CN1886118A - 抗-egfr抗体的固体形式 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及抗EGF受体(EGFR)的抗体的固体形式,特别是抗EGF受体的单克隆抗体,特别优选Mab C225(cetuximab)和Mabh425(EMD72000)的沉淀物和晶体,它们通过溶解或悬浮于水性或者非水性介质中而产生生物学活性抗体蛋白质,通过沉淀试剂将溶解或悬浮于水性介质中的抗体和/或它的变体和/或片段之一沉淀可以得到所述固体形式。本发明还涉及药物制剂,其包含处于沉淀的非结晶形式、沉淀的结晶形式或者溶解或悬浮形式的上述抗体的至少一种固体形式,和任选地,赋形剂和/或佐剂和/或其他药学活性成分,并且涉及根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式的制备方法。
Description
发明背景
本发明涉及抗EGF受体(EGFR)的抗体的固体形式,特别是抗EGF受体的单克隆抗体,特别优选Mab C225(cetuximab)和Mabh425(EMD72000)的沉淀物和晶体,它们通过溶解或悬浮于水性或者非水性介质中而产生生物活性抗体蛋白质,通过沉淀试剂将溶解或悬浮于水性介质中的抗体和/或它的变体和/或片段之一沉淀可以得到所述固体形式。本发明还涉及药物制剂,其包含处于沉淀的非结晶形式、沉淀的结晶形式或者溶解或悬浮形式的上述抗体的至少一种固体形式,和任选地,赋形剂和/或佐剂和/或其他药学活性成分,并且涉及根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式的制备方法。
生物技术领域的发展使得在过去十年期间可以通过重组DNA技术制备用于药学应用的一系列蛋白质。蛋白质药物,如单克隆抗体,用于如肿瘤治疗,例如特异免疫治疗或肿瘤接种。治疗性蛋白质比常规有机和无机活性组分更大而且更复杂,并且它们具有复杂的三维结构和许多官能团,其实现蛋白质的生物学活性或者可以引起不希望的效应。在制备、保存和运输过程中,蛋白质药物暴露于许多外界影响,这些影响对蛋白质活性成分具有稳定性减弱的作用。因此,有必要精确的研究特异性降解反应发生的原因和机制,以便能够稳定蛋白质,例如通过添加某些稳定性佐剂(见,如Manning M.C.,Patel K.,&Borchardt R.T.(1989)Stability of proteinpharmaceuticals.Pharm.Res.6,903-918)。
文献中公开了许多治疗性蛋白质的制剂。但是,对于各种蛋白质活性成分的药物制剂的组合物的要求是很不同的,并且通常,由于不同蛋白质的特定理化性质和降解反应,将已确定的蛋白质配方应用于新的蛋白质活性成分是不可能的。因此,这些新的活性成分的适当的药物配方和稳定形式仍然是一个主要的挑战。
以蛋白质的共价修饰来区分化学不稳定性。蛋白质初级结构通过化学键的断裂、新形成或再次形成而改变。新生成的物质一般与最初的天然蛋白质在生物学活性上完全不同。物理不稳定性在不破坏化学键的状态下改变分子的空间排列(二级、三级、和四级结构)。它们可以分为变性、缔合、聚集、沉淀和吸附。物理不稳定性是常见现象,特别对于相对大的蛋白质。沉淀物是肉眼可见的团聚体等同物,并且在力学术语上通过团聚体簇或缔合形成。通过超出溶解度极限并且由于沉淀,絮片在约10μm光学显微镜看到,在约50μm的直径下可以通过肉眼看到。蛋白质聚集可以是可逆的或不可逆的过程(见,例如,Cleland J.L.,Powell M.F.和Shire S.J.(1993)Thedevelopment of stable protein formulations:A close look at proteinaggregation,deamidation,and oxidation.Crit.Rev.Ther.Drug CarrierSyst.10,307-377)。
虽然先前的文献中将用盐、聚合物和有机溶剂进行蛋白质沉淀描述为蛋白质纯化的标准方法(Scopes R.K.(1997)Separation by precipitation.In:Protein Purification:Principles and Practice(ed Scopes R.K.),2edn,pp.41-71.Springer Verlag,New York),但是,这种方法的采用通常会导致蛋白质,尤其免疫球蛋白变性,以及伴随的活性降低和产量很低,特别使用盐和有机溶剂时(Phillips A.P.,Martin K.L.,和Horton W.H.(1984)Thechoice of methods for Immunoglobulin IgG purification:Yield and purityof antibody activity.Journal of immunological Methods 74,385-393)。相比之下,使用聚乙二醇(PEG)得到了更好的结果(A.Polson,G.M.Potgieter,J.F.Largier,和G.E.F.Joubert,F.J.Mears.The Fractionation of ProteinMixtures by linear Polymers of High Molecular Weight.Biochim.Biophys.Acta 82:463-475,1964)。
蛋白质晶体是从纯化过程(下游处理),优选酶的纯化过程了解到的,并且用于通过X-射线结构分析阐明蛋白质的三级结构(R.K.Scopes.Analysis for purity:Crystallization.In:ProteinPurification:Principles and Pracitice,编者:R.K.Scopes.New York:Springer Verlag,1997,p.284-301)。这里发生了蛋白质之间新的有序的分子间接触的形成。这是一个缓慢的过程,伴随迁移率的下降。溶液中蛋白质的浓度在这个过程中降低。
虽然文献中将用盐、聚合物和有机溶剂结晶蛋白质描述为阐明免疫球蛋白结构的标准方法(Harris L.J.,Skaletsky E.,和McPherson A.(1995)Crystallization of Intact Monoclonal Antibodies.Proteins:Structure,Function,and Genetics 23,285-289;Harris L.J.,Skaletsky E.,和McPhersonA.(1995)Crystallographic Structure of an Intact IgG1 MonoclonalAntibody.Journal of Molecular Biology 275,861-872;Edmundson A.B.,Guddat L.W.,和Andersen K.N.(1993)Crystal Structures of intact IgGantibodies.ImmunoMethods 3,197-210),然而,完整的,例如糖基化抗体的结晶是极端困难的,因为蛋白质大小、单个抗体分子的不同糖基化图式和相关的微观不均一性以及免疫球蛋白的结构柔性使得有序结合形成晶格变得更加困难或者甚至阻止其形成(McPherson A.(1999)Crystallization ofBiological Macromolecules,1edn.Cold Spring Harbor Laboratory Press,New York)。另外,抗体分子显示出聚集的倾向,同样使结晶化变得非常困难(McPherson A.(1999)Crystallization of Biological Macromolecules,1edn.Cold Spring Harbor Laboratory Press,New York)。此外,在结晶过程中抗体变性的危险使治疗性抗体的结晶对本领域技术人员无吸引力。所以迄今为止只有一些完整抗体被结晶出来用于阐明结构,并且至今只有三种抗体在制备规模上被结晶。因此,在生物大分子结晶数据库(BiologicalMacromolecule Crystallization Database)(Gilliland,G.L.,Tung,M.,Blakeslee,D.M.和Ladner,J.1994.The Biological MacromoleculeCryatallization Database,Version 3.0:New Features,Data,and the NASAArchive for Protein Crystal Growth Data.Acta Crystallogr.D50408-413.)列出的已被结晶的免疫球蛋白主要是Fab和Fc片段。
然而,WO02072636中描述的抗体晶体是通过复杂方法制备的,该方法使用接种并使用了在药物制剂中应该尽量避免的去污剂,还使用了佐剂,其中一些是毒理学上不可接受的。另外,在所描述的方法中不能控制颗粒的大小。在对照实验(见实施例8)中,用WO02072636中描述的方法,可以表明从蛋白质溶液和阴性对照(不含蛋白质)中都可以得到所描述的针形晶体。由此而知,这些针形晶体可能最多是沉淀试剂中的晶体形式的蛋白质内含物。
由于上述提到的原因,很清楚,对于本领域技术人员来说,抗体的结晶是极端困难的,并且文献中公开的结晶方法并不能应用于所有已知抗体,这是因为不同的已知抗体在一级、二级、三级结构、糖基化和结构柔性方面具有相当大的异质性。由于上述原因,制备治疗性抗体沉淀物同样地不受技术人员的注意,这特别因为是可以预料到不可逆的变性。
因此本发明的目的是为治疗性蛋白质,特别是抗体找到稳定形式,例如沉淀物或晶体,以使它们在沉淀、保存、运输和应用期间保持其功效。如上所述,由于已建立的蛋白质配方通常不能应用于新的蛋白质活性成分,本发明的另一个目的是为抗EGF受体的单克隆抗体如MabC225(cetuximab)和Mab h425(EMD 72000)找到新的稳定的配方。虽然包含Mab C225(cetuximab)或Mab h425(EMD 72000)的制剂已经在WO03053465和WO 03/007988中公开,但是,在WO03053465公开的制剂具有相对低的蛋白质浓度并且它们在室温下不是长期稳定的,在WO03/007988中公开的制剂同样地具有相对低的蛋白质浓度并且制剂(冻干物)必须在用前重构。因此,本发明的另一目的是找到含有高浓度上述抗体的稳定的药物制剂。
用于稳定蛋白质制剂的冷冻干燥方法公开在例如,WO9300807和WO9822136中,但是,冻干制剂的严重不利之处在于使用者必须在使用前重构冻干物,这代表在使用前制备中相当大的错误之源。由于与液体制剂相比加入了另外的制备方法,由于在方法研发(保证冻干期间的稳定性)、制备(制备成本持续时间)以及例如验证方面的附加工作,此方法是不利的。
因此本发明的目的是为上述抗体找到固体形式和制剂,其增加了对严酷条件,例如高温、空气潮湿和/或剪切力的稳定性,并且不包含毒理学上不可接受的佐剂。
发明概述
已经令人惊奇地发现可以制备上述抗体的固体形式,并且这些固体形式和由此制备的制剂没有现有技术提到的缺点。下述根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式和/或由此制备的制剂令人惊奇地具有一个或多个选自下面的优点:高稳定性、可控的颗粒大小、在重新溶解或重悬浮后是天然的和生物活性蛋白质、高纯度、不存在药理学上不可接受的试剂从而具有高安全性、好的耐受性和可以直接使用、低聚集倾向和因此可以制备高浓度制剂,以及与溶液相比,作为蛋白质悬浮液的制剂的低粘度。根据下述本发明的制备方法令人惊奇地具有一个或多个下述优点:简单、节省时间和成本、使用药学上可接受的试剂、高产量。因此,根据本发明的方法可以优选地以比文献中描述的技术更加简单、省时且划算的方式进行,因为只需加入一种沉淀试剂。
另外,将沉淀试剂加入适当的缓冲体系中的抗体溶液中,即,通过其它佐剂,例如去污剂稳定反应溶液不是必须的。在肠胃外施用的制剂中一般应该避免使用去污剂或将其减少到最小量,因为它们引起不能忽视的毒性和免疫原性潜能(Sweetana S.和Akers M.J.(1996)Solubility principlesand practices for parenteral drug dosage form development.PDA J.Pharm.Sci.Technol.50,330-342),并且它们还可以导致蛋白质二级结构的改变(Vermeer A.W.P.和Norde W(2000)The influence of the binding of lowmolecular weight surfactants on the thermal stability and secondarystructure of IgG.Colloids and Surfaces A:Physicochemical andEngineering Aspects 161,139-150)。因此,抗-EGFR抗体的所得固体形式可以直接用于药物,并且没必要为了去除药学不可接受的试剂而进行进一步纯化。对比之下,WO02072636中得到的晶体则不得不用复杂的方法除去药学上不可接受的试剂,例如CHES、咪唑、TRIS、氯化锰(II)、氯化锌(II)、硫酸铜(II)、2-丙醇、2-甲基-2,4-戊二醇、HEPES、硫酸锂、乙氧基乙醇或去污剂,如多乙氧基醚80或20,或者甚至不能完全除去上述不可接受的试剂。
令人惊奇地发现,如果抗EGF受体的抗体(抗-EGFR抗体),优选单克隆抗-EGFR抗体,特别优选Mab C225(cetuximab)或者Mab h425(EMD72000)在适当的pH值、适合的温度,在适当缓冲液存在下孵育,借助于某些沉淀试剂得到优选的稳定固体形式,所述沉淀试剂选自聚合物,优选聚乙二醇(PEG);盐,优选硫酸铵;或者有机溶剂,优选乙醇,或它们的混合物。
令人惊奇地发现,根据本发明方法得到的抗-EGFR抗体的固体形式,优选单克隆抗-EGFR抗体,特别优选Mab C225(cetuximab)或Mabh425(EMD72000),和/或它们的变体或片段的固体形式在再溶解后优选是天然的,并且优选以高产量获得。
因此,本发明涉及抗-EGFR抗体和/或其变体或片段的固体形式,其通过溶解或悬浮于水性介质中而产生生物活性抗体蛋白质,在适当缓冲液存在下,在适当的pH和适当的温度下,通过用选自聚合物,优选聚乙二醇(PEG),盐,优选硫酸铵、或者有机溶剂,优选乙醇,或它们的混合物的沉淀试剂将溶解或悬浮于水性介质中的抗体和/或它的变体和/或片段之一沉淀可以得到所述固体形式。
抗-EGFR抗体的固体形式
表达“根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式”优选指沉淀物或晶体,其通过溶解或悬浮于水性介质或非水性介质而产生生物活性抗体。按照下面描述的方法,通过沉淀溶解或悬浮于水性介质中的抗体获得根据本发明的固体形式。根据本发明的固体形式在μm和nm范围。
沉淀物:
对于根据本发明,术语沉淀物用来表示无定型非晶体结构或者聚集和缔合状态的固体形式。
晶体:
对于本发明,术语晶体用来表示晶体结构的固体形式。晶体结构可以用下面的方法检测。
沉淀的:
对于本发明,术语沉淀的用来表示沉淀形式的根据本发明的固体形式,即沉淀物形式或晶体形式,这取决于方法条件。
沉淀的晶体:
对于本发明,术语沉淀的晶体用来表示处于有序的晶体结构的根据本发明的固体形式。
沉淀的非晶体:
对于本发明,术语沉淀的非晶体用来表示根据本发明中的,处于无定型非晶体结构或处于聚集和缔合的状态的固体形式。
溶解的:
对于本发明,术语溶解的形式用来表示根据本发明的固体形式,其溶解或再溶解在根据本发明的溶液中。
悬浮的:
术语悬浮的形式用来表示根据本发明的固体形式,其悬浮或重悬浮于根据本发明的溶液中。
对于本发明,“水性介质”用来表示水或者水与适当的惰性溶剂和实施例1中提到的其它试剂,如缓冲剂、稳定剂或佐剂的混合物,所述水性介质具有这样的特性,即它们本身不导致抗体的沉淀或结晶,只有通过加入根据本发明的沉淀试剂才会发生沉淀或结晶。
对于本发明,“非水性介质”用来表示油或油与水或其它适当的惰性溶剂和实施例1中提到的其它试剂,如稳定剂或佐剂的混合物,所述非水性介质具有这样的特性,即根据本发明的非水性介质单独不导致抗体的沉淀或结晶,只有通过加入根据本发明的沉淀试剂才会发生沉淀或结晶。
关于根据本发明的抗-EGFR抗体和对于本发明,术语“生物学活性的”、“天然的”和“有效的”是表示根据本发明的抗-EGFR抗体甚至在转化成根据本发明的固体形式并随后的重溶解或重悬浮后都能够发挥其生物学效应,特别是结合EGFR;抑制配体特别是EGF与EGFR的结合;调节作用,特别是抑制EGFR介导的信号转导和对EGFR介导的疾病的预防或治疗。
具体地,将不会预期直接制备根据本发明的抗-EGFR抗体的晶体,因为抗体一般具有聚集强烈倾向,这使有序结合成晶格更加困难或甚至阻止其形成(McPherson A.(1999)Crystallization of Biological Macromolecules,1edn.Cold Spring Harbor Laboratory Press,New York)。尽管因为上述关于蛋白质结构、糖基化和结构片段柔性的不均一性,甚至抗体种类内的不均一性,本领域技术人员将预期根据本发明的抗体结晶中的困难,但是通过本发明的方法令人惊奇地得到了非常好的结果。
根据本发明的抗体的所得晶体的高稳定性的特征在于:没有发生颗粒形状和颗粒大小谱的改变,认为这种改变对于免疫原性副作用是至关重要的;也没有发生蛋白质一级结构或二级结构的改变。因此,根据本发明的方法可以提供了如下优点:所得晶体的颗粒大小优选是可控的;并且优选地得到稳定的三维晶体。晶体大小在μm和nm范围内。
抗-EGFR抗体:根据本发明的抗-EGFR抗体优选是单克隆的并且是鼠或人来源的;它们特别优选是鼠来源的并且是嵌合的或人源化的。抗表皮生长因子的受体(EGFR)的抗体特别优选为Mab C225(cetuximab)或Mab h425(EMD72000)和/或其变体或片段。在例如EP 0586002和J.Natl.Cancer Inst.1993,85:27-33(Mab 528)中描述了其他抗-EGFR的抗体。
Mab C225(cetuximab,ErbituxTM):Mab C225(cetuximab)是一种经临床证明的抗体,其结合EGF受体。Mab C225(cetuximab)是嵌合抗体,它的可变区是鼠来源的,恒定区是人来源的。它由Naramura等人,CancerImmuno.Immunotherapy 1993,37:343-349和在WO 96/40210A1中首次描述。
Mab h425(EMD 72000):Mab h425(EMD72000)是从鼠抗-EGFR抗体425(Mab 425)获得的一种人源化的单克隆抗体(Mab)(EP 0531472)。鼠单克隆抗体Mab 425在人的癌细胞系A431中产生,因为在这里它结合表皮生长因子受体(EGFR)的细胞外表位。已经发现它抑制EGF的结合(Murthy等人,1987)。在多种来源的恶性组织中发现EGFR表达增加,所以,Mab425是诊断和治疗性治疗人类肿瘤的可能的活性成分。从而,发现Mab 425在体外介导肿瘤细胞毒性,并在体外抑制鳞状细胞癌和结肠直肠癌细胞系的肿瘤生长(Rodeck等人,1987)。另外,有报道显示Mab 425结小鼠体内人恶性神经胶质瘤异种移植物(Takahashi等人,1987)。它的人源化和嵌合形式公开在,例如,EP 0531472;Kettleborough等人,Protein Engineering1991,4:773-783;Bier等人,Cancer Chemother Pharmacol.2001,47:519-524;Bier等人,Cancer Immunol.Immunother.1998,46:167-173中。Mabh425(EMD72000)是人源化的抗体(h425),其处于临床I/II期并且它的恒定区由一条κ链和一条人γ-1链组成(EP 0531472)。
人抗-EGFR抗体可以通过XenoMouse技术制备,如WO9110741、WO9402602和WO9633735中所描述的。通过这种技术制备正进行临床试验的抗体是例如,ABX-EGF(Abgenix,Crit.Rev.Oncol.Hematol.2001,38:17-23;Cancer Research 1999,59:1236-43)。
抗体:对于本发明,抗体或者免疫球蛋白在最广义上使用,并且具体涉及多克隆抗体和多特异性抗体(例如双特异抗体)和特别优选具有生物学活性的完整单克隆抗体(Mab)以及它们的变体和片段。此术语还包含异种抗体,其由两种或多种抗体或其片段组成和/或具有不同的结合特异性并相互结合。依据它们恒定区的氨基酸序列,抗体可以分为不同的抗体(免疫球蛋白)类别:IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。它们中的许多可以进一步细分成亚类(同种型),例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。抗体通常具有大约150kDa的分子量,由两条相同的轻链(L)和两条相同的重链(H)组成。单克隆抗体是从纯系细胞获得的。它们具有高特异性并抗一种表位,而多克隆抗体包括抗不同表位的不同抗体。单克隆抗体的制备方法包括例如,由Kohler和Milstein(Nature 256,495(1975))和由Burdon等人(1985)(“Monoclonal Antibody Technology,The Production andCharacterisation of Rodent and Human Hybridomas”.Eds,LaboratoryTechniques in Biochemistry and Molecular Biology,Volume 13,ElsevierScience Publishers,Amsterdam)描述的杂交瘤方法。特别地,它们还可以用已知的重组DNA技术制备(见,例如,US4816567)。通过如在Clackson等人(Nature,352:624-628(1991)和Marks等人(J.Mol.Biol.,222:58,1-597(1991))描述的技术,可以从噬菌体抗体文库分离单克隆抗体。
变体和片段:抗体的变体(突变蛋白)是结构相关的蛋白质,例如通过一级序列(氨基酸序列)的修饰、糖工程化(糖基化位点或结构的变体,以及去糖基化的蛋白质)、通过聚乙二醇化、通过在改进的宿主细胞中制备或通过其他技术获得的那些变体。根据本发明的变体不是仅限于上述例子,而是包括根据本发明抗体的本领域技术人员已知的所有变体。抗体的片段(部分节段)是例如通过木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、纤维蛋白溶酶进行限制性酶消化,或者通过基因工程制备部分片段而获得的抗体的切割产物。典型的部分节段是例如,二价F(ab’)2片段、单价Fab片段和Fc片段(Lottspeich F.,H.Zorbas(ed.).Bioanalytik,Heidelberg;Berlin:Spektrum AkademischerVerlag GmbH(1998)pp.1035)。根据本发明的片段不局限于于上述例子,而是包括根据本发明抗体的本领域技术人员已知的所有片段。
药物制剂:对于本发明,术语药物制剂(pharmaceutical formulation)与药物制剂(pharmaceutical preparation)是同义的。
如此处用到的“药学上耐受的”涉及药物、沉淀试剂、赋形剂、佐剂、稳定剂、溶剂和其它试剂,它们方便从中得到的药物制剂施用于哺乳动物,并且没有不希望的生理学副作用,如恶心、眩晕、消化问题等等。
对于肠胃外施用的药物制剂,对制剂的等渗性、euhydria和耐受性和安全性(低毒性)、所用佐剂和初级包装都有要求。令人惊奇的是,根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式优选具有可能直接使用的优点,因为所用沉淀试剂是生理学上可接受的试剂,因此,根据本发明的固体形式用于药物制剂之前,不必进行另外的纯化步骤以除去在毒物学上不能接受的试剂,例如,高浓度的有机溶剂或其它在毒物学上不能接受的佐剂。根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式的制备,优选同时以高产量得到高纯度的天然的和药学上可接受的蛋白质优选是简单、省时并且价廉的。
因此,本发明还涉及制备根据本发明的抗-EGFR抗体和/或它的变体和/或片段之一的固体形式的方法,所述固体形式通过溶解于或悬浮于水性介质中产生生物活性抗体蛋白质,所述方法的特征是通过沉淀试剂沉淀溶解或悬浮于水性溶液中的抗体和/或其变体和/或片段,并沉淀产物。用于根据本发明的方法中的沉淀试剂优选为聚合物,特别优选聚乙二醇(PEG);盐,特别优选硫酸铵;或者有机溶剂,特别优选乙醇。
可以向包含根据本发明的抗体的溶液中以分批方法加入根据本发明实施例1中所提到的沉淀试剂和佐剂、缓冲剂和/或稳定剂,并将混合物在实施例1中提到的pH值和温度下孵育制备根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式,所述沉淀试剂优选为聚合物,例如特别优选浓度在0.1到99.9%(w/v),平均分子量为200-80,000,优选400-20,000,特别优选400-8000的聚乙二醇(PEG);盐,如特别优选浓度在0.1-4.5M的硫酸铵;浓度在0.1-4.5M的三水合乙酸钠;浓度在0.1-1.5M的二水合柠檬酸三钠;浓度在0.1-0.2M的磷酸钾;浓度在0.1到4.7M的氯化钾;浓度在0.1-6.1M的氯化钠;浓度在0.1到3.0M的磷酸氢二钾;浓度在0.1到0.5M的二水合磷酸氢二钠;或有机溶剂,如特别优选浓度在0.1-99.9%(v/v)的乙醇,或它们的混合物。为此,将包含确定浓度的实施例1中提到的沉淀试剂、佐剂、缓冲剂、和/或稳定剂的保存液的确定体积有利地加入具有确定浓度的EGFR抗体的溶液中(0.01到150mg/ml,优选从2到100mg/ml,特别优选约5-20mg/ml),所述抗体的浓度如在其制备中所获得的,并且任选用水或缓冲液(例如柠檬酸或磷酸缓冲液,从2到200mM,优选2到20mM,特别优选约10mM的浓度;并且加入等渗试剂,例如1-1000mM,优选40mM-310mM的氯化钾、氯化钠)稀释到预先计算好的浓度。或者,可以以固体形式加入根据本发明的沉淀试剂、佐剂、缓冲剂和稳定剂。如果抗体本身处于为固体聚集状态,例如做为冻干物,那么可以通过首先将根据本发明的抗体溶解于水或者包含一种或多种另外成分的水溶液中,随后加入确定浓度的包含实施例1中提到的沉淀试剂、佐剂、缓冲剂和/或稳定剂的保存液的确定体积来制备根据本发明的抗EGFR抗体的固体形式。根据本发明的沉淀试剂、佐剂、缓冲剂和/或稳定剂还可以以固体聚集态加入。根据本发明的抗体可以有利地直接溶解于包含所有沉淀试剂、佐剂、缓冲剂和/或稳定剂的溶液中。
本发明还包括上述试剂的本领域技术人员所知道和可以想到的所有水合物、盐、以及衍生物。
本发明中提到的一种或多种试剂可以有利地在沉淀期间或者完成后加入,并且可以任选再次除去以便,例如,实施另外的纯化步骤。
本发明中提到的一种或多种沉淀试剂、佐剂、缓冲剂和/或稳定剂可以有利地在抗体制备过程中或者完成后加入。这可以优选地在制备完成后发生的纯化的最后一步中,通过将根据本发明的抗体直接溶解在包含一种、多数或者全部沉淀试剂、佐剂、缓冲剂和/或稳定剂的水溶液中进行。为制备根据本发明的药物制剂,各自其他成分仅仅必须以小量的加入,或者完全不加入。特别优选抗体制备完成后其纯化的最后一步中将各自成分溶解于包含所有其他沉淀试剂、佐剂、缓冲剂和/或稳定剂的水溶液中。因此,能够有利地获得待包装或者直接冻干的溶液。将包含各自抗体的所得溶液调整到4到10,优选5到9的pH值,过滤除菌,如果必要的话,冻干。
通过本领域技术人员已知的方法,在适合的溶剂,特别是惰性溶剂中进行所述反应。适合的惰性溶剂是乙醇、甘油、与水的混合物或者纯水或者包含其它佐剂,例如具有缓冲或等渗产生作用的盐的水。特别优选水。
这里所描述的方法可以特别优选地以批量的形式实施。以根据本发明的方法制备的根据本发明的抗-EGFR抗体和/或其变体和/或片段的固体形式可以特别优选地通过溶解或悬浮于水性介质中而转化成为生物活性抗体蛋白质。为此,溶解或悬浮于水溶液中的抗体和/或其变体和/或片段特别优选地通过实施例1中提到的沉淀试剂沉淀,并且分离沉淀产物。
取决于沉淀试剂浓度的选择,获得无定型沉淀或晶体。优选地,在沉淀试剂的相对高的浓度下得到沉淀,而优选在沉淀试剂的相对低的浓度下得到晶体。通过适当选择沉淀试剂的浓度、蛋白质的浓度、根据本发明的其它试剂、pH值和温度,可以将反应导向所希望的方向。实施例2和3给出了Mab C225(ErbituxTM)的说明性结晶条件,实施例4和5给出了说明性沉淀条件。根据本发明的沉淀方法和根据本发明的结晶方法还可以组合。
适合的反应温度是-10到40℃,优选0到25℃,非常特别优选4到20℃的温度。所使用的压力优选为1到20巴,特别优选大气压。所用pH值优选为4到10。反应持续时间取决于所选择的反应条件。一般,反应持续时间为0.5小时到10天,优选1到24小时,特别优选2到12小时。
术语根据本发明的固体形式的溶剂化物是用来表示惰性溶剂分子加合到根据本发明的固体形式,由于它们的相互吸引力而形成溶剂化物。溶剂化物是例如,水合物,如一水合物或二水合物,或者醇化物,即,与醇,例如,与乙醇的加成化合物。
根据本发明的抗-EGFR抗体的所得固体形式可以与它们在其中制备的相应溶液分离(例如通过离心和洗涤)并且,分离后可以以不同的组分保存,或者它们可以直接保留在制备溶液中。根据本发明的所得固体形式还可以为了特定用途而用所希望的溶剂吸收。根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式在再溶解后和重悬浮后优选具有生物活性,并且优选地,在根据本发明的方法中不发生抗体变性。因此,优选保留蛋白质的生物学功效。
同样地,令人惊奇地发现通过根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式可以制备稳定的药物制剂。这些制剂优选比抗体的常规蛋白质溶液对理化影响如,氧化、机械压力、不适合的pH值和温度具有更高的稳定性。否这,相当的稳定性通常只有通过昂贵合费时的方法,如加入稳定剂、冷藏、冷冻或冻干才能实现。高稳定性优选地方便更简单和更省钱的储藏、运输、和制备药学上有价值的制剂,例如,现成制剂、延迟释放活性成分的制剂或者在延迟时间内的控释制剂。
因此,此发明还涉及作为保存稳定药物的根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式。
本发明特别优选地还涉及药物制剂,其包含根据本发明的抗-EGFR抗体的至少一种固体形式,所述形式为沉淀的非结晶形式、沉淀的结晶形式或溶解或悬浮形式,还任选包含赋形剂和/或佐剂和/或其它药学活性成分。
因此,根据本发明的药物制剂可包含根据本发明的沉淀形式,即沉淀物或者晶体形式或者的固体形式,或者再溶解或重悬浮的形式。因此,本发明还涉及还有药物制剂,其包含沉淀、再溶解和重悬浮的形式的抗-EGFR抗体,优选单克隆抗-EGFR抗体,特别优选Mab C225(Cetuximab)或Mab h425(EMD 72000)和/或其变体或片段的至少一种沉淀和/或晶体,以及任选地赋形剂和/或佐剂和/或其它药学活性成分。
根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式优选使得能够制备高浓度制剂而不发生本发明抗体的不利的不希望的聚集或不希望的高粘度(就像在常规高浓度蛋白质溶液中观察到的那样)。因此,通过根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式,具有高活性成分含量的现成溶液可以再溶解或重悬浮于水溶剂中或水性介质中。最近,对于非常高浓度的蛋白质活性成分制剂的需求增加。大多数用于治疗的抗体的剂量在mg/kg的范围。待施用的高剂量和小体积(例如对于皮下施用,约1到1.5ml)显示了对于具有大于100mg/ml浓度的高浓度蛋白质制剂的需求。另外,高浓度的蛋白质制剂在研究可接受性和体外和体内功效(在动物模型中)的临床前试验中、在研究人体内的可接受性和功效的临床试验中和产品的临床使用中(特别是皮下施用)都有相当大的优点。特别地,它们的优点在于使用相对小体积的制剂。相对于灌注或注射相对低浓度的蛋白质药物,这使得能够将蛋白质药物皮下施用于患者。皮下施用蛋白质药物可以有多种原因。例如,可以希望与“治疗窗口”有关的特异靶定。而且,皮下施用有这样的优点:患者可以不依赖医务人员就可自己进行使用。胰岛素的例子清楚地表明了这些优点。然而,因为皮下施用注射最多为1-1.5ml,所以含有超多100mg/ml的高浓度蛋白质制剂通常是必要的。
令人惊奇的是,通过根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式,可获得高浓度药物制剂,其使得在液体制剂中蛋白质浓度优选为10-200mg/ml,特别优选50-150mg/ml。这是出乎意料的,因为高浓度蛋白质制剂的不稳定趋势要远远大于稀释的蛋白质制剂(Fields,G.,Alonso,D.,Stiger,D.,Dill,K.(1992)“Theory for the aggregation of proteins and copolymers.”J.Phys.Chem.96,3974-3981)。蛋白质分子的“堆积密度”在高蛋白质浓度时增大。因此,必须假设碰撞的次数升高,并且有可能发生偶然的蛋白质缔合。这个过程通常通过成核作用和生长机制发生的,此机制中临界核通常是可溶性缔合蛋白质,然而,其可以快速的转变为不可溶的蛋白质沉淀物(变性的蛋白质)(Reithel,J.F(1962)”The dissociation and association ofprotein structures”,Adv.Protein Chem.18,123)。蛋白质团聚体的大小随着蛋白质浓度的增大而增大,如β-乳球蛋白所显示的那样(Roefs,S.P.F.M.,De Kruif,K.G.(1994)”A model for the denaturation andaggregation of β-Lactoglobulin.”Eur.J.Biochem 226,883-889)。
已知高浓度免疫球蛋白制剂的限定是在抗体的现成液体制剂中通常为2-50mg/ml(Humira)。然而,意外的是,使用根据本发明的固体形式可以制备稳定的高浓度制剂。因此,沉淀或结晶的步骤可以产生高浓度稳定的抗体制剂,此制剂在重悬浮或再溶解后相比较于相同浓度的液态抗体制剂粘度降低,并且因此简化了肠胃外施用的处理。
因此本发明还涉及药物制剂,其包含沉淀的非结晶形式、沉淀的结晶形式或溶解或悬浮形式的根据本发明的抗-EGFR抗体和/或它的变体和/或片段之一的至少一种固体形式,其中所存在的抗体为生物学活性的,所述药物制剂的特征是抗体浓度优选为10-200mg/ml,特别优选50-150mg/ml。
本发明还涉及根据本发明的高浓度药物制剂的制备方法,其特征是根据本发明的抗-EGFR抗体和/或它的变体和/或片段之一的至少一种固体形式溶解或悬浮在根据本发明的溶液中,并且此抗体浓度优选为10-200mg/ml,特别优选50-150mg/ml。
通过将根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式溶解或悬浮于水溶液中并任选地加入佐剂制备水性制剂。为此,将包含确定浓度的所述其他佐剂的确定体积的保存液有利地加入具有确定浓度的根据本发明的固体形式的溶液或悬浮液中,并且混合物可以任意地用水稀释到预先计算的浓度。备选地,可以以固体形式加入佐剂。在每种情况下都必须的保存液和/或水的量可以随后加入所得水溶液或悬浮液中。
根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式还可以有利地直接溶解或悬浮于包含所有其他佐剂的溶液中。
通过用水性溶剂重构可以有利地从根据本发明的固体形式制备含有抗体的溶液或悬浮液,其pH为4到10,优选地pH为5到9,并且其重量摩尔渗透压浓度为250到350mOsmol/kg。因此,重悬浮和再溶解的制剂可以基本上直接施用,而没有静脉内、动脉内和皮下施用的疼痛。另外,此制剂还可以加入灌注溶液中,例如葡萄糖溶液、等渗盐溶液、或者林格液,这些溶液可以还含有另外的活性成分,因此也使得能够施用相对大量的活性成分。根据本发明的药物制剂还可以包含沉淀或结晶的和/或再溶解或重悬浮形式的本发明中的沉淀物和/或晶体的混合物。
根据本发明的制剂是生理上良好耐受的,容易制备,能够精确分配以及在整个保存和运输和在多次冻融的过程中对于测定、分解产物和团聚体优选是稳定的。优选地,它们可以在冰箱温度(2-8℃)和室温(23-27℃)以及60%的相对空气湿度(R.H.)下以稳定的方式保存至少三个月到两年的时间。令人惊奇的是,根据本发明的制剂甚至在升高的温度和空气湿度,例如在40℃温度和75%的相对空气湿度下保存时优选至少稳定六个月。
例如,根据本发明的固体形式可以通过干燥以稳定的方式保存,并且必要时通过溶解或悬浮转化成现成的药物制剂。可能的干燥方法为,例如但不限于,氮气干燥、真空烘箱干燥、冻干、用有机溶剂洗涤并随后风干、液体床干燥、流化床干燥、喷雾干燥、辊筒式干燥、分层干燥、室温下风干和其它方法。
术语“有效量”表示可以在组织、系统、动物或人体引起例如研究人员或医生所寻求或期望的生物学或医学反应的药物或药学活性成分的量。
另外,术语“治疗有效量”表示一定量,其与没有接受该量的相应受试者相比,有以下结果:疾病、综合症、疾病状态、不适、失调的改善的治疗、康复、预防或消除或者疾病副作用的预防或者疾病、不适或失调的发展的减轻。术语“治疗有效量”还包含有效增加正常生理功能的量。
药物可以以剂量单位的形式施用,所述剂量单位每个剂量单位包含预定量的活性成分。该类型的一个单位可以包含例如0.5mg到1g,优选地,1mg到800mg根据本发明的活性成分,这取决于治疗的疾病状态、施用方法和患者的年龄、体重和健康。优选的剂量单位制剂是包含活性成分的如上指出的日剂量或亚剂量,或者其相应的部分。而且,这种类型的药物可以通过药学领域公知的方法之一来制备。
药物可以适于通过所希望的适宜途径施用,所述途径为例如经口(包括口含或舌下)、直肠、肺、鼻、局部(包括口含、舌下、或经皮)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内或动脉内)途径。这种类型的药物可以通过药学领域公知的所有方法来制备,例如,通过将活性成分与赋形剂或佐剂组合。
肠胃外施用优选适于施用根据本发明的药物。在肠胃外施用的情况下,静脉内和皮下施用是特别优选的。在静脉内施用的情况下,可以直接进行注射或者加入到灌注溶液中。
用于皮下施用的药物是特别适合的,因为通过根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式,可以制备稳定的高浓度制剂。从而可以实现肠胃外或皮下施用必要的高浓度制剂和将施用的小体积。
皮下施用有这样的优点,即患者可以在没有专业医务人员的帮助下就可以自己施用药物。根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式还适合于制备将肠胃外施用的药物制剂,其缓释和/或控释活性成分。根据本发明的沉淀物和/或晶体优选地在这里为悬浮物的形式并且在延长的和/或控制的时间内溶液并且溶解后处于天然和有效状态。根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式因此还适合于制备延迟-释放制剂,其对患者有益,因为只有在相对大的时间间隔才有必要进行施用。根据本发明的药物制剂还可以直接注射入肿瘤并因此可以直接在所预期的作用位点发挥它们的作用。
适于肠胃外施用的药物包括水性和非水性无菌注射溶液,其包含抗氧化剂、缓冲剂、制菌剂和溶质,通过它们可以使得制剂与待治疗的受者的血液等渗;适于肠胃外施用的药物还包括水性和非水性无菌悬浮液,其可以包含悬浮介质和增稠剂。制剂可以用单剂量或多剂量容器,例如密封的安瓿和小瓶递送,并且以冷冻干燥(冻干)状态保存,从而,仅需要在即将使用前加入无菌载体液体,如注射用水。可以从无菌粉剂、粒剂和片剂按照配方制备注射液和悬浮液。
根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式,任选地,再溶解形式还可以以脂质体供应体系,例如,单层小脂泡、单层大脂泡和多层脂泡的形式施用。可以从多种磷脂,例如,胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱形成脂质体。
沉淀、再溶解或悬浮形式的根据本发明的抗-EGFR抗体及其变体的固体形式还可以与作为目标药物赋形剂的可溶性聚合物偶联。此类聚合物包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰氨基苯酚、聚羟基乙基天冬酰胺基苯酚或聚化乙烯、被棕榈酰基取代的聚赖氨酸。抗-EGFR抗体的固体形式可以进一步偶联到一类实现药物缓释的生物可降解的聚合物,例如,聚乳酸、聚-ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二羟吡喃、聚氰基丙烯酸酯、聚乳酸-共-乙醇酸,聚合物例如,葡聚糖和异丁烯酸之间的共轭物、聚磷酸酯、多种多糖和多胺和聚-ε-己内酯、白蛋白、壳聚糖、胶原或修饰的明胶或者水凝胶的交联的或者两亲性嵌段共聚物。
适于经皮施用的药物可以以独立的膏剂递送易于受者的表皮长期紧密接触。因此,例如活性成分可以由膏剂通过离子电渗疗法提供,离子电渗疗法是如通常在Pharmaceutical Research,3(6),318(1986)中描述的术语。
适于局部施用的药物可以配制成软膏剂、乳膏、混悬剂、洗剂、粉剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂。
对眼睛或其它外部组织,例如嘴和皮肤的治疗,制剂优选地以局部软膏剂或者乳膏施用。在制剂为软膏剂的情况下,此活性成分可以以石蜡族或者水混溶的乳膏基质一起使用。备选地,此可以配制活性成分以得到具有油包水乳膏基质或者水包油基质的乳膏。
适于局部施用于眼睛的药物包括滴眼液,其中活性成分溶解或者悬浮于适合的赋形剂中,特别是水性溶剂中。
适于经直肠施用的药物可以以栓剂或灌肠剂的形式递送。
适于通过吸入施用的药物包括细微的微粒粉尘或喷雾,其可以用气溶胶的多种类型的压力分配器:喷雾器或吹入器产生。对于本发明,特别优选作为吸入剂施用的根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式的粉剂。
适于阴道施用的药物可以作为阴道栓剂、棉塞、乳膏、凝胶剂、糊剂、泡沫、或喷雾制剂递送。
显而易见,除了上述特别提及的组分外,根据本发明的药物还可以包含本领域中所用的与其他类型的药物制剂有关的其他试剂。
本发明还涉及套药包(套药盒),其由单独包装的:
a)有效量的抗-EGFR抗体的沉淀物和/或晶体,优选抗-EGFR的单克隆抗体,特别优选处于沉淀、再溶解或悬浮形式的Mab C225(cetuximab)或Mab(EMD 72000)和/或其变体或片段,和
b)有效量的其他药物活性成分组成。
此套药包包含适合的容器,例如盒子或纸盒、单独的瓶子、袋子或安瓿。此套药包可以,例如含有分开的安瓿,每只含有有效量的根据本发明的固体形式,任选地,处于再溶解的形式,以及处于溶解或冻干形式的有效量的另一种药物活性成分。
根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式的治疗有效量取决于许多因素,包括例如,年龄和体重、需要治疗的精确的疾病状态,以及其严重性,制剂的性质和施用方法,并且最终由治疗医生或兽医决定。然而,用于治疗肿瘤生长,例如肠癌或乳腺癌的本发明的抗-EGFR抗体的有效量通常为每天0.1到100mg/kg受者(哺乳动物)体重的范围内,特别典型的是每天1到10mg/kg体重范围内。因此,对于体重在70公斤的成年哺乳动物来说,实际每天的量通常是70-700mg,此剂量可以每天以单次剂量给药或者通常以每天以一系列亚剂量(例如,二、三、四、五、或六次)给药,从而总的日剂量是相同的。合适的抗体滴度由本领域技术人员确定。建议施用的剂量对于实现所希望的肿瘤抑制作用通常是足够的。但是,还应该选择尽可能低的剂量从而不会发生副作用,例如不希望的交叉反应、过敏反应等等。
本发明还涉及根据本发明的固体形式在药物制备中的用途,所述药物包含沉淀非结晶、沉淀接近、或处于溶解或悬浮的形式的生物活性抗体和/或它的变体和/或片段之一。
根据本发明的药物具体可以用于预防和/或治疗疾病和疾病状态。因此,此发明涉及处于沉淀的、再溶解的或悬浮的形式的根据本发明的抗-EGFR抗体,优选单克隆抗-EGFR抗体,特别优选Mab C225(cetuximab)或Mab h425(EMD 72000)和/或其变体或片段的固体形式的用途,用于制备治疗和/或预防疾病的药物。
多种体外和体内的研究表明,可以通过抗肿瘤的抗体在多种水平上阻断EGFR,例如通过抑制癌细胞的增殖,减少肿瘤介导的血管发生,诱导癌细胞程序性细胞死亡和加强放射治疗和常规化学治疗的毒效应。
再溶解或悬浮形式的包含根据本发明的抗体的固体形式的药物能有效调节、调制或抑制EGFR,并可以因此用于预防和/或治疗失调或者扰乱的EGFR活性有关的疾病。具体地,根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式因此可以用于治疗某些形式的癌症和病理性血管发生引起的疾病,例如糖尿病性视网膜病或炎症。
因此,本发明还涉及沉淀、再溶解或重悬浮形式的根据本发明的抗体的固体形式的用途,用于制备治疗和/或预防由EGFR和/或EGFR介导的信号转导所引起、介导和/或传播的疾病的药物。根据本发明的药物特别适合治疗和/或预防癌症,包括实体癌,例如,癌(例如肺、胰腺、甲状腺、膀胱或结肠的癌)、骨髓疾病(例如骨髓性白血病)或腺瘤(例如绒毛结肠腺瘤)、病理性血管发生和转移的细胞迁移。而且,所述药物还用于治疗依赖补体活化的慢性炎症(Niculescu等人(2002)Immunol.Res.,24:191-199)和由HIV-1(人类1型免疫缺陷病毒)诱导的免疫缺陷(Popik等人(1998)JVirol,72:6406-6413)。
另外,本药物适宜作为哺乳动物,特别是人类的EGFR诱导的疾病治疗中的药学活性成分。术语“EGFR诱导的疾病”涉及依赖EGFR活性的病理状态。EGFR直接或间接涉及多种细胞活性的信号转导通路,包括增殖、黏附和迁移、以及分化。与EGFR活性相关的疾病包括肿瘤细胞的增殖、病理性新血管形成,其促进实体瘤的生长;眼睛的新血管形成(糖尿病性视网膜病、年龄诱导的黄斑变性等等)和炎症(牛皮癣、类风湿性关节炎等等)。
这里讨论的疾病通常分为两组,高度增殖性和非高度增殖性疾病。在这方面,认为牛皮癣、关节炎、炎症、子宫内膜异位、瘢痕形成、良性前列腺增生、免疫性疾病、自身免疫病和免疫缺陷病是非癌性疾病,其中通常认为关节炎、炎症、免疫性疾病、自身免疫病和免疫缺陷病是非高度增殖性疾病。
在这方面,认为脑癌、肺癌、鳞状细胞癌、膀胱癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、肾癌、结肠直肠癌、乳腺癌、头部癌症、颈部癌症、食管癌、妇科癌症、甲状腺癌、淋巴瘤、慢性白血病和急性白血病是癌性疾病,所有这些通常算在高度增殖性疾病中。特别地,癌性细胞生长以及特别是由EGFR直接和间接介导的癌性细胞的生长是代表本发明目的的疾病。
研究表明,根据本发明的药物在异种移植物肿瘤模型中具有体内抗增殖作用。将根据本发明的药物施用于患有高增殖性疾病的患者,例如用以抑制肿瘤生长、减轻淋巴组织增殖疾病相关的炎症、抑制移植排斥或组织修复所导致的神经损伤,等等。本发明药物可用于预防或治疗目的。此处所用的术语“治疗”用于指疾病的预防和对现有疾病的治疗。通过在明显的疾病发展之前施用根据本发明的药物以达到对增殖的预防,例如防止肿瘤生长、防止转移性生长、减少与心血管手术相关的再狭窄,等等。另外,此药物通过稳定或改善患者的临床症状用于持续性疾病的治疗。
宿主或患者可以属于任意哺乳动物物种,例如灵长类,特别是人类;啮齿动物,包括小鼠、大鼠和仓鼠;兔、马、奶牛、狗、猫等等。动物模型对于实验研究是重要的,提供了治疗人类疾病的模型。
某些细胞对于用根据本发明的药物治疗的感受性可以用体外试验来确定。通常,将细胞培养物用不同浓度的根据本发明的药物孵育一段时间,此时间足够使活性成分诱导细胞死亡或抑制迁移,通常约一小时到一周。体外试验可以用从活组织检查样品得到的细胞进行。随后对处理后剩下的活细胞计数。
剂量随所用的特定药物、特定疾病、患者的状态等等而改变。通常,治疗剂量是足够的以便显著减小目标组织中不希望的细胞群体,而保持患者的生命力。通常治疗持续进行直到发生显著减少,例如减少至少大约50%的特定细胞数,并且可以持续到基本上在体内检测不到不希望的细胞。
很多测定系统都可以用来鉴定EGFR抑制剂。在闪烁亲近测定法(Sorg等人,J.of Biomolecular Screening,2002,7,11-19)和闪板(flashplate)测定法中,γATP测定作为底物的蛋白质或肽的放射性磷酸化。在抑制性化合物的存在下,可以检测到减小的放射性信号或根本没有信号。而且,均相时间分辨荧光共振能量转移(HTR-FRET)和荧光偏振(FP)技术通常用作测定方法(Sills等人.,J.of Biomolecular Screening,2002,191-214)。其它非-放射性ELISA测定方法使用特定的磷抗体(phospho-Abs)。此phospho-AB只结合磷酸化底物。这种结合可以通过化学发光用二级缀合过氧化物酶的抗-绵羊抗体进行检测(Ross等人,2002,Biochem.J.,待出版,手稿BJ20020786)。
有许多疾病和疾病状态与细胞增殖和细胞死亡(程序性细胞死亡)的失调有关。通过根据本发明的药物可以治疗、预防或改善的疾病和疾病状态包括下面列出的疾病和疾病状态,但并不局限于此。根据本发明的药物可用于治疗和/或预防很多不同的疾病和疾病状态,其涉及血管内膜层平滑肌细胞和/或炎症细胞的增殖和/或迁移,而导致通过该血管的血液受限,例如导致新内膜闭塞性损伤。重要的闭塞性移植血管疾病包括动脉粥样硬化、移植后的冠状血管疾病、静脉移植狭窄、临近吻合的假体再狭窄、血管成形术或支架放置后的再狭窄等等。
本发明涉及根据本发明的药物在治疗或预防肿瘤方面的用途。因此,本发明特别优选地涉及根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式在制备治疗和/或预防肿瘤和/或肿瘤转移的药物中的用途,其中所述肿瘤尤其优选地选自脑肿瘤、泌尿生殖道肿瘤、淋巴系统的肿瘤、胃肿瘤、喉瘤、单核细胞白血病、肺腺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤和乳腺癌,但并不局限与此。
本发明还涉及根据本发明的药物在制备治疗疾病的药物中的用途,所述疾病选自由鳞状细胞癌、膀胱癌、胃癌、肝癌、肾癌、结肠直肠癌、乳腺癌、头癌、颈癌、食道癌、妇科癌症、胰腺癌、淋巴瘤、慢性白血病和急性白血病组成的癌性疾病。
根据本发明的药物可以施用于患者以治疗肿瘤。所述药物抑制肿瘤血管生成并因此影响肿瘤的生长(J.Rak等人,CancerResearch,55:4575-4580,1995)。根据本发明的药物的抑制血管生成的特性还适用于治疗与视网膜新血管形成相关的某些形式的失明。
因此,本发明还涉及以沉淀的、再溶解或悬浮的形式存在的根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式的用途,用于制备治疗和/或预防由血管生成引起、介导和/或传播的疾病的药物。
与血管生成有关的此类型的一种疾病是眼病,例如视网膜血管形成、糖尿病性视网膜病、年龄诱导的黄斑变性等等。
因此,本发明还涉及以沉淀的、再溶解或悬浮的形式存在的根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式的用途,用于制备治疗和/或预防选自视网膜血管形成、糖尿病性视网膜病、年龄诱导的黄斑变性和/或炎症疾病的药物。
本发明还涉及根据本发明的药物的用途,用于治疗和/或预防选自牛皮癣、类风湿性关节炎、接触性皮炎、迟发型过敏反应、炎症、子宫内膜异位、瘢痕形成、良性前列腺增生、免疫疾病、自身免疫病和免疫缺陷病的疾病。
本发明还涉及根据本发明的药物在治疗和/或预防选自骨肉瘤、骨关节炎和佝偻病的骨的病理中的用途。
根据本发明的药物还可以用于在某些现有肿瘤化学疗法和放射疗法中提供加性或者协同效果,和/或可用于恢复某些现有的化学疗法和放射疗法的功效。
因此,本发明还涉及以沉淀、再溶解或悬浮形式存在的根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式的用途,用于制备治疗和/或预防疾病的药物,其中以沉淀、再溶解或悬浮形式存在的治疗有效量的根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式与选自下面的化合物组合施用:1)雌激素受体调节剂;2)雄激素受体调节剂;3)类视黄醇受体调节剂;4)细胞毒性剂;5)抗增殖剂;6)异戊二烯基蛋白质转移酶抑制剂;7)HMG-CoA还原酶抑制剂;8)HIV蛋白酶抑制剂;9)逆转录酶抑制剂;10)生长因子受体抑制剂和11)血管生成抑制剂。
因此,本发明还涉及以沉淀、再溶解或悬浮形式存在的根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式的用途,用于制备治疗和/或预防疾病的药物,其中以沉淀、再溶解或悬浮形式存在的治疗有效量的根据本发明的抗-EGFR抗体的固体形式与放射疗法和选自下面的化合物组合施用:1)1)雌激素受体调节剂;2)雄激素受体调节剂;3)类视黄醇受体调节剂;4)细胞毒性剂;5)抗增殖剂;6)异戊二烯基蛋白质转移酶抑制剂;7)HMG-CoA还原酶抑制剂;8)HIV蛋白酶抑制剂;9)逆转录酶抑制剂;10)生长因子受体抑制剂和11)血管生成抑制剂。
根据本发明的药物因此可以与其它公知的治疗剂一起施用,所述治疗剂因其针对所治疗的疾病特别有用而被选择。例如,在骨疾病的情况下,将有利的组合包括与如下治疗剂的组合:抗再吸收的二膦酸盐,例如阿仑特罗和利塞膦酸钠,整联蛋白阻断剂(如下文进一步定义);如αVβ3拮抗剂;用于激素代替疗法的缀合的雌激素;例如Prempro、Premarin和Endometrion;选择性雌激素受体调节剂(SERMs),例如雷洛昔芬、着洛西芬、CP-336.156(Pfizer)和拉索昔芬;组织蛋白酶K抑制剂和ATP质子泵抑制剂。
本发明的药物还适合与已知的抗癌剂组合。这些已知的抗癌剂包括下面的:雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类视黄醇受体调节剂、细胞毒性剂、抗增殖剂、异戊二烯基蛋白质转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂、生长因子受体抑制剂和血管生成抑制剂。本发明化合物特别适合与放射疗法同时施用。
“雌激素受体调节剂”指干扰或抑制雌激素与受体结合的化合物(不管其机制如何)。雌激素受体调节剂的实例包括,但不仅限于:他莫昔芬、雷洛昔芬、艾多昔芬、LY353381、LY117081、托瑞米芬、氟维司群、2,2-二甲基-丙酸4-[7-(2,2-二甲基-1-氧代丙氧基-4-甲基-2-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-2H-1-苯并呲喃-3-基]苯酯、4,4’-二羟基二苯甲酮-2,4-二硝基苯腙和SH646。
“雄激素受体调节剂”指干扰或抑制雄激素与受体结合的化合物(不管其机制如何)。雄激素受体调节剂的实例包括非那雄胺和其它5α-还原酶抑制剂、尼鲁米特、氟他胺、比卡鲁胺、利阿唑和乙酸阿比特龙。
“类视黄醇受体调节剂”指干扰或抑制类视黄醇与受体结合的化合物(不管其机制如何)。类视黄醇受体调节剂的实例包括:贝沙罗汀、维甲酸、13-顺式-视黄酸、9-顺式-视黄酸、α-二氟甲基鸟氨酸、ILX23-7553、反式-N-(4’-羟基苯基)retinamide和N-4-羧基苯基retinamide。
“细胞毒性剂”指主要通过直接作用于细胞功能或抑制或干扰细胞有丝分裂导致细胞死亡的化合物,包括烷化剂、肿瘤坏死因子、嵌入剂、微管蛋白抑制剂和拓扑异构酶抑制剂。细胞毒性剂的实例包括,但不限于替拉扎明、sertenef、肿瘤坏死因子、异磷酰胺、他索纳明、氯尼达明、卡铂、六甲密胺、泼尼莫司汀、二溴甜醇、雷诺氮芥、福替目丁、奈达铂、奥沙利铂、替莫唑胺、heptaplatin、雌氮芥、二丙胺磺酯、氯乙环磷酰胺、尼莫司汀、螺溴丙酰胺、嘌米舌泊、洛巴铂、沙铂、甲基丝裂霉素、顺铂、伊罗夫文、dexifosfamide、顺式-胺二氯(2-甲基吡啶)铂、苄基鸟嘌呤、葡磷酰胺、GPX100、(反式,反式,反式)-双-μ-(己烷-1,6-二胺)-μ[二胺-铂(II)双[二胺(氯)铂(II)]四氯化物、diarizidinyl-精胺、三氧化二砷、1-(11-十二烷基氨基-10-羟基十一烷基)-3,7-二甲基黄嘌呤、佐柔比星、伊达比星、柔红霉素、必桑郡、米托蒽醌、吡柔比星、吡萘非特、戊柔比星、氨柔比星、抗瘤酮、3’-脱氨基-3’-吗啉代-13-脱氧-10-羟基洋红霉素、安那霉素、加柔比星、依利奈法德、MEN10755和4-去甲氧基-3-脱氨基-3-吖丙啶基-4-甲基磺酰基柔红霉素(见(WO 00/50032)。
微管抑制剂的实例包括紫杉醇、硫酸长春地辛、3’,4’-双脱氢-4’-去氧-8’-norvincaleukoblastine、多西他赛、根霉素、多拉司他汀、羟乙基磺酸米伏布林、auristatin、西马多丁、RPR109881、BMS184476、长春氟宁、cryptophycin、2,3,4,5,6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧基苯基)-苯磺酰胺、脱水长春花碱、N,N-二甲基-L-缬氨酰-L-缬氨酰-N-甲基-L-缬氨酰-L-脯氨酰-L-脯氨酸-叔丁基酰胺、TDX258和BMS188797。
拓扑异构酶抑制剂的一些实例是拓扑替康、hycaptamine、伊立替康、卢比替康、6-乙氧基丙酰基-3’4’-O-外苄叉教酒菌素、9-甲氧基-N,N-二甲基-5-硝基吡唑并[3,4,5-kl]吖啶-2-(6H)-丙胺、1-氨基-9-乙基-5-氟-2,3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H,12H-苯并[de]吡喃并[3’,4’:b,7]中氮茚并[1,2b]喹啉-10,13(9H,15H)-二酮、lutotecan、7-[2-(N-异丙基氨基)乙基]-(20S)喜树碱、BNP1350、BNPI 1100、BN80915、BN80942、磷酸依托泊苷、替尼泊苷、索布佐生、2’-二甲基氨基-2’-去氧依托泊苷、GL331、N-[2-(二甲基氨基)乙基]-9-羟基-5,6-二甲基-6H-吡啶并[4,3-b]咔唑-1-甲酰胺、asulacrine、(5a,5aB,8aa,9b)-9-[2-[N-[2-二甲基-氨基)乙基]-N-甲基氨基]乙基]-5-[4-羟基-3,5-二甲氧基苯基]-5,5a,6,8,8a,9-六氢furo(3’,4’,6,7)萘并(2,3-d)-1,3-dioxol-6-酮、2,3-(亚甲二氧基)-5-甲基-7-羟基-8-甲氧基苯并[c]菲啶、6,9-双[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]异喹啉-5,10-二酮、5-(3-氨基丙基氨基)-7,10-二羟基-2-(2-羟基乙氨基甲基)-6H-吡唑并[4,5,1-de]吖啶-6-酮、N-[1-(2-(二乙基氨基)乙基氨基]-7-甲氧基-9-氧代-9H-噻吨-4-基甲基]甲酰胺、N-(2-(二甲基-氨基)乙基)吖啶-4-甲酰胺、6-[[2-(二甲基氨基)乙基]氨基]-3-羟基-7H-茚并[2,1-c]-喹啉-7-酮和地美司钠。
“抗增殖剂”包括反义RNA和RNA寡核苷酸,例如G3139、ODN698、RVASKRAS、GEM231、和INX3001,以及抗代谢物,例如依诺他滨、卡莫氟、喃氟啶、喷司他丁、去氧氟尿苷、三甲曲沙、氟达拉滨、卡培他滨、加洛他滨、阿糖胞苷酯、fosteabine sodium hydrate、雷替曲塞、paltitrexid、乙嘧替氟、噻唑呋林、脱氧氮杂胞苷、诺拉曲塞、培美曲塞、nelzarabine、2’-去氧-2’-methylidene胞苷、2’-氟亚甲基-2’-去氧胞苷、N-[5-(2,3-二氢苯并呋喃基)磺酰基]-N’-(3,4-二氯苯基)脲、N6-[4-去氧-4-[N2-[2(E),4(E)-十四烷二烯酰基]甘氨酰氨基]-L-甘油基-B-L-甘露庚糖吡喃基]腺嘌呤、aplidine、ecteinascidin、沙曲他滨、4-[2-氨基-4-氧代-4,6,7,8-四氢-3H-嘧啶并[5,4-b]-1,4-噻嗪-6-基(S)-乙基]2,5-噻吩基-L-谷氨酸、氨基喋呤、5-氟尿嘧啶、阿拉诺新、11-乙酰基-8-(氨甲酰基氧基甲基)-4-甲酰基-6-甲氧基-14--1,11-二氮杂四环(7.4.1.0.0)四癸-2,4,6-三烯-9-基乙酸酯、苦马豆碱、洛美曲索、右丙亚胺、甲硫氨酸酶、2’-氰基-2’-去氧-N4-棕榈酰基-1-B-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶和3-氨基吡啶-2-carboxaldehyde氨硫脲。“抗增殖剂”除了上面“血管生成抑制剂”下列出的那些还包括抗生长因子的单克隆抗体,例如曲妥单抗,以及肿瘤抑制基因,例如p53,它可以通过重组病毒介导的基因转移递送(例如,见美国专利号6,069,134,)。根据本发明的药物还可以与所有本领域技术人员已知的所有其他治疗性抗体或者适合与上述疾病联系的药物活性成分联合施用。
而且,以沉淀、再溶解或悬浮形式存在的根据本发明的抗体的固体形式可以用于分离和研究EGFR的活性或表达。另外,它们特别适合用于与失调或者扰乱的EGFR活性有关的疾病的诊断方法中。本发明因此还涉及以沉淀、再溶解或悬浮形式存在的根据本发明抗体的固体形式作为EGFR的激活剂或者抑制剂,尤其优选作为EGFR的抑制剂的用途。
对于诊断目的,本发明的抗体可以例如经放射性标记。优选的标记方法是iodogen方法(Fraker等人,1978)。对于诊断目的,抗体特别优选地用作F(ab’)2片段。从而得到了非常好的结果,说明背景扣除不是必须的。此类型的片段可以通过已知的方法制备(例如,Herlyn等人,1983)。一般来说,在酸性pH条件进行胃蛋白酶消化,并且用蛋白A SepharoseTM层析将片段与未消化的IgG和重链片段分离。
根据本发明的沉淀和/或晶体优选地显示出有利的生物学活性,它可以用酶测定法容易地检测,如在实施例中描述的那样。在这种类型的基于酶的测定法中,根据本发明的抗体优选地显示并引起抑制效应,这通常用合适的范围内的IC50值来记录,所述范围优选为微摩尔范围内,更加优选纳摩尔范围。
测定方法:
关于测定方法,本发明包含本领域技术人员已知的或来自文献的所有测定方法。
晶体结构可以例如,参考X射线衍射测定中的衍射光谱来测定。具体地,根据本发明的抗体的晶体结构可以用偏振滤光片通过显微镜研究测定。另外的测定方法,包括但不限于电子显微照片。
处于沉淀的、再溶解的或重悬浮形式的根据本发明的固体形式的蛋白质大小、结构的完整性、纯度或糖基化模式的测定包括但不限于SE-HPLC、肽作图(消化)、N-末端测序、SDS-PAGE、TRIS/甘氨酸梯度凝胶电泳(非还原的)、FTIR(傅立叶变换红外光谱)法、CD(圆二色性、RAMAN光谱法、糖染色(PAS法)、寡糖谱、测定单糖组成和等电聚焦。
根据本发明的固体形式或制剂的稳定性可以例如但不限于通过稳定性程序确定,例如长时间保存于25℃和60%的相对空气湿度,以及40℃和70%的空气相对湿度,并例如通过上述测定方法(SE-HPLC、FT-IR、SDS-PAGE(还原或非还原的))在规则的时间间隔测定蛋白质的稳定性或结构完整性。
用于测定处于沉淀的晶体、沉淀的非晶体、溶解的或悬浮形式的根据本发明的固体形式的生物学活性或功效的方法包括但不限于例如,ELISA、生物学细胞测定法、FTIR或CD。
用于测定处于沉淀的晶体、沉淀的非晶体、溶解的或悬浮形式的根据本发明的固体形式的减小的聚集倾向和从而确定制备高度浓缩的制剂的可能性、晶体大小或沉淀物大小的方法包括但不限于,例如视觉检查、亚可见的颗粒分析、比浊法或者动态光散射鉴定。
上文和下文中所有温度都以“℃”表示。在下面的实施例中,“常规建立”指取决于终产物的组成,如果需要,加入水,并且如果需要,调节pH值到2到10。
实施例1:可以根据本发明使用的试剂和沉淀和/或结晶条件
下表包括本领域技术人员已知的所述化合物的在每种情况下所有可能的水合物、有关的盐和衍生物。
1.沉淀试剂
1.1盐:
例如三水合乙酸钠、氯化钾、氯化钠、二水合柠檬酸三钠、磷酸氢二钾、二水合磷酸氢二钠、硫酸铵、乙酸铵、溴化铵、氯化铵、柠檬酸三铵、柠檬酸氢二铵、磷酸二氢铵、磷酸氢二铵、酒石酸二铵、一水合柠檬酸、咪唑、乙酸钾、溴化钾、一水合柠檬酸三钾、磷酸二氢钾、硫酸钾、四水合乙酸镁、六水合溴化镁、六水合氯化镁、七水合硫酸镁、一水合磷酸二氢钠、十水合硫酸钠、脯氨酸、琥珀酸、二水合乙酸锌、七水合硫酸锌。
1.2聚合物:
例如聚乙二醇(PEG)、环糊精、葡聚糖、羧甲基纤维素钠(Na-CMC)、泊洛沙姆、聚丙烯酸、聚乙二醇单甲基醚(mPEG)、聚丙二醇(PPG)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。
1.3有机溶剂
例如乙醇、丙三醇
2.佐剂:
例如黏性调节物质、去污剂(例如Tween、SolutolHS 15,Pluronic、CremophorEL、Avacel20、聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯)、还原剂(谷胱甘肽、2-巯基乙醇、二硫苏糖醇)、螯合剂(EDTA、EGTA)。
3.缓冲液:
例如磷酸缓冲液:磷酸钠(或钾);还加入等渗试剂(例如NaCl(或KCl)),可能的pH值为约6.0-8.2;
柠檬酸缓冲液:柠檬酸钠或柠檬酸,可能的pH值为约2.2-6.5;还加入等渗试剂(例如NaCl);也可以想象其它的盐用于等渗。
琥珀酸缓冲液:pH大约4.8-6.3
乙酸缓冲液:乙酸钠,pH大约2.5-6
组氨酸缓冲液:pH约6.0-7.8
谷氨酸缓冲液:pH8.0-10.2
甘氨酸(N,N-双(2-羟基乙基)甘氨酸):pH大约8.6到10.6
甘氨酸盐缓冲液:pH大约6.5-7.5
咪唑:pH 6.2到7.8
氯化钾:pH大约1.0到2.2
乳酸盐缓冲液:pH约3.0-6.0
马来酸盐缓冲液:pH大约2.5-5.0
酒石酸盐缓冲液:pH大约3.0-5.0
TRIS:pH大约6.8-7.7
磷酸盐/柠檬酸盐缓冲液
4.pH范围:
理论上可以设想的pH是4-10,优选pH 5-9
5.温度范围:
理论上可设想的温度范围是-10℃到40℃,优选0-25℃,特别优选4℃到20℃的温度。
6.稳定剂:
6.1氨基酸:
例如精氨酸、鸟氨酸、赖氨酸、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、丝氨酸、脯氨酸。
6.2糖和糖醇:
例如蔗糖、乳糖、葡萄糖、甘露糖、麦芽糖、半乳糖、果糖、山梨糖、蜜三糖、海藻糖、葡糖胺、N-甲基葡糖胺、半乳糖胺、神经氨酸。
6.3抗氧化剂:
例如丙酮合亚硫酸氢钠、抗坏血酸、抗坏血酸酯、丁基羟基苯甲醚(BHA)、丁基羟基甲苯(BHT)、半胱氨酸、去甲二氢愈创木酸(NDGA),单硫代甘油、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、生育酚、谷胱甘肽。
6.4防腐剂:
例如间甲酚、氯代甲酚、苯酚、苯甲醇、羟苯甲酸甲酯、对羟苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、氯代丁醇、硝酸苯基汞、乙酸苯基汞、硫柳汞、苯扎氯铵、氯化苄乙氧铵。
6.5环糊精:
例如羟丙基-β-环糊精、硫代丁基乙基-β-环糊精、γ-环糊精,α-环糊精
6.6白蛋白:
例如人血清白蛋白(HAS)、牛血清白蛋白(BSA)
6.7多元醇:
例如丙三醇、乙醇、甘露醇
6.8盐:
例如,乙酸盐(例如乙酸钠)、氯化镁、氯化钙、氨丁三醇、EDTA(例如Na-EDTA)
7.等渗剂;
例如氯化钠、氯化钾、葡萄糖、丙三醇、右旋糖、氯化钠、硫酸钠
实施例2:用硫酸铵结晶ErbituxTM
500μl蛋白质(20mg/ml)
400μl缓冲液(10mM磷酸盐溶液,pH 8.0)
100μl沉淀剂(10mM磷酸盐溶液(pH 8.0)中饱和硫酸铵溶液)
将沉淀试剂以溶液加入蛋白质溶液(分批法)。移液后,样品应通过“手摇”混合。此方法可以在室温下或4℃进行。
实施例3:用乙醇结晶ErbituxTM
500μl蛋白质(10mM柠檬酸盐溶液(pH5.5)中20mg/ml)
400μl缓冲液(10mM柠檬酸盐,pH5.5)
100μl沉淀剂(10mM柠檬酸盐溶液(pH5.5)中50%(v/v)乙醇)或
500μl蛋白质(10mM柠檬酸盐溶液(pH5.5)中20mg/ml)
500μl沉淀剂(10mM柠檬酸盐溶液(pH5.5)中50%(v/v)乙醇)
将沉淀试剂以溶液加入蛋白质溶液(分批法)。移液后,样品应通过“手摇”混合。此方法可以在室温下或4℃进行。
实施例4:用硫酸铵沉淀ErbituxTM
500μl蛋白质(10mM磷酸盐溶液(pH 8.0)中20mg/ml)
500μl沉淀剂(10mM磷酸盐溶液(pH 8.0)中饱和硫酸铵溶液)或
200μl蛋白质(10mM磷酸盐溶液(pH 8.0)中20mg/ml)
800μl沉淀剂(10mM磷酸盐溶液(pH 8.0)中饱和硫酸铵溶液)或
500μl蛋白质(10mM柠檬酸盐溶液(pH5.5)中20mg/ml)
500μl沉淀剂(10mM柠檬酸盐溶液(pH5.5)中饱和硫酸铵溶液)或
200μl蛋白质(10mM柠檬酸盐溶液(pH5.5)中20mg/ml)
800μl沉淀剂(10mM柠檬酸盐溶液(pH5.5)中饱和硫酸铵溶液)
将沉淀试剂以溶液加入蛋白质溶液(分批法)。移液后,样品应通过“手摇”混合。此方法可以在室温下或4℃进行。
实施例5:用PEG沉淀ErbituxTM
500μl蛋白质(10mM磷酸盐溶液(pH 8.0)中20mg/ml)500μl沉淀剂(10mM磷酸盐溶液(pH 8.0)中50%(V/V)PEG 4000)或
500μl蛋白质(10mM柠檬酸盐溶液(pH5.5)中20mg/ml)
500μl沉淀剂(10mM柠檬酸盐溶液(pH5.5)中50%(w/v)PEG 4000)或
500μl蛋白质(10mM磷酸盐溶液(pH 8.0)中20mg/ml)
500μl沉淀剂(10mM磷酸盐溶液(pH 8.0)中50%(w/v)PEG 8000)或
500μl蛋白质(10mM柠檬酸盐溶液(pH5.5)中20mg/ml)
500ul沉淀剂(10mM柠檬酸盐溶液(pH5.5)中50%(w/v)PEG 8000)
将沉淀试剂以溶液加入蛋白质溶液(分批法)。移液后,样品应通过“手摇”混合。此方法可以在室温下或4℃进行。
实施例6:结晶形式的显微镜研究
实施例1和实施例2中获得的晶体用显微镜研究。检测到晶体典型的双折射性质和蛋白质典型的考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)可染色性。
所发现晶体具有约50-200μm的大小。
实施例7:研究沉淀物的天然性(nativity)
将实施例4和实施例5中所获得的沉淀再分散并可以用FT-IR光谱测定法研究。沉淀前起始物质的酰胺1-2的衍生光谱与再分散的沉淀物是一致的。
实施例8:进行WO020727636中描述的结晶方法
为了检查从专利申请WO020727636得到的结果,在WO020727636中描述的对照实验中,首次尝试通过Wizard I screen得到晶体,其可以随后用作种子晶体。虽然,在沉淀条件下用氯化钙和乙酸钙获得了针形晶体,然而,它们同样地在没有蛋白质的柠檬酸盐缓冲液中形成。因此,用WO020727636中描述的方法从蛋白质溶液和阴性对照(没有蛋白质)都得到了所描述的针形晶体。这清楚的表明它们可能最多是沉淀试剂晶体内的蛋白质内含物。
Claims (18)
1.抗-EGFR抗体和/或它的变体和/或片段之一的固体形式,其可以通过溶解或悬浮于水性介质产生生物活性抗体蛋白质,通过用沉淀试剂将溶解或悬浮于水性介质中的所述抗体和/或它的变体和/或片段之一沉淀可以得到所述固体形式。
2.根据权利要求1的固体形式,其特征在于将盐、聚合物和/或有机溶剂用作沉淀试剂。
3.根据权利要求2的固体形式,其特征在于将硫酸铵、乙酸钠、柠檬酸钠、磷酸钾、PEG和/或乙醇用作沉淀试剂。
4.根据权利要求1-3任一项的固体形式,其特征在于它是沉淀物。
5.根据权利要求1-3任一项的固体形式,其特征在于它是晶体。
6.根据权利要求1-5的一项或多项的固体形式,其特征在于抗-EGFR抗体是单克隆的和鼠或人源的。
7.根据权利要求6的固体形式,其特征在于抗-EGFR抗体是鼠源的和嵌合的或人源化的。
8.根据权利要求7的固体形式,其特征在于抗-EGFR抗体是MabC255(cetuximab)或Mab h425(EMD 72000)。
9.制备抗-EGFR抗体和/或它的变体和/或片段之一的固体形式的方法,所述固体形式可以通过溶解或悬浮于水性介质产生生物活性抗体蛋白质,所述方法的特征在于通过用沉淀试剂将溶解或悬浮于水性介质中的所述抗体和/或它的变体和/或片段之一沉淀,并分离开沉淀产物。
10.根据权利要求9的方法,其特征在于将硫酸铵、PEG和/或乙醇用作沉淀试剂。
11.根据权利要求9或10的方法,其特征在于以分批形式进行该方法。
12.根据权利要求1-8的一项或多项的固体形式,其作为保存稳定的药物。
13.药物制剂,其包含沉淀的非结晶、沉淀的结晶或溶解或悬浮形式的根据权利要求1-8的一项或多项的至少一种固体形式,和任选地赋形剂和/或佐剂和/或其他药学活性成分。
14.根据权利要求13的药物制剂,其特征在于抗体浓度是10-200mg/ml。
15.根据权利要求14的药物制剂,其特征在于抗体浓度是50-150mg/ml。
16.根据权利要求1-8的一项或多项的抗-EGFR抗体和/或它的变体和/或片段之一的固体形式用于制备药物的用途,所述药物包含沉淀的非结晶、沉淀的结晶或溶解或悬浮形式的所述生物活性抗体和/或它的变体和/或片段之一。
17.根据权利要求16的用途,用于制备治疗和/或预防肿瘤和/或肿瘤转移的药物。
18.根据权利要求17的用途,其中所述肿瘤选自脑肿瘤、泌尿生殖道肿瘤、淋巴系统的肿瘤、胃肿瘤、喉瘤、单核细胞白血病、肺腺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤和乳腺癌。
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Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102153648A (zh) * | 2011-01-27 | 2011-08-17 | 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 | 一种抗egfr人源化抗体l4-h3及其编码基因与应用 |
CN105810072A (zh) * | 2016-03-25 | 2016-07-27 | 淮海工学院 | 一种蛋白质结晶的教学试剂盒及其方法 |
WO2023138066A1 (zh) * | 2022-01-24 | 2023-07-27 | 景泽生物医药(合肥)有限公司 | 抗egfr抗体的用途 |
Families Citing this family (46)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7060808B1 (en) * | 1995-06-07 | 2006-06-13 | Imclone Systems Incorporated | Humanized anti-EGF receptor monoclonal antibody |
US20030224001A1 (en) * | 1998-03-19 | 2003-12-04 | Goldstein Neil I. | Antibody and antibody fragments for inhibiting the growth of tumors |
ZA200007412B (en) * | 1998-05-15 | 2002-03-12 | Imclone Systems Inc | Treatment of human tumors with radiation and inhibitors of growth factor receptor tyrosine kinases. |
EE200100603A (et) * | 1999-05-14 | 2003-02-17 | Imclone Systems Incorporated | Inimese refraktaarsete kasvajate ravi epidermaalse kasvufaktori retseptori antagonistidega |
CA2418083A1 (en) * | 2000-08-09 | 2002-02-14 | Imclone Systems Incorporated | Treatment of hyperproliferative diseases with epidermal growth factor receptor antagonists |
US20080008704A1 (en) * | 2001-03-16 | 2008-01-10 | Mark Rubin | Methods of treating colorectal cancer with anti-epidermal growth factor antibodies |
US20080026068A1 (en) * | 2001-08-16 | 2008-01-31 | Baxter Healthcare S.A. | Pulmonary delivery of spherical insulin microparticles |
EP2399586A1 (en) | 2002-01-11 | 2011-12-28 | Jefferies, Dr., Wilfred | Use of P97 as an enzyme delivery system for the delivery of therapeutic lysosomal enzymes |
EP1622941A2 (en) * | 2003-03-20 | 2006-02-08 | ImClone Systems Incorporated | Method of producing an antibody to epidermal growth factor receptor |
PL1735348T3 (pl) * | 2004-03-19 | 2012-11-30 | Imclone Llc | Ludzkie przeciwciało przeciwko receptorowi naskórkowego czynnika wzrostu |
US8728525B2 (en) * | 2004-05-12 | 2014-05-20 | Baxter International Inc. | Protein microspheres retaining pharmacokinetic and pharmacodynamic properties |
DK1765294T3 (da) * | 2004-05-12 | 2008-11-10 | Baxter Int | Nukleinsyremikrokugler samt deres fremstilling og afgivelse |
EP1753404A1 (en) * | 2004-05-12 | 2007-02-21 | Baxter International Inc. | Microspheres comprising protein and showing injectability at high concentrations of said agent |
US7884085B2 (en) | 2004-05-12 | 2011-02-08 | Baxter International Inc. | Delivery of AS-oligonucleotide microspheres to induce dendritic cell tolerance for the treatment of autoimmune type 1 diabetes |
JP5118139B2 (ja) * | 2006-08-04 | 2013-01-16 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド | 新規発症自己免疫性糖尿病を予防および/または逆転させるためのマイクロスフィアに基づく組成物 |
NZ613356A (en) * | 2006-10-27 | 2015-02-27 | Abbvie Biotechnology Ltd | Crystalline anti-htnfalpha antibodies |
MX2009011218A (es) | 2007-04-17 | 2010-02-11 | Baxter Int | Microparticulas de acido nucleico para administracion pulmonar. |
CN101980722A (zh) * | 2007-08-08 | 2011-02-23 | 雅培制药有限公司 | 结晶抗体的组合物和方法 |
CN101903512A (zh) * | 2007-10-15 | 2010-12-01 | 比奥根艾迪克Ma公司 | 使用稳定的储存中间体制造生物产物的方法 |
US8323615B2 (en) | 2008-08-20 | 2012-12-04 | Baxter International Inc. | Methods of processing multi-phasic dispersions |
US8367427B2 (en) | 2008-08-20 | 2013-02-05 | Baxter International Inc. | Methods of processing compositions containing microparticles |
US8323685B2 (en) | 2008-08-20 | 2012-12-04 | Baxter International Inc. | Methods of processing compositions containing microparticles |
US10143652B2 (en) * | 2009-09-23 | 2018-12-04 | Curirx Inc. | Methods for the preparation of liposomes |
PT2717917T (pt) | 2011-07-05 | 2016-07-27 | Bioasis Technologies Inc | Conjugados de anticorpos p97 |
CA2842492A1 (en) | 2011-08-05 | 2013-02-14 | Bioasis Technologies, Inc. | P97 fragments with transfer activity |
ES2647082T3 (es) | 2012-07-31 | 2017-12-19 | Bioasis Technologies Inc | Proteínas desfosforiladas de la enfermedad de depósito lisosómico y métodos de uso de las mismas |
CA2906003C (en) | 2013-03-13 | 2021-07-06 | Bioasis Technologies Inc. | Fragments of p97 and uses thereof |
EP3038657A2 (en) | 2013-08-28 | 2016-07-06 | Bioasis Technologies Inc. | Cns-targeted conjugates having modified fc regions and methods of use thereof |
BR112016017933A2 (pt) | 2014-02-03 | 2017-10-10 | Bioasis Technologies Inc | ?proteínas de fusão p97? |
US10392605B2 (en) | 2014-02-19 | 2019-08-27 | Bioasis Technologies Inc. | P97-IDS fusion proteins |
CA2943890A1 (en) | 2014-05-01 | 2015-11-05 | Bioasis Technologies, Inc. | P97-polynucleotide conjugates |
PL3228650T3 (pl) * | 2014-12-04 | 2022-06-27 | Delta-Fly Pharma, Inc. | Nowa pochodna PEG |
CN106794258B (zh) * | 2015-02-15 | 2019-07-12 | 江苏恒瑞医药股份有限公司 | 配体-细胞毒性药物偶联物、其制备方法及其应用 |
WO2016131409A1 (zh) * | 2015-02-17 | 2016-08-25 | 上海美雅珂生物技术有限责任公司 | 抗体药物偶联物 |
AR103726A1 (es) | 2015-02-27 | 2017-05-31 | Merck Sharp & Dohme | Cristales de anticuerpos monoclonales anti-pd-1 humanos |
TW201709932A (zh) * | 2015-06-12 | 2017-03-16 | 西雅圖遺傳學公司 | Cd123抗體及其共軛物 |
FI3316909T3 (fi) * | 2015-06-30 | 2023-09-07 | Seagen Inc | NTB-A-vasta-aineita ja liittyviä koostumuksia ja menetelmiä |
CN109415441B (zh) | 2016-05-24 | 2023-04-07 | 英斯梅德股份有限公司 | 抗体及其制备方法 |
CN110913906A (zh) | 2017-05-02 | 2020-03-24 | 默沙东公司 | 抗lag3抗体的制剂和抗lag3抗体与抗pd-1抗体的共制剂 |
JOP20190260A1 (ar) | 2017-05-02 | 2019-10-31 | Merck Sharp & Dohme | صيغ ثابتة لأجسام مضادة لمستقبل الموت المبرمج 1 (pd-1) وطرق استخدامها |
WO2018218633A1 (en) | 2017-06-02 | 2018-12-06 | Beijing Percans Oncology Co. Ltd. | Combination therapies for treating cancers |
WO2019195959A1 (en) | 2018-04-08 | 2019-10-17 | Cothera Biosciences, Inc. | Combination therapy for cancers with braf mutation |
US20230009076A1 (en) * | 2019-06-28 | 2023-01-12 | Serina Therapeutics, Inc. | Polyoxazoline-drug conjugates with novel pharmacokinetic properties |
EP3954393A1 (en) | 2020-08-13 | 2022-02-16 | Bioasis Technologies Inc. | Combination therapies for delivery across the blood brain barrier |
JP7454110B2 (ja) * | 2020-12-04 | 2024-03-21 | シャンハイ フダン-チャンジャン バイオ-ファーマシューティカル カンパニー リミテッド | 抗体薬物複合体、その中間体、製造方法及び使用 |
CN115073437B (zh) * | 2021-03-11 | 2023-07-18 | 北京师范大学 | 基于二氰基吡喃的大环多胺[12]aneN3化合物及其制备方法与用途 |
Family Cites Families (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
AU4128089A (en) * | 1988-09-15 | 1990-03-22 | Rorer International (Overseas) Inc. | Monoclonal antibodies specific to human epidermal growth factor receptor and therapeutic methods employing same |
DE69133566T2 (de) | 1990-01-12 | 2007-12-06 | Amgen Fremont Inc. | Bildung von xenogenen Antikörpern |
JP3854306B2 (ja) * | 1991-03-06 | 2006-12-06 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング | ヒト化及びキメラモノクローナル抗体 |
US5747469A (en) | 1991-03-06 | 1998-05-05 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions comprising DNA damaging agents and p53 |
AU2309692A (en) | 1991-07-03 | 1993-02-11 | Cryolife, Inc. | Method for stabilization of biomaterials |
EP0652950B1 (en) | 1992-07-24 | 2007-12-19 | Amgen Fremont Inc. | Generation of xenogeneic antibodies |
ES2144440T3 (es) | 1992-08-18 | 2000-06-16 | Centro Inmunologia Molecular | Anticuerpos monoclonales que reconocen el receptor del factor de crecimiento epidermico, celulas y metodos para su produccion y compuestos que los contienen. |
ATE390933T1 (de) | 1995-04-27 | 2008-04-15 | Amgen Fremont Inc | Aus immunisierten xenomäusen stammende menschliche antikörper gegen il-8 |
US7060808B1 (en) | 1995-06-07 | 2006-06-13 | Imclone Systems Incorporated | Humanized anti-EGF receptor monoclonal antibody |
WO1996040210A1 (en) | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Imclone Systems Incorporated | Antibody and antibody fragments for inhibiting the growth of tumors |
EP0852951A1 (de) | 1996-11-19 | 1998-07-15 | Roche Diagnostics GmbH | Stabile lyophilisierte pharmazeutische Zubereitungen von mono- oder polyklonalen Antikörpern |
GB9904387D0 (en) | 1999-02-25 | 1999-04-21 | Pharmacia & Upjohn Spa | Antitumour synergistic composition |
CA2433353C (en) * | 2000-12-28 | 2017-03-21 | Altus Biologics, Inc. | Crystals of whole antibodies and fragments thereof and methods for making and using them |
US20020197261A1 (en) * | 2001-04-26 | 2002-12-26 | Chun Li | Therapeutic agent/ligand conjugate compositions, their methods of synthesis and use |
DE10133394A1 (de) * | 2001-07-13 | 2003-01-30 | Merck Patent Gmbh | Flüssige Formulierung enthaltend Cetuximab |
DE10163459A1 (de) * | 2001-12-21 | 2003-07-03 | Merck Patent Gmbh | Lyophilisierte Zubereitung enthaltend Antikörper gegen EGF-Rezeptor |
US20110142822A1 (en) * | 2004-06-14 | 2011-06-16 | Kussie Paul H | Crystal of egfr extracellular domain and cetuximab fab fragment, and uses thereof |
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Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102153648A (zh) * | 2011-01-27 | 2011-08-17 | 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 | 一种抗egfr人源化抗体l4-h3及其编码基因与应用 |
CN105810072A (zh) * | 2016-03-25 | 2016-07-27 | 淮海工学院 | 一种蛋白质结晶的教学试剂盒及其方法 |
WO2023138066A1 (zh) * | 2022-01-24 | 2023-07-27 | 景泽生物医药(合肥)有限公司 | 抗egfr抗体的用途 |
Also Published As
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