo-20 lume van 20 ml werd gevormd. De verkregen suspensie werd toegevoegd aan de bovengenoemde water bevattende oplossing.

Nadat het mengsel op 35°C werd gehouden, werden 57,2 g van een 11,5 g indool bevattende oplossing in tolueen toegevoegd en werd de omzetting gedurende 48 uren bij 35°C uitgevoerd. De opbrengst van de 25 reactie was kwantitatief.

Het reactiemengsel werd gedestilleerd om tolueen te verwijderen en water werd toegevoegd om de totale hoeveelheid van het mengsel in te stellen op 450 g. Het werd met zwavelzuur ingesteld op een pH van 3,5 en er werden 3 g geactiveerde kool toegevoegd. Het mengsel werd verhit 30 op 95-98eC en gedurende 1 uur bij deze temperatuur gehouden. Het werd bij dezelfde temperatuur heet gefiltreerd, terwijl L-tryptofaan in de opgeloste toestand werd gehouden teneinde geactiveerde kool en het uitgevlokte micro-organisme af te scheiden. Het filtraat werd geconcentreerd tot de L-tryptofaanconcentratie 10 gew.% bedroeg. Het werd afge-35 koeld tot 20°C en de verkregen kristallen werden afgescheiden door filtratie.

L-tryptofaankrlstallen met een zuiverheid van 99,5% werden in een opbrengst van 80%, betrokken op indool, geïsoleerd.

Voorbeeld II

40 Dezelfde omzetting als in voorbeeld I werd uitgevoerd in water on- 8304497 ft 7 m der toepassing van cellen van Escherichia call (MT-10232) en cellen van Pseudomonas punctata (MI-10243), die op dezelfde wijze als in.voorbeeld I waren gekweekt. Het reactiemengsel werd door centrifugeren gefiltreerd teneinde de daarin geprecipiteerde L-tryptofaankristallen en de 5 bij de omzetting gebruikte microbiële cellen af te scheiden*

De crème-achtige koek werd in water gebracht, waarbij de concentratie van L-tryptofaan werd ingesteld op 4,0 gew.Z. Vervolgens werd de pH van de oplossing met fosforzuur ingesteld op 4,0. 2 g geactiveerde kool en 2 g Celite 545 (een handelsnaam voor een produkt van John8-10 Manville Corporation) werden toegevoegd en het mengsel werd gedurende 1 uur bij 95-98eC verhit. Het werd bij dezelfde temperatuur heet gefiltreerd teneinde geactiveerde kool, Celite en uitgevlokte microbiële cellen af te scheiden. Het filtraat werd geconcentreerd tot een L-tryp-tofaanconcentratie van 15 gew.Z en gekoeld tot 20°C. De geprecipiteerde 15 kristallen werden gewonnen door filtratie.

De opbrengst aan geïsoleerd L-tryptofaan was 87Z en de zuiverheid ervan was 99,7Z.

Voorbeeld III

Dezelfde crème-achtige filterkoek, die L-tryptofaan en microbiële 20 cellen omvatte, als was verkregen in voorbeeld II werd gesuspendeerd in een mengsel van water van isopropanol met een volumeverhouding van 1:1 en de concentratie van L-tryptofaan werd ingesteld op 7 gew.Z. Er werd geconcentreerd zoutzuur toegevoegd om de pH van de suspensie in te stellen op 3,5. Geactiveerde kool (3 g) werd toegevoegd en het mengsel 25 werd gedurende 1 uur bij 80-84°C verhit. Het mengsel werd bij dezelfde temperatuur heet gefiltreerd. Het filtraat werd afgekoeld tot 5°C en de geprecipiteerde kristallen werden verzameld door filtratie.

De opbrengst aan geïsoleerd L-tryptofaan was 75% en de zuiverheid was 98,5%.

30 Voorbeeld IV

Dezelfde omzetting als in voorbeeld I werd uitgevoerd. Na verwijderen van tolueen werd het reactiemengsel verdund met water tot de L-tryptofaanconcentratie 1 gew.Z was. De pH van het reactiemengsel werd met zwavelzuur ingesteld op 4,0 en er werd gedurende 2 uren bij kamer-35 temperatuur geroerd om L-tryptofaan op te lossen. Geactiveerde kool (3 g) en 3 g Standard Supercell (een handelsnaam voor een produkt van Johns-Manville Corporation) als een filtreerhulpmiddel werden toegevoegd en de oplossing werd bij kamertemperatuur gefiltreerd. Het filtraat werd geconcentreerd tot de L-tryptofaanconcentratie 10 gew.Z was 40 en vervolgens afgekoeld tot 5°C. De geprecipiteerde cellen werden ver- 830^497

A

» 9 8 zameld door filtratie*

De opbrengst aan geïsoleerd L-tryptofaan was 79% en de zuiverheid ervan was 98,8%.

Voorbeeld V

5 Op dezelfde wijze als in voorbeeld I werden indool en DL-serine in een tolueenoplossing omgezet* De opbrengst van de reactie was kwantitar tief. Tolueen werd door destillatie uit het reactiemengsel verwijderd.

Het verkregen, L-tryptofaan bevattende reactiemengsel werd met zwavelzuur ingesteld op pH 4,0 en gedurende 1 uur bij 95-98°C verhit.

10 Na afkoelen tot kamertemperatuur werd ammoniakgas in het reactiemengsel geblazen teneinde het daarin aanwezige L-tryptofaan als het ammonium-zout ervan op te lossen. Geactiveerde kool in een hoeveelheid van 10 gew.%, betrokken op L-tryptofaan en Celite 545 (een handelsnaam voor een produkt van Johns-Manville Corporation) in een hoeveelheid van 10 15 gew.%, betrokken op L-tryptofaan, werden aan de oplossing toegevoegd en de oplossing werd gefiltreerd. Het micro-organisme werd samen met Celite 545 en geactiveerde kool afgescheiden. Het filtraat werd op 100 °C verhit om ammoniak te verwijderen en de concentratie aan L-tryp-tofaan werd door toevoeging van water ingesteld op 10 gew.%. De oplos-20 sing werd gekoeld tot 20eC en de geprecipiteerde kristallen werden afgescheiden door filtratie, gewassen met water en gedroogd.

De opbrengst aan geïsoleerd L-tryptofaan was 75%, betrokken op het verkregen tryptofaan, en de door vloeistofchromatografle gemeten zuiverheid was 98,5%.

25 Voorbeeld VI

Hetzelfde L-tryptofaan bevattende reactiemengsel als is verkregen in voorbeeld V werd gecentrifugeerd en een mengsel van L-tryptofaan-kristallen en de micro-organismen werd verkregen als een crime-achtige koek. De crème-achtige koek werd in water gebracht, waarbij een suspen-30 sie met een L-tryptofaanconcentratie van 30 gew.% werd gevormd. De pH van de suspensie werd ingesteld op 3,5 en de suspensie werd gedurende 2 uren bij 95-98°C verhit teneinde de bij de omzetting gebruikte micro-organismen uit te vlokken. Na afkoelen tot kamertemperatuur werd water bevattende ammoniak toegevoegd teneinde L-tryptofaan in het reactie-35 mengsel als het atnmoniumzout ervan op te lossen. Aan de oplossing werd 20 gew.% geactiveerde kool, betrokken op L-tryptofaan, toegevoegd en de uitgevlokte microbiële cellen werden bij kamertemperatuur afgescheiden. In het filtraat werd bij verhoogde temperatuur stikstofgas geblazen om ammoniak te verwijderen. Na afkoelen tot 5eC werd het geprecipiteerde 40 L-tryptofaan afgescheiden'door een centrifugale ontwateringsinrichr 83 0 4 4 9 7 Λ « % 9 ting.

De opbrengst van geïsoleerd L-tryptofaan was. 88%, betrokken op het verkregen tryptofaan en de zuiverheid ervan was 98,0%.

Voorbeeld VII

5 Een 12 gew.procents oplossing van L-tryptofaan in water, die op dezelfde wijze als in voorbeeld V was verkregen, werd met fosforzuur ingesteld op pH 4,0 en op 95-98°C verwarmd. Na afkoelen tot 25°C werd een 20 gew.procents oplossing van natriumhydroxide in water toegevoegd teneinde de pH van de oplossing op 10 te brengen. Asm. de water bevat-10 tende L-tryptofaanoplossing werden 10 gew.% geactiveerde kool, betrokken op tryptofaan, en 10 gew.% Standard Supercell (een handelsnaam voor een produkt van Johns-Manville Corporation), betrokken op tryptofaan, als filtreerhulpmiddel toegevoegd en de oplossing werd bij 20°C gefiltreerd. Het filtraat werd met azijnzuur geneutraliseerd tot een pH van 15 6 en de geprecipiteerde kristallen van L-tryptofaan werden afgescheiden door filtratie en gedroogd. De opbrengst aan geïsoleerd L-tryptofaan was 75%, betrokken op het verkregen tryptofaan, en de zuiverheid ervan was 99,2%.

Voorbeeld VIII

20 Een crime-achtige koek van L-tryptofaan, die op dezelfde wijze als in voorbeeld V was verkregen, werd gedispergeerd in een mengsel van war ter en isopropanol in een volumeverhouding van 1:1, waarbij een suspensie met een L-tryptofaanconcentratie van 20 gew.% werd gevormd. De suspensie werd met zwavelzuur ingesteld op pH 3,5 en werd vervolgens gedu-25 rende 2 uren bij 80-84eC verhit. Na afkoelen tot 5°C werd ammoniakgas in het reactiemengsel geblazen teneinde L-tryptofaan in het oplosmiddel als het ammoniumzout ervan op te lossen. Aan de oplossing werd 20 gew.% geactiveerde kool, betrokken op tryptofaan, toegevoegd en de oplossing werd onder zuiging gefiltreerd, wat een lichtgele heldere L-tryptofaanr 30 oplossing gaf. In de oplossing werd onder verwarmen stikstofgas geblazen teneinde ammoniak te verwijderen. De oplossing werd gekoeld en de geprecipiteerde L-tryptofaankristallen werden afgescheiden door filtratie en gedroogd.

De opbrengst aan geïsoleerd L-tryptofaan was 83%, betrokken op het 35 verkregen tryptofaan, en de zuiverheid ervan was 98,8%.

8304497 _ - ___—^

Claims

1. Werkwijze voor het afscheiden van L—tryptofaan uit een L-tryp-tofaan en een miero-organisme bevattend reactiemengsel, dat bij de pro-duktie van L-tryptofaan onder toepassing van het micro-organisme wordt 5 verkregen, met het kenmerk, dat men het reac tiemengsel met anorganisch zuur instelt op een pH van 2-5, het verhit en daarna het verhitte reac-tiemengsel filtreert teneinde het micro-organisme te verwijderen.

2. Werkwijze voor het afscheiden van L-tryptofaan uit een L-tryp-tofaan en een micro-organisme bevattend reac tiemengsel, dat bij de pro- 10 duktie van L-tryptofaan onder toepassing van het micro-organisme wordt verkregen, met het kenmerk, dat men het reac tiemengsel met anorganisch zuur instelt op een pH van 2-5, het verhit, een alkali aan het verhitte reactiemengsel toevoegt teneinde het daarin aanwezige L-tryptofaan om te zetten in het alkalimetaalzout ervan en daarna het reactiemengsel 15 filtreert om het micro-organisme te verwijderen. 11I II l-l 8304497