MXPA06003379A - Antagonistas del receptor de trombina. - Google Patents

Antagonistas del receptor de trombina.

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Abstract

Una serie de compuestos representados por las formulas estructurales y los isomeros, sales, solvatos y polimorfos farmaceuticamente aceptables del mismo; tambien se describen composiciones farmaceuticas que contienen dichos compuestos y su uso como antagonistas del receptor de trombina y ligantes a los receptores cannabinoides.

Description

ANTAGONISTAS DEL RECEPTOR DE TROMBINA ANTECEDENTES DE LA INVENCION La presente invención se relaciona con los derivados nor-seco de himbacina ventajosos como antagonistas del receptor de trombina en el tratamiento de las enfermedades asociadas con la trombosis, aterosclerosis, restenosis, hipertensión, angina de pecho, arritmia, insuficiencia cardiaca, isquemia cerebral, apoplejía, enfermedades neurodegenerativas y cáncer. Los antagonistas del receptor de trombina se conocen también como antagonistas de receptores activados por proteasa (PAR). Los compuestos de la presente invención se unen también a los receptores cannabinoides (CB2) y son de utilidad en e! tratamiento de la artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, diabetes, osteoporosis, isquemia renal, apoplejía cerebral, isquemia cerebral, nefritis, trastornos inflamatorios de los pulmones y el tracto gastrointestinal y trastornos del tracto respiratorio tales como obstrucción reversible de las vías respiratorias, asma crónica y bronquitis. La invención se relaciona asimismo con composiciones farmacéuticas que contienen dichos compuestos. Se sabe que la trombina tiene una variedad de actividades en diferentes tipos de células y se sabe que los receptores de trombina están presentes en dichos tipos de células como plaquetas humanas, células de músculo liso vascular, células endoteliales y fibroblastos. Por lo tanto, se estima que los antagonistas del receptor de trombina han de ser ventajosos en el tratamiento de los trastornos trombóticos, inflamatorios, ateroscleroticos y fibroproliferativos, así como otros trastornos en los cuales la trombina y su receptor desempeñan una función patológica. Se han identificado péptidos antagonistas del receptor de trombina basándose en estudios de actividad y estructura que implican sustituciones de aminoácidos en los receptores de trombina. En el trabajo de Bernatowicz y otros, J. Med. Chem., 39 (1996), p. 4879-4887, se describen tetra- y pentapéptidos como potentes antagonistas del receptor de trombina, por ejemplo N-trans-cinnamoil-p-fluorPhe-p-guanidinoPhe-Leu-Arg-NH2 y N-trans-cinnamoil-p-fluorPhe-p-guanidinoPhe-Leu-Arg-Arg-NH2. También se describen antagonistas peptídicos del receptor de trombina en WO 94/03479, publicada el 17 de febrero de 1994. Los receptores cannabinoides pertenecen a la superfamilia de receptores acoplados a la proteína G. Están clasificados como receptores predominantemente neuronales CBi y los receptores predominantemente periféricos CB2. Estos receptores ejercen sus acciones biológicas modulando la adenilato ciclasa y las corrientes de Ca+2 y K+. En tanto que los efectos de los receptores CB-i están asociados principalmente con el sistema nervioso central, se cree que ios receptores CB2 tienen efectos periféricos relacionados con la constricción bronquial, la inmunomodulación y la inflamación. Por ello, se estima que un agente selectivo de unión al receptor CB2 ha de tener utilidad terapéutica en el control de las enfermedades asociadas con la artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, diabetes, osteoporosis, isquemia renal, apoplejía cerebral, isquemia cerebral, nefritis, trastornos inflamatorios de los pulmones y el tracto gastrointestinal y trastornos del tracto respiratorio tales como obstrucción reversible de las vías respiratorias, asma crónica y bronquitis (R. G. Pertwee, Curr. Med. Chem. 6(8), (1999), 635). Se ha identificado a la himbacina, un alcaloide de piperidina de la fórmula como antagonista del receptor muscarínico. La síntesis total de (+)-himbacina ha sido descrita por Chackalamannil y otros, J. Am. Chem. Soc, 118 (1996), p. 9812-9813. Se han descrito compuestos tricíclicos relacionados con la himbacina como antagonistas del receptor de trombina en la patente de los Estados Unidos No. 6,063,847.
BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención se relaciona con antagonistas del receptor de trombina representados por la fórmula I o un isómero, sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de los mismos, en los cuales: Z es -(CH2)n-; cuando R esta ausente; o v cuando R está ausente; la línea de puntos simple representa un doble enlace optativo; la línea de puntos doble representa un enlace simple optativo; n es 0-2; R y R2 son independientemente seleccionados del grupo formado por H, alquilo de Ci_C6l fluoroalquilo de (Ci-C6), difluoroalquilo de (C-i. C6), trifluoroalquilo de (??.?ß), cicloalquilo de C3-C7, alquenilo de C2-C6, arilalquilo de (C^Ce), arilalquenilo de (C2-C6), heteroarilalquilo de (Ci.Ce), heteroarilalquenilo de (C2-C6), hidroxialquilo de (Oí-Ce), alcoxi(C .Ce)- alqu¡lo(Ci.C6), aminoalquilo de (Ci.C6), arilo y tioalquilo de (Ci_C6); o bien R1 o R2 juntos forman un grupo =0; R3 es H, hidroxi, alcoxi de Ci,C6, -NR18R19, -SOR16, -SO2R17, - C(O)OR17, -C(O)NR18R19, alquilo de Ci.Ce, halógeno, fluoroalquilo de (Ci.C6), difluoroalquilo de (Ci-C6), trifluoroalquilo de (C-|.C6), cicloalquilo de C3-C7, alquenilo de C2-C6, arialquilo de (Ci.C6), arilalquenilo de (C2-C6), heteroarilalquilo de (Ci.C6), heteroarilalquenilo de (C2-C6), hidroxialquilo de (Ci-Ce), aminoalquilo de (Ci.C6), arilo, tioalquilo de (Ci.C6), alcoxi(Ci.C6)-alquilo(Ci.C6) o alquilamino(Ci.C6)-alquilo(Ci.C6); R34 es (H, R3), (H, R43), =0 o =NOR17 cuando el enlace doble optativo no está presente; R34 es R44 cuando el enlace doble está presente; Het es un grupo heteroaromático mono, bi o tricíclico de 5 a 14 átomos compuesto por 1 a 13 átomos de carbono y 1 a 4 heteroátomos independientemente seleccionados del grupo formado por N, O y S, donde un nitrógeno del anillo puede formar un N-óxido o un grupo cuaternario con un grupo alquilo de C1-C4, donde Het está unido a B por un miembro del anillo de átomos de carbono, y donde el grupo Het esta sustituido con 1 a 4 sustituyentes, W, independientemente seleccionados del grupo formado por H; alquilo de C1-C6, fluoroalquilo de (C^C6), difluoroalquilo de (Ci-C6), trifluoroalquilo de (Ci.C6), cicloalquilo de C3-C7, heterocicloalquilo, heterocicloalquilo sustituido con alquilo de Ci.C6, alquenilo C2-C6, OH-alquilo de (Ci.C6) o =0; alquenilo de C2.C6, R21 -arialquilo de (Ci.C6), R21-arialquenilo de (C2-C6), R21-ariloxi; R 1-aril-NH-; heteroarilalquilo de (Ci.Ce), heteroarilaquenilo de (C2-C6), heteroariloxi, heteroaril-NH-; hidroxialquilo(Ci_ C6), dihidroxialquilo de (C-i.Ce), aminoalquilo de (Ci.C6), alquilamino(Ci.C6)- alquilo(Ci-C6), di-(alquil(Ci-C6))-aminoalquilo(Ci-C6), tioalquilo de (Ci-C6), alcoxi de d_C6, alqueniloxi de C2-C6, halógeno; -NR4R5, -CN; -OH; -COOR17; - COR16; -OSO2CF3, -CH2OCH2CF3, alquiltio de (d-Ce); -C(O)NR R5; -OCHR6-fenil-; fenoxi-alquilo de (Ci.C6). -NHCOR16; -NHSO2R16; bifenilo; -OC(R6)2COOR7; -OC(R6)2C(O)NR4R5; alcoxi de (d.C6); -C(=NOR 7)R18; alcoxi de Ci.Ce sustituido con alquilo de (d.Ce), amino, -OH, COOR17, -NHCOOR17, -CONR4R5, arilo, arilo sustituido con 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo formado por halógeno, -CF3, alquilo de Ci.Ce, alcoxi de d.C6 y -COOR17, arilo donde los carbonos adyacentes forman un anillo con un grupo metilendioxi, -C(O)NR4R5 o heteroarilo; R21-arilo, arilo donde los carbonos adyacentes forman un anillo con un grupo metilendioxi, R4 -heteroarilo; y heteroarilo donde los átomos de carbono adyacentes forman un anillo con un grupo alquileno de C3-C5 o un grupo metilendioxi; R4 y R5 son independientemente seleccionados del grupo formado por H, alquilo de Ci.Ce, fenilo, bencilo y cicloalquilo de C3.C7, o bien R4 y R5 juntos son -(CH2)4-, -(CH2)5- o -(CH2)2NR7-(CH2)2- y forman un anillo con el nitrógeno al cual están unidos; R6 es independientemente seleccionado del grupo formado por H, alquilo de C1.C6, fenilo, cicloalquilo de (C3-C7), cicloalquilo (C3-C7)- alquilo(Ci.C6), alcox Ci.CeJ-alquiloíd.Ce), hidroxialquilo de (Ci.C6) y aminoalquilo de (??.?ß); R7 es H o alquilo de (Ci.Ce), R8, R10 y R 1 son independientemente seleccionados del grupo formado por R1 y -OR1, siempre que, cuando el enlace doble optativo está presente, R10 esté ausente; R9 es H, OH, alcoxi de Ci_C6, halógeno o haloalquilo de (C-|.C6); B es -(CH2)n3 ,--, -CH2-O-, -CH2S-, -CH2-NR6- -C(0)NR6-, - NR6C(0)-, ? cis o trans o -(CH2)n4C= C(CH2)n5-, donde n3 es 0-5, n4 y ?5 son independientemente 0-2, y R12 y R12a son independientemente seleccionados del grupo formado por H, alquilo de C1-C6 y halógeno; X es -O- o -NR6- cuando la línea doble de puntos representa un enlace simple o X es H, -OH o -NHR20 cuando el enlace está ausente; Y es =0, =S, (H, H), (H, OH) o (H, alcoxi de Ci.C6) cuando la línea doble de puntos representa un enlace simple, o cuando el enlace está ausente, Y es =0, =NOR17, (H, H), (H, OH), (H, SH), (H, alcoxi de Ci_C6) o (H, -NHR45); R15 está ausente cuando la línea doble de puntos representa un enlace simple; R15 es H, alquilo de Ci.C6, -NR 8R19 o -OR17 cuando el enlace está ausente; o Y o y R15 es H o alquilo de d-Ce; R 6 es alquilo inferior de C-|.C6l fenilo o bencilo, R17, R18 y R 9 son independientemente seleccionados del grupo formado por H, alquilo de Ci.C6, fenilo y bencilo; R20 es H, alquilo de Ci-Ce, fenilo, bencilo, -C(0)R6 o -S02R6; R21 es 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo formado por hidrógeno, CN, -CF3, -OCF3, halógeno, -N02, alquilo de Ci-Ce, alcoxi de Ci.C6, alquilamino de (Ci.Ce), d¡-(alquil(Ci.C6))amino, aminoalquilo de (Ci.C6), alquilaminoíCi.Ce^alquiloíCi-Ce), di-(alquil(Ci-C6))-aminoalquiloíd.Ce), hidroxi-alquilo(Ci.C6), -COOR 7, -COR17, -NHCOR16, -NHS02R16, -NHSO2CH2CF3, heteroarilo o -C(=NOR17)R18; R22 y R23 son independientemente seleccionados del grupo formado por hidrógeno, R24-alquilo de (CrC10), R24-alquenilo de (C2-C10). R24-alquinilo de (C2-C10), R 7-hetero-cicloalquilo, R25-arilo, R25-arilalqu¡lo de (d-C6), R29-cicloalquilo de (C3-C7), R29-cicloalquenilo de (C3-C7), -OH, -OC(0)R30, -C(0)OR30, -C(O)R30, -C(O)NR30R31, -NR30R31, -NR30C(O)R31, -NR30C(O)NR31R32, -NHSO2R30, -OC(O)NR30R31, R24-alcoxi de (C C10), R24-alqueniloxi de (C2-Ci0), R 4-alquiniloxi de (C2-Ci0), R27-heterocicloalquiloxi, R29-cicloaiquiloxi de (C3-C7), R29-cicloalqueniloxi de (C3-C7), R29-cicloalquil(C3-C7)-NH-, -NHSO2NHR16 y -CH(=NOR17); o bien R22 y R10, junto con el carbono al cual están unidos, o R23 y R \ junto con el carbono al cual están unidos, forman independientemente un anillo carbocíclico de 3-10 átomos sustituido con R42 o un anillo heterocíclico de 4-10 átomos sustituido con R , en el cual 1-3 miembros del anillo son independientemente seleccionados del grupo formado por -O-, -NH- y -SOo-2-, siempre que, cuando R22 y R10 forman un anillo, el enlace doble optativo esté ausente; R24 es 1 , 2 o 3 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo formado por hidrógeno, halógeno, -OH, alcoxi de (Ci-C6), R35-arilo, alquenil(C2-C10)-C(O)-, alquinil(C2-C10)-C(O)-, heterocicloalquilo, R 6-cicloalquilo de (C3-C7), R26-cicloalquenilo de (C3-C7), -OC(0)R30, -C(0)OR30, -C(0)R30, -C(O)NR30R31 , -NR30R31, -NR30C(O)R31 ,-NR30C(O)NR31R32, -NHS02R30, -OC(O)NR30R3\ R24-alqueniloxi de (C2-C10), R2 -alquiniloxi de (C2-C10), R27-heterocicloalquiloxi, R29-cicloalquiloxi de (C3-C7), R29-cicloalqueniloxi de (C3-C7), R29-cicloalquil(C3-C7)-NH-, -NHS02NHR16 y -CH(=NOR17); R25 es 1 , 2 o 3 sustituyentes independientes seleccionados del grupo formado por hidrógeno, heterocicloalquilo, halógeno, -COOR36, -CN, -C(0)NR37R38, -NR39C(0)R40, -OR36, cicloalquilo de (C3-C7), cicloalquilo(C3-C7)-alquilo(CrC6), alquil(CrC6)cicloalquil(C3-C7)-alqu¡l(CrC6), haloalquil(C C6)-cicloalquil(C3-C7)-alquil(CrC6), hidroxialquilo de (Ci-C6), alcoxi(Ci-C6)-alquilo(CrC6), y R41-heteroarilo; o dos grupos R25 en carbonos adyacentes del anillo forman un grupo metilendioxi fusionado; R26 es 1 , 2 o 3 sustituyentes independientes seleccionados del grupo formado por hidrógeno, halógeno y alcoxi de (CrC6); R27 es 1 , 2 o 3 sustituyentes independientes seleccionados del grupo formado por hidrógeno, R28-alquilo de (C C10), R28-alquenilo de (C2- Cio), R28-alquinilo de (Ordo), R28 es hidrógeno, -OH o alcoxi de (CrC6); R29 es 1 , 2 o 3 sustituyentes independientes seleccionados del grupo formado por hidrógeno, alquilo de (CrCe), -OH, alcoxi de (CrC6) y halógeno; R30, R31 y R32 son independientemente seleccionados del grupo formado por hidrógeno, alquilo de (C1-C10), alcoxi(C-i-C-6)-alquilo(CrCio), R25-aril-alquilo de (C C6), R33-cicloalquilo de (C3-C7), R3 -cicloalquil(C3-C7)-aiquilo(CrC6), R25-arilo, heterocicloalquilo, heteroarilo, heterocicloalquilalquilo de (CrC6) y heteroarilalquilo de (d-Ce); R33 es hidrógeno, alquilo de (C C6), OH-alquilo de (CrC6) o alcoxi de (CrC6); R35 es 1 a 4 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo formado por hidrógeno, alquilo de (CrC6), -OH, halógeno, -CN, alcoxi de (C C6), trihaloalcoxi de (C C6), alquilamino de (C C6), di(alquil(d-C6))amino, -OCF3, OH-alquilo de (d-d), -CHO, -C(O)-alquiIamino(Ci-C6), -C(0)di(alquil(C Ce))amino, -NH2, -NHC(O)alquilo(C C6) y -N(alquil(C C6))C(O)alquilo(CrC6); R35 es hidrógeno, alquilo de (Ci-C6), haloalquilo de (C-i-C6), dihaloalquilo de (CrC6) o trifluoroalquilo de (Ci-C6), R y R son independientemente seleccionados del grupo formado por hidrógeno, alquilo de (C Ce), arllaquilo de (Ci-C6), feniio y cicloalquilo de (C3-C15), o R37 y R38, juntos son -(CH2)4-, -(CH2)5- o -(CH2)2-NR39-(CH2)2- y forman un anillo con el nitrógeno al cual están unidos; R39 y R40 son independientemente seleccionados del grupo formado por hidrógeno, alquilo de (Ci-C6), arialquilo de (C Ce), feniio y cicloalquilo de (C3-C15), o bien R39 y R40 en el grupo -NR39C(O)R40, junto con los átomos de carbono y nitrógeno a los cuales están unidos, forman una lactama cíclica con 5-8 miembros en el anillo; R4 es 1 a 4 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo formado por hidrógeno, alquilo de (C C6), alcoxi de (C Ce), alquilamino de (C C6), di(alquil(CrC6))amino, -OCF3l OH-alquilo de (C C6), -CHO y feniio; R42 es 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados del grupo formado por hidrógeno, -OH, alquilo de (C-i-C6) y alcoxi de (Ci-C6); R43 es -NR30R31, -NR30C(O)R31, -NR30C(O)NR31R32, -NHSO2R30 o -NHCOOR17; R44 es H, alcoxi de C C6l -SOR16, -SO2R17, -C(O)OR17, -C(O)NR18R19, alquilo de C C6, halógeno, fluoroalquilo de (C C6), difluoroalquilo de (CrC6), trifluoroalquilo de (Ci-C6), cicloalquilo de C3-C7) alquenilo de C2-C6, arialquilo de (C Ce), arilalquenilo de (C2-C5), heteroarilalquilo de (C C6), heteroarilalquenilo de (C2-C6), hidroxialquilo de (Ci-C6), aminoalquilo de (C-i-Ce), arilo, tioalquilo de (C-j-Ce), alcoxi(C C6)- alquilo(C C6) o alquiloamino(CrC6)-alquilo(CrC6); y R45 es H, alquilo de C C6, -COOR16 o -S02. Cada uno de R2, R8, R10 y R11 es preferentemente hidrógeno. R3 es preferentemente hidrógeno, OH, alcoxi de Ci-C6, -NHR18 o alquilo de C C6. La variable n es preferentemente cero. R9 es preferentemente H, OH o alcoxi. R1 es preferentemente alquilo de Ci-C6, más preferentemente metilo. La doble línea de guiones representa preferentemente un enlace simple; X es preferentemente -O- y Y es preferentemente =0 o (H, -OH). B es preferentemente trans -CH=CH. Het es preferentemente piridilo, piridilo sustituido, quinolilo o quinolilo sustituido. Los sustituyentes preferidos (W) de Het son R21-arilo, R41-heteroarilo o alquilo. Son más preferibles los compuestos en los cuales Het es 2-piridilo sustituido en la posición 5 con R2 -arilo, R 1-heteroarilo o alquilo, o bien 2-piridilo sustituido en la posición 6 con alquilo. R34 es preferentemente (H, H) o (H, OH). R22 y R23 se seleccionados preferentemente entre OH, alquilo de (C1-C10), alquenilo de (C2-C10), alquinilo de (C2-C10), trifluoroalquilo de (C C10), trifluoroalquenilo de (C2-C10), trifluoroalquinilo de (C2-C10), cicloalquilo de (C3-C7), R25-arilo, R25-arilalquilo de (CrCe), R25-arilhidroxialquilo de (CrC6), R251-aril-alcoxi-alquilo de (C C6), cicloalquil(C3-C7)-alquilo(Ci-C6), alcoxi de (d-C-io), cicloalquiloxi de (C3-C ), alcoxi(CrC6)-alquilo(CrC6), OH-alquilo de (C C6), trifluoroalcoxi de (C C 0) y R27-heterocicloalqu¡lalquilo de (C-i-C6). Son más preferidos los compuestos en los cuales R22 y R23 son independientemente seleccionados del grupo formado por alquilo de (C1-C10) y OH-alquilo de (C C6). Más preferentemente, la presente invención se relaciona con antagonistas del receptor de trombina representados por cualquiera de las siguientes fórmulas estructurales: o un isómero, sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de los mismos. Los compuestos antagonistas del receptor de trombina de la presente invención pueden tener actividad antitrombótica, anti-agregación de plaquetas, antiaterosclerótica, antirrestenótica y anticoagulante. Las enfermedades relacionadas con la trombosis tratadas por los compuestos de la presente invención son trombosis, aterosclerosis, restenosis, hipertensión, angina de pecho, arritmia, insuficiencia cardiaca, infarto de miocardio, glomerulonefritis, apoplejía trombótica y tromboembólica, enfermedades vasculares periféricas, otras enfermedades cardiovasculares, isquemia cerebral, trastornos inflamatorios y cáncer, así como otros trastornos en los cuales la trombina y su receptor desempeñan una función patológica. Los compuestos de la presente invención que se unen a los receptores cannabinoides (CB2) pueden ser de utilidad en el tratamiento de la artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, diabetes, osteoporosis, isquemia renal, apoplejía cerebral, isquemia cerebral, nefritis, trastornos inflamatorios de los pulmones y el tracto gastrointestinal y trastornos del tracto respiratorio tales como obstrucción reversible de las vías respiratorias, asma crónica y bronquitis. Esta invención se relaciona asimismo con un método para usar por lo menos un compuesto de la fórmula I en el tratamiento de la trombosis, la agregación de plaquetas, la coagulación, el cáncer, las enfermedades inflamatorias o las enfermedades respiratorias, que comprende administrar un compuesto de la fórmula I a un mamífero que necesita dicho tratamiento. Específicamente, la presente invención se relaciona con un método para usar por lo menos un compuesto de la fórmula I en el tratamiento de la trombosis, aterosclerosis, restenosis, hipertensión, agina de pecho, arritmia, insuficiencia cardiaca, infarto de miocardio, glomerulonefritis, apoplejía trombótica, apoplejía tromboembólica, enfermedades vasculares periféricas, isquemia cerebral, cáncer, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, diabetes, osteoporosis, isquemia renal, apoplejía cerebral, isquemia cerebral, nefritis, trastornos inflamatorios de los pulmones y el tracto gastrointestinal, obstrucción reversible de las vías respiratorias, asma crónica y bronquitis. Se contempla el hecho de que un compuesto de la presente invención puede servir para el tratamiento de más de una de las enfermedades enumeradas. En otro aspecto, la invención se relaciona con una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de por lo menos un compuesto de la fórmula I en por lo menos un vehículo farmacéuticamente aceptable.
DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION A menos que se defina lo contrario, el término "alquilo" o "alquilo inferior" se refiere a cadenas alquílicas rectas o ramificadas de 1 a 6 átomos de carbono y "alcoxi" igualmente se refiere a grupos alcoxi con 1 a 6 átomos de carbono. Fluoroalquilo, difluoroalquilo y trifluoroalquilo se refieren a cadenas alquílicas en las cuales el carbono terminal está sustituido con 1 , 2 o 3 átomos de flúor, por ejemplo -CF3) -CH2CF3, -CH2CHF2 o -CH2CH2F. Haloalquilo se refiere a una cadena alquílica sustituida con 1 a 3 átomos de halógeno. "Alquenllo" se refiere a cadenas carbónicas rectas o ramificadas de átomos de carbono que tienen uno o más enlaces dobles en la cadena, conjugados o no conjugados. Del mismo modo, "alquinilo" se refiere a cadenas carbónicas rectas o ramificadas de átomos de carbono que tienen uno o más enlaces triples en la cadena. Cuando una cadena de alquilo, alquenilo o alquinilo une dos variables más y, por lo tanto, es bivalente, se utilizan los términos alquileno, alquenileno y alquinileno. A menos que se indique lo contrario, las cadenas de alquenilo y alquinilo comprenden de 1 a 6 átomos de carbono. La sustitución en las cadenas de alquilo, alquenilo y alquinilo depende de la longitud de la cadena y del tamaño y naturaleza del sustituyente. Los expertos en la técnica sabrán apreciar que, mientras las cadenas más largas pueden dar lugar a múltiples sustituyentes, las cadenas más cortas, por ejemplo metilo o etilo, pueden tener una múltiple sustitución con halógeno, pero de lo contrario es probable que sólo tengan uno o dos sustituyentes además de hidrógeno. Las cadenas insaturadas más cortas, por ejemplo, etenilo o etinilo, generalmente son insustituidas o la sustitución se limita a uno o dos grupos, dependiendo del número de enlaces de carbono disponibles. "Cicloalquilo" se refiere a un anillo de carbono saturado de 3 a 7 átomos de carbono, en tanto que "cicloalquileno" se refiere a un correspondiente anillo bivalente, donde los puntos de unión a otros grupos incluyen todos los esteroisómeros y los isómeros de posición. "Cicloalquenilo" se refiere a un anillo de carbono de 3 a 7 átomos y que tiene uno o más enlaces insaturados, aunque no es de naturaleza aromática. "Heterocicloalquilo" se refiere a anillos saturados de 5 o 6 átomos compuestos por 4 a 5 átomos de carbono y 1 o 2 heteroátomos seleccionados del grupo formado por -O-, -S-, y -NR7- unidos al resto de la molécula por un átomo de carbono. Entre los ejemplos de grupos heterocicloalquilo se cuentan 2-pirrolidinilo, tetrahidrotiofen-2-ilo, tetrahidro-2-furanilo, 4-piperidinilo, 2-piperazinilo, tetrahidro-4-piranilo, 2-morfolinilo y 2-tiomorfolinilo. "Halógeno" se refiere a radicales flúor, cloro, bromo o yodo. Cuando R4 y R5 se unen para formar un anillo con el nitrógeno al cual están unidos, los anillos formados son 1-pirrolidinilo, 1-piperidinilo y 1-piperazinilo, donde el anillo de piperazinilo también puede estar sustituido en el nitrógeno de la posición 4 con un grupo R7. "Dihidroxialquilo de (CrC6)" se refiere a una cadena alquílica sustituida con dos grupos hidroxi en dos átomos de carbono diferentes.
"Arilo" se refiere a fenilo, naftilo, indenilo, tetrahidronaftilo o indanilo. "Heteroarilo" se refiere a un solo anillo o a un grupo heteroaromático benzofusionado de 5 a 10 átomos, compuesto por 2 a 9 átomos de carbono y 1 a 4 heteroátomos independientemente seleccionados del grupo formado por N, O y S, siempre que los anillos no incluyan átomos adyacentes de oxígeno y/o azufre. También se incluyen los N-óxidos de los nitrógenos del anillo, así como los compuestos en los cuales un nitrógeno del anillo está sustituido con un grupo alquilo de C C4 para formar una amina cuaternaria. Entre los ejemplos de grupos heteroarilo de un solo anillo se cuentan piridilo, oxazolilo, isoxazolilo, oxadiazolilo, furanilo, pirrolilo, tienilo, imidazolilo, pirazolilo, tetrazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, tiadiazolilo, pirazinilo, pirimidilo, piridazinilo y triazolilo. Entre los ejemplos de grupos heteroarilo benzofusionados se cuentan indolilo, quinolilo, isoquinolilo, ftalazinilo, benzotienilo (es decir, tionaftenilo), bencimidazolilo, benzofuranilo, benzoxazolilo y benzofurazanilo. Están contemplados todos los Isómeros de posición, es decir, 2-piridilo, 3-piridilo y 4-piridilo. Heteroarilo sustituido con W se refiere a aquellos grupos en los cuales los átomos de carbono sustituibles del anillo tienen un sustituyente como se definió anteriormente, o donde los átomos de carbono adyacentes forman un anillo con un grupo alquileno o un grupo metilendioxi, o donde un nitrógeno del anillo de Het puede estar sustituido con R21-arilo o un sustituyente alquilo optativamente sustituido según lo definido en W.
El término "Het" está ejemplificado por el anillo simple, el anillo sustituido con otro anillo (que puede ser igual o diferente), grupos heteroarilo benzofusionados tal como se definiera anteriormente, así como grupos tricíclicos tales como benzoquinolinilo (por ejemplo, 1 ,4 o 7,8) o fenantrolinilo (por ejemplo, 1,7, 1 ,10; o 4,7). Los grupos Het están unidos al grupo B por un miembro del anillo de carbono, por ejemplo, Het es 2-piridilo, 3-piridilo o 2-quinolilo. Entre los ejemplos de grupos heteroarilo en los cuales los átomos de carbono adyacentes forman un anillo con un grupo alquileno se cuentan 2,3-ciclopentenopiridina, 2,3-ciclohexenopiridina y 2,3-cicloheptenopiridina. El término "doble enlace optativo" se refiere al enlace indicado por la línea de puntos simple en el anillo medio de la estructura expuesta en la fórmula I. El término "enlace simple optativo" se refiere al enlace indicado por la línea doble de puntos entre X y el carbono al cual Y y R15 están unidos en la estructura de la fórmula I. Las enunciaciones anteriores, donde se dice, por ejemplo, que R4 y R5 son independientemente seleccionados de un grupo de sustituyentes, significa que R4 y R5 son independientemente seleccionados, pero también que cuando una variable R4 o R5 aparece más de una vez en una molécula, esas apariciones son seleccionadas independientemente. Los expertos en la técnica reconocerán que el tamaño y el carácter del o los sustituyentes afectarán el número de sustituyentes que pueden estar presentes.
También se ha de notar que se presume que cualquier fórmula, compuesto, porción o ilustración química con valencias no satisfechas en la presente memoria descriptiva y/o las reivindicaciones de la misma, tiene suficientes átomos de hidrógeno para satisfacer las valencias. Los compuestos de la presente invención tienen por lo menos un átomo de carbono asimétrico y, por lo tanto, todos los isómeros están contemplados, incluyendo los diastereómeros y los isómeros rotatorios, como parte de la presente invención. La invención incluye los isómeros (+)- y (-)-tanto en la forma pura como en mezclas, incluyendo mezclas racémicas. Los isómeros se pueden preparar empleando técnicas convencionales, ya sea haciendo reaccionar materiales de partida ópticamente puros u ópticamente enriquecidos o separando los isómeros de un compuesto de la fórmula I. "Polimorfo" se refiere a una forma cristalina de una sustancia que está diferenciada de otra forma cristalina pero que comparte la misma fórmula química. También están contemplados en la presente los profármacos y solvatos de los compuestos de la presente invención. El término "profármaco" empleado en la presente, indica un compuesto que es precursor de un fármaco que, al ser administrado a un sujeto, sufre una conversión química por medio de procesos metabólicos o químicos, para dar origen a un compuesto de la fórmula I o una sal y/o solvato del mismo (por ejemplo un profármaco, una vez ajustado al pH fisiológico o por medio de la acción enzimática, se convierte a la forma de fármaco buscada). Se presenta una explicación de profármacos en el trabajo de T. Higuchi y V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems (1987) Volumen 14 de la Serie A.C.S. Symposium así como en Bioreversible Carriers in Drug Design, (1987) Edward B. Roche, ed., American Pharmaceutical Association y Pergamon Press, ambas incorporadas a la presente a título de referencia. "Solvato" se refiere a la asociación física de un compuesto de la presente invención con una o más moléculas de solvente. Esta asociación física conlleva diversos grados de unión iónica y covalente, incluyendo enlaces de hidrógeno. En ciertos casos, el solvato es capaz de aislamiento, por ejemplo cuando una o más moléculas de solvente se incorporan a la red cristalina del sólido cristalino. "Solvato" abarca tanto los solvatos en fase de solución como solvatos aislables. Entre los ejemplos no limitantes de solvatos adecuados se incluyen los etanolatos y similares. Un "hidrato" es un solvato en el cual la molécula de solventes es H20. Los compuestos de la presente invención con un grupo ácido carboxílico pueden formar ésteres farmacéuticamente aceptables con un alcohol. Entre los ejemplos de alcoholes adecuados se incluyen metanol y etanol. Entre las abreviaturas que se emplean en los ejemplos de preparación, esquemas y ejemplos, se incluyen las siguientes: ABAD: Azodicarboxilato de di-terc-butilo DBU: 1 ,8-Diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno DCC: Diciclohexilcarbodiimida DCM: Diclorometano DIBAL: Hidruro de düsobutilalumino DMAP: 4-Dimetil aminopiridina DMF: N,N-Dimetilformamida DMSO: Sulfóxido de metilo EDCI: Clorhidrato de 1-(3-D¡metilaminopropil)-3-etilcarbodiimida HMPA: Hexametilfosforamida HOBt: Hidroxibezotriazol LAH: Hidruro de litio y aluminio LHMDS Bis(trimetilsilil)amida de litio NMO: N-óxido de 4-Metilmorfina TBAF: Fluoruro de tetrabutilamonio TFA: Acido trifluoracético TF: Tetrahidrofurano TMSI: Yoduro de trimetilsililo TPAP: Perrutenato de tetrapropilamonio Los compuestos típicos preferidos de la invención tienen la siguiente estereoquímica: siendo más preferibles los compuestos que tienen esa estereoquímica absoluta. Los expertos en la técnica sabrán apreciar que, en el caso de algunos compuestos de la fórmula I, un isómero ha de exhibir mayor actividad farmacológica que otros isómeros. Los compuestos de la presente invención con un grupo básico pueden formar sales farmacéuticamente aceptables con ácidos orgánicos e inorgánicos. Entre los ejemplos de ácidos adecuados para la formación de sales se cuentan los ácidos clorhídrico, sulfúrico, fosfórico, acético, cítrico, oxálico, malónico, salicílico, mélico, fumárico, succínico, ascórbico, maleico, metansulfónico y otros ácidos minerales y carboxílicos muy conocidos por los expertos en la técnica. La sal se prepara mediante el contacto de la forma de base libre con una cantidad suficiente del ácido buscado para producir una sal. La forma de base libre puede ser regenerada mediante el tratamiento de la sal con una solución básica acuosa diluida adecuada tal como un bicarbonato de sodio acuoso diluido. La forma de base libre difiere en cierto grado de su respectiva forma de sal en ciertas propiedades físicas, como por ejemplo, la solubilidad en solventes polares, pero por otra parte la sal es equivalente a sus respectivas formas de base libre en lo que se refiere a la invención. Ciertos compuestos de la presente son ácidos (por ejemplo los compuestos que poseen un grupo carboxilo). Estos compuestos forman sales farmacéuticamente aceptables con bases inorgánicas y orgánicas. Entre los ejemplos de dichas sales se incluyen las sales de sodio, potasio, calcio, aluminio, litio, oro y plata. También se incluyen las sales formadas con aminas farmacéuticamente aceptables tales como amoníaco, alquilaminas, hidroxialquiiaminas, N-metilglucamina y similares. Las sales de bisulfato de los compuestos de la presente invención constituyen las modalidades preferidas. Los compuestos de la presente invención se preparan, en general, por procedimientos conocidos en la técnica, como por ejemplo por los procedimientos descritos a continuación. Los compuestos de la fórmula IA, en los cuales n es 1 , el enlace doble optativo no está presente, el enlace simple está presente entre X y el carbono al cual Y está unido, X es -O-, Y es=0, B es-CH=CH-, Het es piridilo sustituido con W, cada uno de R3, R8, R9, R 0 y R11 es hidrógeno y R1 y R2 son como se definiera anteriormente, se pueden preparar condensando un aldehido de la fórmula II, en la cual las variables son las definidas anteriormente, con un fosfonato de la fórmula III, en la cual W es como se definiera anteriormente: Se pueden emplear procedimientos similares para preparar compuestos que comprenden otros grupos Het optativamente sustituidos. Los expertos en la técnica sabrán reconocer, asimismo, que los procedimientos se aplican de igual modo a la preparación de compuestos ópticamente activos o racémicos. Los compuestos de la fórmula IA se pueden convertir a los correspondientes compuestos en los cuales R3 es OH mediante el tratamiento con un reactivo de Davis ((1S)-(+)-(10-canforsulfonil)-oxaziridina) y LHMDS (bis(trimetilsilil)amida de litio). Los aldehidos de la fórmula II se pueden preparar a partir de ácidos dienoicos, por ejemplo los compuestos de la fórmula lia, en los cuales R1 es metilo y R2 es H se pueden preparar de acuerdo con el siguiente esquema de reacciones.
ESQUEMA 1 Se esterifica el alquino de la fórmula 4, preparado por métodos conocidos, con el ácido dienoico de la fórmula 3 empleando condiciones estándar para dar el éster 5. La reducción selectiva del enlace triple de 5 utilizando catalizador de Lindlar bajo hidrógeno da el intermedio 6, que, tras la delación térmica a aproximadamente 185°C, seguida por tratamiento con una base, da el intermedio 7. Se somete al éster 7 a hidrogenación en presencia de óxido de platino para generar el ácido carboxílico saturado intermedio, cuyo tratamiento con cloruro de oxalilo da el correspondiente cloruro de ácido que se convierte al aldehido lia mediante reducción utilizando hidruro de tributilestaño en presencia de un catalizador de paladio. Los ácidos dienoicos de la fórmula 3 se pueden adquirir en el comercio o se preparan con facilidad. También se pueden preparar los aldehidos de la fórmula II por medio de abertura de un anillo de tiopirano, por ejemplo se pueden preparar los compuestos de la fórmula lia antes definidos de acuerdo con el siguiente esquema de reacciones.
ESQUEMA 2 Se reduce el alquino de la fórmula 4 al alqueno 13 utilizando un catalizador de Lindiar bajo hidrógeno. Se esterifica el alqueno 13 con el ácido dienoico de la fórmula 12 utilizando condiciones estándar para dar origen al éster 14. La ciclación térmica a aproximadamente 185°C, seguida por el tratamiento con una base, da el intermedio 15. Se convierte el éster 15 al intermedio ácido carboxílico y se reduce el enlace doble mediante hidrogenación en presencia de un catalizador de platino. A continuación se trata el ácido con cloruro de oxalilo para obtener el cloruro de ácido correspondiente, que se convierte al aldehido 18 mediante reducción con hidruro de tributilestaño en presencia de un catalizador de paladio. Se trata la porción aldehido de 18 con un agente reductor tal como NaBH4 y luego se abre el anillo con contenido de azufre mediante tratamiento con un reactivo tal como níquel Raney para obtener el alcohol 19. A continuación se oxida el alcohol al aldehido, Na, haciendo uso de perrutenato de tetrapropilamonio (TPAP) en presencia de N-óxido de 4-metilmorfolina (NMO). Los fosfonatos de la fórmula III en la cual W es arilo o R21-arilo se pueden preparar mediante un procedimiento similar al descrito inmediatamente a continuación para la preparación del compuesto sustituido con trifluormetil-fenilo, Illa.
Se convierte el derivado hidroxipiridina existente en el mercado al correspondiente triflato utilizando anhídrido trífiico, que luego es acoplado al ácido bórico comercialmente disponible en presencia de Pd(O) en condiciones de Suzuki. Se convierte el producto así obtenido al fosfonato mediante tratamiento con n-butilitio seguido por templado con dietilclorofosfonato. Por otro lado, se pueden preparar compuestos de la fórmula I en los cuales W es arilo optativamente sustituido a partir de los compuestos de la fórmula I en los cuales W es-OH utilizando un intermedio triflato. Por ejemplo, se trata la 3-hidroxi-6-metilp¡r¡dina con cloruro de triisopropilsililo y se convierte el compuesto hidroxi-protegido resultante al fosfonato de acuerdo con lo descrito anteriormente para la preparación del intermedio Illa. A continuación se hace reaccionar el intermedio protegido con triisopropisililo con el intermedio II y se retira el grupo protector en condiciones estándar. Seguidamente, se trata al compuesto obtenido de la fórmula I, en la cual W es OH, con anhídrido trífiico a temperatura ambiente en un solvente tal como CH2CI2; luego se hace reaccionar el triflato con un ácido arilbórico optativamente sustituido, por ejemplo, ácido fenilbórico optativamente sustituido, en un solvente tal como tolueno, en presencia de Pd(PPh3)4 y una base tal como K2CO3 a temperaturas elevadas y bajo atmósfera inerte. Los compuestos de la fórmula I en los cuales W es un grupo hidroxi sustituido (por ejemplo, benciloxi) se pueden preparar a partir de los compuestos de la fórmula I en los cuales W es hidroxi, mediante reflujo en un solvente adecuado tal como acetona con un compuesto sustituido con halógeno tal como bromuro de bencllo optativamente sustituido en presencia de una base tal como K2C03. Los compuestos de la fórmula I en los cuales Het está constituido con W a través de un átomo de carbono (por ejemplo W es alquilo, aíquenilo o arilalquilo) o un átomo de nitrógeno (es decir, -NR4R5) se pueden preparar de acuerdo con lo demostrado en el Esquema 3 empleando un compuesto de la fórmula I en la cual W es cloroalquilo, como intermedio. Los compuestos de la fórmula I en los cuales W es un grupo polar tal como hldroxialquilo, dihidroxlalquilo, -COOH, dimetilamlno y -COH, se pueden preparar de acuerdo con lo ilustrado en el Esquema 4, en el cual el material de partida es un compuesto de la fórmula I en el cual W es aíquenilo. Los siguientes Esquemas 3 y 4 ilustran condiciones de reacción muy conocidas para la preparación de diversos compuestos sustituidos con W en los cuales X es -O-, Y es =0, R 5 está ausente, R1 es metilo, cada uno de R2, R3, R9, R10 y R11 es H, B es -CH=CH- y Het es 2-piridilo.
ESQUEMA 3 ESQUEMA 4 Los expertos en la técnica sabrán apreciar que se pueden llevar a cabo reacciones similares a las descritas en los esquemas anteriores en otros compuestos de la fórmula I, siempre que los sustituyentes presentes no sean susceptibles a las condiciones de reacción descritas. Los compuestos de la fórmula I en los cuales el enlace simple optativo (representado por la línea doble de puntos) está ausente, X es OH, Y es OH, R15 es H y el resto de las variables es como se definiera anteriormente, se pueden preparar mediante el tratamiento de los compuestos correspondientes en los cuales está presente el enlace simple optativo, X es -O-, Y es =0 y R15 está ausente, con un agente reductor tal como LAH. Los compuestos de la fórmula I en los cuales está presente el enlace simple optativo, X es -O-, Y es (H, OH), R15 está ausente y el resto de las variables es como se definiera anteriormente, se pueden preparar mediante el tratamiento de los compuestos correspondientes en los cuales está presente el enlace simple optativo, X es -O-, Y es =0 y R 5 está ausente, con un reactivo tal como DIBAL. Los compuestos obtenidos, en los cuales Y es (H, OH) se pueden convertir a los compuestos correspondientes en los cuales Y es (H, alcoxi) mediante la reacción del compuesto hidroxi con un alcano apropiado en presencia de un reactivo tal como BF3*OE†.2. También se puede convertir un compuesto en el cual Y es (H, OH) al correspondiente compuesto en el cual Y es (H, H) mediante el tratamiento del compuesto hidroxi con BF3*OEt.2 y Et3SiH en un solvente inerte tal como CH2CI2 a bajas temperaturas. Los compuestos de la fórmula I en los cuales R9 es hidrógeno se pueden convertir al correspondiente compuesto en el cual R9 es hidroxi mediante calentamiento con un agente oxidante tal como Se02. Los compuestos de la fórmula IB, en los cuales R2 es H, R3 es H u OH, y W1 representa derivados R21-arilo, R41-heteroarilo, amino o hidroxilamino, se preparan a partir de los compuestos de la fórmula IA en los cuales W es 5-bromo (compuestos de la fórmula 23 o 24) utilizando una variedad de transformaciones químicas estándar, por ejemplo reacción de Suzuki, acoplamiento de Stille y aminación de Buchwald. El esquema de reacción 5 ilustra el procedimiento a partir de la 2,5-dibromopiridina: Se prepara el fosfonato 22 a partir del alcohol conocido 21 por medio de una transformación en dos pasos: se trata al alcohol con CH3S02CI para producir el mesilato, que luego es desplazado con dietilfosfito de sodio para producir 22. También se puede a-hidroxilar el intermedio 23 utilizando un reactivo de Davis para producir el alcohol 24. Tanto 23 como 24 se pueden convertir a diversos análogos, como se demuestra en el esquema 6: ESQUEMA 6 Como se ilustra en el esquema 6, se puede acoplar el bromuro (23 o 24) con ácidos bóricos en condiciones de catálisis con paladio (método 1). Si el ácido bórico posee un grupo funcional, posteriormente se lo puede transformar. Del mismo modo, se pueden acoplar compuestos de aril-estaño (método 2), compuestos de aril-zinc (método 3) y aminas (método 4). La reacción de Heck con vinil éteres puede introducir un grupo ceto, seguidamente puede ser funcionarizado (método 5). Los imidazoles pueden ser acoplados utilizando triflato de cobre (I) como catalizador (método 6). El bromuro también puede ser convertido a un cianuro, al que seguidamente se puede transformar, por ejemplo en un tetrazol (método 7). Utilizando una estrategia de Diles-Alder ilustrada en el esquema 7, se puede acoplar una variedad de ácidos dienoicos 3 con el alcohol 25 y se puede someter al éster 26 a delación térmica para producir el producto IC de DielsAlder: ESQUEMA 7 25 El alcohol 25 se prepara como sigue: 1) H2, cat de Lindlar 2) Reactivo de Dess-Martin Se prepara el alcohol 25 a partir del (R)-(+)-3-butin-2-ol 27 de fácil obtención. Se protege al alcohol como su éter de TBDPS, se desprotona el alquino y se templa con paraformaldehído para dar el alcohol 29. Se reduce el alquino a cis-alqueno utilizando catalizador de Lindlar en presencia de quinolina y se oxida el alcohol aílico para producir el aldehido 30, que se convierte al alcohol 25. Los compuestos de la fórmula ID en donde R22 es - CH20C(0)CH3 o un derivado del mismo, R23 es etilo, R2 es H y el resto de las variables son como se define para IA, se pueden preparar a partir del análogo de tetrahldropirano correspondiente mediante apertura del anillo. Los compuestos de la fórmula ID se pueden convertir en otros compuestos de la fórmula I, por ejemplo los compuestos de la fórmula IE en donde R22 es - CH2OH, por métodos muy conocidos. La reacción se muestra en el esquema 8: ESQUEMA 8 1) BB¾, Cf-U,Ct2 2) Ac20, EtjN, DMAP Se puede preparar el análogo de tetrahidropirano 31 a partir de 3-form¡l-5,6-dihidro-2H-pirano (compuesto conocido) y utilizando el procedimiento similar empleado en el esquema 1. Se puede abrir el anillo en forma regioselectiva empleando BBr3 y se puede proteger el alcohol para dar el acetato ID. La reducción del bromuro con NaCNBH3, seguida por la desprotección del acetato, da origen al alcohol IE. Los materiales de inicio para los procedimientos expuestos se pueden obtener en el comercio, son conocidos en la técnica o se preparan mediante procedimientos muy conocidos en la técnica. Los grupos reactivos no incluidos en los procedimientos anteriores pueden ser protegidos durante las reacciones con grupos protectores convencionales, que pueden ser retirados mediante procedimientos estándar después de la reacción. El siguiente cuadro A ilustra algunos grupos protectores típicos.
CUADRO A La presente invención se relaciona asimismo con una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la fórmula I de esta invención y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Los compuestos de la fórmula I pueden ser administrados en cualquier forma de dosificación oral, como ejemplo en cápsulas, comprimidos, polvos, sellos, suspensiones o soluciones. Las formulaciones y composiciones farmacéuticas se pueden preparar empleando excipientes y aditivos convencionales farmacéuticamente aceptables y técnicas convencionales. Entre dichos excipientes y aditivos farmacéuticamente aceptables reincluyen sustancias de relleno, aglutinantes, desintegrantes, reguladores de pH, conservadores, antioxidantes, lubricantes, saborizantes, espesantes, agentes colorantes, emulsionantes y demás. La dosis diaria de un compuesto de la fórmula I para el tratamiento de una enfermedad o trastorno antes citado es de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día, preferentemente de aproximadamente 0.001 a aproximadamente 10 mg/kg. En el caso de un peso corporal promedio de 70 kg, el nivel de dosificación ha de ser, entonces, de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 700 mg de fármaco por día, administrado en una sola dosis o en 2-4 dosis divididas. La dosis exacta, sin embargo, debe ser determinada por el médico a cargo y depende de la potencia del compuesto administrado, así como de la edad, peso, estado y respuesta del paciente. A continuación se presentan ejemplos de preparación de los materiales de partida y los compuestos de la fórmula I. En los procedimientos, se utilizan las siguientes abreviaturas: temperatura ambiente (ta.), tetrahidrofurano (THF), etil éter (Et20), metilo (Me), etilo (Et), acetato de etilo (EtOAc), dimetilformamida (DMF), 4-dimetilaminopiridina (DMAP), 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU), 1 ,3-diciclohexilcarbodiimida.
PREPARACION 1 Veáse J. Org. Chem., 59(17) (1994), p. 4789.
Paso 2 A una suspensión de NaH al 60% (7.42 g, 185.5 mol, 1.3 eq.) en 300 mi de THF a 0°C se agregó por goteo trietilfosfono acetato (37 mi, 186.5 mol, 1.3 eq.) y se agitó la mezcla a 0°C por espacio de 30 min. Se agregó el producto del paso 1 (14.0 g, 142.7 mmol) y se agitó la mezcla a 0°C durante 30 min. La reacción fue templada mediante la adición de NH4CI acuoso (500 mi), se evaporó el THF y se extrajo la fase acuosa con 3 x 200 mi de EÍ20, se lavó la capa orgánica combinada con solución salina (300 mi), se seco sobre MgS04, filtró y evaporó para dar la mezcla cruda que fue cromatografiada (Et20 al 5%-hexano) para dar 18.38 g (77% de rendimiento) de líquido. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 7.29 (d, 1H, J = 15.4), 5.86 (t, H, J = 7.4), 5.76 (d, 1H, J = 15.4), 4.18 (q, 2H, J = 7.2), 2.22-2.15 (m, 2H), 1.74 (d, 3H, J = 0.7), 1.27 (t, 3H, J = 7.2), 1.00 (t, 3H, J = 7.7). RMN 13C (100 MHz, CDCI3) 167.29, 149.38, 143.45, 132.04, 115.39, 60.08, 22.14, 14.42, 13.58, 12.05. MS: 169 (MH+).
Paso 3 A una solución del producto del paso 2 (6.4 g, 38 mmol) en THF y MeOH (40 mi de cada uno) se agregó una solución de KOH (6.4 g, 11.4 mmol, 3 eq.) en H2O (40 mi). La mezcla fue agitada a t.a. por espacio de 2h, enfriada a 0°C y se agregó H2O (100 mi) y HCM N (150 mi). La mezcla fue extraída con EtOAc (3X100 mi), la capa orgánica combinada fue lavada con H20 (150 mi) y solución salina (150 mi), secada sobre MgSO4, filtrada y evaporada para dar 5.26 g (99% de rendimiento) de un sólido cristalino. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 7.40 (d, 1 H, J = 16), 5.95 (t, 1H, J = 7.2), 5.79 (d, 1H, J = 16), 2.26-2.19 (m, 2H), 1.78 (s, 3H), 1.04 (t, 3H, J = 7.6).
Paso 4 A una solución del producto del paso 3 (2.0 g, 14.3 mmol) en CH2CI2 (70 mi) se agregó cloruro de oxalilo (2.5 mi, 28.7 mmol, 2eq.) seguido por DMF (33 µ?, 3% en mol). La mezcla fue agitada a temperatura ambiente por espacio de 1 h, luego se evaporó el solvente para dar el cloruro de ácido crudo que fue disuelto en CH2CI2 (70 mi) y enfriado a 0°C. A esto se agregó DMAP (175 mg, 1.43 mmol), 0.1 eq.) y una solución del alcohol 4 (2.62 g, 12.8 mmol, 0.9 eq.) en CH2CI2 (5 mi) seguida por Et2N (4 mi, 28.7 mmol, 2 eq.). La mezcla fue agitada a 0°C por espacio de 2 h, diluida con Et2O (200 mi), lavada con NaHCO3 acuoso y solución salina (200 mi de cada uno) y secada sobre MgSO4. La solución fue filtrada, concentrada y el residuo obtenido fue sometido a cromatografía con EtOAc al 5%-hexano para dar 3.56 g (85 %) de la resina color amarillo pálido. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 7.38-7.33 (m, 6H), 5.93 (t, 1 H, J = 7.4), 5.77 (d, 1 H, J = 15.6), 5.62 (q, 1H, J = 6.2), 5.20 (s, 2H), 2.25-2.18 (m, 2H), 1.76 (d, 3H, J = 0.4), 1.58 (d, 3H, J = 6.2), 1.03 (t, 3H, J = 7.4).
Paso 5 A una solución del producto del paso 4 (3.19 g, 9.8 mmol) en THF (50 mi) se agregó catalizador de Lindlar (320 mg, 10% en peso) y quinolina (230 µ?, 2.0 mmol, 0.2 eq.). Se agitó la suspensión bajo 1 atm. de H2 hasta que el material de partida se consumió. Se filtró la solución a través de celite™ y se evaporó. Se disolvió la resina en EtOAc (250 mi) y se lavó con HCI 1 N (3x100 mi) y salina (100 mi). La solución fue secada sobre MgS04, filtrada y evaporada para dar 3.17 g del alqueno crudo que fue utilizado directamente en el siguiente paso.
Paso 6 Se calentó a 185°C una solución del producto del paso 5 (3.15 g, 9.6 mmol) en m-xileno (100 mi), por espacio de 10 h. Se enfrió la solución a t.a. y se agitó durante 1 hora con DBU (290 µ?, 1.94 mmol, 0.2 eq.). Se evaporó el solvente y se sometió al crudo a cromatografía con EtOAc al 10%- hexano para dar .1 g (35%) del producto exo. RMN 1H (400 Hz, CDCI3) 7.38-7.34 (m, 5H) (br s, 1H), 5.14 (ABq, J = 12.0, 22.8, 2H), 4.52 (dq, J = m 6.1 , 8.1 , 1H), 3.26-3.23 (m, 1 H), 2.87 (dd, J = 9.4, 4.6, 1 H), 2.62 (dt, J = 8.1 , 4.5, 1 H), 2.54 (br s, 1 H), 1.71 (t, J = 1.2, 3H), 1.69-1.60 (m, 1 H), 1.50-1.44 (m, 1 H), 1.20 (d, J = 6.4, 3H), 0.77 (t, J = 7.4, 3H). RMN 13C (100 MHz, CDCI3), 175.25, 173.04, 137.86, 135.00, 128.38, 128.34, 128.30, 116.54, 76.64, 66.70, 42.85, 42.14, 41.40, 37.27, 22.52, 21.65, 20.44, 8.98, [<x]22D = -64.4 (c 1 , CH2Ci2). HRMS: 329.1754, calculado 329.1753.
Paso 7 A una solución del producto del paso 6 (1.35 g, 4.1 mmol) en EtOAc (30 mi) se agregó Pd al 10%-C (140 mg, 10% en peso) y se agitó la suspensión bajo un balón de H2 por espacio de 5 h. La mezcla fue filtrada a través de celite™ y concentrada. Se disolvió el material crudo en MeOH (30 mi), se agregó Pt02 (100 mg) y se agitó la mezcla en un recipiente de Parr a 50 psi (344.74 kPa) de H2 por espacio de 2 días. Se filtró la mezcla a través de celite™ y se evaporó para dar 980 mg (99%) del ácido en forma de espuma. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 4.73-4.66 (m, 1H), 2.71 (dd, J = 11.8, 5.4, 1 H), 2.68-2.62 (m, 1 H), 2.53 (dt, J = 10.0, 6.4, 1H), 1.92 (ddd, J = 13.4, 6.0, 2.6, 1 H), 1.63-1.57 (m, 1 H), 1.52-1.20 (m sin resolver, 3H), 1.30 (d, J = 5.9, 3H), 0.96 (d, J = 6.6, 3H), 0.93-0.89 (m, H), 0.80 (t, J = 7.5, 3H). MS: 319.1 (MH+, DMSO).
Paso 8 A una solución del producto del paso 7 (490 mg, 2.04 mmol) en CH2CI2 (20 mi), se agregó cloruro de oxalilo (360 µ?, 4.13 mmol, 2 eq.) seguido por 1 gota de DMF. Se agitó la solución a temperatura ambiente durante 1 hora y se separó el solvente para producir el cloruro de ácido crudo, que fue disuelto en tolueno (20 mi) y enfriado a 0°C. A esto se agregó Pd(PPh3)4 (236 mg, 0.20 mmol, 0.1 eq.) seguido por Bu3SnH (825 µ?, 3.07 mmol, 1.5 eq.). La mezcla fue agitada durante 3 horas a 0°C, concentrada y analizada por cromatografía con EtOAc 25%-hexano para producir el compuesto del título, 220 mg (48%), en forma de resina. RMN H (400 MHz, CDCI3) 9.72 (d, J = 3.6, 1 H), 4.70 (dq, J = 5.7, 9.5 1 H), 2.71-2.64 (m, 2H), 2.56-2.51 (m, 1H), 1.98 (ddd, J = 13.5, 6.1, 2.9, 1 H), 1.68-1.59 (m, 3H), 1.52-1.37 (m, 1H), 1.36 (d, J = 5.9, 3H), 1.32-1.20 m, 1H), 1.00 (d, J = 6.2, 3H), 0.80 (d, J = 7.3, 3H).
PREPARACION 2 Paso 1 Se preparó el enal de tiopirano de acuerdo con el procedimiento de McGinnis y Robinson, J. Chem. Soc, 404 (1941 ), 407.
Paso 2 A una suspensión de NaH al 60% (6.3 g, 158 mmol, 1.3 eq.) en THF (200 mi) a 0°C, se agregó dietilfosfono acetato de metilo (29 mi, 158 mmol, 1.3 eq.) y la mezcla fue agitada a 0°C durante 30 min. Luego se transfirió la solución a una solución del producto del paso 1 (15.6 g, 122 mmol) en THF (100 mi) y se agitó a 0°C por espacio de 1 h. La reacción fue templada mediante la adición de NH4CI ac. (500 mi) y se evaporó el THF. Se extrajo la fase acuosa con Et20 (3 x 200 mi) y se lavó la capa orgánica combinada con H20 y solución salina (200 mi de cada una). Se secó la solución sobre MgS04, se concentró y se sometió al residuo obtenido a cromatografía con EtOAC 5%-hexano para producir 13.0 g (58 %) de aceite. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 7.26 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 6.26 (t, J = 4.4 Hz, 1 H), 5.78 (dd, J = 15.9, 0.6 Hz, 1 H), 3.75 (s, 3H), 3.25-3.23 (m, 2H), 2.71 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.57-2.53 (m. 2H).
A una solución del producto del paso 2 (13.0 g, 70.6 moles) en THF y MeOH (50 mi de cada uno) se agregó una solución de KOH (11.9 g, 212 mmol, 3.0 eq.) en H20 (50 mi). La mezcla fue agitada a t.a. por espacio de 1 h, diluida con H20 (100 mi) y acidificada con HCI 1 N. Se extrajo la fase acuosa con EtOAc (3x 200 mi) y se lavó la capa orgánica combinada con H20 y solución salina (300 mi de cada una). Se secó la solución sobre MgS04, se filtró y se evaporó para dar 11.66 g (97 %) de un sólido amarillo pálido.
RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 7.34 (d, J = 4.4 Hz, 1 H), 6.32 (t, J = 4.4 Hz, 1H), 5.78 (d, J = 15.6 Hz, 1 H), 3.26 (d, J = 1.6 Hz, 2H), 2.72 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.59-2.55 (m, 2H).
Paso 4 A una solución de 4 (5.2 g) en EtOAc (120 m!) se agregó catalizador de Lindlar (520 mg) y se agitó la suspensión bajo 1 atm. de H2. Se agregó otra porción de catalizador (500 mi) después de 45 min., y se agitó la mezcla durante 30 min. más. La mezcla fue filtrada a través de una almohadilla de celite™ y evaporada para producir 5.2 g (99%) del alqueno buscado. RMN H (400 MHz, CDCI3) 7.38-7.26 (m, 5H), 6.32 (dd, J = 11.9, 6.6 Hz, 1H), 5.86 (d, J = 12.0 Hz, 1 H), 5.18 (s, 2H), 5.12-5.07 (m, 1 H), 3.20 (br s, 1 H), 1.34 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
Paso 5 A una solución del producto del paso 3 (2.45 g, 14.39 mmol) en CH2CI2 (60 mi) a 0°C, se agregó DCC (3.27 g, 15.85 mmol, 1.1 eq.) seguido por DMAP (352 mg, 2.88 mmol, 0.2 eq.) y se agitó la mezcla a 0°C durante 30 min. A esto se agregó una solución de 3.27 g (15.85 mmol, .1 eq.) del alcohol del paso 4 en 10 mi de CH2CI2 y se agitó la mezcla a 0°C por espacio de 5 h y a temperatura ambiente durante 1 h. Se diluyó la solución con 350 mi de Et2Ü y se lavó con 2x200 mi de ácido cítrico ac, 200 mi de NaHC03 ac, y 200 mi de solución salina. La solución fue secada sobre MgS04, filtrada y concentrada y el residuo así obtenido fue sometido a cromatografía con EtOAc 6%-hex para producir 2.1 g (41%) de resina. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 7.38-7.32 (m, 5H), 7.45 (d, J = 16.0 Hz, 1 H), 6.38-6.34 (m, 1 H), 6.26 (t, J = 4.6 Hz, 1 H), 6.21 (d, J = 11.6 Hz, 1 H), 6.19 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 5.85 (dd, J = 1 1.6, 1.2 Hz, 1H), 5.76 (d, J = 16.0 Hz, 1 H), 5.18 (d, J = 1.2 Hz, 2H), 3.24 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 2.71 (t, 2H, J = 5.6 Hz, 2H), 2.56-2.52 (m, 2H), 1.41 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
Paso 6 Una solución del producto del paso 5 (2.1 g, 5.85 mmol) en m-xileno (50 mi) fue calentada a 200°C por espacio de 6 horas en un tubo herméticamente cerrado. La solución fue enfriada a ta. y agitada con DBU (178 µ?, 1 .19 mmol, 0.2 eq.) durante 1 h, concentrada y sometida a cromatografía con EtOAc al 15%-hexano para producir 1.44 g (69%) del producto exo deseado. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 7.39-7.35 (m, 5H), 5.46 (br, s 1 H), 5.16 (ABq, J = 21.6, 12.0 Hz, 2H), 4.42 (dq, J = 9.2, 6.0 Hz, 1 H), 3.36-3.33 (m, 2H), 3.08 (dd, J = 14.4, 2.4 Hz, 1 H), 2.85 (ddd, J = 13.9, 12.4, 2.5 Hz, 1 H), 2.72-2.57 (m, 4H), 2.27-2.21 (m, 1 H), 1.47-1.25 (m, 1H), 1.12 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
Paso 7 A una solución del producto del paso 6 (750 mg, 2.09 mmol) en CH2CI2 (10 mi) a -78°C, se agregó BBr3 en CH2CI2 (4.2 mi de una solución 1 M). La solución fue agitada a -78°C durante 30 min., y a 0°C durante 30 min, luego se vertió en K2CO3 ac. (100 mi). Se lavó la fase acuosa con Et20 (2x50 mi) y se retroextrajo la capa orgánica con K2CO3 ac. (50 mi). La fase acuosa combinada fue acidificada con HCI 1 N y extraída con EtOAc (3 x 50 mi). Se lavó la capa de EtOAc con solución salina (50 mi), se secó sobre MgSO4l filtró y evaporó para dar 500 mg (89%) de ácido. R N 1H (400 MHz, CDCI3) 5.50 (br s, 1 H), 4.47 (dq, J = 9.6, 6.0 Hz, 1 H), 3.43-3.39 (m, 1 H), 3.36 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.10 (dd, J = 14.0, 2.4 Hz, 1H), 2.91-2.84 (m, 1 H), 2.82-2.77 (m, 1H), 2.70 (dd, J = 10.6, 4.2 Hz, H), 2.69-2.63 (m, 1 H), 2.57-2.52 (m, 1 H), 2.34-2.29 (m, 1H), 1.53-1.42 (m, 1 H), 1.34 (d, J = 6.0 Hz, 3H).
Paso 8 A una solución del producto del paso 7 (500 mg, 1.86 mmol) en MeOH (30 mi) se agregó AcOH (3 mi) y Pt02 (250 mg) y se agitó la solución bajo 40 psi (275.8 kPa) de H2 en un recipiente Parr por espacio de 1 .5 día. El catalizador fue separado por filtración con una almohadilla de Celite™, la solución fue concentrada y el residuo así obtenido fue disuelto en una mezcla de AcOH-MeOH-CH2CI2 (0.5:2:97.5 v/v/v) y filtrada a través de una columna corta de Si02 para producir 400 mg (79%) del producto reducido en forma de resina que solidificó al reposar. R N 1H (400 MHz, CDCI3) 4.68 (dq, J = 9.4, 5.9 Hz, 1 H), 2.76- 2.69 (m, 2H), 2.60-2.55 (m, 3H), 2.49 (d, J = 1 1.6 Hz, 1 H), 2.10 (br, s, H), 1.93 (ddd, J = 13.5, 6.0, 2.7 Hz, 1 H), 1.60-1.48 (m, 2H), 1.45-1.19 (m, 3H), 1 .33 (d, J = 5.6 Hz, 3H).
Paso 9 A un solución del producto del paso 8 (97 mg, 0.36 mmol) en CH2CI2 (4 mi) se agregó cloruro de oxalilo (94 µ?) seguido por una gota de DMF. La solución fue agitada durante 1 hora a t.a. y concentrada para dar el cloruro de ácido crudo que se disolvió en tolueno (3 mi) y enfrió a 0°C. Se agregó Pd(PPh3)4 (42 mg, 0.04 mmol, 0.1 eq.) seguido por Bu3SnH (94 µ?). La mezcla fue agitada a 0°C durante 3 h, concentrada y sometida a cromatografía con EtOAc al 25 %-hexano para producir 73 mg (80%) de aldehido en forma de sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 9.75 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.62 (dq, J = 9.7, 6.0 Hz, 1 H), 2.8-2.70 (m, 2H), 2.65-2.55 (m, 3H), 2.50 (d, J = 7.2 Hz), 2.10 (ddd, J = 13.2, 6.4, 3.0 Hz, 1H), 1.94 (ddd, J = 13.6, 6.0, 6.0, 1 H), 1.69 (dq, J = 10.9 Hz, 3.00 Hz, 1 H), 1.58-1.48 (m, 1 H), 1.42-1.20 (m, 3H), 1.33 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
Paso 0 A una solución del producto del paso 9 (90 mg, 0.35 mmol) en MeOH (10 mi) (4:1 v/v) a 0°C, se agregó un exceso de NaBH4 y se agitó la mezcla durante 15 min. a 0°C. La reacción fue templada con NH4CI ac. (50 mi) y extraída con EtOAc (3x20 mi). Se lavó la capa orgánica combinada con solución salina (50 mi), se secó sobre MgS04 y concentró para producir un alcohol crudo. Se agregó una solución del alcohol en MeOH-THF (6 mi, 1 :1 v/v) al matraz que contenía un exceso de níquel Raney, que fue lavado con dioxano y THF. Se calentó la suspensión a reflujo por espacio de 3 h, se enfrió, filtró y concentro y se sometió a cromatografía con EtOAc al 25%-hex para producir 54 mg (67 %) del compuesto del titulo en forma de resina. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 4.70 (dq, J = 9.7, 5.9 Hz, 1 H), 3.73 (dd, J = 10.5, 3.4 Hz, 1 H), 3.62 (dd, J = 10.5, 7.6 Hz, 1 H), 2.60-2.53 (m, 1 H), 2.46 (ddd, J = 9.6, 7.2, 5.2 Hz, 1 H), 1.90 (ddd, J = 13.5, 6.1 , 3.1 Hz, 1 H), 1.87-1 .81 (m H), 1.77 (br, s, 1 H), 1.66-1.59 (m, 1 H), 1.50 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.48-1 .36 (m, 2H), 1 .25-1 .14 (m, 2H), 0.93 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.78 (d, J = 7.5 Hz, 3H). RMN 3C (100 MHz, CDCI3) 178.58, 77.63, 61.79, 45.10, 42.49, 9.37, 38.65, 33.44, 31.96, 21.39, 19.91 , 19.74, 7.26.
PREPARACION 3 Se preparó de acuerdo con el procedimiento descrito por Wang y Otros, Tet. Lett, 4 . (2000), p. 4335-4338.
Paso 2 A una solución del producto del paso 1 (20 mg, 106 mmol) y Et3N (17.8 mi, 128 mmol, 1.2 eq.) en CH2CI2 (300 mi) mantenida a ~30°C, se agregó lentamente CH3SO2CI (9.1 mi, 118 mmol, 1.1 eq.). La suspensión fue agitada durante 1 hora mientras se calentaba hasta 0°C. La mezcla de reacción fue diluida con NaHC03 acuoso (500 mi) y se separó la capa orgánica. Se extrajo la capa acuosa con Et20 (2 x 200 mi) y se lavaron las capas orgánicas combinadas con NaHC03 acuoso (2x 300 mi) y solución salina (300 mi). La solución fue secada sobre MgSCu, filtrada y evaporada para dar el mesilato crudo, que fue utilizado como tal para el paso siguiente. RMN 1H 8.67 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 7.89 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1 H), 7.33 (d, J = 8.4 Hz, 1 H), 5.28 (s, 2H), 3.10 (s, 3H).
Paso 3 A una suspensión de NaH al 60% (8.5 g, 212 mmol, 2.0 eq.) en THF (500 mi) a ta., se agregó dietil fosfito (27.4 mi, 213 mmol, 2 eq.) gota a gota y se agitó la mezcla durante 1 h. A esta solución turbia se agregó una solución del producto del paso 2 en THF (125 mi) y se agitó la mezcla a ta. por espacio de 1 h. Se templó la reacción mediante la adición de H2O (500 mi), se evaporó el THF y se extrajo la capa acuosa con EtOAc (4 x 150 mi). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con K2CO3 acuoso (2 x 300 mi), solución salina (300 mi), se secaron sobre MgS04, filtraron, evaporaron y se sometió ai producto a cromatografía con CH3OH:CH2CI2 5:95 para dar 31.7 g (97%) de aceite. RMN 1H: 8.59 (d, J = 2.0 Hz, H), 7.76 (dd, J = 8.2, 2.1 Hz, 1H), 7.29 (dd, J = 8.2, 2.2 Hz, 1 H), 4.12-4.05 (m, 4 H), 3.36 (d, J = 22.0 Hz, 2H), 1.27 (t, J = 7.0 Hz, 6H).
PREPARACION 4 A una solución del producto de la preparación 3 (15 g, 49 mmol, 1.5 eq.) en THF (100 mi) a 0°C, se agregó LHMDS 1 M en THF (49 mi, 49 mmol, 1.5 eq.) y se agitó la solución durante 30 min. A esto se agregó Ti(0'Pr) (14.4 mi, 49 mmol, 1.5 eq.) seguido por una solución del producto de la preparación 1 (7.3 g, 32 mmol) en THF (30 mi) y la mezcla fue agitada a t.a. 45 min. Se diluyó la solución con tartrato de sodio y potasio acuoso (300 mi) y se evaporó el THF. Se extrajo la suspensión con EtOAc (4x 100 mi) y se lavó la capa orgánica combinada con solución salina (100 mi), se secó sobre MgS04, filtró y concentró y se sometió al producto crudo obtenido a cromatografía con EtOAc-hexano 15:85 para producir 11.8 g (96%) de espuma. RMN H: 8.58 (d, J = 2.4 Hz, 1 H), 7.74 (dd, J = 8.4, 2.8 Hz, 1H), 7.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.55 (dd, J = 15.6 10.0 Hz, 1H), 6.45 (d, J = 16.0 Hz, 1 H), 4.75-4.68 (m, 1 H), 2.69-2.56 (m, 2H), 2.32 (dt, J = 10.1 , 6.5 Hz, 1 H), 1.98 (ddd, J = 13.4, 6.6, 2.8 Hz, 1 H), 1.67-1.59 (m, 1 H), 1.47-1.39 (m, 2H) 1.37 (d, J = 5.9 Hz, 3H), 1.31-1.20 (m, 2H), 0.98 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 0.73 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
PREPARACION 5 A una solución del producto de la preparación 4 (7.2 g, 19 mmol), en THF (100 mi) a -78°C, se agregó LHMDS 1 M en THF (23 mi, 23 mmol, 1.2 eq.). Se agitó la solución durante 30 min. a -78°C, 30 min. a 0°C y se volvió a enfriar a -78°C. A esto se agregó una solución de (1S)-(+)-(10-canforsulfon¡l)oxaziridina (6.0 g, 26 mmol, 1.4 eq.) en THF (50 mi) y se agitó la mezcla durante 1 hora a -78°C y 1.5 horas a 0°C. A la solución se agregó NH4CI (300 mi), se evaporó el THF y se extrajo la capa acuosa con EtOAc (4 x 100 mi). Se lavó la capa orgánica combinada con solución salina (100 mi), se secó sobre MgSO4, filtró y concentró y se sometió al producto crudo obtenido a cromatografía con EtOAc-CH2CI2-hex 15:20:65 para producir 6.4 g (85%) de espuma.
RMN H: 8.56 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 8.4 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.56 (dd, J = 15.6, 9.8 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 15.6 Hz, 1 H), 4.62-4.55 (m, 1H), 3.72 (br s, 1H), 2.80-2.74 (m, 1 H), 2.28 (J = 9.6, 5.6 Hz, 1 H), 1.81-1.78 (m, 2H), 1.63-1.58 (m, 1 H), 1.44-1.27 (m, 3H), 1.37 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 0.94 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.73 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
PREPARACION 6 Paso 1 A una solución de (R)-(+)-3-butin-2-ol (5 mi, 64 mmol) en CH2CI2 (100 mi) a t.a. se agregó DMAP (780 mg, 6.4 mmol, 0.1 eq.), terc-butilclorodifenilsilano (17.4 mi, 67 mmol, 1.05 eq.) y Et3N (9.8 mi, 70 mmol, 1.1. eq.). La mezcla fue agitada durante la noche, diluida con Et20 (400 mi), lavada con HCl 1 N (2x200 mi), NaHC03 acuoso (200 mi), solución salina (200 mi), secada sobre MgS04, filtrada y evaporada para dar ~20 g de aceite, que fue utilizado como tal para el paso siguiente.
Paso 2 A una solución del producto del paso 1 en THF (200 mi) a -78°C se agregó BuLi 2.5M en hexanos (30.4 mi, 76 mmol, 1.1 eq.), y la solución fue agitada durante 1 hora y se agregó paraformaldehído sólido (4.15 g, 138 mmol, 2.0 eq.). La mezcla fue agitada durante 15 minutos a -78°C, 1 hora a t.a., luego templada con la adición de NH CI acuoso (500 mi). Se evaporó el THF y se extrajo la capa acuosa con EtOAc (3 x 200 mi). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con H20 (2 x 300 mi) y solución salina (300 mi), se secaron sobre MgS04 filtraron, y evaporaron y se sometió al producto crudo a cromatografía con EtOAc 0%-hex para producir 16.5 g (71%) de resina. RMN 1H: 7.77-7.74 (m, 2H), 7.71-7.68 (m, 2H), 7.46-7.36 (m, 6H), 4.53 (tq, J = 1.8, 6.5 Hz, 1 H), 4.08 (dd, J = 6.2, 1.8 Hz), 2.82 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.07 (s, 9H).
EJEMPLO 1 Preparación 1 + A una solución del fosfonato (650 mg, 2.01 mmol, 2 eq.) en THF (8 mi) a 0°C se agregó BuLi en hexanos (790 µ? de una solución 2.5 M, 2.0 mmol, 2 eq.), se agitó la mezcla durante 10 min., luego se agregó Ti(0'Pr)4 (590 µ?, 2.0 mmol, 2 eq.) y se agitó la solución a t.a. durante 0 min. A esto se agregó una solución del producto de la preparación 1 (220 mg, 0.98 mmol) en THF (3 mi) y la mezcla fue agitada a temperatura ambiente durante 1.5 h. A la solución se agregó sal de Rochelles ac. (100 mi) y se evaporó el THF. Se extrajo la fase acuosa con EtOAc (3 x 30 mi) y se lavó la capa orgánica combinada con solución salina (50 mi). La solución fue secada sobre MgS04, concentrada y el residuo obtenido fue sometido a cromatografía con EtOAc 20%-hexano para producir el compuesto del título (240 mg, 62%) en forma de resina. RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 8.78 (d, J = 2.0 1 H), 7.82 (dd, J = 2.4, 8.0, 1 H), 7.44 (dt, J = 5.7, 8.1 , 1H), 7.36 (dt, J = 1.2, 7.7, 1 H), 7.30-7.25 (m, 2H), 7.09 (ddt, J = 2.5, 1.0, 8.4, 1H), 6.61 (dd, J = 15.3, 8.6, 1H), 6.56 (d, J = 15.3, 1H), 4.78-4.71 (m, 1 H), 2.71-2.61 (m, 2H), 2.36 (dt, J = 10.0, 6.4, 1 H), 1.99 (ddd, J = 13.5, 6.1, 2.9, 1 H), 1.68-1.61 (m, 1 H), 1.51-1.44 (m, 2H), 1.42 (d, J = 5.9, 3H), .39-1.22 (m, 2H), 0.99 (d, J = 6.6, 3H), 0.76 (t, J = 7.5, 3H). FAB HRMS: 394.2184, calculado: 394.2182. Anal. Cale, para C25H28FN02,HCI: C, 69.84; H, 6.80; N, 3.26. Encontrado: C, 71.00, H, 6.96; N, 3.19. Utilizando un procedimiento similar con el fosfonato apropiado, se preparó el siguiente compuesto 1A: RMN 1H (400 MHz, CDCl3) 8.73 (br, s, 1H), 7.84 (dt, J = 2.0, 8.0, 1H), 7.44 (dt, J = 1.7, 7.7, 1H), 7.40-7.34 (m, 1H), 7.30 (d, J = 8.0, H), 7.25 (dt, J = 7.6, 1.1, 1H), 7.18 (ddd, J = 10.6, 8.4, 1.2, 1H), 6.62 (dd, J = 15.1, 8.6, 1H), 6.56 (d, J = 15.1, 1H), 4.79-4.72 (m, 1H), 2.71-2.61 (m, 2H), 2.36 (dt, J = 10.0, 6.5, 1H), 1.99 (ddd, J = 13.5, 6.1, 2.9, 1H), 1.70-1.57 (m, 1H), 1.51-1.44 (m, 2H), 1.42 (d, J = 5.9, 3H), 1.39-1.22 (m, 2H), 0.99 (d, J = 6.6, 3H), 0.76 (t, J = 7.3, 3H). FAB HRMS: 394.2184, calculado: 394.2182.
EJEMPLO 2 Preparación 2+ A una solución del producto de la preparación 2 (50 mg, 0.22 mmol) en CH2CI2 (3 mi) se agregó NMO (78 mg, 0.67 mmol, 3 eq.) y tamices moleculares de 4 Á (aproximadamente 50 mg). Después de agitar durante 10 min., se agregó TPAP (8 mg, 0.02 mmol), 0.1 eq.) y se continuó agitando durante 40 min. más. Se diluyó la mezcla con Et20 (20 mi), se filtró a través de celite ™ y se concentro para producir un residuo. Ei residuo fue filtrado a través de un cilindro corto de Si02, eluyendo con EtOAc 30%-hexano para dar 38 mg de aldehido. En otro matraz que contenía el fosfato (210 mg, 0.56 mmol, 3.3 eq.) en THF (1.5 mi) a 0°C, se agrego una solución de BuLi 2 M en hexanos (224 µ?, 0.56 mmol, 3.3 eq.) y se agitó la mezcla durante 20 min. Se agregó una solución de aldehido anterior en 1.5 mi de THF y se agitó la mezcla a 0°C por espacio de 1 h. La solución fue diluida con EtOAc (20 mi), lavada con H2O (2x20 mi) y solución salina (20 mi), secada sobre MgS04, filtrada, concentrada y purificada por TLC preparativa empleado EtOAc 25 %-hexano para producir 9 mg del compuesto del título. RMN H (400 MHz, CDCI3) 8.79 (d, J = 2.4 Hz, 1 H), 7.85 (dd, J = 8.4, 2.6 Hz, 1 H), 7.81 (br, s, 1 H), 7.76 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 7.67-7.58 (m, 2H), 7.31 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.63 (dd, J = 5.6, 9.2 Hz, 1 H), 6.57 (d, J = 15.6 Hz, 1 H), 4.79-4.72 (m, 1 H), 2.71-2.61 (m, 2H), 2.37 (dt, J = 10.0, 6.4 Hz, 1 H), 2.00 (ddd, J = 13.5, 6.3, 2.7 Hz, 1 H), 1.64-1.56 (m, 1 H), 1.51-1.23 (m 4H), 1.42 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 1.00 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 0.77 (t, J = 7.5 Hz, 3H). FABHRMS: 446.2306 (MH+), Calculado 446.2280. Empleando procedimientos similares, también se prepararon los siguientes compuestos: RMN H (400 MHZ, CDCI3) 8.62 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 7.76 (dd, J = 8.0, 2.4 Hz, 1H), 7.51-7.48 (m, 1 H), 7.37-7.26 (m, 4H), 6.65-6.55 (m, 2H), 4.78-4.71 (m, 1 H), 2.71-2.61 (m, 2H), 2.36 (dt, J = 10.0, 6.4 Hz, H),1.99 (ddd, J = 13.7, 6.3, 2.9 Hz, H), 1.68-1.61 (m, 1 H), 1.50-1.45 (m, 2H), 1.43 (d, J = 5.6 Hz, 3H), 1.33-1.25 (m, 2H), 0.99 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.76 (t, J = 7.4 Hz, 3H). [ct]20D = + 13.2 o(c 0.5 MeOH), FAB HRMS: 410.1891 (MH+), Calculado 410.1887.
EJEMPLO 4 RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 8.75 (d, J = 2.0 Hz, H), 7.80 (dd, J = 8.2, 2.0 Hz, 1 H), 7.54 (s amp, 1 H), 7.46-7.34 (m, 3H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 6.61 (dd, J = 15.3, 9.0 Hz, 1 H), 6.56 (d, J = 15.3 Hz, 1 H), 4.79-4.71 (m, 1 H) 2.70-2.60(m, 2H), 2.31 (dt, J = 10.1 , 6.5 Hz, 1 H), 1.98 (ddd, J = 13.5, 6.4, 2.9 Hz, 1 H), 1.71-1.64 (m, 1 H), 1.49-1.43 (m, 2H), 1.40 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.33-1.21 (m, 2H), 0.99 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.75 (t, J = 7.4 Hz, 3H) <76504-097-A-H en 2A>. [OC]20D = + 23.1 °(c 0.5 MeOH), FAB HRMS: 410.887 (MH+), Calculado 410.1887.
EJEMPLO 5 RMN 1H (400 MHz, CDCI3) 8.58 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.72 (dd, J = 8.0, 2.0 Hz, 1 H), 7.50 (dd, J = 8.0 1.6 Hz, 1 H), 7.31-7.21 (m, 3H), 6.63 (dd, J = 15.5, 8.8 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 15.5 Hz, 1 H), 4.78-4.71 (m, 1H) 2.71-2.61 (m, 2H), 2.36 (dt, J = 10.0, 6.4 Hz, 1 H), 1.99 (ddd, J = 13.6, 6.4, 2.8 Hz, 1 H), 1.68- 1.61 (m, 1 H), 1.50-1.45 (m, 2H), 1.43 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.35-1.22 (m, 2H), 0.99 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.76 (t, J = 7.4 Hz, 3H). [CC]20D = + 5.8 °(c 0.4 MeOH), FAB HRMS: 444.1491 (MH+) Calculado 444.1497.
EJEMPLO 6 A una solución del producto del ejemplo 1 (540 mg, 1.37 mmoles) en THF (8 mi) a -78°C se agregó una solución de LHMDS 1 M en THF (1.65 mi, 1.65 mmoles, 1.2 eq.). La solución fue agitada a -78°c por espacio de 15 min y a 0°C durante 30 min. Se volvió a enfriar a -78°C y se agregó una solución de (1S)-(+) -(10-canforsulfonil)oxazirldina (475 mg, 210 mmoles, 1.5 eq.) en THF (4 mi). La mezcla fue agitada a -78°C durante 15 min, luego se dejó calentar lentamente a t.a. A la mezcla se agregó NH4CI acuoso (100 mi) y luego se extrajo con EtoAc (3x 30 mi). Se lavó la capa orgánica combinada con 30 mi de salida, se secó sobre MgS04l concentró y se sometió a cromatografía con EtOAc-CH2Cl2-hexanos 15:20:65 para producir 390 mg (69 %) de resina. RMN 1H 8.78 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.82 (dd, J = 8.2, 2.6 Hz, 1 H), 7.44 (dt, J = 6.0, 8.0 Hz, 1 H), 7.37-7.35 (m, 1 H), 7.29-7.25 (m, 2H), 7.09 (ddt, J = 1.0, 2.4, 8.3 Hz, 1H), 6.67 -6.58 (m, 2H), 4.67-4.60 (m, 1 H), 2.85-2.79 (m, 2H), 2.32 (dq, J = 1.5, 5.7 Hz, 1 H), 1.89-1.82 (m, 1 H) 1.79-1.75 (m, H), 1.70- 1.61 (m, 2H), 1.54-1.46 (m, 1H), 1.45 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.43-1.32 (m, 1 H), 0.99 (d, J = 6.6, Hz, 3H), 0.78 (t, J = 7.5 Hz, 3H). El procedimiento de acoplamiento de Suzuki se ejemplifica por el calentamiento de la solución de un bromuro de la preparación 4 a 5 con ácido borónico (1.0 a 2.0 eq.), K2C03 (4 eq.) y Pd(PPh3)4 (5 a 10 % en moles) en tolueno: EtOH:H20 (4:2:1 , v/v/v) a 100°C- hasta completarse la reacción. Se diluye la mezcla de reacción con H20, se extrae con EtOAc y se lava la capa orgánica con solución salina, se seca sobre MgS04, filtra, concentra y purifica por cromatografía para producir los compuestos buscados. Empleando el procedimiento de acoplamiento de Suzuki antes descrito, se prepararon los siguientes compuestos: EJEMPLO 7 R N 1H 8.54 (dd, J = 2.2 0.6 Hz, H), 7.62 (dd, J = 8.0, 2.2 Hz, H), 7.31-7.25 (m, 4H), 7.22-7.20 (m, 1H), 6.65-6.56 (m, 1H), 4.67-4.60 (m, H), 3.20 (s amp, 1H), 2.89-2.80 (m, 1H), 2.34 (ddd, J = 10.1, 5.7, 1.5 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 1.91-1.77 (m, 2H), 1.70-1.64 (m, 1H), 1.55-1.43 (m, 2H), 1.45 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.39-1.25 (m, 1 H), 0.98 (d, J = 6.50 3H), 0.79 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
RMN 1H 8.80 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.84 (dd, J = 8.2, 2.2 Hz, 1 H), 7.58 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.47 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.39 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.65-6.55 (m, 2H), 4.67-4.60 (m, 1 H), 3.56 (s amp, 1H) 2.87-2.81 (m, 1H), 2.34 (dd, J = 9.6 5.6 Hz, 1H), 1.87-1.80 (m, 2H), 1.70-1.63 (m, 1H), 1.53-1.33 (m, 3H), 1.44 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 0.98 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 0.79 (t, J = 7.4 Hz, 3H). Utilizando también el procedimiento de acoplamiento de Suzuki con los reactivos apropiados, se prepararon los compuestos de las siguientes estructuras: en las cuales R3, R22, R23 y W son como se define en el siguiente cuadro (Me es metilo, Et es etilo y Ph es fenilo): Más compuestos del Ejemplo 8 Se separaron los siguientes compuestos empleando procedimientos de acoplamiento del tipo Suzuki utilizando los reactivos apropiados.
EJEMPLO 9 Al producto de la preparación 5 (0.127 mmoles) en tolueno seco (5 mi) se agregó anilina (0.254 mmoles, 2 eq.), fosfato de potasio (0.380 mmoles; 3 eq.), acetato de paladio (6.5 % en moles) y 2-(diclohexilfosfino)bifenilo (13% en moles). Se hizo burbujear la mezcla con N2 durante 2 min, luego se calentó a 120°C en un tubo herméticamente cerrado. Al cabo de 16 h, la reacción fue enfriada a t.a., vertida en agua y extraída con Et20 (3x). Se lavaron los extractos orgánicos combinados con salina, se secaron con MgS04, filtrados y evaporados a sequedad. La purificación por cromatografía instantánea (CH3OH al 2-5% en CH2CI2) dio el producto buscado con un rendimiento de 66%. RMN 1H: 8.31 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 7.40 (dd, J = 2.9, 8.5 Hz, 1 H), 7.30-7.26 (m, 2H), 7.15 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.07 (dd, J = 0.9, 8.5 Hz, 1H), 6.97 (t, J = 7.4 Hz, H), 6.50 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 6.25 (dd, J = 10.4, 15.6 Hz, 1 H), 6.14 (s, 1H), 4.60-4.56 (m, 1H), 4.43 (s amp, 1H), 2.79-2.76 (m, 1H), 2.31 (dd, J = 5.6, 9.2 Hz, 1 H), 1.91-1.79 (m, 2H), 1.65-1.58 (m, 1H), 1.41-1.35 (m, 2H), 1.39 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 1.31-1.25 (m, 1H), 0.95 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.77 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
Empleando un procedimiento similar, se prepararon compuestos de la fórmula en la cual W es como se define en el cuadro: EJEMPLO 10 Paso 1 Se agitó bajo una atm. de H2 (balón) una suspensión del alquino de la preparación 6 (3.1 g, 9.2 mmoles), quinolina (215 µ?, 1.8 mmoles, 0.2 eq.) y catalizador de Lindlar (310 mg, 10% en peso) en EtOAc (50 mi) y se monitoreó la reacción por RMN. Una vez completada la reacción, se filtró a través de una plancha de celite™, se lavó con HCI 1 N y salina, se secó sobre 7 MgS04, filtró y evaporó para dar ~3.4 g de resina, que fue utilizada así en el paso siguiente.
Paso 2 Se agregó reactivo de Dess-Martin (4.28 g, 10.1 mmoles, 1.1 eq.) a una mezcla del producto del paso 1 y NaHC03 (1.54 g, 18.3 mmoles, 2 eq.) en CH2CI2 (30 ml) a t.a. y se agitó durante 1 h. La mezcla fue diluida con Et2 (60 ml) y una solución de Na2S203.5H20 (4.55 g, 18.3 mmoles, 2 eq.) y NaHC03 (1.54 g, 18.3 mmoles, 2 eq.) en H20 (100 ml) y se agitó vigorosamente hasta que las dos capas quedaron transparentes. Se separó la capa orgánica y se extrajo la capa acuosa con Et20 (2x50 ml). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con una solución ac. de Na2S203/NaHCO3 (100 ml), se secaron sobre MgS04, filtró y evaporaron para dar ~3.5 g de aldehido, que fue utilizado así para el paso siguiente. mmoles, 1.3 eq.) en THF (30 ml) a 0°C, se agregó NaH al 60% en aceite mineral (480 mg, 12.0 mmoles, 1.3 eq.) y la mezcla fue agitada durante 20 min. A esto se agregó una solución del producto del paso 2 en THF (15 ml) y al cabo de 1 h de agitación a 0°C, se diluyó con NH4CI ac. (200 ml). Se evaporó el THF y se extrajo la capa ac. con EtOAc (3x 75 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron lavadas con salina (100 ml), secadas sobre MgSO4, filtradas, evaporadas y el residuo fue cromatografiado con EtOAc 5 %-hex para dar 4.0 g (87%) de resina. RMN 1H: 8.75 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 8.0, 2.4 Hz, 1 H), 7.73-7.66 (m, 4H), 7.47-7.26 (m, 9H), 7.19 (d J = 8.0 Hz, 1 H), 7.09 (ddt, J = 1.1 , 2.5, 8.4 Hz, 1 H), 7.00 (ddd, J = 15.3, 11.5, 1.1 Hz, 1 H), 6.52 (d, J - 15.2 Hz, 1 H), 6.05-5.99 (m, 1 H), 5.74-5.69 (m, 1H), 4.93-4.86 (m, 1 H), 1.28 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.06 (s, 3H).
Paso 4 A una solución de silil éter (4.0 g, 7.88 mmoles) en THF (30 mi) a 0°C, se agregó TBAF 1 M en TF (11.8 mi, 11.8 mmoles, 1.5 eq.) y la mezcla fue agitada durante a t.a. por espacio de 6 h. Se diluyó con NH4CI ac. (150 mi), se evaporó el THF y se extrajo la capa ac. con EtOAc (3x 60 mi). Se lavaron las capas orgánicas combinadas con H20 (50 mi), solución salina (50 mi), se secaron sobre MgS04, filtraron, evaporaron y sometieron al residuo a cromatografía con EtOAc 30 %-hex para dar 2.0 g (94%) de resina.
RMN H: 8.80 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.81 (dd, J = 8.0, 2.4 Hz, 1H), 7.64 (ddd, J = 15.1 , 11.5, 1.1 Hz, 1 H), 7.44 (dt, J = 5.6, 7.9 Hz, 1 H), 7.38-7.33 (m, 2H), 7.30-7.26 (m, 1H), 7.09 (ddt, J = 1.0, 2.5, 8.3 Hz, 1 H), 6.67 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.24 (t, J = 11.2 Hz, 1 H), 5.70-5.65 (m, 1 H), 5.07-5.00 (m, 1 H), 1.35 (d, J = 6.4 Hz, 3H).
A una solución de alcohol del paso 4 (110 mg, 0.41 mmoles), y el ácido (85 mg, 0.61 mmoles, 1.5 eq.) en CH2CI2 (2 mi) se agregó DCC (130 mg, 0.63 mmoles, 1.5 eq.) y DMAP (10 mg, 0.08 mmoles, 0.2 eq.) y se agitó a 0°C hasta que la reacción se hubo completado. Se diluyó la mezcla con Et20 (50 mi), se lavó con NaHC03 acuoso (2x20 mi) y solución salina (20 mi), se secó sobre MgS0 , filtró y concentró y se sometió al residuo a cromatografía con EtOAc 10 %-hex para dar 135 mg (84%) de resina.
RMN 1H: 8.79 (d, J = 2.4 Hz, 1 H), 7.81 (dd, J = 8.0, 2.4 Hz, 1 H), 7.67 (ddd, J = 15.3, 11.5, 1.2 Hz, 1 H), 7.47-7.27 (m, 5H), 7.15 (ddt, J = 2.0, 1 .0, 8.3 Hz, 1 H), 6.71 (d, J = 15.6 Hz, 1 H), 6.29 (dt, J = 0.8, 11.4 Hz, 1 H), 6.11-6.00 (m, 1 H), 5.88 (t, J = 7.6 Hz, 1 H), 5.63 (t, J = 10.0 Hz, 1 H), 2.24-2.16 (m, 2H), 7.76 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 1.43 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 1.00 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
Paso 6 Se agitó a 185°C por espacio de 7 horas una solución de tetraeno del paso 5 (130 mg) en tolueno (10 mi) en un tubo herméticamente cerrado, se enfrió a t.a. y se agitó con 10 µ? de DBU durante 3 h. La solución fue concentrada y purificada por cromatografía de preparación para dar 63 mg (49 %) de resina. RMN 1H: 8.72 (d, J = 2.0 Hz, 1 H), 7.77 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1 H), 7.41 (dt, J = 6.0, 8.0 Hz, 1 H), 7.36-7.31 (m, 2H), 7.26-7.22 (m, 1 H), 7.06 (ddt, J = 1.0, 2.7, 8.3 Hz, 1 H), 6.66 (d, J = 16.0 Hz, 1 H), 6.47 (dd, J = 15.8, 9.8 Hz, 1 H), 5.62-5.61 (m, 1 H), 4.55 (dq, J = 4.0, 6.4 Hz, H), 3.27-3.24 (m, 1 H), 2.80-2.75 (m, 1 H), 2.56-2.52 (m, 1H), 2.02-1.97 (m, 1 H), 1.78 (d, J = 1.5 Hz, 3H), 1.69-1.59 (m, 1 H), 1.50-1.45 (m, 1 H), 1.41 (d, J = 6.4 Hz, 3H), 0.92 (t, J = 7.4 Hz, 3H). Empleando un procedimiento similar, se prepararon los compuestos de la siguiente estructura: en la cual R11, R22 R23 y W son como se define en el cuadro (Me metilo, Et es etilo, Bn es bencilo): EJEMPLO 11 Se hizo burbujear con N2 una solución de la preparación 4 (100 mg), 2(tri-n-butilestannil)piridina (292 mg) y Pd(PPh3)4 (31 mg) en tolueno (5 mi) en un tubo herméticamente cerrado y se calentó a 120°C durante la noche. Se diluyó la mezcla con NH4CI ac, se extrajo con EtOAc, se secó sobre MgS04, filtró y concentró y se sometió al residuo a cromatografía con CH3OH al 2 %-CH2CI2 para producir 83 mg de resina. Se disolvió la resina en THF (5 mi), se enfrió a -78°C, se agregó una solución de LH S 1 M en THF (290 µ?), se agitó a 0°C durante 1 h, luego se enfrió a -78°C. A esto se agregó una solución de (1S)-(+)-(10-canforsulfonil)oxaziridina (76 mg) en THF (50 mi). Después de agitar durante aproximadamente 1.5 h, se templó mediante la adición de NH4CI ac. y se extrajo con EtOAc. Se lavó la capa orgánica combinada con solución salina, se secó sobre MgS04, filtro y concentró y se purificó el residuo por TLC de preparación para producir 20 mg del compuesto del título. HRMS: 393.2185 (MH+), Calculado 393.2178.
Utilizando un procedimiento similar, también se preparan los siguientes compuestos: en los cuales W es como se define en el cuadro: EJEMPLO 12 Paso 1 A una solución de oxazol (75 µ?, 1.1 mmoles) en THF (2 mi) a -78°C se agregó una solución de BuLi 2.5 M en hexanos (465 µ?, 1.2 mmoles, 2.2 eq.) y se agitó la mezcla por espacio de 30 min. A esto se agregó ZnCI2 en Et20 0.5 M (4.3 mi, 2.2 mmoles, 4 eq.) y se agitó la mezcla durante 30 min a -78°C y 30 min a 0°C.
Paso 2 Por separado, a una suspensión de Pd(PPh3)2Cl2 (37 mg, 0.05 mmoles) en THF a 0°C, se agregó BuLi en hexanos 2.5 M (43 µ?, 0.11 mmoles) y la suspensión fue agitada durante 20 min. Se agregó esta solución a zincato del paso 1, seguida por el producto de la preparación 4 (200 mg, 0.5 mmoles) y la mezcla fue mantenida a reflujo durante la noche. Se enfrió, diluyó con NH CI acuoso (60 mi) y se extrajo con EtOAc (3x 20 mi). Se lavó la capa orgánica combinada con salina (20 mi), se secó sobre MgSO4, filtró, evaporó y purificó por TLC de preparación para producir 29 mg de resina. HRMS: 367.2025 (MH+), Calculado 367.2022.
EJEMPLO 13 Paso 1 Se calentó una solución de la preparación 5 (60 mg, 0.15 mmoles), Et3N (26 µ?, 0.19 mmoles, 1.2 eq.), bis (difenilfosfino)propano (2 mi, 7 moles, 5% en moles), Pd(OAc)2 (1.7 mg, 7.6 umoles, 5% en moles) y vinil n-propil éter (85 µ?, 0.76 mmoles, 5 eq.) en DMF (1.5 mi) en tubo herméticamente cerrado a 100°C durante 2 h, se enfrió a t.a. y se agitó con HCI 2N (2 mi) por espacio de 2 h. Se diluyó a mezcla con NaHC03 acuoso, se extrajo con EtOAc, se secó sobre MgS04, filtró, concentró, y se purificó el residuo por TLC de preparación para dar 25 mg de cetona.
Paso 2 Se agitó durante la noche a ta. una solución del producto del Paso 1 (13 mg, 36 pmoles) clorhidrato de hidroxilamina (8 mg, 0.12 mmoles) en piridina (0.5 mi). Se diluyó la mezcla con NH4CI acuoso (30 mi), se extrajo con EtOAc (2 x 10 mi), se lavó la capa orgánica combinada con solución salina (10 mi), se secó sobre MgS04, filtró, concentró, y se purificó el residuo por TLC de preparación para dar 13 mg del compuesto del título en forma de resina. HRMS: 373.2113 (MH+). Calculado 373.2127. Utilizando un procedimiento similar, se prepara el siguiente compuesto: Ej. 13-2: HRMS: 387.2300 (MH+).
EJEMPLO 14 Se hizo burbujear con argón una mezcla de la Preparación 5 (100 mg, 0.25 mmoles), imidazol (35 mg, 0.51 mmoles, 2.0 eq.), complejo trifluorometanosulfonato benceno de cobre (I) (13 mg, 0.026 mmoles, 0.1 eq.), 1 ,10-fenantrolina (46 mg, 0.26 mmoles, 1eq.) dibencilidenoacetona (6 mg, 0.026 mmoles, 0.1 eq.) y CS2CO3 (125 mg, 0.38 mmoles, 1.5 eq.) en m-xileno (3 mi) en un tubo herméticamente cerrado y se calentó a 130°C de la noche a la mañana. La mezcla se enfrió a t.a., se diluyó con NH4CI ac. (40 mi) y se extrajo con CH2CI2 (3x10 mi). Se lavó la capa orgánica combinada con solución salina ( 0 mi), se secó sobre MgS04, filtró, concentró y se purificó el residuo por TLC de preparación para producir 43 mg (44%) del compuesto del título. HRMS: 382.2133 (MH+), calculado 382.2131.
Utilizando un procedimiento similar, se preparó el siguiente compuesto: Ej. 14-2: HRMS: 396.2286 (MH+) EJEMPLO 15 Se hizo burbujear con argón una mezcla de la preparación 5 (1.0 g, 2.54 mmoles), Zn(CN)2 (30 mg, 2.56 mmoles, 1.0 eq.), Pd2(dba)3 (116 mg, 0.13 mmoles, 5 % en moles), y difeniifosfinoferrocina (170 mg, 0.31 mmoles, 12% en moles) en DMF (10 mi) y H20 (100 µ?, 1 % en vol) en un tubo herméticamente cerrado a 120°C por espacio de 5 h. La mezcla fue enfriada a ta., diluida con EtOAc (150 mi) y lavada con H20 (3x50 mi), solución salina (50 mi), secada sobre MgS04, filtrada, evaporada y el producto crudo fue sometido a cromatografía con EtOAc 30 %-hex para producir 800 mg (93%) de arilcianuro. Se calentó durante la noche a 120°C una mezcla del arilcianuro (100 mg, 0.29 mmoles), NaN3 (1 15 mg, 1.77 mmoles, 6 eq.) en DMF (2 mi) en un tubo herméticamente cerrado. Se enfrió a t.a., se diluyó con H20 (10 mi), se extrajo con CH2CI2> se concentró y se purificó el producto crudo por TLC de preparación para dar 50 mg del compuesto del título en forma de sólido. HRMS: 384.2033 (MH+), calculado 384.2036.
EJEMPLO 16 Paso 1 A una solución del compuesto 31a (en el cual W es 3-fluorfenilo) (480 mg, 1 .2 mmoles) en CH2CI2, se agregó una solución de BBr3 1 M en CH2CI2, (1 .7 mi, 1 1.7 mmoles, 10 eq.) y se mantuvo la mezcla a reflujo durante 2.5 h, luego se diluyó con NaHC03 ac. (100 mi). Después de agitar durante aproximadamente 30 min, se aisló la capa orgánica y se extrajo la capa acuosa con CH2CI2 (2x40 mi). Se lavó la capa orgánica combinada con NaHC03 ac. (100 mi), solución salina (100 mi), se secó sobre MgS04, filtró y evaporó para dar el alcohol crudo. Se disolvió el alcohol crudo en CH2CI2 ( 2 mi) se enfrió a 0°C y se agregó Ac20 (225 µ?, 2.4 mmoles, 2 eq.) seguido por DMAP (27 mg, 0.24 mmoles, 0.2 eq.) y Et3N (0.5 mi, 3.6 mmoles, 3 eq.). Después de agitar durante aproximadamente 2 h, se diluyó la mezcla con EtOAc (80 mi), se lavó con NaHC03 ac. (2x50 mi) y solución salina. Se secó la solución sobre gS04, se filtró, evaporó y se sometió al residuo a cromatografía con EtOAc- 40%-hex para dar 350 mg (56%) del Ejemplo 16-A en forma de espuma blanca. HRMS: 530.1336, calculado 530.1342.
Paso 2 Se agitó una mezcla del Ejemplo 16-A (53 mg, 0.1 eq.), NaCNBH3 (32 mg, 0.5 mmoles, eq.) en HMPA (1 mi) a 80°C por espacio de 4 h, se enfrió a t.a., diluyó con H20 (30 mi) y se extrajo con EtOAc (3x 5 mi). Se lavó la capa orgánica combinada con solución salina (20 mi), se secó sobre MgS04, filtró, concentró y purificó por TLC de preparación para producir 27 mg de resina. A esto se agregó K2C03 (32 mg) en una mezcla de CH3OH-H2O (2 mi de 9:1 , v/v) y se agitó la solución a t.a. durante 1 hora. Se diluyó la mezcla con H2O (30 mi), se extrajo con EtOAc (3x10 mi) y se lavaron las capas orgánicas combinadas con solución salina (10 mi), se secaron sobre MgS04, filtraron y concentraron y se filtraron a través de un tapón corto de S1O2 para producir 7 mg (72%) del Ejemplo 16-B en forma de resina. HRMS: 410.2126, calculado 410.2131. Empleando un procedimiento similar, se prepararon los compuestos de la siguiente estructura: cual R3, R22, R23 y W son como se define en el Cuadro (Me es metilo, ET ilo): EJEMPLO 17 Acido 7a-carbox?lico y amidas 2 3 A una solución agitada de 2.5 g del compuesto 1 (6.59 mmoles) en 50 mi de THF seco a 0°C bajo argón, se agregó LHMDS (9.88 mmoles, 9.9 mi de una solución 1.0 M en THF) y se dejó agitar la mezcla durante 30 minutos. Se redujo la temperatura a -78°C y se agregaron 785 µ? (9.88 mmoles) de metilcianoformiato. Al cabo de 2 horas, se agregaron aproximadamente 75 mi de una solución acuosa de sulfato de amonio y hierro (II) hexahidratado (10 % p/v) y luego se extrajo la mezcla con tres porciones de acetato de etilo. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con solución salina, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y evaporaron a sequedad. La purificación por cromatografía instantánea empleando acetato de etilo al 15% en hexanos produjo 2.47 g del compuesto 2. MS (ESI) m/z 424 (MH+).
A una solución agitada de 2.47 g del compuesto 2 (5.65 mmoles) en 50 mi de THF seco a 0°C bajo N2, se agregó tribromuro de boro (1 1.3 mmoles) y se dejó agitar la mezcla durante aproximadamente 30 min. Se diluyó la mezcla de reacción con aproximadamente 50 mi de diclorometano y se ajustó el pH con bicarbonato de sodio acuoso a aproximadamente pH=4 y se extrajo la mezcla con tres porciones de diclorometano. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con solución salina, se secó sobre sulfato de magnesio, filtró y evaporó para dar 2.32 del compuesto 3. MS (ESI) m/z 424.1 (MH+).
Ej. 17H. Se agitó a temperatura ambiente, por espacio de 16 horas, una mezcla de 4 (68 mg), EDCI (2 eq.), HOBT (2 eq.) y NH3 ac. (3 eq.) en 2 mi de DMF. Se diluyó con EtOAc, se lavó con NaHC03 ac, se secó sobre MgS04, filtró, concentró y purificó por TLC de preparación para dar 18 mg de 5, Ej. 17H. MS: 419.1 (MH+).
Se prepararon los siguientes compuestos empleando un procedimiento análogo: EJEMPLO 18 7a hidroximetilo 1 6 7 A 0.65 g (1.71 mmoles) del compuesto 1 en THF seco a -10°C bajo argón, se agregó LH DS (2.06 mmoles) y se dejó agitar la mezcla durante 30 min. Seguidamente se agregó benciclorometiléter (2.57 mmoles) y al cabo de 60 min se vertió la mezcla sobre cloruro de amonio acuoso y se extrajo con tres porciones de dietil éter. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con solución salina, se secó con sulfato de magnesio, filtró y evaporó a sequedad. La purificación por cromatografía instantánea dió 0.69 g del compuesto 6. MS (ESI) m/z 500 (MH+). A 2.19 g (4.38 mmoles) del compuesto 6 en diclorometano seco se agregó yodotrimetilsilano (87.6 mmoles) y se calentó la mezcla a reflujo bajo un balón de argón por espacio de 2.5 horas. La mezcla de reacción fue enfriada a temperatura ambiente, vertida sobre una solución acuosa de bicarbonato de sodio y extraída con tres porciones de diclorometano. Se lavaron los extractos orgánicos combinados con sulfito de sodio acuoso, se secó sobre sulfato de magnesio, filtró y evaporó a sequedad. La purificación por cromatografía instantánea dio el compuesto 7. S (ESI) m/z 410.1 (MH+).
Se prepararon los siguientes compuestos empleando un procedimiento similar: EJEMPLO 19 7a-Hldroximetilo a 7a-aminometilo 8 A 0.15 g del compuesto 7 en 10 mi de diciorometano seco a 0°C se agregaron 77 µ? de trietilamina (1.5 eq.) y 34 µ? de cloruro de metansulfonilo (1.2 eq.). La mezcla fue agitada bajo N2 durante una hora, diluida con diciorometano, lavada dos veces con NaHC03 acuoso y una vez con solución salina. La fase orgánica fue sacada con MgS04, filtrada y evaporada a sequedad para dar 0.145 g de mesilato. A este producto, en 10 mi de DMSO, se agregó 0.290 g de azida sódica (15 eq.) y se calentó la mezcla a 65°C agitando bajo N2 por espacio de 3 días. Se vertió la mezcla de reacción en H2O y se extrajo tres veces con acetato de etilo. Se lavaron los extractos combinados con solución salina, se secó con MgS04l filtró y evaporó a sequedad para dar 65 mg de azida.
A una solución de esta azida en 5 mi de acetato de etilo y 50 µ? de H20 a 0°C se agregaron 300 mi de una solución de trimetilfosfina en THF 1 M (2 eq.) y se dejó calentar la mezcla a temperatura ambiente con agitación bajo argón. Al cabo de 24 horas, la reacción se evaporó a sequedad y se purificó por cromatografía instantánea para dar 0.053 g de la amina 8. MS (ESI) m/z 409 (MH+).
EJEMPLO 20 Química de 7a-aminación 10 A una solución de 9 (1.01 g, 2.57 mmoles) en 20 mi de THF a 0°C se agregó una solución de LHMDS 1 M en THF (3.34 mi) y se agitó durante 20 min. Se enfrió a -78°C y se agregó una solución de di-terc-butilazodicarboxilato (890 mg, 3.87 mmoles) en 2.5 mi de THF. Se agitó a -78°C por espacio de 2 horas y a 0°C durante 1 hora y se templó mediante la adición de NH4CI acuoso. Se extrajo la capa acuosa con EtOAc y se secó sobre MgS04 y se concentró. Se agitó el producto crudo con 5 mi de DCM y 10 mi de ácido trifluoroacético a 0°C durante 1 hora. Se concentró y suspendió en 100 mi de K2CO3 ac. Se extrajo la fase acuosa con DCM para producir la hidrazida cruda. Se disolvió este material crudo en 10 mi de ácido acético glacial y 2 mi de acetona. A esto se agregaron 2 g de polvo de Zn en porciones. La suspensión fue vigorosamente agitada durante 2 horas y filtrada a través de una plancha de Celite™ y lavada con abundante DCM. Se lavó la capa de DCM con agua y luego con NaHC03 ac, y solución salina. Se secó sobre MgS04, concentró y purificó por cromatografía para dar 500 mg de 0. MS: 409.2 (MH+). Se prepararon los siguientes compuestos utilizando un procedimiento similar: EJEMPLO 21 Análogos 7a-flúor A una solución de 11 (300 mg, 0.83 mmoles) en 5 mi de THF y 2 mi de DMF a 0°C se agregó una solución de LHMDS 1 M en THF (1.1 mi, 1.3 eq.). La solución fue agitada durante 20 min a 0°C, enfriada a -78°C y se agregó una solución de N-fluorbencensulfonamida (400 mg, 1.27 mmoles, 1.5 eq) en THF. La mezcla fue agitada durante la noche y se dejó calentar a t.a. Se diluyó con EtOAc, se lavó dos veces con K2CO3 ac. y dos veces o con H20 y solución salina. Se secó sobre MgS04, filtró y concentró y cromatografió con EtOAc al 20% en hexanos para producir 260 mg de 12. HRMS: 380.2032 (MH+), Calculado 380.2026. Utilizando un procedimiento similar, se preparó el siguiente compuesto: Ej. 21 B HRMS: 394.2188 (MH+), Calculado 394.218. Otras modalidades de la presente invención abarcan la administración de los compuestos de la fórmula I junto con por lo menos un agente cardiovascular más. El agente cardiovascular adicional que se contempla es uno diferente, ya sea en su constitución atómica o en la disposición, de los compuestos de la fórmula I. Otros agentes cardiovasculares que se pueden emplear en combinación con los novedosos compuestos de la presente invención incluyen fármacos que tienen actividad antitrombótica, anti-agregación plaquetaria, antiaterosclerótica, antirestenoica y/o anticoagulante. Dichos fármacos son de utilidad en el tratamiento de las enfermedades relacionadas con la trombosis, incluyendo trombosis, aterosclerosis, restenosis, hipertensión, angina de pecho, arritmia, insuficiencia cardiaca, infarto de miocardio, glomerulonefritis, apoplejía trombótica y tromboembólica, enfermedades vasculares periféricas, otras enfermedades cardiovasculares, isquemia cerebral, trastornos inflamatorios y cáncer, así como otros trastornos en los cuales la trombina y su receptor desempeñan una función patológica. Los agentes cardiovasculares adecuados son seleccionados del grupo formado por los inhibidores de la biosíntesis de tromboxano A2 tales como la aspirina; antagonistas del tromboxano tales como seratrodast, picotamida y ramatroban; inhibidores de la adenosin difosfato (ADP) tales como clopidrogel, inhibidores de la ciclooxigenasa tales como aspirina, meloxicam, refecoxib y colecoxib; antagonistas de la angiotensina tales como valsartán, telmisartán, candesartrán, irbesartrán, losartán y eprosartán; antagonistas de la endotelina tales como tezosentan, inhibidores de la fosfodiesterasa tales como milrinona y enoximona; inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (ACE) tales como captopril, enalapril, enaliprilat, spirapril, quinapril, perindopril, ramipril, fosinopril, trandolapril, lisinopril, meoxipril y benazapril; inhibidores de la endopeptidasa neutra tales como candoxatril y ecadotril; anticoagulantes tales como ximelagatran, fondaparina y enoxaparina; diuréticos tales como clorotiazida, hidroclorotiazida, ácido etacrínico, furosemida y amilorida; inhibidores de la agregación plaquetaria tales como abciximab y eptifibatida y antagonistas de GP llb/llla. Los tipos de fármaco preferidos para usar en combinación con los novedosos compuestos de la presente invención son los inhibidores de la biosíntesis de tromboxano A2, los inhibidores de la ciclooxigenasa y los antagonistas de la ADP. Son especialmente preferidos para usar en las combinaciones la aspirina y el clopidogrel bisulfato. Cando la invención comprende una combinación de un compuesto de la fórmula I y otro agente cardiovascular, los dos componentes activos pueden ser coadministrados en forma simultánea o consecutiva, o bien se puede administrar una sola composición farmacéutica que comprenda un compuesto de la fórmula I y otro agente cardiovascular en un vehículo farmacéuticamente aceptable. Los componentes de la combinación pueden ser administrados individualmente o juntos en cualquier forma de dosificación convencional tal como cápsula, comprimido, polvo, sello suspensión, solución, supositorio, rocío nasa, etc. La dosis del agente cardiovascular puede ser determinada según el material publicado y puede oscilar entre 1 y 1000 mg por dosis. En esta especificación, la expresión "por lo menos un compuesto de la fórmula I" significa que se pueden emplear de uno a tres compuestos diferentes de la fórmula I en una composición farmacéutica o método de tratamiento. De preferencia, se utiliza un compuesto de la fórmula I. Del mismo modo, el término "uno o más agentes cardiovasculares adicionales" se refiere a que se puede administrar de uno a tres fármacos adicionales en combinación con un compuesto de fórmula I; preferentemente se administra un compuesto adicional en combinación con un compuesto de la fórmula l. Los agentes cardiovasculares adicionales se pueden administrar en forma sucesiva o simultánea con referencia al compuesto de la fórmula I.
Cuando se han de administrar composiciones separados de la fórmula I y los otros agentes cardiovasculares, se puede presentar en un equipo que comprenda, en un solo envase, un recipiente que contenga un compuesto de la fórmula I en un vehículo farmacéuticamente aceptable y un recipiente separado que comprenda otro agente cardiovascular en un vehículo farmacéuticamente aceptable, con el compuesto de la fórmula I y el otro agente cardiovascular presentes en cantidades tales que hagan que la combinación se terapéuticamente efectiva. Un equipo es ventajoso para la administración de una combinación cuando, por ejemplo, los componentes deben ser administrados a diferentes intervalos de tiempo o cuando se presentan en diferentes formas de dosificación. Las siguientes formulaciones ejemplifican algunas de las formas de dosificación de esta invención. En cada una de ellas, el término "compuesto activo" designa un compuesto de fórmula I.
EJEMPLO A Comprimidos No. Ingrediente mg/compr. mg/compr. 1 Compuesto Activo 100 500 2 Lactosa USP 122 113 3 Almidón de maíz, grado alimentario, en 30 40 forma de pasta al 10% en agua purificada 4 Almidón de maíz, grado alimentario 45 40 5 Estearato de magnesio 3 7 Total 300 700 Método de elaboración Se mezclan los artículos No. 1 y 2 en una mezcladora adecuada durante 10-15 minutos. Se granula la mezcla con el artículo 3. Se muelen los gránulos húmedos a través de una criba gruesa (0.63 cm) en caso de ser necesario. Se secan los gránulos húmedos. Se tamizan los gránulos secos, si es necesario y se mezclan con el artículo No. 4 y se mezcla durante 10-15 minutos. Se agrega el artículo No. 5 y se mezcla 1-3 minutos. Se comprime la mezcla a un tamaño apropiado y se pesa en una máquina de comprimidos adecuada.
EJEMPLO B Cápsulas No. Ingrediente mg/compr. mq/compr. 1 Compuesto Activo 100 500 2 Lactosa USP 106 123 3 Almidón de maíz, grado alimentario 40 70 4 Estearato de magnesio NF 4 7 Total 250 700 Método de elaboración Se mezclan los Artículos No. 1 , 2 y 3 en una mezcladora adecuada por espacio de 10-15 minutos. Se agrega el artículo No. 4 y se mezcla durante 1-3 minutos. Se introduce la mezcla en cápsulas de gelatina dura de dos piezas en una máquina encapsuladora adecuada. Se puede determinar la actividad de los compuestos de la fórmula I mediante los siguientes procedimientos.
Procedimiento de ensayo in vitro para los antagonistas del receptor de trombina Preparación de í3H1haTRAP Se suspendió A(pF-F)R(ChA)(hR)(l2-Y)-NH2 (1.03 mg) y Pd/C al 10% (5.07 mg) en DMF (250 µ?) y düsopropiletilamina (10 µ?). Se conectó el recipiente a la línea de tritio, se congeló en nitrógeno líquido y evacuó. Luego se agregó gas tritio (342 mCi) al matraz, que fue agitado a temperatura ambiente por espacio de 2 horas. Ai completarse reacción, se eliminó el exceso de tritio y se diluyó la solución péptido reaccionada con D F (0.5 mi) y se filtró para eliminar el catalizador. La solución en DMF colectada del péptido crudo fue diluida con agua y secada por congelación para eliminar el tritio lábil. Se volvió a disolver en agua el péptido sólido y se repitió el proceso de secado por congelación. Se disolvió el péptido tritiado ([3H]haTRAP) en 0.5 mi de TFA acuoso al 0.1 % y se purificó por HPLC utilizando las siguientes condiciones: comuna Bydac™ C18 25 cm x 9.4 mm D.I.; fase móvil, (A) TFA en agua al 0.1 %, (B) TFA en CH3CN al 0.1 %, gradiente, (A/B) de 100/0 a 40/60 en un lapso de 30 min; índice de flujo, 5 mi/min; detección, UV a 215 nm. La pureza radioquímica de [3H]haTRAP era de 99% según el análisis por HPLC. Se obtuvo un lote de 14.9 mCi a una actividad específica de 18.4 Ci/mmol.
Preparación de las membranas plaquetarias. Se prepararon membranas de plaqueta utilizando una modificación del método para Natarajan et al. (Natarajan et al, Int. J. Peptide Protein Res, 45: 145-151 (1995)) a partir de 20 unidades de concentrados de plaquetas obtenidos de North Jersey Blood Center (East Orange, NJ) dentro de las 48 horas de su recolección. Todos los pasos se llevaron a cabo a 4°C en condiciones de seguridad de riesgo biológico aprobadas. Las plaquetas fueron centrifugadas a 100 x g durante 20 minutos a 4°C para separar los glóbulos rojos. Los sobrenadantes fueron sometidos a decantación y centrifugados a 3000 x g durante 15 minutos para reducir las plaquetas a pellas. Las plaquetas fueron resuspendidas en Tris-HCI 10 mM, pH 7.5, NaCI 150 mM, EDTA 5 mM, a un volumen total de 200 mi y centrifugadas a 4400 x g durante 10 minutos. Se repitió este paso dos veces más. Se resuspendieron las plaquetas en Tris-HCI 5 mM, pH 7.5, EDTA 5 mM, hasta un volumen final de aproximadamente 30 mi y se homogeneizó con 20 impactos en un homogeneizador Dounce™. Se redujeron a pellas las membranas a 41.000 x g, se resuspendió en 40-50 mi de Tris-HCI 10 mM, pH 7.5, EDTA 1 mM, ditiotreitol 0.1 mM y se congelaron alícuotas de 10 mi en N2 líquido y se almacenó a -80°C. Para completar la preparación de las membranas, se descongelaron las membranas, se agrupó y homogeneizó con 5 impactos de un homogeneizador Dounce. Las membranas fueron reducidas a pellas y lavadas 3 veces con trietanolamina-HCI 10 mM, pH 7.4, EDTA 5 mM y se resuspendió en 20-25 mi de Tris-HCI 50 mM, pH 7.5, MgCI2 10 mM, EGTA 1 mM y 1% de DMSO. Se congelaron alícuotas de las membranas en N2 líquido y se almacenó a -80°C. Las membranas se mantuvieron estables durante por lo menos 3 meses. 20 unidades de concentrados de plaquetas rindieron típicamente 250 mg de proteína de membrana. La concentración de proteína se determinó por medio de un análisis de Lowry (Lowry et al., J. BioL Chem., 193:265-275 (1951 )).
Ensayo de unión de radioligandos al receptor de trombina de alto rendimiento Se analizaron los antagonistas del receptor de trombina empleando una modificación del ensayo de unión de radioligandos al receptor de trombina de Ahn et al (Ahn et al, Mol. Pharmacol., 51:350-356 (1997). El análisis se llevó a cabo en placas Nunc de 96 pocilios (No. Cat. 269629) a un volumen de ensayo final de 200 µ?. Las membranas plaquetarias y [3H]haTRAP fueron diluidas a razón de 0.4 mg/ml y 22.2 nM, respectivamente, en regulador de pH de unión (Tris-HCI 50 mM, pH 7.5, MgCI2 10 mM, EGTA 1 mM, BSA al 0.1%). También se diluyeron soluciones base (10 mM en DMSO al 100%) de los compuestos de ensayo en DMSO al 10%. A menos que se indique lo contrario, se agregaron 10 µ? de soluciones del compuesto diluido y 90 µ? de radioligando (una concentración final de 10 nM en DMSO al 5%) a cada pocilio y se dio comienzo a la reacción mediante la adición de 100 µ? de membranas (40 µ9 de proteína/pocillo). La unión no fue significativamente inhibida por el DMSO al 5%. Los compuestos fueron analizados en tres concentraciones (0.1 , 1 y 10 µ?). Las placas fueron cubiertas y mezcladas sometiéndolas suavemente en el vórtice en un Agitador de Placas Tituladora Lab-Line™ durante 1 hora a temperatura ambiente. Se remojaron placas de filtro Packard UniFilter™ GF/C durante por lo menos 1 hora en polietilenimina al 0.1%. Las membranas incubadas fueron cosechadas utilizando una Cosechadora FilterMate™ Universal y fueron lavadas rápidamente cuatro veces con 300 µ? de Tris-HCI 50 mM, pH 7.5, MgCI2 10 mM, EGTA 1 mM helado. Se agregó un cocktail de centelleo MicroScint 20 (25 µ?) a cada pocilio y se hizo el recuento de las placas en un Contador de icroplacas de Centelleo Packard TopoCount™. Se define la unión específica como la unión total menos la unión no específica observada en presencia de un exceso (50 µ?) de haTRAP sin marcar. Se calculó el % de inhibición por un compuesto de unión de [3H]haTRAP a los receptores de trombina a partir de la siguiente relación: % de inhibición = Unión total-Unión en presencia de un compuesto de ensayo X 100 Unión total-Unión no específica Materiales Se sintetizó especialmente A(pF-F)R(ChA)(hR)Y-NH2 y A(pF-F)R(ChA)(hR)(l2-Y)-NH2 en AnaSpec Inc. (San José, CA). La pureza de estos péptidos era >95%. Se adquirió gas tritio (97%) de EG&G Mound, Miamisburg, Ohio. Seguidamente se cargó el gas y se almacenó en un Trisober IN/US Systems Inc. Se obtuvo cocktail de centelleo MicroScint™ 20 de Packard Instrument Co.
Protocolo para la agregación de plaquetas ex vivo en sangre entera de Cvnomolgus Administración de fármaco y recolección de sangre Se deja equilibrar a monos cynomolgus conscientes en silla por espacio de 30 min. Se inserta un catéter con agua en una vena braquiel para la infusión de los fármacos de ensayo. Se insería otro catéter con agua en la otra vena braquial o safena y se utiliza para la extracción de muestras de sangre. En los experimentos en los que se administra el compuesto por vía oral sólo se utiliza un catéter. Se colecta una muestra de sangre para línea de base (1 -2 mi) en tubos vacutainer que contienen un inhibidor de trombina CVS 2130 (100 µg/0.1 mi de solución salina) como anticoagulante. Luego se infunde el fármaco por vía intravenosa durante el período de 30 mín. Se recogen muestras de sangre (1 mi) a los 5, 10, 20, 30 min, durante 30, 60, 90 min después de concluir la infusión del fármaco. En los experimentos por vía PO se administra a los animales la dosis utilizando una cánula de gravaje. Se recogen muestras de sangre a 0, 30, 60, 90, 120, 180, 240, 300, 360 min después de la dosificación. Se utiliza 0.5 mi de sangre para la agregación de sangre entera y el otro 0.5 mi se utiliza para determinar la concentración en plasma del fármaco o sus metabolitos. La agregación se realiza inmediatamente después de la colección de la muestra de sangre de acuerdo con lo descrito a continuación.
Agregación de sangre entera Se agrega una muestra de sangre de 0.5 mi a 0.5 mi de solución salina y se calienta a 37°C en un agregómetro de sangre entera Chronolog. Simultáneamente, se calienta el electrodo de impedancia en solución salina a 37°C. Se coloca la muestra de sangre con una barra agitadora en el pocilio del bloque calefactor, se coloca el electrodo de impedancia en la muestra de sangre y se inicia el software de colección. Se deja ejecutar el software hasta que la línea de base se estabilice y luego se lleva a cabo un control de calibración a 20O. 20 O es igual a 4 bloques en la gráfica producida por el software de computación. Se agrega el agonista (haTRAP) por medio de una pipeta de volumen ajustable (5-25 µ?) y se registra la curva de agregación durante 10 minutos. El valor registrado es la agregación máxima en 6 minutos después de agonista.
Procedimiento de agregación de plaquetas in vitro Se llevaron a cabo estudios de agregación plaquetaria de acuerdo con el método de Bednar et al (Bednar, B., Condra, C, Gould, R.J., y Connolly, T.M., Throm. Res., 77:453-463 (1995)). Se obtuvo sangre de sujetos humanos sanos que no habían tomado aspirina durante por lo menos 7 días por medio de venopuntura utilizando ACD como anticoagulante. Se preparó plasma rica en plaquetas mediante centrifugación a 100xg durante 15 minutos a 15 grados C. Se redujeron las plaquetas a pellas a 3000xg y se lavó dos veces en solución salina con regulador de pH que contenía EGTA 1 m y 20 µg/ml de apirasa para inhibir la agregación. Se ejecutó la agregación a temperatura ambiente en solución salina con regulador de pH suplementada con 0.2 mg/ml de fibrinógeno humano. Se preincubaron el compuesto de ensayo y las plaquetas en placas de fondo plano de 96 pocilios por espacio de 60 minutos. Se dio comienzo a la agregación adicionando haTRAP 0.3 µ? o 0.1 U/ml de trombina y sometiendo rápidamente a vórtice a la mezcla utilizando un Agitador de Placas Tituladora Lab Une1™ (velocidad 7). Se monitoreó el porcentaje de agregación con transmitancia de luz en aumento a 405 nm en un Lector de Placas Spectromax™.
Procedimiento antitumoral in vivo Se llevan a cabo las pruebas en el modelo de carcinoma mamario humano en ratón desnudo de acuerdo con el procedimiento dado a conocer por S. Even-Ram et al, Nature Medicine, 4, 8 (1988), p. 909-914.
Ensayo de unión al receptor cannabinoide CB? Se llevó a cabo la unión al receptor cannabinoide CB2 utilizando el procedimiento de Showalter et al (1996, J. Pharmacol Exp Ther. 278(3), 989-99), con modificaciones menores. Todos los ensayos se llevaron a cabo en un volumen final de 100 ul. Los compuestos de ensayo fueron resuspendidos en DMSO 10 mM, luego diluidos en serie en Tris 50 mM, pH 7.1 , MgCI2 3 mM, EDTA 1 mM, 50% de DMSO. Luego se transfirieron alícuotas (10 ul) de cada muestra diluida a pocilios individuales de una placa microtituladora de 96 pocilios. Se resuspendieron membranas de células CHO/Ki transfectadas con CB2 (Receptor Biology, Inc) en regulador de pH de unión (Tris 50 mM, pH 7.1, MgCI2 3 mM, EDTA 1 mM, seroalbúmina bovina libre de ácidos grasos al 0.1%), luego se agrega a la reacción de unión ( 5 ug en 50 ul por ensayo). Se dio comienzo a las reacciones mediante la adición de [3H] CP-55, 940 diluido en regulador de pH de unión actividad específica = 180 Ci/mmol, New England Nuclear, Boston, Mass). La concentración final del ligando en la reacción de unión fue de 0.48 nM. Después de la incubación a temperatura ambiente por espacio de 2 horas, las membranas fueron cosechadas por filtración a través de placas filtro GF-C previamente tratadas (polietilenimina al 0.5%; Sigma P-3143) (Unifilter-96, Packard) utilizando un cosechador de células de 96 pocilios TomTech™ Mach 3U (Hamden, Ct). Se lavaron las placas 10 veces en 100 ul de regulador de pH de unión y se dejó que las membranas secaran al aire. Se cuantificó la radiactividad en las membranas después de la adición de fluido de centelleo Packard Omniscint™ utilizando un Contador de Centelleo y Luminiscencia en icroplacas TopCount™ NXT (Parkard, Meriden, Ct). Se realizó el análisis de regresión no lineal utilizando Prism™ 20b (GraphPad Software, San Diego, Ca). Utilizando los procedimientos de ensayo precedentemente descriptos, se encontró que los compuestos representativos de la fórmula I tienen valores de CI5o del receptor de trombina (es decir, la concentración a la cuai se observa el 50% de inhibición de la trombina) de 1 a 1000 nM, preferentemente de 1-100 nM, más preferentemente de 1-20 nM. Los valores de Ki de CB2 oscilan entre 1 y 1000 nM, preferentemente de 1-200 nM, más preferentemente de 1-100 nM. Por ejemplo, los valores de CI5o de los ejemplos Nos. 8BU, 8CA, 8CB, 8CL, 17H, 20E, 20F, 20G y 20H están en el rango de 1-100 nM.

Claims (6)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES
1.- Un compuesto representado por cualquiera de las siguientes fórmulas estructurales o un isómero, sal, solvato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo. 2 - Una composición farmacéutica que comprende una cantidad efectiva de por lo menos un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 y por lo menos un vehículo farmacéuticamente aceptable. 3. - El uso de por lo menos un compuesto de la reivindicación 1 , para preparar un medicamento para inhibir los receptores de trombina en un mamífero. 4. - El uso de por lo menos un compuesto de la reivindicación 1 , para preparar un medicamento para inhibir los receptores cannabinoides en un mamífero. 5. - El uso de por lo menos un compuesto de la reivindicación 1 , para preparar un medicamento para tratar la trombosis, la agregación de plaquetas, la coagulación, el cáncer, las enfermedades inflamatorias o las enfermedades respiratorias en un mamífero. 6. - El uso de por lo menos un compuesto de la reivindicación 1 , para preparar un medicamento para el tratamiento de la aterosclerosis, restenosis, hipertensión, angina de pecho, arritmia, insuficiencia cardiaca, infarto de miocardio, glomerulonefritis, apoplejía trombótica, apoplejía tromboembólica, enfermedades vasculares periféricas, isquemia cerebral, artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico, esclerosis múltiple, diabetes, osteoporosis, isquemia renal, apoplejía cerebral, isquemia cerebral, nefritis, trastornos inflamatorios de los pulmones y el tracto gastrointestinal, obstrucción reversible de las vías respiratorias, asma cónica o bronquitis en un mamífero. 7.- Un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural: o un isómero, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 8.- Un compuesto representado por la siguiente estructural o un isómero, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 9.- Un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural: o un isómero, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 10.- Un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural: o un isómero, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 11.- Un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural: o un isómero, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 1
2.- Un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural: o un isómero, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 1
3.- Un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural: o un isómero, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 1
4.- Un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural: o un isómero, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 1
5.- Un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural: o un isómero, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo. 1
6.- Un compuesto representado por la siguiente fórmula estructural: o un isómero, sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.
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