MXPA05003607A - Compuestos neurologicamente activos. - Google Patents

Compuestos neurologicamente activos.

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MXPA05003607A
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MX
Mexico
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disease
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Jeffrey Barnham Kevin
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Prana Biotechnology Ltd
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Abstract

La presente invencion se refiere a compuestos neurologicamente activos, que son compuestos heterociclicos que tienen dos anillos fundidos de seis miembros, con un atomo de nitrogeno en la posicion 1 y un grupo hidroxi o mercapto en la posicion 8, siendo aromatico al menos uno de los anillos. Tambien estan descritos procesos para la preparacion de estos compuestos y su uso como agentes farmaceuticos o veterinarios, en particular para tratar condiciones neurologicas, mas especificamente, condiciones neurodegenerativas, tales como el mal de Alzheimer.

Description

COMPUESTOS N EUROLÓGICAMENTE ACTIVOS La presente invención se refiere a compuestos neurológicamente activos, procesos para su preparación y su uso como agentes farmacéuticos o en veterinaria en particular, para el tratamiento de enfermedades neurológicas más específicamente, enfermedades neurodegenerativas como la enfermedad de Alzheimer. ANTECEDENTES DE LA I NVENCIÓN Todas las referencias, incluyendo cualesquiera patentes o solicitudes de patente, citadas en esta especificación se incorporan en la presente por referencia. No se hace admisión que cualquier referencia constituye la técnica anterior. La discusión de las referencias establece que sus autores hacen valer y los solicitantes reservan el derecho de cambiar la exactitud y pertinencia de los documentos citados. Se entenderá claramente que, aunque una variedad de publicaciones de la técnica anterior son referidas a la presente , esta referencia no constituye una admisión que cualquier de estos documentos forman parte del reconocimiento general común en la técnica, en Australia o en cualquier otro país. La longevidad se considera que es biológicamente fija para cada especie y el período de duración de vida humana es incierto, pero puede ser de hasta 120 años. Ya que la esperanza de vida ha subido significativamente en este siglo, los ancianos son un segmento que se incrementa en nuestra población y sus necesidades de cuidado de salud continuarán creciendo por décadas .
Aunque el envejecimiento normal se caracteriza por reducciones modestas en la masa y volumen del cerebro humano, que puede ser debido a la atrofia y/o muerte de células cerebrales, estos cambios son mucho más profundos en los cerebros de pacientes quiénes sucumben a una enfermedad neurodegenerativa. La mayoría de estas condiciones son esporádicas (es decir, no debido a mutaciones genéticas) y de causa desconocida, cientos de mutaciones diferentes en muchos genes han mostrado que provocan variantes familiares (hereditarios) de diversas condiciones neurodegenerativas. Muchas de las docenas o más genes que albergan esas mutaciones se descubrieron en la búsqueda para determinar la base genética de condiciones neurodegenerativas justo en los últimos diez años. Las condiciones neurodegenerativas desarrollan gradualmente después de un período largo de la función normal del cerebro, debido a la degeneración progresiva (es decir, disfunción de la célula nerviosa y muerte) de regiones específicas del cerebro. Ya que la expresión sintomática de la enfermedad ocurre cuando la pérdida de la célula nerviosa excede un "umbral" para la función continua (por ejemplo, memoria, movimiento) realizada por la región del cerebro afectado, el comienzo actual de la degeneración cerebral puede preceder la expresión clínica por muchos años. Las facultades cognitivas integrantes superiores e intelectuales llegan a ser progresivamente mejoradas e interfieren con la actividades de medios de vida diaria en condiciones neurológicas que resultan en demencia. La frecuencia precisa de demencia en la población de edad avanzada es desconocida, pero puede ser el 15% de las personas por arriba de 65 años de edad con 5% severamente y 1 0% ligeramente a demente moderadamente. La frecuencia de demencia severa aumenta del 1 % en los 65 años a 45% en los 85 años. Existen m uchas causas de demencia, pero la Enfermedad de Alzheimer (AD) relaciona el 50% de pacientes dementes sobre los 65 años de edad . La AD es una enfermedad degenerativa primaria del cerebro. Se caracteriza por disminución progresiva de funciones cognitivas como memoria, pensante, comprensión, cálculo, lenguaje, capacidad de aprendizaje y criterio. La demencia se diagnostica cuando estas disminuciones son suficientes para deteriorar las actividades personales de la vida diaria. La AD muestra un comienzo insidioso con deterioro lento. Esta enfermedad necesita ser diferenciada claramente de la disminución normal relacionada con la edad de funciones cognitivas. La disminución normal es m ucho menor, mucho más gradual y conduce a incapacidades más leves. El comienzo de la AD es generalmente después de los 65 años de edad, aunq ue el comienzo tem prano no es poco común. A medida que la edad avanza, la incidencia aumenta rápidamente (se duplica por bastante cada 5 años) . Esto tiene implicaciones obvias para el número total de medios de vida individuales con este trastorno como expectativa de vida aumenta en la población. La etiología de la demencia de la AD es confuso. Existe evidencia considerable de una predisposición hereditable de algunas formas de AD (revisado en St George-Hyslop, 2000) , y la expresión de ciertas isoformas de ApoE también ha sido enlazada con un riesgo superior de AD (Corder et al, 1 993; Czech et al 1994). La acum ulación tóxica de aluminio ha sido sugerida como un agente causativo en AD, aunque esta hipótesis ha sido ahora am pliamente substituida. Los cerebros de pacientes con AD presentan depósitos anormales que incluyen proteína ß-amiloideo (?ß). La ?ß es conocida por estar presente en los cerebros de individuos con ciertas enfermedades neurodegenerativas, pero no se sabe si es sintomática de un proceso de enfermedad implícita, o está actualmente implicada en la etiolog ía de la enfermedad. Por ejemplo, alg unos autores creen que los depósitos de ?ß pueden ser indicativos de un mecanismo de defensa normal del cerebro, en el cual el cerebro intenta retirar la ?ß; tales depósitos pueden estar presentes en los cerebros de individuos normales. Existe una mutación de proteína tau en la cual los embrollos neurofibrilares, pero ninguna de las placas amiloideas están presentes en el cerebro; esta condición es conocida como tauopatía. Una tentativa propuesta para la terapia de AD es inhibir la producción de ?ß en el cerebro. La disociación proteolítica de APP por BACE1 y ?-secretasa genera la longitud completa de ?ß, que se libera luego de las células (Nunan and Small, 2000) . Por lo tanto los inhibidores de ya sea BACE 1 o ?-secretasa pueden ser de valor terapéutico. Alternativamente, una variedad de estudios han mostrado que el colesterol puede influenciar la liberación de ?ß (Simons et al. , 1 998; Hartmann , 2001 ; Fassbender et al. , 2001 ; Frears et al. , 1999; Friedhoff et al. , 2001 ). Sin em bargo, existe desacuerdo en la técnica en cuanto el valor para disminuir los niveles de colesterol , y algunos investigadores consideran que el colesterol es inclusive, benéfico. Por ejemplo, Ji et al, (2002) ha sugerido que el enlace de ?ß con colesterol es posible prevenir la toxicidad de ?ß inhibiendo su oligomerización. En un enfoque alternativo, se ha propuesto que desembrollando el procesamiento proteolítico de la proteína precursora amiioidea (APP), que genera el monómero amiloideo de ?ß, puede ser posible una variedad de objetivos terapéuticos posibles (Shearman et al. , 2000; Sinha et al. , 1 999), y este enfoque está en una etapa temprana del desarrollo clínico. Intentos para promover la evacuación de ?ß del cerebro a través de la inmunización con ?ß, mientras que es eficaz en un modelo ratón transgénico para AD (Schenk et al. 1999), han demostrado que tienen efectos adversos significativos (Brower, 2002). También se ha sugerido que la deposición de fibrillas como amiloideas pueden también ser importantes en otras enfermedades neurodegenerativas. Estas incluyen la enfermedad de Parkinson, demencia con formación corporal de Lewy, atrofia del sistema múltiple, enfermedad de Hallerboden-Spatz, y enfermedad corporal de Lewy difusa. Una de las teorías que compiten de la etiología de AD es que la etapa o etapas causantes se extiende dentro de la trayectoria de la biogénesis intracerebral y acumulación de la proteína amiioidea ?ß (ver revisiones recientes por Selkoe, 2001 ; Beyreuther et al, 2001 ; Bush , 2001 ). Sin embargo, hasta la fecha ninguna de las drogas o agentes cuyo objetivo de esta trayectoria ha sido demostrado que tienen un efecto permanente sobre la modificación de la expresión clínica de la enfermedad o en prevenir o mejorar la disminución en la función cognitiva asociada con trastornos neurodegenerativos, incluyendo la enfermedad de Alzheimer.
Otra hipótesis es que la AD es provocada por la acumulación tóxica de ?ß amiioidea , debido en parte al exceso de enlace de cobre y cinc, iones metálicos q ue son abundantes en las regiones más afectadas. Además, se ha sugerido que cuando los iones Zn2+ y Cu2+ ¡nteractúan con ?ß, ocurre la ag regación de ?ß en fibrillas y plaquetas (Atwood et al . , 1998) ; confirmado por datos recientes de animales deficientes en Zn2+ sináptico (Lee et al . , 2002). También se ha sugerido que las interacciones de Cu2+-Ap activos con redox pueden generar H20 de 02 (Huang et al. , 1999) . Tanto Cu2+ como Zn2+ han demostrado afectar las interacciones de membranas de lípidos de ?ß (Curtain et al. , 2001 ) . El cerebro es un órgano que concentra iones de metal y evidencias recientes sugieren que un análisis en la homeostasis de metal juega un papel crítico en una variedad de enfermedades neurodegenerativas relacionadas con la edad . Características comunes de estas enfermedades incluyen la deposición de proteína desigual (cada enfermedad tiene su propia proteína amiioidea específica) y daño celular substancial como resultado del estrés oxidativo. En realidad los datos q ue ahora están acumulando rápidamente esas reacciones metaloq uímicas emergerían como el denominador común subyacente de los trastornos neurológicos amiloidogémicos tales como, enfermedad de Alzheimer, esclerosis am ilotrófica lateral (ALS) , enfermedades El cerebro es un órgano que concentra iones de metal y evidencias recientes sugieren q ue un análisis en la homeostasis de metal juega un papel crítico en una variedad de enfermedades neurodegenerativas relacionadas con la edad. Características com unes de estas enfermedades incluyen la deposición de proteína desig ual (cada enfermedad tiene su propia proteína amiloidea específica) y daño celular substancial como resultado del estrés oxidativo. En realidad los datos que ahora están acumulando rápidamente esas reacciones metaloquímicas emergerían como el denominador común subyacente de los trastornos neurológicos amiloidogémicos tales como, enfermedad de Alzheimer, esclerosis amilotrófica lateral (ALS) , enfermedades prion - incluyendo la Enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (CJ D), encefalopatías de espongioforme transm isibles (TSE), cataratas , trastornos mitocondriales, enfermedad de Parkinson y enfermedad de Huntington . En estos casos, la agregación patológica de una proteína específica es promovida por la actividad redox normal en un am biente fisiológico tipificado por la presencia de metales de transición y agentes reductores disponibles [Bush, 2000 (Curr Opin Chem Biol. 2000 Apr; 4(2) : 1 84-91 )]. Un método de tratamiento de AD utilizando yodoclorohidroxiq uinolina un antibiótico [también conocido como clioquinol (CQ)] , se describió y reivindicó en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 5 , 994,323 y 6, 001 ,852 por P. N . Geromylatos S.A. y en la solicitud de patente de los Estados Unidos No. 09/972 , 91 3 por Bush et al. CQ fue apartado como un antibiótico en 1970, debido a su asociación con un síndrome neurológico no común, neuropatía mielo-óptica subaguda (S ON), que se observó solamente en Japón en la década de los años 60, en pacientes que se considera han recibido la droga durante períodos largos y probablemente en dosis superiores de los recomendados en el tiempo (Shiraki, 1 975) . Sin embargo, la evidencia reciente sugiere q ue SMON fue provocado por una deficiencia de la vitamina B1 2 relacionada con el uso excesivo en una población excepcionalmente vulnerable, y por lo tanto podría rehabilitarse para estudiarse en un ambiente clínico (Yassin et al. , 2000; Bush and Masters, 2001 ). Sin embargo, resultados no ¡n vivo en modelos animales o en seres humanos se proporcionan en las patentes de Geromylatos y Bush. La US 5, 994,323 describe una com posición que comprende CQ y Vitamina B 1 2 y su uso para el tratamiento de "enfermedades o trastornos sensibles a la administración de CQ m ientras que inhiben efectos laterales detrimentales" de CQ. Estas enfermedades incluyen AD. La US 6, 001 ,852 describe un método de tratamiento de AD utilizando CQ, de preferencia junto con la Vitam ina B 12. Tanto la US 5, 994, 323 como la US 6, 001 ,852 sugieren una dosificación de 1 0-750 mg por día; la US 5,994,323 recomienda que si el tratam iento es durante un período largo la CQ debe darse intermitentemente, durante hasta 3 semanas en un tiem po seguido por un período de "lavado" de 1 -4 semanas. En la solicitud de los Estados Unidos No. 09/972, 913 CQ es referida exclusivamente en términos de su capacidad ' para disgregar depósitos de ?ß. Ningún otro mecanismo de neurotoxicidad es discutido. La PCT/US99/05291 por General Hospital Corporation describe el uso de CQ en combinación con queladores específicos de cobre y cinc para promover la disolución de placas am iloideas y la inhibición de la formación de placas amiloideas y/o la producción de ROS por ?ß. La US 6, 001 , 852 también sugiere que una composición que comprende CQ y Vitamina B 12 podría utilizarse en el tratamiento de la enfermedad de Parkinson; sin embargo, en este contexto se sugiere que CQ actúa principalmente por medio de clarificación de hierro de la substancia nigra. La eficacia de CQ en el tratamiento de AD estriba en su estabilidad para entrar en el CNS y después en el secuestrador de los metales de transición Cu, Zn y Fe de varias entidades de ?ß reduciendo así la toxicidad de ?ß y liberándose para evacuación. La efectividad de CQ es restringida por su pobre solubilidad acuosa que limita su biodisponibilidad oral. CQ también se sabe que sufre metabolismo conjugativo considerable y tiene una historia de toxicidad como se discutió anteriormente. El hecho de que CQ es un ligando de metal bidentado hace necesario el compromiso de al menos dos moléculas para cada ión metálico capturado. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA I NVENCIÓN La presente invención proporciona un medio para tratar condiciones neurológicas incluyendo aquellas caracterizadas por la reacción anormal entre proteínas y metales. Se han desarrollado ahora compuestos heterocíclicos que tiene dos anillos de 6 miembros fusionados con un átomo de nitrógeno en la posición 1 y un grupo hidroxi o mercapto en la posición 8 con al menos un anillo que es aromático a través de la optimización colectiva de una o más de las siguientes propiedades: (a) quelación metálica (como se define en adelante); (b) solubilidad acuosa; (c) toxicidad reducida de la célula; (d) propiedades de dispersión amiloideas; (e) permeabilidad de membrana apropiada para la penetración en el CNS; y (f) estabilidad metabólica. Estos compuestos incluye ejemplos de terapéuticos que se concentran en el CNS a través del transporte activo, contiene actividad antioxidante en adición de sus propiedades metálicas de quelación que en algunos casos conduce a propiedades metálicas de quelación mejoradas y demuestran una estrategia del profármaco que enmascara la porción 8-hidroxi u 8-mercapto para favorecer la penetración en el CNS y hace uso de la actividad conocida de esterasa que reside en la superficie interna de la barrera hemoencefálica (BBB). De acuerdo con la presente invención se proporciona un método para el tratamiento, mejoramiento y/o profilaxis de una condición neurológica que comprende la administración de una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula 1: I en donde R es O o S; R se selecciona independientemente entre H alquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido; aiquinilo opcionalmente sustituido; arilo opcionalmente sustituido; heterociclilo opcionalmente sustituido; un antioxidante; una porción de selección del objetivo; CN; halo; CF3; S03H; y OR2, SR2, SOR2, S02R2, NR2R3, (CH2)nNR2R3, HCNOR2, HCNNR2R3, CONR2R3, CSNR2R3, NCOR2, C02R2, CSR2 o S02NR2R3 en donde R2 y R3 se seleccionan independientemente entre H, alquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, alquinilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, un antioxidante, o una porción de la selección del objetivo y n es un número entero de 1 a 10; X se selecciona independientemente entre CH, CO, N y NH; Z se selecciona independientemente entre CH, CO, N, NH y O; Y está ausente o junto con el anillo al cual está unido forma un arilo opcionalmente sustituido de 5 ó 6 miembros o un heterociclilo opcionalmente sustituido de 5 ó 6 miembros; m es un número entero de 1 a 3; y p es un número entero de 1 a 4, sales, hidratos, solvatos, derivados, pro-fármacos, tautómeros y/o isómeros de los mismos a un sujeto que necesita de los mismos, con la condición de que: (i) al menos uno de X y Z es distinto de CH; (ii) fanquinona o sus tautómeros son excluidos es decir, R es O, R en la posición 7 es OH, X es CH y Y está ausente, entonces Z no es \ (iii) cuando R es O, Y está ausente, Z es CH, X es CH distinto la posición 3 don en l (iv) clioquinol es decir, cuando R es O, Y está ausente, Z y X son CH y m es 2, entonces R1 en la posición 5 no es cloro y R1 en la posición 7 no es yodo. Además de acuerdo con la presente invención se proporciona el uso del compuesto de fórmula I en la elaboración de un compuesto para el tratamiento, mejoramiento y/o profilaxis de una condición neurológica. La invención también proporciona el uso del compuesto de fórmula I para el tratamiento, mejoramiento y/o profilaxis de una condición neurológica. La invención además proporciona el compuesto de fórmula I para uso en el tratamiento, mejoramiento y/o profilaxis de una condición neurológica. La invención todavía proporciona además el uso del compuesto de fórmula I como un farmacéutico, de preferencia un agente neuroterapéutico o neuroprotector, de más preferencia un agente antiamiloidogénico. De preferencia, la condición neurológica es una condición neurodegenerativa, de más preferencia amiloidosis neurodegenerativa como la enfermedad de Alzheimer o la enfermedad de Parkinson . R es de preferencia O. R1 es de preferencia halo, arilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, alquilo opcionalmente sustituido, OR2, S R2, (CH2)nNR2R3, CONR2R3 y NCOR2 en donde n, R2 y R3 son como se definieron anteriormente. De más preferencia R es flúor; yodo; cloro; fenilo opcionalmente sustituido como 4-halofenilo, por ejemplo, 4-fluorofenilo o 4-clorofenilo; un grupo heteromonocíclico opcionalmente sustituido insaturado de 3 a 6 miembros q ue contiene 1 a 4 átomos de nitrógeno como im idazolilo o piridinilo; un grupo heteromonocíclico opcionalmente sustituido saturado de 3 a 6 miembros que contiene 1 a 4 átomos de nitrógeno como im idazolidinilo o piperazinilo; un grupo heteromonocíclico opcionalmente sustituido saturado de 3 a 6 miembros que contiene 1 a 2 átomos de oxígeno y 1 a 3 átomos de nitrógeno como morfolinilo; alquilo de Ci-4 opcionalmente sustituido como metilo o etilo; cicloalquilo de C2-6 opcionalmente sustituido como ciclopropilo; alcoxi de Ci-6 opcionalmente sustituido; tío opcionalmente sustituido ; CH2NR RS en donde R4 y R5 se seleccionan independientemente entre H y alquilo de Ci-4; o CONH(CH2)2R6 en donde R6 es heterociclilo opcionalmente sustituido. Y es de preferencia un fenilo opcionalmente sustituido; un grupo heteromonocíclico opcionalmente sustituido insaturado de 5 ó 6 miembros q ue contiene 1 a 4 átomos de nitrógeno como imidazolilo o piridinilo; o un grupo heteromonocíclico opcionalmente sustituido saturado de 5 ó 6 miembros que contiene 1 a 2 átomos de oxígeno y 1 a 3 átomos de nitrógeno como morfoliniío. Mientras que no se desee limitarse por la teoría, se cree que el sustituyente R1 tiene un efecto limitado, electrónicamente o estéricamente, en las propiedades quelantes de los compuestos de la presente invención. La substitución puede por lo tanto utilizarse para modular otros parámetros como citotoxicidad y propiedades físico-químicas incluyendo el número de donadores y aceptores de enlace de hidrógeno, lipofilicidad (ClogP, ElogP y LogD), solubilidad y área superficial polar. La modulación de estos parámetros contribuye a la optimización del perfil farmacocinético de los compuestos. También es postulado que cuando el sustituyente R está ubicado en las posiciones 2 y/o 7 además de modular la citotoxicidad y propiedades físico-químicas podrían afectar también la actividad si el sustituyente proporciona propiedades quelantes. Clases de compuestos ilustrativos de fórmula I son como sigue: 8-hidroxi-4(3H)-quinazoli nonas 8-hidroxi-quinazolina 8-hidroxi-quinoxalina 6-a]pirimidin-4-ona 0)-fenantrolin-5-ol a]pir¡m¡d¡n-4-ona n-4-ol pirido[2-3-d]piridazin-8-ol [1 ,7]naftiridin-8-ol [1 ,5]naftririd¡na-4,8-diol [1 ,5]naftiridina-8-ol pirido[3,4-b]pirazin- pir¡do[3,4-b]pirazin- p¡r¡do[4,3-d]pirimid¡n-8-ol 4-hidroxi-4a,8a-dihidro-p¡rano[3,2,b]piridin-2-ona 8-hidroxi-6H-[1 ,6]naftirid¡n-5-ona 8-hidroxi-6H-[1 ,6]naftirin-5-ona dibenzo[a, g]quinolizin-8-ona 4-hidroxi-1 H-pirido[3,2-d]piridin-2-ona en donde R1 , m, n y p son como se definieron anteriormente y q es un número entero de 1 ó 2. El g rupo 8- idroxilo u 8-mercapto en los compuestos de la fórmula I pueden bloquearse para formar un profármaco, en particular un profármaco de éster. El 8-hidroxi u 8-mercapto presenta un sitio principal de metabolismo para el compuesto de fórmula I : conjugación con ácido glucurónico o sulfato da una especie hidrofílica fácil de ser excretada. Tales conjugados probablemente no pasen la barrera hemoencefálica. El profármaco de éster puede proteger el compuesto de fórmula 1 de la conjugación. Las esterasas integ rales para la barrera hemoencefálica pueden liberar luego el hidroxi de C8 o mercapto en el pasaje a través de esa barrera que activa el compuesto para su desempeño en el CNS . Un compuesto preferido de fórmula I es un compuesto de fórmula IA en donde R, R1 y m son como se definieron anteriormente; W es CH, N o NH; U es CH, CO o N; y Y' está ausente o junto con el anillo al cual está unido forma un heterociclilo opcionalmente sustituido de 6 miembros que contiene N. Compuestos preferidos de fórmula IA son como sigue: (i) Fórmula la la en donde R, R1 , m y q son como se definieron anteriormente. De preferencia R1 está ubicado en las posiciones 2, 3, 5 y/o 7 y se selecciona entre halo, arilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, alquilo opcionalmente sustituido y (CH2)nNR2R3 en donde n, R2 y R3 son como se definieron anteriormente. De más preferencia R1 es cloro, fenilo opcionalmente sustituido, cicloalquilo de C3 -6 , CH2NR4R5 en donde R4 y R5 se seleccionan independientemente entre H y alquilo de C1-4 o piridinilo opcionalmente sustituido. Ejemplos particularmente preferidos se muestran más adelante. (i¡) Fórmula I b en donde R, R1 , m y q son como se definieron anteriormente. De preferencia R1 está ubicado en las posiciones 2, 4, 5 y/o 7 y se selecciona entre halo y heterociclilo opcionalmente sustituido. De más preferencia, R1 es cloro y/o morfolinilo. Ejemplos preferidos se muestran más adelante.
CLogP = 2.35872 CLogP = 3.087 (iii) Fórmula le Ic en donde R, R1 , m y q son como se definieron anteriormente. De preferencia R1 está ubicado en las posiciones 2, 5 y/o 7 y se selecciona entre halo y CH2NR4R5 en donde R4 y R5 se seleccionan independientemente entre H y alquilo de C -4. Ejemplos preferidos se m uestran más adelante.
Id en donde R, R1 , m y q son como se definieron anteriormente. De preferencia R está u bicado en las posiciones 2 y/o 7 y se selecciona entre heterociclilo opcionalmente sustituido, C02R2, (CH2)nNR2R3 y CON R2R3 en donde n, R2 y R3 son como se definieron anteriormente. Ejemplos preferidos se muestran más adelante. (v) Fórmula le en donde R, R1 , m y q son como se definieron anteriormente. De preferencia R1 está ubicado en las posiciones 2, 3, 6 y/o 7 se selecciona entre halo, arilo opcionalmente sustituido y (CH2)nNR2R3 i donde n , R2 y R3 son como se definieron anteriormente. Ejemplos preferidos se m uestran más adelante. en donde R1 y m son como se definieron anteriormente. De preferencia R1 está ubicado en las posiciones 2 y/o 6 y se selecciona entre halo y (CH2)nNR2R3 en donde n, R2 y R3 son como se definieron anteriormente. Ejem plos preferidos se muestran más adelante.
CLogP =2.61188 En un aspecto adicional , la invención proporciona una composición farmacéutica o para uso veterinario que comprende el compuesto de fórmula I como se definió anteriormente, junto con un portador farmacéuticamente o veterinariamente aceptable. Alguno de los compuestos de fórm ula I son novedosos per se. Por consiguiente, la invención proporciona un compuesto de fórmula I I que es un compuesto de fórmula I con las condiciones de que al menos R1 es distinto de H . Compuestos preferidos de fórm ula I I son compuestos de fórmula IA, de más preferencia com puestos de las fórmula la, I b, l e, Id y le definidos anteriormente, de mayor preferencia 1 045, 1 061 , 1 066, 1 053 , 1 063, 1 064, 1 065, 1067, 1 069 y 1070. El compuesto de fórmula I I definido anteriormente puede prepararse utilizando los procesos descritos en detalle en adelante. DESCRI PCIÓN DETALLADA DE LA I NVENCIÓN En las reivindicaciones de esta solicitud y en la descripción de la invención , excepto donde el contexto se requiere de otra manera debido al lenguaje explícito o im plicación necesaria, las palabras "comprende" o variaciones como "com prenden" o "q ue comprende" se utilizan en un sentido inclusivo, es decir, para especificar la presencia de las características establecidas pero no para excluir la presencia o adición de otras características en diversas modalidades de la invención. El térm ino "alquilo" utilizado ya sea solo o en palabras compuestas como "alquilo opcionalmente sustituido" o "alq uilamino" se refiere a grupos hidrocarburo de cadena lineal, de cadena ramificada o cíclicos que tienen de 1 a 10 átomos de carbono, de preferencia de 1 a 6 átomos de carbono, de más preferencia de 1 a 4 átomos de carbono. Ilustrativo de tales grupos alquilo son metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, neopentilo, hexilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo. Grupos alquilo preferidos son alquilo de C1-4 como metilo o etilo y cicloalquilo de C2-6 como ciclopropilo. El término "alquenilo" utilizado ya sea solo o en palabras compuestas como "alquenilo opcionalmente sustituido", significa radicales lineales, ramificados o mono- o poli-cíclicos que tienen al menos un doble enlace carbono-carbono de 2 a 20 átomos de carbono, de preferencia de 2 a 14 átomos de carbono, de más preferencia de 2 a 6 átomos de carbono. Ejemplos de radicales alquenilo incluyen alilo, etenilo, propenilo, butenilo, iso-butenilo, 3-metil-2-butenilo, 1-pentenilo, ciclopentenilo, 1-metil-ciclopentenilo, 1-hexenilo, 3-hexenilo, ciclohexenilo, 1-heptenilo, 3-heptenilo, 1-octenilo, ciclooctenilo, 1-nonenilo, 2-nonenilo, 3-nonenilo, 1-decenilo, 3-decenilo, 1 ,3-butadien¡lo, 1 ,4-pentadienilo, 1,3-ciclopentadienilo, 1 ,3-hexadienilo, 1 ,4-hexadienilo, 1 ,3-ciclohexadienilo, 1 ,4-ciclohexadienilo, 1 ,3-cicloheptadienilo, 1 ,3,5-cicloheptatrienilo, 1,3,5,7-cicloocta-tetraenilo y similares. El término "alquinilo" utilizado ya sea solo o en palabras compuestas como "alquinilo opcionalmente sustituido" se refiere a radicales de cadena lineal o de cadena ramificada que tienen al menos un triple enlace carbono-carbono de 2 a 20 átomos de carbono, de preferencia de 2 a 14 átomos de carbono, de más preferencia de 2 a 6 átomos de carbono. Ejemplos incluyen etinilo, 1 -propinilo, 1 - y 2-butinilo, 2-metil-2-propinilo, 2-pentinilo, 3-pentinilo, 4-pentinilo, 2-hexinilo, 3-hexinilo, 4-hexinilo, 5-hexinilo, 10-undecinilo, 4-etil-1 -octin-3-ilo, 7-dodecinilo, 9-dodecinilo, 10-dodecinilo, 3-metil-1 -dodecin-3-ilo, 2-tridecinilo, 1 1 -tridecinilo, 3-tetradecinilo, 7-hexadecinilo, 3-octadecinilo y similares. El término "grupo heterociclilo" utilizado ya sea solo o en palabras compuestas como "heterociclilo opcionalmente sustituido" se refiere a grupos heterocíclicos monocíclicos o policíclicos que contiene al menos un átomo heteroátomo seleccionado entre nitrógeno, azufre y oxígeno. Grupos heterocíclicos adecuados incluyen grupos heterocíclicos que contienen N, como, grupos heteromonocíclicos de 3 a 6 miembros ¡nsaturados que contienen 1 a 4 átomos de nitrógeno, por ejemplo, pirrolilo, pirrolinilo, imidazolilo, pirazolilo, piridilo, piridinilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridazinilo, triazolilo o tetrazolilo; grupos heteromonocíclicos de 3 a 6 miembros saturados que contienen 1 a 4 átomos de nitrógeno, como, pirrolidinilo, imidazolidinilo, piperidino o piperazinilo; grupos heterocíclicos condensados ¡nsaturados que contienen 1 a 5 átomos de nitrógeno, como indolilo, isoindolilo, indolizinilo, benzimidazolilo, quinolilo, isoquinolilo, indazolilo, benzotriazolilo o tetrazolopiridazinilo; grupo heteromonocíclico de 3 a 6 miembros insaturado que contiene un átomo de oxígeno, como, piranilo o furilo; grupo heteromonocíclico de 3 a 6 miembros insaturado que contiene 1 a 2 átomos de azufre, como, tienilo; grupo heteromonocíclico de 3 a 6 miembros insaturado que contiene 1 a 2 átomos de oxígeno y 1 a 3 átomos de nitrógeno, como, oxazolilo, isoxazolilo u oxadiazolilo; g rupo heteromonocíclico de 3 a 6 miem bros saturado que contiene 1 a 2 átomos de oxígeno y 1 a 3 átomos de nitrógeno, como, morfolinilo; grupo heterocíclico condensado insaturado que contiene 1 a 2 átomos de oxígeno y 1 a 3 átomos de nitrógeno, como, benzoxazolilo o benzoxadiazolilo; grupo heteromonocíclico de 3 a 6 miembros insaturado que contiene 1 a 2 átomos de azufre y 1 a 3 átomos de nitrógeno, como, tiazolilo o tiadiazolilo; grupo heteromonocíclico de 3 a 6 m iembros saturado que contiene 1 a 2 átomos de azufre y 1 a 3 átomos de nitrógeno, como, tiazolidinilo; y grupo heterocíclico condensado insaturado que contiene 1 a 2 átomos de . azufre y 1 a 3 átomos de nitrógeno, como, benzotiazolilo o benzotiadiazolilo. De preferencia el heterociclilo es un grupo heteromonocíclico de 5 ó 6 miembros insaturado que contiene 1 a 3 átomos de nitrógeno como imidazolilo o piridinilo; un g rupo heteromonocíclico de 5 ó 6 miembros saturado que contiene 1 a 4 átomos de nitrógeno como imidazolidinilo o piperazinilo; o un grupo heteromonocíclico de 5 ó 6 miem bros saturado que contiene 1 a 2 átomos de oxígeno y 1 a 3 átomos de nitrógeno como morfolinilo.
El término "arilo" utilizado ya sea solo o en palabras compuestas como "arilo opcionalmente sustituido" significa un sistema aromático carbocíclico que contiene uno, dos o tres anillos en donde tales anillos pueden estar unidos juntos en una forma suspendida o pueden estar fusionados. El término "arilo" abarca radicales aromáticos como fenilo, naftilo, tetrahidronaftilo, ¡ndano y bifenilo. De preferencia, el arilo es fenilo opcionalmente sustituido como 4-halofenilo, de más preferencia 4-fluorofenilo o 4-clorofenilo. El término "halo" se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo, de preferencia flúor, yodo o cloro. El término "alcoxi" se refiere a radicales que contienen oxi de cadena lineal o ramificada de preferencia que tiene cada uno porciones alquilo de 1 a aproximadamente 6 átomos de carbono. Ejemplos de alcoxi incluyen metoxi, etoxi, propoxi, butoxi y ter-butoxi. El término "tio opcionalmente sustituido" se refiere a sustituyentes opcionales como radicales que contienen un alquilo lineal o ramificado de 1 a 1 0 átomos de carbono, de preferencia 1 a 6 átomos de carbono, de más preferencia 1 a 4 átomos de carbono, unidos a un átomo de azufre divalente. Ejemplos de radicales alquiltio incluyen metiltio, etiltio, propiltio, butiltio y hexiltio. El término "opcionalmente sustituido" se refiere a un grupo que puede o no puede estar además sustituido con uno o más grupos seleccionados entre grupos que contienen alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aldehido, halo, haloalquilo, haloalquenilo, haloalquinilo, haloarilo, hidroxi, alcoxi, alqueniloxi, ariloxi, benciloxi, haloalcoxi, haloalqueniloxi, haloariloxi, nitro, nitrialq uilo, nitroalq uenilo, nitroalquinilo, nitroarilo, nitroheterociclilo, amino, alquilam ino , dialquilam ino, alquenilamino, aiquinilamino, arilamino, diari!amino, bencilamino, dibencilamino, acilo, alquenilacilo, alquinilacilo , arilacilo, acilamino, diacilamino, aciloxi, alquilsulfiniloxi, arilsulfeniloxi , heterociclilo, heterocicloxi , heterociclamino, haloheterociclilo, alquilsulfenilo, arilsulfenilo , carboalcoxi, carboariloxi, mercapto, alquiltio, benciltio, aciltio, fósforo y sim ilares. De preferencia, el sustituyente opcional es alquilo de Ci-6, de más preferencia alquilo de C1-4; CF3; flúor, cloro; yodo; ciano; alcoxi de C1-6, de más preferencia alcoxi de Ci-4; arilo; heterociclilo; amino; o alquilamino. El término "antioxidante" se utiliza en la presente en su sentido más amplio y se refiere a un grupo que tiene la capacidad de reaccionar con una especie de oxígeno reactivo tal como un radical hidroxilo de tal manera que genera un producto no tóxico. Ejemplo incluyen fenoles como 3,4,5-trimetoxifenilo y 3,5-di-t-butil-4-hidroxifen¡lo, indolaminas como metatonina y flavonoides. Otros ejemplos pueden encontrarse en la literatura (Wright, 2001 ; Karbownik, 2001 ; Gilgun-Sherki , 2001 ) . El término "porción de selección del objetivo" se utiliza en la presente en su sentido más amplio y se refiere a un grupo que facilitaría el sum inistro al cerebro de la droga por medio de un mecanismo de transporte activo. La porción de selección del objetivo es reconocida por enzimas transportadoras específicas integrales a la barrera hemoencefálica y estas enzimas transportadoras proporcionan luego un mecanismo para la droga que se im porta al cerebro. Típicamente tales transportadores son dependientes de sodio y sus substratos contienen ácidos carboxílicos tal como ácido ascórbico y L-glutamato. La conjugación de la porción de selección del objetivo a la droga es establecida para retener la porción acida. Pueden encontrarse ejemplos en la literatura (Manfredini, 2002, Sakaedu, 2001 ). El término "quelador metálico" se utiliza en la presente en su sentido más amplio y se refiere a compuestos que tienen dos o más átomos donadores capaces de unir a un átomo de metal, de preferencia Cu, Zn o Fe en donde al menos dos de los átomos donadores son capaces de unir simultáneamente al átomo de metal y el complejo de metal resultante tiene una estabilidad termodinámica mayor que o igual a la del ión de metal : complejo de ligando biológico. El uso de queladores metálicos como tratamientos para trastornos neurológicos en la presente invención se distingue del concepto previamente conocido de "terapia de quelación". La "terapia de quelación" es un término asociado clínicamente con la eliminación de metales a granel como en la enfermedad de Wilson, ß-talesemia y hemocromatosis. La descomposición en homeostasis de metal en estas enfermedades puede describirse como un evento catastrófico muy semejante a una presa en explosión que conduce a una inundación abrumadora del metal problema. El mecanismo de acción de tales compuestos es que el metal en volumen es secuestrado por los queladores y clareados por excreción. A modo de comparación, la descomposición en homeostasis de metal asociada con condiciones neurológicas de la presente invención es más semejante al goteo constante de una llave de agua que gotea, que si deja bastante tiempo provocará eventualmente daño local durante un período grande de tiempo.
La intención del "quelador de metal" de la presente invención es interrumpir una interacción metal-proteína anormal para lograr una repartición de metales y una normalización subsiguiente de distribución de metal con el propósito que una vez que el ciclo tóxico es evitado, los procesos de evacuación endógenos puedan darse abasto más efectivamente con la acumulación de proteína am iloidogénica. Las sales del compuesto de Fórm ula I o I I son de preferencia farmacéuticamente aceptables, pero será apreciado que las sales no farmacéuticamente aceptables también caen dentro del alcance de la presente invención , ya que estas son útiles como intermediarios en la preparación de sales farmacéuticamente aceptables. Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de cationes farmacéuticamente aceptables como sodio, potasio, litio, calcio, magnesio, amonio y alquilamonio; sales de adición ácidas de ácidos inorgánicos farmacéuticamente aceptables como ácidos clorhídrico, ortofosfórico, sulfúrico, fosfórico, n ítrico, carbónico, bórico, sulfám ico y bromhídrico; o sales de ácidos orgánicos farmacéuticamente aceptables como ácidos acético, propiónico, butírico, tartárico, maleico, hidroximaleico, fumárico, cítrico, láctico, múcico, g lucónico, benzoico , succínico, oxálico, fenilacético, metansulfónico, trihalometansulfónico, toluensulfónico, bencensulfónico, salicílico, sulfanílico, aspártico, glutámico, edético, esteárico, palm ítico, oleico, lúrico, pantoténico, tánico, ascórbico y valérico. Además, alg unos de los compuestos de la presente invención pueden formar solvatos con ag ua o solventes orgánicos comunes. Tales solvatos están abarcados dentro del alcance del a invención .
Por "derivado farmacéuticamente aceptable" se pretende cualquier sal, hidrato, éster, amida, metabolito activo, análogo, residuo o cualquier otro compuestos farmacéuticamente aceptable que no sea biológicamente o de otra manera indeseable e induzca el efecto farmacológico y/o fisiológico deseados. El térm ino "profármaco" es utiliza en la presente en su sentido más amplio para incluir aquellos compuestos que son convertidos in vivo a compuestos de Fórmula I o I I . El uso de la estrategia del profármaco optimiza el suministro de la droga a su sitio de acción, por ejemplo, el cerebro. En un aspecto, el término se refiere a la presencia de una porción alquilo de Ci_6 o ariléster que está diseñado para resistir hidrólisis hasta que el profármaco haya cruzado la BBB, donde las esterasas sobre la superficie interna de la BBB actúa para hidrolizar el éster y liberar el hidroxilo C8 de los com puestos de fórmula I o I I . En un segundo aspecto, el término se refiere a la unión en la posición 2 de un grupo antioxidante, en particular la porción 3,4, 5-trimetoxifenilo o derivados del mismo. La exposición al ambiente prooxidativo del cerebro será luego conducido a hidroxilación del grupo 3,4,5-trimetoxifenilo para dar el sustituyente 2-h!droxi-3,4, 5-trimetoxifenilo, el grupo hidroxilo del cual actúa para aumentar las propiedades de quelación de los compuestos de fórmula I o II. El término "tautómero" es utiliza en la presente en su sentido más am plio para incluir compuestos de Fórm ula I o I I que son capaces de existir en un estado de eq uilibrio entre dos formas isoméricas. Tales com puestos pueden diferir en la conexión de enlace dos átomos o grupos y la posición de estos átomos o g rupos en el compuesto.
El término "isómero" se utiliza en la presente en su sentido más amplio e incluye isómeros estructurales, geométricos y estéreos. Como el compuesto de Fórmula I o I I puede tener uno o más centros quirales, es capaz de existir en formas enantiómeras. Las composiciones de la presente invención comprenden al menos un compuesto de Fórmula I o I I junto con uno o más portadores o vehículos farmacéuticamente aceptables y opcionalmente otros agentes terapéuticos. Cada portador, diluyente, adyuvante y/o excipiente debe ser farmacéuticamente "aceptable" en el sentido de que sea compatible con los otros ingredientes de la composición y no sea perjudicial para el sujeto. Las com posiciones incluyen aquellas adecuadas para la adm inistración oral , rectal , nasal, tópica (incluyendo bucal y sublingual) , vaginal o parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa e intradérmica) . Las composiciones pueden ser convenientemente presentadas en forma de dosificación unitaria y pueden prepararse por métodos bien conocidos en la técnica de farmacia. Tales métodos incluyen la etapa de conducir en asociación el ingrediente activo con el veh ículo que constituye uno o más ingredientes accesorios. En general, las composiciones se preparan conduciendo uniformemente o íntimamente en asociación el ingrediente activo con vehículos, diluyentes, adyuvantes y/o excipientes líquidos o vehículos sólidos divididos finamente o ambos, y luego si es necesario conformar el producto. El término "condición neurológica" se utiliza en la presente en su sentido más amplio y se refiere a condiciones en las cuales diversos tipos de células de trastornos neurodegenerativos o lesiones o exposiciones. En particular, los compuestos de fórmula I o II pueden utilizarse para el tratamiento de condiciones resultantes, en donde el daño a las células del sistema nervioso ha ocurrido debido a intervenciones quirúrgicas, infecciones, exposición a agentes tóxicos, tumores, déficits nutricionales o trastornos metabólicos. Además, los compuestos de la fórmula I o I I pueden utilizarse para el tratamiento de las secuelas de trastornos neurodegenerativos, como enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, esclerosis múltiple, esclerosis amilotrófica lateral, abuso de drogas o adicción a drogas (alcohol, cocaína, heroína, anfetaminas o similares), trastornos de la médula espinal y/o lesiones, distrofia o degeneración de la retina neural (retinopatías) y neuropatías periféricas, como neuropatía diabética y/o las neuropatías periféricas inducidas por toxinas. El término "trastorno neurodegenerativo" como se utiliza en la presente se refiere a una anormalidad en la cual está amenazada la integridad neuronal. Puede ser amenazada la integridad neuronal cuando las células neuronales presentan supervivencia disminuida o cuando las neuronas no pueden propagar más tiempo una señal. Los trastornos neurológicos que pueden tratarse con los compuestos de la presente invención incluyen porfiria intermitente aguda, cardiomiopatía inducida por adriamicina; demencia por SIDA y neurotoxicidad inducida por VIH-1 ; enfermedad de Alzheimer; esclerosis lateral amilotrófica; aterosclerosis; cataratas; isquemia cerebral; parálisis cerebral; tumor cerebral; daño de órganos inducido por quimioterapias; nefrotoxicidad inducida por cisplatina; cirugía de derivación coronariopatía; enfermedad de Creutzfeldt-Jacob y sus nuevas variantes asociadas con la enfermedad de las "vacas locas"; neuropatía diabética; síndrome de Down; ahogamiento; epilepsia y epilepsia post-traumática; ataxia de Friedrich; demencia frontotemporal; glaucoma; glomerulopatía; hemocromatosis; hemodiálisis; hemolisis; síndrome urémico hemolítico (enfermedad de Weil); ataque hemorrágico; enfermedad de Hallerboden-Spatz; ataque cardíaco y lesión por reperfusión; enfermedad de Huntington; enfermedad corporal de Lewy; claudicación intermitente; ataque isquémico; enfermedad inflamatoria del intestino; degeneración macular; malaria; toxicidad inducida por metanol; meningitis (aséptica y tuberculosa); enfermedad neuromotora; esclerosis múltiple; atrofia del sistema múltiple; isquemia de miocardio; neoplasia; enfermedad de Parkinson; asfixia perinatal; enfermedad de Pick; parálisis supra-nuclear progresiva; daño de órganos inducido por radioterapia; restenosis después de angioplastía; retinopatía; demencia senil; esquizofrenia; sepsis; choque séptico; encefalopatías espongiforme; vasoespasmo subaracnoideo hemorrágido/cerebral; hematoma subdural; trauma quirúrgico; incluyendo neurocirugía; talasemia; ataque isquémico transitorio (TIA); lesión cerebral traumático (TBI); lesión espinal traumática; trasplante; demencia vascular; meningitis viral; y encefalitis viral. Adicionalmente, los compuestos de la presente invención también pueden utilizarse para potenciar los efectos de otros tratamientos, por ejemplo para potenciar los efectos neuroprotectores del factor de crecimiento del nervio derivado del cerebro. La invención está dirigida particularmente a condiciones que inducen al daño oxidante del sistema nervioso central, incluyendo trastornos neurológicos agudos y crónicos tales como lesión cerebral traumática, lesión de la médula espinal, isquemia cerebral, ataque (isquém ico y hemorrágico), hemorragia subaracnoida/vasospasmo cerebral, tumor cerebral, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Creutzfeldt-Jacob y su variante asociada con la enfermedad de "vacas locas", enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson , ataxia de Friedrich, cataratas, demencia con formación corporal de Lewy, atrofia del sistema múltiple, enfermedad de Hallerboden-Spatz, enfermedad corporal difusa de Lewy, esclerosis múltiple amilotrófica, enfermedad neuromotora, esclerosis múltiple, insomnio familiar mortal, enfermedad de Gertsmann Straussler Sheinker y hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis tipo Dutch. Más particularmente, la invención está dirigida al tratam iento de amiloidosis neurodegenerativa. La amiloidosis neurodegenerativa puede ser cualquier condición en donde el daño neurológico resulta de la deposición de am iloideo. El amiloideo puede formarse a partir de una variedad de precursores de proteína o polipéptido, incluyendo pero no limitado a proteína ?ß, sinucleína, huntingtina, o prion. De esta forma la condición de preferencia se selecciona del grupo que consiste de la enfermedad de Alzheimer esporádica o familiar, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad neuromotora, cataratas , enfermedad de Parkinson, enfermedad de Creutzfeldt-Jacob y su nueva variante asociada con la enfermedad de las "vacas locas" , enfermedad de Huntington , demencia con formación corporal de Lewy, atrofia del sistema múltiple, enfermedad de Hallerboden-Spatz, y enfermedad corporal de Lewy difusa. De más preferencia la amiloidosis neurodegenerativa es una condición relacionada con ?ß, tal como enfermedad de Alzheimer o demencia asociada con síndrome de Down o una de varias formas de formas dominantes autosomáticas de la enfermedad de Alzheimer familiar (revisado en St George-Hyslop. 2000), De mayor preferencia la condición relacionada con ?ß es la enfermedad de Alzheimer. En una modalidad particularmente preferida de todos los aspectos de la invención, antes del tratamiento el sujeto tiene una función cognitiva moderadamente o severamente mejorada, como se valora por la Escala de Valoración de la Enfermedad de Alzheimer (ADAS)-prueba de cog, por ejemplo un valor ADAS-cog de 25 o mayor. Además de retardar o detener la disminución cognitiva de un sujeto, los métodos y compuestos de la invención también pueden ser apropiados para uso en el tratamiento o prevención de condiciones neurodegenerativas, o pueden ser apropiados para uso en calmar los síntomas de condiciones neurodegenerativas. Los compuestos pueden ser capaces de proporcionar al menos una inversión parcial de la disminución cognitiva practicada por pacientes. Si se administra a un sujeto quién ha sido identificado que tiene un riesgo aumentado de una predisposición a condiciones neurodegenerativas, o a un sujeto que presenta manifestaciones pre-clínicas de disminución cognitiva, como Deterioro Cognitivo Leve o deterioro cognitivo progresivo mínimo, estos métodos y compuestos pueden ser capaces de prevenir o retardar el principio de síntomas clínicas, además del efecto de retardar o reducir la velocidad de disminución cognitiva. Actualmente la enfermedad de Alzheimer y otras demencias son normalmente no diagnosticadas hasta que ha aparecido uno o más de los síntomas de advertencia. Estos síntomas constituyen un síndrome conocido como Deterioro Cognitivo Leve (MCI), que fue recientemente definido por la Academia Americana de Neurología (American Academy of Neurology), y se refiere al estado clínico de individuos quiénes tienen deterioro de memoria, pero quiénes son de funcionamiento razonable de otra manera, y quiénes no cumplen los criterios clínicos por demencia (Petersen et al. , 2001 ). Los síntomas de MCI incluyen: (1 ) Pérdida de memoria que afecta la habilidad en el trabajo (2) Dificultad de realizar tareas familiares (3) Problemas con el lenguaje (4) Desorientación como tiempo y lugar (perderse) (5) Criterio pobre o menguado (6) Problemas con pensamientos abstractos (7) Extraviar objetos (8) Cambios en humor y comportamiento (9) Cambios en personalidad (1 0) Pérdida de iniciativa El MCI puede detectarse utilizando pruebas de selección cognitivas convencionales, tales como el Examen del Estado Mini-Mental, y Examinar el Deterioro de la Memoria y baterías de pantalla neurofisiológicas.
El término "sujeto" como se utiliza en la presente se refiere a cualquier animal que tenga una enfermedad o condición que requiera tratamiento con un agente activo farmacéuticamente. El sujeto puede ser un mamífero, de preferencia un ser humano, o puede ser un animal doméstico o compañero. Mientras que es particularmente contemplado que los compuestos de la invención son adecuados para uso en el tratamiento médico de seres humanos, también es aplicable en el tratamiento veterinario, incluyendo tratamiento de animales compañeros tales como perros y gatos, y animales domésticos como caballos, ponis, asnos, muías, llamas, alpacas, cerdos, ganado vacuno y ovejas, o animales de zoológico como primates, félidos, cánidos, bóvidos y ungulados. Mamíferos adecuados incluyen miembros de las Clases de Primates, Roedoras, Lagomorfos, Cetáceos, Carnívoros, Perisodáctilos y Artiodáctilos. Son particularmente preferidos los miembros de las Clases de Perisodáctilos y Artiodáctilos debido a su biología similar y su importancia económica. Por ejemplo, los Artiodáctilos comprenden aproximadamente 150 especies vivientes distribuidos entre nueva familias: cerdos (Suidae), pécaris (Tayassuidae), hipopótamos (Hippopotamidae), camellos (Camelidae) , almizcleros (Tragulidae), jirafas y okapís (Giraffidae), ciervos (Cervidae), antilocapras (Antilocapridae), y ganado vacuno, ovejas, cabras y antílopes (Bovidae). Muchos de estos animales se emplean como animales para alimentación en diversos países. De manera más importante, muchos de los animales económicamente importantes como cabras, ovejas, ganado vacuno y cerdos tienen biología muy similar y distribución de altos grados de homolog ía genómica. La Clase de Perisodáctilos com prenden caballos y asnos, que son ambos económicamente importantes y se relacionan estrechamente. En realidad , es bien conocido q ue los caballos y asnos se cruzan. Como se utiliza en la presente, el término "cantidad terapéuticamente efectiva" se q uiere decir que una cantidad de un compuesto de la presente invención efectiva para producir una respuesta terapéuticamente deseada, por ejemplo, para tratar, mejorar o prevenir una condición neurológica. La "cantidad terapéuticamente efectiva" específica, obviamente varía con tales factores como la condición particular que es tratada, la condición física del sujeto, el tipo de sujeto q ue es tratado, la duración del tratamiento, la naturaleza de la terapia coincidente (sin la hay), y las formulaciones específicas empleadas y la estructura del compuesto o sus derivados. Los compuestos de la presente invención pueden combinarse adicionalmente con otros medicamentos para proporcionar una combinación operativa. Ésta se destina para incluir cualq uier combinación quím icamente compatible de agentes activos farmacéuticamente, ya que la combinación no elimina la actividad del compuesto de fórmula I o I I . Será apreciado que el compuesto de la invención y los otros medicamentos pueden administrarse en forma separada, secuencial o simultánea. Otros medicamentos incluyen , por ejemplo, cuando la condición es una condición relacionada con ß-amiloidea, particularmente enfermedad de Alzheimer, un inhibidor del sitio activo acetilcolinesterasa, por ejemplo, fenserina, galantamina, o tacrina; un antioxidante, como Vitamina E o Vitamina C; un agente anti-inflamatorio como flurbiprofen o ibuprofen modificado opcionalmente para liberar óxido nítrico (por ejemplo, NCX-2216, producido por NicOx) o un agente estrogénico como 17-ß-estradiol. Son bien conocidos en la técnica métodos y portadores farmacéuticos para la preparación de composiciones farmacéuticas, como se establece en los libros de texto tales como Remington's Pharmaceutical Sciences, 20a Edición, Williams & Wilkins, Pennsylvania, USA. Como se utiliza en la presente, un "portador farmacéutico" es un solvente farmacéuticamente aceptable, agente de suspensión o vehículo para suministrar el compuesto de fórmula I o I I al sujeto. El portador puede ser líquido o sólido y se selecciona con la forma planeada de administración en mente. Cada portador debe ser farmacéuticamente "aceptable" en el sentido de que sea compatible con otros ingredientes de la composición y no sea dañino al sujeto. El compuesto de fórmula I o I I puede administrarse en forma oral, tópica o parenteral en formulaciones unitarias de dosificación que contienen portadores, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables no tóxicos. El término parenteral como se utiliza en la presente incluye inyecciones subcutáneas, aerosol para administración a pulmones o cavidad nasal, técnicas de inyección intravenosa, intramuscular, intratecal, intracraneal o por infusión. La presente invención también proporciona formulaciones farmacéuticas adecuadas tópica, oral y parenteral para uso en los métodos novedosos de tratamiento de la presente invención. Los compuestos de la presente invención pueden administrar en forma oral como tabletas o comprimidos, suspensiones acuosas o aceitosas, pastillas, trociscos, polvos, gránulos, emulsiones, cápsulas, jarabes o elíxires. La composición para uso oral puede contener uno o más agentes seleccionados del grupo de agentes dulcificantes, agentes saborizantes, agentes colorantes y agentes conservadores para producir preparaciones farmacéuticamente refinadas y admisibles. Dulcificantes adecuados incluyen sucrosa, lactosa, glucosa, aspartame o sacarina. Agentes de desintegración adecuados incluyen almidón de maíz, metilcelulosa, polivinilpirrolidona, goma xantano, bentonita, ácido algínico o agar. Agentes saborizantes adecuados incluyen aceite de menta, aceite de gaulteria, saborizante de cereza, naranja o frambuesa. Conservadores adecuados incluyen benzoato de sodio, vitamina E, alfatocoferol, ácido ascórbico, metilparabeno, propilparabeno o bisulfito de sodio. Lubricantes adecuados incluyen estearato de magnesio, ácido esteárico, oleato de sodio, cloruro de sodio o talco. Agentes de dilatación incluyen monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo. Las tabletas contienen el ingrediente activo en mezcla con excipientes no tóxicos farmacéuticamente aceptables que sean adecuados para la elaboración de tabletas. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, (1 ) diluyentes inertes, como carbonato de calcio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; (2) agentes de granulación o de desintegración, como almidón de maíz o ácido algínico; (3) agentes aglutinantes, como almidón, gelatina o acacia; y (4) agentes lubricantes, como estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Estas tabletas pueden ser recubiertas o no recubiertas por técnicas conocidas para desintegración retardada y absorción en el tracto gastrointestinal y proporciona así una acción prolongada durante un período más largo. Por ejemplo, puede emplearse un material de dilatación como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo. El recubrimiento también puede realizarse utilizando las técnicas descritas en las Patentes de los Estados Unidos Nos. 4,256, 108; 4, 160,452; y 4,265,874 para formar tabletas osmóticas terapéuticas para controlar la liberación. El compuesto de fórmula I o I I así como el agente activo farmacéuticamente útiles en I método de la invención pueden administrarse, para aplicación in vivo, de manera parenteral por inyección o por perfusión gradual durante un tiempo de manera independiente o juntos. La administración puede ser de manera intravenosa, intraarterial, interperitoneal, intramuscular, subcutánea, intracavidad, transdérmica o por infusión por ejemplo, mediante una bomba osmótica. Para estudios in vitro pueden agregarse o disolverse los agentes en un amortiguador biológicamente aceptable apropiado y agregarse a una célula o tejido. Las preparaciones para la administración parenteral incluyen soluciones acuosas o no acuosas estériles, suspensiones y emulsiones. Ejemplos de solventes no acuosos son propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales como aceite de oliva, y ésteres orgánicos inyectables como oleato de etilo. Los portadores acuosos incluyen agua, soluciones, emulsiones o suspensiones alcohólicas/acuosas, incluyendo soluciones salinas y medios amortiguadores. Los vehículos parenterales incluyen solución de cloruro de sodio, dextrosa de Ringer, dextrosa y cloruro de sodio, vehículos intravenosos de Ringer lactados incluyen rellenadores fluidos y nutrientes, rellenadores de electrolito (como aquellos basados en dextrosa de Ringer), y similares. También pueden estar presentes conservadores y otros aditivos como, por ejemplo, agentes antimicrobianos, anti-oxidantes, quelantes, factores de crecimiento y gases inertes y similares. En general, los términos "tratar", "tratamiento" y similares son utilizados en la presente que significa que produce alteración en un sujeto, tejido o célula para obtener un efecto deseado farmacológico y/o fisiológico. El efecto puede ser profiláctico en término de prevenir completa o parcialmente una enfermedad o signo o síntoma del mismo, y/o puede ser terapéutico en términos de una cura completa o parcial de una enfermedad. "Tratar" como se utiliza en la presente cubre cualquier tratamiento de, o prevención de una enfermedad en un vertebrado, un mamífero, particularmente un ser humano, e incluye: (a) prevenir la enfermedad que se presenta en un sujeto que puede estar predispuesto a la enfermedad, pero que aún no ha sido diagnosticada que la tiene; (b) inhibir la enfermedad, es decir, detener su desarrollo; o (c) mitigar o mejorar los efectos de la enfermedad, es decir, provocar regresión de los efectos de la enfermedad. La invención incluye diversas composiciones farmacéuticas útiles para aliviar la enfermedad. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con una modalidad de la invención se preparan conduciendo un compuesto de fórmula I o II, análogos, derivados o sales de los mismos, combinaciones del compuesto de fórmula I o I I y uno o más agentes activos farmacéuticamente en una forma adecuada para la administración a un sujeto utilizando vehículos, excipientes y aditivos o auxiliares. Los vehículos o auxiliares frecuentemente utilizados incluyen carbonato de magnesio, dióxido de titanio, lactosa, manitol y otros azúcares, talco, proteína de leche, gelatina, almidón, vitaminas, celulosa y sus derivados, aceites vegetales y animales, polietilenglicoles y solventes, como agua estéril, alcoholes, glicerol y alcoholes polihídricos. Los vehículos intravenosos incluyen rellenadores fluidos y nutrientes. Los conservadores incluyen agentes antimicrobianos, anti-oxidantes y quelantes y gases inertes. Otros portadores farmacéuticamente aceptables incluyen soluciones acuosas, excipientes no acuosos, incluyendo sales, conservadores, amortiguadores y similares, como se describe, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, 20a Edición., Williams and Wilkins (2000) y The British National Formulary 43a Edición (British Medical Association and Royal Pharmaceutical Society of Great Britain, 2002; httpJ/bnf.rhn. net), los contenidos de los cuales se incorporan en la presente como referencia. El pH y concentración exacta de los diversos componentes de la composición farmacéutica se ajustan de acuerdo con las habilidades de rutina en la técnica. Véase Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis for Therapeutics (7a Edición, 1985). Las composiciones farmacéuticas de preferencia se preparan y se administran en dosis unitarias. Las dosis unitarias sólidas pueden ser tabletas, cápsulas y supositorios. Para el tratamiento de un sujeto, dependiendo de la actividad del compuesto, forma de administración, naturaleza y severidad del trastorno, edad y peso corporal del sujeto, pueden utilizarse dosis diarias diferentes. Bajo ciertas circunstancias, sin embargo, pueden ser apropiadas dosis diarias superiores o inferiores. La administración de las dosis diarias pueden llevarse a cabo por administración simple en la forma de una dosis unitarias individuales o de otro modo diversas dosis unitarias más pequeñas y también por administración múltiple de dosis subdivididas a intervalos específicos. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención pueden administrarse en forma local o sistémica en una dosis terapéuticamente efectiva. Las cantidades efectivas para este uso variarán, por supuesto, dependiendo de la severidad de la enfermedad y del peso y estado general del sujeto. Típicamente, las dosis utilizadas in vitro pueden proporcionar conducción en las cantidades útiles para la administración in situ de la composición farmacéutica, y pueden utilizarse modelos animal para determinar las dosis efectivas para el tratamiento de los efectos laterales citotóxicos. Diversas consideraciones se describen, por ejemplo, en Langer, Science, 249: 1527, (1990). Las formulaciones para uso oral pueden estar en la forma de cápsulas de gelatina dura en donde el ingrediente activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín. También pueden estar en la forma de cápsulas de gelatina blanda en donde el ingrediente activo se mezcla con agua o un medio aceitoso, como aceite de cacahuate, parafina líquida o aceite de oliva. Las suspensiones acuosas normalmente contienen los materiales activos en mezcla con excipientes adecuados para la elaboración de suspensión acuosa. Tales excipientes pueden ser (1 ) agente de suspensión como carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto y goma acacia; (2) agentes dispersantes o humectantes que pueden ser (a) fosfátidos que se presentan en forma natural como lecitina; (b) un producto de condensación de un óxido de alquileno con un ácido graso, por ejemplo, estearato de polioxietileno; (c) un producto de condensación de óxido de etileno con un alcohol alifático de cadena grande, por ejemplo, heptadecaetilenoxicetanol; (d) un producto de condensación de óxido de etileno con un éster parcial derivado de un ácido graso y hexitol como un monooleato de polioxietilensorbitol, o (e) un producto de condensación de óxido de etileno con un éster parcial derivado de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de polioxietilensorbitan. Las composiciones farmacéuticas pueden estar en la forma de una suspensión oleaginosa o acuosa inyectable, estéril. Esta suspensión puede formularse de acuerdo con los métodos conocidos utilizando aquellos agentes adecuados de dispersión o humectación y agentes de suspensión que han sido mencionados anteriormente. La preparación inyectable estéril también puede ser una suspensión o solución inyectable, estéril en un diluyente o solvente no tóxico parenteralmente aceptable, por ejemplo, como una solución en 1 ,3-butanodiol. Entre los vehículos y solventes aceptables que pueden emplearse son agua, solución de R'mger, y solución isotónica de cloruro de sodio. Además, aceites fijos, estériles son empleados convencionalmente como un solvente o medio de suspensión . Para este propósito, puede emplearse cualquier aceite fijo blando incluyendo mono- o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos como ácido oleico encuentran uso en la preparación de inyectables. También pueden determinarse com puestos de fórm ula I o I I en la forma de sistemas de sum inistro de liposomas, como vesículas unilaminares peq ueñas, vesículas unilaminares grandes y vesículas m ultilam inares. Pueden formarse liposomas a partir de una variedad de fosfolípidos, como colesterol, estearilam ina, o fosfatidilcolinas. Los com puestos de fórm ula I o I I también pueden presentarse para uso en la forma de com posiciones veterinarias, que pueden prepararse, por ejemplo , por métodos que sean convencionales en la técnica. Ejemplos de tales composiciones veterinarias incluyen aquellas adaptadas para: (a) adm inistración oral, aplicación externa, por ejemplo porción purgativa (por ejemplo soluciones o suspensiones acuosas o no acosas) ; tabletas o bolos; polvos, grán ulos o pellets para mezclar con alimentos para ganado ; pastas para aplicación en la lengua; (b) administración parenteral por ejemplo por inyección subcutánea, intramuscular o intravenosa, por ejemplo como una solución o suspensión estéril; o (cuando sea apropiado) por inyección intramamaria cuando se introduce una suspensión o solución en la teta o ubre vía el pezón; (c) aplicaciones tópicas , por ejemplo como una crema, ungüento o aplicado por aspersión a la piel; o (d) ¡ntravaginalmente, por ejemplo como un pesario, crema o espuma.
Los niveles de dosificación del compuesto de fórm ula I o 11 de la presente invención son del orden de aproximadamente 0.5 mg a aproximadamente 20 mg por kilogramo de peso corporal, con un intervalo de dosificación preferido entre aproximadamente 0.5 mg a aproximadamente 10 mg por kilogramo de peso corporal por día (de aproximadamente 0.5 gramos a aproximadamente 3 gramos por paciente por día). La cantidad de ingrediente activo que puede combinarse con los materiales portadores para producir una dosificación simple variará dependiendo del huésped tratado y el modo particular de administración. Por ejem plo, una formulación destinada para la administración oral a seres humanos puede contener de aproximadamente 5 mg a 1 g de un com puesto activo con una cantidad apropiada y conveniente de material portador que puede variar de aproximadamente 5 a 95 por ciento de la com posición total. Las formas unitarias de dosificación en general contendrán entre aproximadamente 5 mg a 500 mg de ingrediente activo. Opcionalmente los compuestos de la invención son administrados en un horario de dosis divididas, de tal manera que son al menos dos administraciones en total en el horario. Las administraciones se dan de preferencia al menos cada dos horas hasta cuatro horas o más tiempo, por ejemplo el compuesto puede administrarse cada hora o cada media hora. En una modalidad preferida, el régimen de dosis dividida comprende una segunda administración del compuesto de la invención después de un intervalo de la primera administración suficientemente por mucho tiem po que el nivel del com puesto activo en la sangre ha disminuido aproximadamente de 5-30% del nivel de plasma máxima alcanzada después de la primera adm inistración , para mantener un contenido efectivo del agente activo en la sangre. Opcionalmente una o más administraciones subsecuentes pueden darse en un intervalo correspondiente de cada administración precedente, de preferencia cuando el nivel de plasma ha disminuido aproximadamente de 1 0-50% del máximo precedente inmediatamente. Será entendido, sin embargo, que el nivel de dosis específica para cualquier paciente particular dependerá de una variedad de factores incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la edad , peso corporal, saluda general , sexo, dieta, tiempo de administración, ruta de adm inistración, velocidad de excreción, combinación de la droga y la severidad de la enfermedad del paciente que es sometida a terapia. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIB UJOS Fig. 1 es un diagrama de flujo de sujetos estudiados; Fig. 2 son diagramas que m uestran medios de cambio (±SE) durante un tiempo de línea base en capacidades cognitivas (como se valoró con ADAS-cog) en (A) dos brazos de CQ vs placebo y (B) estratificación por severidad dentro de los brazos de tratam iento [afectado menos severamente (ADAS-cog < 25) , afectado más severamente (ADAS-cog > 25) (*p< 0.05; **p< 0.01 ); Fig. 3 son diagramas que m uestran medios de cam bio (±SE) durante un tiempo de línea base en niveles de plasma ?ß42 en (A) los brazos de CQ vs placebo y (B) estratificación por severidad como en la Fig . 8 , (***p< 0.001 ); Fig. 4 son diagramas que muestran medios de cambio (±SE) durante un tiempo de línea base en (A) Zn de plasma (B) Cu de plasma en dos brazos de CQ vs placebo; y Fig . 5 es un diagrama que muestra cambios relativos en niveles de com portam iento (ADAS-cog) y de bioquímica (plasma/CSF ?ß) durante el transcurso de AD. EJ EMPLOS La invención será ahora descrita en detalle por medio de referencias solamente para los siguientes ejemplos no limitantes, ül PREPARACIÓN DE 8-H1DROXI-QUINOXAL1NAS Y 8-H1DROX1-3H- QUINAZOLIN-4-ONAS 8-Hidroxi-quinoxalinas y 8-hidroxi-3H-quinazolin-4-onas pueden prepararse mediante procesos conocidos en la literatura. Por ejemplo, la condensación de una 1 ,2-fenilendiamina sustituida apropiadamente con compuestos 1 ,2-dicarbonilo como aldeh ido pirúvico proporciona un intervalo de 8-hidroxiquinoxalinas 2- o 3-sustituidas (ver por ejemplo: Abe y colaboradores, J. Med. Chem., 1 998, 41 , 4062) (Esquema 1 ) . U na síntesis alternativa de tales compuestos vía la condensación de la 1 ,2-fenilendiamina con epóxidos en presencia de Bism uto(O) se m uestra en el Esquema 2 (ver Antoniotti y colaboradores, Tetrahedron Letters, 2002, 4, 3971 ) . Además la elaboración de las posiciones 2 y/o 3 puede lograrse utilizando métodos conocidos. Esquema 1 Esq uema 2 La 8-hidroxi-3H-quinazol¡n-4-ona misma se preparó de acuerdo con un procedimiento de literatura (ver lyer y Dhar, J. Sci. Ind. Res., 1956, 15C, 1 ) . Derivados de 8-hidroxi-3H-quinazolin-4-ona pueden sintetizarse por numerosos métodos conocidos en la literatura. Uno de los enfoques más com unes a los derivados de 3H-quinazolin-4-ona es mediante 2-am inobenzam idas sustituidas. Las 2-aminobenzamidas pueden tener acceso mediante dos enfoques diferentes (Esquema 3). Por ejem plo, un ácido 2-nitrobenzoico 3A es convertido primero en el ácido antranílico 3B correspondiente. En la presencia de una amina y un agente de activación tal como CDI , 3B da la 2-aminobenzamida 3C (Ruta A). Alternativamente, 3A y una amina en presencia de CDI puede convertirse primero en la 2-nitrobenzamida 3D. La reducción subsiguiente de 3D produce 3C (Ruta B) . Esq uema 3 El compuesto, 4,6-dicloro-3-hidroxi-2-nitrobenzoico (4F) (Esquema 4) es un intermediario clave utilizado para la provisión de una serie de 8-hidroxi-3H-quinazolin-4-onas y específicamente para la síntesis de derivados de 5,7-dicloro-sustituidos. Por lo tanto, de acuerdo con Golstein y Schasf {Helv. Chim. Acta , 1957 , 57(23) , 1 32), ácido 2,4-diclorobenzoico (4A) disponible comercialmente es nitrado para dar el ácido 2,4-dicloro-5-nitrobenzoico (4B) . El com puesto 4B se convierte, por medio de la amina 4C y la acetamida 4D, en el ácido 3-acetamida-4,6-dicloro-2-nitrobenzoico (4E) . La hidrólisis base subsiguiente de 4E produce el ácido nitrobenzoico 4F. Todas las etapas proceden en altos rendim ientos (aproximadamente 90%). Esquema 4 * preparado de acuerdo con Goistein y Schaaf, Helv. Chim. Acta, 1957, 57(23), 132 El intermediario de fórmula 4E anterior es novedoso y por lo tanto forma parte de la presente invención . El uso de este intermediario novedoso resulta en el proceso del Esquema 4 siendo de alto rendimiento y receptivo aumento progresivo. La conversión de un ácido 2-nitrobenzoico tal como el compuesto 4F en las 8-hidroxi-3H-quinazolin-4-onas (5C) se muestra en el Esquema 5. Por lo tanto , el tratamiento de 4F con una am ina en presencia de CD I produce la benzamida N-(sustituida) 5A. La reducción del grupo nitro y el acoplamiento de la am ina 5B resultante con ácido fórm ico/CDI proporciona el derivado N-alquilado deseado 5C. Esquema 5 Las q uinazolin-4-onas N-alq uiladas también pueden prepararse mediante la ruta mostrada en el Esquema 6. Por lo tanto, el ácido 2-nitrobenzoico apropiadamente sustituido tal como 4F es tratado primero con una amina en presencia de un agente de activación tal como CD1. Este proporciona la correspondiente nitrobenzamida q ue, bajo condiciones de reducción , produce la aminobenzamida . El tratamiento subsiguiente de la aminobenzam ida con formamida de reflujo produce la 3H-quinazolin-4-ona. Luego es desprotonada la 3H-q uinazolin-4-ona con una base tal como NaH y tratada con un haluro de alquilo apropiado. Esquema 6 El Esquema 7 muestra una ruta para la síntesis de 8-hidroxi-3H-quinazolin-4-onas 2-sustituidas. Por lo tanto, el tratamiento de un ácido antranílico tal como ácido 2-amino-4,6-dicloro-3-hidroxibenzoico con cloruro de tionilo y reacción subsiguiente del cloruro ácido con amoníaco produce la benzamida correspondiente. Esta, a su vez, se trata con ácido cloroacetilacético para proporcionar 5,7-dicloro-2-clorometil-8-hidroxi-3H-quinazolin-4-ona (ver por ejem plo : Tani y colaboradores, J. Med. Chem., 1 979, 22, 95) . Puede log rarse otra elaboración del derivado 2-cloromet¡lo en una serie de derivados de metilo 2-sustituido, por ejemplo derivados de 2-(metilam ino)metilo, utilizando métodos de literatura estándar. La N-alq uilación de estos derivados utilizando las condiciones descritas anteriores produce derivados 2, 3-disustituidos. Esquema 7 Las 8-hidroxi-3H-q uinazolin-4-onas 2 ,3-disustituidas tam bién pueden sintetizarse mediante la ruta mostrada en el Esquema 8. Por lo tanto, una 2-amino-2N-(sustituida)benzamida se trata con el ácido carboxílico apropiado tal como glicina Boc-protegida. La deshidratación subsiguiente con metóxido de sodio (ver Lee y colaboradores, J. Med. Chem., 1995, 38, 3547) produce el análogo deseado. Esq uema 8 (21 PREPARACIÓN DE 8-METOXI-4Í 3H)-QUINAZ0LIN0NA, 8-HIDR0X1- CINOLINA, 5.8-DIHIDROXI-QUINOXALINA, 4,5-DIHIDROXl- FENAZINA. 4.8-DIH1DROXI-FENAZINA, 4-HIDROXI-ACRIDINA Y 5- HIDROXI-3- ETIL-2(1 H -QUINOXALINONA General Los siguientes compuestos se prepararon por los métodos descritos en la literatura: 8-metoxi-4(3H)-quinazolinona (3) , 5 8-hidroxi-cinolina (C1 ),2 5,8-dihidroxi-quinoxalina (B39), 1 4,5-dihidroxi-fenazina (F5),3 4,8-dihidroxi-fenazina (F2),3 4-hidroxi-acridina (E1 ),4 y 5-hidroxi-3-metil-2(1 H)-quinoxalinona (B12)19. Los siguientes compuestos fueron originados comercialmente: 8-Hidroxi-quinazolina (A1 ), 4-hidroxi-fenazina (F1 ), 4, 10-fenantrolin-5-ol (D2), 4,7-fenantrolin-5,6-diol (D3) y 8-hidroxi-2-metil-4(3H)-quinazolinona (1 ). Aminas: etilamina, histamina, 2-(2-aminoetil)piridina, 2-(2-metilaminoetil)piridina; aldehidos: 4-imidazol-carboxaldehído, 2-tiazolcarboxaldehído y 2-piridincarboxaldehído, azoles: pirazol, imidazol, metilimidazol y 1 H-1 ,2,3-triazol, ácido borónicos: ácido fenilborónico, ácido 2-(trifluorometil)fenilborónico, ácido 2-metoxifenil-borónico, ácido o-tolilborónico, ácido 2-fluorofenilborónico, ácido 3-metoxifenilborónico, ácido 4-metoxifenilborónico, ácido m-tolilborónico, ácido 3,5-difluorofenilborónico, ácido 2,4-difluorofenilborónico, ácido 3-tiofenborónico, ácido 3-fluorofenilborónico y ácido 4-fluorofenilborónico; y reactivos de organocinc: bromuro de 2-piridilcinc, yoduro de 2-(metiltio)-fenilcinc, yoduro de 2-(etoxicarbonil)fenilcinc y bromuro de 6-metilpiridil-cinc (solución 0.5 M en THF) fueron comercialmente disponibles (Aldrich). Se adquirió ácido 3-piridilborónico de Frontier Scientific. Se preparó 2- aminometiltiazol de acuerdo con la literatura.13 Los solventes fueron de grado analítico y se utilizaron como suministrados. Se destiló THF a partir de sodio y benzofenona bajo argón. Se registraron espectros de RMN H (d, relativo a TMS) en un espectrómetro de Varían Unity 300 a menos que se indique lo contrario; Se dieron J-valores en hertz. Se registraron los datos de espectros de masas en un espectrómetro de masas Micromass Quattro II . Las síntesis de derivados de 6 clases de compuestos: 8-hidroxi-quinazolina, 8-hidroxi-quinoxalina, 8-hidroxi-cinolina, 4,7(4, 10)-fenantrolin-5-ol, 4-hidroxi-acridina y 6-hidroxi-fenazina, se describe en la Parte A, B, C, D, E y F, respectivamente. PARTE A: SÍNTESIS DE DERIVADOS DE 8-HIDROXI-QUINAZOLINA A2-A138 preparación de una serie de derivados de 8-hidroxi-quinazolina se resume en los Diagramas A1 -A5.
Clase A Clase B Clase C DIAGRAMA A1 DIAGRAMA A2 25 DIAGRAMA A3 DIAGRAMA A4 *- y 5-cloro; 5-cloro-7-yodo; 7-cIoro-5-yodo; 5,7-dicloro; y 5-bromo derivados de los mismos DIAGRAMA A5 DER: otros derivados mediante sustitución en la posición 2- (cloro/ciano) a un sujeto que necesita de los mismos, como se muestra en los DIAGRAMAS A1 - A4. También fue sustituida con halógeno la posición 5 (como se muestra en este DIAGRAMA) 25 Preparación de 4-Cloro-8-hidroxi-2-metil-quinazolina (A2)(Esquema A1 ) Esquema A 1 8-Hidroxi-2-metil-4(3H)-quinazolinona (0.01 mol) y oxicloruro de fósforo (10 mi) se calentaron bajo reflujo durante 30 minutos. El exceso de oxicloruro de fósforo se eliminó bajo presión reducida y se agregó el residuo a una mezcla de hielo (50 g) y agua (50 mi), y se ajustó el pH a 6 (amoníaco acuoso). Se aisló 4-cloro-8-hidroxi-2-metil-quinazolina (A2) por medio de filtración. Preparación de 8-Hidroxi-2-metil-quinazolina (A3)(Esquema A1 ) 4-Cloro-8-hidroxi-2-metil-quinazolina (0.01 mol) se trató con ácido yodhídrico (100 mi, destilado recientemente de un fósforo rojo) de acuerdo con el método descrito6 en la literatura. Este proporciona 8-hidroxi-2-metil-quinazolina (A3) como un sólido. Preparación de 8-Hidroxi-quinazolina-2-carboxaldehído (2) (Esquema A2) Esquema A2 Una solución de 8-hidroxi-2-metil-qu¡nazolina (A3)(5 mmol) en dioxano (1 0 mi) se agregó en gotas durante 3 horas a una mezcla agitada de Se02 (8.8 mmol) en dioxano (30 mi) a 50°C. La mezcla resultante se calentó luego a 80°C durante 16 horas, se dejó enfriar, y los sólidos se filtraron . El filtrado se concentró y se purificó por medio de cromatografía en columna sobre sílice (diclorometano/MeOH , 40: 1 ) . Esto produjo 8-hidroxi-quinazolina-2-carboxaldehído (2) como un sólido. Preparación de 2-[Alq uilam ino-meti l]-8-h id roxi-q u i noxalina (A4 - A7) (Esquema A2) Se ag regó triacetoxiborohidruro de sodio (1 mmol) a una solución agitada de 8-hidroxi-quinoxalina-2-carboxaldehído (1 mmol) y etilamina (1 mmol) en diclorometano (10 mi). La mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante 16 horas , se neutralizó (NaHC03 acuoso) , y se concentró. El residuo, después de la cromatografía en colum na sobre sílice, produjo A4. De una manera similar, la aminación reductiva de 2 con aminas: histamina produjo A5, 2-(2-aminoetil)piridina produjo A6, 2-(2-metilam inoetil)piridina produjo A7. Preparación de 8-hidroxi-quinazolina-2-carboxaldehído-Oximas (A8-A9) (Esquema A3) Esquema A3 Una mezcla de 8-hidroxi-quinazolina-2-carboxaldehído (2) (1 mmol), NaOAc (2 mmol), clorhidrato de hidroxilamina (1 .5 mmol) y agua (10 mi) se calentó a 100°C durante 15 minutos. Se aisló el precipitado por filtración . Este proporciona 8-hidroxi-quinazolina-2-carboxaldehído (A8) como un sólido .
La reacción, repetida utilizando 2 con clorhidrato metoxilamina en piridina, produjo A9. Preparación de 8-Hidroxi-2-metilamino-quinazolina (A10)(Esquema Esquema A4 Una solución del ácido 2-carboxílico-oxima (1 mmol) en MeOH (20 mi) se trató bajo condiciones de hidrogenólisis (H2 atmosférico, Pd/C al 10%) durante 16 horas. Los sólidos se filtraron y el filtrado se concentró para proporcionar 8-hidroxi-2-metilamino-quinazolina (A10). Preparación de ácido 4,8-dimetoxi-quinazolina-2-carboxílico (A11 ) (Esquema A5) Esquema A5 A una mezcla en agitación de 8-metoxi-4(3H)-quinazolinona5(3) (0.05 mol) y THF (1 00 mi) se agregó yodometano (0.1 mol), bromuro de tetrabutilamonio (1 00 mg) y NaOH acuoso (preparado a partir de 7.55 de NaOH en 20 mi de H20) . Después de 16 horas a 40°C, se concentró la mezcla y el residuo restante se dividió entre H20 y diclorometano (1 : 1 , 200 mi). La capa orgánica se lavó con salm uera, se secó y se concentró. La purificación en columna dio 4, 8-dimetoxi-quinazolina (4) . A una solución agitada de 4 (40 mmol) en CHCI3 (200 mi) a 0°C se agregó en gotas ácido m-cloroperbenzoico (44 mmol) durante 1 0 minutos. Después de 30 minutos adicionales a 0°C , la mezcla de dejó calentar a temperatura ambiente durante 30 minutos y luego se concentró hasta sequedad . Al residuo restante se agregó acetato de etilo y NaHC03 1 N (1 : 1 , 200 m i) ; las capas se separaron y la capa orgánica se secó (Na2S04), y se concentró. Esto proporciona el N-óx¡do 5. Una mezcla de 5 (30 m mol), benceno (80 m i) y sulfato de dimetilo (35 mmol) se agitó bajo reflujo durante 1 6 horas, se dejó enfriar, y se concentró in vacuo. Al residuo restante en H20 (1 00 mi) a 0°C se agregó NaCN (90 mmol) . Después de 3 horas , se neutralizó la mezcla de reacción (HOAc) y se extrajo con diclorometano, los extractos se combinaron y se secaron. La eliminación del solvente dio el 2-ciano-compuesto 6. Una mezcla de 6 (20 m mol) y NaOH (40 mmol) en H20 (20 m i) se calentó a 100°C durante 4 horas, y se enfrió. El pH de la solución se ajustó a 4 (HOAc glacial) y la mezcla se extrajo con acetato de etilo (50 mi x 4) . Los extractos combinados se secaron y se eliminaron los materiales volátiles. Esto proporcionó ácido 4, 8-dimetoxi-q uinazolina-2-carboxílico como un sólido. La subsiguiente des-O-metilación con BBr3 dio ácido 4,8-dihidroxi-quinazolina-2-carboxílico (A1 1 ) . Preparación de amidas del ácido 4,8-dih idroxi-quinazolina-2-carboxílico (A12 - A17) (Esquema A5) 1 , 3-Diciclohexilcarbodiimida (1 mmol) se agregó a una solución agitada de hidrato de 1 -hidroxibenzotriazol (1 mmol) y ácido 4, 8-dihidroxi-quinazolina-2-carboxílico (A11 )(1 mmol) en DMF y diclorometano (1 : 1 , 1 0 mi) . Después de 30 minutos, se agregó histamina (1 mmol) y la mezcla se agitó a tem peratura ambiente durante otras 1 6 horas. Los materiales volátiles se eliminaron luego in vacuo y el residuo restante dio, después de la purificación por cromatografía en columna sobre sílice (acetato de etilo/i-PrOH/NH4OH 2 N , 6:2: 1 ), [2-(1 H-imidazol-4-il)-etil-amida del ácido 4, 8-dihidroxi-quinazolina-2-carboxílico (A12) . Se repitió la reacción anterior utilizando am inas con A1 1 :2-(2-aminoetil)p¡rid¡na dio A13, 2-(aminometil)p¡ridina dio A14, 2-aminotiazol dio A15, 2-aminofenol dio A16, 1 ,2-fenilendiamina dio A17. Preparación de Amidas del ácido 8-hidroxi-quinazol ina-2-carboxílico (A18 - A23) (Esquema 5) El 4-hidroxi-compuesto (A12) (1 .2 m mol) y oxicloruro de fósforo (4 mi) se calentaron bajo reflujo durante 15 minutos y se dejaron enfriar. Se agregó hielo (50 g) y la mezcla se basificó con amoníaco acuoso. La mezcla se extrajo con diclorometano (20 mi x 3), los extractos se combinaron , se secaron y se concentraron. Esto proporcionó el correspondiente 4-cloro-compuesto 7.
A una mezcla ag itada de p-toluensulfonhidrazida (Aldrich , 2 mmol) en CHCI3 (1 0 mi) a 50°C se agregó en porciones d urante 1 0 minutos, el 4-cloro-compuesto 7 (1 mmol) . Después de 16 horas, se aisló el sólido mediante filtración , se lavó con H20, y se secó. Esto produjo el 4-N'-(p-toluensulfonhidrazino)-compuesto 21 . El 4-N'-(p-toluensulfonhidrazino)-compuesto 21 (0.8 mmol) se agregó a Na2C03 (1 0 mmol) y H20 (1 0 mi) a 95°C, y la mezcla se calentó bajo reflujo durante 1 5 minutos, se enfrió, se filtró, y se extrajo el filtrado con CHCI3. Los extractos se combinaron y se secaron . La eliminación subsiguiente de los materiales volátiles produjo la amida del ácido 8-hidroxi-quinazolina-2-carboxílico (A18) . De una manera similar, las 4(3H)-quinazolinonas restantes A13 - A17 se convirtieron en amidas del ácido 8-hidroxi-quinazolina-2-carboxílico (A19 - A23) . Preparación de 4-Aril(o heterocíclico)-8-hidroxi-2-metiI-quinoxalina (A24 - A37) (Esquema A6) Esquema A6 Se agregó 2-bromopropano (9 mmol) a una mezcla agitada de 4-cloro-8-hidroxi-2-metil-quinazolina (A2)(6 mmol), K2C03 (24 mmol) y DMSO (20 mi). Después de 1 6 horas a temperatura am biente, se agregó NH4CI saturado (20 mi) y la mezcla se extrajo con dicloromeíano (20 mi x 3) . Los extractos se combinaron y se concentraron . Se agreg ó éter dietílico (1 00 mi) al residuo y la mezcla resultante se lavó sucesivamente con NaOH 2 N, H20 y salm uera, y se secó (Na2S04). La eliminación del solvente produjo 4-cloro-8-isopropoxi-2-metil-quinazolina (35) como un sólido. A una mezcla agitada de 4-cloro-8-isopropoxi-2-metil-quinazolina (35) (0.58 mmol) , ácido fenilborónico (0.62 mmol) , Na2C03 2 N (7.2 mi) , EtOH (1 .2 mi) y benceno se agregó, bajo una manta de argón , Pd(PPh3)4 (20 mg) . La mezcla se agitó bajo reflujo durante 16 horas, se enfrió, y se concentró. La cromatografía en columna subsiguiente (acetato de etilo/hexano) proporcionó 8-isopropoxi-2-metil-4-fenil-q uinazolina (36) como un sólido. A una solución agitada de 8-¡sopropoxi-2-metil-4-fenil-quinazolina (36)(0.34 mmol) en diclorometano (2 mi) a -78° C se agregó BCI3 (1 .36 mi de una solución 1 M en diclorometano, 1.36 mmol) . La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente (durante 2 horas) y se agitó durante otras 2 horas. Se agregó eOH (5 mi) y la mezcla se concentró hasta sequedad. El proceso se repitió cuatro veces. Además del lavado del residuo restante con éter dietílico (2 mi x 3) proporcionó 8-hidroxi-2-meti(-4-fenil-quinazolina (A24) . De una manera similar, el tratamiento de 4-cloro-8-isopropoxi-2-metil-q uinazolina (35) con ácidos borónicos: ácido 2-(trifluorometil)fenil-borónico, ácido 2-metoxifenilborónico, ácido o-tolilborónico , ácido 2-fluorofenilborónico, ácido 3-metoxifenilborónico, ácido 4-metoxifenil- borónico, ácido m-tolilborónico, ácido 3,5-difluorofenilborónico, ácido 2,4-difluorofenilborónico, ácido 3-tiofenborónico, ácido 3-fluorofenilborónico, ácido 4-fluorofenilborónico y ácido 3-piridilborónico; y disociación de isopropoxi con BC13 dio 4-aril(o heterocíclico)-8-hidroxi-2-metil-quinazolinas (A25 - A37). Preparación de 4-Aril(o heterocíclico)-8-hidroxi-quinazolina (A38 -A51 ) (Esquema A7) 3 50 51 -64 A3S-AS1 Esquema A 7 Utilizando el procedimiento como se describió previamente en el Ejemplo 9, 8-metoxi-4(3H)-quinazolona5 (3) (10 mmol) y oxicloruro de fósforo proporcionó 4-cloro-8-metoxi-quinazolina 50. El tratamiento del 4-cloruro 50 con ácido fenilborónico como se describió en el Ejemplo 9 dio, después de la des-O-metilación con BBr3, el derivado 4-fenilo A38. La reacción de acoplamiento de 50 se repitió utilizando una serie de ácidos borónicos: ácido 2-(trifluorometil)fenilborónico, ácido 2-metoxifenilborónico, ácido o-tolilborónico, ácido 2-fluorofenilborónico, ácido 3-metoxifenil-borónico, ácido 4-metoxifenilborónico, ácido m-tolilborónico, ácido 3,5-difluorofenilborónico, ácido 2,4-difluorofenilborónico, ácido 3-tiofenborónico, ácido 4-fluorofenilborónico y ácido 3-piridilborónico dio 51 - 64; y disociación subsiguiente del éter metílico con BBr3 dio las 4-aril(o heterocíclico)-8-hidroxi-quinazolinas A39 - A51.
Preparación de 5-Cloro-8-hidroxi-quinazol¡na (A52) (Esquema A8) 68 -79 Esquema A8 Se agregó cloro (12 mmol) en una solución agitada de 8- hidroxi-quinazolina (A1) (1 0 mmol) en H2S04 al 93% siguiendo un procedimiento previamente publicado7. Después de 3 horas, se agregó hielo (100 g) y H20 (100 mi), la mezcla se basificó con amoníaco acuoso, se extrajo con diclorometano, y los extractos se secaron. La eliminación del solvente dio el 5-cloro-compuesto A52. Preparación de 5-Cloro-8-hídrox¡-7-yodo-quinazoIina (A53) (Esquema A8) Se agregó 5-cloro-8-hidroxi-quinazolina (1 0 mmol) a una solución agitada de ICI (12 mmol) en HCI concentrado (10 mi) .8 Después de 5 minutos, se aisló el precipitado mediante filtración, se lavó sucesivamente con H20, tiosulfato de sodio saturado y H20, y se secó. Esto proporcionó 5-cloro-8-hidroxi-7-yodo-quinazolina (A53) como un sólido. Preparación de 7-AriI(o heterocíclico)-5-cloro-8-hidroxi-quinazolinas (A54 - A67) (Esquema A8) El 8-hidroxi-compuesto A53 se convirtió en el éter isopropílico 65 correspondiente utilizando 2-bromopropano de acuerdo con el método como se describió en el Ejemplo 9. El tratamiento de 5-cloro-7-yodo-8-isopropoxi-quinazol¡na (65), de acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 9, con una serie de ácidos borónicos: ácido fenilborónico, ácido 2-(trifluorometil)fenilborónico, ácido 2-metoxifenilborónico, ácido o-tolilborónico, ácido 2-fluorofenil-borónico, ácido 3-metoxifenilborónico, ácido 4-metoxifenilborónico, ácido m-tolilborónico, ácido 3,5-difluorofenilborónico, ácido 2,4-difluorofenil-borónico, ácido 3-tiofenborónico, ácido 3-fluorofenilborónico, ácido 4-fluorofenilborónico y ácido 3-piridilborónico dio 66 - 79; y disociación subsiguiente del grupo 8-isopropox¡ con BCI3, dio A54 - A79. Preparación de 7-Cloro-8-hidroxi-quinazoIina (A69) (Esquema A9) A1 A88 A69 A70 Esquema A9 8-Hidroxi-quinazolina (A1 ) (0.1 mol) y ácido sulfúrico concentrado (50 mi) se calentaron a 100°C durante 5 horas, y se dejaron enfriar. La solución se agregó luego cuidadosamente a 300 mi de H20 frío. El precipitado resultante se aisló mediante filtración, se lavó con H20, y se secó. Esto proporcionó el ácido 5-sulfónico A68 como un sólido. A una mezcla agitada de ácido 5-sulfónico A68 (0.09 mol) y H20 (225 mi) se agregó KOH (0.25 mol) y NaOCl (230 mi de una solución que contiene 1 0-1 3% de cloro disponible) .9 Después de 1 .5 horas a temperatura ambiente, la solución se pasó a través de una columna de resina de Amberlite I R-120(H+). El efluente concentrado a 20 mi. Se agregó luego acetona (20 mi) y el precipitado se aisló por filtración. El lavado subsiguiente con acetona y secado dio 7-cloro-8-hidroxi-q uinazolina (A69). Preparación de 7-Cloro-8-hidroxi-5-yodo-quinazolina (A70) (Esquema A9) A una solución de 7-cloro-8-hidroxi-quinazolina (A69)(0.1 mol) y acetato de potasio (0.1 5 mol) en MeOH y H20 (19: 1 , 250 mi) se agregó, durante 30 minutos, una solución de yodo (0.095 mol) en MeOH y H20 (1 9: 1 , 350 mi) . La mezcla se calentó luego bajo reflujo durante 15 minutos, se enfrió y se agregó H20 (400 mi). El precipitado se aisló por filtración, se lavó con tiosulfato de sodio saturado y H20, y se secó. Esto proporcionó 7-cloro-8-hidroxi-5-yodo-quinazolina (A70) como un sólido. Preparación de 4-Aril(o heterocíclico)-7-cIoro-8-h idroxi-quinazolinas (A71 - A84) (Esquema A10) Esquema A 10 De acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 9, el tratamiento de 5-cloro-7-yodo-8-isopropoxi-quinazolina (80) , con una serie de ácidos borónicos: ácido fenilborónico, ácido 2-(trifluorometil)-fenilborónico, ácido 2-metoxifenilborónico, ácido o-tolilborónico, ácido 2-fluorofenilborónico, ácido 3-metoxifenilborónico, ácido 4-metoxifenil-borónico, ácido m-tolilborónico, ácido 3, 5-difluorofenilborónico, ácido 2,4-difluorofenilborónico, ácido 3-tiofenborónico, ácido 3-fluorofenilborónico, ácido 4-fluorofenilborónico y ácido 3-piridilborónico dio 81 - 94; y disociación subsiguiente del grupo 8-isopropoxi con BCI3, dio A71 - A84. Preparación de 2-Cloro-4,8-dimetoxi-quinoxalina (96) (Esquema A1 1 ) 5 S5 96 Esquema A 1 1 Se agregó Ac20 (6 mi) a una mezcla agitada del N-óxido 5 (10 mmol) y diclorometano (1 0 mi) . El solvente se eliminó luego in vacuo y la solución resultante se calentó bajo reflujo durante 1 hora, se enfrió, y se concentró. El residuo restante se lavó con éter dietílico ( 1 0 mi x 2). Esto proporcionó 4,8-dimetoxi-2(1 H)-quinazolinona (95) como un sólido. El tratamiento de 4,8-dimetoxi-2( 1 H)-quinazolinona (95) (5 mmol) con oxicloruro de fósforo (20 mi) y elaboración estándar de acuerdo con el Ejemplo 8 proporcionó el 2-cloruro 96. Preparación de 2-Ari l(o heterocíclico)-4,8-dihidroxi-quinazoIinas (A85 - A98) (Esquema A12) Esquema A 12 De acuerdo con el procedimiento descrito previamente en el Ejemplo 9, el acoplamiento del 2-cloruro 96 (0.1 mmol) con ácidos borónicos: ácido fenilborónico, ácido 2-(trifluorometil)fenilborónico, ácido 2-metoxifenilborónico, ácido o-tolilborónico, ácido 2-fluorofenilborónico, ácido 3-metoxifenilborónico, ácido 4-metoxifenilborónico, ácido m-tolil- borónico, ácido 3,5-difluorofenilborónico, ácido 2,4-difluorofenilborónico, ácido 3-tiofenborónico, ácido 3-fluorofenilborónico, ácido 4-fluorofenil- borónico y ácido 3-piridilborónico dio 97 - 110; y disociación subsiguiente del éter 8-O-metílico con BBr3, dio A85 - A98. Preparación de 2-Aril(o heterocíclico)-8-hidroxi-quinazoIina (Esquema A12) El tratamiento secuencia del 4-hidroxi-compuestos A85 - A98 con oxicloruro de fósforo, p-toluensulfonhidrazida y Na2C03, de acuerdo con el método previamente descrito en el Ejemplo 6, proporcionó el 2-aril(o heterocíclico)-8-hidroxi-quinazolinas A99 - A112. Preparación de 2-Cloro-8-metoxi-quinazolina (113) (Esquema A13) A1 113 Esquema A 13 De acuerdo con el procedimiento previamente descrito en el Ejemplo 6, 8-hidroxi-quinazolina (A1) (20 mmol) y yodometano dio 8-metoxi-quinazolina (111). Se trató luego 8-metoxi-qu¡nazolina (111) (10 mmol) con ácido m-cloroperbenzoico que dio el N-óxido 112. El tratamiento subsiguiente del N-óxido 112 con Ac20 y oxicloruro de fósforo de acuerdo con el Ejemplo 14 produjo 2-cloro-8-metoxi-quinazolina (113). Preparación de 2-[(N'-metil)-heterocíclico]-8-hidroxi-quinazolinas (A113 - A116) (Esquema A13) Una solución de 2-cloro-8-metoxi-quinazolina (113)(10 mmol) en piridina (10 mi) se agregó clorhidrato de metilamina (Aldrich, 15 mmol). Después de 16 horas a temperatura ambiente, se concentró in vacuo la mezcla. La purificación en columna subsiguiente del residuo dio el 2-(N'-metil)-compuesto 114. La aminación de 114 (1 mmol) con 2-bromopiridina (1.2 mmol) en presencia de [Pd2(dba)3] y DPPP de acuerdo con el método descrito11 en la literatura, proporcionó 8-metoxi-2-[(N'-piridil)met¡l]-quinazol¡na"(115). El tratamiento subsiguiente de 115 con BBr3 (Ejemplo 6) produjo el derivado 8-hidroxi-quinazolina A113. Se repitió la aminación de 114 utilizando una serie de heterocíclicos 2-bromo-sustituidos: 2-bromotiazol, 4-bromo-1 H-imidazol y 4-bromo-1-metilimidazol que proporcionó 116 - 118; y disociación subsiguiente del éter O-metílico con BBr3, dio A114 - A116. Preparación de 5,7-Diamino-8-hidroxi-quinazolina (A117) (Esquema A14) Esquema A 14 A una solución de 8-hidroxi-quinazolina (A1 ) (0.05 mol) en ácido acético (1 75 mi) se agregó una solución de ácido nítrico (0.16 mol) en ácido acético (25 mi) , manteniendo la temperatura por debajo de 30°C. Después de 2 horas, se aisló 5,7-dinitro-compuesto 119 mediante filtración, se lavó con H20, y se secó. La hidrogenólisis del 5,7-dinitro-compuesto 1 1 9 (0.045 mol) en MeOH (200 mi) en presencia de óxido de platino dio, después de la filtración para eliminar sólidos y concentración, 5,7-diamino-8-hidroxi-quinazolina (A1 1 7) . Preparación de 5,7-Diacilamino-8-h idroxi-q u inazolinas (A118 - A1 1 9) (Esquema A14) Se calentaron ácido acético (2 mmol) y CDI (2.2 mmol) bajo reflujo en THF seco (1 0 mi) durante 1 hora. Se agregó 5, 7-diam ino-8-hidroxi-quinazolina (A1 1 7) (2 mmol) y la mezcla se calentó bajo reflujo durante 1 6 horas. La eliminación de los materiales volátiles in vacuo y cromatografía en columna subsig uiente del residuo resultante proporcionó 5,7-desacetamido-8-hidroxi-quinazolina (A118) . De una manera similar, el tratamiento de 5,7-diamino-8-hidroxi-quinazolina (A1 17) con ácido benzoico proporcionó 5 ,7-dibenzoilamido-8-hidroxí-quinazolina (A119) . Preparación de 2-Acetil-4,8-dihidroxi-quinazoIina (A120)(Esquema A15) Esquema A 15 Bromuro de metilmagnesio (1 .2 mi de una solución 3 de éter dietílico, 3.5 m mol) se agregó en gotas en una solución agitada de 6 (0.6 mmol) en éter dietílico ( 1 0 I) a -15°C. La solución resultante se dejó calentar a temperatura ambiente durante 2 horas y se agitó a tem peratura ambiente durante otras 4 horas. La mezcla de reacción se enfrió rápidamente luego con NH4CI saturado y se extrajo con acetato de etilo (1 0 mi x 3), se combinaron los extractos, se secaron y se concentraron para proporcionar 120. El tratamiento de 120 con BBr3 (Ejemplo 6) dio A120. Preparación de 2-Acetil-8-hidroxi-q uinazolina (A121 )(Esq uema A15) El tratamiento sucesivo de A120 con oxicloruro de fósforo, p-toluensulfonhidrazida y Na2C03 (Ejemplo 6) dio A121 . Preparación de 2-S-Aceti l-4,8-d i hid roxi-q uinazolina (A122) (Esquema A15) Una solución de 120 (1 mmol) y un reactivo de Lawesson (0.7 mmol) en THF (10 mi) se calentó bajo reflujo durante 16 horas y se dejó enfriar. La concentración y cromatografía de columna subsiguiente del residuo dio 121 . El tratamiento de 121 con BBr3 (Ejemplo 6) dio A122. Preparación de 2-S-Acetil-8-hidroxi-quinazolina (A123) (Esquema A15) El tratamiento sucesivo de A 22 con oxicloruro de fósforo, p- toluensulfonhidrazida y Na2C03 (Ejemplo 6) dio A123. Preparación de 8-Hídroxi-quinazolina-2-urea (A124) (Esquema A16) Esquema A 16 El 2-cloruro 113 se convirtió en la amina 122 de acuerdo con las condiciones de reacción estándar de Chichibabin. La 2-amina 122 (1 mmol) e isocianato (1 mmol) en CHCI3 seco (10 mi) se calentaron luego bajo reflujo durante 16 horas. Esto dio, después de la filtración, el derivado de urea 123. El tratamiento de 123 con BBr3 dio A124. Preparación de 8-Hidroxi-quinazolina-2-tiourea (A125) (Esquema A16) El derivado 2-urea 123 (1 mmol) y un reactivo de Lawesson (0.7 mmol) en THF (10 mi) se calentó bajo reflujo durante 16 horas, se dejó enfriar y se concentró. La purificación en columna subsiguiente sobre sílice dio 124. El tratamiento de 124 con BBr3, de acuerdo con el Ejemplo 6, proporcionó luego A125.
Preparación de 2-Acilamido-8-hidroxi-quínazolinas (A126 - A127) (Esquema A17) Esquema A17 Se aciló la 2-amina 122 bajo condiciones estándar: Ac20 dio 125; anhídrido benzoico dio 126. El tratamiento respectivo de 125 y 126 con BBr3 (Ejemplo 6) proporcionó A126 y A127. Preparación de 2-Tioac¡lamido-8-hidroxi-quinazolinas (A128 - A129) (Esquema A17) Los compuestos acilamido 125 y 126 se trataron en forma individual con un reactivo de Lawesson de acuerdo con las condiciones previamente descritas (Ejemplo 21), que proporcionó, después de la elaboración estándar, 127 y 128. La disociación subsiguiente de éter O-metílico con BBr3 dio luego A128 y A129 respectivamente. Preparación de 2-(acilamido)-met¡l-8-hidroxi-qu¡nazolinas (A130) (Esquema A18) Esquema A18 La acilación estándar de la amina A10 utilizando una serie de anhídridos ácidos proporcionó, después de la purificación en columna, los derivados de 2-(acilamido)-metilo A130. Preparación de 2-(Azol)-8~hidroxi-quinazolinas (A131 - A134) (Esquema A19) R = heterocíclico de 5 miembros Esquema A 19 Una mezcla del 2-cloruro 113 (0.5 mmol) y pirazol (2.5 mmol) se calentó a 175°C en un autoclave de acero durante 48 horas. El producto crudo se trató luego con BBr3 de acuerdo con el procedimiento descrito en el Ejemplo 6. La purificación subsiguiente por cromatografía en columna dio 2-pirazol-1 -il-quinazolin-8-ol (A131 ). Se repitió el procedimiento anterior utilizando imidazol, 2-metilimidazol y 1 H-1 ,2, 3-triazol para dar A132 - A134. Preparación de 2-Aril(o heterocíclico)-8-hidroxi-quinazolinas (A135 -A138) (Esquema A20) R = arilo, heteroarilo Esquema A20 De acuerdo con una procedimiento de literatura12, se trató el 2-cloruro 1 13 (5 mmol) con cloruro de acetilo y yoduro de sodio en AcCN.
La elaboración estándar seguido por la cromatografía en columna sobre gel de sílice proporcionó el 2-yodo-compuesto 129. A una solución agitada de 129 (0.1 mmol) y PdCI2(PPh3)2 (5 mg) en THF (2.5 mi) bajo una atmósfera de argón a temperatura ambiente se agregó durante 5 minutos bromuro de 2-piridilcinc (0.37 mi de una solución 0.5 M en THF, 0.185 mmol). Después de 2 horas, se agregó NH4CI saturado (5 mi) y la mezcla se extrajo con diclorometano (10 mi x 3). Los extractos combinados se lavaron con H20 y salmuera, se secaron y se concentraron. La cromatografía en columna subsiguiente sobre sílice dio 8-metoxi-2-pirid-2-il-quinazolina. Se disoció él éter 8-O-metílico de acuerdo con el procedimiento del Ejemplo 6, para dar 2-(pirid-2-il)-8-hidroxi-quinazolina (A135). Se repitió la reacción utilizando: yoduro de 2-(metiltio)-fenilcinc, yoduro de 2-(etoxicarbonil)fenilcinc y bromuro de 6-metilpiridil-cinc para dar A136 - A138. Preparación de 5-Bromo-8-hidroxi-quinazolina (A139) (Esquema A21) Esquema A21 La bromación de 8-hidroxi-quinazolina (A1) con N-bromosuccimida, de acuerdo con el método previamente descrito por Gerson y cNeil,15 dio 5-bromo-8-hidroxi-quinazolina (A139). Preparación de (2-Piridin-2-il-etil)-amida del ácido 8-hidroxi-quinazolina-2-sulfónico (A140 y A141) (Esquema A22) Esquema A22 RNH2: de preferencia, etilamina, histamina, 2-(2-aminoet¡l)- piridina, 2-(2-metilaminoet¡l)piridina Preparación de 2-Alquil(o aril o heterocíclico)sulfanil-8-hidroxi- quinazol ina (A142 y A143) (Esquema A23) R = alquilo, arito, R = alquilo, arilo, heteroarilo heteroarilo Esquema A23 RBr: de preferencia, 2-bromopiridina, 2-bromotiazol, 4-bromo 1 H-imidazol, 4-bromo-1 -metilimidazol Aminación reductiva de aminas (A4 - A7) del Ejemplo 3 para dar A142 A153 (Esquema A24) A4-A7 A142 -A1S3 Esquema A24 RCHO: de preferencia, r-imidazolcarboxaldehído, 2-tiazolcarboxaldehído, 2-piridincarboxaldehído Preparación de 5-fluoro-, 7-fluoro, 5,7-difluoro, 5-cloro-7-fluoro y 7-cloro-5-fluoro-quinazolinas (A154 - A158) (Esquema A25) Esquema A25 La síntesis de los derivados de quinazolina fluorados (A154 -A158) seguido por métodos de literatura18 para 8-hidroxi-quinolina. Preparación de Amidas del ácido 8-hidroxi-quinazolina-7-carboxílico (A160) (Esquema A26) Esquema A26 8-Hidroxi-quinazolina (A1) se convirtió en ácido 8-hidroxi-quinazoIina-2-carboxílico (A159) siguiendo el método de literatura20 para la carboxilación de 8-hidroxi-quinolina. Conversión subsiguiente de A159 en la amida A160 seguido del procedimiento descrito en el Ejemplo 8. PARTE B: SÍNTESIS DE DERIVADOS DE 8-HIDROXI-QUJNOXALINA Los diagramas B1 - B4 muestran las rutas a los derivados 8-hidroxi-quinoxalina. Los procedimientos sintéticos fueron, a menos que se indiquen de otra manera, análogos a aquellos descritos previamente en la Parte A. DIAGRAMA B1 DIAG RAMA B2 DER: derivados vía sustitución del grupo 3-cloro/ciano a un sujeto que necesita del mismo, por ejemplo NR1R2 ( 1 = H, alquilo; R2= alquilo, arilo, heteroarilo, SR CONHR, alquilamino *- y sustitución de halógeno, de preferencia en las posiciones 5 y/o 7 DIAGRAMA B3 R1 = H, alquilo R2 = alquilo, acilo DIAGRAMA B4 PARTE C : SÍNTESIS DE DERIVADOS DE 8-HI DROXI-CI NOLINA Los diagramas C 1 y C2 muestran las rutas a los derivados 8-hidroxi-cinolina. Los procedimientos sintéticos fueron , a menos que se establezcan de otra manera, análogos a aquellos descritos previamente en la Parte A.
DIAGRAMA C1 = alquilo, arilo DIAGRAMA C2 PARTE D: SÍNTESIS DE DERIVADOS DE 4,7(4, 1 0)-FENANTROLI -5-OL Los diagramas D 1 - D4 m uestran las rutas a los derivados 4,7(4, 1 0)-fenantrolin-5-ol. Los procedimientos sintéticos fueron, a menos que se establezcan de otra manera, análogos a aquellos descritos previamente en la Parte A. Las reacciones mostradas en el Diagrama D1 también se repitieron utilizando 4, 7-fenantrolin-5,6-diol (D3) en lugar de 4,7-fenantrolin-5-ol (D1 ) como material de partida.
?? DIAGRAMA D2 20 25 ?? DIAGRAMA D4 R = alquilo, arilo, adío Síntesis de Skraup de 4,7-Fenantrolin-5-ol (D1 ) Una mezcla en agitación de 3-hidroxi-p-fenilendiamina (0.185 mol), glicerol (1 .17 mol), solución de arsénico (1 00 mi; preparada de 123 g de pentóxido de arsénico en 100 mi de H20) y ácido sulfúrico diluido (400 mi; preparado al agregar 240 mi de ácido sulfúrico concentrado a 200 mi de H20) se calentó bajo reflujo durante 4 horas, se dejó enfriar y luego se hizo alcalino con amoníaco concentrado. La mezcla se extrajo con benceno. La eliminación del benceno produjo 4,7-Fenantrolin-5-ol (D1 ).
PARTE E: SÍNTESIS DE DERIVADOS DE 4-HIDROXI-ACRI DINA Se prepararon las 4-hidroxi-acridinas mediante condensación de Ullman4'14 de un ácido 2-halobenzoico sustituido y una anilina sustituida como se muestra en el Diag rama E 1 . Por lo tanto , la condensación de anilina misma con ácido 2-bromo-3-nitro-benzoico dio 4-hidroxi-acridina (E1 ). De una manera análoga, la o-anisidina dio 4-amino-5-hidroxi-acridina y 4,5-dihidroxi-acridina. Fueron preparados otros derivados de esas acridinas (Diag rama E2) utilizando condiciones de reacción análogas previamente descritas para la síntesis de los compuestos en las Partes A-D. DIAG RAMA E1 DIAG RAMA E2 PARTE F: SÍNTESIS DE DERIVADOS DE 4,5(4,8)-DIHI DROXI-FENAZINA Los compuestos, 4,5- y 4,8-dihidroxi-fenazinas (F1 y F2), se prepararon de acuerdo con el procedimiento de literatura3. La síntesis de derivados de estos compuestos, como se resume en los Diagramas F1 -F3, a menos que se establezca de otra manera, seguido por condiciones de reacción análogas a aquellas descritas previamente en las Partes A-E. DIAGRAMA F1 DIAGRAMA F2 20 25 DIAGRAMA F3 REFERENCIAS 1. F.E. King, N.G. Clark and P.M.H. Davis, J. 1949, 3012-3016. 2. E.J. Alford, H. Irving, H.S. Marsh and K. Schofieid, J. 1952, 3009-3017. 3. A. Sugimoto, S. Kato, H. Inoue and E. Imoto, Bull. Chem. Soc. Jpn., 1976, 49(1), 337-338. 4. A. Corsini and E.J. Billo, J. Inorg. Nucí. Chem., 1970, 32, 1241-1255. 5. R.N. lyer, N. Anand and M.L. Dhar, J. Sci. Ind. Res., 1956, 15C, 1-7. 6. A. Albert and A. Hampton, J. 1952, 4985-4993. 7. H. Gerson, M. W. McNeil and S.G. Schulman, J. Org. Chem., 1971, 36, 1616-1618. 8. A. Atsushi, N. Kazuo, H. Kinichi and O. Masana, Radioisotopes, 1974, 23(1), 6-9. 9. H. Gerson, M. W. McNeil and A.T. Grefig, J. Org. Chem., 1969, 34, 3268-3270. 10. H. Gerson and M.W. McNeil, J. Org. 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Shakirov, Zhurnal Prikladnoi Khimii, 1994, 67(7), 1 227-1229. 3 PREPARACIÓN DE 8-H1DROX1-H .6T NAFT1R1 DINAS Una serie de 7-sustituido-8-hidroxi-[ 1 , 6]naftiridinas pueden prepararse utilizando la ruta mostrada en el Esquema 9 (ver por ejemplo: Anthony y colaboradores, Patente WO 02/30931 A2). Por lo tanto, el ácido 2,3-piridindicarboxílico es transformado fácilmente a través de una serie de reacciones dentro del éster metílico del ácido 8-hidroxi-[1 ,6]naftiridina-2-carboxílico. El éster 7-metílico puede entonces convertirse, por ejem plo, bajo condiciones de Curtius, en el compuesto 7-am ino correspondiente. La funcionalidad am ino , a su vez, puede ser además elaborado utilizando métodos conocidos. Por ejemplo, la diazotización en presencia de HCI proporciona el cloruro correspondiente. Otra elaboración del cloruro puede lograrse fácilmente utilizando métodos conocidos. Esquema 9 t 7-amidas etc 'preparado de acuerdo con Anthony et al. Patente WO 02/30931 A2 5,7-Disustituido-8-hidroxi-[1 ,6]naftirid¡nas pueden ser adj untadas de un intermediario avanzado como un éster metílico del ácido 5, 8-dihidroxi-[1 , 6]naftirid¡na-7-carboxílico (preparado de acuerdo con el procedimiento de Albert y Hampton, J. Chem. Soc, 1952, 4985; Blanco y colaboradores, J. Heterocyclic Chem., 1996, 33, 361 ). La cloración de éster metílico del ácido 5, 8-d¡hidrox¡-[ , 6]naftiridma-7-carboxílico con POCI3 o SOCI2 proporciona éster metílico del ácido 5-cloro-8-hidroxi-[1 , 6]-naftiridina-7-carboxílico. La elaboración del cloruro en una serie de 5-sustituido-8-hidroxi-[1 ,6]naftiridinas puede lograrse utilizando métodos conocidos. Otra elaboración utilizando métodos de literatura proporciona una serie de 5,7-disustituido-8-hidroxi-[1 , 6]naftiridinas. Derivados de 8-hidrox¡-[1 , 6]naftiridina sustituida en 2-, 3- y/o 4-posiciones pueden sintetizarse utilizando un ácido 2,3-piridindicarboxílico apropiadamente sustituido. Por ejemplo, el ácido 6-metil-2,3-pirid¡ndicarboxílico comercialmente disponible puede transformarse en el éster metílico del ácido 8-hidroxi-2-metil-[1 ,6]naftiridina-7-carboxílico (Esquema 10) . Otros ácidos 2,3-piridindicarboxílicos sustituidos pueden prepararse fácilmente utilizando métodos conocidos (ver por ejem plo: Wepplo, Patente de los Estados Unidos 4,460, 776). Otra elaboración de la 8-h¡droxi-2-metil-[1 ,6]naftiridina proporciona una serie de análogos como derivados de 2-(metilam ino)metilo y 2-(alquilam ino)metilo. Diversos derivados de 7-sustituidos de estos com puestos pueden prepararse de los compuestos correspondientes 7-metoxicarbonilo, 7-cloro o 7-am ino utilizando métodos conocidos.
Esquema 10 4 PREPARACIÓN DE PIRIDOr3.2-cnPlRllVllDIN-4-OL. G1.71NAFTIRIDIN- 8-OL. PIRIDOr2.3-dTPIRIDAZIN-8-OL. G1.6TNAFTIRIDIN-8-OL. PIRIDOr3,4-b1PIRAZIN-5-OL. PIRIDOr3,4-bTPlRAZIN-8-OL. n,51NAFTIRIDIN-4,8-DIOL, G1 ,5T AFTIRlDIN-8-OL Y PIRlDOr4.3-cn- PI RIMIDI N-8-OL General Los siguientes reactivos fueron originados comercialmente: - aminas: etilamina, histamina, 2-(2-aminoetil)pir¡dina, 2-(2-metiIaminoetil)- piridina; aldehidos: 4-imidazolcarboxaldehído, 2-tiazolcarboxaldeh ído y 2- piridincarboxaldeh ído, azoles: pirazol, imidazol , metillmidazol y 1 H-1 ,2,3- triazol, ácido borónicos : ácido fenilborónico, ácido 2-(trifluorometil)fenil- borónico, ácido 2-metoxifenilborónico, ácido o-tolilborónico, ácido 2- fluorofenilborónico, ácido 3-metoxifenilborónico, ácido 4-metoxifenil- borónico, ácido m-tolilborónico, ácido 3, 5-difluorofenilborónico, ácido 2,4- difluorofenilborónico, ácido 3-tiofenborónico, ácido 3-fluorofenilborónico y ácido 4-fluorofenilborónico; y reactivos de organocinc: bromuro de 2-piridilcinc, yoduro de 2-(metiltio)fenilcinc, yoduro de 2-(etoxicarbonil)-fenilcinc y bromuro de 6-metilpiridilcinc (solución 0.5 M en THF) (Aldrich). Se adquirió ácido 3-piridilborónico de Frontier Scientific y pirido[3,2-d]-pirimidin-4-ol de Ambinter, Francia. Se preparó 2-aminometiltiazol de acuerdo con la literatura.1 Los solventes fueron de grado analítico y se utilizaron como suministrados. Se destiló THF a partir de sodio y benzofenona bajo argón. Se registraron espectros de RMN 1H (d, relativo a TMS) en un espectrómetro de Varían Unity 300 a menos que se indique lo contrario; Se dieron J-valores en hertz. Se registraron los datos de espectros de masas en un espectrómetro de masas Micromass Quattro I I . Se describe la síntesis de derivados de 8 clases de compuestos: pirido[3,2-d]pirimidin-4-ol (A) , [1 ,7]naftiridin-8-ol (B), pirido[2,3-d]piridazin-8-ol (C), [1 ,6]naftiridin-8-ol (D), pirido[3,4-b]pirazin-5-ol (E), pirido[3,4-b]pirazin-8-ol (F), y [1 ,5]naftirid¡n-4,8-diol, [1 ,5]naftiridin-8-ol (G) y pirido[4,3-d]pirimidin-8-ol (H).
Los Diagramas A1 - A3 resumen las rutas utilizadas en la síntesis de una serie de derivados de pirido[3, 2-d]pirimidin-4-ol. La preparación de los derivados de [1 ,7]naftiridin-8-ol se describe en los Diagramas B1 - B2. Se preparó el compuesto B1 siguiendo el método de literatura2 para la síntesis de un compuesto similar. La síntesis del pirido[2,3-d]piridazin-8-ol mismo y derivados de C1 y C2 seguido del método descrito previamente3 por Brzezinski y colaboradores. Otros derivados en esta serie se prepararon siguiendo las rutas resumidas en los Diagramas C 1 - C4. Los Diagramas D 1 - D2 m uestran las rutas con una serie de derivados de [1 ,6]naftiridin-8-ol. La síntesis del compuesto D1 utiliza el método4 de Blanco y colaboradores. Otros miembros en esta serie han sido preparados siguiendo las rutas mostradas en los Diag ramas D 1 -D2. El Diagrama E 1 describe la ruta a una serie de derivados de pirido[3 ,4-b]piraz¡n-5-ol. La condensación de 1 ,2, 3-triam inopiridina con 2, 3-dihidroxi-1 ,4-dioxano dio pirido[3,4-b]pirazin-5-ol (E1 ) , el compuesto principal en esta serie; la misma reacción que em plea 2, 3,4-triaminopiridina como material de partida (Diagrama F 1 ) dio pirido[3 ,4-b]pirazin-8-ol (F1 ) . Se prepararon otros derivados en las clases p¡rido[3,4-b]pirazin-5-ol y pirido[3,4-b]pirazin-8-ol utilizando las rutas mostradas en los Diagramas E 1 y F1 . Los Diagramas G 1 - G2 m uestran las rutas empleadas en la síntesis de una serie de derivados de [1 , 5]naftirid¡n-4, 8-diol y [1 , 5]naftiridin-8-ol. La síntesis del compuesto G1 , el precursor con el com puesto principal , [1 ,5]naftiridin-4, 8-diol , seguido de la ruta descrita5 por Brown y Dewar. Se preparó4 pirido[4, 3-d]pirimidin-8-ol (H1 ) siguiendo la ruta mostrada en el Diagrama H 1 , empleando ácido 4, 5-pirimidin- dicarboxílico como material de partida. Se prepararon otros derivados esta clase utilizando rutas como se muestra en los Diagramas H 1 y H2. DIAG RAMA A1 DIAGRAMA A2 DIAG RAMA A3 R= CO lo, - del DIAGRAMA A1 heterocíclico), arilo, heterocíclico, NR2R3 (R2 « H, alquilo; R3 = alquilo, heterocíclico, acilo), NH.CO(S).NH2, S02NHR4 del DIAGRAMA A2 R= R = SR1 (R1 = alquilo, arilo, heterocíclico), arilo, heterocíclico, NH2 NR2R3 (R2 - H, alquilo; R3 = alquilo, heterocíclico, acilo), NH.C0(S).NH2, S02NHR* C(0).NHRe, -CH2N(R2)R3; g — grupo de R 25 DIAG RAMA B2 ilo; co, R1 = H, alquilo; Ra = alquilo, arilo, acilo DIAGRAMA C1 = arilo, heteraciclico, R = arilo, heteraciclico, NH2,NR1R2{R1=H, NH2< NRRZ {R = H, alquilo, zs alquilo, alquilo, R2¾ alquilo, heteraciclico, acilo), heteraciclico, acilo), NH.C(0).NH2, NH.C(S),NH2 NH.C(0).NH2, NH.C(S).NH2 DIAGRAMA C2 R = H, alquilo; R2 = alquilo, arilo, alquilamino, acilo 20 25 DIAGRAMA C3 R = arilo, heterocíclico, NH2, NR1R2 (R1 = H, alquilo; R2 ss alquilo, heterociclico, acilo), SR3 (R3 = alquilo, heterociclico), SOaNHR , NH.CO(S).NH2, GONHR5, -CH2NH2, -CH2N(R1) 2 - de los DIAGRAMAS C1 Y C2 R1 -- H, alquilo; Rz s alquilo, arilo, heterocíclico, acilo DIAG RAMA C4 R1 - arilo, heterocíclico, H2, NRZR3 (R2 = H, alquilo; R3 = alquilo, heterocíclico, acilo), SR4 (R4 = alquilo, heterocíclico), S02NHR6, NH.CO(S).NH2, CONHR6, -CH2NH2, -CH2N(R2)R3 - de los DIAGRAMAS C1 YC2 25 DIAGRAMA D1 S02NHF¾ heterocíclico), arilo, heterocíclico; NR¾3 (R2 = H, alquilo; R3=alquilo, heterocíclico, acilo), NaCO(S).N¾, S02NHRs DIAGRAMA D2 25 DIAGRAMA E1 DIAGRAMA F1 R , R alquilo, alquilo sustituido, arilo, heterociclico, OH DIAGRAMA G1 NRZR3 (R2 - H, alquilo; R3 = alquilo, heterociclico, acilo), NH.CO(S).NH2, S02NHR5 25 DIAGRAMA G2 25 DIAGRAMA H1 sH, alquilo; R9 s H, alquilo, acilo) DIAGRAMA H2 Rs = CONHR7, .CH IC 'JR* (RS = H, alquilo; Re a H, alquilo, arilo, acilo) DER: derivados del mismo, preparados via sustitución del grupo 2-metilo a un sujeto que necesita de los mismos, por ejemplo, COOH, CONHR, alquilamino, alquilamido, oxima, alquiloxima REFERENCIAS 1. (a) A. Dondoni, G. Fantin, M. Fogagnoio, A. edici and P. Pedrini Synthesis, 1987, 998-1001. (b) A. Dondoni, F. L. Merchan, P Merino, I. Rojo and T. Tejero, Synthesis, 1996, 641-646. 2. A. Albert and A. Hampton , J. , 1952, 4985-4993. 3. J.Z. Brzezinski , H . B. Bzowski and J . Epsztajin , Tetrahedron, 1 996, 52, 3261 -3272. 4. M. Blanco, M. G. Lorenzo , I . Perillo and C. B. Schapira, J. Heterocyclic Chem. , 1996, 33, 363-366. 5. S. B. Brown and M.J .S. Dewar, J. Org. Chem. , 1978, 43, 1331 -1337. (5) PREPARACIÓN DE 8-HIDROXI-6h-ri .6TNAFTIR1 D1N-5-ONA. 4- HIDROXI-4a.8a-DlHIDRO-PIRANOr3.2-b1PIRIDlN-2-ONA. 8^ HlDROXI-6H-n,61 NAFTl RI N-5-ONA, DlBENZOra,glQU INOLlZIN-8- ONA Y 4-HIDROXI-1 H-PIRlDOr3,2-d1PIRllVllDIN-2-ONA General Los siguientes reactivos fueron originados comercialmente: -aminas: etilamina, histamina, 2-(2-arriinoetil)piridina , 2-(2-metilaminoet¡l)-piridina; aldehidos: 4-imidazolcarboxaldeh ído, 2-tiazolcarboxaldeh ído y 2-piridincarboxaldehído, azoles: pirazol , imidazol, metilimidazol y 1 H-1 ,2,3-triazol, ácido borónicos: ácido fenilborónico, ácido 2-(trifluorometil)fenil-borónico, ácido 2-metoxifenilborónico, ácido . o-tolilborónico, ácido 2-fluorofenilborónico, ácido 3-metoxifenilborónico, ácido 4-metoxifenil-borónico, ácido m-tolilborónico, ácido 3, 5-difluorofenilborónico, ácido 2,4-difluorofenilborónico, ácido 3-tiofenborónico, ácido 3-fluorofenilborónico y ácido 4-fluorofenilborónico; y reactivos de organocinc: bromuro de 2-piridilcinc, yoduro de 2-(metiltio)fenilcinc, yoduro de 2-(etoxicarbonil)-fenilcinc y brom uro de 6-metilpiridilcinc (solución 0.5 M en TH F) (Aldrich). Se adquirió ácido 3-piridilborónico de Frontier Scientific. Se preparó 2-aminometiltiazol de acuerdo con la literatura.4 Los solventes fueron de grado analítico y se utilizaron como suministrados. Se destiló THF a partir de sodio y benzofenona bajo argón. Se registraron espectros de RMN 1 H (d, relativo a TMS) en un espectrómetro de Varían Unity 300 a menos que se indique lo contrario; Se dieron J-valores en hertz. Se registraron los datos de espectros de masas en un espectrómetro de masas Micromass Quattro I I . Se describe la síntesis de derivados de 5 clases de com puestos: 8-hidroxi-6H-[1 , 6]naftiridin-5-ona (A) , 4-hidroxi-4a, 8a-dihidro-pirano[3,2-b]piridin-2-ona (B) , 8-hidroxi-6H-[1 , 6]naftirin-5-ona (C) , dibenzo-[a,g]quinolizin-8-ona (D) y 4-hidroxi-1 H-pirido[3, 2-d]pirimid¡n-2-ona (E).
La condensación de 3-amino-plcolin-2-ato de etilo con anhídrido acético de acuerdo con el método de Zhou y colaboradores1 dio 8-hidroxi-6H-[ , 6]naftiridin-5-ona (A1 ) . Sustituyendo 3-amino-picolin-2-ato de etilo respectivamente con 5-cloro-3-amino-picolin-2-ato de etilo y 6-metil-3-amino-picolin-2-ato de etilo, se obtuvieron los correspondientes derivados 2-metil- y 3-cloro-8-hidroxi-6H-[1 , 6]naftiridin-5-ona. Otra derivatización de estos sistemas como se m uestra en los Diagramas A1 - A4 dio una serie de 8-hidroxi-6H-[1 , 6]naftiridin-5-onas. La preparación de una serie de 4-hidroxi-4a, 8a-dihidro-pirano[3,2-b]p¡r¡din-2-onas se describe en los Diag ramas B 1 - B2. El método de Blanco y colaboradores2 se emplea para la síntesis de C2 que después de hidrólisis de ácido subsiguiente proporciona 8-hidroxi-6H-[1 , 6]naftirin-5-ona (C1 ). Se prepararon otros derivados en esta serie sig uiendo las rutas mostradas en los Diagramas C1 - C2. Los Diagramas D1 - D2 muestran la preparación de una serie de dibenzo[a, g]quinolizin-8-onas. La etapa clave, que im plica la construcción del sistema de anillo, seguido por el método previamente descrito3 por Colye y colaboradores. El Diagrama E 1 m uestra las rutas em pleadas en la preparación de una serie de derivados de 4-hidrox¡-1 (a/qí;/7ac/o)-pirido[3,2-d]pirimidin-2-ona.
DIAG RAMA A1 NH- cooa = alquilo Las reacciones anteriores fueron repetidas sustituyendo COOEt DIAGRAMA A2 3 » alquilo, arito, acilo Las reacciones anteriores fueron repetidas sustituyendo 25 DIAGRAMA A3 R = H, alquilo R°« alquilo, alquilamino, acilo Las reacciones anteriores fueron repetidas sustituyendo DIAGRAMA A4 Las reacciones anteriores fueron repetidas sustituyendo con YY « COOEt SN OOEt DIAG RAMA B1 Las reacciones anteriores fueron repetidas sustituyendo DIAGRAMA B2 alquilo, alquilamino, acilo Las reacciones anteriores fueron repetidas sustituyendo T - a??™° DIAGRAMA C1 20 25 DIAGRAMA C2 alquilo, arilo, rociclico, NR3R4 (R3 = H, alquilo; R* = alquilo, NH.CO(S).NH2l ?? DIAGRAMA D2 DIAGRAMA D3 amino sustituido heterociclioo), arilo, heterociclico, R = halógeno, alquilo, CN, N ¾ NR"R5 [R4 * H, alquilo; R5 «alquilo, heteroaryl. acyl), NH.C0(S).NH2, SOzNHR6 R1 = halogen, amtde, amino, subsítuted amino DIAGRAMA E1 REFERENCIAS 1. Z.-L. Zhou, J.M. Navratil, S.X. Caí, E.R. Whittemore, S.A. Espitia, J.E. Hawkinson, M. Tran, R.M. Woodward, E. Weber and J.F.W. Keana, Bioorg. Med. Chem., 2001, 9, 2061-2071. 2. M. Blanco, M.G. Lorenzo, I. Perillo and C.B. Schapira, J. Heterocyclic Chem., 1996, 33, 363-366. 3. J.D. Coly, J.F. Challiner, E.J. Haws and G.L. Newport, J. Chem. Res., M, 1985, 3748-3747. 4. (a) A. Dondoni, G. Fantin, M. Fogagnolo, A. edici and P. Pedrini, Synthesis, 1987, 998-1001. (b) A. Dondoni, F.L. Merchan, P. Merino, I. Rojo and T. Tejero, Synthesis, 1996, 641-646. (6) PREPARACIÓN DE 9-HIDROXI-PIRIDOn ,2-aTPIRIMIDIN-4-ONA La 9-hidroxipirido[1 ,2-a]pirimidin-4-ona misma se sintetizó de acuerdo con el procedimiento de literatura (Dennin y colaboradores, J. Heterocyclic Chem., 1991, 28, 1287). Pueden prepararse derivados de 9-hidroxipirido[1 ,2-a]pir¡midin-4-ona utilizando métodos conocidos (ver por ejemplo." Yale y colaboradores, Patente de los Estados Unidos 4,022,897). Por ejemplo, la condensación de 2-amino-3-h¡droxipiridina comercialmente disponible con un éster etílico del ácido 2-sustituido-3-oxo-propiónico apropiado (para métodos de preparación, ver por ejemplo: arabout y colaboradores, Patente FR 2,765,582) produce un intermediario enamina que bajo condiciones de deshidratación produce la 3-sustituido-9-hidroxipirido[1 ,2-a]pirimidin-4-ona (Esquema 11). Puede lograrse otra elaboración en la posición 8 utilizando métodos reportados conocidos (ver por ejemplo: Smirnow y colaboradores, Chemistry of Heterocyclic Compounds, 1992, 12, 1425). Esquema 11 Esquema 12 muestra una ruta alternada para algunas hidroxipirido[1 ,2-a]pirimidin-4-onas funcionalizadas donde una 2-amino-3-hidroxipiridina apropiadamente sustituida es condensada con un éster etílico del ácido 2-sustituido-3-oxo-propiónico. Por ejemplo, la 2-amino-3-cloro-3-hidroxipiridina (ver Gudm undsson y colaboradores, Synthetic Communications, 1 997, 27(5) , 861 , para preparación) y el éster etílico del ácido 2-(4-clorofenil)-3-oxo-propiónico dieron un derivado de 8-cloro; la última puede elaborarse además utilizando métodos conocidos. Esquema 12 (7) PREPARACIÓN DE 8-Hl DROXI-4(3H)-QUI NAZOLINONA. 9- HIDROXIPlRIMIPOrr .6-a1PlRI MI DIN-4-ONA Y 9-HIDROXIPIRIDO- ri ,2-a1PlRI IDIN-4-ONA General Los siguientes compuestos/reactivos fueron originados comercialmente: -aminas: etilamina, histamina, 2-(2-am inoetil)piridina, 2-(2-metilaminoetil)piridina; aldehidos: 4-imidazolcarboxaldehído, 2-tiazolcarboxaldehído y 2-piridincarboxaldehído, azoles: pirazol, imidazol , metilimidazol y 1 H-1 ,2, 3-triazol , ácido borónicos: ácido fenilborónico, ácido 2-(trifluorometil)fenil-borónico , ácido 2-metoxifenilborónico, ácido o-tolilborónico, ácido 2-fluorofenilborónico, ácido 3-metoxifenilborónico, ácido 4-metoxifenilborónico, ácido m-tolilborónico, ácido 3, 5-difluorofenil- borónico, ácido 2,4-difluorofenilborónico, ácido 3-tiofenborónico, ácido 3-fluorofenilborónico y ácido 4-fluorofenilborónico; y reactivos de organocinc: bromuro de 2-piridilcinc, yoduro de 2-(metiltio)fenilcinc, yoduro de 2-(etoxicarbonil)fenilcinc y bromuro de 6-metilpiridilcinc (solución 0.5 M en TH F) (Aldrich). Se adquirió ácido 3-piridilborónico de Frontier Scientific. Se preparó 2-aminometiltiazol de acuerdo con la literatura.1 Los solventes fueron de g rado analítico y se utilizaron como suministrados. Se destiló TH F a partir de sodio y benzofenona bajo argón . Se registraron espectros de RMN H (d, relativo a TMS) en un espectrómetro de Varían Unity 300 a menos q ue se indique lo contrario; Se dieron J-valores en hertz. Se registraron los datos de espectros de masas en un espectrómetro de masas icromass Quattro I I . Se describe la síntesis de derivados de 3 clases de compuestos: 8-hidroxi-4(3H)-q uinazolinona (A) , 9-hidroxipirim¡do[1 ,6-a]-pirímidin-4-ona (B) y 9-hidroxipirido[1 ,2-a]pirimid¡n-4-ona (C).
Se em pleo el método2 de lyer y colaboradores en la síntesis de compuestos A1 y A2. Otra derivatización de estos compuestos para proporcionar una serie de 8-hidroxi-4(3H)-quinazolinona se emplea las rutas mostradas en los Diagramas A1 - A2. La halogenación de las posiciones 5- y/o 7- en el sistema de 8-hidroxi-4(3H)-quinazolinona seguido por los métodos previamente descritos3 en la literatura para las reacciones en 8- idroxiquinolinas. La síntesis del sistema principal en las clases B y C, los compuestos B1 y C1, empleados en el procedimiento previamente reportado4 por Dennin y colaboradores. Otra derivatización de B1 y C1 sigue las rutas mostradas en los Diagramas B1 - B2 y C1 - C2, respectivamente. DIAGRAMA A1 R2 - alquilo, acilo; R3 = alquilo DIAGRAMA A2 *- y derivados con sustitución de halógeno, de preferencia en las posiciones 5 y/o 7 indicadas por asteriscos DIAGRAMA B1 DIAGRAMA B2 alquilamino, acilo 25 DIAGRAMA C1 , ., R = alquilo, arilo -s alquilo; R = H2, alquilo, arilo = alquilo, arilo, alquilaminc DIAGRAMA C2 REFERENCIAS 1. (a) A. Dondoni, G. Fantin, . Fogagnolo, A. Medici and P. Pedrini, Synthesis, 1987, 998-1001. (b) A. Dondoni, F.L. Merchan, P. Merino, I. Rojo and T. Tejero, Synthesis, 1996, 641-646. 2. R.N. lyer, N. Anand and M.L. Dhar, J. Sci. Ind. Res. A, General, 1956, 15C, 1-7. 3. H. Gerson, M.W. McNeil, R. Parmegiani and R.K. Godfrey, J. Med. Chem., 1972, 15, 987-989, y referencias citadas en la misma. 4. F. Dennin, D. Blondeau and H. Sliwa, J. Heterocyclic Chem., 1991, 28, 1287-1291. General Los siguientes compuestos/reactivos fueron originados comercialmente: 2,4-dicloroanisol, ácido 2,4-diclorobenzoico, ácido 2,3-piridin-dicarboxílico, ácido 6-metil-2,3-piridindicarboxílico y 2-amino-3-hidroxipiridina (Aldrich). Se prepararon estos compuestos de acuerdo con los procedimientos de literatura: éster metílico del ácido 5-cloro-8-hidroxi-[1 ,6]naftiridin-7-carboxílico (PB 1045) de éster metílico del ácido 5,8-dihidroxi-[ ,6]naftiridin-7-carboxílico (Albert and Hampton, J. Chem. Soc, 1952, 4985; Blanco y colaboradores, J. Heterocyclic Chem., 1996, 33, 361); 9-hidroxipirido[1 ,2-a]pirimidin-4-ona (PB 1048)(Dennin y colaboradores, J. Heterocyclic Chem., 1991, 28, 1287); 8-hidroxi-3H-quinazolin-4-ona (PB 1049) (lyer and Dhar, J. Sci. Ind. Res., 1956, 15C, 1). Los solventes fueron de grado analítico y se utilizaron como suministrados. Se destiló THF a partir de sodio y benzofenona bajo argón. Se registraron espectros de RMN H (d, relativo a TMS) en un espectrómetro de Varían I nova 400 a menos que se indique lo contrario; Se dieron J-valores en hertz. Multiplicidad: s = sing ulete, d = doblete, m = multiplete, sep = septete, t = triplete, q = cuartete. Se registraron datos de espectros de masas por electronebuiizacion en un espectrómetro de masas Micromass Quattro I I . Ejemplo 1 (A) 6,8-Dic]oro-3-metiIquinoxalin-5-ol (1 064) y 6,8-D¡cIoro-2-metilquinoxalin-5-ol (1065 Etapa A: Preparación de 6, 8-Dicloro-3-metilquínoxalin-5-ol y 6, 8-Dicloro-2-met¡lquinoxaHn-5-ol A una suspensión agitada de 2,3-díamino-4,6-dicloroanisol (preparada a partir de 2,4-dicloroanisol de acuerdo con las condiciones reportadas por Philps' Gloeilampenfabrieken , N .V. ( 1 973) , Patente GB 1 30371 1 ) (1 .48 g, 7.1 5 mmol) , AcOH 2 M (14.2 mi) y una solución de NaOAc 4 M (8.8 mi) a 60°C se agregó una solución acuosa de aldehido pirúvico al 40% (1 . 5 mi). La mezcla se agitó luego a la misma temperatura durante otros 40 minutos. El precipitado se aisló mediante filtración y se lavó con H20 (5 mi x 2) . Se disolvió luego este sólido ( 1 .21 g) en acetato de etilo y la solución se filtró a través de un tapón corto de Si02-gel (acetato de etilo-hexanos, 1 :3). Esto proporcionó una mezcla de 6, 8-dicloro-5-metoxi-2-metilquinoxalina y 6,8-dicloro-5-metoxi-3-metilquinoxalina 1 : 1 como un sólido de color rosa pálido ( 1 . 1 3 g) . A una solución enfriada con hielo de la mezcla de los compuestos 2-metil- y 3-metil- (2.48 g , 0.01 mol) en diclorometano (30 mi) se agregó BBr3 (20.1 mi de una solución 1 M de diclorometano). El baño de enfriamiento se eliminó después de 1 hora y la mezcla se dejó agitar a 30°C durante 16 horas. Se agregó eOH y la solución se concentró. Se repitió el proceso reciente cuatro minutos más. Se agregó diclorometano (20 mi) al residuo restante y se ajustó el pH de la mezcla a 7 (NH4OH concentrado) . La capa orgánica se secó, se concentró, y se filtró a través de un tapón corto de Si02-gel (diclorometano/MeOH , 1 9: 1 ) para dar una mezcla de 6, 8-dicloro-2-metilquinoxalin-5-ol y 6,8-dicloro-3-metilquinoxalin-5-ol 1 : 1 como un sólido de color amarillo claro (1 .51 g). Se extrajo una muestra de esta mezcla con éter dietílico (3x) . Los extractos etéreos se concentraron y el residuo se recristalizó a partir de isopropanol para proporcionar 6, 8-dicloro-2-metil-quinoxalin-5-ol como agujas de color amarillo. El sólido restante después de la extracción con éter dietílico se lavó con MeOH para dar 6, 8-dicloro-3-metil-quinoxalin-5-ol como un sólido de color rosa pálido. 6,8-Dicloro-3-metilquinoxalin-5-ol: RMN 1H (CDCI3): d 8.88 (s, 1 H) , 8.01 (br, 1 H) , 7.79 (s, 1 H), 2.83 (s, 3 H). 6,8-Dicloro-2-metilquinoxalin-5-ol : RMN 1 H (CDCI3): d 8.68 (s, 1 H) , 7.95 (br, 1 H) , 7.83 (s, 1 H), 2.87 (s, 3 H). Etapa B: Preparación de 8-BencHoxi-5, 7-dicloro-2-met¡lquinoxalina Una mezcla de 6,8-dicloro-3-metilquinoxalin-5-ol (150 mg, 0.655 mmol), bromuro de bencilo (0.20 mi, 1.68 mmol), KOH (0.09 g) y EtOH (1 0 mi) se calentó bajo reflujo durante 16 horas, se enfrió, y se concentró. Se agregó dicloronnetano (20 mi) y la mezcla se lavó con H20 (5 mi x 2), se secó y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de Si02-gel (dlclorometano/MeOH, 1 :0-150: 1 ) para dar 8-benciloxi-5,7-dicloro-2-metilquinoxalina (98 mg, 47%). - RMN H (CDCI3): d 8.82 (s, 1 H), 7.81 (s, 1 H), 7.58 (m, 2 H), 7.38 (m, 2 H), 5.45 (s, 2 H), 2.85 (s, 3 H). Etapa C: Preparación de 8-Benciloxi-5,7-dicloroquinoxalina-2-carboxaldehído Una suspensión del producto 2-metilo de la Etapa B (93 mg , 0.291 mmol) y Se02 (100 mg) en dioxano (4 mi) y H20 (0.4 mi) se calentó a reflujo durante 3 horas. La mezcla se enfrió, se filtró (celite), y se concentró. Se agregó diclorometano y el material insoluble se filtró. El solvente se evaporó y el residuo se purificó por cromatografía de Si02-gel (diclorometano) para producir el aldehido deseado como un sólido blanquecino (57 mg, 59%). 8-Benciloxi-5,7-dicloroquinoxalina-2-carboxaldehído. RMN 1 H (CDCI3): d 10.31 (s, 1 H), 9.48 (s, 1 H), 8.06 (s, 1 H), 7.58 - 7.35 (m, 5 H), 5.55 (s, 2 H). (B) Clorhidrato de 6,8-dicloro-3-(dimetilaminometil)quinoxalin-5-ol (1066) Triacetoxiborohidruro de sodio (50 mg, 0.236 mmol) se agregó a una solución agitada del aldehido de la Etapa C (57 mg, 0.171 mmol), clorhidrato de dimetilamina (15.1 mg, 0.185 mmol) y Et3N (0.023 mi) en 1 ,2-dicloroetano (2 mi). Después de 1 hora, se agregó diclorometano (20 mi) y la solución resultante se lavó con una solución saturada de NaHC03 (5 mi x 2), se secó y se concentró. El residuo se purificó mediante cromatografía de Si02-gel (diclorometano/MeOH 1:0 - 75:1) para producir la (8-benciloxi-5,7-dicloro-quinoxalin-2-ilmetil)dimetilamina deseada como un sólido de color amarillo pálido (38 mg, 61%). - RMN 1H (CDCI3): d 9.11 (s, 1 H), 7.84 (s, 1 H), 7.58 - 7.35 (m, 5 H), 5.47 (s, 2 H). Una solución de (8-benciloxi-5,7-dicloro-quinoxalin-2-ilmetil)-dimetilamina (38 mg, 0.105 mmol) en HCI concentrado (2 mi) se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas. La solución de color anaranjado se concentró hasta sequedad y el residuo restante se lavó con éter dietílico (2 mi x 3) para dar el producto deseado como un sólido de color amarillo claro (27 mg, 83%). Clorhidrato de 6,8-d¡cloro-3-(dimetilaminometil)quinoxalin-5-ol: RMN 1H (DMSO-d6): d 8.75 (s, 1 H), 7.78 (s, 1 H), 4.40 (br, 2 H), 2.13 (s, 6 H); espectro de masas: m/z 272, 274, 276 (M+ + 1, 100%, 66%, 11%).
Ejemplo 2 (A) 5,7-Dicloro-3-(4-fluorofenil)-8-hidroxi-3H-qu¡nazolin-4-ona (1055) Etapa A: Preparación de Ácido 4, 6-dicloro-3-hidroxi-2-nitrobenzoico Hidrato de cloruro de estaño(I I) (50 g , 0.29 mol) se agregó a una solución de ácido 2,4-dicloro-5-nitrobenzoico (preparado de acuerdo con un procedimiento reportado (Golstein, H . And Schaaf, E. , Helv. Chim. Acta. , 1957, 57(23) , 1 32)) ( 1 0.0 g , 0.045 mol) en EtOH (200 mi) . La mezcla se agitó a 70°C durante 0.5 horas, se enfrió y se vertió una vez. El pH de la mezcla se ajustó a 8 (NaHC03 saturado) . La suspensión se dejó agitar a tem peratura am biente durante 5 horas y se volvió a acidificar a pH 5 (HOAc glacial) . La suspensión de color blanco resultante se extrajo continuamente con acetato de etilo, los extractos se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron y se concentraron para producir la amina deseada como un sólido blanquecino (8.8 g , 96%). Ácido 5-amino-2,4-d¡clorobenzo¡co: RMN H (CD3OD) : d 7.30 (s, 1 H), 7.27 (s, 1 H) . Se ag regó ácido acético (27 mi) a ácido 5-amino-2,4-diclorobenzoico (8.0 g , 0.041 mol) en HOAc glacial ( 150 mi). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 0.5 horas y se concentró para producir la acetamida deseada como un sólido de cojor blanco (9.6 g, 96%) . Ácido 5-acetamido-2,4-diclorobenzoico: RMN 1 H (CD3OD) : d 8.32 (s, 1 H), 7.62 (s, 1 H), 2.19 (s, 3 H). Se agregó en pequeñas porciones ácido 5-acetamido-2,4-diclorobenzoico (9.6 g, 0.039 mol) durante 30 minutos a una solución agitada enfriada con hielo de ácido nítrico humeante (1 .8 mi, 0.043 mol) y ácido sulfúrico concentrado (120 mi). Después que se completó la adición, se agregaron más ácido nítrico humeante (17 mi) y ácido sulfúrico concentrado (80 mi) a intervalos de 30 minutos y 60 minutos. La mezcla de reacción se dejó agitar luego durante 2.5 horas adicionales a 0°C, se dejó calentar a 12-16°C y se dejó agitar a esta temperatura hasta que se consumió todo el material de partida (aproximadamente 3 horas). La solución se vertió en hielo y se extrajo con acetato de etilo (3x). Los extractos orgánicos se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron, y se concentraron para dar ácido 3-acetam¡do-4,6-dicloro-2-nitrobenzoico como un sólido de color anaranjado (9.8 g, 86%). Ácido 3-acetamido-4,6-dicloro-2-nitrobenzoico: RMN 1 H (CD3OD): d 8.01 (s, 1 H), 2.13 (s, 3 H). Se agregó ácido 3-acetamido-4,6-dicloro-2-nitrobenzoico (9.7 g , 0.033 mol) a una solución de KOH (18.7 g , 0.034 mol) en H20 (85 mi). La solución se calentó bajo reflujo durante 18 horas y se enfrió a temperatura ambiente. Se agregó HCI concentrado para ajustar el pH a 0. La mezcla se diluyó con acetato de etilo y H20 y se dejó agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos. Las capas se separaron; la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (3x), los extractos se combinaron con la capa orgánica original, se lavaron con salmuera, se secaron y se concentraron para producir ácido 4,6-dicloro-3-hidroxi-2- niírobenzoico como un sólido de color rojo oscuro (7.4 g, 89%); p.f. 188-189°C (p.f. lit. (Linderberg, M., Hellberg, S., Bjork, S. et al, Eur. J. Med. Chem., 1999, 34, 729-744): 186°C (desc.)). Ácido 4,6-dicloro-3-hidroxi-2-nitrobenzoico: RMN 1H (CD3OD): d 7.79 (s, 1 H); espectro de masas: m/z 250, 252, 254 (M+ -1, 100%, 66%, 11%). Etapa B: Preparación de 2-Amino-4,6-dicloro-N-(4-fluorofenil)-3-h idroxib enzamida Se agregó CDI (2.2 g, 0.013 mol) a una solución agitada de ácido 4,6-dicloro-3-hidroxi-2-nitrobenzoico (3.0 g, 0.012 mol) en THF anhidro (30 mi) y DMF (2 mi). Después de 40 minutos, se agregó 4-fluoroanilina (4 mi, 0.042 mol). La solución se calentó bajo reflujo durante la noche, se enfrió, y se concentró hasta que se hizo un aceite viscosos de color marrón oscuro. El aceite se purificó mediante cromatografía de S¡02-gel (diclorometano/metanol, 19:1-9:1) para producir 4,6-dicloro-N-(4-fluorofenil)-3-hidroxi-2-nitrobenzamida como un aceite de color marrón (2.7 g, 65%). 4,6-Dicloro-N-(4-fluorofenil)-3-hidroxi-2-nitrobenzamida: RMN 1H (CD3OD): d 7.58 (m, 2 H), 7.44 (s, 1 H), 7.07 (m, 2 H). Una suspensión de hidrato de cloruro de estaño(ll) (8.8 g, 0.039 mol), 4,6-dicloro-N-(4-fluorofenil)-3-hidroxi-2-nitrobenzamida (2.7 g, 0.008 mol) y EtOH (70 mi) se calentó a 70°C durante 1 hora y se dejó enfriar a temperatura ambiente. La mezcla se vertió sobre hielo, se basificó a pH 8 (NaHC03 saturado), y se agitó a temperatura ambiente durante 1.5 horas antes de que se volviera a acidificar a pH 6.5 con HOAc glacial. La suspensión se filtró; el filtrado se concentró para dar un sólido de color beige. El sólido de color beige se combinó con la torta de filtro y se extrajo con acetato de etilo caliente (5x). Los extractos se combinaron para proporcionar 2-amino-4,6-dicloro-N-(4-fluorofenil)-3-hidroxibenzamida como un sólido (2.0 g, 79%). 2-Amino-4,6-dicloro-N-(4-fluorofenil)-3-hidroxibenzamida: RMN H (CD3OD): d 7.69 (m, 2 H), 7.09 (m, 2 H), 6.73 (s, 1H). Etapa C: Preparación de 5,7-Dicloro-3-(4-fluorofenil)-8-hidroxi-3H-quinazolin-4-ona (1055) Una solución de CDI (0.65 g, 4.0 mmol) y ácido fórmico (0.17 mi, 3.6 mmol) en THF anhidro (18 mi) y DMF (2 mi) se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas. Se agregó luego una solución de la amina de la Etapa B (1.01 g, 3.2 mmol) en THF (15 mi), la solución se calentó bajo reflujo durante 15 horas, y se concentró. El sólido de color marrón resultante se lavó con acetato de etilo para producir el compuesto del título como agujas de color blanco (0.49 g, 47%). 5,7-Dicloro-3-(4-fluorofenil)-8-hidroxi-3H-quinazolin-4-ona: RMN H (CDCI3/CD3OD, 9:1): d 8.10 (br, 1 H), 7.50 (s, 1 H), 7.36 (m, 2 H), 7.21 (m, 2 H); espectro de masas: m/z 325, 327, 329 (M+ + 1, 100%, 66%, 1 1 %). (B) 5 J-Dicloro-3-ciclopropM-8-hidroxi-3H-qu"mazolin-4-ona (1 061 ) Los siguientes compuestos se prepararon utilizando los métodos descritos en el Ejemplo 3: de esta forma, reemplazando 4-fluoroanilina con ciclopropilamina en la Etapa B (se realizó la reacción en un tubo sellado a 70°C) dio, después de la cromatografía de Si02-gel (diclorometano/MeOH, 9: 1 ), 4,6-dicloro-N-ciclopropil-3-hidroxi-2-nitro-benzamida (43%).- R N 1 H (CD3OD) : d 7.37 (s, 1 H), 2.73 (m, 1 H), 0.74 (m, 2 H), 0.59 (m, 2 H); espectro de masas: m/z 289, 291 , 293 (M+ -1 , 100%, 66&, 1 1 %). La reducción de 4,6-dicloro-N-ciclopropil-3-hidroxi-2-nitro-benzamida con hidrato de cloruro de estaño(ll) utilizando las condiciones como se describieron en la Etapa B produjo 2-amino-4,6-dicloro-N-ciclopropil-3-hidroxibenzamida (93%).- RMN 1 H (CD3OD): d 6.67 (s, 1 H), 2.86 (m, 1 H), 0.79 (m, 2 H), 0.62 (m, 2 H) . El acoplamiento mediado con CDI de ácido fórmico con 2-amino-4,6-dicloro-N-ciclopropil-3-h¡droxibenzamida (como se describió en la Etapa C) dio, después del lavado con acetato de etilo y MeOH, 5,7-dicloro-3-ciclopropil-8-hidroxi-3H-quinazolin-4-ona como un sólido de color blanco (40%).- RMN H (CDCI3/CD3OD, 9: 1 ): d 8.30 (s, 1 H), 7.46 (s, 1 H), 3.22 (m , 1 H), 1 .21 (m, 2 H), 0.94 (m , 2 H); espectro de masas: m/z 271 , 273, 275 (M+ + 1 , 100%, 66%, 1 %).
(C) 5,7-Dicloro-8-hidroxi-3H-quinazoIin-4-ona (1067) Una solución de ácido 2,4-dicloro-5-hidroxi-6-nitrobenzoico (Etapa A) (4.40 g, 17.6 mmol) y cloruro de tionilo (2 mi, 27 mmol) en tolueno (60 mi) se calentó bajo reflujo durante 1 hora y se dejó enfriar a temperatura ambiente. Se agregó la solución a NH4OH concentrado (40 mi) a 0°C. El baño de enfriamiento se eliminó y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas y luego se concentró para dar 4,6-dicloro-3-hidroxi-2-nitrobenzamida cruda como un sólido de color marrón. -RMN H (CD3OD): d 7.33 (s, 1 H); espectro de masas: /z 249, 251, 253 (M+ - 1, 100%, 66%, 1 %). La reducción de 4,6-dicloro-3-hidroxi-2-nitrobenzamida con hidrato de cloruro de estaño(ll) de acuerdo con las condiciones como se describieron en la Etapa B, dio 2-amino-4,6-dicloro-3-hidroxibenzam¡da como un sólido de color beige (2.5 g, 62% (2 etapas)).- RMN 1H (CD3OD): d 6.69 (s, 1 H). De acuerdo con el procedimiento descrito en la Etapa C, la 2-amino-4,6-dicloro-3-hidroxibenzamida y ácido fórmico en presencia de CDI, dio, después del lavado del producto crudo con MeOH, 5,7-dicloro-8-hidroxi-3H-quinazolin-4-ona como un sólido de color blanco (36%).- RMN H (DMSO-d6): d 8.12 (s, 1 H), 7.55 (s, 1 H); espectro de masas: m/z 229, 231, 233 (M+ - 1, 100%, 66%, 11%). Ejemplo 3 (A) 7-Morfolin-4-il-[1 ,6]naftiridin-8-oI (1053) Etapa A: Preparación de 7-Amino-8-isopropox¡-[1 , 6]naftiridina Se agregó 2-bromopropano (0.9 mi) a una mezcla agitada de éster metílico del ácido 8-hidroxi-[1 ,6]naftiridina-7-carboxílico (preparado de acuerdo con Anthony y colaboradores, Patente WO 02/30931 A2) (1 .00 g, 4.90 mmol), K2C03 (2.79 g) y DMSO (15 mi). Después de 40 horas a 50°C, se agregó NH4CI saturado (20 mi) y la mezcla se extrajo con diclorometano (10 mi x 3). Los extractos se combinaron y se concentraron. Al residuo se agregó éter dietílico (40 mi) y la mezcla resultante se lavó sucesivamente con H20 (5 mi x 2) y salmuera (10 mi), y se secó. La eliminación del solvente dio éter metílico del ácido 8-isopropoxi-[1 ,6]-naftiridina-7-carboxílico (1 .06 g, 88%).- RMN 1 H (CDCI3): 5 9.16 (dd, J=1 .9 y 4.3, 1 H), 9.03 (s, 1 H), 8.34 (dd, J = 1 .9 y 8.5 1 H), 7.63 (dd, J=4.3 y 8.5, 1 H), 5.33 (sep, J=6.2, 1 H), 4.04 (s, 3 H), 1 .42 (d, J=6.2, 6 H). Una solución de éter metílico del ácido 8-¡sopropoxi-[1 ,6]-naftiridina-7-carboxílico (1 .06 g, 4.30 mmol) en MeOH (1 0 mi) se agregó en gotas durante 5 minutos a una solución agitada de hidrato de hidracina (2.5 mi) , se dejó agitar durante una hora adicional, y se concentró. Esto proporcionó la hidracida de 7-acilo cruda deseada como un jarabe del color del oro (1 .06 g). Hidracida del ácido 8-¡sopropoxi-[1 ,6]naftiridina-7-carboxílico: RMN 1H (CDC ): d 9.16 (dd, J = 1 .8 y 4.0, 1 H), 9.08 (br, 1 H), 9.07 (s, 1 H), 8.35 (dd, J=1.8 y 8.2, 1 H), 7.64 (dd, J=4.0 y 8.2, 1 H), 6.02 (br, 1 H), 5.39 (sep, J=6.2, 1 H), 4.10 (br, 2 H), 1.45 (d, J=6.2, 6 H). A una solución enfriada con hielo en agitación de la hidracida de 7-acilo (1.06 g, 4.30 mmol) en HCI 1 M (6 mi) se agregó en gotas una solución de nitrito de sodio (334 mg, 4.84 mmol) en H20 (1.5 mi) a tal velocidad que la temperatura no se elevó por arriba de 5°C. La mezcla se dejó agitar a 0°C durante 20 minutos adicionales y luego se concentró in vacuo. Se agregaron HOAc (5 mi) y H20 (5 mi) y la solución de color anaranjado resultante se calentó a 95°C durante 24 horas, se enfrió, y se concentró. Se agregó H20 (10 mi), se ajustó el pH de la mezcla a 8 (NH4OH concentrado), se extrajo con diclorometano (10 mi x 3), y se secó.
La eliminación del solvente dio la 7-amina como un sólido de color anaranjado (467 mg, 53%). 7-Amino-8-isopropox¡-[1,6]naftiridina: RMN 1H (CDCI3): d 8.88 (dd, J=1.5 y 4.0, 1 H), 8.62 (s, 1 H), 8.07 (dd, J=1.5 y 8.2, 1 H), 7.15 (dd, J=4.0 y 8.2, 1 H), 5.16 (sep, J=6.2, 1 H), 4.83 (br, 2 H), 1.39 (d, J=6.2, 6 H); espectro de masas: m/z 204 (M+ + 1, 100%). Etapa B: Preparación de 7-Cloro-8-isopropoxi-[1 ,6]naftiridina Se agregó en porciones nitrito de sodio (1.8 g, 0.026 mol) en una solución agitada de la amina (1.00 g, 4.92 mmol) en HCI concentrado (20 mi) a 0 - 5°C. La mezcla se dejó agitar a esta temperatura durante una hora adicional y luego se dejó calentar a temperatura ambiente durante 1 hora. Se agregó hielo y se ajustó el pH de la mezcla a 8 (NH4OH concentrado). La mezcla se extrajo luego con diclorometano, los extractos se lavaron con salmuera, se secaron y se concentraron. La purificación sobre cromatografía de Si02-gel (diclorometano/ eOH, 200:3) proporcionó el 7-cloruro deseado como un sólido incoloro (400 mg, 36%). 7-Cloro-8-isopropoxi-[1,6]naftiridina: RMN H (CDCI3): d 9.04 (dd, J = 1.8 y 4.2, 1 H), 8.76 (s, 1 H), 8.23 (dd, J=1.8 y 8.4, 1 H), 7.46 (dd, J=4.2 y 8.4, 1 H), 5.14 (sep, J=6.2, 1 H), 1.38 (d, J=6.2, 6 H); espectro de masas: m/z 223, 225 (IVT + 1, 100%, 33%). Etapa C: Preparación de 7-Morfolin-4-¡l-[1 ,6]naft¡r¡d¡n-8-ol (1053) Una mezcla del 7-cloruro de la Etapa B (100 mg, 0.448 mmol) y morfolina (2 mi) se calentó a 180°C durante 20 horas y luego se dejó enfriar a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se extrajo con MeOH y los extractos se concentraron. El residuo se purificó utilizando cromatografía de Si02-gel (diclorometano/MeOH, 20:1) para proporcionar el producto deseado como un sólido de color amarillo (78 mg, 64%). A una solución agitada de 8-¡sopropoxi-7~morfolin-4-il- [1 ,6]naftiridina (149 mg, 0.545 mmol) en diclorometano (10 mi) a 0°C se agregó BCI3 (1.5 mi de una solución 1 de diclorometano). La solución de color anaranjado oscuro se dejó agitar a temperatura ambiente durante 24 horas. Se agregó MeOH (10 mi) y la mezcla se concentró. Se repitió este proceso cuatro veces. Otro lavado del residuo restante con éter dietílico (5 mi x 2) proporcionó clorhidrato de 7-morfolln-4-il-[1 ,6]naftirid¡n-8-ol como un sólido de color rojo oscuro (rendimiento cuantitativo).- RMN H (CD3OH): d 9.09 (dd, J=1.5 y 5.1, 1 H), 9.02 (s, 1 H), 8.99 (dd, J=1.5 y 8.2 1 H), 7.79 (dd, J=5.1 y 8.2, 1H), 3.95 (m, 4 H), 3.80 (m, 4 H). Una solución del clorhidrato de 7-morf o!in-4-il-[1 ,6]naftiridin-8-ol en diclorometano (20 mi) se lavó con una solución de NaHC03 saturado (2 x), se secó, y se concentró. La eliminación del solvente dio, después de la cromatografía de Si02-gel (diclorometano/MeOH, 9:1), 7-morfolin-4-il-[1 ,6]naftiridin-8-ol como un sólido de color anaranjado (97 mg, 77%).-RMN 1H (CD3OD): d 8.91 (dd, J = 1.4 y 4.0, 1 H), 8.60 (s, 1 H), 8.32 (dd, J = 1.4 y 8.2, 1 H), 7.41 (dd, J=4.0 y 8.2, 1 H), 3.89 (m, 4 H), 3.47 (m, 4 H). (B) (4-Fluorofenil)amida del ácido 8-hidroxi-2-metilaminometil-[1,6]naftiridina-7-carboxílico (1070) Etapa A: Preparación de éster 2-isopropíiico del ácido 6-metilpiridina-2,3-dicarboxílico Ácido 6-metil-2,3-piridindicarboxílico (10.0 g, 0.055 mol) y Ac20 (50 mi) se calentaron a 120°C durante 4 horas, se enfriaron, y se concentraron hasta un aceite de color marrón. Se agregó isopropanol al aceite de color marrón y la solución se calentó a 80°C durante la noche. Los materiales volátiles se eliminaron in vacuo y el residuo dio, después del lavado con éter dietílico, éster 2-isopropílico del ácido 6-metilpiridina-2,3-dicarboxílico como un sólido de color paja (8.8 g, 71%).- RMN 1H (CDCI3): d 8.24 (d, J = 8.2, 1 H), 7.34 (d, J = 8.2, 1 H), 5.34 (sep, J=6.2, 1 H), 2.68 (s, 3 H) , 1 .39 (d , J=6.2, 6 H). Etapa B: Preparación de Ester isopropílico del ácido 3-hidroximetil-6-m e til p ir ¡din a-2-carboxílico Una mezcla de éster 2-isopropílico del ácido 6-metilpiridina-2, 3-dicarboxílico (7.31 g , 0.33 mol) y cloruro de tionilo (65 mi) se calentó bajo reflujo durante 1 hora. La solución resultante se concentró in vacuo. El residuo se lavó con TH F anhidro (2x) para dar el cloruro ácido crudo como un aceite de color marrón . A una solución agitada enfriada con hielo del cloruro ácido en THF (50 mi) se agregó borohidruro de sodio (1 .26 g, 0.33 mol) en TH F (15 mi) en gotas durante 20 minutos. Después de 1 hora a 0°C, la mezcla de reacción se vertió en hielo y se extrajo con diclorometano (3x). Los extractos se combinaron, se lavaron con salmuera, se secaron y se concentraron . El residuo dio, después de la purificación mediante cromatografía de Si02-gel (diclorometano/MeOH, 1 9: 1 ) , éster isopropílico del ácido 3-hidroximetil-6-metilpiridina-2-carboxílico como un sólido de color marrón claro (3.42 g , 48%) .- RMN 1 H (CDCI3): d 7.76 (d, J=7.9, 1 H) , 7.31 (d, J=7.9, 1 H), 5.32 (sep, J=6.2, 1 H), 4.74 (s, 2 H) , 1 .45 (d , J=6.2, 6 H). Etapa C: Preparación de Éster isopropílico del ácido 3-[(bencensulfonil-(metoxicarbonilmetil)amino)metil]-6-metilpiridina-2-carboxílico De acuerdo con las condiciones reportadas por Anthony et al (WO 02/30931 A2) para la preparación de éster isopropílico del ácido 3-[(bencensulfon¡l(metox¡carbonilmetil)amino)metil]piridina-2-carboxílico, se agregó en gotas una solución de azodicarboxilato de düsopropilo (1 .07 g, 5.30 mmol) en THF (5 mi) durante 40 m inutos a una solución agitada de éster isopropílico del ácido 3-hidroximetil-6-metil-piridina-2-carboxílico (739 mg , 3.53 mmol) , éster metílico de N-(fenilsulfonil)glicina (81 0 mg, 3.53 mmol) y trifenilfosfina (1 .39 g , 5.30 mol) en THF (15 m i). La solución resultante se dejó agitar luego a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción se concentró para dar éster isopropílico del ácido 3-[(bencensulfonil(metoxicarbonilmetil)am¡no)metil]-6-metilp¡ridina-2-carboxílico crudo como un jarabe del color del oro. Este se utilizó en la etapa subsiguiente sin otra purificación. - R N .1 H seleccionada (CDC ) : d 4.73 (s, 2 H) , 4.00 (s, 2 H) , 3.54 (s, 3 H) , 2.70 (s, 3 H). Etapa D: Preparación de Éster metílico del ácido 8-hidroxi-2-metil-[1 , 6Jnaftirídina-7-carboxílico A una solución agitada de éster isopropílico del ácido 3-[(bencensulfonil(metoxicarbonilmetil)am¡no)metil]-6-metilpiridina-3-carboxílico crudo (de la Etapa C) en MeOH (20 m i) a 0°C se agregó una solución en gotas de NaOMe en MeOH (preparada de Na (200 mg) en MeOH (4 mi)) durante 20 m inutos. La solución resultante se dejó agitar a 0°C durante otra hora y se concentró. Se agregaron acetato de etilo (50 mi) y H20 en hielo (50 m i) . Las capas se separaron; la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (2x), se ajustó el pH a 6 (HCI 5 M) y se extrajo con diclorometano (20 mi x 3). Los extractos se combinaron, se secaron y se concentraron para dar éster metílico del ácido 8-hidroxi-2-metil-[1 ,6]-naftiridina-7-carboxílico puro como un sólido de color crema (708 mg, 98% (2 etapas)).- RMN 1H (CDCI3): d 8.87 (s, 1 H), 8.26 (d, J=8.5, 1 H), 7.62 (d, J=8.5, 1 H), 5.40 (br, 1 H), 4.13 (s, 3 H), 2.91 (s, 3 H). Etapa E: Preparación de Clorhidrato de (4-f¡uorofenil)amida del ácido 8-hidroxi-2-me til-[ 1,6] na ft ir i din a-7-carbox ílico Una solución de éster metílico del ácido 8-hidroxi-2-metil-[ ,6]naftiridina-7-carboxílico (0.34 g, 1.56 mmol) y 4-fluorobencilamina (0.5 mi) en tolueno (4 mi) se calentó bajo reflujo durante 16 horas y se dejó enfriar a temperatura ambiente. La eliminación del solvente subsiguiente dio un sólido de color crema que, después del lavado con éter dietílico, dio (4-fluorofenil)-amida del ácido 8-hidroxi-2-metil-[1 ,6]naftiridina-7-carboxílico, como un sólido blanquecino (0.40 g, 87%). -RMN 1H (CDCIs): d 8.57 (s, 1 H), 8.44 (br, 1 H), 8.15 (d, J=8.4, 1 H), 7.52 (d, J=8.4, 1 H), 7.37 (m, 2 H), 7.07 (m, 2 H), 4.67 (d, J=6.2, 2 H), 2.87 (s, 3 H). Etapa F: Preparación de Clorhidrato de (4-fluorofenil)amida del ácido 8-h idrox i-2-(metilamino)metil-[1 ,6] na ftiridin a-7-carboxílico (1070) Se agregó Se02 (100 mg, 0.901 mmol) a una solución de (4-fIuorofenil)amida del ácido 8-hidroxi-2-metil-[ ,6]naftiridina-7-carboxílico (150 mg, 0.482 mmol) en 1 ,4-dioxano (8 mi) y H20 (0.1 mi) y la mezcla se calentó a 55°C durante 3 horas. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente y se filtró (celite). El filtrado se concentró para dar 2-aldehído crudo como un sólido de color anaranjado pálido. - RMN H (CDCI3): d 10.37 (s, 1 H), 8.75 (s, 1 H), 8.46 (d, J=8.4, 1 H), 8.45 (br, 1 H), 8.26 (d, J = 8.6, 1 H) , 7.40 (m, 2 H) , 7.30 (br, 1 H), 7.08 (m, 2 H), 4.70 (d, J=6.0, 2 H). A una solución agitada del 2-aldehído crudo y clorhidrato de metilamina (50 mg, 0.741 mmol) en 1 ,2-dicloroetano (5 mi) se agregó Et3N (0.07 mi). Se agregó luego triacetoxiborohidruro de sodio (102 mg, 0.482 mmol) y la mezcla se dejó agitar a temperatura ambiente durante la noche. Se agregó MeOH y la solución resultante se concentró. Se agregó una solución saturada de NaHC03 y el sólido de color anaranjado pálido resultante se aisló mediante filtración, se lavó con H20 y se secó bajo vacío. Se agregó al sólido MeOH (10 mi) y el material insoluble restante se filtró. El filtrado se concentró; se agregó HCI concentrado y la solución se evaporó hasta sequedad lo cual produjo clorhidrato de (4-fluorofen¡I)amida del ácido 8-hidroxi-2-(metilamino)metil-[1 ,6]naftiridina-7-carboxílico (PB 1070) como un sólido de color amarillo pálido (45 mg, 30%).- RMN 1 H (CD3OD): d 8.92 (s, 1 H), 8.64 (d, J=8.4, 1 H), 7.82 (d, J=8.4, 1 H), 7.43 (m, 2 H), 7.06 (m, 2 H), 4.69 (s, 2 H), 4.68 (br, 1 H), 4.65 (s, 2 H), 2.91 (s, 3 H). Ejemplo 4 (A) 3-(4-cIorofeniI)-9-hidroxipirido[1,2-a]pirimidin-4-ona (1069) Etapa A: Preparación de éster etílico del ácido 2-(4-clorofenil)-3-oxo-propanoico Una solución de ácido (4-clorofenil)acético (20.0 g, 0.12 mol) y ácido sulfúrico concentrado (2 g) en EtOH (150 mi) se calentó a reflujo durante 19 horas, se enfrió, y luego se concentró. Se agregó éter dietílico (100 mi) y la solución se lavó con solución de NaHC03 saturado (40 mi x 2), se secó, y los materiales volátiles se eliminaron. Esto proporcionó éster etílico del ácido (4-clorofenil)acético como un aceite (22.3 g, 96%). Se agregó en gotas formato de etilo (7.46 g, 0.101 mol) a una suspensión agitada enfriada con hielo de éster etílico del ácido (4-cíorofenil)acétíco (20.0 g, 0.101 mol) y NaH (0.131 mol) en éter dietílico (100 mi). La mezcla se dejó calentar luego a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla se neutralizó (HCI 1 M); la capa orgánica se aisló, se secó, y el solvente se eliminó para dar éster etílico del ácido 2-(4-clorofenil)-3-oxo-propanoico como un sólido incoloro (19.8 g, 87%). RMN 1H (CDCI3): d 12.14 (d, J = 12.8, 1 H), 7.31 - 7.18 (m, 4 H), 4.29 (q, J=7.2, 2 H), 1.57 (br, 1 H), 1.29 (t, J=7.2, 3 H). Etapa B: Preparación de 3-(4-Clorofenil)-9-hidroxipirido[1 ,2-a]pirimidin-4-ona (1069) 2-Amino-3-hidroxipiridina (5.51 g, 0.05 mol) y éster etílico del ácido 2-(4-clorofenil)-3-oxo-propanoico (13.6 g , 0.06 mol) en EtOH (100 mi) se calentaron bajo reflujo durante 15 horas y luego se dejó enfriar. El precipitado se aisló mediante la filtración para producir una mezcla 9: 1 de la enamina y el producto ciclizado (1 1 .1 g). Enamina: RMN ' H (DMSO-d5): d 1 0.67 (d, J=12.4, 1 H), 8.10 (d, J=12.4, 1 H), 7.72 (d, J=4.8, 1 H), 7.37 (m, 4 H), 7.16 (m, 1 H), 6.86 (dd, J=4.8 y 8.0, 1 H), 4.16 (q, J=7.2, 2 H), 1 .18 (t, J=7.2, 3 H). Una solución de la mezcla de enamina y el producto ciclizado (1 1 .1 g) en dieíilbencenos (100 mi) se calentó a 160°C durante 8 horas y se enfrió. El precipitado se aisló mediante filtración, se lavó sucesivamente con hexanos y EtOH, y se secó. Esto proporcionó 3-(4-clorofenil)-9-hidroxipirido[1 ,2-a]pirimidin-4-ona como un sólido de color paja (7.03 g, 74%). 3-(4-Clorofenil)-9-hidroxipirido[1 ,2-a]pirimidin-4-ona: RMN 1 H (DMSO-d6): d 8.64 (dd, J=2.0 y 6.0, 1 H), 8.61 (s, 1 H) , 7.89 (m, 2 H), 7.51 (m, 2 H), 7.30 (m, 2 H); espectro de masas: m/z 273, 275 (M+ +1 , 100%, 33%). (B) 3-(4-Clorofen¡l)-9-hidroxi-8-yodopi rido[1 ,2-a]pirimidi n-4-ona (1063) A una suspensión agitada de 3-(4-clorofenil)-9-hidroxipirido-[1 ,2-a]pirimidin-4-ona (2.73 g , 0.01 mol) y yodo (2.54 g , 0.01 mol) en EtOH (100 mi) se agregó peróxido de hidrógeno (1 .94 g de solución acuosa al 30% p/v) . La mezcla se dejó agitar a temperatura am biente durante 6 días. El sólido se aisló mediante filtración , se lavó con EtOH (20 mi x 3), y se secó para dar un polvo de color verde oscuro (3.55 g) . La recristalización subsiguiente de DMF proporcionó 3-(4-clorofenil)-9-hidroxi-8-yodopirido-[1 ,2-a]pirimidin-4-ona como un sólido de color anaranjado-marrón (1 .80 g) . 3-(4-Clorofenil)-9-hidrox¡-8-yodopirido[1 ,2-a]pirimidin-4-ona: RMN 1H (DMSO-d6): d 8.57 (s, 1 H) , 8.35 (d, J=7.2, 1 H) , 7.88 (m , 2 H), 7.64 (d, J=7.2, 1 H) , 7.51 (m , 2 H) ; espectro de masas: m/z 399, 401 (M+ + 1 , 1 00%, 33%). Los siguientes ensayos se utilizaron en la valoración de nuevos compuestos de acuerdo con la invención para adaptabilidad para uso en los métodos de la invención. Ejemplo 5 - Valoración de Compuestos de Fórmula I o II Los siguientes Ensayos fueron utilizados en la valoración de los compuestos de fórmula I o I I para adaptabilidad para uso en los métodos de la invención. Ensayo 1 . Ensayo de H202 Fluorométrico Se utilizó un ensayo fluorométrico para probar la capacidad de un compuesto de prueba para inhibir la generación de peróxido de hidrógeno mediante ?ß en presencia de cobre basado en diacetato de diclorofluorosceína (DCF; Molecular Probes, Eugene OR). La solución de DCF (5 mM) en 1 00% de sulfóxido de dimetilo (purgado previamente con argón durante 1 hora a 20°C) se desacetiíó en presencia de NaOH 0.025M durante 30 m inutos y se neutralizó a pH 7.4 hasta una concentración final de 1 mM. Se preparó una solución madre de peróxido de rábano rusticano (picante) (H RP) a 1 µ? a pH 7.4. Las reacciones se llevaron a cabo en PBS , pH 7.4 en una placa de 96 pocilios (volumen total = 250 µ?/pocillo). Las soluciones de reacción que contenían ?ß 1 -42 a concentraciones en el intervalo de 50 nM a 1 µ? , quelato de cobre-glicina (Cu-Gly), se prepararon agregando CuCI2 a glicina en la proporción de 1 :6 y se ag regó a la ?ß en la proporción 2Cu-Gly : 1 ?ß), agentes de reducción incluyendo dopamina (5 µ?) o ácido ascórbico, DCF desacetilado 1 00 µ? , y HRP, 0.1 µ . También puede estar presente EDTA 1 -1 0 µ? u otro q uelador como control para cobre libre, pero no fue requerido para el ensayo de funcionamiento. La mezcla de reacción se incubó a 37°C durante 60 minutos. Pueden incluirse estándares o normas de catalasa (4000 unidades/ml) y H202 (1 -2.5 µ?) en PBS de pH 7.4 como controles positivos. Se registró la fluorescencia utilizando un lector de placas con filtros de excitación y emisión a 485 nM y 530 nM respectivamente. La concentración de H202 puede establecerse comparando la fluorescencia con los estándares de H202. La inhibición de producción de ?ß H202 fue ensayada incluyendo una concentración dada del compuesto o compuestos de prueba en los pocilios de prueba. Ensayo 2. Ensayos de Neurotoxicidad Cultivos neuronales corticales primarios Se prepararon cultivos corticales como se describió previamente (White et al . , 1998) . Se separaron cortezas de ratón embriónico el día 14 BL61 x129sv, se disecaron libres de meninges y se disociaron en tripsina al 0.025% (peso/volumen) . Las células disociadas se colocaron en placas de cultivo de 48 pocilios a una densidad de 2 x 1 06 células/ml en M EM con FCS al 25% (volumen/volumen) y HS al 5% (volumen/volumen) y se incubaron a 37°C, 2 horas. Se reemplazaron luego medios con medios Neurobasales (I nvitrogen Life Technologies) y complementos B27 (I nvitrogen Life Technologies) . Los cultivos se mantuvieron a 37°C en 5% de C02. Antes del experimento , se reemplazo el medio de cultivo con medios Neurobasales y B27 menos antioxidantes (I nvitrogen Life Technolog ies). Cultivos neuronales de gránulo cerebelar primarios Se separaron cerebelos de ratones postnatales el día 5-6 (P5-6) y se disecaron libre de meninges y se disociaron en tripsina al 0.025%. Se colocaron neuronas de gránulo cerebelar (CG N) en placas de cultivo de 24 pocilios a 350 000 células/cm2 en BME (I nvitrogen Life Technologies) complementado con Suero de Ternero Fetal al 1 0% (FCS) , glutam ina 2 mM y KCI 25 mM . Se agregó sulfato de gentamicina ( 1 00 Mg/ml) a todos los medios de colocación en placas y se mantuvieron los cultivos a 37°C en 5% de C02. Ensayo 3. Ensayos para Viabilidad Cel ular (a) Ensayo de MTS para Viabilidad Celular La viabilidad celular se determina utilizando el ensayo de MTS. El medio de cultivo se reemplazó con un medio neurobasal reciente más complementos B27 menos antioxidantes. Una solución de MTS en volumen de 1 /10 (Cell Titre 96 Aqueous One, Promega Corporation) y se incubó a 37°C, 2 horas. Se midieron alícuotas de 200 m icrolitros con un espectrofotómetro a 560 nm . (b) Ensayo de LDH para Viabilidad Celular La muerte celular se determinó a partir de sobrenadantes de cultivo libres de suero y restos celulares utilizando la lactato deshidrogenasa (LDH) Equipo de Detección de Citotoxicidad (Boehringer Ingelheim) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. (c) Ensayo para Neurotoxicidad de ?ß y Neuroprotección de ?ß Se cultivaron células corticales neuronales durante cinco días de acuerdo con el Ensayo 2. En el día seis los medios neurobasales (N B) (I nvitrogen Life Technologies) y el complemento B27 (sin antioxidantes). En el día seis , se agregaron individualmente compuestos de prueba a los cultivos celulares neuronales: Los compuestos de prueba se disolvieron en D SO al 1 00% a una concentración de 2.5 m M ( 1 0 mM si el com puesto en exceso se pesó por frasco - luego se diluyó a 2.5 m M) . Una solución madre 2.5 mM se diluyó en serie 1 en 10 para dar soluciones de trabajo de 250 uM, 25 uM, 2.5 uM. Preparación de ?ß Se disolvió ¡nicialmente ?ß en NaOH 20 m M a una concentración de 1 mM y se sonificó durante 5 m inutos. El péptido se diluyó luego en H20 y PBS 1 0 X a una concentración final de ?ß de 200 uM en PBS 1 X. El péptido se sonificó nuevamente durante 5 minutos y luego se hizo girar a 14000 rpm durante 5 minutos y se transfirió a un tubo fresco. Los compuestos de prueba se disolvieron en DMSO al 1 00% a una concentración de 2.5 mM ( 1 0 m M si el compuesto en exceso se pesó por frasco - luego se diluyó a 2.5 mM) . U na solución madre 2.5 mM se diluyó en serie 1 en 1 0 [en medios de NB y B27 (sin antioxidantes)] para dar soluciones de trabajo de 250 uM, 25 uM, 2.5 uM. No se agregaron los compuestos de prueba directamente a las células, más bien se agregaron a una "Placa de la Droga" de 48 pocilios como se comprende más adelante: Preparación de la "Placa de la Droga": Se agregó a una placa de 48 pocilios: Pocilio 1 : 515 ul NB+B27 (sin antioxidante)* + 24 ul de compuesto de prueba 25 uM + 60 ul de diluyente ?ß** Pocilio 2: 515 ul NB+B27 (sin antioxidante) + 24 ul de compuesto de prueba 250 uM + 60 ul de diluyente ?ß Pocilio 3: 51 5 ul NB+B27 (sin antioxidante) + 24 ul de diluyente de compuesto de prueba*** + 60 ul de ?ß1 -42 Pocilio 4: 51 5 ul NB+B27 (sin antioxidante) + 24 ul de compuesto de prueba 2.5 uM + 60 ul de ?ß 1 -42 Pocilio 5: 515 ul NB+B27 (sin antioxidante) + 24 ul de compuesto de prueba 25 uM + 60 ul de ?ß1 -42 Pocilio 6: 51 5 ul NB+B27 (sin antioxidante) + 24 ul de compuesto de prueba 250 uM + 60 ul de diluyente ?ß1 -42 Pocilio 7: 515 ul NB+B27 (sin antioxidante) + 24 ul de diluyente de compuesto de prueba + 60 ul de diluyente ?ß1 -42 Pocilio 8: 600 ul NB+B27 (sin antioxidante) N. B. 60 ul ?ß1 igual 20 ul ?ß 1 -42 por pocilio igual 20 uM ?ß1 -42 La Placa de la Droga se incubó a 37°C durante 1 5 minutos. Se agregaron 200 ul de cada pocilio por triplicado a la placa celular correspondiente. La placa celular se incubó a 37°C, durante 4 días. * medios B + B27 (sin antioxidantes), ** diluyente ?ß de NaOH 2 mM , PBS 1 X *** diluyente PBT de DMSO al 1 0% en NB+B27 (sin antioxidante) Terminación del ensayo: En el día 4 después de tratar las células se completó el ensayo agregando MTS a las células, (d) Ensayo para Citoxicidad del Compuesto de Prueba Se cultivaron células corticales neuronales para cinco días por Ensayo 2 en medios N B y complemento B27. En el día seis se agregaron los compuestos de prueba a los cultivos de células neuronales en medios N B y complemento B27 menos antioxidantes. Se disolvieron los compuestos de prueba en DMSO al 1 00% a una concentración de 2.5 mM (1 0 mM si el compuesto en exceso se pesó por frasco - luego se diluyó a 2.5 mM) . U na solución madre 2.5 mM se diluyó en serie 1 en 1 0 para dar soluciones de trabajo de 250 uM , 25 uM, 2.5 uM. No se agregaron los compuestos de prueba directamente a las células, más bien se ag regaron a una "Placa de la Droga" de 48 pocilios como se comprende más adelante: Preparación de la "Placa de la Droga" : Se agregó a una placa de 48 pocilios: Pocilio 1 : 576 ul N B+B27 (sin antioxidante)* + 24 ul de compuesto de prueba 25 uM Pocilio 2: 576 ul N B+B27 (sin antioxidante) + 24 ul de compuesto de prueba 25 uM Pocilio 3: 576 ul NB+B27 (sin antioxidante) + 24 ul de com puesto de prueba 250 u Pocilio 4: 576 ul NB+B27 (sin antioxidante) + 24 ul de compuesto de prueba 2.5 uM Pocilio 5: 576 ul N B+B27 (sin antioxidante) + 24 ul de com puesto de prueba 25 uM Pocilio 6: 576 ul N B+B27 (sin antioxidante) + 24 ul de compuesto de prueba 250 uM Pocilio 7: 576 ul NB+B27 (sin antioxidante) + 24 ul de diluyente de compuesto de prueba** Pocilio 8: 600 ul N B+B27 (sin antioxidante) La Placa de la Droga se incubó a 37°C durante 1 5 minutos. Se agregaron 200 ul de cada pocilio por triplicado a la placa celular correspondiente. La placa celular se incubó a 37°C, durante 4 días, (2 compuestos se probaron en cada placa de células) . * medios N B y B27 (sin antioxidantes) , ** diluyente PBT de DMSO al 1 0% en NB+B27 (sin antioxidante) En la terminación del ensayo, se ag regó MTS en 1 /1 0 volumen por pocilio de placa (es decir 25 ul/250 ul). Las placas se incubaron a 37°C durante 2 horas, y luego se leyó la absorbancia a 560 nm. Ensayo 4. Ensayo de Caspase Para medir la actividad de caspase en cultivos neuronales, se eliminó el medio de crecimiento, se lavaron dos veces las células con una solución salina control (pH 7.4) y se agregó directamente a los cultivos un tampón de extracción celular enfriado con hielo. El tampón de extracción consiste de Tris 20 mM (pH 7.4), sucrosa 1 m M, EDTA 0.25 mM, ditiotreitol 1 mM (DTT) , PMSF 0.5 m M , Tritón X-1 00 al 1 % (Tx-100) y 1 pg/ml de pepstatina y aprotinina. Después de la incubación durante 1 5 minutos sobre hielo, se eliminó el tampón de extracción , se centrifugó durante 5 minutos a 4°C en una microcentrífuga y se agregaron 1 00 µ? de sobrenadante a cada pocilio de una placa de 96 pocilios. Se agregaron a cada pocilio 1 00 µ? de substrato 200 µ ? (ya sea DEVD-pNA, VEI D-pNA o I ETD-??? para caspases 3, 6 y 8 respectivamente) para dar una concentración final de substrato 1 00 µ? . Las placas se incubaron a 37°C durante 2, 4, 6 ó 24 horas y se determ inó la absorbancia a una longitud de onda de 41 5 nm (Abs41 5) . La lectura de absorbancia se comparó con un estándar conocido de pNA único. Ensayo 5. Ensayo de Annexin V Para determinar el nivel de annexin V enlazadas a las células, se lavaron los cultivos dos veces con solución salina control (pH 7.4) seguido por la adición de annexin V-FITC a una concentración de aproximadamente 0.5 pg/ml en solución salina control (pH 7.4). Se agregó también yoduro de propidio (1 0 µg/ml) a los cultivos en el mismo tiempo. Las células se incubaron en la oscuridad durante 30 minutos a temperatura ambiente y se lavaron subsecuentemente tres veces con solución salina control reciente. El análisis de la fluorescencia de FITC (ex. 488 nm , em. 510 nm) se determinó utilizando un microscopio Leica DMI RB. Se tomaron fotografías con una cámara de unión Leica MPS 60 utilizando película de color ASA400, y se exploraron los negativos en Adobe Photoshop v2.0.1 . Ensayo 6. Ensayo de Oxidación de Lipoproteína Pueden utilizarse dos ensayos diferentes de peroxidación de lípidos mediado por metal. El primer ensayo implica la medición de la actividad oxidativa de proteínas metaladas. Estas se determinan mezclando proteína dializada metalada o nativa (a concentraciones designadas) con 0.5 mg/ml de LDL durante 24 horas (37°C). La peroxidación de lípidos (LPO) se midió utilizando un equipo de ensayo de peroxidación de lípidos (LPO 486, Oxis International Inc. Portland, OR) por instrucciones de equipo. El nivel de LPO se determinó al comparar la absorbancia (486 nm) con LDL único (100% de LPO). El segundo ensayo se utilizó para medir la actividad de LPO de proteínas nativas en presencia de Cu enlazada sin proteína, libre. Esto implica agregar péptidos no metalados (140 µ?) a 0.5 mg/ml de LDL junto con 20 µ? de Cu-gly y ensayando para LPO para las proteínas metaladas. El nivel de LPO se determinó comparando la absorbancia (486 nm) con LDL + Cu-gly (100% de LPO). Como control negativo, también se expuso LDL a soluciones de Cu-gly dializadas comparables con aquellas utilizadas para Cu-metalado de las proteínas. Ensayo 7. Citotoxicidad Inducida por Proteínas Cu-Metaladas Proteínas o péptidos sintéticos se mezclan con soluciones de metal-glicina a concentración equimolar o dos veces metal a proteína. Las mezclas de metal-proteína son incubadas durante la noche a 37°C y se dializaron luego extensivamente (24 horas contra dos cambios de dH20 (3 L/cambio) a temperatura ambiente) utilizando copas de mini-diálisis con un corte de 3,500 kilodaltons (Pierce, Rockford, IL). La diálisis de proteínas contra PBS pH 7.4 resultó en proteínas metaladas con actividad idéntica para diálisis de dH20. Para determinar sus efectos neurotóxicos, se agregaron proteínas metaladas, proteínas nativas o péptidos en dos días cultivos neuronales corticales primarios. Los cultivos tam bién se expusieron a Cu-gly (5 ó 10 µ ) o LDL. Los cultivos control positivos son tratados con Cu-gly+ LDL o el producto LPO, r-hidroxi-nonenol (HNE, Sigma Chem icals). Se ensayaron cultivos de muerte celular utilizando el equipo de ensayo de lactato deshidrogenasa (LDH) (Roche Molecular Biochemicals, Nunawading, Australia) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Ensayo 8. Ensayo de Acridina de color Anaranjado para Pérdida Mediada de ?ß de Acidificación Lisosomal Neuronas corticales de ratón cultivadas se trataron con ?ß 1 -42 (20 µ?) durante 16 horas y se tiñeron luego con 5 mg/ml de acridina color anaranjado (AO) durante 5 m inutos a 37°C, 1 5 minutos a 37°C. La fluorescencia inducida con AO se m idió con un filtro de color rojo en un microscopio de fluorescencia. La AO es una base débil lisosomotrópica que acumula en los com partimientos endosomal/lisosomal y presenta fluorescencia de color anaranjado durante la incubación. La AO es secuestrada en el interior de los lisosomas ya que existe un gradiente de protones sustancial sobre las mem branas lisosomales. El tratamiento de las células con ?ß1 -42 interrumpe el gradiente de protones de membrana lisosomal y relocaliza AO en el citosol, como se indicó por la pérdida de fluorescencia de color anaranjado dentro de 1 6-24 horas. Ensayo 9. Ensayo de Solubilización Am iloidea de Cerebro H umano Este ensayo se realizó para valorar la capacidad de un compuesto de prueba para mobilizar ?ß de la fase insoluble a la soluble de un extracto de tejido de cerebro AD humano post mortem. Hasta 0.5 g de corteza que soporta la placa sin meninges se homogeneizó utilizando un homogeneizador DIAX 900 (Heudolph and Co, Kelheim, Alemania) u otro dispositivo adecuado por tres períodos de 30 segundos a velocidad completa en hasta 2 m i de solución salina tamponada o amortiguada con fosfato enfriado con hielo, pH 7.4. Para obtener la fracción que se puede extraer con solución salina amortiguada con fosfato, se centrifugó el homogenato a 100, 000 x g durante 30 minutos y se eliminó el sobrenadante. Alternativamente, el tejido se liofilizó, luego se pulverizó para formar un polvo que se pesó luego en alícuotas para extracción como en lo anterior. Una alícuota de 1 0 µ? de sobrenadante se eliminó después de la centrifugación y se mezcló con un volumen igual de tampón m uestra de SDS 2Xtris-Ticene, pH 8.3, que contiene SDS al 8%, 2-mercaptoetanol al 1 0%. Se calentaron luego las muestras durante 1 0 minutos a 90°C y se separaron por electroforesis de gel. La fracción insoluble de las muestras corticales se obtuvo al resuspender la muestra en forma de gránulo inicial en 1 mi de solución salina amortiguada con fosfato. Una alícuota de 50 µ? de esta suspensión se llevó luego a ebullición en 200 m i de tam pón de muestra como en lo anterior. Se realizó electroforesis de gel de poliacrilamida Tris-Tricina cargando apropiadamente muestras diluidas en geles de gradiente del 1 0% al 20% (Novex, San Diego, CA) seguido por transferencia sobre membrana de nitrocelulosa de 0.2 pm (Bio-Rad, Hercules, CA) . Se detectó ?ß utilizando anticuerpo monoclonal W02, q ue detectó residuos 5 a 8, 1 7 (u otro anticuerpo adecuado) en conjunción con peroxidasa de rábano rusticano (picante)-lgG anti-ratón de conejo conjugado (Dako, Dinamarca), y se visualizó utilizando quimicoluminiscencia mejorada (por ejemplo ECL; Amersham Life Science, Buckinghamshire, Reino Unido), Cada gel incluyó tres rutas que contienen 0.5, 1 y 2 ng de ?ß40 sintética (Keck Laboratory, Yale University, New Haven, CT) como estándares de referencia. Películas manchadas se exploraron utilizando un sistema de imagen adecuado tal como el sistema de documentación de gel UVP, y se realizó la densitometría utilizando un software adecuado, por ejemplo Labworks UVP. Se determinó un margen dinámico de la película/explorador utilizando una tabla en etapas (No. 91 1 ST600, Kodak, Rochester NY), una película calibrada expuesta por el fabricante para proporcionar etapas de intensidad creciente conocida. El margen cuantificable de intensidad de señal para análisis densitométrico de las bandas mono- y diméricas ?ß se basó en la comparación con una curva obtenida por exploración y densitometría de la tableta en etapas. Las muestras en donde la intensidad de señal es baja después del ensayo preliminar pueden ser re-ensayadas utilizando estándares sintéticos de concentración inferior o superior. Todas las muestras se analizaron varias veces, y las cargas y diluciones de gel se ajustaron para adaptarse dentro de la región cuantificable de la curva estándar. La ?ß insolubie está comprendida de la fracción en forma de bolita derivada de la placa amiloidea insolubie de las muestras corticales anteriores y la fracción soluble que comprende ?ß soluble monomérica y/o oligomérica. Diversos geles fueron ensayados por el compuesto de prueba con un control de PBS incluido en cada gel. Cada gel que contiene concentraciones variantes del compuesto de prueba. Una "prueba t" de Student se utilizó para comparar el medio del valor más alto obtenido por el compuesto de prueba para cada gel en cualquier concentración, para el medio de los valores PBS tomados de los geles múltiples. Por consiguiente puede hacerse una determinación de si el promedio aumenta en solubilización obtenida por cualquier compuesto de prueba es significativa comparado con el PBS único. Los compuestos de prueba con señal (+) son compuestos que logran un aumento estadísticamente significativo en solubilización de placas sobre aquel del PBS único. Un compuesto de prueba con una señal (-) es un compuesto que no logra aumento estadísticamente significativo en solubilización de placas sobre aquel del PBS único. Ensayo 10: Partición de Metal Para efectos de ensayo bajo la partición de varios metales, incluyendo cinc y cobre, después de la extracción del tejido cerebral en presencia de un compuesto de prueba, se prepararon las fracciones solubles e insolubles de un extracto de tejido de cerebro humano para el ensayo de solubilización amiloidea. Se analizaron metales en dos fracciones por espectrometría de masas de plasma inductivamente copulado, después del pretratamiento apropiado con ácido nítrico y/o peróxido de hidrógeno cuando sea necesario. Ensayo 1 1 : Efecto de Admi n istración de Compuestos de Prueba en depósitos de ?ß en Animales Transgénicos Modelos de ratón transgénicos están disponibles por un número de trastornos neurológicos, incluyendo la enfermedad de Alzheimer (Games et al. , 1995; Hsiao et al. , 1 996); enfermedad de Parkinson ( asliah et al. , 2000); esclerosis lateral amiotrófica familiar (ALS) (Gurney et al., 1994); enfermedad de Huntington (Reddy et al. , 1998); y enfermedad de Creutzfeld-Jakob (CJD)(Telling et al. , 1 994). Se encontró que uno de los modelos transgénicos para la enfermedad de Alzheimer, el ratón transgénico APP2576 (Hsiao et al. , 1 996) también tiene una alta incidencia de cataratas. Estos modelos animal son adecuados para probar los métodos de la invención. Son utilizados ratones transgénicos de la cepa APP2576 (Hsiao et al. , 1996). Se seleccionaron ratones hembra de ocho a nueve meses de edad y se dividieron en grupos para tratamiento. Se sacrificaron los ratones a intervalos, y sus cerebros se examinaron para determinar si el tratamiento con los compuestos de prueba disminuyó la formación amiloidea del cerebro, y la identificación del protocolo de administración más efectivo. Los niveles de ?ß solubles e insolubles en el cerebro y suero se determinaron utilizando eiectroinmunotransferencias (Western blots) por la metodología descrita en el Ensayo 9. Ensayo de Solubilización Amiloidea de Cerebro. Se probaron otros ratones en cada grupo durante un período de hasta ocho meses por realización cognitiva, utilizando un laberinto de agua Morris de acuerdo con los métodos estándar. La salud general y bienestar de los animales también se midió cada día por un operador cegado, utilizando una escala entera de cinco puntos que subjetivamente estima una combinación de características, incluyendo actividad motora, agilidad y signos de salud general. Ensayo 12. Propiedades Fisicoquímicas Cálculos de Área Superficial Polar (PSA) Se calcularon valores de área superficial polar utilizando el programa basado en la red disponible a través de "Molinspíration", un paquete para cálculo de propiedades moleculares. Mediciones de Solubilidad Turbidimétricas Se midió el estimado de solu bilidad tanto en pH 2.0 como en pH 6.5. Esto es dentro del intervalo del pH q ue puede anticiparse a lo largo del tracto gastrointestinal proximal en humanos. Los compuestos se disolvieron en DMSO a concentraciones apropiadas y luego se descargaron en ya sea HCI 0.01 (aproximadamente pH = 2.0) o pH 6.5 de tam pón fosfato isotón ico, la concentración de DMSO final es del 1 %. Las muestras se analizaron luego mediante Nefelometría para determinar u n intervalo de solubilidad, [por D. Bevan and R. S. Lloyd, Anal. Chem. 2000, 72, 1781 -1787]. Valores cLog P Se determinaron los valores teóricos Log P utilizando el software ACD Log P. Los valores cotizados han sido calculados a partir de una base de datos inexperta y se refiere a las especies sindicalizadas. Ensayo 13. Penetración de la Barrera Hemoencefálica Los compuestos de prueba se disolvieron en DMSO y se agregó solución salina amortiguada con fosfato (PBS) para obtener soluciones a una concentración de 50 µ ? en PBS que contiene DMSO al 1 .25-2.5%. Una cantidad muy pequeña de sucrosa- 4C se agregó a cada solución madre de infusión (aproximadamente 0.01 µ??/???) para actuar como un marcador impermeable de la Barrera Hemoencefálica (BBB) para valorar la integridad de la BBB durante cada perfusión y para estimar el volumen del espacio vascular residual (RVS) en muestras de tejido de cerebro (es decir: el volumen de fluido que permanece dentro del lumen de los vasos sanguíneos en el final de cada perfusión). Se anestesiaron ratas macho adulto Sprague Dawley (180-190 g) con inyecciones intraperitoneales de Uretano (25% p/v) a una dosis de 1 .0 ml/1 00 g de peso corporal. La arteria carótida común derecha fue expuesta quirúrgicamente y fue canalizada por perfusión de la circulación cerebral. La arteria carótida externa derecha (que suministra los tejidos fuera del cráneo) se ligó luego distal a su bifurcación de la arteria carótida común derecha de modo que toda la solución de infusión pasaría dentro del cerebro vía la arteria carótida interna derecha remanente. El corazón fue expuesto luego y se hizo un corte transversal inmediatamente antes del comienzo de la infusión. La velocidad de la infusión se controló por una bomba fija para depositarse en 3.2 ml/minuto (aproximadamente 85% del suministro de sangre normal al cerebro para este tamaño de rata). La cánula de infusión inicialmente contenía un pre-lavado de 0.5 mi de PBS heparinizada (10 lU/ml) que actúa para fluir en los vasos sanguíneos y para prevenir que la sangre coagule o bloquee los vasos pequeños. Después de 1 .5 minutos, la bomba de infusión automáticamente se interrumpa, la cánula fue apartada de la arteria carótida y se recolectó luego una muestra de la solución de infusión (1 -1 .5 mi) de la punta de la cánula de infusión. Se . disecó luego el cerebro libre y se dividió en 3 partes; el hemisferio derecho junto con el mesocéfalo derecho, el hemisferio izquierdo junto con el mesocéfalo izquierdo y el metencéfalo (cerebelo, puente de Varolio y tronco del encéfalo). Solamente la parte derecha del cerebro se utilizó para mediciones subsecuentes debido a que la perfusión vía la arteria carótida interna derecha suministra el hemisferio derecho y el mesocéfalo derecho (el hemisferio izquierdo y el metencéfalo reciben una perfusión colateral variable). Las muestras de tejido de cerebro de cada animal se congelaron a -30°C, alícuotas homogenizadas y pesadas se analizaron por CL-EM para dar una concentración total del cerebro. El análisis se llevó a cabo utilizando el instrumento Micromass Triple Quad. La fase móvil consistía de un gradiente de acetonitrilo / agua (que contiene ácido fórmico al 0.05%) y la columna fue un Phenomenex Luna CN. Se analizaron alícuotas pequeñas de cada muestra de tejido cerebral y la solución de infusión correspondiente por conteo de centelleo líquido para determinar el nivel de sucrosa-14C. El espacio vascular residual (RVS) en cada muestra de tejido cerebral se calculó dividiendo la concentración medida de sucrosa en el tejido cerebral (dpm/mg) mediante su concentración en la solución de infusión correspondiente (dpm^L). Este es el volumen de fluido que permanece dentro de los vasos sanguíneos en el final de cada perfusión. Multiplicando este RVS mediante la concentración del compuesto de prueba en la solución de infusión da la cantidad residual total del compuesto de prueba que está presente dentro de los vasos sanguíneos en cada muestra de tejido cerebral (es decir: esa que no ha cruzado la BBB) . Restando esto de la concentración total de cerebro da la cantidad de droga en cada muestra de tejido cerebral que está fuera de los vasos sang uíneos (es decir: q ue ha cruzado la BBB). Dividiendo esta concentración de RVS-cerebro corregida da la relación de captación de cerebro (Ecuación 1 ) . Ecuación 1. [cerebro ng . mg"1]-[RVS ng ^l"1] Relación de Captación del Cerebro = [solución de infusión ng . L"1] Se realizaron un total de 5-6 experimentos de perfusión de cerebro para cada uno de los compuestos de prueba y se calcularon las relaciones de captación de cerebro medio. Las relaciones de más del 50% indican compuestos que entran en el cerebro extremadamente rápido; relaciones entre 10 y 50% indican compuestos que entran en la cavidad del cerebro; relaciones de menos del 10% (no observado) indicarían compuestos que entran en el cerebro muy lentamente y no serían adecuados para la administración terapéutica; relaciones de menos del 1 % (no observado) indicarían com puestos q ue son excluidos efectivamente del cerebro. Ensayo 14. Inmunohistoq u imia de Cerebro de Ratón Transgénico El ratón transgénico APP2576 (Hsiao et al. , 1 996) referido en el Ensayo 1 1 se utiliza en este ensayo. El tejido de cerebro de ratón fijado con formalína contralateral se cortó en forma de corona. Se tomaron secciones (1 0 m) de los sitios correspondientes y se trataron con ácido fórmico al 80% para recuperación de antígeno. El anticuerpo primario utilizado es anticuerpo monoclonal 1 E8, que reconoce epítopes entre los residuos 18 y 22 de la ?ß (SmithKIine Beecham , UK). Se desarrolló la inmunorreactividad con anticuerpo secundario unido a peroxidasa de rábano rusticano (utilizando un 3,39-diam¡nobencidinacromageno)(Dako) y fosfatasa alcalina (utilizando 3-indoxilfosfato de 5-bromo-4-cloro y cromageno de cloruro de nitroazultetrazolio)(Dako). Se valoró la abundancia de la placa por sección por dos operadores cegados al tratamiento de acuerdo con la siguiente escala: 0 = sin placas aparentes 1 = placas presentes pero muy escasas 2 = diversas placas presentes 3 = numerosas placas visibles en áreas restringidas 4 = abundantes placas y no restringidas a cualquier área en particular. Se asignaron valores intermedios por ejemplo 2.5 cuando es aplicable. Se utilizó la prueba t de Student para comparaciones entre grupos. Ensayo 15: Perfil Farmacocinético • Infusión intravenosa del compuesto de prueba; 2 mg/Kg en un vehículo adecuado se administró a 2 ratas y se tomó una muestra de sangre arterial de hasta 24 horas. • Administración oral del compuesto de prueba; 30 mg/Kg en un vehículo adecuado se administró vía cebadura oral a 2 ratas y se tomó una muestra de sangre arterial de hasta 24 horas. • Concentraciones de plasma del compuesto de prueba se determinaron mediante un método analítico adecuado.
Cálculos: D0S ÍS/y C Ltotal AUCora/ *D 0SÍS/\/ CLfote/ = VdjS = BA(%) = AUC/ ß AUC/i/ * Dosisora, C Ltotai = aclaramiento total de plasma después de la administración VdjS = volumen de distribución durante la fase de eliminación después de la administración IV BA = biodisponibilidad oral AUCiv = área bajo la concentración de plasma versus perfil de tiempo a partir del tiempo cero a infinito después de la administración IV AUCorai = área bajo la concentración de plasma versus perfil de tiempo a partir del tiempo cero a infinito después de la administración oral ß = constante de velocidad de eliminación terminal después de la administración IV Ensayo 1 6: Determ i nación de niveles de plasma de ratón de com puestos de prueba PBT 1061 Adm inistración oral de PBT 1 061 a 30 mg/kg , como una suspensión en Na-Carboximetil-Celulosa (CMC) se administró por cebadura oral a cuatro ratones. Se sacrificaron dos ratones 30 minutos después de la administración y dos ratones se sacrificaron 60 minutos después de la administración . Se obtuvo sang re por punción cardíaca y se separó plasma por centrifugación.
La concentración de ???? 061 se determinó por CL/EM utilizando el instrumento ZQ. La fase móvil consistía de un gradiente de acetonitrilo (ACN)/ag ua (q ue contiene ácido fórmico al 0.05%) y la columna fue una colum na Phenomenex Polar-RP 4 µ? 80A (50 x 2 m m) . Las muestras de plasma de ratón se inyectaron directamente después de una precipitación de proteína con ACN . El método analítico en plasma fue lineal en el intervalo de 125 a 1 0, 000 ng/ml (R2 = 0.9992) . Se utilizó diazepam como el estándar interno. La recuperación de PBT1 061 del plasma fue ~ 1 00%. La concentración de PBT1 061 en plasma de ratón después de dosificar oralmente a 30 mg/kg se da en la Tabla 1 . Tabla 1 . Concentraciones de PBT1061 en Plasma de Ratón después de la Dosificación Oral a 30 mg/kg PBT 1 063 Administración oral de PBT 1 063 a 30 mg/kg , como una suspensión en Na-Carboximetil-Celulosa (CMC) se adm inistró por cebadura oral a cuatro ratones. Se sacrificaron dos ratones 30 minutos después de la administración y dos ratones se sacrificaron 60 minutos después de la administración. Se obtuvo sangre por punción cardíaca y se separó plasma por centrifugación.
La concentración de PBT1 063 se determinó por CL/E utilizando el instrumento cuadripolar simple . La fase móvil consistía de un gradiente de acetonitrilo (ACN)/agua (que contiene ácido fórmico al 0.05%) y la columna fue una columna Phenomenex C8 4 µ? 80A (50 x 2 mm) . Las muestras suministradas de plasma de ratón de toxicidad aguda (suministrado 02.09.03) se inyectaron directamente después de una precipitación de proteína con ACN . Las concentraciones se determinaron por comparación con una curva de calibración preparada en plasma de rata. El método analítico en plasma fue lineal en el intervalo de 31 2 a 1 0, 000 ng/ml (R2 = 0.9976) . Se utilizó diazepam como el estándar interno. La recuperación de PBT1 063 del plasma fue ~ 42.9%. Las concentraciones de PBT1 063 en muestras de plasma de ratón se dan en la Tabla 2. Tabla 2. Concentraciones de PBT1 063 en Plasma de Ratón después de la Dosificación Oral a 30 mg/kg o Tabla 3 a (+) = efectivo en placas de solubllización en más de 1 concentrado con relación a PBS, (-) = no efectivo en placas de solubiüzació con relación a PBS.
Ejemplo 6 - Pruebas clínicas del compuesto de fórmula I o II para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer Una prueba clínica de Fase I I del compuesto de fórmula I o II para el tratamiento de AD se comenzó para estudiar los efectos del tratamiento de PBT-1 oral en una prueba clínica de fase 2 piloto controlada con placebo, doble ciega de pacientes de AD moderadamente severa. Se aleatorizaron treinta y seis sujetos [1 8 placebo y 1 8 PBT-1 , con 32 consumaciones], y se estratificaron en grupos de más- y menos-severamente afectados. El efecto de tratamiento fue estadísticamente significativo en prevenir la deterioración cognitiva durante 36 semanas en los pacientes más- severamente afectados (línea básica ADAS-cog > 25). La realización del grupo menos- severamente afectado (ADAS-cog < 25) deteriorado de manera insignificante durante este intervalo, de modo que los cambios cognitivos podrían no ser discriminados en este estrato. La Ap42 de plasma disminuida en el g rupo PBT-1 pero aumentada en el grupo placebo (p<0.001 ). Los niveles de Zn de plasma aumentaron significativamente («30%) en el grupo PBT-1 . Dosificación Diversas consideraciones llevan a la elección de la dosis. En estudios previos en ratones transgénicos, dosis de 20-30 mg/kg de PBT-1 oralmente al día durante cinco días por semana fueron marcadamente efectivos en la inhibición de la acum ulación de ?ß después de 2-3 meses de tratamiento. La dosis equivalente en un ser humano de 1500-2250 mg/día se cerró a la dosis de antibiótico prescrita de PBT-1 (600 mg po qid). Sin embargo, esta magnitud de dosis, administrada por meses, provocaría preocupación respecto a la toxicidad de SMON . La dosis inicial de 3.3 mg/kg/día, que asume 75 kg de peso promedio, está dentro del mismo orden de magnitud de la dosis efectiva en el modelo ratón transgénico, pero solo aproximadamente una décima de la dosis antibiótica. Ya que no existen datos del estudio de ratón transgénico de la efectividad de la dosis menor de 20 mg/kg/día, se argumentó q ue un efecto benéfico debe req uerir un período más largo de tratamiento que la duración de 9-12 semanas del estudio de ratón (Cherny et al. , 2001 ) . Por lo tanto, se eligió un período de prueba de 36 semanas a una dosis promedio que es aproximadamente un tercio del cuál es efectivo en los ratones transgénicos . La dosis final de 10 mg/kg/día es la mitad de una dosis efectiva en ratones. La dosis inicial de 3.3 mg/kg/día dentro del m ismo orden de magnitud de la dosis efectiva en modelos de ratón transgénicos, pero solo aproximadamente una décima de la dosis anti-infectiva. El estudio fue propulsado para detectar efectos bioquímicos en niveles de metal y ?ß q ue estarían en la misma magnitud como aquellos observados en el estudio transgénico. PROCEDIMIENTOS EXPERI MENTALES Cuestiones éticas: De acuerdo con las leyes Australina respecto al consentim iento de individuos cuya función cognitiva puede dañarse hasta el punto de ser incapaz de hacer juicios o decisiones con fundamento, se obtuvo el "Consentim iento a Procedimientos Especíales" administrado por el Tribunal Administrativo y Civil Victoriano para cada participante no ser capaz de consentir en su propio beneficio. Además, la tercera parte de consentimiento se obtuvo de todos los cuidadores. Todos los sujetos se estabilizaron con donepezil antes del com ienzo del estudio. El estudio fue aprobado por la Royal elbourne Hospital Research Foundation's Clinical Research and Ethics Committee. Población del estudio: El estudio tomó lugar en la unidad de pruebas clínicas de AD, Mental Health Research I nstitute of Victoria y en el Royal Melbourne Hospital. Los criterios para la inclusión en el estudio fueron: consentimiento con fundamento; una diagnosis de probable AD por criterios de N I NCDS-ADRDA (McKhann et al. , 1 984) ; puntuación de Escala de Valoración de AD-cognitiva (ADAS-cog)(Rosen et al . , 1 984) de 1 8-45; puntuación del Examen del Estado Mini-Mental (MMSE)(Folstein et al. , 1975) de 1 0-24; en 5 mg o 1 0 mg de donepezil por al menos 6 meses; relativo o cuidador voluntario y capaz de soportar la prueba; capas de completar los exámenes de prueba; funciones intactas sensoriales primarias. Se excluyeron pacientes si tuvieron una historia o evidencia clínica de neuropatía periférica u óptica o tuvieron enfermedades co-existentes o pasado historial que pueda tener función cognitiva afectada, conducción nerviosa o enfermedades que puedan tener confundido el perfil de un caso adverso. Se obtuvieron los siguientes factores en una línea básica para determinar si se correlacionan con mediciones de resultado: edad, sexo, I Q prepatológico [estimado de la National Adult Reading Test (NART)], años de educación, y alotipos de apolipoproteína E (ApoE).
Diseño del estudio: El estudio es un diseño aleatorizado de grupo paralelo, controlado con placebo, doble ciega. Treinta y seis pacientes y sus cuidadores se reclutaron para participar, con pacientes aleatorizados en una relación 1 : 1 para recibir ya sea PBT-1 o placebo. La duración del estudio fue de 36 semanas. La dosificación oral de PBT-1 fue de 125 mg ordenado de 0-12 semanas, aumentó a 250 mg ordenado de 13-14 semanas, y finalmente, 375 mg ordenado de 25-36 semanas. Procedimientos del estudio: Los procedimientos de selección consistían de un historia médica completa , examen físico, neurológico y oftálm ico, pruebas de sangre y orina y pruebas psicométricas (ADAS-cog , MMSE) . Las pruebas de conducción nerviosa y respuestas evocadas visuales se condujeron entre las visitas de selección y línea básica para proporcionar una medición de línea básica. Se recolectó sangre para observar los niveles de plasma de línea básica, en alodactilografía de ApoE de metales y ?ß antes de la aleatorización . Todos los pacientes continuaron su estudio entre dosis de donepezil y todos los pacientes recibieron 1 00 mg de vitamina B 2 intramuscularmente cada cuatro semanas. Resultado de las mediciones: La variable de eficacia clínica primaria fue un cambio de puntuación de línea básica en la ADAS-cog conducida en línea básica y en las semanas 4, 1 2, 24 y 36. Esta medición se eligió para permitir la comparabiiidad de los efectos de tratamiento con terapéuticos actuales como donepezil , cuando se utilizan tam bién las pruebas de eficacia ADAS-cog como su resultado de medición primario (Rogers et al. , 1 998). Aunque numerosas pruebas neurofisicológicas podrían considerarse como mediciones secundarias, fue necesario evitar que se fatigaran los sujetos en la revisión. Por lo tanto la prueba cognitiva únicamente distinta fue el Examen de Estado Mino-Mental (MMSE). La CIBIC+ (impresión de cambio basado en la entrevista médico clínico que incorpora información del cuidado del donante), un índice observacional subjetivo también fue conducido. Plasma ?ß, y cinc y cobre de plasma se tomaron todos cada cuatro semanas. Ensayo inmunoabsorbente enlazado con la enzima de captura de anticuerpo doble (ELISA) para detección de ?ß: Se revistieron placas de poliestireno con mAb G210 (para ?ß40) o mAb G211 (para ?ß42). Las placas se lavaron y se agregó mAb W02 biotinilada. Se detectó el anticuerpo ligado con Europium marcado con estreptavidina (Perkin Elmer, Vic Australia). Los valores obtenidos a partir de pocilios por triplicado se calcularon con base en las curvas estándar generadas en cada placa. Las muestras de plasma complementadas con ?ß-40 y ?ß-42 sintéticas también fueron ensayadas para confirmar la fiabilidad de medición a través del intervalo de concentración de interés. Niveles del metal: Se midieron los metales por espectrometría de masas de plasma inductivamente copulado como se describió previamente (Cherny et al., 2001). Control de la droga terapéutica: En las semanas 12, 24 y 36, se ensayaron niveles de sangre de PBT-1 por CLAP con estudios de validación apropiados (Centre for Pharmaceutical Research, University of South Australia).
Mediciones de seguridad: Fue conducido un evento adverso estándar y las pruebas bioquím icas, la función renal y hepático, examen de sangre completo, vitam ina B12 de suero y niveles de folato se documentaron en cada visita. Para valorar la neuropatía periférica y óptica se condujo un examen neurológico en cada vista, y respuestas evocadas visuales, estudios de conducción nerviosos y examen oftálmico se condujeron en selección, semana 1 6 y antes de la visita de prueba final. U n ECG se hizo en selección y en las semanas 12, 24 y 36. Preparación de datos y análisis estadísticos: El control y manejo de datos fueron emprendidos por concesionarios independientes (Kendle International and Health Research Solutions, Melbourne). Se indicó la evidencia de eficacia por una diferencia significativa en cambio de la línea básica entre los brazos de tratam iento. El análisis de variancia fue el método principal de evaluar el significado estadístico con la severidad de la enfermedad del brazo de tratamiento en línea básica siendo el factor de diseño primario. Las covariables potencialmente significativas se introducen como sea necesario. Las diferencias entre grupos en mediciones categóricas se analizaron utilizando métodos estadísticos exactos para maximizar la potencia. Basado en la hipótesis de una correlación de 0.60 entre las ocasiones de medición, potencia para detectar un efecto de una diferencia de desviación estándar en cambio entre grupos de línea básica a la semana 36 sería de aproximadamente 80% si 1 5 sujetos se recluyen por grupo. Ya que una velocidad de fricción del 1 5% ha sido observada en cada brazo en poblaciones similares, se reclutaron 1 8 pacientes.
RESULTADOS Reclutamiento y demográficos de sujetos: Treinta y seis sujetos se reclutaron durante un período de 12 meses a principios de Abril del 2000 (Figura 1 ). De estos , 32 tuvieron datos suficientes para análisis por protocolo. Dos sujetos fueron olvidados de cada brazo. El factor de severidad de la enfermedad de línea básica se originó, como planeado, por división de la m uestra en dos grupos en la puntuación ADAS-cog intermedio en línea básica (valores <25, 25), prod uciendo grupos menos severamente afectados y más severamente afectados (n=8 y 8 en el brazo de tratamiento y n=7 y 9 en el brazo de placebo, respectivamente) . Los g rupos no difieren a través de parámetros demog ráficos, biológicos y clínicos en línea básica (Tabla 4), distinto del brazo de tratamiento que tiene un I Q prepatológico medio superior que el grupo placebo como se estima utilizando el NART ( 1 1 1 .4 comparado con 104.9; t(30)=2.27, p=0.031 ) y un nivel inferior de la hormona estimulante tiroidea (TSH) (1 . 14 comparado con 2.00 mU/L; t(30)=4.400, p<0.001 ) . El NART y TSH fueron introducidos subsecuentemente de manera provisional en los análisis como co-variantes pero se encontraron que no eran significativos en cualquier análisis. Efectos clínicos: Se sometieron cambios en la puntuación ADAS-cog en las semanas 4, 12, 24 y 36 de la línea básica a análisis de dos rutas de variación con factores de brazo de tratam iento y la severidad de la enfermedad de línea básica. El medio de los cambios en la puntuación ADAS-cog mostró mayor deterioración en el grupo tratado con placebo en cada intervalo de examen , comparado con el grupo tratado con PBT-1 (Figura 2A). Esta tendencia llega cerca del significado estadístico en la semana 4 [F(1 ,28)=3.55, p=0.070] y en la semana 24[(F(1 ,28)=3.31 , p=0.080] (Figura 2A) . Como se planeó en el protocolo, el efecto de severidad de la enfermedad se examinó por estratificación de la muestra en sujetos afectados menos- o más- severamente (línea básica de valores ADAS-cog <25, >25) . Las pruebas de efectos simples dentro del nivel de severidad muestran la tendencia en los grupos recolectados con ser separables en los resultados no significativos para el estrato menos severo en todas las semanas y diferencias significativas en el estrato más severo en la semanas 4 [F(1 , 28)=7.73, p=0.010] y la semana 24 [F(1 ,28)=6.63, p=0.016] (Figura 2B) . Esta tendencia se mantuvo en la semana 36 pero el significado estadístico librado por muy poco [F(1 ,28)=3.62, p=0.068] . En los grupos afectados más severamente, la diferencia en el cambio medio de la línea básica de puntuación ADAS-cog de PBT-1 sobre placebo en las semanas 24 y 36 fue una diferencia de 7.37 (95% de Cl : 1 .51 - 1 3.24) y 6.36 (95% de Cl : -0.50 - 1 3.23) respectivamente (Figura 2B) . Efectos en ?ß, Zn y Cu en plasma: En la línea básica no existieron diferencias significativas en niveles de ?ß42 de plasma entre los brazos de tratam iento o estratos de severidad. La variancia en niveles individuales en l ínea básica en ?ß40/42 de plasma fue grande y se llevó a una potencia reducida del estudio para detectar cualesquiera diferencias significativas en los cambios medios entre grupos . Sin embargo , la referencia de niveles ?ß individuales a los niveles de referencia de línea básica disminuyó marcadamente la variación, y los efectos de tratamiento significativos revelados. La ?ß42 mostró una disminución significativa de la línea básica en el grupo tratado con PBT-1 de la semana 20 en adelante; durante el mismo tiempo, la ?ß42 de plasma en el grupo placebo disminuyó (Figura 3A) . La estratificación por severidad de la enfermedad como en lo anterior demostró que los cambios fueron evidentes solamente en el menos- severamente afectado (Figura 3B). La administración de PBT-1 fue asociado con una elevación sig nificativa (»30%) de Zn de plasma total (Fig ura 4A) pero sin efecto en el Cu de plasma (Figura 4B) . Los niveles medios de línea básica de Zn (9.4 u M) en los grupos AD recolectados fueron por debajo de los valores basados en normas relacionados con la edad (Wood and Zheng , 1 997). El aumento en Zn de plasma se indujo por tratamiento de PBT-1 representado por lo tanto por una normalización de niveles. En contraste, los niveles medios de línea básica de Cu (1 3.1 µ?) estuvieron dentro del rango basado en normas relacionados con la edad (Rahil-Khazen et al. , 2000) . La correlación de los niveles de ?ß42/4? de plasma con niveles de Zn/Cu se ensayaron en las m ismas ocasiones subsecuentes sin mostrar asociaciones significativas. Un resultado importante del tratamiento de sujetos de AD con PBT-1 es la elevación paradójica en Zn de plasma (Figura 4A), que es consistente con una restauración en la com unicación mediada con ZnT3 de cinc sináptico con la sangre. Esto tam bién indica que, en contraste con un quelador metálico típico tal como desferrioxamina, el mecanismo de acción de PBT-1 en esta dosis no es aquél de un quelador de tejido grueso. La afinidad relativamente débil de PBT-1 para los metales parece ser insuficiente para provocar depleción de metal sistémico marcado en presencia de un equilibrio re-establecido de homeostasis metálico. Niveles de sangre de PBT-1: Niveles de PBT-1 de pre-dosis en estado confiable a dosis diarias totales de 250, 500 y 750 mg fueron 4.03+2. 1 0, 6.74±3.70, 7.60±2.1 5 g/ml , respectivamente, y no mostraron correlaciones sig nificativas con niveles de ADAS-cog , metal o ?ß ensayados en las mismas ocasiones subsecuentes. Tabla 4 - Variables clínicos demográficos y clave de línea básica Grupo Variable Muestra Total Clioquinol Placebo Valor P (n=32) (n^ld) (n=16) Edad intermedia 72.50 73.19 71.81 ?=0.65? (SD; mín-máx) (8.37; 56-87) (8.61; 58-87) (8.35; 56-87) Sexo 17 8 9 P=1.00Í (n; % masculino) (53.1%) (47.1%) (52.9%) Estado de ApoE Heterocigoto n de ApoE4 (%) 15 7 8 p=i.ooi (46.9%) (43.8%) (50.0%) Homocigoto n de ApoE4 (%) 3 2 1 (9.4%) (12.5%) (63%) IQ NART premorboso estimado 108.1 111.4 104.9 P=0.03Í medio, (SD; mín-máx) (8.86; 91-124) (8.04; 94-121) (8.26; 91-124) ADAS-Cog 26.31 25.56 27.06 P=0.57t (7.27; 15-46) (7.67; 15-46) (7.01; 19-41) Edad del primer medio de 70.09 70.88 69.31 P=0.59t diagnosis, (SD; mín-máx) (7.98; 54-83) (8.50; 57-83) (7.61; 54-83) Duración de enfermedad (años) 2.41 2.31 2.56 P=0.66t medio (SD; mín-máx) -?9; 1-5) (1.08; 1-4) (1.32; 1-5) † Prueba t de muestra independiente (todas las pruebas 30 df) t Prueba exacta de dos colas. Las referencias citadas en la descripción y en los ejemplos se listan en las sig uientes páginas, y se incorporan en la presente por esta referencia.
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Claims (4)

  1. REIVINDICACIONES 1 . Un método para el tratamiento, mejoramiento y/o profilaxis de una condición neurologica que comprende la administración de una cantidad efectiva de un compuesto de fórmula I: i en donde R es O o S; R1 se selecciona independientemente entre H , alquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido; alquinilo opcionalmente sustituido; arilo opcionalmente sustituido; heterociclilo opcionalmente sustituido; un antioxidante; una porción de selección del objetivo; CN; halo; CF3; S03H; y OR2, SR ,SOR2, S02R2, NR2R3, (CH2)nNR2R3, HCNOR2, HCNNR R3, CONR2R3, CSNR R3, COR2, NCOR2, C02R2, CSR2 o S02NR2R3 en donde R2 y R3 se seleccionan independientemente entre H, alquilo opcionalmente sustituido, alquenilo opcionalmente sustituido, alquinilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, un antioxidante, o una porción de la selección del objetivo y n es un número entero de 1 a 10; X se selecciona independientemente entre CH, CO, N y NH; Z se selecciona independientemente entre CH, CO, N, NH y O; Y está ausente o junto con el anillo al cual está unido forma un arilo opcionalmente sustituido de 5 ó 6 miembros o un eterociclilo opcionalmente sustituido de 5 ó 6 miembros; m es un número entero de 1 a 3; y p es un número entero de 1 a 4, sales, hidratos, solvatos, derivados, pro-fármacos, tautómeros y/o isómeros de los mismos a un sujeto que necesita de los mismos, con la condición de que: (i) al menos uno de X y Z es distinto de CH; (ii) fanquinona o sus tautómeros son excluidos es decir, R es O, R1 en la posición 7 es OH, X es CH e Y está ausente, entonces Z no es (iii) cuando R es O, Y está ausente, Z es CH, X es CH distinto en la posición 3 don en l (iv) clioquinol es decir, cuando R es O, Y está ausente, Z y X son CH y m es 2, entonces R1 en la posición 5 no es cloro y R1 en la posición 7 no es yodo. 2. Un método de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque el compuesto de fórmula I se selecciona entre los siguientes: 8-hidroxi-4(3H)-quinazolinonas 8-hidroxi-quinazolina 8-hidroxi-quinoxalina [1 ,6]naftiridin-8-ol 9- idroxipirimido[1 ,6-a]pirimidin-4-ona 8-hidroxi-cinolina 6-hidroxi-fenazina 4-hidroxi-acridina 4,7(4, 10)-fenantrolin-5-ol ip¡rido[1 ,2-a]pirimidin-4-ona
  2. ,2-d]pirimidin-4-ol
  3. -3-d]piridazin-8-ol tiridin-8-ol triridina-4,8-diol tiridina-8-ol ,4-b]pirazin-8-ol ,4-b]pirazin- rido[4,3-d]pirimidin-8-ol hidroxi-4a,8a-dihidro-pirano[3,2, b]piridin-2-ona idroxi-6H-[1 ,6]naftiridin-5-ona hidroxi-6H-[1 ,6]naftirin-5-ona dibenzo[a,g]quinolizin-8-ona
  4. 4- idroxi-1 H-pirido[3,2-d]piridin-2-ona en donde R1 , m, n y p son como se definieron anteriormente y q es un número entero de 1 ó 2. 3. Un método de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado porque el compuesto de fórmula I es un compuesto de fórmula IA IA en donde R, R1 y m son como se definieron anteriormente; W es CH, N o NH; U es CH , CO o N; y Y' está ausente o junto con el anillo al cual está unido forma un heterociclilo opcionalmente sustituido de 6 miembros que contiene N. 4. Un método de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado porque el compuesto de fórmula IA se selecciona entre los siguientes: la donde R, R , m y q son como se definieron anteriormente; (ii) Fórmula Ib en donde R, R , m y q son como se definieron de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3; (iii) Fórmula le en donde R, R , m y q son como se definieron de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3; (iv) Fórmula Id en donde R, R1 , m y q son como se definieron de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3; (v) Fórmula le en donde R, R1 , m y q son como se definieron de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3; y (vi) Fórmula If en donde R1 y m son como se definieron de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3. 5. Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque R en el compuesto de fórmula I es O. 6. Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque R1 en el compuesto de fórmula I es halo, arilo opcionalmente sustituido, heterociclilo opcionalmente sustituido, alquilo opcionalmente sustituido, OR2, (CH2)nNR2R3, CONR2R3 y NCOR2 en donde n, R2 y R3 son como se definieron de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3. 7. Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque R en el compuesto de fórmula I es flúor, yodo, cloro, fenilo opcionalmente sustituido, un grupo heteromonocíclico opcionalmente sustituido insaturado de 3 a 6 miembros que contiene 1 a 4 átomos de nitrógeno, un grupo heteromonocíclico opcionalmente sustituido saturado de 3 a 6 miembros que contiene 1 a 4 átomos de nitrógeno, un grupo heteromonocíclico opcionalmente sustituido saturado de 3 a 6 miembros que contiene 1 a 2 átomos de oxígeno y 1 a 3 átomos de nitrógeno, alquilo de 0·,_4 opcionalmente sustituido, cicloalquilo de C2-6 opcionalmente sustituido, alcoxi de C-i -6 opcionalmente sustituido, tio opcionalmente sustituido, CH2NR4R5 en donde R4 y R5 se seleccionan independientemente entre H y alquilo de C - , o CONH(CH2)2R6 en donde R6 es heterociclilo opcionalmente sustituido. 8. Un. método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque Y en el compuesto de fórmula I es un fenilo opcionalmente sustituido, un grupo heteromonocíclico opcionalmente sustituido insaturado de 5 ó 6 miembros que contiene 1 a 4 átomos de nitrógeno o un grupo heteromonocíclico opcionalmente sustituido saturado de 5 ó 6 miembros que contiene 1 a 2 átomos de oxígeno y 1 a 3 átomos de nitrógeno. 9. Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizado porque el compuesto de fórmula I es como sigue: 1067 1049 1066 214 1026 10. Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque la enfermedad neurológica es un trastorno neurodegenerativo. 1 1. Un método de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado porque el trastorno neurodegenerativo es amiloidosis neurodegenerativa. 12. Un método de conformidad con la reivindicación 10 o la reivindicación 1 1 , caracterizado porque el trastorno neurodegenerativo es la enfermedad de Alzheimer esporádica o familiar, esclerosis lateral amiotrófica, cataratas, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Creutzfeldt-Jacob y su nueva variante asociada con la enfermedad de las "vacas locas", enfermedad de Huntington, demencia con formación corporal de Lewy, atrofia del sistema múltiple, enfermedad de Hallerboden-Spatz, enfermedad corporal de Lewy difusa, insomnio familiar mortal, enfermedad de Gertsmann Straussler Sheinker, hemorragia cerebral hereditaria con amiloidosis tipo Dutch, esclerosis múltiple, tauopatías, enfermedad neuromotora o enfermedades prion. 13. Un método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el trastorno neurodegenerativo es enfermedad de Parkinson. 14. Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, caracterizado porque el trastorno neurodegenerativo es una condición relacionada con la ?ß. 15. Un método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la condición relacionada con la ?ß es la enfermedad de Aizheimer o demencia asociada con el síndrome de Down o una de las diversas formas de formas dominantes autosomáticas de la enfermedad de Aizheimer familiar. 16. Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque retarda, reduce o detiene la disminución cognltiva del sujeto. 17. Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque además comprende la administración separada, secuencia! o simultánea de otro medicamento. 1 8. Un método de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado porque el otro medicamento es un inhibidor del sitio de la acetilcolinesterasa, un antioxidante, un agente anti-inflamatorio o un agente estrogénico. 19. Un método de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque el compuesto de fórmula I se administra de manera oral, tópica o parenteral. 20. Uso del compuesto de fórmula I como se definió de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento, mejoramiento y/o profilaxis de una condición neurológica. 21 . Uso de un compuesto de fórmula I como se definió de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para el tratamiento, mejoramiento y/o profilaxis de una condición neurológica. 22. Un compuesto de fórmula I como se definió de conformidad con las reivindicaciones 1 a 9 para uso en el tratamiento, mejoramiento y/o profilaxis de una condición neurológica. 23. Uso del com puesto de fórm ula I como se definió de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, como un farmacéutico. 24. Uso de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque el farmacéutico es un agente neuroterapéutico o neuroprotector. 25. Uso de conformidad con la reivindicación 23 o la reivindicación 24, caracterizado porque el farmacéutico es un agente antiamiloidogénico. 26. Una composición farmacéutica o veterinaria, caracterizada porque com prende el compuesto de fórmula I como se definió anteriormente de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 y un portador farmacéuticamente o veterinariamente aceptable. 27. Una composición de conformidad con la reivindicación 26 , caracterizada porque además comprende otro medicamento. 28. Una composición de conformidad con la reivindicación 27, caracterizada porq ue el otro medicamento es un inhibidor del sitio activo de la acetilcolinoesterasa, un antioxidante, un agente anti-inflamatorio o un agente estrogénico. 29. Un com puesto de fórmula I I, caracterizado porque es un compuesto de fórmula I como se definió de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, con la condición además de que al menos uno de R1 es distinto de H. 30. Un compuesto de fórmula IA como se definió de conformidad con la reivindicación 3. 31 . Compuestos de las fórmulas la, Ib, le, Id, le y If como se definió de conformidad con la reivindicación 4. 32. Un compuesto como se definió de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque excluye 1049, 1048, 1026 y 1045. 33. Un proceso para la preparación del compuesto de fórmula II definido de conformidad con la reivindicación 29 como se describe en la presente. 34. Un compuesto de la fórmula:
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