MXPA04012309A

MXPA04012309A - Derivados de acidos polienocarboxilicos, metodo para su produccion y el uso de los mismos.

Info

Publication number: MXPA04012309A
Application number: MXPA04012309A
Authority: MX
Inventors: Wink Joachim
Original assignee: Aventis Pharma Gmbh
Priority date: 2002-07-02
Filing date: 2003-06-18
Publication date: 2005-02-25
Also published as: WO2004005236A1; CA2490570A1; ATE490228T1; JP4500163B2; JP2006502983A; AU2003281344A1; DE50313293D1; BR0312337A; EP1519909A1; EP1519909B1; DE10229713A1

Abstract

La invencion se refiere a nuevos compuestos llamados serpentemicinas, de la formula (I), en la cual Y, R1, R2, R3, R4, X1, X2, X3, n, m y o se definen segun la descripcion, dichos compuestos se forman del microorganismo Actinomycetales sp. DSM 14865 durante la zimolisis o fermentacion. La invencion tambien se refiere a derivados quimicos de las serpentemicinas, a un metodo para su produccion y al uso de dichos compuestos como medicamentos, en particular para el tratamiento y profilaxis de enfermedades infecciosas, bacterianas.

Description

DERIVADOS DE ÁCIDOS POLIENOCARBOXÍLICOS, MÉTODO PARA SU PRODUCCIÓN Y EL USO DE LOS MISMOS. Para tratar las enfermedades infecciosas bacterianas, se usan tera-péuticamente un gran número de antibióticos. Sin embargo, los patógenos se están haciendo cada vez más resistentes a los preparados farmacéuticos empleados y existe incluso la amenaza de un serio riesgo debido a los denominados organismos multirresistentes, que no sólo han llegado a ser capaces de resistir a los grupos de antibióticos simples, tales como los antibióticos ß-lactámicos, glucopéptidos o macrólidos, sino que también presentan varias resistencias a la vez y al mismo tiempo. Hay incluso patógenos que han llegado a ser resistentes a todos los antibióticos comercialmente disponibles. Las enfermedades infecciosas que son causadas por estos organismos ya no pueden ser tratadas. Existe por tanto una gran necesidad de nuevos agentes que se pueden usar frente a los organismos resis-tentes. Aunque en la bibliografía han sido descritos muchos miles de antibióticos, la mayor parte de ellos son demasiado tóxicos para ser usados como preparados farmacéuticos. Ha sido descrito ya un número relativamente grande de antibióticos poliénicos, la mayoría de los cuales pertenece al tipo de estructura macrocíclica. Estos macrólidos actúan antimicóticamente por medio de interacciones con las membranas biológicas y son por tanto tóxicos para los organismos homeotérmi-cos. El representante más importante de este tipo es la amfotericina B, que se usa como un agente terapéutico en los seres humanos a pesar de su toxicidad. Un ejemplo de un antibiótico poliénico no macrocíclico que ha sido descrito (Ritzau et al., Liebigs Ann. Chem. 1993, 433-435) es el serpenteno, que contiene un anillo fenílico que está sustituido en la posición 1 ,2 con cadenas laterales poliénicas. En los ensayos dirigidos frente a bacterias Gram-positivas y Gram-negativas, el serpenteno sólo presentó un efecto antibiótico débil frente al Bacillus subtilis. La pared celular de las bacterias Gram-positivas está compuesta, entre otros, de mureína, que está compuesta de N-acetil-D-glucosamina y ácido N-acetilmurámico, que están ligados uno a otro como un disacárido, y contiene aminoácidos y péptidos, tales como D-glutamina, D- y L-alanina, L-lisina y unidades pentaglicílicas, y que está fuertemente reticulada. La biosíntesis de la pared celular bacteriana tiene lugar usando enzimas que no se encuentran en el metabolismo homeotérmico. Estas enzimas son por tanto sitios adecuados de ataque para desarrollar antibióticos que son bien tolerados por los organismos homeotérmicos, y los inhibidores de la biosíntesis de la mureína no deben ser tóxicos para los seres humanos. La glucosiltransferasa (transglucosilasa, GT) es una enzima clave en la biosíntesis de los peptidoglucanos y consecuentemente de la construcción de la pared celular. Un inhibidor específico de esta enzima, esto es, la moenomici-na (Kurz et al., Eur. J. Biochem. 1998, 252, 500-507), se conoce desde hace relativamente mucho tiempo. La moenomicina es un antibiótico que presenta una actividad muy potente y que es bien tolerado; sin embargo, no se absorbe desde el tracto gastrointestinal y su eliminación de la sangre después de la administración intravenosa también es problemática. Por estas razones, no ha sido posible usar la moenomicina sistémicamente en medicina. Desde entonces, sólo muy pocos inhibidores adicionales de la glucosiltransferasa han sido descritos en la bibliografía; por razones de farmacocinética o de tolerancia, ninguno de estos agentes ha encontrado su utilidad terapéutica. Por esta razón, todavía se están buscando nuevos inhibidores de GT, como ha sido recientemente publicado por Goldman & Gange en Current Medicinal Chem. 2000, 7, 801-820. El cribado se realiza usando sistemas de ensayo de GT bioquímicos específicos. Estos ensayos han sido descritos repetidamente, por ejemplo por Vollmer & Hóltje en Antimicrobial Agents and Chemotherapy 2000, 44, 1181-1185. Darby et al. (J. Org. Chem. 1977, 42, 1960-1967) describen la sínte-sis de compuestos fenílicos que están sustituidos con cadenas laterales trans-poliénicas en la posición 1 ,2 para analizar el sistema p de los anillos macrocícli-cos. Se ha encontrado, de forma sorprendente, que la cepa Actinomyce-tales sp. DSM 14865 es capaz de formar nuevos compuestos que son muy bue-nos inhibidores de la glucosiltransferasa y muy eficaces compuestos antibacterianos. La invención se refiere por tanto a los compuestos activos que son producidos por la cepa Actinomycetales sp. DSM 14865, y a sus sales, ésteres, éteres y equivalentes químicos claros, fisiológicamente tolerados. La invención se refiere por tanto a un compuesto de la fórmula (I) en la que Y es un grupo de la fórmula (II) o de la fórmula (III) R es H, alquilo C- -C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6 o arilo C5-C14, halógeno, -CN, -OH, -O-alquilo Ci-C6, -O-alquenilo C2-C6, -O-arilo C5-C14, -O-alquinilo C2-C6, -NH2, -NH-alquilo Ci-C6, -NH-alquenilo C2-C6, -NH-alquinilo C2-C6, -NH-arilo C5-C14, -N(-alquil C C6)2, -N(-alquenil C2-C6)2l -N(-alquinil C2-C6)2l -N(aril C5-C14)2, -NH[-C(=0)-(alquil CrC6)], -NH[-C(=0)-(aril C5-C14)], -NH-O-Ri, -SH, -S-alquilo CrC6, -S-alquenilo C2-C6, -S-alquinilo Ci-C6 o -O-arilo C5-C14, donde los sustituyentes mencionados pueden estar sin sustituir o sustituidos, una vez o más de una vez, con alquilo Ci-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6 o arilo C5-C14, donde alquilo, alquenilo, alquinilo y arilo están sin sustituir o sustituidos, una o dos veces, con -OH, =0, -O-alquilo d-Ce, -O-alquenilo C2-C6, -O-arilo C5-C14, -arilo C5-C 4, -NH-alquilo C Ce, -NH-alquenilo C2-C6, -NH2, halógeno, donde alquilo, alquilo (- -06, -NH-alquenilo C2-C6, -NH2, halógeno, donde alquilo, alquenilo, alquinilo y arilo pueden estar adicionalmente sustituidos con un -CN, una amida o una oxima, R-i, R2, R3 y R4 son, independientemente uno de otro: H, alquilo Ci-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6 o arilo C5-C 4, en la que alquilo, alquenilo, alquinilo y arilo están sin sustituir o sustituidos, una o dos veces, con -OH, -O-alquilo CrC6, -O-alquenilo C2-C6, -O-arilo C5-C 4, -arilo C5-C14) -NH-alquilo C1-C6, -NH-alquenilo C2-C6, -NH2 o halógeno, donde alquilo, alquenilo, alquinilo y arilo están sin sustituir o sustituidos, una o dos veces, con -OH, =0, -O-alquilo Ci-C6, -O-alquenilo C2-C6, -O-arilo C5-Ci4, -arilo C5-C 4, -NH-alquilo Ci-C6, -NH-alquenilo C2-C6, -NH2 o halógeno, donde alquilo, alquenilo, alquinilo y arilo pueden estar adicionalmente sustituidos con un -CN, una amida o una oxima, Xi, X2 y X3 son, independientemente uno de otro, -CH2-, -CHR-, -NH-, -N(alquil C-i-C6)-, -N(alquenil C2-C6)-, -N(alquinil C2-C6)-, -N[-C(=0)-(alqu¡l Ci-C6)]-, -N[-C(=0)-(aril Cs-Ci4)]-, -N(aril Cs-C )-, -N(O-R)-, -O- o -S-, n y m son, independientemente uno de otro, 2, 3, 4 o 5, y o es 0, 1 , 2 o 3, donde los compuestos de la fórmula (I) cumplen las excepciones de que o es 0, n es 2, m es 2 o 3, X2 y X3 son O, y R2 y R3 son C2H5) y todos los dobles enlaces poseen la configuración trans, y/o una forma estereoisomérica del compuesto de la fórmula (I) y/o una mezcla de estas formas en cualquier propor-ción, y/o una sal del compuesto de la fórmula (I) fisiológicamente tolerada. Alquilo CrC6 es un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada que tiene de 1 a 6 átomos de C, preferiblemente que tiene de 1 a 4 átomos de C, tal como metilo, etilo, /-propilo, ferc-butilo y hexilo.

Alquenilo C2-C6 es un grupo alquenilo de cadena lineal o ramificada que tiene de 2 a 6 átomos de C que está insaturado una, dos o tres veces, tal como alilo, crotilo, 1-propenilo, penta-1 ,3-dienilo y pentenilo. Alquinilo C2-C6 es un grupo alquinilo de cadena lineal o ramificada que tiene de 2 a 6 átomos de C que está insaturado una o dos veces, tal como propinilo, butinilo y pentinilo. Arilo C5-C14 es un grupo arilo que tiene de 5 a 14 átomos de C, tal como fenilo o 1-naftilo o 2-naftilo, que está sin sustituir o sustituido con halógeno, alquilo C1-C6, preferiblemente alquilo C1-C4, por ejemplo metilo, hidroxilo, -O-alquilo CrC6, preferiblemente -O-alquilo C1-C4, por ejemplo metoxi, o trifluorometi-lo. Los grupos acilo alifáticos -N[-C(=0)-(alquil C1-C6)]- contienen preferiblemente un alquilo C1-C4 y son, por ejemplo, formilo, acetilo, propionilo, butirilo, hexanoilo, acriloilo, crotonilo o propiolilo y pueden estar adicionalmente sustituidos con halógeno, por ejemplo cloro, bromo o flúor, con NH2, y/o con-NH(alquilo C1-C6), preferiblemente -NH(alquilo C1-C4), por ejemplo metilamino o etilamino. El acilo aromático -N[-C(=0)-(aril C5-C14)]- es, por ejemplo, N-benzoilo o N-naftilo y puede estar adicionalmente sustituido con halógeno, tal como cloro, bromo o flúor, con alquilo Ci-C6, preferiblemente alquilo C1-C4, por ejemplo metilo, con hidroxilo, con -NH(alquilo CrC6), preferiblemente -NH(alquilo CrC4), por ejemplo metilamino o etilamino, o -O-alquilo Ci-C6, preferiblemente -O-alquilo C1-C4, por ejemplo metoxi. El halógeno es un elemento del grupo principal 7 del sistema periódi- co, preferiblemente cloro, bromo o flúor. A menos que se indique otra cosa, la configuración de los dobles enlaces en los grupos poliénicos de los compuestos de la fórmula (I) pueden ser la configuración cis o la configuración trans. La invención se refiere tanto a los compuestos puros como a las mezclas estereoisoméricas, tales como las mezclas enantiómeras y las mezclas diastereoisómeras, en cualquier proporción. Las formas estereoisoméricas se entienden, en particular, como compuestos que tienen diferentes ordenamientos espaciales (configuraciones) de los átomos o grupos de átomos en una molécula cuando los átomos están ligados del mismo modo, por ejemplo los isómeros cis-trans en los dobles enlaces. Preferiblemente, al menos un grupo poliénico del compuesto de la fórmula (I) contiene al menos un doble enlace cis. R es preferiblemente H. Ri, 2. R3 y 4 son preferiblemente, independientemente uno de otro, H o alquilo C C6. ??, X2 y X3 son preferiblemente, independientemente uno de otro, -O- m es preferiblemente 3 o 4. n es preferiblemente 2. o es preferiblemente 0. Las definiciones generales de los radicales y las definiciones preferidas de los radicales, R, Ri, R2, R3 y R4, ??, X2 y X3, m, n y o en los compuestos de la fórmula (I) se pueden combinar una con otra a voluntad, independientemente una de otra. La invención se refiere preferiblemente a un compuesto de la fórmula (I), en el que R es H, Ri es H o alquilo Ci-C6, R2 es H o alquilo C1-C6, R3 es H o alquilo C1-C6, R4 es alquilo C^C6, y Xi y X2 son -O-, y sus sales fisiológicamente toleradas. La invención se refiere preferiblemente a un compuesto de la fórmula (I) que se caracteriza por un compuesto de la fórmula (IV) en el que m es 3 o 4, y sus sales fisiológicamente toleradas La invención se refiere de modo particularmente preferible a un compuesto de la fórmula (IV) en el que m es 4 y en el que la configuración de los po-lienos corresponde a la fórmula (V): g Se da especial preferencia a un compuesto de la fórmula (V) en el que Ri y R2 son H. Este compuesto se denomina serpentemicina A (fórmula empírica: C20H18O4; MW = 322,36) de aquí en adelante. La invención se refiere además de modo particularmente preferible a un compuesto de la fórmula (IV) en el que n es 2 y m es 3 y en el que la configuración de los polienos corresponde a la fórmula (VI): Se da especial preferencia a un compuesto de la fórmula (VI) en el que R1 y R2 son H. Este compuesto se denomina serpentemicina B (fórmula empírica: Ci8H1604; MW = 296,33) de aquí en adelante. La invención se refiere además de modo particularmente preferible a un compuesto de la fórmula (IV) en el que n es 2 y m es 3 y en el que la configuración de los polienos corresponde a la fórmula (VII): Se da especial preferencia a un compuesto de la fórmula (VII) en el que Ri y R2 son H. Este compuesto se denomina serpentemicina C (fórmula empírica: Ci8H1604; MW = 296,33) de aquí en adelante. La invención se refiere preferiblemente a un compuesto de la fórmula (I) que se caracteriza por un compuesto de la fórmula (VIII) y sus sales fisiológicamente toleradas. La invención se refiere además de modo particularmente preferible a un compuesto de la fórmula (VIII) en el que R2 y R3 son H y en el que la configuración de los polienos corresponde a la fórmula (IX): Se da especial preferencia a un compuesto de la fórmula (IX) en el que R1 es H. Este compuesto se denomina serpentemicina D (fórmula empírica: C20H22O ; MW = 236,40) de aquí en adelante. La invención se refiere además de modo particularmente preferible a un compuesto de la fórmula (VIII) en el que R2 y R3 son H y en el que la configuración de los polienos corresponde a la fórmula (X): Se da especial preferencia a un compuesto de la fórmula (X) en el que es H. Este compuesto se denomina serpentemicina E de aquí en adelante. La invención se refiere además a un compuesto que tiene la fórmula empírica 02??1804 (serpentemicina A), C18H16O4 (serpentemicina B y C) o C20H22O4 (serpentemicina D) que se puede obtener por fermentación de Actino-mycetales sp. DSM 14865, o de una de sus variantes y/o mutantes, en un medio de cultivo hasta que los compuestos serpentemicina A, B, C y/o D se acumulen en la solución de cultivo y por el subsiguiente aislamiento del compuesto y, cuando sea apropiado, la conversión del mismo en una sal farmacológicamente tolerada. La invención se refiere a un compuesto de la fórmula (I) que se puede obtener por fermentación de Actinomycetales sp. DSM 14865 o de una de sus variantes y/o mutantes, en un medio de cultivo hasta que uno o más de los compuestos serpentemicina A, B, C y/o D se acumulen en el caldo de cultivo, aislando después el compuesto, cuando sea apropiado, convirtiendo el mismo en un derivado químico y, cuando sea apropiado, convirtiendo el mismo en una sal farmacológicamente tolerada. Las serpentemicinas A, B, C y D difieren de las sustancias conocidas por la bibliografía en las fórmulas estructurales que se especifican. Aunque se conocen derivados de ácidos polienocarboxílicos estructura Imente relacionados, es- tos difieren de los compuestos según la invención en su estructura química, en su actividad antimicrobiana y/o en su actividad bioquímica y en otras propiedades físicas. La invención se refiere además a un procedimiento para preparar un compuesto de la fórmula (I), que comprende 1. cultivar el microorganismo Actinomycetales sp. DSM 14865, o una de sus variantes y/o mutantes, en un medio nutriente acuoso hasta que uno o más de los compuestos serpentemicina A, B, C y/o D se acumula en el caldo de cultivo, 2. aislar y purificar la serpentemicina A, B, C o D, 3. cuando sea apropiado, usar un reactivo adecuado para con vertir la serpentemicina A, B, C o D en un compuesto de la fórmula (I), 4. y, cuando sea apropiado, convertir el compuesto de la fórmu la (1 ) en una sal farmacológicamente tolerada. Ejemplos de reactivos adecuados son los agentes alquilantes, que se pueden usar para convertir los grupos carboxilo de las serpentemicinas A, B, C y D en el correspondiente éster. Ejemplos de agentes alquilantes son yoduro de metilo, sulfato de dietilo, diazometano y otros derivados alquílicos como han sido descritos, por ejemplo, por Jerry March en Buch Advanced Organic Chemistry, John Wiley & Sons, 4th Edición, 1992. Los dobles enlaces pueden ser, por ejemplo, isomerizados fotoquímicamente o en la presencia añadida de un formador de radicales libres. Con el fin de llevar a cabo las reacciones selectivamente, puede ser ventajoso introducir grupos protectores adecuados, de una manera conocida per se, antes de la reacción. Los grupos protectores se eliminan después de la reacción y entonces se purifica el producto de la reacción. En adición a esto, la invención se refiere a equivalentes químicos claros de los compuestos de la fórmula (I). Los equivalentes químicos claros son compuestos que presentan una ligera diferencia química, esto es que tienen la misma actividad o se convierten en los compuestos según la invención en condiciones suaves. Dichos equivalentes incluyen, por ejemplo, ásteres, amidas, hidra-zidas, anhídridos, productos de hidrogenación, productos de reducción, complejos o aductos de los compuestos según la invención. Se pueden usar métodos conocidos por los expertos para convertir un compuesto de la fórmula (I) en la correspondiente sal farmacológicamente tolerada. Las sales farmacológicamente toleradas de los compuestos según la invención, se entiende que significan tanto las sales inorgánicas como las sales orgánicas, como se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences (17th Edición, page 1418 [1985]). Las sales particularmente adecuadas son sales de metal alcalino, amonio o metal alcalinotérreo, sales con aminas fisiológicamente toleradas y sales con ácidos inorgánicos u orgánicos, tales como HCI, HBr, H2S04, ácido ma-leico y ácido fumárico. La cepa Actinomycetales sp. DSM 14865 produce los compuestos Serpentemicinas A, B, C y D sobre soluciones nutrientes que contienen glucosa, almidón, extracto de levaduras o glicerol. En adición a esto, el Actinomycetales sp. DSM 14865 produce numerosos productos secundarios que tienen cadenas poliénicas ligeramente modifica- das. Un aislado de Actinomycetales sp. fue depositado en el Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSM) [colección alemana de microorganismos y cultivos celulares], Mascheroder Weg 1 B, 38124 Bruns-wick, Germany, el 18-03-2002 con el número DSM 14865, de acuerdo con las normas del tratado de Budapest. En un medio de copos de avena, el Actinomycetales sp. DSM 14865 tiene un micelio de sustrato de color beige-marrón y un escaso micelio aéreo. En cultivo, no forma ninguna de las ramificaciones que son características de los Acti-nomycetes. Dicho procedimiento comprende cultivar Actinomycetales sp. DSM 14865, sus mutantes y/o variantes, en condiciones aerobias en un medio de cultivo que contiene una fuente de carbono y nitrógeno, sales inorgánicas y, cuando sea apropiado, elementos trazas. En lugar de la cepa Actinomycetales sp. DSM 14865, es posible también usar sus mutantes y variantes siempre que ellos sinteticen los compuestos según la invención. Un muíante es un microorganismo en el que uno o más genes del genoma han sido modificados, siendo retenidos el gen o genes que son responsa-bles de la capacidad del organismo para producir el compuesto de la invención, de tal forma que sean funcionales y hereditarios. Tales mutantes se pueden producir, de una manera conocida per se, por medios físicos, por ejemplo irradiación, tales como usando rayos ultravioleta o rayos X, o usando mutágenos químicos, tales como metanosulfonato de etilo (EMS); 2-hidroxi-4-metoxibenzofenona (MOB) o N-metil-N'-nitro-N- nitrosoguanidina (MNNG), o como se ha descrito por Brock et al. en "Biology of Microorganisms", Prentice Hall, pages 238-247 (1984). Una variante es un fenotipo del microorganismo. Los microorganismos tienen la capacidad de adaptarse a su ambiente y por tanto presentan una flexibilidad fisiológica altamente desarrollada. Todas las células del microorganismo están implicadas en la adaptación fenotípica, no estando condicionada la naturaleza del cambio genéticamente y siendo reversible bajo condiciones alteradas (H. Stolp, Microbial ecology: organismus, habitats, activities. Cambridge University Press, Cambridge, GB, page 180, 1988). El cribado de mutantes y variantes que produce el antibiótico según la invención se puede efectuar determinando la actividad biológica del compuesto activo que se ha acumulado en el caldo de cultivo, por ejemplo determinando su efecto antibacteriano, o si no detectando en el caldo de fermentación los compuestos que se sabe que tienen actividad antibacteriana, por ejemplo usando métodos de HPLC o LC-MS. Las fuentes de carbono adecuadas y preferidas para la fermentación son los carbohidratos y alcoholes de azúcares asimilables, tales como glucosa, lactosa, sacarosa o D-manitol, y también los productos naturales que contienen carbohidratos, tales como extracto de malta o extracto de levadura. Las fuentes de nitrógeno adecuadas son: aminoácidos, péptidos y proteínas y sus productos de degradación, tales como caseína, peptonas o triptonas, y también extractos de carne, extractos de levadura, semillas, por ejemplo maíz, trigo, alubias, semillas de soja o de la planta de algodón, residuos de la destilación procedentes de la producción de alcohol, harinas de carne o extractos de levadura, y también sales de amonio y nitratos, en particular péptidos que han sido obtenidos sintética o biosin- téticamente, también. Ejemplos de sales inorgánicas y elementos trazas que puede contener la solución nutriente son cloruros, carbonatos, sulfatas o fosfatos de los metales alcalinos o de los metales alcalino-térreos, hierro, cinc, cobalto y manganeso. La formación de los compuestos según la invención se realiza particularmente bien, por ejemplo, en una solución nutriente que contiene aproximadamente de 0,05 a 5 %, preferiblemente de 0,5 a 2 %, de almidón, de 0,05 a 3 %, preferiblemente de 0,1 a 1 %, de extracto de levadura, de 0,05 a 5 %, preferiblemente de 0,1 a 2 %, de glucosa, de 0,2 a 5 %, preferiblemente de 0,5 % a 2 %, de glicerol, de 0,05 a 3 %, preferiblemente de 0,1 a 1 %, de Comsteep, de 0,05 a 3 %, preferiblemente de 0,1 a 1 %. de peptona, de 0,05 a 3 %, preferiblemente de 0,05 a 0,5 %, de NaCI y de 0,05 a 3 %, preferiblemente de 0,1 a 1 %, de CaC03. Los porcentajes están basados en cada caso en el peso de la solución nutriente completa. En la solución nutriente, el Actinomycetales sp. DSM 14865 produce una mezcla de las serpentemicinas A, B, C y D y productos secundarios. La proporción cuantitativa de uno o más de los compuestos según la invención puede variar dependiendo de la composición de la solución nutriente. Además, la síntesis de los ácidos polienocarboxílicos individuales se puede controlar por la composi- ción del medio de tal modo que el microorganismo no produce un antibiótico en absoluto o lo produce en una cantidad que está por debajo del límite de detección. El microorganismo se cultiva aerobiamente, esto es, por ejemplo, sumergido mientras se voltea o agita en frascos de agitación o fermentadores, o en un medio sólido, cuando sea apropiado, a la vez que se hace pasar aire u oxígeno. El cultivo se puede realizar en un intervalo de temperatura desde aproximadamente 15 a 35 °C, preferiblemente desde aproximadamente 25 a 32 °C, particularmente de 27 a 30 °C. El intervalo de pH debe estar entre 4 y 10, preferiblemente entre 6,5 y 7,5. El microorganismo generalmente se cultiva en estas condiciones durante un periodo de 48 a 720 horas, preferiblemente de 72 a 320 horas. El cultivo se realiza ventajosamente en varias etapas; esto es, uno o más cultivos preliminares se preparan inicialmente en un medio nutriente líquido, siendo entonces inoculados estos cultivos preliminares, por ejemplo en una relación de volumen de 1 :10 a 1 :100, en el medio de producción presente, esto es, el cultivo principal. Se obtiene el cultivo preliminar, por ejemplo, inoculando el micelio a una solución nutriente y dejándolo crecer desde aproximadamente 20 a 120 horas, preferiblemente de 48 a 72 horas. El micelio se puede obtener, por ejemplo, dejando que la cepa crezca durante aproximadamente 1 a 40 días, preferiblemente de 14 a 21 días, en un medio de cultivo sólido o líquido, por ejemplo agar de levadura-malta-glucosa, agar de copos de avena o agar de almidón. El curso de la fermentación, y la formación de los antibióticos según la invención, se pueden monitorizar usando métodos que son conocidos por los expertos, por ejemplo por medio de ensayar la actividad biológica en bioensayos o por medio de métodos cromatográficos tales como cromatografía en capa fina (TLC) o cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC). El Actinomycetales sp. DSM 14865 es capaz de producir el compuesto según la invención por medio de fermentación sumergida. Los compuestos según la invención pueden estar presentes tanto en el micelio como en el filtrado del cultivo; la mayor cantidad está usualmente presente en el filtrado del cultivo. Es por tanto conveniente separar la solución de fermentación por filtración o centrifugación. El filtrado se extrae usando una resina de adsorción como una fase sólida. El micelio, y también la superficie del cultivo, se extrae convenientemente con un disolvente adecuado, por ejemplo metanol o 2-propanol. Aunque la extracción se puede realizar en un amplio intervalo de pH, es conveniente realizarla en un medio neutro o débilmente ácido, preferiblemente entre pH 3 y pH 7. Los extractos pueden ser, por ejemplo, concentrados en vacío y secados. Un método de aislar el antibiótico según la invención es el reparto de la solución, llevado a cabo de una manera conocida per se. Otro método de purificación es el de cromatografía sobre resinas de adsorción, tales como Dianion® HP-20 (Mitsubishi Casei Corp., Tokyo, Japan), Amberlite® XAD 7 (Rohm and Haas, USA), Amberchrom® CG (Toso Haas, Phila-delphia, USA) o similares. Además de estos, son también adecuados un gran número de soportes de fase inversa, por ejemplo RP8 y RP18, como es bien conocido, por ejemplo, dentro del contexto de la cromatografía de líquidos de alta presión (HPLC).

Otra opción para purificar el antibiótico según la invención consiste en usar los que se denominan soportes de cromatografía de fase normal, tales como gel de sílice o AI2O3, u otros, de una manera conocida per se. Un método de aislamiento alternativo es el de usar tamices moleculares tales como Fractogel® TSK HW-40 (Merck KGaA, Darmstadt, Germany), Sephadex® G-25 (Amersham Biosciences, Uppsala, Sweden), y otros, de una manera conocida per se. En adición a esto, es posible también obtener los nuevos ácidos polienocarboxílicos cristalizando los mismos a partir de material enriquecido. Los disolventes orgánicos y sus mezclas, ya estén libres de agua o con agua añadida, o diferentes sales, son, por ejemplo, adecuados para este propósito. Un método adicional para aislar y purificar los antibióticos según la invención es el de usar intercambiadores aniónicos, preferiblemente en un intervalo de pH de 4 a 10. El uso de soluciones tampón a las que se han añadido cantidades de disolventes orgánicos es particularmente adecuado para este propósito. Se ha encontrado, de forma sorprendente, que los compuestos según la invención son inhibidores potentes de la glucosiltransferasa. Los inhibidores selectivos y potentes de la glucosiltransferasa, tales como los antibióticos del grupo moenomicina, siempre presentan efectos antibacterianos, siendo asociada una baja concentración inhibitoria (IC50) con una potente actividad bacteriostática. Los compuestos según la invención tienen actividad bacteriostática porque inhiben el crecimiento y la replicación de las bacterias; son por tanto adecuados para tratar enfermedades que son causadas por infecciones bacterianas. La Tabla 1 resume, a modo de ejemplo, las concentraciones inhibitorias (IC50) de algunos compuestos según la invención. Se usó un sistema de ensayo especial para encontrar inhibidores de la glucosiltransferasa que son específicos y muy eficaces. Este sistema hace uso de un complejo de glucosiltransferasa/3H-moenomicina, que se pone en contacto con las sustancias que se van a ensayar. La determinación del efecto inhibidor de GT se basa en el desplazamiento de la moenomicina A, marcada radiactivamente, desde el complejo de glucosiltransferasa (PBP 1 b)/3H-moenomicina, siendo posible separar la 3H-rnoenomicina liberada, como un compuesto soluble, desde el complejo fijo y medir la radiactividad restante usando un contador Geiger.

Tabla 1 : Las constantes inhibitorias (valores IC50 ) de los antibióticos según la invención en el ensayo de la glucosiltransferasa. serpentemicina A: 0,2 µ? serpentemicina B: 0,1 µ? serpentemicina C: 21 µ? serpentemicina D: 19 µ? Para comparación, se determinó la constante inhibitoria de serpente-no (Ritzau et al., Liebigs Ann. Chem. 1993, 433435): el valor IC50 fue 18 µ?. La presente invención por tanto se refiere también al uso de un com-puesto de la fórmula (I) como un preparado farmacéutico, preferiblemente para el tratamiento y/o profilaxis de las infecciones bacterianas. Además la invención se refiere también al uso de un compuesto de la fórmula (I) para producir un preparado farmacéutico, preferiblemente para el tratamiento y/o profilaxis de las infecciones bacterianas. Además, la presente invención se refiere a un preparado farmacéutico que contiene uno o más de los compuestos según la invención. Dicho preparado farmacéutico se produce mezclando al menos un compuesto de la fórmula (I) con una o más sustancias auxiliares fisiológicamente adecuadas y poniendo esta mezcla en una forma adecuada para la administración. En general, los preparados farmacéuticos según la invención se administran oralmente, localmente o parenteralmente; sin embargo, es también posible en principio usarlos rectalmente. Ejemplos de formas de preparación galénica sólidas o líquidas adecuadas son gránulos, polvos, comprimidos, comprimidos recubiertos con azúcar, (micro)cápsulas, supositorios, jarabes, emulsiones, suspensiones, aerosoles, gotas o soluciones inyectables en forma de ampollas, y también preparaciones que dan una liberación prolongada del compuesto activo, en cuya producción se usan habitualmente adyuvantes fisiológicamente adecuados tales como desintegrantes, agentes aglutinantes, agentes de recubrimiento, agentes de engrosamiento, deslizantes, lubrificantes, aromatizantes, edulcorantes y solubili-zantes. Ejemplos de sustancias auxiliares frecuentemente empleadas que se pueden mencionar son carbonato de magnesio, dióxido de titanio, lactosa, manitol y otros azúcares, talco, proteína láctea, gelatina, almidón, vitaminas, celulosa y sus derivados, aceites animales o vegetales, polietilenglicoles y disolventes, tales como agua estéril, alcoholes, glicerol y alcoholes polihidroxilados. Cuando sea apropiado, las unidades de dosificación para adminis- tración oral pueden ser microencapsuladas con el fin de retrasar la liberación o extenderla durante un periodo de tiempo relativamente largo, por ejemplo por medio de recubrir o embeber el compuesto activo, en forma de partículas, en polímeros adecuados, ceras o similares. Como una dosis conveniente se administran de 0,1 a 1000, preferiblemente de 0,2 a 100, mg/kg de peso corporal. Estas cantidades se administran convenientemente en unidades de dosificación que contienen al menos la cantidad diaria eficaz de los compuestos según la invención, por ejemplo 30 - 3000, preferiblemente 50 - 1000, mg. Los siguientes ejemplos se pretende que aclaren la invención sin que limiten de ningún modo su alcance. Ejemplo 1. Preparación de un cultivo de Actinomycetales sp. DSM 14865 en glicerol Se inocularon 30 mi de solución nutriente (extracto de malta al 1 ,0 %, extracto de levadura al 0,4 %, glucosa al 0,4 %, pH 7,0 en agua), en un matraz Erlenmeyer estéril de 100 mi, con la cepa Actinomycetales sp, DSM 14865 y se incubaron durante 7 días a 28 °C y 180 rpm sobre un agitador rotatorio. En cada caso, se diluyeron después 1 ,5 mi de este cultivo con 2,5 mi de glicerol al 80 % y se conservaron a 135 °C. Ejemplo 2. Preparación de un cultivo preliminar de Actinomycetales sp, DSM 14865 en un matraz Erlenmeyer En cada caso se inocularon 100 mi de solución nutriente (glucosa al 1 ,5 %, harina de soja al 1 ,5 %, Cornsteep al 0,5 %, CaC03 al 0,2 % y NaCI al 0,5 %, pH 7,0), en un matraz Erlenmeyer estéril de 300 mi, con la cepa Actinomycetales sp, DSM 14865 y se incubaron durante 4 días, a 28 °C y 180 rpm, sobre un agitador rotatorio. Este cultivo preliminar se usó después para inocular los cultivos principales. Ejemplo 3. Cinética de la formación de los ácidos polienocarboxílicos aromáticos en los cultivos agitados de Actinomycetales sp, DSM 14865 Se empezaron los cultivos de Actinomycetales sp, DSM 14865, como se describe en el Ejemplo 2, en 20 matraces Erlenmeyer y se incubaron los cultivos sobre un agitador durante un periodo de hasta 2 semanas. Se separaron los matraces en agitación después de 48, 72, 96, 102, 120, 240 y 312 horas. Después de que se hubo separado el micelio, y después de la extracción en fase sólida de los ácidos polienocarboxílicos aromáticos del filtrado del cultivo con MCI-Gel® (Mitsubishi Chemical Industries) y elución con metanol, se analizaron los extractos por HPLC como se describe en el Ejemplo 8. Los cambios en las unidades de área superficial por HPLC que tuvieron lugar en dependencia con el tiempo de incubación se listan en la siguiente tabla. Las unidades de área superficial son proporcionales a las concentraciones de los productos. Tabla 2: Cambio en las concentraciones de los productos que ocurre a lo largo del tiempo durante el cual se incuba Actinomycetales sp, DSM 14865 en cultivos con agitación. Las concentraciones de producto son proporcionales a las unidades de área superficial por HPLC dadas.

Tiempo de incubación Serpentemicinas Serpenteno A B C D 48 h 174 132 151 54 574 72 h 313 284 372 94 1948 96 h 727 443 891 242 2530 102 h 698 424 814 358 1878 120 h 816 470 1098 430 1212 240 h 917 1216 1786 1437 47 312 h 882 1411 1877 734 35 entras que el serpenteno ha alcanzado ya su máxima formación después de 96 horas, las concentraciones más altas de serpentemicinas A y D sólo se observan después de 10 días. Los productos serpentemicina B y C están incluso presentes en sus más altas concentraciones después de 13 días. Ejemplo 4. Fermentación de Actinomycetales sp. DSM 14865 con el fin de producir serpentemicina A Con el fin de producir los antibióticos según la invención, se fermentó la cepa Actinomycetales sp. DSM 14865 en termentadores de 30 litros. La solución nutriente empleada fue la siguiente: 10 g de almidón soluble/litro; 10 g de glucosa/litro; 10 g de glicerol/litro; 2,5 g de Cornsteep, líquido/litro; 5 g de pepto-na/litro; 2 g de extracto de levadura/litro; 1 g de NaCI/litro; 3 g de CaCCVlitro en agua; pH anterior a la esterilización, 7,2. Se observaron un buen crecimiento y una rápida productividad en este medio nutriente. La fermentación se realizó en las siguientes condiciones: Esterilización: in-situ, 20 min a T=121 °C Inoculo: 6 % Velocidad de agitación: 180 rpm T: 28 °C Aire: 0,45 m3/h PO2: no regulado, pH, durante la fermentación: aproximadamente 6,2; no regulado.

En estas condiciones, se observó un buen crecimiento dentro de las primeras 70 h; a este tiempo, la fuente de C en el medio había sido consumida y el crecimiento se estaba estancando. Después de 80 h, fue posible detectar la primera formación del producto de los compuestos según la invención. Los fermentado-res fueron recolectados después de 98 h. Ejemplo 5: Aislamiento de la serpentemicina A a partir de la solución de cultivo de Actinomycetales sp. DSM 14865. Después de que la fermentación de Actinomycetales sp. DSM 14865 hubo llegado a su fin, se filtraron 27,5 litros de caldo de cultivo procedente del termentador, obtenidos como se describe en el Ejemplo 4, en la presencia añadida de aproximadamente 2 % de un acelerador de la filtración (Celite®) y se extrajo la masa celular (1890 g) con 6 litros de metanol. La solución metanólica que contiene el compuesto activo fue liberada del micelio por filtración y concentrada en vacío. Se reunió el concentrado con 25 litros del filtrado del cultivo, tras lo cual se ajustó el pH a 7 y el conjunto se cargó sobre una columna CHP20P de 3 litros de ®MCI GEL, previamente preparada. Se eluyó la columna con un gradiente de tampón de acetato de NH4 50 mM en agua y después 2-propanol. El caudal a través de la columna (7 litros por hora) se recogió en fracciones (en cada caso 2 litros) y las fracciones 4 a 11 y 16 a 19 que contienen el antibiótico, se reunieron en cada caso y se concentraron en vacío. Se analizaron las fracciones usando HPLC. Las fracciones 4 a 11 contienen las serpentemicinas más polares mientras que las fracciones 16 a 19 contienen los serpentenos. Las fracciones que contienen serpenteno se purificaron dos veces cromatográficamente sobre columnas de HPLC LiCh-rospher® 100 RP-18e, 250-25, usando en primer lugar mezclas de tampón de ace-tato de NH4 50 mM/acetonitrilo y usando después gradientes de ácido trifluoroacé-tico al 0,05 % /acetonitrilo. La liofilización de las fracciones que contienen el antibiótico puro dio como resultado 19 mg de serpenteno puro. Después de haber sido concentrados en vacío, los compuestos más polares en las fracciones 4 a 11 se purificaron una vez más por cromatografía en columna sobre CHP20P con 160 mi de MCI GEL® (dimensiones de la columna: 26 mm x 300 mm) usando un método de gradiente. El gradiente varió desde acetonitrilo al 10 % hasta 60 % en tampón de acetato de NH4 50 mM durante 2 horas. El caudal a través de la columna fue de 25 mi por minuto mientras que el tamaño de la fracción fue de 50 mi. Los compuestos serpentemicina B y D se localizaron en las fracciones 5 a 35 mientras que las fracciones 36 a 39 contenían serpentemicina C y las fracciones 40 a 43 contenían serpentemicina A. Las últimas se liberaron del disolvente orgánico en vacío, tras lo cual se añadió ácido ascórbico al 0,01 % y se llevó a cabo la purificación por cromatografía ¡socrática sobre una columna de HPLC LiChrospher® 100 RP-18e, 250-25, usando acetonitrilo al 45 % en ácido trifluoroacético al 0,05 %. Las fracciones que contenían serpentemicina A pura (fracciones 31 a 35) se liofilizaron en la oscuridad y la serpentemicina A se conservó protegida del aire en atmósfera de argón (37 mg). Espectrometría de masas ESI": 321 ,4 (M - H), espectrometría de masas ESI+: 305,3 (MH - H20). Máximos en UV: 315 y 355 nm. Los datos de NMR se listan en la Tabla 3, estando numerados los átomos de C como sigue: Tabla 3: Desplazamientos químicos en la NMR de la serpentemicina A en DMSO a 300°K. 13C 1H 1 - 167,43 2 6,02 122,54 3 7,35 144,35 4 7,04 128,09 5 7,19 137,16 6 - 134,33 7 7,73 125,93 8 7,35 127,90 9 7,35 128,57 10 7,27 130,22 11 - 135,78 12 6,81 130,33 13 6,63 131 ,24 14 6,59 132,61 15 7,15 130,33 16 6,41 136,57 17 6,21 127,45 18 7J0 138,40 19 5,95 123,07 20 - 167,48 Serpentemicina A: Apariencia: sustancia de color amarillo limón que es soluble en medios polares y disolventes orgánicos polares y no particularmente soluble en agua. Estable en medio neutro y moderadamente ácido pero inestable en solución fuer-temente ácida y fuertemente alcalina. La serpentemicina A es sensible a la luz y al aire. Fórmula empírica: C20H18O4 Peso molecular: 322,36 Ejemplo 6: Aislamiento y descripción de la serpentemicina B Las fracciones 36 a 39 que contienen serpentemicina B, procedentes de la columna CHP20P con 160 mi de MCI GEL®, obtenidas como se describe en el Ejemplo 4, se concentraron en vacío y la solución acuosa, que todavía contenía algo de acetonitrilo, se cargó sobre una columna de HPLC LiChrospher® 100 RP-18e, 250-25. La columna se eluyó ¡socráticamente usando acetonitrilo al 42 % en ácido trifluoroacético al 0,05 % (pH 2,4). El caudal a través de la columna fue de 39 ml/minuto; se separaron las fracciones cada 19,5 mi y se analizaron por HPLC. Las fracciones 22 a 24 contenían el antibiótico serpentemicina B; estas fracciones fueron cromatografiadas de nuevo sobre la misma columna siendo reducida a 40 % la concentración de acetonitrilo en el eluyente. Las fracciones 38 a 42 contenían serpentemicina B pura; estas fracciones fueron liofilizadas y dieron 10,2 mg del antibiótico. Espectrometría de masas ESI": 295,0985 (M - H), espectrometría de masas ESI+: 297,1 164 (M + H), correspondiente a la fórmula empírica Ci8Hi604. Máximos en UV: 306 y 332 nm en acetonitrilo/ácido fosfórico al 0,1 % en agua.

Los datos de NMR se listan en la Tabla 4; la numeración de los átomos es análoga a la numeración de la serpentemicina A. Tabla 4: Desplazamientos químicos en la NMR de la serpentemicina B en DMSO a 300°K. 1H 13C 1 - 167,42 2 6,02 122,59 3 7,35 144,32 4 7,05 128,23 5 7,19 137,09 6 - 134,40 7 7,74 126,00 8 7,36 128,10 9 7,36 128,61 7,28 130,31 11 - 135,40 12 6,90 131,86 13 6,53 130,54 14 6,81 135,71 15 6,65 132,89 16 7,19 143,79 17 5,93 122,69 18 - 167,33 Serpentemicina B: Apariencia: sustancia de color amarillo pálido que es soluble en medios polares y disolventes orgánicos polares y no particularmente soluble en agua. Estable en medio neutro y moderadamente ácido pero inestable en solución fuertemente ácida y fuertemente alcalina. La serpentemicina B es sensible a la luz y al aire. Fórmula empírica: Ci8His04 Peso molecular: 296,33 Ejemplo 7: Aislamiento y descripción de la serpentemicina C. Se añadieron 450 mg de ácido ascórbico a 45 litros del filtrado del cultivo, obtenido como se describe en el Ejemplo 3, y se cargó el conjunto, a pH 4,5, sobre una columna CHP20P de 3,5 litros de MCI GEL® (15 cm x 20 cm). Se eluyó la columna con un gradiente de tampón de acetato de NH4 al 0,1 %, pH 4,5, después 2-propanol. El caudal fue de 15 litros/hora. El eluido que contiene propa- nol se recogió en fracciones (en cada caso 7 litros); la fracción 6 contenía los ácidos polienodicarboxílicos aromáticos polares. Estos se concentraron en vacío; tras lo cual se añadieron 50 mg de ácido ascórbico y se ajustó el pH de la solución acuosa a 3; se cargó entonces la solución sobre una columna CHP20P con 490 mi de MCI GEL® (5 cm x 30 cm). La desorción se llevó a cabo usando un gradiente de acetonitrilo al 10 % en ácido acético al 0,5 % después acetonitrilo al 100 %; a un caudal de 25 mi por minuto, el tiempo de la fracción fue de 10 minutos (en cada caso 250 mi). Los ácidos polienodicarboxílicos aromáticos polares se localizaron en las fracciones 12 a 19; éstas se reunieron, se concentraron en vacío y después se purificaron por cromatografía de permeación en gel. El soporte empleado fue 3,9 litros de Fractogel® TSK HW-40 (dimensiones de la columna: 10 x 50 cm), mientras que la fase móvil empleada fue una mezcla constituida por 60 % de acetonitrilo, 20 % de metanol y 20 % de tampón acetato de NH4 25 mM, pH 7. A un caudal de 4,5 ml/minuto, se recogieron fracciones cada media hora (en cada caso 135 mi). Las fracciones 37 a 40, que se examinaron por HPLC, contenían el compuesto serpentemicina C. La purificación final tuvo lugar sobre LiChrospher® 100 RP-18e, 250-25 usando la fase móvil de tampón acetato de NH4 50 mM, pH 7/acetonitrilo. Las fracciones que contienen serpentemicina C pura se reunieron y se desalaron a través de LiChrospher® RP-18e, 250-10, usando agua/acetonitrilo. Por liofilización se obtuvieron 15 mg de la sal de amonio de la serpentemicina C. Espectrometría de masas ESI": 295,1 (M - H), espectrometría de masas ESI+: 279,2 (MH - H2O), correspondiente a la fórmula empírica Ci8Hi604. Máximos en UV: 212, 308 y 356 nm en acetonitrilo/ácido fosfórico al 0,1 % en agua (1 :1). Los datos de NMR se listan en la Tabla 5; la numeración de los átomos es análoga a la numeración de la serpentemicina A. Tabla 5: Desplazamientos químicos en la NMR de la serpentemicina C en DMSO a 300°K.

Serpentemicina C: Apariencia: sustancia de color amarillo pálido que es soluble en me- dios polares y disolventes orgánicos polares y no particularmente soluble en agua. Estable en medio neutro y moderadamente ácido pero inestable en solución fuertemente ácida y fuertemente alcalina. La serpentemicina C es sensible a la luz y al aire. Fórmula empírica: Ci8Hi604 Peso molecular: 296,33 Ejemplo 8: Aislamiento y descripción de la serpentemicina D. Las fracciones 36 a 39 que contienen serpentemicina D procedentes de la columna CHP20P con 160 mi de MCI GEL®, obtenidas como se describe en el Ejemplo 4, se concentraron en vacío y la solución acuosa, que aún contenía algo de acetonitrilo, se cargó sobre una columna de HPLC LiChrospher® 100 RP-18e, 250-25. La columna se eluyó ¡socráticamente usando acetonitrilo al 42 % en ácido trifluoroacético al 0,05 % (pH 2,4). El caudal a través de la columna fue de 39 ml/minuto; se tomaron fracciones en cada caso de 19,5 mi y se analizaron por HPLC, como se describe en el Ejemplo 9. Las fracciones 51 a 53 contenían el antibiótico serpentemicina D; estas fracciones fueron cromatografiadas de nuevo sobre la misma columna, como se ha descrito, excepto que la concentración de acetonitrilo en el eluyente se redujo al 40 %. Las fracciones 13 a 15 contenían serpentemicina D pura; estas fracciones fueron liofilizadas y dieron 3 mg del antibiótico. Espectrometría de masas ESI': 325,5 (M - H), espectrometría de masas ESI+; 349,2 (M + Na), correspondiente a la fórmula empírica C20H22O4. Máximos en UV: 299 y 338 nm en acetonitrilo/ácido fosfórico al 0,1 % en agua. Los datos de NMR se listan en la Tabla 6; los átomos se numeraron análogamente al compuesto ser- pentemicina A. Tabla 6: Desplazamientos químicos en la NMR de la serpentemicina D en DMSO a 300° K. 16 6,30 129,68 17 5,90 136,71 18 3,82 75,31 18-OH 4,81 (ancho) - 19 3,48 69,77 19-OH 4,48 (ancho) - 20 1,03 19,10 Serpentemicina D: Apariencia: sustancia de color amarillo pálido que es soluble en medios polares y disolventes orgánicos polares y no particularmente soluble en agua. Estable en medio neutro y moderadamente ácido pero inestable en solución fuertemente ácida y fuertemente alcalina. La serpentemicina D es sensible a la luz y al aire. Fórmula empírica: C20H22O4 Peso molecular: 326,40 Ejemplo 9: Cromatografía de líquidos de alta presión (HPLC) de las serpentemicinas. La HPLC se llevó a cabo con las siguientes condiciones: Columna: Superspher 100 RP-18e®, 250-4, con precolumna, Fase móvil: acetonitrilo al 50 % en ácido fosfórico al 0,1 %, Caudal: 1 mi por minuto, Temperatura de la columna: 40 °C, Detección por medio de absorción UV a 210 nm.

Se observaron los siguientes tiempos de retención. Serpentemicina A 10,1 minutos, Serpentemicina B 5,6 minutos, Serpentemicina C 7,3 minutos, Serpentemicina D 5,2 minutos. Ejemplo 10: Determinación de la inhibición de la glucosiltransferasa por las serpentemicinas. Se realizó el ensayo como está descrito por Vollmer & Hóltje (Antimi-crobial Agents and Chemotherapy 2000, 44, 1181-1185), excepto que en el presente ejemplo se usó proteína 1 b que liga penicilina purificada (PBP 1b; 5 pM), que lleva moenomicina marcada con 3H en el sitio de la glucosiltransferasa, en lugar de [3H]bencilpenicilina. La 3H-moenomicina se obtiene de la moenomicina A (Kurz et al., Eur. J. Biochem., 1998, 252, 500-507) por hidrogenación con 3H2: 6 mg de moenomicina, disueltos en 300 µ? de metanol, se añaden a un matraz de 1 cm3, tras lo cual se añaden 2 mg de paladio-carbón (Degussa Type E10N/D). Después se gasifica el matraz, mientras se excluye el aire, con 1 cm3 de 3H2 y se deja hidrogenar la solución de reacción durante 15 minutos. Una vez que se ha completado la reacción, se separa el catalizador por filtración de la mezcla de reacción, que se diluye hasta 100 mi con etanol. Esta solución se puede usar directamente para preparar el complejo de glucosiltransferasa/3H-moenomicina. Radiactividad total del producto de la reacción: 6,56 GBq (177mCi), actividad específica: 1 ,9 TBq/mmol. El complejo radiactivo se une a perlas SPA PVT Copper His-Tag. Se mide la moenomicina radiactiva que es desplazada por los inhibidores.

Perlas SPA PVT Copper His-Tag: Amersham RPN 0095; PBS: GIBCO BRL 14200-067; BSA: Calbiochem 12657; NOG: SIGMA 0-8001 (n-octil-p-D-glucopiranósido); Tween 20: Acros 23336-067; Placas de microtitulación: Greiner Labortechnik; La determinación se llevó a cabo en placas de microtitulación. Se añadieron a las placas de microtitulación 10 µ? de la solución de ensayo, seguidos por 10 µ? de 3H-moenomicina (25 nM, 3,1 kBq/pocillo) y 40 µ? de perlas SPA cargadas con PBP 1b (100 pg de perlas, enzima 45 nM ). Se sellaron las placas y se dejaron en reposo a temperatura ambiente durante 8 horas. Después de esto, se separaron las perlas de la solución de ensayo centrifugando durante 3 minutos a 1300 rpm y se midió la distribución de la radiactividad en un WALLAC MicroBeta® 1450 Counter. Los valores inhibitorios se calcularon de acuerdo con la fórmula: [1 - (CpmmUestra-Cpmcontrol ¡nferior)/(CpmControl superior" CprT rol inferior)] X 100 (%).

Claims

REIVINDICACIONES:
Un compuesto de la fórmula (I) en la que Y es un grupo de la fórmula (II) o de la fórmula (III)
R es H, alquilo Ci-C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6 o arilo C5-C14, halógeno, -CN, -OH, -O-alquilo C1-C6, -O-alquenilo C2-C6l -O-arilo C5-C14, -O-alquinilo C2-C6, -NH2l -NH-alquilo CrC6, -NH-alquenilo C2-C6, -NH-alquinilo C2-C6, -NH-arilo C5-C14, -N(-alquil C^CG)2, -N(-alquenil C2-C6)2, -N(-alquinil C2-C6)2, -N(aril C5-Ci4)2, -NH[-C(=0)-(alquil C^Cs)], -NH[-C(=0)-(aril C5-C14)], -NH-O-R^ -SH, -S-alquilo C C6, -S-alquenilo C2-C6, -S-alquinilo C C6 o -O-arilo C5-C14, donde los sustituyentes mencionados pueden estar sin sustituir o sustituidos, una vez o más de una vez, con alquilo CrC6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6 o arilo C5-C14, donde alquilo, alquenilo, alquinilo y arilo están sin sustituir o sustituidos, una o dos veces, con - OH, =0, -O-alquilo C C6, -O-alquenilo C2-C6, -O-arilo C5-C14, -arilo C5-C14, -NH-alquilo Ci-C6, -NH-alquenilo C2-C6, -NH2, halógeno, donde alquilo, alquenilo, alquinilo y arilo pueden estar adicionalmente sustituidos con un -CN, una amida o una oxima, R-i, R2, R3 y R4 son, independientemente uno de otro: H, alquilo C C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6 o arilo C5-Ci4, en la que alquilo, alquenilo, alquinilo y arilo están sin sustituir o sustituidos, una o dos veces, con -OH, -O-alquilo Ci-C6, -O-alquenilo C2-C6, -O-arilo C5-Ci4l -arilo C5-C14, -NH-alquilo Ci-C6, -NH-alquenilo C2-C6, -NH2 o halógeno, donde alquilo, alquenilo, alquinilo y arilo están sin sustituir o sustituidos, una o dos veces, con -OH, =0, -O-alquilo Ci-C6> -O-alquenilo C2-C6, -O-arilo C5-Ci4, -arilo C5-Ci4) -NH-alquilo Ci-C6, -NH-alquenilo C2-C6, -NH2 o halógeno, donde alquilo, alquenilo, alquinilo y arilo pueden estar adicionalmente sustituidos con un -CN, una amida o una oxima, i, X2 y X3 son, independientemente uno de otro, -CH2-, -CHR-, -NH-, -N(alquil Ci-C6)-, -N(alquenil C2-C6)-, -N(alquinil C2-C6)-, -N[-C(=0)-(alquil Ci-C6)]-, -N[-C(=0)-(aril C5-C14)]-, -N(aril C5-Ci4)-, -N(O-R)-, -O- o -S-, n y m son, independientemente uno de otro, 2, 3, 4 o 5, y o es 0, 1 , 2 o 3, donde los compuestos de la fórmula (I) cum-píen las excepciones de que o es 0, n es 2, m es 2 o 3, X2 y X3 son O, y R2 y R3 son C2Hs, y todos los dobles enlaces poseen la configuración trans, y/o una forma estereoisomérica del compuesto de la fórmula (I) y/o una mezcla de estas formas en cualquier proporción, y/o una sal del compuesto de la fórmula (I) fisiológica- mente tolerada. 2 - Un compuesto de la fórmula (I) según la reivindicación 1 , en el que al menos un grupo poliénico contiene al menos un doble enlace cis. 3.- Un compuesto de la fórmula (I) según las reivindicaciones 1 o 2, en el que R es H Ri es H o alquilo C-i-Ce, R2 es H o alquilo ?-?-??, 3 es H o alquilo C1-C6, R4 es alquilo CrC6, y Xi y X2 son -O-, y sus sales fisiológicamente toleradas.
4.- Un compuesto de la fórmula (I) como se reivindica en una o más de las reivindicaciones 1 a 3, que es un compuesto de la fórmula (IV) en el que m es 3 o 4, y sus sales fisiológicamente toleradas.
5.- Un compuesto de la fórmula (I) como se reivindica en una o más de las reivindicaciones 1 a 4, que es un compuesto de la fórmula (V) (V)
6. - Un compuesto de la fórmula (V) según la reivindicación 5, en el que Ri y F¾ son H.
7. - Un compuesto de la fórmula (I) como se reivindica en una o más de las reivindicaciones 1 a 4, que es un compuesto de la fórmula (VI)
8. - Un compuesto de la fórmula (VI) según la reivindicación 7, en el que Ri y R2 son H.
9. - Un compuesto de la fórmula (I) como se reivindica en una o más de las reivindicaciones 1 a 4, que es un compuesto de la fórmula (VII)
10. - Un compuesto de la fórmula (VII) según la reivindicación 9, en el que R1 y R2 son H.
11. - Un compuesto de la fórmula (I) como se reivindica en una de las reivindicaciones 1 a 3, que es un compuesto de la fórmula (VIII)
12.- Un compuesto de la fórmula (VIII) según la reivindicación 11 , que es un compuesto de la fórmula (IX)
13. - Un compuesto de la fórmula (IX) según la reivindicación 12, en el que Ri es H.
14. - Un compuesto de la fórmula (VIII) según la reivindicación 1 1 , que es un compuesto de la fórmula (X)
15. - Un compuesto de la fórmula (X) según la reivindicación 14, en el que Ri es H.
16. - Un procedimiento para preparar un compuesto de la fórmula (I) según la reivindicación 1 , que comprende 1. cultivar el microorganismo Actinomycetales sp. DSM 14865, o una de sus variantes y/o mutantes, en un medio nutriente acuoso hasta que uno o más de los compuestos serpentemicina A, B, C y/o D se acumula en el caldo de cultivo, 2. aislar y purificar la serpentemicina A, B, C o D, 3. cuando sea apropiado, usar un reactivo adecuado para convertir la serpentemicina A, B, C o D en un compuesto de la fórmula (I), 4. y, cuando sea apropiado, convertir el compuesto de la fórmula (1) en una sal farmacológicamente tolerada.
17. - El procedimiento según la reivindicación 16, en el que el reactivo adecuado es un agente alquilante.
18. - Un procedimiento para preparar un compuesto como se reivindica en una o más de las reivindicaciones 12 a 15, que comprende fermentar el microorganismo Actinomycetales sp. DSM 14865, o una de sus variantes y/o mutan-tes, en un medio de cultivo que contiene una fuente de carbono y nitrógeno y también las sales inorgánicas habituales y elementos trazas, aislar las serpentemici-nas A, B, C y/o D y, cuando sea apropiado, convertir las serpentemicinas A, B, C y/o D en una sal farmacológicamente tolerada.
19. - Un procedimiento como se reivindica en una o más de las reivindicaciones 16 a 18, en el que la fermentación se realiza en condiciones aerobias a una temperatura entre 20 y 35 °C y a un pH entre 4 y 10.
20. - El uso de un compuesto como se reivindica en una o más de las reivindicaciones 1 a 15, para producir un preparado farmacéutico.
21. - El uso de un compuesto según la reivindicación 20, para producir un preparado farmacéutico para el tratamiento y/o profilaxis de las enfermeda- des infecciosas bacterianas.
22.- Un preparado farmacéutico que contiene al menos un compuesto como se reivindica en una o más de las reivindicaciones 1 a 15 y una o más sustancias auxiliares fisiológicamente adecuadas.
23.- Un procedimiento para producir un preparado farmacéutico según la reivindicación 22, que comprende poner al menos un compuesto como se reivindica en una o más de las reivindicaciones 1 a 15, junto con una o más sustancias auxiliares fisiológicamente adecuadas, en una forma adecuada para la administración.
24.- El microorganismo Actinomycetales sp., DSM 14865.