MXPA05004503A - Nuevos profarmacos de monofosfato de citarabina. - Google Patents

Abstract

Se describen compuestos de la formula I, su preparacion y usos; formula I, en donde M y V son cis entre si y MH es citarabina; el 5' -oxigeno de la citarabina se une al fosforo; V es 4-piridilo; y sales y profarmacos farmaceuticamente aceptables de los mismos.

Description

NUEVOS PROFARMACOS DE MONOFOSFATO DE CITARABINA Campo de la Invención La presente invención se refiere a nuevos diésteres cíclicos de monofosfato de citarabina (araCMP) de 1,3-propano- 1 -aril-dioles , a su preparación y a sus usos. De manera más específica, la invención está relacionada al área de diésteres cíclicos de monofosfato de citarabina (araCMP) de 1, 3-propano-l- (4-piridil) dioles que tienen la estereoquímica cis. Antecedentes de la Invención La siguiente descripción de los antecedentes de la invención se proporciona con la finalidad de entender la invención, pero no se admite que sea, o que describa, la técnica anterior a la invención. Todas las publicaciones se incorporan como referencia en su totalidad. El AraC es un análogo de desoxicitidina , que se transporta en células vía transportadores de nucleósidos y se fosforila al metabolito activo trifosfato de araC (araCTP) por nucleósido- y nucleótido-cinasas . Es uno de los fármacos más exitosos usados para tratar leucemia no linfocítica aguda, pero es inefectivo en el tratamiento contra el carcinoma hepatocelular ("HCC", por sus siglas en inglés) debido a que la nucleósido-cinasa necesaria se expresa a bajos niveles en el hígado (Arner et al., Pharmacol. Ther.

REF: 163256 67 (2) (: 155-86 , (1995); Ruiz van Heperen et al., Semin. Oncol . 22 Suppl 11(4):35-41 (1995)). Sin embargo, la cinasa permanece altamente expresada en los órganos objetivos de la toxicidad (por ejemplo, médula ósea) lo que conduce a las toxicidades asociadas que limitan la dosis. Los profármacos cíclicos de araC ofrecen el potencial de mejorar la efectividad de araC en el hígado al distribuir de forma específica concentraciones mayores de araCTP a células HCC y hepáticas que expresan CYP3A4. La distribución de araC como su monofosfato, el araCMP, se espera que derive la desoxicitidina-cinasa limitante, la desoxicitidina-desaminasa limitante y las actividades de transporte tanto en células normales como tumorales resistentes. Los diésteres cíclicos de araCMP de los 1 , 3 -propanodioles por lo tanto se predice que tienen actividad incrementada anti-tumor en el hígado, en comparación a araC, con toxicidad reducida al sistema hematopoyético extra-hepático, lo que conduce a una mielosupresión limitante de la dosis vista en el hombre (Ver, US 6,312,662) . La hepatitis y el cáncer hepático permanecen pobremente tratados con las terapias actuales debido a los efectos secundarios extrahepáticos que limitan la dosis o debido a la distribución inadecuada de los agentes quimioterapéuticos al tejido objetivo. La limitación en los planteamientos actuales incluye la capacidad de carga de fármaco, la complejidad en la fabricación y caracterización del conjugado, y la reducción de la expresión del receptor. De esta manera, hay una necesidad de una manera para distribuir fármacos tal como araC al hígado. Breve Descripción de las Figuras Figura la. Representa el nivel de araCTP en el hígado cuando se administra en el Compuesto A y el Compuesto B a una dosis de 100 mg/kg de CE a ratones suizos NIH machos por una inyección en bolo i.p. individual en el tiempo 0. Figura Ib. Representa el nivel de profármaco en plasma cuando se administra un Compuesto A y Compuesto B a una dosis de 100 mg/kg de CE a ratones suizos NIH machos por una inyección en bolo i.p. individual en el tiempo 0. Figura le. Representa el nivel de araC en plasma cuando se administra un Compuesto A y Compuesto B a una dosis de 100 mg/kg de CE a ratones suizos NIH machos por una inyección en bolo i.p. individual en el tiempo 0. Figura 2a. Representa el nivel de araCTP en el hígado después de que se administra un Compuesto A, Compuesto B o Compuesto C por infusión i.v. continua. Figura 2b. Representa la respuesta a la dosis de araCTP hepático después del tratamiento con Compuesto A o Compuesto B. Figura 3a. Representa peso corporal, expresado como un por ciento del peso inicial, como una función del tiempo en ratones tratados con araC a dosis de 30-1000 mg/kg de CE durante 5 días por inyección IP diaria. Figura 3b. Representa peso corporal, expresado como un por ciento del peso inicial, como una función del tiempo en ratones tratados con Compuesto C a dosis de 30-1000 mg/kg de CE durante 5 días por inyección IP diaria. Figura 4a. Representa puntos terminales" de hematología después del tratamiento de 5 días con araC o Compuesto C con relación a vehículo en solución salina. Células nucleadas de medula ósea. Figura 4b. Representa puntos terminales de hematología después del tratamiento de 5 días con araC o Compuesto C con relación a vehículo en solución salina. Células multinucleadas , sanguíneas, periféricas (PM ) . Figura 4c. Representa puntos terminales de hematología después del tratamiento de 5 días con araC o Compuesto C con relación a vehículo en solución salina. Células mononucleares sanguíneas periféricas. Figura 4d. Representa puntos terminales de hematología después del tratamiento de 5 días con araC o Compuesto C con relación a vehículo en solución salina. Plaquetas . Breve Descripción de la Invención La presente invención se refiere a ciertos diésteres cíclicos novedosos de monofosfato de citarabina (araCMP) de 1 , 3-propano-l-aril-dioles, a su preparación y sus usos. De manera más específica, la invención se refiere al área de diésteres cíclicos de monofosfato de citarabina araCMP) de 1 , 3 -propano- 1 - (4 -piridil ) -dioles que tienen estereoquímica cis. Un aspecto de la invención se refiere a compuestos de la fórmula I : Fórmula I en donde : M y V son cis entre sí y MH es citarabina; el 5'-oxígeno de la citarabina está unido al fósforo; V es 4-piridilo; y profármacos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos. En otro aspecto, la invención se refiere al compuesto de la fórmula III Fórmula III y sales y profármacos farmacéuticamente aceptable del mismo. Otro aspecto de la invención se refiere a métodos para la preparación de compuestos de la fórmula II: Fórmula III en donde : el 5' -oxígeno de la citarabina se une al fósforo que comprende el acoplamiento de un reactivo de fosforilación de la fórmula IV y citarabina opcionalmente protegida; Fórmula IV en donde L se selecciona del grupo que consiste de cloro, y 4 -nitrofenoxi .

Definiciones De acuerdo con la presente invención y como se usa en la presente, se definen los siguiente términos con los siguientes significados, a menos que se señale explícitamente otra cosa. El término estereoquímica "cís" se refiere a la reacción de las posiciones del grupo V y el grupo M en el anillo de seis miembros. La fórmula a continuación muestra una estereoquímica cis.

Otra estereoquímica cis tendría V y M apuntando por arriba del plano. La fórmula a continuación muestra esta estereoquímica cis.

Los términos "S-configuración" , "S-isómero" y "S-profármaco" se refieren a las configuraciones absolutas S del carbono C . La fórmula a continuación muestra la S-estereoquímica .

Los términos "R-configuración" , "R-isómeros" y "R-profármaco" se refieren a la configuración absoluta R del carbono C . La fórmula a continuación muestra la R-estereoquímica .

El término "por ciento de exceso enantiomérico (% de ee) " se refiere a la pureza óptica. Se obtiene al usar la siguiente fórmula: - fSI X100=%R-%S [R] + [S] en donde [R] es la cantidad del isómero R y [S] es la cantidad del isómero S. Esta fórmula proporciona el % de ee cuando R es el isómero dominante. El término "centro estereogénico" se refiere a El término "d.e." se refiere al exceso diastereomérico . Se obtiene al usar la siguiente fórmula: \cis - \trans] X 100 = %[cis] - %[írans] [cis] + [tr ns] El término "diastereoisómero" se refiere a compuestos con dos o más centros asimétricos que tienen los mismos grupos sustituyentes y que sufren los mismos tipos de reacciones químicas en donde los diastereoisómeros tienen diferentes propiedades físicas, tienen grupos sustituyentes que ocupan diferentes posiciones relativas en el espacio, y tienen diferentes propiedades biológicas. El término "racémico" se refiere a un compuesto o mezcla que está compuesta de cantidades iguales de formas moleculares enantioméricas de la molécula que no son ópticamente activas. El término "enantiómero" se refiere a cualquiera de un par de moléculas cuyas estructuras moleculares tienen entre sí una relación de imágenes en el espejo.

El término "halógeno" se refiere a cloro, bromo, yodo o flúor. El término "alquilo" se refiere a grupos alifáticos saturados incluyendo grupos cíclicos y de cadena recta, ramificada y cíclica. Los grupos alquilo adecuados incluyen metilo, etilo, isopropilo y ciclopropilo . El término "arilo" se refiere a grupos aromáticos que tienen 5-6 átomos de anillo. Los grupos arilo adecuados incluyen fenilo, furanilo, piridilo y tienilo. Los grupos arilo pueden estar sustituidos. El término "ariloxi-" se refiere al grupo aril-0-. El término "inferior" referido en la presente con relación a radicales o compuestos orgánicos, define respectivamente tal como con hasta e incluyendo 10, de manera preferente hasta e incluyendo 6, y de manera ventajosa de uno a cuatro átomos de carbono. Estos grupos pueden ser de cadena recta, ramificada o cíclica. El término "opcionalmente sustituido" o "sustituido" incluye grupos arilo sustituidos por uno o dos sustituyentes , independientemente seleccionados de alquilo inferior, arilo inferior y halógenos. De manera preferente, estos sustituyentes se seleccionan del grupo que consiste de halógenos . El término "sal farmacéuticamente aceptable" incluye sales de compuestos de la fórmula I y sus profármacos derivados de la combinación de un compuesto de esta invención y ácido o base orgánica o inorgánica. Los ácidos adecuados incluyen ácido acético, ácido adípico, ácido bencenosul fónico, ácido (+) -7, 7-dimetil-2-oxobiciclo [2.2.1] heptano-l-metanosulfónico, ácido cítrico, ácido 1 , 2 -etanodisulfónico , ácido dodecil - sulfónico , ácido fumárico, ácido glucoheptónico, ácido glucónico, ácido glucorónico, ácido hippúrico, ácido hemietanólico de clorhidrato, HBr, HC1, HI,, ácido 2-hidroxietanolsulfónico, ácido láctico, ácido lactobiónico, ácido maleico, ácido metanosul fónico , ácido metilbromuro, ácido metil - sulfúrico , ácido 2-naftalenosulfónico, ácido nítrico, ácido oleico, ácido 4 , 4-metilenobis [3 -hidroxi -2 -naf alencarboxílico] ácido fosfórico, ácido poligalacturónico, ácido esteárico, ácido succínico, ácido sulfúrico, ácido sulfosalicí lico, ácido tannico, ácido tartárico, ácido teref álico, y ácido p-toluenosul fónico . El término "profármaco" como se usa en la presente se refiere a cualquier composición M que cuando se administra a un sistema biológico genera un compuesto biológicamente activo como resultado de reacciones químicas espontáneas, reacciones químicas catalizadas con enzima, y/o reacciones químicas metabólicas, o una combinación de cada una. Los profármacos normales se forman usando grupos unidos a la funcionalidad, por ejemplo, H0- , HS-, H00C-, R2 -, asociados con el fármaco, que se escinden m vivo. Los profarmacos normales incluyen de manera enunciativa y sin limitación esteres de carboxilato donde el grupo es alquilo, arilo, aralquilo, aciloxialquilo, alcoxicarboniloxialquilo así como esteres de hidroxilo, tiol y aminas donde el grupo unido es un grupo acilo, un alcoxicarbonilo, aminocarbonilo, fosfato o sulfato. Los grupos ilustrados son de ejemplo y no exhaustivos y una persona experta en la técnica puede preparar otras variedades conocidas de prof rmacos. Estos profármacos de los compuestos de la fórmula I, caen dentro del alcance de la presente invención. Los profármacos deben someterse a alguna forma de una transformación química para producir el compuesto que es biológicamente activo o es un precursor del compuesto biológicamente activo. En algunos casos, el profármaco es biológicamente activo, usualmente menos que el fármaco mismo, y sirve para mejorar la eficiencia del fármaco con la seguridad a través de la disponibilidad oral mejorada, vida media farmacodinámica , mejorada, etc. Los compuestos biológicamente activos incluyen, por ejemplo, agentes anti-cáncer y agentes antivirales. Ciertos compuestos de citarabina, por ejemplo, citarabina A^-acilada (Wechter et al., J. Med. Chem. 19(8), 1013 (1976)) en donde el grupo acilado es palmitoilo o behanoilo, se conoce que incrementan la solubilidad en líquidos y el transporte en membranas así como disminuyen la desaminacion por citidina-desaminasa . Otros grupos en iV4-también se contemplan tal como alquilideno (es decir, un grupo imino) . Estos grupos se remueven in vivo para generar el grupo 4-amino de citarabina. Se contemplan profármacos similares para los profármacos de esta invención. El término "éster cíclico de 1', 3'-propano", "éster cíclico de 1 , 3 -propano" , "éster cíclico de 1', 3'-propanilo" , y "éster cíclico de 1 , 3 -propanilo" se refieren a lo siguiente.

El término "4 -piridilo" , "parid-4-il" y "4-piridinilo" se refieren a lo siguiente: El término "5' -oxígeno" se refiere al oxígeno en lo siguiente El término "solvente de heteroarilo que contiene es un grupo heteroarilo con 1 a 3 nitrógeno como átomos de anillo y una 4<pka<6 y cualquier mezcla con solventes de heteroarilo que no contienen N. El término heteroarilo que contiene N-hidroxi-nitrógeno" se refiere a un heteroarilo que contiene N en donde un grupo hidroxi está unido a un átomo de nitrógeno. Un ejemplo es N-hidroxi -benzotriazol . El término "heteroarilo que contiene N" se refiere al grupo heteroarilo con 1 a 3 nitrógenos como átomos de anillo y unidos vía un átomo de carbono. El término "grupo de retiro de electrones" se reconoce en la técnica, y denota la tendencia de un sustituyente para atraer electrones de valencia de átomos vecinos, es decir, el sustituyente es electronegativo con respecto a los átomos vecinos. Una cuantificacion del nivel de la capacidad de retiro de electrones se da por la constante sigma (s) de Hammett. Esta constante bien conocida se describe en muchas referencias, por ejemplo, J. arch, Advanced, Organic Chemistry, McGraw Hill Book Company, New York, (1977) edition) pp . 251-259. Los valores de la constante de Hammett son en general negativos para grupos donadores de electrones (s? = 0.66 para NH2) y positiva para grupos de retiro de electrones (op = 0.78 para un grupo nitro), s? que indica sustitución para. Los grupos de retiro de electrones de ejemplo incluyen nitro, cetona, aldehido, sulfonilo, trifluorometilo, -CN, cloruro, y similares. El término "grupo saliente" se refiere a la parte de la molécula de substrato que cuando se escinde en una reacción no contiene fósforo que se suministró al enlace durante la reacción. El término "P450" se refiere al citocromo P-450. Se encuentran enzimas de P-450 en grandes cantidades en el hígado y otros tejidos que contienen estas enzimas. Las isozimas de P450 específicas son responsables de la oxidación del fosfonato cíclico de la presente invención, de modo que se produce finalmente el fosfonato o fosfato libre. Se encuentran enzimas de P450 en tejidos y células en todos los mamíferos . El término "tejidos que expresan P450" se refiere al hígado y a tejidos similares y células similares que contienen la isozima CYP3A4 o cualquier otra isozima de P450 encontrada como que oxida los profármacos cíclicos de la invención. De acuerdo con DeWazíers et al., [J. Phar . Exp. Ther., 253, 387-394 (1990), la CYP3A4 se localiza en humanos en los siguientes tejidos (determinado por mediciones con inmunotransferencia y/o enzimática) : Tej idos ividad en hígado Hígado Duodeno Yeyuno 30 íleo 10 Colon <5 (solo isoenzima P450 encontrada) Estomago <5 Esófago <5 Riñon no detectable El término "enfermedades de tejidos que expresan P450" se refiere a enfermedades, de la función de los tejidos que expresan P450 está comprometida tal que los tejidos no son capaces por más tiempo de realizar sus funciones metabólicas. Esto puede dar por resultado ya sea una sobreproducción o un decaimiento en los productos terminales bioquímicos. Estas enfermedades pueden incluir enfermedad del hígado tal como cáncer hepático primario o metastático (por ejemplo, HCC) , fibrosis hepática, o cirrosis; enfermedades que pueden comprender el hígado, pero que también comprenden otros tejidos que expresan P450 pueden incluir cáncer colorrectal primario o metastático, hiperlipidemia, diabetes e infecciones virales y parásitas. El término "citarabina opcionalmente protegida" se refiere a la protección de los grupos 2' y 3'-hidroxilo y el grupo 4 -nitrógeno de citarabina de grupos protectores normales . El término "que mejora" se refiere al incremento o mejora de una propiedad específica.

El término "que enriquece "se refiere al incremento de la cantidad de un isómero específico producido por una reacción. El término "administrado simultáneamente" se refiere a la administración de un fármaco en o cerca al mismo tiempo en el cual se administra otro fármaco. De manera preferente, la administración está en el espacio de 30 minutos una de otra. El término "índice terapéutico" ("TI") se refiere a la relación de la dosis de un fármaco o profármaco que produce una respuesta terapéuticamente benéfica con relación a la dosis que produce una respuesta indeseada tal como muerte, o una elevación de los marcadores que son indicativos de toxicidad, y/o efectos secundarios farmacológicos. El término "remisión" se refiere al abatimiento o disminución en la severidad de los síntomas de una enfermedad . El término "libre de cáncer" se refiere a la carencia de evidencia que indique la presencia de neoplasmas malignos (cánceres) o metastasas en cualquier tejido u órgano . Los siguientes productos químicos bien conocidos se refieren en la especificación y las reivindicaciones. También se proporcionan abreviaciones y nombres comunes. CH2C12; Diclorometano o cloruro de metileno DCM: diclorometano o cloruro de metileno (-) -DIP-C1; (-) -ß-Clorodiisopinocanfeilborano DMAP, 4 -dimetilaminopiridina DMF; Dimetilformamida DMPU; l,3-dimetil-3,4, 5, 6 - tetrahidro-2 (1H) -pirimidinona DMSO; sulfóxido de dimetilo HC1 ; ácido clorhídrico KI ; yoduro de potasio gS04 ; sulfato de magnesio MTBE; éter metílico de ter-butilo NaCl ; cloruro de sodio NaOH; hidróxido de sodio P450; citocromo P-450; PyBOP; hexafluorofosfato de benzotriazol - 1 -iloxi ripirrolidinofosfonio TBDMSC1 ; TBSC1 ; t-butildimetil -clorosilano TBS , TBDMS; t-butildimetilsililo TEA; trietilamina THF; tetrahidrofurano TMSCl ; clorotrimetilsilano 5' -O-cis- [4- (4-piridil) -1, 3, 2 -dioxafosforin-2 -oxo-2-il] -citosina- -D-arabinofuranosido ; 2 ( 1H) - Pirimidinona , 4-amino-1- [5-0-cis- [2 -óxido-4- (4 -piridinil ) -1,3,2-dioxafosforinan-2-il] -ß-D-arabinofuranosilo] El siguiente fármaco bien conocido se refiere en la especificación y las reivindicaciones. También se proporcionan abreviaciones y nombres comunes. Citarabina; 1- (ß-D-Arabinofuranosil ) citosina; araC Descripción Detallada de la Invención Esta invención se refiere al descubrimiento de y compuestos de 5 ' -O-cis- [ - (4 -piridil ) - 1 , 3 , 2 -dioxafosforin-2 -???-2-il] -citosina-p-D-arabinofuranosido y su uso en el tratamiento de enfermedades del hígado. En un aspecto, las enfermedades del hígado se seleccionan del grupo que consiste de infecciones virales y cánceres del hígado. En otro aspecto, el cáncer del hígado es carcinoma hepatocelular . En un aspecto secundario, el cáncer de hígado es carcinoma colorrectal . En un aspecto, el isómero de los compuestos de 5' -O-cis - [4- (4-piridil) -1,3, 2 -dioxafosforin- 2 -oxo-2 -il ] -citosina-P-D-arabinofuranosido es el isómero donde el carbono C tiene la configuración S. En otro aspecto, la presente invención también se refiere a el proceso para la síntesis de compuestos de 5 ' -O-cis [4- (4-piridil) -l,3,2-dioxafosforin-2-oxo-2-il] -citosina-P-D-arabinofuranosido. El proceso de esta invención se refiere a la síntesis de ambos cis-estereoisómeros de los diésteres cíclicos de fosfato de araCMP. En un aspecto, el cis-isómero de los diésteres de fosfato de citarabina es el cis-isómero de los diésteres de fosfato de citarabina con la configuración S en el carbono C .

Muy pocos procedimientos han mostrado ser eficaces en la curación de cáncer hepático. En un pequeño porcentaje de pacientes, donde los tumores están nuy bien definidos y muy pocos, la ablación quirúrgica, crioablación e inyecciones de etanol , han mostrado eficiencia limitada en la curación de los pacientes. Sin embargo, la mayoría de los pacientes quienes se someten a estos procedimientos terminan llegando a recurrencia del cáncer. En otro aspecto, esta invención también se refiere a la prevención de la recurrencia de cánceres en tumores que expresan P450 en pacientes quienes se someten a tratamiento médico o quirúrgico. En otro aspecto de la invención, los profármacos preferidos de la invención se usan para tratar cánceres metastáticos . En un aspecto, los cánceres metastáticos se seleccionan de cánceres secundarios derivados de cánceres colorrectales . Método para Tratar Cánceres Recurrentes Se identifican pacientes con carcinoma hepatocelular y se monitorizan usando una variedad de técnicas, incluyendo ultrasonografía , tomografía computará zada (CT, por sus siglas en inglés), formación de imágenes por resonancia magnética, angiografía, y biopsia. Se usan los niveles de alfa- fetoproteína (AFP, por sus siglas en inglés) en la diagnosis y puede ser un buen indicador de la actividad anti-tumor, especialmente en pacientes con altos niveles iniciales de (AFP) . Estas técnicas frecuentemente son útiles en la determinación de las opciones de tratamiento y la eligibilidad del paciente. Las opciones de tratamiento incluyen, transplante ortotópico de hígado (OLT, por sus siglas en inglés) , recepción quirúrgica, inyección percutánea de varios agentes (incluyendo alcohol), crioterapia, quimioterapia intra-arterial , quimioembolización arterial trans-catéter (TACE, por sus siglas en inglés) , quimioterapia sistémica, radioterapia, inmunoterapia y terapia con hormonas. Usualmente no se pueden diagnosticar los tumores <1 cm.

Los pacientes que sufren un procedimiento quirúrgico (OLT ó recepción quirúrgica) pueden no mostrar evidencia observable de tumores después del procedimiento. De manera similar, los pacientes que se someten a tratamientos no quirúrgicos tal como terapia de ablación, (etanol, micrcondas, radiofrecuencia) y TACE también pueden mostrar disminuciones significativas en el tamaño del tumor y la apariencia de estar libres de tumor. Los pacientes también se pueden tratar con microesferas (microcuentas de vidrio radiomarcadas con Ytrio-90) , vehículos de distribución de fármaco tal como micropartículas compuestas de hierro que se pueden colocar con imanes exteriores al tumor, inyección directa de agentes de quimioterapia, por ejemplo, cisplatina en un gel, fármacos que seleccionan como objetivo tumores de HCC tal como doxorrubicina y el uso de quimioagentes (tal como doxorrubicinas ) en ablación con etanol. También se ven otros agentes de quimioterapia como potencial en tratamientos iniciales de terapia sistémica, incluyendo agentes anti-angiogénesis , inhibidores de timidilato-sintasa (por ejemplo, timitaq) , inhibidores de polimerización de tubulina (por ejemplo, T67) , varios inhibidores de topoisomerasa I, por ejemplo, fármacos de la clase de tecan tal como exatecan, varias combinaciones de fármacos que incluyen una combinación de cisplatina, interferón, adriamicina y 5-FU. Todos los tratamientos de HCC se asocian con una alta incidencia de recurrencia de cáncer. El cáncer recurrente puede surgir por una o más razones. Por ejemplo, las metástasis intrahepáticas secundarias que están presentes en el momento de la cirugía frecuentemente no se detectan debido a su tamaño (<1 cm) . Los pacientes con invasión de vena hepática o portal tienen pobre diagnosis puesto que el tumor puede haber sembrado otros glóbulos hepáticos. Estas micro-metástasis crecen en tamaño y proliferan y son particularmente susceptibles a los profármacos de esta invención. Un segundo factor que puede conducir a enfermedad recurrente surge de la resección incompleta del tumor o la ablación de los tumores primarios. Un tercer factor esta relacionado al ambiente del hígado (cirrótico, infección viral) puede hacer al hígado de alto riesgo para "nuevas" primarias algunas de las cuales pueden estar presentes pero sin detectar en el momento del tratamiento.

Para prevenir o retrazar el cáncer recurrente, se contemplan que se usen los profármacos de la invención antes de, durante o después de uno de los tratamientos anteriores. El tratamiento conlleva a la administración de un profármaco de la invención a un paciente con HCC durante uno a 10 ciclos, de manera preferente de tres a seis ciclos durante el transcurso de uno a dos años. Un ciclo conlleva un curso de tratamiento mostrado que es efectivo en la desaceleración o prevención del crecimiento de tumor. En un aspecto de la invención, el tratamiento conlleva la infusión continua de un profármaco durante 7-14 días seguido por al menos un periodo libre de fármaco de 14 días (un ciclo) . Se monitorizan los pacientes durante el tiempo. Los profármacos dan por resultado tiempo incrementado libre de cáncer, tiempo incrementado de supervivencia y/o calidad mejorada de vida. Método para Tratar Leucemia Se usa citarabina para tratar varias leucemias. Típicamente, las citarabina se administra a dosis de 100 a 200 mg/m2/día ya sea por infusión continua durante hasta 7 días seguido por un periodo libre de fármaco de varias semanas como resultado de la mielosupresión inducida por citarabina. Típicamente, se usan tres o más ciclos para tratar pacientes con leucemia. También se han empleado regímenes de alta dosis (por ejemplo 3 gm/m2) por varias razones. En conjunto, se requieren mayores niveles de fármaco debido al rápido metabolismo de la citarabina que conlleva principalmente la desaminación de araC al metabolito inactivo araU. La distribución prolongada se considera óptima para tratar cánceres con oncolíticos dependientes del ciclo celular tal como la citarabina. La citarabina es al menos en parte efectiva a través de su capacidad para inhibir la síntesis de ADN ya sea a través de su capacidad para inhibir la ADN-polimerasa y/o da por resultado la terminación de cadena de una hebra de ADN en crecimiento después de la incorporación catalizada por ADN-polimerasa. Como un inhibidor de la síntesis de ADN, el araC tiene sus más grandes efectos citotóxicos durante la fase S del ciclo celular quizá debido al requerimiento de su incorporación en el ADN y la mayor actividad de las enzimas anabólicas durante la fase S . En consecuencia, la duración y exposición de las células araC se correlaciona directamente con la aniquilación celular debido a que el periodo prolongado de exposición permite que araC se incorpore en el ADN de un mayor porcentaje de células conforme pasan a través de la fase S. Los pacientes tratados con mayores dosis o araC o durante periodos prolongados están en riesgo de varias toxicidades asociadas con araC. Además, si estos pacientes pueden estar particularmente en riesgo a las toxicidades de citarabina, por ejemplo, pacientes dañados del hígado, de edad madura. Las toxicidades incluyen mielosupresión, ulceración epitelial gastrointestinal, colestasis intrahepática y pancreatitis, disfunción cerebelar y cerebral y conjuntivitis. Los profármacos de la invención se contemplan para disminuir algunas de estas toxicidades que limitan la dosis. En particular, AraC, producido y liberado del hígado después de la activación con profármaco proporcionará un método para lograr la actividad anti-leucémica con menores toxicidades. Se pueden lograr niveles en estado estable con los profármacos de la invención sin lograr altos niveles pico que pueden ocasionar toxicidades tal como disfunción cerebelar y cerebral y con untivitis. El profármaco también proporciona un medio en el cual se administra citarabina que disminuye los eventos adversos asociados al sitio de inyección. La liberación sostenida de citarabina del profármaco puede cambiar el régimen de dosificación desde infusión continua a bolo i.v. o infusión corta, s.c, i.m. oral, etc. La mielosupresión aun puede estar asociada con la terapia. Se pueden usar una variedad de mecanismos para disminuir los efectos de la actividad mielosupresiva de los profármacos, incluyendo un día de descanso del fármaco, transplante de médula ósea, o agentes que incrementan la activación de células hematopoyéticas mieloides, por ejemplo, IL-3, GM-CSF, G-CSF, epoetina) . índice Terapéutico Incrementado También se asocian varias toxicidades con casi todos los agentes anticáncer. En un esfuerzo para disminuir estas toxicidades durante el tratamiento de los cánceres hepáticos primarios o secundarios, algunas veces se administran directamente fármacos en la arteria portal, a fin de incrementar la exposición en hígado del fármaco. Puesto que los fármacos oncolíticos se asocian típicamente con efectos secundarios significativos, la administración local permite una mayor captación hepática y de este modo menores toxicidades extrahepáticas . Para incrementar adicionalmente la captación en hígado, se usa algunas veces la quimioembolización en unión con infusión de fármaco en arteria hepática. La alta especificidad hepática de los profármacos de la presente invención sugiere que se disminuirán de forma similar los efectos secundarios sistémicos por el nuevo planteamiento con profármacos. Además, los cánceres hepáticos primarios y secundarios son particularmente resistentes tanto a la quimioterapia como a la radioterapia. Aunque no se entiende completamente el mecanismo para la resistencia, puede surgir de una mayor concentración de productos génicos hepáticos que conducen a un rápido metabolismo y/o exportación de agentes quimioterapéuticos . Además, el hígado, que esta asociado en general con metabolismo xenobiótico y generación de compuestos intermedios citotóxicos, esta equipado por la naturaleza con múltiples mecanismos protectores de modo que se reduce al mínimo el daño de estos compuestos intermedios. Por ejemplo, la concentración intracelular de glutationa es muy alta en el hígado con relación a otros tejidos, presumiblemente, de modo que los compuestos intermedios capaces de alquilar proteínas y ADN se destoxifican a través de una rápida reacción intracelular. En consecuencia, el hígado puede ser resistente a agentes quimioterapéuticos debido a estos mecanismos y por lo tanto requiere mayores concentraciones que lo normal del agente oncolítico para lograr el éxito. Mayores concentraciones hepáticas requieren mayores dosis del fármaco que comúnmente da por resultado toxicidades extrahepáticas . Los profármacos de esta invención pueden incrementar de forma significativa el índice terapéutico ("TI") de citarabina. En muchos casos, el TI incrementado es un resultado de una alta especificidad hepática. Por ejemplo, la citarabina se fosforila pobremente en el hígado debido a bajos niveles de cinasas. Sin embargo, la cinasa permanece altamente expresada en los órganos objetivo de toxicidad (por ejemplo, médula ósea) lo que conduce a toxicidades asociadas que limitan la dosis. Por lo tanto, los profármacos cíclicos de araC ofrecen el potencial de mejorar la efectividad de araC en el hígado al distribuir de manera específica concentraciones mucho mayores de araCTP a células de HCC y hepáticas que expresan CYP3A4-. La alta especificidad hepática de escisión del profármaco implica que el sub-producto de la escisión del producto también se produce principalmente en el hígado. Por consiguiente, se reducen al mínimo las toxicidades asociadas con el sub-producto puesto que el sub-producto frecuentemente sufre rápidas reacciones de destoxi ficación que ya sea eliminan o reducen al mínimo la toxicidad del sub-producto. Por ejemplo, las reacciones entre el sub-producto y los compuestos y/o proteínas presentes en los hepatocitos (por ejemplo, glutationa y la olefina a, ß- insaturada generada por la descomposición del profármaco). Además, las enzimas presentes en el hígado también pueden transformar adicionalmente el sub-producto en un compuesto no tóxico (por ejemplo, oxidación y/o sulfatación de hidroxipiridina , o reducción de la cetona a, ß- insaturada , etc.). Además, las reacciones intramoleculares que comprenden reacciones de ciclización entre un grupo reactivo y el compuesto que contiene carbonilo a, ß- insaturado generado por la descomposición del profármaco puede reducir al mínimo la toxicidad del sub-producto. La citoxicidad de los profármacos se evalúa fácilmente usando líneas celulares que carecen de actividad de P450 (por ejemplo, actividad de CYP3A4) .

También se puede lograr un TI incrementado por la distribución de mayores cantidades del agente biológicamente activo al hígado con relación a las dosis equivalentes del fármaco de origen. Los niveles hepáticos incrementados del agente biológicamente activos se logran por la administración de profármacos junto con agentes que inducen actividad de P450, por ejemplo, actividad CYP3A4 (por ejemplo, rifampicina, glucocorticoides , fenobarbital , eritromicina) . Método para Mejorar Estabilidad de Profármaco La estabilidad del compuesto en sistemas biológicos es crucial para el desarrollo de un profármaco de un fármaco citotóxico tal como citarabina. Por ejemplo, una carencia de estabilidad a las enzimas presentes en el plasma conducirá la descomposición del compuesto activo en el plasma en lugar del tejido objetivo que expresa CYP3A4 y en consecuencia disminuirá el TI que se espera lograr por una estrategia con profármacos. De manera similar, una carencia de estabilidad intrínseca en el medio acuoso conducirá a la descomposición del profármaco no solo en plasma sino en cualquier órgano que se pueda distribuir el profármaco, conduciendo nuevamente una disminución en el Ti. Además, una carencia de estabilidad puede dañar el desarrollo del fármaco puesto que hará a la formulación final del compuesto activo más difícil, especialmente si el profármaco se va a usar de forma parenteral . En un aspecto, esta invención se refiere al uso de profármacos de 1 - ( 4 -piridil ) - 1 , 3 -propanodiol de araCMP a fin de mejorar la estabilidad total de los profármacos de araCMP. En un aspecto, los profármacos de araCMP son los profármacos de cis- (4 -piridil ) de araCMP. En otro aspecto, el profármaco de araCMP es el profármaco de cis- (4 -piridil ) de araCMP donde el carbón C tiene la configuración S. La estabilidad de los profármacos se determina fácilmente al monitorizar la descomposición de los profármacos en fluidos biológicos, tal como plasma, y soluciones amortiguadas a varios pH y con diferentes agentes de amortiguamiento. Vida Media Farmacodinámica Mejorada La vida media farmacodinámica de la citarabina se puede extender por la nueva metodología de profármaco como resultado tanto de la capacidad para producir el profármaco con respecto al periodo sostenido y en algunos casos, la más prolongada vida media farmacocinética del profármaco. Ambas propiedades pueden permitir de forma individual que se mantengan niveles del fármaco terapéutico durante un periodo prolongado dando por resultado una mejora en la vida media farmacodinámica. La vida media farmacodinámica se puede extender al impedir el metabolismo o rutas de eliminación seguidas por el fármaco de origen. Para algunos fármacos, los profármacos de la presente invención son capaces de impedir las rutas de eliminación o metabolismo seguidas por el fármaco de origen y existir de este modo durante periodos prolongados en el animal. Por ejemplo, la citarabina es un sustrato para la enzima metabólica citidina-desaminasa , que convierte citidina a uridina, y como tal, la citarabina se convierte a arabinofuranosil -uracilo . Sin embargo, los profármacos de araC P no son sustancias para esta enzima y en consecuencia conducen a una más prolongada vida media farmacodinámica de citarabina en comparación a la administración directa de la citarabina. Una ruta común de eliminación de los fármacos de fosfato es vía los ríñones y un transportador que reconoce compuestos aniónicos. La eliminación completa de los profármacos que contienen fosfato, de la circulación, ocurre frecuentemente solo minutos después de la administración del fármaco. Los profármacos de esta invención desaceleran la eliminación del fármaco al remover la carga negativa hasta después de la oxidación e hidrólisis en el hígado y tejidos similares . Formulaciones Los compuestos de la invención se administran en una dosis diaria total de aproximadamente 0.1 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg, de manera preferente de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 30 mg/kg. El intervalo más preferido de dosis es de aproximadamente 10 mg/kg/día. La dosis se puede administrar en tantas dosis divididas como sea conveniente. Los compuestos de esta invención cuando se usan en combinación con otros agentes antivirales o agentes oncológicos se pueden administrar como una dosis diaria o una fracción apropiada de la dosis diaria (por ejemplo, toma) . La administración del profármaco puede presentarse en o cerca del momento en el cual se administre el otro agente antiviral u oncolítico o en un momento diferente. Los compuestos de esta invención se pueden usar en un régimen de múltiples fármacos, también conocido como terapia de combinación o de "cóctel", en donde se pueden administrar múltiples agentes de forma conjunta, se pueden administrar de manera separada al mismo tiempo o a diferentes intervalos, o se pueden administrar en forma secuencial . Los compuestos de esta invención se pueden administrar después de un curso de tratamiento por otro agente, durante un curso de terapia con otro agente, administrados como parte de un régimen terapéutico, o se pueden administrar antes de la terapia por otro agente en un programa de tratamiento. Los profármacos de la invención se pueden combinar con varios agentes para mejorar adicionalmente la eficacia y/o para disminuir la toxicidad asociada a citarabina. Se pueden contemplar varias combinaciones que incrementarán la efectividad de la terapia. La combinación con fármacos que se conoce que son efectivos contra cáncer puede ayudar a tratar las metástasis que han escapado al hígado y no son sensibles a la terapia con el profármaco. Estos agentes incluyen fármacos seleccionados del grupo de agentes de quimioterapia bien conocidos, incluyendo inhibidores de la síntesis de ADN (inhibidores de ADN-polimerasa , inhibidores de novo de la ruta de pirimidina (por ejemplo, inhibidores de timidilato-sintasa, inhibidores de dihidroorotato-deshidrogenasa , inhibidores de aspartato-carbamoil -transíerasa) , antimetabolitos de folato (por ejemplo, inhibidores de dihidrofol iato- reductazo , inhibidores de fol ipol iglutamato-sintetasa) , inhibidores de la biosíntesis de purina (inhibidores de inosina- 5 ' -monofosfato-deshidrogenasa , inhibidores de glicinamida-ribonucleótido-formiltransferasa, inhibidores de ribonucleótido-difosfato-reductasa, inhibidores de la biosíntesis de poliamina (por ejemplo inhibidores de S-adenosil -L-metionina-descarboxilasa , ornitina-descarboxilasa, espermidina/espermina-N-acetiltransferasa) , antibióticos antitumor, alcaloides vegetales, inhibidores de farnesil - transíerasa, inhibidores de topoisomerasa , fármacos basados en platino, fármacos antioangiogénesis , inhibidores de tubulina-polimerasa, etc. Se contemplan varias clases de fármacos bien conocidos como adecuados para la combinación con los profármacos de la invención, incluyendo Epipodofilotoxinas , Camptotecinas , Antraciclinas , Antrapirazoles , Análogos de Combretastatina , Antibióticos de Enediiina, Taxanos . En un aspecto de la invención, se prefieren las epipodofilotoxinas incluyendo Etopósido, Tenipósido, NK-611, GL-331, y azatoxina. En un aspecto, las epipodofilotoxinas son Etopósido y Tenipósido. En un aspecto, se prefieren las Camptotecinas incluyendo Camptotecina , Topotecano, Irinotecano (CPT-11) , Lurtotecano (GI 147211) , 9-aminocamptotecina, GG-211, DX-8951F, SKF 107874, y SKF 108025. En otro aspecto, las Camptotecinas incluyen Camptotecina, Topotecano, Irinotecano, Lurtotecano y 9-aminocamptotecina . En otro aspecto, las Camptotecinas incluyen Topotecano e Irinotecano. En un aspecto, los Taxanos incluyen paclitaxel, docetaxel, y FCE-28161. En otro aspecto, los taxanos incluyen paclitaxel. En un aspecto, las combretastatinas incluyen combretastaina A-4 y el análogo de dioxolano reportado (S,S) (Bioorg. Med. Chem. Lett. 88: 1997-2000 (1998) . En un aspecto, los antrapirazoles incluyen mitoxantrona , poroxantrona y Losoxantrona . En un aspecto, las Antraciclinas incluyen Doxorrubicina , Daunorrubicina , Idarrubicina , Pirarrubicina , plicamicina, valrrubicina , dactinomicina y Epirrubicina . En otro aspecto, las Antraciclinas son Doxorrubicina, Pirarrubicina, Epirrubicina, e Indarrubicina . En otro aspecto, las Antraciclinas incluyen Pirarrubicina y Doxorrubicina. En otro aspecto, los antibióticos de Enediina incluyen neocarzinostat ina , 4 cal iqueamicina y esperamicina . En otro aspecto, los antibióticos de Enediina incluyen Neocarzinostatina y Cal iqueamicina, Dinemicina. En un aspecto, los fármacos que dañan el ADN tal como agentes de alquilación (mostazas de nitrógeno, aziridinas) , nitrosoureas y complejos metálicos se usan. En un aspecto, se prefiere la mitomicina. En un aspecto, los complejos de platino incluyen cisplatina, nedaplatina, miriplatina y carboplatina . En un aspecto, los agentes de alquilación incluyen ciclofosfamida, ifosfamida. En un aspecto, la nitrosourea incluye carmustina (BCNU) , temozolomida . En un aspecto preferido de la invención, los inhibidores dependientes del ciclo celular se prefieren incluyendo 5-FU, doxifluridina, gemcitabina, cladribina, fludarabina. En un aspecto, los antimetabolitos de folato incluyen metotrexato. En otro aspecto, los fármacos oncolíticos útiles en combinación con los profármacos de esta invención incluyen busulfano, tiotepa, melfalano, luroteca . En un aspecto, los agentes que actúan sinergísticos con citarabina, se usan. Estos agentes incluyen agentes de alquilación tal como ciclofosfamida , ifosfamida, carmustina (BCNU) , cisplatina, mercaptopurina , tioguanina, metotrexato, ß-tioguanina y 3 -desazauridina . En otro aspecto, los profármacos de la invención se combinan con fármacos que se conocen que estimulan el progreso del ciclo celular a la fase S y los hacen de este modo más susceptibles a los fármacos de la invención. En otro aspecto, los profármacos de la invención se combinan con fármacos que se conocen que estimula la apoptósis. Estos fármacos incluyen inhibidores de caspasa-3. La terapia combinada conlleva la administración al hospedero de agentes ya sea de forma separada o de manera simultánea. En un aspecto, el profármaco se administra de manera simultánea con el fármaco oncolítico. Los fármacos se pueden administrar en el mismo vehículo o de manera separada.

Ambos fármacos se pueden administrar de manera parenteral (incluyendo de forma subcutánea, intramuscular, intravenosa e intradérmica) , o por otras rutas, incluyendo oral, rectal, nasal, tópica, vaginal y transdérmica . En un aspecto, ambos agentes se administran de manera simultánea en ya sea la misma cápsula o en pildoras separadas. En otro aspecto, ambos agentes se administran durante el tiempo de alimentación (justo antes de la alimentación o justo después de la alimentación) . En otro aspecto, la combinación de fármacos se administra en momentos separados. En un aspecto, la administración de fármaco esta separada en el tiempo pero durante el periodo de la terapia del ciclo. En otro aspecto, se administra un fármaco durante el día de descanso del fármaco para el fármaco compañero. Los agentes oncolíticos o agentes antivirales y los compuestos de esta invención se pueden administrar de manera separada o se pueden administrar de forma simultánea. Los agentes oncolíticos adecuados incluyen busulfano, carboplatina, cisplatina, miriplatina, temozolomida , tiotepa, melfalan, ifosfamida, ciclofosfamida , clorambucilo, doxorrubicina , daunorrubicina , epirrubicina , indarrubicina , plicamicina, valrrubicina , dactinomicina , gemcitabina, floxuridina, fluorouracilo, mercaptopurina, tioguanina, metotrexato, mitomicina, etopósido, paclitaxel, docetaxel irinotecan, topotecan, etopósido, tenipósido, nedaplatina, carmustina, doxifluridina, cladribina, fludarabina, azatoxina, camptotecina , lurtotecan, 9-aminocamptotecina, pirarrubina, neocarzinoestatina , caliqueamicina, esperamicina u luroteca. Para los propósitos de esta invención, los compuestos se pueden administrar por una variedad de medios incluyendo de forma oral, parenteral, por aspersión, por inhalación, de forma tópica, o de manera rectal en formulaciones que contienen portadores, adyuvantes o vehículos farmacéuticamente aceptables. El término parenteral como se usa en la presente incluye inyecciones subcutánea, intravenosa, intramuscular e intraarterial con una variedad de técnicas de infusión. La inyección intraarterial e intravenosa como se usa en la presente incluye administración a través de catéteres. En general se prefiere la administración intravenosa. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen acetato, adipato, besilato, bromuro, camsilato, cloruro, citrato, edisilato, estolato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucoranato, hipurato, hiclato, bromhidrato, clorhidrato, yoduro, isetionato, lactato, lactobionato , maleato, mesilato, . metilbromuro, metilsulfato, nafsilato, nitrato, oleato, palmoato, fosfato, poligalacturonato , estearato, succinato, sulfato, sulfosaliicilato, tannato, tartrato, terftalato, tosilato y trietiyoduro . Las composiciones farmacéuticas que contienen el agente activo pueden estar en cualquier forma adecuada para el método propuesto de administración. Cuando se usan para el uso oral, por ejemplo, tabletas, trociscos, pastillas suspensiones acuosa u aceitosa, polvos o gránulos dispersables , emulsiones, cápsulas duras o blandas, jarabes o elixires se pueden preparar. La composiciones propuestas para el uso oral se pueden preparar de acuerdo a cualquier método conocido en la técnica para la elaboración de composiciones farmacéuticas y estas composiciones pueden contener uno o más agentes incluyendo agentes edulcorantes, agentes sabori zantes , agentes colorantes y agentes conservadores, a fin de proporcionar una preparación sabrosa. Las tabletas que contienen el ingrediente activo y mezcla con el excipiente farmacéuticamente aceptable no tóxico que son adecuadas para la elaboración de tabletas, son aceptables. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes, tal como carbonato de calcio o sodio, lactosa, fosfato de calcio o sodio; agentes de -granulación y desintegración, tal como almidón de maíz o ácido algínico; agentes de unión, tal como almidón, gelatina o acacia; y agentes lubricantes, tal como estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Las tabletas pueden estar sin revestir o se pueden revestir por técnicas conocidas que incluyen microencapsulación para retardar la desintegración y adsorción en el tracto gastrointestinal y proporcionar de este modo una acción sostenida durante un periodo más prolongado. Por ejemplo, se puede emplear un material de retrazo de tiempo tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo solo o con una cera. Las formulaciones para el uso oral también pueden presentarse como cápsulas de gelatina dura donde el ingrediente activo se mezcle con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blanda en donde el ingrediente activo se mezcla con agua o un medio de aceite, tal como aceite de cacahuate, parafina líquida o aceite de oliva. Las suspensiones acuosas de la invención contienen los materiales activos en mezcla con excipientes adecuados para la elaboración de suspensiones acuosas. Estos excipientes incluyen un agente de suspensión, tal como carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato sódico, polivinilpirrolidona , goma de tragacanto y goma de acacia y agentes dispersantes o humectantes tal como fosfátido que se presenta de forma natural (por ejemplo lecitina) , un producto de condensación de un óxido de alquileno con un ácido graso (por ejemplo, estearato de polioxietileno) , un producto de condensación de óxido de etileno con un alcohol alifático de cadena larga (por ejemplo, heptadecaetilenooxicetanol), un producto de condensación de óxido de etileno con un éster parcial derivado de un ácido graso y un anhídrido de hexitol (por ejemplo, monooleato de polioxietilen-sorbitan) . La suspensión acuosa también puede contener uno o más conservadores tal como etil- ó n-propil -p-hidroxi -benzoato , uno o más agentes colorantes, o uno o más agentes saborizantes y uno o más agentes edulcorantes, tal como sacarosa o sacarina. Las suspensiones en aceite se pueden formular al suspender el ingrediente activo en un aceite vegetal, tal como aceite de cacahuate, aceite de oliva, aceite de ajonjolí, o aceite de coco, o un aceite mineral tal como parafina líquida. Las suspensiones orales pueden contener un agente espesante, tal como cera de abeja, parafina dura o alcohol cetílico. Los agentes edulcorantes, tal como aquellos expuestos anteriormente y los agentes saborizantes se pueden adicionar para proporcionar una preparación oral sabrosa. Estas composiciones se pueden conservar por la adición de un antioxidante tal como ácido ascórbico. Los polvos y gránulos dispersables de la invención adecuados para la preparación de una solución acuosa por la adición de agua proporcionan el ingrediente activo en mezcla con un agente dispersante o humectante, un agente de suspensión y uno o más conservadores. Los agentes de dispersión o humectantes adecuados y los agentes de suspensión se ejemplifican por aquellos descritos anteriormente. También pueden estar presentes excipientes adicionales tal como por ejemplo agentes edulcorantes, saborizantes y colorantes. Las composiciones farmacéuticas de la invención también pueden estar en la forma de emulsiones de aceite en agua. La fase aceitosa puede ser un aceite vegetal, tal como aceite de oliva o aceite de cacahuate, un aceite mineral, tal como parafina líquida, o una mezcla de estos. Los agentes emulsionantes adecuados incluyen gomas que se presentan de forma natural, tal como goma de acacia y goma de tragacanto, fosfátidos que se presentan de forma natural, tal como lecitina de soya, ésteres y ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, tal como monooleato de sorbitan y productos de condensación de estos ésteres parciales con óxido de etileno, tal como monooleato de polioxietilen-sorbitan. La emulsión también puede contener agentes edulcorantes y saborizantes . Se pueden formular jarabes y elixires con agentes edulcorantes, tal como glicerol, sorbitol o sacarosa. Estas formulaciones también pueden contener un emoliente un conservador, un agente saborizante o colorante. Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden estar en la forma de una preparación inyectable, estéril, tal como una suspensión oleaginosa o acuosa, inyectable, estéril. Esta suspensión se puede formular de acuerdo a la técnica conocida usando aquellos agentes dispersantes o humectantes adecuados y agentes de suspensión que se han mencionado anteriormente. La preparación inyectable estéril también puede ser una solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o solvente parenteralmente aceptable, no tóxico, tal como una solución de 1 , 3 -butano-diol o preparado como un polvo liofilizado. Entre los vehículos aceptables y solventes que se pueden emplear están agua, solución de Ringer y solución isotónica de cloruro de sodio. Además, los aceites fijados estériles se pueden emplear de manera convencional como un solvente o medio de suspensión. Para este propósito se puede emplear cualquier aceite insípido fijado incluyendo mono- o di-glicéridos sintéticos. Además, se pueden usar igualmente ácidos grasos tal como ácido oleico en la preparación de inyectables . La cantidad de ingrediente activo que se puede combinar con el material portador para producir una forma de dosis individual varía dependiendo del hospedero tratado y el modo particular de administración. Por ejemplo, una formulación de liberación en el tiempo propuesta para la administración oral a humanos puede contener de 20 a 2000 µp??? (aproximadamente de 10 a 1000 mg) del material activo combinado con una cantidad apropiada y conveniente del material portador que puede variar de aproximadamente 5 a aproximadamente 95 % de las composiciones totales. Se prefiere que la composición farmacéutica que se va a preparar proporcione cantidades fácilmente medibles para la administración. Por ejemplo, una solución acuosa propuesta para la infusión intravenosa debe contener de aproximadamente 0.05 a aproximadamente 50 µp??? (aproximadamente 0.025 a 25 mg) del ingrediente activo por mililitro de solución a fin de que pueda presentarse la infusión de un volumen adecuado a una proporción de aproximadamente 30 mL/hr. Como se señala anteriormente, las formulaciones de la presente invención adecuadas para la administración oral se pueden presentar como unidades discretas tal como cápsulas, cápsulas amiláceas o tabletas cada una que contiene una cantidad predeterminada del ingrediente activo, como un polvo o gránulos; como una solución o una suspensión en un líquido acuoso o no acuoso; o como una emulsión de aceite en agua, líquida, o una emulsión líquida de agua en aceite. El ingrediente activo también se puede administrar como un bolo, electuario o pasta. Se puede elaborar una tableta por compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes auxiliares. Se pueden preparar tabletas comprimidas al comprimir en una máquina adecuada al ingrediente activo en forma fluida tal como un polvo o granulos, opcionalmente mezclada con un aglutinante (por ejemplo, povidona, gelatina, hidroxipropilmetilcelulosa) , lubricante, diluyente inerte, conservador, desintegrante (por ejemplo, almidó -glicolato de sodio, povidona reticulada, carboximetilcelulosa sódica reticulada) agente activo en la superficie o dispersante. Se pueden elaborar tabletas moldeadas al moldear en una máquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo humectado con un diluyente líquido inerte. Las tabletas se pueden revestir opcionalmente o se pueden formular para proporcionar liberación lenta o controlada del ingrediente activo en el mismo, usando, por ejemplo, hidroxipropil -metilcelulosa en proporciones variables para proporcionar el perfil deseado de liberación. Las tabletas se pueden proporcionar opcionalmente con un revestimiento entérico, para proporcionar liberación en partes del intestino diferentes del estómago. Esto es particularmente ventajoso para los compuestos de la fórmula I cuando estos compuestos son susceptibles a hidrólisis ácida.

Las formulaciones adecuadas para la administración tópica en la boca incluyen pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base saborizada, usualmente sacarosa y goma de acacia y tragacanto; pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base inerte tal como gelatina y glicerina, o sacarosa y acacia; y lavados bucales que comprenden el ingrediente activo en un portador líquido adecuado. Las formulaciones para administración rectal se pueden presentar como un supositorio con una base adecuada que comprende, por ejemplo, manteca de cacao o un silicato. Las formulaciones adecuadas para la administración vaginal se pueden presentar como pesarios, tampones, cremas, geles, pastas, espumas o formulaciones de aspersión que contienen además del ingrediente activo portadores tal como se conocen en la técnica por ser apropiados. Las formulaciones adecuadas para la administración parenteral incluyen soluciones de inyección, estériles, isotónicas, acuosas y no acuosas que pueden contener antioxidantes, amortiguadores, bacteriostatos y solutos que vuelven a la formulación isotónica con la sangre del receptor propuesto; y soluciones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Las formulaciones se pueden presentar en recipientes sellados de una dosis o múltiples dosis, por ejemplo, ampolletas y frascos, y se pueden almacenar en una condición secada por congelación ( liofilizada) que requiere solo la adición del portador líquido estéril, por ejemplo, agua para inyección, inmediatamente antes del uso. Las suspensiones y soluciones de inyección se pueden preparar a partir de polvos, granulos y tabletas estériles de la clase descrita de forma previa. Las formulaciones adecuadas para la administración parenteral se pueden administrar de una manera de infusión continua de una bomba residente o una bolsa de hospital. La infusión continua incluye la infusión por una bomba externa. Las infusiones se pueden hacer a través de un medio Hickman o PICC o cualquier otro medio adecuado de administración de una formulación ya sea de manera parenteral o i.v. Las formulaciones preferidas de dosis unitaria son aquellas que contienen una dosis diaria o unidad, sub-dosis diaria, o una fracción apropiada de la misma, de un fármaco. Sin embargo, se entenderá que el nivel específico de dosis para cualquier paciente en particular dependerá de una variedad de factores que incluyen la actividad del compuesto específico empleado; la edad, peso corporal, salud general, sexo y dieta del ser individual tratado; el tiempo y ruta de administración, la velocidad de excreción; otros fármacos que se han administrado de forma previa y la severidad de la enfermedad particular que se somete a terapia, como es bien entendido por aquellos expertos en la técnica.

Compuestos Preparados por la Invención Los compuestos intermedios preparados por la invención son profármacos de diéster de fosfato cíclico de 6 miembros de araCMP como se representa por la Fórmula I Fórmula I en donde : M y V son cis entre sí y MH es citarabina; el 5' -oxígeno de la citarabina está unido al fósforo ; V es 4-piridilo,-y profármacos o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos . Otro aspecto de la invención es la preparación de los compuestos de la fórmula: Fórmula II en donde : MH es citarabina unida al fosforo en la Fórmula II y al átomo de oxígeno en la posición de 5' -hidroxilo; V es 4-piridilo; y prof rmacos y sales farmacéuticamente aceptable de los mismos. Otro aspecto de la invención es la preparación del compuesto como se representa por la Fórmula III y profármacos y sales farmacéuticamente aceptables del mismo.

Fórmula III 1.0 Síntesis de Reactivo de Fosforilación: Una variedad de métodos de síntesis se conocen para preparar 1,3 -dioles. Estos métodos adecuados se dividen en dos tipos como sigue: 1) síntesis de 1 - (aril ) -propano- 1 , 3 -diol racémico; 2) síntesis de 1- (aril ) -propano- 1 , 3 -diol enantio-enriquecido . 1.1 Síntesis de 1 - (Aril ) -Propano- 1 , 3 -Diol Racémico: Los compuestos de 1 , 3 -dihidroxi se ' pueden sintetizar por varios métodos bien conocidos de la literatura. Se utilizan aldehidos aromáticos sustituidos para sintetizar 1 - (aril ) -propano- 1 , 3 -diol racémico vía adición de enolato de litio de acetato de alquilo seguido por reducción de éster (ruta A) (Turner, J. Org. Che . 55:4744 (1990)) . De manera alternativa, las adiciones de arilo de Grignard al l-hidroxi-propan-3-al también- dan 1- (arilsustituido) propano-1 , 3 -dioles (ruta B) . Este método permitirá la conversión de varios haluros de arilo sustituidos a 1 - (arilsustituido) - 1 , 3 -propano-dioles (Coppi, et al., J. Org. Chem. 53:911 (1988)). También se pueden usar haluros de arilo para sintetizar propano-dioles 1-sustituidos por el acoplamiento de Heck de 1, 3-idos-4-eno seguido por reducción e hidrólisis (Sakamoto, et al., Tetrahedron Lett. 33:6845 (1992)) . Se pueden oxidar los derivados de piridil, quinolina, isoquinolina-propan- 3 -ol a 1 -sustituidos- 1 , 3 -dioles por formación de N-óxido seguido por rearreglo en condiciones de anhídrido acético (ruta C) (Yamamoto, et al., Tetrahedron 37:1871 (1981)). También se puede convertir una variedad de aldehidos aromáticos a 1-sustituidos-l , 3-dioles por adición de vinilo de Grignard seguido por reacción de hidroboración (ruta D) .

V = Arilo, R = Alquilo, R' = bencilo, = Mg o Li , X = Haluro o nulo. 1.2 Síntesis de 1 - (aril ) -Propano- 1 , 3 -Diol Enantio-Enriquecido : Una variedad de métodos conocidos para la separación de alcoholes secundarios vía agentes químicos o enzimáticos se pueden utilizar para la preparación de enantiómeros de diol (Harada, et al., Tetrahedron Lett. 28:4843 (1987)). La hidrogenación catalizada con metal de transición de ácidos 3 -aril -3 -oxo-propiónicos sustituidos, o ésteres, es un método eficiente para preparar isómeros R o S de ácidos beta-hidroxi o ésteres en alta pureza enantiomérica (Comprehensive Asymmetric Catalysis, Jacobsen, E. N., Pfaltz, A., Yamamoto, H (Eds), Springer, (1999); Asymmetríc Catalysis in organic Synthesis, Noyori , R., John Wiley, (1994)). Estos productos de éster o ácido beta-hidroxi se puede reducir adicionalmente para dar los 1- (aril ) -propano- 1 , 3 -dioles requeridos en alto ee (ruta A) . Los substratos de éster o ácido ß-ceto para hidrogenación de alta presión o reacciones de transferencia de hidrogeno se pueden preparar por una variedad de métodos tal como condensación de acetofenona con dimetilcarbonato en la presencia de una base (Chu, et al., J. Het Chem. 22:1033 (1985)), por condensación de éster (Turner, et al., J. Org. Chem. 54:4229 (1989)) o de haluros de arilo (Kobayashi, et al., Tetrahedron Lett. 27:4745 (1986)). De manera alternativa, se pueden obtener 1,3 -dioles de alta pureza enantiomérica por reducción con borano, enantioselectiva, de derivados de ß-hidroxietil-aril-cetona o derivados de ácido ß-ceto (ruta B) (Ramachandran, et al., Tetrahedron Lett. 38:761 (1997)). En otro método, los alcoholes de cinnamilo comercialmente disponibles se pueden convertir a alcoholes de epoxi bajo condiciones de epoxidación asimétrica catalítica. Estos alcoholes de epoxi se reducen por Red-Al para dar por resultado 1,3 -dioles con alto ee (ruta C) (Gao et al., J. Org. Chem. 53:4081 (1980)) . La condensación enantioselectiva con aldol es otro método bien descrito para la síntesis de la funcionalidad 1,3-oxigenada con alto ee iniciando de aldehidos aromáticos (ruta D) (Mukaiyama, Org. React. 28:203 (1982)). VCOCH.CO- COCH-R' v = Arilo, R = Alquilo o H, R' = CH20H, C02R. Para el propósito de esta invención, el cetoéster intermedio se prepara a partir de -acetilpiridina de la Fórmula A. El C identifica el carbono que es el centro estereogénico de carbono de metina en el compuesto final preparado por esta invención.

Fórmula A compuesto de la Fórmula A se hace reaccionar con dimetilcarbonato para obtener el éster metílico del ácido oxo-propanoico . El centro esterogénico se instala usando el método de transferencia de hidrógeno de Noyori (Fujii et al., J. Am. Chem. Soc. 118(10) : 2521-2 (1996)). El éster de ácido oxi -propanoico se reduce en la presencia de un catalizador de rutenio enantio-enriquecido (10) al compuesto intermedio de hidroxi -éster que se reduce adicionalmente con borohidruro de sodio al 1 , 3 -propano-diol enantio-enriquecido, mostrado en la siguiente Fórmula B: Fórmula B El centro estereogénico en el carbono, C se ha establecido en este paso de proceso y el exceso enantiomérico se mantuvo a todo lo largo del resto del proceso. 1.3 Síntesis de Reactivos de Fosforilación Otro aspecto de la invención es la preparación de agentes de fosforilación de la Fórmula C: en donde : L es un grupo saliente seleccionado de los grupos que consisten de halógenos, grupos ariloxi sustituidos por 1 a 3 grupos de retiro de electrones. Los Grupos L y 4-piridilo son trans entre sí. Los compuestos de la Fórmula C son ya sea racémicos, tienen la configuración S en el carbono C , o tienen la configuración R en el carbono C . La síntesis general del reactivo de fosforilación de la Fórmula C se logra al hacer reaccionar 1 - (4 -piridil ) -1 , 3 -propano-diol con fosforodicloridato de la fórmula C12P(0)-L. En un aspecto, los grupos salientes L se seleccionan de halógeno, y los grupos ariloxi sustituidos por 1 a 3 grupos de retiro de electrones. En otro aspecto, los grupos salientes son halógenos tal como cloro o bromo, y grupos ariloxi sustituidos tal como clorofenoxi, diclorofenoxi o nítrofenoxi . En otro aspecto, los grupos salientes son cloro, 4 -clorofenoxi , 3 , 5-diclorofenoxi , 2,4-diclorofenoxi y 4-nitrofenoxi . El fosforodicloridato en donde L es ariloxi se sintetiza al hacer reaccionar fenoles sustituidos con fósforo-oxi -cloruro ( athore et al., Indian J. Chem. B. 32(10), 1066 (1993)). El agente de fosforilación activado, enantio-enriquecido se sintetiza por fosforilación de un l-(4-piridil) -1 , 3 -propano-diol enantio-enriquecido con fosforodicloridatos de la fórmula L-P(0)C12 en la presencia de una base (Ferroni et al., J. Org. Chem. 64(13), 4943 (1999) . En un aspecto, los órdenes de adición incluyen la adición de una solución del diol y la base a una solución del fosforodicloridato en el solvente elegido. En otro aspecto, una solución del diol y la base, y otra solución que contiene el fosforodicloridato en el mismo solvente o un solvente diferente, se adicionan simultáneamente a un solvente elegido. En otro aspecto, se adiciona una solución del diol a una solución del reactivo de fósforo seguido por la adición de la base. Los solventes típicos para la fosforilación del diol son solventes apróticos polares que tienen ba a reactividad con fosforodicloridatos y solubilizan el diol o el fosforodicloridato . En un aspecto, los solventes para correr la reacción de fosforilación son dieloróme ano , THF, acetonitrilo, piridina, tetraalquilureas , trialquilfosfatos o hexaalqui 1 fosforamidas . En otro aspecto, los solventes son diclorometano, THF, acetonitrilo, piridina, DMPU, DMEU, tetrametilurea , trimetilfosfato, o hexametilfosforamida. La temperatura de reacción se mantiene baja, especialmente durante la fase inicial de la reacción, que es exotérmica, para conservar la integridad de los reactivos. En un aspecto, las temperaturas se mantienen por debajo de la temperatura ambiente dentro de -20°C a 10°C. En un aspecto, la exoterma está bajo control, la temperatura de reacción se pone lentamente a temperatura ambiente para terminar la formación del reactivo del fosfato. En otro aspecto, la temperatura se mantiene igual hasta el término de la reacción para conservar la integridad del reactivo. Debido a la naturaleza estereogénica del átomo de fósforo, la reacción del fosforodicloridato con el diol bajo las condiciones de reacción descrita anteriormente da una mezcla de isómeros cis y trans, favoreciendo ligeramente el isómero cis. Las relaciones cis/trans típicas varían de 50/50 a 60/40. Los isómeros cis y trans se separan por una combinación de cromatografía en columna y/o cristalización. En un aspecto de esta invención, se encontró que cuando el cis- isómero aislado del reactivo de fosforilación de 4 -nitrofenoxi se calentó con una sal de 4 -nitrofenol , >85% del reactivo de fosforilación aislado fue el isómero trans. En otro aspecto de esta invención, se encontró que cuando la mezcla aislada de isómero cis y trans del reactivo de fosforilación de 4-nitrofenoxi se calentó con una sal de 4 -nitrofenol , en el mismo solvente usado para el paso de fosforilación u otro solvente, >85% del agente de fosforilación aislado fue el isómero trans. Adicionalmente , se encontró que no fue necesario el aislamiento anterior de la mezcla para lograr el enriquecimiento. Como tal, la adición de la sal en el grupo saliente de fenol a la mezcla de reacción cruda en la cual se generó el reactivo de fosforilación de ariloxi del diol logró el enriquecimiento en el isómero trans de la Fórmula C, en la misma relación obtenida cuando se realiza el enriquecimiento de la mezcla aislada de los reactivos de fosforilación. De manera similar, cuando se calentó una mezcla equimolar de fosforocloridato cis y trans del compuesto de la Fórmula C (L = Cl) , solo se puede aislar el isómero trans. La sal de fenóxido se genera para hacer reaccionar el fenol correspondiente con una base, de manera preferente trialquilaminas , heterociclos que contienen nitrógeno, o sodio. En un aspecto, las bases son trietilamina, diisopropiletilamina , piridina, DABCO, DBU, hidruro de sodio o un metal alcalino. En otro aspecto, las bases son trietilamina, DBU o la sal sódica del fenóxido. El paso de enriquecimiento se puede correr a temperatura ambiente pero se calienta en general para disminuir los tiempos de reacción, de manera preferente en el intervalo de 40°C a 70°C. En tanto que la conversión del reactivo de fosforilación de ariloxi requiere la adición de la sal del fenóxido correspondiente, la conversión de fosforocloridatos del diol quiral no necesita el uso adicional de sales solubles de cloruro puesto que la formación de fosforocloridato mismo con las bases preferidas genera dos equivalentes del ion cloruro. Un aspecto, al término de la fosforilación del diol, la mezcla de reacción entonces se calienta, de manera preferente en el intervalo de 40°C a 70°C, para convertir completamente el isómero cis en el isómero trans . En otro aspecto, la temperatura se mantiene igual como la usada para la adición de los reactivos. Para la preparación del agente de fosforilación enantio-enriquecido a partir de dioles enantio-enriquecidos , es crítica la conservación de la quiralidad en el carbono C . Se observó racemización parcial con 1- (4 -piridil ) - 1 , 3 -propanodiol donde el ee inicial de 98% para el diol se redujo a <85% en el reactivo de trans- fosforilación usando las condiciones descritas. En un aspecto de esta invención, se descubrió que el uso de solventes de heteroarilo que contienen N medió la pureza óptica del agente de transfosforilación por arriba de 95% de ee . En un aspecto, los solventes de heteroarilo que contienen N son piridinas, quinolinas y pirazinas opcionalmente sustituidas. En otro aspecto, los. solventes de heteroarilo que contienen N son piridinas opcionalmente sustituidas. En otro aspecto, el solvente de heteroarilo que contiene N es piridina. En otro aspecto de la invención, se descubrió que la formación de la sal del 1- (4 -piridil ) - 1 , 3 -propano-diol enantio-enriquecido antes de la adición del fosforodicloridato o fósforo-oxi-cloruro y la adición subsiguiente de la base ayudó a prevenir la epimerización del carbono C sin requerir el uso de un solvente de heteroarilo que contiene N. En un aspecto, las sales de 1- (4 -piridil) - 1 , 3 -propano-diol son sales hechas al hacer reaccionar 1 - (4 -piridil )- 1 , 3 -propano-diol con un ácido orgánico o mineral con un pka <2. En otro aspecto, las sales son ácidos minerales con pka <1. En otro aspecto, las sales son las sales de clorhidrato y bromhidrato. Los isómeros cis y trans se separan por una combinación de cromatografía en columna y/o cristalización. Sin embargo, se encontró que después de correr el paso de enriquecimiento, el aislamiento del isómero cis se simplificó en su mayor parte produciendo los reactivos de fosforilación de gran pureza, isómero trans >95% y ee >95%. En un aspecto, el reactivo de transfosforilación se aisla. En otro aspecto, el reactivo de fosforilación se mantiene en solución y se usa para la fosforilación de nucleósidos sin purificación. La configuración relativa del átomo de fósforo se determina por comparación de los espectros de RMN 31P. El desplazamiento químico de la porción ecuatorial de fosforiloxi (isómero trans) es más campo arriba que una del isómero axial (isómero cis) (Verkade, et al., J. Org. Chem. 42, 1549 (1977)). 5 2.0 Síntesis de Ci s-profármacos de araCMP Para la síntesis de cis-profármaco de la Fórmula I, la porción de profármaco se puede introducir en diferentes etapas de la síntesis. Más frecuentemente, los fosfatos cíclicos se introducen en una etapa posterior, debido a la sensibilidad general de estos grupos a varias condiciones de reacción. La síntesis también puede proseguir usando citarabina protegida o desprotegida. Los estereoisómeros individuales de los cis-profármacos se pueden ya sea hacer por separación de los diastereoisómeros por una combinación de cromatografía en columna y/o cristalización, o por síntesis enantioespecífica usando agentes de fosforilación enantio-enriquecidos . 2.1 Protección de Citarabina Varias preparaciones de araC (Merck Index Ilth Edition, No. 2790) y sus análogos se describen en la literatura (por ejemplo, Patente de los Estados Unidos No. 3,116,282 ; Shen et al., J. Org. Chem. 30: 835-838 (1965); Hessler, J. Org. Chem. 41 (10) : 1828-1831 (1976)) y se conocen por aquellos expertos en la técnica. La citarabina también está disponible de fuentes comerciales que incluyen de manera enunciativa y sin limitación Shanghai Freeman International Trading Co., Brantford, Sigma, Fluka y Sunray Pharmaceuticals .

El procedimiento general para la fosforilación de citarabina protegida se logra al hacer reaccionar un compuesto intermedio de citarabina, adecuadamente protegido, con una base y al hacer reaccionar el alcóxido generado con el reactivo de fosforilación. La citarabina protegida se pueden preparar por aquellos expertos en la técnica usando uno de los muchos procedimientos descritos para la protección de nucleósidos (Greene T. ., Protective Groups en Organic Chemistry, John Wiley & Sons, New York (1999)). El nucleósido está protegido de una manera tal para exponer el grupo 5'-hidroxilo en el cual se adiciona el grupo fosfato en tanto que se protegen todos los hidroxilo restantes y otros grupos funcionales en el nucleósido que pueden interferir en el paso de fosforilación o conducen a regioisómeros . En un aspecto, los grupos protectores seleccionados son resistentes a bases fuertes, por ejemplo, éteres y silil-éteres . En otro aspecto, los grupos protectores son éteres OM opcionalmente sustituidos, éteres de MEM y trialquilsilil -éteres . En otro aspecto, el grupo protector es t -butildimetilsilil -éter . La protección adicional conlleva el enmascaramiento del 4-nitrógeno de citarabina para eliminar cualquier protón ácido. En un aspecto, los grupos N-protectores seleccionados se seleccionan de los grupos de dialquil - formamidinas , mono- y di -alquil - iminas , mono- y di -aril - iminas . En un aspecto, los grupos N-protectores se seleccionan de los grupos de dialquil - formamidinas y mono-alquil - imina y mono-aril -imina . En un aspecto, la mono-alqui1 - imina es bencilimina y la mono-aril-imina es fenilimina. En otro aspecto, el grupo N-protector es una dialquil-formamidina simétrica seleccionada del grupo de dimetil - formamidina y dietil - formamidina . En un aspecto, la protección de citarabina se logra por el siguiente procedimiento de 4 pasos. La citarabina se trata con cloruro de benzoilo en DMPU para obtener el éster de benzoato. El éster se calienta con cloruro de ter-butildimetilsililo para dar una mezcla de los compuestos de disililo y monosililo. La mezcla cruda se trata con hidracina etanólica para escindir el éster. El tratamiento acuoso y la purificación como la sal de clorhidrato da la 2 ' , 3 ' -disililcitarabina deseada como una entidad individual. Esto se mezcla con dimetilformamida dimetilacetal para proteger el compuesto de citarabina- formamidina protegido como se muestra en la Fórmula D.

Fórmula D 2.2 Fosforilación de citarabina protegida La generación del alcóxido del grupo hidroxilo expuesto en la citarabina protegida adecuadamente se logra con una base en un solvente aprótico que no es sensible a la base tal como THF, dialquil- y formamidas cíclicas, éter, tolueno y mezclas de estos solventes. En un aspecto, los solventes son DMF , DMA, DEF, N-metilpirrolidina, THF, y mezclas de estos solventes. Se han usado muchas bases diferentes para la fosforilación de nucleósidos y compuestos que no son de nucleósido con agentes de fosforilación cíclicos y acíclicos. Por ejemplo, trialquilaminas tal como trietilamina (Roodsari et al., J". Org. Chem. 64(21), 7727 (1999)) o diisopropileitilamina (Meek et al., J". Am. Chem. Soc. 110(7), 2317 (1988)), aminas heterocíclicas que contienen nitrógeno tal como piridina (Hoefler et al., Tetrahedron 56 (11), 1485 (2000)), N-metilimidazol (Vankayalapat i et al., J. Chem., Soc. Perk T I; 14, 2187 (2000)), 1 , 2 , 4 - riazol (Takaku et al., Chem. Lett. (5) 699 (1986)) o imidazol (Dyatkina et al., Tetrahedron Lett. 35(13), 1961 (1994)); bases organometálicas tal como (t) ; -butóxido de potasio (Postel et al., J. Carhohyd. Chem. 19(2), 171 (2000)), butil-litio (Tomeiro et al., J. Org. Chem. 62(18), 6344 (1997)), cloruro de t -butilmagnesio (Hayakawa et al., Tetrahedron Lett. 28 (20), 2259 (1987)) o LDA (Aleksiuk et al., J. Chem. Soc. Chem. Comm. (1)11 (1993)); bases inorgánicas tal como fluoruro de cesio (Takaku et al., Nippon Kagaku Kaishi (10), 1968 (1985)), hidruro de sodio (Hanaoka et al., Heterocycles 23(11), 2927) (1985)), yoduro de sodio (Stromberg et al., J. Núcleos. Nucleot. 6(5), 815 (1987)), yodo (Stromberg et al., J. Núcleos. Nucleot. 6(5), 815 (1987)) o hidróxido de sodio (Attanasi et al., Phosphorus Sulfur 35(1-2), 63 (1988)); metal tal como cobre (Bhatia et al., Tetrahedron Lett. 28(3), 271 (1987)). Sin embargo, no se observó reacción o racemización en el centro quiral del fósforo cuando se intentó el acoplamiento del reactivo de fosforilación de la Fórmula C usando los procedimientos previamente descritos. Especialmente, no se observó reacción con las bases previamente usadas con el reactivo de fosforilación, cíclico, sustituido para dar los fosfatos cíclicos correspondientes en alto rendimiento tal como hidruro de sodio (Thuong et al., Bull. Soc. Chim. Fr. 661 (1974)), pirina (Ayral -Kaloustian et al., Carbohydr. Res. 187 (19991)), butil-litio (Hulst et al., Tetraheron Lett. 1339 (1993)), DBU (Merckling et al., Tetrahedron Lett. 2217 (1996)), trietilamina (Hadvary et al., Helv. Chim. Acta 69 (8), 1862 (1986)), N-metilimidazol (Li et al., Tetrahedron Lett. 6615 (2001)) o metóxido de sodio (Gorenstein et al., J. Am. Chem. Soc. 5077 (1980)). En un aspecto de esta invención, se encontró que el uso de los reactivos de Grignard promovió la fosforilación con epimerización mínima del centro de fósforo. En un aspecto, los reactivos de Grignard son Grignard de alquilo y arilo.

En otro aspecto, los reactivos de Grignard son haluros de t-butil -magnesio y haluros de fenil -magnesio . En otro aspecto, los reactivos de Grignard son cloruro de t-butilmagnesio y cloruro de fenilmagnesio . En otro aspecto de la invención, se usan alcóxidos de magnesio para generar el 5'-alcóxido de magnesio de citarabina. En un aspecto, los alcóxidos de magnesio se seleccionan del grupo de Mg(0-t-Bu)2 y Mg(0-iPr)2. En otro aspecto de esta invención, se pueden adicionar ácidos de Lewis a la solución del 5' -alcóxido, hecho con una de las bases previamente descritas, para ya sea intercambiar la carbocación del alcóxido y/o para modular la reactividad del alcóxido formado con el agente de fosforilación. Los ejemplos de ácido de Lewis incluyen sales alcalinas, sales de tierras raras o sales de metales de transición. En un aspecto, los ácidos de Lewis son sales de magnesio, sales de calcio, sales de cesio, sales de aluminio o sales de cerio. En otro aspecto, los ácidos de Lewis son cloruro de magnesio, bromuro de magnesio y yoduro de magnesio. En un aspecto, las condiciones de reacción para la síntesis de los compuestos de la Fórmula I abarca primero la generación del alcóxido con un reactivo de Grignard o, una de las otras bases seguido por la adición de sales de magnesio, segundo, la adición del reactivo de fosforilación de la Fórmula C a la solución del nucleósido, ya sea en solución, en general en el mismo solvente pero no necesariamente, o directamente como un sólido. En otro aspecto, la solución del alcóxido s.e adiciona a la solución del reactivo de fosforilación. En un aspecto, las temperaturas para la generación del alcóxido con una base se eligen del intervalo de -78°C a 40°C. En un aspecto, las temperaturas se eligen del intervalo de -20°C a 25°C. En otro aspecto, las temperaturas para el paso de fosforilación se eligen del intervalo de -10°C a 70°C. En otro aspecto, las temperaturas se eligen del intervalo de 10°C a 40°C. Los profármacos protegidos generados como se describen anteriormente entonces se someten a un paso de desprotección para remover todos los grupos protectores usando uno de los muchos métodos conocidos por aquellos expertos en la técnica (Greene T.W., Protective Groups in Organic Chemistry John Wiley & Sons, New York (1999)) y que son compatibles con la estabilidad del pro-fármaco de fosfato. En un aspecto, los reactivos de desprotección incluyen sales de fluoruro para remover grupos protectores de sililo, ácidos minerales u orgánicos para remover grupos protectores lábiles ácidos tal como sililo y/o cetales y grupos N-protectores , si están presentes. En otro aspecto, los reactivos de desprotección son TBAF, soluciones de ácido clorhídrico y soluciones acuosas de TFA. En otro aspecto, los reactivos de desprotección son soluciones de ácido clorhídrico. El aislamiento y purificación de los profármacos finales, así como todos los compuestos intermedios, se logra por una combinación de cromatografía en columna y/o cristalización para dar compuestos de la Fórmula I . En otro aspecto, la presente invención proporciona métodos para sintetizar isómeros individuales de los compuestos de la Fórmula I . Debido a la presencia de un centro estereogenico en C en el reactivo de fosfato cíclico, este átomo de carbono puede tener dos orientaciones distintas, específicamente R o S. Como tal, el reactivo de trans - fosfato de la Fórmula C puede existir ya sea como la configuración S-trans o R-trans y estos dos reactivos son enantiómeros . Por lo tanto, la síntesis del agente de fosforilación de un diol racémico genera una mezcla racémica de los isómeros R-trans y S-trans. Además, debido a que la citarabina es quiral, la fosforilación de este nucleósido con un reactivo de trans-fosfato racémico generará una mezcla de dos cis-profármacos diastereoméricos de la Fórmula I. Estos compuestos se pueden preparar por una combinación de cromatografía en columna y/o cristalización. De manera alternativa, la fosforilación del alcóxido de citarabina con un reactivo de trans-fosfato enantio-enriquecido genera un cis-profármaco individual. Como tal, la reacción del reactivo de C -S-trans- fosfato, hecha del diol de la Fórmula B, genera el C -S-cis-profármaco de la Fórmula III en tanto que la reacción con el reactivo de C -R-trans-fosfato genera el C -R-cis-profármaco . En otro aspecto, dependiendo de la velocidad de epimeri zación del reactivo de cis- fosfato al reactivo de trans- fosfato en comparación a la velocidad de reacción de citarabina con el reactivo de trans-fosfato, se descubrió que un reactivo de cis-fosforilación da aún el cis-profármaco de citarabina. En este aspecto, el reactivo de cis-fosforilación epimeriza al reactivo de trans - fosfato con las trazas del grupo saliente generado por la formación de pequeñas cantidades del profármaco. La citarabina entonces reacciona con el reactivo de trans- fosfato que se genera in- i situ dando el cis-profármaco . En otro aspecto, se hace reaccionar citarabina con una mezcla cruda de reactivo de fosforilación para generar el cis-profármaco . En un aspecto, la mezcla cruda del reactivo de fosforilación se ha enriquecido en el trans- isomero . En otro aspecto, el reactivo de fosforilación se usa sin el paso de enriquecimiento . 2.3 Fosforilación Se Citarabina no Protegida De manera alternativa, el profármaco de citarabina se puede sintetizar sin protección anterior usando condiciones de reacción que fosforilan selectivamente los grupos hidroxilos primarios. Las 5'-acilación selectiva de nucleósidos tal como araC con cloruros de acilo está bien establecida (Gish et al., J. Med. Chem. 14, 1159 (1971)) . Sin embargo, debido a que los agentes de fosforilación se considera que son más activos, presumiblemente darán menos regioselectividad y menores rendimientos, así como reacción con el solvente usado en la reacción (DMF) . En un aspecto de la invención, se encontró que la reacción de un agente de fosforilación de la Fórmula C con citarabina no protegida generó el profármaco de 5 ' -cis-fosfato de la Fórmula I en alto rendimiento, alta regioselectividad y estereoselectividad. En un aspecto, la fosforilación aislada se adiciona a una solución de citarabina. En otro aspecto, se adiciona citarabina a una solución del reactivo de fosforilación. De manera similar, la reacción del reactivo de S - trans- fosforilación , hecha a partir de S-diol de la Fórmula B, genera el S-cis-profármaco de la Fórmula III, en tanto que el reactivo de R-trans-fosforilación genera el R-cis-profármaco . Debido a la pobre solubilidad de nucleósidos no protegidos en solventes comunes y la reactividad potencial del solvente con el reactivo de fosforilación, son necesarios solventes con fuerte constante dieléctrica que tienen baja reactividad con el reactivo de fosforilación. Los ejemplos de estos solventes son tetraalquilureas . En un aspecto, los solventes son DMPU, tetrametil-urea, DMEU, trimetil - fosfato o hexametilfosforamida .

Ejemplos Ejemplo 1. Síntesis de metil- 3 -oxo-3 - (pirid-4 -il ) -propanoato 1 Un matraz de fondo redondo de 3 cuellos de 50 L se equipó con un agitador elevado, manto de calentamiento y entrada de nitrógeno. El matraz se cargó con THF (8 L) y t-butóxido de potasio (5 kg, 44.6 mol) , seguido por THF adicional (18 L) . Se adicionó 4 -acetilpiridina (2.5 kg, 20.6 mol) acompañada por un incremento en la temperatura, seguido por la adición de dimetilcarbonato (3.75 L, 44.5 mol) . Después de ambas adiciones, la temperatura de la mezcla fue mayor de 40°C. La mezcla de reacción se agitó sin calentamiento durante 2.5 h, periodo durante el cual la temperatura se incrementó a una temperatura promedio de aproximadamente 55 °C. Entonces, la temperatura se calentó a 57-60°C durante 3 horas. El proceso se monitorizó por cromatografía de capa delgada (TLC) . El calor se apagó y la mezcla se dejó enfriar lentamente durante la noche (15 h) .

La mezcla entonces se filtró a través de un embudo Buchner de 45 cm. El sólido, el enolato de potasio del ceto-éster, se retornó al matraz de 50 L y se diluyó con ácido acético acuoso (ácido acético 3 L en 15 L de agua) . Esta mezcla ácida se extrajo con éter metílico de t-butilo (MTBE) (1 x 16 L, 1 x 12 L) . Las capas orgánicas se combinaron y se lavaron con carbonato de sodio acuoso (Na2C03) (1750 g en 12.5 L de agua) , bicarbonato de sodio acuoso saturado (NaHC03) (8 L) y salmuera (8 L) . Se usó sulfato de magnesio (MgS04) (500 g) para secar durante la noche (15 h) . Las capas orgánicas combinadas. La solución orgánica seca se filtró y el solvente se removió por evaporación giratoria a una masa de 6.4 kg . El material empezó a precipitar después de la remoción de aproximadamente la mitad del solvente. La suspensión resultante se enfrió en un baño de hielo con agitación durante 2 h. El sólido se recolectó por filtración, se lavó con MTBE (500 mL) y se secó en un horno de vacío a 20°C durante 15 h, dando 2425 g (60% de rendimiento) del ceto-éster 1 como un sólido amarillo pálido. El licor madre de MTBE se concentró a aproximadamen e 1 L. La suspensión resultante se enfrió en un baño de hielo durante 1 h. El sólido se recolectó por filtración, se lavó con MTBE (2 x 150 mL) , y se secó en un horno de vacío para dar 240 g (6%) de una segunda recolección.

Condición de TLC: La mezcla ¦ de reacción se monitorizó usando placas de gel de sílice Merck 60, 2.5 x 7.5 era, 250 mieras; lámpara UV; solventes THF/hexano 1:2. Rf del material de inicio = 0.25; Rf de producto = 0.3.

Ejemplo 2. Síntesis de (S) ( - ) metil - 3 -hidroxi - 3 - (piridin- 4 -il ) -propanoato (2) t Un matraz de fondo redondo de 3 cuellos de 22 L se equipó con un agitador elevado, termocavidad/termómetro, embudo de adición (1 L) y el recipiente de enfriamiento (vacío) . El matraz se enjuagó con nitrógeno, se cargó con ácido fórmico (877 g) y se enfrió con un baño de hielo. Se cargó trietilamina (TEA) (755 g) al embudo de adición y se adicionó lentamente durante un intervalo de tiempo de 50 minutos al ácido fórmico agitado. Hubo una reacción exotérmica con emisión moderada de humo, que se disipó hacia el final de la adición. Después de que se terminó la adición, se removió el baño de enfriamiento y la solución de reacción se diluyó con dimetilformamida (DMF) (5.0 L) . El cetoéster 1 (2648 g) se adicionó en una porción, seguido por 0.5 L adicionales de DMF en una reacción exotérmica. Hubo un incremento en la temperatura a aproximadamente 5°C punto en el cual fue insoluble el cetoéster 1. El matraz se equipó con un manto de calentamiento y la mezcla agitada se calentó gradualmente a 16°C para disolver todos los sólidos. El catalizador de rutenio quiral (18.8 g) (10) se adicionó en una porción y la mezcla agitada se calentó a 55°C durante 1 hora. La solución oscura resultante se agitó a 55°C durante 16 hora. Se usó TLC para determinar cuando se terminó la reacción. El solvente se evaporó bajo presión reducida (evaporador giratorio Buchi R152 bajo alto vacío, temperatura de baño = 60°C) para dar 3574 g de un aceite café. El aceite se disolvió en diclorometano (10 L) y se transfirió a un embudo de separación estacionario de 5 galones. La solución oscura se lavó con solución saturada de bicarbonato de sodio (3.0 L) y la fase acuosa entonces se extrajo de regreso nuevamente con diclorometano (3.0 L) . Los extractos combinados de diclorometano se secaron sobre MgS04 (300 g) , se filtraron y concentraron bajo presión reducida para proporcionar 3362 g de un aceite café (125% de teórico, contiene D F por RM """H) . El análisis de RMN 1H para este ejemplo y los siguientes ejemplos se realizó en un espectrómetro VARIAN GEMINI-200 MHz . Las muestras se disolvieron en el solvente indicado y los desplazamientos químicos se referenciaron al solvente residual. Condición de TLC: La mezcla de reacción se monitorizó usando placas de gel de sílice Merck 60, 2.5 x 7.5 cm, 250 mieras; lámpara UV; MeOH al 5% en CH2C12; Rf del material de inicio = 0.44; Rf del producto = 0.15. RMN XH (CDC13) : d 2.73 (d, 2H, J = 1.5 Hz) , 3.73 (s 3H) , '4.35 (s 1H) , 5.11-5.19 (m, 1H) , 7.31 (d, 2H, J = 6.6 Hz) , 8.53 (d, 2H, J = 6.0 Hz) . e.e. = 87% de isómero S (determinado por CLAR) . Condiciones de CLAR: Columna: Chiralpak AD, 0.46 x 25 cm; fase móvil = etanol : hexano 10:90, isocrática, velocidad de flujo = 1.5 mL/min; volumen de inyección = 10 µL, detección UV a 254 nm; r.t.: R-hidroxi -áster = 19.9 min; S -hidroxi -áster = 21.7 min.

Ejemplo 3: Síntesis de S- ( - ) -1- (4 -piridil ) - 1 , 3 -propanodiol (3) OH 3 Un matraz de fondo redondo de 4 cuellos de 22 L se equipó con un agitador elevado, termocavidad/termómetro , embudo de adición (2 L) condensador y recipiente de enfriamiento (vacío) . El matraz se enjuagó con nitrógeno, se cargó secuencialmente con borohidruro de sodio (149 g) y 1-butanol (9.0 L) . El hidroxiéster crudo (2) se disolvió en 1-butanol (1.0 L) , volumen total de solución = 3.2 L) . Una primera cuarta porción (800 mL) de solución de hidroxiéster se adicionó lentamente a la suspensión espesa agitada de borohidruro de sodio durante 90 minutos. La temperatura se incrementó de 19°C a 32°C y se presentó desgasificación moderada. La mezcla se agitó durante 45 minutos y la temperatura llegó a un máximo a 36°C. Una segunda cuarta porción de la solución de hidroxiéster se adicionó lentamente durante 45 minutos con un incremento de temperatura de 36 a 52°C. La mezcla se agitó durante 20 minutos y la temperatura llegó a un máximo a 57°C. La mezcla se enfrió a 40°C usando un baño de hielo, y la tercera cuarta porción de la solución de hidroxiéster se adicionó durante 45 minutos. Nuevamente, la temperatura exhibió un incremento de 38 a 51°C. La mezcla se agitó durante 20 minutos con un máximo de temperatura a 57°C. La mezcla se enfrió a 38°C y la cuarta porción final de la solución de hidroxiéster se adicionó durante 25 minutos y no hubo reacción exotérmica aparente en este punto. La mezcla se agitó durante 40 minutos con la temperatura a 45°C; luego el matraz se equipó con un manto de calentamiento y la mezcla agitada se calentó a 80°C durante un periodo de 2.5 h. La mezcla se agitó a 80-85°C durante 3 horas. La mezcla se enfrió gradualmente a temperatura ambiente durante un periodo de 12 h. Nuevamente se usó TLC para monitorizar la terminación de la reacción. La mezcla de reacción se enfrió rápidamente con solución acuosa de carbonato de potasio (20% en peso, 5.2 L) y la mezcla se agitó durante 10 minutos. Las capas se separaron y la capa de la fase de butanol se lavó con solución acuosa de carbonato de potasio (20%, 2.6 L) y solución de cloruro de sodio (15% en peso, 1.3 L) . El solvente se removió bajo presión reducida (evaporador giratorio Buchi R152 alto vacío, temperatura de baño = 60°C) para proporcionar un semi-sólido amarillo. Se alimentó acetonitrilo (3 L) en el matraz evaporador y el solvente se evaporó bajo presión reducida. Se alimentó nuevamente acetonitrilo (9 L) en el matraz evaporador y la suspensión espesa se agitó (rotación en el evaporador giratorio) a 60°C (temperatura en baño = 65°C, presión atmosférica) durante 15 minutos. La suspensión espesa caliente se filtró a través de de un agente de filtración Si02 (Celita 521) (250 g como una suspensión espesa en 1 L de acetonitrilo se pre-empacó en un embudo Buchner de 24 cm) . El filtrado se concentró parcialmente bajo presión reducida (4 L de destilado se recolectaron) y la suspensión espesa resultante se calentó a presión atmosférica en el evaporador giratorio para disolver todos los sólidos (temperatura de baño = 65°C) . La fuente de calor se apagó y la solución resultante se agitó en el evaporador giratorio durante 16 horas, con enfriamiento gradual a temperatura ambiente. La mezcla resultante se filtró y el sólido recolectado se lavó con acetonitrilo (2 X 200 mL) y se agitó a peso constante (-30 en Hg, 55°C, 4 h) , dando (3, 436 g, 39%) como un sólido amarillo pálido. Punto de fusión = 98-100°C e.e. = 98% de isómero S (determinado por CLAR). Condiciones de CLAR: Columna: Chiralpak AD, 0.46 x 25 era; fase móvil = etanol : hexano 10:90, isocrático; velocidad de flujo = 1.5 mL/min; volumen de inyección = 10 L, detección UV 254 nm; r.t.; R-diol = 12.7 min, S-diol = 14 min .

Ejemplo 4: Síntesis de (4S) - ( - ) -Trans-4 - (4 -piridil ) -2 - (4 -nitrofenoxi) -2 -oxo- 1 , 3 , 2 -dioxafosforinano (4) 4 Un matraz de fondo redondo de 1 L equipado con un agitador magnético y entrada de nitrógeno se cargó con diol 3 (100 g, 0.65 mol) y piridina (500 mL) . La mezcla se agitó vigorosamente a temperatura ambiente hasta que se disolvió completamente el diol 3. La solubilidad de 3 se disminuyó por TEA. Un matraz de fondo redondo de 3 cuellos de 3 L separados se equipó con un agitador elevado, termopar, embudo de adición de 1 L y entrada de nitrógeno. Este recipiente se cargó 4 -nitrofenil-fosforodicloridato (166.4 g, 0.65 mol), colocado en un baño de hielo y luego se introdujo piridina (500 mL) a través del embudo de adición. La mezcla resultante se agitó a la temperatura del baño de hielo durante 15 minutos. Después de que se disolvió completamente 3 (aproximadamente 0.5 h) , se adicionó TEA (190 mL, 1.36 mol) y la solución amarilla de un café ligeramente turbia, se transfirió al embudo de adición en el matraz de 3 L y se adicionó a la solución fría de dicloridato durante 2 horas 40 minutos. La reacción fue exotérmica y la velocidad de adición se mantuvo tal que la temperatura de reacción no excedió 6°C. Después de que se terminó la adición, el baño de hielo se reemplazó con un baño de agua a temperatura ambiente y se continuó la agitación durante 3 h. Durante este tiempo, se equipó un matraz de fondo redondo de 3 cuellos de 3 L con un agitador elevado, termopar, embudo de adición de 250 mL y entrada de nitrógeno. Este matraz entonces se cargó con hidruro de sodio (15 g, 0.38 mol) y THF (100 mL) y el embudo de adición se cargó con una solución de 4-nitrofenol (67.5 g, 0.49 mol) en THF (100 mL) . El matraz entonces se colocó en un baño de hielo y la solución de nitrofenol se adicionó lentamente a la suspensión fría de hidruro de sodio. Se mantuvo una temperatura <40°C durante la adición del nitrofenol. El cese de la emisión de gas indicó que se terminó la adición. La suspensión naranja brillante resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora . Después de que la reacción de diol (3 ) -dicloridato se juzgó completa por CLAR, la suspensión oscura se sometió a filtración al vacío. La cristalería y la torta del filtro (TEA-HC1) se enjuagaron con THF (100 mL) y el enjuague se vertieron en la suspensión naranja de 4 -nitrofenóxido de sodio. La mezcla resultante entonces se calentó a 40°C durante 4 h y el equilibrio de cis y trans se monitorizó por CLAR. El manto de calentamiento se apagó y la reacción se agitó a temperatura ambiente. La mezcla cruda de reacción se filtro a través de un agente de filtración, Si02 (Celita 521, 0.5 pulgadas) , y la cristalería y la Celita se enjuagaron con 200 mL de diclorometano. El filtrado y enjuague combinados se concentraron en un evaporador giratorio a 30-35°C a presión reducida (bomba de aceite) . El alquitrán espumoso, negro, espeso, resultante se disolvió en HCl acuoso 1.0 M , (1.5 L) y acetato de etilo (800 mL) , se transfirió a un embudo separador de 4 L y las fases se separaron. La capa de acetato de etilo se lavó con una porción adicional de 300 mL de HCl acuoso 1.0 M. Se adicionó diclorometano (750 mL) a las capas acuosas combinadas y en tanto que se agita vigorosamente la mezcla, se neutralizó cuidadosamente con bicarbonato de sodio sólido a pH entre 7 y 8. La solución se transfirió nuevamente a un embudo de separación de 4 L y las capas se separaron. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (750 mL) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y concentraron a sequedad. El residuo seco resultante se agitó como una suspensión espesa en isopropanol (200 mL) y se filtró para dar 190 g de fosfato 4. El producto crudo 4 se disolvió en diclorometano (600 mL) , se agitó durante 10 minutos en la presencia de 10 g de carbón activado (Darco) , y se filtró a través de Si02 (Celita 521, 0.5 pulgadas) . El matraz y la Celita se enjuagaron con diclorometano (150 mL) y el filtrado y enjuague combinado se concentraron nuevamente a sequedad. El sólido resultante se convirtió en polvo y se agitó a 50°C como una suspensión espesa en isopropanol (250 mL) . Después de 1 hora, la suspensión espesa se enfrió a temperatura ambiente y subsiguientemente a la temperatura del baño de hielo para filtración. El sólido se secó durante 16 horas a 55°C en un horno al vacío para producir 154.6 g (70%) en fosfato 4 como un sólido beige. p.f. = 140-142°C Rotación específica = -80.350° (c = 1.0, MeOH) . Condiciones de CLAR: Columna: Chiralpak AD, 0.46 x 25 cm; fase móvil = 2 -propanol : hexano 50:50, isocrático; velocidad de flujo = 1.0 mL/min; volumen de inyección = 10 µ??, detección de UV a 254 nm; r.t. = 6.6 min, 99+% de trans. ee = 99+% RMN XH (DMSO-dg) : d 2.23-2.29 (m, 2H) , 4.56-4.71 (m, 2H) , 5.88-5.95 (m, 1H) , 7.44 (d, 2H, J = 5.8 Hz) , 7.59 (d, 2H, J" = 9.2 Hz) , 8.34 (d, 2H, J = 9.4 Hz), 8.63 (d, 2H, J" = 5.8 Hz) .

Ejemplo 5. Síntesis de 5 ' -O-benzoilcitarabina (5¡ Un matraz de fondo redondo de 4 cuellos de 12 L se equipó con un agitador elevado, termopar y entrada de nitrógeno. El recipiente se cargó con citarabina (500 g, 2.06 mol) y DMPU (1 L) , que dio una solución espesa pero agitable. Se adicionó una solución de HCl en dioxano (617 mL, 2.47 mol) en una porción con un incremento de temperatura a 52°C. La mezcla se agitó durante 2 horas y se enfrió a 27°C. Se adicionó cloruro de benzoilo (578 g, 4.11 mol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 22 horas con un incremento de temperatura a 34 °C durante los primeros 30 minutos. Después de 2.5 h, la temperatura ha disminuido a 25°C. Se adicionó agua (2.5 L) y la mezcla se agitó durante 30 minutos con incremento de temperatura a 37°C. Las capas resultantes se separaron y la capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 1 L) . Las capas orgánicas combinadas se extrajeron con HCl acuoso al 10% (vol/vol) (2 x 500 mL) . Las capas acuosas combinadas se cargaron al matraz de 12 L, se diluyeron con agua (1.5 L) y se enfriaron en un baño de hielo. El pH se ajustó a 10 al adicionar NaOH acuoso al 30% (peso/peso) (850 mL) . Hubo un incremento de temperatura durante la neutralización de 14°C a 21°C durante el periodo de adición de 30 minutos. La formación en el precipitación empezó a presentarse a pH 3. En tanto que lo restante en el baño de hielo, la suspensión espesa resultante se agitó durante 8 horas. El sólido se recolectó en un Buchner de 24 cm. La torta se lavó con agua (2 L) y se secó parcialmente en el embudo durante la noche. El material sólido resultante se secó en un horno al vacío a 70°C durante 18 h, dando 659 g (92% de rendimiento) de 5 ' -O-benzoilcitarabina (5). El contenido de agua como se mide por Kartl Fischer fue demasiado alto y el material se recristalizó . Se cargó un matraz de 12 L con (5) , metanol (5 L) , y etanol (3 L) y esta mezcla se espesó después de la agitación. La mezcla se calentó a reflujo, dando una solución amarillo claro. La mezcla se destiló a presión atmosférica hasta que se recolectaron 2 L de destilado. Se adicionó etanol (2 L) y la destilación se- continuó hasta que se recolectó 1 L más. Al final de la destilación, la temperatura era de 79°C. El calor se apagó y la mezcla se enfrió a 21°C y se agitó durante 19 h. El sólido se recolectó por filtración, se lavó con etanol (1 L) , y se agitó en un horno de vacío a 70°C durante 36 horas para dar 508 g (71%) del compuesto 5 como un sólido cristalino blanco. Condiciones de CLAR: Columna: Zorbax Eclipse XDB-C8; Solvente A = acetronitrilo al 5% en amortiguador de fosfato de sodio 20 m ; solvente B = acetonitrilo al 80% en agua; gradiente; velocidad de flujo = 1.0 mL/min,- volumen de inyección = 10 µ??, detección UV a 270 nm; r.t. = 4.3 min.

Ejemplo 6. Síntesis de 5 ' -O-benzoilo-2 ¿ , 3 ' -di-O-TBS -citarabina (6) : Un matraz de fondo redondo de 4 cuellos de 12 L se equipó con un agitador elevado, termopar, condensador y entrada de nitrógeno. El matraz se cargó con piridina (703 mL, 8.64 mol) , DMF (1 L) , y (5) . La mezcla se agitó durante 5 minutos. La adición del compuesto (5) al solvente facilita la dilución. Se adicionó cloruro de ter-butildimetilsililo (TBSC1) , seguido por DMF (500 mL) . La mezcla se calentó a 93 °C + 1°C durante 44 h con monitoreo ocasional por CLAR. La mezcla se enfrió a 51°C y se adicionó metanol (250 mL) para enfriar rápidamente el TBSC1 sin reaccionar. La mezcla se agitó durante 4.5 h tiempo después del cual se adicionó agua (2 L) . Después de la agitación durante 40 minutos adicionales, la mezcla se extrajo con acetato de etilo (2 L) . La capa orgánica superior se lavó con HCl acuoso al 10% (2 x 2 L) , NaHC03 acuoso al 7% (2 x 2 L) , NaCl acuoso al 10% (2 L) . La capa orgánica se secó sobre MgS04 y se filtró. El solvente se removió en evaporador giratorio, dando (6) crudo como un aceite negro espeso que pesa 1.3 kg. El material se usó en la reacción subsiguiente sin purificación adicional. Condiciones de CLAR: Columna Zorbax Eclipse XDB-C8; Solvente A = acetonitrilo al 5% en amortiguador de fosfato de sodio 20 mM; solvente B = acetonitrilo al 80% en agua; gradiente; velocidad de flujo = 1.0 mL/min; volumen de inyección = 10 µL, detección UV a 270 nm; r.t. di-silil = 10.1 min; r.t. monosililo = 6.9 min.

Ej emplo 7. Síntesis de clorhidrato de 2 ',3' -di-O-TBS-citarabina (7) 7 Un matraz de fondo redondo de 4 cuellos de 12 L se equipó con un agitador elevado, condensador con aparato burbuj eador de nitrógeno en la parte superior, un termopar y un manto de calentamiento. matraz se cargó con una solución del (6) crudo en etanol (2.3 L) e hidracina (185 g, 5.76 mol) . La mezcla se calentó a 80°C durante 15 horas con monitoreo por CLAR. El manto de calentamiento se removió y la mezcla se enfrió a 35°C durante un periodo de 2 h. La solución color oscuro se vertió en NH4C1 acuoso al 15% (4 L) y se extrajo con acetato de etilo (4 L) . La fase orgánica se lavó con NH4C1 acuoso al 15% (2 L) luego se evaporó a un aceite espeso en un evaporador giratorio. El residuo se disolvió en acetonitrilo (3 L) y se transfirió a un embudo de separación grande. Una solución al 10% de HC1 en agua (3 L) se adicionó y la mezcla se agitó durante 5 minutos. La solución gris resultante se extrajo con hexanos (2 x 3 L) . Después de la extracción con hexano, las dos fases fueron claras. La capa inferior acuosa/de acetonitrilo que contiene (7) se concentró en un evaporador giratorio hasta que se recolectaron 3 L de destilado. Se adicionó agua (3 L) y la destilación continuó hasta que se removieron aproximadamente 500 mL de solvente adicional. La formación del precipitado empezó después de la remoción de 2 L con una suspensión espesa que permanece después de que se tiene la destilación. El sólido se recolectó por filtración en un embudo Buchner de 24 cm y la torta se lavó con acetonitrilo al 5% vol/vol en agua (2 x 1 L) . El sólido húmedo (2.6 kg) se transfirió a un matraz de 12 L y se agitó con acetonitrilo al 5%/agua (6 L) durante 45 minutos. El sólido se recolectó por filtración (lento) , se lavó con agua (1 L) y se agitó en un horno al vacío a 65°C durante 46 horas, dando 644 g (88% de rendimiento) . La pureza se determinó por CLAR y RMN 1H (DMS0-d6) : El material crudo se cargó a un matraz de 12 L. Se adicionó acetato de etilo (4 L) y la mezcla se calentó a reflujo durante 1 hora luego se mantuvo a reflujo durante 1 hora. La mezcla se enfrió a 25°C durante 3 h. El sólido resultante (7) se recolectó por filtración, se lavó con acetato de etilo, y secó en un horno al vacío a 65°C durante 24 h para dar un sólido blanquecino (335 g, 46%) . El licor madre se neutralizó con NaHC03 acuoso, saturado y las fases se separaron. La fase orgánica se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04 , y se evaporó en un evaporador giratorio, dando 283 g de un aceite café espeso. El material se cromatografió en gel de sílice (1.1 kg) , eluyendo con MeOH al 2%/diclorometano MeOH al 15%/diclorometano. Las fracciones que contienen el producto claro se combinaron y el solvente se evaporó. El residuo resultante, la base libre de 2',3'-di-0-TBScitarabina, se secó bajo vacío durante la noche para dar un sólido amorfo ámbar (171 g) . Condiciones de CLAR: Columna: Zorbax Eclipse XDB-C8 ; Solvente A = acetonitrilo al 5% en amortiguador de fosfato de sodio 20 tnM; solvente B = acetonitrilo al 80% en agua; gradiente; velocidad de flujo = 1.0 mL/min; volumen de inyección = 10 µ??, detección UV 270 nm; r.t. = 7.4 min. Ejemplo 8. Síntesis de 2 ' , 3 ' -di -O-TBS-citarabina-N, N-dimetil formamidina (8) : Un matraz de 4 cuellos de 12 L, equipado con un agitador elevado se cargó con (7) (333 g) , 0.66 mol) y tolueno (2 L) . Se adicionó una solución de NaHC03 (110 g, 1.31 mol) en agua (2 L) y la mezcla se agitó vigorosamente durante 15 minutos. Una gran cantidad de sólidos aún estaba presente, de modo que se adicionó acetato de etilo (2 L) . En el espacio de 5 minutos, se disolvió todo el material a un pH de 8. Las fases se separaron y la fase orgánica se lavó con solución acuosa de NaCl al 10% (1.5 L) , se secó sobre MgS0 y se filtró. El solvente se removió en un evaporador giratorio, dando la base libre como una espuma blanca que pesa 398 g (130% de teórico) . La base libre de 2 ' , 3 ' -di-O-TBS-citarabina (de la cromatografía en el Ejemplo 7) se adicionó a la base libre de la preparación anterior en el matraz evaporador giratorio. Se adicionó tolueno (2 L) y la mezcla se calentó a 50°C durante 1 hora, dando una solución café clara. La solución se transfirió a un matraz de 4 cuellos de 12 L. Se usó tolueno (400 mL) para enjuagar el matraz rotoevaporatorio . Se adicionó DMF-dimetil -acetal (158 g, 1.32 mol) y la mezcla se agitó a 20°C durante 21 horas y la reacción se monitorizó por TLC. El solvente se removió en un evaporador giratorio, dando un aceite espeso. Se adicionó hexano (1 L) y luego se removió bajo vacío. El material se secó en el evaporador giratorio durante 2 horas a 60°C, pero aún permaneció un aceite espeso. Se adicionaron hexano (2 L) y diclorometano (2 L) al residuo y la mezcla se agitó a 50°C, dando una solución café claro. La mezcla se destiló a presión atmosférica hasta que se recolectaron 2 L de destilado. La mezcla se enfrió ligeramente y el solvente restante se evaporó bajo vacío. El residuo se secó en el evaporador giratorio durante 15 h, dando una espuma dura. El material se desprendió de los lados del matraz y el sólido fluido resultante se secó bajo vacío a 25°C durante 24 h para dar 527.6 g (98%) del compuesto 8 como un sólido café claro. Condiciones de TLC: La mezcla de reacción se monitorizó usando gel de sílice Merck 60, 2.5 x 7.5 cm, 250 mieras; lámpara UV; MeOH al 10% en CH2C12; Rf de material de inicio = 0.4; Rf de producto = 0.7. RMN XH (DMSO-d6) : d -0.27 (s 3H) , -0.02 (s 3H) , 0.11 (s 6H) , 0.74 (s 9H) , 0.88 (s 9H) , 3.02 (s 3H) , 3.16 (s 3H) , 3.51-3.69 (m, 2H) , 3.80-3.85 (m, 1H) , 4.05-4.08 (m, 2H) , 4.95-5.03 (m, 1H) , 5.93-6.01 (m, 2H) , 7.67 (d, 1H, J = 7.2 Hz) , 8.62 (s 1H) .

Ejemplo 9. Síntesis de 2 ( 1H) -pirimidinona , 4 -amino- 1 - [5 -O-[ (2R,4S) -2-oxido-4- (4 -piridinilo) -1, 3 , 2 -dioxofosforina- 2 - il ] -ß -D-arabinofuranosilo (9) Un matraz de fondo redondo de 3 cuellos de 12 L se equipó con un agitador elevado, termocavidad/termómetro , embudo de adición (1 L) y baño de enfriamiento. El matraz se enjuagó con nitrógeno y se cargó con el nucleósido protegido 8 (250 g, 0.47 mol) y THF (2.5 L) . La solución agitada se enfrió a 4°C (baño de hielo) y se adicionó lentamente solución de cloruro de t - but i lmagnes io (617 mL , 0.62) durante 1 hora, manteniendo la temperatura =8°C. Después de que se terminó la adición, la solución se agitó a la temperatura del baño de hielo durante 1.25 h. El reactivo de fosfato (4) (262 g, 0.78 mol) se adicionó en una porción y se removió el baño de enfriamiento. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La reacción se enfrió son solución de cloruro de amonio (20% en peso, 2.5 L) y se diluyó con acetato de etilo (2.5 L) . La mezcla se agitó durante 5 minutos para disolver todos los residuos, y se separaron las capas. La fase acuosa se extrajo de regreso con acetato de etilo (1.1 L) y la fase orgánica combinada se lavó con solución de cloruro de sodio (15% en peso, 1.6 L) , se secó sobre MgS0 (260 g) , se filtró y se concentró bajo presión reducida para proporcionar 526 g de sedimento naranja oscuro que se sometió a análisis por CLAR (ver condiciones A de CLAR posteriormente) .

Un matraz de fondo redondo de 3 cuellos de 12 L se equipó con un agitador elevado, termocavidad/termómetro , condensador con una t rampa/burbuj eador base, y manto de calentamiento. El matraz se cargó con el sedimento crudo como una solución en metanol (2.5 L) y solución de HCl-dioxano (790 mL, 3.16 mol) . La solución naranja agitada se calentó, a 50°C y se agitó a 50-55°C durante 16 h con monitoreo por CLAR (ver Condiciones B de CLAR, posteriormente) . El solvente se evaporó bajo presión reducida para dar una brea naranja espesa. El matraz de evaporación (10 L) se equipó con un montaje elevado de agitador/soporte y la brea se dividió entre agua (800 mL) y acetato de etilo (800 mL) . Se adicionó bicarbonato de sodio sólido en porciones de 2-5 g y se agitó hasta que disminuyó la desgasificación y el pH de la fase acuosa fue 7 (papel pH de amplio rango) . Las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo nuevamente con acetato de etilo (800 mL) . La fase acuosa se filtró y el agua se evaporó con destilación azeotrópica con etanol bajo presión reducida (4 x 400 mL de etanol llevado a cabo por adición secuencial de etanol) para proporcionar 445 g de una mezcla de ace i t e/ sól ido café conforme el agua se reemplazó gradualmente con etanol . Se adicionó etanol (700 mL) y la suspensión espesa se agitó (agitador elevado) a temperatura ambiente durante 2 h. 9.1 La mezcla resultante se filtró y el sólido recolectado se lavó con etanol (2 X 50 mL) y se agitó a peso constante (-30 pulgadas de Hg, 55°C, 2 h) para proporcionar 199 g de un sólido beige que contuvo una cantidad indeterminada de NaCl . Este material sólido se transfirió a un matraz de fondo redondo de 1 L equipado con agitación magnética. Se adicionó agua (200 mL) y la temperatura se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla se filtró y el sólido recolectado (9) se lavó con agua (2 x 25 mL) y se secó a peso constante (-30 pulgadas de Hg , 50°C, 16 h) . Recuperación = 109 g de un polvo beige (9) que contiene aproximadamente NaCl al 10%. 9.2. El filtrado de etanol de lo anterior se concentró bajo presión reducida para dar una brea café espesa. La brea se disolvió en metanol (200 mL) con calentamiento y la solución espesa resultante se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. Se ha formado un precipitado. La mezcla se filtró y el sólido recolectados (9) se lavó con metanol (2 x 25 mL) y se secó a peso constante (-30 pulgadas de Hg, 55°C, 16 h) . Recuperación = 6.22 g de un sólido blanquecino.

El producto (9) de este ejemplo se aisló de las dos corrientes de tratamiento separadas (9.1 y 9.2) . 9.3. Purificación de 2 ( 1H) -pirimidinona , 4-amino- 1- [5-0-[(2R,4S) -2-oxido-4- (4 -piridinil ) -1,3 , 2 -dioxafosforin- 2- il] -ß-D-arabinofuranosil] (9) 9 Un matraz de fondo redondo de 3 cuellos de 2 L se equipó con un agitador elevado y se cargó con el producto crudo combinado (9) de las corrientes separadas de tratamiento y agua (650 mL) . La suspensión espesa se agitó y se adicionó gota a gota ácido clorhídrico concentrado hasta que se disolvieron los sólidos (34 mL requeridos, pH = 3 por papel pH de amplio rango) . Los 20 mL iniciales de HC1 se adicionaron rápidamente y el resto se adicionó en porciones de 5 x 2 mL y 4 x 1 mL . La solución naranja se filtró y se recargó al matraz. Se adicionó por porciones bicarbonato de sodio sólido (36 g) en porciones de 2-3 g hasta que el pH de la mezcla fue de 6-7 (papel pH de amplio rango) . La mezcla se agitó hasta que disminuyó la desgasificación. La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, luego se filtró. El sólido recolectado se lavó con agua (2 x 25 mL) y se secó a peso constante (-30 pulgadas de Hg, 55°C, 16 h) , dando 133.0 g de 2 ( 1H) -pirimidinona , 4 -amino- 1 - - [5-0- [ (2R, 4S) -2 -oxido- 4 - (4-piridinilo)-l,3,2 -dioxafosforinan- 2 -il] -ß-D-arabinofuranosil] como un sólido granular amarillo-beige (39.7 %) . Análisis elemental calculado para C17H2iN.}08P : C, 46.09; H, 4.85, n, 12.62, Encontrado: C, 45.88; H, 4.72; N , 12.58. Condiciones de CLAR : Columnas: Dos de las siguientes columnas en conexión en serie; Agilent, Zorbax Eclipse XDB-C8, 4.6 x 250 mm, 5 µp?; Solvente A = amortiguador de fosfato de sodio 20 mM en acetonitrilo al 11%/agua; solvente B = acetonitrilo al 50% en agua desionizada, en fase invertida; velocidad de flujo = 1.0 mL/min; volumen de inyección = 10 µ?_, detección UV a 210 nm, temperatura de columna = 30°C; r.t. = 13.4 min (isómero S) ; r.t. = 14.1 min ( isómero R) . RMN XH (DMSO-de) : ó 2.15-2.27 (m, 2H) , 3.90-3.97 (m, 3H) , 4.24-4.58 (m, 4H) , 5.58 (d, 1H, J = 7.4 Hz), 5.62-5.65 (m, 2H) , 5.71-5.79 (m, 1H) , 6.10 (d, 1H, J-3.6 Hz) , 7.08 (s 1H) , 7.13 (s 1H) , 7.42 (d, 2H, J = 5.8 Hz) , 7.48 (d, 1H, J = 7.4 Hz) , 8.59 (d, 2H, J = 6.0 Hz) . Condiciones A de CLAR: Columna: Chiralpak AD, 0.46 x 25 cm; fase móvil = etanol : hexano 10:90, isocrática; velocidad de flujo = 1.5 mL/min; volumen de inyección = 10 µ?,, detección UV a 254 nm. r . t . = 18.9 min. Condiciones B de CLAR Columna: Bondclone 10, C18, 300 x 3.9 mm; solvente A acetonitrilo al 10% en amortiguador de fosfato de potasio 20 m (pH 6.2) , solvente B acetonitrilo; gradiente; velocidad de flujo = 1.4 mL/min; volumen de inyección = 10 /¿L, detección UV a 260 nm. r.t. = 5.8 min. Ejemplo 10. Síntesis de catalizador de rutenio quiral (10) 10 Un matraz de fondo redondo de 3 cuellos de 3 L se equipó con agitador elevado y termocavidad/termómetro . El matraz se enjuagó con nitrógeno y se enjuagó con el complejo de rutenio (32.0 g) , ( 1S , 2S) - ( + ) -N-p- tosil - 1 , 2 -difeniletilendiamina (38.24 g) e isopropanol (1.0 L) . Se adicionó trietilamina (30.0 mL) a la suspensión espesa agitada y los contenidos se calentaron a 80°C durante 1 hora. La mezcla naranja se agitó a 80 °C, luego se removió el manto de calentamiento y la mezcla agitada se enfrió a temperatura ambiente durante 45 minutos. El solvente se evaporó bajo presión reducida para dar un sólido naranja oscuro. Se adicionó metanol (320 mL) y la suspensión espesa agitada se calentó a 50°C. La mezcla se agitó a 50°C durante 15 minutos, y luego se enfriaron gradualmente a temperatura ambiente durante 30 minutos, la mezcla se agitó a la temperatura del baño de hielo durante 30 minutos adicionales, y luego se filtró. El sólido recolectado se lavó con metanol (2 x 15 mL) , luego se secó a peso constante (-30 de Hg, 50°C, 1 h) , dando 53.1 g de catalizador como sólido naranja (80% de rendimiento) .

Ejemplo 11. Síntesis de (4S )-(-)-( S )-(-)- (4 -piridil )- 2 -( 4 -nitrofenoxi) -2 -oxo- 1 , 3 , 2 -dioxafosforinano (4) usando la sal de clorhidrato del diol . / ^ \ p-c; 4 Un matraz de fondo redondo de 3 cuellos de 1 litro se fijó con un agitador elevado, embudo de adición, un termómetro y una entrada de N2. El . matraz se cargó con S-(-) -1- (pirid-4-il) -propano-1, 3-diol (25 g, 163.4 mmol y acetato de etilo (250 mL) y la suspensión resultante se trató lentamente con una solución de HCl 4N en dioxano (43 mL, 176 mmol) durante un periodo de 15 minutos. Después de la agitación durante 30 minutos a temperatura ambiente, se adicionó 4 -nitrofenilfosforodicloridato (41.81 g, 163.4 mmol) como un sólido tan rápido como sea posible bajo un flujo positivo de N2. La temperatura interna de la mezcla de reacción se ajustó a -10°C con la ayuda de un baño de enfriamiento de hielo seco-acetona. Se adicionó una solución de trietilamina (57.76 g, 79 mL, 572 mmol) en acetato de etilo (100 mL) que mantiene la temperatura de reacción a <-5°C. Treinta minutos después de la adición completa de la solución de trietilamina, el baño de enfriamiento se removió y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 h. La mezcla de reacción se filtró para remover la sal de clorhidrato de trietilamina, que se lavó con acetato de etilo (3 x 30 mL) hasta que el filtrado mostró solo absorción desvanecida. El filtrado se evaporó a un volumen de 150-175 mL bajo presión reducida. Se adicionaron 4-nitrofenol (7.5 g, 54.3 mmol) y tietilamina (9 mL) a la solución concentrada y la mezcla de reacción naranja resultante se agitó a temperatura ambiente durante 24 h. El sólido formado en la mezcla de reacción se colectó por filtración, se lavó con acetato de etilo (2 x 25 mL) y éter t-butílico de metilo (25 mL) y se secó bajo vacío a 55°C para dar 31.96 g (58.4%) del producto deseado. Los mismos datos analíticos como en el Ejemplo 4.

Ejemplo 12. Síntesis de (4S ) - ( - ) - trans - ( -piridi 1 ) - 2 -cloro-2 -oxo- 1 , 3 , 2 -dioxafosforinano (11) . 11 Un matraz de fondo redondo de 250 mL secado en horno equipado con una barra de agitación magnética se cargó con 3.49 g del S- ( - ) 1 - (4 -piridil ) - 1 , 3 -propanodiol seguido por 60 mL de acetonitrilo . La mezcla heterogénea se dejó agitar a temperatura ambiente durante 15 minutos y luego se trató lentamente con 5.7 mL de HCl a 4 M en solución de dioxano durante 5 minutos. Después de la agitación durante 1 hora a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se trató con 2.16 mL de P0C13 en una porción vía una jeringa. En un matraz separado de 25 mL, se disolvieron 2.68 g de DABCO en 15 mL de acetonitrilo bajo nitrógeno se transfirió vía una jeringa o un embudo de adición a la mezcla de reacción durante 5 minutos. Se observó una ligera exoterma al final de la adición de la solución de DABCO (+ 10°C) . La mezcla de reacción se dejó agitar durante 1 hora a temperatura ambiente durante lo cual permaneció heterogénea. Se empujó una pequeña muestra de mezcla de reacción y se evaporó rápidamente con un chorro de N2 seco y el residuo se disolvió en DMS0-dÉ para correr un espectro de RMN 1H.

MN XH (D SO-d6 Varían Gemini 200 Hz) : protón C : trans-ísómero 5.85-5.75 (d, 1H) .

Ejemplo 13. Síntesis de 2 (1H) -pirimidinona, 4 -amino-1- [5-0- [ (2R, 4S ) -2 -oxido -4 - (4-piridinilo) -1,3, 2 -d oxafosforinan-2 - Método A: Un matraz de fondo redondo de 250 mL secado en horno equipado con una barra de agitación magnética se cargó con 3.35 g de citarabina-HCl y 6.0 mL de DMPU. En este matraz, la mezcla de reacción del Ejemplo 12 se filtró directamente y se lavó la sal de DABC0-HC1 rápidamente con acetonitrilo (1 x 15 mL) . Los productos volátiles se removieron en un evaporador giratorio bajo vacío de aspiración (temperatura de baño <35°C) . El aceite residual se mantuvo brevemente bajo alta presión y se agitó a temperatura ambiente durante 48 h. La mezcla de reacción se trató con 100 mL de MeOH y se agitó durante 2 horas a temperatura ambiente. El pH de la mezcla de reacción se ajustó a 7.0 usando solución de NaOMe al 25% en peso en metanol (aproximadamente se requieren 13 mL) . En esta etapa, la mezcla de reacción fue turbia. Se corrió CLAR para asegurar la integridad del perfil de reacción. La mezcla de reacción se evaporó a sequedad y el residuo se agitó con 50 mL de diclorometano durante 30 minutos a temperatura ambiente. El precipitado se recolectó por filtración, se lavó con cloruro de metileno (1 x 20 mL) y se transfirió de regreso al matraz, se agitó nuevamente con 50 mL de diclorometano durante 15 minutos y se filtró. El sólido se agitó con 200 mL de etanol durante 1-2 horas, se filtró y se lavó con etanol (2 x 10 mL) . El filtrado se evaporó a sequedad para dar 4.90 g de un sólido blanco. Este sólido se disolvió en 10 mL de K20 y se agitó a temperatura ambiente durante la noche para dar un sólido que se recolectó por filtración, se lavó con agua (2 3 mL) y se secó en un horno al vacío para dar el compuesto 9, 1.38 g (26%) .

Método B: Paso A: Síntesis de Clorhidrato de Citarabina Un matraz de 3 cuellos de 5 L equipado con un agitador elevado y termopar se cargó con citarabina (500 g, 2.06 mol) y metanol (2.0 L) . La suspensión se enfrió a 2°C. Se burbujeó gas HCl , dando una mezcla muy espesa y una exoterma a 25°C. La suspensión se diluyó con metanol (0.5 L) para facilitar la agitación. Se adicionaron un total de 108 g (2.95 mol) de HC1. La mezcla se agitó durante 4 horas a 20°C luego se filtró para recolectar el sólido. El sólido se lavó con MTBE (3 x 250 mL) y se secó en un horno al vacío a 70°C para dar 555 g (96% de rendimiento) de clorhidrato de citarabina como un sólido blanco floculento.

Paso B: Síntesis de 5' -O-cis [4- (S) - (pirid-4-il) -1, 3,2-dioxafosforin- 2 -oxo-2 - il ] -citosina- ß -D-arabinofuranosido Un reactor cilindrico enchaquetado de 1 L se equipó con un agitador elevado, termopar y dos embudos de adición (60 mL y 125 mL) . El reactor se enjuagó con nitrógeno y se cargó con DMPU (188 mL, 195.8 g) . El líquido agitado se enfrió a -16°C (enfriador/circulador Julabo F32). Solución de diol : Un matraz de fondo redondo de 250 mL se equipó con una barra de agitación magnética y termómetro. El matraz se cargó con S- (-) -1- (pirid-4-il) -1 , 3 , -propanodiol (50.0 g) , DMPU (62.5 mL, 64.5 g) y piridina (25.8 g) luego se colocó bajo una atmósfera de nitrógeno. Los contenidos agitados se calentaron a 40°C (baño de agua) y se agitaron a 40-42°C hasta que se disolvieron todos los sólidos (10 minutos) . La solución naranja pálido resultante se enfrió a 22°C y luego se cargó al embudo de adición de 125 mL (volumen = 127 mL) . Solución POCl3: Se cargó un matraz Erlenmeyer de 125 mL con acetonitrilo (22.9 g) y oxicloruro de fósforo (50.0 g) . Después de mezclar bien, la solución incolora se transfirió al embudo de adición de 60 mL (volumen = 60 mL) . Las dos soluciones se adicionaron simultáneamente en el reactor de 1 L durante 2.6 h, manteniendo la temperatura por debajo de -11°C. Después de que se terminaron las adiciones, la solución naranja pálida viscosa se agitó, manteniendo la temperatura entre -11 y -17°C durante 1 h. Se jaló una muestra de la solución de reacción y se verificó para la terminación de reacción de CLAR (se hidrolizaron alícuotas al ácido fosforito cíclico y luego se analizaron por CLAR) . Se adicionó clorhidrato de citarabina (60.9 G) . La mezcla resultante se calentó a 5°C durante 1 hora y se agitó a 4-6°C durante 87 horas. La solución de reacción viscosa resultante se muestreó diariamente para análisis por CLAR. La solución de reacción agitada se enfrió lentamente con solución de NaOH (13% p/vol) a una velocidad tal para mantener la temperatura =20°C, hasta que el pH de la solución alcanzó 5.0 (290 mL de solución de NaOH requerida) . Se adicionó diclorometano (450 mL) y la mezcla bifásica se agitó a 15-20°C durante 30 minutos. Se detuvo la agitación y la mezcla se dejó asentar durante 30 minutos. La capa orgánica inferior se separó. La capa acuosa superior se extrajo dos veces más con diclorometano (450 mL, agitación de 30 minutos, asentamiento de 30 minutos) (Nota 5) . El reactor se quitó con una sonda de pH y se adicionó una solución de NaOH (13% p/vol) durante 10 minutos a pH 7.0 (68.0 mL de una solución NaOH requeridos. Se aplicó a enfriamiento (5°C) a la chaqueta para mantener la temperatura por abajo de 20°C. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 20 h luego se enfrió a 5°C durante 5 h (Nota 6) . La mezcla resultante se filtró y el sólido recolectado se lavó con agua (2 x 100 mL) y se agitó a peso constante (-30 pulgadas de Hg, 60°C, 18 h) . Recuperación = 46.6 g de un sólido granular, fino, amarillo pálido (48% de rendimiento) . CLAR para síntesis de fosforocloridato : Columna: Zorbax Eclipse XDB-C8, 4.6 x 250 mm, tamaño de partícula 5 µt?; solvente A = amortiguador de fosfato de sodio 20 mM en acetonitrilo al 11%/agua; solvente B = acetonitrilo al 50% en agua desionizada (gradiente 100% de A a 100% de B en 15 minutos) ,- velocidad de flujo = 1.0 mL/min: volumen de inyección = 10 µL de detección UV a 250 nm, temperatura de columna = 30 °C. r.t. = 4.3 min. CLAR para 5 ' -0-cis- [4 - (S) - (pirid-4 - il ) - 1 , 3 , 2 -dioxafosforin-2-oxo-2-il] -citosina- ß-D-arabinofuranosido : Columnas: Inertsil ODS-3, 4.6 x 150 mm, 3 µ?t? de tamaño de partícula; solvente A = amortiguador de fosfato de amonio 20 mM en acetonitrilo al 5%/agua; solvente B acetonitrilo (gradiente (tiempo en minutos/% de B en % de A) : 0/0, 30/10, 40/40, 40.1/0, 50/0); velocidad de flujo = 1.0 1 2 mL/min; volumen de inyección = 50 µ?., detección UV a 210 nm, temperatura de columna = 30°C + 5°C, r.t. 15.7 min. Paso C: Purificación de 5 ' -O-cis- [4 - (S) - (pirid-4 -il ) -1,3,2 -dioxafosforin-2 -oxo-2 - il] -citosina-3-D-arabinofuranosido . Procedimiento I: Un matraz de 3 cuellos de 1 litro equipado con un agitador elevado, termómetro, embudo de adición, y sonda de pH se cargó con 5 ' -O-cis- [4 - (S) - (pirid-4 -il ) -1,3, 2 -dioxafosforin-2 -oxo-2 -il] -citosina-ß-?-arabinofuranosido crudo (80 g, 0.18 mol) y agua desionizada (256 mL) . El pH de la mezcla fue de 5.16. Se adicionó gota a gota ácido sulfúrico, 3.0 M (60.6 mL, 0.18 mol) durante 10 minutos. Se usó un baño de enfriamiento de 10°C para mantener la temperatura entre 19-22 °C. Resultó una solución amarilla ligeramente turbia. La solución se filtró a través de un filtro de membrana de nylon de 0.45 µp? (diámetro de 47 mm) . El matraz y el filtro se enjuagaron con agua (40 mL) . El filtrado y los lavados se regresaron al matraz de 1 L y el pH se ajustó a 6.5 al adicionar NaOH 3 M (155 mL) y ácido sulfúrico 3 M. Se observó formación de precipitado que empieza a pH 5.1. La mezcla se agita 2.5 h y luego se filtra para recolectar el sólido. El matraz y la torta de filtro se lavaron con agua (2 x 80 mL) y se secó en un horno al vacío durante la noche (-30 pulgadas de Hg, 60°C, 18 n) para dar 73.4 g de 5 ' -O-cis- [4 - (S) - (pirid-4 -il) - 1 , 3 , 2 -dioxafosforin-2 -oxo-2 - il ] - citosina- ß -D-arabinofuranosido como un sólido amarillo pálido grueso (92% de rendimiento) . Procedimiento 2: Un matraz de 3 cuellos de 250 mL equipado con un agitador elevado, termopar, embudo de adición, y sonda de pH se cargó con 5' -O-cis- [4- (S) - (piridin-4-il) -1,3,2 -dioxafosforin-2 -oxo-2 - il ] - ci osina- ß -D-arabinofuranosido crudo (16 g, 36.3 mmol) y agua desionizada (50 mL) . Se adicionó ácido sulfúrico acuoso, 3.0 M gota a gota a pH 2.5 (12 mL, 36.3 mmol), atendiendo la temperatura por debajo de 22°C. Se adicionó metanol (160 mL) durante 20 minutos, dando un precipitado blanco. La suspensión se agitó a 20°C durante 1.5 h luego se filtró para recolectar el sólido. El sólido se lavó con metanol (2 x 25 mL) y se secó en un horno al vacío (-30 pulgadas de Hg, 60 °C, 1.5 h) para dar 18.89 de la sal de ácido sulfúrico. El sólido se cargó a un matraz de 3 cuellos de 250 mL equipado con un agitador elevado y sonda de pH . Se adicionó agua (180 mL) y la mezcla se agitó durante 10 minutos para disolver todos los sólidos (pH = 2.7) . Se adicionó monohidrato monobásico de fosfato de sodio (0.25 g, 1.81 mmol) y la mezcla se agitó durante 5 minutos. La solución se filtró a través de Celita. El filtrado se regresó al matraz y se adicionó NaOH acuoso al 13% p/vol) a pH 7.1. La suspensión se agitó a 20°C durante 3 horas. El sólido se recolectó por filtración, se lavó con agua (2 x 15 mL) y se secó en un horno al vacío (-30 pulgadas de Hg, 60°C, 16 h) a un peso constante, dando 13.55 g (85% de rendimiento) de 5'-0-cis-[4-(S)- (pirid-4-il ) -1,3, 2 -dioxafosforin-2 -oxo-2 -il] -citosina- 3-D-arabinofuranósido como un sólido granular blanquecino .

Ejemplo 14: Síntesis de R- (+)- 1 - (4 -piridil )- 1 , 3 -propanodiol R- ( + ) -1- (4- Piridil ) - 1 , 3 -propanodiol como se muestra en el Ejemplo 3 usando el enantiómero del catalizador 10 del Ejemplo 10. Punto de fusión = 98-100°C e.e. = 98% de isómero R (determinado por CLAR) . Condiciones de CLAR: Columna: Chiralpak AD, 0.46 x 25 cm; fase móvil = etanol : hexano 10:90, isocrático; velocidad de flujo = 1.5 mL/min; volumen de inyección = 10 L, detección UV a 254 nm; r.t.: R-diol - 12.7 min; S-diol = 14 min.

Ejemplo 15. Síntesis de (4R) --(+)- (4 -piridil ) nitrofenoxi ) -2 -oxo- 1 , 3 , 2 -dioxafosforinano (12) . 12 1 A una solución agitada de fosforodicloridato de 4-nitrofenilo (9.2 g, 36 mmol) en THF (100 mL) a 0°C se adicionó lentamente piridina (7.9 mL, 98 mmol) durante 30 minutos. La mezcla de reacción se agitó durante 5 minutos a 0°C y se adicionó lentamente a una solución de R-(+)-l-(4-piridil ) - 1 , 3 -propanodiol , 95.8% ee, 5 g, 32.7 mmol) y trietilamina (15.6 mL, 114 mmol) en THF (300 mL) a 0°C durante 1.5 horas. La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 2.5 horas. Se adicionó 4 -nitrofenóxido de sodio (18.17 g, 131 mmol) y la mezcla de reacción naranja heterogénea se calentó a 40°C durante 4.5 horas. La mezcla de reacción se enfrió a 0°C, se enfrió rápidamente como una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (250 mL) y las capas se separaron. Los productos orgánicos se lavaron con una solución acuosa de cloruro de amonio (200 mL) y los lavados acuosos combinados se extrajeron de regreso con diclorometano (100 mL) . Los extractos orgánicos combinados se lavaron con solución acuosa 0.3 N de hidróxido de sodio (200 mL x 4) y se secaron sobre sulfato de magnesio. La solución filtrada se concentró bajo presión reducida para dar un aceite que cristalizó en el reposo. El sólido amarillo se recristalizó a partir de 100 mL de 2-propanol para dar el trans - fosfato (12) deseado como un sólido blanco (95% ee, [a]D20 + 74.2 (c 1.0, MeOH) ) . Condiciones de TLC: Gel de sílice uniplaca, 250 mieras; fase móvil = acetona/hexanos 3/2; diol : rf = 0.2, trans- fosfato : rf = 0.6, cis-fosfato: rf = 0.5. Condiciones de CLAR para cis/trans-isomerización : Columna = Zorbax Rx-LC18 (4.6 X 250 mm) ; fase móvil = 35% de acetonitrilo/65% de amortiguador de fosfato 20 mM, pH 7.95; velocidad de flujo = 0.5 mL/min; detección = UV a 250 nm; tiempo de retención: cis-isómero = 9.39 min, trans-isómero = 10.11 min. Condiciones de CLAR para determinación de ee: Columna = Chiral Pak AD; fase móvil = 2 -propanol -hexanos 1:1; velocidad de flujo = 1.0 mL/min; detección = UV a 254 nm; tiempo de retención en min: trans- fosfato = 7.02.

Ejemplo 16. Síntesis de 2 ( 1H) -pirimidinona , 4-amino-l- [5-0- [ (2S, 4R) -2 -oxido-4- (4 -piridinil ) - 1 , 3 , 2 -dioxafosforinan- 2 - il ] -ß -D-arabinofuranosilo (13) 16.1 Paso de fosforilación A una solución agitada del compuesto 8 (2.4 g, 4.55 mmol) en THF (40 mL) a temperatura ambiente se adicionó lentamente una solución de t-BuMgCl (1 M en THF, 6 mL, 6 mmol) . Después de 30 minutos, se adicionó el R- trans-fosfato 12 (1.84 g, 5.5 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La reacción se enfrió a 0°C, se enfrió rápidamente con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio y se extrajo con acetato de etilo (50 mL x 2). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y concentraron bajo presión reducida. El producto crudo se purificó por cromatografía en columna en gel de sílice, eluyendo con acetona para dar el profármaco protegido deseado como un sólido blanquecino (2.19 g, 66%, p.f.: 142.0-145.0°C) . Condiciones de TLC : Gel de sílice uniplaca, 250 mieras; fase móvil = acetona, trans-fosfato; rf = 0.6, ara-C protegido: rf = 0.2. 16.2 Paso de desprotección Se calentó a 60°C una solución agitada del profármaco protegido de lo anterior en TFA a 70% (20 mL) durante 16 horas y el solvente se removió bajo presión reducida. Al residuo se adicionó metanol (30 mL) y la mezcla se hizo ligeramente básica con carbonato de sodio. La solución gris se agitó sobre sulfato de magnesio y se filtró. El solvente se removió bajo presión reducida y el producto crudo se purificó por cromatografía en columna de gel de sílice, eluyendo con metanol -acetona (1:1) para dar el profármaco deseado (13) como un sólido blanquecino (1.06 g, 80%, 98% de p.f.: 178.0-180.0°C) . Condiciones de- TLC: Gel de sílice uniplaca, 250 mieras; fase móvil = acetona-metanol (1:1), araC protegido: rf = 0.7, producto: rf = 0.3. Condiciones de CLAR: Columna = Zorbax Eclipse x DB-C8 4.6 x 150 mm; fase móvil = amortiguador de fosfato 20 mM en acetonitrilo al 5%-agua; velocidad de flujo = 1.0 mL/min; detección = UV 210 nm; tiempos de retención en min: producto = 10.60.

Ejemplo 17: Síntesis de 2 - ( 1H) -pirimidinona , 4 -amino- 1 - [5 -O- [ (2R, 4S) -2-oxido-4- (4 -piridinil ) - 1 , 3 , 2 -dioxafosforinan- 2 - il ] -ß-D-arabinofuranosil] ( +) -sal de canforsulfonato . Se adicionó ácido (+) -canforsulfónico (232 mg, 1 mmol) a una suspensión de 2 ( 1H) -pirimidinona, 4 -amino- 1 - [5 -0- [ (2R, 4S) -2 -oxido- 4 - (4 -piridinil ) -1,3,2 -dioxafosforin-2 - il ] - ß-D-arabinofuranosil ] (9, 400 mg, 0.91 mmol) en metanol (8 mL) . La solución incolora, clara resultante se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y luego se concentró bajo presión reducida. La espuma blanca resultante se trituró con acetato de etilo y se concentró bajo presión reducida. El residuo se suspendió en acetato de etilo y se calentó a reflujo. Después del enfriamiento durante 1 hora, el sólido se recolectó por filtración, se enjuagó cor. acetato de etilo y se secó )bajo vacío durante la noche a 50°C para dar el compuesto del título como un sólido blanco (562 mg) p.f- 193, descomposición. Análisis elemental (Robertson Microlit) calculado para Ci7H2:LN408P . C10Hi6O4S . H20; C, 46.95; H, 569; N, 8.11. Encontrado: C, 47.22; H, 5.51; N, 7.81.

Ejemplo 18: Síntesis de sal de maleato de 2(1H)-Pirimidinona , 4 -amino- 1 - [5-0- [ (2R,4S) -2 -oxido- 4 - (4-piridinil) -1,3, 2 -dioxafosforinan- 1 -il] - ß -d-arabinofuranosilo] El mismo procedimiento como para el Ejemplo 17 usando ácido maleico (1.1 equivalente) . p.f. 140, descomposición, análisis elemental (Robertson Microlit) calculado para C17H2iN408P C4H404. H20.0.5 C4H802; C, 44.67; H, 5.05; N, 9.06. Encontrado: C, 44.58; H, 4.61; N,848.

Ejemplo 19: Síntesis de sal de sulfato ácido de 2(1H)-pirimidinona , 4 -amino- 1 - [5-0- [ (2R, 4 S ) -2 -oxido-4 - (4-piridinil) -1,3, 2-dioxafosforinan-2-il] - ß -D-arabinofuranosilo] Se adicionó ácido sulfúrico (89 mg, 091 mmol) a una suspensión de 2 ( 1H) -pirinidinoan, 4 - amino- 1- [5-0- [ (2R, 4S) -2 -oxido-4 - (4-piridinil) -1, 3, -dioxafosforinan- 2 -il] - ß-D-arabinofuranosilo] (9, 400 mg, 091 mmol) en metanol (8 mi ) . El sólido fluido libre llegó a ser pegajoso y se pegó a los lados del matraz. La mezcla se sometió a reflujo durante 15 minutos, se enfrió a temperatura ambiente y los sólidos se rasparon en los lados del matraz. Después de la agitación a temperatura ambiente durante 3. h, el sólido fluido blanco se recolectó por filtración, se enjuagó con metanol y se secó bajo vacío 20°C para dar el compuesto del título (428 mg) . p.f. 158 descomposición. Análisis elemental (Robertson Microlit) calculado para C17H2iN408P H2S04 2 H20: C, 35.54 ; H, 4.74; , 9.75. Encontrado: C, 35.50; H, 4.73; , 9.51.

Ejemplo 20: Síntesis de sal de clorhidrato de 2 (1H) -pirimidinona , 4 -amino-1 - [5-0- [ (2R,4S) -2 -oxido- 4 - (4-piridinil) -1,3, 2 -dioxafosforinan-2 - il] - ß-D-arabinofuranosilo] Una solución 1 N de ácido clorhídrico (228 µL, 0.23 mmol) se adicionó a 2 ( 1H) -pirimidinona , 4 -amino- 1 -[ 5 -0- [ (2R, 4S) -2-oxido-4- (4 -piridinil ) - 1 , , 2 -dioxafosforinan- 2 - i 1 ] -ß-D-arabinofuranosilo] (9, 100.6 mg, 0.228 mmol) en el matraz. Se adicionaron agua (5 mi) y metanol (5 mL) el sólido parcialmente soluble y la mezcla se trató con sonido. La solución incolora clara se filtró a través de un filtro de jeringa de 0.45 m que se probó con metanol. Los filtrados combinados se concentraron bajo presión reducida. El residuo se volvió azeótropo con acetonitrilo (2 x 10 mL) . El residuo se disolvió en una mezcla de acetonitrilo y metanol (1/1, 10 mL) y se concentró a sequedad. El polvo blanco se secó bajo vacío a 20°C para dar el compuesto del título (78 mg) . p.f. > 200°C. Análisis elemental (Robertson Microlit) calculado para Ci7H2iN408P . HCl : C 42.03; H, 4.77; N, 11.53; Cl, 7.30. Encontrado: C, 41.70; H, 484; N, 11.68; Cl , 7.45.

Ejemplo 21: Síntesis de sal L-tartrato de 2(1H)-pirimidinona, 4-amino-l- [5-0- [ (2R,4S) -2 -oxido- 4- (4 -pi idinil ) -1,3, 2 -dioxafosforinan-2- il] - ß-D-arabinofuranosilo] El mismo procedimiento como en el Ejemplo 20 usando una solución 0.1 N de ácido L-tartárico en agua. p.f. > 200°C. Análisis elemental (Robertson Microlit) calculado para Ci7H21N408P C4H606. H20.0.1CH3N : C = 41.57; H = 4.82; N = 9.38; Encontrado: C = 41.32; H = 5.03; N 9.69.

Ejemplo 22. Síntesis de trans -4 - ( 4 -piridil ) -2 - ( 4 -nitrofenoxi ) -2 -oxo-1 , 3 , 2 -dioxafosforinano racémico . Una solución de- 1- (4 -piridil) - 1 , 3 -propanodiol racémico (4 g, 26.1 mmol) y trietilamina (12 mL, 86 mmol) en THF se adicionó a una solución de fósforo dicloridato de 4-nitrofenilo (7.35 g, 28.7 mmol) en THF. Después de la agitación a temperatura ambiente durante la noche, se adicionó 4 -nitrofenóxido de sodio (10 g, 71.8 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 50°C durante 4 horas. La mezcla de reacción enfriada se enfrió rápidamente con una solución saturada de cloruro de amonio y se extrajo (3X) con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron con cloruro de sodio saturado y se secaron sobre sulfato de sodio. La solución filtrada se concentró bajo presión reducida y el residuo resultante se purificó por cromatografía en columna (gel de sílice, diclorometano/etanol 95/5) . RMN XH (CDCI3 , Varían Gemini 200 MHz): C -proton-cis-isómero 5.6-5.8 (m, 1H) ; trans- isómero 5.5-5.69 (m, 1H) . Condiciones de TLC: Gel de sílice uniplaca, 250 mieras; fase móvil = acetona/hexanos 3/2; diol : rf = 0.2, trans- fosfato : rf = 0.6, cis-fosfato: rf = 0.5. Condiciones de CLAR para isomerización cis/trans: columna = Zorbax Rx-C18 (4.6 x 250 mm) ; fase móvil = 35% de acetonitrilo/65 de amortiguador de fosfato 20 mM pH 7.95; velocidad de flujo = 0.5 mL/min; detección = UV a 250 nm; tiempos de retención: cis-isómero = 9.39 min, trans - isómero = 10.11 min.

Ejemplo 23. Síntesis de 2 ( 1H) -pirimidinona, 4 -amino-1- [5-0-cis- [2 -oxido- 4 - (4-piridinil) -1,3,2 -dioxafosforinan- 2 - il ] - ß -d-arabinofuranosilo] 23.1 Paso de fosforilación Mismo como el Ejemplo 16.1 usando trans-4-(4-piridil ) -2 - (4 -nitrofenoxi ) -2 -oxo- 1 , 3 , 2 -dioxafosforinano racémico . Condiciones de TLC Gel de sílice uniplaca, 250 mieras; fase móvil = acetona, trans-fosfato : rf = 0.6, ara-C protegido: rf = 0.2 23.2 Paso de desprotección Mismo como el Ejemplo 16.2 Condiciones de TLC: Gel de sílice, 250 mieras; fase móvil = acetona- metanol (1:1) ara-C protegida: rf = 0.7, producto: rf = 0.3. Los ejemplos de uso del método de la invención incluyen lo siguiente. Se entenderá que estos ejemplos son ejemplo y que el método de la invención no se limita solamente a estos ejemplos. Para el propósito de claridad y brevedad, 2(1H)-pirimidinona, 4 -amino- 1 -[5-0-[(2R,4S)-2 -oxido- 4 - (4-piridinil) -1 , 3 , 2 -dioxfosforinan-2-il] (9) se refiere como el compuesto A, 2 (1H) -pirimidinona, -amino- 1 - [5 -0- [ (2R, R) -2 -oxido-4 - (4 -piridinil)-l,3, 2 -dioxafosforinan-2 - il ] - ß-D-arabinofuranosil ] (13) se refiere como el compuesto B, y 2 (1H) -pirimidinona, 4-amino- 1- [5-O-cis - [2 -oxido- 4 - (4-piridinil) -1,3,2-dioxafosforinan-2 -il] - -D-arabinofuranosil ] del Ejemplo 23 se refieren como el compuesto C en los siguientes ejemplos.

Ejemplos Biológicos Ejemplo A: Cinética de enzimas en microsomas de hígado humano . Se midió la activación del Compuesto A y el Compuesto B a araCMP por microsomas de hígado humano para comparar la activación en tejido de hígado humano. Se evaluó la especificidad de CYP3A4 usando inhibidores farmacológicos.

Métodos : Se incubaron el Compuesto A y el Compuesto B durante 5 minutos con mezclas que contienen 2 mg/mL de microsomas de hígado humano (In Vitro Technologies (IVT) , catálogo # X00821, lote # RQX, agrupación de sexos mezclados de 50 donadores) , amortiguador de fosfato de potasio 100 mM (Sigma, catálogo #P3786, lote # 62H0619) , pH 7.4 y NADPH 1 mM (Calbiochem, catálogo # 481973, lote # B38806) . Las mezclas de reacción se pre - incubaron durante 2 minutos a 37°C en un Mezclador Térmico Eppendorf 5436 a 700 rpm en la ausencia de NADPH y luego se inició por la adición de NADPH a una concentración final de 1 mM. Las reacciones se enfriaron rápidamente con 112.5 µL de metanol 5 minutos después, las muestras se centrifugaron durante 10 minutos a 14,000 rpm en una microcentrí fuga Eppendorf, y 150 µL del sobrenadante se evaporaron a sequedad con calor medio. Las muestras se re-suspendieron en 60 ^iL del amortiguador de par iónico (fosfato de potasio 10 mM , Fisher, catálogo # P286-1, lote # 9152328A, hidróxido de t e rabut i 1 - amoni o 50 mM , Aldrich, catálogo # 17,878-0, lote # 07030KO, pH ajustado a 4.5 con aproximadamente 3.3 mL/L de ácido fosfórico, 85 % en agua, Chempure , catálogo # 831-621, lote # M224KBRR) . Se sometió a vértice, se sometió con sonido durante aproximadamente 30 segundos, y se giró a 14,000 rpm durante aproximadamente 10 segundos. Para cuantificar la activación a araCMP, las muestras se analizaron por CLAR de fase invertida (Hewlett Packard 1100) . Se inyectaron cincuenta µ]!. de cada muestra en una columna de fase invertida Agilent C18 Zorbax SB-AQ (catálogo # 88395 - 914, 5µp?, 4.6 mm x 150 mm) con una columna Alltech C-18- EPS (catálogo # 32607, 7.4 mm x 4.6 mm) . Las muestras se cargaron con un amortiguador de par iónico (ver anteriormente) a una velocidad de flujo de 1 mL/min, una temperatura de columna de 40°C y una temperatura de muestra de 4°C. Se eluyó AraCMP de forma isocrática a aproximadamente 7 minutos seguido por un lavado de metanol a 70 % durante 2 minutos. El efluente se monitorizó por absorbancia de UV a 272 nm. Los estudios de inhibición se llevaron a cabo por pre - incubación con 0.1 µ? a 100 µ? de troleandomicina (TAO; Sigma T-6514, lote #81K1655) o 0.01 µ a 10 µ? de quetoconazol (KTZ; Research Biochemi ca 1 s Internacional, catálogo # K105, lote # SIG-587A) . Tanto TAO y KTZ se disolvieron en metanol, por lo tanto todas las muestras que incluyen controles contuvieron una concent ación final de metanol al 1 % (v/v) . Para los estudios de inhibición con TAO, los microsomas se pre - incubaron con TAO, durante 30 minutos a 37°C en la ausencia de sustrato. Las reacciones (volumen de 100 µ? se iniciaron por adición del sustrato: compuesto A 1000 µ? o Compuesto B 100 µ? y una alícuota fresca de NADPH 1 mM . El quetoconazol no requiere este procedimiento de preincubación , de modo que las reacciones se realizaron como se describe anteriormente con la adición de quetoconazol a la mezcla de reacción en el momento de la adición del sustrato. Se reportan parámetros cinéticos como ± desviación estándar (n=2 ó 3 experimentos independientes) . La ecuación de Mi chael i s - Ment en , Veloc idad=Vmax [ S ] / [ S ] + ?p , se usó para calcular V-,ax y Km usando el módulo de Cinética de Enzimas v. 1.1 de Sigma Plot (SPSS, Inc.) . Se obtuvieron las depuraciones intrínsecas al dividir Vmax por Km . Se determinaron los valores de IC50 para estudios de medición o interpolación media máxima con los valores de IC50 expresados como ± desviación estándar (n=2 ó 3 experimentos independientes) . Se determinó Ki por la ecuación de Cheng y Prusoff, ?? = I C50 / 1 + [ sus ra o ] / Km .

Re sul t ados : El microsoma de hígado humano lote # RQX (Tabla 1) , el Compuesto A tiene una depuración intrínseca 2-6 veces mayor que el Compuesto B.

Tabla 1 Parámetros cinéticos de activación del Compuesto el Compuesto B en microsomas de hígado humano Compuesto A Compuesto B ¡Concentraciones Probadas. mM .25, 0.5, 0.75, 0.5, 1, 3, 6 Vmax, nmol/min/mg 0.11±0.2 0.1310.02 Km, mM 0.8+0.27 3.131 0.51 Clint, µ?_./p???/p?9 0.11+0.02 0.04210.003 La activación del Compuesto A y el Compuesto B se inhibió por TAO con valores de IC50 de 0.910.1 µ? y 0.714.0 µ? para el Compuesto A y el Compuesto B, respectivamente (Tabla 2) . Se observó una inhibición completa (99 %) de la activación del Compuesto A a TAO 100 µ? . La concentración más alta de TAO probada con el Compuesto B fue de 10 µ , que dio por resultado 73±2 % de inhibición. Los valores de Ki de TAO fueron similares para el Compuesto A y el Compuesto B , 0.5 =0.1 µ? y 0.5+0.3 µ?, respectivamente. Como con TAO, KTZ inhibió la activación del Compuesto A y el Compuesto B. Los valores de IC50 fueron menores que aquellos para TAO: 0.2±0.1 µ? tanto para el Compuesto A como para el Compuesto B (Tabla 2) . Nuevamente, a KTZ 10 µ?, se observó inhibición máxima de 96+3 % y 49±1% para la activación del Compuesto A y el Compuesto B, respectivamente. Los valores de Ki fueron 0.01=0.03 µ? para el Compuesto A y 0.5 µ? para el Compuesto B.

Tabla 2. Inhibición de TAO y KTZ de activación en microsomas de hígado humano % de inhibición a Concentración IC50 i COMPUESTO Inhibidor conce tración máxima Probada (µ?) ( LlM ) ' (µ?) de inhibidor probado Compue s t o 1000 TAO 0. 9± 0 5 99% a ???µ? A n .1 0 . 1 (94% a 10µ?) Compue s t o 1000 TAO 0. 7i 0 5 ¦÷- 7312% a ??µ? B 0 .4 0 .3 Compuesto 1000 ??? 0. 2 ± 0 . 1± 96 ± 3 % a 10 µ M A 0 .1 0 . 03 Compuesto 1000 KTZ 0. 2 ± 0 . 1 + 3Sil* a ??µ? B 0 1 05 Conc 1 us iones : El Compuesto A y el Compuesto B se activan a araCMP por microsomas de hígado humano. El Compuesto A se activa a 2.6 veces mayor velocidad que el Compuesto B. KTZ y TAO inhibieron la activación de profármaco sugiriendo que se media por CYP3A4.

Ejemplo B: Niveles en hígado de dosis individual Se midió la activación de los profármacos in vivo después de la administración i.p. de bolo a ratones. Métodos : Ratones Swiss Webster machos, no ayunados, normales, (25 a 35 g de peso corporal, Harían Sprague Dawley, I ndi anápol i s , IN) se inyectaron i.p. con el Compuesto A o Compuesto B a 189 y 192 mg/kg, respec i amente, que corresponde a equivalentes molares de 100 mg/kg de ara-C. En momentos específicos de la pos - inyección , los ratones se anestesiaron y exsanguinaron vía punción cardiaca. El hígado completo se removió, y se congeló instantáneamente en nitrógeno líquido, y se homogenizó usando un homogeneizador Politron 10/34 PT (Bringmann Instruments, Westbury, NY) en 3 volúmenes de ácido perclórico (PCA) al 10 % (v/v) . Después de una centrifugación de 5 minutos a 2,500 x g, se neutralizó 1 mL de sobrenadante usando 0.3 mL de KOH 3M/KHC03 3 M y se mezcló completamente. Las muestras entonces se centrifugaron durante 5 minutos y los sobrenadantes resultantes se trataron con periodato a fin de remover los ribonucleotidos endógenos que de otro modo pueden interferir con la detección de araCTP . Para esto, se incubó un extracto de tejido de 100 µ?? con 4 µ? de periodato de sodio 0.5 M (Aldrich Chemical Co . , Milwaukee, WI, lote # 08009 BU) y 10 µ? de metilamina 1.8 M (Aldrich lote # 04526 DQ ) , pH 5.5) durante 30 minutos a temperatura ambiente. La reacción se obtuvo con la reacción de 2 ul de L-Rhamnose 1 (Aldrich lote # 06801 JS) . Las muestras resultantes se analizaron por CLAR como se describe ¦posteriormente . Para medir el araCTP de médula sanguínea, las muestras de médula sanguínea se enjuagaron de las cavidades de la médula de los fémures con 1.2 mi de solución salina en tubos Eppendorf pre-pesados . Después de la centrifugación durante 20-30 segundos ( mi crocent r í fuga Eppendorf, 14,000 rpm) y remoción del sobrenadante, se adicionaron 12 volúmenes de PCA al 3 % (v/v) al sedimiento celular de la médula ósea. Las muestras se sometieron a vórtice hasta que se disolvió bien el sedimento y se centrifugaron durante aproximadamente 10 minutos. Se neutralizaron diecinueve µ]1. del sobrenadante extraído a pH 7-8 usando 30 µ?, de KOH 1M/KKC03 1 M y nuevamente se centrifugó. Los sobrenadantes resultantes se trataron con periodato como antes. Se determinaron los niveles de araCTP de hígado y médula ósea por CLAR de fase de intercambio iónico (Hewlett Packard 1050) usando una columna Whatman Partisil 5 SAX (5 µp?, 4.6 x 250 mm) . Se inyectaron muestras (50 µ?,) en la columna en 70 % de amortiguador de fosfato de amonio 10 mM 30 % de amortiguador de fosfato de amonio 1M, ambos a pH 3.5 y que contienen 6 % de etanol . Se eluyeron los trifosfatos de nucleósido de la columna usando un gradiente lineal a 80 % de amortiguador de fosfato de amonio 1 M, pH 3.5/6 % de etanol, a una velocidad de flujo de 1.25 mL/min, se detectó araCTP por absorbancia UV (280 nm) y se eluyó usualmente entre 12 y 13 minutos. Se preparó una curva normal al adicionar cantidades conocidas de araCTP, en extractos de PCA de hígado de control o médula ósea de control antes de la neutralización y preparación, por consiguiente de las muestras de CLAR . Para obtener plasma, la sangre se transfirió a tubos de mic ro reco 1 e c c i ón heparini zados y se centrifugó en una mi crocent r í fuga Eppendorf a 14,000 rpm durante 2 minutos. El plasma resultante se recolectó, se colocó en hielo seco y se almacenó subsiguiente a menos 20°C. El día del análisis, las proteínas se precipitaron al adicionar 1 mL de acetonitrilo a 100 µ?_. de plasma. Después de 10 minutos de centrifugación (microcentrí f uga Eppendorf, 14,000 rpm, el sobrenadante se removió y se secó en un Savant SpeedVac Plus SC119A. Las muestras se recons ituyeron con 110 de amortiguador de fase móvi 1 ( KH2 P0 20 mM , pH 4.5) , se trataron con sonido durante 5 minutos y se centrifugaron durante 30 segundos. Los sobrenadantes se realizaron por CLAR de fase invertida (Hewlett Packard 1090) equipada con una columna Alltech C18 (5 µ??, 4.6 mm x 250 mm) . Después de la inyección de la muestra de 50 µ?-. en amortiguador de fase móvil, la concentración de acetonitrilo se incrementó a 10 % durante 10 minutos, luego a 50 % durante 15 minutos. Los tiempos de elusión para araC y profármacos fueron aproximadamente 3 y 19 minutos, respectivamente. Se detectaron araC y profármacos por absorbancia a 280 mm y se cuantifico usando curvas normales obtenidas con muestras de plasma tratadas con alcohol procesadas como antes. Los resultados se expresan como media ± error estándar de la media. Se analizaron los datos por mediciones repetidas ANOVA, . seguido por la Prueba Tukey HSD pos-hoc para comparaciones en puntos de tiempo individuales cuando es apropiado. Se consideró estadísticamente significativo un valor p de menos de 0.05. Las líneas punteadas en las figuras indican LOQ (límite de cuant i f i cae i ón ) usando el método CLAR indicado . Re su 11 ado s : El Compuesto A y el Compuesto B generaron altos niveles de araCTP en el hígado (Figura la.) que tuvieron máximos a 60 minutos después de la inyección a 69.89 ± 6.38 y 27.00 ± 4.04 mmol/g para el Compuesto A y el Compuesto B, respectivamente. El compuesto A produjo significativamente mayores (p<0.05) niveles hepáticos de araCTP que el Compuesto B en todo el punto de tiempo de 4 horas-. Los niveles plásmicos de profármaco fueron similares para el Compuesto A y el Compuesto B (p<0.01; Figura Ib.) . Los niveles plásmicos de araC fueron mayores en ratones administrados con Compuesto A (p<0.01 para 0.5, 1 y 2 horas; Figura le.) , que correlacionan más con los niveles hepáticos de araCTP que con los niveles plásmicos de profármacos. Esto sugiere que el araC plásmico se puede derivar del araCTP hepático en lugar de la degradación del profármaco en plasma. El araCTP de médula ósea estaba en o por abajo del nivel de cuant i f i cae i ón (3 mmol/g) en todas las muestras sugiriendo buena búsqueda de objetivo del hígado.

Conc 1 us iones : Tanto el Compuesto A como el Compuesto B dieron por resultado niveles significativos de araCTP en el hígado cuando se adminis raron por inyección i.p. de bolo. El Compuesto A da por resultado aproximadamente 2 veces más niveles hepáticos de araCTP que el Compuesto B. No se detectó araCTP en la médula ósea de los animales tratados con cualquier compuesto. Los niveles plásmicos de profármaco fueron similares para ambos profármacos, pero los niveles plásmicos de araC fueron 2 veces mayores con el Compuesto A. En base a la correlación relativa de los niveles plásmicos de araC a los niveles hepáticos de araCTP, el araC plásmico se presume que se genera por el araCTP hepático, posiblemente por des fos for i lac ión de araCTP a araC y fuga de araC de las células de hígado de regreso al plasma.

Ejemplo C: araCTP hepático cuando se distribuye por infusión i.v. continúa. La activación de profármacos a araCTP y mantenimiento de niveles hepáticos de araCTP se midió en ratas que se instrumentaron para la distribución de fármaco por infusión i.v. continua.

Métodos : Ratas macho Simonsen Albino (derivadas de Sprague Dawley, de Simonsen Laboratories, Inc., Gilroy, CA) se anestesiaron con una inyección intraperitoneal de 0.25 mi de una mezcla anestésica que contiene Cetamina 150 mg ("Vitamina", 100 mg/ml, Phoenix Scientific, Inc. St Joseph, MD) , 10 mg de xilazina (100 mg/ml, The Butler Company, Columbus, OH) y 5 mg de morfina (15 mg/ml, Marsam Pharmaceuticals, Inc., Cherry Hill, NJ) por 1.93 mis. Un catéter de tubería' PE-50, romo, llenado con solución salina (Intramedic. Becton Dickinson, Sparks, MD) se insertó en la vena yugular, exteriorizado entre la escápula y se conectó a un sistema de infusión constante con correa y destorcedor (Lomir Bioraedical , Inc. Malone, NY and Harvard Apparatus, Inc. , South Natick; MA) . La tubería se rellenó con solución salina heparinizada y se selló, y los animales se dejaron recuperar durante 1 a 7 días. Se introdujeron los animales con instrumentos en los siguientes protocolos de infus ión : Compuesto A: Se infundió el Compuesto A a 200 mg/kg/24 horas de equivalentes de araC (CE) durante 2, 4, 8, 16, 24 ó 48 horas ( n= 4 - 5 / g rupo , excepto en grupo de 48 horas donde n=l) . Compuesto B: El Compuesto B se infundió a 200 mg/kg/24 horas de CE durante 2, 4, 8, 16 ó 48 a horas ( n = 3 - 5 /grupo ) . Además, se infundió el Compuesto A a la misma dosis durante 4 horas (n=3) . Compuesto C: El Compuesto C se infundió a 200 mg/kg/24 horas de CE durante 2, 4, 8, 16, 24 ó 48 horas (n=3 - 5/grupo) .

Respuesta de dosis: El Compuesto A se infundió a 144 y 200 mg/kg/24 horas de CE durante 4 horas ( n = 4 - 5 /grupo ) . El compuesto B se infundió a 50, 100 y 200 mg/kg/24 horas de CE durante 24 horas (n=3-5/grupo) . Después d-e las varias duraciones de infusión, los animales se anestesiaron por inyecciones intracatéter de la mezcla anestésica descrita anteriormente. Se obtuvieron muestras sanguíneas vía punción cardiaca usando una aguja calibre 23 unida a una jeringa de 3 ce revestida con heparina. Las muestras hepáticas se escindieron y congelaron de golpe en nitrógeno líquido usando una pinza de congelamiento y se procesaron como se describe en el Ejemplo B. Las muestras se analizaron para araCTP hepático como se describe en el Ejemplo B. Se recolectaron muestras de plasma y médula ósea y se analizaron para niveles plásmicos de profármaco, niveles plásmicos de araC y niveles en médula ósea en araCTP como se describe en el Ejemplo B.

Re sul ados : - -* La infusión continua del Compuesto A a 200 mg/kg/24 horas dio por resultado niveles hepáticos de estado estable de araCTP por 4 horas (12.84 ± 1.50 nmoles/g y se mantuvo un promedio de 13 ± 1 nmoles/g para las 44 horas restantes (Figura 2a) . Los niveles plásmicos de profármaco fueron similares para los tres compuestos que varían de 30-60 µ? durante el tratamiento de 48 horas. El Compuesto B y el Compuesto C generaron menos araCTP en el hígado que el Compuesto A. Estos estudios se realizaron de forma independiente; por lo tanto, para controlar la variación experimental potencial, el Compuesto A se administró a un grupo de animales en el estudio del Compuesto B. Los niveles hepáticos de araCTP de estos animales, medidos después de 4 horas de infusión, fueron similares a aquellos obtenidos en el mismo punto de tiempo en el estudio de 48 horas en el Compuesto A y dos niveles plásmicos de profármaco fueron idénticos para los dos compuestos sugiriendo diferencias en los niveles hepáticos de araCTP que no son debidos a ligeras diferencias en la f armacocinét ica . El araCTP de médula ósea estaba en o por abajo del nivel de cuantif icación (3 nmol/g) en todas las muestras. La respuesta a la dosis de los niveles hepáticos de araCTP se probaron al infundir el Compuesto B a 100 ó 50 mg/kg/24 horas durante un periodo de 24 horas o al infundir el Compuesto A a 144 mg/kg/24 horas durante un periodo de 4 horas. Como se muestra en la Figura 2b, los niveles hepáticos de araCTP fueron sensibles a la dosis para ambos profármacos.

Conclusiones : La infusión continua del Compuesto A, B ó C da por resultado niveles significativos y mantenidos de araCTP en el hígado. La adminis ación del Compuesto A dio por resultado más araCTP hepático que el compuesto B o el Compuesto C con similares niveles plásmicos de profármaco sugiriendo que las diferencias son debidas a las diferencias en la velocidad de activación en lugar de la f armacocinética.

Ejemplo D: Selección, objetivo del hígado La especificidad hepática de la distribución de araCTP por estos profármacos activados con CYP3A se midió in vivo al comparar niveles hepáticos de araCTP para activar metabolito en otros órganos. En particular, la selección como objetivo del hígado con relación a la médula ósea se evaluó debido a que la médula ósea es el órgano objetivo de toxicidad para la citarabina.

Métodos : Se realizaron estudios de distribución del tejido en ratones y ratas como se describe en los Ejemplos B y C. En estos estudios, se obtuvieron muestras de hígado, plasma y médula ósea en la necropsia para evaluar la selección como objetivo del hígado. Se realizaron estudios similares con el compuesto de origen, citarabina, para mostrar la utilidad como un agente de selección de objetivo del h í gado . Los resultados se expresan como media ± error estándar de la media. Cuando es apropiado, se evaluó AUC desde tiempo cero al último punto de tiempo del estudio. Se calcularon los índices de selección como objetivo del hígado (LTI) al dividir el AUC de araCTP hepático o el AUC para araC de plasma (LTI de plasma) o por el AUC para el araCTP de médula ósea (LTI de médula ósea) para cada compuesto. Para los estudios de infusión continua, los niveles de araCTP de estado estable se dividieron por los niveles de araC plásmicos de estado estable.

Resultados : Como se describe en el Ejemplo B, se detectaron altos niveles de araCTP en el hígado cuando se administraron el Compuesto A, Compuesto B ó Compuesto C a ratones ó ratas. La Tabla 3 resume los niveles pico y los AUC fueron los estudios de inyección y punto de bolo. El araCTP de médula ósea estaba en por abajo del nivel de cuan t i f i cae i ón (3 nmol/g) en todos los estudios sugiriendo buena selección como objetivo del hígado. En contraste, se detectaron altos niveles (19 nmol/g) de araCTP en la médula ósea si se administran 100 mg/kg de citarabina de una manera similar. No hay evidencia que la médula ósea active directamente los compuestos a araCMP; cualquier araCTP potencial probablemente se deriva de la activación de araC tomado del plasma y fosforilado a araCTP en la médula ósea. Se detecta araC en el plasma de estos animales y en todos los estudios parece correlacionar con los niveles hepáticos de araCTP. Como se muestra en la Tabla 3, los valores de AUC de araC plasmáticos varían de 3-22 µM*hr en ratones y ratas después de la administración i.p del Compuesto A o Compuesto B. La estimación de un índice de selección como objetivo del hígado (LTI) al tomar la relación de la exposición de araCTP hepático a araC plásmico durante la duración del experimento sugiere una selección de 19.2-27 veces como objetivo de araCTP al hígado con relación a la exposición periférica. Estos valores son 100 veces mayores que el LTI para citarabina. Se pueden comparar de manera similar valores de estado estable cuando el Compuesto A, Compuesto B ó Compuesto C se distribuye por infusión i.v. continuo (Tabla 4) . El LTI varía de 5 —> 12 en aquellos estudios en los cuales 1000 veces más que el LTI para citarabina se administró a una dosis 10 veces mayor. Tabla 3: Selección como objetivo de hígado de ratón in vivo de 4- piridilo (compuesto A, Compuesto B) , profármacos HepDirectos de citarabina. Los compuestos se administraron a 100 mg (equivalentes de citarabina) /kg usando una inyección IP individual asm ) nM) Compuesto AUCo.s hr de AUC hr d LTI Profármaco araC (Hígado/plasma) H Plásmico plásmico /nmol/g/n ) (nmcl/g*hr) ( M*hr) Compuesto Ra a 147.1 19.

AraC Ratón N/A <0.

Tabl a 4 : Infusión continua de 4 -piridilo (Compuesto A, Compuesto B ó Compuesto C) , profármacos HepDirectos de citarabina en ratas, Se administraron los profármacos una dosis de 200 mg (equivalentes de ci t arabina ) / kg / di a por infu sión intravenosa continua. *AraC se da a 2000 mg/kg/día Compuesto AraCTP LTI a 24 horas (estudio) hepático a (Hígado/plasma) 4 hr (nmol/g/µ?) (nmol/g) Compuesto 12.8 7.5 Compues o 6.4 >12 Compuesto 9.9 Compuesto AraCTP AraCTP LTI a 24 horas (estudio) ¡pático a hepático, (Hígado/ lasma) 4 hr 24 hr (nmol/g/ µ?) nmol/g) (nmol/g) AraC 3 a 2 hr <2.26 <o .01 Conclusiones : El compuesto A. el Compuesto B y el Compuesto C seleccionan como objetivo de forma eficiente para araCTP al hígado, reduciendo la exposición periférica por aproximadamente 20 veces cuando se administran de forma intraperitoneal o por aproximadamente 10 veces cuando se administran por infusión intravenosa continua. La selección como objetivo representa una mejora de 100-1000 veces con respecto a araC.

Ejemplo E: Estabilidad Acuosa Las estabilidades acuosas de los compuestos se midieron como una función del pH y concentración de amor iguador .

Métodos : Se disolvieron el Compuesto A y el Compuesto B en agua a 500 µ? (0.23 mg/mL) como soluciones concentradas. Se incubaron soluciones diluidas (50 µ?) a 37°C en un incubador de baño seco Fisher Scientific (catálogo #11-718-2) con muestras; recolectadas cada 24 horas y almacenas a -80°C. Las muestras plásmicas (100 µ??) se enfrió rápidamente con 1 mL de acetonitrilo . Cuando se recolectaron todas las muestras plásmicas, las muestras se descongelaron, se centrifugaron durante 10 minutos a 14,000 rpm en una microcentrífuga Eppendorf, y se removió 1 mL del sobrenadante y se evaporó a sequedad durante 2 ó 3 horas con calor medio (aproximadamente 37°) . Las muestras se re -suspendieron en 120 µL de amortiguador de fase móvil antes de la inyección a CLAR. Las muestras se analizaron en una CLAR HP1090 ó HP1100 (Hawlett Fackard) usando una columna C18 Allterch Econosphere, 150 mm x 4.6 mm (catálogo #70065), con una columna protectora C-18 Alltech Eoconsphere, y 7.5 mm, por 4.6 mm (catálogo #96121). Las muestras se fluyeron con un gradiente de metanol : 0 % durante 5 minutos luego incrementando a 10 % a los 10 minutos, 30 % a los 20 minutos y 60 % a los 25 minutos. La columna se dejó equilibrar en 0 % de metanol durante 10 minutos antes de la siguiente inyección. La velocidad de flujo fue de 1 mL/minuto con una temperatura de columna de 40 °C. Los profármacos se eluyeron en aproximadamente 19.5 minutos y se monitori zaron por absorbancia UV 280 nm. Para profármacos en condiciones acuosas, se empleó el mismo método excepto el gradiente de metanol que fue como sigue: 0 % durante 5 minutos, incrementando 10 % a los 10 minutos y 30 % a los 20 minutos con el profármaco que se eluye en aproximadamente 20 minutos.

Resultados : Tanto el compuesto A como el compuesto B son bastante estables en solución acuosa con t90 de >6 días en de fosfato de potasio 10 m (Pi), pH 7.4, y citrato 10 mM, pH 5.0. La estabilidad del compuesto A fue también mayor a 6 días en Pi 100 mM, pH 7.4, pero la estabilidad del Compuesto B fue ligeramente menor en este amortiguador con una t90 de 4 días. La estabilidad de ambos compuestos disminuyó en citrato 100 mM, pH 5.0, con una t90 calculada de 2 días y 1.7 días para el compuesto A y el Compuesto B respectivamente.

Conclusiones : La estabilidad de los profármacos de 4-piridilo es bastante buena, pero los compuestos son ligeramente menos estables a pH bajo con altas concentraciones de amortiguador.

Ejemplo F: Solubilidad Las solubilidades del Compuesto A y el Compuesto B se midieron bajo una variedad de condiciones para identificar formulaciones potenciales para la administración in vivo.

Métodos : La solubilidad del compuesto A y el Compuesto B se evaluó en Pi 0.5 M , pH 8.0, citrato 0.5 M, pH 7.0 y citrato 0.5 M, pH 4.0. Con cada uno de los tres sistemas de amortiguador, las soluciones de saturación del Compuesto A y el Compuesto B se prepararon como sigue. Un objetivo de 30 mg del Compuesto A y 159 mg del Compuesto B se transfirieron a 4 frascos separados de vidrio limpios de 4 ce y se adicionó 1.0 mL de amortiguador a cada frasco. Los frascos resultantes se sellaron y pusieron en equilibrio al agitar en tambor a 25°C durante un mínimo de 24 h. Al final del periodo de incubación, el profármaco que no estuvo en solución se removió de las muestras por filtración a través de un filtro de jeringa de nylon con un tamaño de poro de 0.45 µp?. Estas muestras diluidas se analizaron por el método de CLAR del ejemplo E.

Resultados : La solubilidad del Compuesto A fue de 2.9 mg/mL en amortiguador de pH 8, 2.6 mg/mL y 45.8 mg/mL a pH 4.0. La solubilidad del Compuestos B fue de 10.2 mg/mL en el amortiguador de pH, 9.0 mg/mL a pH 7.0 y 94.6 mg/mL a pH 4.0.

Conclusiones : Tanto el Compuesto A como el Compuesto B son relativamente solubles en soluciones de pH neutral con la solubilidad del compuesto B que excede aquella del Compuesto A. La solubilidad de ambos compuestos se incrementan sustancialmente cuando se preparan a pH 4.

Ejemplo G: Estabilidad en Plasma La estabilidad del Compuesto A, Compuesto B y el Compuesto C en plasma se midió durante 6 días para probar si los compuestos son bastante estables in vivo.

Métodos : Plasma humano mezclado de hombre y mujer (Bioreclamation Inc., Hickville, NY, catalogo # HMPLNAHP, lote # BRH02236) que contienen heparina como anticoagulante, pH de todos los alícuotas de plasma fue de 8.3. Se disolvieron el Compuesto A y el Compuesto B en agua a 500 µ? (0.23 mg/mL) como soluciones concentradas, se diluyeron a 50 µ? en muestras de plasma y se incubaron a 37°C en un incubador de baño seco Fisher Scientific (catálogo #11-718-2) con muestras recolectadas cada 24 horas y almacenadas a -80°C. Las muestras (100 µL) se enfriaron con 1 mL de acetonitrilo . Cuando se recolectaron todas las muestras, las muestras se descongelaron, se centri ugaron durante 10 minutos a 14,000 rpm en una microcentrifuga Eppendorf, y se removió 1 mL del sobrenadante y se evaporó a sequedad durante 2 a 3 horas con calor medio (aproximadamente a 37°C) . La muestras se re-suspendieron en 120 µ?. de amortiguador de fase móvil antes del análisis por CLAR. Para las muestras de plasma, se inyectaron muestras de 40 µ??? ó 50 µ?? en la columna descrita en el Ejemplo E con amortiguador de fase móvil, amortiguador de fosfato de potasio 20 mM, pH6.2 (Fisher Scientific, catálogo # P261-1, varios lotes). Todos los otros análisis por CLAR se realizaron como se describe en el Ejemplo E.

Resultados: Las T ½ en plasma humano a 37°C fueron 6 ± ¾ días para todos los compuestos.

Conclusiones : Con las vidas medias de >1 día en plasma humano, el Compuesto A, el Compuesto B y el Compuesto C no se espera que sufran degradación significativa in vivo.

Ejemplo H: Toxicidad aguda en ratas Se evaluó la tolerabilidad y seguridad del Compuesto A a una dosis de 2000 mg/kg/24 horas después de 24 horas de infusión i.v. continua.

Métodos : Ratas Simonsen macho y hembra se instrumentaron para infusión continua como se describe en el Ejemplo C. En el día de tratamiento, las ratas se engancharon a la correa, de infusión constante y se les dio libre acceso al alimento y agua. Se trataron 3 ratas macho y 3 ratas hembras con el Compuesto A con a una dosis de 2000 mg/kg/24 horas usando una velocidad de flujo de 2.08 ml/kg/hr. Se disolvió el Compuesto A a 42.5 mg/ml en agua · y el pH se ajustó a 4 con HC1 1M. La osmolaridad se ajustó a aproximadamente 300 mOsm usando NaCl 5M. Como un control, se sometieron a infusión 2 ratas macho con solución salina pH 4 durante el mismo periodo de tiempo. La apariencia y colocación de las ratas se monitorizó de forma regular y se registró acerca de su comportamiento cada 1-3 horas durante el día del trabajo. Los animales se anestesiaron en una cámara suministrada con . un vaporizador Fluotec 3 con isoflurano al 5 % (Abbot Laboratorios, NDC 0074-3292-02) en 100 % de oxígeno a una velocidad de flujo de 1.5 a 2 litros por minuto. Se obtuvieron muestras sanguíneas durante la infusión i.v. vía punción cardiaca usando una aguja de calibre 23 unida a una jeringa de 3 ce revestida con heparina . La sangre de cada animal se dividió entre microtubos que contienen K2 - EDTA (Becton Dickinson 36/5974) y los microtubos con separadores de gel para el suero (Becton Dickinson 36/5956) y heparina de litio para la recolección de plasma (Becton Dickinson 36/5958) . Si es posible, se removió la orina de la vedija usando una aguja calibre 23 a una jeringa de 3 ce. Se recolectaron muestras de tejido en el siguiente orden: hígado, ríñones, intestino delgado, vejiga y médula ósea. El intestino delgado se dividió en tres porciones iguales para representar muestras del duodeno, jejuno e íleo; se removió manualmente la materia fecal por presión deslizante suave usando un fórceps romo. De cada tejido, se colocó una porción en formalina amortiguada al 10 % para histología. Para medir las células nucleadas de la médula ósea, las muestras de médula ósea se enjuagaron de las cavidades de la médula de los fémures con 1 mi de PBS (c/o Ca++ o Mg++) y se trituraron rigurosamen e y se sometieron a vórtice para separar las células. Para el conteo celular, se mezclaron 50 µ??? de sangre tratada con EDTA o enjuague de médula ósea suspendida en PBS con 450 µ??? o ' 950 µ?> , respectivamente, de solución de tinción nuclear que contiene 0.19 mg/mL de violeta cristalina (Sigma # C-1658, 14 lote 112H3660) en ácido acético 1 M, y se incubó a temperatura ambiente durante al menos 5 minutos. Después de un breve tratamiento en vórtice, se colocó una alícuota de 10 µ? de la mezcla en un hemocitómetro y las células se contaron usando un microscopio Nikon Optiphot-2. Las muestras sanguíneas se contaron bajo un objetivo de 40x para evaluar el número de células mononucleares (linfocitos y monolitos) y células pol imorf onucleares (PMN, incluyendo granulocitos del tipo neutrófilos, eosinófilos y basófilos) . Las células nucleadas de médula ósea se contaron bajo un objetivo de lOx. Las muestras sanguíneas tratadas con EDTA se presentaron a LabCorp (San Diego, CA) para análisis de hematología incluyendo números de eritrocitos y plaquetas, hemoglobina y hematocritos . También se analizó el análisis de química sérica por LabCorp. Los especímenes de te ido de los ratones tratados se codificaron y enviaron en formalina a Compara ive Biosciences (Mountain View, CA) para la preparación de secciones de tejido teñidas con hematoxi 1 ina/eos ma y evaluación histopatológica .

Resultados : El compuesto A se toleró bien a altas do sin diferencias significativas en el comportamiento señaladas entre los animales tratados con el fármaco, los animales tratados con el vehículo o los animales de control no tratados. En la necropsia, se notó que los estómagos de todos los animales con perfusión estaban vacíos, pero no se observaron otras ¦diferencias. No se midieron el peso corporal y el consumo de alimento antes o durante el protocolo de infus ión . Se evaluaron la sangre, médula ósea y secciones de tejido para varios parámetros. Una cuestión fue del potencial para la hepatoto icidad después de la exposición a altos niveles del compuesto A o toxicidades ostensibles asociadas con la formulación. Como se describe anteriormente, no se notó toxicidad ostensible en el tratamiento de 24 horas . Todos los parámetros de química sérica y hematología estuvieron en general dentro de intervalos normales. Unas pocas muestras dieron origen a valores atípicos aparentes en comparación con la temperatura publicada, pero ni fueron diferentes de los controles no tratados ni se consideraron toxicológicamente pertinentes. De todos los parámetros séricos evaluados, solo los niveles séricos de trigl icáridos estuvieron fuera del intervalo normal. Se midieron las células mononucleares sanguíneas, PMN y cuentas de médula ósea para probar los potenciales exactos agudos en la hematología. No se anticiparon diferencias significativas notables en este corto periodo de tiempo. En realidad, no se detectaron diferencias en células mononucl no era eares sanguíneas o células PMN entre los animales no tratados, los tratados con vehículo o los tratados con fármaco. Tampoco fueron diferentes las células nucleadas de la médula ósea entre los animales tratados con vehículo y los animales tratados con fármaco. Las muestras de tejido de hígado, riñon, intestino delgado (duodeno, jejuno, ileo) , y vejiga urinaria se evaluaron todas por un patólogo. No se notaron hallazgos histopatológicos significativos en ninguna de las muestras.

Conclusiones : El Compuesto A fue bien tolerado por ratas cuando se administró por infusión intravenosa continua a las dosis durante al menos las primeras 24 horas.

Ejemplo I: Farmacología de Seguridad de 5 días en ratones Se evaluó la seguridad del Compuesto C con relación a aquella del Compuesto de origen, araC en un estudio de dosis repetida de 5 días en ratones machos normales.

Métodos : Se compró AraC de Sigma Chemical CO . (St. Louis, Mo, catálogo # C1768, lote # 39H5962) . El Compuesto C y araC se disolvieron en solución salina fisiológica estéril. Se prepararon soluciones concentradas diariamente a partir del fármaco pre-pesado. Pero todas las más altas concentraciones se prepararon al diluir las soluciones concentradas usando solución salina estéril adicional. Se refrigeró cualquier fármaco que no se use inmediatamente y se usó en el espacio de 24 horas. Todos los profármacos se dosificaron en equivalentes molares de citarabina (CE) . Se inyectaron ratones NIH Swiss Webster machos (25 a 33 g de peso corporal, Harían Sprague Dawley, I ndi anápo 1 i s , IN) i.p. con el Compuesto C, araC o vehículo una vez al día o en los días 0-4, aproximadamente 3 de 4 horas después del comienzo del ciclo de luz de vivero. Las dosis para el Compuesto C fueron 1000, 300, 100 y 30 mg/kg de equivalentes de nucleósido/dí a (igual a 1848, 554, 185 y 55.4 mg/kg/día) en tanto que se administró araC a 100, 30, 10 y 3 mg/kg/día. El vehículo fue solución salina. Se registraron los pesos corporales en los días 0-4 inmediatamente antes de la administración del compuesto y en el día 5 después del sacrificio. Todos los ratones se sacrificaron en el día 5 (23 -25 horas después de la última dosis i.p.) por desangrado bajo anestesia con halotano, y subsiguiente dislocación cervical. La sangre de cada animal se analizó para los parámetros de química sanguínea y hematología como se describe en el Ejemplo H. Se cortaron escindieron los hígados y se fijaron en formalina al 10 % amortiguada-neutral , y se enjuagó la médula ósea del fémur derecho usando 1 mi de PBS sin calcio o magnesio y las cuentas de células nucleadas se midieron como en el Ejemplo H. Las muestras sanguíneas tratadas con EDTA se presentaron a LabCorp (LabCorp, San Diego, CA) para análisis de hematología incluyendo número de eritrocitos y plaquetas, hemoglobina y hematocrito. También se realizó el análisis de química sérica por LabCorp. Los especímenes de tejido de los ratones tratados con vehículo o 100 mg/kg de araC ó 1000 mg/kg CE del Compuesto C se codificaron y enviaron en formalina a Comparative Biosciences (Mountain View, CA) para la preparación de secciones de tejido teñidas con hematoxilina/eosina y evaluación hi s t opa t ol óg i ca . Los códigos de los especímenes para los estudios de histopatología fueron: #1-7, Compuesto C 1000 mg/kg/día; #33-40, araC 100 mg/kg/día; #65-72, vehículo de solución salina. Los resultados se expresan como media ± error estándar para 5-8 animales por grupo de dosis. Para los parámetros seleccionados de hematología, también se presentaron datos para cada animal como un % de la media del grupo con vehículo. Se realizó el análisis estadístico por un ANOVA unidireccional seguido por la prueba post-hoc de Dunnett para diferencias entre un grupo de control y grupos de múltiples dosis. Se consideró un valor p de menos de 0.05 como estadísticamente significativo.

Resul tados : Se inyectaron ratones i.p. con el Compuesto C ó araC a varias dosis durante 5 días y se sacrificaron 24 horas después de la dosis final. Ningún ratón llegó a estar claramente enfermo, como se oculta por el comportamiento y apariencia general. En tanto que araC indujo una caída progresiva y estadísticamente significativa en el peso corporal a la más dosis más alta (Figura 3a, 100 mg/kg/día) , el Compuesto C no tiene efecto significativo, aun a la más alta dosis (1000 mg/kg/día de equivalentes de nucleósido) (Figura 3b) .

A 30 y 100 mg/kg/día, araC disminuyó significativamen e el número de células nucleadas de médula ósea, PMN en circulación, células mononucleares, y plaquetas (Figura 4) . A la más alta dosis de araC, se redujo la celularidad de la médula ósea a 11 % de aquella en los animales tratados con vehículo. Una dosis 30 veces mayor del Compuesto C (1000 mg/kg/día de equivalentes de nucleósido) ' se requirió para reducir el número de células nucleadas de médula ósea (Figura 4a) . En contraste a araC, el Compuesto C no afecta el número de PMN, de células mononucleares o de plaquetas, en cualquier dosis (Figuras 4 b - d ) . AraC y el Compuesto C afectaron de manera significativa los parámetros de las células sanguíneas rojas, pero a dosis 10 veces diferentes. El araC disminuyó los números de eritrocitos, hematocrito y hemoglobina significativamente a las dos dosis más altas, 30 y 100 mg/kg/día. También se observó una ligera reducción en los hematocrito con araC a 10 mg/kg/día. El compuesto C afectó de manera similar estos parámetros, pero a dosis diez veces mayores . El análisis por química sérica indicó que la mayoría de los analistas estuvieron sin afectar por cualquier compuesto. De manera específica, los parámetros de prueba de función hepática (bil irrubina , AST y ALT) fueron similares en los animales tratados con vehículo, araC, o Compuesto C. Se disminuyó de manera significativa la fosfatasa alcalina a la dosis más alta de araC únicamente. La albúmina y BUN permanecieron sin cambio para todos los tratamientos. Se disminuyó la creatinina y glucosa por araC a la dosis más alta (100 mg/kg/día) . También se disminuyó la glucosa por araC a 30 mg/kg/día y por el Compuesto C a 1000 mg/kg/día. El efecto ligero pero significativo del Compuesto C en la glucosa fue el único efecto del Compuesto C observado en cualquier parámetro de la química sérica. Un hi stopatól ogo en Comparative Biosciences evaluó especímenes de hígado, riñon e intestino delgado fijados en formalina a partir de ratones tratados con vehículo o 100 mg/kg de araC ó 1000 mg/kg de CE de Compuesto C y no se encontró cambios h i s t opat o 1 óg i c o s t oxi co 1 óg i carne nt e pertinentes en cualquiera de las muestras. Conclusiones : El Compuesto C fue > 30 veces más seguro que araC en un protocolo de tratamiento de dosis repetidas en 5 días en términos de puntos terminales hematol ógi eos que incluyen células nucleadas de médula ósea, P M periférica y células mononuel eares . No se observó hepatotoxicidad para cualquier Compuesto C o su compuesto de origen, araC . Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la presente invención, es el que resulta claro a partir de la presente descripción de la invención.

Claims (19)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1. Un compuesto de la Fórmula I:
2. Fórmula I caracterizado porque: M y V son cis entre sí y MH es citarabina; el 5' -oxígeno de la citarabina está unido al fósforo ; V es 4-piridilo; y profármacos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos . 2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el compuesto es un compuesto de la Fórmula III:
3. 3. Un método para tratar enfermedades de tejidos que expresan P450 en un animal, caracterizado porque comprende administrar Fórmula III: Fórmula III y sales y profármacos farmacéuticamente aceptables del mismo.
4. 4. El método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque la enfermedad de tejidos que expresan P450 se selecciona del grupo que consiste de cánceres del hígado, cánceres del colon e infecciones virales del hígado.
5. 5. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque la enfermedad de tejidos que expresan P450 es carcinoma hepatocelular .
6. 6. El método de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado porque la enfermedad de tejidos que expresan P450 es carcinoma colorrectal .
7. 7. Un método para prevenir recurrencia de cánceres en tejidos que expresan P450 después del tratamiento médico o quirúrgico para cánceres en un animal, caracterizado porque comprende administrar un compuesto de la Fórmula III: Fórmula III y sales y profármacos farmacéuticamente aceptables del mismo.
8. 8. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el animal está libre de cáncer.
9. 9. El método de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque el animal está en remisión de cánceres y la administración de un compuesto de la Fórmula III previene desarrollos adicionales de los cánceres.
10. 10. Un método para incrementar el índice terapéutico de citarabina, caracterizado porque comprende administrar un compuesto de la fórmula III: NH2 Fórmula III y sales y profármacos farmacéuticamente aceptables del mismo.
11. 11. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una cantidad farmacéuticamente efectiva de un compuesto de la fórmula I Fórmula I en donde : M y V son cis entre sí y MH es citarabina; el 5' -oxígeno de la citarabina está unido al f sforo ; V es 4-piridilo; y profármacos y sales farmacéuticamente aceptables y excipientes farmacéuticamente aceptables.
12. 12. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 11, caracterizada porque comprende una cantidad farmacéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula III: Fórmula III
13. 13. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una cantidad farmacéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula I : Fórmula I en donde : M y V son cis entre sí y MH es citarabina; el 5' -oxígeno de la citarabina está unido al fósforo; V es 4-piridilo; y sales farmacéuticamente aceptables del mismo, y una cantidad farmacéuticamente efectiva de un agente oncolítico, o sales del mismo, y excipientes farmacéuticamente aceptables .
14. 14. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 13, caracterizada porque comprende una cantidad farmacéutica efectiva de la Fórmula III: Fórmula III
15. 15. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el agente oncolítico se selecciona de un grupo que consiste de busulfano, carboplatina, cisplatina, miriplatina, temozolomida , tiotepa, melfalan, ifosfamida , ciclofosfamida, clorambucilo , doxorrubicina , daunorrubicina, epirrubicina, indarrubicin , plicamicina, valrrubicina , dactinomicina, gemcitabina, floxuridina, fluorouracilo , mercaptopurina , tioguanina, metotrexato, mitomicina, etopósido, paclitaxel, docetaxel irinotecan, topotecan, etopósido, tenipósido, nedaplatina, carmustina, doxifluridina , cladribina, fludarabina, carmustina, mercaptopurina, tioguanina, azatoxina, camptotecina , lurtotecan, 9-aminocamptotecina, pirarrubina, neocarzinoestat ina , caliqueamicina, esperamicina y luroteca.
16. 16. Un método para el tratamiento de cánceres en tejidos que expresan P450, caracterizado porque comprende administrar un compuesto de la Fórmula III: Fórmula III y sales y profármacos farmacéuticamente aceptables del mismo; y administrar una cantidad farmacéuticamente efectiva de un agente oncolítico.
17. 17. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el agente oncolítico y el compuesto de la Fórmula III se administran de manera separada.
18. 18. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el agente oncolítico y el compuesto de la Fórmula III se administran de manera simultánea.
19. 19. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el agente oncolítico se selecciona de un grupo que consiste de busulfano, carboplatina , cisplatina, miriplatina, temozolomida , tiotepa, melfalan, ifosfamida, ciclofosfamida , clorambucilo, doxorrubicina , daunorrubicina, epirrubicina , indarrubicina , plicamicina, valrrubicina , dactinomicina , gemcitabina, floxuridina, fluorouracilo, mercaptopurina, tioguanina, metotrexato, mitomicina, etopósido, paclitaxel, docetaxel irinotecan, topotecan, etopósido, tenipósido, nedaplatina, carmustina, doxifluridina , cladribina, fludarabina, carmustina, mercaptopurina, tioguanina, azatoxina, camptotecina , lurtotecan, 9-aminocamptotecina, pirarrubina, neocarzinoestatina , caliqueamicina, esperamicina y luroteca.