CN1720238B - 神经活性化合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及神经活性化合物，它们的制备方法以及它们作为药物或兽药的用途，特别是用于治疗神经病症，更具体地是用于治疗神经变性病症例如阿尔茨海默氏病。

Description

神经活性化合物

本发明涉及神经活性化合物(neurologically-active compounds)、它们的制备方法以及它们作为药物或兽药的用途，特别是用于治疗神经疾病、更具体地说用于治疗神经变性疾病例如阿尔茨海默氏病的用途。

发明背景

在本说明书中引用的所有参考文献，包括任何专利或专利申请，都在此引入作为参考。不是承认任何参考文献构成现有技术。所述参考文献的论述表明了它们的作者所主张的内容，本申请人对所引用文献的准确性和相关性保留质疑的权利。可以清楚地理解，虽然在此参考了许多现有技术出版物，但是在澳大利亚或任何其它国家，这种参考并不等于承认任何这些文献构成本领域公知常识的一部分。

对于每个物种来说，认为在生物学上的寿命是固定的，而人的寿命是不确定的，可以长达120年。由于本世纪的寿命预期显著地上升，所以老年人在我们的人群中所占比例不断增加，他们的卫生保健需求将持续数十年。

虽然自然老化的特征为人脑质量和体积的适度减少，这可能是由于脑细胞的萎缩和/或死亡引起的，但是这些变化在神经变性病症对象的大脑中的意义是非常深远的。这些病症中的大多数是间歇性的(即，不是由遗传突变引起的)并且不知道原因，但是有显示在许多基因中的成百上千种不同的突变造成几种神经变性病症的家族性(遗传)变种。在最近的十年中，在测定神经变性病症遗传基础的调查中，发现了成打或更多中的一些藏匿这些突变的基因。长时间的正常脑功能后，由于特定脑部位的进行性退化(即，神经细胞功能异常和死亡)，神经变性病症逐渐衍变。由于当神经细胞损失超过由受影响脑部位执行的连续功能(例如，记忆、运动)的“阙值”时，出现疾病的症状表现，因此脑退化的实际发病可能要比临床表现早许多年。

在造成痴呆的神经疾病中，智力和高级综合认知能力逐渐受损并干扰日常活动。在老年人群中，痴呆的确切发病率是未知的，但是在65岁以上的老年人群中可能15％的人群患有痴呆，其中5％的人群情况严重，10％的人群患有轻度至中等的痴呆。在85年中，65年以上人群患严重痴呆的发病率从1％增加到了45％。有许多原因引起痴呆，但是阿尔茨海默氏病(AD)占了65岁以上痴呆对象的50％。

AD是大脑的原发性退行性疾病。它的特点在于认知功能例如记忆、思考、理解、计算、语言、学习能力和判断的进行性下降。当这些下降足以损害到个人的日常生活时，被诊断为痴呆。AD表现出一种缓慢衰退的起病隐袭。这种疾病需要与和年龄有关的认知功能的正常下降区别开。正常下降要更小、更逐渐并引起更轻度的残疾。尽管更早发病并不罕见，但是AD的发病通常在65岁以后。随着年龄的增长，发病率也迅速增加(岁数每增加5岁，发病率约增加一倍)。在老年人群中，随着寿命预期的增加，这种疾病与个体的总数之间存在明显的关系。

AD痴呆的病原学还不清楚。大量证据表明某些形式的AD具有可遗传素因(St George-Hyslop中的综述，2000)，并且某些ApoE同工型的表达同样与AD的更高风险有关(Corder等人，1993；Czech等人1994)。铝的毒性累积被认为是AD的致病因素，虽然这种假设现在已经基本上被废弃。AD对象的大脑显示出异常沉积，其中包括β-淀粉状蛋白(Aβ)。

Aβ已知存在于某些神经变性疾病对象的大脑中，但是不知道它是否是潜在原发疾病过程的症状，或者实际上涉及所述疾病的病原学。例如，一些作者相信Aβ沉积可以是正常脑防御机制的指示，其中大脑试图隐退Aβ；这些沉积可以存在于正常个体的大脑中。存在神经原纤维纠缠在一起的tau蛋白的突变，没有淀粉状血小板存在于大脑中；这种病症被称为tauopathy。

有人提出治疗AD的方法是抑制大脑中Aβ的产生。通过BACE1和γ-分泌酶进行的APP的蛋白水解裂解生成全长Aβ，然后其从细胞中释放(Nunan and Small，2000)。因此，BACE1或γ-分泌酶的抑制剂可能具有治疗价值。另外，许多研究表明胆固醇可以影响Aβ的释放(Simons et al.，1998；Hartmann，2001；Fassbender et al.，2001；Frears et al.，1999；Friedhoff et al.，2001)。但是，对于降低胆固醇含量的数值，在本领域中存在一些争论，一些人认为胆固醇实际上是有益的。例如，Ji等人(2002)提出：Aβ与胆固醇的结合通过抑制它的低聚反应可以预防Aβ毒性。

在一种可选方法中，已经提出，通过舒展淀粉样前体蛋白(APP)的蛋白酶解加工，其生成Aβ淀粉样单体，许多潜在的治疗靶标是可能的(Shearmanet al.，2000；Sinha et al.，1999)，这种方法处在临床开发的早期。人们试图通过Aβ免疫接种，来清除脑部的Aβ，虽然在AD的转基因小鼠模型中是有效的(Schenk等人1999)，但是现已发现这种方法具有显著的副作用(Brower，2002)。

还有人提出，淀粉样原纤维的沉积在其它神经变性疾病中同样是重要的。这些包括帕金森病、路易体(Lewy body)形成性痴呆、多系统萎缩症、哈-斯二氏病(Hallerboden-Spatz disease)和弥漫性路易体疾病。

AD病因学的一种竞争性理论是：致病步骤位于Aβ淀粉样蛋白质的脑内生源说和累积的途径内(参见Selkoe最近述评，2001；Beyreuther et al.，2001；Bush，2001)。然而，到目前为止，还没有以此途径作为靶标的药物或试剂已经表明在改变疾病的临床表达上或在预防或改善与神经变性疾病包括阿尔茨海默氏病有关的认知功能下降中具有一种持久作用。

另一种假说是AD是由Aβ淀粉状蛋白的毒性累积引起的，部分原因是由于铜和锌的过度结合，这些金属离子在最受影响的区域中很丰富。此外，已经提出，当Zn²⁺和Cu²⁺离子与Aβ相互作用时，在原纤维和血小板中出现Aβ的聚集(Atwood et al.，1998)；这种情况已经被从缺乏突触Zn²⁺的动物中获得的最新数据所证实(Lee等人，2002)。还已经提出，氧化还原活性的Cu²⁺-Aβ相互作用可以由O₂生成H₂O₂(Huang等人，1999)。Cu²⁺和Zn²⁺两者都已经表明影响Aβ-类脂膜的相互作用(Curtain等人，2001)。

脑是一个富集金属离子的器官，最近的证据表明，金属内环境稳定的破坏在各种与年龄有关的神经变性疾病中起关键性的作用。这些疾病的共同特性包括错折叠蛋白质的沉积(每种疾病具有自己的特异性淀粉样蛋白质)和由于氧化应激引起的大量细胞损伤。的确，目前数据被快速累积，金属化学反应可以作为构成致淀粉状神经障碍例如阿尔茨海默氏病、肌萎缩性侧索硬化(ALS)、朊病毒病(prion diseases)-包括克-雅二氏病(CJD)、传递性海绵状脑病(TSE)、白内障、线粒体病、帕金森病和亨廷顿舞蹈病的共同点。在这些情况中，通过生理环境(典型地存在过渡金属和有用的还原剂)中的异常氧化还原活性，促进了特异性蛋白质的病理性聚集。[Bush，2000(Curr OpinChem Biol.2000 Apr；4(2)：184-91)]。

使用氯碘喹啉(iodochlorohydroxyquinoline)-抗生素[亦称为氯碘羟喹(CQ)]治疗AD的方法已经在P.N.Geromylatos S.A的美国专利5,994,323和6,001,852以及Bush等人的美国专利申请No.09/972,913中公开并且列于它们的权利要求书中。1970年作为抗生素的CQ被取消，因为它与罕见的神经综合症，亚急性脊髓视神经病(SMON)有关，其仅仅在六十年代的日本被观察到，在接受长时间药物以及以及可能给予比建议剂量更高的剂量的病人中(Shiraki，1975)。但是，最新证据表明，SMON是由特别弱人群中与维生素B12不足有关的滥用引起的，因此在临床情况中可以进行修复研究(Yassin等人，2000；Bush and Masters，2001)。

但是，在Geromylatos和Bush的专利中没有提供动物模型或人的体内结果。US 5,994,323公开了一种包含CQ和维生素B12的组合物，及其治疗″对CQ给药起反应的同时抑制有害副作用的疾病或障碍″的用途。这些疾病包括AD。美国6,001,852公开了一种使用CQ(优选与维生素B12一起)治疗AD的方法。美国专利5,994,323和美国专利6,001,852提出的剂量范围是10-750mg每天；美国专利5,994,323建议如果进行长期治疗，那么CQ应该周期性地给予，给药3周后，接着进行一个1-4周的″清除″阶段。

在美国申请09/972,913中，CQ仅仅是指它解聚Aβ沉积的能力。没有讨论神经毒性的其它机理。General Hospital公司申请的PCT/US99/05291公开了使用CQ与特定的铜和锌螯合剂结合以促进淀粉样蛋白斑的溶解以及抑制淀粉样蛋白斑的形成和/或抑制由Aβ引起的ROS的产生。

美国专利6,001,852还提出了一种包含CQ和维生素B12的组合物，这种组合物可以在治疗帕金森氏病中使用；然而，在美国专利6,001,852中提出，CQ主要是通过从黑质(substantia nigra)中清除铁起作用的。

CQ治疗AD的效力取决于它进入CNS然后从各种Aβ实体中螯合过渡金属Cu、Zn和Fe的能力，由此减少Aβ毒性并将Aβ释放清除出去。由于CQ差的水溶性，这限制了它的口服生物利用度，因此它的效果受到限制。还已知，CQ进行大量的接合代谢(conjugative metabolism)，并且具有如上所述的毒性史。CQ是一种二齿金属配体的事实使得捕获每个金属离子必须至少需要两个分子。

发明概述

本发明提供治疗神经疾病的方法，所述神经疾病包括其特征为蛋白质和金属间异常反应的那些。

现在，通过对下列一种或多种性质进行集体优化，我们已经开发出了具有两个稠合6元杂环的化合物，其中氮原子在1位上，羟基或巯基在8位上并且至少一个环是芳族的：

(a)金属螯合(如下文所定义)；

(b)水溶性；

(c)减少的细胞毒性；

(d)淀粉分散性能；

(e)适合于CNS渗透的膜渗透性；以及

(f)代谢稳定性。

这些化合物包括通过主动转运集中在CNS中的治疗的例子，除它们的金属螯合性质外还含有抗氧化活性，其在一些情况中导致金属螯合性质增强并显示出一种前药策略，这种前药策略掩蔽了8-羟基或8-巯基部分以有利于CNS渗透，并且利用保存在血脑屏障(BBB)内表面上的已知酯酶活性。

本发明提供治疗、改善和/或预防神经疾病的方法，其包括给予需要的对象有效量的式I的化合物：

其中

R是O或S；

R¹独立地选自H，任选取代的烷基，任选取代的烯基；任选取代的炔基；任选取代的芳基；任选取代的杂环基；抗氧化剂(antioxidant)；靶部分(targeting moiety)；CN；卤素；CF₃；SO₃H；以及OR²，SR²，SOR²，SO₂R²，NR²R³，(CH₂)_nNR²R³，HCNOR²，HCNNR²R³，CONR²R³，CSNR²R³，NCOR²，NCSR²，COR²，CO₂R²，CSR²或SO₂NR²R³其中R²和R³独立地选自H、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的芳基、任选取代的杂环基、抗氧化剂或靶部分以及n是1-10的整数；

X独立地选自CH、CO、N和NH；

Z独立地选自CH、CO、N，NH和O；

Y独立地是不存在或与和它相连的环一起形成5或6元任选取代的芳基或5或6元任选取代的杂环基；

m是1-3的整数；以及

p是1-4的整数，

其盐、水合物、溶剂化物、衍生物、前药、互变异构体和/或异构体，

条件是：

(i)X和Z中的至少一个不是CH；以及

(ii)泛喹酮(phanquinone)或其互变异构体除外，即，当R是O，在7位的R¹是OH，X是CH以及Y不存在时，那么Z不是

此外，本发明提供式I化合物在制备用于治疗、改善和/或预防神经疾病的药物中的用途。

本发明还提供式I化合物用于治疗、改善和/或预防神经疾病的用途。

本发明此外还提供在治疗、改善和/或预防神经疾病中使用的式I化合物。

本发明更进一步提供式I化合物作为药物，优选作为神经治疗药物或神经保护药物，更优选作为抗致淀粉样药物(antiamyloidogenic agent)的用途。优选地，所述神经病症是神经变性病症(neurodegenerative condition)，更优选是神经变性淀粉样变性病(neurodegenerative amyloidosis)，例如阿尔茨海默氏病或帕金森病。

R优选是O。

R¹优选是卤素，任选取代的芳基，任选取代的杂环基，任选取代的烷基，OR²，SR²，(CH₂)_nNR²R³，CONR²R³和NCOR²，其中n、R²和R³如上所定义。R¹更优选是氟；碘；氯；任选取代的苯基例如4-卤代苯基，例如，4-氟苯基或4-氯苯基；任选取代的含1-4个氮原子的不饱和3-6元杂单环基团例如咪唑基或哌啶基；任选取代的含1-4个氮原子的饱和3-6元杂单环基团例如咪唑烷基或哌嗪基；任选取代的含1-2个氧原子和1-3个氮原子的饱和3-6元杂单环基团例如吗啉基；任选取代的C_1-4烷基例如甲基或乙基；任选取代的C_2-6环烷基例如环丙基；任选取代的C_1-6烷氧基；任选取代的硫基(thio)；CH₂NR⁴R⁵，其中R⁴和R⁵独立地选自H和C_1-4烷基；或CONH(CH₂)₂R⁶，其中R⁶是任选取代的杂环基。

Y优选是任选取代的苯基；任选取代的含1-4个氮原子的不饱和5或6元杂单环基团例如咪唑基或吡啶基；或任选取代的含1-2个氧原子和1-3个氮原子的饱和5或6元杂单环基团例如吗啉基。

虽然不希望受理论的束缚，但是有理由相信，在本发明化合物的螯合性质方面，取代基R¹在电子或空间方面具有受限的作用。因此，取代可以用来调节其它参数例如细胞毒性和物理化学性质包括氢键供体和受体的数目、亲脂性(ClogP、ElogP和LogD)、溶解度和极性表面积。这些参数的调节有助于优化所述化合物的药物动力学特性。还推定，如果所述取代基提供螯合性质，那么当取代基R¹位于2位和/或7位时，除调节细胞毒性和物理化学性质外，还可能影响活性。

式I化合物的说明性类型如下所示：

             8-羟基-4(3H)-喹唑啉酮(quinazoIinones)

              8-羟基-喹唑啉

              8-羟基-喹喔啉

              [1，6]萘啶-8-酚

             9-羟基嘧啶并[1，6-a]嘧啶-4-酮

                                      8-羟基-噌啉

                                6-羟基-吩嗪

                                4-羟基-吖啶

            4，7(4，10)-菲咯啉-5-酚

                                   9-羟基吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮

                                      吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-酚

                                         吡啶并[2-3-d]哒嗪-8-酚

                                        [1，7]萘啶-8-酚

                                   [1，5]萘啶-4，8-二酚

                                       [1，5]萘啶-8-酚

                                       吡啶并[3，4-b]吡嗪-8-酚

                        吡啶并[3，4-b]吡嗪-5-酚

                       吡啶(pyridol)[4，3-d]嘧啶-8-酚

                     4-羟基-4a，8a-二氢-吡喃并[3，2，b]吡啶-2-酮

                8-羟基-6H-[1，6]萘啶(naphthayridin)-5-酮

                   8-羟基-6H-[1，6]萘啶(naphthayridin)-5-酮

            二苯并(dibenzo)[a，g]喹嗪-8-酮

                 4-羟基-1H-吡啶并[3，2-d]吡啶-2-酮

其中R¹、m、n和p如上所定义，以及q是1或2的整数。

可以将式I化合物上的8-羟基或8-巯基封闭，形成前药，特别是酯前药。8-羟基或8-巯基代表式I化合物代谢的主要位置：与葡糖醛酸或硫酸盐共轭得到待排泄的亲水性物质。这些共轭物可能不通过血脑屏障。所述的酯前药可以避免式I化合物被共轭。然后，累积于血脑屏障的酯酶在经过屏障的途中可以释放出C8-羟基或巯基，激活在CNS中起作用的化合物。

优选的式I化合物是式IA的化合物

其中

R、R¹和m如上所定义；

W是CH、N或NH；

U是CH、CO或N；以及

Y′与和它相连的环一起形成6元含N任选取代的杂环基。

优选的式IA化合物如下所示：

(i)式Ia

其中R、R¹、m和q如上所定义。

优选地，R¹处于2、3、5和/或7位并且选自卤素、任选取代的芳基、任选取代的杂环基、任选取代的烷基和(CH₂)_nNR²R³，其中n、R²和R³如上所定义。更优选地，R¹是氯、任选取代的苯基、C_2-6环烷基、CH₂NR⁴R⁵，其中R⁴和R⁵独立地选自H和C_1-4烷基或任选取代的吡啶基。

特别优选的例子如下所示。

(ii)式Ib

其中R、R¹、m和q如上所定义。

优选地，R¹处于2、4、5和/或7位并且选自卤素和任选取代的杂环基。更优选地，R¹是氯和/或吗啉基。

优选的例子如下所示。

(iii)式Ic

其中R、R¹、m和q如上所定义。

优选地，R¹处于2、5和/或7位并且选自卤素和CH₂NR⁴R⁵，其中R⁴和R⁵独立地选自H和C_1-4烷基。

优选的例子如下所示。

(iv)式Id

其中R、R¹、m和q如上所定义。

优选地，R¹处于2和/或7位并且选自任选取代的杂环基、CO₂R²、(CH₂)_nNR²R³和CONR²R³，其中n、R²和R³如上所定义。

优选的例子如下所示。

(v)式Ie

其中R、R¹、m和q如上所定义。

优选地，R¹处于2、3、6和/或7位并且选自卤素、任选取代的芳基和(CH₂)_nNR²R³，其中n、R²和R³如上所定义。

优选的例子如下所示。

(vi)式If

其中R¹和m如上所定义。

优选地，R¹处于2和/或7位并且选自卤素和(CH₂)_nNR²R³，其中n、R²和R³如上所定义。

优选的例子如下所示。

另一方面，本发明提供含如上所定义的式I化合物以及药学上或兽医上可接受的载体的药物组合物或兽用组合物。

一些式I化合物本身是新的。

因此，本发明提供式II的化合物，其是式I的化合物，条件是至少一个R¹不是H。

式II的优选化合物是式IA的化合物，更优选的化合物是如上所定义的式Ia、Ib、Ic、Id和Ie的化合物，最优选是1045、1061、1062、GK2、1066、1053、1063、1064、1065、1067、1069和1070。

如上所定义的式II的化合物可以使用在下文中详细描述的方法进行制备。

发明详述

在本申请的权利要求书和本发明的说明书中，除上下文由于表达措辞或必要含义需要之外，术语“包含”以“包括”的含义使用，即，是指所述特征的存在，但是并不排除本发明各种实施方案中另外特征的存在或加入。

术语“烷基”单独使用时或在其它复合术语例如“任选取代的烷基”或“烷基氨基”中使用时是指具有1-10个碳原子、优选具有1-6个碳原子、更优选具有1-4个碳原子的直链、支链或环状烃基。这些烷基的示范性例子是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、新戊基、己基、环丙基、环丁基、环戊基或环己基。优选的烷基是C_1-4烷基例如甲基或乙基以及C_2-6环烷基例如环丙基。

术语“烯基”单独使用时或者在复合术语例如“任选取代的烯基”中使用时表示具有至少一个碳-碳双键的2-20个碳原子、优选2-14个碳原子、更优选2-6个碳原子的线性、分枝或单环或多环基团。烯基的例子包括烯丙基、乙烯基、丙烯基、丁烯基、异丁烯基、3-甲基-2-丁烯基、1-戊烯基、环戊烯基、1-甲基-环戊烯基、1-己烯基、3-己烯基、环己烯基、1-庚烯基、3-庚烯基、1-辛烯基、环辛烯基、1-壬烯基、2-壬烯基、3-壬烯基、1-癸烯基、3-癸烯基、1，3-丁二烯基、1，4-戊二烯基、1，3-环戊二烯基、1，3-己二烯基、1，4-己二烯基、1，3-环已二烯基、1，4-环已二烯基、1，3-环庚二烯基、1，3，5-环庚三烯基、1，3，5，7-环辛四烯基等等。

术语“炔基”单独使用时或者在复合术语例如“任选取代的炔基”中使用时表示具有至少一个碳-碳三键的2-20个碳原子、优选2-14个碳原子、更优选2-6个碳原子的直链或支链基团。例子包括乙炔基、1-丙炔基、1-和2-丁炔基、2-甲基-2-丙炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基、5-己炔基、10-十一碳炔基、4-乙基-1-辛炔-3-基、7-十二碳炔基、9-十二碳炔基、10-十二碳炔基、3-甲基-1-十二碳炔-3-基、2-十三碳炔基、11-十三碳炔基、3-十四碳炔基、7-十六碳炔基、3-十八碳炔基等等。

术语“杂环基”单独使用时或在复合术语例如“任选取代的杂环基”中使用时是指含有至少一个选自氮、硫和氧的杂原子的单环或多环杂环基。

合适的杂环基包括含N杂环基，例如不饱和的3-6元含1-4个氮原子的杂单环基，例如吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、三唑基或四唑基；

饱和的3-6元含1-4个氮原子的杂单环基，例如吡咯烷基、咪唑烷基、哌啶基或哌嗪基；

不饱和的含1-5个氮原子的稠合杂环基，例如吲哚基、异吲哚基、中氮茚基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、吲唑基、苯并三唑基或四唑并哒嗪基；

不饱和的3-6元含氧原子的杂单环基，例如吡喃基或呋喃基；

不饱和的含1-2个硫原子的3-6元杂单环基，例如噻吩基；

不饱和的含1-2个氧原子和1-3个氮原子的3-6元杂单环基，例如噁唑基、异噁唑基或噁二唑基；

饱和的含1-2个氧原子和1-3个氮原子的3-6元杂单环基，例如吗啉基；

含1-2个氧原子和1-3个氮原子的不饱和稠合杂环基，例如苯并噁唑基或苯并噁二唑基；

不饱和的含1-2个硫原子和1-3个氮原子的3-6元杂单环基，例如噻唑基或噻二唑基；

饱和的含1-2个硫原子和1-3个氮原子的3-6元杂单环基，例如噻唑烷基；以及

含1-2个硫原子和1-3个氮原子的不饱和稠合杂环基，例如苯并噻唑基或苯并噻二唑基。

优选地，所述的杂环基是不饱和的含1-3个氮原子的5或6元杂单环基，例如咪唑基或吡啶基；饱和的含1-4个氮原子的5或6元杂单环基，例如咪唑烷基或哌嗪基；或饱和的含1-2个氧原子和1-3个氮原子的5或6元杂单环基，例如吗啉基。

术语“芳基”单独使用时或者在复合术语例如“任选取代的芳基”中使用时表示含一个、两个或三个环的碳环芳族体系，其中这些环可以以悬挂方式连接在一起或者可以稠合在一起。术语“芳基”包括芳香族基团例如苯基、萘基、四氢萘基、茚满和联苯基。优选地，所述的芳基是任选取代的苯基例如4-卤代苯基，更优选是4-氟苯基或4-氯苯基。

术语“卤素”是指氟、氯、溴或碘，优选是指氟、碘或氯。

术语“烷氧基”是指直链或分枝的含氧基团，优选每个具有1-约6个碳原子的烷基部分。烷氧基的例子包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基和叔丁氧基。

术语“任选取代的硫基”是指任选的取代基，例如含1-10个碳原子、优选1-6个碳原子、更优选1-4个碳原子的线性或支链烷基与二价硫原子连接的基团。烷硫基的例子包括甲硫基、乙硫基、丙硫基、丁硫基和己硫基。

术语“任选取代的”是指基团，该基团可能或没有进一步被一个或多个选自烷基、烯基、炔基、芳基、醛、卤素、卤代烷基、卤代烯基、卤代炔基、卤代芳基、羟基、烷氧基、链烯氧基、芳氧基、苄氧基、卤代烷氧基、卤代链烯氧基、卤代芳氧基、硝基、硝基烷基、硝基烯基、硝基炔基、硝基芳基、硝基杂环基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烯基氨基、炔基氨基、芳氨基、二芳基氨基、苄基氨基、二苄基氨基、酰基、烯基酰基、炔基酰基、芳基酰基、酰胺基、二酰基氨基、酰氧基、烷基磺酰氧基、芳基亚磺酰氧基(arylsulphonyloxy)、杂环基、杂环氧基、杂环氨基、卤代杂环基、烷基亚磺酰基、芳基亚磺酰基、烷氧羰基(carboalkoxy)、芳氧羰基(carboaryloxy)、巯基、烷硫基、苯甲硫基、酰硫基、含磷基团等等的基团所取代。优选地，所述的任选取代基是C_1-6烷基，更优选C_1-4烷基；CF₃；氟；氯；碘；氰基；C_1-6烷氧基，更优选C_1-4烷氧基；芳基；杂环基；氨基；或烷基氨基。

在此使用的术语“抗氧化剂”具有广泛的含义并且是指能够与活性氧物质例如羟基以如生成无毒性产物的方式反应的基团。实例包括酚，例如3，4，5-三甲氧基苯基和3，5-二-叔丁基-4-羟基苯基、吲哚胺例如褪黑激素和黄酮类。其它实例可以在下面的文献(Wright，2001；Karbownik，2001；Gilgun-Sherki，2001)中找到。

在此使用的术语“靶部分”具有广泛的含义并且是指通过主动转运机制促进药物大脑传送的基团。所述的靶部分被累积于血脑屏障的特异性转运酶识别，然后这些转运酶提供将药物引入大脑中的机制。通常，这些转运体是钠依赖性的，它们的底物含有羧酸类例如抗坏血酸和L-谷氨酸。靶部分与药物进行共轭以便保持酸部分。实例可以在文献(Manfredini，2002，sakaedu，2001)中找到。

在此使用的术语“金属螯合剂”具有广泛的含义并且是指具有两个或多个能与金属原子优选Cu、Zn或Fe结合的供体原子的化合物，其中供体原子中的至少两个能与该金属原子同时结合，所得的金属络合物大于或等于金属离子的热力学稳定性：生物配体络合物。在本发明中，使用金属螯合剂用于治疗神经障碍不同于先前已知的“螯合疗法”的概念。“螯合疗法”是一个与临床上除去大量金属有关的术语，例如在威尔逊病、β-地中海贫血和血色素沉着症中。在这些疾病中，金属体内平衡的破坏被认为是灾难性的事情，非常像引起大批问题金属涌入的溃坝。这些化合物的作用机理是大量金属被螯合剂所螯合并通过排泄清除掉。通过比较，与本发明神经病症有关的金属体内平衡破坏更像水龙头的恒定滴漏，其如果保持足够长的时间，在长时间内最终将引起局部损伤。本发明的“金属螯合剂”的目的是破坏异常金属-蛋白质的相互作用，以获得金属的微妙分配，随后正常化的金属分布的目的是一旦毒性循环是短循环的，可以用累积的致淀粉状蛋白更有效地对付内源性清除过程。

式I或II化合物的盐优选是药学上可接受的，但是可以理解，非药学上可接受的盐同样属于本发明的范围，因为这些非药学上可接受的盐在制备药学上可接受的盐的过程中可以作为有用的中间体。药学上可接受的盐的实例包括药学上可接受的阳离子例如钠、钾、锂、钙、镁、铵和烷基铵的盐；药学上可接受的无机酸例如盐酸、磷酸、硫酸、正磷酸、硝酸、碳酸、硼酸、氨基磺酸和氢溴酸的酸加成盐；或药学上可接受的有机酸例如乙酸、丙酸、丁酸、酒石酸、马来酸、羟基马来酸、富马酸、柠檬酸、乳酸、粘酸、葡糖酸、苯甲酸、琥珀酸、草酸、苯乙酸、甲磺酸、三卤代甲磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、水杨酸、磺胺酸、天冬氨酸、谷氨酸、依地酸、硬脂酸、棕榈酸、油酸、月桂酸、泛酸、丹宁酸、抗坏血酸和戊酸的盐。

此外，本发明的一些化合物可以与水或常见的有机溶剂形成溶剂化物。这些溶剂化物包括在本发明的范围内。

“药学上可接受的衍生物”是指任何药学上可接受的盐、水合物、酯、酰胺、活性代谢物、类似物、残基或没有生物学上相反的不希望的作用并引起所需的药理学和/或生理作用的任何其它化合物。

在此使用的术语“前药”具有广泛的含义并且包括在体内转化为式I或II化合物的那些化合物。使用前药策略优化了药物给予它的作用部位例如脑的输送。一方面，所述术语是指C_1-6烷基或芳基酯部分的存在被设计用来阻止前药越过BBB前的水解，其中BBB内表面上的酯酶对该酯进行水解并释放出式I或II化合物的C8羟基。第二方面，所述的术语是指在2位附着抗氧化基团，特别是3，4，5-三甲氧基苯基部分或其衍生物。然后，将脑暴露于前氧化环境中将导致3，4，5-三甲氧基苯基的羟基化，得到2-羟基-3，4，5-三甲氧基苯基取代基，其中的羟基将增强式I或II化合物的螯合性质。

在此使用的术语“互变异构体”具有广泛的含义并包括能够以两种异构形式平衡态存在的式I或II的化合物。这些化合物可能在连接两个原子或基团的键方面有差异以及化合物中这些原子或基团的位置上存在差异。

在此使用的术语“异构体”具有广泛的含义并包括结构上的、几何上的和立体的异构体。由于式I或II的化合物可以具有一个或多个手性中心，因此它能够以对映体的形式存在。

本发明的组合物包含至少一种式I或II的化合物以及一种或多种药学上可接受的载体以及任选其它的治疗剂。每种载体、稀释剂、佐剂和/或赋形剂必须是药学上“可接受的”，即与组合物的其它组分相容并且对对象是无害的。组合物包括适合口服、直肠、鼻、局部(包括颊和舌下)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内和真皮内)给药的那些。该组合物可能方便地以单位剂型存在并且可以通过药学领域公知的方法进行制备。这些方法包括将活性成分与构成一种或多种助剂的载体混合在一起。通常，通过将活性成分与液体载体、稀释剂、佐剂和/或赋形剂或精细粉碎的固体载体或两者均匀和紧密地混合在一起，然后如果需要的话对产品进行成形，这样可以制得所述的组合物。

在此使用的术语“神经病症(neurologyical condition)”具有广泛的含义并且是指这样的病症，其中神经系统的各种细胞类型产生变性和/或由于神经变性疾病或损伤或暴露造成损伤。特别地，式I或II的化合物可以用于治疗产生的病症，其中由于外科手术、感染、暴露于毒性剂、肿瘤、营养缺乏或代谢失调所引起的神经系统细胞受损。此外，式I或II的化合物可以用于治疗神经变性疾病的后遗症，例如阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、多发性硬化、肌萎缩性侧索硬化、癫痫症、药物滥用或药瘾(酒精、可卡因、海洛因、苯丙胺等等)、脊髓障碍和/或损伤、营养不良或神经视网膜退化(视网膜病)和外周神经病，例如糖尿病性神经病和/或由毒素引起的外周神经病。

在此使用的术语“神经变性疾病(neurodegenerative disorder)”是指神经元完整性受到威胁的异常。当神经元细胞表现出降低的存活率时或当神经元不再能传播信号时，神经元的完整性可能受到了威胁。

可以用本发明的化合物进行治疗的神经障碍包括急性间歇性血紫质病；阿霉素引起的心肌病；AIDS痴呆和HIV-1引起的神经毒性；阿尔茨海默氏病；肌萎缩性侧索硬化；动脉粥样硬化；白内障；脑缺血；脑性麻痹；大脑瘤；化疗引起的器官损伤；顺铂引起的肾毒性；冠状动脉旁路术；克雅氏病及其与“疯牛”病有关的新变体；糖尿病性神经病变；唐氏综合症；淹溺；癫痫症和外伤后癫痫；家族性遗传性共济失调；额颞性痴呆；青光眼；肾小球病；血色素沉着症；血液透析；溶血；溶血性尿毒性综合症(外氏病)；出血性中风；哈-斯二氏病；心脏病发作和再灌注损伤；亨廷顿舞蹈病；路易体病；间歇性跛行；缺血性中风；炎性肠病；黄斑变性；疟疾；甲醇引起的中毒；脑膜炎(无菌的和结节状的)；运动神经元病；多发性硬化；多系统萎缩症；心肌局部缺血；肿瘤形成；帕金森氏病；围产期窒息；皮克氏病；进行性核上性麻痹；放射疗法引起的器官损伤；血管成形术后再狭窄；视网膜病；老年性痴呆；精神分裂症；脓毒症；脓毒性休克；海绵状脑病；subharrachnoid haemorrage/脑血管痉挛；硬膜下血肿；手术创伤，包括神经外科；地中海贫血；短暂性缺血发作(TIA)；外伤性脑损伤(TBI)；外伤性脊椎伤损；移植；血管性痴；病毒性脑膜炎；以及病毒性脑炎。

此外，本发明的化合物还可以用来增强其它治疗的作用，例如增强脑源性神经生长因子的神经保护作用。

本发明特别是涉及引起中枢神经系统氧化性损伤的病症，包括急性和慢性神经障碍例如外伤性脑损伤、脊髓损伤、脑缺血、中风(缺血性和出血性)、subharrachnoid haemorrage/脑血管痉挛、大脑瘤、阿尔茨海默氏病、克雅氏病及其与“疯牛”病有关的新变体、亨廷顿舞蹈病、帕金森氏病、家族性遗传性共济失调、白内障、路易体形成痴呆、多系统萎缩、哈-斯二氏病、弥漫性路易体疾病(diffuse Lewy body disease)、肌萎缩性侧索硬化、运动神经元病(motor neuron disease)、多发性硬化(multiple sclerosis)、致命性家族性失眠症(fatal familial insomnia)、格-斯-斯三氏病(Gertsmann StrausslerSheinker disease)和遗传性脑出血伴淀粉样变-荷兰型(hereditary cerebralhaemorrhage with amyloidosis-Dutch type)。

更特别地，本发明涉及神经变性淀粉样变性病的治疗。神经变性淀粉样变性病可以是任何病症，其中神经学损伤由淀粉状蛋白沉积引起的。淀粉状蛋白可以由各种蛋白质或多肽前体制备，包括，但不局限于Aβ、结瘢、亨廷顿或朊病毒蛋白。

因此，所述的病症优选选自间歇性或家族性阿尔茨海默氏病(sporadic orfamilial Alzheimer’s disease)、肌萎缩性侧索硬化(amyotrophic lateralsclerosis)、运动神经元病、白内障(cataract)、帕金森病、克雅氏病(Creutzfeldt-Jacob)及其与″疯牛″病有关的新变体、亨廷顿舞蹈病(Huntington’s disease)、伴有路易体形成的痴呆(dementia with Lewy bodyformation)、多系统萎缩(multiple system atrophy)、哈-斯二氏病和弥散性路易体病。

更优选地，所述的神经变性淀粉样变性病是与Aβ-有关的病症，例如阿尔茨海默氏病或与唐综合症有关的痴呆或几种类型的常染色体显性形式的家族性阿尔茨海默氏病之一(reviewed in St George-Hyslop，2000)。最优选地，与Aβ有关的病症是阿尔茨海默氏病。

在本发明所有方面的特别优选的实施方案中，在治疗前，对象患有中等或严重危害的认知功能，其由阿尔茨海默氏病评分(ADAS)-cog测定法进行评估，例如ADAS-cog值为25或更大。

除减缓或阻止对象认知下降外，本发明的方法和化合物还可以适于在治疗或预防神经变性病症中使用，或者可以适于在减缓神经变性病症症状中使用。所述化合物能够对患有认知下降的对象提供至少部分逆转。如果对已经确认具有趋向于患神经变性病症不断增加风险的对象给药，或者对在临床表现前表现出认知下降的对象给药，例如轻度认知损伤或最小进行性认知损伤，除减缓或降低认知下降速度的作用外，这些方法和化合物能够阻止或推迟临床症状的发病。

目前，阿尔茨海默氏病以及其它痴呆通常不能被诊断，直到出现一种或多种警告症状为止。这些症状构成被称为轻度认知缺损(MCI)的综合症，其最近由美国神经学会(the American Academy of Neurology)定义，并且是指患有记忆缺陷的个体的临床陈述，但是功能良好以及不满足痴呆临床标准的那些人除外(Petersen等人，2001)。MCI的症状包括：

(1)影响职业技能的记忆丧失

(2)执行熟悉任务时有困难

(3)语言有问题

(4)对时间和地点迷惑(迷失)

(5)糟糕的或降低的判断力

(6)抽象思维有问题

(7)错放东西

(8)情绪或行为的改变

(9)个性改变

(10)不主动

MCI可以使用常规认知筛选试验法进行测定，例如缩型精神状态测验法、记忆缺陷筛选法和神经心理学筛选试验法。

在此使用的术语″对象(受试者)″是指具有一种需要用一种药物活性剂进行治疗的疾病或病症的任何动物。所述的对象可以是一种哺乳动物，优选是人，或者可以是家畜或伙伴动物。虽然本发明的化合物特别考虑用于人的治疗，但是也适于兽医治疗，包括对伙伴动物例如狗和猫，家畜例如马、矮马、驴、骡、骆驼、羊驼、猪、牛和羊，或动物园动物例如灵长类、猫科、犬科、牛族和有蹄动物进行治疗。

合适的哺乳动物包括灵长目、啮齿目、兔形目、鲸目、食肉目、奇蹄目和偶蹄目。由于奇蹄目和偶蹄目具有相似的生物学和重要的经济价值，因此奇蹄目和偶蹄目是特别优选的。

例如，偶蹄目包括约150个分布在九个族的活物种：猪(猪科)、野猪(Tayassuidae)、河马(河马科)、骆驼(骆驼科)、麝香鹿(Tragulidae)、长颈鹿和okapi(长颈鹿科)、鹿(鹿科)、叉角羚(叉角羚科)和牛、羊、山羊和羚羊(牛科)。这些动物中的许多在各个国家被用于喂养。更重要地，许多具有重要经济价值的动物例如山羊、绵羊、牛和猪具有非常相似的生物学并且享有高度的基因组同源性。

奇蹄目包括马和驴，这两种动物都具有重要的经济价值并且是密切相关的。的确，马和驴进行杂种繁殖是公知的。

如在此使用的，术语“治疗有效量”是指为了有效地获得所需的治疗反应，例如为了治疗、改善或预防神经病症，所需的本发明化合物的数量。

显然，具体的″治疗有效量″将随这些因素而改变，例如待治疗的具体病症、对象的身体状况、待治疗对象的类型、治疗的持续时间、联合治疗的性质(如果有的话)以及所使用的具体制剂和化合物或其衍生物的结构。

此外，本发明的化合物可以与其它药物一起提供有效的组合。可以包括药物活性剂的任何化学上相容的组合，只要该组合没有消除式I或II化合物的活性就可以。可以理解，本发明的化合物和其它药物可以分开给药、依次给药或同时给药。

其它药物可以包括，例如，其中所述病症是与β-淀粉状蛋白有关的病症，特别是阿尔茨海默氏病，乙酰胆碱酯酶活性部位的抑制剂，例如phenserine、加兰他敏(galantamine)或他克林(tacrine)；抗氧化剂，例如维生素E或维生素C；抗炎药例如氟比洛芬或布洛芬，任选改性以释放氧化一氮(例如NCX-2216，由NicOx生产)，或雌激素药例如17-β-雌二醇。

用于制备药物组合物的方法和药物载体在本领域中是公知的，如在教科书例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，20th Edition，Williams&Wilkins，Pennsylvania，USA中所述的。

如在此使用的，″药物载体″是药学上可接受的溶剂、悬浮剂或赋形剂，用于将式I或II的化合物给予所述的对象。所述的载体可以是液体或固体并且根据所考虑的给药方式进行选择。每种载体必须是药学上“可接受的”，即与组合物的其它组分相容并且对对象是无害的。

式I或II的化合物可以口服、局部或胃肠外以含常规的无毒药学上可接受的载体、佐剂和赋形剂的剂量单位制剂形式给药，如在此使用的，术语肠胃外包括皮下注射、给予肺或鼻腔的气溶胶、静脉、肌内、鞘内、颅内、注射或输液方法。

本发明还提供合适的局部、口服和肠胃外药物制剂，供本发明新的治疗方法中使用。本发明的化合物可以以片剂、含水或含油悬浮液、糖锭、锭剂、粉剂、粒剂、乳剂、胶囊、糖浆剂或酏剂的形式口服给药。口服组合物可以含有一种或多种选自甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的试剂，以便制备药学上精致的和可口的制剂。合适的甜味剂包括蔗糖、乳糖、葡萄糖、阿司帕坦或糖精。合适的崩解剂包括玉米淀粉、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、黄原胶、膨润土、褐藻酸或琼脂。合适的调味剂包括薄荷油、冬青油、樱桃、甜橙或覆盆子调味剂。合适的防腐剂包括苯甲酸钠、维生素E、α生育酚、抗坏血酸、羟苯甲酸甲酯、对羟苯甲酸丙酯或亚硫酸氢钠。合适的润滑剂包括硬脂酸镁、硬脂酸、油酸钠、氯化钠或滑石粉。合适的延时剂包括单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。所述的片剂含有与无毒药学上可接受的适合于制备片剂的赋形剂混合的活性成分。

这些赋形剂例如可以是，(1)惰性稀释剂，例如碳酸钙、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；(2)造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或褐藻酸；(3)粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；以及(4)润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。这些片剂可以是未包衣的或者用已知技术进行包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收，并因此在较长时间内提供持续作用。例如，可以使用延时材料例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。还可以使用在美国专利4,256,108；4,160,452和4,265,874中所述的技术进行包衣，以形成用于控制释放的渗透性治疗片剂。

对于体内应用来说，式I或II的化合物以及在本发明发明中使用的药学活性剂可以通过胃肠外注射给药或通过随时间独立或一起逐渐灌注给药。给药可以是静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、皮下、腔内、经皮或例如通过渗透泵输注。对于体外研究来说，可以将药剂加入或溶于一种合适的生物学上可接受的缓冲液中，然后将其加入到细胞或组织中。

肠胃外给药制剂包括无菌水或非水溶液、悬浮液以及乳浊液。非水溶剂的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油例如橄榄油、以及可注射有机酯例如油酸乙酯。含水载体包括水，醇/水溶液、乳浊液或悬浮液，包括盐水和缓冲培养基。肠胃外赋形剂包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠，乳酸林格氏静脉内赋形剂包括液体和营养素补充剂、电解质补充剂(例如基于林格氏葡萄糖的那些)等等。还可能存在防腐剂以及其它添加剂，例如抗菌剂、抗氧化剂、螯合剂、生长因子和惰性气体等等。

一般地，在此使用的术语″治疗″是指作用于对象、组织或细胞，以获得一种所需的药理学和/或生理学作用。该作用可以是预防性的，用来完全或部分预防一种疾病或其病征或症状，和/或可以是治疗性的，用来部分或完成治疗一种疾病。如在此所使用的″治疗″包括对脊椎动物、哺乳动物特别是人的疾病进行任何治疗或预防，并且包括：(a)预防易感染疾病但还没有被诊断患有该疾病的对象发生该疾病；(b)抑制该疾病，即阻止它的发展；或(c)减轻或改善该疾病的影响，即引起该疾病影响的衰退。

本发明包括各种用于改善疾病的药物组合物。根据本发明一种实施方案的药物组合物通过使用载体、赋形剂和添加剂或助剂，将式I或II的化合物或其类似物、衍生物或盐，或者将式I或II化合物与一种或多种药学活性剂的混合物制备成适合对象给药的形式。通常使用的载体或助剂包括碳酸镁、二氧化钛、乳糖、甘露糖醇以及其它糖、滑石粉、乳蛋白、明胶、淀粉、维生素、纤维素及其衍生物、动植物油、聚乙二醇及溶剂例如无菌水、醇、甘油和多元醇。静脉内赋形剂包括液体和营养素补充剂。防腐剂包括抗菌剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体。其它药学上可接受的载体包括如Remington's Pharmaceutical Sciences，20th ed.Williams and Wilkins(2000)和The British National Formulary 43rd ed.(British Medical Associationand Royal Pharmaceutical Society of Great Britain，2002；http：//bnf.rhn.net)中所述的水溶液，无毒赋形剂，包括盐，防腐剂，缓冲液等等，其内容在此整个引入作为参考。药物组合物的pH值和各组分的准确浓度根据本领域熟练技术人员已知的常规方法进行调节。参见Goodman和Gilman的ThePharmacological Basis for Therapeutics(7th ed.，1985)。

优选以剂量单位的形式制备和给予所述的药物组合物。固体剂量单位可以是片剂、胶囊和栓剂。对于对象的治疗，根据化合物的活性、给药方式、疾病的性质和严重程度以及对象的年龄和体重，可以使用不同的日剂量。但是，在某些情况下，更高或更低的日剂量也许是合适的。日剂量的给药可以通过两种方式进行：以单个剂量单位的形式单一给药，或者在特定时间间隔给予若干较小剂量单位和多次给予分剂量。

可以以治疗有效剂量局部或全身给予本发明的药物组合物。当然，有效剂量将取决于疾病的严重程度和对象的体重和一般情况。典型地，体外用剂量可以给药物组合物的原位给药用量提供有用的指导，并且可以使用动物模型来确定治疗细胞毒性副作用的有效剂量。各种考虑事项例如描述在Langer，Science，249：1527，(1990)中。口服制剂可以以硬胶囊的形式使用，其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合在一起。它们还可以以软胶囊的形式使用，其中活性成分与水或油介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合在一起。

水混悬液通常含有与适于制备水混悬液的赋形剂混合在一起的活性物质。这些赋形剂可以是(1)悬浮剂例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶；(2)分散剂或润湿剂其可以是(a)天然存在的磷脂例如卵磷脂；(b)环氧烷与脂肪酸的缩合产物例如聚氧乙烯硬脂酸酯；(c)环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物，例如十七乙烯氧基鲸蜡基(heptadecaethylenoxycetanol)；(d)环氧乙烷与来源于脂肪酸和己糖醇的偏酯形成的缩合产物例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯，或(e)环氧乙烷与来源于脂肪酸和己糖醇酸酐形成的缩合产物，例如聚氧乙烯去水山梨糖醇单油酸酯。

所述的药物组合物可以以无菌可注射含水悬浮液或含油悬浮液的形式存在。可以根据已知的方法使用合适的分散剂或润湿剂以及上述悬浮剂配制这种悬浮液。无菌可注射制剂还可以是在无毒胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。在可接受的赋形剂和溶剂当中，可以使用的是水、林格溶液以及等渗氯化钠溶液。此外，无菌固定油通常用作溶剂或悬浮介质。为此，可以使用任何温和的固定油包括合成的甘油一酯和甘油二酯。此外，可以在可注射的制剂中使用脂肪酸例如油酸。

式I或II化合物还可以以脂质体递药系统(liposome delivery systems)的形式给予，例如小型单层水泡(vesicles)、大型单层水泡和多层水泡。脂质体可以由各种磷脂制备，例如胆固醇、硬脂酰胺或卵磷脂。

式I或II的化合物还可以作为兽用组合物使用，兽用组合物例如可以通过本领域常规方法进行制备。这些兽用组合物的例子包括：

(a)口服给药，外用，例如灌服(例如水溶液或非水溶液或悬浮液)；片剂或丸剂；粉剂、粒剂或与饲料掺合在一起的小药丸；用于舌头的糊剂；

(b)肠胃外给药例如以无菌溶液或悬浮液的形式进行皮下、肌内或静脉内注射；或者(合适时)通过乳房内注射，其中通过乳头将悬浮液或溶液引入到乳房中。

(c)局部施用，例如以乳剂、膏剂或喷雾剂的形式施加到皮肤上；或者

(d)阴道内，例如以阴道栓剂、乳剂或泡沫的形式施用。

本发明式I或II化合物的剂量水平为约0.5mg-约20mg每公斤体重的数量级，优选的剂量范围在约0.5mg-约10mg每公斤体重每天之间(约0.5gms-约3gms每位对象每天)。可以与赋形剂或载体材料混合制备单一剂型的活性成分的数量将随所治疗的主体和具体的给药方式而改变。例如，人口服制剂可以含有约5mg-1g的活性化合物以及合适和方便数量的载体物质，其中载体物质可以占总组合物的约5-95％。剂量单位形式通常含有约5mg-500mg的活性成分。

任选地，本发明的化合物以分剂量给药方案给予，这样在整个给药方案中至少存在两次给药。给药优选至少每两小时多至每四小时或更长时间给予；例如可以每一小时或每半小时给予化合物。在一种优选实施方案中，分剂量给药方案包括在第一次给药后足够长的时间间隔后(第一次给药后血液中活性化合物的浓度降为高峰时的约5-30％)第二次给予本发明的化合物，这样在血液中保持有效剂的有效含量。任选地，在前次给药的相应时间间隔后，进行一次或多次给药，优选当血浆浓度降至峰值的约10-50％时再次给药。

然而，可以理解，任何特定对象的特定剂量水平将取决于各种因素包括所使用具体化合物的活性、对象的年龄、体重、一般健康、性别、饮食、给药时间、给药途径、排泄速度、药物联用以及所治疗具体疾病的严重程度。

附图的简要说明

图1是所研究对象的流程图；

图2表示从基线开始随时间的认知能力的平均变化(+SE)(用ADAS-cog评价)在(A)CQ对安慰剂的两组中和(B)根据严重程度将治疗组再分为[较少严重受影响组(ADAS-cog＜25)，更严重受影响组(ADAS-cog≥25)(^*p≤0.05；^**p≤0.01)的曲线图；

图3表示从基线开始随时间的血浆中Aβ水平的平均变化(±SE)在(A)CQ对安慰剂组以及(B)根据严重程度再分(^***p≤0.001)的曲线图；

图4表示在CQ对安慰剂的两组中从基线开始随时间的(A)血浆中Zn(B)血浆中Cu的平均变化(±SE)的曲线图；以及

图5表示在AD过程内行为(ADAS-cog)和生化(血浆/CSF Aβ)水平的相对变化曲线图。

实施例

通过参考下面非限制性实施例，将对本发明进行详细描述。

(1)8-羟基-喹喔啉和8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮的制备

8-羟基-喹喔啉和8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮)可以通过文献中已知的方法进行制备。例如，合适取代的1，2-苯二胺与1，2-二羰基化合物例如丙酮醛进行缩合，得到一系列2-或3-取代的8-羟基喹喔啉(例如参见：Abe及其同事，J.Med Chem.，1998，41，4062)(方案1)。这些化合物的另一种合成方法是：通过1，2-苯二胺与环氧化物在铋(0)存在下进行缩合反应，这种合成方法表示在方案2中(参见Antoniotti及同事，Tetrahedron Letters，2002，4，3971)。使用已知方法可以对2-和/或3-位进行进一步修饰。

方案1

方案2

8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮本身可以根据一种文献方法进行制备(参见Iyer和Dhar，J.Sci.Ind.Res.，1956，15C，1)。8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮的衍生物可以由文献中已知的许多方法合成。3H-喹唑啉-4-酮衍生物的最常见合成方法之一是通过取代的2-氨基苯甲酰胺进行合成。所述的2-氨基苯甲酰胺可以通过两种不同的方法得到(方案3)。例如，首先将2-硝基苯甲酸3A转化为相应的邻氨基苯甲酸3B。在胺和活化剂例如CDI存在下，由3B转化为2-氨基苯甲酰胺3C(路径A)。或者，首先在CDI存在下3A和胺可以转化为2-硝基苯甲酰胺3D。随后对3D进行还原，得到3C(路径B)。

方案3

化合物，4，6-二氯-3-羟基-2-硝基苯甲酸(4F)(方案4)是一种关键的中间体，用来提供一系列8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮，特别是用于合成5，7-二氯-取代的衍生物。因此，根据Golstein和Schaaf(Helv.Chim.Acta，1957，57(23)，132)，将市场上可买到的2，4-二氯苯甲酸(4A)进行硝化，得到2，4-二氯-5-硝基苯甲酸(4B)。然后，化合物4B通过胺4C和乙酰胺4D转化成3-乙酰胺-4，6-二氯-2-硝基苯甲酸(4E)。随后，对4E进行碱性水解，得到2-硝基苯甲酸4F。所有步骤以高收率进行(约90％)。

方案4

根据Golstein和Schaaf，Helv.Chim.Acta，1957，57(23)，132的方法进行制备

上面式4E的中间体是新的，并因此构成本发明的一个部分。在方案4的方法中使用这种新中间体可以获得高的收率并能够进行反应放大。

2-硝基苯甲酸例如化合物4F转化为8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮(5C)的反应流程表示在方案5中。因此，在CDI存在下用一种胺处理化合物4F，生成N-(取代的)苯甲酰胺5A。对硝基进行还原并将所得的胺5B与甲酸/CDI进行偶合，得到所需的N-烷基化的衍生物5C。

方案5

N-烷基化的喹唑啉-4-酮也可以通过方案6中所示的途径进行制备。因此，首先在一种活化剂例如CDI存在下用一种胺对合适取代的2-硝基苯甲酸例如化合物4F进行处理。然后，将由此获得的相应的硝基苯甲酰胺在还原条件下得到氨基苯甲酰胺。随后，用回流的甲酰胺处理氨基苯甲酰胺，得到3H-喹唑啉-4-酮。然后，用一种碱例如NaH对3H-喹唑啉-4-酮进行脱质子化，并用合适的烷基卤进行处理。

方案6

方案7表示2-取代的8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮的合成路线。因此，用亚硫酰氯处理邻氨基苯甲酸例如2-氨基-4，6-二氯-3-羟基苯甲酸，随后所述的酰基氯与氨反应，得到相应的苯甲酰胺。接着，所述的苯甲酰胺用氯乙酰基乙酸处理，得到5，7-二氯-2-氯甲基-8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮(例如参见：Tani及同事，J.Med.Chem.，1979，22，95)。使用标准文献方法，对所述的2-氯甲基衍生物进行进一步修饰，可以获得一系列2-取代的-甲基衍生物，例如2-(甲基氨基)甲基衍生物。使用先前所述的条件，对这些衍生物进行N-烷基化，生成2，3-二取代的衍生物。

方案7

2，3-二取代的-8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮也可以通过方案8中所示的路线进行合成。因此，2-氨基-3N-(取代的)苯甲酰胺用合适的羧酸例如Boc-保护的甘氨酸进行处理。随后用甲醇钠脱水(参见Lee及同事，J.Med.Chem.，1995，38，3547)，生成所需的类似物。

方案8

(2)8-甲氧基-4(3H)-喹唑啉酮、8-羟基-噌啉、5，8-二羟基-喹喔啉、4，5- 二羟基-吩嗪、4，8-二羟基-吩嗪、4-羟基-吖啶和5-羟基-3-甲基-2(1H)- 喹喔啉酮的制备

概述

下列化合物通过文献中所述的方法进行制备：8-甲氧基-4(3H)-喹唑啉酮(3)⁵，8-羟基-噌啉(C1)²，5，8-二羟基-喹喔啉(B39)¹，4，5-二羟基-吩嗪(F5)³，4，8-二羟基-吩嗪(F2)³，4-羟基-吖啶(E1)⁴和5-羟基-3-甲基-2(1H)-喹唑啉酮(B12)¹⁹。下列化合物来源于商业上：8-羟基-喹唑啉(A1)，4-羟基-吩嗪(F1)，4，10-菲咯啉-5-酚(D2)，4，7-菲咯啉-5，6-二酚(D3)和8-羟基-2-甲基-4(3H)-喹唑啉酮(1)。胺：乙胺、组胺、2-(2-氨基乙基)吡啶、2-(2-甲基氨基乙基)吡啶；醛：4-咪唑甲醛、2-噻唑甲醛和2-吡啶甲醛，唑：吡唑、咪唑、甲基咪唑和1H-1，2，3-三唑，硼酸：苯基硼酸、2-(三氟甲基)苯基硼酸、2-甲氧基苯基硼酸、o-甲苯基硼酸、2-氟苯基硼酸、3-甲氧基苯基硼酸、4-甲氧基苯基硼酸、m-甲苯基硼酸、3，5-二氟苯基硼酸、2，4-二-氟苯基硼酸、3-噻吩硼酸、3-氟苯基硼酸和4-氟苯基硼酸；以及有机锌试剂：2-吡啶基溴化锌、2-(甲硫基)苯基碘化锌、2-(乙氧羰基)苯基碘化锌和6-甲基吡啶基溴化锌(在THF中的0.5M的溶液)是市场上可买到的(Aldrich)。3-吡啶基硼酸从Frontier Scientific处购得。2-氨基甲基噻唑根据文献制得¹³。溶剂是分析级的并且按照提供时的情况使用。THF在氩气下用钠和二苯甲酮进行蒸馏。除非另有说明，¹H NMR光谱(δ，相对于TMS)在Varian Unity 300光谱仪上记录；J-值以赫兹给出。质谱数据在Micromass Quattro II质谱仪上记录。

6类化合物的衍生物：8-羟基-喹唑啉、8-羟基-喹喔啉、8-羟基-噌啉、4，7(4，10)-菲咯啉-5-酚、4-羟基-吖啶和6-羟基-吩嗪的合成分别描述在A、B、C、D、E和F部分中。

A部分：8-羟基-喹唑啉衍生物A2-A138的合成

一系列8-羟基-喹唑啉衍生物的制备概括在图A1-A5中。

类型A                   类型B                类型C

类型D                                       类型E                  类型F

图A1

图A2

图A3

图A4

图A5

DER：通过在2-(氯/氰基)位置的取代的

衍生物给予需要的对象，显示在

图A1-A4中。5-位也经氯取代

(如此图所示)

4-氯-8-羟基-2-甲基-喹唑啉(A2)的制备(方案A1)

方案A1

将8-羟基-2-甲基-4(3H)-喹唑啉酮(0.01mol)和三氯氧磷(10mL)在回流下加热30分钟。在减压下除去过量三氯氧磷，将残余物加入到冰(50g)和水(50ml)的混合物中，然后将pH值调节至6(氨水)。过滤分离4-氯-8-羟基-2-甲基-喹唑啉(A2)。

8-羟基-2-甲基-喹唑啉(A3)的制备(方案A1)

4-氯-8-羟基-2-甲基-喹唑啉(0.01mol)用氢碘酸(100mL；使用前用红磷蒸馏)根据文献⁶所述方法进行处理。这样得到固体形式的8-羟基-2-甲基-喹唑啉(A3)。

8-羟基-喹唑啉-2-甲醛(2)的制备(方案A2)

方案A2

在3h内，在50℃下，将8-羟基-2-甲基-喹唑啉(A3)(5mmol)在二噁烷(10mL)中的溶液滴加到搅拌下的SeO₂(8.8mmol)在二噁烷(30mL)中的混合物中。然后，所得混合物在80℃下加热16h，将其冷却，滤出固体。浓缩滤液，通过硅胶柱色谱(二氯甲烷/MeOH，40∶1)提纯。这样得到固体形式的8-羟基-喹唑啉-2-甲醛(2)。

2-[烷基氨基-甲基]-8-羟基-喹喔啉(A4-A7)的制备

(方案A2)

将乙酰氧基硼氢化钠(1mmol)加入到搅拌下的8-羟基-喹喔啉-2-甲醛(1mmol)和乙胺(1mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中。混合物在RT下搅拌16h，中和(NaHCO₃水溶液)，接着浓缩。残余物经硅胶柱色谱提纯后得到A4。

以类似的方式，用胺：组胺对2进行还原性胺化，得到A5，2-(2-氨基乙基)吡啶得到A6，2-(2-甲基氨基乙基)吡啶得到A7。

8-羟基-喹唑啉-2-甲醛肟(A8-A9)的制备(方案A3)

方案A3

将8-羟基-喹唑啉-2-甲醛(2)(1mmol)、NaOAc(2mmol)、盐酸羟胺(1.5mmol)和水(10mL)的混合物在100℃下加热15分钟。过滤分离沉淀。这样得到固体形式的8-羟基-喹唑啉-2-甲醛肟(A8)。

重复使用2与甲氧基胺盐酸盐在吡啶中反应，得到A9。

8-羟基-2-甲基氨基-喹唑啉(A10)的制备(方案A4)

方案A4

将2-羧酸肟(1mmol)在MeOH(20mL)中的溶液在氢解条件下(大气压的H₂，10％Pd/C)处理16h。滤出固体，浓缩滤液，得到8-羟基-2-甲氨基-喹唑啉(A10)。

4，8-二甲氧基-喹唑啉-2-羧酸(A11)的制备(方案A5)

方案A5

向搅拌下的8-甲氧基-4(3H)-喹唑啉酮⁵(3)(0.05mol)和THF(100mL)的混合物中加入碘甲烷(0.1mol)、四丁基溴化铵(100mg)和NaOH水溶液(由7.55g NaOH在20mL H₂O中制得)。在40℃下16小时后，浓缩混合物，剩余的残余物在H₂O和二氯甲烷(1∶1，200mL)之间进行分配。有机层用盐水洗涤，干燥并浓缩。柱色谱提纯得到4，8-二甲氧基-喹唑啉(4)。

在0℃下，在10分钟内，分批向搅拌下的4(40mmol)在CHCl₃(200mL)中的溶液中加入m-氯过苯甲酸(44mmol)。在0℃下再经过30分钟后，在30分钟内将混合物温热至RT，然后浓缩至干。向剩余的残余物中加入乙酸乙酯和1N的NaHCO₃(1∶1，200mL)；分离层，有机层干燥(Na₂SO₄)并浓缩。这样得到N-氧化物5。

将5(30mmol)、苯(80mL)和硫酸二甲酯(35mmol)的混合物在回流下搅拌16h，将其冷却，并在真空中进行浓缩。在0℃下，向在H₂O(100mL)中的剩余残余物中加入NaCN(90mmol)。3h后，将反应混合物中和(HOAc)接着用二氯甲烷萃取，合并萃取液并干燥。除去溶剂，得到2-氰基-化合物6。

将6(20mmol)和NaOH(40mmol)在H₂O(20mL)中的混合物在100℃加热4h，接着冷却。将溶液的pH调节到4(冰HOAc)，用乙酸乙酯(50mLx4)萃取混合物。合并的萃取液干燥，接着除去挥发物。这样得到固体形式的4，8-二甲氧基-喹唑啉-2-羧酸。随后，用BBr₃脱-O-甲基化，得到4，8-二羟基-喹唑啉-2-羧酸(A11)。

4，8-二羟基-喹唑啉-2-羧酸酰胺(A12-A17)的制备(方案A5)

将1，3-二环己基碳二亚胺(1mmol)加入到搅拌下的1-羟基苯并三唑水合物(1mmol)和4，8-二羟基-喹唑啉-2-羧酸(A11)(1mmol)在DMF和二氯甲烷(1∶1，10mL)中的溶液中。30分钟后，加入组胺(1mmol)，混合物在RT下再搅拌16h。然后，在真空中除去挥发物，剩余的残余物经硅胶柱色谱(乙酸乙酯/异丙醇2N NH₄OH，6∶2∶1)提纯后得到4，8-二羟基-喹唑啉-2-羧酸[2-(1H-咪唑-4-基)-乙基-酰胺(A12)。

使用胺和A11：2-(2-氨乙基)吡啶重复以上反应，得到A13，2-(氨基甲基)吡啶得到A14，2-氨基噻唑得到A15，2-氨基苯酚得到A16，1，2-苯二胺得到A17。

8-羟基-喹唑啉-2-羧酸酰胺(A18-A23)的制备(方案5)

将4-羟基-化合物(A12)(1.2mmol)和三氯氧磷(4mL)在回流下加热15分钟，接着将其冷却。加入冰(50g)，混合物用氨水碱化。用二氯甲烷(20mLx3)萃取混合物，合并萃取液，干燥并浓缩。这样得到相应的4-氯-化合物7。

在50℃下，在10分钟内，向搅拌下的p-甲苯磺酰肼(Aldrich，2mmol)在CHCl₃(10mL)中的混合物中分批加入4-氯-化合物7(1mmol)。16h后，过滤分离，用H₂O洗涤，接着干燥。这样得到4-N’-(p-甲苯磺酰肼基)-化合物21。

在95℃下，将4-N’-(p-甲苯磺酰肼基)-化合物21(0.8mmol)加入到Na₂CO₃(10mmol)和H₂O(10mL)中，混合物在回流下加热15分钟，冷却，过滤，滤液用CHCl₃萃取。合并萃取液，干燥。随后除去挥发物，得到8-羟基-喹唑啉-2-羧酸酰胺(A18)。

以类似的方式，将其余的4(3H)-喹唑啉酮A13-A17转化为8-羟基-喹唑啉-2-羧酸酰胺(A19-A23)。

4-芳基(或杂环基)-8-羟基-2-甲基-喹喔啉(A24-A37)的制备(方案A6)

方案A6

将2-溴丙烷(9mmol)加入到搅拌下的4-氯-8-羟基-2-甲基-喹唑啉(A2)(6mmol)、K₂CO₃(24mmol)和DMSO(20mL)的混合物中。在RT下16h后，加入饱和NH₄Cl(20mL)，用二氯甲烷(20mLx3)萃取混合物。合并萃取液，并浓缩。将乙醚(100mL)加入到该残余物中，然后将所得混合物依次用2NNaOH、H₂O和盐水洗涤，接着干燥(Na₂SO₄)。除去溶剂，得到固体形式的4-氯-8-异丙氧基-2-甲基-喹唑啉(35)。

在氩气氛中，向搅拌下的4-氯-8-异丙氧基-2-甲基-喹唑啉(35)(0.58mmol)、苯基硼酸(0.62mmol)、2N Na₂CO₃(7.2mL)、EtOH(1.2mL)和苯(6mL)的混合物中加入Pd(PPh₃)₄(20mg)。混合物在回流下搅拌16h，冷却，接着浓缩。随后进行柱色谱(乙酸乙酯/己烷)提纯，得到固体形式的8-异丙氧基-2-甲基-4-苯基-喹唑啉(36)。

在-78℃下，向搅拌下的8-异丙氧基-2-甲基-4-苯基-喹唑啉(36)(0.34mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中加入BCl₃(1.36mL在二氯甲烷中的1M溶液)。将反应混合物温热至RT(2h内)，接着再搅拌2h。加入MeOH(5mL)，然后将混合物浓缩至干。该过程重复四次。用乙醚(2mLx3)再次洗涤剩余的残余物，得到8-羟基-2-甲基-4-苯基-喹唑啉(A24)。

以类似的方式，用下列硼酸处理4-氯-8-异丙氧基-2-甲基-喹唑啉(35)：2-(三氟甲基)苯基硼酸、2-甲氧基苯基硼酸、o-甲苯基硼酸、2-氟苯基硼酸、3-甲氧基苯基硼酸、4-甲氧基苯基硼酸、m-甲苯基硼酸、3，5-二氟苯基硼酸、2，4-二氟苯基硼酸、3-噻吩硼酸、3-氟苯基硼酸、4-氟苯基硼酸和3-吡啶基硼酸；接着用BCl₃进行异丙氧基裂解，得到4-芳基(或杂环基)-8-羟基-2-甲基-喹唑啉(A25-A37)。

4-芳基(或杂环基)-8-羟基-喹唑啉(A38-A51)的制备(方案A7)

方案A7

使用先前在实施例9中所述的方法，由8-甲氧基-4(3H)-喹唑啉酮⁵(3)(10mmol)和三氯氧磷得到4-氯-8-甲氧基-喹唑啉50。如实施例9所示用苯基硼酸处理4-氯化物50，用BBr₃脱-O-甲基化后，得到4-苯基衍生物A38。使用一系列硼酸重复50的偶联反应：2-(三氟甲基)苯基硼酸、2-甲氧基苯基硼酸、o-甲苯基硼酸、2-氟苯基硼酸、3-甲氧基苯基硼酸、4-甲氧基苯基硼酸、m-甲苯基硼酸、3，5-二氟苯基硼酸、2，4-二氟苯基硼酸、3-噻吩硼酸、3-氟苯基硼酸、4-氟苯基硼酸和3-吡啶基硼酸，得到51-64；随后用BBr₃对所述甲醚进行裂解，得到4-芳基(或杂环基)-8-羟基-喹唑啉A39-A51。

5-氯-8-羟基-喹唑啉(A52)的制备(方案A8)

方案A8

将氯(12mmol)加入到搅拌下的8-羟基-喹唑啉(A1)(10mmol)在93％H₂SO₄中的溶液中，接着进行之前公开的方法⁷。3h后，加入冰(100g)和H₂O(100mL)，混合物用氨水碱化，用二氯甲烷萃取，接着将萃取物干燥。除去溶剂，得到5-氯-化合物A52。

5-氯-8-羟基-7-碘代-喹唑啉(A53)的制备(方案A8)

将5-氯-8-羟基-喹唑啉(10mmol)加入到搅拌下的ICl(12mmol)在浓HCl(10mL)中的溶液中⁸。5分钟后，过滤分离沉淀，依次用H₂O、饱和硫代硫酸钠和H₂O洗涤，然后干燥。这样得到固体形式的5-氯-8-羟基-7-碘代-喹唑啉(A53)。

7-芳基(或杂环基)-5-氯-8-羟基-喹唑啉(A54-A67)的制备(方案A8)

使用2-溴丙烷根据实施例9所述的方法将8-羟基-化合物A53转化为相应的异丙醚65。

根据实施例9所述的方法，用下面的一系列硼酸处理5-氯-7-碘代-8-异丙氧基-喹唑啉(65)：苯基硼酸、2-(三氟甲基)苯基硼酸、2-甲氧基苯基硼酸、o-甲苯基硼酸、2-氟苯基硼酸、3-甲氧基苯基硼酸、4-甲氧基苯基硼酸、m-甲苯基硼酸、3，5-二氟苯基硼酸、2，4-二氟苯基硼酸、3-噻吩硼酸、3-氟苯基硼酸、4-氟苯基硼酸和3-吡啶基硼酸，得到66-79；随后，用BCl₃进行8-异丙氧基的裂解，得到A54-A79。

7-氯-8-羟基-喹唑啉(A69)的制备(方案A9)

方案A9

将8-羟基-喹唑啉(A1)(0.1mol)和浓硫酸(50mL)在100℃下加热5h，接着将其冷却。然后，将所述溶液小心地加入到300mL冷H₂O中。过滤分离所得沉淀，用H₂O洗涤，接着干燥。这样得到固体形式的5-磺酸A68。

向搅拌下的5-磺酸A68(0.09mol)和H₂O(225mL)的混合物中加入KOH(0.25mol)和NaOCl(230mL含10-13％有效氯的溶液)⁹。在RT下1.5h后，所述溶液通过Amberlite IR-(H⁺)树脂柱。流出物浓缩至20mL。然后，加入丙酮(20mL)，过滤分离沉淀。随后，用丙酮洗涤，干燥，得到7-氯-8-羟基-喹唑啉(A69)。

7-氯-8-羟基-5-碘代-喹唑啉(A70)的制备(方案A9)

在30分钟内，向7-氯-8-羟基-喹唑啉(A69)(0.1mol)和乙酸钾(0.15mol)在MeOH和H₂O(19∶1，250mL)中的溶液中加入碘(0.095mol)在MeOH和H₂O(19∶1，350mL)中的溶液。然后，所得混合物在回流下加热15分钟，冷却，接着加入H₂O(400mL)。过滤分离沉淀，用饱和硫代硫酸钠和H₂O洗涤，接着干燥。这样得到固体形式的7-氯-8-羟基-5-碘代-喹唑啉(A70)。

4-芳基(或杂环基)-7-氯-8-羟基-喹唑啉(A71-A84)的制备(方案A10)

方案A10

根据实施例9所述的方法，用下面的一系列硼酸处理5-氯-7-碘代-8-异丙氧基-喹唑啉(80)：苯基硼酸、2-(三氟甲基)苯基硼酸、2-甲氧基苯基硼酸、o-甲苯基硼酸、2-氟苯基硼酸、3-甲氧基苯基硼酸、4-甲氧基苯基硼酸、m-甲苯基硼酸、3，5-二氟苯基硼酸、2，4-二氟苯基硼酸、3-噻吩硼酸、3-氟苯基硼酸、4-氟苯基硼酸和3-吡啶基硼酸，得到81-94；随后，用BCl₃裂解8-异丙氧基，得到A71-A84。

2-氯-4，8-二甲氧基-喹喔啉(96)的制备(方案A11)

方案A11

将Ac₂O(6mL)加入到搅拌下的N-氧化物5(10mmol)和二氯甲烷(10mL)的混合物中。然后，在真空中除去溶剂，所得溶液在回流下加热1h，冷却，浓缩。剩余的残余物用乙醚(10mLx2)洗涤。这样得到固体形式的4，8-二甲氧基-(1H)-喹唑啉酮(95)。

根据实施例8，用三氯氧磷(20mL)处理4，8-二甲氧基-2(1H)-喹唑啉酮(95)(5mmol)并进行标准的后处理，得到2-氯化物96。

2-芳基(或杂环基)-4，8-二羟基-喹唑啉(A85-A98)的制备(方案A12)

方案A12

根据先前实施例9所述的方法，2-氯化物96(0.1mmol)与下列硼酸进行偶联：苯基硼酸、2-(三氟甲基)苯基硼酸、2-甲氧基苯基硼酸、o-甲苯基硼酸、2-氟苯基硼酸、3-甲氧基苯基硼酸、4-甲氧基苯基硼酸、m-甲苯基硼酸、3，5-二氟苯基硼酸、2，4-二氟苯基硼酸、3-噻吩硼酸、3-氟苯基硼酸、4-氟苯基硼酸和3-吡啶基硼酸，得到97-110；随后，用BBr₃裂解8-O-甲醚，得到A85-A98。

2-芳基(或杂环基)-8-羟基-喹唑啉的制备(方案A12)

根据先前实施例6所述的方法，依次用三氯氧磷、p-甲苯磺酰肼和Na₂CO₃处理4-羟基-化合物A85-A98，得到2-芳基(或杂环基)-8-羟基-喹唑啉A99-A112。

2-氯-8-甲氧基-喹唑啉(113)的制备(方案A13)

方案A13

根据先前实施例6所述的方法，由8-羟基-喹唑啉(A1)(20mmol)和碘甲烷得到8-甲氧基-喹唑啉(111)。然后，8-甲氧基-喹唑啉(111)(10mmol)用m-氯过苯甲酸处理，得到N-氧化物112。根据实施例14的方法，依次用Ac₂O和三氯氧磷处理N-氧化物112，得到2-氯-8-甲氧基-喹唑啉(113)。

2-[(N’-甲基)-杂环基]-8-羟基-喹唑啉(A113-A116)的制备(方案A13)

向2-氯-8-甲氧基-喹唑啉(113)(10mmol)在吡啶(10mL)中的溶液中加入甲胺盐酸盐(Aldrich，15mmol)。在RT下16h后，混合物在真空中进行浓缩。随后对残余物进行柱色谱提纯，得到2-(N’-甲基)-化合物114。

根据文献中所述的方法¹¹，在[Pd₂(dba)₃]和DPPP存在下，用2-溴吡啶(1.2mmol)对114(1mmol)进行胺化，得到8-甲氧基-2-[(N’-吡啶基)甲基]-喹唑啉(115)。随后，用BBr₃处理115(实施例6)，得到8-羟基-喹唑啉衍生物A113。

使用一系列2-溴-取代的杂环化合物对114重复进行胺化：2-溴噻唑、4-溴-1H-咪唑和4-溴-1-甲基咪唑，得到116-118；随后用BBr₃裂解O-甲醚，得到A114-A116。

5，7-二氨基-8-羟基-喹唑啉(A117)的制备(方案A14)

方案A14

保持温度在30℃下，向8-羟基-喹唑啉(A1)(0.05mol)在乙酸(175mL)中的溶液中加入硝酸(0.16mol)在乙酸(25mL)中的溶液。2h后，过滤分离5，7-二硝基-化合物119，用H₂O洗涤，接着干燥。

在氧化铂存在下，在MeOH(200mL)中对5，7-二硝基-化合物119(0.045mol)进行氢解，过滤除去固体并浓缩，得到5，7-二氨基-8-羟基-喹唑啉(A117)。

5，7-二酰基氨基-8-羟基-喹唑啉(A118-A119)的制备(方案A14)

乙酸(2mmol)和CDI(2.2mmol)在回流下在干燥THF(10mL)中加热1h。加入5，7-二氨基-8-羟基-喹唑啉(A117)(2mmol)，然后将混合物在回流下加热16h。在真空中除去挥发物，随后将所得残余物进行柱色谱提纯，得到5，7-脱乙酰氨基-8-羟基-喹唑啉(A118)。

以类似的方式，用苯甲酸处理5，7-二氨基-8-羟基-喹唑啉(A117)，得到5，7-二苯甲酰氨基8-羟基-喹唑啉(A119)。

2-乙酰基-4，8-二羟基-喹唑啉(A120)的制备(方案A15)

方案A15

在-15℃下，将溴化甲基镁(1.2mL在乙醚中的3M溶液，3.5mmol)滴加到搅拌下的6(0.6mmol)在乙醚(10，L)中的溶液中。在2h内，将所得溶液温热至RT，接着在RT下再搅拌4h。然后，用饱和NH₄Cl淬灭反应混合物，用乙酸乙酯(10mLx3)萃取，合并萃取液，干燥并浓缩，得到120。

用BBr₃处理120(实施例6)，得到A120。

2-乙酰基-8-羟基-喹唑啉(A21)的制备(方案A15)

依次用三氯氧磷、p-甲苯磺酰肼和Na₂CO₃(实施例6)处理A120，得到A121。

2-S-乙酰基-4，8-二羟基-喹唑啉(A122)的制备(方案A15)

将120(1mmol)和Lawesson’s试剂(0.7mmol)在THF(10mL)中的溶液在回流下加热16h，然后将其冷却。浓缩，随后对残余物进行柱色谱提纯，得到121。用BBr₃处理121(实施例6)，得到A122。

2-S-乙酰基-8-羟基-喹唑啉(A123)的制备(方案A15)

依次用三氯氧磷、p-甲苯磺酰肼和Na₂CO₃(实施例6)处理A122，得到A123。

8-羟基-喹唑啉-2-脲(A124)的制备(方案A16)

方案A16

根据标准的琪琪巴宾反应条件将2-氯化物113转化为胺122。然后，将2-胺122(1mmol)和异氰酸酯(1mmol)在干燥CHCl₃(10mL)中加热回流16h。过滤后，得到脲衍生物123。用BBr₃处理123，得到A124。

8-羟基-喹唑啉-2-硫脲(A125)的制备(方案A16)

将2-脲衍生物123(1mmol)和Lawesson’s试剂(0.7mmol)在THF(10mL)中加热回流16h，将其冷却并浓缩。随后进行硅胶柱色谱提纯，得到124。然后根据实施例6，用BBr₃处理124，得到A125。

2-酰氨基-8-羟基-喹唑啉(A126-A127)的制备(方案A17)

方案A17

2-胺122在标准条件下进行酰化：Ac₂O得到125；苯甲酸酐得到126。用BBr₃(实施例6)对125和126分别进行处理，得到A126和A127。

2-硫代酰氨基-8-羟基-喹喔啉(A128-A129)的制备(方案A17)

根据先前所述的条件(实施例21)，酰氨基化合物125和126分别用Lawesson’s试剂处理，经标准后处理后，得到127和128。然后，用BBr₃裂解O-甲醚，分别得到A128和A129。

2-(酰胺基)-甲基-8-羟基-喹唑啉(A130)的制备(方案A18)

方案A18

使用一系列酸酐对胺A10进行标准酰化，经柱色谱提纯后，得到2-(酰胺基)-甲基衍生物A130。

2-(唑(azole))-8-羟基-喹唑啉(A131-A134)的制备(方案A19)

方案A19

将2-氯化物113(0.5mmol)和吡唑(2.5mmol)的混合物在175℃在钢制高压釜中加热48h。然后，根据实施例6所述的方法，粗产物用BBr₃处理。随后，用柱色谱提纯，得到2-吡唑-1-基-喹唑啉-8-酚(A131)。

使用咪唑、2-甲基咪唑和1H-1，2，3-三唑重复以上方法，得到A132-A134。

2-芳基(或杂环基)-8-羟基-喹唑啉(A135-A138)的制备(方案A20)

方案A20

根据文献¹²的方法，2-氯化物113(5mmol)用在AcCN中的乙酰氯和碘化钠进行处理。标准后处理后，接着进行硅胶柱色谱提纯，得到2-碘代-化合物129。

在RT下，在5分钟内，向搅拌下的129(0.1mmol)和PdCl2(PPh3)2(5mg)在THF(2.5mL)中的溶液中加入2-吡啶基溴化锌(0.37mL的在THF中的0.5M溶液，0.185mmol)。2h后，加入饱和NH₄Cl(5mL)，用二氯甲烷(10mLx3)萃取混合物。合并的萃取液用H₂O和盐水洗涤，干燥并浓缩。随后，用硅胶柱色谱提纯，得到8-甲氧基-2-吡啶-2-基-喹唑啉。根据实施例6的方法裂解8-O-甲醚，得到2-(吡啶-2-基)-8-羟基-喹唑啉(A135)。

使用下面的反应物重复该反应：2-(甲硫基)苯基碘化锌、2-(乙氧羰基)苯基碘化锌和6-甲基吡啶基溴化锌，得到A136-A138。

5-溴-8-羟基-喹唑啉(A139)的制备(方案A21)

方案A21

根据先前由Gerson和McNeil¹⁵所述的方法，用N-溴代琥珀酰亚胺对8-羟基-喹唑啉(A1)进行溴化，得到5-溴-8-羟基-喹唑啉(A139)。

8-羟基-喹唑啉-2-磺酸(2-吡啶-2-基-乙基)-酰胺(A140和A141)的制备

(方案A22)

方案A22

RNH₂：优选乙胺、组胺、2-(2-氨乙基)吡啶、2-(2-甲基氨基乙基)吡啶

2-烷基(或芳基或杂环基)硫烷基-8-羟基-喹唑啉(A142和A143)的制备(方案A23)

方案A23

RBr：优选2-溴吡啶、2-溴噻唑、4-溴-1H-咪唑、4-溴-1-甲基咪唑

对从实施例3中得到的胺(A4-A7)进行还原性胺化，得到A142-A153(方案A24)

方案A24

RCHO：优选4-咪唑甲醛、2-噻唑甲醛、2-吡啶甲醛

5-氟-、7-氟、5，7-二氟、5-氯-7-氟和7-氯-5-氟-喹唑啉(A154-A158)的制备(方案A25)

方案A25

按照文献¹⁸方法，由8-羟基喹啉合成氟化喹唑啉衍生物(A154-A158)。

8-羟基-喹唑啉-7-羧酸酰胺(A160)的制备(方案A26)

方案A26

按照文献方法²⁰，对于8-羟基喹啉的羧化，将8-羟基-喹唑啉(A1)转化为8-羟基-喹唑啉-2-羧酸(A159)。随后，按照实施例8所述的方法，将A159转化为酰胺A160。

B部分：8-羟基-喹喔啉衍生物的合成

图B1-B4表示8-羟基-喹喔啉衍生物的合成路线。除非另有说明，合成方法类似于先前A部分所述的那些。

图B1

DER：通过2-和3-氯/氰基的取代的衍生物

给予需要的对象，例如NR₁R₂(R₁＝H、烷基；

R₂＝烷基、芳基、杂环)、SR、CONHR、烷基氨基

图B2

DER：通过3-氯/氰基的取代的衍生物给予

需要的对象，例如NR1R2(R1＝H、烷基；

R2＝烷基、芳基、杂环)、SR、CONHR、                       烷基氨基

^*-和卤素取代，优选在5-和/或7-位

图B3

图B4

C部分：8-羟基-噌啉衍生物的合成

图C1和C2表示8-羟基-噌啉衍生物的合成路线。除非另有说明，合成方法类似于先前A部分所述的那些。

图C1

图C2

D部分：4，7(4，10)-菲咯啉-5-酚衍生物的合成

图D1-D4表示4，7(4，10)-菲咯啉-5-酚衍生物的合成路线。除非另有说明，合成方法类似于先前A部分所述的那些。图D1所示反应还可以使用4，7-菲咯啉-5，6-二酚(D3)而不是4，7-菲咯啉-5-酚(D1)作为初始物料。

图D1

图D2

图D3

图D4

4，7-菲咯啉-5-酚(D1)的斯克洛浦(Skraup)合成

将3-羟基-对苯二胺(0.185mol)、甘油(1.17mol)、砷溶液(100mL；由123g五氧化二砷在100mL H₂O中制得)和稀硫酸(400mL；通过将240mL浓硫酸加入到200mL H₂O中制得)的混合物搅拌下加热回流4h，将其冷却，然后用浓氨水碱化。混合物用苯萃取。除去苯，得到4，7-菲咯啉-5-酚(D1)。

E部分：4-羟基-吖啶衍生物的合成

如图E1所示，通过取代的2-卤代苯甲酸与取代的苯胺进行Ullman缩合^4，14，制备4-羟基-吖啶。因此，苯胺本身与2-溴-3-硝基-苯甲酸的缩合得到4-羟基-吖啶(E1)。以一种类似的方式，邻-茴香胺得到4-氨基-5-羟基-吖啶和4，5-二羟基-吖啶。这些吖啶的其它衍生物(图E2)使用先前合成A-D部分化合物所述的类似反应条件进行制备。

图E1

图E2

F部分：4，5(4，8)-二羟基-吩嗪衍生物的合成

化合物，4，5-和4，8-二羟基-吩嗪(F1和F2)根据文献³的方法进行制备。除非另有说明，这些化合物的衍生物的合成，如图F1-F3中所示，按照类似于先前A-E部分所述的那些反应条件。

图F1

图F2

图F3

参考文献

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(3)8-羟基-[1，6]萘啶的制备

使用方案9所述的路线，可以制备一系列7-取代的-8-羟基-[1，6]萘啶(例如参见Anthony及同事，专利WO 02/30931 A2)。因此，通过一系列反应，2，3-吡啶二羧酸很容易转化成8-羟基-[1，6]萘啶-2-羧酸甲酯。然后，例如在Curtius条件下，所述的7-甲酯可以转化成相应的7-氨基化合物。反过来，使用已知方法，氨基官能团可以进一步被修饰。例如，在HCl存在下进行重氮化，得到相应的氯化物。使用已知方法，可以很容易对所述的氯化物进行进一步修饰。

方案9

5，7-二取代的-8-羟基-[1，6]萘啶可以由一种高级中间体例如5，8-二羟基-[1，6]萘啶-7-羧酸甲酯(根据Albert和Hampton，J.Chem.Soc.，1952，4985；Blanco及同事，J.Heterocyclic Chem.，1996，33，361的方法制备)得到。5，8-二羟基-[1，6]萘啶-7-羧酸甲酯与POCl₃或SOCl₂进行氯化反应，得到5-氯-8-羟基-[1，6]萘啶-7-羧酸甲酯。使用已知方法，可以将所述的氯化物修饰为一系列5-取代的-8-羟基-[1，6]萘啶。使用文献方法进一步修饰，得到一系列5，7-二取代的-8-羟基-[1，6]萘啶。

8-羟基-[1，6]萘啶在2-、3-和/或4-位被取代的衍生物可以使用合适取代的2，3-吡啶二羧酸合成。例如，可以将市场上可买到的6-甲基-2，3-吡啶二羧酸转化成8-羟基-2-甲基-[1，6]萘啶-7-羧酸甲酯(方案10)。其它取代的2，3-吡啶二羧酸可以很容易地使用已知方法进行制备(例如参见：Wepplo，美国专利4,460,776)。对8-羟基-2-甲基-[1，6]萘啶进行进一步修饰，得到一系列类似物例如2-(甲氨基)甲基和2-(烷基氨基)甲基衍生物。这些化合物的各种7-取代的衍生物可以由相应的7-甲氧羰基、7-氯或7-氨基化合物使用已知方法进行制备。

方案10

(4)吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-酚、[1，7]萘啶-8-酚、吡啶并[2，3-d]哒嗪-8-酚、

[1，6]萘啶-8-酚、吡啶并[3，4-b]吡嗪-5-酚、吡啶并[3，4-b]吡嗪-8-酚、[1，5] 萘啶-4，8-二酚、[1，5]萘啶-8-酚和吡啶并[4，3-d]嘧啶-8-酚的制备

概述

下列试剂从商业上可以获得：-胺：乙胺、组胺、2-(2-氨乙基)吡啶、2-(2-甲基氨基乙基)吡啶；醛：4-咪唑甲醛、2-噻唑甲醛和2-吡啶甲醛，唑：吡唑、咪唑、甲基咪唑和1H-1，2，3-三唑，硼酸：苯基硼酸、2-(三氟甲基)苯基硼酸、2-甲氧基苯基硼酸、o-甲苯基硼酸、2-氟苯基硼酸、3-甲氧基苯基硼酸、4-甲氧基苯基硼酸、m-甲苯基硼酸、3，5-二氟苯基硼酸、2，4-二氟苯基硼酸、3-噻吩硼酸、3-氟苯基硼酸和4-氟苯基硼酸；以及有机锌试剂：2-吡啶基溴化锌、2-(甲硫基)苯基碘化锌、2-(乙氧羰基)苯基碘化锌和6-甲基吡啶基溴化锌(0.5M溶液，在THF中)(Aldrich)。3-吡啶基硼酸从FrontierScientific处购得，吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-酚从Ambinter，France处购得。2-氨基甲基噻唑根据文献制得¹。溶剂是分析级的并且按照提供时的情况使用。THF在氩气下用钠和二苯甲酮进行蒸馏。除非另有说明，¹H NMR光谱(δ，相对于TMS)在Varian Unity 300光谱仪上记录；J-值以赫兹给出。质谱数据在Micromass Quattro II质谱仪上记录。

描述了化合物的8类衍生物的合成：吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-酚(A)、[1，7]萘啶-8-酚(B)、吡啶并[2，3-d]哒嗪-8-酚(C)、[1，6]萘啶-8-酚(D)、吡啶并[3，4-b]吡嗪-5-酚(E)、吡啶并[3，4-b]吡嗪-8-酚(F)、[1，5]萘啶-4，8-二酚、[1，5]萘啶-8-酚(G)和吡啶并[4，3-d]嘧啶-8-酚(H)。

图A1-A3概括了合成一系列吡啶并[3，2-d]嘧啶-4-酚衍生物所使用的路线。[1，7]萘啶-8-酚衍生物的制备描述在图B1-B2中。化合物B1按照合成相似化合物的文献方法²进行制备。吡啶并[2，3-d]哒嗪-8-酚本身及衍生物C1和C2按照先前由Brzezinski及同事所述的方法³进行合成。在此系列中的其它化合物按照图C1-C4中所概括的路线进行制备。图D1-D2表示合成一系列[1，6]萘啶-8-酚的路线。化合物D1使用Blanco及同事的方法⁴进行合成。在此系列中的其它化合物按照图D1-D2所示的路线进行制备。图E1描述了一系列吡啶并[3，4-b]吡嗪-5-酚衍生物的合成路线。1，2，3-三氨基吡啶与2，3-二羟基-1，4-二噁烷缩合，得到吡啶并[3，4-b]吡嗪-5-酚(E1)，此系列中的母体化合物；使用2，3，4-三氨基吡啶作为初始物质(图F1)的相同反应得到吡啶并[3，4-b]吡嗪-8-酚(F1)。吡啶并[3，4-b]吡嗪-5-酚和吡啶并[3，4-b]吡嗪-8-酚类中的其它衍生物使用图E1和F1所示的路线进行制备。图G1-G2表示一系列[1，5]萘啶-4，8-二酚和[1，5]萘啶-8-酚衍生物的合成路线。化合物G1的合成，母体化合物的前体，[1，5]萘啶-4，8-二酚，按照由Brown和Dewar⁵所述的路线合成。吡啶并[4，3-d]嘧啶-8-酚(H1)按照图H1所示的路线⁴，使用4，5-嘧啶二羧酸作为初始物质进行制备。此类中的其它衍生物使用图H1和H2所示的路线进行制备。

图A1

图A2

图A3

图B1

图B2

图C1

图C2

图C3

图C4

图D1

图D2

图E1

图F1

图G1

图G2

图H1

图H2

DER：其衍生物，通过2-甲基的取代给予需要的对象，例如COOH，CONHR，烷基氨基，烷基胺基，肟，烷基肟

参考文献

1.(a)A.Dondoni，G.Fantin，M.Fogagnolo，A.Medici and P.Pedrini，Synthesis，1987，998-1001.(b)A.Dondoni，F.L.Merchan，P.Merino，I.Rojo andT.Tejero，Synthesis，1996，641-646.

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5.S.B.Brown and M.J.S.Dewar，J.Org.Chem.，1978，43，1331-1337.

(5)8-羟基-6H-[1，6]萘啶-5-酮，4-羟基-4a，8a-二氢-吡喃并[3，2-b]吡 啶 -2-酮，8-羟基-6H[1，6]异萘啶-5-酮，二苯并[a，g]喹嗪-8-酮和4-羟基-1H- 吡啶并[3，2-d]嘧啶-2-酮的制备

概述

下列试剂从商业上可以获得：-胺：乙胺、组胺、2-(2-氨乙基)吡啶、2-(2-甲基氨基乙基)吡啶；醛：4-咪唑甲醛、2-噻唑甲醛和2-吡啶甲醛，唑：吡唑、咪唑、甲基咪唑和1H-1，2，3-三唑，硼酸：苯基硼酸、2-(三氟甲基)苯基硼酸、2-甲氧基苯基硼酸、o-甲苯基硼酸、2-氟苯基硼酸、3-甲氧基苯基硼酸、4-甲氧基苯基硼酸、m-甲苯基硼酸、3，5-二氟苯基硼酸、2，4-二氟苯基硼酸、3-噻吩硼酸、3-氟苯基硼酸和4-氟苯基硼酸；以及有机锌试剂：2-吡啶基溴化锌、2-(甲硫基)苯基碘化锌、2-(乙氧羰基)苯基碘化锌和6-甲基吡啶基溴化锌(0.5M溶液，在THF中)(Aldrich)。3-吡啶基硼酸从FrontierScientific处购得。2-氨基甲基噻唑根据文献⁴制得。溶剂是分析级的并且按照提供时的情况使用。THF在氩气下用钠和二苯甲酮进行蒸馏。除非另有说明，¹H NMR光谱(δ，相对于TMS)在Varian Unity 300光谱仪上记录；J-值以赫兹给出。质谱数据在Micromass Quattro II质谱仪上记录。

描述了化合物的5类衍生物的合成：8-羟基-6H-[1，6]萘啶-5-酮(A)、4-羟基-4a，8a-二氢-吡喃并[3，2-b]吡啶-2-酮(B)、8-羟基-6H-[1，6]萘啶-5-酮(C)、二苯并[a，g]喹嗪-8-酮(D)和4-羟基-1H-吡啶并[3，2-d]嘧啶-2-酮(E)。

3-氨基-皮考林(picolin)-2-乙酯与乙酸酐根据Zhou及同事的方法¹进行缩合，得到8-羟基-6H-[1，6]萘啶-5-酮(A1)。分别用5-氯-3-氨基-皮考林-2-乙酯和6-甲基-3-氨基-皮考林-2-乙酯代替3-氨基-皮考林-2-乙酯，获得相应的2-甲基-和3-氯-8-羟基-6H-[1，6]萘啶-5-酮衍生物。如图A1-A4所示，对这些体系进一步衍生化，得到一系列8-羟基-6H-[1，6]萘啶-5-酮。图B1-B2描述了一系列4-羟基-4a，8a-二氢-吡喃并[3，2-b]吡啶-2-酮的制备。使用Blanco及同事的方法²合成C2，随后酸解，得到8-羟基-6H-[1，6]萘啶-5-酮(C1)。在此系列中的其它化合物按照图C1-C2中所表示的路线进行制备。图D1-D2表示一系列二苯并[a，g]喹嗪-8-酮的制备。关键步骤，涉及环系的结构，按照Colye及同事先前所述的方法³进行。图E1表示制备一系列4-羟基-1(烷基化的)-吡啶并[3，2-d]嘧啶-2-酮衍生物的路线。

图A1

图A2

图A3

图A4

图B1

图B2

图C1

图C2

图D1

图D2

图D3

图E1

参考文献

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(6)9-羟基-吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮的制备

9-羟基吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮本身根据文献方法进行合成(Dennin及同事，J.HeterocyclicChem.，1991，28，1287)。9-羟基吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮的衍生物可以使用已知方法制备(例如参见：Yale及同事，美国专利4,022,897)。例如，市场上可买到的2-氨基-3-羟基吡啶与合适的2-取代的-3-氧代-丙酸乙酯的缩合反应(至于制备方法，例如参见：Marabout及同事，专利FR 2,765,582)生成一种中间体烯胺，该中间体在脱水条件下得到所需的3-取代的-9-羟基吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(方案11)。使用已知报道的方法(例如参见：Smirnov及同事，Chemistry of Heterocyclic Compounds，1992，12，1425)，可以在8-位上进一步修饰。

方案11

方案12表示一些官能化9-羟基吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮的另一种合成路线，其中合适取代的2-氨基-3-羟基吡啶与2-取代的-3-氧代-丙酸乙酯进行缩合。例如，2-氨基-3-氯-3-羟基吡啶(其制备参见Gudmundsson及同事，Synthetic Communications，1997，27(5)，861)和2-(4-氯苯基)-3-氧代-丙酸乙酯，得到8-氯衍生物；后者可以使用已知方法进行进一步修饰。

方案12

(7) 8-羟基-4(3H)-喹唑啉酮、9-羟基嘧啶并[1，6-a]嘧啶-4-酮和9-羟基 吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮的制备

概述

下列化合物/试剂从商业上可以获得：胺：乙胺、组胺、2-(2-氨乙基)吡啶、2-(2-甲基氨基乙基)吡啶；醛：4-咪唑甲醛、2-噻唑甲醛和2-吡啶甲醛，唑：吡唑、咪唑、甲基咪唑和1H-1，2，3-三唑，硼酸：苯基硼酸、2-(三氟甲基)苯基硼酸、2-甲氧基苯基硼酸、o-甲苯基硼酸、2-氟苯基硼酸、3-甲氧基苯基硼酸、4-甲氧基苯基硼酸、m-甲苯基硼酸、3，5-二氟苯基硼酸、2，4-二氟苯基硼酸、3-噻吩硼酸、3-氟苯基硼酸和4-氟苯基硼酸；以及有机锌试剂：

2-吡啶基溴化锌、2-(甲硫基)苯基碘化锌、2-(乙氧羰基)苯基碘化锌和6-甲基吡啶基溴化锌(0.5M溶液，在THF中)(Aldrich)。3-吡啶基硼酸从FrontierScientific处购得。2-氨基甲基噻唑根据文献¹制得。溶剂是分析级的并且按照提供时的情况使用。THF在氩气下用钠和二苯甲酮进行蒸馏。除非另有说明，¹H NMR光谱(δ，相对于TMS)在Varian Unity 300光谱仪上记录；J-值以赫兹给出。质谱数据在Micromass Quattro II质谱仪上记录。

描述了化合物的3类衍生物的合成：8-羟基-4(3H)-喹唑啉酮(A)、9-羟基嘧啶并[1，6-a]嘧啶-4-酮(B)和9-羟基吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(C)。

Iyer及同事的方法²用于化合物A1和A2的合成。使用图A1-A2所示的路线，这些化合物的进一步衍生化，得到一系列8-羟基-4(3H)-喹唑啉酮。8-羟基-4(3H)-喹唑啉酮体系的5-和/或7-位按照先前所述文献³的方法进行卤化。类型B和C中的母体体系(化合物B1和C1)使用先前Dennin及同事所报道的方法⁴合成。B1和C1分别按照图B1-B2和C1-C2所示的路线进一步衍生化。

图A1

图A2

图B1

图B2

图C1

图C2

参考文献

1.(a)A.Dondoni，G.Fantin，M.Fogagnolo，A.Medici and P.Pedrini，Synthesis，1987，998-1001.(b)A.Dondoni，F.L.Merchan，P.Merino，I.Rojo andT.Tejero，Synthesis，1996，641-646.

2.R.N.Iyer，N.Anand and M.L.Dhar，J.Sci.Ind.Res.A，General，1956，15C，1-7.

3.H.Gerson，M.W.McNeil，R.Parmegiani and R.K.Godfrey，J.Med.Chem.，1972，15，987-989，and references cited therein.

4.F.Dennin，D.Blondeau and H.Sliwa，J.Heterocyclic Chem.，1991，28，1287-1291.

概述

下列化合物/试剂从商业上获得：2，4-二氯苯甲醚、2，4-二氯苯甲酸、2，3-吡啶二羧酸、6-甲基-2，3-吡啶二羧酸和2-氨基-3-羟基吡啶(Aldrich)。这些化合物根据文献方法进行制备：由5，8-二羟基-[1，6]萘啶-7-羧酸甲酯制得5-氯-8-羟基-[1，6]萘啶-7-羧酸甲酯(PB 1045)(Albert and Hampton，J.Chem.Soc.，1952，4985；Blanco and coworkers，J.Heterocyclic Chem.，1996，33，361)；9-羟基吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(PB 1048)(Dennin and coworkers，J.HeterocyclicChem.，1991，28，1287)；8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮(PB 1049)(Iyer and Dhar，J.Sci.Ind.Res.，1956，15C，1)。溶剂是分析级的并且直接使用。THF在氩气下用钠和二苯甲酮进行蒸馏。除非另有说明，¹H NMR光谱(δ，相对于TMS)在VarianInova 400光谱仪上记录；J值以赫兹给出；多重性：s＝单峰，d＝双峰，m＝多重峰，sep＝七重峰，t＝三重峰，q＝四重峰。在Micromass Quattro II质谱仪上记录电喷雾质谱数据。

实施例1

(A)6，8-二氯-3-甲基喹喔啉-5-酚(1064)和6，8-二氯-2-甲基喹喔啉-5-酚(1065)

步骤A：6，8-二氯-3-甲基喹喔啉-5-酚和6，8-二氯-2-甲基喹喔啉-5-酚的制备

在60℃下，向搅拌下的2，3-二氨基-4，6-二氯苯甲醚(由2，4-二氯苯甲醚根据Philips’Gloeilampenfabrieken，N.V.(1973)，专利GB 1303711所报道的条件制得)(1.48g，7.15mmol)、2M AcOH(14.2mL)和4M NaOAc溶液(8.8mL)的悬浮液中加入40％的丙酮醛水溶液(1.15mL)。然后，将该混合物在相同温度下再搅拌40分钟。过滤分离沉淀，用H₂O(5mLx2)洗涤。然后，将此固体(1.21g)溶于乙酸乙酯中，通过硅胶短塞过滤该溶液(乙酸乙酯/己烷，1∶3)。这样得到浅桃红色固体形式的6，8-二氯-5-甲氧基-2-甲基喹喔啉和6，8-二氯-5-甲氧基-3-甲基喹喔啉的1∶1的混合物(1.13g)。

向2-甲基-和3-甲基-化合物(2.48g，0.01mol)的混合物在二氯甲烷(30mL)中的冰冷却下的溶液中加入BBr₃(20.1mL在中的1M溶液)。1h后移去冷却浴，将混合物在30℃下搅拌16h。加入MeOH，浓缩溶液。后者过程重复四次以上。向剩余的残余物中加入二氯甲烷(20mL)，将混合物的pH值调节到7(浓NH₄OH)。将有机层干燥，浓缩，通过硅胶短塞过滤(二氯甲烷/MeOH，19∶1)，得到浅黄色固体形式的6，8-二氯-2-甲基喹喔啉-5-酚和6，8-二氯-3-甲基喹喔啉-5-酚的1∶1的混合物(1.51g)。这种混合物的样品用乙醚(3x)萃取。浓缩乙醚萃取物，残余物用异丙醇重结晶，得到黄色针状形式的6，8-二氯-2-甲基-喹喔啉-5-酚。用乙醚萃取后的剩余固体用MeOH洗涤，得到浅桃红色的6，8-二氯-3-甲基-喹喔啉-5-酚。

6，8-二氯-3-甲基喹喔啉-5-酚：¹H NMR(CDCl₃)：δ8.88(s，1H)，8.01(br，1H)，7.79(s，1H)，2.83(s，3H)。

6，8-二氯-2-甲基喹喔啉-5-酚：¹H NMR(CDCl₃)：δ8.68(s，1H)，7.95(br，1H)，7.83(s，1H)，2.87(s，3H)。

步骤B：8-苄氧基-5，7-二氯-2-甲基喹喔啉的制备

将6，8-二氯-3-甲基喹喔啉-5-酚(150mg，0.655mmol)、苄基溴(0.20mL，1.68mmol)、KOH(0.09g)和EtOH(10mL)的混合物加热回流16h，冷却，并浓缩。加入二氯甲烷(20mL)，混合物用H₂O(5mLx2)洗涤，干燥并浓缩。残余物通过硅胶色谱(二氯甲烷/MeOH，1∶0-150∶1)提纯，得到8-苄氧基-5，7-二氯-2-甲基喹喔啉(98mg，47％)。¹H NMR(CDCl₃)：δ8.82(s，1H)，7.81(s，1H)，7.58(m，2H)，7.38(m，2H)，5.45(s，2H)，2.85(s，3H)。

步骤C：8-苄氧基-5，7-二氯喹喔啉-2-甲醛的制备

将从步骤B中得到的2-甲基产物(93mg，0.291mmol)和SeO₂(100mg)在二噁烷(4mL)和H₂O(0.4mL)中悬浮液加热回流3h。冷却混合物，过滤(硅藻土)并浓缩。加入二氯甲烷，过滤除去不溶性物质。蒸发除去溶剂，残余物用硅胶色谱(二氯甲烷)提纯，得到灰白色固体形式的所需的醛(57mg，59％)。

8-苄氧基-5，7-二氯喹喔啉-2-甲醛：¹H NMR(CDCl₃)：δ10.31(s，1H)，9.48(s，1H)，8.06(s，1H)，7.58-7.35(m，5H)，5.55(s，2H)。

(B)6，8-二氯-3-(二甲氨基甲基)喹喔啉-5-酚盐酸盐(1066)

将三乙酰氧基硼氢化钠(50mg，0.236mmol)加入到搅拌下的从步骤C中制得的醛(57mg，0.171mmol)、二甲胺盐酸盐(15.1mg，0.185mmol)和Et₃N(0.023mL)在1，2-二氯乙烷(2mL)中的溶液中。1h后，加入二氯甲烷(20mL)，所得溶液用饱和NaHCO₃溶液(5mLx2)洗涤，干燥并浓缩。残余物通过硅胶色谱(二氯甲烷/MeOH，1∶0-75∶1)提纯，得到浅黄色固体形式的所需的(8-苄氧基-5，7-二氯-喹喔啉-2-基甲基)二甲胺(38mg，61％)。¹HNMR(CDCl₃)：δ9.11(s，1H)，7.84(s，1H)，7.58-7.35(m，5H)，5.47(s，2H)。

(8-苄氧基-5，7-二氯-喹喔啉-2-基甲基)二甲胺(38mg，0.105mmol)在浓HCl(2mL)中的溶液在室温下搅拌16h。所述橙色溶液浓缩至干，剩余的残余物用乙醚(2mlx3)洗涤，得到浅黄色固体形式的所需产物(27mg，83％)。

6，8-二氯-3-(二甲氨基甲基)喹喔啉-5-酚盐酸盐：¹H NMR(DMSO-d₆)：δ8.75(s，1H)，7.78(s，1H)，4.40(br，2H)，2.13(s，6H)；质谱：m/z272，274，276(M⁺+1，100％，66％，11％)。

实施例2

(A)5，7-二氯-3-(4-氟苯基)-8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮(1055)

步骤A：4，6-二氯-3-羟基-2-确基苯甲酸的制备

将氯化锡(II)水合物(50g，0.29mol)加入到2，4-二氯-5-硝基苯甲酸(根据所报道的方法(Golstein，H.and Schaaf，E.，Helv.Chim.Acta，1957，57(23)，132)制备)(10.0g，0.045mol)在EtOH(200mL)中的溶液中。所述的混合物在70℃搅拌0.5h，冷却，接着倒在冰上。将混合物的pH值调节到8(饱和NaHCO₃)。将所述的悬浮液在室温下搅拌5h，再次酸化至pH5(冰HOAc)。所得的白色悬浮液用乙酸乙酯连续萃取，合并萃取液，萃取液用盐水洗涤，干燥，浓缩，得到灰白色固体形式的所需的胺(8.8g，96％)。

5-氨基-2，4-二氯苯甲酸：¹H NMR(CD₃OD)：δ7.30(s，1H)，7.27(s，1H)。

将乙酸酐(27mL)加入到在冰HOAc(150mL)中的5-氨基-2，4-二氯苯甲酸(8.0g，0.041mol)中。所述溶液在室温下搅拌0.5h，浓缩，得到白色固体形式的所需的乙酰胺(9.6g，96％)。

5-乙酰氨基2，4-二氯苯甲酸：¹H NMR(CD₃OD)：δ8.32(s，1H)，7.62(s，1H)，2.19(s，3H)。

在30分钟内，分小批将5-乙酰氨基-2，4-二氯苯甲酸(9.6g，0.039mol)加入到搅拌下的冰冷却的发烟硝酸(1.8mL，0.043mol)和浓硫酸(120mL)的溶液中。加毕后，间隔30分钟和60分钟，加入更多的发烟硝酸(17mL)和浓硫酸(80mL)。然后，将所述的反应混合物在0℃再搅拌2.5h，将其温热至12-16℃，接着在此温度下搅拌直到所有初始物质消耗完毕为止(约3h)。将所述的溶液倒入到冰上，用乙酸乙酯萃取(3x)。合并有机萃取液，用盐水洗涤，干燥，浓缩，得到橙色固体形式的3-乙酰氨基-4，6-二氯-2-硝基苯甲酸(9.8g，86％)。

3-乙酰氨基-4，6-二氯-2-硝基苯甲酸：¹H NMR(CD₃OD)：δ8.01(s，1H)，2.13(s，3H)。

将3-乙酰氨基-4，6-二氯-2-硝基苯甲酸(9.7g，0.033mol)加入到KOH(18.7g，0.034mol)在H₂O(85mL)中的溶液中。所述溶液加热回流18h，然后冷却至室温。加入浓HCl，将pH调节至0。混合物用乙酸乙酯和H₂O稀释，并在室温下搅拌30分钟。分离层；水层用乙酸乙酯萃取(3x)，萃取液与最初的有机层合并，用盐水洗涤，干燥，浓缩，得到暗红色固体形式的4，6-二氯-3-羟基-2-硝基苯甲酸(7.4g，89％)；m.p.188-189℃(lit.m.p.(Linderberg，M.，Hellberg，S.，Bjork，S.et al，Eur.J.Med.Chem.，1999，34，729-744)：186℃(分解))。

4，6-二氯-3-羟基-2-硝基苯甲酸：¹H NMR(CD₃OD)：δ7.79(s，1H)；质谱：m/z 250，252，254(M⁺-1，100％，66％，11％)。

步骤B：2-氨基-4，6-二氯-N-(4-氟苯基)-3-羟基苯甲酰胺的制备

将CDI(2.2g，0.013mol)加入到搅拌下的4，6-二氯-3-羟基-2-硝基苯甲酸(3.0g，0.012mol)在无水THF(30mL)和DMF(2mL)中的溶液中。40分钟后，加入4-氟苯胺(4mL，0.042mol)。所述溶液加热回流过夜，冷却，浓缩至暗褐色粘性油。将该油通过硅胶色谱(二氯甲烷/甲醇，19∶1-9∶1)提纯，得到浅褐色油形式的4，6-二氯-N-(4-氟苯基)-3-羟基-2-硝基苯甲酰胺(2.7g，65％)。

4，6-二氯-N-(4-氟苯基)-3-羟基-2-硝基苯甲酰胺：¹H NMR(CD₃OD)：δ7.58(m，2H)，7.44(s，1H)，7.07(m，2H)。

将氯化锡(II)水合物(8.8g，0.039mol)、4，6-二氯-N-(4-氟苯基)-3-羟基-2-硝基苯甲酰胺(2.7g，0.008mol)和EtOH(70mL)的悬浮液在70℃加热1h，然后冷却到室温。将所述的混合物倒入到冰上，碱化至pH8(饱和NaHCO₃)，在室温下搅拌1.5h，然后用冰HOAc再次酸化至pH6.5。悬浮液过滤；将滤液浓缩，得到一种米黄色固体。将所述的米黄色固体与滤饼合并，并用热的乙酸乙酯萃取(5x)。合并萃取液，得到固体形式的2-氨基-4，6-二氯-N-(4-氟苯基)-3-羟基苯甲酰胺(2.0g，79％)。

2-氨基-4，6-二氯-N-(4-氟苯基)-3-羟基苯甲酰胺：¹H NMR(CD₃OD)：δ7.69(m，2H)，7.09(m，2H)，6.73(s，1H)。

步骤C：5，7-二氯-3-(4-氟苯基)-8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮(1055)的制备

将CDI(0.65g，4.0mmol)和甲酸(0.17mL，3.6mmol)在无水THF(18mL)和DMF(2mL)中的溶液在室温下搅拌4h。然后加入从步骤B中获得的胺(1.01g，3.2mmol)在THF(15mL)中的溶液，所述的溶液加热回流15h，接着浓缩。将所得褐色固体用乙酸乙酯洗涤，得到白色针状形式的标题化合物(0.49g，47％)。

5，7-二氯-3-(4-氟苯基)-8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮：¹H NMR(CDCl₃/CD₃OD，9∶1)：δ8.10(br，1H)，7.50(s，1H)，7.36(m，2H)，7.21(m，2H)；质谱：m/z325，327，329(M⁺+1，100％，66％，11％)。

(B)5，7-二氯-3-环丙基-8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮(1061)

以下化合物使用实施例3所述的方法进行制备：在步骤B中用环丙胺代替4-氟苯胺(在一个密封管中在70℃下进行反应)，经硅胶色谱(二氯甲烷/MeOH，9∶1)提纯后，得到4，6-二氯-N-环丙基-3-羟基-2-硝基苯甲酰胺(43％)。-¹H NMR(CD₃OD)：δ7.37(s，1H)，2.73(m，1H)，0.74(m，2H)，0.59(m，2H)；质谱：m/z289，291，293(M⁺-1，100％，66％，11％)。

使用步骤B中所述的条件，用氯化锡(II)水合物还原4，6-二氯-N-环丙基-3-羟基-2-硝基苯甲酰胺，得到2-氨基-4，6-二氯-N-环丙基-3-羟基苯甲酰胺(93％)。-¹H NMR(CD₃OD)：δ6.67(s，1H)，2.86(m，1H)，0.79(m，2H)，0.62(m，2H)。

甲酸与2-氨基-4，6-二氯-N-环丙基-3-羟基苯甲酰胺(如步骤C所述)在CDI中进行偶联，用乙酸乙酯和MeOH洗涤后，得到白色固体形式的5，7-二氯-3-环丙基-8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮(40％)。-¹H NMR(CDCl₃/CD₃OD，9∶1)：δ8.30(s，1H)，7.46(s，1H)，3.22(m，1H)，1.21(m，2H)，0.94(m，2H)；质谱：m/z271，273，275(M⁺+1，100％，66％，11％)。

(C)5，7-二氯-8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮(1067)

将2，4-二氯-5-羟基-6-硝基苯甲酸(步骤A)(4.40g，17.6mmol)和亚硫酰氯(2mL，27mmol)在甲苯(60mL)中的溶液加热回流1h，然后冷却至室温。将该溶液在0℃下加入到浓NH₄OH(40mL)中。移去冷却浴，所述的混合物在室温下搅拌2h，然后浓缩，得到褐色固体形式的粗的4，6-二氯-3-羟基-2-硝基苯甲酰胺。-¹H NMR(CD₃OD)：δ7.33(s，1H)；质谱：m/z 249，251，253(M⁺-1，100％，66％，11％)。

根据步骤B中所述的条件，用氯化锡(II)水合物还原4，6-二氯-N-羟基-2-硝基苯甲酰胺，得到米黄色固体形式的2-氨基-4，6-二氯-3-羟基苯甲酰胺(2.5g，62％(2步))。-¹H NMR(CD₃OD)：δ6.69(s，1H)。

根据步骤C所述的方法，2-氨基-4，6-二氯-3-羟基苯甲酰胺和甲酸在CDI存在下，用MeOH洗涤粗产物后，得到白色固体形式的5，7-二氯-8-羟基-3H-喹唑啉-4-酮(36％)。-¹H NMR(DMSO-d₆)：δ8.12(s，1H)，7.55(s，1H)；质谱：m/z 229，231，233(M⁺-1，100％，66％，11％)。

实施例3

(A)7-吗啉-4-基-[1，6]萘啶-8-酚(1053)

步骤A：7-氨基-8-异丙氧基-[1，6]萘啶的制备

将2-溴丙烷(0.9mL)加入到搅拌下的8-羟基-[1，6]萘啶-7-羧酸甲酯(根据Anthony及同事，专利WO 02/30931 A2制得)(1.00g，4.90mmol)、K₂CO₃(2.79g)和DMSO(15mL)的混合物中。在50℃40h后，加入饱和NH₄Cl(20mL)，用二氯甲烷(10mLx3)萃取混合物。合并萃取液，并浓缩。将乙醚(40mL)加入到该残余物中，然后将所得混合物依次用H₂O(5mLx2)和盐水(10mL)洗涤，接着干燥。除去溶剂，得到8-异丙氧基-[1，6]萘啶-7-羧酸甲酯(1.06g，88％)。-¹H NMR(CDCl₃)：δ9.16(dd，J＝1.9和4.3，1H)，9.03(s，1H)，8.34(dd，J＝1.9和8.5，1H)，7.63(dd，J＝4.3和8.5，1H)，5.33(sep，J＝6.2，1H)，4.04(s，3H)，1.42(d，J＝6.2，6H)。

在5分钟内，将8-异丙氧基-[1，6]萘啶-7-羧酸甲酯(1.06g，4.30mmol)在MeOH(10mL)中的溶液滴加到搅拌下的水合肼(2.5mL)的溶液中，接着再搅拌1小时，然后浓缩。这样得到金色糖浆形式的所需的粗7-酰基酰肼(1.06g)。

8-异丙氧基-[1，6]萘啶-7-羧酸酰肼：¹H NMR(CDCl₃)：δ9.16(dd，J＝1.8和4.0，1H)，9.08(br，1H)，9.07(s，1H)，8.35(dd，J＝1.8和8.2，1H)，7.64(dd，J＝4.0和8.2，1H)，6.02(br，1H)，5.39(sep，J＝6.2，1H)，4.10(br，2H)，1.45(d，J＝6.2，6H)。

向搅拌下的在1M HCl(6mL)中的7-酰基酰肼(1.06g，4.30mmol)冰冷却溶液中滴加亚硝酸钠(334mg，4.84mmol)在H₂O(1.5mL)中的溶液，滴加期间所述的温度不超过5℃。混合物在0℃再搅拌20分钟，然后在真空中进行浓缩。加入HOAc(5mL)和H₂O(5mL)，所得橙色溶液在95℃加热24h，冷却，接着浓缩。加入H₂O(10mL)，将混合物的pH值调节到8(浓NH₄OH)，用二氯甲烷萃取(10mLx3)，接着干燥。除去溶剂，得到橙色固体形式的7-胺(467mg，53％)。

7-氨基-8-异丙氧基-[1，6]萘啶：¹H NMR(CDCl₃)：δ8.88(dd，J＝1.5和4.0，1H)，8.62(s，1H)，8.07(dd，J＝1.5和8.2，1H)，7.15(dd，J＝4.0和8.2，1H)，5.16(sep，J＝6.2，1H)，4.83(br，2H)，1.39(d，J＝6.2，6H)；质谱：m/z 204(M⁺+1，100％)。

步骤B：7-氯-8-异丙氧基-[1，6]萘啶的制备

在0-5℃下，将亚硝酸钠(1.8g，0.026mol)分批加入到搅拌下的所述胺(1.00g，4.92mmol)在浓HCl(20mL)中的溶液中。所述混合物在此温度下再搅拌1h，然后在1h内将其温热至室温。向其中加入冰，将混合物的pH调节到8(浓NH₄OH)。然后，用二氯甲烷萃取该混合物，用盐水洗涤萃取液，干燥并浓缩。经硅胶色谱(二氯甲烷/MeOH，200∶3)提纯后，得到无色固体形式的所需的7-氯化物(400mg，36％)。

7-氯-8-异丙氧基-[1，6]萘啶：¹H NMR(CDCl₃)：δ9.04(dd，J＝1.8和4.2，1H)，8.76(s，1H)，8.23(dd，J＝1.8和8.4，1H)，7.46(dd，J＝4.2和8.4，1H)，5.14(sep，J＝6.2，1H)，1.38(d，J＝6.2，6H)；质谱：m/z 223，225(M⁺+1，100％，33％)。

步骤C：7-吗啉-4-基-[1，6]萘啶-8-酚(1053)的制备

将步骤B的7-氯化物(100mg，0.448mmol)和吗啉(2mL)的混合物在180℃加热20h，然后将其冷却到室温。反应混合物用MeOH萃取，然后浓缩萃取液。残余物用硅胶色谱(二氯甲烷/MeOH，20∶1)提纯，得到黄色固体形式的所需的产物(78mg，64％)。

在0℃下，向搅拌下的8-异丙氧基-7-吗啉-4-基-[1，6]萘啶(149mg，0.545mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入BCl₃(1.5mL的在二氯甲烷中的1M溶液)。将所述的暗橙色溶液在室温下搅拌24h。加入MeOH(10mL)，然后将混合物浓缩。此过程重复四次。剩余的残余物用乙醚再次洗涤(5mLx2)，得到暗红色固体形式的7-吗啉-4-基-[1，6]萘啶-8-酚盐酸盐量收率)。-¹HNMR(CD₃OD)：δ9.09(dd，J＝1.5和5.1，1H)，9.02(s，1H)，8.99(dd，J＝1.5和8.2，1H)，7.79(dd，J＝5.1和8.2，1H)，3.95(m，4H)，3.80(m，4H)。

7-吗啉-4-基-[1，6]萘啶-8-酚盐酸盐在二氯甲烷20mL)中的溶液用饱和NaHCO₃溶液(2x)洗涤，干燥，然后浓缩。除去溶剂，经硅胶色谱(二氯甲烷/MeOH，9∶1)提纯后，得到橙色固体形式的7-吗啉-4-基-[1，6]萘啶-8-酚(97mg，77％)。-¹H NMR(CD₃OD)：δ8.91(dd，J＝1.4和4.0，1H)，8.60(s，1H)，8.32(dd，J＝1.4和8.2，1H)，7.41(dd，J＝4.0和8.2，1H)，3.89(m，4H)，3.47(m，4H)。

(B)8-羟基-2-甲基氨基甲基-[1，6]萘啶-7-羧酸(4-氟苯基)酰胺(1070)

步骤A：6-甲基吡啶-2，3-二羧酸2-异丙酯的制备

6-甲基-2，3-吡啶二羧酸(10.0g，0.055mol)和Ac2O(50mL)在120℃加热4h，冷却，接着浓缩至一种褐色油。将异丙醇加入到该褐色油中，然后将溶液在80℃加热过夜。在真空中除去挥发物，残余物用乙醚洗涤后，得到淡黄色固体形式的6-甲基吡啶-2，3-二羧酸2-异丙酯(8.8g，71％)。-¹HNMR(CDCl₃)：δ8.24(d，J＝8.2，1H)，7.34(d，J＝8.2，1H)，5.34(sep，J＝6.2，1H)，2.68(s，3H)，1.39(d，J＝6.2，6H)。

步骤B：3-羟甲基-6-甲基吡啶-2-羧酸异丙酯的制备

将6-甲基吡啶-2，3-二羧酸2-异丙酯(7.31g，0.33mol)和亚硫酰氯(65mL)的混合物在回流下加热1h。所得溶液在真空中进行浓缩。残余物用无水THF(2x)洗涤，得到褐色油形式的粗酰基氯。在20分钟内，向搅拌下的冰冷却的该酰基氯在THF(50mL)中的溶液中滴加在THF(15mL)中的硼氢化钠(1.26g，0.33mol)。在0℃1h后，将反应混合物倒入到冰上，然后用二氯甲烷萃取(3x)。合并萃取液，用盐水洗涤，干燥并浓缩。残余物通过硅胶色谱(二氯甲烷/MeOH，19∶1)提纯后，得到浅褐色固体形式的3-羟甲基-6-甲基吡啶-2-羧酸异丙酯(3.42g，48％)。-¹H NMR(CDCl₃)：δ7.76(d，J＝7.9，1H)，7.31(d，J＝7.9，1H)，5.32(sep，J＝6.2，1H)，4.74(s，2H)，1.45(d，J＝6.2，6H)。

步骤C：3-[(苯磺酰基(甲氧基羰基甲基)氨基)甲基]-6-甲基吡啶-2-羧酸异丙酯的制备

根据Anthony等人(WO 02/30931 A2)所报导的制备3-[(苯磺酰基(甲氧基羰基甲基)氨基)甲基]吡啶-2-羧酸异丙酯反应条件，在40分钟内，将偶氮二乙酸二异丙酯(1.07g，5.30mmol)在THF(5mL)中的溶液滴加到搅拌下的3-羟甲基-6-甲基-吡啶-2-羧酸异丙酯(739mg，3.53mmol)、N-(苯磺酰基)甘氨酸甲酯(810mg，3.53mmol)和三苯膦(1.39g，5.30mol)在THF(15mL)中的溶液中，然后将所得溶液在室温下搅拌过夜。浓缩反应混合物，得到金黄色糖浆形式的粗3-[(苯磺酰基(甲氧基羰基甲基)氨基)甲基]-6-甲基吡啶-2-羧酸异丙酯。此粗产物没有进一步提纯直接用于下一步中。-有选择的¹HNMR(CDCl₃)：δ4.73(s，2H)，4.00(s，2H)，3.54(s，3H)，2.70(s，3H)。

步骤D：8-羟基-2-甲基-[1，6]萘啶-7-羧酸甲酯的制备

在0℃下，在20分钟内，向搅拌下的粗3-[(苯磺酰基(甲氧基羰基甲基)氨基)甲基]-6-甲基吡啶-2-羧酸异丙酯(从步骤C中得到)在MeOH(20mL)中的溶液中滴加NaOMe在MeOH中的溶液(由Na(200mg)在MeOH(4mL)中制得)。所得溶液在0℃再搅拌1小时，然后浓缩。加入乙酸乙酯(50mL)和冰-H₂O(50mL)。分离层；水层用乙酸乙酯(2x)萃取，将pH调节到6(5M的HCl)，接着用二氯甲烷(20mLx3)萃取。合并萃取液，干燥，浓缩，得到奶油色固体形式的纯8-羟基-2-甲基-[1，6]萘啶-7-羧酸甲酯(708mg，98％(2步))。-¹HNMR(CDCl₃)：δ8.87(s，1H)，8.26(d，J＝8.5，1H)，7.62(d，J＝8.5，1H)，5.40(br，1H)，4.13(s，3H)，2.91(s，3H)。

步骤E：8-羟基-2-甲基-[1，6]萘啶7-羧酸(4-氟苯基)酰胺盐酸盐的制备

将8-羟基-2-甲基-[1，6]萘啶-7-羧酸甲酯(0.34g，1.56mmol)和4-氟苄胺(0.5mL)在甲苯(4mL)中的溶液在回流下加热16h，然后将其冷却至室温。除去溶剂，得到一种奶油色固体，用乙醚洗涤后，得到灰白色固体形式的8-羟基-2-甲基-[1，6]萘啶-7-羧酸(4-氟苯基)酰胺(0.40g，87％)。-¹HNMR(CDCl₃)：δ8.57(s，1H)，8.44(br，1H)，8.15(d，J＝8.4，1H)，7.52(d，J＝8.4，1H)，7.37(m，2H)，7.07(m，2H)，4.67(d，J＝6.2，2H)，2.87(s，3H)。

步骤F：8-羟基-2-(甲氨基)甲基-[1，6]萘啶-7-羧酸(4-氟苯基)酰胺盐酸盐(1070)的制备

将SeO₂(100mg，0.901mmol)加入到8-羟基-2-甲基-[1，6]萘啶-7-羧酸(4-氟苯基)酰胺(150mg，0.482mmol)在1，4-二噁烷(8mL)和H₂O(0.1mL)中的溶液中，混合物在55℃加热3h。将混合物冷却至室温并过滤(硅藻土)。浓缩滤液，得到浅橙色固体形式的粗2-醛。-¹H NMR(CDCl₃)：δ10.37(s，1H)，8.75(s，1H)，8.46(d，J＝8.4，1H)，8.45(br，1H)，8.26(d，J＝8.6，1H)，7.40(m，2H)，7.30(br，1H)，7.08(m，2H)，4.70(d，J＝6.0，2H)。

向搅拌下的所述粗2-醛和甲胺盐酸盐(50mg，0.741mmol)在1，2-二氯乙烷(5mL)中的溶液中加入Et₃N(0.07mL)。然后，加入乙酰氧基硼氢化钠(102mg，0.482mmol)，混合物在室温下搅拌过夜。加入MeOH，浓缩所得溶液。加入饱和NaHCO₃溶液，过滤分离所得浅橙色固体，用H₂O洗涤并在真空下干燥。向固体中加入MeOH(10mL)，滤掉剩余的不溶性物质。浓缩滤液；加入浓HCl，溶液蒸发至干，得到浅黄色固体形式的8-羟基-2-(甲氨基)甲基-[1，6]萘啶-7-羧酸(4-氟苯基)酰胺盐酸盐(PB 1070)(45mg，30％)。-¹HNMR(CD₃OD)：δ8.92(s，1H)，8.64(d，J＝8.4，1H)，7.82(d，J＝8.4，1H)，7.43(m，2H)，7.06(m，2H)，4.69(s，2H)，4.68(br，1H)，4.65(s，2H)，2.91(s，3H)。

实施例4

(A)3-(4-氯苯基)-9-羟基吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(1069)

步骤A：2-(4-氯苯基)-3-氧代-丙酸乙酯的制备

(4-氯苯基)乙酸(20.0g，0.12mol)和浓硫酸(2g)在EtOH(150mL)中的溶液在回流下加热19h，冷却，然后浓缩。加入乙醚(100mL)，溶液用饱和NaHCO₃溶液(40mLx2)洗涤，干燥，接着除去挥发物。这样得到油形式的(4-氯苯基)乙酸乙酯(22.3g，96％)。

将甲酸乙酯(7.46g，0.101mol)滴加到搅拌下的冰冷却的(4-氯苯基)乙酸乙酯(20.0g，0.101mol)和NaH(0.131mol)在乙醚(100mL)中的悬浮液中。然后，将混合物温热至室温过夜。用1M的HCl中和混合物；分离有机层，干燥，除去溶剂，得到无色固体形式的2-(4-氯苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(19.8g，87％)。¹H NMR(CDCl₃)：δ12.14(d，J＝12.8，1H)，7.31-7.18(m，4H)，4.29(q，J＝7.2，2H)，1.57(br，1H)，1.29(t，J＝7.2，3H)。

步骤B：3-(4-氯苯基)-9-羟基吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(1069)的制备

2-氨基-3-羟基吡啶(5.51g，0.05mol)和2-(4-氯苯基)-3-氧代-丙酸乙酯(13.6g，0.06mol)在EtOH(100mL)中在回流下加热15h，然后将其冷却。过滤分离沉淀，得到烯胺和环化产物的9∶1的混合物(11.1g)。

烯胺：¹H NMR(DMSO-d₆)：δ10.67(d，J＝12.4，1H)，8.10(d，J＝12.4，1H)，7.72(d，J＝4.8，1H)，7.37(m，4H)，7.16(m，1H)，6.86(dd，J＝4.8和8.0，1H)，4.16(q，J＝7.2，2H)，1.18(t，J＝7.2，3H)。

烯胺和环化产物的混合物(11.1g)在二乙苯(100mL)中的溶液在160℃加热8h，接着冷却。过滤分离沉淀，一次用己烷和EtOH洗涤，接着干燥。这样得到淡黄色固体形式的3-(4-氯苯基)-9-羟基吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(7.03g，74％)。

3-(4-氯苯基)-9-羟基吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮：¹H NMR(DMSO-d₆)：δ8.64(dd，J＝2.0和6.0，1H)，8.61(s，1H)，7.89(m，2H)，7.51(m，2H)，7.30(m，2H)；质谱：m/z 273，275(M⁺+1，100％，33％)。

(B)3-(4-氯苯基)-9-羟基-8-碘吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(1063)

向搅拌下的3-(4-氯苯基)-9-羟基吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(2.73g，0.01mol)和碘(2.54g，0.01mol)在EtOH(100mL)中的悬浮液中加入过氧化氢(1.94g的30％w/v的水溶液)。混合物在室温下搅拌6天。过滤分离固体，用EtOH(20mLx3)洗涤，干燥，得到一种深绿色的粉末(3.56g)。用DMF重结晶，得到橙棕色固体形式的3-(4-氯苯基)-9-羟基-8-碘吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮(1.80g)。

3-(4-氯苯基)-9-羟基-8-碘吡啶并[1，2-a]嘧啶-4-酮：¹H NMR(DMSO-d₆)：δ8.57(s，1H)，8.35(d，J＝7.2，1H)，7.88(m，2H)，7.64(d，J＝7.2，1H)，7.51(m，2H)；质谱：m/z 399，401(M⁺+1，100％，33％)。

以下测定用于评估本发明的新化合物在本发明方法中使用的适用性。

实施例5

式I或II化合物的评估

以下测定用于评估式I或II的化合物在本发明方法中使用的适用性。

测定1.荧光H₂O₂分析

荧光测定用来分析测试化合物在基于dichlorofluorosceindiacetate(DCF；分子探针，Eugene OR)的铜存在下通过Aβ抑制过氧化氢生成的能力。该DCF溶液(5mM)在100％二甲基亚砜中(预先用氩气在20℃下吹扫1小时)在0.025MNaOH存在下脱乙酰30分钟，接着在pH7.4下中和至1mM的最终浓度。制备pH7.4的1μM的辣根过氧化物酶(HRP)储备液。反应在PBS、pH7.4、96孔板中进行(总体积＝250μL/孔)。所述的反应溶液含有浓度在50nM至1μM之间的Aβ1-42，铜-甘氨酸螯合物(Cu-Gly)，如下制备：以1∶6的比例将CuCl₂加入到甘氨酸中，接着以比例2Cu-Gly：1Aβ加入到Aβ，还原剂包括多巴胺(5M)或抗坏血酸、脱乙酰的DCF 100μM以及HRP 0.1μM。1-10uM EDTA或另外的螯合剂也可以作为游离铜的控制剂(control)存在，但是不需要对测定起作用。反应混合物在37℃培育60分钟。在PBS中的pH7.4的H₂O₂(1-2.5μM)标准物和催化酶(4000单位/ml)可以作为阳性对照包括在内。使用波长分别在485nM和530nM的激发和发射滤光器的板读数器记录荧光。通过比较荧光与H₂O₂标准物，可以确定H₂O₂浓度。通过在测试孔中包含给定浓度的测试化合物，分析产生Aβ H₂O₂的抑制。

测定2.神经毒性测定

原发皮层神经元培养

如先前描述的(White等人，1998)制备皮层培养物。除去胚胎期第14天BL6Jx129sv小鼠的皮层，切除脑膜(meninges)，并离解在0.025％(wt/vol)胰蛋白酶中。将离解细胞以2×10⁶细胞/mL的密度铺在48孔培养平板中，该平板中预先放有含25％(vol/vol)FCS和5％(vol/vol)HS的MEM，接着在37℃培育2小时。然后，用Neurobasal培养基(Invitrogen Life Technologies)和B27补充剂(Invitrogen Life Technologies)替换培养基。培养物在37℃下保持在5％的CO₂中。实验前，用Neurobasal培养基和B27-抗氧化剂(Invitrogen LifeTechnologies)替换该培养基。

原发性小脑颗粒神经元培养物

除去出生5-6天后(P5-6)的小鼠的小脑，切除脑膜，并将其离解在0.025％的胰蛋白酶中。将小脑颗粒神经元(CGN)以350000细胞/cm²的密度铺在24孔培养平板中，该平板中预先装有补充有10％胎牛血清(FCS)、2mM谷氨酰胺和25mM KCl的BME(Invitrogen Life Technologies)。将硫酸庆大霉素(100μg/mL)加入到所有平板培养基中，培养物在37℃下保持在5％的CO₂中。

测定3.细胞成活力测定

(a)细胞成活力(cell viability)的MTS测定

使用MTS测定确定细胞的成活力。用新鲜的Neurobasal培养基加B27补充剂-抗氧化剂替换培养基。1/10体积的MTS溶液(Cell Titre 96 AqueousOne，Promega Corporation)并在37℃下培育2小时。用分光光度计在560nm测定200微升等分试样。

(b)细胞成活力的LDH测定

使用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒(Boehringer Ingelheim)根据厂家的教导，从不含血清和细胞碎片的培养上清液中确定细胞死亡。

(c)Aβ神经毒性和Aβ神经保护测定

神经元皮层细胞按照测定2培养5天。第6天，用Neurobasal(NB)培养基和B27补充剂(没有抗氧化剂)替换NB培养基(Invitrogen LifeTechnologies)和B27补充剂(Invitrogen Life Technologies)。第6天，将测试化合物分别加入到神经元细胞培养物中：

将测试化合物溶于100％DMSO中，至2.5mM的浓度(10mM如果每管瓶称出过量的化合物-那么稀释至2.5mM)。将2.5mM储备液以1∶10比例连续稀释，得到250uM、25uM、2.5uM的使用溶液。

Aβ制备：

首先，将Aβ溶于20mM NaOH中，至1mM的浓度，接着超声波处理5分钟。然后，将该肽在H₂O和10X PBS中稀释至在1X PBS中200uM Aβ的最终浓度。所述肽再次用超声波处理5分钟，然后以14000rpm旋转5分钟，并将其移入到清洁管中。

将测试化合物溶于100％DMSO中，至2.5mM的浓度(10mM如果每管瓶称出过量的化合物，那么稀释至2.5mM)。将2.5mM储备液以1∶10比例[在NB介质和B27(没有抗氧化剂)中]连续稀释，得到250uM、25uM、2.5uM的使用溶液。测试化合物没有直接加入到细胞中，相反，将它们加入到一个含如下物质的48孔‘药物板’中：

“药物板”的制备：

向48孔板中加入：

孔1：515ul NB+B27(没有抗氧化剂)^*+24ul25uM测试化合物+60ulAβ稀释剂^**

孔2：515ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul250uM测试化合物+60ulAβ稀释剂

孔3：515ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul测试化合物稀释剂^***+60ulAβ1-42

孔4：515ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul2.5uM测试化合物+60ulAβ1-42

孔5：515ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul25uM测试化合物+60ulAβ1-42

孔6：515ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul250uM测试化合物+60ulAβ1-42稀释剂

孔7：515ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul测试化合物稀释剂+60ulAβ1-42稀释剂

孔8：600ul NB+B27(没有抗氧化剂)

N.B.60ulAβ1-42等于20ulAβ1-42每孔等于20uMAβ1-42

将所述的药物板在37℃培育15分钟。一式三份以200ul每孔加入到相应的细胞板中。所述细胞板在37℃下培育4天。

^*NB培养基+B27(没有抗氧化剂)，

^**Aβ稀释剂2mM NaOH，1XPBS

^***PBT稀释剂10％DMSO在NB+B27中(没有抗氧化剂)

完成测定：

处理细胞后第4天，通过向所述细胞中加入MTS完成测定。

(d)测试化合物细胞毒性的分析

按照测定2，将神经元皮层细胞在NB介质和B27补充剂中培养5天。

第6天，将测试化合物加入到在NB培养基和B27补充剂减抗氧化剂中的神经元细胞培养物中。

将测试化合物溶于100％DMSO中，至2.5mM的浓度(10mM如果每管瓶称出过量的化合物-那么稀释至2.5mM)。将2.5mM储备液以1∶10比例连续稀释，得到250uM、25uM、2.5uM的使用溶液。测试化合物没有直接加入到细胞中，相反，将它们加入到一个含如下物质的48孔‘药物板’中：

“药物板”的制备：

向48孔板中加入：

孔1：576ul NB+B27(没有抗氧化剂)^*+24ul2.5uM测试化合物

孔2：576ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul25uM测试化合物

孔3：576ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul250uM测试化合物

孔4：576ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul2.5uM测试化合物

孔5：576ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul25uM测试化合物

孔6：576ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul250uM测试化合物

孔7：576ul NB+B27(没有抗氧化剂)+24ul测试化合物稀释剂^**

孔8：600ul NB+B27(没有抗氧化剂)

将所述的药物板在37℃培育15分钟。一式三份以200ul每孔加入到相应的细胞板中。所述的细胞板在37℃下培育4天，(在细胞的每个板上测试两个化合物)。

^*NB培养基和B27(没有抗氧化剂)，

^***PBT稀释剂10％DMSO在NB+B27中(没有抗氧化剂)

在完成测定时，将1/10体积的MTS加入到板的每个孔中(即25ul/250ul)。所述板在37℃下培育2小时，然后在560nm下读取吸光度。

测定4.半胱天冬酶(caspase)测定

为了测定神经元培养物中半胱天冬酶的活性，除去生长培养基，用对照盐溶液(pH7.4)洗涤细胞两次，接着将冰冷的细胞萃取缓冲液直接加入到该培养物中。萃取缓冲液由20mM Tris(pH7.4)、1mM蔗糖、0.25mM EDTA、1mM二硫苏糖醇(DTT)、0.5mM PMSF、1％Triton X-100(Tx-100)和1μg/mL胃酶抑素和抑肽酶组成。在冰上培育15分钟后，除去萃取缓冲液，在4℃在微量离心机中离心5分钟，接着向96孔板的每个孔中加入100μL上清液。将100μL 200μM的底物(对于半胱天冬酶3、6和8，分别是DEVD-pNA、VEID-pNA或IETD-pNA)加入到每个孔中，得到100μM的底物最终浓度。板在37℃下培育2、4、6或24小时，在415nm的波长处测定吸光度(Abs415)。该吸光度读数与已知标准的单独pNA进行比较。

测定5.膜联蛋白(annexin)V测定

为了测定与细胞结合的膜联蛋白V的含量，用对照盐溶液(pH7.4)洗涤培养物两次，接着加入在对照盐溶液(pH7.4)中的浓度约0.5μg/mL的膜联蛋白V-FITC。同时还向培养物中加入碘化丙锭(propidium iodide)(10μg/mL)。细胞在黑暗中在环境温度下培育30分钟，随后用新鲜的对照盐溶液洗涤三次。使用莱卡(Leica)DMIRB显微镜分析确定FITC荧光(激发488nm，发射510nm)。用莱卡MPS60照像附加使用ASA400彩色胶片进行拍照，底片用Adobe Photoshop v2.0.1软件扫描。

测定6.脂蛋白氧化测定

可以使用两种不同的方法测定金属介导的脂质过氧化作用。第一种测定法涉及测定金属化蛋白质的氧化作用。这种测定法如下进行：将透析金属化蛋白质或天然蛋白质(在指定浓度下)与0.5mg/mL LDL混合24小时(37℃)。使用脂质过氧化作用分析试剂盒(LPO 486，Oxis International Inc.Portland，OR)按照试剂盒教导测定脂质过氧化作用(LPO)。通过吸光度(486nm)与单独LDL(100％LPO)进行比较，确定LPO的水平。第二种测定法用来测定天然蛋白质在游离的、非蛋白质结合的Cu存在下的LPO活性。这涉及到将非金属化的肽(140μM)加入到0.5mg/mL LDL和20μM Cu-gly中，接着对金属化蛋白质进行LPO测定。通过吸光度(486nm)与LDL+Cu-gly(100％LPO)进行比较，确定LPO的水平。作为阴性对照，LDL还暴露于透析的Cu-gly溶液中，以与Cu-金属化蛋白质所使用的那些进行比较。

测定7.由Cu-金属化蛋白质诱导的细胞毒性

在与蛋白质为等摩尔浓度或两倍摩尔浓度下，将蛋白质或合成肽与金属-甘氨酸溶液混合。金属-蛋白质混合物在37℃培育过夜，然后使用3,500千道尔顿阻流(cut-off)的微型渗析杯(mini-dialysis cups)(Pierce，Rockford，IL)进行广泛透析(24小时，在室温下抗dH₂O(3L/变化)的两种变化)。蛋白质抗PBS pH7.4的透析产生与dH₂O透析具有相同活性的金属化蛋白质。

为了测定它们的神经毒害作用，将金属化蛋白、天然蛋白或肽加入到两天龄的原发性皮层神经元培养物中。培养物同时还暴露于Cu-gly(5或10μM)或LDL中。阳性对照培养物用Cu-gly+LDL或LPO产物，4-羟基-壬烯醇(HNE，Sigma Chemicals)处理。用乳酸脱氢酶(LDH)分析试剂盒(RocheMolecular Biochemicals，Nunawading，Australia)根据厂商的教导，测定培养物中的细胞死亡。

测定8.对溶酶体酸化的Aβ-介导损失进行吖啶橙分析

经培养的小鼠皮层神经元用Aβ1-42(20μM)处理16h，然后用5mg/ml吖啶橙(AO)在37℃下染色5分钟。在37℃下15分钟。用荧光显微镜上的红色滤光器测定AO-诱导的荧光。AO是溶酶体向性弱碱，累积在胞内体/溶酶体区室中，并在培养期间显示出橙色荧光。只要溶酶体膜内存在大量的质子梯度，AO就在溶酶体内被螯合。用Aβ1-42处理细胞破坏了溶酶体膜的质子梯度，并且将AO重新定位到胞质溶胶中，根据16-24小时内橙色荧光的损失表示。

测定9.人脑淀粉状蛋白增溶作用测定

这种测定法是评价测试化合物在死后人AD脑的组织萃取物中将Aβ从不溶阶段赋予可溶阶段的能力。

高达0.5g的带血小板的没有脑膜的皮层在高达2ml的冰冷磷酸缓冲盐溶液pH7.4中使用DIAX 900均化器(Heudolph and Co，Kelheim，Germany)或其它合适的装置全速均化三个30-秒周期。为了获得磷酸缓冲盐溶液-可提取部分，将均浆在100,000xg下离心30分钟，接着除去上清液。或者，将所述组织冷冻干燥，然后磨碎形成一种粉末，接着将所述粉末称成等分试样，进行如上所述的提取。离心后移去10μl上清液的等分试样，将其与等体积的2XTris-Ticene SDS样品缓冲液(pH8.3，含8％SDS，10％2-巯基乙醇)混合。然后，样品在90℃下加热10分钟，接着通过凝胶电泳分离。将初始粒状样品再悬浮在1ml磷酸缓冲盐溶液中，获得皮层样品的不溶部分。然后，将这种悬浮液的50-μL等分试样在200ml上述样品缓冲液中煮沸。

将合适稀释的样品装载到10％-20％梯度凝胶剂(Novex，San Diego，CA)上，接着转移到0.2-μm硝化纤维素膜(Bio-Rad，Hercules，CA)上，进行Tris-Tricine聚丙烯酰胺凝胶电泳。使用单克隆抗体W02检测Aβ，其检测与辣根过氧化物酶-共轭的兔抗-小鼠IgG(Dako，Denmark)结合的残基5-8、17(或其它合适的抗体)，并通过使用增强化学发光(例如ECL；Amersham LifeScience，Buckinghamshire，UK)进行观察。每种凝胶包括三条含0.5、1和2ng合成Aβ₄₀的带(Keck Laboratory，Yale University，New Haven，CT)作为参考标准。

使用合适的成像系统例如UVP凝胶文献编制系统扫描斑点膜，使用合适的软件，例如UVP Labworks进行密度测定。使用阶式板(No.911ST600，Kodak，Rochester NY)测定胶片/扫描仪的动态范围，依据厂商的教导，对校准胶片曝光，以便提供已知增加亮度的步骤。用于单-和二聚Aβ带光密度分析的信号强度的可计量范围是基于扫描获得的曲线与阶式板的密度测定法的比较。经初级试验后信号强度低的样品，可以使用更低或更高浓度的人造标准进行再测定。

所有样品分析若干次，将胶凝加样和稀释度调节到标准曲线的可计量区域内。不溶性Aβ含有来源于上面皮层样品中的不溶性淀粉状蛋白血小板的可粒化部分，可溶部分包含单体的和/或寡聚的可溶性Aβ。

每一测试化合物与包括在每种胶凝上的PBS对照一起，进行几个凝胶运行。每种胶凝含有不同浓度的测试化合物。使用学生的“t”测定，通过由测试化合物对于每种胶凝在任何浓度下获得的最高值的平均值与由多种胶凝中获得的PBS值的平均值进行比较。因此，可以进行测定，不管由任何测试化合物获得的溶解度的平均增加值是否与单独PBS获得的溶解度平均增加值具有可比性。获得(+)评分的测试化合物是这样的化合物，其相对于单独PBS，在血小板溶解度方面获得统计学上显著增加。获得(-)评分的测试化合物是这样的化合物，其相对于单独PBS，在血小板溶解度方面没有获得统计学上显著增加。

测定10.金属分配

为了测定各种金属包括锌和铜的分配作用，在测试化合物存在下提取脑组织后，从人脑组织的提取物中制得可溶性和不溶性部分，用于淀粉状蛋白溶解度测定。由感应耦合等离子体质谱分析两部分中的金属，如果必要的话，用硝酸和/或过氧化氢进行适当的预处理。

测定11.在转基因动物中给予测试化合物对Aβ沉积的影响

转基因小鼠模型对许多神经障碍是可以得到的，包括阿尔茨海默氏病(Games等人，1995；Hsiao等人，1996)；帕金森病(Masliah等人，2000)；家族性肌萎缩性侧索硬化(ALS)(Gurney等人，1994)；亨廷顿舞蹈病(Reddy等人，1998)和克-雅二氏病(CJD)(Telling等人，1994)。我们已经发现，阿尔茨海默氏病的转基因模型之一，APP2576转基因小鼠(Hsiao等人，1996)还具有白内障的高发病率。这些动物模型适合于测试的本发明的方法。

使用APP2576品系的转基因小鼠(Hsiao等人1996)。选择8-9个月大的雌性小鼠，并将其分成治疗组。

每隔一段时间杀死小鼠，检查它们的脑，以确定测试化合物的治疗是否降低了脑淀粉状蛋白的生成，并识别出最有效的给药方案。使用校准的Western印迹法，按照测定9所述的方法，测定脑和血清中可溶性和不溶性Aβ的水平。脑淀粉状蛋白增溶作用测定。

使用Morris水迷宫，根据标准方法，在高达8个月的时间内，对每组中其它小鼠的认知性能进行测定。同时，由不知情的操作员天天测定动物的总体健康和福利，使用5分整数在主观上对综合特征进行评价，包括运动活动、警觉性和总体健康体征。

测定12.物理化学性质

极表面积计算(PSA)

使用基于万维网，通过“Molinspiration”(一种计算分子性质的程序包)，计算极表面积值。

比浊法溶解度测定

在pH2.0和pH6.5时测定溶解度估计值。这在沿人近侧胃肠道可预测的pH范围范围内。

将化合物溶于DMSO中至合适的浓度，然后加入到0.01M HCl(约pH＝2.0)或pH6.5等渗磷酸盐缓冲液中，最终DMSO浓度是1％。然后，通过比浊法分析样品，确定溶解度范围。[根据D.Bevan and R.S.Lloyd，Anal.Chem.2000，72，1781-1787]。

cLog P值

理论Log P值使用ACD Log P软件进行确定。所标出的值由未经训练的数据库计算，并且是指未离子化的物质。

测定13.血脑屏障渗透

将测试化合物溶于DMSO中，接着加入磷酸盐缓冲盐水(PBS)，获得浓度为50μM的在含1.25-2.5％DMSO的PBS中的溶液。为了评价每一灌注期间血脑屏障剂(BBB)的完整性，以及为了评价脑组织样品中剩余血管空间(RVS)的体积(即：每一灌注结束时血管腔内剩余液体的体积)，将痕量¹⁴C-蔗糖加入到每种储备输液溶液(约0.01μCi/mL)中起BBB作用。

以1.0mL/100g体重的剂量腹膜内注射尿烷(Urethane)(25％w/v)，将成年雄性Spague Dawley大鼠(180-190g)麻醉。通过手术割开右颈总动脉，插管进行大脑循环灌注。然后，在与右颈总动脉分叉的末端处结扎右颈外动脉(其供应颅骨外的组织)，这样所有的输液溶液将通过剩余的右侧内颈动脉进入脑内。然后，暴露心脏，横切，立即开始输液。输液的速度由泵组控制，以3.2mL/分钟的量给予(对于这种大小的大鼠，约85％的正常脑部血液供应)。该输液套管最初含有0.5mL预先洗涤的肝素化PBS(10IU/ml)，用于冲洗血管和预防血液凝结和阻塞小血管。

1.5分钟后，自动停止输液泵，将套管从颈动脉中取出，然后从输液套管的端头处收集输液溶液的样品(1-1.5mL)。然后，将脑解剖，分成3部分；右半球和右中脑、左半球和左中脑、以及后脑(小脑、脑桥和脑干)。仅仅使用脑的右部进行随后的测定，因为通过右侧内颈动脉的灌注优先供应右脑半球和右中脑(左脑半球和后脑接受可变的并行灌注)。将每只动物的脑组织样品在-30℃下冷冻，均化，称重后的等分试样通过LC-MS分析确定总脑浓度。使用Micromass Triple Quad仪进行分析。流动相由乙腈/水梯度(含0.05％甲酸)组成，柱子是Phenomenex Luna CN。

由液体闪烁计数分析每个脑组织样品的小等分试样和相应的输液溶液，确定¹⁴C-蔗糖的含量。通过脑组织中蔗糖的实测浓度(dpm/mg)除以相应输液溶液中蔗糖的浓度(dpm/μL)，计算每个脑组织样品中剩余的血管空间(RVS)。RVS是每次灌注结束时留在血管内的液体的体积。RVS乘以输液溶液中测试化合物的浓度，得到每个脑组织样品中存在于血管内的测试化合物的总剩余量(即：没有越过BBB的那些)。总脑浓度减去每个脑组织样品中存在于血管内的测试化合物的总剩余量，得到每个脑组织样品中存在于血管外的药物的数量(即：越过BBB的那些)。除以RVS校正的脑浓度，得到脑摄取率(方程式1)。

方程式1.

每一个测试化合物进行5-6次脑灌流实验，计算平均脑摄取率。

比值大于50％表示化合物非常迅速地进入脑内；比值在10至50％之间表示化合物较好的进入脑内，比值小于10％(没有观察到)表示化合物非常慢地进入脑内并且不适合于治疗给药；比值小于1％(没有观察到)表示化合物有效地从脑中排出。

测定14.转基因小鼠脑免疫组织化学

在本测定中使用如测定11中所指的APP2576转基因小鼠(Hsiao等人，1996)。对侧的福尔马林-固定的小鼠脑组织被沿头颅切割。从相应的部位取得切片(10μm)并用80％甲酸处理以回收抗原。所使用的原发性抗体是单克隆抗体1E8，其识别Aβ残基18和22之间的表位(SmithKline Beecham，UK)。免疫反应性随与辣根过氧化物酶(使用3，39-二氨基联苯胺发色团)(Dako)和碱性磷酸酯酶(使用5-溴-4-氯3-吲哚酚磷酸酯和氮蓝四唑氯化物发色团)(Dako)有关的二次抗体而发展。每个切片的血小板丰度(Plaque abundance)由两个操作员根据下列等级盲目进行评价：

0＝没有看见血小板

1＝血小板存在但是非常稀少

2＝存在几个(several)血小板

3＝在限制范围内出现许多可见的血小板

4＝血小板很丰富并且不限于任何特定的区域。

如果合适的话，给予中间值例如2.5。

学生的t测试被用于基团之间的比较。

测定15.药物动力学特性(pharmacokinetic profile)

·静脉内输注测试化合物；2mg/Kg在合适的赋形剂中，给予2只大鼠，对动脉血进行取样直到24小时。

·口服给药测试化合物；30mg/Kg在合适的赋形剂中，通过口服管饲法给予2只大鼠，对动脉血进行取样直到24小时。

·通过合适的分析方法确定测试化合物的血浆浓度。

计算：

${\mathrm{CL}}_{\mathrm{total}}=\frac{{\mathrm{Dose}}_{\mathrm{IV}}}{{\mathrm{AUC}}_{\mathrm{IV}}},V_{\mathrm{d\β}}=\frac{{\mathrm{CL}}_{\mathrm{total}}}{\mathrm{\β}},\mathrm{BA}(\%)=\frac{\mathrm{AU}{C}_{\mathrm{oral}}*{\mathrm{Dose}}_{\mathrm{IV}}}{{\mathrm{AUC}}_{\mathrm{IV}}*{\mathrm{Dose}}_{\mathrm{oral}}}$

CL_total＝IV给药后的总血浆清除率

V_dβ＝IV给药后消除相期间的分布体积

BA＝口服生物利用度

AUC_IV＝IV给药后从零时到无穷，血浆浓度对时间分布下的面积

AUC_oral＝口服给药后，从零时到无穷，血浆浓度对时间分布下的面积

β＝IV给药后终端消除速度常数

测定16.测试化合物的小鼠血浆水平的确定

PBT1061

以30mg/kg的剂量口服给予PBT1061，在Na-羧甲基纤维素(CMC)中以悬浮液的形式通过口服管饲法给予四只小鼠。给药后30分钟，处死两只小鼠，给药后60分钟处死另两只小鼠。通过心脏穿刺获得血液，然后通过离心分离血浆。

由LC/MS使用ZQ仪测定PBT1061的浓度。流动相由乙腈(ACN)/水梯度(含0.05％的甲酸)组成，柱子是Phenomenex极性-RP 4μM80A(50×2mm)柱。

用ACN进行蛋白质沉淀后，将小鼠血浆样品直接注入。血浆中的分析方法在125-10,000ng/ml范围内是线性的(R²＝0.9992)。地西泮(Diazepam)用作内标。从血浆中回收的PBT1061是～100％。

以30mg/kg的剂量口服给药后，小鼠血浆中的PBT1061浓度在表1中给出。

表1.以30mg/kg口服给药后，小鼠血浆中PBT1061的浓度

小鼠ID	剂量(mg/Kg)	时间(min)	浓度(ng/ml)
				2703	30	30	1826.61
2743	30	30	5475.88
				2740	30	60	1115.24
2801	30	60	2417.55

PBT1063

以30mg/kg的剂量口服给予PBT1063，在Na-羧甲基纤维素(CMC)中以悬浮液的形式通过口服管饲法给予四只小鼠。给药后30分钟，处死两只小鼠，给药后60分钟处死另两只小鼠。通过心脏穿刺获得血液，然后通过离心分离血浆。

由LC/MS使用单一四极仪(single quadrupole instrument)测定PBT1063的浓度。流动相由乙腈(ACN)/水梯度(含0.05％的甲酸)组成，柱子是PhenomenexC8 RP 4μM80A(50×2mm)柱。

用ACN进行蛋白质沉淀后，将提供急性毒性的小鼠血浆样品(02.09.03给予的)直接注入。通过比较在大鼠血浆中制得的校准曲线确定浓度。血浆中的分析方法在312至10,000ng/ml范围内是线性的(R²＝0.9976)。地西泮用作内标。从血浆中回收的PBT1063是～42.9％。

小鼠血浆样品中的PBT1063浓度在表2中给出。

表2.以30mg/kg口服给药后，小鼠血浆中PBT1063的浓度

实施例号	时间(min)	浓度(ng/ml)
			2835	30	412.81
2843	30	279.39
			2814	60	439.49
2677	60	330.66

实施例6

式I或II化合物治疗阿尔茨海默氏病的临床试验

进行式I或II化合物治疗AD的II期临床试验，以研究在随机、双盲、安慰剂对照的中度AD对象的先导性试验阶段2临床试验中口服PBT-1治疗的作用。三十六个受试者进行随机化处理[18个受试者给予安慰剂，18个受试者给予PBT-1，32个受试者完成]，并分为较严重受影响组和较不严重受影响组。在较严重受影响的对象当中，在36周内的治疗对预防认知衰退具有统计上显著的作用(基线ADAS-cog≥25)。较不严重受影响组(ADAS-cog＜25)在此期间的恶化表现可忽略，因此在这组中的认知变化不能被区分。在PBT-1组中，血浆Aβ₄₂下降，但是在安慰剂组中，血浆Aβ₄₂却上升(p＜0.001)。在PBT-1组中，血浆Zn水平显著上升(≈30％)。

剂量

若干考虑因素决定了剂量的选择。在前面转基因小鼠的研究中，每天口服剂量20-30mg/kg的PBT-1，每周给药5天，治疗2-3个月后可以显著有效地抑制Aβ的累积。1500-2250mg/天的人等效剂量与PBT-1的处方抗生素剂量接近(600mg，口服每日四次)。但是，每月给药的剂量值将随SMON毒性而提高。

3.3mg/kg/天的起始剂量，假定75kg的平均体重，与转基因小鼠模型中有效剂量具有相同的数量级，但是仅仅约为抗生素剂量的十分之一。

由于剂量小于20mg/kg/天的有效性在转基因小鼠研究中没有数据，我们推断取得有益效果可能需要比小鼠研究中9-12周更长的一个疗程(Cherny等人，2001)。因此，选择转基因小鼠有效剂量的约三分之一在平均剂量下36周的试验时间。10mg/kg/天的最终剂量是小鼠有效剂量的一半。

3.3mg/kg/天的起始剂量与转基因小鼠模型中有效剂量具有相同的数量级，但是仅仅约为抗感染剂量的十分之一。该研究用于检测金属和Aβ水平(与转基因研究中所见的那些具有相同的数值)的生物化学作用。

实验步骤

道德问题：遵照澳大利亚法律关于那些认知功能损害至不能根据信息进行判断或决定程度的个体的同意，得到由Victorian Civil and AdministrativeTribunal管理的每个不能代表他们自己利益的参与者的“特殊程序的同意”，。此外，从所有护理病人者处得到第三方同意。在开始研究前，用多奈哌齐使所有受试者稳定。该研究经皇家墨尔本医院研究基金会的临床研究和道德委员会批准。

研究人群：该研究在AD临床试验单位-维多利亚州的心理健康研究所以及在皇家墨尔本医院进行。在该研究中包括的标准为：征得同意；依据NINCDS-ADRDA标准诊断可能的AD(McKhann等人，1984)；18-45的AD评分-的认知(ADAS-cog)(Rosen等人，1984)评分；10-24的小型精神状态检查(MMSE)(Folstein等人，1975)评分；给予多奈哌齐5mg或10mg至少6个月；亲戚或护理病人者愿意和能够支持该试验；能完成试验检查；原发性感觉功能完整。

具有外周神经病或视神经病临床迹象或病史，或具有可能影响认知功能、神经传导的共存疾病或既往史，或者可能混淆不利事件分布的疾病的对象除外。

在基线处获得以下因素，以确定它们是否与测定结果有关：年龄、性别、发病前IQ[由National Adult Reading Test(NART)评估]、受教育时间和载脂蛋白E(ApoE)异型。

研究设计：该研究是一种双盲、安慰剂对照、平行组随机化设计。三十六个对象和他们的护理者应征参与该研究，将对象随机以1∶1的比例或者接受PBT或者接受安慰剂。研究时间为36周。在0-12周时，PBT-1的口服剂量为125mg每日两次，在第13-24周时，PBT-1的口服剂量增加至250mg每日两次，在第25-36周时，PBT-1的口服剂量为375mg每日两次。

研究程序：筛选程序由完整的病史、身体、神经病学和眼科检查、血和尿检查以及心理测试(ADAS-cog，MMSE)组成。在筛选和基线访问之间进行神经传导测试和视觉诱发反应以提供基线测量结果。随机化之前，收集血液用于血浆金属和Aβ含量基线、ApoE同种异型化。所有对象给予多奈哌齐继续他们的研究，并且所有对象每四周通过肌内注射接受100mg的维生素B12。

除第12、24和36周由留置导管收集血样外，其余时间由肘前静脉穿刺收集血样。除发现Zn含量总是偏低约10％(可能是由于血小板激活存在差异的结果)外，程序改变不影响生化读数。因此，从分析中省略这些时间间隔的Zn数据。

结果测定：原发性临床效力变量是在基线和在第4、12、24和36周进行的对ADAS-cog基线评分的变化。选择这种测量法使得治疗效果与当前的疗法例如多奈哌齐具有可比性，其中药效试验还使用ADAS-cog作为它们原发性结果测定(Rogers等人，1998)。虽然许多神经心理测试法可以被认为是辅助的测量法，但是必须避免使受试者疲劳。因此，唯一的其它认知测试是微型精神状态测验法(MMSE)。还进行CIBIC+(临床医师在结合病人护理者信息的基础上作出的印象变化评述)，主观观察指数。血浆Aβ以及血浆锌和铜全部每四周采集。

Aβ检测用双抗体捕捉酶联免疫吸附测定(ELISA)：聚苯乙烯板用mAbG210(对于Aβ40)或mAb G211(对于Aβ42)包上。洗涤板，加入生物素酰化的mAb WO2。用抗生蛋白链菌素标记的铕检测结合抗体(Perkin Elmer，VicAustralia)。基于在每块板上得到的标准曲线，计算从重复三次孔处获得的数值。补充有合成Aβ1-40和Aβ1-42的血浆样品在使人感兴趣的浓度范围内还测试以确定证实测量的可靠性。

金属含量：使用先前所述的(Cherny等人，2001)电感耦合等离子体质谱测定金属。

治疗药物监测：在第12、24和36周时，按照合适的验证研究通过HPLC测定血液中PBT-1的浓度(Centre for Pharmaceutical Research，University ofSouth Australia)。

安全措施：进行标准不利事件报告，并且在每一次访问时记录生物化学试验、肾和肝功能、完血检查、血清维生素B12和叶酸水平。为了评价外周神经病和视神经病，在每次访问时进行神经病学检查，分别在筛选时、在第16周时和在结束试验调查前进行视觉诱发反应、神经传导研究和眼科检查。在筛选时和在第12、24和36时进行ECG。

数据准备和统计分析：由独立合同合作者从事数据监控和管理(KendleInternational and Health Research Solutions，Melbourne)。由治疗组间与基线的变化的显著差异表示药效证据。方差分析是评价统计显著性的首选方法，在基线处的治疗组疾病严重程度是初步设计因素。根据需要引入潜在地显著协变量。为了使幂(power)最大化，使用精确统计法分析类别测定上的组间差异。基于测量场合间存在0.60相关性的假定，如果每组15个对象，从基线到第36周的时间内，组间变化的标准偏差差异约80％。由于在类似的人群中已经观察到15％的损耗率，每组征募18名对象。

结果

受试者招募和人口分布：从2000年四月开始在12个月的时间内招募三十六个受试者(图1)。在这些当中，32个受试者具有充分的方案分析数据。两个受试者从每组中失去。

按计划，在基线、ADAS-cog评分的中值处(值＜25，≥25)将样品分为两组，建立基线疾病严重程度因子，得到较少严重受影响组和较严重受影响组(在治疗组中n＝8和8，在安慰剂组中n＝7和9)。

除治疗组比安慰剂组具有较高的平均发病前IQ(使用NART评价)(111.4与104.9相比；t(30)＝2.27，p＝0.031)以及低水平的促甲状腺激素(TSH)(1.14与2.00mU/L相比；t(30)＝4.400，p＜0.001)外，所述的组在基线处在人口统计、生物学和临床参数上没有不同(表4)。接着，作为共同变量对NART和TSH进行临时分析，发现在任何分析中都不显著。

临床效果：在第4、12、24和36周时ADAS-cog评分从基线的变化与治疗组和基线疾病严重程度的因子一起进行二向方差分析。ADAS-cog评分变化的平均值表明：与PBT-1-治疗组相比，安慰剂治疗组在每一检查时间间隔具有更大的恶化(图2A)。这种趋势接近第4周[F(1，28)＝3.55，p＝0.070]和第24周[(F(1，28)＝3.31，p＝0.080]的统计显著性(图2A)。如方案中所安排的，通过将样品分成较少严重受影响对象或较严重受影响对象(基线ADAS-cog值＜25，≥25)，检查疾病严重程度效果。严重程度的简单效果测试表明，联合组中分为较少严重组中的非显著性在第4周[F(1，28)＝7.73，p＝0.010]和第24周[F(1，28)＝6.63，p＝0.016]。这种趋势在第36周保持，但是紧密地脱离统计显著性[F(1，28)＝3.62，p＝0.068]。在更严重受影响组中，在第24周和第36周，PBT-1相对于安慰剂的基线ADAS-cog评分的平均变化差异分别为7.37(95％CI：1.51-13.24)和6.36(95％CI：-0.50-13.23)的差异(图2B)。

对血浆Aβ、Zn和Cu的影响：在基线处，在治疗组之间或严重层之间不存在血浆Aβ42含量的显著差别。在基线处，血浆Aβ40/42的个体水平的差异是大的，并且导致检测组间平均变化的任何显著差别的研究变差。但是，个体Aβ水平的参考与基线参考水平显著地减少了差异，并且显示出明显的治疗效果。在PBT-1治疗组中，从第20周开始，相对于基线，血浆Aβ42显示出明显下降；而在相同的时间内，在安慰剂组中，血浆Aβ42却增加了(图3A)。如同上述的疾病严重程度的层化(stratification)表明：变化仅在较不严重受影响的组中是显著的(图3B)。

PBT-1给药与血浆中总Zn显著升高(≈30％)有关(图4A)，但是对血浆中的铜没有影响(图4B)。混合AD组中Zn的平均基线浓度(9.4μM)低于与年龄有关的正常值(Wood和Zheng，1997)。因此，由PBT-1治疗引起的血浆中Zn水平的增加代表浓度的归一化。相反，Cu的平均基线浓度(13.1μM)在与年龄有关的正常范围内(Rahil-Khazen等人.，2000)。在相同或随后场合中测得的血浆Aβ42/40水平与Zn/Cu水平的相关性显示没有显著关联。

AD对象用PBT-1治疗的重要结果是血浆中Zn浓度的反常升高(图4A)，其在ZnT3介导的联合锌与血液的传染中与复原保持一致。这同样表明，与典型金属螯合剂例如去铁敏(desferrioxamine)相反，在此剂量下的PBT-1的作用机理不是总组织螯合剂。在金属内环境稳定的重建平衡存在下，PBT-1与金属的相对弱的亲和力似乎不足以引起显著系统性金属损耗。

PBT-1的血液浓度：在250、500和750mg的总日剂量下，PBT-1的稳态前剂量水平分别为4.034±2.10、6.74±3.70、7.60±2.15μg/ml，与相同或后续情况中测得的ADAS-cog、金属或Aβ水平没有显示出显著相关。

表4-基线人口分布和关键临床变量

独立样本t检验(所有测试30df)

精确的双尾检验。

在说明书和实施例中引用的参考文献列于以下数页中，并在此引入作为参考。

参考文献

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对本领域的技术人员来说很明显，尽管出于清楚和理解的目的，详细描述了本发明的某些细节，但是可以对在此所述的技术方案和方法作出多种修改和变化，而不偏离本说明书所公开的发明概念的范围。

Claims (14)

1.式I的化合物或其盐在制备用于治疗、改善和/或预防阿尔茨海默氏病的药物中的用途：

其中

R是O或S；

R¹独立地选自H，任选取代的C_1-6烷基，任选取代的苯基；和卤素，其中任选的取代基是C_1-6烷基、CF₃、F、Cl、I、氰基、C_1-6烷氧基、苯基、氨基或C_1-6烷基氨基；

X是CO；

m是整数1-3；以及

q是整数1或2。

2.权利要求1的用途，其中式I化合物中的R是O。

3.权利要求1的用途，其中式I化合物中的R¹是卤素、任选取代的苯基或任选取代的C_1-6烷基。

4.权利要求1的用途，其中式I化合物中的R¹是氟、碘、氯、任选取代的苯基或任选取代的C_1-4烷基。

5.权利要求1的用途，其中任选取代的C_1-6烷基包括任选取代的C_3-6环烷基。

6.权利要求1的用途，其中所述式I化合物如下所示：

7.权利要求1的用途，用于减缓、降低或阻止对象的认知衰退。

8.权利要求1的用途，其中所述式I化合物通过口服、局部或胃肠外给药。

9.权利要求1的用途，其中式I的化合物为抗致淀粉样药物。

10.药物或兽药组合物，包含权利要求1中所定义的式I化合物以及药学上或兽药上可接受的载体，其中式I化合物中，条件是：左侧环上的至少一个R¹不是H。

11.式I化合物或其盐：

其中

R是O或S；

R¹独立地选自H，任选取代的C_1-6烷基，任选取代的苯基；和卤素，其中任选的取代基是C_1-6烷基、CF₃、F、Cl、氰基、C_1-6烷氧基、苯基、氨基或C_1-6烷基氨基；

X是CO；

m是整数1-3；以及

q是整数1或2，

条件是：

(i)至少一个R¹不是H；以及

(ii)左侧环上的至少一个R¹不是H。

12.权利要求11的用途，其中任选取代的C_1-6烷基包括任选取代的C_3-6环烷基。

13.如权利要求11中定义的化合物，为如下的化合物：

14.药物或兽药组合物，包含权利要求11或13的化合物以及药学上或兽药上可接受的载体。

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