NL2000373C2 - Antibacteriële middelen. - Google Patents

Description

Antibacteriële middelen

GEBIED VAN DE UITVINDING

5 In de beschrijving zijn antibacteriële verbindingen, hun toepassing als antibacteriële middelen, farmaceutische samenstellingen die deze verbindingen bevatten en werkwijzen voor de bereiding hiervan, beschreven.

ACHTERGROND VAN DE UITVINDING

10

Antibacteriële resistentie is een globaal klinisch en algemeen gezondheidsprobleem dat ontstaan is met een alarmerende snelheid in recentelijke jaren en ongetwijfeld in de nabije toekomst zal toenemen. Resistentie is een probleem in de gemeenschap alsmede in instellingen van gezondheidszorg, waar de transmissie van 15 bacteriën in grote mate vergroot wordt. Aangezien multipele geneesmiddelenresistentie een groeiend probleem is zijn de artsen nu geconfronteerd met infecties waartegen er geen effectieve therapie bestaat. De morbiditeit, mortaliteit en financiële kosten van deze infecties vormen een toenemende last voor gezondheidszorgsystemen in de gehele wereld. Strategieën voor de behandeling van deze problemen onderstrepen een 20 verhoogd toezicht op geneesmiddelenresistentie, een verhoogd natrekken en verbeterd gebruik van antimicrobiële geneesmiddelen, professionele en algemene educatie, ontwikkeling van nieuwe geneesmiddelen en beoordeling van alternatieve therapeutische modaliteiten.

Als resultaat zijn alternatieve en verbeterde middelen nodig voor de behandeling 25 van bacteriële infecties, in het bijzonder voor de behandeling van infecties veroorzaakt door resistente stammen van bacteriën, bijvoorbeeld penicilline-resistente, methicilline-resistente, ciprofloxacine-resistente en/of vancomycine-resistente stammen.

SAMENVATTING VAN DE UITVINDING 30

Een uitvoeringsvorm verschaft een verbinding met formule I: 2000373 2

YïrC

Y

Ra of een zout, solvaat, hydraat of voorgeneesmiddel hiervan.

In de bovenstaande formule is Ri een al dan niet gesubstitueerd pyrazine; 5 R2 en R3 zijn onafhankelijk H of een al dan niet gesubstitueerd C^-alkyl; R4 en R$ zijn onafhankelijk H, een al dan niet gesubstitueerd Q-e-alkyl, een al dan niet gesubstitueerde ether, een al dan niet gesubstitueerd -(CH2)„,aryl, al dan niet gesubstitueerd -0(CH2)maryl, -(CH2)mNR8R9, -(CH2)2ORé, -(CH2)m0P03(Rp>2, -(CH2)m 0C(=O)(CH2)mCH3, -(CH2)m0C(=0)(CH2)mC02R6, -(CH2)m0C(=0)(CH2)mNR*R9, 10 -(CH2)mOC(=0)E of vormen R4 en R5 tezamen de atomen waarmee zij verbonden zijn een al dan niet gesubstitueerde hydrocyclische ring; elke m is onafhankelijk 0,1,2 of 3; E is een al dan niet gesubstitueerde ether; elke Rp is onafhankelijk H, Ci_6 alkyl, benzyl, gesubstitueerd benzyl, fenyl, 15 gesubstitueerd fenyl of vormen (Rp)2 tezamen met de atomen waarmee zij verbonden zijn een al dan niet gesubstitueerde heterocyclische ring; elke R^ is onafhankelijk H, al dan niet gesubstitueerd C14 alkyl, Ci-β acyl of benzyl; R$ en R9 zijn onafhankelijk H, al dan niet gesubstitueerd Ci-é alkyl of Rs en R9 20 vormen tezamen met het stikstofatoom waarmee zij verbonden zijn een al dan niet gesubstitueerde heterocyclische ring; en X en Y zijn onafhankelijk H, halogeen, al dan niet gesubstitueerd C|^ alkyl, -ORé -CN, een al dan niet gesubstitueerde ether, een al dan niet gesubstitueerde heterocyclyl of een al dan niet gesubstitueerd amine.

25 Vormen van de verbindingen kunnen zouten, zoals bijvoorbeeld farmaceutisch aanvaardbare zouten, solvaten, hydraten of voorgeneesmiddelen van de beschreven verbindingen omvatten. De beschreven verbindingen kunnen eveneens onderdeel zijn 3 van een farmaceutische samenstelling die bovendien een farmaceutisch aanvaardbare drager, verdunningsmiddel of excipiënt omvatten.

Dergelijke verbindingen en samenstellingen vertonen een antibacteriële activiteit en kunnen in dit opzicht worden toegepast.

5

GEDETAILLEERDE BESCHRIJVING

In de beschrijving worden verschaft verbindingen met formule I. Wanneer de verbindingen met formule I bijvoorbeeld worden beschreven bij het aanduiden van de 10 verbindingen wordt het ringsysteem als volgt genummerd: χΊ^ΐ|ΐ·*Α Y ily*

Ra

In enkele verbindingen is Ri: 15 bijvoorbeeld "O' ·β 20 f R7 of 4 cc »

In deze uitvoeringsvorm geeft aan een verbindingspunt en de pyrazine kan met een, twee, drie of meer R.7-groepen gesubstitueerd zijn.

R7 is H, halogeen, al dan niet gesubstitueerd Ci^-alyl, al dan niet gesubstitueerd C3-C8 cycloalkyl, al dan niet gesubstitueerd heterocyclyl, een al dan niet 5 gesubstitueerde ether,-CN-(CH2)m0P03(Rp)2, -(CH2)m0C(=0)(CH2)mCH3, -(CH2)mOC (^OXCHzVCOzRi, -(CH2VOC(=0)(CH2)mNR8R9, -(CH2)m0C9=0)E, -(CH2)mC02(CH2)mCH3, -(CH^COXCH^CC^Ré, -(CH2)mC02(CH2)mNR5R9, -(CH2)mC02E, -(CH2)mC(=0)NR6(CH2)mC02R6, -(CH2)nA=0)NR6R9, -(CH^NR^, -(CH2)mP02(Rii)2, -(CH2)n,ORio, die eventueel gesubstitueerd is met -ORn, -(CH2)mC 10 (=0)0Rn, -(CH2)mNRiiSOnRi2» -(CH2)mSOnRi2, -(CH2)mSO„NR«R9, al dan niet gesubstitueerd aryl, of al dan niet gesubstitueerd heteryaryl; • elke m is zoals hierboven, elke n is onafhankelijk 0,1 of 2;

Rio is H, al dan niet gesubstitueerd Ci-6-alyk, -PC>3H2, C(=0)Ri3, C(=0)0Rj3 of C(=0)NR*R9; en 15 Ru, Ri2 en R13 zijn onafhankelijk H, al dan niet gesubstitueerd Ci^-alkyl, al dan niet gesubstitueerd aminoalkyl, een aminozuurresidu of een peptideresidu. Voorbeelden van aminozuurresiduen omvatten alanine, asparginezuur, glycine, glutaminezuur, histidine, lysine of valine.

In enkele gevallen kan een stikstof van de pyrazinering gesubstitueerd en 20 bijvoorbeeld met een zuurstof in g-SK-C.

die weergegeven kan worden als 25 5 J-tK.

In bepaalde verbindingen is X H, Y is H of zijn X en Υ Η. In andere verbindingen is X F, Y is F of zijn beide X en Y F. In deze en andere verbindingen S kunnen R2 en R3 methyl zijn. In enkele verbindingen kan X al dan niet gesubstitueerd -OR* zijn en in sommige gevallen kan R$ ethyl zijn. Op een andere wijze kan Xij een al dan niet gesubstitueerde ether of een amine zijn.

In enkele uitvoeringsvormen kunnen X, Y of beide een al dan niet gesubstitueerde ether zijn. In de verbindingen kan geen, een of beide van de groepen R4 10 en R5 H zijn. R4 en R5 kunnen eveneens onafhankelijk van elkaar ether zijn.

Op een andere wijze kunnen X, Y of beide onafhankelijk van elkaar al dan niet gesubstitueerd amine zijn. Wanneer X of Y een al dan niet gesubstitueerd amine is dan kan de groep onafhankelijk door de formule -(CHajmNRgRg worden weergegeven en elke m, Rg en R9 is onafhankelijk van elkaar m, Rg en R9 hebben waarden op andere 15 posities. Wanneer elke Rg en R9 tezamen met het atoom waarmee zij verbonden zijn een al dan niet gesubstitueerde heterocyclische ring zijn, kan de ring een monocyclische ringsysteem bijvoorbeeld een systeem dat drie tot acht ringatomen bevat dan wel kan het ringsysteem een bi- of polyheterocyclisch ringsysteem zijn. Bovendien een of meer ringatomen naast het stikstofatoom waarmee Rg en R9 20 verbonden zijn kan uit niet-koolstofatomen, bijvoorbeeld N, O of S gekozen zijn.

In enkele uitvoeringsvormen zijn R4 en R$ gelijk, bijvoorbeeld wanneer beide H zijn. R4 en R5 kunnen eveneens al dan niet gesubstitueerd -(Cltjmaryl of-0(CH2)m-aryl zijn zoals al dan niet gesubstitueerd benzyl of al dan niet gesubstitueerd -Obenzyl.

In bepaalde verbindingen wanneer Rg en R9 tezamen met het atoom waarmee zij 25 verbonden zijn een al dan niet gesubstitueerd heterocyclische ring vormen kan de heterocyclische ring drie, vier, vijf, zes, zeven, acht of meer ringleden bezitten en omvatten een, twee, drie of meer heteroatomen zoals N, O of S. Specifieke voorbeelden van deze heterocyclische ringen omvatten morfoline en piperazine of een gesubstitueerd piperazine.

30 In bepaalde uitvoeringsvormen kunnen Rn, R12 of R13 een aminozuurresidu zijn.

Aminozuurresiduen zijn moleculen die zowel amino als carbonzuur functionele groepen bevatten. Enkele aminozuren kunnen worden weergegeven door de formule 6 -C(=0)CH(Z)NHRa, waarin Z alleen een zijketen kan zijn van een in de natuur voorkomen of een niet in de natuur voorkomend aminozuur. In cyclische aminozuren zoals praline kan Z in combinatie met Ra een zijketen zijn van een al dan niet in de natuur voorkomend aminozuur. Wanneer Ra geen onderdeel is van de 5 aminozuurzijketen dan is Ra in het algemeen H. Aminozuren en petpiden kunnen via C of N verbonden zijn. Voorbeelden van aminozuren omvatten alanine, arginine, asparagine, asparaginezuur, cysteine, glutaminezuur, glutamine, glycine, histidine, isoleuchine, leucine, lysine, methionine, fenylalanine, praline, serine, threonine, tryptofan, tyrosine en valine. Andere aminozuren omvatten gamma-aminoboorzuur 10 (GABA), carnitine, ornithine, citrulline, homocysteine, hydroxyproline, hydroxylysine, en sarcosine. De aminozuren kunnen in de L- of D-configuratie zijn.

Op een andere wijze kunnen Ri i, R12 of R13 een petideresidu zijn die via C of N verbonden is. Peptiden zijn aminozuren die met elkaar via peptidebindingen verbonden zijn en kunnen lineaire of vertakte ketens zijn. Geschikte peptiden kunnen dipeptiden, 1S tripeptiden, tetrapeptiden of meer omvatten waarin de aminozuurresten die het peptide vormen gelijk of verschillend kunnen zijn.

In enkele uitvoeringsvormen vormen (Rp)2 tezamen met de atomen waarmee zij verbonden zijn een al dan niet gesubstitueerde heterocyclische ring. In enkele verbindingen kunnen de zuurstofatomen verbonden zijn via een alkyl, aryl of alkyl-20 aryl-alkylbrug zoals bijvoorbeeld in of 25

In enkele van de verbindingen elke E of ether heeft onafhankelijk de formule 7 - [(CV 2)pO(C V 2)p]q waarin elke p is onafhankelijk 0, 1, 2, 3, 4, 5 of 6, elke q is onafhankelijk 1,2,3,4, 5 of 6, elke V is onafhankelijk H of een andere —[(CV2} pO(CV2)p]q· Voorbeelden van deze verbindingen omvatten het geval waarbij elke E of ether onafhankelijk de formule -[CH2)pO(CH2)p]q heeft waarin elke p 5 onafhankelijk 0,1,2,3 of 4 en elke q onafhankelijk 1,2,3 of 4 is.

In sommige specifieke uitvoeringsvormen zijn X en Y F, R2 en R3 zijn methyl en R4 en R5 zijn H. In verdere specifieke uitvoeringsvormen is X F, Y is H, R2 en R3 zijn methyl en R* en R5 zijn H. In verdere specifieke uitvoeringsvormen is X Η, Y is F, R2 en R3 zijn methyl en R* en R$ zijn H. In enkele specifieke uitvoeringsovrmen zijn X en 10 Y H, R2 en R3 zijn methyl en R4 en R5 zijn H. In verdere specifieke uitvoeringsvormen zijn X en Y F, R2 en R3 zijn methyl en R4 en R5 zijn al dan niet gesubstitueerde ether, -CH2)mNR8R9, -(CH2)mOR6, -(CltVOPOaiRpk, -(CH2)mOC(=OXCH2)mCH3, -(CH2)m0C(=0)(CH2)mC02R6, -(CH2)mOC(K))(CH2)mNReR9 of-(CH2)mOC(-0)E. In bepaalde van deze uitvoeringsvormen is m 1 of 2. In andere specifieke 15 uitvoeringsvormen is X F, Y is H, R2 en R3 zijn methyl en R4 en R5 zijn al dan niet gesubstitueerde ether, -(CH2)mNR8R9, -(CH2)mOR6, -(CH2)mOP03(Rp)2, -(CH2)mOC(=OXCH2)niCH3, -(CH2)m0C(=0)(CH2)mC02R6, -(CH2)m0C(=0)(CH2)raNR8R9 of -{CH2)mOC(=0)E. In bepaalde van deze uitvoeringsvormen is m 1 of 2. In bepaalde van deze verbindingen kan R7 H, Ci^-alkyl 20 zoals methyl, -NReR9 dan wel -OR10 zijn. In andere uitvoeringsvormen is R7 een al dan niet gesubstitueerde ether, -(CH^OPC^Rp^, -(CH2)mOC9=0)(CH2)mCH3, -(CH2)m0C9=0)(CH2)mC02R6,-(CH2)m0C(=0)(CH2)mNR8R9,-(CH2)in0C(=0)E, -(CH2)mC02(CH2)mCH3, -(CH2)mC02(CH2)mC02R6, -(CH2)mC02(CH2)mNR8R9, -(CH2)mC02E, -(CH2)mC(=0)NR6(CH2)mC02R6, -(CH2)mC(=0)NReR9, -(CHa^NReR,, 25 -(CH2)mP03(R„)2, -(CH2)mC(=0)0Rn, -(CH2)mNRnSO„R,2, -(CH2)mSO„R,2 of -(CH2)mSOnNR8R9. In bepaalde van deze uitvoeringsvormen is m 1 of 2.

In een ondergeschikte serie van deze verbindingen met de formule 1 kunnen de verbindingen de in formule Ib hieronder weergegven stereochemie hebben: 8 /° R4N-< νν\··Γ xy^N^-«R2 y

Elke uitvoeringsvorm die in de beschrijving beschreven is kan worden gecombineerd met elke andere geschikte uitvoeringsvorm beschreven in de 5 beschrijving waarbij additionele uitvoeringsvormen verkregen worden. Bijvoorbeeld daar waar een uitvoeringsvorm afzonderlijk of tezamen mogelijke groepen voor Ri, R2, R3, R4, R5 etc. omvat en een afzonderlijke uitvoeringsvorm mogelijke R7-groepen omvat is het vanzelfsprekend dat deze uitvoeringsvormen gecombineerd kunnen worden ter verkrijging van een uitvoeringsvorm die mogelijke groepen voor Ri, R2, R3, 10 R4, Rs etc. met de mogelijke R7-groepen omschrijven. Met betrekking tot de bovenstaande verbindingen en de door de gehele aanvrage heen en de conclusies hebben de volgende termen de hieronder aangegeven betekenissen.

De term “acyl” heeft betrekking op groepen met een dubbel gebonden koolstof aan een zuurstofatoom zoals de structuur -C(=0)R. Voorbeelden van R kunnen H zoals 15 in aldehyde, een koolwaterstof zoals bijvoorbeeld in een keton, -NReRg zoals in een amide, -ORé zoals bijvoorbeeld in een carbonzuur of ester, -OOCR2, zoals in een acylanhydride of een halogeen, zoals bijvoorbeeld in een acylhalogenide omvatten.

De term “alkenyl” heeft betrekking op lineaire of vertakte koolwaterstoffen zoals die beschreven met betrekking tot de alkylgroepen beschreven in de beschrijving welke 20 ten minste één dubbele binding omvatten die tussen twee koolstofatomen bestaat. Voorbeelden omvatten vinyl, -CH=C(H)(CH3). -CH=C(CH3)2, -C(CH3)=C(H)2, -C(CH3)=C(H)(CH3), -C(CH2CH3)=CH2, cyclohexenyl, cyclopentenyl, cyclohexadienyl, butadienyl, pentadienyl, en hexadienyl onder andere. Een alkenylgroep kan eventueel gesubstitueerd zijn bijvoorbeeld daar waar 1,2,3,4,5,6, 25 7,8 of meer waterstofatomen vervangen zijn door een substituent gekozen uit de groep bestaande uit halogeen, halogeenalkyl, hydroxy, thiol, cyaan en -NRgRg.

De term “alkyl” heeft betrekking op koolwaterstofketens bijvoorbeeld Ci^-ketens die geen heteroatomen bevatten. Dus de term omvat lineaire alkylgroepen zoals methyl, 9 ethyl, propyl, butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl, decyl, undecyl, dodecyl en dergelijke. De term omvat tevens vertakte isomeren of lineaire alkylgroepen waaronder maar niet beperkt tot de volgende die bij wijze van voorbeeld gegeven worden: -CH(CH3)2, -CH(CH3)(CH2CH3), -CH(CH2CH3)2, -C(CH3)3, -C(CH2CH3)3, 5 -CH2CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)(CH2CH3), CH2CH(CH2CH3)2, -CH2C(CH3)3, -CH2C(CH2CH3)3, -CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3), -CH2CH2CH(CH3)2, -CH2CH2CH(CH3)(CH2CH3), -CH2CH2CH(CH2CH3)2, -CH2CH2C(CH3), -CH2CH2C9CH2CH3)3, -CH(CH3)CH2CH(CH3)2, -CH9CH3)CH(CH3)CH(CH3)2, -CH(CH2CH3)CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3) en andere. De term omvat primaire 10 alkylgroepen, secundaire alkylgroepen en tertiaire alkylgroepen. Alkylgroepen kunnen verbonden zijn met een of meer koolstofatomen, zuurstofatomen, stikstofatomen en/of zwavelatomen in de ouderverbinding. Een alkylgroep kan eventueel gesubstitueerd zijn bijvoorbeeld daar waar 1,2, 3,4,5,6 of meer waterstofatomen vervangen zijn door een substituent gekozen uit de groep bestaande halogeen, halogeenalkyl, hydroxy, thiol, 15 cyaan en -NRgRg.

De term “alkyleen” heeft betrekking op een lineaire of vertakte tweewaardige koolwaterstofrest in het algemeen met twee tot tien koolstofatomen.

De term “alkynyl” heeft betrekking op lineaire en vertakte koolwaterstofgroepen zoals die beschreven met betrekking tot alkylgroepen zoals zij in de beschrijving 20 beschreven zijn behalve dat ten minste één drievoudige binding bestaat tussen twee koolstofatomen. Voorbeelden omvatten -C=C(H), -C=C(CH3), -OC(CH2CH3), -C(H2)C=C(H), -C(H)2C^C(CH3) en onder andere -C(H>20C(CH2CH3). Een alkynylgroep kan eventueel gesubstitueerd zijn bijvoorbeeld daar waar 1,2,3,4, 5,6, 7, 8 of meer waterstofatomen vervangen zijn door een substituent die gekozen is uit de 25 groep bestaande uit halogeen, halogeenalkyl, hydroxy, thiol, cyaan en -NR^Rq.

De term “aminoalkyl” heeft betrekking op een alkylgroep zoals hierboven verbonden met een aminogroep die uiteindelijk kan zijn een primaire, secundaire of tertiaire aminogroep. Een voorbeeld van een aminoalkylgroep is de -NRgR<rgroep waar een of beide van de groepen R« en R? een al dan niet gesubstitueerd Ci^-alkyl is dan 30 wel Rs en R9 tezamen met het atoom waarmee zij verbonden zijn een al dan niet gesubstitueerd heterocyclische ring. Specifieke aminoalkylgroepen omvatten -NHCH3, -N(CH3)2, -NHCH2CH3, -N(CH3)CH2CH3, -N(CH2CH3)2, -nhch2ch2ch2, -N(CH2CH2CH3)2 en dergelijke. Additionele aminoalkylgroepen omvatten: 10 -0H;OvO:-0-0: -

Een aminoalkylgroep kan eventueel gesubstitueerd zijn met 1, 2,3,4 of meer niet-waterstofsubstituenten bijvoorbeeld daar waar elke substituent onafhankelijk gekozen is uit de groep bestaande uit halogeen, cyaan, hydroxy, Ci^-alkyl, Ci^-alkoxy, C1-2-5 alkyl gesubstitueerd met een of meer halogeenatomen, Cj-2-alkoxy gesubstitueerd met een of meer halogeenatomen, -C(0)R6, -C(0)OR6, -S(0)„R6 en -NR&R9. Deze substituenten kunnen gelijk of verschillend zijn en kunnen gelocaliseerd zijn op elke positie op de ring die chemisch toelaatbaar is.

De term “aryl heeft betrekking op cyclische of polycyclische aromatische ringen 10 in het algemeen met 5 tot 12 koolstofatomen. Dus de term omvat maar is niet beperkt tot groepen zoals fenyl, bifenyl, antracenyl, naftenyl bij wijze van voorbeeld. De uitdrukking “niet gesubstitueerd aryl” omvat groepen die gecondenseerde ringen bevatten zoals naftaleen. Niet gesubstitueerde arylgroepen kunnen gebonden zijn aan * een of meer koolstofatomen, zuurstofatomen, stikstofatomen en/of zwavelatomen in de 15 ouderverbinding. Gesubstitueerde arylgroepen omvatten methoxyfenylgroepen zoals paramethoxyfenyl.

Gesusbtitueerde arylgroepen omvatten arylgroepen waarin een of meer aromatische koolstofatomen van de arylgroep gebonden is aan een al dan niet gesubstitueerd alkyl, alkeen, alkynylgroep of een heteroatoom bevattende groep zoals 20 in de beschrijving beschreven is. Dit omvat bindingsopstellingen waarin twee koolstofatomen van een arylgroep verbonden zijn met twee atomen van een alkyl, alkenyl of alkynylgroep om een ringsysteem te definiëren bijvoorbeeld dihydronaftyl of tetrahydronaftyl. Dus de term “gesubstitueerd aryl” omvat maar is niet beperkt tot tolyl en hydrofenyl onder andere. Een arylrest kan eventueel gesubstitueerd met 1,2,3,4 of 25 meer waterstofsubstituenten bijvoorbeeld daar waar elke substituent is onafhankelijk gekozen uit de groep bestaande uit halogeen, cyaan, hydroxy, Cj^-alkyl, Ci^-alkoxy, Ci-2-alkyl gesubstitueerd met een of meer halogenen, Ci-2-alkoxy gesubstueerd met een of meer halogenen, -C(0)R6, -C(0)0Ré, -S(0)nRi en -NR8R9. Deze substituenten kunnen gelijk of verschillend zijn en kunnen op elke positie van de ring die chemisch 30 toelaatbaar gelocaliseerd zijn.

11

De term “cycloalkyl” heeft betrekking op cyclische koolwaterstofketens in het algemeen met 3 tot 12 koolstofatomen en omvat cyclische alkyl groepen zoals cyclopropyul, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl en cyclooctyl en deze ringen zijn gesubstitueerd met lineaire en vertakte alkylgroepen zoals zij in de 5 beschrijving beschreven zijn. De uitdrukking omvat tevens polycyclische alkylgroepen zoals maar niet beperkt tot adamantyl, norbomyl en bicyclo[2,2,2]octyl en deze ringen gesubstitueerd met lineaire en vertakte alkylgroepen zoals zij in de beschrijving beschreven zijn. Cycloalkylgroepen kunnen al dan niet verzadigd zijn en kunnen verbonden zijn met een of meer koolstofatomen, zuurstofatomen, stikstofatomen en/of 10 zwavelatomen in de ouderverbinding. Een cycloalkylgroep kan eventueel gesubstitueerd zijn bijvoorbeeld daar waar 1,2, 3,4 of meer waterstofatomen vervangen zijn door een substituent gekozen uit de groep bestaande uit halogeen, cyaan, hydroxy, Ci.6-alkyl, Ci-6-alkoxy, Ci-2-alkyl gesubstitueerd met een of meer halogenen, C^-alkoxy gesubstitueerd met een of meer halogenen, -C(0)R$, -C(0)ORe, 15 -S(0)nRé en -NRgR9.

Ethers zoals zij in de beschrijving gebruikt zijn omvatten genetisch monoethers, polyethers, lineaire ethers, vertakte ethers en cyclische ethers. Lineaire ethers kunnen de structuur -[(CH2)pO(CH2)p]qCH3 hebben waarin elke p onafhankelijk 0,1,2,3,4, 5 of 6 is en q is 1,2, 3,4,5 of 6. Vertakte ethers kunnen de formule 20 -[(CV2)pO(CV2)p]qCH3 hebben waarin elke V is onafhankelijk H of een andere [(CV2)pO(CV2)p]qCH3-groep. Cyclische ethers kunnen de formule upy hebben wanneer p en q zijn zoals hierboven en ^λαλλ geeft aan een verbindingspunt. Specifiek als etherverbindingen zijn er -dimethylether, -methylethylether, -methoxyethylether, -diethylether, -methyl-t-butylether, -methylcellosolve, -ethyleen-glycoldimethylether, -diethyleenglycoldimethylether, -triethyleenglycoldimetylether, -tetraaethyleenglycoldimethylether, -tetrahydrofuran, -1,4-dioxaan en dergelijke.

25 De term “halogeen” heeft betrekking op fluor, chloor of jood.

12

De term “halogeenalkoxy” heeft betrekking op een alkylgroep waarin ten minste een, bijvoorbeeld 1, 2, 3, 4, 5 of meer waterstofatomen vervangen zijn door een halogeen. Voorbeelden van geschikte halogeenalkylen omvatten chloormethyl, difluormethyl, trifluormethyl, l-fluor-2-chloorethyl, 5-fluorhexyl, 3-difluorisopropyl, 5 3-chloorisobutyl etc.

De term “heterocyclyl” of “heterocyclische ring” heeft betrekking op aromatisch, niet-aromatisch, al dan niet verzadigde ringverbindingen waaronder monocyclische, bicyclische en polycyclische ringverbindingen waaronder aangecondenseerde, brugvormende of spirosysternen zoals maar niet beperkt tot chinyclidyl, bevattende 1, 10 2,3 of meer ringleden waarvan een of meer een heteroatoom is zoals bijvoorbeeld maar niet beperkt tot N, O, P en S. Niet gesubstitueerde heterocyclylgroepen omvatten aangecondenseerde hydrocyclische ringen zoals benzimidazolyl. Vooorbeelden van heterocyclische groepen omvatten onverzadige 3 tot 8 leden bevattende ringen die 1 tot 4 stikstofatomen bevatten zoals maar niet beperkt tot pyrrolyl, pyrrolinyl, imidazolyl, 15 imidazolidinyl, pyrazolyl, pyridyl, dihydropyridyl, pyrimidyl, pyrazinyl, pyridazinyl, triazolyl (bijvoorbeeld 4H-l,2,4-triazolyl, lH-l,2,3-triazolyl, 2H-l,2,3-triazolyl etc.), tetrazolyl (bijvoorbeeld lH-tetrazolyl, 2H-tetrazolyl, etc); verzadigde ringen met 3 tot 8 leden die 1 tot 4 stikstofatomen bevatten zoals bijvoorbeeld maar niet beperkt tot pyrrolidinyl, piperidinyl, piperazinyl, aangecondenseerde onverzadigde heterocyclische 20 groepen die 1 tot 4 stikstofatomen bevatten zoals bijvoorbeeld maar niet beperkt tot indolyl, isoindolyl, indolinyl, indolizinyl, benzimidazolyl, chinolyl, isochinolyl, indazolyl, benzotriazolyl; verzadigde 3 tot 8 leden bevattende ringen die 1 tot 4 zuurstofatomen bevatten zoals bijvoorbeeld maar niet bepekt tot tetrahydrofuran; onverzadigde 3 tot 8 leden bevattende ringen die 1 tot 2 zuurstofatomen en 1 tot 3 25 stikstofatomen bevatten zoals bijvoorbeeld maar niet beperkt tot oxazolyl, isoxazolyl, oxadiazolyl (bijvoorbeeld 1,2,4-oxadiazolyl, 1,3,4-oxadiazolyl, 1,2,5-oxadiazolyl etc.); verzadigde 3 tot 8 leden bevattende ringen die 1 tot 2 zuurstofatomen en 1 tot 3 stikstofatomen bevatten zoals bijvoorbeeld maar niet beperkt tot morfolinyl; onverzadigde aangecondenseerde heterocyclische groepen die 1 tot 2 zuurstofatomen 30 en 1 tot 3 stikstofatomen bevatten zoals bijvoorbeeld benzoxazolyl, benzoxadiazolyl, benzoxazinyl (bijvoorbeeld 2H-l,4-benzoxazinyl etc.); onverzadigde 3 tot 8 leden bevattende ringen die 1 tot 3 zwavelatomen en 1 tot 3 stikstofatomen bevatten zoals bijvoorbeeld maar niet beperkt tot thiazolyl, isopthiazolyl, thiadiazolyl (bijvoorbeeld 13 1.2.3- thiadiazolyl, 1,2,4-thiadiazolyl, 1,3,4-thiadiazolyl, 1,2,5-thiadiazolyl etc.); verzadigde 3 tot 8 leden bevattende ringen die 1 tot 2 zwavelatomen en 1 tot 3 stikstofatomen bevatten zoals bijvoorbeeld maar niet beperkt tot thiazolodinyl; verzadigde en onverzadigde 3 tot 8 leden bevattende ringen die 1 tot 2 zwavelatomen 5 omvatten zoals bijvoorbeeld maar niet beperkt tot thienyl, dihydrodithiinyl, dihydrodithionyl, tetrahydrothiofeen, tetrahydrothiopyraan; onverzadigde gecondenseerde heterocyclische ringen die 1 tot 2 zwavelatomen en 1 tot 3 stikstofatomen bevatten zoals bijvoorbeeld maar niet beperkt tot benzoethiazolyl, benzothiadiazolyl, benzothiazinyl (bijvoorbeeld 2H-1,4-benzothiazinyl etc.), 10 dihydrobenzothiazinyl, (bijvoorbeeld 2H-3,4-dihydrobenzothiazinyl etc.); onverzadigde 3 tot 8 leden bevattende die zuurstofatomen bevatten zoals bijvoorbeeld maar niet beperkt tot furyl; onverzadigde aangecondenseerde heterocyclische ringen die 1 tot 2 zuurstofatomen bevatten zoals bijvoorbeeld benzodioxolyl (bijvoorbeeld 1,3-benzodioxolyl etc.); onverzadigde 3 tot 8 leden bevattende ringen die een 15 zuurstofatoom en 1 tot 2 zwavelatomen bevatten zoals bijvoorbeeld maar niet beperkt tot dihydrooxathiinyl; verzadigde 3 tot 8 leden bevattende ringen die 1 tot 2 zuurstofatomen en 1 tot 2 zwavelatomen bevatten zoals 1,4-oxathiaan; onverzadigde aangecondenseerde ringen die 1 tot 2 zwavelatomen zoals benzothienyl, benzodithiinyl bevatten; en onverzadigde aangecondenseerde heterocyclische ringen een 20 zuurstofatoom en 1 tot 2 zuurstofatomen bevatten zoals bijvoorbeeld benzoxathiinyl. Heterocyclische groepen omvatten tevens die welke beschreven zijn in de beschrijving waarin een of meer zwavelatomen in de ring is dubbel gebonden aan een of twee zuurstofatomen (sulfoxiden en sulfonen). Bijvoorbeeld omvat de heterocyclyl groepen tetrahydrothiofeen, tetrahydrothiofeenoxide en tetrahydrothiofeen-1,1-dioxide.

25 Heterocyclylgroepen kunnen 5 of 6 ringleden bevatten. Voorbeelden van heterocyclyl-groepen omvatten morfoline, piperazine, piperidine, pyrrolidine, imidazool, pyrazool, 1.2.3- triazool, 1,2,4-triazooll, tetrazool, thiomorfoline, thiomorfoline waarin het zwavelatoom van thiomorfoline verbonden is met een of meer zuurstofatomen, pyrrool, homopiperazine, oxazolidine-2-on, pyrrolidine-2-on, oxazool, chinuclidine, thiazool, 30 isoxazool, furaan en tetrahydrofuraan.

Een heterocyclylgroep kan eventueel gesubstitueerd zijn bijvoorbeeld daar waar 1, 2, 3, 4 of meer waterstofatomen vervangen zijn door een substituent gekozen uit de groep bestaande uit halogeen, cyaan, hydroxy, Ci^-alkyl, Ci-6-alkoxy, Ci-2-alkyl 14 gesubstitueerd met een of meer halogenen, Ci-2-alkoxy gesubstitueerd met een of meer halogenen, -0(0)¾. -0(0)0¾. -8(0),,¾ en -MlgRc,. VOorbeelden van “gesubstitueerde heterocyclyl” ringen omvatten 2-methylbenzimidazolyl, 5-methylbenzimidazolyl, 5-chloorbenzthiazolyk, 1-methylpiperazinyl en 2-chloorpyridyl 5 onder andere. Elk stikstofatoom binnen een heterocyclische ring kan eventueel gesubstitueerd zijn met Ci-6-alkyl indien zulks chemisch toelaatbaar is.

Heterocyclylgroepen omvatten heteroarylgroepen als ondergeschikte groep. De term “heteroaryl” heeft betrekking op een eenwaardige aromatische ringrest die in het algemeen met 5 tot 10 ringatomen die 1, 2, 3 of meer heteroatomen bevatten die 10 onafhankelijk van elkaar gekozen zijn uit S, O of N. De term heteroaryl omvat tevens bicyclische groepen waarbij de heteroarylring aangecondenseerd is met een benzeenring, heterocyclische ring, een cycloalkylring of een andere heteroarylring. Voorbeelden van heteroaryl omvatten 7-benzimidazolyl, benzo[b]thienyl, benzofuryl, benzothiazolyl, benzothiofenyl, 2-, 4-, 5-, 6- of 7-benzoxazolyl, furanyl, furyl, 15 imidazolyl, indolyl, indazolyl, isochinolinyl, isothiazolyl, isoxazolyl, oxadiazolyl, oxazolyl, purinyl, pyrazinyl, pyrazolyl, pyradazinyl, pyridinyl, pyrimidinyl, pyrrolyl, chinolinyl, tetrazolyl, thiadiazolyl, thiazolyl, thienyl, thiofenyl, triazolyl en dergelijke. Heteroarylringen kunnen eveneens eventueel aangecondenseerd zijn met een of meer andere heterocyclische ringen, heteroarylringen, arylringen, cycloalkeenringen of 20 cycloalkylringen. Een heteroarylgroep kan eventueel gesubstitueerd zijn bijvoorbeeld daar waar 1, 2, 3, 4 of meer waterstofatomen vervangen zijn door een substituent gekozen uit de groep bestaande uit halogeen, cyaan, hydroxy, Ci-6-alkyl, Ci-6-alkoxy, Ci.2-alkyl gesubstitueerd met een of meer halogeenatomen, Ci.2-alkoxy gesubstitueerd met een of meer halogenen, -(^(0)¾. -(3(0)0¾. -8(0),,,¾ en -NReR9.

25 De term “heterocyclyloxy” heeft betrekking op een groep waarin een zuurstofatoom verbonden is met een ringatoom van een heterocyclylgroep zoals in de beschrijving beschreven is.

“Farmaceutisch aanvaardbaar” betekent geschikt voor gebruik in zoogdieren. Een “farmaceutisch aanvaardbaar zout” omvat een zout met een anorganische base, 30 organische base, anorganisch zuur, organisch zuur of basisch of zuur aminozuur. Als zouten van anorganische basen, omvat de uitvinding bijvoorbeeld alkalimetalen zoals natrium of kalium, aardalkalimetalen zoals calcium en magnesium of aluminium en ammoniak. Als zouten van organische basen omvat de uitvinding bijvoorbeeld 15 trimethylamine, triethylamine, pyridine, picoline, ethanolamine, diethanolamine en triethanolamine. Als zouten van anorganische zuren omvat de onderhavige uitvinding bijvoorbeeld chloorwaterstofzuur, hydroboorzuur, salpeterzuur, zwavelzuur en fosforzuur. Als zouten van organische zuren omvat de onderhavige uitvinding 5 bijvoorbeeld mierenzuur, azijnzuur, trifluorazijnzuur, fumaarzuur, oxaalzuur, wijnsteenzuur, maleïnezuur, citroenzuur, bamsteenzuur, malonzuur, methaansulfonzuur, benzeensulfonzuur en p-tolueensulfonzuur. Als zouten van basische aminozuren omvat de onderhavige uitvinding bijvoorbeeld arginine, lyhsine en omithine. Zure aminozuren omvatten bijvoorbeeld asparaginezuur en 10 glutaminezuur. Voorbeelden van farmaceutisch aanvaardbare zouten zijn beschreven in Berge, S.M. et al, “Pharmaceutical Salts”, Journal of Pharmaceutical Science, 1977; 66:1 19.

Een “voorgeneesmiddel” is een verbinding die in vivo omgezet kan worden in een actieve therapeutische verbinding zoals een verbinding die in de beschrijving 15 beschreven is. Transformatie van de voorgeneesmiddelverbinding kan chemisch, enzymatisch dan wel door inwerking van andere endogene materialen bijvoorbeeld aminozuur, peptiden en proteïnen tot stand worden gebracht. Voorgeneesmiddelen zijn besproken in T. Higuchi en V. Stella, “Pro-drugs as Novel Delivery Systems”, band 14 van de A.C.S. Symposium Series, en in Bioreversible Carrriers in Drug Design, ed. 20 Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association en Pergamon Press, 1987. Voorbeelden van voorgeneesmiddelen kunnen esters en amiden van polaire groepen zoals carboxylaatgroepen omvatten.

De term “beschermd” met betrekking tot hydroxylgroepen, aminegroepen en sulhydrylgroepen heeft betrekking op vormen van deze functionaliteiten die beschermd 25 zijn tegen ongewenste reactie met een beschermende groep die de deskundige bekend is zoals die welke beschreven zijn in Protective Groups in Organic Synthesis, Greene, T.W.; Wuts, P.G.M, John Wiley & Sons, New York, N.Y. (3e editie, 1999) die verder verwijderd of toegevoegd kunnen worden gebruik makend van procedures die hierin beschreven zijn. Voorbeelden van beschermde hydroxylgroepen omvatten silylethers 30 zoals die verkregen door omzetting van een hydroxylgroep met een reagens zoals bijvoorbeeld maar niet beperkt tot t-butyldimethylchloorsilaan, trimethylchloorsilaan, triisopropylchloorsilaan, triethylchloorsilaan; gesubstitueerd methyl en ethylethers zoals maar niet beperkt tot methoxymethylether, methylthiomethylether, 16 benzyloxymethylether, t-butoxymethylether, 2-methoxyethoxymethylether, tetrahydro-pyranylether, 1-ethoxyethylether, allylether, benzylether; esters zoals bijvoorbeeld maar niet beperkt tot benzoylformaat, foirmaat, acetaat, trichlooracetaat en trifluoracetaat. Voorbeelden van beschermde aminogroepen omvatten amiden zoals 5 formamide, acetamide, trifluoracetamide en benzamide; imiden zoals fthalimide en dithiosuccinimide en andere. Voorbeelden van beschermde sulfhydrylgroepen omvatten thioethers zoals S-benzylthioether en S-4-picolylthioether; gesubstitueerde S-methylderivaten zoals hemithio, dithio en aminothioacetaal en andere.

Een “zout” heeft betrekking op alle zoutvormen van een verbinding waaronder 10 zouten die geschikt zijn voor gebruik in industriële processen zoals de bereiding van de verbinding en farmaceutisch aanvaardbare zouten.

“Gesubstitueerd” heeft betrekking op een groep waarin een of meer bindingen aan een waterstofatoom die daarin aanwezig is vervangen is door een binding naar een niet-waterstofatoom. In enkele gevallen zal de binding ook vervangen zijn door niet-15 koolstofatomen zoals maar niet beperkt tot een halogeenatoom zoals bijvoorbeeld F, Cl,

Br en I; een stikstofatoom in groepen zoals aminen, amiden, alkylaminen, dialkylaminen, arylaminen, alkylarylaminen, diarylaminen, heterocyclylamine, (alkyl)(heterocyclyl)amine, (aryl)(heterocyclyl)amine of diheterocyclylaminegroepen, isonitril, N-oxiden, imiden en enaminen; een zuurstofatoom in groepen zoals 20 hydroxylgroepen, alkoxygroepen, aryloxygroepen, estergroepen en heterocyclyloxygroepen; een siliciumatoom in groepen zoals in trialkylsilylgroepen, dialkylarylsilylgroepen, alkyldiarylsilylgroepen en triarylsilylgroepen; een zwavelatoom in groepen zoals bijvoorbeeld thiolgroepen, alkyl- en arylsulfidegroepen, sulfongroepen, sulfonylgroepen en sulfoxidegroepen en andere heteroatomen in 25 verscheidene andere groepen. Gesubstitueerde alkylgroepen en gesubstitueerde cycloalkylgroepen omvatten tevens groepen waarin een of meer bindingen naar een of meer koolstof- of waterstofatomen vervangen zijn door een binding naar een heteroatoom zoals bijvoorbeeld zuurstof in carbonyl, carboxyl en ethergroepen; stikstof in groepen zoals bijvoorbeeld iminen, oximen en hydrazonen. Gesubstitueerd 30 cycloalkyl, gesubstituurd aryl, gesubstitueerd heterocyclyl en gesubstitueerd heteroaryl omvatten tevens ringen en aangecondenseerde ringsystemen die gesubstitueerd kunnen zijn met alkylgroepen zoals zij in de beschrijving beschreven zijn. Gesubstitueerde arylalkylgroepen kunnen gesubstitueerd zijn op de arylgroep, op de alkylgroep of op 17 zowel de aryl- als de alkylgroepen. Alle groepen die in de beschrijving mede omvat zijn zoals bijvoorbeeld alkyl, alkenyl, alkyleen, alkynyl, aryl, heterocyclyl, heterocyclyloxy, en dergelijke kunnen gesubstitueerd zijn. Representatieve voorbeelden van substituenten voor substitutie omvatten een of meer bijvoorbeeld een, twee of drie 5 groepen onafhankelijk gekozen uit halogeen, -OH, -Ci-6-alkyl, C^-alkoxy, trifluormethoxy, -S(0)„Ci-6-alkyl, amino, haloalkyl, thiol, cyaan, -ORio en -NRgRö en trifluormethyl.

“Behandeling” betekent een verzachting van de symptomen geassocieerd met een infectie, het stopzetten van verdere progressie of het slechter worden van deze 10 symptomen of de preventie of profylaxis van de infectie. Behandeling kan tevens omvatten het toedienen van de farmaceutische formuleringen van de onderhavige uitvinding in combinatie met andere therapieën. Bijvoorbeeld kunnen de verbindingen en farmaceutische formuleringen volgens de uitvinding worden toegediend voorafgaande, tijdens of na een chirurgische ingreep en/of bestralingstherapie. De 15 verbindingen van de onderhavige uitvinding kunnen eveneens worden toegediend tezamen met andere antibacteriële geneesmiddelen.

In enkele gevallen kunnen verbindingen beschreven in de beschrijving verschaft worden ex vivo of in vivo worden geproduceerd bijvoorbeeld daar waar een voorgeneesmiddel van een verbinding wordt toegediend.

20 In het algemeen is de verwijzing naar een bepaald element zoals bijvoorbeeld waterstof of H bedoeld om alle isotopen van dat element mede te omvatten. Bijvoorbeeld indien een R-groep gedefinieerd is als omvattende waterstof of H omvat deze tevens deuterium en tritium. Chemische formules worden aangeduid met hoofd Romeinse getallen voor een eenvoudige identificatie. Romeinse getallen gebruikt 25 tezamen met een kleine letter bijvoorbeeld Ia geeft aan dat de structuur waar het over gaat een enantiomeer is van de verbinding geïdentificeerd door het Romeinse getal. Romeinse getallen gebruikt te zamen met een accent bijvoorbeeld III’ geeft aan dat de structuur die vermeld is een of meer beschermende groepen kan hebben die opgenomen zijn in atoomgroepen geïdentificeerd met het accent zoals bijvoorbeeld waar O’ 30 aangeeft een zuurstofatoom of een beschermede aldehydegroep.

Algemene Synthese van Verbindingen. De beschreven verbindingen kunnen worden geproduceerd volgens de volgende algemene syntheseschema’s, waarin alle R, 18 X en Y de hierboven beschreven waarde hebben, B’is een broomzuur of een boronaatester, zoals bijvoorbeeld -- en O’ is zuurstof, waarbij een aldehyde of een beschermde aldehydegroep verkregen 5 wordt.

«s A «s Λ (V^_- rV^· Λη^ι ^ «Τ'1 s X X \ 0=< HRg / W v

- / \X p \ IV

nngcoupnng / ring coupflng^^C FW4—\ condensation \ / \ o=< NHe andcycteatton N.

condeneatkxX BM-fi Y andcyelizattonX IV o_/ condensation I / n n. and cycfization DC 1¾ / / ring coupling jyj ff ring coupling y' 0=Y% \ ^ w-f w 0

V

k

Formule 1 10 In enkele gevallen kan het nodig zijn het aldehyde te beschermen voorafgaande aan de uitvoering van een koppelingsreactie zoals de omzettingen van ΧΙΓ tot ΙΙΓ, X’ tot III’ of XII’ tot X’. In deze gevallen kan het aldehyde worden beschermd bijvoorbeeld als een acetal door omzetting met een diol zoals ethyleendiol, propaan- 1,3-diol or 2,2-dimethylpropaan-l,3-diol. Meer specifiek kan het aldehyde worden 19 omgezet met een diol in een niet-polair oplosmiddel door het verwannen tot 60-140°C gedurende 2 tot 24 uur bij aanwezigheid van een katalytische hoeveelheid van een protisch zuur zoals bijvoorbeeld paratolueensulfonzuur of puridiniumparatolueen-sulfonaat. Alternatieve methoden voor het maskeren van de aldehyde waaronder 5 alternatieve beschermende groepen of reductie tot de corresponderende alcohol en bescherming van de alcohol zullen de deskundige bekend zijn.

In een uitvoeringsvorm wordt een al dan niet gesubstitueerde pyrazinering met een hieraan gebonden borongroep, zoals B’, gekoppeld met verbinding ΧΙΓ bijvoorbeeld via een organometaal cross-koppelingreactie waarbij de verbinding met de 10 formule ΙΙΓ verkregen wordt. De verbinding met formule I kan verkregen worden uitgaande van verbinding ΙΙΓ door condensatie met de verbinding met formule IV zoals een barbituurzuur en cyclisering. Op een andere wijze kan de verbinding IX verkregen worden door condensatie van verbindingen IV en XIF en cyclisering. De verbinding met formule I kan verkregen worden uitgaande van verbinding IX door koppeling van 15 een gesubstitueerde of niet-gesubstitueerde pyrazinering met een verbonden borongroep bijvoorbeeld via een organometaal cross-koppelingsreactie. In dit schema kan vorming van verbinding X’ uitgaande van verbinding XII of verbinding III’ uitgaande van verbinding X’ vereisen het gebruik van een beschermd aldehyde. In bovenstaande reactie is Ha waterstof of een halogeen bijvoorbeeld broom. Ha kan 20 tevens chloor of jood zijn.

In een andere uitvoeringsvorm wordt verbinding X’ die een B’-groep bevat gekoppeld met een al dan niet gesubstitueerde pyrazinering met een hiermee verbonden halogeen waarbij de verbinding met de formule ΙΙΓ verkregen wordt. Op een andere wijze kan verbinding X’ worden omgezet in verbinding II door condensatie met de 25 verbinding met formule IV zoals barbituurzuur en cyclisering. Verbinding II kan eveneens worden verkregen uitgaande van verbinding IX door het susbtitueren van het halogeen met een B’-groep door omzetting met een boraan zoals in de beschrijving beschreven is. Verbinding I kan worden gevormd uitgaande van verbinding II door koppeling van een al dan niet gesubstitueerde pyrazinering zoals beschreven in de 30 beschrijving. In enkele uitvoeringsvormen kan verbinding X’ worden geproduceerd uitgaande van verbinding ΧΙΓ door het substitueren van het halogeen met een B’-groep door omzetting met een boraan zoals beschreven in de beschrijving. Dientengevolge 20 kan de cross-koppelingsreactie worden uitgevoerd hetzij voorafgaande aan de condensatie met verbinding IV en cyclisering of na de introductie van verbinding IV.

Wanneer introductie van pyrazinering door kruiskoppeling uitgevoerd is na de introductie van de verbinding IV is het in bepaalde gevallen wenselijk de amidegroepen 5 in de verbinding in het bijzonder wanneer R4 en R5 H zijn, te beschermen. De beschermende groep kan de vorm aannemen van een overgangsgroep die na de kruiskoppelingreactie verwijderd wordt dan wel kan het een voorgeneesmiddelgroep zijn die behouden blijft dan wel verder gemodificeerd wordt voor gebruikt in het moduleren van de potentie en/of de afgifte van de verbinding. Een illustratie van dit 10 beschermingsschema is hieronder weergegeven.

cwN"f o*=Af (wNT

_ tl'YyNUH,rai IX IX D * X Y Y ^γ° r '

Tevens wordt verschaft een werkwijze voor het produceren van verbindingen met 15 formule Ia die hieronder weergegeven zijn. Deze methode kan worden uitgevoerd door (a) omzetting van een verbinding met formule lila met een verbinding met formule IV bij een temperatuur die voldoende is om een verbinding met formule Ia te produceren: 21

*4 P

R4 P

Rjj o=( n-r5 s Λ, "ύυ^γΓ"8 A'^""3 ,v Μγ«.

•Λ*, + M> X ft.

Ilia la

Volgens deze methode kunnen specifieke groepen zoals elders in de beschrijving worden gedefinieerd. Reactie ter vorming van Ia kan optreden in een waterige of in een 5 organisch oplosmiddel. Gebruikelijke temperaturen voor deze reacties zullen ongeveer 60 tot ongeveer 180°C, bijvoorbeeld van ongeveer 80 tot 100°C zijn, 100 tot 140°C of 140 tot 180°C zijn en kan optreden binnen een tijdsperiode van 0,5 tot ongeveer 24 uur bijvoorbeeld 0,5,1, 1,5, 2,4, 6, 8,10,12,14,16,18,20,22 of 24 uur. Voorbeelden van oplosmiddelen die gebruikt kunnen worden omvatten azijnzuur, ijsazijn of mengsels 10 met water, DMSO, methanol, isopropanol, butanol, tolueen, water en combinaties hiervan. In een specifiek voorbeeld kunnen temperaturen variëren van ongeveer 80 tot ongeveer 120°C. In een specifiek voorbeeld variëren reactietijden van ongeveer 5 tot 24 uur. Wanneer de reactie optreedt in azijnzuur of mengsels van azijnzuur en water, zullen gebruikelijke temperaturen voor deze reactie variëren van 80 tot 110°C en 15 bijvoorbeeld van ongeveer 80 tot 90°C, 90 tot 100°C or 100 tot 110°C en kan optreden binnen ongeveer 0,5 tot ongeveer 4 uur, bijvoorbeeld 0,5, 1,1,5, 2 of 4. Deze reactie kan eveneens worden gebruikt voor de productie van verbindingen met formule I uitgaande van verbinding met formule III.

Deze methoden kunnen eveneens omvatten (b) de omzetting van een verbinding 20 met formule V met een verbinding met formule IVa eventueel in een niet-protisch organisch oplosmiddel en/of bij aanwezigheid van een base waarbij de verbinding met formule lila geproduceerd wordt: 22 λ —

{ 'l X

V R/StX '»a

Vla

In deze reactie wanneer aanwezig kan de base een organisch of anorganische base zijn. In enkele gevallen kan verbinding VI als een base fungeren. Typisch zal de reactie 5 plaatsvinden bij een temperatuur van ongeveer 20 tot ongeveer 100°C bijvoorbeeld van ongeveer 40 tot 100°C, 60 tot 80°C of 80 tot 100°C. Deze reactie kan worden uitgevoerd alleen ter verschaffing van een verbinding met formule lila. Voorbeelden van oplosmiddelen die gebruikt kunnen worden omvatten acetonitril en dimethylformamide. Temperatuurtrajecten voor de reactie kunnen tevens variëren van 10 ongeveer 70 tot 90°C. Basen die gebruikt kunnen worden in de reactie omvatten triethylamine, diisopropylethylamine en kaliumcarbonaat. Reactietijden kunnen variëren van ongeveer 2 tot 24 uur bijvoorbeeld 2, 4, 6, 8,10, 12, 14, 16, 18,20, 22 of 24 uur. Deze reactie kan eveneens worden gebruikt voor het produceren van een verbinding met formule III gebruikmakend van een verbinding met formule VI.

15 Verbinding V kan geproduceerd worden door: (c)(i) uitvoering van een halogeenmetaaluitwisseling of deprotoneringsreactie op een verbinding met formule VIII en (c)(ii) omzetting van het product van (c)(i) met een carbonyldonor voor het produceren van de verbinding met formule V: 20

Ma ^

inrF-- XX

x x

V

VII v 23

In bovenstaande reactie is Ha waterstof of een halogeen, bijvoorbeeld broom. Ha kan chloor of jood zijn. In deze reactie kan (c)(i) omvatten het contacteren van een verbinding met formule VII met een sterke base zoals bijvoorbeeld alkyllithium. Op een andere wijze kan (c)(i) omvatten het contacteren van de verbinding met formule 5 VII met een Grignard-reagens in een niet-protisch organisch oplosmiddel. Deze reacties treden gewoonlijk op bij een temperatuur van ongeveer -78 tot ongeveer 50°C, bijvoorbeeld van ongeveer -78 tot ongeveer 0°C. In (c)(ii) kan de carbonyldonor omvatten een of meer dimethylformamide, N-formylmorfoline of paranitrofenylformaat. Voorbeelden van reactietijden kunnen variëren van ongeveer 1 10 tot ongeveer 18 uur, bijvoorbeeld 2,4,6, 8,10,12,14,16 of 18 uur.

Verbinding V kan eveneens worden gesynthetiseerd door (d) het oxideren van een verbinding met formule VIII voor het produceren van de verbinding met formule V: _ (Χγ*

RiX*y «17* y X x

15 Vl» V

Een synthese kan verscheidene van deze stappen combineren, als volgt: 24 Ψ ϊ* ρ F ling 1 ij (TV _ coupling

Riy^Y ^ Rrv'f^Y tt X >r x -Cl VII V Ra'" TT*R2 nia HO. y/' VI a JL P oxidation

A

X

VIII

hHU JW* W R Λ 0=( N-Re

o ’VVhK

iv 11¾¾ __ X^Y^N-Y-Ra condensation * and cydization ^ la

Beschreven verbindingen en tussenproducten kunnen eveneens volgens de volgende reactie worden geproduceerd: 5

XI

hath

By^CHO ^ Βγ*γΟΗΟ «8 «s X ui —V.

"Ό

In deze reactie is B’ boronzuur of een boronaatester zoals » en 25 halo is halogeen zoals jood. Dientengevolge wordt verbinding III geproduceerd door omzetting van verbindingen X en XI. Deze koppelingsreactie kan eveneens worden uitgevoerd met een omgekeerde polariteit waarbij het boronatoom verbonden is met Ri en het halogeenatoom verbonden is met verbinding X op de positie aangegeven door B’ 5 (zie structuur XIII hieronder). In het algemeen kan de koppelingsreactie worden uitgevoerd onder standaard Suzuki-kruiskoppelingsomstandigheden onder toepassing van 0,01-0,1 equivalenten van een palladiumkatalysator met geschikte liganden zoals Pd(PPli3)4 of Pd(dppf)Cl2 in een organisch oplosmiddel of in een mengsel van oplosmiddelen die organische oplosmiddelen bevatten zoals bijvoorbeeld tolueen en 10 een alcohol en water. De reactie kan worden uitgevoerd bij aanwezigheid van een base zoals bijvoorbeeld kaliumcarbonaat, natriumcarbonaat, kaliumfosfaat, cesiumcarbonaat of natriumacetaat bijvoorbeeld bij temperaturen variërende van ongeveer 20 tot 120°C gedurende ongeveer 2 tot 24 uur. Deze route kan eveneens worden gebruikt voor het produceren van verbindingen met formule lila wanneer een transmorfolineverbinding 15 in deze reactie wordt gebruikt. Verbindingen III of lila kunnen worden gebruikt voor het produceren van verbindingen met formule I of Ia volgens de methoden die in de beschrijving beschreven zijn.

Verbinding X kan worden geproduceerd door omzetting van verbinding XII ter verschaffing van verbinding X waarin halo is halogeen zoals broom, chloor of jood: 20 halo^^XHO VV010 χΜν^ —► x ï kJT y y l x *

XII

Omzetting van verbindingen XII in verbinding X kan worden uitgevoerd door omzetting met een boraan zoals bijvoorbeeld bis(pinacolato)diboron onder 25 palladiumkatalysator gebruik maken van een palladium(II) of palladium(o)species met geschikte liganden bijvoorbeeld Pd(PPh3)4, Pd(dppf)Cl2, Pd(Pcy)2Cl2 in een organisch oplosmiddel zoals tetrahydrofuran, methyltetrahydrofuran of tolueen en bij 26 aanwezigheid van een anorganische base zoals bijvoorbeeld kaliumacetaat, kaliumfosfaat, natriumcarbonaat, cesiumcarbonaat. De reactie geschiedt gewoonlijk bij verhoogde temperaturen variërende van 80 tot 120°C gedurende perioden van ongeveer 12 uur tot 5 dagen.

5 Op zijn beurt kan verbinding XII worden geproduceerd door omzetting van verbindingen VI en XIV waarbij halo een halogeen is, zoals broom, chloor of jood:

_ Vl _ _ XII

XIV

hatos^wCHO \Ύ “VV"3

xïX —AV

ï Y v° "o

10 De methode kan omvatten (a) omzetting van een verbinding met formule XIV

met een verbinding met formule VI eventueel in een niet-protisch organisch oplosmiddel en/of in aanwezigheid van een base ter productie van een verbinding met formule XII. In deze reactie wanneer aanwezig kan de base een organische of anorganische base zijn. In enkele gevallen kan verbinding VI fungeren als een base.

15 Gewoonlijk zal de reactie plaatsvinden bij een temperatuur van ongeveer 20 tot ongeveer 100°C bijvoorbeeld van ongeveer 40 tot 100°C, 60 tot 80°C of 80 tot 100°C.

Verbinding XIV kan worden geproduceerd uitgaande van verbinding XV als volgt, waarbij halo halogeen is zoals broom of jood:

XV XIV

_ .. hato^s^-CHO

halOv^^^^Ha m

20 Y

In een uitvoeringsvorm kan verbinding XIV worden geproduceerd door: (b)(i) uitvoering van een deprotoneringsreactie op een verbinding met formule XV en 27 (b)(ii) omzetting van een poduct (b)(i) met een carbonyldonor ter vorming van een verbinding met formule XIV: In bovenstaande reactie is Ha waterstof. In deze reactie kan (b)(i) omvatten het contacteren van de verbinding met formule XV met een sterke base zoals alkyllithium. Deze reacties geschieden gewoonlijk bij een temperatuur 5 van ongeveer -78 tot ongeveer 50°C. In (b)(ii) kan de carbonyldonor een of meer dimethylformamide, N-formylmorfoline of paranitrofenylformaat omvatten.

Tevens wordt verschaft een methode voor het produceren van de verbinding met formule XVIIa welke omvat (a) de omzetting van een verbinding met formule Vla met een verbinding 10 met formule XVIII eventueel in een niet-protisch organisch oplosmiddelen en/of bij aanwezigheid van een base waarbij de verbinding met formule XVII geproduceerd wordt: <S ψ I - s Λ

Jfl

RiPr» —~—- 1 JL.

* JL R,<

wil JL JL

fy' OfTy XVIIa

Vla * 15 In deze reactie is R14 een halogeen zoals broom of jood, boronzuur, een boronaat- —-Ov B** ester zoals , ; of een gesubstitueerd of niet-gesubstitueerd pyrazine zoals in Rj.

In deze reactie wanneer aanwezig kan de base een organische of anorganische base zijn. In enkele gevallen kan verbinding VI fungeren als een base. Gewoonlijk zal de reactie plaatsvinden bij een temperatuur van ongeveer 20 tot ongeveer 100°C 20 bijvoorbeeld van ongeveer 40 tot 100°C, 60 tot 80°C of 80 tot 100°C. Voorbeelden van oplosmiddelen die gebruikt kunnen worden omvatten acetonitril en dimethylformamide. Temperatuurtrajecten voor deze reactie kunnen eveneens ongeveer 70 tot 90°C zijn. Basen die gebruikt kunnen worden in deze reactie omvatten 28 triethylamine, diisopropylethylamine of kaliumcarbonaat. Reactietijden kunnen variëren van ongeveer 2 tot 24 uur, bijvoorbeeld 2, 4, 6, 8, 10, 12,14, 16,18, 20, 22 of 24 uur.

Wanneer Rh een halogeen is zoals broom kan verbinding XVII worden gebruikt 5 voor het produceren van verbinding XVII waarin Rh boronzuur is of een boronaatester gebruik makend van dezelfde reactie als beschreven voor het produceren van verbinding X.

Wanneer Rh een halogeen zoals jood kan verbinding XVII eveneens worden gebruikt voor het produceren van de verbinding met formule lila door koppeling van 10 verbinding XVII met een verbinding met formule Ri-B’ waarin B’ boronzuur is of een B·*' boronaatester is zoals bijvoorbeeld . De verbinding met de formule lila kan eveneens worden geproduceerd wanneer Rh boronzuur is of een boronaatester, door omzetting van verbinding XVII met verbinding XI (Ri-halo) door middel van de methode beschreven voor het produceren van verbinding III die in de beschrijving beschreven is.

15 Ψ ifr ^ rS °1 <j R-^T'Y R’ ;ΠΥ

Λ X

XVII lila

In het algemeen kan deze koppelingsreactie worden uitgevoerd onder standaard Suzuki-kruiskoppelingsomstandigheden onder toepassing van 0,01 tot 0,1 of meer equivalenten van een palladiumkatalysator met geschikte liganden zoals Pd(PPh3)4 of 20 Pd(dppf)Cl2 in een organisch oplosmiddel of in een mengsel van oplosmiddelen die organische oplosmiddelen bevatten zoals bijvoorbeeld tolueen en een alcohol en water. De reactie kan worden uitgevoerd bij aanwezigheid van een base zoals bijvoorbeeld kaliumcarbonaat, natriumcarbonaat, kaliumfosfaat, cesiumcarbonaat of natrium acetaat bijvoorbeeld bij temperaturen variërende van ongeveer 20 tot 120°C gedurende 29 ongeveer 2 tot 24 uur. Verbinding ΠΙ kan worden gebruikt voor het produceren van verbindingen met formule Ia zoals zij in de beschrijving beschreven zijn.

Verbinding XVIII kan worden geproduceerd door: (b)(i) uitvoering van een halo geenmetaaluitwi ssel ing of 5 deprotoneringsreactie op een verbinding met formule XIX en (cXii) omzetting van het product van (c)(i) met een carbonyldonor waarbij de verbinding met formule XVIII geproduceerd wordt: o*.

^ |j"VF

i * xix W"' 10

In bovenstaande reactie is Ha waterstof of een halogeen, bijvoorbeeld broom. Ha kan eveneens chloor of jood zijn. In deze reactie kan (c)(i) omvatten het contacteren van een verbinding met formule XIX met een sterke base zoals bijvoorbeeld alkyllithium. Op een andere wijze kan (c)(i) omvatten het contacteren van de 15 verbinding met formule XIX met een Grignard-reagens in een niet-protisch organisch oplosmiddel. Deze reacties treden gewoonlijk op bij een temperatuur van ongeveer -78 tot ongeveer 50°C, bijvoorbeeld van ongeveer -78 tot ongeveer 0°C. In (c)(ii) kan de carbonyldonor omvatten een of meer van dimethylformamide, N-formylmorfoline of paranitrofenylformaat. Voorbeelden van reactietijden variëren van ongeveer 1 tot 20 ongeveer 18 uur, bijvoorbeeld 2,4,6,8,10,12,14,16 of 18 uur.

Verbinding XVIII kan eveneens worden gesynthetiseerd door (d) het oxideren van een verbinding met formule XX voor het produceren van de verbinding met formule XVIII: 30

Rm^T^Y Rm'^X'Y

X X

XX XVIII

De verbindingen die daarin beschreven zijn kunnen eveneens worden gesynthetiseerd door op geschikte wijze de protocollen beschreven in WO 5 2004/031195 te modificeren.

Bepaalde verbindingen die in de beschrijving beschreven zijn zijn tevens nuttig als tussenproducten voor de bereiding van andere beschreven verbindingen en dergelijke tussenproducten zijn opgenomen in de beschermingsomvang van de onderhavige uitvinding.

10 Specfieke verbindingen zijn beschreven in de gehele beschrijving met bijzondere verwijzing naar de voorbeelden en de volgende tabel, waarin verbindingen met aan het begin “rel-“ of aangegeven door ± racemische verbindingen zijn:

Tabel 1 ~~

Verbinding/ Naam Structuur

Voorbeeld nr.____

1 rel-(2S,4R,4aR)-9,10- ^ H O

difluor-2,4-dimethyl-8- Ij? pyrazine-2-yl-l,2,4,4a- tetrahydro-2’H,6H- T H^T~v spiro[ 1,4-oxazino[4,3- a]chinoline-5,5’- p l q pyrimidine]- 2,,4’,6’(l’H,3,H)-trion * ω

2 (2R,4S,4aS)-9,10- ^ H O

difluor-2,4-dimethyl-8- ( "yf Chiraal pyrazine-2-yl-l,2,4,4a- tetrahydro-2’H,6H- jj ΊΓ H/JT^ spiro [ 1,4-oxazino[4,3 - a]chinoline-5,5’- I L n pyrimidine]- _ 2’,4’,6’(1 ’H,3’H)-trion _I_ 31

ï1 (2R,4S,4aS)-9,10- ^ H O

difluor-2,4- f N Chiraal dimethyl-8- pyrazine-2-yl' jj T M«Jv.

1,2,4,4a-tetrahydro- Q.

2Ή,6Η- ï L ά spiro[l,4- h Τ'0

oxazino[4,3- I

a]chinoline-5,5’- pyrimidine]- 2’,4’,6,(1’H,3’H)- __trion__ 4 (2R,4S,4aS)-9,10- Chiraal difluor-2,4- \ \ dimethyl- H—✓

l’,3’-bis (morfoline- \ λ /^O

4- f^N O^N^U ( ) ylmethyl)-8-

pyrazine-2-yl- v Y H

l,2,4,4a-tetrahydro- A Q

2’H,6H-spiro[l,4- F /1 i T*"’

oxazino[4,3- F

* a]chinoline-5,5’- | pyrimidine]-2 ’ ,4’,6’ __(ΓΗ,3Ή)-ΐτίοη__ 5 (2R,4S,4aS)-9,10- / Chiraal difluor-2,4- / *ï dimethyl- 1« / 1 \3’-bL[(4- , methylpiperazine-1 - S , yl)methyl]-8- Γ n* pyrazine-2-yl- ' l,2,4,4a-tetrahydro- 1| I H JPv· 2’H,6H-spirofl,4- oxazino[4,3- p I φ ajchinoline- y' 5,5’-pyrimidine]- = 2’,4,6,’(1Ή3Ή)- __trion__ 6 (2R,4S,4aS)-9,10- H .Q Chiraal difluor-2,4- |^N O^N-^- dimethyl-8-(4- oxidopyrazine- ® || T H/Jv 2-yl)l,2,4,4a-

tetrahydro-2’H,6H- p I A

spiro[l,4- y oxazino[4,3- ~ _alchinoline-5,5’-___ 32 pyrimidine]-2’,4’,6’(ΓΗ,3,Η)- __trion__ 7 rel-(2S,4R,4aR)- 9.10- difluor-2,4- 9

dimethyl-2’,4’,6’- Q jj P

trioxo-8-pyrazine-2- Nr~N

yl-1,2,4,4a- O-J3 tetrahydro-2 ’H,6H- F Τ^,'Τ* \

spiro[l,4- F

oxazino[4,3- a]chinoline-5,5’- pyrimidine]- (*) l’,3”(4’H6’H)- diyl]bis(methyleen) __diacetaat___ 8 (2S,4R,4aR)-9,10-

difluor-2,4- O

dimethyl-2’,4’,6’- ( 0cH«t trioxo-8-pyrazine-2- Chiraal yl-1,2,4,4a- tetrahydro-2’H,6H- a | .0 spiro[l,4-

oxazino[4,3- F

a]chinoline-5,5’- | pyrimidine]- l’,3’(4’H,6’H)- diyl]bis(methyleen) __diacetaat__ 9 rel-(2S,4R,4aR)- ~ 9.10- difluor-l’,3’- Q 'N^° bis(hydroxymethyl)- I Jl V i 2,4-dimethyl-8-

pyrazine-2-yl- Jl qH

1,2,4,4a-tetrahydro- 2’H,6H-spiro[l,4- * ^ £ oxazino[4,3-a] j chinoline-5,5’- * >±\ pyrimidine]-2’,4’,6’ _ (l’H,3’H)-trion _ 33 1() (2S,4R,4aR)-9,10- HO-, ”

difluor-r,3’-bis f^N O

(hydroxymethyl)- Λ |l J.

2,4-dimethyl-8- ^^ιΓ^Τηι "Ί

pyrazine-2-yl- Q

l,2,4,4a-tetrahydro- ^ j ι I

2’H,6H-spiro[ 1,4- F

oxazino[4,3-a] I ( .

chinoline-5,5’- + pyrimidine]-2’,4’6’ __(l’H,3’H)-trion__

11 rel-(2S,4R,4aR)- υι^\ I

r,3’-bis(chloor- methyl)-9,10-di- .

fluor-2,4-dimethyl- Jj qj 8-pyrazine-2-yl-

l,2,4,4a-tetrahydro- F N^O

2’H,6H-spiro[l,4- 1 (±) oxazino[4,3-a] chinoline-5,5’- pyrimidine]-2’ ,4’ ,6’ __(rH,3’H)-trion__ 12 rel-tetrabenzyl-[(2S, 4R,4aR)-9,10-di- /^\

£luor-2,4-dimethyl- '—¢0-^P

2’,4’,6’-trioxo-8- pyrazine-2-yl- l,2,4,4a-tetrahydro- 2’H,6H-spiro[l,4- oxazino[4,3-a F 1 chinoline-5,5’- jt

pyrimidine]- \aJ

r,3’(4’H,6’H)-diyl] (±) bis(methyleen)bis __(fosfaat)_ 13 (2S,4R,4aR)-l',3- ” “^p bis(broommethyl)- £ ff 1 9,10-difluor-2,4-di-methyl-8-pyrazine- f 2-yl-l ,2,4,4a- F *ύΟ tetrahydro-2’H,6H- *

spiro[ 1,4-oxazino W

[4,3-a]chinoline- 5,5’-pyrimidine] - 2’,4’,6’(1’H,3’H)- _trion__ 34 14 Tetra-tert-butyl ''Φ'* [(2S,4R,4aR)-9,10- vM5 difluor-2,4- 7 dimethyl-2’,4’,6’- ^jjf trioxo-8-pyrazine- p 2-yl-l,2,4,4a-tetra- hydro-2 ’H,6H-spiro * Sr [ 1,4-oxazino[4,3 ~a] * chinoline-5,5’- '+* pyrimidine]-Γ,3’ (4’H,6’H)-diyl]bis (methyleen)bis __(fosfaat)__

15 rel-(2S,4R,4aR)-10- Η O

fluor-2,4-dimethyl- | $ 8- pyrazine-2-yl-

l,2,4,4a-tetrahydro- || jT

2’H,6H-spiro[l,4- Q, oxazino[4,3-a] I ι 1 chinoline-5,5’- ^ pyrimidine]-2 ’ ,4 ’ ,6 ’ a __(l’H,3’H)-trion__^_

16 rel-(2S,4R,4aR)-10- Η O

fluor-2,4-dimethyl- { N

9- morfoline-4-yl-8- NH

pyrazine-2-yl-l,2,4, j| T

4a-tetrahydro-2’H,

6H-spiro[1,4· O J ï L O

oxazino[4,3-a] Γ chinoline-5,5’- | pyrimidine]- *** 2’,4’,6’(1’H,3’H)- __trion__ 17 rel-(2S,4R,4aR)-10- ~Z Η Ό fluor-9-(2-methoxy- ethoxy)-2,4-di- methyl-8-pyrazine- Tj T MJv 2-yl-1,2,4,4a-tetra- hydro-2’H,6H-spiro I 1 ^ [l,4-oxazino[4,3-a] γ·^ chinoline-5,5’- |

pyrimidine] -2’ ,4’ ,6’ W

_ (l’H,3’H)-trion _ 35 ÏÏ8 rel-(2S,4R,4aR>-10- ^ “ Η Ο fluor-9-(2-fluor- \ ethoxy)-2,4-di- methyl-8-pyrazine- jj Τ Η^Γ\^ 2-yl-1,2,4,4a-tetra- hydro-2’H,6H-spiro ί L Λ [l,4-oxazino[4,3-a] ^ chinoline-5,5’- | pyrimidine]-2’,4’,6’ __(ΓΗ,3’Η)-ΐποη 19 rel-(2S,4R,4aR)-9- ^ Η .0 fluor-2,4-di-methyl- \ Ν 8-pyrazine-2-yl- ΝΗ

l,2,4,4a-tetra- jj J

hydro-2’H,6H-spiro Q| [l,4-oxazino[4,3-a] l Γ chinoline-5,5’- vy''

pyrimidinel-2’,4’,6’ I

__(l’H,3’H)-trion__^_

20 rel-(2S,4R,4aR)- ^ Η O

2.4- di-methyl-8- γ N °^N \

pyrazine-2-yl- NH

l,2,4,4a-tetra- || J

hydro-2’H,6H-spiro Q)

[l,4-oxazino[4,3-a] ι I

chinoline-5,5’- pyrimidine]-2’,4’,6’ | __(l’H,3’H)-trion___ 21 rel-(2S,4R,4aR)-8- ^ Η Ο (3-methoxy- 0$^· pyrazine-2-yl)-2,4- ΝΗ dimethyl-1,2,4,4a- | jj T uj ^ tetrahydro-2’H,6H- /0

spiro [1,4-oxazino 1 I

[4,3-a] chinoline-

5,5’-pyrimidine]- J

2’,4’,6’ (ΓΗ,3’Η)- __trion____

22 (2S,4R,4aR)-8-(5- H

aminopyrazine-2- {J^P

yl)-9,10-difluor- H X J1 °V > 2.4- dimethyl-

l,2,4,4a-tetrahydro- j| | H

2’H,6H-spiro [1,4- p>v^N>\0(

oxazino [4,3-a] c l A

chinoline-5,5’- **

pyrimidine]-2’,4’,6’ I

_ (l’H,3’H)-trion _ 36 [23 (2S,4R,4aR)-9,10- ____ \C~Ö difluor-2,4- <V*-f dimethyl-8-[5- methylpirazine-2- J | H JT\k yl)-l ,2,4,4a- Fy tetrahydro-2’H,6H- p spiro[l,4-oxazino [4,3-a]chinoline- s 5,5’-pyrimidine]-2’,4’,6’ (l’H,3’H)-__trion_ 24 (2S,4R,4aR)-8-(5- ~ RJ3

broompyrazine-2- T u ^ X

yl)-9,10-difluor- 2.4- dimethyl- JK Ί^Η l,2,4,4a-tetrahydro-

2’H,6H-spiro[l,4- p lA

oxazino[4,3-a] j chinoline-5,5’- ~ pyrimidine]-2’ ,4’ ,6’ _- (ΓΗ,3’Η)-ίΗοη 25 (2S,4R,4aR>»,10- difluor-8-[5- Γ [Γ \ methoxylpirazine- 2-yl)-2,4-dimethyl- J| JL ^ l,2,4,4a-tetrahydro-

2,H,6H-spiro[l,4- p lA

oxazino[4,3-a] ^ chinoline-5,5’- “ pyrimidine]-2 ’ ,4’ ,6’ __(l’H,3’H)-trion Chiraal 26 (2S,4R,4aR)-8-(5- ^CxT^.. rt }L*0 ethoxypyrazine-2- | Ij1 \ yl)-9,10-difluor-

2.4- dimethyl- J| T

l,2,4,4a-tetrahydro- F^AN^^s‘N‘^Svt'^· 2’H,6H-spiro[l,4- p L^,0 oxazino[4,3-a] ; chinoline-5,5’- £ pyrimidine]-2’,4’,6’ _ (l’H,3’H)-trion Chiraal_

Tevens worden verschaft samenstellingen die bereid kunnen worden door het mengen van een of meer verbindingen die in de beschrijving beschreven zijn of farmaceutisch aanvaardbare zouten of tautomeren hiervan met farmaceutisch 5 aanvaardbare dragers, excipiënten, bindmiddelen, verdunningsmiddelen en dergelijke ter behandeling of ter verbetering van een verscheidenheid van bacteriële infecties. Een 37 therapeutische werkzame dosering of hoeveelheid heeft betrekking op de hoeveelheid van een of meer verbindingen die in de beschrijving beschreven zijn die voldoende is om te leiden tot een verbetering van symptomen van de infectie. De farmaceutische samenstellingen volgens de onderhavige uitvinding kunnen worden geproduceerd door S toepassing van methoden die bekend zijn zoals conventioneel granuleren, mengen, oplossen, encapsuleren, liofiliseren, emulgeren of processen ter verpulvering of fijnmalen onder andere. De samenstellingen kunnen in de vorm van bijvoorbeeld granules, poeders, tabletten, capsules, siropen, zetpillen, injecties, emulsies, elixers, suspensies of oplossingen zijn. De onderhavige samenstellingen kunnen geformuleerd 10 worden voor verscheidene wijzen van toediening bijvoorbeeld orale toediening, transmucosale toediening, rectale toediening of subcutane toediening alsmede intrathecale, intraveneuze, intramusculaire, intraperitoneale, intranasale, intraoculaire of intraventriculaire injectie. Een of meer verbindingen van de onderhavige uitvinding kan eveneens worden toegediend in een locale eerder dan op systemische wijze zoals 15 injectie in de vorm van een formulering met een duurzame afgifte. De volgende « doseringsvormen worden bij wijze van voorbeeld gegeven en dienen niet opgevat te worden als limiterend voor de onderhavige uitvinding.

Voor orale toediening, toediening via de mond en sublinguale toediening, zijn poeders, suspensies, granules, tabletten, pillen, capsules, gelcapsules en zakjes 20 aanvaardbaar als vaste doseringsvormen. Deze kunnen worden bereid bijvoorbeeld door het mengen van een of meer verbindingen van de onderhavige uitvinding of farmaceutisch aanvaardbare zouten of tautomeren hiervan met ten minste één additief of excipiënt zoals bijvoorbeeld een zetmeel of een ander additief. Geschikte additieven of excipiënten zijn sucrose, lactose, cellulosesuiker, mannitol, maltitol, dextran, 25 sorbitol, zetmeel, agar, alginaten, chitinen, chitosanen, pectinen, tragacanthgom, arabische gom, gelatines, collagenen, caseïne, albumine, synthetische of halfsynthetische polymeren of glyceriden, methylcellulose, hydropropylmethylcellulose en/of polyvinylpyrrolidon. Eventueel bevatten orale doseringsvormen andere ingrediënten om als hulpmiddel te worden gebruikt tijdens de toedieningen zoals 30 bijvoorbeeld een inactief verdunningsmiddel of glijmiddel zoals magnesiumstearaat of conserveermiddelen zoals parabeen of sorbinezuur, of antioxidantia zoals ascorbinezuur, tocoferol of cysteïne, een desintegreermiddel, bindmiddel, verdikkingsmiddel, buffers, zoetmiddelen, smaakstoffen of aroma’s. Bovendien kunnen 38 kleurstoffen of pigmenten voor identificatie worden toegevoegd. Tabletten en pillen kunnen verder worden behandeld met geschikte bekledingsmaterialen die uit de stand der techniek bekend zijn.

Vloeibare doseringsvormen voor orale toediening kunnen in de vorm van 5 farmaceutisch aanvaardbare emulsies, siropen, elixers, suspensies, opslibbingen en oplossingen zijn die een inactief verdunningsmiddel zoals water bevatten. Farmaceutische formuleringen kunnen worden bereid als vloeibare suspensies of oplossingen gebruik makend van een steriele vloeistof zoals bijvoorbeeld maar niet beperkt tot een olie, water, een alcohol en combinaties hiervan. Farmaceutisch 10 geschikte oppervlakte-actieve middelen, suspendeermiddelen, emulgeermiddelen kunnen voor orale of parenterale toediening worden toegevoegd.

Zoals hierboven opgemerkt kunnen suspensies oliën omvatten. Dergelijke oliën omvatten pinda-olie, sesamolie, katoenzoutolie, maïsolie, olijfolie en mengsels van deze oliën. Suspensiepreparaten kunnen eveneens esters van vetzuren zoals ethyloleaat, 15 isopropylmyristaat, vetzuur, glycerine en geacetyleerde vetzuurglycerine bevatten.

Suspensieformuleringen kunnen eveneens alcoholen omvatten zoals bijvoorbeeld maar niet beperkt tot ethanol, isopropylalcohol,hexadecylalcohol, glyerol en propyleenglycol. Ethers zoals maar niet beperkt tot poly(ethyleenglycol), petroleumkoolwaterstoffen zoals minerale olie en petrolatum en water kan eveneens in 20 suspensieformuleringen worden toegepast.

Voor nasale toediening kunnen farmaceutische formuleringen bestaan uit een spray of een aerosol die geschikte oplosmiddelen bevatten en verder eventueel andere verbindingen zoals bijvoorbeeld maar niet beperkt tot stabilisatoren, anti-microbiële middelen, anti-oxidantia, pH-modificeermiddelen, oppervlakte-actieve stoffen, 25 biobeschikbaarheidsmodificeerdmiddelen en combinaties hiervan. Een drijfgas voor een aerosolformulering kan omvatten samengeperste lucht, stikstof, koolstofdioxide of een koolwaterstof op basis van een laag kokend oplosmiddel. De verbinding of verbindingen van de onderhavige uitvinding worden op geschikte wijze afgegeven in de vorm van een aerosolspraypresentatie uit een vemevelaar en dergelijke.

30 Injecteerbare doseringsvormen omvatten in het algemeen watersuspensies of oliesuspensies die bereid kunnen worden gebruik makend van een geschikt dispergeermiddel of bevochtigingsmiddel en een suspendeermiddel. Injecteerbare vormen kunnen in oplossingsfase of in de vorm van een suspensie verkeren die bereid 39 is met behulp van een oplosmiddel of verdunningsmiddel. Aanvaardbare oplosmiddelen of dragers omvatten gesteriliseerd water, Ringer’s oplossing of een isotonische waterige zoutoplossing. Op een andere wijze kunnen steriele oliën worden gebruikt als oplosmiddelen of suspendeermiddelen. In het algemeen is de olie of 5 vetzuur niet vluchtig waaronder natuurlijke of synthetische oliën, vetzuren, mono-, di-of triglyceriden.

Voor injectie kan de farmaceutische formulering een poeder zijn die geschikt is voor reconstitutie met een geschikte oplossing zoals hierboven beschreven. Voorbeelden van deze omvatten drooggevroren, aan de rotatieverdamper gedroogde of 10 gesproeidroogde poeders, amorfe poeders, granules, precipitaten of deeltjes. Voor injectie kunnen de formuleringen eventueel stabilisatoren, middelen ter verandering van de pH, oppervlakte-actieve middelen, biobeschikbaarheidsmodificeermiddelen en combinaties hiervan. De verbindingen kunnen worden geformuleerd voor parenterale toediening door injecties zoals bijvoorbeeld door middel van bolusinjectie of continue 15 infusie. Een eenheidsdoseringsvorm voor injectie kan in ampullen of in multi- doseringsvaten voorkomen.

Voor rectale toediening kunnen de farmaceutische formuleringen in de vorm van een zetpil, een zalf, een enema, een tablet of een zalf voor afgifte van de verbinding in de darmen, sigmoïde flexure en/of rectum zijn. Rectale zetpillen worden geproduceerd 20 door het mengen van een of meer verbindingen van de onderhavige uitvinding of farmaceutisch aanvaardbare zouten of tautomeren van de verbinding met aanvaardbare dragers bijvoorbeeld cacaoboter of polyethyleenglycol, aanwezig in een vaste fase bij normale opslagtemperaturen en aanwezig in een vloeibare fase bij die temperaturen die geschikt zijn voor de afgifte van een geneesmiddel binnen het lichaam zoals 25 bijvoorbeeld bij het rectum. Oliën kunnen eveneens worden toegepast bij de bereiding van formuleringen van het zachte-gelatinetype en suppositoria. Water, zoutoplossing, waterige dextrose en aanverwante suikeroplossingen en glycerolen kunnen worden toegepast bij de bereiding van suspensieformuleringen die tevens suspendeermiddelen zoals petines, carbomeren, metylcellulose, hydroxypropylcellulose of 30 carboxymethylcellulose alsmede buffers en conserveermiddelen kunnen bevatten.

Naast deze representatieve doseringsvormen die hierboven beschreven zijn, zijn farmaceutisch aanvaardbare excipiënten en dragers in het algemeen de deskundige bekend en zijn dus in de onderhavige uitvinding opgenomen. Deze excipiënten en 40 dragers zijn beschreven bijvoorbeeld in “Remmingtons Pharmaceutical Sciences”

Mack Pub. Co., New Jersey (1991).

De formuleringen van de onderhavige uitvinding kunnen worden aangeduid als langzaam inwerkende, snel inwerkende, snel afgevende, lang inwerkende en duurzame 5 afgifte. Dus de farmaceutische formuleringen kunnen eveneens worden geformuleerd voor gecontroleerde afgifte of voor langzame afgifte.

De onderhavige samenstellingen kunnen eveneens bijvoorbeeld omvatten micellen of liposomen of enige andere ingekapselde vorm dan wel kunnen zij worden toegediend in een verlengde afgiftevorm ter verschaffing van een verlengde opslag 10 en/of afgifte-effect. Derhalve kunnen de farmaceutische formuleringen tot pellets of cilinders worden samengeperst en intramusculair dan wel subcutaan als depotinjecties of als implantaten zoals stents geïmplanteerd worden. Dergelijke implantaten kunnen gebruik maken van materialen zoals siliconen en biodegradeerbare polymeren.

De samenstellingen kunnen bijvoorbeeld van ongeveer 0,1 gew.% tot ongeveer 15 90 gew.% of meer van het actieve materiaal bevatten afhankelijk van de wijze van toediening. Daar waar de samenstellingen doseringeenheden omvatten kan elke eenheid bijvoorbeeld van ongeveer 5 tot 500 mg of meer van de actieve ingrediënten bevatten. De doseringsvorm zoals deze wordt gebruikt voor de volwassen mensbehandeling kan variëren van bijvoorbeeld ongeveer 10 tot 3000 mg per dag afhankelijk van de wijze 20 van toediening en de frequentie van toediening.

Specifieke doseringsvormen kunnen worden aangepast in afhankelijkheid van de omstandigheden van de infectie, de leeftijd, het lichaamsgewicht, de algemene gezondheidstoestand, het geslacht en dieet van de patiënt, doseringsintervallen, wijzen van toediening, afscheidingssnelheid en combinaites van geneesmiddelen. Elke van de 25 bovengenoemde doseringsvormen die werkzame hoeveelheden bevatten zijn binnen de grenzen van het routinematig experimenteren en derhalve binnen de beschermingsomvang van de onderhavige uitvinding. In het algemeen zal de totale dosering gewoonlijk variëren van ongeveer 0,1 mg/kg/dag tot ongeveer 500 mg/kg/dag in een enkele of in verdeelde doseringen. Gewoonlijk kunnen doseringen voor de mens 30 variëren van ongeveer 10 mg tot ongeveer 3000 mg per dag in een enkele of in multipele doseringen.

Een therapeutisch effectieve dosering of hoeveelheid kan variëren in afhankelijkheid van de wijze van toediening en de toedieningsvorm. Enkele 41 samenstellingen van de onderhavige uitvinding verschaffen een formulering die een hoge therapeutische index vertoont. De therapeutische index is de dosisverhouding tussen toxische en therapeutische effecten die uitgedrukt kan worden als de verhouding tussen LD50 en ED50. De LD50 is de lethale dosering voor 50% van de populatie en de 5 ED50 is de therapeutisch effectieve dosis in 50% van de populatie. De LD50 en de ED50 kunnen worden bepaald door toepassing van standaard farmaceutische procedures in dierlijke celculturen of experimentele modellen.

In een uitvoeringsvorm verschaft de uitvinding methoden voor de behandeling of de preventie van een bacteriële infectie in een patiënt zoals bijvoorbeeld een zoogdier, 10 bijvoorbeeld een mens of een niet-menselijk zoogdier, omvattende het toedienen van een werkzame hoeveelheid van een of meer verbindingen die in de beschrijving beschreven zijn aan de patiënt. Geschikte patiënten kunnen worden behandeld waaronder huisdieren of wilde dieren, gezelschapsdieren zoals honden, katten en dergelijke; levende dieren zoals bijvoorbeeld paarden, koeien en andere herkauwers, 15 varkens, kippen, konijnen en dergelijke; primaten bijvoorbeeld apen zoals mesusapen en cynomolgus (ook bekend als krabetende of dieren met een lange staart) apen, maromosets, tamarins, chimpansees, macakken en dergelijke; knaagdieren zoals ratten, muizen, woestijnratten, cavia’s en dergelijke. In een uitvoeringsvorm wordt de verbinding toegediend in een farmaceutisch aanvaardbare vorm eventueel in een 20 farmaceutisch aanvaardbare drager. De verbindingen die in de beschrijving beschreven zijn kunnen worden gebruikt voor de behandeling of de preventie van besmettelijke ziekten veroorzaakt door een verscheidenheid van bacteriële organismen waaronder infecties door pathogene bacteriële species. Voorbeelden omavtten Gram positieve en Gram negatieve aerobe en anaerobe bacteriën zoals bijvoorbeeld Staphylococci, 25 bijvoorbeeld S. aureus; Enterococci, bijvoorbeeld E. faecalis; Streptococci, bijvoorbeeld S. pyogenes en S.pneumoniae; Escherichia species, bijvoorbeid E. coli, met inbegrip van enterotoxigenische, enteropahogenische, enteroinvasieve, enterohemorrhagische en enteroaggregatieve E. coli; Haemophilus, bijvoorbeeld H. influenze; Moraxella, bijvoorbeeld M. catarrhalis. Andere voorbeelden omvatten 30 Mycobacteria, bijvoorbeeld M. tuberculosis, M. avian-intracellulare, M. kansasli, M. bovis, M. africanum, M. genavense, M. leprae, M. xenopi, M. simiae, M. scrofulaceum, M. malmoense, M. celatum, M. abscessus, M. chelonae, M. szulgai, M. gordonae, M. haemophilum, M. fortuni en M. marinum; Corynebacteria, bijvoorbeeld C. diphtheriae; 42

Vibrio species, bijvoorbeeld V cholerae; Campylobacter species, bijvoorbeeld C. jejuni; Helicobacter species, bijvoorbeeld H. pylori’, Pseudomonas species, e.g. P. aeruginosa’, Legionella species, bijvoorbeeld L. pneumophila; Treponema species, bijvoorbeeld. pallidum·, Borrelia species, bijvoorbeeld B. burgdorferi', Listeria species, 5 bijvoorbeeld L. monocytogenes’, Bacillus species, bijvoorbeeld B. cereus; Bordatell species, bijvoorbeeld B. pertussis’, Clostridium species, bijvoorbeeld C. perjringens, C. tetani, C. difficle en C. botulinum', Neisseria species, bijvoorbeeld N. meningitidis en N. gonnorrhoeae; Chlamydia species, bijvoorbeeld C. psittaci, C. pneumoniae en C. trachomatis; Rickettsia species, bijvoorbeeld R. rickettslii en R. prowazekii; Shigella 10 species, bijvoorbeeld S. sonnei; Salmonella species, bijvoorbeeld S. typhimurium; Yersinia species, e.g. Y. enterocollitica en Y pseudotuberculosis’, Klebsiella species, bijvoorbeeld K. pneumoniae’, en Mycoplasma, bijvoorbeeld M. pneumoniae.

Infecties die behandeld kunnen worden met behulp van de beschreven verbindingen omvatten infecties van het centrale zenuwstelsel, uitwendige oorinfecties, 15 infecties van het middenoor zoals acute otitis media, infecties van de craniale sinusen, ooginfecties, infecties van de orale holte zoals infecties van de tanden, tandvlees en slijmvlies, infecties van de bovenste ademhalingswegen, infecties van de lagere ademhalingswegen, genitoürinaire infecties, gastroïntestinale infecties, gynecologische infecties, septicemia, beender- en gewrichtsinfecties, huid- en huidstructuurinfecties, 20 bacteriële endocarditis, verbrande weefsels, antibacteriële profylaxis bij chirurgische ingrepen en antibacteriële profylaxis bij immuno-onderdrukte patiënten zoals patiënten die kankerchemotherapie ontvangen dan wel patiënten die een orgaantransplantaat ontvangen. Deze infecties kunnen worden behandeld in een ziekenhuis of in gemeentegebouwen via verscheidene wijzen van toedieningen zoals zij in de 25 beschrijving beschreven zijn.

De verbindingen of samenstellingen die in de beschrijving beschreven zijn kunnen eveneens profylactisch worden toegepast. Dientengevolge een of meer van de onderhavige verbindingen of samenstellingen kunnen worden toegediend aan een persoon waarvan geacht wordt dat deze risico loopt voor het ontwikkelen van een 30 microbiële infectie. Individuen die het risico lopen een microbiële infectie te ontwikkelen omvatten personen die blootgesteld zijn aan bepaalde micro-organismen zoals bijvoorbeeld een pathogene bacteriële species; individuen met een verzwakt immuunsysteem zoals individuen die lijden aan een immunodeficiëncyziekte of die 43 medicatie leidende tot een immunodeficientie innemen; en personen met een lange geschiedenis van herhaalde of chronische infectie; zoals bijvoorbeeld kinderen met herhaalde infecties van het middenoor.

Een andere uitvoeringsvorm verschaft een methode voor het doden of de 5 preventie van groei van bacteriën welke omvat het contacteren van bacteriën met hetzij een niet-therapeutische hoeveelheid dan wel een therapeutisch effectieve hoeveelheid van een of meer verbindingen volgens de uitvinding. Deze methoden kunnen in vivo of in vitro optreden. In vitro contact kan omvatten een screeningstest ter bepaling van de doeltreffendheid van een of meer verbindingen tegen geselecteerde bacteriën bij 10 verschillende hoeveelheid of concentraties. In vivo contact met een therapeutisch werkzame hoeveelheid van een of meer van de verbindingen kan omvatten de behandeling of profylaxis van een bacteriële infecties in het dier waarin het contact optreedt. Het effect van een of meer verbindingen op de bacteriën en/of het gastheerdier kan eveneens worden bepaald of worden gemeten.

15 Inbegrepen binnen de beschermingsomvang van de onderhavige uitvinding zijn alle isomeren (bijvoorbeeld stereoisomeren, diastereoisomeren, epimeren, geometrische isomeren) van de verbindingen beschreven in de beschrijving alsmede alle geheel of ten dele geëquilibreerde mengsels hiervan (bijvoorbeeld racemisch of optisch actieve mengsels). De onderhavige uitvinding dekt tevens de individuele isomeren van de 20 verbindingen weergegeven door de formules in de beschrijving als mengsels met isomeren daarvan waarin een of meer chirale centra geïnverteerd zijn.

Stereoisomere mengsels, bijvoorbeeld mengsels van diastereomeer kunnen worden gescheiden in him corresponderende isomeren op bekende wijze door middel van een geschikte scheidingsmethode. Diastereomere mengsels bijvoorbeeld kunnen 25 worden gescheiden in hun afzonderlijke diastereomeren door middel van een gefractioneerde kristallisatie, chromatografie, oplosmiddelverdeling, en vergelijkbare procedures. Deze scheiding kan plaatsvinden hetzij op een niveau van een van de uitgangsverbindingen of in een verbinding met formule 1 zelf. Enantiomeren kunnen worden gescheiden door de vorming van diastereomere zouten bijvoorbeeld door 30 zoutvorming met een enantiomeer zuiver chiraal zuur of door middel van chromatografie bijvoorbeeld HPLC gebruik makend van chirale chromatografiemedia.

Het is vanzelfsprekend dat de verbindingen die in de beschrijving beschreven zijn het verschijnsel van tautomerisme kunnen vertonen. Aangezien de chemische structuur 44 soms slechts een van de mogelijke tautomere vormen voorstellen dient men te begrijpen dat de uitvinding alle tautomere vormen van de weergegeven structuur omvat.

Bovendien kunnen de in de beschrijving beschreven verbindingen bestaan in niet-5 gesolvateerde alsmede in gesolvateerde vormen met farmaceutisch aanvaardbare oplosmiddelen zoals water, ethanol en dergelijke. In het algemeen worden de gesolvateerde vormen equivalent beschouwd met de niet-gesolvateerde vormen voor de doelstellingen van de onderhavige uitvinding.

10 VOORBEELDEN

VOORBEELD 1

Trap 1: 2-broom-3,4,5-trifluorbenzaldehyde. Een 3 liter vurenhouten kolf werd 15 gedroogd door verhitting met een hete luchtpistool tot 94-95°C. Na koeling tot kamertemperatuur werden 74,48 g (1,47 mol) diisopropylamine aan de kolf toegevoegd en in 600 ml droog THF opgelost. De oplossing werd tot -75°C gekoeld en n-butyllithium (2,5 M in hexaan, 320 ml) werd druppelsgewijs over een testperiode van 20 minuten onder instandhouding van een temperatuur tussen -75 tot -60°C 20 toegevoegd. Het mengsel liet men opwarmen tot -10,4°C tot 0,2°C gedurende 13 minuten. Het reactiemengsel werd gekoeld tot -73,7°C en 140 gram (0,665 mol) 1-broom-2,3,4-trifluorbenzeen opgelost in 860 ml THF werd druppelsgewijs toegevoegd over een tijdsperiode van 2 uur onder instandhouding van de temperatuur tussen -73,7 en -66°C. Het reactiemengsel werd geroerd gedurende 5 uur tussen -76,3 en 71,7°C. 25 DMF (146 ml) werd over een tijdsperiode van 40 minuten bij -70,2 tot -64,8°C toegevoegd. Het reactiemengsel werd tot 13°C gedurende een nacht opgewarmd. Het reactiemengsel werd tot -25,6°C gekoeld voor de druppelsgewijze toevoeging van een oplossing van 259 ml geconcentreerd chloorwaterstofzuur in 538 ml gedestilleerd water. De toevoeging was volledig in 30 minuten terwijl de temperatuur niet hoger dan 30 -9°C steeg. De lagen werden gescheiden en het waterige gedeelte werd drie maal met ... ml ethylacetaat geëxtraheerd. De gecombineerde organische porties werden achtereenvolgens gewassen met 500 ml verzadigd NaHC03-oplossing en 500 ml pekel. Na drogen op natriumsulfaat werd het mengsel gefiltreerd en aan de rotatieverdamper 45 afgetapt waarbij 148,4 gram van een bruine vloeistof werd verkregen. De vloeistof werd onder vacuüm gedestilleerd en het product werd verzameld bij 47,9 tot 51,3°C (1,6 torr) waarbij 110,17 gram product met een zuiverheid van 91% (HPLC) werd verkregen. Dit werd opgenomen in heptaan en werd gekoeld in de vriezer waarbij 80,23 5 gram van een witte lichtgele vaste stof werd verkregen. De vaste stof werd gecombineerd met een opvolgende oogst en materiaal uit een eerdere proef een reactie waarbij 106,21 gram werd verkregen die onder vacuüm gedroogd werd teneinde heptaan te verwijderen. Opbrengst 104,5 gram met een zuiverheid van 98,8%, smeltpunt 36,8-38°C. HPLC-analyse uitgevoerd op een Chromolith Performance RP-10 18e, 100-4,6 mm. Mobiele fase: A = methanol, B = 0,1 N TEAA (pH = 7). Gradiënt van 50% tot 90% methanol over een tijdsperiode van 5 minuten. Detector bij 254 nm. Retentietijd: 1,79 minuten.

Trap 2: 3-broom-6-(2,6-cis-dimethylmorfoline-4-yl)-4,5-difluorbenzaldehyde. 2-broom-3,4,5-trifluorbenzaldehyde (133,15 gram, 0,56 mol) werd opgelost in 1000 ml 15 droog acetonitril. Triethylamine (118,65 ml, 0,85 mol) werd toegevoegd gevolgd door cis-2,6-dimethylmorfoline (Lancaster, 71,64 gram, 062 mol) en verder 125 ml acetonitril. Het mengsel werd gedurende 24 uur onder druk van koeling verhit en vervolgens op kamertemperatuur gekoeld en gegoten op 1500 ml van een verzadigd natriumbicarbonaatoplossing. De fasen werden gescheiden en de waterige fase werd 20 twee maal met 500 ml ethylacetaat geëxtraheerd. De gecombineerde organische porties werden twee maal gewassen met 500 ml pekel en werden vervolgens op magnesiumsulfaat gedroogd. Na filtreren en afdampen aan de rotatieverdamper werd 199,7 gram olie teruggewonnen. De olie werd verdund tot ongeveer -300 ml met heptaan om het vast worden te induceren en werd in de vriezer gedurende een nacht 25 opgeslagen. De verkregen gele vaste stof werd gefiltreerd waarbij 111,7 gram werd verkregen met een zuiverheid van 99,8% (HPLC) van de in de titel genoemde verbinding. Smeltpunt 88,1-92,0°C. HPLC-analyse uitgevoerd op een Chromolith Performance-kolom, RP-18e, 100-4,6 mm; mobiele fase: A = MeOH, B = 0,1N TEAA (pH = 7); gradiënt: 60% A tot 100% A over een tijdsperiode van 5 minuten; golflengte: 30 254 nm; retentietijd: 1,94 minuten.

Trap 3: 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluor-5-(4,4,5,5-tetramethyl[l,3,2]-dioxaborolan-2-yl)-benzaldehyde. Kaliumacetaat (179,7 gram, 1,83 mol) Pd(PCy3)2Cl2 (Aldrich, 32,0 gram, 0,043 mol), bis-(pinacolato)diboron (Aldrich, 149,7 gram, 0,59 46 mol), en 3-broom-6-(2,6-cisdimethylmorfoline-4-yl)-4,5-difluorbenzaldehyde (147,0 gram, 0,538 mol) werden gebracht in een 5 liter 4-halskolf. De vaste stof werd geëvacueerd en zes maal met argon gespoeld. Methyltetrahydrofuran (3300 ml) werd toegevoegd. Het mengsel werd mechanisch geroerd terwijl het geëvacueerd werd totdat 5 het opborrelen stopte. De reagentia werden met argon gespoeld en vervolgens onder vacuüm gebracht en vervolgens met argon wederom gespoeld. Argon werd door het mengsel geleid gedurende 2 uur en 16 minuten, het mengsel werd onder vacuüm gebracht totdat het opborrelen ophield. Het mengsel werd met argon gespoeld, onder vacuüm gebracht en wederom met argon gespoeld. Het mengsel werd gedurende 4,7 10 dagen onder terugvoerkoeling verhit en vervolgens gaf NMR aan dat de gehele hoeveelheid 3-broom-6-(2,6-cisdimethylmorfoline-4-yl)-4,5-difluorbenzaldehyde verbruikt was. Het mengsel werd tot kamertemperatuur gekoeld, gefilteerd en gespoeld met ethylacetaat. Het substraat werd aan de rotatieverdamper afgedampt waarbij een stroperige vaste stof werd verkregen die in ethylacetaat werd opgenomen en hierna 15 gefilteerd werd. Dit leverde 101,9 gram vaste stof op. De vaste stof werd gemengd met ongeveer 800 ml warm ethylacetaat en werd ter verwijdering van de katalysator gefiltreerd. Rotatieverdamping leverde 94,4 gram van een product met een bevredigende NMR. Het oorspronkelijke ethylacetaatfiltraat werd geconcentreerd, heptaan werd toegevoegd voor het induceren van het vast worden en het verkregen 20 mengsel werd in de vriezer opgeslagen. Dit werd gefiltreerd waarbij 45,45 gram additioneel product werd verkregen. Dit werd opgenomen in ongeveer 400 ml warm ethylacetaat en werd gefiltreerd ter verwijdering van een witte verontreiniging en werd hierna aan de rotatieverdamper afgedampt. Het residu werd behandeld met warm heptaan waarbij fijne deeltjes werden verkregen en dit werd vervolgens gefiltreerd om 25 een verdere hoeveelheid product te verzamelen. Totaal verzameld product was 121 gram met een smeltpunt van 142, 9-143,8°C. Analyse berekend: 59,86% H, 3,67% N; gevonden: 59,81% C, 7,03% H, 3,66% N.

Trap 4: 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluor-5-pyrazine-2-yl-

benzaldehyde, 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluor-5-(4,4,5,5-tetramethyl-30 [l,3,2]dioxaborolan-2-yl)-benzaldehyde (16 gram, 41 mmol), 2-iodopyrazine (Aldrich, 6 gram, 29,1 mmol), natriumcarbonaat (9,3 gram, 87 mmol) en Pd(PPh3)2Cl2 (Aldrich, 0,82 gram, 1,2 mmol) werden gesuspendeerd in een l:l-mengsel van CH3CN/H2O. Het reactiemengsel werd vervolgens met stikstof gespoeld en gedurende een nacht bij 85°C

47 verhit. Na voltooiing werd het reactiemengsel verdeeld tussen H2O en ethylacetaat en de waterige laag werd twee maal met ethylacetaat geëxtraheerd. De gecombineerde extracten werden over MgS04 gedroogd, gefiltreerd en geconcentreerd. Het ongezuiverde product werd gezuiverd door middel van kolomchromatografie onder 5 elutie met 5-40% ethylacetaat in hexaan waarbij 6,6 gram van het gewenste product werd verkregen. 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1,19 (d, J=6,2 Hz, 6 H), 3,09 (m, 4 H), 3,84 (m, 1 H), 8,28 (dd, J=8,l, 2,1 Hz, 1 H), 8,53 (d, J=2,5 Hz, 1 H), 8,66 (dd, J=2,4, 1,7 Hz, 1 H), 9,01 (s, 1 H), 10,22 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 334 (MH+).

10 Trap 5: Verbinding 1. Een geroerde opslibbing van 2-(2,6-dimethylmorfoline-4- yl)-3,4-difluor-5-pyrazine-2-yl-benzaldehyde (6,6 gram, 19,9 mmol) in MeOH werd behandeld met barbituurzuur (Aldrich, 2,7 gram, 20,9 mmol). Het reactiemengsel werd gedurende een nacht onder vlugverkoeling verhit en werd tot kamertemperatuur gekoeld. Een vaste precipitaat resulteerde dat gefiltreerd werd en onder vacuüm 15 gedroogd werd waarbij 7,2 gram van een lichtgele vaste stof werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,85 (d, J=6,4 Hz, 3 H), 1,08 (d, J=6,2 Hz, 3 H), 2,87 (d, J=14,4 Hz, 1 H), 3,02 (m, 1H), 3,52 (d, J=14,8 Hz, 1 H), 3,60 (dd, J=8,7, 6,3 Hz, 1 H), 3,72 (m, 1 H), 3,82 (d, J=8,8 Hz, 1 H), 4,04 (dd, J=13,5, 2,1 Hz, 1 H), 7,39 (d, J=8,4 Hz, 1 H), 8,49 (d, J=2,5 Hz, 1 H), 8,63 (dd, J-2,4,1,7 Hz, 1 H), 8,88 (m, 1 Η), 11,44 (s, 20 1H), 11,78 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 444 (MH+). Analyse berekend voor C2iH,9F2N504 · 0,27 H20: C, 56,27; H, 4,39: N, 15,62. Gevonden: C, 55,88; H 4,28; N, 15,39.

VOORBEELD 2A

Verbinding 2: De enantiomeren van verbinding 1 werden gescheiden door 25 omgekeerde fase HPLC. Het meest vastgehouden enantiomeer 2:[alphaD] = 239°. Analye berekend voor C2iHi9F2N504 · 0,22 H20: C, 56,38; N, 15,65. Gevonden: C, 56,66; H, 4,21; N, 15,26.

VOORBEELD 2B

Trap 1: Κ2(Χ>3 werd aan een flink geroerd mengsel van 2R,6R-(trans)-30 dimethylmorfoline (afkomstig van BASF) in aceton (100 ml) toegevoegd. Benzylbromide werd druppelsgewijs aan het mengsel toegevoegd hetgeen resulteerde in een exotherme reactie. Het reactiemengsel werd afgekoeld en gedurende 18 uur bij kamertemperatuur geroerd. Aceton werd grotendeels onder vacuüm afgedampt en 48 verdeeld met water (100 ml) en ethylacetaat (100 ml). De waterige laag werd met EtOAc (100 ml) geëxtraheerd, op Na2SC>4 gedroogd en geconcentreerd. Het product werd gedestilleerd onder verminderde druk bij 120°C (75-80 at 0,5 torr) waarbij een kleurloze olie van 4-benzyl-2R,6R-(trans)-dimethylmorfoline werd verkregen.

5 Trap 2: 2,6-dimethylmorfoline, HCl-zout. 4-Benzyl-2R,6R-(trans)- dimethylmorfoline (15 g, 73 mmol) werd in een autoclaaf gebracht en MeOH (800 ml) werd toegevoegd. Pd/C (3,5 g) werd toegevoegd en het mengsel werd gedurende een nacht bij kampertemperatuur geroerd onder een druk van 3,5 bar H2. Het mengsel werd vervolgens door celiet gefiltreerd gevolgd door de toevoeging van HC1 2M in Et20 (47 10 ml, 1,3 eq, 95 mmol). Dit fïltraat werd vervolgens geconcentreerd waarbij 8,3 g van het morfolinezout werd verkregen. Hl NMR (500 MHz, CDCI3) d 4,26 (m, 2H), 3,25 (m, 2H). 2,94 (m, 2H), 1,39 (m, 6H).

Trap 3: 5-broom-2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluorbenzaldehyde. Aan een oplossing van 5-brom-2,3,4-trifluorbenzaldehyde (11,5 g, 48 mmol) in droog 15 acetonitril (180 ml) werd Et3N (16,7 ml, 120 mmol) en 2,6-dimethylmorfoline, HCl-zout (8,3 g, 53 mmol) toegevoegd. Het reactiemengsel werd gedurende 24 uur onder terugvoerkoeling verhit. De oplossing liet men tot kamertemperatuur afkoelen en deze werd vervolgens op een verzadigde oplossing van NaHCC>3 gegoten. De fasen werden gescheiden en de waterige fase werd met EtOAc geëxtraheerd. De gecombineerde 20 organische lagen werden met pekel gewassen op MgSÜ4 gedroogd en geconcentreerd waarbij een oranje olie (15 g) werd verkregen. Een opslibbing van het ongezuiverde materiaal in heptaan leverde 11,92 g van een gele vaste stof. Hl NMR (500 MHz, CDCI3) d 10,36 (s, 1H), 7,82 (dd, 1H), 4,19 (m, 2H), 3,3 (d, 2H), 2,97 (dd, 2H), 1,30 (d, 6H).

25 Trap 4: 2-(2,6-dimethylmofroline-4-yl)-3,4-difluor-5-(4,4,5,5-tetramethyl[l,3,2] dioxaborolan-2-yl)-benzaldehyde. 5=broom-2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluorbenzaldehyde (18,7 g, 55,6 mmol), bis-(pinacolato)-diboron (19,0 g, 74,4 mmol), kaliumacetaat (22,8 g, 231 mmol) en bis-(tricyclohexylfosfïne)-dichloorpalladium (4,0 gg, 5,41 mmol) werden in 1 liter 3-halskolf gebracht. De vaste 30 stof werd met argon gespoeld en ontgast watervrij 2-methyl-THF (470 ml) werd met een cannule toegevoegd. Het reactiemengsel werd gedurende 5 dagen onder terugverkoeling verhit, tot kamertemperatuur gekoeld, door ciliet gefiltreerd en afgedampt waarbij een stroperige vaste stof werd verkregen die in EtOAc werd 49 opgenomen en gefiltreerd werd. De moedervloeistof werd afgedampt en het residu werd in heptaan getritureerd. Filtratie via een gesinterde trechter leverde 5,05 g. De moedervloeistof werd wederom afgedampt, het residu werd getritureerd in heptaan en tot +4°C gekoeld. Filtratie via een gesinterde funnel leverde 5,69 g op. De 5 moedervloeistof werd wederom afgedampt, het residu werd in een kleine hoeveelheid heptaan getritureerd en tot -18°C gekoeld. Filtratie gebruik makend van een gesinterde trechter leverde 0,779 g op. Hl-NMR (500 MHz, CDC13) d 10,25 (s, 1H), 7,98 (dd, 1H), 4,20 (m, 2H), 3,38 (dt, 2H), 3,00 (m, 2H), 1,35 (s, 12H), 1,29 (d, 6H).

Trap 5: 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluor-5-pyrazine-2-yl- 10 benzaldehyde. Aan een suspensie van 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluor-5-(4,4,5,5-tetramethyl-[l,3,2]dioxaborolan-2-yl)-benzaldehyde (11,5 g, 29,1 mmol) en natriumcarbonaat (8,8 g, 83,1 mmol) in eerder ontgast acetonitril/water (1/1) mengsel (140 ml) werd iodopyrazine (5,7 g, 27,7 mmol) onder stikstof toegevoegd. Bis-(trifenylfosfine)-dichloorpalladium-(II) (758 mg, 1,08 mmol) werd bij 15 kamertemperatuur toegevoegd en het reactiemengsel werd gedurende een nacht bij 85°C verhit. Het mengsel werd tot kamertemperatuur gekoeld, met EtOAc en water verdund. De fasen werden gescheiden en de waterige fase werd wederom geëxtraheerd met 2x EtOAc. De gecombineerde organische lagen werden op magnesiumsulfaat gedroogd en geconcentreerd waarbij een bruine olie werd verkregen. Zuivering op 20 silicagel (hexaanethyLAc 9/1, 8/2 en vervolgens 7/3) leverde 3,65 g van een beige vaste stof. Hl-NMR (500 MHz, CDC13) d 10,35 (s, 1H), 9,06 (t, 1H), 8,70 (dd, 1H), 8,57 (d, 1H), 4,24 (m, 2H), 3,43 (dt, 2H), 3,05 (m, 2H), 1,32 (d, 6H).

Trap 6: Verbinding 2: (2R,4S,4aS)-9,10-difluor-2,4-dimethyl-8-pyrazine-2-yl-l,2,4,4a-tetrahydro-2’H,6H-spiro[l,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5’-pyrimidine]-25 2\4’,6’(1 ’H,3’H)-trion (2,65 g, 8 mmol) en barbituurzuur (1,07 g, 8,4 mmol) werden in IPA (350 ml) bij 85°C over een tijdsperiode van 9 Vi dagen verhit. Een monster van het heterogene mengsel werd afgenomen en tot droog afgedampt. IPA (100 ml) werd toegevoegd en het reactiemengsel werd bij 85°C gedurende nog 2 dagen verhit. Een monster van het heterogene mengsel werd opgenomen en tot droog afgedampt. Verder 30 IPA (600 ml) werd toegevoegd ter verkrijging van een helder gele oplossing en het reactiemengsel werd bij 85°C gedurende nog een dag verhit. Het oplosmiddel werd vervolgens onder verminderde druk afgedampt waarbij 4 g van een gele vaste stof werd verkregen. De verkregen vaste stof werd opgeslibd in MeOH (100 ml) gedurende een 50 nacht en werd gefiltreerd waarbij 1,79 g van een gele vaste stof als een mengsel van isomeren werd verkregen. De moedervloeistof werd tot droog afgedampt en de verkregen vaste stof (2,17 g) werd in MeCN (50 ml) opgelost. Precipitatie werd tot stand gebracht door het toevoegen van water en filtratie leverde een zuiver product als 5 een gele vaste stof (914 gmg). Hl-NMR (500 MHz, DMSO-D6) d 11,83 (s, 1H), 11,49 (s, 1H), 8,94 (t, 1H), 8,68 (dd, 1H), 8,54 (d, 1H), 7,44 (d, 1H), 4,09 (dd, 1H), 3,88 (d, 1H), 3,77 (m, 1H), 3,66 (m, 1H), 3,57 (d, 1H), 3,07 (t, 1H), 2,92 (d, 1H), 1,13 (d, 3H), 0,91 (d, 3H); MS (APC1+, m/z) 443,1; microanalyse: verwacht C 55,88%, H 4,32%, N 15,79%, gevonden C 56,21%, H 4,17%, N 15,24%. Het mengsel van isomeren (1,79 g) 10 werd gesuspendeerd in IPA (700 ml) en werd bij 85°C gedurende 5 Vz dagen verhit. Het oplosmiddel werd vervolgens onder verminderde druk verwijderd waarbij een oranje vaste stof als een meer verrijkt mengsel van isomeren werd verkregen. Een combinatie van een vergelijkbare opwerking als hierboven (MeOH en vervolgens MeCN/water) leverde nog twee batches van product (358 mg) respectievelijk (150 mg).

15 VOORBEELD 3

Verbinding 3: De enantiomeren van verbinding 1 werden gescheiden door middel van omgekeerde fase HPLC. Het minst overgehouden enantiomeer 3:[alphaD] = +202°. Analyse berekend voor C21H19F2N5O4 · 0,05 H20: C, 56,77; H, 4,33; N, 15,76. Gevonden: C, 56,38; H, 4,17; N, 15,43.

20 VOORBEELD 4

Verbinding 4: Verbinding 2 (0,300 gram, 0, 677 mmol) werd gesuspendeerd in droog acetoniltrl (5 ml) en werd behandeld met formaldehyde (37% waterige oplossing, 0,151 ml, 2,03 mmol) en morfoline (0,177 ml, 2,03 mmol). De suspensie werd onder terugvloeikoeling geduerende een nacht verhit. De verkregen oplossing werd gekoeld 25 en gefiltreerd waarbij een witte vaste stof werd verkregen. NMR gaf aan dat het uitgangsmateriaal overbleef zodat vast materiaal werd opnieuw gesuspendeerd in acetonitril en een verdere hoeveelheid formaldehyde en morfoline werd toegevoegd. Het reactiemengsel werd gedurende een nacht onder terugvloeikoeling verhit. De oplossing werd vervolgens gekoeld en het precipitaat werd gefiltreerd en gedroogd 30 waarbij een witte vaste stof (0,101 gram) werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 0,98 (d, J=6,2 Hz, 3 H). 1.19 (d, J=6,2 Hz, 3 H), 2,48 (m, 4 H), 2,69 (m,4 H), 3,00 (d, J=14,3 Hz, 1 H), 3,08 (m, 1 H), 3,18 (d, J=14,3 Hz, 1 H), 3,51 (m, 4 H), 3,62 (m, 4 H), 3,77 (m, 1 H), 3,90 (m, 1 H), 4,09 (d, J=16,3, 13,0 Hz, 2 51 Η), 5,01 (d, J=13,l Hz, 1 H), 7,40 (d, J=6,8 Hz, 1 H), 8,38 (d, J=2,3 Hz, 1 H), 8,51 (m, 1 H), 9,00 (s, 1 H).

VOORBEELD 5

Verbinding 5: Verbinding 2 (0,400 gram, 0,902 mmol) werd gesuspendeerd in 5 droog acetonitril (5 ml) en werd behandeld met formaldehyde (37% waterige oplossing, 0,403 ml, 5,41 mmol) en N-methylpiperazine (0,600 ml, 5,41 mmol). De suspensie werd onder terugverkoeling gedurende 5 uur verhit. De verkregen oplossing werd gekoeld en tot een olie geconcentreerd. Het olieachtige residu werd enkele maken met MTBE (tert-butylmethylether) en hexaan getritureerd waarbij een precipitaat werd 10 verkregen dat gefiltreerd en onder vacuüm gedroogd werd waarbij een gele vaste stof (0,438 gram) verkregen werd. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 0,96 ( d, J=6,4 Hz, 3 H), 1,18 (d, J=6,2 Hz, 3 H), 2,12 (s, 3 H), 2,22 (s, 3 H), 2,46 (m, 8 H), 2,69 (m, 4 H), 3,12 (m, 3 H),. 3,77 (m, 1 H), 3,89 (m, 1 H), 4,08 (d, J=8,m8 Hz, 1 H), 4,17 (dd, J-13,5, 2,0 Hz, 1 H), 4,69 (d, J=12,9 Hz, 1 H), 4,87 (dd, J=14,l, 13,3 Hz, 2 15 H), 5,02 (d, J=12,9 Hz, 1 H), 7,41 (d, J=7,6 Hz, 1 H), 8,37 (d, J=2,5 Hz, 1 H), 8,51 (m, 1 H), 8,99 (s, 1 H). Analyse berekend voor C33H43F2N9O4 · 0,55 H3O · 0,20(CH3)3COCH3: C, 58,59; H, 6,76; N, 18,19. Gevonden: C, 58,33; H, 7,23; N 18,59 VOORBEELD 6

Verbinding 6: Verbinding 2 (0,400 gram, 0,90 mmol) werd gesuspendeerd in 20 CH2CI2 (40 ml) gevolgd door de toevoeging van 3-chloorperoxybenzoëzuur (77% in H2O). Het reactiemengsel werd bij kamertemperatuur gedurende 2 dagen geroerd. Verzadigd natriumbicarbonaat werd vervolgens toegevoegd. Na roeren gedurende 1 uur resulteerde geel vast precipitaat dat gefiltreerd werd waarbij 0,188 gram van een gewenst product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,84 (d, 25 J=6,4 Hz, 3 H), 1,07 (d, J=6,2 Hz, 3 H), 2,83 (d, J=14,8 Hz, 1 H), 3,00 (m, 1 H), 3,36 (d, J=14,4 Hz, 1 H), 3,62 (dd, J=8,8, 6,4 Hz, 1 H), 3,70 (m, 1 H), 3,84 (d, J=8,8 Hz, 1H), 4,03 (dd, J=13,7, 2.1 Hz, 1 H), 7,40 (d, J=7,8 Hz, 1 H), 8,19 (dd, J=4,l, 1,6 Hz, 1 H), 8,43 (s, 1 H), 8,49 (dd, J=4,l, 0,8 Hz, 1 H), 11,38 (s, 2 H); MS(APC1+) m/z 460 (MH+). Analyse berekend voor C21H19F2N5O5 · 1,80 H2O · 0,30 CH2CI2: C, 49,45; H, 30 4,52; N, 13,54. Gevonden C, 49,26; H, 4,17; N, 13.15 VOORBEELD 7

Verbinding 7: Verbinding 1 (1,0 gram, 2,3 mmol) werd opgelost in droog DMF (5 ml) en triethylamine (0,943 ml, 6,77 mmol) werd toegevoegd gevolgd door 52 broommethylacetaat (Aldrich, 0,487 ml, 4,96 mmol). De verkregen oplossing werd bij kamertemperatuur gedurende een nacht geroerd en werd vervolgens verdund met ethylacetaat en werd vervolgens met water gewassen. De organische laag werd of magnesiumsulfaat gedroogd, geconcentreerd en door middel van kolomchromatografie 5 onder elutie met 35-80% ethylacetaat in hexaan gezuiverd waarbij een gele olie (0,942 gram) werd verkregen die vervolgens onder vacuüm gedroogd werd. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,85 (d, J=6,2 Hz, 3 H), 1,09 (d, J=6,2 Hz, 3 H), 1,84 (s, 3 H), 2,00 (s, 3 H), 3,00 (d, J=14,l Hz, 1 H), 3,06 ( dd, J=13,l, 9,2 Hz, 1 H), 3,55 (d, J=14,3 Hz, 1 H), 3,61 (dd, J=8,8, 6,4 Hz, 1 H), 3,74 (m, 1 H), 3,92 (d, J=8,6 Hz, 1 H), 4,05 10 (dd, J=13,6, 2,2 Hz, 1 H), 5,57 (q, J=10Hz, 2 H), 5,79 (q, J=10Hz, 2 H), 7,36 (d, J=7,8 Hz, 1 H), 8,49 (d, J=2,5 Hz, 1 H), 8,82 (dd, J=2,5,1,6 Hz, 1 H), 8,90 (m, 1 H).

VOORBEELD 8

Verbinding 8: Aan een gekoelde oplossing van verbinding 3 (2,0 gram, 4,5 mmol) in droog DMF (7 ml) werd triethylamine (1, 89 ml, 13,5 mmol) gevolgd door 15 broommethylacetaat (Aldrich, 1,42 ml, 14,4 mmol) toegevoegd. De verkregen oplossing werd vervolgens verhit tot 50°C gedurende 3 uur. Het reactiemengsel liet men vervolgens afkoelen en het werd vervolgens druppelsgewijs toegevoegd aan een geroerde hoeveelheid water hetgeen een precipitaat opleverde dat afgefiltreerd werd en onder vacuüm gedroogd werd. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,85 (d, J=6,2 20 Hz, 3 H), 1,09 (d, J=6,2 Hz, 3 H), 1,84 (s, 3H), 2,00 (s, 3 H) 2,99 (d, J=14,8 Hz, 1 H), 3.06 (m, 1 H), 3,55 (d, J=14,3 Hz, 1 H), 3,62 (m, 1 H), 3,74 (m, 1 H), 3,92 (d, J=8,6 Hz, 1 H), 4,05 (dd, J=13,6, 2,2 Hz, 1 H), 5,57 (m, 2 H), 7,36 (d, J=7,8 Hz, 1 H), 8,49 (d, J=2,5 Hz, 1 H), 8,62 (dd, J=2,5,1,6 Hz, 1 H), 8,90 (m, 1 H).

VOORBEELD 9 25 Verbinding 9: Een oplossing van verbinding 7 (0,940 gram, 1,60 mmol) in

MeOH (20 ml) werd behandeld met HC1 (20 ml van een 1M oplossing in diethylether). De gele oplossing werd gedurende 1 uur geroerd hetgeen in een precipitaat resulteerde. Het reactiemengsel werd geconcentreerd. Ether werd toegevoegd en de verkregen gele vaste stof werd gefiltreerd en met ether gewassen. Het vaste materiaal (0,755 gram) 30 werd onder vacuüm gedroogd. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,84 (d, J=6,2 Hz, 3 H), 1,09 (d, J=6,l Hz, 3 H). 2.96 (d, J=14,6 Hz, 1 H), 3,03 (m, 1 H), 3,40 (d, J=14,4 Hz, 1 H), 3,62 (dd, J=8,7, 6,3 Hz, 1 H), 3,73 (m, 1 H), 3,89 d, J=8,8 Hz, 1 H), 4.06 (dd, J=13,5, 2,1 Hz, 1 H), 4,95 (d, J=10,0 Hz, 1 H), 5,04 (m, 1 H), 5,21 (m, 2 H), 53 5,86 (br. s., 2 H), 7,32 (d, J=7,8 Hz, 1 H), 8,49 (d, J=2,l Hz, 1 H), 8,63 (s, 1 H), 8,89 (s, 1H).

VOORBEELD 10

Verbinding 10: Een oplossing van verbinding 8 (2,5 gram, 4,25 mmol) in MeOH 5 (30 ml) werd met HC1 (30 ml van een 1M oplossing in diethylether) behandeld. De oplossing werd gedurende 3 uur geroerd en werd vervolgens geconcentreerd en enkele malen met tert-butylmethylether getritureerd ter isolatie van een rode vaste stof. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,84 (d, J=6,2 Hz, 3 H), 1,09 (d, J=6,l Hz, 3 H), 2,96 (d, J=14,6 Hz, 1 H), 3,01 (m, 1 H), 3,40 (d, J=14,4 Hz, 1 H), 3,62 (dd, J=8,7, 6,3 10 Hz, 1 H), 3,73 (m, 1 H), 3,89 (d, J=8,8 Hz, 1 H), 4,06 (dd, J=13,5, 2,1 Hz, 1 H), 4,95 (d, J=10,0 Hz, 1 H), 5,04 (m, 1 H), 5,21 (m, 2 H), 5,86 (br. s., 2 H), 7,32 (d, J=7,8 Hz, 1 H), 8,49 (d, J=2,l Hz, 1 H), 8,63 (s, 1 H), 8,89 (s, 1 H).

VOORBEELD 11

Verbinding 11: Een oplossing van verbinding 9 (0,750 gram, 1,5 mmol) in 15 CH2CI2 werd met thionylchloride (1,1 ml) behandeld. Het reactiemengsel werd gedurende 1 uur geroerd en het werd een rode oplossing. De oplossing werd zorgvuldig met water geblust en werd gedurende 5 minuten geroerd. De organische laag werd gescheiden en de waterige laag werd met CH2CI2 geëxtraheerd. De gecombineerde organische stoffen werden op magnesiumsulfaat gedroogd. Het concentreren leverde de 20 verbinding (0,657 gram) als een beige schuim. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,86 (d, J=6,3 Hz, 3 H), 1,12 (d, J=5,5 Hz, 3 H), 3,08 (m, 2 H), 3,59 (m, 2 H), 3,78 (m, 1 H), 3,95 (d, J=8,6 Hz, 1 H), 4,09 (dd, J=13,6, 2,2 Hz, 1 H), 5,51 (m, 2 H), 5,73 (s, 2 H), 7,35 (d, J=8,0 Hz, 1 H), 8,52 (d, J=2,3 Hz, 1 H), 8,65 (dd, J=2,3,1,6 Hz, 1 H), 8,92 (m, 1 H).

25 VOORBEELD 12

Verbinding 12: Aan een mengsel van dibenzylfosfaat (Aldrich, 0,770 gram, 2,8 mmol) en zilvercarbonaat (0,383 gram, 1,4 mmol) in tolueen (1 ml) werd verbinding 11 (0,600 gram, 1, 1 mmol) toegevoegd. Het reactiemengsel werd tot 70°C gedurende 2 uur verhit en werd vervolgens tot kamertemperatuur gekoeld. Het ongezuiverde 30 reactiemengsel werd rechtstreeks op de kolom gebracht en werd door kolomchromatografie onder elutie met 40-100% ethylacetaat in hexaan gezuiverd waarbij 0,439 gram werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,82 (d, J=6,4 Hz, 3 H), 1,11 (d, J=6,l Hz, 3 H), 2,98 (d, J=14,7 Hz, 1 H), 3,07 (m, 1 H), 3,44 54 (d, J=14,l Hz, 1 H), 3,59 (dd, J=8,6, 6,4 Hz, 1 H), 3,73 (m, 1 H), 3,94 (d, J=8,8 Hz, 1 H), 4,07 (dd, J=13,3, 1,8 Hz, 1 H), 4,84 (m, 4 H), 5,04 (dd, J=8,0, 2,0 Hz, 4 H), 5,47 (m, 1 H), 5,55 (t, J=9,9 Hz, 1 H), 5,71 (t, J=9,8 Hz, 1 H), 5,80 (m, 1 H), 7,19 (m, 4 H), 7,30 (m, 16 H), 8,44 (d, J=2,5 Hz, 1 H), 8,55 (m, 2 H), 8,78 (s, 1 H).

5 VOORBEELD 13

Verbinding 13: Aan een geroerde oplossing van verbinding 10 (0,10 gram, 0,20 mmol) en trifenylfosfine (0,16 gram, 0,60 mmol) in DMF (2 ml) werd langzaam N-broomsuccinimide (NBS) (0,11 gram, 0,60 mmol) in dichloormethaan (l ml) toegevoegd. Het reactiemengsel werd gedurende een nacht bij kamertemperatuur 10 geroerd. Het reactiemengsel werd tussen water en dichloormethaan verdeeld. De gecombineerde organische extracten werden op magnesiumsulfaat gedroogd. Gezuiverd door middel van chromatografie onder elutie met ethylacetaat in hexaan (20-70%). Product werd bevestigd door het downfield shift van de methyleenprotonen in het Hl NMR spectrum (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 5,47 (m, 2 H), 5,69 (m, 2 H).

15 VOORBEELD 14

Verbinding 14: Aan een geroerde oplossing van verbinding 10 (0,10 gram, 0,20 mmol) en trifenylfosfine (PL-TPP (Polymer Laboratories): 0,18 gram, 0,70 mmol) in THF (5 ml) werd langzaam NBS (0,12 gram, 0,70 mmol). Het reactiemengsel werd bij kamertemperatuur gedurende 1,5 uur geroerd en vervolgens werd Nal (0,006 gram, 20 0,04 mmol) toegevoegd gevolgd door ditertbutylfosfaat, kaliumzout (Digital Specialty, 0,200 gram, 0,79 mmol). Het reactiemengsel werd tot 55°C verhit en een opslibbing werd verkregen. Een verdere hoeveelheid THF (2 ml) werd toegevoegd en het reactiemengsel werd gedurende 3,5 uur verhit. Het reactiemengsel werd gefiltreerd en op een hars met CH2CI2 gewassen en tot een gele olie geconcentreerd. De olie werd 25 verdeeld tussen CH2CI2 en waterig natriumbicarbonaat en werd vervolgens op magnesiumsulfaat gedroogd. De vaste stoffen met hexaan/MTBE getritureerd en werd gefiltreerd waarbij een licht oranje gekleurde vaste stof werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,85 (d, J=6,2 Hz, 3 H), 1,09 (d, J=6,l Hz, 3 H), 1,24 (d, J=4,9 Hz, 18 H), 1,39 (s, 18 H), 3,05 (m, 2 H), 3,47 (d, J=14,8 Hz, 1 H), 3,59 (dd, J=8,3, 6,2 30 Hz, 1 H), 3,74 (m, 1 H), 3,94 (d, J=8,4 Hz, 1 H), 4,06 (dd, J=13,2, 1,5 Hz, 1 H), 5,30 (m, 1 H), 5,40 (m, 1 H), 5,55 (m, 2 H), 7,32 (d, J=7,0 Hz, 1 H), 8,49 (d, J=2,5 Hz, 1 H), 8,63 (m, 1 H), 8,90 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 888 (MH+).

VOORBEELD 15 55

Trap 1: 5-broom-2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3-fluorbenzaldehyde. 4-(4-broom-2-[l,3]dioxolan-2-yl-6-fluorfenyl)-2,6-dimethylmorfoline (1,0 gram, 2,8 mmol) werd in THF (4 ml) en IN HC1 (3 ml) opgelost. Het mengsel werd gedurende een nacht bij kamertemperatuur geroerd en werd vervolgens tot 50°C gedurende 5 uur verhit. Het 5 reactiemengsel werd verdeeld tussen ethylacetaat en natriumbicarbonaat. De organische laag werd op magnesiumsulfaat gedroogd, gefiltreerd en geconcentreerd waarbij 0,847 gram van een gele vaste stof werd gekregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1,19 (d, J=6,3 Hz, 6 H), 2,90 (m, 2 H), 3,01 (m, 2 H), 3,81 (M, 2 H), 7,43 (dd, J=ll,5, 2,2 Hz, 1 H), 7,73 (dd, J=2,4, 1,2 Hz, 1 H), 10,37 (s, 1 H); MS(SPC1+) m/z 10 316, 318 (MH+).

Trap 2: 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3-fluor-5-(4,4,5,5-tetramethyl-[l ,3,2]-dioxaborolan-2-yl)-benzaldehyde. 5-Broom-2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3-fluor-benzaldehyde (0,827 gram, 2,6 mmol) en bis(pinacolato)diboron (0,72 gram, 2,9 mmol) werden opgelost in watervrij 2-methyl-THF (20 ml). Hieraan werd kaliumacetaat 15 (0,770 gram, 7,8 mmol) en Pd(PCy3)2Cl2 (0,058 gram, 0,08 mmol) toegevoegd. Het reactiemengsel werd onder stikstof gebracht en werd bij 80°C gedurende een nacht verhit. Het reactiemengsel werd gefiltreerd en het filtraat werd tot een gele vaste stof geconcentreerd. Het ongezuiverde product werd door middel van kolomchromatografie onder elutie met ethylacetaat in hexaan gezuiverd waarbij 0,688 gram van het gewenste 20 product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1,18 (d, J=6,3 Hz, 6 H), 1,31 (s, 12 H), 3,02 (m, 4 H), 3,83 (m, 2 H), 7,63 (dd, J=12,9,1,5 Hz, 1 H), 8,01 (d, J=l,5 Hz, 1 H), 10,32 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 364 (MH+).

Trap 3: 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3-fluor-5-pyrazine-2-yl-benzaldehyde. 2-(2,6-dimethylmorfoline-2-yl)-3-fluor-5-(4,4,5,5-tetramethyl-[l,3,2]dioxaborolan-2-yl)-25 benzaldehyde (,040 gram, 1,1 mmol), 2-chloorpyrazine (0,115 gram, 1,Ommol), natriumcarbonaat (0,32 gram, 3,0 mmol) en Pd(PPh3)2Cl2 (0,03 gram, 0,04 mmol) werden gesuspendeerd in een l:l-mengsel van CH3CN/H2O. Het reactiemengsel werd vervolgens met stikstof gespoeld en werd gedurende een nacht bij 95°C verhit. Na voltooiing weid het reactiemengsel verdeeld tussen H2O en ethylacetaat en de waterige 30 laag werd twee maal met ethylacetaat geëxtraheerd. De gecombineerde extracten werden op magnesiumsulfaat gedroogd, gefiltreerd en geconcentreerd. Het ongezuiverde product werd gezuiverd door middel van kolomchromatografie onder elutie met 10-55% ethylacetaat in hexaan waarbij 0,230 gram van het gewenste product 56 werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1,21 (d, J=6,3 Hz, 6H), 3,08 (m, 4 H), 3,86 (m, 2 H), 8,04 (dd, J=13,4, 2,3 Hz, 1 H), 8,23 (d, J=l,5 Hz, 1 H), 8,52 (d, J=2,54 Hz, 1 H), 8,62 (dd, J=2,6, 1,6 Hz, 1 H), 9,04 (d, J=l,5 Hz, 1 H), 10,41 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 316 (MH+).

5 Trap 4: Verbinding 15: Een geroerde opslibbing van 2-(2,6-dimethylmorfoline-4- yl)-3-fluor-5-pyrazine-2-yl-benzaldehyde (0,221 gram, 0,70 mmol) in MeOH (4 ml) werd met barbituurzuur (0,094 gram, 0,74 mmol) behandeld. Het reactiemengsel werd gedurende een nacht onder terugvloeikoeling verhit en werd op kamertemperatuur gekoeld. Een vast precipitaat resulteerde dat gefiltreerd werd en onder vacuüm 10 gedroogd werd waarbij 0,246 gram van het gewenste product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,87 (d, J=6,3 Hz, 3 H), 1,09 (d, J=6,l Hz, 3 H), 2,98 (m, 2 HO 3,48 (d, J=13,9 Hz, 1 H), 3,62 (dd, J=8,7, 6,5 Hz, 1 H), 3,74 (m, 1 H), 3,84 (d, J=8,8 Hz, 1 H), 4,06 (dd, J= 13,1,1,8 Hz, 1 H), 7,62 (d, J=l,2 Hz, 1 H), 7,77 (dd, J= 15,4, 2,0 Hz, 1 H), 8,43 (d, J=2,4 Hz, 1 H), 8,55 (dd, J= 2,6, 1,6 Hz, 1 H), 9,08 15 (d, J=l,5 Hz, 1 H), 11,45 (s, 1 H), 11,81 (s, 1 H),; MS(APC1+) m/z 426 (MH+).

Analyse berekend voor C21H20FN5O4 · 0,52H2O: C, 58,01; H, 4,88; N, 16,11. Gevonden: C, 57,62; H, 4,85; N, 15,88.

VOORBEELD 16

Trap la. 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3-fluor-4-morfoline-4-yl-5-pyrazine-2-20 yl-benzaldehyde. Aan morfoline opgelost in CH3CN werd K2CO3 toegevoegd gevolgd door 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluor-5-pyrazine-2yl -benzaldehyde (Voorbeeld 1, trap 4). Het reactiemengsel werd gedurende een nacht verhit. Het werd verdeeld tussen natriumbicarbonaat en ethylacetaat. Het werd met (3x) ethylacetaat geëxtraheerd, op magnesiumsulfaat gedroogd en geconcentreerd. Het ongezuiverde 25 product werd gezuiverd door middel van kolomchromatografie onder elutie met 10-70% ethylacetaat in hexaan waarbij 0,099 gram van het gewenste product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1,21 (d, J=6,3 Hz, 6 H).

3,06 (m, 8 H), 3,60 (m, 4 H), 3,85 (m, 2 H), 7,75 (d, J=l,6 Hz, 1 H), 8,50 (d, J=2,5 Hz, 1 H), 8,64 (m, 1 H), 8,91 (s, 1 H), 10,26 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 401 (MH+).

30 Trap 2: Verbinding 16: Een geroerde opslibbing van 2-(2,6-dimethylmorfoline-4- yl)-3-fluor-4-morfoline-4-yl-5-pyrazine-2-yl-benzaldehyde (0,099 gram, 0,25 mmol) in MeOH werd met barbituurzuur (0,033 gram, 0,26 mmol) behandeld. Het reactiemengsel werd gedurende een nacht onder terugvloeikoeling verhit en werd bij 57 kamertemperatuur gekoeld. Een vast precipitaat resulteerde dat gefiltreerd werd en onder vacuüm gedroogd werd waarbij 0,105 gram van het gewenste product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,87 (d, J=6,4 Hz, 3 H), 1,10 (d, J=6,3 Hz, 3 H), 2,92 (m, 6 H), 3,46 (m, 5 H), 3,64 (dd, J=8,8, 6,4 Hz, 1 H), 3,78 (m, 2 5 H), 4,01 (dd, J=13,l, 2,1 Hz, 1 H), 7,00 (s, 1H), 8,43 (d, J=2,5 Hz, 1 H), 8,57 (dd, J=2,5, 1,6 Hz, 1H), 8,94 (d, J=l,8 Hz, 1 H), 11,40 (s, 1 H), 11,74 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 511 (MH+). Analyse berekend voor C25H27FN6O5 · 0,80H20: C, 57,20; H, 5,49; N, 16,01. Gevonden: C, 57,14; H, 5,32; N, 15,61.

VOORBEELD 17 10 Trap la. 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3-fluor-4-(2-methoxyethoxy)-5- pyrazine-2-yl-benzaldehyde. NaH werd gesuspendeerd in THF (4 ml) en werd tot 0°C gekoeld. Aan deze suspensie langzaam 2-methoxyethanol toegevoegd en het reactiemengsel werd gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur geroerd. 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluor-5-pyrazine-2-yl-benzaldehyde (Voorbeeld 1, trap 15 4) werd opgelost in THF en werd langzaam aan het reactiemengsel toegevoegd. Het reactiemengsel werd tot 50°C gedurende 1 uur verhit en het werd vervolgens bij kamertemperatuur gedurende een nacht geroerd. Het reactiemengsel werd verdeeld tussen natriumbicarbonaat en ethylacetaat. Het mengsel werd geëxtraheerd met ethylacetaat (3x), op magnesiumsulfaat gedroogd en geconcentreerd. Het ongezuiverde 20 product werd door middel van kolomchromatografie onder elutie met 10-70% ethylacetaat in hexaan gezuiverd waarbij 0,099 gram van het gewenste product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1,20 (d, J=6,3 Hz, 6 H), 3,08 (m, 4H), 3,27 (s, 3H), 3,60 (m, 2 H), 3,86 (m, 2 H), 4,31 (m, 2 H), 8,14 (d, J=l,8 Hz, 1 H), 8,50 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 8,66 (s, 1 H), 9,19 (s, 1H), 10,28 (s, 1 H); 25 MS(APC1+) m/z 390 (MH+).

Trap 2. Verbinding 17: Een geroerde opslibbing van 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3-fluor-4-(2-methoxyethoxy)-5-pyrazine-2-yl-benzaldehyde (0,092 gram, 0,24 mmol) in MeOH werd behandeld met barbituurzuur (0,032 gram, 025 mmol). Het reactiemengsel werd gedurende een nacht onder terugvloeikoeling verhit, tot 30 kamertemperatuur gekoeld en geconcentreerd. De vaste stof werd met MeOH getritureerd, gefiltreerd en onder vacuüm gedroogd waarbij 0,044 gram van het gewenste product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,87 (d, J=6,3 Hz, 3 H), 1,10 (d, J=6,3 Hz, 3 H), 2,88 (d, J=14,3 Hz, 1 H), 2,98 (m, 1 H), 3,10 58 (s, 3 Η), 3,47 (m, 3 Η), 3,47 (m, 3 Η), 3,63 (dd, J=8,6, 6,4 Hz, 1 H), 3,75 (m, 1 H), 3,81 (d, J=8,6 Hz, 1 H), 4,04 (m, 2 H), 4,12 (m, 1 H), 7,29 (s, 1 H), 11,76 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 500 (MH+). Analyse berekend voor C24H26FN6O6 · 0,07H20: C, 57,56; H, 5,26; N, 13,99. Gevonden: C, 57,17; H, 5,02; N, 13,70.

5 VOORBEELD 18

Trap 1 a. 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3-fluor-4-(2-fluorethoxy)-5-pyrazine-2-yl-benzaldehyde. NaH werd gesuspendeerd in THF (4 ml) en werd tot 0°C gekoeld. Aan deze suspensie werd langzaam 2-fluorethanol toegevoegd en het reactiemengsel werd gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur geroerd. 2-(2,6-dimethylmorfoline-10 4-yl)-3,4-difluor-5-pyrazine-2-yl-benzaldehyde (Voorbeeld 1, trap 4) werd opgelost in THF en werd langzaam aan het reactiemengsel toegevoegd. Het reactiemengsel werd tot 50°C gedurende 1 uur verhit en werd vervolgens bij kamertemperatuur gedurende een nacht geroerd. Het reactiemengsel werd verdeeld tussen natriumbicarbonaat en ethylacetaat. Het mengsel werd geëxtraheerd met ethylacetaat (3x) en werd op 15 magnesiumsulfaat gedroogd en geconcentreerd. Het ongezuiverde product werd gezuiverd door middel van kolomchromatografie onder elutie met 10-50% ethylacetaat in hexaan waarbij 0,103 gram van het gewenste product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm UI (d, J=6,3 Hz, 6 H), 3,09 (m, 4 H), 3,87 (m, 2 H), 4,40 (m, 2 H), 4,61 (m, 2H), 8,12 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 8,52 (m, 1 H), 8,66 (m, 1 H), 9,10 20 (s, 1 H), 10,28 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 378 (MH+).

Trap 2. Verbinding 18: Een geroerde opslibbing van 2-(2,6- dimethylmorfoline-4-yl)-3-fluor-4-(2-fluorethoxy)-5-pyrazine-2-yl-benzaldehyde (0,103 gram, 0,27 mmol) in MeOH werd behandeld met barbituurzuur (0,036 gram, 0,29 mmol). Het reactiemengsel werd gedurende een nacht onder terugvloeikoeling 25 verhit, tot kamertemperatuur gekoeld en geconcentreerd. De vaste stof werd met MeOH getritureerd, gefiltreerd en onder vacuüm gedroogd waarbij 0,081 gram van het gewenste product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,87 (d, J=6,3 Hz, 3 H), 1,10 (d, J=6,3 Hz, 3 H), 2,88( d, J=14,3 Hz, 1 H) 2,98 (m, 1 H), 3,10 (s, 3 H), 3,47 (m, 3 H), 3,63 (dd, J=8,6, 6,4 Hz, 1 H), 3,75 (m, 1 H), 3,81 (d, J=8,6 Hz, 1 30 H), 4,04 (m, 2 H), 4,12 (m, 1 H), 7,29 (s, 1 H), 8,43 (d, J=2,5 Hz, 1 H), 8,58 (m, 1 H),9,09 (d, J=l,6 Hz, 1 H), 11,41 (s, 1 H), 11,76 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 488(MH+). Analyse berekend voor C23H23F2N5O5 · 0,71H2O: C, 55,22; H, 4,92; N, 14,0. Gevonden: C, 54,84; H, 4,66; N, 13,84.

59 VOORBEELD 19

Trap 1: 5-broom-2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-4-fluorbenzaldehyde. 4-(4-broom-2-[l,3]dioxolan-2-yl-5-fluorfenyl)-2,6-dimethylmorfoline (3,5 gram, 9,7 mmol) werd opgelost in THF en 1 N CH1 (3 ml). Het reactiemengsel werd gedurende een 5 nacht bij 50°C geroerd. Het reactiemengsel werd tussen ethylacetaat en natriumbicarbonaat verdeeld. De organische laag werd op magnesiumsulfaat gedroogd, gefiltreerd en geconcentreerd waarbij 2,9 gram van een gele vaste stof werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1,21 (d, J=6,3 Hz, 6H), 2,60 (dd, J=12,0,10,3 Hz, 2 H), 3,05 (m, 2 H), 3,88 (m, 2 H), 6,81 (d, J=10,4 Hz, 1 H), 7,97 (d, 10 J=8,0 Hz, 1 H), 10,10 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 316,318 (MH+).

Trap 2. 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-4-fluor-5-(4,4,5,5-tetramethyl[l ,3,2]-dioxaborolan-2-yl)-benzaldehyde. 5-broom-2-(2,6-dimethylmofroline-4-yl)-40-fiuorbenzaldehyde (2,99 gram, 9,5 mmol) en bis(pinacolato)diboron (2,4 gram, 9,5 mmol) werden in watervrij 2-methyl-THF opgelost. Hieraan werd kaliumacetaat (2,8 15 gram, 28 mmol) en Pd(PCy3)aCl2 (0,28 gram, 0.04 mmol) toegevoegd. Het reactiemengsel werd onder stikstof gebracht en gedurende een nacht tot 80°C verhit Het reactiemengsel werd gefiltreerd en het fikraat werd tot een gele vaste stof geconcentreerd. Het ongezuiverde product werd gezuiver door middel van kolomchromatografie onder elutie met ethylacetaat in hexaan waarbij 2,1 gram van het 20 product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1,21 (d, J=6,3 Hz, 5 H), 1,33 (s, 12H), 2,61 (dd, J=12,l, 10,4 Hz, 2 H), 3,18 (m, 2 H), 3,90 (m, 2 H), 6,62 (d, J=11,5 Hz, 1 H), 8,19 (d, J=7,2 Hz, 1 H), 10,03 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 364 (MH+).

Trap 3.2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-4-fluor-5-pyrazine-2-yl-bezaldehyde. 2-25 (2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-4-fluor-5-(4,4,5,5-tetramethyl-[l,3,2]dioxaborolan-2-yl)-benzaldehyde (0,35 gram, 0,96 mmol), 2-iodopyrazine (79 pL, 0,80 mmol), kaliumfosfaat (0,34 gram, 1,6 mmol), Buchwald-ligand: 2-(dicyclohexylfosfine)-2’,6’-dimethoxy-1,1 ’-bifenyl (Strem Chemicals) (0,04 gram, 0,10 mmol), en Pd(OAc)2 (Aldrich, 0,01 gram, 0,04 mmol) werden in tolueen (1,6 ml) gesuspendeerd. Het 30 reactiemengsel werd vervolgens met stikstof gespoeld en werd tot 85°C gedurende een nacht verhit. Na voltooiing werd het reactiemengsel verdeeld tussen H2O en ethylacetaat en de waterige laag werd tweemaal met ethylacetaat geëxtraheerd. De gecombineerde extracten werden op magnesiumsulfaat gedroogd, gefiltreerd en 60 geconcentreerd. Het ongezuiverde product werd gezuiverd door middel van kolomchromatografie onder elutie met 5-45% ethylacetaat in hexaan waarbij 0,230 gram van het gewenste product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1,24 (d, J=6,3 Hz, 6 H), 2,68 (dd, J=11,9,10,4 Hz, 2 H), 5 3,21 (m, 2 H), 3,94 (m, 2 H), 6,82 (d, J=13,3 Hz, 1 H), 8,53 (d, J=9,0 Hz, 2 H), 8,67 (s, 1 H), 9,05 (s, 1 H), 10,14 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 316 (MH+).

Trap 4. Verbinding 19. Een geroerde opslibbing van 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-4-fluor-5-pyrazine-2-yl-benzaldehyde (0,115 gram, 0,36 mmol) in MeOH (4 ml) werd met barbituurzuur (0,049 gram, 0,38 mmol) behandeld. Het reactiemengsel werd 10 gedurende een nacht onder terugvloeikoeling verhit en werd tot kamertemperatuur gekoeld en geconcentreerd. De vaste stof werd met MeOH getritureerd, gefiltreerd en onder vacuüm gedroogd waarbij 0,098 gram van het gewenste product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,90 (d, J=6,4 Hz, 3 H), 1,12 (d, J=6,l Hz, 3 H), 2,86 (m, 2 H), 3,45 (d, J=14,8 Hz, 1 H), 3,50 (dd, J=8,9,6,3 Hz, 1 H), 3,57 (m, 1 15 H), 3,76 (d, J=9,0 Hz, 1 H), 4,12 (dd, J=12,8,1,7 Hz, 1 H), 6,87 (d, J=15,4 Hz, 1 H), 7,55 (d, J=8,8 Hz, 1 H), 8,43 (d, J=2,5 Hz, 1 H), 8,61 (dd, J=2,5,1,6 Hz, 1 H), 8,88 (m, 1 Η), 11,45 (s, 1 Η), 11,75 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 426 (MH+). Analyse berekend voor C21H20FN5O4 · 1,23Η2θ: C, 55,96; H, 4,99; N, 15,78. Gevonden: C, 56,35; H, 5,06; N, 15,65 20 VOORBEELD 20

Trap 1. 2-fluor-5-(4,4,5,5-tetramethyl-[l,3,2]dioxaborolan-2-yl)-benzaldehyde. 4-fluor-3-fomiylfenylboronzuur (Lancaster, 3,1 gram, 18 mmol) en pinacol (2,4 gram, 21 mmol) werden onder stikstof in watervrij THF dat geactiveerd 4A moleculaire zeven bevatte, geroerd. Het werkzame mengsel werd gedurende een nacht geroerd. Het 25 reactiemengsel werd gefiltreerd en het filtraat werd in vacuüm geconcentreerd waarbij 4,5 gram van een witte vaste stof werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1,32 (s, 12 H), 7,14 (dd, J=10,5, 8,3 Hz, 1 H), 8,00 (m, 1 H), 8,31 (dd, J=7,4,1,6 Hz, 1 H), 10,34 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 251 (MH+).

Trap 2. 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-5-(4,4,5,5-tetramethyl-[l ,3,2]dioxaboro-30 lan—2-yl)-benzaldehyde. 2-Fluor-5-(4,4,5,5,-tetramethyl-[l,3,2]dioxaborolan-2-yl)- benzaldehyde (4,6 gram, 18 mmol) en kaliumcarbonaat (3,8 gram, 27 mmol) werden in DMF (3 ml) gesuspendeerd. Dimethylmorfoline (2,6 ml, 21 mmol) werd vervolgens toegevoegd en het mengsel werd gedurende een nacht bij 105°C verhit. Het 61 reactiemengsel werd gekoeld en gefiltreerd ter verwijdering van zouten. De druppelsgewijze toevoeging van water induceerde de vorming van een precipitaat. Het gele precipitaat werd afgefiltreerd en verzameld. Het precipitaat werd in een vacuümoven gedroogd waarbij 4,26 gram van het gewenste product werd verkregen.

5 Η1 NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1,21 (d, J=6,1 Hz, 6 Η), 1,32 (s, 12 H), 2,65 (m, 2 H), 3,16 (d, J=11,5 Hz, 2 H), 3,93 (m, 2 H), 7,03 (d, J=8,3 Hz, 1 H), 7,90 (dd, J=8,2,1,6 Hz, 1 H), 8,22 (d, J=l,5 Hz. 1 H), 10,17 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 346 (MH+).

Trap 3. 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-5-pyrazine-2-yl-benzaldehyde. 2-(2,6-10 dimethylmorfoline-4-yl)-5-(4,4,5,5-tetramethyl-[l,3,2]dioxaborolan-2-yl)- benzaldehyde (0,50 gram, 0,72 mmol), 2-iodopyrazine (0,135 gram, 065 mmol), natriumcarbonaat (0,350 gram, 3,3 mmol) en Pd(PPh3)2Cl2 (0,014 gram, 0,02 mmol) werden in een 1:1-mengsel van CH3CN/H2O gesuspendeerd. Het reactiemengsel werd vervolgens met stikstof gespoeld en werd bij 95°C gedurende een nacht verhit. Na 15 voltooiing werd het reactiemengsel verdeeld tussen H2O en ethylacetaat en de waterige laag werd twee maal met ethylacetaat geëxtraheerd. De gecombineerde extracten werden op magnesiumsulfaat gedroogd, gefiltreerd en geconcentreerd. Het ongezuiverde product werd gezuiverd door middel van kolomchromatografie onder elutie met 15-60% ethylacetaat in hexaana waarbij 0,157 gram van het gewenste 20 product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) 5 ppm 1,25 (d, J=6,3 Hz, 6 H). 2,73 (m, 2 H), 3,20 (m, 2 H), 3,95 (m, 2 H), 7,20 (d, J=8,5 Hz, 1 H), 8,24 (dd, J=8,5,2,4 Hz, 1 H), 8,45 (d, J=2,4 Hz, 1 H), 8,50 (d, J=2,4 Hz, 1 H), *,62 (m, 1 H), 9,04 (d, J=T,5 Hz, 1 H), 10,30 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 298 (MH+).

Trap 4. Verbinding 20: Een geroerde opslibbing vna 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-25 yl)-5-pyrazine-2-yl-benzaldehyde (0,155 gram, 0,52 mmol) in IPA (4 ml) werd met barbituurzuur (0,070 gram, 0,55 mmol) behandeld. Het reactiemengsel werd gedurende een nacht onder terugvloeikoeling verhit en werd tot kamertemperatuur gekoeld. Een vast precipitaat resulteerde dat gefiltreerd werd en onder vacuüm gedroogd werd waarbij 0,171 gram van het gewenste product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, 30 DMSO-d6) δ ppm 0,90 (d, J=6,3 Hz, 3 H). 1.13 (d, J=6,l Hz, 3 H), 2,85 (dd, J=13.3.

10,3 Hz, 1 H), 2,92 (d, J=15,l Hz, 1 H), 3,37 (d, J=14,9 Hz, 1 H), 3,52 (dd, J=9,0,6,3 Hz, 1 H), 3,60 (m, 1 H), 3,75 (d, J=9,0 Jz. 1 H), 4,15 (dd, J=13,l, 2,1 Hz, 1 H), 6,96 ( d, J=9,0 Hz, 1 H), 7,70 (d, J=2,0 Hz, 1 H), 7,87 (dd, J=8,8, 2,2 Hz, 1 H), 8,37 (d, J=2,7 62

Hz, 1 Η), 8,52 (dd, J=2,4,1,5 Hz, 1 H), 9,04 (d, J=l,5 Hz, 1 Η), 11,45 (s, 1 Η), 11,77 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 408 (MH+). Analyse berekend voor C21H21N5O4: C, 61,91; H, 5,20; N, 17,19. Gevonden: C, 61,81; H, 5,13; N, 17,10.

VOORBEELD 21 5 Trap 1: 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-5-(3-methoxypyrazine-2-yl)- benzaldehyde. 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-y 1)-5 -(4,4,5,5 -tetramethyl- [1,3,2]dioxaboro-lan-2-yl)-benzaldehyde (Voorbeeld 18, trap 2) (0,250 gram, 0,72 mmol), 2-chloor-3-methoxypyrazine (0,095 gram, 0,66 mmol), natriumcarbonaat (0,350 gram, 3,3 mmol) en Pd(PPh3)2Cl2 (0,014 gram, 0,02 mmol) werden gesuspendeerd in een 1:1-mengsel 10 van CH3CN/H2O. Het reactiemengsel werd vervolgens met stikstof gespoeld en werd bij 95°C gedurende een nacht verhit. Na voltooiing werd het reactiemengsel verdeeld tussen H2O en ethylacetaat en de waterige laag werd twee maal met ethylacetaat geëxtraheerd. De gecombineerde extracten werden op magnesiumsulfaat gedroogd, gefiltreerd en geconcentreerd. Het ongezuiverde product werd gezuiverd door middel 15 van kolomchromatografie onder elutie met 15-45% ethylacetaat in hexaan waarbij 0,127 gram van het gewenste product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1,24 (d, J=6,3 Hz, 6 H), 2,70 (m, 2 H), 3,16 (m, 2 H), 3,94 (m, 2 H), 4,06 (s, 3 H). 7.15 (d, J=8,5 Hz., 1 H), 8,05 (d, J=2,7 Hz, 1 H), 8,22 (d, J=2,7 Hz, 1 H), 8,27 (dd, J=8,5,2,2 Hz, 1 H), 8,57 (d, J=2,2 Hz, 1 H), 10,28 (s, 1 H); 20 MS(APC1+) m/z 329 (MH+).

Trap 2. Verbinding 21: Een geroerde opslibbing van 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-5-(3-methoxypyrazine 2-yl)-benzaldehyde (0,125 gram, 0,38 mmol) in nBuOH (4 ml) werd met barbituurzuur (0,051 gram, 0,40 mmol) behandeld. Het reactiemengsel werd gedurende een nacht onder terugvloeikoeling verhit, tot kamertemperatuur 25 gekoeld en geconcentreerd. Het mengsel werd met MeOH getritureerd en het precipitaat werd gefiltreerd en onder vacuüm gedroogd waarbij 0,071 gram van het gewenste product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 0,90 (d, J=6,3 Hz, 3 H), 1,13 (d, J=6,l Hz, 3 H), 2,84 (m, 1 H), 2,91 (d, J=15,l Hz, 1 H), 3,38 (d, J=14,9 Hz, 1 H), 3,52 (dd, J=8,4, 6,5 Hz, 1 H), 3,60 (m, 1 H), 3,73 (d, J=8,8 Hz, 1 30 H), 3,94 (s, 3 H), 4,13 (d, J=13,7 Hz, 1 H), 6,91 (d, J=8,8 Hz, 1 H), 7,68 (s, 1 H), 7,89 (d, J= 8,1, Hz, 1 H), 8,00 (d, J=2,4 Hz, 1 H), 8,16, (d, J=2m7 Hz, 1 Η), 11,42 (s, 1 H), 11,74 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 438 (MH+). Analyse berekend voor C22H23N5O5 · 2,13H20: C, 55,93; H, 5,77; N, 14,72. Gevonden: C, 55,93; H, 4,88; N, 14,14.

63 VOORBEELD 22

Trap 1: 5-broom-2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluor-benzaldehyde. 5-Broom-2,3,4-trifluor-benzaldehyde (10 gram, 41,8 mmol) werd in droog acetonitril (70 ml) opgelost. Triethylamine (6,4 ml, 46,0 mmol) werd toegevoegd gevolgd door trans-5 2,6-dimethylmorfoline (BASF, 5,3 gram, 46 mmol). Het mengsel werd gedurende 24 uur onder terugvloeikoeling verhit en werd vervolgens tot kamertemperatuur gekoeld en met IN HC1 (58 ml) behandeld. Het acetonitril werd aan de rotatieverdamper afgedampt en de verkregen vaste stof werd gefiltreerd, met water afgewassen en vervolgens in THF (100 ml) opgelost. De oplossing werd op magnesiumsulfaat 10 gedroogd en tot een gele olie geconcentreerd. Hexanen werden toegevoegd en het mengsel werd opnieuw geconcentreerd waarbij 12,66 g van een geel poeder werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1,26 (d, J=6,4 Hz, 6 H), 2,92 (m, 2 H), 3,28 (d, J=11,7 Hz, 2 H), 4,15 (m, 2 H), 7,78 (dd, J=7,2,2,3 Hz, 2 H), 10,32 (s, 4 H).

15 Trap 2: 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluor-5-(4,4,5,5-tetramethyl- [1,3,2]dioxaborolan-2-yl)-benzaldehyde. Een oplossing van 5-broom-2-(2,6-dimethyl-morfoline-4-yl)-3,4-difluorbenzaldehyde (11,6 g, 34,9 mmol) en bis-(pinacolato)diboron (9,3 g, 36,7 mmol) in watervrij 2-methyl THF (120 ml) werd met kaliumacetaat (10 g, 105 mmol) behandeld en met argon gedurende 25 minuten 20 ontgast. De katalysator Pd(PCy3)2Cl2 (1 g, 1,4 mmol) werd vervolgens aan het reactiemengsel toegevoegd en werd gedurende een nacht bij 80°C verhit. Het reactiemengsel werd tot kamertemperatuur gekoeld en de vaste stof werd gefiltreerd en met THF gewassen. Het gecombineerde filtraat-wasvloeistoffen werden geconcentreerd en opgelost in warm methanol en in de koelkast gedurende een nacht gekoeld. De vaste 25 stof die gevonden werd werd afgefiltreerd, met koude methanol gewassen en gedroogd waarbij 4,2 gram van een gele vaste stof werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1,24 (d, J=6,4 Hz, 6 H), 1,1 (s, 12 H), 2,95 (m, 2 H). 3.35 (m, 2 H), 4,16 (m, 2 H), 7,94 (dd, J=6,2, 2,0 Hz, 1 H), 10,21 (s, 1 H).

Trap 3: 5-(5-aminopyrazine-2-yl)-2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-30 difluorbenzaldehyde. Aan een suspensie van 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4,-difluor-5-(4,4,5,5-tetramethyl-[l,3,2]dioxaborolan-2-yl)benzaldehyde (0,500 g, 1,3 mmol) en cesiumcarbonaat (1,2 g, 3,6 mmol) in eerder ontgast toleen/IPA/water (4/4/1) mengsel (2,5 ml) werd 5-broompyrazine-2-yl-amine (Maybridge, 0,208 g, 1,2 mmol) 64 onder stikstof toegevoegd. Tetrakis(trifenylfosfine)palladium-(0) (0,555 g, 0,05 mmol) werd bij kamertemperatuur toegevoegd en het reactiemengsel werd bij 85°C gedurende 3,5 uur verhit. Het mengsel werd tot kamertemperatuur gekoeld, met EtOAc en water verdund en vervolgens geneutraliseerd. De fasen werden gescheiden en de waterige 5 fase werd opnieuw geëxtraheerd met EtOAc (x2). De gecombineerde organische lagen werden op magnesiumsulfaat gedroogd en geconcentreerd. Deze werden gezuiverd door middel van kolomchromatografie onder elutie met ethylacetaat in hexaan (10-60%) waarbij 150 mg product verkregen werd. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 1,28 (d, J=6,4 Hz, 6 H), 2,97 (m, 2 H), 3,34 (m, 2 H), 4,18 (m, 2 H), 4,78 (s, 2 10 H), 8,08 (d, J=l,6 Hz, 1 H), 8,19 (dd, J=8,4m 2ml Hz, 1 H), 8,44 (m, 1 H), 10,37 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 349 (MH+).

Trap 4: Verbinding 22. Een geroerde opslibbing van 5-(5-aminopyrazine-2-yl)-2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluorbenzaldehyde (0,148 g, 0,425 mmol) in nBuOH werd met barbituurzuur (0,057 gram, 0,446 mmol) behandeld. Het 15 reactiemengsel werd bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten geroerd en werd vervolgens gedurende een nacht onder terugvloeikoeling verhit. Na koeling resulteerde een precipitaat dat gefiltreerd werd. Verdere analyse gaf aan dat noch het fïltraat noch het vaste materiaal zuiver waren. De vaste stoffen en het fïltraat werden opnieuw gecombineerd en geconcentreerd en vervolgens gezuiverd door middel van 20 kolomchromatografie onder elutie met MeOH in DCM (1-12%) waarbij 112 mg van een verrijkt mengsel van isomeren verkregen werd. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) Belangrijkste isomeer: d ppm (0,84 (d, J=6,4 Hz, 3 H), 1,07 (d, J=6,0 Hz, 3 H), 2,84 (d, J=14,4 Hz, 1 H), 3,44 (d, J=14,6 Hz, 1 H), 3,59 (dd, J=8,6,6,2 Hz, 1 H), 3,71 (m, 1 H), 3,77 (d, J=8,8 Hz, 1 H), 3,99 (dd, J=13,7,2,4 Hz, 1 H), 6,50 (s, 2 H), 7,20 (d, J=8,l Hz. 25 1 H), 7,88 d, J=l,6 Hz, 1 H), 8,16 (dd, J=2,4, 1,5 Hz, 1 Η), 11,40 (s, 1 H), 11,74 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 459 (MH+).

VOORBEELD 23

Trap 1:5-(5-broompyrazine-2-yl)-2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluor-benzaldehyde. Aan een suspensie van 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluor-5-30 (4,4,5,5-tetramethyl-[l ,3,2]dioxaborolan-2-yl)-benzaldehyde (Voorbeeld 22, trap 2) (1,5 g, 3,9 mmol) en natriumcarbonaat (1,1 g, 11 mmol) in eerder ontgast acetonitril/water 1:1-mengsel (4 ml) werd 2-broom5-ioodpyrazine (1,0 g, 3,5 mmol) onder stikstof toegevoegd. Bis-(trifenylfosfine)-dichloorpalladium-(I() (0,099 g, 0,14 65 mmol) werd bij kamertemperatuur toegevoegd en het reactiemengsel werd gedurende een nacht bij 55°C verhit. Het mengsel werd tot kamertemperatuur gekoeld, met EtOAc en water verdund en vervolgens geneutraliseerd. De fasen werden gescheiden en de waterige fase werd opnieuw geëxtraheerd met EtOAc (2x). De gecombineerde 5 organische lagen werden op magnesiumsulfaat gedroogd en geconcentreerd. Het mengsel werd gezuiverd door kolomchromatografie onder elude met ethylacetaat in hexaan (5-40%) waarbij 931 mg van het product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) d ppm 1,28 (d, J=6,4 Hz, 6 H), 3,02 (m, 2 H), 3,40 (m, 2 H), 4,19 (m, 2 H), 8,28 (dd, J=8,2,2,1 Hz, 1 H), 8,74 (d, J=l,4 Hz, 1 H), 8,78 (m, 1 H), 10,29 (s, 10 1 H); MS(APC1+) m/z 412,414 (MH+).

Trap 2: 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluor-5-(5-methylpyrazine-2-yl)-benzaldehyde. Aan een suspensie van 5-(5-broomoyrazine-2-yl)-2-(2-,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluorbenzaldehyde (0,375 g, 0,91 mmol) en natriumcarbonaat (0,29 g, 2,7 mmol) in eerder ontgast acetonitril/water (1/1) mengsel 15 (4 ml) werd methylboronzuur (0,11 g, 1,8 mmol) onder stikstof toegevoegd. Bis- (trifenylfosfïne)-dichloorpalladium-(II) (0,026 g, 0,036 mmol) werd bij kamertemperatuur toegevoegd en het reactiemengsel werd gedurende 5 uur bij 85°C verhit. Analyse gaf aan dat het uitgangsmateriaal niet volledig verbruikt zo werd een verdere hoeveelheid van 1 equivalent methylboronzuur aan het reactiemengsel 20 toegevoegd en het werd gedurende een nacht bij 85°C geroerd. Het mengsel werd tot kamertemperatuur gekoeld, met EtOAc en water verdund en vervolgens geneutraliseerd. De fasen werden gescheiden en de waterige fase werd opnieuw geëxtraheerd met twee maal EtOAc. De gecombineerde organische lagen werden op magnesiumsulfaat gedroogd en geconcentreerd. Het mengsel werd door middel van 25 kolomchromatografie gezuiverd onder elutie met ethylacetaat in hexaan (5-35%) waarbij 132 mg product verkregen werd. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) d ppm 1,28 (d, J=6,4 Hz, 6 H), 2,61 (s, 3 H), 3,00 (m, 2 H), 3,38 (m, 2 H), 4,19 (m, 2 H), 8,26 (dd, J=8,2,2,1 Hz, 1 H), 8,54 (d, J=l,2 Hz, 1 H), 8,89 (dd, J=2,3, 1,6 Hz, 1 H), 10,33 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 348 (MH+).

30 Trap 3: Verbinding 23. Een geroerde oplossing van 2-(2,6-dimethylmorfoline-4- yl)-3,4-difluor-5-(5-methylpyrazine-2-yl)-benzaldehyde (0,185 g, 0,533 mmol) in azijnzuur, ijsazijn (4 ml) werd behandeld met barbituurzuur (0,072 g, 0,559 mmol). Het reactiemengsel werd gedurende 1 uur bij 110°C geroerd en werd vervolgens tot 66 kamertemperatuur gekoeld. Het reactiemengsel werd azeotropisch gedestilleerd en werd gebruik makend van tolueen geconcentreerd. Het mengsel werd gezuiverd door middel van kolomchromatografie onder elutie met ethylacetaat in hexaan (25-80%) waarbij 99 mg product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0,85 5 (d, J=6,4 Hz, 3 Η), 1,08 (d, J=6,2 Hz, 3 H), 2,45 (s, 3 H), 2,86 (d, J=14,4 Hez, 1 H), 3,01 (m, 1 H), 3,51 (d, J=14,4 Hz, 1 H), 3,60 (dd, J=8,8,6,4 Hz, 1 H), 3,72 (m, 1 H), 3,81 (d, J=8,8 Hz, 1 H), 4,03 (dd, J=13,5,2,0 Hz, 1 H), 7,36 (d, J=7,2 Hz, 1 H), 8,53 (d, J=l,2 Hz, 1 H), 8,75 (m, 1 Η), 11,44 (s, 1 Η), 11,77 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 458 (MH+). Analyse berekend voor C22H21F2N5O4 · 0,14H2O; C, 57,45; H, 4,66; N, 15,23. 10 Gevonden: C, 57,14; H, 4,55; N, 1483.

VOORBEELD 24

Verbinding 24. Een geroerde opslibbing van 5-(5-broompyrazine-2-y 1)-2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluorbenzaldehyde (Voorbeeld 23, trap 1) (0,274 g, 0,665 mmol) in nBuOH werd met barbituurzuur (0,089 g, 0,698 mmol) behandeld. Het 15 reactiemengsel werd bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten geroerd en werd vervolgens tot 105°C gedurende een nacht verhit. De donkerrode oplossing werd in vacuüm geconcentreerd tot een roodachtige olie die azeotropisch met tolueen gedestilleerd werd waarbij een verrijkt mengsel van isomeren verkregen werd. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6). Hoofdisomeer: d ppm 0,85 (d, J=6,4 Hz, 3 H), 1,08 (d, 20 J=6,2 Hz, 3 H), 2,86 (d, J=14,6 Hz, 1 H), 3,02 (m, 1 H), 3,53 (d, J=14,6 Hz, 1 H), 3,60 (dd, J=8,7,6,5 Hz, 1 H), 3,72 (m, 1 H), 3,83 (d, J=8,8 Hz, 1 H), 4,04 (dd, J=13,5,1,9 Hz, 1 H), 7,39 (d, J=8,2 Hz, 1 H), 8,71 (t, J=l,7 Hz, 1 H), 8,82 (d, J=l,6 Hz, 1 H), 11,45 (s, 1 H), 11,78 (s, 1 H); MS(APC1+) m/z 522, 524 (MH+).

VOORBEELD 25 25 Trap 1.2-jood-5-methoxypyrazine. Natriummethoxide (25 gew.% in MeOH, 0,321 ml, 1,4 mmol) werd gecombineerd met N-methylpyrrolidine (NMP) (1,28 ml) en werd tot 60°C opgewarmd. 2-broom-5-joodpyrazine (0,40 g, 1,4 mmol) werd toegevoegd. De suspensie werd bij 60°C gedurende 1 uur geroerd. De suspensie werd gecombineerd met een verdere hoeveelheid van 100 mg eerder verkregen 30 reactiemengsel voorafgaande aan de opwerking. Het reactiemengsel werd verdeeld tussen H2O en ethylacetaat en de waterige laag werd drie maal met ethylacetaat geëxtraheerd. De gecombineerde extracten werden op magnesiumsulfaat gedroogd, gefiltreerd en geconcentreerd waarbij een bruine olie werd verkregen die vast werd 67 waarbij 406 mg ongezuiverd materiaal werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) d ppm 3,90 (s, 3 H), 8,03 (d, J=l,4 Hz, 1 H), 8,29 (d, J=l,4 Hz, 1 H); MS(APC1+, m/z) 237.

Trap 2.2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluor-5-(5-methoxypyrazine-2-yl)-5 benzaldehyde. Aan een suspensie van 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluor-5-(4,4,5,5-tetramethyl-[l,3,2]dioxaborolan-2-yl)-benzaldehyde (0,78 g, 2,0 mmol) en natriumcarbonaat (0,54 g, 5,1 mmol) in eerder ontgast acetonitril/water (3 ml/3 ml) mengsel werd 2 -j ood-5 -methoxypyrazine (0,40 g, 1,69 mmol) onder stikstof toegevoegd. Bis-(trifenylfosfïne)-dichloorpalladium-(II) (0,048 g, 0,068 mmol) werd 10 bij kamertemperatuur toegevoegd en het reactiemengsel werd gedurende een nacht bij 60°C verhit. Het mengsel werd tot kamertemperatuur gekoeld met EtOAc en water verdund. De fasen werden gescheiden en de waterige fase werd opnieuw geëxtraheerd met EtOAc (3x). De gecombineerde extracten werden op magnesiumsulfaat gedroogd en door middel van kolomchromatografie 0-5% EA/Hex gezuiverd waarbij 386 mg 15 vaste stof werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) d ppm 1,28 (d, J=6,4 Hz, 6 H), 2,98 (m, 2 H), 3,35 (m, 2 H), 3,99 (s, 3 H), 4,18 (m, 2 H), 8,22 (dd, J=8,2,2,1 Hz, 1 H), 8,29 (d, J=l,4 Hz, 1 H), 8,53 (dd, J=2,2,1,5 Hz, 1 H), 10,35 (s, 1 H); MS(APC1+, m/z) 364.

Trap 3. Verbinding 25. Een geroerde oplossing van 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-20 yl)-3,4-difluor-5-(5-methoxypyrazine-2-yl)-benzaldehyde (0,386 g, 1,06 mmol) werd opgelost in azijnzuur (3 ml):H20 (2 ml) en behandeld met barbituurzuur (0,143 g, 1,12 mmol). Het reactiemengsel werd gedurende 1 uur bij 110°C geroerd en werd vervolgens tot kamertemperatuur gekoeld. Het precipitaat werd gefiltreerd waarbij 388 mg van een lichtbruine vaste stof werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 25 ppm 0,85 (d, J=6,4 Hz, 3 H), 1,08 (d, J=6,2 Hz, 3 H), 2,86 (d, J=14,2 Hz, 1 H). 2,99 (m, 1 H), 3,48 (d, J=13,6 Hz, 1 H), 3,60 (dd, J=8,8,6,4 Hz, 1 H), 3,71 (m, 1 H), 3,80 (d, J=8,8 Hz, 1 H), 3,89 (s, 3 H), 4,01 (dd, J=13,5, 2,2 Hz, 1 H), 7,29 (d, J=7,8 Hz, 1 H), 8,31 (d, J=l,6 Hz, 1 H), 8,44 (dd, J=2,2, 1,5 Hz, 1 Η), 11,42 (s, 1 H), 11,76 (s, 1 H); MS(AP1+, m/z) 474. Analyse berekend voor C22H21F2N5O5 · 0,08CH3CC>2H: C, 55,65; 30 H, 4,49; N, 14,64. Gevonden: C, 55,49; H, 4,22; N, 14.25.

VOORBEELD 26

Trap 1.2-ethoxy-5-joodpyrazine. Natriumethoxide (21 gew.%, 0,524 ml, 1,4 mmol) werd gecombineerd met NMP (2 ml) en tot 60°C opgewarmd. 2-broom-5- 68 joodpyrazine (0,40 g, 1,4 mmol) werd vervolgens toegevoegd. De suspensie werd bij 60°C gedurende 1 uur geroerd. Het reactiemengsel werd verdeeld tussen H2O en ethylacetaat en de waterige laag werd drie maal met ethylacetaat geëxtraheerd. De gecombineerde extracten werden op magnesiumsulfaat gedroogd, gefiltreerd en 5 geconcentreerd warbij een bruine olie (362 mg) werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) d ppm 1,36 (t, J=7,l Hz, 3 H), 4,31 (q, J=7,0 Hz, 2 H), 8,00 (d, J=l,6 Hz, 1 H), 8,26 (d, J=l,6 Hz, 1 H); MS (APC1+, m/z) 251.

Trap 2.2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-5-(5-ethoxypyrazine-2-yl)-3,4-difluor-benzaldehyde. Aan een suspensie van 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-3,4-difluor-5-10 (4,4,5,5-tetramethyl-[l,3,2]dioxaborolan-2-yl)-benzaldehyde (0,66 g, 1,7 mmol) en natriumcarbonaat (0,61 g, 5,8 mmol) in eerder ontgast acetonitril/water (3 ml/3 ml) mengsel werd 2-ethoxy-5-joodpyrazine (0,362 g, 1,45 mmol) onder stikstof toegevoegd. Bis-(trifenylfosfme)-dichloorpalladium-(II) (0,041 g, 0,058 mmol) werd bij kamertemperatuur toegevoegd en het reactiemengsel werd gedurende een nacht bij 15 60°C verhit. Het mengsel werd tot kamertemperatuur gekoeld met EtOAc en water verdund. De fasen werden gescheiden en de waterige fase werd opnieuw geëxtraheerd met EtOAc (3x). De gecombineerde extracten werden op magnesiumsulfaat gedroogd en door middel van kolomchromatografie 0-5% EA/Hex gezuiverd waarbij 313 mg vaste stof werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) d ppm 1,28 (d, 20 J=6,4 Hz, 6 H), 1,41 (t, J=7,l Hz, 3 H), 2,98 (m, 2 H), 3,36 (m, 2 H), 4,18 (m, 2 H), 4,41 (q, J=7,l Hz, 2 H), 8,22 (dd, J-8,2,2,1 Hz, 1 H), 8,26 (d, J=l,4 Hz, 1 H), 8,51 (dd, J=2,3,1,6 Hz, 1 H), 10,36 (s, 1 H); MS )APC1+, m/z) 378.

Trap 3. Verbinding 26. Een geroerde oplossing van 2-(2,6-dimethylmorfoline-4-yl)-5-(5-ethoxypyrazine-2-yl)-3,4-difluorbenzaldehyde (0,312 g, 0,829 mmol) opgelost 25 in azijnzuur (2,48 ml):H20 (1,65 ml) werd behandeld met barbituurzuur (0,112 g, 0,871 mmol). Het reactiemengsel werd gedurende 1 uur bij 110°C geroerd en werd vervolgens langzaam tot kamertemperatuur gekoeld. Het reactiemengsel werd azeotropisch gedestilleerd en geconcentreerd gebruik makend van tolueen. Het mengsel werd gezuiverd door middel van kolomchromatografie onder elutie met ethylacetaat in 30 hexaan waarbij 320 mg product werd verkregen. Hl NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 0,85 (d, J=6,4 Hz, 3 H), 1,07 (d, J=6,0 Hz, 3 H), 1,31 (t, J=7,l Hz, 3 H), 2,86 (d, J=14,4 Hz, 1 H), 2,99 (m, 1 H), 3,48 (d, J=14,2 Hz, 1 H), 3,60 (dd, J=8,7,6,3 Hz, 1 H), 3,71 (m, 1 H), 3,79 (d, J=8,8 Hz, 1 H), 4,01 (dd, J=13,5, 2,2 Hzm 1 H), 4,33 (1, J=7,0 69

Hz, 2 Η), 7,28 (d, J=6,0 Hz, 1 H), 8,28 (d, J=1,4 Hz, 1 H), 8,42 (m, 1 Η), 11,42 (s, 1 H), 11,76 (s, 1 H); MS(APC1+, m/z) 488. Analyse berekend voor C22H21F2N5O5 · 0,llCH3CO2H: C, 56,45; H, 4,78; N, 14,18. Gevonden: C, 56,21; H, 4,68; N, 13,79.

VOORBEELD 27 5 In dit voorbeeld werd de in vitro antibacteriële activiteit van geselecteerde verbindingen bepaald tegen S. aureus en H. Influenzae. Afgezien van ophelderingen of modificerende aanwijzingen, volgde het MIC testen procedures die aanbevolen zijn door het NCCLS1'2 of volgden de hieronder aangegeven beschrijvingen.

Bacteriële Cultures Ten minste de volgende organismen werden in de screen 10 opgenomen: Staphylococcus aureus SA-1 (UC-76) en H. Influenzae HI-3542.

Incubaties vonden plaats bij 35°C. Stockbacteriële cultures werden in stand gehouden op tryptische soja agar die 5% schapenbloed (BD, Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeysville, Maryland), anaeroben werden in stand gehouden op anaerobe bloedagarplaten - CDC formulering (BD), en lastige organismen werden op chocolade-15 agar II-platen (BD) in stand gehouden. Specifieke omstandigheden voor de bewerking zijn hieronder aangegeven.

Permanente Stock Cultuur Collectie Stock cultures werden opgeslagen in de vorm van bevroren suspensies bij -70°C. De meeste cultures worden routinematig gesuspendeerd in 10% afgeroomde melk (BD) voorafgaande aan het snel bevriezen in 20 droog ijs/ethanol en werd vervolgens in een vriezer bij -70°C opgeslagen. Haemophilus werden gesuspendeerd in geïnactiveerde paardenserum (Colorado Serum Company, Denver, Colorado) die 7,5% glucose bevatte voorafgaande aan het snel bevriezen.

Instandhouding van Stock Cultures De meeste cultures werden in stand gehouden op tryptisch soja agar die 5% schapenbloed bevatte bij kamertemperatuur (20°C). Elke 25 cultuur werd teruggewonnen uit overgebracht een additionele periode voorafgaande aan het MIC-testen. Verse platen werden geïnoculeerd de dag voorafgaande aan het testen, ze werden gedurende een nacht geïncubeerd en gechecked ter bevestiging van zuiverheid en identiteit.

Haemophilus werd op chocolade agar II platen bij kamertemperatuur in een 30 kaarsenfles in stand gehouden waarin een 3,5% C02-atmosfeer verschaft werd.

Bevestiging van de Identiteit van Cultures Culture-identificaties werden bevestigd door middel van standaard-microbiologische methoden3. Cultures werden aangebracht op geschikte agarplaten voor het visualiseren van zuiverheid, verwachte 70 koloniemorfologie en hemolytische patronen. Gramstammen werden eveneens gebruikt.

De identiteiten van recente isolaten gebruikt in deze test werden bevestigd gebruik makend van een MicroScan WalkAway 40 SI Instrument (Dade Behring, West 5 Sacramento, Califomië). Dit apparaat maakt gebruik van een geautomatiseerde incubator, aflezer en computer voor identificatiedoeleinden ter beoordeling van de biochemische reacties die in elk organisme worden uitgevoerd. Gebruik makend van dit apparaat werd organisme-identificatie (bevestiging) en een initiële antibiogram voor elke stam gegenereerd.

10 Gestandardiseerde Organisme Inocula Bevroren stockcultures werden gebruikt als de initiële bron van organismen voor de uitvoering van het microbouillon verdunning MIC test. Stockcultures werden gebracht op hun standaard-groeimedium gedurende ten minste 1 groeicyclus (18-24 uur) voorafgaande aan het gebruik hiervan.

De meeste bacteriën tenzij anders wordt aangegeven werden geprepareerd 1S rechtstreeks uit agarplaten in 10 ml porties van het geschikte bouilloncultuurmedium. Bacteriële cultures werden ingesteld met betrekking tot de opaciteit van een 0,5 McFarland-standaard (optische dichtheidswaarde van 0,28-0,3 op een Perkin-Elmer Lambda EZ 150 spectrofotometer Wellesley, Massachusetts, ingesteld op een golflengte van 600 run). De aangepaste cultures werden 400 maal verdund (0,25 ml inoculum + 20 100 ml bouillon) in groeimedium ter productie van een uitgangssuspensie van ongeveer 5 x IO5 kolonie vormende eenheden (CFU)/ml. Tenzij anders wordt aangegeven werden de bacteriële stammen getest in kation ingestelde Mueller Hinton bouillon (CAMHB).

Haemophilus influenzae-stammen werden gekweekt op chocolade agar II platen 25 en getest in Haemophilus Test Medium (Remel, Lenexa, Kansas).

Testverbinding (“Geneesmiddel”’) bereiding Verbindingen werden in oplossing gebracht in DMSO. Geneesmiddelstockoplossingen werden bereid op de dag van de test. Geneesmiddelen werden nauwkeurig gewogen voor testinhoud waar dit noodzakelijk was.

30 Geneesmiddelverdunning Trav Bereidingswijze Microbouillonverdunningsstock- platen werden klaar gemaakt in twee verdunningsseries, 64 tot 0,06 pg geneesmiddel/ ml en 0,25 tot 0,00025 pg geneesmiddel/ml. Voor de hoge concentratiereeks werd 200 pl stockoplossing (2 mg/ml) toegevoegd aan duplo-rijen van een microtiterplaat met 96 71 putjes. Deze werd gebruikt als het eerste putje in de verdunningsreeks. Serie tweevoudige decrementale verdunningen werden gemaakt gebruik makend van BiMek FX robot (Beekman Coulter Inc., Fullerton, CA) met 10 van de overgebleven 11 putjes waarbij elke 100 μΐ bevatte van het geschikte oplosmiddel/verdunningsmiddel. Rij 12 5 bevatte slechts verdunningsmiddel/oplosmiddel en diende als controle. Voor buis een van de lage concentratieserie werd 200 μΐ van een 8 pg/ml stock aan duplo-rijen van een plaat met 96 putjes toegevoegd. Serie tweevoudige verdunningen werden zoals hierboven beschreven gemaakt.

Dochterplaten werden geënt (3,2 μΐ/putje) uitgaande van de stockplaten die 10 hierboven opgesomd zijn gebruik makend van een BioMek FX robot en waren hetzij onmiddellijk gebruikt dan wel bij -70°C bevroren tot het gebruik.

Plaatinoculatie Aerobe organismen werden geïnoculeerd (100 μΐ volume) in de ontdooide platen gebruik makend van de BioMek FX robot. De gemoculeerde platen werden gebracht in stapels van niet meer dan 5 en werden met een lege plaat bedekt.

15 Deze platen werden gedurende 16 tot 24 uur bij omgevingstemperatuur volgens de CLSI-richtlijnen geïncubeerd.

Beoordeling van de Test Na inoculatie en incubatie werd de graad van bacteriële groei visueel beoordeeld met behulp van een Test Reading Mirror (Dynex Technologies 220 16) in een donker gemaakte kamer met een enkele belichting 20 rechtstreeks door de bovenzijde van de microbouillon-tray. Het MIC was de laagste concentratie aan geneesmiddel dat macroscopisch zichtbare groei onder de omstandigheden van de test verhinderde. Het testen werd uitgevoerd in duplo. Wanneer de MIC-waarde in duplotest varieerde met 1 putje (2-voudig) waren de lagere waarden gerapporteerd. Indien de MIC’s varieerden met 2 verdunningen werd de gemiddelde 25 waarde gerapporteerd. Groter dan deze 4-voudige variatie vroeg om een herhaling van de test waarna een vergelijkbare bepaling op alle waarden werd toegepast.

REFERENTIES:

National Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance Standarad 30 for Antimicrobial Susceptibility Testing; Fourteenth Informational Supplement.

NCCLS document M 100-S14 (ISBN 1-56238-516-X), NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, 2004.

72 2. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Method for Dilution Antimicrobial Tests for Bacteria That Grow Aerobically; Approved Standard-Sixth Edition. NCCLS document M7-A6 (ISBN 1-56238-486-4), NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, 2003.

5 3. Murray PR, Baron EJ, Jorgensen JH, Pfaller MA, Yolken RH. Manual of

Clinical Microbiology, Eighth Edition. ASM Press (ISBN 1-55581-255-4), American Society for Microbiology, 1752 N Street NW, Washington, DC 20036-2904 USA, 2003.

Gebruik makend van dit protocol werden de volgende resultaten gegenereerd: 10 _ Tabel 2- Minimale Inhibitieconcentratie (pg/ml)__

Verbinding/ S. aureus H Verbinding/ S. aureus H

Voorbeeld UC76 influenzae Voorbeeld UC76 influenzae

No.___3542___No.___3542

J__0,5 1___14__ND ND

_2__0,125 0,5___15__1__4_ J__32__>64___16__>64 >64 _4__0,25 0,5___17__>64 >64 J__0,5 1___18__>64 >64 _6__0,5 0,25___19__2__2_ J__ND* ND___20__4__2_ J__ND ND___21__16__32_ _9__ND ND___22__0,5__0,5 _10__ND ND___23__0,125 1_

_n__ND ND___24__ND__ND

_12__ND ND___25__0,125 0,5 13 I ND 1 ND I I 26 | 0,25 1 *ND - niet bepaald

Relatieve stereochemie voor racemische verbindingen werden toegekend op basis van de R- of S-aanduiding van de structures zoals in Tabel 1 is weergegeven.

15 Zoals gebruikt wordt in de beschrijving de referentie aan “a” of “een” betekent “een of meer”. Enkelvoud en meervoud zijn verwisselbaar anders dan de indicatie van een getal.

Zoals door de deskundige begrepen zal worden omvatten alle trajecten die in de beschrijving geopenbaard zijn voor een of meerdere doeleinden in het bijzonder met 20 betrekking tot het verschaffen van een geschreven omschrijving alle mogelijke ondergeschikte gebieden en combinaties van ondergeschikte gebieden hiervan alsmede de afzonderlijke waarden waaruit het gebied bestaat, in het bijzonder gehele 73 getalswaarden. Elk opgesomd gebied kan gemakkelijk worden herkend als een gebied dat voldoende omschrijving biedt waardoor hetzelfde gebied afgebroken kan worden in ten minste gelijke helften, derden, kwart, vijfden, of tienden etc.. Als niet beperkend voorbeeld kan elk in de beschrijving besproken gebied gemakkelijk worden afgebroken S in lagere derde, midden derde en bovenste derde etc.. Bijvoorbeeld omvat het gebied Ci-C6 de ondergeschikte gebieden C2-C6-, C3-C6, C3-C5, C4-C6 etc. alsmede Ci-(metyl), C2-(ethyl), C3-(propyl), C4-(butyl), Cs-(pentyl) en C6-(hexyl) afzonderlijk. Tevens zal door de deskundige worden begrepen dat uitdrukkingen zoals “ten hoogste”, “ten minste”, “groter dan”, “minder dan”, “meer dan” of “meer” en dergelijke het genoemde 10 getal omvat en refereert aan gebieden die hierna afgebroken kunnen worden in ondergeschikte gebieden zoals hierboven besproken is. Op dezelfde wijze omvatten tevens alle beschreven verhoudingen in de beschrijving ondergeschikte verhoudingen die binnen de bredere verhouding vallen.

Een deskundige zal tevens gemakkelijk herkennen dat daar waar leden tezamen 15 gegroepeerd zijn op gebruikelijke wijze zoals in de Markush-groep de onderhavige uitvinding niet alleen de gehele groep die als geheel wordt vermeld omvat maar elk lid van de groep afzonderlijk en alle mogelijk subgroepen van de hoofdgroep. Verder voor alle doeleinden omvat de onderhavige uitvinding niet alleen de hoofdgroep maar een of meer van de groepleden die afwezig zijn uit de hoofdgroep. De onderhavige uitvinding 20 beoogt tevens de expliciete uitsluiting van een of meer willekeurige groepleden in de geclaimde uitvinding.

Het zal de deskundige duidelijk zijn dat alle getallen waaronder die welke hoeveelheden van ingrediënten, eigenschappen zoals molecuulgewicht, reactie-omstandigheden enz. uitdrukken benaderingen zijn en begrepen dient te worden als 25 gemodificeerd zijnde in alle instanties door de term “ongeveer”. Deze waarden kunnen variëren in afhankelijkheid van de gewenste eigenschappen die men zoekt en die verkregen moeten worden via de deskundige op dit gebied gebruik makend van de hedendaagse leer van de onderhavige uitvinding. Tevens is het duidelijk dat dergelijke waarden inherent een variabiliteit hebben die noodzakelijkwijze resulteert uit de 30 standaard-deviaties die in hun respectievelijke testmetingen gevonden worden.

Alle in de beschrijving geopenbaarde referenties worden specifiek in de beschrijving opgenomen in de vorm van een referentie hierna.

74

Terwijl specifieke uitvoeringsvormen geïllustreerd en beschreven zijn dient men te begrijpen dat deze uitvoeringsvormen de beschermingsomvang van de uitvinding niet beperken en dat veranderingen en modificaties gemaakt kunnen worden volgens een op zichzelf bekende wijze zonder van de uitvinding in zijn bredere aspecten zoals 5 gedefinieerd in de volgende conclusies af te wijken. Een referentie aan een “stap” in de aanvrage wordt slechts voor het gemak gebruikt en categoriseert, definieert noch limiteert de uitvinding zoals deze in de beschrijving geopenbaard wordt.

2000373

Claims (38)

1. Een verbinding met formule I: v 5 of een zout, solvaat, hydraat of voorgeneesmiddel hiervan, waarin Ri is een al dan niet gesubstitueerd pyrazine;

2. H ,6H-spiro [ 1,4-oxazinol [4,3 -a]chinoline-5,5 ’ -pyrimidine] -2’,4’,6’(rH,3’H)-trion; (2S,4R,4aR)-9,l 0-difluor-2,4-dimethyl-8-pyrazine-2-yl-l ^,4,4a-tetrahydro-2’ H,6H-spiro[ 1,4-oxazmol[4,3-a]chinoline-S,5 ’-pyrimidine]-15 2’,4’,6’(l’H,3’H>trion; (2R,4S,4aS)-9,10-difluor-2,4-methyl-r,3’-bis(morfoline-4-yl-methyl)-8-pyrazine- 2-yl-1,2,4,4a-tetrahydro-2 ’ H ,6H-spiro[ 1,4-oxazinol[4,3 -a]chinoline-5,5 ’ -pyrimidme]-2’,4’,6’(l ’H,3’H)-trion; (2R,4S,4aS)-9,10-difluor-2,4-dimethyl-r,3’-bis[(4-methylpiperazine-l-yl)methyl]-20 8-pyrazine-2-yl-l ,2,4,4a-tetrahydro-2’H,6H-spiro[ 1,4-oxazinol[4,3- a]chinoline-5,5 ’-pyrimidine]-2’ ,4’ ,6’(1’ H,3 ’H)-trion; (2R,4S,4aS)-9,10-difluor-2,4-dimethyl-8-(4-oxidopyrazinepyrazine-2yl)-1,2,4-4a-tetrahydro-2’H,6H-spiro[l,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5’-pyrimidine]-2\4\6’(l’H,3’H)-trion; 25 rel-(2S,4R,4aR)-9,10-difluor-2,4-dimethyl-2’,4’,6’-trioxo-8-pyTazine-2-yl- 1,2,4,4a-tetrahydro-2’H,6H-spiro[l,4-oxazino[4,3-a)chinoline-5,5’-pyrimidine]-r,3’(4’H,6’H)-diyl]bis(methyleen)diacetaat; (2S,4R,4aR)-9,10-difluor-2,4-dimethyl-2,,4’,6’-trioxo-8-pyrazine-2-yl-l ^,4,4a-tetrahydro-2’H,6H-spiro[ 1,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5’-pyrimidine]-30 1 ’ ,3 ’ (4’H,6 ’ H)-diyl]bis(methyleen)diacetaat rel-(2S,4R,4aR)-9,10-difluor-r,3,-bis*hydroxymethyl)-2,4-dimethyl-8-pyrazine- 2-yl-l,2,4,4a-tetrahydro-2’H,6H-sp[iro[l,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5’-pyrimidine]-2’ ,4’ ,6’ (1 ’H,3’H)-trion; (2S,4R,4aR)-9,10-difluor-1 ’ ,3 ’-bis(hydroxymethyl)-2,4-diinethyl-8-pyrazme- 2-yl-l ,2,4,4a-tetrahydro-2’H,6H-sp[iro[l,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5’-pyrimidine]-2\4’,6’(l ’H,3’H)-trion; rel-(2S,4R,4aR)- Γ ,3 ’ -bis(chloormethyl)-9,10-difluor-2,4-dimethyl-8-pyrazine-5 2-yl-l,2,4,4a-tetrahydro-2,H,6H-sp[iro[l,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5’- pyrimidine]-2’,4’,6’(rH,3’H)-trion; rel-tetrabenzyl [(2S,4R,4aR)-9,10-difluor-2,4-dimethyl-2,,4,,6,-trioxo-8-pyrazine- 2-yl-l ,2,4,4a-tetrahydro-‘H,6H-spiro[ 1,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5’-pyrimidine]-r,3’(4’H,6’H)-<iiyl]bis(methyleen)bis(fosfaat); 10 (2S,4R,4aR)-l’,3’-bis(broommethyl)-9,10-difluor-2,4-dimethyl-8-pyrazine- 2-yl-l,2,4,4a-tetrahydro-2’H,6H-sp[iro[l,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5’-pyrimidine]-2\4\6’(l ’H,3’H)-trion; tetra-tert-butyl [(2 S ,4R_4aR)-9> 10-difluor-2,4-dimethy 1-2 ’ ,4 ’ ,6’-trioxio-8-pyrazine- 2-yl-l i2,4,4a-tetrahydro-2’H,6H-spiro[l,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5’-15 pyrimidine]-1 ’,3’(4,H,6*H)-diyl]bis(methyleen)bis(fosfaat); rel-(2S,4R,4aR>-10-fluor-2,4-dimethyl-8-pyrazine-2-yl-1,2,4,4a-tetrahydro- 9 2’H,6H-sp[iro[l,4-oxazino[4,3-a]chmoline-5,5’-pyrimidine]-2’,4’,6’(1 ’H,3’H)-trion; rel-(2S,4R,4aR)-10-fluor-2,4-dimethyl-9-morfoline-4-yl-8-pyrazine-20 2-yl-l,2,4,4a-tetrahydro-2’H,6H-sp[iro[l,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5’- pyrimidine]-2’,4’,6’( ΓΗ,3’H)-trion; reI-(2S,4R,4aR)-10-fluor-9-(2-methoxyethoxy)-2,4-dimethyl-8-pyrazine- 2-yl-lr2,4,4a-tetrahydro-2’H,6H-sp[iro[l,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5’-pyrimidine]-2\4’,6’(l ’H,3’H)-trion; 25 rel-(2S,4R,4aR)-10-fluor-9-(2-fluorethoxy)-2,4-dimethyl~8-pyrazine- 2-yl-l ,2,4,4a-tetrahydro-2’H,6H-sp[iro[ 1,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5’-pyrimidine]-2\4’,6’(1 ’H,3’H)-trion; rel-(2S,4R,4aR)-9-fluor-2,4-dimethyl-8-pyrazine-2-yl-1 ,2,4,4a-tetrahydro~ 2Ή,6H-sp[iro[ l,4-o xazino[4,3-a]chinoline-5,5’-pyrimidine]-30 2\4\6’(1 ’H,3’H)-trion; rel-(2S,4R,4aR)-2,4-dimethyl-8-pyrazine-2-yl-l,2,4,4a-tetrahydro-2’H,6H- sp[iro[l,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5’-pyriinidine]-2’,4’,6’(l’H,3’H)- trion; rel-(2S,4R,4aR)-8-(3-methoxypyrazine-2yl)-2,4-dimethyl-1,2,4,4a-tetrahydro-2’H,6H-spiro[ 1,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5 ’ -pyrimidine] -2’,4’,6’(1 ’H,3’H)-trion; (2R,4S,4aS)-8-(5-ammopyrazine-2-yl>9,10-difluor-2,4-dimethyl-1,2,4,4a-5 tetrahydro-2,H,6H-spiro[l,4-oxa2dno[4,3-a]chinoline-5,5’-pyrimidine]- 2’,4’,6’(l’H,3’H)-trion; (2R,4S,4aS)-9,10-difluor, 2,4-dimethyl-5-(5-methylpyrazine-2-yl)- 1,2,4,4a-tetrahydro-2’H,6H-spiro[ 1,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5 ’-pyrimidine]-2’,4’,6’(1 *H,3’H)-trion; 10 (2R,4S,4aS)-8-(5-broompyrazine-2-yl)-9,10-difluor-2,4-dimethyl-1,2,4,4a- tetrahydro-2’H,6H-spiro[ 1,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5 ’-pyrimidine]-2’,4’,6’(1 ’H,3’H)-trion; (2R,4S,4aS)-9,10-difluor-8-(5-methoxypyrazine-2-yl)-2,4-dimethyl-1,2,4,4a-tetrahydro-2’H,6H-spiro[l,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5’-pyrimidine]- 15 2\4’,6’(1 ’H,3’H>trion; en (2R,4S,4aS)-8-(5-ethoxypyrazine-2-yl)-9,10-difluor-2,4-dimethyl-1 4,4a- tetrahydro-2 ’H,6H-spiro[ 1,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5 ’ -pyrimidine]-2’,4’,6’(1 ’H,3’H)-trion; of een enantiomeer of diastereomeer hiervan of een zout, sol vaat of hydraat 20 hiervan.

2. De verbinding volgens conclusie 1, waarin WW» een verbindingspunt aangeeft; R-7 is H, halogeen, al dan niet gesubstitueerd Ci-6-alkyl, al dan niet gesubstitueerd C3-Cg-cycloalkyl, al dan niet gesubstitueerd 10 heterocyclyl, een al dan niet gesubstitueerde ether, -CN, -NRgRg, - OR,o, -(CH2)m0P03(Rp)2, -(CH2)onOC(=0)(CH2)inCH3, -(CH2)m0C(=O)(CH2)mCO2R6,-(CH2)I„OC(=OXCH2)mNR«R9, -CCH2),„0C(=0)E, -(CH2)mC02(CH2)mCH3, -(CH2)1„C02(CH2)inC02R6, -(CH2)mC02(CH2)mNRsR9, -(CH2)mC02E, 15 -(CH2)mC(:=0)NReR9, -(CH2)mNReR9, -(CH2)mP03(R„)2, -(CH2),„OR,o, die eventueel gesubstitueerd is met -OR,,, -(CI^jmCCK^ORii, -(CH2)mNRnSOnR12, -(CH2)I„SOnR12, -(CH2)mSO„NReR9, al dan niet gesubstitueerd aryl of al dan niet gesubstitueerd heteroaryl; 20 elke n onafhankelijk 0,1 of 2 is; Rio H is, al dan niet gesubstitueerd Ci-e-alkyl, -PO3H2, C(=0)R,3, C(=0)0R]3 of C(=0)NR8R9 en Rn> R12 en R,3 onafhankelijk van elkaar H, al dan niet gesubstitueerd C1-6-alkyl, al dan niet gesubstitueerd aminoalkyl, al dan niet gesubstitueerd benzyl, al dan niet 25 gesubstitueerd fenyl, een aminozuurrest of een peptiderest.

3. De verbinding volgens een of meer der voorafgaande conclusies 1-2, waarin X H is of F, Y H is of F of zowel X en Y H of F zijn.

4. De verbinding volgens een of meer der voorafgaande conclusies 1-3, waarin R2 en R3 methyl zijn.

5 R2 en R3 onafhankelijk H of al dan niet gesubstitueerd C|-e-alkyl is.

5. De verbinding volgens een of meer der voorafgaande conclusies 1-4, waarin Ri is RT of

6. De verbinding volgens een of meer der voorafgaande conclusies 1-5, waarin R7 H of methyl is.

7. De verbinding volgens een of meer der voorafgaande conclusies 1-6, met de formule IB: .0 R4N—\ yNR* y Vo K

8. De verbinding volgens een of meer der voorafgaande conclusies 1 -7, waarin elke E of ether onafhankelijk de formule -[(CV2)pO(CV2)p]qCH3 heeft waarin elke p onafhankelijk 0, 1, 2, 3, 4, 5 of 6 is en elke q onafhankelijk 1, 2, 3, 4, 5 of 6 is en waarbij elke V onafhankelijk H of een andere -[(CV2)pO(CV2)p]qCH3 is.

9. De verbinding volgens conclusie 8, waarin elke E of ether onafhankelijk de formule -[(CV2)pCXCH2)p],CH3 heeft waarbij elke p onafhankelijk 0, 1,2, 3 of 4 is en elke q onafhankelijk 1,2,3 of 4 is.

10. De verbinding volgens conclusie 1 met een structuur van verbinding weergegeven in Tabel 1, een enantiomeer of diastereomeer hiervan of een zout, solvaat of hydraat hiervan.

10 R2 en R3 zijn onafhankelijk H of een al dan niet gesubstitueerd Ci-6-alkyl; R4 en R5 zijn onafhankelijk H, een al dan niet gesubstitueerd Cj^-alkyl, een al dan niet gesubstitueerde ether, een al dan niet gesubstitueerd -(CH2)maryl, al dan niet gesubstitueerd -0(CH2>maryl, -(CH2)mNReR9, -(CH2>20R6, -(CH2)mOP03(Rp)2, -(CHzV OC(=OXCH2)mCH3, (CHzjmOC^XCHzVCOzR* -15 (CH2)m0C(=0)(CH2)ra NRgRx», -(CH2)mOC(=0)E of vormen R« en R5 tezamen de atomen waarmee zij verbonden zijn een al dan niet gesubstitueerde hydrocyclische ring; elke m is onafhankelijk 0, 1,2 of 3; E is een al dan niet gesubstitueerde ether; 20 elke Rp is onafhankelijk H, C]^ alkyl, benzyl, gesubstitueerd benzyl, fenyl, gesubstitueerd fenyl of vormen (Rp>2 tezamen met de atomen waarmee zij verbonden zijn een al dan niet gesubstitueerde heterocyclische ring; elke R* is onafhankelijk H, al dan niet gesubstitueerd C14 alkyl, Ci^ acyl of benzyl;

11. De verbinding conclusie 1, waarbij voomoemde verbinding gekozen is uit de groep bestaande uit rel-(2S,4R,4aR)-9,l 0-difluor-2,4-dimethyl-8-pyrazine-2-yl-l ,2,4,4a-tetrahydro-2’H,6H-spiro[ 1,4-oxazinol [4,3 -a] chinoline-5,5-pyrimidine] -2\4*,6’(1 ’H,3’H)-trion; 10 (2R,4R,4aS)-9,10-difluor2,4-dimethy l“8-pyrazine-2-yl-1,2,4,4a-tetrahydro-

12. De verbinding volgens conclusie 1, waarbij voomoemde verbinding (2R,4S,4aS)- 9.10- difluor-2,4-dimethyl-8-(5-methylpyrazine-2yl)-l ,2,4,4a-tetrahydro-2’H,6H-spiro[l,4-oxazino[43-a]chinoline-5,5,-pyrimidine]-2’,4’,6’(l Ή,3Ή)-Ιηοη is of een 25 enantiomeer of diastereomeer hiervan of een zout, solvaat hydraat hiervan is.

13. De verbinding volgens conclusie 1, waarin voomoemde verbinding (2R,4S,4aS)- 9.10- difluor-2,4-dimethyl-8-(5-methylpyrazine-2-yl)-l,2,4,4a-tetrahydro-2’H,6H-spiro[l,4-oxazino[4,3-a[chinoline-5,5’-pyrimidine]-2’,4’,6’(rH,3’H)-trion is. 30

14. Een farmaceutische samenstelling die een verbinding volgens een of meer der voorafgaande conclusies 1-13 en een farmaceutisch aanvaardbare drager, verdunningsmiddel of excipient omvat

15. Een bacteriostatische en/of bactericide methode welke omvat: (a) het contacteren van een bacterie met een verbinding volgens een of meer der voorafgaande conclusies 1-13 of een samenstelling volgens 5 conclusie 14.

16. De werkwijze volgens conclusie 15, waarin (a) in vivo of in vitro plaatsvindt.

17. Een werkwijze voor de behandeling van een bacteriële infectie in een zoogdier, 10 welke omvat het toedienen van een werkzame hoeveelheid van een verbinding volgens een of meer der voorafgaande conclusies 1-13 of een samenstelling volgens conclusie 14 aan het zoogdier.

18. De werkwijze volgens conclusie 17, welke omvat het voorkomen van een bacteriële 15 infectie in een zoogdier door het toedienen van een werkzame hoeveelheid van de verbinding volgens een of meer der voorafgaande conclusies 1-10 dan wel de samenstelling volgens conclusie 14 aan het zoogdier.

19. De toepassing van een verbinding volgens een of meer door voorafgaande 20 conclusies 1-13 of een samenstelling volgens conclusie 14 bij de productie van een geneesmiddel voor de behandeling van een bacteriële infectie in een zoogdier.

20. De toepassing volgens conclusie 19, waarbij voomoemde verbinding (2R,4S,4aS)- 9.10- difluor-2,4-dimethyl-8-(5-methylpyrazine-2-yl)-1,2,4,4a-tetrahydro-2 ’H,6H- 25 spiro[l,4-oxazmo[4,3-a]chinoline-5,5,-pyrimidine]-2’,4’,6’(l ’H,3’H)-trion of een enantiomeer of diastereomeer hiervan of een zout, solvaat of hydraat hiervan is.

21. De toepassing volgens conclusie 19, waarbij voomoemde verbinding (2R,4S,4aS)- 9.10- difluor-2,4-dimethyl-8-(5-methylpyrazine-2-yl)-l ,2,4,4a-tetrahydro-2’H,6H- 30 spiro[l,4-oxazino[4,3-a]chinoline-5,5’-pyrimidine]-2’,4’,6’(l ’H,3’H)-trion is.

22. Een werkwijze voor de productie van een verbinding volgens een of meer der voorafgaande conclusies 1-13 met formule Ia, welke omvat (a) de omzetting van een verbinding met formule lila met een verbinding met formule IV bij een temperatuur die voldoende is om een verbinding met de formule Ia te produceren: 9» ‘hM*-** V? n XJL. x/o Ri^ykY Y i^O X K lila la

23. De werkwijze volgens conclusie 22, waarbij (a) in een waterig of in een organisch oplosmiddel plaatsvindt 10

24. De werkwijze volgens conclusie 22 of 23, waarbij de temperatuur van (a) ongeveer 60 tot ongeveer 180°C is.

25. De werkwijze volgens een of meer der voorafgaande conclusies 22-24, waarin (a) 15 gedurende ongeveer 30 minuten tot ongeveer 24 uur uitgevoerd wordt.

25 Rg en R9 zijn onafhankelijk H, al dan niet gesubstitueerd Ci_* alkyl of Rg en R9 vormen tezamen met het stikstofatoom waarmee zij verbonden zijn een al dan niet gesubstitueerde heterocyclische ring; en 2000373 X en Y zijn onafhankelijk H, halogeen, al dan niet gesubstitueerd C,-6 alkyl, -OR$ -CN, een al dan niet gesubstitueerde ether, een al dan niet gesubstitueerde heterocyclyl of een al dan niet gesubstitueerd amine.

26. De werkwijze volgens een of meer der voorafgaande conclusies 23-25, welke verder omvat: (b) omzetting van een verbinding met formule V met de verbinding met 20 formule Vla waarbij de verbinding met de formule lila gevormd wordt. Jfc —- jV'*' i Λ "’'Τ’ v Cl χ Ri"'NrS* «ia Vla »

27. De werkwijze volgens conclusie 26, waarbij (b) bij aanwezigheid van een niet-protisch organisch oplosmiddel en/of bij aanwezigheid van een base plaatsvindt. 5

28. De werkwijze volgens conclusie 27, waarbij de base een organische of anorganische base is.

29. De werkwijze volgens een of meer der voorafgaande conclusies 26-28, waarbij de 10 temperatuur van (b) ongeveer 20 tot ongeveer 100°C is.

30. De werkwijze volgens een of meer der voorafgaande conclusies 27-29, welke omvat: (cXi) de uitvoering van een halogeen metaaluitwisseling of 15 deprotoneringsreactie op een verbinding met formule VII; en (cXii) omzetting van het product van (cXi) met een carbonyldonor waarbij de verbinding met formule V verkregen wordt Λ — λ X x VI. v waarin Ha waterstof of halogeen is. 20

31. Werkwijze volgens conclusie 30, waarin (cXi) het contacteren van de verbinding met formule VII met een sterke base omvat.

32. Werkwijze volgens conclusie 31, waarbij de sterke base alkyllithium omvat. 5

33. Werkwijze volgens conclusie 30, waarbij (c)(i) het contacteren van de verbinding met formule VII met een Grignard-reagens in een niet-protisch organisch oplosmiddel omvat.

34. Werkwijze volgens een of meer der voorafgaande conclusies 30-33, waarbij de temperatuur van (c)(i) ongeveer -78 tot ongeveer 50°C is.

35. Werkwijze volgens een of meer der voorafgaande conclusies 3-34, waarbij de carbonyldonor een of meer dimethylformaide, N-formylmorfoline of para- 15 nitrofenylformiaat omvat.

36. Werkwijze volgens een of meer der voorafgaande conclusies 20-29, welke verder omvat: (c) het oxideren van een verbinding met formule VIII ter bereiding van de 20 verbinding met formule V: ,¾—- Jfc X X VIII V

37. Werkwijze ter bereiding van de verbinding met formule XVII welke omvat: 25 (a) het reageren van een verbinding met formule XVIII met een verbinding met formule Vla ter bereiding van de verbinding met formule XVII: r ^ x xvni ..1 JL 1¾0 xt*r2 XVI» Via waarin Ru een halogeen, boronzuur, een boronaatester of een al dan niet gesubstitueerd pyrazine is; en

38. Een verbinding volgens een of meer der voorafgaande conclusies 1-13 of een samenstelling volgens conclusie 14 die toepasbaar is als geneesmiddel. » ringkoppeling ringkoppeling 5 condenseren en cycliseren condenseren en cycliseren 10 condenseren en cycliseren ringkoppeling 15 ringkoppeling 20 ringkoppeling oxidatie condensatie 25 en cyclisatie 2000373