NL8101068A - Reagens en werkwijze voor de bepaling van aldolase van het menselijke spiertype. - Google Patents
Reagens en werkwijze voor de bepaling van aldolase van het menselijke spiertype. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8101068A NL8101068A NL8101068A NL8101068A NL8101068A NL 8101068 A NL8101068 A NL 8101068A NL 8101068 A NL8101068 A NL 8101068A NL 8101068 A NL8101068 A NL 8101068A NL 8101068 A NL8101068 A NL 8101068A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- aldolase
- muscle type
- antibody
- human muscle
- reagent
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 32
- 108010068561 Fructose-Bisphosphate Aldolase Proteins 0.000 title claims description 23
- 102000001390 Fructose-Bisphosphate Aldolase Human genes 0.000 title claims description 23
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 title claims description 18
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 title claims description 14
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 11
- 101000755879 Homo sapiens Fructose-bisphosphate aldolase A Proteins 0.000 claims description 22
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 12
- 101710123627 Fructose-bisphosphate aldolase A Proteins 0.000 claims description 11
- 102100022277 Fructose-bisphosphate aldolase A Human genes 0.000 claims description 11
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- RNBGYGVWRKECFJ-ZXXMMSQZSA-N alpha-D-fructofuranose 1,6-bisphosphate Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@](O)(COP(O)(O)=O)O[C@@H]1COP(O)(O)=O RNBGYGVWRKECFJ-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 4
- GNGACRATGGDKBX-UHFFFAOYSA-N dihydroxyacetone phosphate Chemical compound OCC(=O)COP(O)(O)=O GNGACRATGGDKBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940025237 fructose 1,6-diphosphate Drugs 0.000 description 4
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010044467 Isoenzymes Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 102000003677 Aldehyde-Lyases Human genes 0.000 description 1
- 108090000072 Aldehyde-Lyases Proteins 0.000 description 1
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 description 1
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 238000005882 aldol condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000001177 diphosphate Substances 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- ZKLLSNQJRLJIGT-UYFOZJQFSA-N keto-D-fructose 1-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)COP(O)(O)=O ZKLLSNQJRLJIGT-UYFOZJQFSA-N 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000029052 metamorphosis Effects 0.000 description 1
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L sodium disulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940001584 sodium metabisulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229960001479 tosylchloramide sodium Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
N.0. 29.94½
Reagens en werkwijze voor de bepaling van aldolase van het mense-lijke spiertype.__
De onderhavige uitvinding heeft betrekking op reagentia en een werkwijze voor de bepaling van aldolase van het menselijke spiertype.
Aldolase is een algemene uitdrukking voor de enzymen, die de 5 aldolcondensatie en de splitsing tussen dihydroxyacetonfosfaat en een verscheidenheid aldehyden katalyseren.
Aldolase volgens de onderhavige uitvinding is bedoeld voor een fructose difosfaat aldolase (E.C. 4* 1· 2. 13· fructose-1, β-fosfaat D-glycelaldehyd-3-fosfaat lyase) dat omkeerbaar fruc-10 tose-1,6-difosfaat tot dihydroxyacetonfosfaat en D-glycelaldehyd- 3-fosfaat ontleedt. Dit enzym neemt de hoofdstroom van het glyco-lysesysteem in en verdeelt zich in het bijzonder in hoofdzaak in de spier en draagt daarbij in aanzienlijke mate bij aan het ener-giemetabolisme· 15 Zoogdieraldolase bevat drie typen isoenzymen, dat wil zeg gen het spiertype (A type), het levertype (B type) en het hersen-type (C type). Het is bekend dat de opbouwverhouding van deze isoenzymen varieert volgens de metamorfose van het levende lichaam, zoals differentiatie van de foetale rattelever, kankervorming van 20 het organisme van de mens, de rat en dergelijke·
Er zijn twee gebruikelijke methoden bekend voor de bepaling van het aldolase van het menselijke spiertype, waarvan een de elektroforetische methode is en de andere een methode is, die de meting inhoudt van de ontledingsactiviteiten van twee substraten, 25 dat wil zeggen fructose-1,6-difosfaat (FDP) en fructose-1-fosfaat (FIP) voor aldolase, [FDP-ALD activiteit en FIP-ALD activiteit!]* waarbij de activiteitsverhouding (FDP/FIP) bepaald wordt.
Deze methoden houden echter verschillende problemen in.
Bij de elektroforese-methode is het probleem, dat de gemi-30 greerde punten van de menselijke aldolase isoenzymen zo dicht bij elkaar geplaatst zijn, dat de onderscheiding moeilijk is en een nauwkeurige kwantitatieve bepaling niet kan worden bereikt.
Bij de meetmethode van de activiteitsverhouding FDP/FIP, wordt er op gewezen, dat de uitvoering bijzonder ingewikkeld is 35 voor de meting van de FIP-ALD activiteit, hetgeen gepaard gaat met een niet-kwantitatieve bepaling.
8101068 ί· Λ 2
Onlangs is er een werkwijze vermeld voor de bepaling van aldolase door middel van een radioimmunoproef door concurrentie (dubbele antilichaammethode). Bij vergelijking met de hiervoor vermelde methoden is deze methode meer uitstekend in de gevoelig-5 heid en ook in de kwantificering· Echter heeft deze methode enkele nadelen, doordat een grote hoeveelheid van het tweede antilichaam vereist is voor de scheiding van B en F, alsmede is de hanterings-methode zelf van de scheiding zeer gecompliceerd, hetgeen resulteert in eisen van een lange tijdsperiode en veel arbeidskosten.
10 Er is verder een verschijnsel waargenomen van niet-specifieke reactie.
De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een met radio-isotoop gemerkt aldolase antilichaam van het spiertype en een werkwijze voor de bepaling van het aldolase van het menselijke 15 spiertype door middel van een radioimmunoproef volgens de zogenaamde ,,sandwich-imethode,, onder toepassing van het hiervoor vermelde aldolase antilichaam als reagens. Volgens deze werkwijze kunnen verschillende nadelen bij de bekende werkwijzen worden opgelost of verminderd. Meer in het bijzonder is de werkwijze van de onderha-20 vige uitvinding opmerkelijk zowel wat betreft de gevoeligheid voor • de bepaling als de kwantitatieve kant van de zaak. Obk bij vergelijking met de dubbele antilichaam-methode wordt de werkwijze van de onderhavige uitvinding gekenmerkt door de punten, dat het tweede antilichaam niet vereist is; de scheidingsmethode voor B en F 25 eenvoudig en doelmatig is en de niet specifieke reactie buitenge woon gering is.
Volgens de zogenaamde sandwich-methode van de onderhavige uitvinding wordt de bepaling van het aldolase van het menselijke spiertype uitgevoerd volgens de volgende trappen: 30 (a) het in aanraking brengen van een monster met een onoplosbaar gemaakt aldolase antilichaam van het spiertype, gevolgd door afscheiding van de vaste fase, (b) het in aanraking brengen van de vaste fase met een met een radioisotoop gemerkt aldolase antilichaam van het spier-type, 35 gevolgd door afscheiding van de vaste fase en (c) bepaling van de radioactiviteit van de vaste fase.
Het volgende zal meer in het bijzonder deze methode toelichten.
Bij de trap (a) wordt een antilichaam, onoplosbaar gemaakt ^0 door combinatie met een drager, tezamen met een monster» zoals S' φ 3 serum, enz. gexncubeerd, zodat het antigeen (aldolase van het menselijke spiertype) in het monster kan reageren met het onoplosbaar gemaakte antilichaam· Nadat de reactie voorbij is wordt de reactieoplossing verwijderd en wordt de vaste fase gewassen met 5 een bufferoplossing, gedestilleerd water* een fysiologische zoutoplossing of dergelijke.
Bij trap (b) wordt de bij trap (a) verkregen vaste fase tezamen met een met een radioisotoop gemerkt antilichaam gexncubeerd* daarin resulterend* dat het met radioisotoop gemerkte antilichaam 10 gecombineerd wordt met het antigeen* dat vooraf gecombineerd was met het onoplosbaar gemaakte antilichaam. Nadat de reactie voorbij is wordt de reactieoplossing verwijderd en wordt de vaste fase met een bufferoplossing, gedestilleerd water, een fysiologische zoutoplossing of dergelijke gewassen.
15 Bij trap (c) wordt de radioactiviteit van de bij trap (b) verkregen vaste fase bepaald onder toepassing van een bekend type scintilatie teller, enz..
De radioactiviteit van het standaard antigeen is vooraf gemeten met dit bepalingssysteem om een standaardkromme van de hoe-20 veelheid antigeen tegen de radioactiviteit op te stellen. De radioactiviteit van een monster wordt gemeten met hetzelfde bepalingssysteem en vervolgens wordt de hoeveelheid antigeen in het monster bepaald uit de standaardkromme.
De bijgevoegde figuur laat een standaardkromme zien van het 25 aldolase van het menselijke spiertype verkregen volgens de radio-immunoproef in voorbeeld 11.
De volgende beschrijving licht het reagens toe voor de met de onderhavige werkwijze te gebruiken bepaling en het aldolase antilichaam van het spiertype toe te passen bij de bereiding van het 30 reagens.
A) Het aldolase antilichaam van het spiertype
Antiserum wordt verkregen door aldolase van het spiertype van een zoogdier zoals mens, konijn, hond, aap, enz. bij een ander dier te immuniseren.
33 Het immune dier wordt bij voorkeur gekozen uit vogelsoorten, omdat aldolasen van het spiertype geen wezenlijk immunologisch verschil tussen de zoogdieren laten zien. Voorbeelden van vogels die de voorkeur verdienen zijn hoenders, kalkoenen, eenden en dergelijke.
kO Bij de zuivering van het verkregen antiserum kan een werkwij- 8101068 .. τ · * ze gebruikt worden, die de toevoeging van het geïnactiveerde serum van het dier, dat de bron van het aldolase van het spier-is typeren de verwijdering door absorptie van het andere onzuivere antilichaam, een affiniteitschromatografie onder toepassing van 5 een drager gecombineerd met het aldolase van het spiertype en dergelijke, inhoudt· B) Met radioisotoop gemerkt aldolase antilichaam van het spiertype
Het merken van het aldolase antilichaam van het spiertype 10 door middel van een radioisotoop kan volgens elke gebruikelijke methode worden bereikt·
Bijvoorbeeld wordt het merken uitgevoerd volgens de chloor- 125 131 amine T methode onder toepassing van J, J, enz. als het radioisotoop of een dergelijke methode.
15 C) Het onoplosbaar gemaakte aldolase antilichaam van het spiertype
Als drager wordt gebruik gemaakt van een onoplosbare vaste stof, die gecombineerd kan worden met een antilichaam. Tot voorbeelden van dergelijke vaste stoffen behoren bijvoorbeeld poly-20 styreen, cellulose, agarose, glas, verknoopt dextran, metaal, enz.. Er kan een vorm vermeld worden zoals een buis, een microtiter-plaat, een poeder, een bol, een schijf, een plaat, een foelie, enz..
Bij de polystyreen microtiter-plaat kan het antilichaam gecombineerd worden met het wandoppervlak van de plaat, wanneer het 25 antilichaam op geschikte wijze verdund is met een bufferoplossing of dergelijke, waarna de verdunde oplossing aan de plaat wordt toegevoegd en het geheel tenslotte wordt bewaard.
De voorafgaande beschrijvingen zijn gedaan met betrekking tot de sandwich-methode, maar het aldolase van het menselijke spier-30 type kan ook bepaald worden volgens de immunoradiometrische proef onder toepassing van een met radioisotoop gemerkt aldolase antilichaam van het spiertype, dat het reagens van de onderhavige uitvinding is. Deze werkwijze omvat de reactie van het met radioisotoop gemerkte antilichaam met een monster (antigeen), gevolgd 35 door scheiding van het met radioisotoop gemerkte antilichaam-anti-geen-reagens (B) van niet-omgezet met radioisotoop gemerkte antilichaam (F) en de bepaling van de radioactiviteit van zowel (B) als (F). Als methode voor de scheiding van (B) en (F) kan de gel-filtratie-methode, de absorptiemethode door middel van onoplosbaar ifO gemaakt antigeen, enz. vermeld worden. .
8101068 /
De volgende experimenten en voorbeelden zullen de onderhavige uitvinding toelichten#
Experiment 1
Aldolase antilichaam van het menselijke spiertype 5 1 mg aldolase van het menselijke spiertype werd opgelost in 0,5 ml van een fysiologische zoutoplossing en de oplossing werd gemengd met het gelijke volume van een compleet toevoegsel volgens Freund. Hep produkt werd geïmmuniseerd door subcutane injectie bij een hoender (witte Leghorn) met intervallen van 1 week, 10 zodat de injecties tot vijfmaal kunnen bedragen. Eén week na de laatste immunisering werd het bloed verzameld uit de hoender, waarbij een anti-serum werd verkregen.
TM
10 g Sepharose 4B— (handelsmerk van Pharmacia Fine Chemicals ABj agarose), dat geactiveerd was met broomcyanide en 15 10 mg aldolase van het menselijke spiertype werden een nacht bij
If°C bewaard in 15 ml van een 0,1 molaire bufferoplossing van na-triumcarbonaat (pH 9*0).
De verkregen Sepharose gel gecombineerd met het aldolase van het menselijke spiertype werd in een kolom gepakt en gewassen 20 met 0,05 molair van een tris-zoutzuur-bufferoplossing (pH 8,0), die 0,5 N natriumchloride bevatte. Aan deze kolom werd het hiervoor vermelde aldolase anti-serum van het menselijke spiertype toegevoegd en het anti-serum werd uitgestroomd met 0,05 molaire tris-zoutzuur-bufferoplossing (pH 8,0), die 0,5 N natriumchloride 25 bevatte. Daarna werd een 0,1 molaire oplossing van natriumcarbo-naat in water aan de kolom toegevoegd om het aldolase antilichaam van het menselijke spiertype te elueren. De fractie van het anti-lichaam-eluaat werd aan dialyse onderworpen met een 0,05 molaire tris-zoutzuur-bufferoplossing (pH 8,0), waarbij 3 mg aldolase 30 antilichaam van het menselijke spiertype verkregen werden.
Experiment 2
Onoplosbaar gemaakt aldolase antilichaam van het menseli.jke spiertype
Aan elk van de holten aangebracht op een polystyreen micro-35 titerplaat werden telkens 200^,ul oplossing van het aldolase antilichaam van het menselijke spiertype toegevoegd, dat was ingesteld op 0D-ort = 0,10 en het geheel werd een nacht bij k°C 2o0 m jo.
bewaard. De oplossing werd van de plaat verwijderd. De plaat werd met gedestilleerd water gewassen, waarbij de micro-titerplaat ge-Z*0 combineerd met het aldolase antilichaam van het menselijke spier- 8101068 b type werd verkregen.
Voorbeeld I 125
Met J-gemerkt aldolase antilichaam van het menselijke spier-typ® 125 5 Na «J van 250^u curie (IQ^ul), 0,5 M fosfaatbuffer (pH 7j4) (12 ,5^ul), aldolase antilichaam van het menselijke spiertype (1,85 mg/ml) (10yUl) en chlooramine-T (3 mg/ml) (12,5^u1) werden 20 seconden met elkaar omgezet in een kleine proefbuis, die met een polysiloxan bekleed is. Nadat de reactie voorbij was werden 10 6 mg/ml (25yUl) natriummetabisulfiet aan het mengsel toegevoegd
om de reactie te doen ophouden. Aan het verkregen mengsel werden kaliumjodide (50 mg/ml) (12,5yUl) en 2 % ei albumine (250yUl) in een 0,05 molaire fosfaatbuffer toegevoegd. Het geheel werd vervolgens onderworpen aan asen gelfiltratie door middel van Sephadex TM
15 G-25~~ (handelsmerk van Pharmacia Fine Chemicals AB; verknoopt 125 dextran), zodat het vrije J kan worden verwijderd. Aldus werd 125 met J gemerkt aldolase antilichaam van het menselijke spiertype verkregen, waarvan de specifieke activiteit 11,6^u curie/yUg was.
20 Voorbeeld II
Radioimmunoproef (sandwich-methode)
Aan elk vah de holten, die verschaft waren op een microti terplaat gecombineerd met aldolase antilichaam van het menselijke spiertype, werden respectievelijk 100^ul van de standaard-op-25 lossing van aldolase van het menselijke spiertype toegevoegd. Het geheel werd 2 uren bij 37°G omgezet. Nadat de reactie voorbij was werd de bovenstaande laag verwijderd en werd de rest driemaal gewassen met een fysiologische zoutoplossing. Aan de gewassen hol- 125 ten werden vervolgens respectievelijk lOO^ul van met J gemerkt 30 aldolase antilichaam van het menselijke spiertype toegevoegd (ongeveer 200.000 cpm). Het geheel werd 16 uren bij kamertemperatuur omgezet. Nadat de reactie voorbij was werd de bovenstaande laag verwijderd* De rest werd driemaal met een fysiologische zoutoplossing gewassen. Nadat het aanwezige water grondig was uitge-35 put, werd de plaat gesneden en werden de respectievelijke holte-gedeelten van elkaar gescheiden. De afzonderlijke evenmatige hoeveelheden werden respectievelijk in kleine proefbuizen geplaatst. De radioactiviteit werd geteld met een bekende scintilatie-teller. Zoals aangegeven in de figuur werd de standaardkromme ver-40 kregen, waarin ongeveer 8 - 1000 ng/ml als meettrajecten waren 8101068 7 uitgezet. In de figuur geeft de horizontale as (logaritme) de concentratie (ng/ml) van aldolase van het menselijke spiertype en de vertikale as de radioactiviteit (cpm) aan.
Aldolasen van het menselijke spiertype in verschillende men-5 selijke sera werden vervolgens bepaald door middel van het hiervoor vermelde proefsysteem. Aldus werden de gegevens waargenomen» dat aldolase van het menselijke spiertype van 25 normale individuen 165 - bO ng/ml bedroegen» die alle minder waren dan 210 ng/ml* Daarentegen vertoonden de aldolasen van het menselijke 10 spiertype van 20 kankerpatiënten hogere waarden dan 210 ng/ml, uitgesloten twee voorbeelden. De 20 kankerpatiënten betroffen 7 hepatomae, 8 maagkankerpatienten, 3 dikke darm kankerpatiënten en 2 leverkankerpatienten.
8101068
Claims (4)
1. Reagens voor de bepaling van aldolase van bet menselijke spiertype gekenmerkt door de aanwezigheid van met radioisotoop gemerkt aldolase antilichaam van het spiertype.
2. Reagens volgens conclusie 1, met het kenmerk, 125 dat het radioisotoop J is.
3. Reagens volgens conclusie 1» met het kenmerk» dat het aldolase antilichaam van het spiertype aldolase antilichaam van het menselijke spiertype is. 10 4» Werkwijze voor de bepaling van aldolase van het menselijke spiertype, met het kenmerk, dat men (a) een monster in aanraking brengt met een onoplosbaar gemaakt aldolase antilichaam van het spiertype, gevolgd door afscheiding van de vaste fase, 15 (b) de vaste fase in contact brengt met met radioisotoop ge merkt aldolase antilichaam van het spiertype, gevolgd door afscheiding van de vaste fase en Cc) de radioactiviteit van de vaste fase bepaalt. ****** 8101068 - — - .9 cpm 9000 - . • / 7000 - / / · 5000 - / 3000 - / / · 1000 - / ·/ I I I I I I
10 SO 100 m SOO 1000 ngfml 8101068
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2799680 | 1980-03-07 | ||
| JP2799680A JPS56125667A (en) | 1980-03-07 | 1980-03-07 | Reagent for measurement and measuring method for human muscle type aldolase |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8101068A true NL8101068A (nl) | 1981-10-01 |
Family
ID=12236425
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8101068A NL8101068A (nl) | 1980-03-07 | 1981-03-05 | Reagens en werkwijze voor de bepaling van aldolase van het menselijke spiertype. |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS56125667A (nl) |
| BE (1) | BE887828A (nl) |
| CA (1) | CA1141291A (nl) |
| CH (1) | CH651933A5 (nl) |
| DE (1) | DE3107268A1 (nl) |
| FR (1) | FR2477573A1 (nl) |
| GB (1) | GB2071318B (nl) |
| IT (1) | IT1136853B (nl) |
| NL (1) | NL8101068A (nl) |
| SE (1) | SE8101404L (nl) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4649039A (en) * | 1984-07-03 | 1987-03-10 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Radiolabeling of methionine-containing proteins and peptides |
| JPH0672893B2 (ja) * | 1985-08-16 | 1994-09-14 | 富士薬品工業株式会社 | ヒト血中のヒトプロリルヒドロキシラーゼの放射性免疫学的測定法による定量法 |
| WO2006067792A2 (en) * | 2004-12-22 | 2006-06-29 | Yeda Research And Development Co. Ltd. At The Weizmann Institute Of Science | Aldolase autoantigens useful in diagnosis and treatment of alzheimer's disease |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5648894A (en) * | 1979-09-25 | 1981-05-02 | Eisai Co Ltd | Reagent for measuring human muscular aldolase and its determination |
-
1980
- 1980-03-07 JP JP2799680A patent/JPS56125667A/ja active Pending
-
1981
- 1981-02-26 DE DE19813107268 patent/DE3107268A1/de not_active Withdrawn
- 1981-03-02 CH CH1389/81A patent/CH651933A5/de not_active IP Right Cessation
- 1981-03-03 FR FR8104174A patent/FR2477573A1/fr active Pending
- 1981-03-04 IT IT20117/81A patent/IT1136853B/it active
- 1981-03-04 SE SE8101404A patent/SE8101404L/ unknown
- 1981-03-05 NL NL8101068A patent/NL8101068A/nl not_active Application Discontinuation
- 1981-03-06 BE BE0/204036A patent/BE887828A/fr not_active IP Right Cessation
- 1981-03-06 CA CA000372438A patent/CA1141291A/en not_active Expired
- 1981-03-06 GB GB8107059A patent/GB2071318B/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GB2071318B (en) | 1983-08-24 |
| SE8101404L (sv) | 1981-09-08 |
| FR2477573A1 (fr) | 1981-09-11 |
| GB2071318A (en) | 1981-09-16 |
| BE887828A (fr) | 1981-07-01 |
| DE3107268A1 (de) | 1982-01-07 |
| IT1136853B (it) | 1986-09-03 |
| IT8120117A0 (it) | 1981-03-04 |
| JPS56125667A (en) | 1981-10-02 |
| CA1141291A (en) | 1983-02-15 |
| CH651933A5 (de) | 1985-10-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI60720C (fi) | Foerfarande och medel foer bestaemning av aktiviteten av kreatinkinas-mb | |
| Cohn | [107] Methods of isolation and characterization of mono-and polynucleotides by ion exchange chromatography | |
| US4366242A (en) | Method and agent for the immunological determination of enzymes | |
| KR20070094950A (ko) | 3,4-ｄｇｅ에서 유래하는 ａｇｅ에 특이적으로 반응하는항체 | |
| US4478934A (en) | Determination of adenosine by immunoassay involving acylation of the adenosine | |
| JPH10511776A (ja) | レセプター：遊離リガンド（リランド）複合体ならびにそれに基づくアッセイおよびキット | |
| NL8101068A (nl) | Reagens en werkwijze voor de bepaling van aldolase van het menselijke spiertype. | |
| JPH0138479B2 (nl) | ||
| US4237044A (en) | Antibodies against creatinekinase-M8 and process for the production thereof | |
| US4808522A (en) | Enzyme immunoassays using inorganic pyrophosphatase | |
| JPH0215827B2 (nl) | ||
| US20240192223A1 (en) | Methods and materials for identifying and treating monoclonal and oligoclonal gammopathies | |
| CA1158549A (en) | Enzyme-labelled muscle type aldolase antibody | |
| EA012438B1 (ru) | Способ и набор для определения тимидинкиназной активности и их применение | |
| Bârzu et al. | Spectrophotometric method for assay of mitochondrial oxygen uptake: II. Simultaneous determination of mitochondrial swelling, respiration, and phosphate esterification | |
| EP0106615B1 (en) | Assay for the free portion of substances in biological fluids | |
| US4330620A (en) | Method and reagent for the determination of creatine kinase MB | |
| PL110972B1 (en) | Method of determination of hormones or drugs total content | |
| Jahngen et al. | Intermediary purine-metabolizing enzymes from the cytosol of Dictyostelium discoideum monitored by high-performance liquid chromatography | |
| US5460975A (en) | Diphenylmethane derivatives, process for their production and their use for the displacement of iodothyronines from proteins which bind them | |
| US5177020A (en) | Method for the immunological determination of heparan sulfate-proteoglycan and process for the preparation and purification of heparan sulfate-proteoglycan suitable for this purpose from tissues containing basal membrane | |
| NO860167L (no) | Fremgangsmaate til bestemmelse av aktiviteten av blodets komplementsystem. | |
| Eckert | Radioimmunoassay | |
| JPH0815261A (ja) | 免疫測定用材料の製造方法 | |
| Moser | Development and use of new affinity ligands for pharmaceutical analysis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A85 | Still pending on 85-01-01 | ||
| BV | The patent application has lapsed |