MXPA06005968A - Formas solidas de anticuerpos anti-egfr. - Google Patents

Abstract

La invencion se refiere a formas solidas de anticuerpos contra el receptor EGF, en particular a precipitados y cristales de anticuerpos monoclonales contra el receptor EGF, con preferencia particular de Mab C225 (cetuximab) y Mab h425 (EMD 72000), que dan como resultado proteinas de anticuerpo biologicamente activas por disolucion o la suspension en medio acuoso, que se pueden obtener por precipitacion del anticuerpo y/o una de sus variantes y/o fragmentos disueltos o suspendidos en medio acuoso por medio de un reactivo de precipitacion. La invencion tambien se refiere a preparaciones farmaceuticas que comprenden al menos una forma solida de los anticuerpos antes mencionados en forma de precipitado no cristalino, precipitado cristalino o en forma soluble o suspendida, y opcionalmente excipientes y/o coadyuvantes y/u otros ingredientes activos farmaceuticos, y a un procedimiento para preparar formas solidas de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invencion.

Description

FORMAS SOLIDAS DE ANTICUERPOS ANTI-EGFR Campo de la invención La invención se refiere a formas sólidas de anticuerpos contra el receptor EGF (EGFR) , en particular precipitados y cristales de anticuerpos monoclonales contra el receptor EGF, con particular preferencia de Mab C225 (cetuximab) y Mab h425 (EMD 72000) , que dan por resultado anticuerpos proteicos biológicamente activos por disolución o suspensión en medio acuoso o no acuoso, que se obtienen por precipitación del anticuerpo- y/o de una de sus variantes y/o fragmentos disueltos o suspendidos en medio acuoso mediante un reactivo de precipitación. Además, la invención se refiere a preparaciones farmacéuticas que comprenden al menos una forma sólida de los anticuerpos antes mencionados en forma de precipitado no cristalino, precipitado cristalino o en forma disuelta o suspendida, y opcionalmente excipientes y/o coadyuvantes y/u otros ingredientes farmacéuticos activos, y a un proceso para la preparación de formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención. Antecedentes de la invención Los adelantos en el área de la biotecnología en los últimos 10 años han permitido preparar diversas proteínas para la aplicación farmacéutica mediante técnicas con ADN recombinante . Por ejemplo, se usan medicamentos proteicos, REF,: 172314 tales como anticuerpos monoclonales , por ejemplo en la terapia de tumores, por ejemplo para inmunoterapia específica o vacunas contra tumores . Las proteínas terapéuticas son más grandes y más complejas que los ingredientes activos orgánicos e inorgánicos convencionales, y tienen complejas estructuras tridimensionales y numerosos grupos funcionales que intervienen en la actividad biológica de la proteína o, como alternativa, pueden causar efectos no deseados . Durante la preparación, el almacenamiento y el transporte, los medicamentos proteicos están expuestos a numerosas influencias externas que pueden tener acción reductora de la estabilidad sobre los ingredientes activos proteicos . En consecuencia, es necesario estudiar con exactitud las causas y los mecanismos de las reacciones específicas de degradación, a fin de poder estabilizar la proteína, por ejemplo mediante la adición de ciertos coadyuvantes estabilizantes (véase, por ejemplo, Manning M. C, Patel K. , & Borchardt R. T. (1989) Stability of protein pharmaceuticals . Pharm. Res. 6, 903-918). La bibliografía describe numerosas formulaciones de proteínas terapéuticas. No obstante, los requerimientos de la composición de una preparación farmacéutica de ingredientes activos proteicos puede ser muy diferente, y en general no es posible aplicar formulaciones proteicas ya establecidas a ingredientes activos proteicos nuevos, debido a las propiedades fisicoquímicas específicas y las reacciones de degradación de las distintas proteínas. En consecuencia, aún representa un desafío importante hallar formulaciones farmacéuticas adecuadas y estables de estos nuevos ingredientes activos . Las inestabilidades químicas se distinguen por las modificaciones covalentes de las proteínas. La estructura primaria de la proteína cambia por ruptura, neoformación o reformación de enlaces químicos. Por lo general, la sustancia recién formada es completamente diferente en la actividad biológica de la proteína nativa original . Las inestabilidades físicas modifican la disposición espacial de la molécula (estructura secundaria, terciaria y cuaternaria) , sin destruir los enlaces covalentes . Se pueden clasificar en desnaturalización, asociación, agregación, precipitación o adsorción. Las inestabilidades físicas son un fenómeno frecuente, en particular en el caso de proteínas relativamente grandes . Los precipitados son el equivalente macroscópicamente visible de los agregados y están formados, en términos mecánicos, por cúmulos de agregados o asociaciones . Al exceder el límite de solubilidad y debido a la precipitación, los copos se hacen visibles desde un diámetro de aproximadamente 10 µt? a través de un microscopio óptico y desde aproximadamente 50 µt? a simple vista. La agregación proteica puede ser un proceso reversible o irreversible (véase, por ejemplo, Cleland J. L., Powell M. F. & Shire S. J. (1993), The development of stable protein formulations . A cióse look at protein aggregation, deamidation, and oxidation Crit . Rev. Ther. Drug Carrier Syst 10, 307-377) . Si bien la bibliografía anterior describe la precipitación de proteínas con sales, polímeros y solventes orgánicos como método estándar para la purificación de las proteínas (Scopes R. K. (1997) Separation by Precipitation. En: Protein Purification Principies and Practice (ed Scopes R. K. ) , 2a ed. págs . 41-71 Springer Verlag, Nueva York), el uso de este método por lo general da por resultado, en particular en el caso de las inmunoglobulinas , la desnaturalización, una reducción asociada de la. actividad y bajos rendimientos cuantitativos, particularmente con el uso de sales y solventes orgánicos (Phillips A. P. , Martin K. L. & Horton W. H. (1984) The choice of methods for immunoglobulin IgG purification: Yield and purity of antibody activity. Journal of Immunological Methods 74, 385-393). Por el contrario, con el uso de polietilenglicol (PEG) se obtienen mejores resultados (A. Polson, G, M. Potgieter, J. P. Largier y G. E. P. Joubert, F. J. ears. The Fractionation of Protein Mixtures by linear Polyraers of High Molecular Weight. Biochem. Biophys . Acta 82: 463-475, 1964). Se conocen los cristales proteicos por los procesos de purificación (procesamiento corriente abajo) , preferentemente de enzimas, y por la dilucidación de la estructura terciaria de las proteínas por medio del análisis estructural por rayos X (R. K. Scopes Analysis for purity: Crystallization. En: Protein Purification: Principies and Practice, editado por R. K. Scopes, Nueva York. Springer Verlag, 1997, p. 284-301) . Aquí tiene lugar la formación de nuevos contactos en términos moleculares ordenados entre proteínas. Es un proceso lento, con movilidad reducida. En el proceso se reduce la concentración de la proteína en solución. Aunque la bibliografía describe la cristalización de las proteínas con sales, polímeros y solventes orgánicos como método estándar para dilucidar la estructura de las inmunoglobulinas (Harris L. J., Skaletsky E. & McPherson A. (1995) Crystallization of Intact Monoclonal Antibodies . Proteins : Structure, Function, and Genetics 23, 285-289, Harris L. J. , Skaletsky E., & McPherson A. (1998) Cristallografic Structure of an Intact IgGl Monoclonal Antibody. Journal of Molecular Biology 275, 861-872; Edmundson A. B . , Guddat L. W. , & Andersen . N. (1993) Cristal Structures of intact IgG antibodies . ImmunoMethods 3 , 197-210) , la cristalización de anticuerpos intactos, por ejemplo glucosilados , es, sin embargo, extremadamente difícil, dado que el tamaño de la proteína, el diferente patrón de glucosilación de cada molécula de anticuerpo, las microheterogeneidades asociadas, además de la flexibilidad estructural de la inmunoglobulina hacen más difícil la incorporación ordenada en un retículo cristalino, o incluso lo impiden ( cPherson A. (1999) Crystallization of Biological Macromolecules, Ia ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Nueva York) . Además, las moléculas de anticuerpo exhiben una tendencia a la agregación, que también causa grandes dificultades en la cristalización (McPherson A. (1999) Crystallization of Biological Macromolecules, Ia ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Nueva York) . Además, el riesgo de desnaturalización de los anticuerpos durante el proceso de cristalización torna poco atractiva la cristalización de anticuerpos terapéuticos para la persona experta en el arte. Así, hasta el momento sólo se han cristalizado pocos anticuerpos intactos para su dilucidación estructural y hasta el momento sólo se cristalizaron tres anticuerpos en escala preparativa. En consecuencia, las inmunoglobulinas enumeradas en la Biological Macromolecule Crystallisation Datábase [base de datos de cristalización de macromoléculas biológicas] (Gilliland, G. L., Tung, M. , Blakeslee, D. M. y Ladner, J. 1994. The Biological Macromolecule Crystallization Datábase, Versión 3.0: New Features . Data, and the NASA Archive for Protein Crystal Growth Data. Acta Crystallogr. D50 408-413) que ya se cristalizaron son principalmente fragmentos Fab y Fe.

El documento WO 02/072636 describe cristales de anticuerpo que, sin embargo, se preparan en un proceso complejo con inoculación y el uso de detergentes, que se deberían evitar en lo posible en formulaciones farmacéuticas, y coadyuvantes, algunos de los cuales son toxicológicamente inaceptables. Además, en el proceso descrito no se puede controlar el tamaño de las partículas. En un experimento control (véase el E emplo 8) , se pudo demostrar que los cristales con forma de aguja descritos se obtienen de la solución de proteína y del control negativo (sin proteína) mediante el proceso descrito en el documento WO 02/072636. De todo esto es obvio que presumiblemente son las mejores inclusiones proteicas en cristales del reactivo de precipitación. Por las razones antes mencionadas, es obvio que la cristalización de los anticuerpos es extremadamente difícil para la persona experta en el arte y los procesos de cristalización descritos en la bibliografía no se pueden aplicar a todos los anticuerpos conocidos, debido a la considerable heterogeneidad de los distintos anticuerpos conocidos con respecto a estructura primaria, secundaria y terciaria, glucosilación y flexibilidad estructural. De modo similar, por las razones antes mencionadas no resultaba atractivo para el experto en el arte preparar precipitados de anticuerpos terapéuticos, dado que, en particular, cabía esperar la desnaturalización irreversible. Breve descripción de la invención En consecuencia, el objeto de la presente invención era hallar formas estables, por ejemplo precipitados o cristales, de proteínas terapéuticas, en particular anticuerpos, para retener su eficacia durante la preparación, el almacenamiento, el transporte y la aplicación. Dado que, como se mencionó antes, por lo general no se pueden aplicar formulaciones proteicas ya establecidas a nuevos ingredientes proteicos activos, otro objeto de la presente invención era hallar nuevas formulaciones estables de anticuerpos monoclonales contra el receptor EGF, por ejemplo Mab C225 (cetuximab) y Mab h425 (EMD 72000) . Aunque las formulaciones que comprenden Mab C225 (cetuximab) o Mab h425 (EMD 72000) se describen en los documentos WO 03/053465 y WO 03/007988, sin embargo, las formulaciones descritas en el documento WO 03/053465 tienen una concentración proteica relativamente baja y no son estables por largo tiempo a temperatura ambiente, y de modo similar, las formulaciones descritas en el documento WO 03/007988 tienen una concentración proteica relativamente baja y se debe reconstituir la preparación (liofil zado) antes de su uso. En consecuencia, otro objeto de la presente invención consistía en hallar una preparación farmacéutica estable que tuviera alta concentración de los anticuerpos antes mencionados .

El proceso de liofilización para la estabilización de formul ciones proteicas se describe, por ejemplo, en los documentos O 93/00807 y WO 98/22136, pero las significativas desventajas de las preparaciones liofilizadas consisten en que el usuario debe reconstituir el liofilizado antes de su uso, lo cual representa una considerable fuente de error en la preparación antes del uso. Dado que se agrega otro proceso de preparación, en comparación con formulaciones líquidas, el proceso es desfavorable con respecto al trabajo adicional para el desarrollo del proceso (para asegurar la estabilidad durante la liofilización) , la preparación (costos y duración de la preparación) y, p.ej., la convalidación. En consecuencia, el objeto de la presente invención consiste en buscar formas sólidas y formulaciones de los anticuerpos antes mencionados que tengan mayor estabilidad ante condiciones de estrés, tales como alta temperatura, humedad atmosférica y/o fuerzas de cizallamiento, y que no comprendan coadyuvantes toxicológicamente inaceptables . Descripción detallada de la invención Sorprendentemente, se halló que se pueden preparar las formas sólidas de los anticuerpos antes mencionados y que estas formas sólidas y formulaciones preparadas a partir de ellas no tienen las desventajas mencionadas en el arte previo. Se distinguieron las formas sólidas de los anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención descritas más adelante y/o las formulaciones preparadas a partir de ellas, sorprendentemente, por una o más de las ventajas seleccionadas de: gran estabilidad, tamaño de partículas controlable, proteínas nativas y biológicamente activas tras la redisolución o la resuspensión, gran pureza, ausencia de agentes farmacéuticamente inaceptables y, en consecuencia, gran seguridad, buena tolerancia y la posibilidad del uso directo, baja tendencia de agregación y así la posibilidad de la preparación de formulaciones muy concentradas y baja viscosidad en la formulación como suspensión proteica, comparada con una solución. El proceso de preparación de acuerdo con la invención descrita más adelante se distingue, sorprendentemente, por una o más de las ventajas seleccionadas de: simplicidad, ahorro de tiempo y costos, uso de agentes farmacéuticamente aceptables, alto rendimiento. Él proceso de acuerdo con la invención se puede llevar a cabo en forma significativamente más simple, con ahorro de tiempo y en forma costo-efectiva, respecto de las técnicas descritas en la bibliografía, dado que sólo es necesaria la adición de un único reactivo de precipitación. Además, el reactivo de precipitación se agrega a una solución del anticuerpo en un sistema buffer adecuado, es decir, que no es necesaria la estabilización de las soluciones de reacción mediante otros coadyuvantes tales como, p. ej . , detergentes. Por lo general, se debe evitar o minimizar el uso de detergentes en preparaciones para la administración parenteral, dado que causan un potencial tóxico e inmunogénico no despreciable (Sweetana S. & Akers M. J. (1996) Solubility principies and practices for parenteral drug dosage form development PDA J. Pharm. Sci. Technol . 50, 330-342) y también pueden causar cambios en la estructura secundaria de las proteínas (Vermeer A. W. P. & Norde W. (2000) The influence of the binding of low molecular weight surfactants on the thermal stability and secondary structure of IgG, Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects 161, 139-150) . En consecuencia, las formas sólidas obtenidas de anticuerpos anti-EGFR se pueden usar directamente en medicamentos, y no es necesaria la purificación ulterior para la eliminación de agentes farmacológicamente inaceptables. En contraste, los cristales obtenidos en el documento WO 02/072636 se deben liberar de agentes farmacológicamente inaceptables, P-ej . CHES, imidazol, TRIS, cloruro de manganeso (II) , cloruro de cinc (II), sulfato de cobre (II), 2-propanol, 2-metil-2,4-pentanodiol, HEPES, sulfato de litio, etoxietanol o detergentes, tales como polisorbato 80 o 20, en un proceso complejo, o incluso es imposible eliminar por completo los agentes inaceptables antes mencionados . Sorprendentemente, se halló que las formas sólidas preferentemente estables se obtienen si los anticuerpos contra el receptor EGF (anticuerpos anti-EGFR) , preferentemente anticuerpos monoclonales anti-EGFR, con particular preferencia Mab C225 (cetuximab) o Mab h.425 (EMD 72000) , se incuban a pH adecuado y a temperatura adecuada en presencia de un buffer adecuado, con la ayuda de ciertos reactivos de precipitación seleccionados de polímeros, preferentemente polietilenglicol (PEG) , sales, preferentemente sulfato de amonio, o solventes orgánicos, preferentemente etanol, o las correspondientes mezclas. Sorprendentemente, se halló que las formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR, preferentemente de anticuerpos anti-EGFR monoclonales, con particular preferencia de Mab C225 (cetuximab) o Mab h425 (EMD 72000) , y/o variantes o sus fragmentos, obtenidos por el proceso de acuerdo con la invención, son preferentemente nativos después de la redisolución y se obtienen preferentemente en un alto rendimiento . En consecuencia, la invención se refiere a formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR y/o sus variantes o fragmentos, que dan por resultado una proteína de anticuerpo biológicamente activa por disolución o suspensión en medio acuoso, que se obtienen por precipitación del anticuerpo y/o una de sus variantes y/o fragmentos disueltos o suspendidos en medio acuoso mediante un reactivo de precipitación seleccionado de polímeros, preferentemente polietilenglicol (PEG) , sales, preferentemente sulfato de amonio, o solventes orgánicos, preferentemente etanol, o sus mezclas, en presencia de un buffer adecuado, pH y temperatura adecuados. Formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR: Por "formas sólidas de un anticuerpo anti-EGFR de acuerdo con la invención" se entienden preferentemente precipitados o cristales que resultan en un anticuerpo biológicamente activo mediante la disolución o suspensión en un medio acuoso o no acuoso. Se obtienen las formas sólidas de acuerdo con la invención por precipitación del anticuerpo disuelto o suspendido en un medio acuoso según el proceso descrito más adelante . Las formas sólidas de acuerdo con la invención pueden estar en el rango de µ?? y nm. Precipitados : A los fines de la presente invención, se entiende por precipitados las formas sólidas en una estructura no cristalina amorfa o estados de agregación y asociación. Cristales : A los fines de la presente invención, se entiende por cristales las formas sólidas en una estructura cristalina. Las estructuras cristalinas se pueden detectar mediante los siguientes procesos de precipitación. Precipitado : A los fines de la presente invención, se entiende por precipitado las formas sólidas de acuerdo con la invención en forma precipitada, es decir, en forma de un precipitado o cristal, según las condiciones del proceso. Precipitado cristalino: A los fines de la presente invención, se entiende por precipitado cristalino o cristalino las formas sólidas de acuerdo con la invención en una estructura cristalina ordenada. Precipitado no cristalino: A los fines de la presente invención, se entiende por precipitado no cristalino las formas sólidas de acuerdo con la invención en estructuras amorfas no cristalinas o estados de agregación y asociación. Disuelta: A los fines de la presente invención, se entiende por forma disuelta las formas sólidas de acuerdo con la invención que se disuelven o redisuelven en una solución de acuerdo con la invención. Suspendid : Por suspendida se entienden las formas sólidas de acuerdo con la invención que se suspenden o resuspenden en una solución de acuerdo con la invención. A los fines de la invención, se entiende por "medio acuoso" agua o mezclas de agua con solventes inertes adecuados y otros agentes mencionados en el Ejemplo 1, tales como, por ejemplo, buffers, estabilizantes o coadyuvantes, con la propiedad de que el medio acuoso de acuerdo con la invención no causa por sí mismo la precipitación o cristalización del anticuerpo, pues la precipitación o la cristalización sólo tienen lugar por adición de reactivos de precipitación de acuerdo con la invención. A los fines de la invención, se entienden por "medio, no acuoso" aceites o mezclas de aceites con agua u otros solventes inertes adecuados y otros agentes mencionados en el Ejemplo 1, tales como, por ejemplo, estabilizantes o coadyuvantes, con la propiedad de que los medios no acuosos de acuerdo con la invención no sólo no causan la precipitación o cristalización del anticuerpo, sino en cambio, la precipitación o la cristalización sólo tiene lugar por adición de reactivos de precipitación de acuerdo con la invención. Respecto de los anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención y a los fines de la presente invención, se entienden por "biológicamente activos" , "nativos" y "efectivos" los anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención capaces de ejercer sus efectos biológicos aún después de la conversión en formas sólidas de acuerdo con la invención y la posterior redisolución o resuspensión, en particular la unión a EGFR, inhibición de la unión de ligandos, en particular EGF a EGFR, modulación, en particular la inhibición de la transducción de señales mediada por EGFR y la prevención o la terapia de enfermedades mediadas por EGFR. En particular, no se esperaba en consecuencia la preparación directa de cristales de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención, dado que los anticuerpos por lo general tienen una fuerte tendencia a la agregación, que dificulta o incluso impide la incorporación ordenada en un retículo cristalino (McPherson A. (1999) Crystallization of Biological Macromolecules , Ia ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press. Nueva York). A pesar de las dificultades previstas por el experto en el arte para la cristalización de anticuerpos de acuerdo con la invención, debido a la falta de homogeneidad antes mencionada con respecto a la estructura proteica, la glucosilación y la flexibilidad segmentaria estructural, incluso dentro de una especie de anticuerpo, sorprendentemente se obtienen resultados excelentes mediante el proceso de acuerdo con la invención. La elevada estabilidad de los cristales de anticuerpos obtenidos de acuerdo con la invención también se caracterizan por no presentar cambios en el especto de la forma o el tamaño de las partículas, que se deberían considerar esenciales respecto de los efectos secundarios inmunogénicos, ni cambios en las estructuras primaria o secundaria de la proteína. En consecuencia, el proceso de acuerdo con la invención ofrece la ventaja de que el tamaño de las partículas es preferentemente controlable y de preferencia se obtienen cristales tridimensionales estables. El tamaño de los cristales puede estar en el rango de µp? y nm. Anticuerpos anti-EGFR: De preferencia, los anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención son monoclonales y de origen murino o humano; con particular preferencia son de origen murino y son quiméricos o humanizados. El anticuerpo dirigido contra el receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGFR) es con particular preferencia Mab C225 (cetuximab) o Mab h425 (EMD 72000) y/o variantes o fragmentos de ellos. Otros anticuerpos dirigidos contra EGFR se describen, por ejemplo, en EP 0586002 y en J. Nati. Cáncer Inst. 1993, 85 27-33 (Mab 528). Mab C225 (cetuximab, Erbitux™) : Mab C225 (cetuximab) es un anticuerpo clínicamente probado que se une al receptor EGF. Mab C225 (cetuximab) es un anticuerpo quimérico cuyas regiones variables son de origen murino y cuyas regiones constantes son de origen humano. Fue descrito por primera vez por Naramura et al., Cáncer Immunol. Immunotherapy 1993, 37, 343-349 y en el documento WO 96/40210 Al. Mab h.425 (EMD 72000) : Mab h.425 (EMD 72000) es un anticuerpo humanizado de monoclonal (Mab) obtenido de anticuerpo anti-EGFR murino 425 ( ab 425} (documento EP 0531472) . El anticuerpo monoclonal murino Mab 425 se desarrolló en la línea celular de carcinoma humano A431, dado que se une aquí con un epitopo extracelular del receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGFR) . Se halló que inhibe la unión de EGF (Murthy et al., 1987). Se observó aumento de la expresión de EGFR en tej idos malignos provenientes de diversas fuentes, y en consecuencia Mab 425 es un posible ingrediente activo para el diagnóstico y tratamiento terapéutico de tumores humanos. En consecuencia, se halló que Mab 425 media la citotoxicidad tumoral in vitro y suprime el crecimiento tumoral de líneas celulares de carcinomas epidermoides y colorrectales in vitro (Rodeck et al., 1987) . Además, se demostró que Mab 425 se une a xenoinjertos de gliomas humanos malignos en ratones (Takahashi et al., 1987). Sus formas humanizadas y quiméricas se describen, por ejemplo, en el documento EP 0531472; Kettleborough et al., Protein Engineering 1991, 4: 773-783; Bier et al., Cáncer Chemother. Pharmacol . 2001, 47: 519-524; Bier et al., Cáncer Immunol . Immunother 1998, 46: 167-173. Mab h425 (EMD 72000) es un anticuerpo humanizado (h425) en fase clínica I/II y cuya región constante se compone de una cadena K y una cadena ?-l humana (documento EP 0531472) . Los anticuerpos humanos anti-EGFR se pueden preparar mediante tecnología XenoMouse, según se describe en los documentos WO 91/10741, WO 94/02602 y WO 96/33735. Un anticuerpo sometido a estudios clínicos y preparado mediante esta tecnología es, p.ej., ABX-EGF (Abgenix. Crit . Rev. Oncol. Hematol. 2001. 38: 17-23; Cáncer Research 1999-, 59: 1236-43) . Anticuerpo : Anticuerpo o inmunoglobulina se usan en el sentido más amplio, a los fines de la presente invención, y se refiere, en particular, a anticuerpos policlonales y anticuerpos multiespecíficos (por ejemplo anticuerpos biespecíficos) y, con particular preferencia, a anticuerpos monoclonales intactos (Mab) que son biológicamente activos, y sus variantes y fragmentos . El término también cubre heteroanticuerpos que consisten en dos o más anticuerpos o sus fragmentos y/o tienen distintas especificidades de unión, y se unen entre sí. Según la secuencia de aminoácidos de sus regiones constantes, los anticuerpos se pueden asignar a distintas clases de anticuerpo (inmunoglobulina) : IgA, IgD, IgE, IgG e Ig . Varios de ellos se pueden subdividir en subclases (isotipos) , por ejemplo IgGl, IgG2, IgG3 , IgG4, IgAl e lgA2. Por lo general, los anticuerpos tienen un peso molecular de aproximadamente 150 kDa y constan de dos cadenas livianas idénticas (L) y dos cadenas pesadas idénticas (H) . Los anticuerpos monoclonales se obtienen de una población de células homogéneas. Son muy específicas y están dirigidas contra un único epitopo, mientras que los anticuerpos policlonales cubren distintos anticuerpos, dirigidos contra diversos epitopos . Los procesos para la preparación de anticuerpos monoclonales incluyen, por ejemplo, el método del hibridoma descrito por Kohler y Milstein (Nature 256, 495 (1975)) y en Burdon et al., (1985) "Monoclonal Antibody Technology, The Production and Gharacterization of Rodent and Human Hybridomas" , eds . Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Volume 13 , Elsevier Science Publishers, Amsterdam. Se pueden preparar, en particular, mediante técnicas conocidas de ADN recombinante (véase, p.ej., el documento US 4816567). Los anticuerpos monoclonales también se pueden aislar de bibliotecas de fagos de anticuerpos, por ejemplo con la ayuda de las técnicas descritas en Clackson et al. (Nature, 352: 624-628 (1991)) y arks et al. (J. Mol. Biol, 222: 58, 1-597(1991)). Variantes y f agmentos : Las variantes (muteínas) de los anticuerpos son proteínas estructuralmente relacionadas, por ejemplo, que se pueden obtener por modificación de la secuencia primaria (secuencia de aminoácidos) , por glucoingeniería (variantes de los sitios o estructuras de glucosilación, también proteínas desglucosiladas) , por PEGilación, por preparación en células huésped modificadas o por otras técnicas . Las variantes de acuerdo con la invención no se restringen a los ejemplos anteriores, sino que, en cambio, incluyen todas las variantes de los anticuerpos de acuerdo con la invención que son conocidos por los expertos en el arte . Los fragmentos (segmentos parciales) de anticuerpos son productos de escisión de los anticuerpos obtenidos, por ejemplo, por digestión enzimática limitada con la ayuda de papaína, pepsina y plasmina o por preparación de los segmentos parciales mediante ingeniería genética. Son segmentos parciales típicos, por ejemplo, el fragmento bivalente F(ab' )2# el fragmento monovalente Fab y el fragmento Fe (Lottspeich F., H. Zorbas (ed. ) . Bioanalytik, Heidelberg; Berlín: Spektrum Akademischer Verlag GmbH, (1998)-p g. 1035) . Los fragmentos de acuerdo con la invención no se restringen a los ejemplos anteriores, sino que, en cambio, incluyen todos los fragmentos de anticuerpos de acuerdo con la invención, conocidos para el experto en el arte. Preparación farmacéutica: Los términos formulación farmacéutica y preparación farmacéutica se usan como sinónimos a los fines de la presente invención. Tal como se usa en la presente, "farmacéuticamente tolerado" se refiere a medicamentos, reactivos de precipitación, excipientes, coadyuvantes, estabilizantes, solventes y otros agentes que facilitan la administración de las preparaciones farmacéuticas así obtenidas a un mamífero, sin efectos secundarios fisiológicos indeseados, tales como náuseas, mareos, problemas digestivos o similares. En las preparaciones farmacéuticas para la administración parenteral, se requiere isotonicidad, euhidria y tolerabilidad y seguridad de la formulación. (baja toxicidad) , de los coadyuvantes empleados y del envase primario. Sorprendentemente, las formas sólidas de los anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención preferentemente tienen la ventaja de que el uso directo es posible, dado que los reactivos de precipitación utilizados son agentes fisiológicamente aceptables y, en consecuencia, son innecesarias otras etapas de purificación para la eliminación de agentes toxicológicamente inaceptables, tales como, p.ej., elevadas concentraciones de solventes orgánicos u otros coadyuvantes toxicológicamente inaceptables, antes del uso de las formas sólidas de acuerdo con la invención en formulaciones farmacéuticas. La preparación de formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención permite, preferentemente de forma simultánea, un elevado rendimiento de proteína nativa y farmacéuticamente aceptable de gran pureza y es, en consecuencia, preferentemente simple, ahorra tiempo y de bajo costo. Así, la invención también se refiere a un proceso para la preparación de una forma sólida de un anticuerpo anti-EGFR de acuerdo con la invención y/o uno de sus variantes y/o fragmentes que dé por resultado una proteína de anticuerpo biológicamente activa por disolución o suspensión en medio acuoso, caracterizado porque el anticuerpo y/o sus variantes y/o fragmentos disueltos o suspendidos en solución acuosa se precipitan mediante un reactivo de precipitación, y se separa el producto de precipitación. Los reactivos de precipitación utilizados en el proceso de acuerdo con la invención son preferentemente polímeros, con particular preferencia polietilenglicol (PEG) , sales, con particular preferencia sulfato de amonio, o solventes orgánicos, con particular preferencia etanol . Una forma sólida de un anticuerpo anti-EGFR de acuerdo con la invención se puede preparar mediante la adición de los reactivos de precipitación de acuerdo con la invención mencionados en el Ejemplo 1, de preferencia polímeros, tales como, con particular preferencia, polietilenglicol (PEG) en una concentración de aproximadamente 0,1 a 99,9% (p/v),' con un peso molecular promedio de 200-80.000, preferentemente de 400 a 20.000, con particular preferencia de 400 a 8.000; sales, tales como, con particular preferencia, sulfato de amonio en, una concentración de 0,1-4,5 M, acetato de sodio trihidrato en una concentración de 0,1-4,5 M, citrato trisódico dihidrato en una concentración de 0,1-1,5 M, fosfato de potasio en una concentración de 0,1-1,2 M, cloruro de potasio en una concentración de 0,1 a 4,7 M, cloruro de sodio en una concentración de 0,1 a 6,1 M, hidrógeno-fosfato dipotásico en una concentración de 0,1 a 3,0 M, hidrógeno-fosfato disódico dihidrato en una concentración de 0,1 a 0,5 M, o solventes orgánicos, tales como, con particular preferencia, etanol en una concentración de 0,1-99,9% (v/v) , o sus mezclas, y coadyuvantes, buffers y/o estabilizantes, a una solución que comprende anticuerpos de acuerdo con la invención en un método discontinuo, e incubar la mezcla a los valores de pH y temperatura mencionados en el Ejemplo 1. Al final, los volúmenes definidos de soluciones madre que comprenden los reactivos de precipitación, coadyuvantes, buffers y/o estabilizantes mencionados en el Ejemplo 1 en concentración definida se agregan ventajosamente a una solución con una concentración definida de anticuerpos EGFR (de 0,01 a 150 mg/ml, preferentemente de 2 a 100 mg/ml, con particular preferencia aproximadamente de 5 a 20 mg/ml) , como se obtuvo en su preparación, y opcionalmente se diluyen con agua o buffer (por ejemplo buffer de citrato o de fosfato, en una concentración de 1 mM a 200 mM, preferentemente de 2 a 20 mM, con particular preferencia de aproximadamente 10 mM; también con la adición de agentes isotónicos tales como, por ejemplo, cloruro de potasio, cloruro de sodio en una concentración de 1-1.000 mM, preferentemente 40 mM-310 mM) hasta una concentración calculada previamente. De modo alternativo, los reactivos de precipitación, los coadyuvantes, los buffers y los estabilizantes de acuerdo con la invención también se pueden agregar en forma sólida. Si el anticuerpo está por sí mismo en dicho estado de agregación sólido, por ejemplo como liofilizado, las formas sólidas de los anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención se pueden preparar primero disolviendo los anticuerpos de acuerdo con la invención en agua o en una solución acuosa que comprende uno o más de los demás ingredientes, y luego agregando volúmenes definidos de soluciones madre que comprenden los reactivos de precipitación, coadyuvantes, buffers y/o estabilizantes mencionados en el Ejemplo 1 en concentración definida. Los reactivos de precipitación, los coadyuvantes, los buffers y/o los estabilizantes de acuerdo con la invención también se pueden añadir en los anticuerpos en estado de agregación sólido. Los anticuerpos de acuerdo con la invención también se pueden disolver ventajosamente de forma directa en una solución que comprenda todos los reactivos de precipitación, coadyuvantes, buffers y/o estabilizantes . La invención también cubre todos los hidratos, sales y derivados de los agentes antes mencionados, que con conocidos y aceptados por el experto en el arte . Uno o más de los agentes mencionados en la invención se pueden agregar ventajosamente durante o después de completar el proceso de precipitación y opcionalmente eliminarlos, a fin de realizar, p.ej., una etapa de purificación adicional.

Uno o más de los reactivos de precipitación, coadyuvantes, buffers y/o estabilizantes mencionados en la invención se pueden agregar ventajosamente durante o después de completar el proceso de preparación del anticuerpo. De preferencia, esto se realiza mediante la disolución del anticuerpo de acuerdo con la invención directamente en una solución acuosa que comprende un, una pluralidad o todos los reactivos de precipitación, coadyuvantes, buffers y/o estabilizantes en la etapa final de la purificación que tiene lugar después de su preparación. Para la obtención de una preparación farmacéutica de acuerdo con la invención, el o los respectivos ingredientes adicionales sólo se deben agregar en las respectivas cantidades menores o no agregarse . Se prefiere particularmente que el respectivo ingrediente se disuelva en una solución acuosa que comprenda todos los demás reactivos de precipitación, coadyuvantes, buffers y/o estabilizantes en la etapa final de la purificación del anticuerpo, después de la preparación correspondiente. En consecuencia, se puede obtener ventajosamente una solución que se envasa o liofiliza de modo directo. La solución resultante que comprende el anticuerpo respectivo se ajusta a un pH de 4 a 10, de preferencia un pH de 5 a 9, se filtra manteniendo la esterilidad y, de ser necesario, se seca por congelación. La reacción se lleva a cabo según los métodos conocidos por el experto en el arte en un solvente adecuado, en particular en un solvente inerte. Solventes inertes adecuados son etanol, glicerol, mezclas con agua o agua pura o agua que comprenda otros coadyuvantes tales como, por ejemplo, sales con acción amortiguadora o productora de isotonicidad . Se da particular preferencia al agua. El proceso aquí descrito se puede realizar de particular preferencia de manera discontinua. Las formas sólidas de los anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención y/o sus variantes y/o fragmentos preparados por el procedimiento de acuerdo con la invención se pueden convertir con particular preferencia en la proteína de anticuerpo biológicamente activa mediante su disolución o suspensión en medio acuoso. Por último, un anticuerpo y/o una de sus variantes y/o fragmentos disueltos o suspendidos en solución acuosa con particular preferencia se precipita mediante un reactivo de precipitación mencionado en el Ejemplo 1, y se separa el producto de precipitación. De acuerdo con la elección de la concentración del reactivo de precipitación, se obtienen precipitados amorfos o cristales. De preferencia, se obtienen precipitados con una concentración relativamente elevada del reactivo de precipitación, mientras que de preferencia se obtienen cristales con una concentración relativamente baja del reactivp de precipitación. En consecuencia, mediante la correcta elección de la concentración del reactivo de precipitación, la concentración de la proteína, los demás agentes de acuerdo con la invención, el pH y la temperatura, se puede dirigir la reacción en la dirección deseada. Los Ejemplos 2 y 3 muestran condiciones ilustrativas de cristalización para Mab C225 (Erbitux™) , y los Ejemplos 4 y 5 muestran condiciones ilustrativas de precipitación. También se pueden combinar el proceso de precipitación de acuerdo con la invención y el proceso de cristalización de acuerdo con la invención. Las temperaturas de reacción adecuadas son las temperaturas de -10 a 40°C, preferentemente de 0 a 25°C y con preferencia muy particular de 4 a 20°C. La presión utilizada es preferentemente de 1 a 20 bar, con particular preferencia es presión atmosférica. El pH utilizado varía preferentemente entre 4 y 10. La duración de la reacción depende de las condiciones de reacción seleccionadas. En general, la duración de la reacción es de 0,5 horas a 10 días, preferentemente de 1 a 24 horas, con particular preferencia de 2 a 12 horas . Por solvatos de las formas sólidas de acuerdo con la invención se entienden productos de adición de moléculas de solventes inertes sobre las formas sólidas, de acuerdo con la invención, que se forman debido a sus fuerzas de atracción mutuas. Son solvatos, por ejemplo, los hidratos, tales como monohidratos o dihidratos, o los alcoholatos, es decir, compuestos de adición con alcoholes, tales como, por ejemplo, con etanol . Las formas sólidas resultantes de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención se pueden separar de ' la correspondiente solución en la cual se prepararon (por ejemplo por centrifugación y lavado) y, tras la separación se pueden almacenar en una composición distinta o permanecer directamente en la solución de la preparación. Las formas sólidas obtenidas de acuerdo con la invención también se pueden recuperar en los solventes deseados para el uso particular. Las formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención son preferentemente biológicamente activas tras la redisolución o la resuspensión, y la desnaturalización de los anticuerpos no ocurre preferentemente en el proceso de acuerdo con la invención. Asi, se mantiene la eficacia biológica de la proteina. De modo similar se halló, sorprendentemente, que se pueden preparar formulaciones farmacéuticamente estables con la ayuda de formas sólidas de los anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención. De preferencia, estas formulaciones tienen mayor estabilidad a las influencias fisicoquímicas, tales como, por ejemplo, oxidación, estrés mecánico, valores de pH y de temperatura desfavorables, que las soluciones proteicas convencionales de anticuerpos. Una estabilidad comparable sólo se puede obtener de otro modo mediante métodos de alto costo y con gran consumo de tiempo tales como, por ejemplo, la adición de estabilizantes, almacenamiento en frío, congelamiento o secado por congelación. La elevada estabilidad facilita preferentemente el almacenamiento más simple y menos costoso, el transporte y la preparación de formulaciones farmacéuticamente valiosas, tales como, por ejemplo, formulaciones listas para usar, formulaciones con liberación retardada del ingrediente activo, o liberación controlada durante un período extendido.

En consecuencia, la invención también se refiere a formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención como medicamentos estables en almacenamiento . La invención también se refiere con particular preferencia a preparaciones farmacéuticas que comprenden al menos una forma sólida de un anticuerpo anti-EGFR de acuerdo con la invención en forma de precipitado no cristalino, precipitado cristalino o en forma disuelta o suspendida, y opcionalmente excipientes y/o coadyuvantes y/u otros ingredientes farmacéuticamente activos. Las preparaciones farmacéuticas de acuerdo con la invención pueden comprender, en consecuencia, formas sólidas de acuerdo con la invención en forma precipitada, es decir, como precipitado o como cristal, o en forma redisuelta o resuspendida . En consecuencia, la invención también se refiere a preparaciones farmacéuticas que comprenden al menos un precipitado y/o cristal de un anticuerpo anti-EGFR, preferentemente de un anticuerpo anti-EGFR monoclonal, con particular preferencia Mab C225 (cetuximab) o Mab h.425 (EMD 72000) y/o sus variantes o fragmentos en forma de precipitado, redisuelto o suspendido, así como opcionalmente excipientes y/o coadyuvantes y/u otros ingredientes farmacéuticamente activos . Las formas sólidas de los anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención permiten preferentemente la preparación de formulaciones muy concentradas, sin que tenga lugar la indeseable agregación de los anticuerpos de acuerdo con la invención o la indeseable alta viscosidad, como se puede observar en el caso de soluciones proteicas convencionales muy concentradas. En consecuencia, las soluciones listas para usar, con elevado contenido de ingrediente activo se pueden redisolver o resuspender en solventes acuosos o en un medio acuoso con la ayuda de formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención. Las formulaciones en extremo concentradas de ingredientes activos de proteínas han tenido recientemente un gran aumento. La mayoría de los anticuerpos empleados para la terapia se usan en dosis en la región de mg/kg. Una dosis elevada y los pequeños volúmenes que se deben administrar (por ejemplo de aproximadamente 1 a 1,5 mi para la administración por vía subcutánea) demuestra la demanda de preparaciones proteicas muy concentradas, con concentraciones superiores a 100 mg/ml. Además, las formulaciones proteicas muy concentradas tienen considerables ventajas en los ensayos preclínicos para la investigación de la aceptabilidad y la eficacia in vitro e in vivo (en un modelo animal) , en ensayos clínicos para la investigación de la aceptabilidad y la eficacia en humanos y en el uso clínico del producto (en particular para la administración por vía subcutánea) . Sus ventajas consisten, en particular, en que se usa un volumen relativamente pequeño de la preparación. En contraste con la infusión o la inyección de medicamentos proteicos con una concentración relativamente baja, esto permite, por ejemplo, la administración por vía subcutánea de medicamentos proteicos para el paciente . La administración por vía subcutánea de medicamentos proteicos puede deberse a diversas causas. Por ejemplo, se puede desear la dirección a un blanco específico en conexión con una "ventana terapéutica". Además, la administración por vía subcutánea tiene la ventaja de que el paciente puede hacerse cargo de la administración por sí mismo, sin depender de personal médico. El ejemplo de la insulina muestra con claridad estas ventajas. Sin embargo, dado que las inyecciones para la administración por vía subcutánea tiene un máximo de 1-1,5 mi, a menudo se necesitan formulaciones proteicas muy concentradas, que contienen más de 100 mg/ml. Sorprendentemente, se pueden obtener preparaciones farmacéuticas muy concentradas que permiten concentraciones de proteína de preferentemente 10-200 mg/ml, con particular preferencia de 50-150 mg/ml, en una formulación líquida, con la ayuda de formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención. Esto era inesperado, ya que la tendencia a la inestabilidad es mucho mayor en formulaciones proteicas muy concentradas que en formulaciones proteicas diluidas (Fields, G. , Alonso, D. , Stiger, D . , Dill, K. (1992) "Theory for the aggregation of proteins and copolymers . " J. Phys . Chem. 96, 3974-3981) . La densidad de empaquetamiento de las moléculas de proteína está aumentada con la concentración proteica elevada. En consecuencia, se puede suponer que hay mayor cantidad de colisiones, y que se pueden producir ocasionales asociaciones proteicas. Por lo general, este proceso tiene lugar por mecanismos de nucleación y crecimiento, en donde los núcleos críticos a menudo son proteínas asociadas solubles que, sin embargo, se pueden convertir rápidamente en precipitados de proteína insoluble (proteína desnaturalizada) (Reithel, J. F. (1962) "The díssociation and association of protein structures", Adv. Protein Chem. 18, 123). El tamaño de los agregados proteicos aumenta con el incremento de la concentración de proteínas, como ya se demostró para la ß-lactoglobulina (Roefs, S. P. F.

M. , De Kruif, K. G. (1994) "A model for the denaturation and aggregation of ß-lactoglobulin. " por Eur. J. Biochem. 226, 883-889) . El límite de las formulaciones muy concentradas de inmunoglobulina es normalmente de 2-50 mg/ml (Humira®) en formulaciones líquidas de anticuerpos listas para usar. Con las formas sólidas de acuerdo con la invención, sin embargo, sea pueden preparar formulaciones muy concentradas estables, lo cual era inesperado. En consecuencia, la etapa de precipitación o de cristalización puede dar una formulación de anticuerpo estable altamente concentrada que, después de la resuspensión o la redisolución, tiene menor viscosidad, comparada con las formulaciones de anticuerpos líquidas de la misma concentración, lo que así simplifica el manejo en el caso de la administración por vía parenteral. En consecuencia, la invención también se refiere a preparaciones farmacéuticas que comprenden al menos una forma sólida de un anticuerpo anti-EGFR de acuerdo con la invención y/o una de sus variantes y/o fragmentos en forma de precipitado no cristalino, precipitado cristalino o en forma disuelta o suspendida, donde el anticuerpo presente es biológicamente activo, caracterizado porque la concentración de anticuerpo es preferentemente de 10-200 mg/ml, con particular preferencia de 50-150 mg/ml. La invención también se refiere a un proceso para la producción de una preparación farmacéutica altamente concentrada de acuerdo con la invención, caracterizada porque al menos una forma sólida de un anticuerpo anti-EGFR de acuerdo con la invención y/o una de sus variantes y/o fragmentos se disuelve o se resuspende en una solución de acuerdo con la invención, y la concentración de anticuerpo es preferentemente de 10-200 mg/ml, con particular preferencia de 50-150 mg/ml. Se pueden producir preparaciones acuosas por disolución o suspensión de formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención en una solución acuosa y opcionalmente agregar coadyuvantes. Hasta el momento se agregan ventajosamente volúmenes definidos de soluciones madre que comprenden dichos coadyuvantes en concentraciones definidas a una solución o suspensión con una concentración definida de formas sólidas de acuerdo con la invención, y la mezcla se diluye opcionalmente con agua hasta la concentración calculada previamente. De modo alternativo, los coadyuvantes se pueden agregar en forma sólida. Las cantidades de soluciones madre y/o de agua necesarias en cada caso se pueden añadir luego a la solución o suspensión acuosa obtenida. Las formas sólidas de los anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención también .se pueden disolver o suspender venta osamente de manera directa en una solución que comprende todos los demás coadyuvantes . Se preparan soluciones o suspensiones que contienen anticuerpos con un pH de 4 a 10, preferentemente con un pH de 5 a 9, y una osmolalidad de 250 a 350 mOsmol/kg ventajosamente a partir de las formas sólidas de acuerdo con la invención, por reconstitución con solventes acuosos. La preparación resuspendida o redisuelta se puede administrar entonces de forma directa, sustancraímente sin dolor, por via intravenosa, intraarterial y también subcutánea. Además, la preparación también se puede agregar a soluciones para infusión, tales como, por ejemplo, solución de glucosa, solución fisiológica isotónica o solución de Ringer, que también puede contener otros ingredientes activos, lo que permite la administración de cantidades relativamente grandes de ingredientes activos . Las preparaciones farmacéuticas de acuerdo con la invención también pueden comprender mezclas de precipitados y/o cristales de acuerdo con la invención en forma de precipitado o cristal y/o redisuelta o resuspendida. Las preparaciones de acuerdo con la invención son fisiológicamente bien toleradas, fáciles de preparar, se pueden administrar con precisión y son preferentemente estables con respecto a los ensayos, productos de descomposición y agregados durante el almacenamiento y transporte y durante múltiples procesos de congelación y descongelación. Con preferencia, se pueden almacenar de forma estable durante un período de al menos tres meses a dos años a temperatura de refrigerador (2-8 °C) y a temperatura ambiente (23-27 °C) y 60% de humedad relativa ambiente (RH) . Sorprendentemente, las preparaciones de acuerdo con la invención son preferentemente estables en almacenamiento de al menos seis meses aún con temperaturas y humedades ambiente elevadas, por e emplo a una temperatura de 40°C y 75% de humedad relativa ambiente . Por ejemplo las formas sólidas de acuerdo con la invención se pueden almacenar de forma estable por secado y cuando es necesario se convierten en una preparación farmacéutica lista para usar por disolución o suspensión. Entre los posibles métodos de secado se cuentan, p . ej . , sin limitaciones, secado bajo gas nitrógeno, secado en horno de vacío, liofilización, lavado con solventes orgánicos y posterior secado al aire, secado en lecho líquido, secado en lecho fluido, secado por rocío, secado por rodillo, secado en capas , secado al aire a temperatura ambiente y otros métodos . El término "cantidad efectiva" denota la cantidad de un medicamento o de un ingrediente farmacéutico activo que causa una respuesta biológica o médica en un tejido, sistema, animal o humano que busca o es de interés, por ejemplo, para un investigador o médico . Además, el término "cantidad terapéuticamente efectiva" denota una cantidad que, comparada con un sujeto correspondiente que no recibió dicha cantidad, tiene las siguientes consecuencias: mejor tratamiento, curación, prevención o eliminación de una enfermedad, síndrome, estado patológico, molestia, trastorno o prevención de efectos secundarios o también la reducción del progreso de una enfermedad, molestia o trastorno. El término "cantidad terapéuticamente efectiva" también abarca las cantidades que son efectivas para aumentar la función fisiológica normal. Los medicamentos se pueden administrar en forma de dosis unitarias que comprenden una cantidad predeterminada de ingrediente activo por unidad de dosis. Una unidad de este tipo puede comprender, por ejemplo, de 0,5 mg a 1 g, preferentemente de 1 mg a 800 mg, de un ingrediente activo de acuerdo con la invención, según el estado patológico tratado, el método de administración y la edad, el peso y la salud del paciente. Las formulaciones unitarias de preferencia son las que comprenden una dosis o subdosis diaria, según se indicó antes, o una de sus fracciones de ingrediente activo. Además, este tipo de medicamentos se pueden preparar por medio de uno de los procesos generalmente conocidos en el sector farmacéutico . Los medicamentos se pueden adaptar para la administración por alguna vía de preferencia, por ejemplo por vía oral (incluyendo bucal o sublingual) , rectal, pulmonar, nasal, tópica (incluyendo bucal, sublingual o transdérmica) , vaginal o parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular/ intravenosa o intradérmica) . Los medicamentos de este tipo se pueden preparar mediante todos los procesos conocidos en el sector farmacéutico, por ejemplo, por combinación del ingrediente activo con el o los excipientes o coadyuvantes. La administración parenteral es preferentemente adecuada para la administración de los medicamentos de acuerdo con la invención. En el caso de la administración parenteral, se prefieren particularmente las administraciones intravenosa y subcutánea. En el caso de la administración intravenosa, la inyección se puede aplicar directamente o también como adición a soluciones por infusión. Los medicamentos para la administración por vía subcutánea son particularmente adecuados, dado que se pueden preparar formulaciones estables muy concentradas con la ayuda de formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención. De ese modo, se pueden obtener las formulaciones muy concentradas necesarias para la administración parenteral o subcutánea, y los pequeños volúmenes que se pueden administrar . La administración por via subcutánea tiene la ventaja de que el paciente se puede administrar a sí mismo el medicamento, sin necesidad de ayuda médica experta. Las formas sólidas de los anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención también son adecuados para la preparación de medicamentos para administrar por vía parenteral con liberación lenta, sostenida y/o controlada del ingrediente activo. Los precipitados y/o cristales de acuerdo con la invención son preferentemente en forma de una suspensión que se disuelve durante un período extendido y/o controlado y se encuentra entonces en el estado nativo y efectivo. Las formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención también son, por lo tanto, adecuadas para la preparación de formulaciones de liberación retardada, que son ventajosas para el paciente, dado que la administración sólo es necesaria a intervalos relativamente prolongados . Las preparaciones farmacéuticas de acuerdo con la invención también se pueden inyectar directamente en el tumor y así desarrollar su efecto directamente en el sitio de acción según se pretende . Los medicamentos adaptados para la administración parenteral incluyen soluciones para inyección acuosas y no acuosas estériles que comprenden antioxidantes,, buffers, bacteriostáticos y solutos, a través de los cuales la formulación es isotónica con la sangre del receptor que debe ser tratado; así como suspensiones estériles acuosas y no acuosas, que pueden comprender medios de suspensión y espesantes . Las formulaciones se pueden administrar en contenedores de dosis única o múltiple, p.ej. ampollas selladas y viales, y almacenar en estado seco por congelación (liofilizado) por lo que sólo es necesario agregar el portador liquido estéril, por ejemplo agua para inyecciones, inmediatamente antes de usar. Las soluciones y suspensiones para inyección preparadas de acuerdo con la formulación se pueden producir a partir de polvos estériles, granulos y comprimidos . Las formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención, opcionalmente en forma redisuelta, también se pueden administrar en forma de sistemas de suministro de liposomas, tales como, por ejemplo, pequeñas vesículas unilaminares , grandes vesículas unilaminares y vesículas multilaminares . Los liposomas se pueden formar a partir de diversos fosfolípidos tales como, por ejemplo, colesterol, estearilamina o fosfatidilcolinas . Las formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención y sus variantes en forma de precipitado, redisueltas o suspendidas también se pueden acoplar con polímeros solubles como excipientes medicinales dirigidos. Dichos polímeros pueden abarcar polivinilpirrolidona, copolímero de pirano, polihidroxipropilmetacrilamidofenol, polihidroxietilaspartamidofenol o polilisina de óxido de polietileno, sustituido con radicales palmitoílo. Las formas de anticuerpos anti-EGFR se pueden acoplar además a una clase de polímeros biodegradables adecuados para lograr la liberación lenta de un medicamento, p.ej. ácido poliláctico, poli-epsilon-caprolactona, ácido polihidroxibutírico, poliortoésteres, poliacetales , polidihidroxipiranos, policianoacrilatos , ácido poliláctico-co-glicólico, polímero tales como conjugados entre dextrano y metacrilatos, polifosfoésteres , diversos polisacáridos y poliaminas y poli-e-caprolactona, albúmina, quitosano, colágeno o gelatina modificada y copolímeros de hidrogeles con enlaces cruzados o de bloque anfipáticos. Los medicamentos adaptados para la administración transdérmica se pueden aplicar como emplastes para lograr un contacto extendido estrecho con la epidermis del receptor. Así, p.ej., se puede proveer el ingrediente activo desde el emplaste mediante iontoforesis , como se describe en términos generales en Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986). Los medicamentos adaptados para la administración tópica se pueden formular como ungüentos, cremas, suspensiones, lociones, polvos, soluciones, pastas, geles, rocíos, aerosoles o aceites . Para el tratamiento del ojo o de otros tejidos externos, por ejemplo la boca y la piel, las formulaciones se administran preferentemente como ungüento tópico o crema. En el caso de la formulación como ungüento, el ingrediente activo se puede emplear con una base de crema con parafina o miscible con agua. De modo alternativo, el ingrediente activo se puede formular para dar una crema con una base de crema de aceite en agua o una base de agua en aceite . Los medicamentos adaptados para la administración tópica del ojo incluyen gotas oftálmicas, donde el ingrediente activo se disuelve o se suspende en un excipiente adecuado, en particular un solvente acuoso. Los medicamentos adaptados para la administración rectal se pueden suministrar en forma de supositorios o enemas . Los medicamentos adaptados para la administración por 'inhalación abarcan polvos o vapores finamente particulados que pueden ser producidos mediante diversos tipos de dispensadores a presión con aerosoles, atomizadores o insufladores . A los fines de la presente invención, se da particular preferencia a los polvos de las formas sólidas de los anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención para la administración como inhalante. Los medicamentos adaptados a la administración vaginal se pueden suministrar como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones en aerosol. Es obvio que, además de los constituyentes particularmente mencionados con anterioridad, los medicamentos de acuerdo con la invención también pueden comprender otros agentes habituales en el sector con relación al tipo particular de formulación farmacéutica. La invención además se refiere a equipos (kits) compuestos por paquetes separados de a) una cantidad efectiva de un precipitado y/o cristal de un anticuerpo anti-EGFR, preferentemente de un anticuerpo anti-EGFR monoclonal, con particular preferencia de Mab C225 (cetuximab) o Mab h425 (EMD 72000) y/o de sus variantes o fragmentos en forma de precipitado, en forma redisuelta o suspendida y b) una cantidad efectiva de otro medicamento o ingrediente activo . El kit contiene recipientes adecuados, tales como cajas o cartones, frascos, bolsas o ampollas individuales. El equipo puede contener, por ejemplo, ampollas separadas, donde cada una contiene una cantidad efectiva de una forma sólida de acuerdo con la invención, opcionalmente en forma redisuelta, y una cantidad efectiva de otro ingrediente activo medicamentoso en forma disuelta o liofilizada. Una cantidad terapéuticamente efectiva de una forma sólida de un anticuerpo anti-EGFR de acuerdo con la invención depende de varios factores, tales como, por ejemplo, la edad y el peso, el estado patológico preciso que requiere tratamiento y su gravedad, la naturaleza de la formulación y el método de administración, y en última instancia es determinado por el médico o veterinario tratante. No obstante, una cantidad efectiva de un anticuerpo anti-EGFR de acuerdo con la invención para el tratamiento de un desarrollo neoplásico, por ejemplo cáncer intestinal o de mama, oscila generalmente en el rango de 0,1 a 100 mg/kg de peso corporal del receptor (mamífero) por día y, en particular, típicamente en el rango del 1 a 10 mg/kg de peso corporal por día. Por lo tanto, la cantidad real por día para un mamífero adulto que pesa 70 kg sería usualmente de entre 70 y 700 mg, donde esta cantidad se puede dar como dosis única por día o usualmente en una serie de subdosis (tales como, p.ej., dos, tres, cuatro, cinco o seis) por día, de modo que la dosis diaria total es la misma. El título de anticuerpo adecuado se determina mediante métodos conocidos por el especialista en el arte. La dosis propuesta para la administración suele ser suficiente para lograr la acción inhibidora del tumor buscada. No obstante, también se debe elegir la dosis más baja posible para no tener efectos secundarios indeseados, tales como reacciones cruzadas, reacciones anafilácticas o similares . La invención también se refiere al uso de formas sólidas de acuerdo con la invención para la preparación de un medicamento que comprende el anticuerpo biológicamente activo y/o una de sus variantes y/o fragmentos en forma de precipitado no cristalino, precipitado cristalino o en forma disuelta o suspendida. Los medicamentos de acuerdo con la invención se pueden usar, en particular, para la prevención y/o el tratamiento de enfermedades y estados patológicos. En consecuencia, la invención se refiere al uso de formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención, preferentemente anticuerpos monoclonales anti-EGFR, con. particular preferencia Mab C225 (cetuximab) o Mab h425 (EMD 72000) y/o sus variantes o fragmentos en forma de precipitado, redisuelta o suspendida para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades. Se ha demostrado en diversos estudios in vitro e in vivo que el bloqueo de EGFR por anticuerpos actúa contra los tumores en diversos niveles, por ejemplo por inhibición de la proliferación de células cancerosas, reducción de angiogénesis mediada por un tumor, inducción de apoptosis de células cancerosas y aumento de los efectos tóxicos de la radioterapia y la quimioterapia convencional. Los medicamentos que comprenden formas sólidas de los anticuerpos de acuerdo con la invención en forma redisuelta o suspendida son capaces de regular, modular o inhibir efectivamente EGFR y, por ello, se pueden emplear para la prevención y/o el tratamiento de enfermedades conectadas con la actividad de EGFR no regulada o alterada. En particular, las formas sólidas de los anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención puede emplearse, en consecuencia, en el tratamiento de ciertas formas de cáncer y en enfermedades causadas por angiogénesis patológica, tales como retinopatía diabética o inflamación. En consecuencia, la invención también se refiere al uso de formas sólidas de acuerdo con la invención en forma de precipitado, redisuelta o resuspendida para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades causadas, mediadas y/o propagadas por EGFR y/o por la transduccion de señales mediadas por EGFR. Los medicamentos de acuerdo con la invención son particularmente adecuados para el tratamiento y/o la prevención del cáncer, p.ej. carcinomas sólidos tales como p.ej., carcinomas (p.ej. de pulmón, páncreas, tiroides, vejiga o colon), enfermedades mieloides (p.ej. leucemia mieloide) o adenomas (por ejemplo adenoma colónica velludo) , angiogénesis patológica y migración de células metastáticas . Los medicamentos también son útiles para el tratamiento de inflamación crónica dependiente de la activación del complemento (Niculescu et al. (2002) "Immunol Res., 24: 191-199) e inmunodeficiencia inducida por VIH-1 (virus de inmunodeficiencia humana tipo 1) (Popik et al. (1998) J Virol, 72: 6406-6413). Además, los presentes medicamentos son adecuados como ingredientes activos farmacéuticos para mamíferos, en particular los seres humanos, para el tratamiento enfermedades inducidas por EGFR. El término "enfermedades inducidas por EGFR" se refiere a estados patológicos dependientes de la actividad de EGFR. EGFR interviene directa o indirectamente en las vías de transducción de señales de diversas actividades celulares, por ejemplo proliferación, adhesión y migración, así como la diferenciación. Las enfermedades asociadas con la actividad de EGFR incluyen la proliferación de células tumorales, la neovascularización patológica que favorece el crecimiento de tumores sólidos, la neovascularización en el ojo (retinopatía diabética, degeneración macular inducida por la edad y similares) e inflamación (psoriasis, artritis reumatoidea y similares) . Las enfermedades analizadas aquí se suelen dividir en dos grupos: enfermedades hiperproliferativas y no hiperproliferativas . En esta conexión, se consideran enfermedades no cancerosas: psoriasis, artritis, inflamación, endometriosis , cicatrización, hiperplasia benigna de próstata, enfermedades inmunológicas , enfermedades autoinmunes y enfermedades de inmunodeficiencia, de las cuales artritis, inflamación, enfermedades inmunológicas, enfermedades autoinmunes y enfermedades de inmunodeficiencia se suelen considerar enfermedades no hiperproliferativas . En esta conexión, se consideran enfermedades cancerosas el cáncer de cerebro, cáncer de pulmón, carcinoma de células escamosas, cáncer de vejiga, cáncer de estómago, cáncer de páncreas, cáncer de hígado, cáncer de riñon, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de cabeza, cáncer de cuello, cáncer de esófago, cáncer ginecológico, cáncer de tiroides, linfoma, leucemia crónica y leucemia aguda, y todos se suelen incluir en el grupo de enfermedades hiperprolifera-tivas . En particular, el desarrollo de las células cancerosas y en particular el crecimiento de células cancerosas mediado directamente o indirectamente por EGFR es una enfermedad que representa un objeto de la presente invención. Se puede demostrar que los medicamentos de acuerdo con la invención tienen acción antiproliferativa in vivo en un modelo de tumor de xenotrasplante . Los medicamentos de acuerdo con la invención se administran a un paciente con una enfermedad hiperproliferativa, por ejemplo para inhibir el desarrollo del tumor, para reducir la inflamación asociada a una enfermedad linfoproliferativa, para inhibir el rechazo a un trasplante o el daño neurológico debido a la reparación tisular, etc. Los presentes medicamentos son útiles para fines preventivos o terapéuticos . Tal como se usa en la presente, el término "tratar" se usa como referencia tanto a la prevención de enfermedades como al tratamiento de las molestias existentes. La prevención de la proliferación se logra por la administración de los medicamentos de acuerdo con la invención antes del desarrollo de la enfermedad evidente, por ejemplo, para evitar el crecimiento del tumor, prevenir el crecimiento metastático, reducción de la restenosis asociada con la cirugía cardiovascular, etc. De modo alternativo, los medicamentos se usan para el tratamiento de enfermedades continuas al estabilizar o mejorar los síntomas clínicos del paciente. El huésped o paciente puede pertenecer a cualquier especie de mamífero, por ejemplo, una especie de primate, y en particular humanos y roedores, por ejemplo ratones, ratas y hámsteres, conejos, caballos, vacas, perros, gatos, etc.. Los modelos animales son de interés para estudios de experimentación, pues proveen un modelo para el tratamiento de la enfermedad humana. La receptividad de cierta célula al tratamiento con los medicamentos de acuerdo con la. invención se puede determinar mediante pruebas in vitro. Típicamente, un cultivo de la célula se incuba con un medicamento de acuerdo con la invención con diferentes concentraciones durante un periodo suficiente para permitir que los ingredientes activos induzcan la muerte celular o inhiban la migración, por lo general entre aproximadamente una hora y una semana. Las pruebas in vitro se pueden llevar a cabo mediante células cultivadas provenientes de una muestra de biopsia. Luego se cuentan las células vitales remanentes después del tratamiento . La dosis varía según los medicamentos específicos utilizados, la enfermedad específica, el estado del paciente, etc. Típicamente, una dosis terapéutica es suficiente para reducir considerablemente la población celular indeseada en el tejido blanco, mientras se mantiene la vitalidad del paciente. Generalmente se continúa el tratamiento hasta obtener una reducción considerable, por ejemplo una reducción de al menos aproximadamente el 50% del recuento celular específico, y se puede continuar hasta que esencialmente no se detecten células no deseadas en el organismo. Existen diversos sistemas de ensayo para la identificación de inhibidores de EGFR. En el ensayo de proximidad de centelleo (Sorg et al., J. of . Biomolecular Screening, 2002. 7, 11-19) y el ensayo con placa flash se mide la fosforilación radiactiva de una proteína o péptido como sustrato, mediante ????. En presencia de un compuesto inhibidor se puede detectar una señal radiactiva reducida o nula. Además, las tecnologías de transferencia de energía de resonancia fluorescente homogénea por resolución en el tiempo (HTR-FRET) y polarización de fluorescencia (FP) son útiles como métodos de ensayo (Sills et al., J. of Biomolecular Screening, 2002, 191-214) . Otros métodos de ensayo no radiactivos por ELISA utilizan fosfo-anticuerpos específicos (fosfo-AB) . Los fosfo-AB sólo se unen al sustrato fosforilado. Esta unión se puede detectar mediante un segundo anticuerpo antioveja conjugado a peroxidasa por quimioluminiscencia (Ross et al., 2002, Biochem. J. , en imprenta, manuscrito BJ20020786) .

Existen muchas enfermedades y estados " patológicos asociados con la desregulación de la proliferación celular y la muerte celular (apoptosis) . Las enfermedades y los estados patológicos que se pueden tratar, prevenir o aliviar mediante medicamentos de acuerdo con la invención incluyen las enfermedades y los estados patológicos enumerados más adelante, pero sin limitaciones. Los medicamentos de acuerdo con la invención son útiles para el tratamiento y/o la prevención de varias enfermedades y estados patológicos diversos, que afectan la proliferación y/o la migración de células musculares lisas y/o células inflamatorias en la capa intima de un vaso, lo que da por resultado una restricción del flujo sanguíneo a través de dicho vaso, por ejemplo en lesiones oclusivas de la neoíntima. Entre las enfermedades oclusivas de vasos por trasplante se incluyen aterosclerosis, enfermedad vascular coronaria tras trasplante, estenosis de vena trasplantada, restenosis de prótesis perianastomótica, restenosis posterior a angioplastia o colocación de stents y similares . La presente invención se refiere al uso de medicamentos de acuerdo con la invención para el tratamiento o la prevención de cáncer. En consecuencia, la invención se refiere con particular preferencia al uso de formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de tumores y/o metástasis de tumores, donde el tumor se selecciona con particular preferencia ¦ del grupo formado por tumor de cerebro, tumor del tracto urogenital, tumor del sistema linfático, tumor de estómago, tumor de laringe, tumor de leucemia monocítica, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de pulmón de células pequeñas, cáncer de páncreas, glioblastoma y carcinoma de mama, sin restricciones . La invención también se refiere al uso de medicamentos de acuerdo con la invención para la preparación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades seleccionadas del grupo formado por enfermedades cancerosas que consiste en carcinoma de células escamosas, cáncer de vejiga, cáncer de estómago, cáncer de hígado, cáncer de riñon, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de cabeza, cáncer de cuello, cáncer de esófago, cáncer ginecológico, cáncer de páncreas, linfoma, leucemia crónica y leucemia aguda. Los medicamentos de acuerdo con la invención se pueden administrar a pacientes para el tratamiento de cáncer. Los presentes medicamentos inhiben la angiogénesis tumoral y, así, influyen sobre el desarrollo de los tumores (J. ak et al., Cáncer Research, 55: 4575-4580, 1995). Las propiedades inhibidoras de la angiogénesis de los medicamentos de acuerdo con la invención también son adecuados para el tratamiento de ciertas formas de ceguera asociada a la neovascularización de la retina. En consecuencia, la invención también se refiere al uso de formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención en sus formas de precipitado, redisuelta o suspendida para' la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades causadas, mediadas y/o propagadas por angiogénesis . Una enfermedad de este tipo que incluye angiogénesis es una enfermedad ocular, tales como vascularización retiniana, retinopatía diabética, degeneración macular inducida por la edad y similares. En consecuencia, la invención también se refiere al uso de formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención en sus formas de precipitado, redisuelta o suspendida para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades seleccionadas del grupo formado por vascularización de la retina, retinopatía diabética, degeneración macular inducida por la edad y/o enfermedades inflamatorias . La invención se refiere, además, al uso de medicamentos de acuerdo con la invención para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades seleccionadas del grupo formado por psoriasis, artritis reumatoidea, dermatitis de contacto, reacción de ipersensibilidad de tipo tardío, inflamación, endometriosis , cicatrización, hiperplasia benigna de próstata, enfermedades inmunológicas, enfermedades autoinmunes y enfermedades de inmunodeficiencia . La invención también se refiere al uso de medicamentos de acuerdo con la invención para el tratamiento y/o la prevención de osteopatxas seleccionadas del grupo formado por osteosarcoma, osteoartritis y raquitismo. Los medicamentos de acuerdo con la invención también se pueden usar para proporcionar efectos aditivos o sinérgicos en ciertas quimioterapias e irradiaciones existentes contra el cáncer, y/o se pueden usar para restablecer la eficacia de ciertas quimioterapias e irradiaciones existentes contra el cáncer. En consecuencia, la invención también se refiere al uso de formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención en sus formas de precipitado, redisuelta o suspendida para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades donde se administra una cantidad terapéuticamente efectiva de una forma sólida de acuerdo con la invención en sus formas de precipitado, redisuelta o suspendida en combinación con un compuesto del grupo formado por 1) modulador de receptor de estrógeno, 2) modulador de receptor de andrógeno, 3) modulador de receptor de retinoide, 4) agente citotóxico, 5) agente antiproliferativo, 6 ) inhibidores de prenil proteina transferasa, 7) inhibidores de HMG-CoA reductasa, 8) inhibidores de proteasa de VIH 9) inhibidores de la transcriptasa inversa, 10) inhibidores de receptor de factor de crecimiento y 11) inhibidores de angiogénesis . En consecuencia, la invención también se refiere al uso de formas sólidas de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención en sus formas de precipitado, redisuelta o suspendida para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de enfermedades en donde se administra una cantidad terapéuticamente efectiva de una forma sólida de acuerdo con la invención en sus formas de precipitado, redisuelta o suspendida en combinación con radioterapia y . un compuesto del grupo formado por 1) modulador de receptor de estrógeno, 2) modulador de receptor de andrógeno, 3) modulador de receptor de retinoide 4) agente citotóxico, 5) agente antiproliferativo, 6) inhibidores de prenil proteína transferasa, 7) inhibidores de HMG-CoA reductasa, 8) inhibidores de proteasa de VIH 9) inhibidores de transcriptasa inversa, 10) inhibidores de receptor de factor de crecimiento y 11) inhibidores de angiogénesis. En consecuencia, los medicamentos de acuerdo con la invención también se pueden administrar junto con otros agentes terapéuticos bien conocidos que se seleccionan por su particular utilidad contra la condición que se trata. Por ejemplo, en el caso de condiciones patológicas óseas, entre las combinaciones que serían favorables se incluyen las que contienen bisfosfonatos antirresortivos , tales como alendronato y risedronato, bloqueadores de integrina (como se define más adelante), tales como antagonistas a?ß3 , estrógenos conjugados utilizados en terapia de reemplazo hormonal, tales como Prempro°, Premarins y Endometrion°; moduladores selectivos de receptor de estrógenos (SERM) , tales como raloxifeno, droloxifeno, CP-336.156 (Pfizer) y lasofoxifeno, inhibidores de catepsina K e inhibidores de bomba de protones ATP. Los presentes medicamentos también son adecuados para la combinación con agentes anticancerosos conocidos. Estos agentes anticancerosos conocidos incluyen los siguientes: moduladores de receptor de estrogeno, moduladores de receptor de andrógenos, moduladores de receptor de retinoide, agentes citotóxicos, agentes antiproliferativos , inhibidores de prenil proteína transferasa, inhibidores de HMG-CoA reductasa, inhibidores de proteasa de VIH, inhibidores de transcriptasa inversa, inhibidores de factor de crecimiento e inhibidores de angiogénesis . Los presentes compuestos son particularmente adecuados para administrar al mismo tiempo que la radioterapia. "Moduladores de receptor de estrógenos" se refiere a compuestos que interfieren con o inhiben la unión del estrogeno al receptor, sin importar el mecanismo. Entre los ejemplos de moduladores de receptor de estrógenos se incluyen, sin limitaciones, tamoxifeno, raloxifeno, idoxifeno, LY353381, LY 117081, toremifeno, fulvestrant, 2,2-dimetilpropanoato de 4- [7- (2 , 2-dimetil-l~oxopropoxi-4-metil-2- [4- [2- (1-piperidinil) etoxi] fenil] -2H-l-benzopiran-3-il] fenilo, 4,4' -dihidroxibenzofenon-2 , 4-dinitrofenilhidrazona y SH646. "Moduladores de receptor de andrógeno" se refiere a compuestos que interfieren con o inhiben la unión de los andrógenos con el receptor, sin importar el mecanismo. Ejemplos de moduladores de receptor de andrógenos incluyen finasterida y otros inhibidores de 5 -reductasa, nilutamida, flutamida, bicalutamida, liarozol y acetato de abiraterona. "Moduladores de receptor de retinoide" se refiere a compuestos que interfieren con o inhiben la unión de los retinoides con el receptor, sin importar el mecanismo. Ejemplos de moduladores de receptor de retinoides incluyen bexaroteno, tretinoína, ácido 13-cis-retinoico, ácido 9-cis-retinoico, a-difluorometilo nitina, ILX23-7553, trans-N- ( ' -hidroxifenil) retinamida y W-4-carboxifenilretinamida . "Agentes citotóxicos" se refiere a compuestos que dan por resultado la muerte celular, principalmente por acción directa sobre la función celular, o inhiben o interfieren con la miosis celular, e incluyen agentes alquilantes, factores de necrosis tumoral, intercaladores, inhibidores de microtubulina e inhibidores de topoisomerasa .

Ejemplos de agentes citotóxicos incluyen, sin limitaciones, tirapazimina, sertenef, caquectina, ifosfamida, tasonermina, lonidamina, carboplatino, altretamina, prednimustina, dibromodulcitol , ranimustina, fotemustina, nedaplatino, oxaliplatino, temozolomida, heptaplatino, estramustina, tosilato de improsulfano, trofosfamida, nimustina, cloruro de dibrospidio, pumitepa, lobaplatino, satraplatino, profiromicina, cisplatino, irofulveno, dexifosfamida, cis-aminodicloro (2-metilpiridina) platino, bencilguanina, glufosfamida, GPX100, tetracloruro de (trans , trans , trans) -bis-mu- (hexan-1 , 6-diamin) -mu- [diamin-platino (II) ] bis [diamin (cloro) platino (II)], diarizidinil-espermina, trióxido de arsénico, 1- (ll-dodecilamino-10-hidroxiundecil) -3, 7-dimetilxantina, zorrubicina,' idarrubicina, daunorrubicina, bisantreno, mitoxantrona, pirarrubicina, pinafida, valrubicina, amrubicina, antineoplastona, 3 ' -desamino-3 ' -morfolino-13-desoxo-10-hidroxicarminomicina, anamicina, galarrubicina, elinafida, MEN10755 y 4-desmetoxi-3-desamino~3-azindinil-4~ metilsulfonildaunorrubicina (véase el documento WO 00/50032) .

Ejemplos de inhibidores de microtubulina incluyen paclitaxel, sulfato de vindesina, 3 ' , 4 ' -dideshidro-4 ' -desoxi-8 ' -norvincaleucoblastina, docetaxol, rizoxina, dolastatina, isetionato de mivobulina, auristatina, cemadotina, RPR109881, BMS184476, vinflunina, criptoficina, 2 , 3 , , 5 , 6-pentafluoro-N- (3-fluoro-4-metoxifenil) bencensulfonamida, anhidrovinblastina, N, N-dimetil-L-valil-L-valil-N-metil-L-valil-L-prolil-L-prolin-t-butilamida, TDX25.8 y BMS188797. Algunos ejemplos de inhibidores de topoisomerasa son to-potecano, hicaptamina, irinotecano, rubitecano, 6-etoxipro-pionil-3 ' , 4 ' -O-exobencilidencartreusin, 9-metoxi-N, N-dimetil-5-nitropirazolo [3,4, 5-kl] acridin-2- (6H) -propanamina, 1-amino-9-etil-5~fluoro-2 , 3-dihidro-9-hidroxi-4-metil-lH, 12H-ben~ zo [de] -piran [3' , 4 ' :b, 7] -indolizino [1, 2b] -quinolin-10 , 13- (9H, 15H) diona, lurtotecano, 7- [2- (N-isopropilamino) etil] - (20S) cam toteciña, BNP1350, BNPI1100, BN80915, BN80942, fosfato de etopósido, tenipósido, sobuzoxano, 2'-dimetilamino-2 ' -desoxietopósido, GL331, N- [2- (dimetilamino) etil] -9-hidroxi-5 , 6-dimetil-6H-pirido (4 , 3-b] carbazol-l-carboxamida, asulacrina, (5a, 5aB, 8aa, 9b) -9- [2- [N- [2- (dimetilamino) etil] -N-metilamino] etil] -5- [4-hidroxi-3 , 5-dimetoxifenil] -5 , 5a, 6,8, 8a, 9-hexohidrofuro (3 ' , ' : 6, 7) -nafto- (2 , 3-d) -1, 3-dioxol-6-ona, 2 , 3- (metilendioxi) -5-metil-7-hidroxi-8-metoxibenzo [c] fenantridinio, 6, 9-bis [ (2-aminoetil) amino] benzo [g] isoquinolin-5 , 10-diona, 5- (3-aminopropilamino) -7 , 10-dihidroxi-2- (2-hidroxietilaminometil) -6H-pirazolo [4,5, 1-de] acridin-6-ona, N- [1- [2- (dietilamino) etilamino] -7-metoxi-9-oxo-9H-tioxanten-4-ilmetil] formamida, N- (2- (dimetilamino) etil) cridin-4-carboxamida, 6- [ [2- (dimetilamino) etil] mino] -3-hidroxi-7H- indeno [2 , 1-c] quinolin-7-ona y dimesna. "Agentes antiproliferativos" incluyen oligonucleótidos de ARN y ADN antisentido, tales como G3139, ODN698, RVAS RAS, GEM231 e INX3001, y antimetabolitos tales como enocitabina, carmofur, tegafur, pentostatina, doxifluridina, trimetrexato, fludarabina, capecitabina, galocitabina, ocfosfato de citarabina, hidrato de fosteabina de sodio, raltitrexed, paltitrexid, emitefur, tiazofurina, decitabina, nolatrexed, pemetrexed, nelzarabina, 2 ' -desoxi-2 ' -metilidencitidina, 2'-fluorometilen-2 ' -desoxicitidina, N- [5~ (2 , 3-dihidrobenzofu-ril) sulfonil] -N' - (3 , -diclorofenil) urea, N6- (4-desoxi-4- [N2-- [2 (E) , 4 (E) -tetradecadienoil] glicilamino] -L-glicero-B-L-manoheptopiranosil] adenina, aplidina, ecteinascidina, troxacitabina, ácido 4- [2-amino-4-oxo-4 , 6, 7 , 8-tetrahidro-3H-pirimidino [5, 4-b] -1 , 4-tiazin-6-il- (S) -etil] -2 , 5-tienoil-L-glutámico, aminopterina, 5-fluorouracilo, alanosina, éster del ácido ll-acetil-8- (carbamoiloximetil) -4-formil-6-metoxi-14-oxa-l, 11-diazatetra-ciclo (7.4.1.0.0) tetradeca-2 , 4 , 6-trien-9-il-acetico, swainsonina, lometrexol, dexrazoxano, metioninasa, 2 ' -ciano-2 ' ~desoxi-N4-palmitoil-l-B-D-arabinofuranosil-citosina y tiosemicarbazona de 3-ami-nopiridin-2-carboxaldehído . "Agentes antiproliferativos" también incluyen anticuerpos monoclonales contra factores de crecimiento distintos de los enumerados antes bajo "inhibidores de angiogénesis" , tales como trastuzumab, y genes supresores de tumores, tales como p53 que se pueden proveer a través de una transferencia génica mediada por virus recombinante (véase patente US N° 6.069.134, p.ej.). Los medicamentos de acuerdo con la invención también se pueden administrar en combinación con todos los demás anticuerpos terapéuticos conocidos por los expertos en el arte o los ingredientes farmacéuticos activos que son adecuados en conexión con las enfermedades antes mencionadas .

Además, las formas sólidas según la invención de los anticuerpos de acuerdo con la invención en sus formas de precipitado, redisuelta o suspendida se pueden usar para el aislamiento y la investigación de la actividad o la expresión de EGFR. Además, son particularmente adecuados para ser usados como métodos de diagnóstico de enfermedades relacionadas con la actividad no regulada o alterada de EGFR. En consecuencia, la invención también se refiere al uso de formas sólidas- de anticuerpos anti-EGFR de acuerdo con la invención en sus formas de precipitado, redisuelta o suspendida como activadores o inhibidores de EGFR, con particular preferencia como inhibidores de EGFR. Con fines diagnósticos, los anticuerpos de acuerdo con la invención pueden recibir, por ejemplo, una marca radiactiva. Un método de rotulado preferido es el método de yodogénico (Fraker et al., 1978) . Con fines diagnósticos, el anticuerpo usado con particular preferencia es el fragmento F(ab')2. Asi se obtienen excelentes resultados, lo cual significa que no es necesario restar el fondo. Los fragmentos de este tipo se pueden preparar mediante los métodos conocidos (por ejemplo, Herlyn et al., 1983) . En general se realiza la digestión con pepsina en pH ácido, y los fragmentos se separan de la IgG no digerida y de los fragmentos de cadenas pesadas mediante cromatografía de proteína A en Sepharose™. Los precipitados y/o cristales de acuerdo con la invención preferentemente exhiben una actividad biológica ventajosa, que se detecta con facilidad en los ensayos de enzima, como se describe en los ejemplos. En los ensayos basados en enzimas de este tipo, los anticuerpos de acuerdo con la invención preferentemente exhiben y causan un efecto inhibitorio, que se suele documentar mediante valores de IC50 en un rango adecuado, preferentemente en el rango micromolar, y más preferentemente en el rango nanomolar. Métodos de determinación Respecto de los métodos de determinación, la presente invención abarca todos los métodos de determinación conocidos por los expertos en el arte o de la bibliografía. Las estructuras cristalinas se pueden determinar, por ejemplo, respecto del espectro de difracción en la medición de la difracción por rayos X. En particular, las estructuras cristalinas de los anticuerpos de acuerdo con la invención se pueden determinar mediante estudios con microscopía mediante filtros polarizados . Otros métodos de determinación, . sin restricciones, abarcan las microfotograflas electrónicas. La determinación del tamaño de la proteína, la integridad estructural, la pureza o el patrón de glucosilación de las formas sólidas de acuerdo con la invención en sus formas de precipitado, redisuelta o suspendida abarcan, sin restricciones, SE-HPLC, mapeo peptídico (digestión) , secuencia de N-terminal, SDS-PAGE, gel de gradiente TRIS/glicina (no reductor) , el método FTIR (espectro infrarrojo de transformación de Fourier) , CD (dicroísmo circular) , espectroscopia RAMAN, tinción de hidratos de carbono (método PAS) , perfil de oligosacáridos, determinación de la composición de monosacáridos y enfoque isoeléctrico . La estabilidad de las formas sólidas o formulaciones de acuerdo con- la invención se pueden determinar, por ejemplo, sin restricciones, con la ayuda de programas de estabilización, por ejemplo almacenamiento a 25 °C y 60% de humedad relativa ambiente y a 40°C y 70% de humedad relativa ambiente durante un periodo extenso y determinación de la estabilidad o la integridad estructural de la proteína a intervalos regulares, por ejemplo mediante los métodos de determinación antes mencionados (SE-HPLC, FT-IR, SDS-PAGE (reductor o no reductor) ) .

Los métodos para la determinación de la actividad biológica o la eficacia de las formas sólidas de acuerdo con la invención en sus formas de precipitado cristalino, precipitado no cristalino, forma disuelta o suspendida abarcan, por ejemplo, sin limitaciones, ELISA, ensayos biológicos celulares, FTIR o CD . La determinación de la reducción de la tendencia a la agregación de las formas sólidas de acuerdo con la invención en sus formas de precipitado cristalino, precipitado no cristalino, disuelta o suspendida y, en consecuencia, la posibilidad de preparar formulaciones muy concentradas, el tamaño del cristal o el tamaño del precipitado abarcan, por ejemplo, sin limitaciones, la inspección visual, el análisis de partículas sub-visibles, nefelometría o turbidimetría o caracterización dinámica de la dispersión de la luz . Previa y posteriormente, todas las temperaturas están indicadas en °C. En los siguientes ejemplos, "elaboración convencional" significa que se agrega agua de ser necesario, y si es necesario se ajusta el pH entre 2 y 10, según la constitución del producto final. Ejemplo 1 : Agentes y condiciones de precipitación y/o cristalización que se pueden usar de acuerdo con la invención La siguiente lista incluye en cada caso todos los hidratos, sales y derivados viables relacionados de dichos compuestos que son conocidos por el especialista en el arte. 1. Reactivos de precipitación: 1.1 Sales: Por ejemplo, acetato de sodio trihidrato, cloruro de potasio, cloruro de sodio, citrato trisódico dihidrato, hidrógeno-fosfato dipotásico, hidrógeno-fosfato disódico dihidrato,, sulfato de amonio, acetato de amonio, bromuro de amonio, cloruro de amonio, citrato de triamonio, hidrógeno-citrato de diamonio, dihidrógeno-fosfato de amonio, hidrógeno-fosfato de diamonio; tartrato de diamonio, ácido cítrico monohidrato, imidazol, acetato de potasio, bromuro de potasio, citrato tripotásico monohidrato, dihidrógeno-fosfato de potasio, sulfato de potasio, acetato de magnesio tetrahidrato, bromuro de magnesio hexahidrato, cloruro de magnesio hexahidrato, sulfato de magnesio heptahidrato, dihidrógeno-fosfato sódico monohidrato, sulfato de sodio decahidrato, prolina, ácido succínico, acetato de zinc dihidrato, sulfato de zinc heptahidrato . 1.2 Polímeros : por ejemplo polietilenglicol (PEG) : ciclodextrinas , dextrano, carboximetilcelulosa sódica (Na-CMC) , poloxámero, ácido poliacrílico, polietilenglicol-monometiléter (mPEG) , polipropílenglicol (PPG) , alcohol polivinílico (PVA) , polivinilpirrolidona (PVP) . 1.3 Solventes orgánicos: por ejemplo, etanol, glicerol. 2. Coadyuvantes : por ejemplo, sustancias que modifican la viscosidad, detergentes (por ejemplo Tween8, Solutol° HS 15, Pluronice, Cremophor° EL, Avacel® 20, polioxietilensorbitano monooleato), agentes de reducción (glutatión 2-mercaptoetanol, ditiotreitol) , agentes de complejación (EDTA, EGTA) . 3. Buffers: por ejemplo, buffer de fosfato: fosfato de Na (o K) , también con adición de agentes isotónicos (por ejemplo NaCl (o KC1)), pH posible aproximadamente 6,0-8,2 buffer de citrato: citrato de Na o ácido cítrico, pH posible aproximadamente 2,2-6,5, también con adición de agentes isotónicos (por ejemplo, NaCl) ; también se pueden concebir otras sales para la isotonización buffer de succinato: pH aproximadamente 4,8 - 6,3 buffer de acetato.- acetato de sodio, pH aproximadamente 2,5-6 buffer de histidina: pH aproximadamente 6,0 - 7,8 ácido glutámico: pH 8,0 a 10,2 glicina (N, -bis (2- idroxietil) glicina) : pH aproximadamente 8, 6 a 10, 6 buffer de glicinato: pH aproximadamente 6,5 - 7,5 imidazol : pH 6,2 a 7,8 cloruro de potasio: pH aproximadamente 1,0 a 2,2 buffer de lactato: pH aproximadamente 3,0 - 6,0 buffer de maleato: pH aproximadamente 2,5-5,0 buffer de tartrato: pH aproximadamente 3,0 - 5,0 TRIS: pH aproximadamente 6,8 - 7,7 buffer.de fosfato/citrato 4. Intervalo del pH El pH teóricamente concebible es pH 4 - 10, preferentemente pH 5-9. 5. Intervalo de temperatura: El intervalo de temperatura teóricamente concebible es la temperatura de -10°C a 40°C, preferentemente de 0 a 25°C, con particular preferencia de 4°C a 20°C. 6. Estabilizantes: 6.1 Aminoácidos : por ejemplo, arginina, ornitina, lisina, histidina, ácido glutámico, ácido aspártico, isoleucina, leucina, alanina, fenilalanina, tirosina, triptófano, metionina, serina, prolina. ¦6.2 Azúcares y alcoholes de azúcar por ejemplo, sacarosa, lactosa, glucosa, ma osa, maltosa, galactosa, fructosa, sorbosa, rafinosa, trehalosa, glucosamina, N-metilglucosamina, galactosamina, ácido neurámico. 6.3 Antioxidantes : por ejemplo, acetona, bisulfito de sodio, ácido ascórbico, ésteres de ácido ascórbico, butilhidroxianisol (???) , butilhidroxitolueno (BHT) , cisterna, ácido nordihidroguayarético (NDGA) , monotioglicerol, bisulfito de sodio, metabisulfito de sodio, tocoferóles, glutatión. 6.4 Conservantes: por ejemplo, m-cresol, clorocresol, fenol, alcohol bencílico, metilparabeno, propilparabeno, butilparabeno, clorobutanol, nitrato fenilmercúrico, acetato fenilmercúrico, timersal, cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio. 6.5 Ciclodextrinas : por ejemplo, hidroxipropil~fi~ciclodextrina, sulfobutiletil-ß-ciclodextrina, ?-ciclodextrina, -ciclodextrina. 6.6 Albúminas : por ejemplo, albúmina de suero humano (HSA) , albúmina de suero bovino (BSA) . 6.7 Alcoholes polihídricos ; por ejemplo, glicerol, etanol, manitol. 6.8 Sales por ejemplo, sales de acetato (por ejemplo acetato de sodio) , cloruro de magnesio, cloruro de calcio, trometamina, EDTA (por ejemplo EDTA sódico) . 7. Agentes isotónicos: por ejemplo, cloruro de sodio, cloruro de potasio, glucosa, glicerol, dextrosa, sulfato de sodio. Ejemplo 2; Cristalización de Erbitux™ con sulfato de amonio 500 µ? de proteína (20 mg/ml en fosfato 10 m , pH 8,0) 400 µ? de buffer (fosfato 10 mM, pH 8,0) 100 µ? de precipitante (solución saturada de sulfato de amonio en fosfato 10 mM, pH 8,0) La adición de agentes de precipitación a la -solución de proteínas se lleva a cabo en solución (procedimiento discontinuo) . Después de pipetear, la muestra se debería mezclar por "agitación manual" . El procedimiento se puede llevar a cabo a temperatura ambiente o a 4°C. Ej emplo 3 : Cristalización de Erbitux™ con etanol 500 µ? de proteína (20 mg/ml en citrato 10 mM, pH 5,5) 400 µ? de buffer (citrato 10 mM, pH 5,5) 100 µ? de precipitante (50% (v/v) de etanol en citrato 10 mM, pH 5,5) o 500 µ? de proteína (20 mg/ml en citrato 10 mM, pH 5,5) 500 µ? de precipitante (50% (v/v) de etanol en citrato 10 mM, pH 5,5) La adición de los reactivos de precipitación a la solución de proteínas se lleva a cabo en solución (procedimiento discontinuo) . Después de pipetear, la muestra se debería mezclar por "agitación manual" . El procedimiento se puede llevar a cabo a temperatura ambiente o a 4°C. Ejemplo 4.· Precipitación de Erbitux™ con sulfato de amonio 500 µ? de proteína (20 mg/ml en fosfato 10 mM, pH 8,0) 500 µ? de precipitante (solución saturada de sulfato de amonio en fosfato 10 mM, pH 8,0) o 200 µ? de proteína (20 mg/ml en fosfato 10 mM, pH 8,0) 800 µ? de precipitante (solución saturada de sulfato de amonio en fosfato 10 mM, pH 8,0) o 500 µ? de proteína (20 mg/ml en citrato 10 mM, pH 5,5) 500 µ? de precipitante (solución saturada de sulfato de amonio en citrato 10 mM, pH 5,5) o 200 µ? de proteína (20 mg/ml en citrato 10 mM, pH 5,5) 800 µ? de precipitante (solución saturada de sulfato de amonio en citrato 10 mM, pH 5,5) La adición de reactivos de precipitación a la solución de proteínas se lleva a cabo en solución (procedimiento discontinuo) . Después de pipetear, la muestra se debería mezclar por "agitación manual" . El procedimiento se puede llevar a cabo a temperatura ambiente o a 4°C E emplo S : Precipitación de Erbitux™ con PEG 500 µ? de proteina (20 mg/ml en fosfato 10 mM, pH 8,0) 500 µ? de precipitante (50% (p/v) de PEG 4000 en fosfato 10 mM, pH 8,0) o 500 µ? de proteína (20 mg/ml en citrato 10 mM, pH 5,5) 500 µ? de precipitante (50% (p/v) de PEG 4000 en citrato 10 mM, pH 5,5) o 500 µ? de proteina (20 mg/ml en fosfato 10 mM, pH 8,0) 500 µ? de precipitante (50% (p/v) de PEG 8000 en fosfato 10 mM, pH 8,0) o 500 µ? de proteína (20 mg/ml en citrato 10 mM, pH 5,5) 500 µ? de precipitante (50% (p/v) de PEG 8000 en citrato 10 mM, pH 5,5) La adición de los reactivos de precipitación a la solución de proteínas se lleva a cabo en solución (procedimiento discontinuo) . Después de pipetear, la muestra se debería mezclar por "agitación manual" . El procedimiento se puede llevar a cabo a temperatura ambiente o a 4°C. Ej emplo 6 : Investigación microscópica de la forma cristalina Los cristales obtenidos en los Ejemplos 1 y 2 fueron investigados por microscopía. Se detectaron tanto las propiedades birrefringentes que son típicas de los cristales como la capacidad de coloración con azul brillante de Coomassie que es típica de las proteínas. Se hallaron cristales con un tamaño de aproximadamente 50-200 µp?. Ejemplo 7 : Investigación de los precipitados para determinar si son nativos Los precipitados obtenidos en los Ejemplos 4 y 5 se redispersaron e investigaron por medio de espectrometría FT-IR. Los espectros de derivación 1-2 de la amida del material de partida antes de la precipitación y del precipitado redisperso eran congruentes . Ej emplo 8 : Rendimiento del método de cristalización descrito en el documento WO 02/072636 A fin de controlar los resultados de la solicitud de patente WO 02/072636, en primer lugar se intentó, en un experimento de control tal como se describe en el documento WO 02/072636, obtener cristales que pudieran usarse posteriormente como cristales de semilla por medio de la pantalla Wizard I. A pesar de que se obtuvieron cristales con forma de aguja en condiciones de precipitación con cloruro de calcio o acetato de calcio, igualmente se formaron, no obstante, en solución de buffer de citrato sin proteínas. Así, los cristales con forma de aguja descritos se obtienen tanto de la solución de proteínas como del control negativo (sin proteína)., empleando el procedimiento descrito en el documento WO 02/072636. En el mejor de los casos es obvio que presumiblemente sean inclusiones de proteínas en cristales del reactivo de precipitación. Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims (18)

1. REIVINDICACIONES
2. Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones: 1. Forma sólida de un anticuerpo anti-EGFR y/o una de sus variantes y/o fragmentos, que dan por resultado una proteína de anticuerpo biológicamente activa por disolución o suspensión en medio acuoso, caracterizada porque se obtiene por precipitación del anticuerpo y/o una de sus variantes y/o fragmentos disueltos o suspendidos en medio acuoso mediante un reactivo de precipitación. 2. Forma sólida de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizada porque se usan sales, polímeros y/o solventes orgánicos como reactivo de precipitación.
3. 3. Forma sólida de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizada porque se usa sulfato de amonio, acetato de sodio, citrato de sodio, fosfato de potasio, PEG y/o etanol como reactivo de precipitación.
4. 4. Forma sólida de acuerdo con una de las reivindicaciones 1-3, caracterizada porque es un precipitado.
5. 5. Forma sólida de acuerdo con una de las reivindicaciones 1-3, caracterizada porque es un cristal.
6. 6. Forma sólida de acuerdo con una o varias de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque el anticuerpo anti-EGFR es monoclonal y de origen murino o humano.
7. 7. Forma sólida de acuerdo con la reivindicación 6, caracterizada porque el anticuerpo anti-EGFR es de origen murino y es quimérico o humanizado.
8. 8. Forma sólida de acuerdo con la reivindicación 7, caracterizada porque el anticuerpo anti-EGFR es Mab C225 (cetuximab) o Mab h.425 (EMD 72000) .
9. 9. Procedimiento para la preparación de una forma sólida de un anticuerpo anti-EGFR y/o una de sus variantes y/o fragmentos que da como resultado una proteína de anticuerpo biológicamente activa por disolución o suspensión en medio acuoso, caracterizado porque el anticuerpo y/o una de sus variantes y/o fragmentos disueltos o suspendidos en solución acuosa se precipita por medio de un reactivo de precipitación, y se separa el producto de precipitación.
10. 10. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 9, caracterizado porque se usa sulfato de amonio, PEG y/o etanol como reactivo de precipitación.
11. 11. Procedimiento de acuerdo con la reivindicación 9 o 10, caracterizado porque el procedimiento se lleva a cabo de manera discontinua.
12. 12. Forma sólida de acuerdo con una o varias de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizada porque como medicamento es estable en almacenamiento.
13. 13. Preparación farmacéutica que comprende al menos una forma sólida de acuerdo con una o varias de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizada porque esta en forma de precipitado no cristalino, precipitado cristalino o en forma soluble o suspendida, y opcionalmente excipientes y/o coadyuvantes y/u otros ingredientes activos farmacéuticos.
14. 14. Preparación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 13, caracterizada porque la concentración de anticuerpos es de 10 - 200 mg/ml.
15. 15. Preparación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 14, caracterizada porque la concentración de anticuerpos es de 50 - 150 mg/ml.
16. 16. Uso de una forma sólida de un anticuerpo anti-EGFR y/o una de sus variantes y/o fragmentos de acuerdo con una o varias de las reivindicaciones 1 a 8, para preparar un medicamento que comprende el anticuerpo biológicamente activo y/o una de sus variantes y/o fragmentos en forma de precipitado no cristalino, precipitado cristalino o en forma disuelta o suspendida.
17. 17. Uso de acuerdo con la reivindicación 16, para preparar un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de tumores y/o metástasis tumorales .
18. 18. Uso de acuerdo con la reivindicación 17, en donde el tumor se selecciona del grupo integrado por tumor cerebral, tumor del tracto urogenital, tumor del sistema linfático, tumor estomacal, tumor laríngeo, leucemia monocitica, adenocarcinoma de pulmón, carcinoma de pulmón de células pequeñas, cáncer de páncreas, glioblastoma y carcinoma de mama.