MXPA05002157A - Medicamento que contiene disorazoles y derivados de los mismos para el tratamiento de enfermedades tumorales benignas y malignas. - Google Patents

Abstract

La invencion se refiere a los disorazoles de la formula general (1) que son utilizados como medicamentes, preferentemente en el tratamiento de enfermedades tumorales, especialmente en el caso de resistencia medicamentosa contra otros ingredientes activos, y en carcinoma con metastasis. Los posibles usos de los mismos no estan restringidos a las enfermedades tumorales.

Description

MEDICAMENTO QUE CONTIENE DISORAZOLES Y DERIVADOS DE LOS MISMOS PARA EL TRATAMIENTO DE ENFERMEDADES TUMORALES BENIGNAS Y MALIGNAS DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Para los siguientes pocos años, se espera mundialmente un incremento dramático en las oncosis y en los casos de muerte relacionados a tumores. En el 2001, en todo el mundo aproximadamente 10 millones de personas sufrieron de cáncer y más de 6 millones de personas murieron de esta enfermedad. El desarrollo de tumores es una enfermedad fundamental de organismos superiores en el reino vegetal, en el reino animal y en humanos. El modelo de carcinogénesis de pasos múltiples, generalmente reconocido asume que como resultado de la acumulación de un número de mutaciones en una célula individual ésta es modificada en su comportamiento de proliferación y diferenciación que finalmente, vía etapas intermedias benignas, se alcanza un estado maligno con metástasis. El término cáncer o tumor esconde un panorama clínico con más de 200 diversas enfermedades individuales. Las oncosis pueden proceder de una manera benigna o maligna. Los tumores más importantes son aquellos del pulmón, las mamas, el estómago, el cuello del útero, la próstata, la cabeza y el cuello, el intestino grueso y delgado, el hígado y el sistema sanguíneo. Existen grandes diferencias con respecto . al curso, la prognosis y el comportamiento de terapia. Más del 90% de los casos conocidos se refieren a tumores sólidos, los cuales en particular, en la etapa avanzada o en la metástasis son tratables con dificultad o no son tratables. Los tres pilares del control del cáncer' son todavía la eliminación quirúrgica, la irradiación y la quimioterapia. A pesar de grandes avances, no ha sido hecho posible el desarrollar medicamentos que den orige a una prolongación marcada del tiempo de supervivencia o incluso una curación completa de los tumores sólidos muy difundidos. Es por lo tanto significativo inventar nuevos medicamentos para el control del cáncer. La presente invención se refiere al disorazol -con la excepción del disorazol Al - y derivados de los disorazoles , y a su uso como medicamento, en particular para el tratamiento de tumores benignos y malignos en humanos y mamíferos . Se ha encontrado sorprendentemente ¦ ahora que los disorazoles El y DI en particular poseen una acción citotóxica sorprendente sobre . diversas líneas de células tumorales humanas. En concentraciones nano- y picomolares, la división, entre otras, del carcinoma de ovario, carcinoma de próstata, y glioblastoma, 'carcinoma de pulmón y células de cáncer de mama, es inhibida. La acción de los disorazoles El y DI es en este caso dependiente del ciclo celular, incluso en concentraciones nanomolares el ciclo celular es mantenido en la fase G2/M y las células cancerosas son forzadas .hacia la apoptosis. Se ha hecho posible además el mostrar que la acción antiproliferativa de los disorazoles reclamados está basada, entre otras cosas, en una inhibición efectiva, de la polimerización de la tubulina. El disorazol El es en particular también altamente activo contra líneas de células resistentes al paclitaxel y a la vindesina. . Fue inventivamente posible mostrar que el disorazol El es altamente potente con relación a la acción biológica, y de este modo es posible el uso como un compuesto activo en un medicamento para el control de los cánceres . Esto interesa en particular, ya que el disorazol Al no es adecuado para el uso como un citostático (G. Hoefle, reporte anual 1999/2000 de Gesellschaft für Biotechnologische Forschung [Association for Biotechnological Research] GBF, p. 103). En un experimento terapéutico, utilizando por ejemplo, ratones desnudos que llevan el injerto tumoral NCI-H460 - pero no restringidos a éstos - fue posible observar, no obstante, para el disorazol El administrado intravenosamente, una . reducción significativa en el desarrollo .. tumoral ' incluso a dosis que no produjeron disminución del peso o quizás incluso la mortalidad. Las sustancias naturales son una fuente importante para estructuras de guía novedosas en investigación f rmacéutica, y e algunos casos son también directamente adecuadas para el- desarrollo de un nuevo medicamento (Y.Z. Shu, J. Nat. Prod., 1998, ,61, 1053-1071). Se sabe que muchas sustancias naturales poseen acción fuertemente citotóxica (V.J. Ram, S. Kumari, DNP, 2001, 14(8), 465-482). Se sabe que las sustancias naturales del grupo que consiste de los disorazoles son aisladas de las bacterias de la cepa Sorangium cellulosum So cel2 (R. Jansen, H. Irschik, H. Reichenbach, V. Wray, G. Hófle, Liebigs Ann. Chem. , 1994, (8), 759-773) . En total, han sido aislados y caracterizados fisicoquímicamente 29 disorazoles. Para el disorazol Al, se reportó que éste .posee una acción antiproliferativa en modelos celulares (H. Irschik, R. Jansen, K. Gerth, G. Hófle, H. Reichenbach, J. Antibiot. 1995, 48 (1), 31-35; Y.A. Elnakady, Dissertation, -Brunswick Technical University, 2001) . El uso para' el tratamiento de las oncosis, no obstante, no fue ni descrito ni sugerido. No fue llevada a cabo una investigación biológica de los otros disorazoles. Los compuestos de acuerdo a la invención son adecuados, sin estar restringidos a éstos, para el empleo como medicamentos para el tratamiento de oncosis benignas y malignas u otras enfermedades antiproliferativas en humanos y animales. En principio,, los compuestos de acuerdo a la invención son , adecuados para el control de todos los trastornos que están basados en la división rápida y descontrolada de las células, y con esto provocan condiciones patológicas. Los compuestos de acuerdo a la invención pueden ser empleados como una sustancia individual o en combinación con sustancias citotóxicas adicionales, por ejemplo cisplatino, carboplatino, . doxorrubicina, - ifosfamida, ciclofosfamida, 5-FU, metotxexato y en particular' en combinación con inhibidores de la transducción de señales, tales como, por ejemplo, Herceptina, Gilvec o Iressa, pero no restringidos a éstos . Los análogos sintéticos y semisintéticos de los disorazoles también poseen acción antiproliferativa . Por medio de modificación específica de la forma molecular, propiedades importantes tales como la acción inhibitoria biológica, estabilidad y propiedades biofísicas pueden ser moduladas. De esta manera, son obtenibles derivados-terapéuticamente valiosos de los compuestos iniciales. Un objetivo adicional de la derivatización consiste en moderar los posibles efectos colaterales tóxicos. Los compuestos de acuerdo a la invención pueden ser administrados como formas farmacéuticas líquidas. Esto es llevado a cabo de una manera adecuada en cada caso en la forma de soluciones o suspensiones . Los compuestos de acuerdo a la invención pueden ser administrados en una forma de administración adecuada, preferentemente dentro de una arteria, intraarterialmente como una inyección; dentro de una vena, intravenosamente como una inyección o infusión; dentro de la piel, intracutáneamente como una inyección, bajo la piel, subcutaneamante como una inyección, dentro del músculo, intramusculármente como una inyección, dentro de la cavidad abdominal, intraperitonealmente como una inyección o infusión. Si los compuestos de la fórmula general I de acuerdo a la invención tienen al menos un centro asimétrico, éstos pueden estar presentes en la forma de sus racematos, en la forma de enantiómeros y/o diastereoisómeros puros o en la forma de mezclas de estos enantiómeros y/o diastereoisómeros,. a saber en sustancia y como sales farmacéuticamente aceptables de estos compuestos. Las mezclas pueden estar presentes en cualquier proporción de mezclado deseada de los estereoisomeros . Si es posible, las configuraciones de cada uno de los dobles enlaces en los compuestos de acuerdo a la invención pueden independientemente uno del otro en cada caso, ser E o Z. Si es posible, los . compuestos de acuerdo a la invención pueden estar presentes en la forma de tautómeros. De acuerdo a una modalidad, la invención se refiere a los compuestos de la fórmula general I :, Fórmula I en la cual independientemente uno del otro Rl es: (i) hidrógeno (ii) 0R4 (iii) parte del doble enlace a C5' R2, R3 y R4 son: (i) hidrógeno (ii) alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido o no sustituido (iii) alquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido con uno o más átomos de . flúor, preferentemente un grupo trifluorometilo, (iv) (alquil de 1 a 4 átomos de carbono) - (arilo de 6 a 14 átomos de carbono) sustituido o no sustituido, alquilheteroarilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido o no sustituido; · (v) alcoxicarbonilo de 1 a 4 átomos de carbono, alquilaminocarbonilo de 1 a 4 átomos de carbono, alquilaminotiocarbonilo de 1 a 4 átomos de carbono, alquilcarbonilo de 1 a 6 átomos de carbono o (alcoxicarbonil de 1 a 6 átomos de carbono) - (alquilo de 1 a 6 átomos de carbono) , siendo posible que la sustitución del radical alquilo por flúor, cloro,, bromo, yodo, CN, N¾, NH- (alquilo de 1 a 20 átomos de carbono) , NH- (cicloalquilo de 3. a 12 átomos de carbono) , OH., O- (alquilo de 1 a 20 átomos de carbono) , tenga lugar de manera simple o, sobre átomos idénticos o diferentes, múltiples veces por sustituyentes idénticos o diferentes, y es posible que la sustitución de un radical arilo por flúor, cloro, bromo, yodo, CN, NH2/ NH- (alquilo de 1 a 20 átomos de carbono) , OH, 0- (alquilo de 1 a 20 átomos de carbono) , y/o heterociclilo de 3 a 8 átomos de carbono que tiene 1 a 5 heteroátomos , preferentemente nitrógeno, oxígeno, azufre, tenga lugar de manera simple o, sobre átomos idénticos o diferentes, múltiples veces por sustituyentes idénticos o diferentes, y X, Y son: en cada caso individual independientemente uno del otro o junto con oxígeno, azufre, dos grupos hidroxilo vecinos, dos grupos metoxi vecinos, parte de un doble enlace, siendo excluido un compuesto en el cual Rl es metoxi, R2, R3 es hidrógeno, X es oxígeno e Y es la parte de un doble enlace. La expresión "arilo" dentro del significado de esta invención significa hidrocarburos aromáticos, entre otros fenilos, naftilos y antracenilos . Los radicales pueden también ser fusionados a sistemas de anillo saturados, (parcialmente) insaturados o aromáticos. La expresión "heteroarilo" significa un radical aromático cíclico de 5, 6 ó 7 miembros, que contiene al menos 1, opcionalmente también 2, 3, 4 ó -5 heteroátomos donde los heteroátomos son idénticos o diferentes. El heterociclo puede también ser parte de un sistema bi- o policíclico. Los heteroátomos preferidos son nitrógeno, oxígeno y azufre . Se prefiere que el radical heteroarilo sea seleccionado del grupo que consiste de pirrolilo, furilo, tienilo, triazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, pirazolilo, imidazolilo, piridinilo, pirimidinilo, pirazinilo, indolilo, indolizinilo, quinolilo, isoquinolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, carbazolilo, fenazinilo, fenotiazinilo, acridinilo.

Los compuestos más preferidos de acuerdo a la fórmula general I son aquellos que son encontrados en la siguiente selección: (1) Disorazol El Fórmula II: disorazol El (2) Disorazol DI Fórmula III: disorazol DI (3) Disorazol Al es expresamente no un objetivo de esta invención.

Fórmula IV: disorazol al Los análogos sintéticos y semisintéticos de la presente invención, de los disorazoles de la fórmula general la, Ib y Ic son preparables de acuerdo al Esquema de Reacción 1: Esquema de Reacción 1 Fórmula la Formula I Fórmula Ib base R-Hal R. Alk, Alquilante Fórmula le Los disorazoles de la fórmula general I pueden ser convertidos, de una manera convencional, a los derivados de la presente invención por la fórmula la, Ib y Ic al reemplazar el hidrógeno sobre R2 , R3 y R . Por ejemplo, si los disorazoles sustituidos por la fórmula Ic donde R2, R3 y R4 = alquilo o alquilarilo, van a ser preparados, el disorazol apropiado de la fórmula general I se hace reaccionar con un haluro de alquilo o haluro de alquilarilo apropiado, y una base adecuada, preferentemente trietilamina, piridina, un alcóxido, hidruro de sodio o carbonato de sodio, en un solvente adecuado, por ejemplo diclorómetaño, éter dietílico, acetonitrilo, N,N-dimetilformamida, entre 0 y 100°C (J. Org. Chem. 1971, 36, 284-294) . Por ejemplo, si los disorazoles sustituidos de la fórmula Ib donde R2 , R3 y R4 = carbamato, tiocarbamato se van a preparar, el disorazol apropiado de la fórmula general I se puede hacer reaccionar con los isocianatos o isotiocianatos apropiados en presencia de una base adecuada, preferentemente trietilamina, piridina, hidruro de sodio, un alcóxido, hidróxido de sodio en agua o carbonato de potasio y en un solvente adecuado, por ejemplo, dielorómetaño, éter dietílico, acetonitrilo, ?,?-dimetilformamida o mezclas de solventes, tales como el dioxano-agua o mezclas · de THF-agua a una temperatura entre 0 y 100°C (DE2040175, Rocz. Chem. 1972, 46, 717; Tetrahedron Lett. 1993, 34, 3745) .

O bien, si los disorazoles sustituidos de la fórmula la" donde' R2 , R3 y R4 = alquilcarbonilo o alcoxicarbonilo van a ser preparados, el disorazol apropiado de la fórmula general I se puede hacer reaccionar con los cloruros de alquilcarbonilo apropiados, anhídridos alquilcarboxilicos o cloroformiatos en presencia de una base adecuada, preferentemente trietílamina, piridina, hidruro de sodio, un alcóxido, hidróxido de sodio en agua o carbonato de potasio y un solvente adecuado, por ejemplo dielorómetaño, éter dietílico, acetonitrilo, N,N-dimetilformamida o mezclas de solventes, tales como mezclas de dioxano-agua o tetrahidrofurano-agua, a uná temperatura de entre 0 y 100°C (J. Org. Chem. 1957, 22, 1551; Synth. Commun. 1997, 27, 2777; J. Org, Chem. 1959, 24, 774). La invención será ilustrada con mayor detalle con la ayuda de los siguientes ejemplos, sin estar restringidos a éstos.

Ej emplos Posibilidades de uso Ej emplo 1 Los disorazoles tales, por ejemplo, disorazol El "son preferidos como un compuesto activo en un medicamento listo para utilizarse, para el tratamiento de oncosis malignas tales como cáncer de mama, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de piel, cáncer de próstata, cáncer de colón, cáncer de células renales, cáncer hepático o cáncer pancreático y cánceres del cerebro. En una forma de administración preferida, el compuesto activo está presente como un liofilizado junto con los excipientes conocidos por la persona experta en la técnica en una botella de inyección que se disuelve utilizando solución salina fisiológica antes del uso, luego se diluye en una bolsa de inyección y se administra al paciente con ayuda, de una cánula dentro de la vena. La dosis, dependiendo de la etapa de la oncosis, y del estado de salud del paciente, es entre 0.1 mg 100 mg del compuesto activo, por m2. El periodo de infusión depende de los criterios objetivos de la enfermedad.

Ejemplo 2 Uso de los disorazoles tales como, por ejemplo, disorazol El como un compuesto activo en un medicamento listo para utilizarse para el tratamiento de las enfermedades inflamatorias. Estas incluyen por ejemplo, enfermedades inflamatorias de las vías respiratorias tales como asma bronquial, rinitis alérgica, conjuntivitis alérgica, dermatitis atópica, eczema, angiitis alérgica, inflamaciones mediadas por eosinófilos tales como neumonía eosinofílica y síndrome de PIE (infiltración pulmonar con eosinofilia) , urticaria, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn y enfermedades proliferativas de la piel tales como psoriasis y queratosis .

Ejemplo 3 Uso de los disorazoles tales como, por ejemplo, disorazol El como un compuesto activo en un medicamento listo para utilizarse que tiene acción inmunomoduladora para el tratamiento de enfermedades inmunes y autoínmunes . Tales enfermedades pueden incluir, por ejemplo, inflamaciones de las articulaciones tales como artritis y artritis reumatoide y otras enfermedades artríticas tales como espondilitis reumatoide y osteoartritis . Las posibilidades adicionales de usos son el tratamiento de pacientes quienes están sufriendo de sepsis, choque séptico, sepsis por Gram-negativos, síndrome de choque séptico, síndrome de insuficiencia respiratoria, asma y otras enfermedades pulmonares crónicas, enfermedades de resorción ósea o reacciones de rechazo de transplantes u otras enfermedades autoínmunes, tales como lupus eritematoso, esclerosis múltiple, glomerulonefritis y uveitis, diabetes mellitus dependiente de insulina y desmielinización crónica.

E emplo 4 · Uso de los disorazoles tales como, por ejemplo, disorazol El como un compuesto activo en un medicamento listo para utilizarse, el cual puede ser empleado para la terapia de infecciones tales como infecciones virales e infecciones por parásitos, por ejemplo para la terapia de la malaria, fiebre relacionada a infección, dolor muscular relacionado a infección, infecciones por HIV (SIDA) y caquexias.

Producción Para - la ¦ administración de los compuestos de acuerdo a la invención, son preferentemente adecuadas las preparaciones parenterales , transdérmicas, tópicas, de inhalación e intranasales . La producción, llenado y selladura de las preparaciones es llevada a cabo bajo las condiciones antimicrobianas y asépticas acostumbradas. Además de al menos un constituyente de acuerdo a la invención, las formas farmacéuticas, dependiendo de la forma farmacéutica empleada, contienen opcionalmente excipientes, tales como, entre otros, solventes, aceleradores de la solución, solubilizadores, emulsificantes , agentes humectantes, antiespumantes , agentes formadores de gel, espesantes, amortiguadores, agentes formadores de sales, conservadores, antioxidantes, colorantes, correctores del sabor y del olor. La elección de los excipientes y de las cantidades de los mismos, que van a ser empleados dependen de la forma farmacéutica elegida, y está adaptada a las formulaciones conocidas para la persona experta en la técnica. Los medicamentos de acuerdo a la invención pueden ser administrados en una forma de administración adecuada, a la piel, epicutáneamente como una solución, suspensión, emulsión, espuma, ungüento, pasta o parche,-, vía la mucosa nasal, nasalmente como gotas, ungüento o rocío; vía el epitelio bronquial y alveolar, pulmonarmente o por inhalación como un aerosol o inhalante, vía la conjuntiva; conjuntivamente como gotas oftálmicas, ungüento oftálmico, tabletas oftálmicas, laminilla o loción oftálmica; dentro de una arteria, intraarterialmente como una inyección; dentro de una vena, intravenosamente como una inyección o infusión, paravenosámente como una inyección o infusión; dentro de la piel, intracutáneamente como una inyección o implante; bajo la piel, subcutáneamente como una inyección o implante; dentro del músculo, intramuscularmente como una inyección o implante; dentro de la cavidad abdominal, intraperitonealmente como una inyección o infusión. En terapia tumoral, .los compuestos de la fórmula general I de acuerdo a la invención pueden ser empleados como una sustancia individual o en combinación con sustancias citotóxicas adicionales, tales como por ejemplo, paclitaxel, docetaxel, vincritina, vindesina, cisplatino, carboplatino, doxorrubicina, ifosfamida, ciclofosfamida, 5-FU, metotrexato o en combinación con inmunomoduladores o anticuerpos y en particular en combinación con inhibidores de la transducción de señales, tales como, por ejemplo, Herceptin,. Glivec o Iressa.

Ejemplo 5 Las preparaciones para la administración parenteral de los disorazoles tales como, por ejemplo, disorazol El pueden estar presentes en forma de dosis unitaria separada, tales como por ejemplo, ampolletas o frascos. Preferentemente, las soluciones del compuesto activo son utilizadas, preferentemente soluciones acuosas y especialmente soluciones . isotónicas o alternativamente suspensiones. Estas formas de inyección pueden ser hechas disponibles como una preparación lista para utilizarse, o son preparadas solo directamente antes del uso mediante el mezclado el compuesto activo, por ejemplo, el " liofilizado, si es apropiado con portadores sólidos adicionales, con el solvente deseado o el agente suspensor deseado.

Ej emplo S Las preparaciones para administración intranasal de los disorazoles tales, por ejemplo, disorazol' El, pueden estar presentes como soluciones acuosas o aceitosas, o como suspensiones acuosas o aceitosas. Estas pueden estar presentes también como liofilizados, que se preparan antes del uso utilizando el solvente o agente suspensor adecuados.

Acciones biológicas de los compuestos de acuerdo a la invención E emplo 7 Acción antiproliferativa sobre diversas líneas celulares tumorales Los compuestos de acuerdo a la invención fueron investigados para su _ actividad antiproliferativa en una prueba de proliferación sobre líneas celulares tumorales, establecidas (D.A. Scuderio et al. Cáncer Res. 1988, 48, 4827-4833) . La prueba utilizada determina la actividad de deshidrogenasa celular y hace posible una determinación de la vitalidad celular e indirectamente de la cuenta celular. La líneas celulares utilizadas por medio del ejemplo son la línea de células de carcinoma cervical humano KB/HeLa (ATCC CCL17) , la línea celular de adenocarcinoma de ovario SKOV-3 (ATCC HTB77) , la línea celular de glioblastoma humano SF-268 (NCI 503138), la línea celular de carcinoma de pulmón NCI-H460 (NCI 503473) y la línea celular de adenocarcinoma de colon humano RKOP27. La actividad citotóxica o inhibitoria del crecimiento, de los compuestos descritos así como de los compuestos de referencia, se muestra en la tabla 1. Los resultados muestran una inhibición muy potente de la proliferación de las líneas de células tumorales seleccionadas, por las sustancias de acuerdo a la invención.

Tabla 1 : Inhibición de la proliferación por sustancias de acuerdo a la "invención en la prueba de citotoxicidad XTT sobre líneas de células tumorales humanas Ejemplo Ensayo de proliferación de XTT, EC50 en Oig/ml] KB/Hela . S OV3 . SF-268 NC1-H 60 KOP27 Disorazol 0.00005 0.000016 0.00012 0.00003 0.00006 El Disorazol 0.00015 0.0001 0.00022 0.00015 0.0003 Di Disorazol 0.00015 0.0002 0.00027 0.00015 0.00025 Al Paclitaxel 0.01 0.01 0.01 0.01 Vindesina 0.002 0.002 0.005 0.006 Ejemplo 8 Acción antiproliferativa sobre lineas de células tumorales MDR Para la caracterización adicional, las sustancias de acuerdo a la invención fueron investigadas contra las líneas celulares resistentes a fármacos múltiples (MDR) en comparación a las líneas celulares de tipo silvestre, no resistentes . Las. líneas celulares investigadas son las líneas de células de leucemia mieloide aguda LT12 y la línea resistente LT12/mdr. Además, la línea celular murina P388 (neoplasma linfoide inducido por metilcolantreno) y la P388 resistente a la doxorrubicina, fueron utilizadas como sistemas de. prueba. Los resultados ¦ son mostrados en. forma resumida en la tabla 2 siguiente: Tabla 2: Acción inhibitoria del disorazol El y sustancias de referencia en la prueba de proliferación XTT sobre líneas lulares tumorales no resistentes y resistentes El disorazol El muestra una acción inhibitoria muy potente sobre todas las líneas celulares probadas, mientras que en el caso de los inhibidores de tubulina clásicos tales como el paclitaxel o la vincristina, puede ser detectada una acción disminuida en gran medida, y resistencias cruzadas a las líneas celulares MDR1.

Ejemplo 9 Inhibición de la polimerización de la tubulina Fueron probadas las sustancias en una prueba in vitro para la inhibición de la polimerización de la ß- tubulina bovina (D.M. Bollag et al. Cáncer Res. 1995, 55, 2325-2333) . En esta prueba, la tubulina purificada por ciclos de polimerización y despolimerización es empleada, y es polimerizada por la adición de GTP y calentamiento. Los valores de IC50 de la inhibición de la polimerización de la ß-tubulina con 30% de proteínas asociadas (MAPs) se indican en la tabla 3.

Tabla 3 : Inhibición de la polimerización de la ß-tubulina con 30% de MAPs Sustancias EC50 en [jjg/ml] con 30% de MPAs Disorazol El 1.50 Disorazol DI 2.50 . ¦ Disorazol Al 4.8 Vindesina 0.40 experimentos n = 2 Los resultados muestran que los disorazoles El y DI inhiben la polimerización de la tubulina a bajas concentraciones.

E emplo 10 Análisis del ciclo celular El ciclo celular comprende el desarrollo de la célula desde la generación de una célula hasta la siguiente. Durante la fase de reposo (G0) y la fase presintética (Gl) , la célula tiene un equipo cromosómico diploide (2c) . En la fase de síntesis (S) , la cantidad de ADN se incrementa por replicación. La fase S termina al alcanzar la fase premitótica (G2M) , en la cual la célula tiene un complemento cromosómico reduplicado (4c) y el contenido de ADN duplicado. En la fase de mitosis transitoria (M) subsiguiente, ocurre la división uniforme de los cromosomas reduplicados a dos células hijas, las cuales luego en cada caso, muestran nuevamente un contenido de ADN diploide y están en la fase G01, de modo que el ciclo celular puede comenzar nuevamente . Para el análisis del ciclo celular, las células KB/HeLa fueron tratadas con las sustancias de prueba en diferentes concentraciones (0.1-10000 nM) por 24 horas a 33°C. La proporción porcentual de las células detenidas en la fase 62/M del ciclo celular después del tratamiento con las sustancias de referencia o las sustancias de prueba seleccionadas, se muestra en la tabla 4 siguiente. Los resultados fueron evaluados utilizando el software de análisis especial (ModFitMR) .

Tabla 4: Concentración a la cual '50% de las células son detenidas en la fase G2/M Ej emplo EC50 en [nM] (50% de células en G2/M) Disorazol El 1.6 Paclitaxel 46 Vindesina 3.0 Los compuestos de acuerdo a la invención tienen las más altas actividades en comparación con los compuestos de referencia . En particular, el disorazol El' inhibe el ciclo celular en la fase G2/M en concentraciones extremadamente baj as .

Ejemplo 11 Resultados in vivo La . actividad i vivo de los compuestos de acuerdo a la invención fue probada sobre modelos de genoinjertos humano y murino . En el experimento de terapia, con los ratones desnudos que poseen el genoinjerto de tumor NCI-H460, fue posible que el disorazol El, administrado intravenosamente, produjera una reducción significativa · del crecimiento tumoral, incluso a dosis que no produjeron disminución significativa del peso, o quizás incluso mortalidad.

Figura 1 : Experimento de tratamiento in vivo con disorazol El en el genoinjerto de tumor NCI-H460 O S 10 15 20 25 Días después de !a aieatorización Disorazol El (D-42805) : 0.25 . mg/kg; i.v.; día 0, 7; 8 murieron (días 11, 12, 13) Disorazol El (D-42805): 0.1 mg/kg; i.v.; día 0, 7, 14; no hubo casos de muerte Disorazol El (D-42805): 0.05 mg/kg; i.v.; día 0, 7, 14; no hubo casos de muerte Control: solución salina al 0.9% que contenía 3.3% de DMSO, 10 ml/kg; n = 8 animales/grupo Ejemplo 12 Prueba AMES Para la estimación de los posibles efectos colaterales, se investigó el disorazol El para la mutagenicidad en un ensayo de fluctuación contra las cepas mutantes TA98 y TA100 de la bacteria Salmonella typhimurium a tres concentraciones (2.5; 5 . y 10 µ?) . Las investigaciones de mutagenicidad fueron además llevadas a cabo en presencia de la enzima de hígado de rata, S9. Los resultados se recopilan en la tabla 5 siguiente : Tabla 5 : Investigación del disorazol El para la mutagenicidad El disorazol El no muestra efectos bajo las condiciones de ensayo descritas en las concentraciones anteriormente mencionadas, y es de este modo inactivo a la prueba AMES .

Ejemplo 13 Influencia sobre la biosíntesis de proteínas y células no proliferantes Para la estimación de posible potencial de efectos colaterales, se investigó . la influencia del disorazol El sobre las células no proliferantes y sobre la biosíntesis de proteínas (tabla 6) : Tabla 6: Influencia de disorazol El sobre las células no proliferantes y sobre la biosíntesis de proteínas Sustancia Células Síntesis de supervivientes, proteína2 hepatocitos humanos primarios Promedio, % de Promedio, % control de control Disorazol El 119.6 95.9 i) Probada con Azul alamar, hepatocitos primarios humanos, n 2) Probada vía la incorporación de 14C-metionina, células de carcinoma hepatocelular humano (HepG2) , n = 2 ¦ · Los resultados de ..· la- tabla 6 muestran que el disorazol El ni actúa negativamente sobre la biosíntesis de proteínas ni sobre la supervivencia de las células no proliferantes.

Claims (12)

REIVINDICACIONES

1. Un medicamento que contiene, al menos un derivado de disorazol de la fórmula general G Fórmula I en la cual independientemente uno del otro Rl es: (i) hidrógeno (ü) OR4 (iii) parte 'del doble enlace a C5' R2, R3 y R4 son: (i) hidrógeno (ii) alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido o no sustituido (iii) alquilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido con uno o más átomos, de flúor, preferentemente un grupo trifluorometilo, (iv) (alquil de 1 a 4 átomos de carbono) - (arilo de 6 a 14 átomos de carbono) sustituido o no sustituido, alquilheteroarilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido o no sustituido; (v) alcoxicarbonilo de 1 a 4 átomos de carbono, alquilaminocarbonilo de 1 a 4 átomos de carbono, alquilaminotiocarbonilo de 1 a 4 átomos de carbono, alquilcarbonilo de 1 a 6 átomos de carbono o (alcoxicarbonil de 1 a 6 átomos de carbono) - (alquilo de 1 a 6 átomos de carbono) , siendo posible que la sustitución del radical alquilo por flúor, cloro, bromo, yodo, CN, NH2, H- (alquilo de 1 a 20 átomos de carbono) , NH- (cicloalquilo de 3 a 12 átomos de carbono) , OH, O- (alquilo de 1 a 20 átomos de carbono) , tenga lugar de manera simple o, sobre átomos idénticos o diferentes, múltiples veces por sustituyentes idénticos o diferentes, y es posible que la sustitución de un radical arilo por flúor, cloro, bromo, yodo, CN, N¾, NH- (alquilo de 1 a 20 átomos de carbono) , OH, O- (alquilo de 1 a 20 átomos de carbono) , y/o heterociclilo de 3 a 8 átomos de carbono que tiene 1 a 5 heteroátomos, preferentemente nitrógeno, oxígeno, azufre, tenga lugar de manera simple o, sobre átomos idénticos o diferentes, múltiples veces por sustituyentes idénticos o diferentes, y X, Y son: en cada caso individual independientemente uno del otro o junto con oxigeno, azufre, dos grupos hidroxilo vecinos, dos grupos metoxi vecinos, parte de un doble enlace, siendo excluido un compuesto en el cual Rl es metoxi, R2, R3 es hidrógeno, X es oxigeno e Y es la parte de un doble enlace sus tautómeros, isómeros E/Z, estereoisómeros, incluyendo los diastereoisómeros y enantiómeros , y las sales fisiológicamente tolerables de los mismos.

2. El "medicamento según la reivindicación 1, que contiene el derivado de disorazol y los portadores y/o diluyentes farmacéuticamente utilizables, y excipientes en la forma de soluciones, suspensiones, emulsiones, espumas, ungüentos, pastas, parches o implantes ¦ para la administració .

3. El uso de. los derivados de disorazol de la fórmula general I Fórmula I en la cual independientemente uno del otro Rl es : ' (i) Hidrógeno (ii) 0R4 (iü) parte del doble enlace a C5' R2 , R3 y R4 son : ' (i) hidrógeno (ii) alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido o no sustituido (iü) alquilo de 1 a 4 átomos' de carbono sustituido con uno o más átomos de flúor, preferentemente un grupo trifluorometilo, (iv) (alquil de 1 a 4 átomos de carbono) - (arilo de 6 a 14 átomos de carbono) sustituido o no sustituido, alquilheteroarilo de 1 a 4 átomos de carbono sustituido o no sustituido; (v) alcoxicarbonilo de 1 a 4 átomos de carbono, alquilaminocarbonilo de 1 a 4 átomos de carbono, alquilaminotiocarbonilo de 1 a 4 átomos de carbono, alquilcarbonilo de 1 a 6 átomos de carbono o (alcoxicarbonil de 1 a 6 átomos de carbono) - (alquilo de 1 a 6 átomos de carbono) , siendo posible que la sustitución del radical alquilo por flúor, cloro, bromo, yodo, GST, H2, NH- (alquilo de 1 a 20 átomos de carbono) , NH- (cicloalquilo de 3 a 12 átomos de carbono) , OH, 0- (alquilo de 1 a 20 átomos de carbono) , tenga lugar de manera simple o, sobre átomos idénticos o diferentes, múltiples veces por sustituyentes idénticos o diferentes, y es posible que la sustitución de un radical a-rilo por flúor, cloro, bromo, yodo, CN, H2/ NH-(alquilo de 1 a 20 átomos de carbono) , OH, O- (alquilo de 1 a 20 átomos de carbono), y/o heterociclilo de 3 a 8 átomos de carbono que tiene l a 5 heteroátomos , preferentemente nitrógeno, oxígeno, azufre, tenga lugar de manera simple o, sobre átomos idénticos o diferentes, múltiples veces por sustituyentes idénticos o diferentes, y X, Y. son: en cada caso individual independientemente uno del otro o junto con oxígeno, azufre, dos grupos hidroxilo vecinos, dos grupos metoxi vecinos, parte de un doble enlace, siendo excluido un compuesto en el cual Rl es metoxi, R2, R3 es hidrógeno, X es oxígeno e Y es la parte de un doble enlace sus tautómeros, isómeros E/Z, estereoisómeros, incluyendo los diastereoisómeros y enantiómeros , y las sales fisiológicamente tolerables de los mismos, para la producción de un medicamento para el tratamiento de oncosis benignas' o malignas en humanos . o animales.

4. El uso de' los derivados de disorazol de la fórmula general 1 según la reivindicación 3, para el tratamiento de oncosis, solos o en . combinación con sustancias citotoxicas y/o inhibidores de la transducción de señales .

5. El uso de los derivados de disorazol de la fórmula general I, para la producción de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad en humanos o en animales, que está basada en la proliferación rápida y descontrolada de las células endógenas .

6. El uso de los derivados de disorazol de la fórmula general. I, para la producción de un medicamento para el tratamiento de enfermedades que responden a la acción inmunomoduladora, tales como psoriasis, arterioesclerosis , artritis, queratosis, esclerosis múltiple y cáncer.

7. El uso de los derivados de disorazol de la fórmula general I, para la producción de un medicamento para el tratamiento, de enfermedades infecciosas, tales como caquexia, malaria, SIDA y fiebre y dolor relacionados a la infección. ·

8. - El uso de los derivados de disorazol de la fórmula general I, para la producción de un medicamento para el tratamiento de enfermedades inflamatorias y alérgicas, inflamaciones mediadas por eosinófilos o enfermedades proliferativas tales como enfermedades de las vías respiratorias, asma bronquial, ' rinitis alérgica, conjuntivitis alérgica, eczema y enfermedad de Crohn.

9. El uso de los derivados de disorazol El de la fórmula general I, en el cual Rl y R2 son hidrógeno, R3 es metilo y X e y son oxígeno, según la reivindicación 3, para la producción de un medicamento para el tratamiento de oncosis malignas o benignas en humanos o animales.

10. El uso de los derivados de disorazol de la fórmula general I según la reivindicación 9, para la producción de un medicamento para el tratamiento del cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer de pulmón, cáncer de piel, cáncer de próstata, cáncer renal, cáncer hepático, cáncer pancreático, cáncer de colon, y cáncer en el cerebro en humanos .

11. El uso de los derivados de disorazol de la fórmula general I según la reivindicación 9 y 10, para la producción de un medicamento para el tratamiento de oncosis benignas o malignas en -humanos o en animales, en combinación con otros agentes antitumorales .

12. El uso de los derivados de disorazol .de la fórmula general I según la reivindicación 9 a 11, para la producción de un medicamento para el tratamiento de oncosis benignas o malignas en humanos o en animales, en combinación con paclitaxel, docetaxel , vincristina, vindesina, cisplatino, carboplatino, dexorrubicina, ifosfamida, ciclofosfamida, 5-FU, metotrexato o en combinación con inmunomoduladores o anticuerpos y en particular en combinación con inhibidores de la transducción de señales tales como Herceptin, Glivec o Iressa y otros.