MXPA06012638A - Medicamento que comprende un extracto de peptido de aguacate el cual se propone para el tratamiento y prevencion de afecciones que se enlazan a una deficiencia del sistema inmune. - Google Patents
Medicamento que comprende un extracto de peptido de aguacate el cual se propone para el tratamiento y prevencion de afecciones que se enlazan a una deficiencia del sistema inmune.Info
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Abstract
La invencion se refiere a una medicamentos que comprende un extracto peptidico de aguacate y que tambien comprende una composicion que contiene D-manoheptulosa y/o perseitol, tal como un extracto soluble en agua de azucares de aguacate, y/o un extracto peptidico de lupina; el medicamento de la invencion se destina para tratamiento y/o prevencion de enfermedades que se relacionan con una alteracion en immunidad innata y/o adquirida, a traves de un incremento en la produccion de peptidos antimicrobianos, preferiblemente hBD-2 sin inducir reacciones inflamatorias, irritaciones o intolerancias.
Description
MEDICAMENTO QUE COMPRENDE UN EXTRACTO DE PEPTIDO DE AGUACATE. EL CUAL SE PROPONE PARA EL TRATAMIENTO Y
PREVENCIÓN DE AFECCIONES QUE SE ENLAZAN A UNA DEFICIENCIA
DEL SISTEMA INMUNE
MEMORIA DESCRIPTIVA
La presente invención se refiere a un fármaco que comprende un ' extracto de péptido de aguacate, ventajosamente para el tratamiento y/o prevención de enfermedades las cuales se enlazan a una inmunodeficiencia, y más particularmente a un deterioro de inmunidad natural. Todas las especies animales diariamente confrontan un número de microorganismos, tales como bacterias, hongos, parásitos o virus, los cuales pueden afectar su salud o aún su supervivencia. Dos sistemas de defensa se oponen a estros microorganismos: uno el cual es llamado inmunidad natural, y es común para todos los animales, incluyendo el hombre, y otro sistema inmune, llamada adaptativo o específico, el cual es adquirido a través de células y mediadores de inmunidad después del contacto con el atacante potencial. Una diferencia entre respuestas inmunes naturales o adaptativas se puede encontrar en los mecanismos de identificación para los microorganismos. Con inmunidad natural, la especificidad de receptores es genéticamente determinada desde el nacimiento y es invariable. Estos receptores se expresan en células tales como algunas células de epitelio y endotelio, células dendríticas, monocitos y macrófagos. Todas las estructuras las cuales se identifican por receptores de inmunidad natural son comunes a muchos microorganismos. Contrario a la respuesta inmune adaptativa, los mecanismos de respuesta inmune natural (fagocitosis, péptidos antimicrobianos, etc.) son activados tan tempranamente como el comienzo de una infección, y controlan casi inmediatamente la proliferación de patógenos los cuales invaden el hospedero. La respuesta inmune adaptativa luego prevalece. Los péptidos antimicrobianos se han encontrado tanto en reinos vegetales como animales, y sobre 500 diferentes péptidos antimicrobianos se han descubierto, desde insectos al hombre. Los péptidos antimicrobianos son moléculas pequeñas (10-50 aminoácidos), y son capaces de destruir una gran variedad de microorganismos (bacterias Gram+ o Gram-, hongos, virus, células transformadas), permeabilizando sus membranas celulares. Además algunos de estos péptidos antimicrobianos son capaces de reclutar a través de las propiedades quimio-atrayentes las células las cuales participan en la inmunidad adaptativa tales como células dendríticas o linfoticos T. Muchos péptidos antimicrobianos se han detectado en la vernix caseosa y en el fluido amniótico, así como en pieles de niños recién nacidos, lo cual sugiere un papel clave en la defensa antimicrobiana en el tiempo de suministro, pero también en los comienzos de la vida en un tiempo cuando la inmunidad adquirida es aún inmadura.
La mayoría de los microorganismos sintetizan diversos tipos de péptidos antimicrobianos en sus varios epitelios, para definir un amplio espectro de actividad. En mamíferos dos clases principales de péptidos antimicrobianos, cuya producción se induce durante el contacto con un microorganismo se han descrito: catelicidinas y defensinas. La catelicidina humana (LL-37) se ha aislado por primera vez de células de médula ósea. La LL-37 es notablemente expresada en la piel humana, en la región de las uñas, así como en aquella de la membrana sinovial inflamada y saludable, especialmente con pacientes con artrosis. La LL-37 tiene un amplio espectro de actividad y parece actuar sinergísticamente con otros péptidos antimicrobianos, notablemente defensinas. La LL-37 también tiene propiedades quimio-atrayentes, las cuales hacen capaz de reclutar células inmunes adaptativas. Las defensinas son por si mismas divididas en dos familias, o a y ß, basado en su estructura secundaria. Las A-defensinas (6 con conocidas a la fecha) son principalmente situadas en los granulos de almacenamiento de células especializadas, tales como neutrófilos, o células de Paneth del intestino, mientras que las ß-defensinas son un aspecto característico de los tejidos epiteliales. Aparte de su papel en la inmunidad natural, las defensinas también son conocidas por sus propiedades mítogénicas, lo cual sugiere que pueden jugar una parte en los procedimientos de salud. En el hombre se han identificado a la fecha 4 ß-defensinas (sobre 20 genes que codifican los péptidos antimicrobianos parecen existir en nuestro genoma). La ß-defensina1 humana (hBD-1 ) generalmente se produce de una manera constitutiva, y se expresa abundantemente en el riñon, y, a un grado menor, en el páncreas, glándulas salivares, epitelios de vías respiratorias, en sistema urogenital de la mujer, en la membrana sinovial saludable, así como en la placenta. La hBD-1 también se expresa en la piel. Otras formas de ß-defensinas, hBD-2, 3 y 4, son capaces de ser inducidas. La hBD-3 se induce en las membranas sinoviales inflamadas, tal como por ejemplo en enfermedades artróticas. La expresión de hBD-2 a la fecha se ha documentado en la piel, el tracto urogenital, las glándulas sudoríparas, y la unidad pilosebácea. En la piel otros péptidos o proteínas, tales como adenomedulina , cistatina, el inhibidor específico de elastasa/SKALP/elafina, podrían parecer poseer actividades antimicrobianas. Más recientemente, la dermicidina (con un amplio aspectro de actividad) se ha caracterizado como un péptido antimicrobiano el cual es específico a la piel, el cual podría parecer ser producido en las glándulas sudoríparas de ecrina, y cuya secreción, conjuntamente con sudor, podría parecer elaborar una parte importante del sistema de defensa natural contra infecciones locales y sistémicas. La hBD-2 se ha caracterizado por primera vez en escamas de psoriasis. La expresión de hBD-2, así como de LL-37, se incrementa en lesiones por psoriasis, lo cual podría explicar la resistencia mayor a infección de pacientes con esta patología. A la inversa en dermatitis atópica (lesiones crónicas y lesiones por brote), la expresión de LL-37 y hBD-2 disminuye bajo la influencia de interleucina-4 (IL-4) e interleucina-13 (IL-13), los cuales son mediadores de atopia. Esta insuficiencia podrá explicar la sensibilidad incrementada a infección de pacientes con dermatitis atópica. En el acné, la expresión de ß-defensinas (hBD-1 y 2) se incrementa como una reacción a la proliferación de P acnés. Además, se soporta que los pacientes con acné podrían sufrir de un desequilibrio inicial de péptidos antimicrobianos, lo cual podría ser responsable de proliferación bacteriana. A su vez estas bacterias podrían estimular las defensas inmunes naturales. Por consiguiente se cree que la inflamación es un factor primario en la inducción de péptidos antimicrobianos. Por consiguiente, también se ha mostrado que la interleucina-1 , TNF-a (Factor de Necrosis de Tumor alfa) e irradiación ultravioleta podrían estimular la producción de hBD-2. La expresión de hBD-2 también es enlazada a la etapa de diferenciación de queratinocitos. Por consiguiente, la estimulación de la producción de péptidos antimicrobianos, notablemente dentro de la familia de defensina, y más particularmente de hBD-2, podría hace posible mejorar y/o restaurar la inmunidad natural, especialmente en el ojo y los epitelios (epidermis, mucosas vaginal, intestinal, nasa y auricular, y vías respiratorias). La cavidad bucal está constantemente abierta a una gran variedad de microorganismos (bacterias, virus, hongos). Entre otros hechos, está bien establecido que las bacterias tales como Actinobacillus actinomicetemicomitans, Porfiromonas gingivalis, son factores clave que participan en el desarrollo de enfermedades periodontales (gingivitis y parodontitis). El epitelio gingival es el primer bastión contra los diversos patógenos los cuales se pueden encontrar en la región de la boca. Como tal los queratinocitos gingivales producen un amplio panel de péptidos antimicrobianos, hBD-1 , -2, -3, LL-37. Estos péptidos también se producen en la mucosa bucal, así como por glándulas salivares. Más particularmente, la estimulación de péptidos antimicrobianos podría hacer posible mejorar y/o restaurar la inmunidad natural en la piel saludable o enferma de jóvenes y niños recién nacidos, cuya inmunidad generalmente es deficiente, y en la piel de adultos o personas de edad, si están con buena salud o no (imunodepresivos). Esta estimulación podría por consiguiente hacer posible complementar ventajosamente el sistema de defensa pasivo de la piel como se elabora por la capa córnea (comeocitos + cemento intercelular), y preparar la respuesta inmune adaptativa en niños recién nacidos, jóvenes, adultos y personas de edad, si están con buena saluda o no. De la misma manera, esta estimulación podría hacer posible acelerar la curación. En una manera sorprendente los inventores han descubierto que una composición que comprende un extracto de péptido de aguacate hace posible incrementar la producción de péptidos antimicrobianos, ventajosamente de hBD-2. Por consiguiente, el objeto de la invención es un fármaco que comprende un extracto de péptido de aguacate, el cual incluye 2-10% en peso de nitrógeno alfa-aminado, con relación al peso de materia seca del extracto de péptido, y un excipiente apropiado. En esta invención la frase 'nitrógeno alfa-aminado' significa el contenido de nitrógeno de péptidos en la forma de tres grupos alfa-aminados.
Una medición del contenido de nitrógeno alfa-aminado de péptidos permite evaluar el nivel de hidrólisis de las proteínas así como el peso molecular promedio de los péptidos. El extracto de péptido de aguacate se puede obtener directamente de cualquier parte del aguacate o árbol de aguacate, tal como el fruto, la cascara, el hueso, la hoja o las raíces del árbol. También se puede obtener un extracto de péptido de aguacate de sub-productos de la industria de procesamiento de aguacate, de los cuales se pueden citar, entre otros: la pulpa de aguacate fresca, la pulpa deshidratada o congelada rápida, tortas de aguacate de procedimientos de extracción de aceite (extracción mecánica y/o por solvente de la fruta previamente deshidratada), materia sólida des-aceitada de procedimientos de extracción de aceite húmedos (procedimiento de centrifugación así llamado), materia sólida des-aceitada de procedimientos de extracción de aceite de aguacate enzimático, aguacate machacado crudo (guacamole), residuos sólidos de plantas que manufacturan estos productos machacados. El extracto se obtiene ventajosamente del fruto de árbol de aguacate fresco. Los frutos se pueden elegir entre las variedades Hass, Fuerte, Ellinger, Bacon, Nabal, Anaheim, Lula, Reed, Zutano, Queen, Crióla Selva, Mexicana Canta, Región Dschang, Hall, Booth, Peterson y Collinson Red, más ventajosamente las variedades Hass, Fuerte y Red.
Preferiblemente, las variedades Hass, Fuerte, Ettinger y Bacon serán retenidas, y más preferiblemente las variedades Hass y Fuerte. El fruto del árbol de aguacate principalmente está integrado de agua, pulpa, aceite y hueso. Las proporciones de estos diversos constituyentes son extremadamente variables, como es el caso con todos los productos naturales. Sin embargo, generalmente se puede asumir la siguiente composición promedio, como se expresa en el porcentaje del fruto fresco, y mostrado en el siguiente cuadro 1 :
CUADR0 1
Con relación a la pulpa, las proteínas del aguacate representan
1.5-2.5% (J. P. Gaillard, l'Avocatier, Edition G.P. Maisonneuve et Larose, 1987, páginas 266-67). La distribución de aminoácidos, como se expresa en el porcentaje en peso con relación al peso total de aminoácidos, se muestra en el siguiente cuadro 2:
CUADRO 2
Los aminoácidos principales son ácido glutámico, ácido aspártico y leucina. Cuando se compara con plantas oleoproteáceas tales como soya, girasol o colza, el aguacate es de contenido de proteína distintamente inferior. Además, el fruto tiene un contenido de fibra comparativamente alto, estas proteínas se hacen altamente inaccesibles a través de trayectorias bioquímicas o químicas convencionales. Lo que es más, estas macromoléculas naturales son apenas hidrosolubles, uno tiende a preparar fracciones hidrolizadas de estas proteínas (péptidos), las cuales son altamente solubles en agua y más fácilmente biodisponibles. Por consiguiente, su potencia alergénica también se puede eliminar. Por lo tanto, la invención también se relaciona con la preparación de un extracto de péptido de aguacate vía una trayectoria de síntesis gentil la cual no desnaturaliza las proteínas hidrolizadas. Más particularmente el extracto de péptido de aguacate se puede obtener por un procedimiento que comprende las siguientes etapas: - una torta de aguacate se obtiene, ventajosamente del fruto de aguacate, a través de secado y extracción del aceite (lípidos); después de lo cual - la torta se muele en el frío (criomolienda) y se deslipida totalmente, luego se deja asentar, se centrifuga y colecta; después de lo cual - una primera hidrólisis se realiza en la presencia de glucanasas, esto es seguido por un procedimiento de centrifugación y la eliminación de la fracción soluble; - una segunda hidrólisis se realiza en la presencia de una o más proteasas, esto es seguido por un procedimiento de centrifugación y la eliminación del residuo; después de lo cual - la fase de péptido se concentra por nanofiltración; - una decoloración se realiza en la presencia de carbón activado, por ejemplo, esto es seguido por una simple filtración (10 µm), luego por una ultrafiltración (límite de corte 10 kD); y finalmente - si es necesaria, una microfiltración por esterilización final (0.2 µm), con conservador agregado y una operación de envasado se realizan. De acuerdo con una variante ventajosa de la invención, la primera etapa del procedimiento consiste de secado, luego des-aceitado del fruto. Por consiguiente, después de que el fruto se ha cortado en rodajas delgadas se puede secar por alguna del conjunto de técnicas conocidas por especialistas de la técnica, entre las cuales se pueden citar secado con aire caliente, secado por congelación o secado osmótico. La temperatura durante esta etapa de secado generalmente se mantendrá ventajosamente por debajo o a 80°C, cualquiera que sea la técnica que se utilizó. Dentro de este procedimiento, por razones de fácil implementación y costo, es preferido el secado en secadores ventilados, en capa delgada y bajo un flujo de aire caliente a una temperatura entre 70-75°C. Esta operación puede durar entre 5 y 72 horas. Los lípidos en el fruto seco son más tarde extraídos ya sea mecánicamente en una prensa de tornillo sin fin, o químicamente con un solvente tal como hexano en un extractor tipo Soxhlet o en un extractor de banda continua tipo De Smet®, notablemente de acuerdo con el procedimiento como se describe en la solicitud Francesa FR 2 843 027, o por un procedimiento usando CO2 supercrítico. Entre los beneficios principales de este procedimiento el subproducto de aceite es una sustancia la cual naturalmente se puede directamente reciclar. Por esta razón, es preferida la extracción de lípido mecánica. El fruto seco y des-aceitado, también llamado una torta, luego se puede someter a las siguientes etapas: - criomolienda, - deslipidación total, notablemente con un solvente grado alimenticio no tóxico tal como etanol y/o acetona, - decantación y lavado de la torta con agua, - centrifugación y colección de la torta, - una primera hidrólisis en la presencia de una o más diversas glucanasas, - centrifugación y descartación de la fracción soluble, - una segunda hidrólisis en la presencia de una o más diversas proteasas, - centrifugación y descartación del residuo, - concentración a través de nanofiltración, - decoloración en la presencia de carbón activado, - una simple filtración (10 µm) seguida por una ultrafiltración (límite de corte 10 kD), - adición de un conservador, microfiltración por esterilización final (0.2 µm) y envasado. El extracto acuoso final puede contener 1-60% en peso de materia seca, ó 3-20% de materia seca, preferiblemente 5-6% de materia seca. Con relación al peso de materia seca, el contenido de masa del nitrógeno alfa-aminado puede estar entre 2-10%, preferiblemente entre 5-7%. El valor de pH de una solución acuosa de 1.2% en peso de extracto seco generalmente estará entre 3-6, más ventajosamente entre 4-5. Los datos analíticos promedio para una solución acuosa de 1.2% en peso de extracto seco, como se obtiene por el procedimiento descrito anteriormente, se muestran en el siguiente cuadro 3:
CUADRO 3
1N x 6.25 corresponde a una dosificación de nitrógeno (N) total de una muestra, multiplicada por un coeficiente el cual es específico para la proteína ensayada. Cuando el coeficiente para las proteínas ensayadas no se conoce con precisión, un coeficiente de 6.25 es convencionalmente usado. El siguiente cuadro 4 muestra la composición de aminoácido promedio del extracto de péptido como se obtiene por el procedimiento de la invención, en el cual los valores se expresan en % en peso con relación al peso total de aminoácidos ensayados. Los valores para ácido aspártico y ácido glutámico también incluyen contenidos de asparagina y glutamina, respectivamente.
CUADRO 4
No se ensayó el triptofan. El extracto obtenido se puede secar por congelación para obtener un polvo sólido (extracto seco), pero es totalmente hidrosoluble con relación a las proteínas de aguacate originales. De acuerdo con una variante ventajosa de la invención, al menos 50% de los péptidos de extracto se integran de secuencia de 10-30 aminoácidos. El tamaño de estos péptidos por lo tanto es mucho menor comparado con aquel de las proteínas del aguacate. Por lo tanto estos péptidos por consiguiente poseen una biodisponibilidad mucho mejor, notablemente en la piel. El fármaco de la invención es particularmente apropiado para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades las cuales se enlazan a un cambio de inmunidad natural y/o adquirida, a través de un incremento en la producción de péptidos antimicrobianos, que pertenecen a las familias de catelicidina y/o beta-defensina, ventajosamente hBD-2. En el sentido de esta invención, un 'cambio' puede significar un incremento o una disminución. El fármaco de la invención también es particularmente apropiado para el tratamiento y/o prevención de enfermedades cuando se enlazan a un cambio de inmunidad natural y/o adquirida a través de la estimulación de péptidos antimicrobianos similares a un inhibidor de elastasa específico, particularmente elafina (SKALP). El fármaco de la invención hace posible estimular y/o complementar ventajosamente la inmunidad natural y/o adquirida. Dentro del alcance de la invención, las enfermedades generalmente se pueden enlazar a la presencia de microorganismos, notablemente bacterias Gram+ y/o Gram-, hongos o virus. Más particularmente las enfermedades pueden ser infecciones de los órganos de la vista y audición, epitelios no queratinizados (mucosas vaginal, intestinal, gingival, nasal, pulmonar, tracto respiratorio y uretral) y ephitemia queratinizada tal como la piel. Las enfermedades también pueden ser infecciones de los tegumentos, piel, faneras (cabello, uñas, glándulas sudoríparas, glándulas sebáceas). Por consiguiente las enfermedades pueden ser patologías tales como foliculitis, furúnculos, abscesos, impétigo o panadizo.
Las enfermedades pueden ser patologías las cuales se enlazan a un cambio en el equilibrio de Th1/Th2, tal como dermatitis atópica. Las enfermedades pueden ser patologías las cuales se enlazan a cambios en la síntesis de citocinas, tales como IL-4 y/o IL-13, notablemente dentro del cuadro de dermatitis atópica. Las enfermedades también pueden ser dermatosis inflamatorias, tales como dermatitis atópica, eczema, dermatitis por contacto y/o atópica, psoriasis, acné y dermatitis por prurito. Las enfermedades también pueden ser quemaduras, particularmente quemaduras de primer o segundo grado. Las enfermedades también pueden ser patologías las cuales se enlazan a una deficiencia en la barrera de la piel. Por consiguiente, el fármaco de la invención se puede usar para el tratamiento de pieles hiper-reactivas (sensibles, irritadas, alérgicas), pieles atópicas, resecas o envejecidas. Las enfermedades también pueden ser patologías las cuales se enlazan a pieles hechas vulnerables por agresión del ambiente, notablemente debido al frío, contaminación, tensión, tabaco o exposición al sol. Dentro del alcance de esta invención, el fármaco también es apropiado para la protección de pieles inmaduras, saludables o patológicas en niños recién nacidos y jóvenes. En efecto permite un refuerzo de las defensas naturales de una epidermis del niño cuando la inmunidad es generalmente deficiente. Dentro del alcance de esta invención el fármaco también es apropiado para la protección de pieles saludables o patológicas en adultos o de edad avanzada, notablemente con personas inmunodepresivas. El fármaco de la invención también es apropiado para mejorar el procedimiento de curación, si es normal o patológico, tales como úlceras o úlceras por decúbito. Dentro del alcance de esta invención el fármaco también es dirigido para el tratamiento y/o prevención de enfermedades periodontales, patologías articulares inflamatorias tales como artrosis, infecciones de las mucosas, notablemente las mucosas vaginal, intestinal, respiratoria, nasal o auricular, o las infecciones de los órganos de la vista. De acuerdo con una variante ventajosa de la invención el fármaco comprende 0.1-20% en peso seco de extracto de péptido de aguacate, con relación al peso total del fármaco, más ventajosamente 0.1-15% en peso seco de extracto de péptido de aguacate, más ventajosamente aún 0.5-10% en peso seco de extracto de péptido de aguacate, más ventajosamente aún 0.7-8% en peso seco de extracto de péptido de aguacate, y más ventajosamente aún 1-5% en peso seco de extracto de péptido de aguacate. De acuerdo con una variante ventajosa de la invención, el fármaco además comprende D-manoheptulosa y/o perseitol (azúcares C7) o uno de sus derivados químicos, ventajosamente en una cantidad de 0.001- 30%o en peso seco, con relación al peso total del fármaco, más ventajosamente 0.01-20%» en peso seco, más ventajosamente aún 0.1-10% en peso seco, más ventajosamente aún 0.5-5% en peso seco. Un efecto sinergístico luego se observa ventajosamente. La fuente de D-manoheptulosa y/o perseitol es ventajosamente ya sea un extracto de azúcar hidrosoluble de aguacate u otras plantas. De otra forma la D-manoheptulosa y perseitol son comúnmente vendidos (origen sintético). De acuerdo con una variante ventajosa de la invención la fuente de D-manoheptulosa y/o perseitol es un extracto hidrosoluble de azúcar de aguacate que comprende al menos 50% en peso de azúcares C7, con relación al peso total de la materia seca de extracto. El extracto hidrosoluble de azúcares de aguacate se puede obtener por un procedimiento el cual comprende la siguiente secuencia de etapas: - obtención de una torta de aguacate, ventajosamente de fruta de aguacate, secado del aguacate y extracción de los lípidos (aceite); seguido por - criomolienda y deslipidación total de la torta, luego asentamiento y centrifugación para colectar una fracción soluble que tiene un alto contenido de azúcares C7 (descartado de la torta); - desmineralización en una resina iónica de la fracción soluble como se obtiene en la etapa precedente; seguido por - una ultrafiltración a 10,000 Daltons; - se es necesario, concentración por vaporización en vacío, adición de un conservador, esterilización por mcirofiltración (0.2 µm) y envasado. De acuerdo con una variante preferida de la invención, los procedimientos por los cuales la torta de aguacate se obtiene y los lípidos se extraen son ventajosamente realizados de una manera idéntica para el extracto de péptido de aguacate y los azúcares de aguacate. La fruta seca y desaceitada, también llamada torta, luego se puede someter a las siguientes etapas: - criomolienda, - deslipidación total, ventajosamente con etanol y/o acetona, - asentamiento y lavado de la torta con agua, - centrifugación y colección de la fracción soluble (descartado de la torta), - desmineralización pasando sobre resinas de intercambio iónico, - ultrafiltración con un límite de recorte de 10 kD, - concentración en vacío, adición de un conservador y envasado. El extracto acuoso final generalmente puede contener 0.1-10% en peso de materia seca, ventajosamente 1-7% en peso de materia seca, más ventajosamente 3-5% de materia seca. El azúcar C7, es decir contenido de D-manoheptulosa y perseitol en la materia seca ventajosamente está arriba de 50% en peso, más ventajosamente entre 65-90% en peso, con relación al peso de materia seca total. La composición de azúcar relativa del extracto hidrosoluble de aguacate, como se expresa en peso con relación al peso total de la materia seca de extracto, ventajosamente cumple los siguientes criterios (composición relativa como se determina por CLAR): - D-manoheptulosa 5-80% - Perseitol 5-80% - Sucrosa < 10% - Glucosa < 10% - Fructosa < 10% El extracto hidrosoluble de azúcar de aguacate ventajosamente comprende, con relación al peso de materia seca total, 1-99%) en peso de manoheptulosa, más ventajosamente 5-80% en peso de manoheptulosa, más ventajosamente aún 10-80%) en peso de manoheptulosa. El extracto hidrosoluble de azúcar de aguacate ventajosamente comprende, con relación al peso de materia seca total, 20-80% en peso de perseitol, más ventajosamente 25-70% en peso de perseitol. Preferiblemente, la composición de azúcar relativa del extracto hidrosoluble, como se expresa en peso con relación al peso de materia seca de extracto total, cumple los siguientes criterios (composición relativa como se determina por CLAR): - D-manoheptuiosa 25-60% - Perseitol 25-60% - Sucrosa < 10% - Glucosa < 10% - Fructosa < 10% Si se necesita el extracto obtenido se puede secar por congelación para obtener un polvo sólido (extracto seco) el cual es totalmente hidrosoluble. De acuerdo con una variante ventajosa de la invención, el fármaco de la invención además comprende un extracto de péptido lupina, ventajosamente en una cantidad de masa, con relación al peso de fármaco total, entre 0.001-30% en peso seco, más ventajosamente aún entre 0.01-10%) en peso seco. El extracto de péptido lupina, como se adiciona en la composición de la invención, comprende al menos 70%) en peso de péptidos, ventajosamente al menos 80%o en peso, con relación al peso de materia seca del extracto de péptido. Un efecto sinergístico luego se observa ventajosamente. Particularmente, el extracto de péptido lupina se puede obtener por un procedimiento el cual comprende las siguientes etapas: - preparación de una torta de lupina molida o una torta de harina de lupina micronizada; - seguido por la deslipidación a través de extracción con solvente; - extracción de proteína soluble y fracciones osídicas, o precipitación de las proteínas en el punto isoeléctrico; - si se necesita, la separación de la fracción de proteína; - hidrólisis de enzima de la fracción de proteína, y colección, posiblemente después de la filtración, del extracto de péptido. Un procedimiento para preparar un extracto de péptido se describe en la publicación de patente Francesa FR 2 792 202, presentada por Expanscience Laboratories. El fármaco de la invención puede además comprender al menos un compuesto como se elige dentro del grupo integrado por emolientes, sustancias activas humectantes, activadores de síntesis de queratina, querato-reguladores, queratolíticos, agentes de reestructuración par al barrera de la piel (activadores de síntesis de lípido de piel, PPARs o agonistas de Receptores Activados por Proliferador Peroxisoma), activadores en la diferenciación de queratinocitos (retinoides, Calcidone®, calcio), antibióticos, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos, agentes antivirales, seborreguladores, tales como inhibidores de 5-alfa reductasa, notablemente la sustancia activa 5-alfa Avocuta®, como se vende por Expanscience Laboratories, inmunomoduladores, tales como tacrolimo, pimecrolimo, oxazolinas, conservadores, agentes anti-prurito, agentes calmantes, filtros y filtros solares, agentes anti-oxidantes, factores de crecimiento, agentes de curación o moléculas eutróficas, agentes y fármacos anti-inflamatorios, y compuestos que contienen insaponificables de aceite vegetal. Los activadores de síntesis de queratina los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención en asociación con el extracto de péptido de aguacate, son ventajosamente retinoides, péptidos de lupina (como se vende por la Silab Company), proteínas clave de la capa córnea o granulosa (queratinas). Los antibióticos los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación con el extracto de péptido de aguacate, ventajosamente son ácido fucídico, penicilina, tetraciclinas, pristamicina, eritromicina, clindamicina, mupirocina, minociclina y doxiciclina. Los agentes antivirales los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación con el extracto de péptido de aguacate, son ventajosamente aciclovir y valaciclovir. Los agentes anti-prurito los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación con el extracto de péptido de aguacate, son ventajosamente glicina, azúcares de lupina y/o péptidos, cicloceramida®. Los agentes calmantes los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación con el extracto de péptido de aguacate, son ventajosamente alfa bisabolol, derivados de regaliz. Los querato-reguladores los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación con el extracto de péptido de aguacate, son ventajosamente alfa hidroxi ácidos y sus derivados. Una sustancia queratolítica la cual se puede usar dentro del alcance de esta invención, en asociación con el extracto de péptido de aguacate, es notablemente ácido salicílico y sus derivados. Los agentes anti-oxidantes los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación con el extracto de péptido de aguacate, son ventajosamente vitaminas (C, E), microelementos (cobre, zinc, selenio). Los factores de crecimiento los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación con el extracto de péptido de aguacate, son ventajosamente becaplermina y TGF beta (Factor de Crecimiento de Transformación beta). Los agentes de curación los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación con el extracto de péptido de aguacate, son ventajosamente vitamina A, pantenol, Avocadofurano®, óxido de zinc, magnesio, silicio, ácido asiático o madecásico. Los fármacos los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación con el extracto de péptido de aguacate, son ventajosamente fármacos los cuales son apropiadamente suministrados tópicamente u oralmente, para la prevención y/o tratamiento de atopia (corticoides, emolientes), acné (antibióticos, peróxido de benzoilo, retinoides, ácido azelaico, vitamina PP, zinc, ciclinas), de eczema (inmunomoduladores, emolientes, aceite de salmón, aceite de borraja, prebióticos) o de psoriaris (corticoides, calcipotriol, calcitriol, tazaroteno, aceite de cada, acitretina, terapia de PUVA). Los agentes anti-inflamatorios los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación con el extracto de péptido de aguacate, son ventajosamente agentes anti-inflamatorios esteroides (AIS), tales como corticoides, o agentes no estroides (AINS). Los agentes de reestructuración de la barrera de la piel, los cuales hacen posible estimular la síntesis de los lípidos clave en la epidermis, y los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación - ventajosamente con un efecto sinergístico - con el extracto de péptido de aguacate, son ventajosamente concentrados de girasol, más ventajosamente concentrados de girasol linoleicos, tales como la sustancia activa como se vende por Expanscience Laboratories, Soline® (véase Solicitud Internacional WO 01/21150), insaponificables de aceite vegetal, tal como Avocadofurano® (véase Solicitud Internacional WO 01/21150); agonistas de PPARs (rosiglitazona, pioglitazona). Los agentes de reestructuración están ventajosamente presente en proporciones entre 0.001 y 30% en peso, con relación al peso total del fármaco. Los compuestos antifúngicos los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación con el extracto de péptido de aguacate, son ventajosamente econazol y quetoconazol. Los conservadores antisépticos los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación con el extracto de péptido de aguacate, son ventajosamente son por ejemplo triclosan, clorhexidina, amoníaco cuaternario. Los inmunomoduladores los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación con el extracto de péptido de aguacate, son ventajosamente tacrolimo, pimecrolimo y oxazolinas. Las oxazolinas las cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación - ventajosamente con un efecto sinergístico -con el extracto de péptido de aguacate, son ventajosamente oxazolinas las cuales se eligen entre el grupo integrado por 2-undecil-4-hidroximetil-4-metil- 1 ,3-oxazolina, 2-undecil-4,4-dimetil-1 ,3-oxazolina, (E)-4,4-dimetil-2-heptadec-8-enil-1 ,3-oxazolina, 4-hidroximetil-4-metil-2-heptadecil-1 ,3-oxazolina, (E)-4-hidroximetil-4-metil-2-heptadec-8-enil-1 ,3-oxazolina, 2-undecil-4-et¡I-4-hidroximetil-1 ,3-oxazolina. De una manera aún más ventajosa, la oxazolina es 2-undecil-4,4-dimetil-1 ,3-oxazolina, llamada OX-100 o Cicloceramida®. Los compuestos los cuales contienen insaponificables de aceite vegetal, y los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación, ventajosamente con un efecto sinergístico, con el extracto de péptido de aguacate, son preferiblemente elegidos dentro del grupo integrado por lípidos de furano de aguacate, insaponificables de aguacate y soya, concentrados de aceite de lupina, concentrados de aceite de girasol, y sus mezclas. Los lípidos de furano de aguacate los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación, ventajosamente con un efecto sinergístico, con el extracto de péptido de aguacate, son preferiblemente 2-alquil furanos naturales, notablemente la sustancia activa Avocadofurano® como se vende por Expanscience Laboratories, la cual se puede obtener por el procedimiento como se describe en la Solicitud Internacional WO 01/21605. Los insaponificables de aguacate y soya los cuales se pueden usar dentro de la estructura de esta invención, en asociación, ventajosamente con un efecto sinergístico, con el extracto de péptido de aguacate, son preferiblemente una mezcla de insaponifibales de aguacate de furano e insaponificables de soya, en una relación respectiva de aproximadamente 1/3-273. Los insaponificables de aguacate y soya son más ventajosamente el producto Piasclédine®, como se vende por Expanscience Laboratories. Los concentrados de aceite de lupina los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación, ventajosamente con un efecto sinergístico, con el extracto de péptido de aguacate, son ventajosamente concentrados los cuales se obtienen a través de destilación molecular de aceite de lupina, ventajosamente aceite de lupina blanco dulce, tal como aquellos descritos en la Solicitud Internacional WO 98/47479. Contienen, ventajosamente, algunos 60%) en peso de insaponificables. Los concentrados de aceite de girasol los cuales se pueden usar dentro del alcance de esta invención, en asociación, ventajosamente con un efecto sinergístico, con el extracto de péptido de aguacate, son ventajosamente concentrados de girasol linoleico, tal como la sustancia activa vendida por Expanscience Laboratories, Soline® (véase Solicitud Internacional WO 01/21150). El fármaco de la invención se dirige al tratamiento y/o prevención de enfermedades las cuales pueden afectar el hombre y/o animales, notablemente mamíferos. El fármaco de la invención se puede formular en la forma de varias preparaciones las cuales se adaptan para administración tópica, para administración oral, rectal, vaginal, nasal, auricular o bronquial, para administración parenteral. Preferiblemente, las diversas preparaciones se adaptan para administración tópica e incluyen cremas, ungüentos, lociones, aceites, parches, pulverizadores, o cualquier otro producto para aplicación externa. Las rutas de administración de los compuestos de la invención y composiciones, dosificación óptima y formas de fármacos se pueden determinar siguiendo los criterios los cuales generalmente se toman en cuenta en el establecimiento de un tratamiento farmacéutico, particularmente en los campos de dermatología o medicina veterinaria, como se adapta a un paciente o un animal, tal como, por ejemplo, la edad o peso corporal del paciente o animal, la seriedad de su condición, tolerancia hacia el tratamiento particular, los efectos secundarios observados, y el tipo de piel. De acuerdo con el tipo de administración la cual se busca, el fármaco de la invención y/o sustancias activas pueden además comprender al menos un excipiente farmacéuticamente adecuado, notablemente dermatológicamente adecuado. Uno preferiblemente puede usar un excipiente el cual se adapta para la administración externa tópica. El fármaco de la invención puede además comprender al menos un aditivo farmacéuticamente conocido, como se conoce farmacéuticamente por especialistas técnicos, elegido entre agentes espesantes, conservadores, perfumes, agentes colorantes, filtros químicos o minerales, agentes de humectación, aguas térmicas, etc. Esta invención también se refiere a una composición cosmética que comprende un extracto de péptido de aguacate y un excipiente apropiado cosméticamente adecuado. El extracto de péptido de aguacate ventajosamente comprende 2-10% en peso de nitrógeno alfa-aminado, con relación al peso de materia seca del extracto de péptido.
La composición cosmética de la invención ventajosamente comprende 0.001-30% en peso seco de extracto de péptido de aguacate, con relación al peso total de la composición, más ventajosamente aún 0.01-10%) en peso seco de extracto de péptido de aguacate. De acuerdo con una versión preferida de la invención el extracto de péptido de aguacate se puede obtener de acuerdo con un procedimiento tal como se describió previamente. De acuerdo con una versión ventajosa de la invención, la composición además comprende D-manoheptulosa y/o perseitol (efecto sinergístico), ventajosamente en una cantidad de 0.001-30%) en peso seco, más ventajosamente aún 0.01-5%o en peso seco, con relación al peso total de la composición. La fuente de D-manoheptulosa y/o perseitoi ventajosamente es un extracto de azúcares de aguacate hidrosoluble cuyo contenido de azúcar C7 - es decir el contenido de D-manoheptulosa y perseitol - en la materia seca está ventajosamente entre 65-90%o en peso, con relación al peso de materia seca total. Estos azúcares tipo heptitol también se pueden obtener de otra fuente vegetal o por síntesis. De acuerdo con una variante ventajosa de la invención, la composición además comprende un extracto de péptido de lupina (efecto sinergístico), ventajosamente en una cantidad de 0.001 -30%> en peso, con relación al peso total de la composición. El extracto de péptido de lupina, cuando se agrega en la composición de la invención, comprende al menos 70%o en peso, ventajosamente al menos 80%) de péptidos, con relación al peso de materia seca del extracto de péptido. Se puede obtener de acuerdo con un procedimiento tal como se describió anteriormente. La composición además puede contener al menos un compuesto elegido entre el grupo integrado por los agentes de reestructuración de barrera de la piel y compuestos que contienen insaponificables de aceite vegetal, tal como se definió anteriormente. En particular, la composición cosmética puede contener una sustancia activa elegida entre el grupo integrado por Soline®, Avocadofurano® y Piasclédine®, como se vende por Expanscience Laboratories. La composición cosmética de la invención comprende ventajosamente 0.001-30%) en peso, con relación al peso total de la composición, de al menos un agente de reestructuración de barrera de la piel. La composición cosmética de la invención se puede formular en la forma de varias preparaciones adaptada para administración tópica, administración oral, rectal o vaginal, o administración parenteral. Preferiblemente, las diversas preparaciones se adaptan para administración tópica e incluyen crema, ungüentos, lociones, aceites, parches, pulverizadores o cualesquiera otros productos para aplicación externa. De acuerdo con el tipo de administración el cual se dirige, la composición de la invención y/o compuestos activos pueden además comprender al menos un excipiente cosméticamente adecuado. La composición cosmética de la invención puede además comprender al menos un aditivo el cual se conoce por el especialista técnico, y se elige agentes espesantes, conservadores, perfumes, agentes colorantes, filtros químicos o minerales, agentes de humectación, aguas térmicas, etc. Esta invención también se refiere a un procedimiento para el tratamiento cosmético de pieles y/o mucosas sensibles, irritadas, intolerantes, las cuales presentan enrojecimientos cutáneos, o un desequilibrio inmunológico no patológico, caracterizado porque implica aplicar sobre la piel y/o la mucosa una composición cosmética de la invención. Esta invención finalmente se refiere a una composición nutracéutica que comprende un extracto de péptido de aguacate, y, si se necesita, un excipiente apropiado adecuado. El extracto de péptido de aguacate ventajosamente comprende 2-10%o en peso de nitrógeno alfa-aminado, con relación al peso de materia seca del extracto de péptido. La composición nutracéutica de la invención ventajosamente comprende 0.001-30%) en peso de extracto de péptido de aguacate, con relación al peso total de la composición, más ventajosamente 0.01-10%) en peso de extracto de péptido de aguacate. De acuerdo con una variante ventajosa de la invención, el extracto de péptido de aguacate se puede obtener de acuerdo con un procedimiento tal como se describió anteriormente. De acuerdo con una variante ventajosa de la invención, la composición nutracéutica también comprende D-manoheptulosa y/o perseitol (efecto sinergístico), ventajosamente en una cantidad de 0.001-30% de peso seco, con relación al peso total de la composición. La fuente de D-manoheptulosa y/o perseitol ventajosamente es un extracto hidrosoluble de azúcar de aguacate, cuyo contenido de azúcar C7, es decir, el contenido de D-manoheptulosa y perseitol en la materia seca está ventajosamente entre 65-90% en peso, con relación al peso de materia seca total. De acuerdo con una variante ventajosa de la invención, la composición nutracéutica comprende al menos un extracto de péptido de lupina (efecto sinergístico) ventajosamente en una cantidad de 0.01-30%) de peso seco, con relación al peso total de la composición. El extracto de péptido de lupina, como se agrega en la composición de la invención, comprende al menos 70% en peso, ventajosamente al menos 80%> de péptidos, con relación al peso de materia seca de extracto de péptido. Se puede obtener de acuerdo con un procedimiento tal como se describió anteriormente. Los siguientes ejemplos no limitativos ilustran la invención.
EJEMPLO 1 Preparación de un extracto de péptido de aguacate
50 kg de aguacate fresco, variedad Hass, se cortaron en rodajas delgadas, 2-5 mm de espesor, incluido el hueso, con una máquina cortadora de disco. El aparato de secado es un horno termo-regulado de flujo de aire caliente. Una vez cortados los aguacates se distribuyen en capas de 4-5 cm de espesor sobre bandejas las cuales se colocan en hileras. La temperatura de secado se ajusta a 80°C por una duración total de 48 horas. Una vez secados los frutos son expuestos a presión en frío. Esta operación se realiza en una pequeña prensa de laboratorio Komet®.
Los 4 kg de piezas deslipidadas de fruto (torta) luego se quiebran a una temperatura fría, luego se extraen con reflujo, en la presencia de 25 litros de etanol. El polvo, con los lípidos extraídos, luego se colecta por filtración sobre un embudo Büchner, y se seca en el horno a 50°C durante 5 horas. La torta luego se lava con agua desmineralizada (10 I), luego se separa por centrifugación. La fracción sólida se recupera en una solución acuosa, se acidifica con HCl (con un valor de pH ajustado a 5), luego se hace llegar a la presión de 2% de celulosa (con relación a la materia seca). La duración de la hidrólisis se ajusta a 6 horas. La mezcla luego se centrifuga a 2,000 g en la presencia de un aditivo (2.5%o p/v). El residuo el cual se colecta luego se somete a una segunda hidrólisis a un valor de pH de 8.0, en la presencia de 0.5%o de proteasa, a una temperatura de 55°C, durante 2 horas. La hidrólisis se regul a un valor de pH constante por la adición continua de hidróxido de sodio 2M La proteasa finalmente se desnaturaliza por calentamiento durante 10 minutos a 85°C. La mezcla como se obtiene se centrifuga y el sobrenadante se filtra pasando a través de una membrana de 7.5 µm. Luego seultrafiltra en membranas que tienen límite de corte de 10 kD. El extracto de péptido crudo como se obtiene con 20% de materia seca se decolora en la presencia de 1% de carbón activado, luego se filtra de nuevo a través de una membrana de 7.5 µm. El extracto decolorado luego se microfiltra (0.2 µm), su filtro se ajusta a 5%> de materia seca, y luego se complementa con un conservador y finalmente se envasa después de una filtración por esterilización (0.2 µm). Los datos característicos del extracto de péptido de aguacate hidrosoluble (5%> de materia seca) como se obtiene por este procedimiento se muestran en el siguiente cuadro 5:
CUADRO 5
En el siguiente cuadro 6, se da la distribución de masa molecular en el extracto de péptido de aguacate como se obtiene por este procedimiento:
CUADRO 6
(1 ) masa < 10000 g/mol
Se puede observar que al menos 27% de péptidos en el extracto se integran de secuencias de al menos 9 aminoácidos. Por lo tanto, el tamaño de los péptidos en el extracto es muy pequeño con relación a aquel de las proteínas naturales en el aguacate. Por consiguiente estos péptidos poseen una biodisponibilidad mucho mayor, notablemente en la piel.
EJEMPLO 2 Preparación de un extracto de hidrosoluble de azúcar de aguacate
50 kg de aguacate fresco, variedad Hass, se cortaron en rodajas delgadas, 2-5 mm de espesor, incluido el hueso, con una máquina cortadora de disco. El aparato de secado es un horno termo-regulado de flujo de aire caliente. Una vez cortados los aguacates se distribuyen en capas de 4-5 cm de espesor sobre bandejas las cuales se colocan en hileras. La temperatura de secado se ajusta a 80°C por una duración total de 48 horas. Una vez secados los frutos son expuestos a presión en frío. Esta operación se realiza en una pequeña prensa de laboratorio Komet®.
Los 4 kg de piezas deslipidadas de fruto (torta) luego se muelen a una temperatura fría, luego se extraen con reflujo, en la presencia de 25 litros de etanol. El polvo, con los lípidos extraídos, luego se colecta por filtración sobre un embudo Büchner, y se seca en el horno a 50°C durante 5 horas. La torta luego se lava con agua desmineralizada (10 I), luego se separa por centrifugación. La fracción soluble (líquida) se recupera para ser purificada y concentrada de acuerdo con el siguiente procedimiento: • Desmineralización con resinas de intercambio iónico: la desmineralización de heptulosas pasando sobre OH", luego resina H+. • Ultrafiltración en 10,000 Da: la ultrafiltración se realiza usando un sistema el cual es equipado con unas membranas que tienen un límite de corte de 10 kDa. • Concentración en vacío: la concentración del extracto purificado se realiza con un evaporador a vacío hasta que se obtiene la materia seca a aproximadamente 4%. • Envasado: la concentración del extracto se ajusta a 5% de materia seca y se adiciona un conservador, luego una filtración estéril se realiza con un membrana de límite de corte de 0.2 µm, y el producto se envasa. El siguiente cuadro 7 muestra la composición del extracto de azúcar C7 de aguacate, a 5%o de materia seca, como se prepara de acuerdo con el procedimiento descrito anteriormente:
CUADRO 7
EJEMPLO 3 Inducción de beta-defensina-2 con el extracto de péptido de aguacate
Siembre de célula (JO): Se sembraron queratinocitos humanos normales en placas de 96 cavidades (aproximadamente 20,000 células/cavidad) en la presencia de un medio específico el cual está enriquecido de calcio (concentración final .3 mM), como se describió antes en la publicación 'Human ß-Defensin-2-production in Keratinocytes is regulated by lnterleukin-1 , Bacteria, and the State of Differentiation', Alice Y. Liu et al., The Society for investigative Dermatology, vol. 118, No. 2, Feb. 2002, páginas 275-281.
Procesamiento de células (J1 ): Después de la incubación por 2 4horas a 37°C, 5% CO2: => 2 enjuagues con 200 µl/cavidad de PBS (agente regulador de pH de fosfato en solución salina) => estimulación celular con 200 µl/cavidad (en medio complementado con Ca++): • extracto de péptido de aguacate a concentraciones de 3, 1 y 0.3%), o , respectivamente, 0.15, 0.05 y 0.015%> de material seca. • 11-1 ß a una concentración de 100 ng/ml (inducción positiva verificada para hBD-2).
Fin del procesamiento (J2): ELISA Después de 24 horas de incubación, la inducción de hBD-2 se valora con una técnica de ELISA usando un anticuerpo específico (policlonal de cabra a BD2 humana; Abcam; ab9871). Los resultados obtenidos se resumen en el siguiente cuadro 8:
CUADRO 8
Se puede observar que, de una manera bastante inesperada, el extracto de péptido de aguacate de la invención permite incrementar la cantidad de hBD-2 que se produce.
EJEMPLO 4 Inducción de ARNms los cuales codifican hBD-2 y péptidos similares antimicrobianos (inhibidor específico de elastasa)
El método de "micro arreglo de ADNc" se usa para estudiar los efectos de los extractos de péptido de aguacate sobre la expresión de genes los cuales codifican las proteínas estructurales y reguladoras las cuales pueden ser de interés en la fisiología de la piel. Tal procedimiento permite seleccionar en una etapa única los efectos de un producto o de un tratamiento sobre ia expresión de genes en un sistema biológico dado, y obtener una 'firma' de los efectos de este tratamiento.
Condiciones de cultivo y productos ensayados Los extractos de péptido de aguacate, a concentraciones de 3, 1 y 0.3%), o, respectivamente, 0.15, 0.05 y 0.015% de materia seca, como se obtienen por el procedimiento de la invención, se incubaron directamente en el medio de cultivo para reconstruir la epidermis, Skinethic®, durant 24 horas.
Análisis de expresión diferencial de genes El procedimiento usado, el cual se recomienda por Clontech (Palo Alto, USA), comprende: • Una etapa de extracción y purificación de ARN total. • Una etapa de purificación de ARN mensajero de acuerdo con el protoloco de AtlasPure (Clontech). • Un etiquetado de sondas de ADN con P32 usando transcripción inversa. • Una purificación de sondas cuando se etiquetan por cromatografía de columna de exclusión, y verificación de la calidad y equivalencia por conteo de escintilación líquida. Una hibridación de membranas (Custom ATLAS BIOAIternative) con las sondas radioetiquetadas (68°C durante la noche).
Resultados Los efectos en la síntesis de ARNms que codifican péptidos antimicrobianos (hBD-2) y péptidos similares antimicrobianos (inhibidor específico de elastasa/SKALP/elafina) se muestran en el siguiente cuadro 9:
CUADRO 9
EJEMPLO 5 Formulaciones cosméticas a base de extracto de péptido de aguacate
Crema anti-acné No.1 Agua CS 100% Isononanoato de Isononilo 7.000 Malato de D-C12-?3 7.000 Estearato de isocetiio 5.000 Butilenglicol 3.000 Oryza sativa 2.500 Extracto de péptido de aguacate 2.000 Éter de dicaprililo 2.000 Salicilato de silanodiol 2.000 Alcohol araquídico 1.650 Trometamina 1.180 Alcohol cetílico 1.000 Ácido salicílico 1.000 Ascorbil glucósido 1.000 Glicina 1.000 Acetato de tocoferilo 1.000 Alcohol behenílico 0.900 Escualeno 0.790 Citrato de sodio 0.660 Copolímero PPG-12/SMD1 0.500 Araquidil glucósido 0.450 Perfume 0.400 Goma de esclerotio 0.160 Alcohol cetearílico 0.130 Ácido cítrico 0.110 Sepigel 305* 0.100 Sistema conservador CS * Un producto el cual se vende por la compañía Seppic.
Crema anti-acné No.2 Agua CS 100%) Isononanoato de Isononilo 7.000 Malato de Di-alquilo de C12-13 7.000 Estearato de isocetilo 5.000 Butilenglicol 3.000 Oryza sativa 2.500
Extracto de péptido de aguacate 2.000
Azúcares C7 (heptitol) 1.000
Éter de dicaprililo 2.000 Salicilato de silanodiol 2.000
Alcohol araquídico 1.650
Trometamina 1.180
Alcohol cetílico 1.000
Ácido salicílico 1.000 Ascorbil glucósido 1.000
Glicina 1.000
Acetato de tocoferilo 1.000
Alcohol behenílico 0.900
Escualeno 0.790 Citrato de sodio 0.660
Copolímero PPG-12/SMD1 0.500
Araquidil glucósido 0.450
Perfume 0.400
Goma de esclerotio 0.160 Alcohol cetearílico 0.130
Ácido cítrico 0.110
Sepigel 305* 0.100
Sistema conservador CS Un producto el cual se vende por la compañía Seppic.
Emulsión de espumación para limpiar pieles atópicas Agua CS 100 Arlatone dúo* 20.00000 Coco glucósido 12.00000 Hidroxipropil guar 2.00000 Extracto de péptido de aguacate 2.000 Palmato de Gliceril PEG-200 Hidrogenado 1.10000 Cocoato de Gliceril PEG-7 1.10000 Salicilato de silanodiol 1.00000 Cocamida DEA 1.00000 Caprilol Glicina 0.50000 Sorbato de potasio 0.50000 Policuaternio 10 0.40000 Perfume 0.40000 Ácido cítrico 0.30000 Zinc PCA 0.20000 Un producto el cual se vende por la compañía Quimasso.
Emulsión de espumación y limpieza para higiene personal Agua CS 100 Arlatone dúo* 20.00000
Coco glucósido 12.00000
Hidroxipropil guar 2.00000
Extracto de péptido de . aguacate 3.00000
Azúcares de aguacate 1.00
Péptidos de lupina 2.00
Palmato de Glíceril PEG-200 Hidrogenado 1.10000
Cocoato de Gliceril PEG-7 1.10000
Salicilato de silanodiol 1.00000
Cocamida DEA 1.00000
Caprilol Glicina 0.50000
Sorbato de potasio 0.50000
Policuaternio 10 0.40000
Perfume 0.40000
Ácido cítrico 0.30000
Zinc PCA 0.20000 el cual se vende por la compañía Quimasso.
Claims (20)
1.- Un fármaco, caracterizado porque comprende un extracto de péptido de aguacate, el cual comprende 2-10%) en peso de nitrógeno alfa-aminado, con relación al peso de materia seca de extracto de péptido, y un excipiente apropiado. 2. El fármaco de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el extracto de péptido de aguacate tiene la siguiente composición de aminoácido, en porcentaje en peso con relación al peso de aminoácido total: Alanina 6.4-7.8; Arginina 4.7-5.7; Ácido aspártico 10.3-12.7; Cistina-Cisteina 2.9-3.5; Ácido glutámico 13.0-15.8; Glicina 5.3-6.5: Histidina 2.2-2.6; Isoleucina 4.8-5.8; Leucina 7.6-9.4; Lisina 3.0-3.8; Metionina 1 .2-1.6; Fenilalanina 4.7-5.7; Prolina 4.1-5.2; Serina 5.5-6.7; Treonina 4.6-5.6; Tirosina 3.6-4.4: Valina 5.8-7.
2.
3. El fármaco de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado además porque 50% de los péptidos en el extracto se integran de 10-30 aminoácidos.
4. Un procedimiento para obtener el extracto de péptido de aguacate como se define en las reivindicaciones 1 a 3 que comprende las siguientes etapas: obtener una torta de aguacate, ventajosamente del fruto de aguacate, por secado y extracción del aceite; seguido por criomolienda y deslipidación total de la torta, seguido por decantación, centrifugación y colección de la torta; seguido por una primera hidrólisis en la presencia de glucanasas, seguido por una centrifugación y eliminación de la fracción soluble; una segunda hidrólisis en la presencia de una o más proteasas, seguido por una centrifugación y la eliminación del residuo; seguido por una concentración de la fase de péptido por nanofiltración y, si se necesita, una decoloración en la presencia de carbón activado; seguido por una simple filtración (10 µm), seguido por una ultrafiltración (límite de corte 10 kD); y finalmente si es necesaria, adición de un conservador, una microfiltración por esterilización final (0.2 µm) y envasado.
5. El uso de un extracto de péptido de aguacate de conformidad con las reivindicaciones 1-3, en la elaboración de un fármaco para el tratamiento y/o prevención de enfermedades las cuales se enlazan a un cambio de inmunidad natural y/o adquirida, incrementando la producción de péptidos antimicrobianos, de las familias de catelicidinas y/o beta-defensinas, ventajosamente hBD-2.
6. El uso de un extracto de péptido de aguacate de conformidad con las reivindicaciones 1-3, en la elaboración de un fármaco para el tratamiento y/o prevención de enfermedades las cuales se enlazan a un cambio de inmunidad natural y/o adquirida, estimulando péptidos similares antimicrobianos, tales como un inhibidor de elastasa específico, particularmente elafina (SKAL).
7. El uso que se reclama en las reivindicaciones 5 ó 6, en donde las enfermedades se enlazan a la presencia de microorganismos tales como bacterias Gram+ y/o Gram-, hongos y virus.
8. El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 5-7, en donde las enfermedades se eligen entre el grupo constituido por: infecciones de la piel y faneras, notablemente elegidas dentro del grupo el cual se integra por foliculitis, furúnculos, abscesos, impétigo o panadizo; dermatosis inflamatorias, tales como dermatitis atópica, dermatitis atópica y/o por contacto, psoriasis, acné y dermatitis por prurito; enfermedades las cuales se asocian con un cambio en el equilibrio de Th1/Th2; enfermedades las cuales se asocian con un cambio en la síntesis de citocinas, tales como IL-4 y/o IL-13; o quemaduras.
9. El uso que se reclama en las reivindicaciones 5 ó 6, en donde las enfermedades son patologías las cuales se enlazan a una deficiencia en la barrera de la piel, tales como pieles hiper-reactivas, atópicas, resecas o envejecidas, o patologías enlazadas a pieles las cuales se han debilitado por una agresión del ambiente.
10. El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 5 ó 6, el cual es apropiado para la protección de pieles tales como: pieles de niños recién nacidos inmaduros o jóvenes; pieles de niños recién nacidos inmaduros o jóvenes patológicas; pieles saludables o patológicas en adultos o individuos de edad avanzada.
11. El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 5 ó 6, en donde el fármaco es útil para mejorar el procedimiento de curación en procedimientos de curación normales o patológicos, tales como úlceras y úlceras por decúbito.
12. El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 5 ó 6, en donde el fármaco es útil para el tratamiento y/o prevención de enfermedades periodontales.
13. El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 5 ó 6, en donde el fármaco es útil para el tratamiento y/o prevención de patologías articulares inflamatorias tales como artrosis.
14. El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 5 ó 6, en donde el fármaco es útil para el tratamiento y/o prevención de infecciones de las mucosas, notablemente las mucosas vaginal, intestinal, respiratoria, nasal o auricular.
15. El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 5 ó 6, en donde el fármaco es útil para el tratamiento y/o prevención de las infecciones de los órganos de la vista.
16. El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 5 a 15, en donde el fármaco comprende además D-mannoheptulosa y/o perseitol, ventajosamente la fuente de D-manoheptulosa y/o perseitol es un extracto de azúcar de aguacate hidrosoluble.
17. El uso que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 5 a 16, en donde el fármaco es útil para el tratamiento y/o prevención de enfermedades las cuales pueden afectar el hombre y/o animales, notablemente mamíferos.
18. Una composición cosmética o nutracéutica, caracterizada porque comprende un extracto de péptido de aguacate, el cual contiene ventajosamente 2-10%> en peso de nitrógeno alfa-aminado, con relación al peso de materia seca de extracto de péptido, y un excipiente apropiado, el cual, es respectivamente cosméticamente adecuado o un excipiente de grado alimenticio.
19. La composición cosmética o nutracéutica de conformidad con la reivindicación 18, caracterizada además porque adicionalmente contiene D-manoheptulosa y/o perseitol, ventajosamente la fuente de D-manoheptulosa y/o perseitol es un extracto hidrosoluble de azúcar de aguacate.
20. Un procedimiento para el tratamiento cosmético de pieles y/o mucosas sensibles, irritadas, alérgicas, resecas, envejecidas, intolerantes, con una deficiencia en la barrera de la piel, la cual se ha debilitado por una agresión del ambiente, con enrojecimientos o con un desequilibrio inmunológico no patológico, caracterizado porque consiste en aplicar sobre la piel y/o la mucosa una composición cosmética de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 18-19.
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