MXPA05002494A - Una oxidorreductasa microbiana. - Google Patents

Abstract

Se proporciona una oxidorreductasa microbiana capaz de convertir sustratos carotenoideos; la oxidorreductasa se puede obtener a partir de basidiomicetos, en especial Lepista irina, tambien se proporciona un acido nucleico aislado que codifica un marco de lectura abierto para la oxidorreductasa, junto con un polipeptido codificado por el acido nucleico, es posible convertir los carotenoides por medio de incubacion con la enzima; las aplicaciones para la oxidorreductasa incluyen su incorporacion en composiciones detergentes destinadas a utilizarse en el tratamiento de manchas, en especial manchas derivadas de caroteno.

Description

UNA OXIDORREDUCTASA MICROBIANA MEMORIA DESCRIPTIVA Esta invención se refiere a una oxidorreductasa microbiana capaz de convertir sustratos carotenoideos, a composiciones detergentes que contienen la oxidorreductasa y a los métodos de conversión de carotenoides para la producción de productos derivados de carotenoides destinados a utilizarse como ingredientes en alimentos, cosméticos y perfumes. El caroteno y otros compuestos carotenoideos son ingredientes muy comunes en una amplia gama de productos alimenticios y cosméticos. Debido a su color, es frecuente que las substancias carotenoideas presenten problemas de manchado en las telas, estas manchas son difíciles de eliminar utilizando los detergentes convencionales. Las denominadas manchas "difíciles" incluyen aquellas derivadas de jitomate y salsa o pasta de jitomate, jugos y alimentos para bebés a base de zanahoria, vegetales verdes y pasto. Los detergentes convencionales empleados para eliminar estas manchas difíciles y los que utilizan sistemas de enzimas ocasionan a menudo la decoloración de los colorantes sensibles. Estos sistemas por lo general tienen como base enzimas laccasa o peroxidasas. Existe la necesidad de disponer de enzimas con la capacidad de escindir eficientemente los sustratos carotenoideos, de proporcionar métodos enzimáticos para convertir substancias carotenoideas y para tratar manchas derivadas de carotenoides. Los carotenoides están presentes en muchos productos naturales como frutas y vegetales. Los ejemplos incluyen zanahorias, espinacas y caléndula. Es sabido que a partir de estos carotenoides se pueden preparar compuestos saborizantes y aromatizantes destinados a utilizarse en alimentos, cosméticos, perfumes y lo similar. Los más importantes carotenoides que se pueden escindir para producir compuestos saborizantes y aromatizantes son cualesquier substancia con una cadena principal de caroteno, en particular con una cadena principal de ß-caroteno o capsantina, de manera más particular a- y ß-caroteno, luteína, licopeno, anteraxantina, capsantina, zeaxantina, violaxantina, astaxantina, cantaxantina, luteoxantina, neoxantina y los respectivos apo-carotenoides. Los productos derivados de la escisión de carotenoides desempeñan una importante función en la industria de detergentes, alimentos y perfumes. Entre los productos de escisión son de interés particular los denominados norisoprenoides, principalmente los productos de escisión en C-13. Estos compuestos también son muy comunes en la naturaleza y se derivan de los carotenoides en los procesos de origen natural. Esto lo demuestra el hecho de que durante el proceso de maduración de los frutos, la concentración de carotenoides disminuye en forma proporcional al aumento en la concentración de norisoprenoides.

Los carotenoides se pueden escindir de varias maneras y producir diferentes norisoprenoides, por ejemplo, C-9 isoforona, C-10 safranal, C-13 ionona o C-15 ácido abscisinico, dependiendo del doble enlace que se escinda. Las iononas son los productos primarios de la escisión de carotenoides. Los productos de escisión secundarios más importantes son las damascenonas y damasconas, así como los teaspiranos, vitispiranos y edulanos. Los productos de escisión primarios y secundarios son compuestos que se encuentran en forma natural. Por ejemplo, a- y ß-ionona, dihidroactinidiolido, teaspirona y los derivados de 2,2,6-trimetilcliclohexanona se encuentran en las infusiones herbales. El método convencional para producir productos derivados de carotenoides es por cooxidación. La reacción se cataliza por medio de lipoxigenasas. Sin embargo, este proceso no es muy eficiente. Las posiciones de los dobles enlaces del precursor de carotenoides se conservan en la serie de productos de conversión. Por ejemplo, la delta-damascona se genera mediante una reacción de isomerización enzimática. La generación de sus precursores inmediatos, a- o ß-damascona, se puede llevar a cabo utilizando una serie de enzimas que introducen oxígeno como oxidasas, oxigenasas o peroxidasas. El documento WO 94/08028 describe un método para la preparación enzimática de substancias químicas aromatizantes, en particular iononas y aldehidos C6 a C-m, que utiliza una lipoxigenasa (cooxidación). Este método produce principalmente a-ionona y sólo trazas de ß-ionona.

Las substancias aromatizantes deseadas también se pueden sintetizar químicamente. La síntesis química de algunos ingredientes de perfume, por ejemplo, de almizcles macrocíclicos como la muscenona, se asocia con algunas desventajas, en particular, las altas proporciones de dilución y reactivos costosos. En la década de 1950 se descubrió una enzima que produce escisión en carotenoides y se encuentra presente en herbívoros, algunos carnívoros y pájaros. Sin embargo, no se sabe de ninguna enzima microbiana que tenga la capacidad de escindir con eficiencia compuestos carotenoideos. Por consiguiente, también existe la necesidad de un método mejorado para preparar productos derivados de carotenoides destinados a utilizarse como saborizantes y aromatizantes. En forma inesperada se ha encontrado que una enzima aislada de la Lepista irina, un basidiomiceto, presenta muy alto grado de conversión de sustratos carotenoideos, en particular ß,ß-caroteno y sus derivados. Otros sustratos carotenoideos susceptibles de ser convertidos por la enzima incluyen a-caroteno (ß,e-caroteno) y derivados. La ß-ionona es el principal producto de escisión del ß,ß-caroteno. En un primer aspecto, la presente invención aporta un ácido nucleico aislado que codifica un marco de lectura abierto para una oxidorreductasa para degradación de caroteno, que comprende: (a) Una secuencia de conformidad con la SEQ ID NO: 1 , ó (b) una secuencia que tiene, en orden de menor a mayor preferencia, 75 %, 80 %, 90 %, 95 % o más de identidad secuencial con la secuencia de conformidad con (a), o (c) una secuencia capaz de hibridar a la secuencia de (a) y/o (b) en condiciones severas, y/o (d) una secuencia que es complementaria a (a), (b) y/o (c). La SEQ ID NO: 1 se presenta en la Figura 1 adjunta y en el listado de secuencias. La secuencia que se muestra en la SEQ ID NO: 1 se deriva de la Lepista ¡riña. La Lepista ¡riña es un organismo que está disponible el comercialmente (CBS 458.79, Centraalbureau voor Schimmelcultures, Baam, NL). El ácido nucleico de conformidad con la SEQ ID NO: 1 comprende un marco de lectura abierto (ORF) que codifica para 361 aminoácidos. La SEQ ID NO: 2, que se presenta en la Figura 2 adjunta, muestra la correspondiente secuencia proteica. La enzima codificada es una peroxidasa polivalente que para los fines de esta especificación se denominará oxidorreductasa. Para los fines de la presente invención, "hibridar en condiciones severas", de preferencia se define como se establece en la obra Sambrook y col. "Molecular Cloning: A Laboratory Manual" (Clonación molecular: manual de laboratorio), Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989), Capítulo 1.101-1.104. De preferencia, una hibridación severa significa que después de 1 hora de lavado con 1 x SSC y 0.1 % SDS a una temperatura, en orden creciente de preferencia, de 50 °C, 55 °C, 62 °C ó 68 °C; en particular durante 1 h con 0.2 x SSC y 0.1 % SDS a una temperatura, en orden creciente de preferencia, de 50 °C, 55 °C, 62 °C ó 68 CC, aún es detectable una señal positiva de hibridación. Una secuencia de ácido nucleico que en esas condiciones se hibrida con la secuencia de ácido nucleico de conformidad con la SEQ ID NO:1 es un ácido nucleico de la presente invención. El ácido nucleico de la presente invención es preferentemente un ADN. Sin embargo, también puede ser un ARN o consistir en análogos de ácido nucleico. El ácido nucleico comprende una secuencia que tiene, en orden de menor a mayor preferencia, 75 %, 80 %, 90 %, 95 % o más identidad secuencial con la secuencia correspondiente a la SEQ ID NO:1 o las secuencias que se hibridan a ésta. La presente invención también aporta un vector que comprende la secuencia del ácido nucleico tal como se presenta en la SEQ ID NO:1 y también una célula transformada con este ácido nucleico o con este vector. Un experto en la técnica podrá elegir la cadena principal del vector que sea adecuada para insertar la secuencia de ácido nucleico de la presente invención. El vector puede ser un vector eucariote o procariote y de preferencia comprende todas las secuencias de control necesarias, como los promotores y potenciadores. Por otra parte, la invención aporta una célula transformada con una secuencia de ácido nucleico o vector de la presente invención. Otro aspecto relacionado aporta un cultivo celular que comprende las células transformadas de la invención en un medio de cultivo celular adecuado. Las células adecuadas para ser transformadas con el ácido nucleico o vector de la presente invención, son células microbianas, de preferencia, células bacterianas o fúngicas. Un aspecto al que se refiere la invención es un polipéptido codificado por el ácido nucleico de la invención de conformidad con la SEQ ID NO: 1. El polipéptido es preferentemente un polipéptido que tiene, (a) Una secuencia de aminoácido de conformidad con la SEQ ID NO: 2, (b) una secuencia de aminoácidos que tiene, en orden de menor a mayor preferencia, 70 %, 80 %, 90 % de homología con (a), y/o (c) una secuencia de aminoácidos que tiene reactividad inmunológica cruzada con (a) y/o (b). La SEQ ID NO: 2 se presenta en la Figura 2 y en el listado de secuencias. El polipéptido de la presente invención representa una oxidorreductasa capaz de convertir sustratos carotenoideos. Los sustratos carotenoideos que se pueden convertir utilizando el polipéptido de la presente invención, son compuestos que tienen la estructura básica y la cadena de carbonos que se representa en las Fórmulas generales I, II y III.

Fórmula I Fórmula I Fórmula En esta especificación las referencias a sustratos carotenoideos incluyen compuestos que tienen la estructura general de una de las Fórmulas I, II o III, también todos sus derivados hidroxilados y con grupo funcional oxo y todos los estereoisómeros que se encuentran en forma natural. Los sustratos preferidos incluyen sustratos a- y ß-carotenoides, en particular ß, ß-caroteno, a-caroteno, licopeno, capsantina, luteína, anteraxantina, violaxantina, zeaxantina, astaxantina, cantaxantina, luteoxantina, neoxantina y los respectivos apocarotenoides. La oxidorreductasa de la presente invención se caracteriza por tener un peso molecular aproximado de 50 kDa y un punto isoeléctrico aproximado de 3.75 (determinado como se describe más adelante en los ejemplos). La oxidorreductasa tiene la capacidad de escindir carotenoides asimétricamente y de este modo libera los productos de escisión deseados, en particular iononas y con mayor preferencia a- y ß-iononas. Estos productos son muy útiles como fragancias, sabores, substancias aromatizantes y aditivos para alimentos, también para cosméticos, perfumes y lo similar.

En general, es posible usar todos los productos de escisión enzimática susceptibles de obtenerse por medio de la oxidorreductasa de la presente invención. Los productos derivados de carotenoides preferidos incluyen en particular las iononas, con más preferencia a- y ß-iononas. Los ejemplos específicos preferidos de estos productos de escisión incluyen ß-ionona, dihidroactinidiolido, 2-hidroxi-2,6,6-trimetilciclohexanona, ß-ciclocitral (productos de escisión de ß-caroteno) o la cetona "grasshopper" (producto de escisión de neoxantina). Hasta ahora, ha sido necesario incluir peróxido de hidrógeno en las composiciones enzimáticas destinadas a la conversión de carotenoides. La oxidorreductasa tiene una característica inesperada que consiste en tener la capacidad de escindir carotenoides en ausencia de peróxidos. Otro aspecto de la presente invención proporciona composiciones detergentes que contienen una oxidorreductasa microbiana capaz de convertir sustratos carotenoideos. La oxidorreductasa es preferentemente la oxidorreductasa de esta invención. La enzima de la invención se puede usar en su forma silvestre en las composiciones detergentes. Como alternativa, ésta se puede desarrollar mediante ingeniería genética para adaptarse a ciertas aplicaciones detergentes, por ejemplo, mejorar la estabilidad y actividad en un amplio intervalo de pH (6 a 12), en presencia de surfactantes y/o soluciones acuosas que contienen quelatos.

Las composiciones detergentes en las que se puede incorporar la enzima de la invención, comprenden una diversidad de componentes y los niveles de incorporación dependerán de la forma física de la composición y de la naturaleza de la operación de limpieza en la que se utilizará. En efecto, las composiciones detergentes en la presente, incluyen detergentes de lavandería y también productos de limpieza para superficies duras, detergentes para lavado manual o automático de platos y utensilios. Las composiciones detergentes de la presente pueden ser líquidos, pastas, geles, barras, tabletas, rocío, espuma, polvo o gránulos. Las composiciones granulares pueden estar en forma "compacta" y las composiciones líquidas también pueden estar en forma "concentrada". Las composiciones en tableta pueden presentarse en una sola fase o en forma multifásica. Cuando se formulan como composiciones destinadas a utilizarse en métodos de lavado manual de platos y utensilios, las composiciones de la presente contienen por lo general un surfactante y de preferencia otros compuestos detergentes seleccionados a partir de compuestos poliméricos orgánicos, agentes ¡ntensificadores de espuma, iones metálicos del grupo II, disolventes, hidrótropo y enzimas adicionales. Cuando se formulan como composiciones propias para utilizarse en un método de lavado automático de platos y utensilios, las composiciones de la presente contienen por lo general un surfactante y un compuesto aditivo ablandador de agua y en forma adicional uno o más componentes detergentes preferentemente seleccionados a partir de compuestos poliméricos orgánicos, agentes blanqueadores, enzimas adicionales, supresores de espuma, dispersantes, dispersantes del jabón de cal, agentes de suspensión para la suciedad, agentes antiredepósito e inhibidores de corrosión. Las composiciones de lavandería también pueden contener agentes suavizantes como componentes detergentes adicionales. Cuando se formulan como composiciones propias para utilizarse en un método de lavado automático de platos y utensilios, las composiciones de la presente contienen por lo general un surfactante no iónico de baja espuma, un sistema de aditivo ablandador de agua y uno o más componentes detergentes preferentemente seleccionados a partir de compuestos poliméricos orgánicos, agentes blanqueadores, enzimas adicionales, supresores de espuma, dispersantes, dispersantes del jabón de cal, agentes de suspensión para la suciedad, agentes antiredepósito e inhibidores de corrosión. Las composiciones de la presente también se pueden usar como productos aditivos para detergentes en forma líquida o sólida. Estos productos aditivos tienen el propósito de complementar o reforzar el desempeño de las composiciones detergentes convencionales y se pueden agregar en cualquier etapa del proceso de limpieza. De ser necesario, la densidad de las composiciones detergentes para lavandería de la presente, varían de 400 a 1200 g/L, de preferencia 500 a 950 g/L de composición determinada a 20 °C. La forma "compacta" de las composiciones de aquí se refleja mejor por la densidad y en términos de composición, por la cantidad de sal de carga inorgánica; las sales de carga inorgánica son ingredientes convencionales de las composiciones detergentes en forma de polvo; en las composiciones detergentes convencionales, las sales de carga están presentes en cantidades considerables, por lo general 17-35 % en peso del total de la composición. En las composiciones compactas, la sal de carga está presente en cantidades que no exceden 15 % del total de la composición, de preferencia no exceden 10 %, con la máxima preferencia no exceden 5 % en peso de la composición. Las sales de carga inorgánica, tal como se definen en las composiciones presentes, se seleccionan a partir de sales de metales alcalinos y alcalinotérreos de sulfatos cloruros. Una de las sales de carga preferida es el sulfato de sodio. Las composiciones detergentes líquidas según la presente invención, también pueden estar en forma "concentrada", en cuyo caso las composiciones detergentes líquidas según la presente invención contendrán una cantidad inferior de agua en comparación con los compuestos detergentes líquidos convencionales. Por lo general y de preferencia, el contenido de agua del detergente líquido concentrado es, en orden de menor a mayor preferencia, menor de 40 %, menor de 30 %, menor de 20 % en peso de la composición detergente. Los compuestos que por lo general son adecuados para utilizarse en detergentes, se describen a continuación. Las composiciones detergentes comprenden por lo general un sistema surfactante, en el que el surfactante se puede seleccionar entre los catiónicos, no iónicos y/o aniónicos convencionales y/o mezclas de éstos.

También se consideran adecuados los surfactantes anfolíticos y/o zwitteriónicos y/o semipolares. El sistema surfactante normalmente está presente en una proporción de 0.1 % a 60 % en peso. Las proporciones de incorporación más preferidas son de 1 % a 35 % en peso, con la máxima preferencia de 1 % a 30 % en peso de las composiciones detergentes. La composición detergente pueden contener uno o más agentes blanqueadores. Los agentes blanqueadores que se pueden usar comprende los blanqueadores de compuestos de peróxido y los agentes blanqueadores halogenados. Ejemplos de blanqueadores de compuestos de peróxido son los blanqueadores "inorgánicos de perhidrato, por lo general, percarbonatos y perboratos, usados solos o en combinación con activadores de blanqueador, por ejemplo, TAED. Los ejemplos de los agentes blanqueadores hipohalitos, por ejemplo, incluyen el ácido tricloroisocianúrico y los dicloroisocianuratos sódicos y potásicos y las sulfonamidas de N-cloro y N-bromoalcano. Por lo general, estos materiales se agregan en una proporción de 0.5 a 10 % en peso del producto terminado, de preferencia 1 a 5 % en peso. También se conocen en la técnica los agentes blanqueadores distintos de los agentes blanqueadores oxigenados y pueden utilizarse en la presente invención. Un tipo de agente blanqueador no oxigenado de interés particular incluye los agentes blanqueadores fotoactivados como las ftalocianinas de aluminio, zinc sulfonado o ambas. Estos materiales se pueden depositar en el sustrato durante el proceso de lavado. La radiación luminosa en presencia de oxígeno, por ejemplo, cuando la ropa para secarse se expone a la luz del día, activa la ftalocianina de zinc sulfonada y en consecuencia, se blanquea el sustrato. En la patente de los EE.UU. núm. 4,033,718 se describe una ftalocianina de zinc preferida y un proceso de blanqueado fotoactivado. Por lo general, las composiciones detergentes contendrán aproximadamente 0.025 % a 1 .25 %, en peso, de ftalocianina de zinc sulfonada. Las composiciones detergentes de la presente también pueden contener un aditivo ablandador de agua. Para utilizarse en la presente, se considera adecuado cualquier sistema aditivo ablandador de agua convencional, incluidos los materiales de aluminosilicato, silicatos, policarboxilatos, ácido alquil o alquenilsuccínico y ácidos grasos, materiales como tetraacetato de etilendiamina, pentametilenacetato de dietilentriamina, agentes secuestrantes de iones metálicos, por ejemplo, aminopolifosfonatos, en particular, ácido etilendiaminotetrametilfosfónico y ácido dietilentriaminapentametilenfosfónico. También se pueden usar aquí los aditivos de fosfatos. Los aluminosilicatos inorgánicos, mejor conocidos como zeolitas también son adecuados para utilizarse en la presente. Las sales de aditivo ablandador de agua para detergentes normalmente se incluyen en cantidades de 5 % a 80 % en peso de la composición, de preferencia de 10 % a 70 % y lo más común de 30 % a 60 % en peso. Además de la enzima de la presente, las composiciones detergentes también contienen una o más enzimas que imparten beneficios en el desempeño de limpieza, cuidado de las telas y/o beneficios de higienización. Estas enzimas incluyen enzimas seleccionadas a partir de celulasas, hemicelulasas, peroxidasas, proteasas, glucoamilasas, amilasas, xilanasas, lipasas, fosfolipasas, esterasas, cutinasas, otras pectinasas, queratanasas, reductasas, oxidasas, fenoloxidasas, lipoxigenasas, ligninasas, pululanasas, tanasas, pentosanasas, malanasas, ß-glucanasas, arabinosidasas, hialuronidasa, condroitinasa, laccasa, pectina liasa, pectato Nasa o mezclas de éstos. Una combinación preferida es una composición detergente que tiene una mezcla de enzimas utilizadas en aplicaciones convencionales, por ejemplo, proteasa, amilasa, lipasa, cutinasa y/o celulasa junto con una o más enzimas de degradación de la pared celular vegetal. Por lo general, las enzimas se incorporan en la composición detergente en una proporción total de 0.0001 % a 2 % de enzima pura en peso de la composición detergente. Las enzimas pueden agregarse como ingredientes individuales separados (pepitas, granulados, líquidos estabilizados, etc. que contengan una enzima) o como mezclas de dos o más enzimas (por ejemplo, cogranulados). También se pueden incluir las tecnologías que brindan un tipo de beneficio para el cuidado del color. Ejemplos de estas tecnologías son los catalizadores metálicos para el mantenimiento del color. Estos catalizadores metálicos se describen en el documento EP-B-0 596 184. Los agentes para fijación de colorantes, la dispersión de poliolefina para efecto antiarrugas y una mejor absorbencia de agua, el perfume y el polímero aminofuncional, que se exponen en el documento EP-A-0 931 133, para tratamiento de cuidado del color sustantividad del perfume, son otros ejemplos de tecnologías para el cuidado del color y de las telas. Los agentes suavizantes de telas también se pueden incorporar en las composiciones detergentes según la presente invención. Estos agentes pueden ser inorgánicos u orgánicos. Los agentes suavizante inorgánicos se ilustran mediante las arcillas de esmectita expuestas en el documento GB-A-1 400 898 y en la patente de los EE.UU. núm. 5,019,292. Los agentes suavizantes de telas orgánicos incluyen las aminas terciarias insolubles en agua como las que se exponen en los documentos GB-A1 514 276 y EP-BO 01 340 y sus combinaciones con sales de amonio cuaternario C12-C14 que se exponen en los documentos EP-B-0 026 527 y EP-B-0 026 528 a las amidas disustituidas con cadenas largas como las que se exponen en el documento EP-B-0 242 919. Otros ingredientes orgánicos utilizados en los sistemas suavizantes de telas incluyen materiales de óxido de polietileno de alto peso molecular como los que se exponen en los documentos EP-A-0 299 575 y 0 313 146. Las proporciones de arcilla de esmectita por lo general se encuentran en el intervalo de 2 % a 20 %, con más preferencia de 5 % a 15 % en peso, el material se adiciona al resto de la formulación como componente de mezclado en seco. Los agentes suavizantes de telas orgánicos, como las aminas tercianas insolubles en agua o los materiales disustituidos de cadena larga, se incorporan en proporciones de 0.5 % a 5 % en peso, por lo general, de 1 % a 3 % en peso, mientras que los materiales de óxido de polietileno de alto peso molecular y los materiales catiónicos solubles en agua se adicionan en proporciones de 0.1 % a 2 %, por lo general, de 0.15 % a 1.5 % en peso. Estos materiales normalmente se agregan a la porción de la composición de secado por aspersión, aunque en algunos casos puede ser más conveniente adicionarlas como un particulado mezclado en seco o rociarlas como líquido de fusión en otros componentes sólidos de la composición. Las composiciones detergentes en la presente de manera opcional también pueden contener uno o más agentes quelantes de hierro y/o magnesio. Estos agentes quelantes se pueden escoger del grupo formado por aminocarboxilatos, aminofosfonatos, agentes quelantes aromáticos polifuncionalmente sustituidos y mezclas de éstos, todo como se define más adelante. Sin estar obligados por la teoría, se cree que el beneficio de estos materiales se debe en parte a su capacidad excepcional de eliminar iones de hierro y magnesio de las soluciones de lavado mediante la formación de quelatos solubles. En caso de utilizarse, estos agentes quelantes constituyen por lo general aproximadamente de 0.1 % a 15 % en peso de las composiciones detergentes de la presente. Con más preferencia, si se utilizan, los agentes quelantes comprenderán aproximadamente entre 0.1 % y 3.0 % en peso de las composiciones. Se pueden emplear otros componentes utilizados en las composiciones detergentes, por ejemplo, agentes de suspensión de suciedad, agentes de liberación de suciedad, abrillantadores ópticos, abrasivos, bactericidas, inhibidores de empañado, supresores de espuma, inhibidores de transferencia de colorantes, agente colorante y/o perfumes encapsulados o no encapsulados, dispersantes. Las composiciones de la invención se pueden usar básicamente en cualesquier método de lavado o de limpieza, incluidos los métodos de remojo, métodos de pretratamiento y métodos con etapas de enjuague en los cuales se puede adicionar por separado una composición auxiliar de enjuague. El proceso descrito aquí consiste en poner en contacto las telas, los platos y utensilios de mesa o cualquier otra superficie dura con una solución limpiadora en la forma acostumbrada y que se ilustra más adelante. Un método convencional de lavandería consiste en tratar una tela sucia con un líquido acuoso que tiene disuelta o dispersa una cantidad eficaz del detergente de lavandería y/o la composición para el cuidado de las telas. Un método preferido para el lavado automático de platos y utensilios consiste en tratar los artículos sucios con un líquido acuoso que tiene disuelta o dispersa una cantidad eficaz de la composición de enjuague o lavado automático de platos y utensilios de mesa. Una cantidad efectiva convencional de la composición lavatrastes para lavado automático se refiere a 8-60 g de producto disuelto o disperso en un volumen de lavado de 3-10 L. Según un método manual de lavado de platos y utensilios, los platos y utensilios sucios se ponen en contacto con una cantidad eficaz de la composición lavatrastes, por lo general, de 0.5-20 g (por 25 unidades que se tratan). Los métodos manuales preferidos para lavado de platos y utensilios incluyen la aplicación de una solución concentrada a las superficies de los platos o el remojo en grandes volúmenes de solución diluida de la composición detergente. Un método convencional para superficies duras, consiste en tratar los artículos y/o superficies duras sucias, por ejemplo, con una esponja, cepillo, tela, etc. y un líquido acuoso que tiene disuelto o disperso una cantidad eficaz del limpiador para superficies duras y/o con esta composición sin diluir. Esto también incluye el remojo de un artículo duro en una solución concentrada o en un gran volumen de solución diluida de la composición detergente. El proceso de la invención se lleva a cabo en forma muy conveniente en el transcurso del proceso de limpieza. De preferencia, el método de limpieza se lleva a cabo a una temperatura de 5 °C a 95 °C, en especial entre 10 °C y 60 °C. De preferencia, el pH de la solución de tratamiento es de 7 a 12. La oxidorreductasa de la presente invención es especialmente adecuada para la incorporación en detergentes líquidos para trabajo pesado (HDL) de pH neutro y productos limpiadores no blanqueadores. Una ventaja de la presente invención es que la oxidorreductasa es activa en ausencia de peróxidos, en particular peróxido de hidrógeno. Por lo tanto, es posible preparar composiciones detergentes de conformidad con la presente invención, que prácticamente no contengan agentes blanqueadores, en particular peróxido de hidrógeno. Por otra parte, la presente invención aporta un método para tratar manchas provenientes de carotenos, que consiste en poner en contacto el material que tiene la mancha con la oxidorreductasa de la presente invención o una composición detergente de la presente invención. De preferencia, el material manchado y la oxidorreductasa se ponen en contacto durante un período de tiempo suficiente para eliminar substancialmente la mancha. De preferencia, este método se lleva a cabo en ausencia de agentes blanqueadores, en particular peróxido de hidrógeno. Sin embargo, es posible utilizar un detergente como el que ya se describió y usar la enzima de la invención en combinación con sistemas detergentes convencionales y/o sistemas enzimáticos. Otro aspecto de la presente invención aporta un método para obtener productos derivados de caroteno a partir de un sustrato carotenoideo, que consiste en: (a) Poner en contacto en sustrato carotenoideo con la oxidorreductasa de la presente invención, y (b) incubar la mezcla de sustrato carotenoideo y la oxidorreductasa. De preferencia, la incubación se lleva a cabo durante un período de tiempo suficiente para que la oxidorreductasa escinda asimétricamente el sustrato. De preferencia el sustrato carotenoideo se emulsífica con un suríactante adecuado, por ejemplo, éster de polioxietilensorbitán (comercializado como una gama de productos con nombre comercial Tween™) y se incuba ya sea con la enzima aislada o con un sobrenadante de cultivo que contiene la enzima, en una solución regulada a un pH adecuado, de preferencia en el intervalo de 3 a 5, durante un tiempo suficiente, por lo general de 30 min. a 3 h. Los productos de escisión se pueden recuperar mediante los métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, extracción con disolventes o adsorción. La oxidorreductasa de la presente invención es activa para convertir una amplia gama de sustratos carotenoideos, en particular ß,ß-caroteno, a-caroteno, licopeno, capsantina, luteína, anteraxantina, violaxantina, zeaxantina, astaxantina, cantaxantina, luteoxantina, neoxantina y los respectivos apocarotenoides. La enzima es particularmente activa en la conversión de a-caroteno, ß,ß-caroteno, capsantina, licopeno, anteraxantina, violaxantina y neoxantina. Los productos derivados de carotenoides preferidos incluyen en particular iononas, con más preferencia a- y ß-iononas. Los productos derivados de carotenoides obtenidos por este método son útiles como fragancias y/o sabores en perfumes, cosméticos y/o alimentos. Al usar la oxidorreductasa de la presente invención, también es posible mejorar productos naturales, por ejemplo, productos alimenticios y cosméticos naturales. Por lo tanto, otro aspecto de la invención es el tratamiento de productos alimenticios naturales con la oxidorreductasa de la presente invención. Ejemplos de estos productos alimenticios naturales son extractos de frutas, vegetales, follaje, hierbas y productos naturales similares que contienen caroteno. Es posible que estos se presenten en formas más procesadas, por ejemplo, en forma de extractos, jugos, purés, pulpas o lo similar, como los que se utilizan en alimentos para bebés y otros alimentos procesados, también pueden presentarse secos, como hojas, pétalos, frutos secos, por ejemplo, los destinados a utilizarse en infusiones hierbales. El tratamiento de estos productos naturales con la oxidorreductasa dará lugar a la conversión de los carotenoides que se presentan en forma natural en esos productos, los cuales a su vez mejorarán el sabor y/o el aroma de los productos alimenticios. Una de las mayores ventajas del método de la presente invención es que se puede llevar a cabo en ausencia de cualquier substancia para la intensificación de la decoloración, específicamente en ausencia de peróxido de hidrógeno. La presente invención se describirá ahora en forma de ilustración mediante los siguientes ejemplos específicos y con referencia a las figuras adjuntas, en las cuales: Figura 1 : Representa la secuencia del ADNc de la oxidorreductasa derivada de la Lepista irina. Figura 2: Representa la secuencia de aminoácidos de la oxidorreductasa derivada de la Lepista irina en código de una letra. Figura 3: Muestra la conversión de ß,ß-caroteno con respecto al tiempo (ß- caroteno: línea punteada; ß-íonona: línea continua Figura 4: Muestra la determinación óptima de temperatura de la oxidorreductasa.

Figura 5: Representa un cromatograma de gases (cromatograma GC) de los norisoprenoides volátiles provenientes de la conversión de ß,ß-caroteno mediante la oxidorreductasa de Lepista irina. Figuras 6A y 6B: (Fig. 6A) Muestra la fotografía de una muestra de tela de referencia manchada con jugo de zanahoria y tratada con un surfactante medio disponible en el comercio (arriba) y una muestra de tela de prueba manchada con jugo de zanahoria y tratada con la oxidorreductasa de la invención y un surfactante comercial (abajo). (Fig. 6B) Presenta una fotografía de una muestra de tela de referencia manchada con jugo de zanahoria y tratada con un surfactante medio (arriba) y una muestra de tela de prueba manchada con jugo de zanahoria y tratada con 50 pl de oxidorreductasa de la invención (abajo).

Ejemplos Ejemplo 1 Aislamiento de la oxidorreductasa para conversión de caroteno, de la Lepista irina La enzima oxidorreductasa de Lepista irina se purificó a partir de geles SDS-PAGE (electroforesis en gel de dodecilsulfato de sodio y poliacrilamida) y se obtuvieron secuencias parciales de aminoácidos a partir de la degradación de Edman N-terminal y espectrometría de masas (ESI-MSMS). Los cebadores se dedujeron a partir de las secuencias parciales de aminoácidos y un fragmento 1274 bp cADN de la oxidorreductasa de Lepista irina se secuenció por medio de la estrategia de "paseo con sebador". Por optimización de las respectivas temperaturas de apareamiento, se produjeron bandas únicas de PCR (reacción en cadena de polimerasa). La estrategia de paseo con cebador así como los cebadores PCR empleados, se representan a continuación: PCR I PCR PCR IV PCR III PCR la Lambda fw 2, 6071 E: 5' CGC GCC ATT GTG TTG GTA 3' pevoxid Lipiv rev, 0690 D: 5' AGC AGT GCC TGG GAA GAG T 3' PCR IIa pevoxid Lipiv fw, 0691 D: 5' CCC CAT TGC AAG GAG AGA T 3' Lambda rev, 0064 E: 5' CGA TGT ACA TGT CGT CAA TGG 3' PCR III: perlipend fw, 3646 D: 5' TCC CTG GAT CGT AAA TGC TT 3' Lambda rev, 0064 E: 5' CGA TGT ACA TGT CGT CAA TGG 3' PCR IV: peroxid lipis middle fw, 3721 E: 5' CTC GTG CCA GAG CCT TTT 3' peroxid lipis middle rev, 3722 E: 5' GGT TCT GAA TCT TCG GTT GG 3' La secuencia ooteniaa que comprende un marco de lectura abierto (ORF) de 1083 bp, que inicia a partir de 41 está representado en la Figura 1 y la SEQ ID NO:1. El ORF codifica para una enzima de 361 aminoácidos, cuya secuencia se representa en la Figura 2 y la SEQ ID NO:2.

Ejemplo 2 Determinación del pH y temperatura óptimos y el punto isoeléctrico de la oxidorreductasa para conversión de caroteno derivada de la Lepista irina Se determinó que el pH óptimo es 3.6 y la temperatura óptima 34 °C. El resultado se muestra en la Figura 4.

El punto isoeléctrico se determinó mediante la aplicación de factores de retención (RF) de proteínas estándar contra sus valores pl.

Se usó un gel de poliacrilamida IEF (Serva, Heidelberg, Alemania) de 12.5 cm x 12.5 x 0.3 mm, que contenía un gradiente de pH inmovilizado de pH 3 a 10. Las muestras se sometieron a ultrafiltración (Ultrafree 4, valor de discriminación 10 kDa, Millipore) a 3300 g y a desalinización utilizando agua bidestilada. Se concentraron hasta obtener un contenido de proteína de 2 mg/mL Las muestras se aplicaron dos veces, lateralmente invertidas en los dos lados del gel IEF. Para detección, el gel se cortó concéntrico y cada una de las mitades se sometió a tinción de coomassie y "actividad de desteñido", respectivamente. Se mezclaron 50 mL de solución de /^-caroteno (0.01 % m/v + surfactante Tween™ 40 1 % m/v), 15 mL solución amortiguadora (7 mM ácido cítrico, 6 mM fosfato hidrogenado disódico; pH 3.5), 100 pL solución de microelementos (que contiene iones Fe-, Cu-, Zn- y Mn-) y 0.7 g de agarosa, se obtuvo un gel de agarosa color naranja de 2 mm de grosor para la prueba de desteñido. Una mitad del gel IEF se cubrió con este agar para prueba de caroteno, se fijó y se incubó a 34 °C durante 1.5 h. La fracción activa dio una mancha decolorada en el gel de prueba. La comparación de las posiciones de decoloración de la muestra y de las manchas de referencia en la mitad del gel teñido con coomassie, permitieron la determinación del punto isoeléctrico de la oxidorreductasa. Se determinó que el punto isoeléctrico para la oxidorreductasa de la presente invención es 3.75 (no se muestra).

Ejemplo 3 Determinación del peso molecular de la oxidorreductasa para conversión de caroteno, proveniente de Lepista ¡riña El peso molecular se determinó por medio de cromatografía de permeación en gel (GPC) utilizando una columna Superdex 200 HR10/30, la cual cubre el intervalo de 10-600 kDa. Se determinó que el peso molecular es aproximadamente 50 kDa (no se muestran los resultados).

Ejemplo 4 Conversión de B,3-caroteno La Figura 5 muestra un cromatograma de gases (cromatograma CG) de los norisoprenoides volátiles derivados de la conversión de ß,ß-caroteno. El medio libre de células de un cultivo de Lepista ¡riña se concentró por ultrafiltración, se mezcló con ß,ß-caroteno solubilizado y se incubó. Para la emulsificación, se disolvieron 20 mg de ß,ß-caroteno y 200 mg de surfactante Tween™ 40 ex Aldrich en diclorometano. El disolvente se destiló a presión reducida y el residuo se resuspendió en 50 ml_ de agua. Para la biotransformación, el medio de cultivo de Lepista ¡ri a libre de células, se ajustó a pH 3.5 y se amortiguó con ácido cítrico/Na2HP04 (1 :1 , v/v). Después de la adición de 25 ml_ de la emulsión de caroteno, la incubación se llevó a cabo en un agitador rotatorio a 15.7 rad/s (150 rpm) y 34 °C durante 60 min. El medio se extrajo tres veces con pentano/diclorometano (1 :1 , v/v) y la solución se concentró a un volumen final de 5 ml_. Los resultados se muestran en la Figura 5 y el Cuadro 1. Como se puede observar, el ß,ß-caroteno se convierte con alto rendimiento en norisoprenoides mediante las enzimas obtenidas a partir de Lirina.

Cuadro 1 : Ejemplo 5 Investigaciones de cinética La investigaciones de cinética sugieren un perfil de reacción rápida. La disminución de absorción en función del tiempo de una solución de prueba de ß-caroteno, se monitoreó a 450 nm por medio de un espectrofotómetro. La disminución significativa de absorción se observó rápidamente a los 2 min. después de iniciar la incubación. En los experimentos de biotransformación, después de 30 min del inicio de la incubación, se había degradado más de 90 % del ß-caroteno inicialmente adicionado. En el espectro de los productos de conversión volátiles de ß-caroteno, predominó el compuesto C13 ß-ionona (13 mol- %), indicando la escisión asimétrica (no céntrica) de la cadena principal C40 de caroteno. Otros productos de conversión de ß-caroteno fueron: 2-h¡drox¡-2,6,6-trimetilo-ciclohexanona, dihidoractinidiolido y ß-ciclocitral (GC/MS). Conforme con la formación de norisoprenoides volátiles C13, en los experimentos de LC/MS fue detectable el correspondiente apocarotenal C27. El medio libre de células de un cultivo de Lepista irína se mezcló con 2 mg de ß,ß-caroteno solubilizado y se incubó. Después de 30 min, 1 h, 2 h, 3 h y 6 h, respectivamente, la reacción se detuvo y la mezcla se extrajo. El resultado se muestra en la Figura 3. Después de 30 min, el sustrato se había convertido por completo. (- -) muestra la degradación del ß,ß-caroteno, (- -) el aumento en ß-ionona. La conversión de a-caroteno (que dio a-ionona como producto principal), capsantina y licopeno mostró la gama extremadamente amplia de sustratos para la oxidorreductasa.

Ejemplo 6 Remoción de manchas de zanahoria en muestras de telas por medio de la oxidorreductasa Preparación de la enzima: Un litro de medio de cultivo (en el 10° día de cultivo) se concentró a 80 mL por ultrafiltracion (límite de exclusión: 10 kDa). La concentración de proteína total fue de 0.6 mg/mL antes y 2.4 mg/mL después de la etapa de ultrafiltracion. El ensayo fotométrico mostró una buena actividad de -75 mU/mL. Ensayo enzimático: 0.1 mL de una solución acuosa de ß,ß-caroteno emulsificada con un éster de polioxietilensorbitán (Tween™ 40) se adicionó a 1.5 mL de medio de cultivo concentrado de Lepista ¡riña libre de células. La disminución de absorción en función del tiempo se monitoreó a 450 nm por medio de un espectrofotómetro. La actividad enzimática se puede calcular según la siguiente ecuación: \ [UmL-1] = Delta E x Vt / Vs x d x e| En donde: Delta E Disminución de absorción por minuto V, volumen total en la celda [mL] Vs volumen de muestra en la celda [mL] d grosor de la celda [cm] e coeficiente de extinción de ß,ß-caroteno (en agua) Valor experimental: (95000 L mol" 1 cm'1 , ? = 450 nm) Prueba de desempeño del lavado sobre la mancha de carotenoide: Las pruebas prelavado y de lavado posterior utilizaron un prelavado en condiciones específicas en cada uno de los siguientes medios: (1 ) 200 mL de agua semineutralizada (2) 200 mL de solución al 1 % de (solución de surfactante) Tween™ 40 en agua semineutralizada (3) 200 mL de solución de amortiguador de acetato de sodio 25 m a pH 3.5 Todas las soluciones de prueba contenían 10 ppm de enzima. Las soluciones de referencia se prepararon sin enzima. El prelavado para los tres diferentes tratamientos se llevaron a cabo a una temperatura constante de 28 °C durante 18 h aproximadamente, seguido de un tratamiento posterior. Los tratamientos (1 ) y (2) consistieron en un enjuague prolongado con agua del grifo, el tratamiento (3) consistió en un lavado posterior en detergente líquido de trabajo pesado y de acabado total al 1 % (HDL, adicionado a la solución amortiguadora de prelavado) durante 15 min a 40 °C realizado en un Washtec LaunderOmeter. Las condiciones específicas en el tratamiento de prelavado (3) son cercanas a las condiciones óptimas de la enzima segregada por Lepista ¡riña. Después del tratamiento, las telas de prueba se secaron en una secadora.

Telas de prueba: Se hicieron dos réplicas de manchas de zanahoria (3 cm / 3 cm) conforme a las especificaciones que siguen y se usaron en todos los tratamientos: 1. Algodón tejido preacondicionado (3 x 95 °C) con detergente en polvo sin blanqueador, 1 x 95 °C sin detergente, al final secado en secadora, 2. La tela preacondicionada se corta en piezas, 3. Las piezas se remojan en jugo de zanahoria Granini y se secan en secadora, 4. Se repite el paso 3, 5. La tela manchada y de coloración homogénea se corta en piezas de 3 cm / 3 cm. Prueba de Calificación Visual La evaluación se lleva a cabo en condiciones controladas de iluminación por medio de la calificación visual en "Unidades de Calificación del Panel" (Panel Score Units) [psu] de la tela de prueba en comparación con las telas de referencia asignada por graduadores expertos. Las unidades son las siguientes: 0 = El graduador no observa diferencia 1 = Los graduadores consideran que se observa una diferencia 2 = El graduador está seguro de observar una a diferencia 3 = El graduador observa una gran diferencia 4 = El graduador observa una enorme diferencia Resultados: Los tres diferentes tratamientos se aplicaron con 10 ppm de enzima (proteína total) en 200 mL de solución en el prelavado y la incubación se hizo durante aproximadamente 18 h a 28 °C sin agitación. Las calificaciones visuales comparadas con la referencia en psu se representan en el Cuadro 1 a continuación.

Cuadro 1 La prueba inicial mostró que la oxidorreductasa específica para caroteno de la presente invención tiene una acción significativa sobre las manchas de zanahoria en condiciones óptimas (amortiguador a ph 3.5 a 28 °C durante aproximadamente 18 h). El remojo prolongado en solución al 1 % de Tween™ redujo la remoción visualmente detectable de zanahoria. El remojo en agua sola no produjo ninguna acción visualmente detectable sobre la mancha. Véanse las Figuras 6A y 6B, muestras de tela superior.

Ejemplo 7 Experimentos de decoloración con manchas de zanahoria en los que se utiliza la oxidorreductasa Para el experimento de decoloración, 50 µ?_ de medio de cultivo concentrado de un cultivo de Lepista irina se aplicaron directamente a una pieza de tela manchada con zanahoria. Con el fin de asegurar una mejor biodisponibilidad, se agregó un suríactante (Tween™ 40, 1 %) en un experimento paralelo. Las muestras se incubaron a 28 °C durante 3 y 18 h, respectivamente. Después de la incubación, las muestras se enjuagaron varias veces con agua. En los experimentos de referencia, se usó agua en lugar del medio de cultivo concentrado. Todos los experimentos se realizaron con una muestra de enzima vieja como la que se utilizó en la prueba de prelavado y de lavado posterior según lo ya descrito. En esta prueba a la gota, 50 µ?_ de medio de cultivo concentrado mostraron una acción de remoción de manchas significativa en el área manchada. Por el contrario, la solución de referencia (sin enzima) no mostró remoción de manchas. Los resultados se presentan en las Figuras 6A y 6B. Las flechas muestran el punto de aplicación de la oxidorreductasa.

Ejemplo 8 Ejemplos de detergentes utilizados Los siguientes son ejemplos de detergentes. En las composiciones detergentes, las proporciones de enzimas se expresan en términos de enzima pura en peso de la composición total y a menos que se especifique de otro modo, los ingredientes del detergente se expresan en peso de la composición total. En estos ejemplos, las identificaciones abreviadas del componente tienen el siguiente significado: LAS Alquil C1 1 -13 bencensulfonato de sodio lineal TAS Alquil sulfato de sodio (alquilo derivado de sebo). CxyAS Alquil Cix - C1y su|fato de sodio- CxySAS Alquil C1 x - C1y secundario (2,3) sulfato de sodio. BASx.y Alquilsulfato de sodio ramificado en media cadena, con un promedio de x átomos de carbono, en donde un promedio de y átomos de carbono están constituidos por unidades (a) ramificadas, CxyEz alcohol primario Cix-Ciy predominantemente lineal condensado con un promedio de z moles de óxido de etileno CxyEzS Alquil C - Ciy sulfato de sodio condensado con un promedio de z moles de óxido de etileno. CxEOy Alcohol Cy con un promedio de etoxilación de y. No iónico Alcohol graso mixto etoxilado/propoxilado, por ejemplo, el Plurafac LF404 que es un alcohol con un grado de etoxilación promedio de 3.8 y un grado de propoxilación promedio de 4.5. QAS R2. +(CH3)2(C2H4OH) con R2 = C12-C14.

Alquil C14-22 disulfato de sodio con fórmula 2-R.C4H7.-1 ,4-(S04- )2 en donde R = C10-18. Ester x-sulfometílico de ácido graso C18. Alquilcarboxilato de sodio lineal derivado de una mezcla 80/20 ácidos grasos de sebo y coco Silicato de sodio amorfo (Si02:Na20 relación = 1.6-3.2:1 ). Metasilicato de sodio (Si02:Na20 relación = 1.0). Aluminosilicato de sodio hidratado con fórmula Nai2(A102Si02)i2. 27H20 con un tamaño de partícula primario en el intervalo de 0.1 a 10 micrómetros (peso expresado en base anhidra). Silicato cristalino estratificado de fórmulaó - Na2S¡205 Citrato trisódico dihidratado Ácido cítrico anhidro Carbonato de sodio anhidro Carbonato de sodio hidrogenado. Sulfato de sodio anhidro Tripolifosfato de sodio Pirofosfato tetrasódico Copolímero al azar de 4:1 acrilato/maleato, con peso molecular promedio aproximado de 70,000-80,000. Copolímero al azar de 6:4 acrilato/maleato, con peso molecular promedio aproximado de 10,000. 1 0 Polímero de poliacrilato de sodio con peso molecular promedio de 4,500. Copolímero constituido por una mezcla de monómeros carboxilados como acrilato, maleato y metacrilato con un peso molecular (PM) que varía entre 2,000 y 80,000, por ejemplo, el Sokolan de BASF, es un copolímero de ácido acrílico, PM 4,500. Propansulfonato de 3-(3,4-dihidroisoquinolinio) preparado según la preparación del Ejemplo 1 Decan-2-sulfato de 1-(3,4-dihidroisoquinolinio) preparado según la preparación del Ejemplo 2 Perborato sódico monohidrato anhidro 15 Perborato de sodio tetrahidratado de fórmula nominal NaB03.4H20 Percarbonato de sodio anhidro de fórmula nominal 2.74 Na2C03.3H202. Diacil peróxido particulado con 30 % de peróxido de dibenzoilo, 40 % de sulfato de sodio, 5 % de polímero Acusol 480N, 2 % de maltodextrina, 12 % de alcohol estearílico etoxilado y agua csp. Dilauroil peróxido de Akzo Dicloroisocianurato de sodio. Tetraacetiletilendiamina. Nonanoiloxibencensulfonato en forma de sal sódica. (6-nonamidocaproil) oxibencensulfonato. Decanoiloxibencensulfonato en forma de sal sódica. 20 Ácido dietilentriaminapentaacético Ácido 1 ,1 -hidroxietanodifosfónico Dietiltriamína penta (metilen) fosfonato, comercializado por Monsanto con el nombre comercial Dequest 2060. Ácido etilendiamino-N,N'-disuccín¡co, isómero (S,S) en forma de su sal de sodio. Quelante seleccionado entre EEDS, HEDP, DTPA, DETPMP y/o mezclas de éstos. Mn(biciclam)CI2 Manganeso 1 ,4,7-trimetilo-1 ,4,7-triazaciclononano.

Blanqueador Ftalocianina de zinc sulfonada encapsulada en polímero de fotoactivado dextrina soluble. Blanqueador Ftalocianina de aluminio sulfonada encapsulada en polímero de fotoactivado 1 dextrina soluble. PAAC Sal de pentaaminoacetato de cobalto(lll). Parafina Aceite de parafina comercializado con el nombre comercial Winog 70 de Wintershall. NaBz Benzoato de sodio. Oxidorreductasa Oxidorreductasa para degradación de caroteno proveniente de de la presente Lepista irina de conformidad con la presente invención invención Proteasa Enzima proteolítica comercializada con los nombres comerciales Savinase, Alcalase, Durazym de Novo Nordisk AIS, Maxacal, Maxapem comercializadas por Gist-Brocades y las proteasas descritas en las patentes WO91/06637 y/o WO95/10591 y/o EP 251 446. Amilasa Enzima amilolítica comercializada con el nombre comercial Purafact Ox AmR y descrita en los documentos WO 94/18314, WO96/05295 de Genencor; Termamyl®, Fungamyf y Duramyl® de Novo Nordisk AIS y las que se describen en el documento W095/26397 (comercializada con el nombre comercial Natalase de Novo Nordisk). Lipasa Enzima lipolítica comercializada con los nombres comerciales Lipolase Lipolase Ultra de Novo Nordisk AIS y Lipomax de Gist- Brocades. Celulasa Enzima celulitica comercializada con los nombres comerciales Carezyme, Celluzyme y/o Endolase de Novo Nordisk AIS. CMC Carboximetilcelulosa de sodio PVNO N-óxido de polivinilpiridina, con un peso molecular promedio de 50,000. PVPVI Copolímero de polivilpirrolidona y vinilimidazol, con un peso molecular promedio de 20,000 Abrillantador 1 4,4'-bis(2-sulfoestiril)bifenil disódico Abrillantador 2 4,4'-bis(4-anilino-6-morfolin-1.3.5-triazin-2-il)amino) estilben-2:2'- disulfonato disódico Antiespuma de Controlador de espuma de polidimetilsiloxano con copolímero de silicona siloxano-oxialquileno como agente dispersante con una proporción relativa de controlador de espuma y agente dispersante de 10:1 a 100:1 Supresores de 12 % de silicona/silíce, 18 % de alcohol estearílico, 70 % de espuma almidón en forma granulada. Espesante Poliacrilatos reticulados de alto peso molecular como el Carbopol de B.F. Goodrich Chemical Company y Polygel. SRP 1 Poliésteres amónicamente obstruidos en un extremo. QEA bis((C2H50)(C2H40)n)(CH3) -N+-C6H12-N+-(CH3) bis((C2H50)- (C2H40))n, en donde n = 20 a 30. PEGX Polietilenglicol con un peso molecular de x. PEO Óxido de polietileno, con un peso molecular promedio de 5,000.

TEPAE Tetraetilenpentamina etoxilato. BTA Benzotriazol. PH Determinada como solución al 1 % en agua destilada a 20°C.

Ejemplo 9 Las siguientes composiciones detergentes para lavandería de alta densidad y que contienen blanqueador, se prepararon de conformidad con la presente invención: I II III IV V VI Polvo soplado Zeolita A 12.0 - 15.0 12.0 - 15.0 Sulfato - 5,0 - - 5,0 - LAS 3.0 - 3.0 3.0 - 3.0 C45AS 3.0 2.0 4,0 3.0 2.0 4,0 QAS - - 1.5 - - 1 .5 DETPMP 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 CMC 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 MA/AA 1 .0 2.0 2.0 1.0 2.0 2.0 Aglomerados QAS 1 .0 - - 1.0 - - LAS - 1 1.0 7.0 - 11.0 7.0 TAS 2.0 2.0 1.0 2.0 2.0 1.0 Silicato 3.0 - 4,0 3.0 - 4,0 Zeolita A 8.0 8.0 8.0 8.0 8.0 8.0 Carbonato 8.0 8.0 4,0 8.0 8.0 4,0 Aglomerado NaSKS-6 15.0 12.0 5,0 15.0 12.0 5,0 LAS 8.0 7.0 4,0 8.0 7.0 4,0 Solución de rociado Perfume 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 C25E3 2.0 - 2.0 2.0 - 2.0 Aditivos secos QEA 1 .0 0.5 0.5 1.0 0.5 0.5 Ácido cítrico/citrato 5,0 - 2.0 5,0 - 2.0 Bicarbonato: - 3.0 - - 3.0 - Carbonato 8.0 15.0 10.0 8.0 15.0 10.0 TAED y/o/ NACA-OBS 6.0 - 5,0 6.0 - 5,0 NOBS - 2.0 - - 2.0 • ¦ - DAP 1 - - - 6.7 4,8 5,2 Catalizador 0.002 - 0.02 - 0.02 - Percarbonato o PB1 14,0 7.0 10.0 4.15 7.0 10.0 BB1 0.40 - 0.20 - - - BB2 - 0.14 - - - - Óxido de polietileno de - - 0.2 - - 0.2 PM 5,000,000 Arcilla bentonita - - 10.0 - - 10.0 Ácido cítrico 4,0 - 1 .5 4,0 - 1.5 Oxidorreductasa de la 0.001 0.02 0.01 0.001 0.02 0.01 presente invención Proteasa 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 0.033 Lipasa 0.008 0.008 0.008 0.008 0.008 0.008 Amilasa 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 Celulasa 0,0014 0,0014 0,0014 0,0014 0,0014 0,0014 Antiespuma de silicona 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 5,0 Sulfato - 3.0 - - 3.0 Densidad (g/L) 850 850 850 850 850 850 Humedad y misceláneos csp 100 % Ejemplo 10 Las siguientes composiciones detergentes de lavandería, que pueden presentarse en forma de gránulos o tabletas, se prepararon de conformidad con la presente invención. Producto base C45 AS/TAS 8.0 5,0 3.0 3.0 3.0 LAS 8.0 - 8.0 - 7.0 C25AE3S 0.5 2.0 1.0 - - C25AE5/AE3 2.0 - 5,0 2.0 2.0 QAS - - - 1.0 1.0 Zeolita A 20.0 18.0 1 1 .0 - 10.0 !-6 (I) (adición en seco) - - 9.0 - - A/AA 2.0 2.0 2.0 - - AA - - - - 4,0 Citrato - 2.0 - - - Cítrico 2.0 - 1.5 2.0 - DTPA 0.2 0.2 - - - con EDDS - - 0.5 0.1 - HEDP - - 0.2 0.1 - PB1 3.0 5,0 10.0 - 4,0 Percarbonato - - - 18.0 - NOBS 3.0 4,0 - - 4,0 NACA OBS - - 2.0 - - 1 II III IV V TAED - - 2.0 5,0 - BB1 0.06 - 0.34 - 0.14 BB2 - 0.14 - 0.20 - Catalizador - 0.001 - - 0.002 Carbonato 15.0 18.0 8.0 15.0 15.0 Sulfato 5,0 12.0 2.0 17.0 3.0 Silicato - 1.0 - - 8.0 Proteasa 0.033 0.033 0.033 0.046 0.033 Lipasa 0.008 0.008 0.008 0.008 0.006 Amilasa 0.001 0.001 0.001 0,0014 0.001 Celulasa 0,0014 0,0014 0,0014 0.01 - Oxidorreductasa de la 0.001 0.002 0.02 0.05 0.005 presente invención Menores 0.5 0.5 Perfume 0.2 0.1 Humedad y misceláneos csp 100 % Los componentes menores incluyen abrillantador / SRP1 / CMC / fotoblanqueador / MgS04 / PVPVI/ supresores de espuma /PEG.

Ejemplo 11 Los siguientes detergentes granulados se prepararon conformidad con la presente invención: 1 II III IV V VI VII VIII nulo base STPP - 22.0 - 15.0 - 22.0 - 15.0 Zeolita A 30.0 - 24.0 5,0 30.0 - 24.0 5,0 Sulfato 5.5 5,0 7.0 7.0 5.5 5,0 7.0 7.0 A/AA 3.0 - - - 3.0 - - - AA 1 ,6 2.0 - - 1 ,6 2.0 - MA/AA(1 ) - 12.0 - 6.0 - 12.0 - 6.0 LAS 14,0 10.0 9.0 20.0 14,0 10.0 9.0 20.0 C45AS 8.0 7.0 9.0 7.0 8.0 7.0 9.0 7.0 C45AE1 1 S - 1 .0 - 1.0 - 1.0 - 1.0 MES 0.5 4,0 6.0 - 0.5 4,0 6.0 - SADS 2.5 - - 1.0 2.5 - - 1.0 Silicato - 1.0 0.5 10.0 - 1.0 0.5 10.0 Jabón - 2.0 - - - 2.0 - - Abrillantador 1 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 Carbonato 6.0 9.0 8.0 10.0 6.0 9.0 8.0 10.0 PEG 4000 - 1 .0 1.5 - - 1.0 1.5 DTPA - 0.4 - - - 0.4 - - Solución de rociado C25E9 - - - 5,0 - - - 5,0 C45E7 1.0 1.0 - - 1.0 1.0 - - C23E9 - 1.0 2.5 - - 1.0 2.5 - Perfume 0.2 0.3 0.3 - 0.2 0.3 0.3 - OS secos Carbonato 5,0 10.0 13.0 8.0 5,0 10.0 13.0 8.0 PVPVI/PVNO 0.5 - 0.3 - 0.5 - 0.3 - Proteasa 0.033 0.033 0.033 .0016 0.033 0.033 0.033 .0016 Lipasa 0.008 - - 0.008 0.008 - - 0.008 Amilasa .0016 - - .0016 .0016 - - .0016 Celulasa .0002 .0005 .0005 .0002 .0002 .0005 .0005 .ooo: Oxidorreductasa 0.001 0.02 0.03 0.015 0.001 0.02 0.03 0.01 ! de la presente invención DTPA 0.5 0.3 0.5 1 .0 0.5 0.3 0.5 1.0 PB1 5 3.0 10 4,0 5 3.0 10 4,0 DAP 1 - - - - 3.8 6.7 4.3 3.2 Catalizador 0.001 - - 0.002 - 0.001 - - BB1 0.2 - - 0.5 - - - - BB2 - 0.3 0.4 - - - - - NOBS/ TAED 0.5 0.3 0.5 0.6 0.5 0.3 0.5 0.6 Sulfato 4,0 5,0 - 5,0 4,0 5,0 - 5,0 SRP1 - 0.4 - - - 0.4 - - Supresor de - 0.5 - - - 0.5 - - espuma moteado 0.9 - 2.7 1.2 0.9 - 2.7 1.2 Humedad y misceláneos csp 100 % Ejemplo 12 Las siguientes composiciones detergentes de lavandería prepararon de conformidad con la presente invención: 1 II III IV V VI VII VIII LAS 13.3 13.7 10.4 8.0 13.3 13.7 10.4 8.0 C45AS 3.9 4,0 4.5 3.9 4,0 4.5 (2.5 (2.5 °C) °C) C45 E0.5S 2.0 2.0 - - 2.0 2.0 - - C45 E3S - - - - - - - - C45E6.5S 0.5 0.5 0.5 5,0 0.5 0.5 0.5 5,0 Sal de alquil 1.0 - - 0.5 1.0 - - 0.5 dimetil hidroxietll NH4 cuaternario Ácido graso 0.5 - - - 0.5 - - - de sebo Alcohol - 1.0 0.3 - - 1.0 0.3 etoxilado (50) de sebo STPP - 41.0 - 20.0 - 41.0 - 20.I Zeolita A 26.3 - 21 .3 1 .0 26.3 - 21 .3 1 .0 Carbonato 23.9 12.4 25.2 17.0 23.9 12.4 25.2 17.1 Poliacrilato 3,4 0.0 2.7 - 3,4 0.0 2.7 - de sodio (45 %) A/AA - - 1 .0 1 .5 - - 1.0 1.5 Silicato 2.4 6.4 2.1 6.0 2.4 6.4 2.1 6.0 (relación 1 :6) Sulfato 10.5 10.9 8.2 15.0 10.5 10.9 8.2 15.0 PB1 1 .0 1.0 1.0 2.0 1.0 1 .0 1.0 2.0 PEG PM 1 .7 0.4 1.0 - 1.7 0.4 1.0 - 4000 (50 %) CMC 1 .0 - - 0.3 1.0 - - 0.3 Cítrico - - 3.0 - - - 3.0 - BB1 1 .0 0.5 0.6 - - - - - BB2 - 0.2 - 1 .0 - - - - DAP 1 - - - - 2.0 2.1 3,4 2.1 NOBS/ 0 2 0.5 0.5 0.1 - - - - DOBS TAED 0.6 0.5 0.4 0.3 - - - - SRP 1 1 .5 - - - 1.5 - - - SRP2 - 1.5 1 .0 1.0 - 1.5 1.0 1.0 Humedad 7.5 3.1 6.1 7.3 7.5 3.1 6.1 7.3 (1 .7 (1.7 °C) °C) Sulfato de - - - 1.0 - - - 1.0 Mn Quelante - - - 0.5 - - - 0.5 moteado 0.5 1.0 3.0 0.5 0.5 1.0 3.0 0.5 Proteasa 0.033 0.033 0.033 0.046 0.033 0.033 0.033 0.046 Lipasa 0.008 0.008 0.008 0.008 0.008 0.008 0.008 0.008 Amilasa 0.001 0.001 0.001 .0014 0.001 0.001 0.001 .0014 Celulasa .0014 .0014 .0014 0.01 .0014 .0014 .0014 0.01 Oxidorreduct 0.001 0.01 0.005 0.002 0.001 0.01 0.005 0.002 asa de la presente invención Menores 1 .0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1 .0 1.0 Ejemplo 13 Las siguientes composiciones detergentes granuladas para telas, las cuales imparten "suavidad a través del lavado", se prepararon de conformidad con la presente invención: I II III IV C45AS - 10.0 - 10.0 LAS 7.6 - 7.6 C68AS 1.3 - 1 .3 C45E7 4,0 - 4,0 C25E3 - 5,0 - 5,0 Cloruro de alquil (derivado de coco)-dimet¡lhidrox¡ 1 .4 1.0 1 .4 1.0 etilamonio Citrato 5,0 3.0 5,0 3.0 Na-SKS-6 - 1 1.0 - 1 1.0 Zeolita A 15.0 15.0 15.0 15.0 MA/AA 4,0 4,0 4,0 4,0 DETPMP 0.4 0.4 0.4 0.4 DAP 1 4,8 6.7 - - Catalizador - - 0.001 0.001 Percarbonato - - - 15.0 PB1 - - 15.0 - TAED - - 5,0 5,0 Arcilla de esmectita 10.0 10.0 10.0 10.0 H WPEO - 0.1 - 0.1 Oxidorreductasa de la presente invención 0.001 0.01 0.001 0.01 Proteasa 0.02 0.01 0.02 0.01 Lipasa 0.02 0.01 0.02 0.01 Amilasa 0.03 0.005 0.03 0.005 Celulasa 0.001 - 0.001 - Silicato 3.0 5,0 3.0 5,0 Carbonato 10.0 10.0 10.0 10.0 Supresores de espuma 1 .0 4,0 1.0 4,0 CMC 0.2 0.1 0.2 0.1 Misceláneos y componentes menores csp 100 % Ejemplo 14 Las siguientes formulaciones detergentes líquidas se prepararon de conformidad con la presente invención (las proporciones se dan en partes por peso, la enzima se expresa como enzima pura): 1 II III IV V LAS 1 1.5 9.0 - 4,0 - C25E2.5S - 3.0 18.0 - 16.0 C45E2.25S 1 1 .5 3.0 - 16.0 - C23E9 - 3.0 2.0 2.0 1.0 C23E7 3.2 - - - - CFAA - - 5,0 - 3.0 TPKFA 2.0 - 2.0 0.5 2.0 Cítrico (50 %) 6.5 1 .0 2.5 4,0 2.5 Formiato de calcio 0.1 0.06 0.1 - - Formiato de Na 0.5 0.06 0.1 0.05 0.05 SCS 4,0 1 .0 3.0 1 .2 - Borato 0.6 - 3.0 2.0 3.0 Hidróxido de Na 6.0 2.0 3.5 4,0 3.0 Etanol 2.0 1.0 4,0 4,0 3.0 1 ,2-propanodiol 3.0 2.0 8.0 8.0 5,0 Monoetanolamina 3.0 1.5 1 .0 2.5 1.0 TEPAE 2.0 - 1 .0 1.0 1.0 Catalizador 0.01 0.01 0.005 0.005 0.1 Oxidorreductasa de la presente invención 0.001 0.002 0.01 0.01 0.005 Proteasa 0.03 0.01 0.03 0.02 0.02 Lipasa - - 0.002 - - Amilasa - - - 0.002 - Celulasa - - 0.0002 0.0005 0.0001 SRP 1 0.2 - 0.1 - - DTPA - - 0.3 - - PVNO - - 0.3 - 0.2 Abrillantador 1 0.2 0.07 0.1 - - Antiespuma de silicona 0.04 0.02 0.1 0.1 0.1 Misceláneos y agua Ejemplo 15 Las siguientes composiciones detergentes en barra para lavandería, se prepararon de conformidad con la presente invención (las proporciones se dan en partes por peso, la enzima se expresa como enzima pura): I II III VI V III VI V LAS - - 19.0 15.0 21.0 6.75 8.8 - C28AS 30.0 13.5 - - - 15.7 1 1 .2 22.5 <J Laurato de Na 2.5 9.0 Zeolita A 2.0 1.25 - - - 1.25 1.25 1.25 Carbonato 20.0 3.0 13.0 8 0 10.0 15.0 15.0 10.0 Carbonato de calcio 27.5 39.0 35.0 - - 40.0 - 40.0 Sulfato 5.0 5,0 3.0 5,0 3.0 - - 5,0 TSPP 5,0 - - - - 5,0 2.5 - STPP 5,0 15.0 10.0 - - 7.0 8.0 10.0 Arcilla bentonita - 10.0 - - 5,0 - - - DETPMP - 0.7 0.6 - 0.6 0.7 0.7 0.7 CMC - 1.0 1 .0 1.0 1.0 - - 1 .0 Talco - - 10.0 15.0 10.0 - - - Silicato - - 4,0 5,0 3.0 - - - PVNO 0.02 0.03 - 0.01 - 0.02 - - MA/AA 0.4 1.0 - - 0.2 0.4 0.5 0.4 SRP 1 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 Oxidorreductasa de la 0.01 0.00 0.00 0.02 0.02 0.00 0.01 0.01 presente invención 1 5 1 Amilasa 0.01 - - - 0.00 2 Proteasa - 0.00 - 0.00 0.00 - - 0.00 4 3 3 3 Lipasa - 0.00 - 0.00 - - - - 2 2 Celulasa - .000 - .000 .000 - - 3 3 2 Catalizador 1 .0 5,0 0.1 3.0 10.0 1.0 0.3 1.0 PEO - 0.2 - 0.2 0.3 - - 0.3 Perfume 1.0 0.5 0.3 0.2 0.4 - - 0.4 Sulfato de magnesio - - 3.0 3.0 3.0 - - - Abrillantador 0.15 0.1 0.15 - - - - 0.1 Blanqueador fotoactivado - 15.0 15.0 15.0 15.0 - - 15.0 (ppm) Ejemplo 16 Las siguientes composiciones detergentes en barra para lavandería, se prepararon de conformidad con la presente invención (las proporciones se dan en partes por peso, la enzima se expresa como enzima pura): 1 1! III IV V VI VII VIII LAS - - 19.0 15.0 21 .0 6.75 8.8 - C28AS 30.0 13.5 - - - 15.75 11 .2 22.5 Laurato de sodio 2.5 9.0 - - - - - - Zeolita A 2.0 1.25 - - - 1.25 1.25 1 .25 Carbonato 8.0 3.0 1.0 8.0 10.0 15.0 3.0 10.0 Carbonato de calcio 27.5 27.0 35.0 - - 28.0 - 28.0 Sulfato 5.0 5,0 3.0 5,0 3.0 - - 5,0 TSPP 5,0 - - - - 5,0 2.5 - STPP 5,0 15.0 10.0 - - 7.0 8.0 10.0 Arcilla bentonita - 10.0 - - 5,0 - - - DETPMP - 0.7 0.6 - 0.6 0.7 0.7 0.7 CMC - 1 .0 1 .0 1.0 1 .0 - - 1 .0 Talco - - 10.0 15.0 10.0 - - - Silicato - - 4,0 5,0 3.0 - - - PVNO 0.02 0.03 - 0.01 - 0.02 - - MA/AA 0.4 1.0 - - 0.2 0.4 0.5 0.4 SRP 1 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 Oxidorreductasa de la 0.01 0.001 0.005 0.02 0.02 0.1 0.01 0.01 presente invención Amilasa - - 0.01 - - - 0.002 - Proteasa - 0.004 - 0.003 0.003 - - o.oo; Lipasa - 0.002 - 0.002 - - - - Celulasa - .0003 - - .0003 .0002 - - PEO - 0.2 - 0.2 0.3 - - 0.3 Perfume 1 .0 0.5 0.3 0.2 0.4 - - 0.4 Sulfato de magnesio - - 3.0 3.0 3.0 - - - Abrillantador 0.15 0.1 0.15 - - - - 0.1 Catalizador 0.001 - - 0.001 - - - - BB1 0.2 0.2 0.3 - - 0.4 - - BB2 - - - 0.4 0.5 - 0.45 0.3 TAED 1.7 1.7 1 .7 1 .7 1.7 1.7 1 .7 1.7 PB4 12.0 12.0 12.0 12.0 12.0 12.0 12.0 12.0 NOBS 0.2 0.2 0.2 0.20 0.2 0.2 0.2 0.2 Blanqueador - 15.0 15.0 15.0 15.0 - - 15.0 fotoactivado (ppm) Ejemplo 17 Las siguientes composiciones detergentes lavatrastes pactas y de alta densidad (0.96 Kg/L), se prepararon de conformidad con la presente invención: I II III IV V VI STPP - 51.0 51.0 - - 44.3 Citrato 17.0 - - 50.0 40.2 - Carbonato 17.5 14,0 20.0 - 8.0 33.6 Bicarbonato: - - - 26.0 - - Silicato 15.0 15.0 8.0 - 25.0 3.6 Metasilicato 2.5 4.5 (2.5 4.5 (2.5 - - - °C) °C) PB1 10.0 8.0 8.0 - - - PB4 - - - 10.0 - - Percarbonato - - - - 1 1.8 4,8 BB1 - 0.1 0.1 - 0.5 - BB2 0.2 0.05 - 0.1 - 0.6 No iónico 2.0 1 .5 1.5 3.0 1.9 5.9 TAED 2.0 - - 4,0 - 1.4 HEDP 1.0 - - - - - DETPMP 0.6 - - - - - MnTACN - - - - 0.01 - PAAC - 0.01 0.01 - - - Parafina 0.5 0.4 0.4 0.6 - - Oxidorreductasa de la 0.04 0.1 0.03 0.5 0.005 0.005 presente invención Proteasa 0.072 0.053 0.053 0.026 0.059 0.01 Amilasa 0.012 0 012 0.012 0,021 0,021 0.006 Lipasa - 0.001 - 0.005 - - BTA 0.3 0.2 0.2 0.3 0.3 0.3 Policarboxilato 6.0 - - - 4,0 0.9 Perfume 0.2 0.1 0.1 0.2 0.2 0.2 PH 1 1.0 11.0 11.3 9.6 10.8 10.9 Misceláneos, sulfato y agua csp 100 % Ejemplo 18 Las siguientes composiciones detergentes en tableta, se prepararon de conformidad con la presente invención, mediante compresión de una composición lavatrastes granulada a una presión de 13 KN/cm2 ndo una prensa de cabezal giratorio 12 estándar: 1 II III IV V VI VII VIII STPP - 48.8 54.7 38.2 - 52.4 56.1 36.0 Citrato 20.0 - - - 35.9 - - - Carbonato 20.0 5,0 14,0 15,4 8.0 23.0 20.0 28.0 Silicato 15.0 14.8 15.0 12.6 23.4 2.9 4.3 4.2 Oxidorreductasa 0.001 0.001 0.01 0.004 0.02 0.02 0.001 0.005 de la presente invención Proteasa 0,042 0.072 0,042 0.031 0.052 0.023 0.023 0.029 Amilasa 0.012 0.012 0.012 0.007 0.015 0.003 0.017 0.002 Lipasa 0.005 - - - - - - - PB1 14.3 7.8 1 1.7 12.2 - - 6.7 8.5 PB4 - - - - 22.8 - 3,4 - Percarbonato - - - - - 10.4 - - BB1 0.2 - 0.5 - 0.3 0.2 - - BB2 - 0.2 - 0.5 - - 0.1 0.2 No iónico 1.5 2.0 2.0 2.2 1.0 4.2 4,0 6.5 PAAC - - 0.02 0.009 - - - - MnTACN - - - - 0.007 - - - TAED 2.7 2.4 - - - 2.1 0.7 1 ,6 HEDP 1.0 - - 0.9 - 0.4 0.2 - DETPMP 0.7 '- - - - - - - Parafina 0.4 0.5 0.5 0.5 - - 0.5 - BTA 0.2 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 - Policarboxilato 4,0 - - - 4.9 0.6 0.8 - PEG - - - - - 2.0 - 2.0 Glicerol - - - - - 0.4 - 0.5 Perfume - - - 0.05 0.2 0.2 0.2 0.2 Peso por tableta 20g 25 g 20g 30g 18g 20g 25 g 24g PH 10.7 10.6 10.7 10.7 10.9 1 1.2 1 1.0 10.8 Misceláneos, sulfato y agua csp 100 % Ejemplo 19 Las siguientes composiciones detergentes lavatrastes compactas y de alta densidad (0.96 Kg/L), se prepararon de conformidad con la presente invención: I II III IV V VI STPP - 51 .0 51 .0 - - 44.3 Citrato 17.0 - - 50.0 40.2 - Carbonato 17.5 14,0 20.0 - 8.0 33.6 Bicarbonato: - - - 26.0 - - Silicato 15.0 15.0 8.0 - 25.0 3.6 Metasilicato 2.5 4.5 (2.5 4.5 (2.5 - - - °C) °C) PB1 10.0 8.0 8.0 - - - PB4 - - - 10.0 - - Percarbonato - - - - 1 1.8 4,8 No iónico 2.0 1.5 1 .5 3.0 1 .9 5.9 DAP 1 0.2 1 .0 4.3 6.7 1 .7 0.3 TAED 2.0 - - 4,0 - 1 .4 HEDP 1 .0 - - - - - DETPMP 0.6 - - - - - MnTACN - - - - 0.01 - PAAC - 0.01 0.01 - - - Parafina 0.5 0.4 0.4 0.6 - - Oxidorreductasa de 0.04 0.001 0.03 0.005 0.005 0.005 la presente invención Proteasa 0.072 0.053 0.053 0.026 0.059 0.01 Amilasa 0.012 0.012 0.012 0,021 0,021 0.006 Lipasa - 0.001 - 0.005 - - BTA 0.3 0.2 0.2 0.3 0 3 0.3 Policarboxilato 6.0 - - - 4,0 0.9 Perfume 0.2 0.1 0.1 0.2 0.2 0.2 PH 1 1 .0 1 1.0 1 1 .3 9.6 10.8 10.9 Misceláneos, sulfato y agua csp 100 % Ejemplo 20 Las siguientes composiciones detergentes en tableta, se prepararon de conformidad con la presente invención, mediante compresión de una composición lavatrastes granulada a una presión de 13 KN/cm2 utilizando una prensa de cabezal giratorio 12 estándar: 1 II III IV V VI VII VIII STPP - 48.8 54.7 38.2 - 52.4 56.1 36.0 Citrato 20.0 - - - 35.9 - - - Carbonato 20.0 5,0 14,0 15.4 8.0 23.0 20.0 28.0 Silicato 15.0 14.8 15.0 12.6 23.4 2.9 4.3 4.2 Oxidorreductasa de 0.1 0.001 0.01 0.4 0.02 0.02 0.1 0.005 la presente invención Proteasa 0,042 0.072 0,042 0.031 0.052 0.023 0.023 0.029 Amilasa 0.012 0.012 0.012 0.007 0.015 0.003 0.017 0.002 Lipasa 0.005 - - - - - - - PB1 14.3 7.8 1 1 .7 12.2 - - 6.7 8.5 PB4 - - - - 22.8 - 3,4 - Perca rbonato - - - - - 10.4 - - DAP 1 0.6 0.8 1.0 1.2 1.1 0.8 0.5 1 .4 No iónico 1 .5 2.0 2.0 2.2 1.0 4.2 4,0 6.5 PAAC - - 0.02 0.009 - - - - MnTACN - - - - 0.007 - - - TAED 2.7 2.4 - - - 2.1 0.7 1 ,6 HEDP 1.0 - - 0.9 - 0.4 0.2 - DETPMP 0.7 - - - - - - - Parafina 0.4 0.5 0.5 0.5 - - 0.5 - BTA 0.2 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 - Policarboxilato 4.0 - - - 4.9 0.6 0.8 - PEG - - - - - 2.0 - 2.0 Glicerol - - - - - 0.4 - 0.5 Perfume - - - 0.05 0.2 0.2 0.2 0.2 Peso por tableta 20g 25 g 20g 30g 18g 20g 25 g 24g PH 10.7 10.6 10.7 10.7 10.9 1 1.2 11.0 10.8 Misceláneos, sulfato y agua csp 100 % Ejemplo 21 Las siguientes composiciones detergentes lavatrastes pactas y de alta densidad (0.96 Kg/L), se prepararon de conformidad con la presente invención: 1 II III IV V VI STPP - 51.0 51 .0 - - 44.3 Citrato 17.0 - - 50.0 40.2 - Carbonato 17.5 14,0 20.0 - 8.0 33.6 Bicarbonato: - - - 26.0 - - Silicato 15.0 15.0 8.0 - 25.0 3.6 Metasilicato 2.5 4.5 (2.5 4.5 (2.5 - - - °C) °C) Catalizador 0.01 0.005 0.1 2.0 0.01 0.005 PB1 10.0 8.0 8.0 - - - PB4 - - - 10.0 - - Percarbonato - - - - 1 1.8 4,8 No iónico 2.0 1.5 1.5 3.0 1.9 5.9 TAED 2.0 - - 4,0 - 1.4 HEDP 1.0 - - - - - DETPMP 0.6 - - - - - PAAC - 0.01 0.01 - - - Parafina 0.5 0.4 0.4 0.6 - - Oxidorreductasa de la 0.04 0.001 0.03 0.005 0.005 0.005 presente invención Proteasa 0.072 0.053 0.053 0.026 0.059 0.01 Amilasa 0.012 0.012 0.012 0,021 0,021 0.006 Lipasa - 0.001 - 0.005 - - BTA 0.3 0.2 0.2 0.3 0.3 0.3 Policarboxilato 6.0 - - - 4,0 0.9 Perfume 0.2 0.1 0.1 0.2 0.2 0.2 PH 11.0 1 1.0 1 1.3 9.6 10.8 10.9 Misceláneos, sulfato y agua csp 100 % Ejemplo 22 Las siguientes composiciones detergentes en tableta, se prepararon de conformidad con la presente invención, mediante compresión de una composición lavatrastes granulada a una presión de 13 KN/cm2 utilizando una prensa de cabezal giratorio 12 estándar: 1 II III IV V VI VII VIII STPP - 48.8 54.7 38.2 - 52.4 56.1 36.0 Citrato 20.0 - - - 35.9 - - - Carbonato 20.0 5,0 14,0 15,4 8.0 23.0 20.0 28.0 Silicato 15.0 14.8 15.0 12.6 23.4 2.9 4.3 4.2 Oxidorreductasa de la 0.001 0.001 0.01 0.004 0.02 0.02 0.001 0.005 presente invención Proteasa 0,042 0.072 0,042 0.031 0.052 0.023 0.023 0.029 Amilasa 0.012 0.012 0.012 0.007 0.015 0.003 0.017 0.002 Lipasa 0.005 - - - - - - - Catalizador 0.001 0.003 0.05 0.001 0.001 0.003 0.01 0.001 PB1 14.3 7.8 11 .7 12.2 - - 6.7 8.5 PB4 - - - - 22.8 - 3,4 - Percarbonato - - - - - 10.4 - - No iónico 1 .5 2.0 2.0 2.2 1 .0 4.2 4,0 6.5 PAAC - - 0.02 0.009 - - - - TAED 2.7 2.4 - - - 2.1 0.7 1 ,6 HEDP 1 .0 . - - 0.9 - 0.4 0.2 - DETPMP 0.7 - - - - - - Parafina 0.4 0.5 0.5 0.5 - - 0.5 - BTA 0.2 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 - Policarboxilato 4,0 - - - 4.9 0.6 0.8 - PEG - - - - - 2.0 - 2.0 Glicerol - - - - - 0.4 - 0.5 Perfume - - - 0.05 0.2 0.2 0.2 0.2 Peso por tableta 20g 25 g 20g 30g 18g 20g 25 g 24g pH 10.7 10.6 10.7 10.7 10 9 11 .2 1 1 .0 10.8 Misceláneos, sulfato y agua csp 100 % Ejemplo 23 Las siguientes composiciones auxiliares de enjuague líquidas, se prepararon de conformidad con la presente invención: 1 II III IV Oxidorreductasa de la presente invención 0.001 0.0005 0.01 0.001 Catalizador 0.1 0.01 0.008 0.001 No iónico 10.0 13 6 62.3 60.0 Propilenglicol - - 5,0 5.5 Cítrico 3.5 4.6 - - SCS 10.0 7.7 - - pH del líquido 3.0 2.5 7,2 7,2 Misceláneos, disolvente y agua csp 100 % Ejemplo 24 Las siguientes tabletas lavatrastes para lavado automático, se prepararon de conformidad con la presente invención (se expresan en g de materia prima y las enzimas en términos de enzima pura): I II III IV V VI STPP 9.6 9.6 10.6 9.6 9.6 10.6 Silicato 0.5 0.7 2.9 0.5 0.7 2.9 SKS-6 1 .5 1.5 - 1 .5 1.5 - Carbonato 2.3 2.7 2.8 2.3 2.7 2.8 HEDP 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 PB1 2.4 2.4 2.8 2.4 2.4 2.8 PAAC 0.002 0.002 - - - - Catalizador 0.002 0.002 BB1 0.2 0.5 - DAP 1 - - 0.5 - - 0.2 Amilasa 0.1 0.1 0.001 0.1 0.1 0.001 Proteasa 0.06 0.06 0.002 0.06 0.06 0.002 No iónico 0.4 0.8 0.4 0.4 0.8 0.4 PEG 6000 0.4 0.26 - 0.4 0.26 - BTA 0.04 0.04 0.06 0.04 0.04 0.06 Parafina 0.1 0.10 0.1 0.1 0.10 0.1 Perfume 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 0.02 Total 17.7g 18.5 g 20.1 g 17.7 g 18.5 g 20.1 g Fase 2 Oxidorreductasa de la 0.005 0.5 0.2 0.005 0.5 0.2 presente invención Amilasa 0.003 0.003 0.004 0.003 0.003 0.004 Proteasa 0.01 0.009 0.01 0.01 0.009 0.01 Ácido cítrico 0.3 - 0.6 0.3 - 0.6 Ácido sulfámico - 0.3 - - 0.3 - Bicarbonato: 1.1 0.4 0.6 1 .1 0.4 0.6 Carbonato - 0.5 - - 0.5 - Triacetina - - 1.2 - - 1.2 CaClz - 0.07 0.1 - 0.07 0.1 PEG 6000 - - 1 .2 - - 1.2 PEG 3000 0.06 0.06 - 0.06 0.06 - Total 2.05g 2.50g 23.6 g 2.05g 2.50g 23.6 g Las composiciones en la Tableta I y II se preparan de la siguiente manera. La composición activa detergente de la fase 1 se prepara mezclando los componentes granulares y líquidos y luego se pasa por la matriz de una prensa rotatoria convencional. La prensa incluye un troquel con la forma adecuada para formar un molde. La sección transversal de la matriz es aproximadamente de 30 x 38 mm. Luego, la composición se somete a una fuerza de compresión de 940 kg/cm2 y el troquel se eleva exponiendo la primera fase de la tableta que contiene el molde en su superficie superior. La composición activa detergente de la fase 2 se prepara de manera similar y se pasa por la matriz. La composición activa particulada se somete luego a una fuerza de compresión de 170 kg/cm2, el troquel se eleva y la tableta multifásica se expulsa de la prensa de tableteado. Las tabletas resultantes se disuelven o desintegran en una lavadora automática tal como se describió antes, en los primeros 12 min, la fase 2 de las tabletas se disuelve en los primeros 5 min. Las tabletas muestran una resistencia mejorada, en especial durante períodos prolongados de almacenamiento y también excelentes características de disolución. La composición en tableta III se preparó de la siguiente manera: la porción comprimida se preparó alimentando la composición de componentes activos del detergente a la cavidad de un troquel de prensa de tableteado rotatoria modificada y comprimiendo la composición a una presión de 940 kg/cm2. La prensa de tableteado modificada produce una tableta cuando la porción comprimida tiene un molde. Para los fines del Ejemplo III, la porción no comprimida está en forma de particulado. La porción no comprimida se suministra con precisión al molde de la porción comprimida por medio de un alimentador de boquilla. La porción no comprimida se adhiere a la porción comprimida al recubrir la porción no comprimida con una capa de recubrimiento que hace contacto con la porción comprimida.

LISTA DE SECUENCIAS <110> The Procter & Gamble Company <120> Una oxidorreductasa microbiana <130> EPO02447168.2 <140> EPO02447168.2 <160> 2 <170> Patentln versión 3.1 <210> 1 <211 > 1274 <212> DNA <213> Lepista irina <400> 1 ggatccggcc attatggccg gggaagatcc ccagtcttac aacccactgc aatgtctt te 60 aagacgctct ccgctctcgc gcttgcgctc ggcgccgccg tccagttcgc gagtgctg ct 120 gtgcctctcg tccagaaacg cgcaacügc gccgacggac gcaccaccgc aaatgctg ca 80 tgttgcgttc tgttccccat cctcgatgac atecaagaaa acctcttcga cggtgccc ag 240 tgtggagaag aggtacacga gtcccttcgt ttgactttcc acgatgcaat cggtttct ct 300 cctactttag gcggaggagg agctgacggt tccatcatcg cgttcgacac cattgaga ct 360 aatttccccg ccaatgctgg catcgatgaa atcgtcagcg ctcagaagcc attcgtgg ct 420 aaacacaaca tctccgccgg cgacttcatt caatttgctg gcgccgttgg agtctcca ac 480 tgccctggtg gtgtcaggat tcctttcttc ttgggtcgcc cggatgccgt ggcggcct cc 540 ccggaccacc tcgtgccaga gccttttgat tctgttgaca ccattcttgc cagaatgg gt 600 gacgcaggct tcagtcccgt cgaggttgtt tggctcctgg cttcgcactc cattgccg ct 660 gccgacaagg ttgacccatc gattcctgga acgccattcg attcaacccc cggagttt tt 720 gattctcaat tcttcatcga aacgcaactt aaaggcaaac tcttcccagg cactgctg ac 780 aacaagggag aagcccaatc tccattgcaa ggagagatca ggcttcagtc cgatcact tg 840 ttggctagag acccccagac tgcctgtgaa tggcagtcca tggttaacaa ccaaccga ag 900 attcagaacc gtttcgctgc taccatgtcg aagatggctc ttcttggcca agacaaga cc 960 aaattgattg actgttctga tgttatcccc acccctcctg cccttgtcgg agcggccc ac 1020 ttgccggcgg gattttctct tagcgatgta gagcaagcgt gcgccgagac ccctttcc ct 1080 gctcttactg ctgacccagg cccagtaacc tctgtccctc ccgtccctgg atcgtaaa tg 1140 cttcgatacc tgaatatgct cgttctgctg cgctgaattt ccaacttttg ccattggg te 1200 tgtattcgat tctagatgtt tgtgatatca actgtgtata aatgatcttt tgaaatat ac 1260 ttttttctgc ggag 1274 <210> 2 <211 > 360 <212> PRT <213> Lepista irina <400> 2 Met Ser Phe Lys Thr Leu Ser Ala Leu Ala Leu Ala Leu Gly Ala Ala 1 5 10 15 Val GIn Phe Ala Ser Ala Ala Val Pro Leu val GIn Lys Arg Ala Thr 20 25 30 Cys Ala Asp Gly Arg Thr Thr Ala Asn Ala Ala Cys Cys Val Leu Phe 35 40 45 Pro lie Leu Asp Asp lie GIn Glu Asn Leu Phe Asp Gly Ala GIn Cys 50 55 60 Gly Glu Glu Val His Glu Ser Leu Arg Leu Thr Phe His Asp Ala lie 65 70 75 80 Gly Phe Ser Pro Thr Leu Gly Gly Gly Gly Ala Asp Gly Ser He He 85 90 95 Ala Phe Asp Thr lie Glu Thr Asn Phe Pro Ala Asn Ala Gly lie Asp IO0 105 110 Glu He Val Ser Ala GIn Lys Pro Phe Val Ala Lys His Asn He Ser 115 120 125 Ala Gly Asp Phe lie GIn Phe Ala Gly Ala Val Gly Val Ser Asn Cys 130 135 140 Pro Gly Gly Val Arg lie Pro Phe Phe Leu Gly Arg Pro Asp Ala Val 145 150 155 160 Ala Ala Ser Pro Asp His Leu Val Pro Glu Pro Phe Asp Ser Val Asp 165 170 175 Thr lie Leu Ala Arg Met Gly Asp Ala Gly Phe Ser Pro Val Glu Val 180 185 190 Val Trp Leu Leu Ala Ser His Ser He Ala Ala Ala Asp Lys Val Asp 195 200 205 Pro Ser lie Pro Gly Thr Pro Phe Asp Ser Thr Pro Gly Val Phe Asp 210 215 220 Ser Gln Phe Phe He Glu Thr Gln Leu Lys Gly Lys Leu Phe Pro Gly 225 230 235 240 Thr Ala Asp Asn Lys Gly Glu Ala Gln Ser Pro Leu Gln Gly Glu lie 245 250 255 Arg Leu Gln Ser Asp His Leu Leu Ala Arg Asp Pro Gln Thr Ala Cys 260 265 270 Glu Trp Gln Ser Met Val Asn Asn Gln Pro Lys lie Gln Asn Arg Phe 275 280 285 Ala Ala Thr Met Ser Lys Met Ala Leu Leu Gly Gln Asp Lys Thr Lys 290 295 300 Leu lie Asp Cys Ser Asp Val lie Pro Thr Pro Pro Ala Leu Val Gly 305 310 315 320 Ala Ala His Leu Pro Ala Gly Phe Ser Leu Ser Asp Val Glu Gln Ala 325 330 335 Cys Ala Glu Thr Pro Phe Pro Ala Leu Thr Ala Asp Pro Gly Pro Val 340 345 350 Thr Ser Val Pro Pro Val Pro Gly 355 360

Claims (25)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1. Un ácido nucleico aislado que codifica un marco de lectura abierto para una oxidorreductasa que degrada caroteno; el ácido nucleico comprende: (a) una secuencia de conformidad con la SEQ ID NO: 1 , o (b) una secuencia que tiene, en orden de menor a mayor preferencia, 75 %, 80 %, 90 %, 95 % o más de identidad secuencial con la secuencia según (a), o (c) una secuencia capaz de hibridar a la secuencia de (a) y/o (b) en condiciones severas, y/o (d) una secuencia que es complementaria a (a), (b) y/o (c).

2. El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque la secuencia del ácido nucleico se deriva de hongos o levaduras, de preferencia un basidiomiceto.

3. El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque la secuencia del ácido nucleico se deriva de Lepista ¡riña.

4. Un vector que comprende la secuencia de un ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3.

5. Una célula transformada con el ácido nucleico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o con el vector de conformidad con la reivindicación 4.

6. Un cultivo celular que comprende células de conformidad con la reivindicación 5 y un medio de cultivo celular adecuado.

7. Un polipéptido codificado por el ácido nucleico de conformidad con la SEQ ID NO: 1.

8. El polipéptido de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado además porque comprende: (a) una secuencia de aminoácido de conformidad con la SEQ ID NO: 2, (b) una secuencia de aminoácidos que tiene, en orden de menor a mayor preferencia, 70 %, 80 %, 90 % o más de homología con (a), y/o (c) una secuencia de aminoácidos que tiene reactividad inmunológica cruzada con (a) y/o (b).

9. El polipéptido de conformidad con la reivindicación 7 u 8, caracterizado además porque es activo en la conversión de un sustrato carotenoideo.

10. El polipéptido de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado además porque tiene especificidad de sustrato por ß,ß-caroteno, a-caroteno, licopeno, capsantina, luteína, anteraxantina, violaxantina, zeaxantina, astaxantina, cantaxantina, luteoxantina, neoxantina, y los apo-carotenoides respectivos.

11. Una oxidorreductasa activa para convertir sustratos carotenoideos, aislada de levaduras u hongos, con un peso molecular aproximado de 50 kDa y un punto isoeléctrico aproximado de 3.75.

12. La oxidorreductasa para degradación de caroteno de conformidad con la reivindicación 1 1 , caracterizada además porque escinde carotenoides asimétricamente.

13. La oxidorreductasa para degradación de caroteno de conformidad con la reivindicaciones 11 u 12, caracterizada además porque se deriva de Lepista irína.

14. Una composición detergente que comprende oxidorreductasa microbiana capaz de convertir sustratos carotenoideos.

15. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada además porque la oxidorreductasa microbiana es la oxidorreductasa de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 1 a 13, ó el polipéptido de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10.

16. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 14 ó 15, caracterizada además porque también comprende un surfactante, dispersante, un portador csp y/o un ingrediente adjunto.

17. La composición detergente de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 14 a 16, caracterizada además porque también comprende una enzima o un sistema enzimático adicional.

18. La composición detergente de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada además porque la enzima adicional es una esterasa específica para caroteno.

19. La composición detergente de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 14 a 18, caracterizada además porque prácticamente está libre de peróxido de hidrógeno.

20. Un método para tratar manchas que comprenden caroteno; el método comprende poner en contacto el material portador de la mancha con el polipéptido o la oxidorreductasa de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 13, o la composición detergente de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 14 a 19.

21. Un método para producir productos derivados de caroteno a partir de un sustrato carotenoideo; el método comprende: (a) poner en contacto el precursor de carotenoide con el polipéptido o la oxidorreductasa de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 12, ó con la composición detergente de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 13 a 17, y (b) incubar la mezcla de precursor de carotenoide y la oxidorreductasa.

22. El método de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado además porque los productos derivados de caroteno se aislan o purifican.

23. El método de conformidad con la reivindicación 20 ó 21 , caracterizado además porque se lleva a cabo en ausencia de peróxido de hidrógeno.

24. El uso de la oxidorreductasa como la que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 1 a 13, o el polipéptido como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10, en el tratamiento de manchas.

25. El uso de la oxidorreductasa como la que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 1 a 13, o el polipéptido como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10, en la conversión de sustratos carotenoideos.