MXPA05002197A

MXPA05002197A - Derivados de hidroxifenilundecano, un procedimiento para su produccion y su uso.

Info

Publication number: MXPA05002197A
Application number: MXPA05002197A
Authority: MX
Inventors: Astrid Markus-Erb
Original assignee: Aventis Pharma Gmbh
Priority date: 2002-10-02
Filing date: 2003-09-18
Publication date: 2005-06-08
Also published as: WO2004031123A1; EP1556333A1; AU2003270218B2; US7112608B2; BR0314870A; AU2003270218A1; JP4464823B2; CA2498337A1; JP2006501285A; IL167781A; US20040122092A1

Abstract

La presente invencion se refiere a nuevos derivados de hidroxifenilundecano de la formula (1) a un metodo para la preparacion de dichos compuestos mediante el cultivo del hongo Cryphonectria parasitica, DSM 14453, y a su uso como compuestos farmaceuticos, es decir para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntington, ictus, psicosis y/o depresiones.

Description

DERIVADOS DE HIDROXIFENILUNDECANO, UN PROCEDIMIENTO PARA SU PRODUCCIÓN Y SU USO DESCRIPCIÓN. La presente invención se refiere a nuevos derivados de hidrofenilundecano, un método para la preparación de dichos compuestos y su uso como compuestos farmacéuticos, es decir, para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, ictus, psicosis y/o depresiones. La expresión diferencial y la localización de las quinasas N-terminales c-Jun (JNK) en el cerebro humano refleja la transducción de una variedad de estímulos extracelulares hacia respuestas celulares selectivas. De las 3 JNK, JNK 1 y JNK 2 están ampliamente distribuidas en los tejidos y las JNK 3 están predominantemente restringidas al cerebro donde se expresan en las neuronas. La ruta de la quinasa N-terminal c-Jun (JNK) que conduce a la fosforilación de c-Jun juega un papel causal en la apoptosis de las neuronas embriónicas primarias aisladas y de las líneas celulares neuronales múltiples después de una amplia variedad de estímulos. La activación de esta ruta se ha sugerido que contribuye a la atrofia y la muerte neuronal que se asocia con los estados patológicos neurodegenerativos que incluyen la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington y el ictus (Kumagae et al, Mol. Braln. Res. (1999), 67(1), 10-7). Los inhibidores de JNK3, por tanto, deben detener la apoptosis y ser útiles para el tratamiento y/o la prevención de las enfermedades mencionadas antes.

La proteína fosfatasa-1 (PP1) es una fosfatasa de serina/treonina que juega un papel importante en una variedad de procesos celulares, que incluyen la contracción muscular, la progresión del ciclo celular, y la neurotransmisión (Hsieh-Wilson eí al., Biochemisfry 1999, 38, 4365-4373). La localización y la especificidad de sustrato de PP1 se determinan por una clase de proteínas conocidas como subunidades diana. Las subunidades diana restringen la especificidad, de otra forma amplia, de la subunidad catalítica (PP10) dirigiendo la enzima a compartimentos subcelulares discretos y, en algunos casos, modulando su actividad hacia sustratos particulares. Hay estudios que sostienen la idea de que la espinofilina, una proteína altamente enriquecida en las espinas dentríticas, funciona como una subunidad diana neuronal de PP1. La espinofilina juega un papel importante en la regulación de los estados de fosforilación de los receptores de glutamato en las espinas dentríticas, por ejemplo, el receptor de glutamato AMPA (ácido a-amino-3-hidroxi-5-metil-4-isoxazolepropiónico) anclando PP1 en la proximidad de estos receptores (Jiang Feng eí al., Proc. Nati. Acad. Sci. USA 2000, 97, 9287-9292). En ausencia de espinofilina, los receptores AMPA no están sometidos más tiempo a la regulación a la baja (down-regulation) por PP1, que da como resultado corrientes del receptor AMPA más persistentes. La desregulación de las corrientes del receptor de glutamato conduce a cambios específicos en los circuitos neuronales, que pueden llevar, por ejemplo, a depresión de larga duración. Las moléculas que interfieren con la interacción espinofilina-PP1, por tanto, son útiles para el tratamiento o prevención de la psicosis o las depresiones. Hidroxifenilundecano dimerizado de la fórmula en la que cuando -lla'L representa. jjn _ .enlace ^ sencillo, R es -OH o - OC(0)CH3, y cuando "a" representa un doble enlace, R está ausente, se han descrito como inhibidores de la VIH integrasa en la solicitud de patente de Reino Unido GB 2327674. Se ha encontrado ahora que el microorganismo Cryphonectría parasítica, ST 002447 (DSM 14453) produce nuevos compuestos que inhiben la interacción espinofilina-PP1. La presente invención, por consiguiente, se refiere a compuestos de la fórmula (I) en la que Ri y R2 son independientemente H o SO3H, y/o una de sus sales fisiológicamente toleradas y/o uno de sus equivalentes químicos obvios. En el compuesto-de aJórrnula (l), los centros quirales pueden tener configuración R o S. La invención comprende compuestos ópticos puros de la fórmula (I) así como mezclas de estereoisómeros en cualquier proporción. Los compuestos de la fórmula (I) son subsiguientemente denominados también espinosulfatos. En una modalidad R1 y R2 son SO3H. Un compuesto de la fórmula (I) que tiene esta combinación de sustituyentes es denominado subsiguientemente espinosulfato A. Una modalidad adicional es un compuesto de la fórmula (I) en la que R y R2 son H. Este compuesto es denominado subsiguientemente espinosulfato B.

Los compuestos de la fórmula (I) se pueden obtener por cultivo del hongo Cryphonectria parasítica ST 002447 (DSM 14453). Dicho microorganismo ha sido depositado el 29 de agosto de 2001 en la colección alemana de microorganismos y cultivos celulares (DS Z- Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH), Brunschweig, Germany y se le ha dado el número de registro DSM 14453. La invención se refiere a un compuesto de la fórmula (I) o a una de sus sales fisiológicamente toleradas y/o a uno de sus equivalentes químicos obvios, es decir, el compuesto espinosulfato A o el compuesto espinosulfato B, obtenibles por cultivo de Cryphonectria parasítica, DSM 14453 o una de^sus variantes o mutantes. Por tanto, la presente invención se refiere además a un procedimiento para la preparación de un compuesto de la fórmula (I) o una de sus sales fisiológicamente toleradas y/o uno de sus equivalentes químicos obvios, es decir, el compuesto espinosulfato A o el compuesto espinosulfato B, caracterizados por el cultivo de Cryphonectria parasítica DSM 14453 o una de sus variantes o mutantes, aislar y opcionalmente purificar el compuesto de la fórmula (I), y convertirlo, cuando sea apropiado, en sales fisiológicamente toleradas o un equivalente químico obvio. El medio nutriente contiene preferiblemente una o más fuentes de carbono, nitrógeno y sales inorgánicas nutrientes, y opcionalmente sales inorgánicas nutrientes y/o elementos en trazas. Las fuentes de carbono son, por ejemplo, harina de avena, almidón, glucosa, sacarosa, dextrina, fructosa, molasas, glicerol, lactosa o galactosa, preferiblemente harina de avena. Las fuentes de nitrógeno son, por ejemplo, harina de soja, harina de cacahuete, extracto de levadura, extracto de ternera, peptona, extracto de malta, licor de maíz macerado, gelatina o ácidos casamino, preferiblemente licor de maíz macerado. Las sales inorgánicas nutrientes, por ejemplo, son hidrogenofosfato de sodio, hidrogenofosfato de potasio, hidrogenofosfato de amonio, cloruro de sodio, cloruro de calcio. Los elementos en trazas, por ejemplo, son Fe, Mn, Cu, B, Mo, Zn en forma de una sal o un ácido o base. En lugar de la cepa DSM 14453, también es posible emplear sus mutantes y variantes ya que producen el nuevo compuesto. Un mutante se refiere a un_microorganismo. en el que algunos genes del genoma están modificados, dejando el gen o los genes responsables de la capacidad del organismo para producir los compuestos de la fórmula (I) en cantidades recuperables funcionales y heredables. Tales mutantes se pueden generar de una manera conocida en la técnica, por ejemplo irradiación, tal como con luz ultravioleta o rayos X, o mutágenos químicos tal como, por ejemplo, metanosulfonato de etilo (EMS); 2-hidroxi-4-metoxibenzofenona (MOB) o N-metil-N'-nitro-N-nitrosoguanidina ( NNG) o como se describe por Brock et al. en " Biology of Microorganisms" Prentice Hall, páginas 238-247 (1984). Una variante se refiere a un fenotipo del microorganismo. Los microorganismos tienen la capacidad de adaptarse a los cambios medioambientales. Esta capacidad adaptativa es la razón de la flexibilidad fisiológica observada. En la adaptación fenotípica, están implicadas todas las células de una población. Este tipo de cambio generalmente no está condicionado genéticamente. Es una modificación que en condiciones alteradas es reversible (H. Stolp, Microbial ecology; organisms, habitáis, activitíes. Cambridge University Press, Cambridge, GB, Seite 180, 1988). El cribado de los mutantes y variantes que producen el nuevo antibiótico puede tener lugar determinando la actividad biológica de la sustancia activa acumulada en el caldo de cultivo, por ejemplo determinando el efecto antibiótico, o detectando los compuestos que se sabe que son activos en el caldo de cultivo, por ejemplo, por métodos de HPLC o LC- S. El cultivo de la Cryphonectría parasítica, DSM 14453 se puede llevar a cabo a temperaturas entre 15 °C y 35 °C y a pH entre 2,5 y 8,0, preferiblemente en condiciones aeróbicas. Preferiblemente la Cryphonectría parasítica, DSM 14453 se cultiva a 25 °C (± 1 °C) y pH 3-6. El cultivo de la Cryphonectría parasítica, DSM 14453 se lleva a cabo preferiblemente durante 72-200 horas y se obtiene un rendimiento óptimo de un espinosulfato. Es particularmente preferido llevar a cabo el cultivo por fermentación durante 96-144 horas en condiciones sumergidas, por ejemplo, en frascos agitados así como en fermentadores de laboratorio. El progreso de la fermentación y la formación de un espinosulfato se puede detectar por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) o LC-MS y midiendo la bioactividad del caldo de cultivo. En el caldo de cultivo resultante el espinosulfato está presente en el filtrado del cultivo así como en el micelio. Se puede aislar usando técnicas de separación conocidas. Por tanto, se puede recuperar del filtrado del cultivo por extracción con un disolvente inmiscible en agua tal como acetato de etilo, diclorometano, cloroformo o butanol a pH de 3-8 o por cromatografía de interacción hidrófoba usando resinas poliméricas tales como "Diaion HP-20®* o MCI® Gel CHP-20P* (Mitsubishi Chemical Industries Limited, Japan), "Amberlite XAD®* (Rohm and Hass Industries U.S.A.), carbón activo o cromatografía de intercambio iónico a pH 3-8. El método preferido es la cromatografía sobre MCI® Gel CHP-20P*. El material activo también se puede recuperar del micelio por extracción con un disolvente miscibie con agua tal como metanol, acetona, acetonitrilo, n-propanol o /so-propanol o un disolvente inmiscible con agua tal como acetato de etilo, diclorometano, cloroformo o butanol a pH 3-8 y el método preferido es la extracción con metanol. La concentración y liofilización de los extractos da el material crudo activo. Los compuestos de la fórmula (I), por ejemplo, se pueden recuperar del material crudo como sigue: Por fraccionamiento usando cualquiera de las siguientes técnicas: cromatografía de fase normal (usando alúmina o gel de sílice como fase estacionaría y eluyentes tales como éter de petróleo, acetato de etilo, cloruro de metileno, acetona, cloroformo, metanol o sus combinaciones y adiciones de aminas tales como EÍ3), cromatografía de fase inversa (usando gel de sílice de fase inversa como gel de dimetiloctadecilsililsílice, también llamado RP-18 o gel de dimetiloctilsililsílice también llamado RP-8 como fase estacionaria y eluyentes tales como agua, tampones, es decir que contienen fosfato, acetato, citrato (pH 2-8) y disolventes orgánicos tales como metanol, acetonitrilo, acetona, tetrahidrofurano y combinaciones de estos disolventes), cromatografía de penetración en gel usando resinas tales como Sephadex® LH-20 (Pharmacia Chemical Industries, Sweden), TSKgel Totopearl® HW (TosoHaas, Tosoh Corporation, Japan) en disolventes tales como metanol, cloroformo, acetona, acetato de etilo o sus combinaciones o Sephadex® G-10 y G-25 en agua; o por cromatografía en contracorriente usando un sistema eluyente bifásico preparado de dos o más disolventes tales como agua, metanol, etanol, /so-propanol, n-propanol, tetrahidrofurano, acetona, acetonitrilo, cloruro de metileno, cloroformo, acetato de etilo, éter de petróleo, benceno y tolueno. Estas técnicas se pueden usar repetidamente o se puede usar una combinación de diferentes técnicas. El método preferido es la cromatografía sobre gel de sílice de fase inversa (RP-18). Los equivalentes químicos obvios del compuesto según la invención son compuestos que muestran una ligera diferencia química, y tienen el mismo efecto o se pueden convertir en condiciones suaves en los compuestos según la invención. Dichos equivalentes incluyen, por ejemplo, ésteres, éteres, complejos o aductos del compuesto o con el compuesto de la fórmula (I). Los equivalentes químicos obvios, tales como éteres y/o ésteres del compuesto de la fórmula (I), se pueden preparar por procedimientos estándar conocidos por los expertos en la técnica, por ejemplo, descritos en J. March, Advanced Organic Chemistry, John Wiley & Sons, 4th edición, 1992.

Los compuestos según la presente invención se pueden convertir en sales farmacéuticamente aceptables. Las sales se pueden preparar por procedimientos estándar conocidos por los expertos en la técnica. Las sales fisiológicamente toleradas de un compuesto de la fórmula (I) pueden ser una sal orgánica e inorgánica y se pueden preparar como se describe en Remington's Pharmaceutical Sciences (17th edition, pag 1418 (1985)). Las sales como las sales de sodio y potasio, por ejemplo, se pueden preparar tratando los compuestos según la invención con bases adecuadas de sodio y potasio. Los_compuestos según la presente invención y/o sus sales farmacéuticamente aceptables y sus equivalentes químicos obvios se pueden administrar a animales, preferiblemente mamíferos, y en particular a seres humanos como compuestos farmacéuticos en si mismos, en mezclas unos con otros y en forma de composiciones farmacéuticas que permiten la administración parenteral. Por consiguiente, la presente invención también se refiere al uso de un compuesto de la fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente toleradas o uno de sus equivalentes químicos obvios, es decir, el compuesto espinosulfato A o el compuesto espinosulfato B, como compuestos farmacéuticos, en particular para uso como inhibidores del complejo espinofilina-PP1 y/o la quinasa N-terminal c-Jun (JNK3), y por tanto, son útiles para el tratamiento y/o la prevención de la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, ¡ctus, psicosis y/o depresiones. La presente invención se refiere además a un compuesto farmacéutico que comprende al menos un compuesto de la fórmula (I) o una de sus sales farmacéuticamente toleradas o uno de sus equivalentes químicos obvios, es decir, el compuesto espinosulfato A o el compuesto espinosulfato B, y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable. Los compuestos según la invención se pueden administrar oralmente, intramuscularmente, intravenosamente o por otros modos de administración. Las composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos o una de, sus sales fisiológicamente toleradas o uno de sus equivalentes químicos obvios, opcionalmente con otras sustancias farmacéuticamente activas, se pueden preparar mezclando al menos un compuesto de la fórmula (I) con al menos un auxiliar farmacológicamente aceptable. La mezcla se puede convertir después en una forma farmacéutica aceptable tal como comprimidos, comprimidos revestidos, cápsulas, granulos, polvos, emulsiones, suspensiones o soluciones. Ejemplos de excipientes farmacéuticamente aceptables son agentes de carga, emulsionantes, lubrificantes, aromatizantes de enmascaramiento, colorantes y sustancias tampón, goma de tragacanto, lactosa, talco, agar-agar, poliglicoles, etanol y agua. Son adecuados y preferidos para administración parenteral las suspensiones o soluciones en agua. También es posible administrar las sustancias activas como tales, sin vehículos o diluyentes, en forma adecuada, por ejemplo, en cápsulas. La invención también se refiere a un método para la producción de un compuesto farmacéutico caracterizado por convertir al menos un compuesto de la fórmula (I) o una de sus sales fisiológicamente toleradas y/o uno de sus equivalentes químicos obvios, es decir, el compuesto espinosulfato A o el compuesto espinosulfato B, con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable en una forma farmacéutica adecuada. Como es costumbre, la formulación galénica y el método de administración así como el intervalo de dosificación que son adecuados en un caso específico jtependerán de las especies a ser tratadas y se basarán en el estado o enfermedad respectiva y se pueden optimizar usando métodos conocidos en la técnica. Los siguientes son ejemplos ilustrativos de la presente invención sin limitar su alcance: Ejemplo 1 : mantenimiento del cultivo de Cryphonectria parasítica, DSM 14453 a) Medio de mantenimiento Después de disolver los ingredientes por medio de calentamiento, la solución resultante se esterilizó a 121 °C durante 20 minutos y se distribuyó en platos Petri (15 ml/plato). Después de la solidificación se inocularon las placas con el cultivo de partida y se incubaron a 25 °C hasta que se observó un buen crecimiento. Los cultivos con buen crecimiento usaron para las siguientes etapas de conservación.

Medio de mantenimiento Extracto de malta 2,00 % Extracto de levadura 1 ,00 % Glucosa 1 ,00 % (NH4)2HP04 0,05 % Agar-Agar 2,00 % b) Conservación a -135 °C Se vierten 1 ,5 mi de una solución estéril de DMSO al 10 % en crioviales de 2 mi. De la placa de agar de mantenimiento se añade una pieza de agar de 2 cm2 a la solución de DMSO y se almacena a -135 °C. b) Conservación en nitrógeno líquido: Se vierten 1 ,5 mi de una solución estéril de glicerol al 50 % en crioviales de 2 mi. De la placa de agar de mantenimiento se tomó y se añadió una pieza de agar de 2 cm2 a la solución de glicerol y después se almacenó en nitrógeno líquido. Ejemplo 2: fermentación de la Cryphonectria parasítica, DSM 14453 en frascos agitados a) Preparación de cultivo semilla en frascos agitados El medio semilla se distribuyó en cantidades de 100 mi en frascos agitados de 300 mi y se puso en el autoclave a 121 °C durante 30 minutos. Se enfriaron los frascos a temperatura ambiente y se inocularon con piezas de agar de 2 cm2 tomadas de una placa de cultivo de agar envejecido durante 6 días o con el contenido de un vial de conservación (-135 °C o nitrógeno líquido). La incubación se llevó a cabo durante 72 horas en un agitador rotatorio a 140 rpm y 25 °C. Medio semilla Extracto de malta 2,00 % Extracto de levadura 0,20 % Glucosa 1 ,00 % (NH4)2HP04 0,05 % pH 6 Condiciones de producción: El medio de producción (véase posteriormente) se distribuyó en cantidades de 100 mi en frascos agitados de 300 mi y se puso en el autoclave a 121 °C durante 20 minutos. Los frascos se enfriaron a temperatura ambiente y se inocularon con 2 mi de cultivo semilla envejecido durante 72 horas. La incubación se llevó a cabo durante 144 horas en un agitador rotatorio a 140 rpm y 25 °C. La producción de espinosulfato A se determinó ensayando la bioactividad frente a la inhibición del complejo espinofilina-PP1 como se describe en el ejemplo 5 y por análisis por HPLC y LC-MS.

IVledio de producción Líquido de maíz macerado 0,50 % Pasta de tomate 4, 00 % Harina de avena 1 ,00 % Solución de elementos en trazas 1 ,00 mi Solución de elementos en trazas FeS04 7H20 0,1000 % MnS04 x H20 0,1000 % CuCI2 2H20 0,0025 % CaCI2 x 2H20 0,0100 % (NH4)eMo7024 x 4HzO 0,0019 % ZnS04 x 7H20 0,0200 % Ejemplo 3: Modalidad de un cultivo de Cryphonectria parasítica, DSM 14453 en termentadores (12 I) PREPARACIÓN DE CULTIVO SEMILLA EN FRASCOS AGITADOS: El medio semilla se distribuyó en cantidades de 500 mi en frascos Erlenmeyer de 2 I y se puso en el autoclave a 120 °C durante 30 minutos. El cultivo semilla se hizo crecer en estos frascos como se describe en el ejemplo 2. Fermentación a gran escala: Se esterilizaron ¡n situ 81 del medio de producción en un termentador de 12 I junto con 1 mi/11 de Desmophen® como agente antiespumante y se esterilizaron ¡n situ durante 45 minutos a 121 °C, se enfriaron a 25 DC (+ 1°C) y se sembraron con 0,5 I (6,25 % de termentador de 12 I) de dicho cultivo semilla mencionado antes. LA FERMENTACIÓN SE LLEVÓ A CABO CON LOS SIGUIENTES PARÁMETROS: Temperatura 25 °C Agitación 200 rpm Aireación 0,5 wm Tiempo de recogida 96 h La producción de espinosulfatos se determinó ensayando la inhibición como se describe en los ejemplos 8 y 9. El caldo de cultivo se recogió y se centrifugó y los compuestos de espinosulfato A y B se aislaron y purificaron del filtrado del cultivo y del micelio por los métodos descritos en los ejemplos 4 y 6. Ejemplo 4: Aislamiento y purificación del espinosulfato A El caldo de cultivo (7,5 I) se centrifugó y el filtrado del cultivo y el micelio se secaron por congelación separadamente. El producto de la liofilización del micelio se extrajo con metanol (7 I) y los extractos activos se reunieron y se concentraron a presión reducida y se secaron por congelación dando 38 g del material crudo. Este material se purificó por HPLC preparativa usando las siguientes condiciones: Columna MCI Gel CHP-20P (260 x 50 mm; Kronlab) Eluyente A) H20 B) MeOH Gradiente: min % A % B 0 9(3 ?0~ 50,1 80 20 65,1 60 40 95,1 40 60 125, 1 20 80 162,6 0 100 193 0 100 Caudal: 20 ml/min Detección: 210 nm Las fracciones activas se eluyeron después de 125 min. Las fracciones reunidas se concentraron a presión reducida y se secaron por congelación. La purificación final se realizó por HPLC preparativa usando las siguientes condiciones: Columna Luna® C18 (2) (5 µ??, 250 x 21 mm; Phenomenex, Inc.) Eluyente A) 100 % H20 B) 100 % CH3CN Gradiente: min % A % B rj 70 30~ 10 70 30 45 5 95 Caudal: 30 ml/min Detección: 210 nm Las fracciones activas se analizaron por HPLC y LC-MS. Las fracciones que contienen espinosulfato A (PM: 730 Da) se eluyeron después de 18 minutos (A). Las fracciones reunidas se concentraron a presión reducida y se secaron por congelación. El rendimiento global de 7,5 I de caldo de cultivo fue de 35 mg. Ejemplo 5: Propiedades físico químicas y espectrales del espinosulfato A Propiedades físico químicas del espinosulfato A: Apariencia Aceite incoloro Solubilidad Metanol, DMSO Purospher STAR RP.18e (30 x 2 mm, 3 Columna µ??, Merck KgaA, Darmstadt) Eluyente CH3CN/10mM NH4AC (pH 4,5) Gradiente: tiempo % CH3CN 0,00 5,0 6,00 100,0 7,50 6,0 9,00 100,0 10,50 5,0 13,00 5,0 Caudal: 0,25 ml/min Temperatura: 40 °C 210 nm, 230, 250, 320, 400 (UV); Detección: 100-2000 amu (MS) Tiempo de 6,5 minutos retención: ESI-MS: 729,5 amu ( -H)" HR-ESI-MS: 729,2987 [calculado para C35H53012S2: 729,2984 (M-H)"] Fórmula C35H5 O12S2 molecular: MSn- Instrumento FTICR, Bruker APEX III, 7T equipado con una experimentos: fuente-ESI externa 729 amu (M-H)" a 649 amu (-S03), 649 amu a 369 amu, 359 ESI": amu (-CiaHzeOa), 341 (-C1BH2804), 307 amu (-C17H2605S), 289 amu (-Ci7H2806S), Posición 1JC d (ppm) ? 5 (ppm) HMBC-correlaciones 13C ? ? 1 169,25 - H19 2 109,02 - 3-OH, H4, H6, H8 3 159,71 - 3-OH, H4 3-OH - 10,48 s - 4 100,38 6,14 3-OH, H6 160,21 - H4, H6 5-OH - 9,75 s, br - 6 108,63 6,12 H4, H8 7 144,32 - H8 8 34,41 2,55 H6 9 31,33 1,45 H8 10 29,13 1,23-1,32 H8 11 28,80-28,99 1,23-1,32 12 28,80-28,99 1,23-1,32 13 28,80-28,99 1,23-1,32 14 28,80-28,99 1,23-1,32 15 28,80-28,99 1,23-1,32 16 31,20 1,23 (H11-H15), H18 17 22,00 1,25 (H11-H15), H18 18 13,87 0,85 19 74,23 5,04 H20, H31.H32, H21 33,58 1,59 H19, H31, H19 21 24,82 1,31,1,35 H19 22 28,60 1,23-1,32 23 28,80-28,99 1,23-1 ,32 24 28,80-28,99 1 ,23-1,32 H26 25 30,81 1,50 H26 26 35,23 2,45 H28 27 142,54 - H26 28 114,85 6,72 H30, H28, H26 29 153,56 - H30, H28 30 110,23 6,75 H28 31 35,76 1 ,57 H32, H33, H19 32 18,07 1 ,35 H31 , H33, H19 33 13,74 0,88 H31 , H32 Ejemplo 6: Aislamiento y purificación del espinosulfato B El caldo de cultivo (22 I) se separó y el micelio (310 g) se extrajo primero con metanol (9 I) y después con acetato de etilo (4 I). Las fracciones de acetato de etilo se reunieron y se secaron por congelación para dar 9,4 g del material crudo. El análisis por HPLC y LC-MS reveló que el extracto de acetato de etilo contenía la mayoría del componente activo y, por tanto, se purificó por HPLC preparativa usando las siguientes condiciones: Columna MCI® Gel CHP-20P (260 x 50 mm; Kronlab) Eluyente A) H20 B) Isopropanol Gradiente: Min % A % B 0 80 20 15,1 60 40 45,1 40 75,1 20 113 0 142,5 0 Caudal: 20 m!/min Detección: 210 nm Las fracciones activas se eluyeron después de 100 minutos. Las fracciones se analizaron por HPLC y LC-MS. Las fracciones que contenían espinosulfato se reunieron y se concentraron a presión reducida y se secaron por congelación. La purificación final se realizó por HPLC preparativa usando las siguientes condiciones: Columna Luna® C18 (2) (5 µ, 250 x 21 ,20 mm; Phenomenex, Inc.) Eluyente A) 0,05 % TFA en H20 B) CH3CN Gradiente: in % A % B Ó 95 5~~ 30 50 50 75 0 100 123 0 100 Caudal: 25 ml/min Detección: 210 nm Las fracciones activas se analizaron por LC-MS. Las fracciones que contenían espinosulfato B se eluyeron después de 60 minutos. Las fracciones reunidas se concentraron a presión reducida y se secaron por congelación. El rendimiento global del caldo de cultivo de 22 1 fue de 60 mg. Ejemplo 7: Propiedades físico químicas y espectrales del espinosulfato B La apariencia, la solubilidad y las condiciones de LC-MS fueron idénticas a las descritas en el ejemplo 5. Tiempo de retención 8,5 minutos ESI-MS: 569,3 amu (M-H)" 571,39885 [calculado para C35H55016: HR-ESl-MS: 571,39932 (M-H)l Fórmula molecular: C35H54O6 - Instrumento FTICR, Bruker APEX III, 71 MS"-exper¡mentos equipado con una fuente-ESI externa 569 amu (M-H)" a 289 amu, 245 amu, 91 amu; ESP: 289 amu a 245 amu Tabla 2: Datos espectroscopios 1H y 13C del espinosulfato B en 31 1 ,56 35,78 32 1 ,39/1 ,33 18,08 33 0,88 13,75 Ejemplo 8: ensayo JNK3 El ensayo se realizó en un sistema de pipeteado Cybio en un formato de placas de 384 pocilios. El volumen del ensayo final fue de 30 µ?, que comprendenlO µ? de una sonda (un extracto de una sustancia pura a ser ensayada), 10 µ? de una mezcla enzima-sustrato (JNK-3/GST-ATF2) y 10 µ? de solución de ATP. Después de 20 minutos de incubación a 37 °C se añadieron 50 µ? de mezcla de anticuerpo HTRF (XL665-anti-GST(Eu)cryptal anti-P-ATF2). Se midieron la intensidad de emisión de la transferencia de energía y de Eu a 665 y 615 nm, respectivamente, después de 120 minutos a temperatura ambiente y estimulación de las sondas a 340 nm en un Victor2® (Wallac). Tampón I para diluir JNK3, GST-ATF2, ATP: 25 mM HEPES, pH 7,5 100 µ? MgCI2 0,03 % TRITON X 100 10 m DTT 5 % Glicerol Tampón II para diluir los reactivos HTRF 100 mM HEPES, pH 7,0 100 m KF 133 mM EDTA 1 g/l BSA Reactivos adicionales JNK3 quinasa Bíotech, Vitry 8 ng/pocillo GST-ATF2 Biotech, Vitry 88 ng/pocillo Solución ATP Sigma, A7699 15 µ? Anti-GST-XL665 CisBio 125 ng/pocillo Anti-P-ATF2-(Eu)-criptato NEB/CisBio 6 ng/pocillo Cada placa incluía 16 testigos positivos (transferencia máxima de energía, tampón I en vez de la sonda), 8 testigos en blanco (transferencia mínima de energía, tampón II en lugar de ATP) y 8 pocilios que contenían una solución de 200 µ? de EDTA. Los resultados se calcularon como sigue: Relación de señal: SR = (intensidad(665 nm)/intensidad (615 nm) Corrección en blanco; Delta F (%)= (SR(sonda)-SR(min)/(SR(min) x 100) Inhibición: Inhibición (%) = 100 x [1 - (DeltaF(sonda)/DeltaF(max)) Se han encontrado los siguientes valores de IC50 para el espinosulfato A y B: Espinosulfato A: IC50 = 0,5 µ? Espinosulfato B: IC5o = 10 µ? Ejemplo 9: Ensayo PP1 El ensayo se realizó en un sistema de pipeteado Cybio en el formato de placas de 384 pocilios. El volumen del ensayo final fue de 55 µ?. Revestimiento de la placa: Las placas Elisa de alto ligamiento (greiner) se revistieron añadiendo 30 µ? de espinofilina (10 g/ml) a cada pocilio. Los testigos inferiores recibieron, en cambio, 30 µ? de BSA (1 %). Después de una noche de incubación a 4 0 C se lavaron las placas 3 veces con tampón de lavado TBS (TRIS/HCI 20 mM, pH 7,5, NaCI 500 mM) antes de que se usaran en el ensayo.- — . - Cuantificación de la interacción proteína-proteína por DELFIA®: 50 µ? de GST-pp1 diluido en tampón TBS (1,25 g/ml) se añadieron a cada pocilio en las placas revestidas. Después de la adición de 5 µ? de muestra de ensayo apropiadamente diluida (o TBS en los testigos inferiores y superiores) se incubaron las placas a temperatura ambiente durante 3 horas. Después de una etapa de lavado (3 veces con 80 µ? de TBS/pocillo) se habían añadido a cada pocilio 30 µ? de un anticuerpo marcado con Eu (Eu-W 1024-anti-GST-anticuerpo, 0,1 g/ml en tampón de ensayo Delfia suplementado con BSA a! 0,5 %). Después de incubación adicional (1 hora a temperatura ambiente) y lavado (3 x 80 µ? de TBS/pocillo) se habían añadido a cada pocilio 50 µ? de una solución potenciadora (Wallac). Subsiguientemente, se incubaron las placas durante 30 minutos a temperatura ambiente antes de que se lea la señal TRF a 615 nm en un lector de placas Víctor Wallac. Para la evaluación de resultados los datos primero fueron corregidos en blanco. Después, se calculó la actividad de las muestras en relación con los testigos superiores usando la siguiente ecuación: 00 x [1 - (señal TRF a 615 nnrimedia de ia muestra/ señal TRF a 6 5 niTImedia del testigo El valor de IC50 del espinosulfato A se determinó como 34 µ , el valor de IC50 del espinosulfato B como 10 µ?.

Claims

REIVINDICACIONES 1.- Compuesto de la fórmula (I) en la que Ri y R2 son independientemente H o S03H, y/o una de sus sales fisiológicamente toleradas y/o uno de sus equivalentes químicos obvios.
2. - Compuesto de la fórmula (I) según la reivindicación 1 , en el que Ri y R2 son S03H.
3. - Compuesto de la fórmula (I) según la reivindicación 1 , en el que Ri y R2 son H.
4. - Compuesto de la fórmula (I) o una de sus sales fisiológicamente toleradas y/o uno de sus equivalentes químicos obvios según una o más de las reivindicaciones 1 a 3, obtenible por cultivo de la Cryphonectria parasítica DSM 14453 o una de sus variantes o mutantes.
5. - Compuesto de la fórmula molecular C35H54O12S2 y caracterizado adicionalmente por los datos de 1H NMR (d en ppm) 0,85, 0,88, 1 ,23, 1 ,23-1 ,32, 1 ,25, 1,31 , 1 ,45, 1 ,50, 1 ,57, 1 ,59, 2,45, 2,55, 5,04, 6,12, 6,14, ,72, 6,75, 9,75, 10,48, y por los datos de 13C NMR (d en ppm) 13,74, 13,87, 18,07, 22,00, 24,82, 28,60, 28,80-28,99, 29,13, 30,81 , 31 ,20, 31 ,33, 33,58, 34,41 , 35,23, 35,76, 74,23, 100,38, 108,63, 109,02, 110,23, 114,85, 142,54, 144,32, 153,56, 159,71 , 160,21 , 169,25.
6. - Compuesto de la fórmula molecular C35H54O6 y caracterizado adicionalmente por los datos de 1H NMR (d en ppm) 0,84, 0,88, 1 ,25, 1 ,26, 1 ,33/1 ,29, 1 ,39/1 ,33, 1 ,45, 1 ,46, 1 ,56, 1 ,58, 2,34, 2,55, 5,05, 6,00, 6,12, 6,14, y por los datos de 13C NMR (d en ppm) 13,75, 13,87, 18,08, 22,02, 24,84, 28,91-28,62, 28,91-28,62, 29,19, 30,67, 31 ,22, 31 ,39, 33,59, 34,49, 35,25, 35,78, 74,19, 99,91 , 100,39, 106,20, 108,75, 144,08, 144,43, 158,11 , 159,89, 160,37, 169,31.
7. - Procedimiento para la preparación de un compuesto de la fórmula (I) o una de sus sales fisiológicamente toleradas y/o uno de sus equivalentes químicos obvios según una o más de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por el cultivo de la Cryphonectría parasítica DSM 14453 o una de sus variantes o mutantes, aislamiento y opcionalmente purificación del compuesto de la fórmula (I), y conversión, cuando sea apropiado, en sales fisiológicamente toleradas o un equivalente químico obvio.
8.- Uso de un compuesto de la fórmula (I) o una de sus sales fisiológicamente toleradas o uno de sus equivalentes obvios, para la preparación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, ictus, psicosis y/o depresiones.
9. - Compuesto farmacéutico que comprende al menos un compuesto de la fórmula (I) o una de sus sales fisiológicamente toleradas o uno de sus equivalentes obvios según una o más de las reivindicaciones 1 a 3, y al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable.
10. - Un método para la producción de un compuesto farmacéutico según la reivindicación 9, caracterizado por convertir al menos un compuesto de la fórmula (I) o una de sus sales fisiológicamente toleradas y/o uno de sus equivalentes químicos obvios según una o más de las reivindicaciones 1 a 3, con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable en una forma farmacéutica adecuada.
11. - Cryphonectría parasítica DSM 14453 RESU EN DE LA INVENCION La presente invención se refiere a nuevos derivados hidroxifenilundecano de la fórmula (I) a un método para la preparación de dichos compuestos mediante el cultivo del hongo Cryphonectría parasítica, DS 14453, y a su uso como compuestos farmacéuticos, es decir para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntington, ictus, psicosis y/o depresiones.