MXPA05001647A - Composiciones inmunoestimuladoras y metodos para estimular una respuesta inmune. - Google Patents

Abstract

La presente invencion proporciona composiciones inmunoestimuladoras que incluyen una porcion de modificador de respue4sta inmune emparejada con una porcion antigenica.

Description

V COMPOSICIONES INMUNOES IMULADORAS Y METODOS PARA ESTIMULAR UNA RESPUESTA INMUNE Referencia Cruzada a Solicitud Relacionada Esta solicitud reivindica la prioridad de la 5 solicitud de patente provisional norteamericana No. 60/403,846, presentada el 15 de agosto del 2002. Antecedentes Los modificadores de respuesta inmune ("IRMs") incluyen compuestos que poseen potente actividad inmunomoduladora incluyendo, pero no limitada a, la actividad antiviral y antitumoral. Ciertos IRMs modulan la producción y secreción de citoquinas. Por ejemplo, ciertos compuestos IRM inducen la producción y secreción de citoquinas tales como, por ejemplo, interferonas de Tipo I, TNF-ot, IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, MPI-1 y/o MCP-1. Como otro ejemplo, ciertos compuestos IRM pueden inhibir la producción y secreción de ciertas citoquinas TH-2 tales como IL-4 e IL-5. Adicionalmente, algunos compuestos IRM se dicen que suprimen IL-1 y TNF (patente norteamericana No. 6,518,265). 20 Ciertos IRMs son moléculas orgánicas pequeñas (por ejemplo, peso molecular menor que aproximadamente 1,000 Daltons, en ciertos casos menor que aproximadamente 500 Daltons, opuesto a las proteínas biológicas grandes, péptidos y similares) tales como aquellos descritos en, por ejemplo, las patentes norteamericanas Nos. 4,689,338; 4,929,624; 4, 988, 815/ 5, 037, 986; 5,175,296; 5,238,944; 5,266,575; 5,268,376; 5,346,905; 5,352, 784; 5,367,076; 5,389, 640; 5,395,937; 5,446,153; 5,482,936; 5,693,811; 5,741,908; 5,756, 747; 5, 939, 090; 6, 039, 969; 6, 083,505; 6, 110, 929; 6,194, 425; 6,245,776; 6,331, 539; 6,376, 669; 6,451,810; 6,525,064; 6,545,016; 6,545,017; 6,558,951 y 6,573,273; la patente europea 0 394 026; la publicación de patente norteamericana No. 2002/0055517; y las publicaciones de patentes internacionales Nos. WO 01/74343; WO 02/46188; WO 02/46189; WO 02/46190; WO 02/46191; WO 02/46192; WO 02/46193; WO 02/46749; WO 02/102377; WO 03/020889; WO 03/043572 y WO 03/045391. Ejemplos adicionales de IRMs de molécula pequeña incluye ciertos derivados de purina (tales como aquellos descritos en las patentes norteamericanas Nos. 6,376,501 y 6,028,076), ciertos derivados de imidazoquinolina amida (tales como aquellos descritos en la patente norteamericana No. 6,069,149), ciertos derivados de bencimidazol (tales como aquellos descritos en la patente norteamericana 6,387,938), y ciertos derivados de una 4-aminopirimidina fusionada a un anillo heterociclico que contiene nitrógeno de cinco miembros (tales como derivados de adenina descritos en las patentes norteamericanas Nos. 6,376,501; 6,028,076 y 6,329,381 y en WO 02/08595) . Otro IRMs incluyen moléculas biológicas grandes tales como secuencias de oligonucleótido . Algunas secuencias de oligonucleótido IRM contienen dinucleótidos de citosina-guanina (CpG) y son descritos, por ejemplo, en las patentes norteamericanas Nos. 6,194,388; 6,207,646; 6,239,116; 6,399,068 y 6,406,705. Algunos oligonucleótidos que contienen CpG pueden incluir porciones estructurales inmunomoduladoras sintéticas tales como aquellas descritas, por ejemplo, en las patentes norteamericanas Nos. 6,426,335 y 6,476,000. Otras secuencias de nucleótidos de IRM carecen de CpG y son descritas, por ejemplo, en la publicación de patente internacional No. WO 00/75304. Ciertos IRMs puede funcionar como agonistas del receptor similar a Toll (TLR) . Algunos IRMs de molécula pequeña pueden actuar a través de uno o más TLRs 2, 4, 6, 7 y 8. CpG puede actuar a través de TLR9. Al estimular ciertos aspectos del sistema inmune, asi como al suprimir otros aspectos (ver, por ejemplo, las patentes norteamericanas Nos. 6,039,969 y 6,200,592), los IRMS se pueden usar para tratar muchas enfermedades. Por ejemplo, el imiquimod IRM de molécula pequeña es útil para el tratamiento de verrugas genitales y perianales externas causadas por el papilomavirus humano [ver, por ejemplo, Tomai y colaboradores, Antiviral Research 28(3):253-64 (1995)]. Ejemplos de otras enfermedades que pueden ser tratadas usando IRMs incluyen, pero no están limitadas a, carcinoma de célula basal, eczema, trombocitemia esencial, hepatitis B, esclerosis múltiple, enfermedades neoplásticas, psoriasis, artritis reumatoide, herpes simple de tipo I y herpes, simple de tipo II. Los compuestos IRM también pueden modular la inmunidad humoral - al estimular la producción de anticuerpos por las células B. Además, varios IRMs se han mostrado que son útiles como adyuvantes de vacunas (ver, por ejemplo, las patentes norteamericanas Nos. 6,083,505 y 6,406,705). Breve Descripción de la Invención Ahora se ha encontrado que los IRMs, especialmente los IRMs de molécula pequeña y agonistas de TLR 2, 4, 6, 7 y 8, son sorprendentemente efectivos en estimular una respuesta inmune cuando se emparejan o asocian químicamente o físicamente con un antígeno para formar una composición inmunoestimuladora . El efecto inmunoestimulador de una composición particular puede ser más grande que el efecto inmunoestimulador del mismo antígeno y el mismo o un IRM comparable como aquel en la composición, pero administrado en una forma no emparejada. La presente invención proporciona una composición inmunoestimuladora que incluye una porción de modificador de respuesta inmune (IRM) emparejada con una porción antigénica. En algunas modalidades, la porción IRM puede ser, o ser derivada de, un agonista del receptor similar a Toll 2, receptor similar a Toll 4, receptor similar a Toll 6, receptos similar a Toll 7 o receptor similar a Toll 8. En otras modalidades, la porción IRM puede incluir, o ser derivada de, una imidazoquinolina amina; una tetrahidroimidazoquinolina amina; una imidazopiridina amina, un imidazopiridina amina sustituida con aril éter; una imidazoquinolina amina con puente 1,2; una cicloalquilimidazopiridina amina 6, 7-fusionada; una imidazonaftipiridina amina; una tetrahidroimidazonaftiridina amina; una oxazoloquinolina amina; una tiazoloquinolina amina; una oxazolopiridina amina; una tiazolopiridina amina; una oxazolonaftiridina amina; o una tiazolonaftiridina amina. En todavia_ otras modalidades, la porción IRM puede incluir, o ser derivada de, una porción orgánica que tiene un peso molecular de menos de aproximadamente 1000 Daltons . La porción antigénica puede incluir una secuencia de aminoácidos, una secuencia de nucleótidos, un lipopolisacárido, un prión, una bacteria, un virus o un hongo . En otro aspecto, la presente invención proporciona un método para estimular células T de un paciente. El método incluye proporcionar una composición inmunoestimuladora que incluye un modificador de respuesta inmune emparejado con una porción antigénica; permitir que la composición inmunoestimuladora enlace a las células que presentan antigeno, para de esta manera activar las células que presentan antigeno; y permitir que las células que presentan antigeno activadas estimulen las células T del paciente. Las células T del paciente pueden ser estimuladas in vivo o in vitro.' En todavía otro aspecto, la presente invención proporciona un método para estimular células que producen anticuerpo. El método incluye proporcionar una composición inmunoestimuladora que comprende una porción de modificador de respuesta inmune emparejada con una porción antigénica; y permitir que la composición inmunoestimuladora enlace a las células que producen anticuerpo. Las células que producen anticuerpo pueden ser estimuladas in vivo o in vitro. Otras diversas características y ventajas de la presente invención llegarán a ser evidentes fácilmente con referencia a la siguiente descripción detallada, los ejemplos, las reivindicaciones y los dibujos adjuntos. En varios lugares con toda la especificación, se proporciona la guía a través de listas de ejemplos. En cada caso, la lista mencionada sirve solamente como un grupo representativo y no debe ser interpretada como una lista exclusiva. Breve Descripción de los Dibujos La Figura 1 muestra el porcentaje de células T CD8+ activadas específicas de ovalbúmina generadas por ratones inmunizados con ovalbúmina, como es descrito en el Ejemplo 4.

La Figura 2 el porcentaje de células T CD8* activadas especificas de ovalbúmina generada por ratones inmunizados subcutáneamente con un conjugado de IRM-ovalbúmina como es descrito en el Ejemplo 4. La Figura 3 muestra el porcentaje de células T CD8+ activadas especificas de ovalbúmina generadas por ratones inmunizados intraperitonealmente con un conjugado de IRM-ovalbúmina, como es descrito en el Ejemplo 4. La Figura 4 muestra la producción de interferona-? inducida por ratones inmunizados como ovalbúmina como es descrito en el Ejemplo 5. La Figura 5 muestra ,1a producción de interferona-? inducida por ratones inmunizados subcutáneamente por un conjugado de IKM-ovalbúmina, como es descrito en el Ejemplo 5. La Figura 6 muestra la producción de interferona-? inducida por ratones inmunizados intraperitonealmente con un conjugado de IRM-albúmina como es descrito en el Ejemplo 5. La Figura 7 muestra un incremento en' la respuesta inmune especifica de antigeno al proporcionar una inmunización secundaria con un conjugado de IRM-ovalbúmina como es descrito en el Ejemplo 6. La Figura 8 muestra la reducción en el tamaño del tumor después de la inmunización en un conjugado de IRM-antigeno especifico de tumor, como es descrito en el Ejemplo 7. La Figura 9 muestra la expansión de las células T CD8+ especificas de antigeno de tumor activadas en el bazo después de la inmunización con un conjugado de IRM-antigeno de tumor, como es descrito en el Ejemplo 8. La Figura 10 muestra la expansión de las células T CD8+ especificas de antígeno de tumor activadas en el tumor después de la inmunización con un conjugado de IRM-antigeno de tumor, como es descrito en el Ejemplo 8. La Figura 11 muestra el porcentaje de células que presentan antigeno que están presentando Kb/SIINFEKL después de la inmunización con ovalbúmina, como es descrito en el E emplo 9. La Figura 12 muestra el porcentaje de células que presentan antigeno que están presentando Kb/SIINFEKL después de la inmunización con ovalbúmina, más IRM no conjugado, como es descrito en el Ejemplo 9. La Figura 13 muestra el porcentaje de células que presentan antigeno que están presentando Kb/SIINFEKL después de la inmunización con el conjugado de II -ovalbúmina, como es descrito en el Ejemplo 9. La Figura 14 muestra las proporciones de supervivencia de ratones inmunizados por ovalbúmina o un conjugado de IRM-ovalbúmina después de la estimulación con células de tumor que expresan ovalbúmina, como es descrito en el E emplo 10. La Figura 15 muestra la expansión de las células T CD8+ especificas de antigeno después de la inmunización con ovalbúmina, como es descrito en el Ejemplo 11. La Figura 16 muestra la expansión de las células T CD8+ especificas de antigeno de un sujeto después de la inmunización con una suspensión coloidal de IRM y ovalbúmina, como es descrito en el Ejemplo 11. La Figura 17 muestra la expansión de las células T CD8+ especificas de antigeno en un segundo sujeto después de la inmunización con una suspensión coloidal de IRM y ovalbúmina, como es descrito en el Ejemplo 11. La Figura 18 muestra la expansión de las células T CD8+ especificas de antigeno como un resultado de la inmunización con conjugados de IRM-antigeno usando dos diferentes IRMs. La Figura 19 muestra la expansión plegada de las células T CD8+ sobre la inmunización con ovalbúmina sola de ratones inmunizados con varias composiciones inmunoestimuladoras . Descripción Detallada de Modalidades Ilustrativas de la Invención La presente invención proporciona composiciones inmunoestimuladoras (ISCs) , métodos para hacer composiciones inmunoestimuladoras, métodos para inducir una respuesta inmune usando composiciones inmunoestimuladoras, y métodos para incrementar la actividad inmunoestimuladora de un IRM al emparejar el IRM con otro componente inmunoestimulador (por ejemplo, un antígeno) . Las ISCs se pueden diseñar para inducir una respuesta inmune mediada por célula, una respuesta inmune humoral, o ambas. Como es mencionado en lo anterior, muchos IRMs se pueden usar como un adyuvante de vacuna para incrementar la respuesta inmune generada contra uno o más antigenos también presentados en la vacuna. De manera sorprendente, ciertas ISCs de acuerdo con la invención pueden proporcionar una respuesta inmune aun más grande que una vacuna que contiene el mismo o un IRM comparable y el mismo antigeno, pero en una forma no emparejada. En un caso, una ISC proporcionó una respuesta inmune aproximadamente cinco veces más grande que la respuesta inmune generada por una vacuna que incluyó el mismo antigeno y un IRM comparable. Como se utiliza en la presente, el término "emparejado" y variaciones del mismo se refieren a componentes asociados en alguna manera física o química de modo que los componentes no están libremente dispersables entre sí. Por ejemplo, dos componentes pueden ser unidos covalentemente entre sí de modo que los componentes son incapaces de dispersarse o difundirse por separado. El emparejamiento también se puede obtener, por ejemplo, mediante el enlace de afinidad no covalente, enlace iónico, afinidad hidrofilica o hidrofóbica, entrampamiento físico y similares. El emparejamiento es específicamente distinguido de una mezcla simple de antígeno y adyuvante en una vacuna convencional. En una mezcla simple, los componentes pueden estar libres para dispersarse independientemente dentro del medio ambiente vacunado. Como se utiliza en la presente, "emparejado" y sus variaciones del mismo confiere un entendimiento de que los componentes emparejados mantiene una asociación química o física después de la inmunización. La porción de modificador de respuesta inmune puede ser, o ser derivada de, cualquier IRM adecuado. Los IRMs adecuados incluyen moléculas orgánicas pequeñas, es decir, moléculas que tienen un peso molecular de menos de aproximadamente 1000 Daltons, aunque . en algunas modalidades el IRM puede tener un peso molecular de menos de aproximadamente 700 Daltons y en algunos casos el IRM puede tener un peso molecular de aproximadamente 500 Daltons a aproximadamente 700 Daltons. Los IRMs adecuados también incluyen agonistas de uno o más de TLRs 2, 4, 5, 6, 7, 8 9. En algunas modalidades, los IRMs adecuados incluyen, pero no están limitados a, los compuestos IRMs de molécula pequeña descritos en lo anterior y derivados de los mismos. Los IRMs de molécula pequeña adecuados que tienen una 2-aminopiridina fusionada a un- anillo heterocíclico que contiene nitrógeno de cinco miembros, incluyen pero no están limitados a imidazoquinolina aminas incluyendo, pero no limitadas a imidazoquinolina aminas sustituidas con amida, imidazoquinolina sustituidas son sulfonamida, imidazoquinolina aminas sustituidas con urea, imidazoquinolina aminas sustituidas con aril éter, imidazoquinolina aminas sustituidas con éter heterociclico, imidazoquinolina aminas sustituidas con amido éter, imidazoquinolina aminas sustituidas con sulfonamido éter, imidazoquinolina éteres sustituidas con urea e imidazoquinolina aminas sustituidas con tioéter; tetrahidroimidazoquínolina aminas incluyendo pero no limitado a, tetrahidroimidazoquínolina aminas sustituidas con amida, tetrahidroimidazoquínolina aminas sustituidas con sulfonamida, tetrahidroimidazoquínolina aminas sustituida con urea, tetraimidazoquinolina aminas sustituidas con aril éter, tetraimidazoquinolina aminas sustituidas con éter heterociclico, tetraimidazoquinolina aminas sustituidas con éter, tetraimidazoquinolina aminas sustituidas con sulfonoamidoéter, tetraimidazoquinolina éter sustituidas con urea y tetraimidazoquinolina aminas sustituidas con tioéter; imidazopiridina aminas incluyendo, pero no limitadas a, imidazopiridina aminas sustituidas con amina, imidazopiridina aminas sustituidas con sulfonamido, imidazopiridina aminas sustituidas con urea; imidazopiridina aminas sustituidas con aril éter, imidazopiridina sustituidas con éter heterociclico, imidazopiridina aminas sustituidas con amido éter, imidazopiridina aminas sustituida con sulfonamido éter, imidazopiridina éteres sustituidas con urea e imidazopiridina amina sustituidas con tioéter; imidazoquinolina aminas con puente 1,2/ cicloalquilimidazopiridina aminas 6, 7-fusionadas; imidazonaftiridina aminas; tetra idroiidazonaftiridina aminas; oxazoloquinolina aminas; tiazoloquinolina aminas; oxazolopiridina aminas; tiazolopiridina aminas; oxazolonaftiridina aminas y tiazolonaftiridina aminas. Los IRMs de molécula pequeña adecuados adicionales, incluyen ciertos derivados de purina, ciertos derivados de imidazoquinolina amida, ciertos derivados de bencimidazol y ciertos derivados de 4-aminopirimidina fusionada a un anillo heterociclico que contiene nitrógeno de cinco miembros (por ejemplo, derivados de adenina) descritos en lo anterior. Otros IRMs adecuados incluyen los CPPS y otras secuencias de nucleótidos IRM que carecen de CpG descritos en lo anterior. La porción antigénica puede incluir cualquier material que resalta una respuesta inmune mediada por célula, una respuesta inmune humoral, o ambas. Los materiales antigénicos adecuados incluyen, pero no están limitados a péptidos; polipéptidos, lipidos; glicolípidos; polisacáridos; carbohidratos; polinucleótidos; priones; bacterias vivas o inactivadas, virus y hongos; inmunogénicos bacterianos, virales, fúngales, protosoarios, derivados de tumor o derivados de organismo, toxinas o toxoides. Las enfermedades para las cuales las composiciones inmunoestimuladoras de la presente invención pueden ser usadas como tratamientos incluyen, pero no están limitadas a; (a) enfermedades virales, tales como verrugas genitales, verrugas comunes, verrugas de la planta del pie, hepatitis B, hepatitis C, virus de herpes simples tipo I y tipo II, molluscum contagiosum, viruela, HiV, CMV", VZV, rinovirus, adenovirus, coronavirus, influenza, parainfluenza; (b) enfermedades bacterianas, tales como tuberculosis y microbacterium avium, lepra; (c) otras enfermedades infecciosas, tales como enfermedades fúngales, clamidia, candida, aspergillus, meningitis criptocócica, pneumocystis carnii, cristosporidiosis, histoplasmosis, toxoplasmosis, infección por tripanosoma, leismaniasis; (d) enfermedades neoplásicas, tal como neoplasias intraepiteliales, displacía cervical, queratosis actínica, carcinoma de célula basal, carcinoma de célula escamosa, leucemia de célula pilosa, sarcoma de arposi, melanoma, carcinoma de célula renal, leucemia mielógena, mieloma múltiple, linfoma que no es de Hodgkin, linfoma de célula T cutánea y otros cánceres; (e) enfermedades mediadas por TH-2, atópicas o autoinmunes, tal como dermatitis atópica o eczema, eosinofilia, asma, alergia, rinitis alérgica, lupus eritematoso sistémico, trombocitemia esencial, esclerosis múltiple, síndrome de Ommen, lupus discoide, alopecia areata, inhibición de la formación queloide y otros tipos de cicatrización, y mejoramiento del saneamiento de heridas, incluyendo heridas crónicas y (f) como un adyuvante de vacuna para el uso en conjunción con cualquier material que eleva ya sea la respuesta inmune humoral y/o mediada por célula, tal como inmunógenos virales vivos y bacterianos e inmunógenos virales inactivados, derivado de tumor, de protozoario, derivados de organismo, fúngales y bacterianos, toxoides, toxinas, polisacáridos, proteínas, glicoproteínas, péptidos, vacunas celulares, vacunas de DNA, proteínas recombinantes, glicoproteínas y péptidos y similares, para el uso en relación, por ejemplo, BCG, cólera, plaga, fiebre tifoidea, hepatitis A, B y C, influenza A y B, parainfluenza, polio, rabia, sarampión, paperas, rubéola, fiebre amarilla, tétano, difteria, influenza b hemofílica, tuberculosis, vacunas meningocócicas y neumocócicas, adenovirus, HIV, erupción postulosa de pollo, citomegalovirus, dengue, leucemia felina, plaga de aves domésticas, HSV-1 y HSV-2, cólera de cerdo, encefalitis Japonesa, virus sincitial respiratorio, rotavirus, virus de papiloma y fiebre amarilla. Las composiciones inmunoestimuladoras de la invención incluyen una cantidad efectiva de actividad biológica de tanto la porción de modificador de respuesta inmune como la porción antigénica. Una cantidad efectiva de actividad biológica de la porción de respuesta inmune ("actividad IBM") incluye uno o más de los siguientes: un incremento en la producción de citoquina por las células T, activación de las células T especificas a un antigeno, y activación de células dendríticas . Una cantidad efectiva de actividad biológica de la porción antigénica ("actividad antigénica") incluye uno o más de lo siguiente: generación de anticuerpos específicos al antígeno con las células B y generación de células presentadoras de antígeno, que presentan el antígeno. Las composiciones inmunoestimuladoras de la presente invención se pueden combinar con un portador farmacéuticamente aceptable, uno o más excipientes, o alguna combinación de los anteriores con el fin de formar una composición farmacéutica. Aunque la cantidad exacta del compuesto activo usando una composición farmacéutica de lá invención variará de acuerdo con factores conocidos para aquellos expertos en la técnica, tal como la naturaleza física y química de la composición inmunoestimuladora, la naturaleza del portador, la naturaleza del sistema inmune del sujeto (por ejemplo, suprimido, comprometido, estimulado) y el régimen de dosificación propuesto, se anticipa que las composiciones farmacéuticas de la invención contendrán suficiente porción de modificador de respuesta inmune para proporcionar una dosis de aproximadamente 100 ng/kg a aproximadamente 50 mg/kg, de preferencia aproximadamente 10 g/kg a aproximadamente 5 mg/kg, de IRM al sujeto. Una variedad de formas' de dosificación pueden ser utilizadas, tales como tabletas, pastillas, cápsulas, formulaciones parenterales, jarabes, cremas, ungüentos, formulaciones en aerosol, parches transdérmicos, parches transmucosales y similares . Las composiciones farmacéuticas de la invención se pueden administrar como el único agente terapéutico en un régimen de tratamiento, o la composición farmacéutica se puede administrar en combinación con otra composición farmacéutica o con otros agentes activos, incluyendo modificadores de respuesta inmune adicionales, antivirales, antibióticos, anticuerpos, proteínas, péptidos, oligonucleótidos, etc. En algunas modalidades, la porción de modificador de respuesta inmune inmunoestimuladora puede ser covalentemente acoplada a la porción antigénica para formar un conjugado inmunoestimulador. Como se utiliza en la presente, "covalentemente acoplado" se refiere al acoplamiento directo e indirecto de dos componentes exclusivamente a través de enlaces covalentes. El acoplamiento covalente directo puede implicar el enlace covalente directo entre un átomo de la porción de modificador de respuesta inmune y un átomo de la porción antigénica. Alternativamente, el acoplamiento covalente puede ocurrir a través de un grupo de enlace covalentemente unido a la porción IRM, la porción antigénica o ambos, que facilita el acoplamiento covalente de la porción IRM y la porción antigénica. El acoplamiento covalente indirecto puede incluir un tercer componente, tal como, por ejemplo, un soporte sólido al cual la porción de modificador de la respuesta inmune y la porción antigénica se une covalentemente por separado. También '"covalentemente acoplado" y "covalentemente unido" se usan de manera intercambiable. Un conjugado inmunoestimulador puede incluir una porción de modificador de respuesta inmune como la porción de IRM y una porción que contiene antigeno como la porción antigénica. Cuando se sintetiza un conjugado inmunoestimulador, cada uno de la porción de modificador de respuesta inmune, el grupo de enlace y la porción que contiene antigeno se puede seleccionar de modo que el conjugado inmunoestimulador resultante posee una cantidad efectiva de actividad IRM y una cantidad efectiva de actividad antigénica.

El grupo de enlace puede ser cualquier grupo de" enlace orgánico adecuado que permite que la porción que contiene antigeno sea covalentemente acoplada a la porción de modificador de respuesta inmune mientras que preserva una cantidad efectiva de IRM y la actividad antigénica. En algunas modalidades, el grupo de enlace puede ser seleccionado para crear un espacio suficiente entre el núcleo vivo de la porción de verificador de respuesta inmune y la porción que contiene antigeno, de modo que la porción que contiene antigeno no interfiere con una interacción biológicamente efectiva entre el núcleo activo y las células T que resulta en la actividad IRM tal como la producción de citoquina . El grupo de enlace incluye un grupo reactivo capaz de reaccionar con el antigeno para formar un enlace covalente. Los grupos reactivos adecuados incluyen aquellos discutidos en Hermanson, G. (1996), Bioconjugate Techniques, academia Press, Chapter 2 "The Chemistry of Reactive Functional Groups", 127-166. Por ejemplo, el grupo de enlace puede reaccionar con una amina primaria (por ejemplo, un áster N-hidroxisuccinimidilico · o un áster N-hidroxisulfosuccinimidilico) ; este puede reaccionar con un grupo sulfihidrilo (por ejemplo, una maleimida o un yodoacetilo) , o puede ser un grupo fotorreactivo (por ejemplo, una fenil azida incluyendo 4-acidofenilo, 2-hidroxi-4-azidofenilo, 2-nitro-4-azidofenilo y 2-nitro-3-azidofenilo) . Un grupo químicamente activo accesible para el acoplamiento covalente al grupo de enlace incluye grupos que pueden ser usados directamente para el acoplamiento covalente al grupo o grupos de enlace que pueden ser modificados para estar disponibles para el acoplamiento covalente al grupo de enlace. Por ejemplo, los grupos químicamente activos adecuados incluyen, pero no están limitados a aminas primarias y grupo sulfhidrilo . Debido a que ciertas porciones que contienen antígeno, por ejemplo, proteínas y otros péptidos, pueden incluir una pluralidad de grupos químicamente activos, ciertas ISCs de acuerdo con la presente invención pueden incluir una pluralidad de porciones de IRM conjugadas en una porción que contiene antígeno particular. Métodos para Hacer Conjugados Inmunoestimuladores Los conjugados inmunoestimuladores de acuerdo con la presente invención generalmente se pueden preparar al hacer reaccionar un modificador de respuesta inmune con un agente de reticulación y luego al hacer reaccionar el intermediario resultante con un antígeno. Muchos agentes de reticulación adecuados para preparar bioconjugados son conocidos y muchos son comercialmente disponibles. Ver por ejemplo, Hermanson, G. (1996) Bioconjugate Techniques, Academic Press.

Los conjugados inmunoestimuladores de acuerdo con la presente invención también se pueden preparar, por ejemplo, de acuerdo con el método mostrado en el Esquema de Reacción I en el cual la porción que contiene antigeno se enlaza en la porción IRM a través de La etapa (1) del Esquema de Reacción I un compuesto de la Fórmula III se hace reaccionar con un agente de reticulación heterobifuncional de la Fórmula IV para proporcionar un compuesto de la Fórmula II. RA y RB cada uno contiene un grupo funcional que es seleccionado para reaccionar con el otro, por ejemplo, si RA contiene una amina primaria, entonces un agente de reticulación heterobifuncional puede ser seleccionado en el cual RB contiene un grupo funcional reactivo de amina tal como un éster N-hidroxisulfosuccinimidilico . RA y RB se pueden seleccionar de modo que reaccionan para proporcionar el grupo enlazador deseado en el conjugado. Los métodos para preparar compuestos de la Fórmula III en donde RA contiene un grupo funcional son conocidos. Ver, por ejemplo, las patentes norteamericanas Nos. 4,689,338; 4,929,624; las patentes norteamericanas Nos. 5,258,376; 5,389,640; 5,352,784; 5,494,916; 4,988,815; 5,367,076; 5,175,296; 5,395,937; 5,741,908; 5,693,811; 6,069,149; 6,194,425; y la patente norteamericana 6,331,539 y las publicaciones internacionales WO 00/76505; WO 00/76518; WO 02/46188, WO 02/46189; WO 02/46190; WO 02/46191; WO Muchos agentes de reticulación heterobifuncionales son conocidos y muchos son comercialmente disponibles. Ver por ejemplo, Hermanson, G. (1996), Bioconjugate Techniques, Academia Press, Chapter 5 "Heterobifuncional Cross-Linkers", 229-285. La reacción generalmente se puede llevar a cabo al combinar una solución del compuesto de la Fórmula III en un solvente adecuado tal como ?,?-dimetilformamida con una solución del agente de reticulación heterobifuncional de la Fórmula IV en un solvente adecuado como N,N-dimetilformamida. La reacción se puede correr a temperatura ambiente. El producto de la Fórmula II luego se puede aislar usando técnicas convencionales. En la etapa (2) del Esquema de Reacción I, un compuesto de la Fórmula II que contiene grupos reactivos ZA se hace reaccionar con el antigeno para proporcionar el conjugado inmunoestimulador de la Fórmula I. La reacción generalmente se puede llevar a cabo al combinar una solución del compuesto en la Fórmula II en un solvente adecuado tal como sulfóxido de dimetilo con una solución del antigeno en una solución reguladora adecuada tal como PBS . La reacción se puede correr a temperatura ambiente a una temperatura reducida (~4°C) . Si Zñ es un grupo fotorreactivo tal como una fenil azida entonces la mezcla de reacción será expuesta a una luz UV de onda larga durante una duración de tiempo adecuada para efectuar la reticulación (por ejemplo 10-20 minutos) . El número promedio de porciones de modificador de respuesta inmune mejor construcción de antigeno se puede controlar al ajustar las cantidades del compuesto de la Fórmula II usado en la reacción. El conjugado de respuesta inmune del conjugado de la Fórmula I se puede aislar y purificar usando técnicas convencionales. Esquema de Reacción I I Alternativamente, un compuesto de la Fórmula II se puede sintetizar sin usar un agente de reticulación heterobifuncional . Mientras que el compuesto de la Fórmula II contiene el grupo reactivo Z¾, éste se puede reaccionar con el antigeno usando el método de la etapa (2) anterior para proporcionar un conjugado xnmunoestimulador.

Como se utiliza en la presente, los términos "alquilo", "alquenilo" y el prefijo "alq-" incluyen grupos de cadena recta, cadena ramificada y cíclicos, es decir, cicloalquilo y cicloalquenilo . A menos que se especifique de otra manera, estos grupos contienen de 1 a 20 átomos de carbono, con los grupos alquenilo que contienen de 2 a 20 átomos de carbono. Grupos preferidos tienen un total de hasta 10 átomos de carbono. Los grupos cíclicos pueden ser monocíclicos o policíclicos y de preferencia tienen de 3 a 10 átomos de carbono en el anillo. Los grupos cíclicos ejemplares incluyen ciclopropilo, ciclopentilo, ciclohexilo, ciclopropilmetilo y adamantilo. El término "haloalquilo" es inclusive de grupos que están sustituidos por uno o más átomos de halógeno, incluyendo grupos perfluorados . Esto también es verdadero de grupos que incluyen el prefijo "halo-". Ejemplos de grupos haloalquilo adecuados son clorometilo, trifluorometilo y similares . El término "arilo" como se utiliza en la presente, incluye anillos aromáticos carbocíclicos o sistemas de anillo. Ejemplos de grupos arilo incluyen fenilo, naftilo, bifenilo, fluorenilo e indenilo. El término "heteroarilo" incluye anillos aromáticos o sistemas de anillo que contienen por lo menos un anillo heteroátomo en el anillo (por ejemplo, O, S, N) . Grupos heteroarilo adecuados incluyen furilo, tienilo, piridilo, quinolinilo, isoquinolinilo, indolilo, isoindolilo, triazolilo, pirrolilo, tetrazolilo, imidazolilo, pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo, benzofuranilo, benzotriofenilo, carbazolilo, benzoxazolilo, pirimidinilo, bencimidazolilo, quinoxalinilo, benzotriazolilo, naftiridinilo, isoxazolilo, isotiazolilo, purinilo, quinazolinilo y asi sucesivamente. "Heterociclilo" incluye anillos no aromáticos de sistemas de anillo que contienen por lo menos un heteroátomo en el anillo (por ejemplo, O, S, N) e incluye todos los derivados completamente saturados y parcialmente insaturados de los grupos heteroarilo mencionados en lo anterior. Grupos heterociclicos ejemplares incluyen pirrolidinilo, tetrahidrofuranilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, piperidi-nilo, piperazinilo, tiazolidinilo, isotiazolidinilo e imidazolidinilo . Los grupos arilo, heteroarilo y heterociclilo pueden estar no sustituidos o sustituidos por uno o más sustituyentes independientemente seleccionados del grupo que consiste de alquilo, alcoxi, metilendioxi, etilendioxi, alquiltio, haloalquilo, haloalcoxi, haloalquiltio, halógeno, nitro, hidroxi, mercapto, ciano, carboxi, formilo, arilo, ariloxi, ariltio, arilalcoxi, arialquiltio, heteroarilo, heteroariloxi, heteroariltio, heteroarilalcoxi, heteroaril-alquiltio, amino, alquilamino, dialquilamino, heterociclilo, heterocicloalquilo, alquilcarbonilo, alquenilcarbonilo, alcoxicarbonilo, aloalquilcarbonilo, haloalcoxicarbonilo, alquiltiocarbonilo, arilcarbonilo, heteroarilcarbonilo, ariloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, ariltiocarbonilo, heteroariltiocarbonilo, alcanoiloxi, alcanoiltio, alcanoil-amino, arilcarboniloxi, arilcarbonitio, alquilaminosulfonilo, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, aril-diazinilo, alquilsulfonilamino, arilsulfonilamino, arilal-quilsulfonilamino, alquilcarbonilamino, alquenilcarbonil-amino, arilcarbonilamino, arilalquilcarbonilamino, hetero-arilcarbonilamino, eteroarilalqüicarbonilamino, alquilsulfo-nilamino, alquenilsulfonilamino, arilsulfonilamino, arilalquilsulfonilamino, heteroarilsulfonilamino, heteroaril-alquilsulfonilamino, alquilaminocarbonilamino, alquenilamino-carbonilamino, arilaminocarbonilamino, arilalquilaminocar-bonilamino, heteroarilaminocarbonilamino, heteroarilalquil-aminocarbonilamino y, en el caso de heterociclilo, oxo . Si otros compuestos son descritos por ser "sustituidos" "opcionalmente sustituidos", entonces esos grupos también pueden ser sustituidos por uno o más de los sustituyentes enumerados en lo anterior. Ciertos sustituyentes son generalmente preferidos. Por ejemplo, los grupos I½ preferidos incluyen hidrógeno, grupos alquilo que tienen de 1 a 4 átomos de carbono (es decir, metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo, ter-butilo y ciclopropilmetilo) y grupos alcoxialquilo (por ejemplo, metoxietilo y etoximetilo) . De preferencia R3 y son independientemente hidrógeno o metilo o R3 y ¾ se unen conj ntamente para formar un anillo de benceno, un anillo de piridina, un anillo saturado de 6 miembros o un anillo saturado de 6 miembros que contiene un átomo de nitrógeno. Uno o más de estos sustituyentes preferidos, si están presentes, se pueden presentar en los compuestos de la invención en cualquier combinación. En algunas modalidades, los conjugados inmunoestimuladores pueden incluir una estructura de soporte sólido al cual tanto la porción antigénica como la porción de IRM son unidos. En algunas modalidades, la porción de IRm, la porción antigénica, o ambas pueden ser covalentemente unidas al soporte o sólido usando un soporte de enlace tal como aquellos descritos en lo anterior. El soporte sólido puede incluir, por ejemplo, cuentas de azarosa, partículas de oro y similares. El soporte sólido luego puede ser usado para co-suministrar la porción de IRM unida y la porción antigénica a la población de células objetivo apropiada. Los métodos para unir biomoléculas a soportes sólidos son conocidos en la técnica. Los protocolos para inmovilizar biomoléculas o soportes sólidos son bien conocidos en la técnica y los reactivos adecuados son disponibles de fuentes comerciales. Las composiciones inmunoestimuladoras de acuerdo con la presente invención pueden contener asociaciones químicas entre la porción de IRM y la porción antigénica diferente al acoplamiento covalente. Por ejemplo, una ISC puede incluir una interacción de afinidad entre la porción antigénica y la porción de IRM. La afinidad de avidina-biotina representa un ejemplo de interacción no covalente que puede ser utilizado para emparejar una porción antigénica con una porción de IRM. Una molécula de biotina puede ser químicamente unida a un antígeno por la vía de un número de grupos funcionales presentes en aminoácidos en, por ejemplo, un antígeno proteinoso (por ejemplo, aminas primarias o grupos sulfhidrilo) . Una porción de IRM puede ser conjugada con una molécula de avidina por medios químicos similares. La porción de IRM y la porción antigénica luego se pueden emparejar mediante la interacción de afinidad de avidina-biotina. Los métodos para biotinilar proteínas y enlazar grupos químicos a la avidita son bien conocidos para un experto en la técnica. Las interacciones de afinidad alternativas que pueden ser útiles para hacer ISC incluyen, por ejemplo las interacciones de antígeno/anticuerpo, interacciones de glicoproteína/lectina. Las composiciones inmunoestimuladoras también se pueden formar mediante interacciones iónicas entre una porción de IRM y una porción de antigénica. Por ejemplo, una porción de IRM, una porción antigénica, o ambas, pueden ser químicamente modificadas para contener componentes supuestamente cargados . La porción de IRM opuestamente cargada de porción antigénica luego se pueden incubar conjuntamente para permitir la interacción iónica entre las dos entidades. La ISC resultante luego se puede administración a un sujeto o a una. población de células, dando por resultado el co-suministro de tanto el IRM y el antígeno de células objetivo. Como en el caso de las ISCs covalentemente enlazadas, la ISCs en la cual la porción de IRM y la porción antigénica son emparejadas no covalentemente pueden incluir un soporte sólido. Métodos para Inducir Respuestas Inmunes Usando Conjugados Inmunoestimuladores . · Las composiciones inmunoestimuladoras de acuerdo con la presente invención se pueden usar para inducir respuestas inmunes de células del sistema inmune in vitro o in vivo. Asi, una ISC de acuerdo con la presente invención puede ser útil como un componente de una vacuna o como un factor inmunoestimulador usado en el cultivo de células in vitro de células T o células B. En realidad, los IRMs pueden ser factores inmunoestimuladores más potentes cuando se suministran como parte de una ISC de acuerdo con la presente invención comparado con el que es suministrado como un adyuvante de vacuna emparejado. Cuando se usan para inducir respuestas inmunes in vitro, las células inmunes activadas in vitro pueden ser introducidas en un paciente. Alternativamente, los factores secretados por las células inmunes activadas, por ejemplo, anticuerpos, citoquinas y similares, se pueden recolectar para usos de investigación, de diagnóstico y/o terapéuticos. A menos que se mencione de otra manera, un huésped puede ser inmunizado subcutáneamente o intraperitonealmente . Después de un tiempo suficiente para permitir que el huésped genere una respuesta inmune a la ISC, las células inmunes apropiadas para el sitio de inmunización son recolectadas. Por ejemplo, los ganglios linfáticos pueden ser recolectados desde un huésped que se ha inmunizado subcutáneamente. Las células del bazo se pueden recolectar de un huésped inmunizado peritonealmente . Para algunos huéspedes, la recolección de células puede incluir el sacrificio de los huéspedes. En otros casos, la recolección de células puede incluir una biopsia o remoción quirúrgica de un tejido apropiado . En una modalidad, las ISCs se pueden usar para la proliferación de células T · específicas de antígeno. Un huésped . (por ejemplo, un ratón) se puede inmunizar con un ISC que incluye un antígeno particular. Después de la incubación suficiente en el huésped, ciertas células T (por ejemplo, células T CD8+) madurarán a las células T específicas de antigeno en respuesta a la inmunización. Un porcentaje de más grande de células T serán especificas al antigeno huéspedes inmunizados con ISC, comparados con huéspedes inmunizados con solamente el antigeno (Figs. 1-3). La ISC puede ser emparejada al acoplar covalentemente la porción IRM y la porción antigénica (Figs. 1-3) o alternativamente, mediante un empare amiento no covalente tal como, por ejemplo, una suspensión coloidal (Figs. 15-17). Si el antigeno es una proteina (por ejemplo, ovalbúmina) este no puede ser necesario que la ISC incluye la proteina completa. Por ejemplo, un péptido inmunodominante de la proteina puede ser todo lo que es requerido para inducir el desarrollo de células T especificas al antigeno de proteina completa. Además, una inmunización de refuerzo, por ejemplo, 15 dias después de la inmunización inicial, puede aumentar la inducción de células T especificas de antigeno (Fig. 7) . La inmunización de un huésped con ISCs se puede usar para inducir una respuesta especifica de antigeno en linfocitos T citotóxicos CDS+ (CTLs) . Tal respuesta puede ser dirigida contra muchas condiciones incluyendo, pero no limitados a tumores y poblaciones de células viralmente infectadas. Las ISCs también pueden ser administradas profilácticamente para proporcionar a. un huésped con una inmunidad CTL protectora dirigida contra tumores futuros o infecciones virales. En otra modalidad, las ISCs se pueden usar para inducir la producción de citoquina mediante células T específicas de antígeno in vitro. El tejido apropiado de un huésped inmunizado puede ser recolectado y cultivado in vitro por el antígeno, para de esta manera inducir la producción de una o más citoquinas (por ejemplo, IFN-?, ver la Fig. 4-6) . Nuevamente, en casos en donde el antígeno es una proteína, un péptido inmunodominante de la proteína de antígeno puede ser todo lo que es requerido para inducir las células T específicas de antígeno en el cultivo de células para producir y secretar las citoquinas. En otra modalidad, las ISCs se pueden usar para inhibir el crecimiento del tumor in vivo. Los huéspedes que tienen células de tumor que expresan un antígeno particular pueden ser inmunizados con ISCs que contiene el antígeno. En algunas modalidades, la inmunización inicial puede ser reforzada con una segunda inmunización. Los tumores recolectados de los huéspedes inmunizados con ISC que contienen el antígeno fueron generalmente más pequeños que los tumores recolectados de huéspedes inmunizados con solamente el antígeno (Fig. 8) . Además el análisis de los tumores demostró tumores recolectados de huéspedes inmunizados con ISC contuvieron un porcentaje más alto de células T específicas de antígeno que los tumores recolectados de los huéspedes inmunizados con solamente el antigeno (Fig. 10] . En todavía otra modalidad, las ISCs se pueden usar para producir células que presentan antígeno (APCs, por ejemplo, células dendríticas) para presentar péptidos del antígeno dentro de los complejos MHC clase I en sus superficies celulares. Los huéspedes pueden ser inmunizados intravenosamente para inducir este tipo de respuesta. La respuesta puede ser verificada al recolectar y analizar las células del bazo para APCs que presenta, complejos de antígeno/MHC clase I (Figs. 11-13) . En una modalidad alternativa, las ISCs se pueden usar para desarrollar células T específicas de antígeno in vitro. Por ejemplo, las células de la médula ósea se pueden recolectar de un paciente que tiene un tumor que expresa un antígeno particular. Las células recolectadas pueden ser cultivadas in vitro con una ISC que contiene el antígeno expresado por el tumor. Una vez nuevamente, si el antígeno es una proteína, la ISC puede necesitar solamente incluir péptido inmunodominante de la proteína. Las células T específicas de antígeno que se desarrollo in vitro en respuesta a la incubación de ISC pueden ser reintroducidas al paciente. En todavía otra modalidad alternativa, una ISC puede administrar a un sujeto que tiene un tumor para incrementar la probabilidad, duración, o ambas, de supervivencia. Una ISC que incluye una porción antigénica especifica de tumor administrada a ratones estimulados con células de melanoma proporcionaron supervivencia incrementada comparada con ratones inmunizados con' solamente antigeno de tumor (Fig. 14) . Ejemplos Los siguientes ejemplos se han seleccionado solamente para ilustrar adicionalmente características, ventajas y otros detalles de la invención. Se va a entender expresamente, sin embargo, que mientras que los ejemplos sirven para este propósito, los materiales particulares de las cantidades usadas así como otras condiciones y detalles no se van a considerar en un asunto que limitaría indebidamente el alcance de esta invención. Preparación de Compuestos IRM Compuesto IRM 1 (IRM1) : N- [ 6- ( {2- [4-amino-2- (etoximetil) -lfT-imidazo [4, 5-c] quinolin-l-il] -1, 1-dimetil-etil } amino) -6-oxohexil] -4-azido-2-hidroxibenzamida Parte A Una solución agitada de 4-cloro-3-nitroquinolina (17.3 g, 83.2 mmol) en 200 mL de CH2CI2 anhidro, bajo N2/ se trató con trietilamina (23.2 mL, 166.4 mmol) y 1, 2-diamino-2-metilpropano (9.57 mL, 91.5 mmol) . Después de la agitación durante la noche, la mezcla de reacción se diluyó con 800 mL de CHC13, se lavó con H20 (3 X 300 mL) y salmuera (300 mL) . La porción, orgánica se secó sobre Na2SQ4 y se concentró para dar 2-metil-N1- (3-nitroquinolin-4-il) propano-1, 2-diamina (21.0 g) como un sólido amarillo brillante. Parte B Una solución de 2-metil-N1- (3-nitroquinolin-4-il) propano-1, 2-diamina (2.60 g, 10.0 mmol) en 50 mL de tetrahidrofurano (THF) , bajo N2/ se enfrió a 0°C y se trató con 10 mL de solución de NaOH 1N. Dicarbonato de di-ter-butilo (2.18 g, 10.0 mmol) luego se adicionó a una solución rápidamente agitada. La mezcla de reacción luego se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante la noche. 400 mg adicionales de dicarbonato de di-ter-butilo se adicionaron y la agitación se continuó durante 3 días. La reacción luego se trató con acetato de etilo (200 mL) y se lavó con H20 (2X) y salmuera. La porción orgánica se secó sobre Na2S04 y se concentró para dar un sólido amarillo que se trituró con EtOAc 10 /hexanos. El sólido se aisló por filtración y se secó bajo vacio durante la noche para dar 1, l-dimetil-2- [ (3-nitroquinolin-4-il) amino] etilcarbamato de ter-butilo (2.80 g) como un polvo amarillo. Parte C Una solución de 1, l-dimetil-2- [ (3-nitroquinolin-4-il) amino] etilcarbamato de ter-butilo (3.50 g, 9.72 mmol), en 150 mL de tolueno se trató con 0.3 g de Pt al 5% sobre carbón y se agitó bajo H2 (3 atm, 3 Kg/cm2) durante 6 horas. La solución luego se filtró a través de una almohadilla de celite y se concentró para dar 3.04 g de 2- [ (3-aminoquinolin-4-il] -1, 1-dimetiletilcarbamato de ter-butilo como una espuma naranja clara. Parte D Una solución de 2- [ (3-aminoquinolin-4-il] -1, 1-dimetiletilcarbamato de ter-butilo (3.04 g, 9.21 mmol) en 50 mL de CH2C12 se enfrió a 0°C y se trató con trietilamina (1.41 mL, 10.13 mmol) y cloruro de etoxiacetilo (1.02 mL, 10.17 mml) . Después de 2 horas, la mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida. El jarabe resultante se tomó en 100 mL de EtOH y se trató con 4.5 mL de trietilamina. La solución se calentó a reflujo durante la noche. La mezcla de reacción se concentró y se tomó en 100 mL de CH2C12 y se lavó con H20 (2X) y salmuera. La porción orgánica se secó sobre Na2S04 y se concentró. El jarabe resultante se purificó mediante la cromatografía en columna (Si02, EtOAc al 80%/hexanos) para dar 2- [2- (etoximetil) -IH-imidazo [4, 5-c] quinolin-l-il] -1, 1-dimetiletilcarbamato de ter-butilo (1.57 g) como una espuma de color durazno . Parte E Una solución de 2- [2- (etoximetil) -Iff-imidazo [4, 5-c] quinolin-l-il] -1, 1-dimetiletilcarbamato de ter-butilo (1.57 g, 3.94 mmol) en 30 mL de CH2C12 se trató con ácido 3-cloroperoxibenzoico (77%, 1.01 g, 4.57 mmol). Después de la agitación durante 2 horas, la mezcla de reacción se trató con 30 mL de CH2CI2 adicionales y se lavó con una solución de Na2C03 al 1% (2 X 30 mL) , ¾0 y salmuera. La porción orgánica luego se secó sobre Na2S04 y se concentró para dar 2- [2- (2- (etoximetil) -5-óxido-lH-imidazo [4, 5-c] quinolin-l-il] -1, 1-dimetiletilcarbamato de ter-butilo (1.58 g) como una espuma café clara. Parte F Una solución de 2- [2- (2- (etoximetil) -5-óxido-lff-imidazo [4, 5-c] quinolin-l-il] -1, 1-dimetiletilcarbamato de ter-butilo (1.57 g, 3.79 mmol) en 20 mL de 1, 2-dicloroetano se calentó a 70°C y se trató con 2 mL de solución de NH4OH concentrada. A la solución rápidamente agitada se adicionó cloruro de p-toluensulfonilo sólido (795 mg, 4.17 mmol). La mezcla de reacción luego se selló en un recipiente a presión y el calentamiento se continuó durante 2 horas. La mezcla de reacción luego se enfrió y se trató con 50 mL de CHCI3. La mezcla de reacción luego se lavó con H20, solución de Na2CO al 1% (3 X) y salmuera. La porción orgánica se secó sobre Na2S04 y se concentró para dar él producto como un aceite café claro. El aceite concentrado se purificó mediante la cromatografía en columna (S1O2/ MeOH 2-5%/CHCl3) para dar 2-[4-amino-2- (etoximetil) -Lfí-imidazo [4, 5-c] quinolin-l-il] -1, 1-dimetiletilcarbamato de ter-butilo (1.26 g) como una espuma amarilla clara. Parte G 2- [4-amino-2- (etoximetil) -Iff-imidazo [4, 5-c] quinólin-l-il] -1, 1-dimetiletilcarbamato de ter-butilo (1.26 g, 3.05 mmol) se disolvió en 10 mi de EtOH y se trató con 10 mL de HCl 2M en EtOH. Después del calentamiento a reflujo durante 2 horas, la mezcla de reacción se enfrió y se concentró bajo presión reducida. El sólido amarillo resultante se disolvió en 50 mL de H20 y se extrajo con CHC13 (20 mL) . La capa orgánica se desechó y la porción acuosa se hizo básica /pH~12) mediante la adición de una solución de NH4OH concentrada. Esta luego se extrajo con CHCI3 (4x20 mL) y las porciones orgánicas combinadas se secaron con Na2SÜ y se concentraron para dar 1- (2-amino-2-metilpropil) -2- (etoximetil) -lH-imidazo [4, 5-c] quinolina-4-amina (606 mg) como un polvo café claro, p.f. 161.0-162.0°C; MS m z314 (M + H); lH NMR (300 MHz, ds-DMSO) d 8.30 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.59 (dd, J = 1.2, 8.3 Hz, 1H), 7.40 (ddd, J= 1.0, 7.2, 8.1 Hz, 1H), 7.21 (ddd, 3 = , 7.0, 8.2 Hz, 1H), 6.57 (s, 2H), 4.94 (br s, 2H), 4.61 (br s, 2H), 3.52 (¾ J = 7.0 Hz, 2H), 1.61 (s, 2H), 1.31 (1, J = 7.0 Hz, 3H), 1.07 (s, 6H); 13Cm4R (75 MHz, (¼-DMSO) d 152.4, 151.1, 145.7, 134.3, 126.8, 126.7, 121.7, 120.8, 115.7, 65.6, 5.2, 55.8, 52.5, 29.2, 15.4.

Análisis Calculado para C17H23 5O: %C, 65.15; %H, 7.40; %N, 22.35. Encontrado: %C, 65.04; %H, 7.52; %N, 22.07. Parte H Bajo una atmósfera de nitrógeno, una solución de (azidosalicilamido) hexanoato de N-hidroxisulfosuccinimidilo (100 mg, 0.204 mmol de Sulfa-LC-NHS-ASA de Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL, USA) en N,N-dimetilformamida DMF, (2-4 mL) se adicionó a una solución de 1- (2-amino-2-metilpropio) -2- (etoximetil) -líf-imidazo [4, 5-c] -quinolin- -amina (63 mg, 0.201 mmol) en DMF (5 mL) . La mezcla de reacción se filtró bajo nitrógeno en un recipiente envuelto con lámina delgada. Después de 2 días, 50 mg adicionales de (azidosalicilamido) hexanoato de N-hidroxisulfosuccinimidilo se adicionó. Después de aproximadamente una semana, la mezcla de reacción se concentró bajo presión reducida a 55°C. El residuo se dividió entre dielorómetaño que contiene una pequeña cantidad de metanol y agua. La capa orgánica se separó y se concentró bajo presión reducida. El residuo se purificó mediante la cromatografía de evaporación instantánea (2 X 15 cm Si02 eluyendo con metanol al 6% en cloroformo) para proporcionar 53 mg de producto como un cristal incoloro. El cristal se transfirió usando diclorometano a un matraz cónico y luego se concentró para proporcionar una espuma. La espuma se secó durante la noche bajo alto vacio, para proporcionar 48 mg de un sólido cristalino blanco. El análisis mediante NMR indicó la presencia de diclorometano asi que el material se secó durante la noche bajo alto vacio y luego en un horno al vacio a 50°C durante 5 horas. El análisis mediante HPLC indicó una pureza de >93%. Compuesto IRM 2 (IRM2) : N- { 6- [ (2- {2- [4-amino-2- (2-metoxietil) -lff-imidazo [4, 5-c] quinolin-l-il] etoxi}etil) amino] -6-oxohexil }-4-azido-2-hidroxibenzamida Parte A Una solución de 2- (2-aminoetoxi ) etanol (29.0 g, 0.276 mol) en 180 mL de tetrahidrofurano (THF) , bajo N2 se enfrió a 0°C y se trató con 140 mL de una solución de NaOH 2N. Una solución de bicarbonato de di-ter-butilo (60.2 g, 0.276 mol) en 180 mL de THF luego se adicionó gota a gota durante 1 h a la solución rápidamente agitada. La mezcla de reacción luego se dejó calentar a temperatura ambiente durante 18 horas adicionales. El THF luego se retiró bajo presión reducida y la suspensión acuosa restante se llevó a un pH de 3 entre la adición de 150 mL de solución de H2S0 1M. Este luego se extrajo con acetato de etilo (300 mL, 100 mL) y las capas orgánicas combinadas se lavaron con H2O (2X) y salmuera. La porción orgánica se secó sobre Na2S04 y se concentró para dar 2- (2-hidroxietoxi) etilcarbamato de ter-butilo como un aceite incoloro (47.1 g) . Parte B Una solución rápidamente agitada de 2- (2-hidroxietoxi) etilcarbamato de ter-butilo (47.1 g, 0.230 mol) en 1 L de CH2C12 se enfrió a 0°C bajo N2 y se trató con trietilamina (48.0 mL, 0.345 mol). Cloruro de metanosulfonilo (19.6 mL, 0.253 mol) luego se adicionó gota a gota durante 30 min. La mezcla de reacción luego se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó 22 horas adicionales. La reacción se enfrió rápidamente mediante la adición de una solución de NaHC03 saturada de 500 mL y la capa orgánica se separó. La fase orgánica luego se lavó con H20 ( 3 X 500 mL) y salmuera. La porción orgánica se secó sobre Na2S04 y se concentró para dar metanosulfonato de 2-{2-[(ter-butoxicarbonil) amino] etoxi } etilo como un aceite café (63.5 g) · Parte C Una solución agitada de metanosulfonato de 2-{2-[ (ter-butoxicarbonil) amino] etoxi} etilo (63.5 g, 0.224 mol) en 400 iriL de N, N-dimetilformamida (DMF) se trató con NaN3 (16.1 g, 0.247 mol) y la mezcla de reacción se calentó a 90°C bajo N2. Después de 5 horas, la solución se enfrió a temperatura ambiente y se trató con 500 mL de H20. La mezcla de reacción luego se extrajo con Et20 (3 X 300 mL) . Los extractos orgánicos combinados se lavaron con H20 (4 X 100 mL) y salmuera (2 X 100 mL) . La porción orgánica se secó bajo MgSO^ y se concentró para dar 52.0 g de 2- (2-azidoetoxi) etilcarbamato de ter-butilo como un aceite café claro. Parte D Una solución de 2- (2-acidoetoxi) etilcarbamato de ter-butilo (47.0 g, 0.204 mol) en MeOH se trató con 4 g de Pd al 10% sobre carbón y se agitó bajo H2 (3 g/cm2) durante 24 horas. La solución luego se filtró a través de una almohadilla de Celite y se concentró para dar 35.3 g de 2- (2-aminoetoxi) etilcarbamato de ter-butilo crudo como un líquido incoloro que se usó sin purificación adicional. Parte E Una solución agitada de 4-cloro-3-nitroquinolina (31.4 g, 151 mol) en 500 mL de CH2C12 anhidro, bajo N2, se trató con trietilamina (32 mL, 0.308 mol) y 2- (2-aminoetoxi) etilcarbamato de tejr-butilo (0.151 mol). Después de la agitación durante la noche, la mezcla de reacción se lavó con H20 y salmuera (300 mL) . La porción orgánica se secó sobre Na2S04 y se concentró para dar un sólido amarillo brillante. La recristalización de acetato de etilo/hexanos dio 43.6 de 2-{2- [ (3-nitroquinolin-4-il) amino] etoxi}-etilcarbamato de tez—butilo como cristales amarillos · brillantes. Parte F Una solución de 2- {2- [ (3-nitroquinolin-4-il) amino] etoxi } etilcarbamato de ter-butilo (7.52 g, 20.0 mmol) en tolueno se trató con 1.5 g de Pt al 5% sobre carbón y se agitó bajo H2 (3 Kg/cm2) durante 24 horas. La solución luego se filtró a través de una almohadilla de Celite y luego se concentró para dar 6.92 g de 2- { 2- [ (3-aminoquinolin-4-il) amino] etoxi } etilcarbamato de ter-butilo crudo como un jarabe amarillo. Parte G Una solución de 2-{2- [ (3-aminoquinolin-4-il) amino] etoxi} etilcarbamato de ter-butilo (10.2 g, 29.5 mmol) en 250 mL de CH2C12 anhidro se enfrió a 0°C y se trató con trietilamina (4.28 mL, 30.0 mmol) . Cloruro de metoxipropionilo (3.30 mL, 30.3 mmol) luego se adicionó gota a gota durante 5 min. La reacción luego se calentó a temperatura ambiente y la agitación se continuó durante 1 hora. La mezcla de reacción luego se concentró bajo presión reducida para dar un sólido naranja. Esta se disolvió en 250 mL de EtOH y 12.5 mL de trietilamina se adicionaron. La mezcla se calentó a reflujo y se agitó bajo N2 durante la noche. La reacción luego se concentró a sequedad bajo presión reducida y se trató con 300 mL de Et20. La mezcla luego se filtró y el filtrado se concentró bajo presión reducida para dar un sólido café. El sólido se disolvió en 200 mL de metanol caliente y se trató con carbón vegetal activado. La solución caliente se filtró y se concentró para dar 11.1 g de 2-{2- [2- (2-metoxietil) -líf-imidazo [4, 5-c] quinolin-1-il] etoxi } etilcarbamato de ter-butilo como un jarabe amarillo. Parte H Una solución de 2-{2- [2- (2-metoxietil) -1H-imidazo [4, 5-c] quinolin-l-il] etoxi} etilcarbamato de ter-butilo (10.22 g, 24.7 mmol) en 250 mL de CHC13 se trató con ácido 3-cloroperbenzoico (77%, 9.12 g, 40.8 mmol). Después de la agitación durante 30 minutos, la mezcla de reacción se lavó con una solución de a2C03 al 1% (2 X 75 mi) y salmuera. La capa orgánica luego se secó sobre Na2S0 y se concentró para dar 10.6 g de 2-{2- [2- (-metoxietil) -5-óxido-lH-imidazo [4, 5-c] quinolin-l-il] etoxi} etilcarbamato de ter-butilo como una espuma naranja que se usó sin purificación adicional. Parte I Una solución de 2-{2- [2- (2-metoxietil) -5-óxido-lJí-imidazo [4 , 5-c] quinolin-l-il] etoxi } etilcarbamato de ter-butilo (10.6 g, 24.6 mmol) en 100 mL de 1, 2-dicloroetano se calentó a 60°C y se trató con 10 mL de solución de N¾OH concentrada. A la solución rápidamente agitada se adicionó cloruro de p-toluensulfonilo sólido (7.05 g, 37.0 mmol) durante un periodo de 10 minutos. La mezcla de reacción se trató con 1 mL adicional de solución de NHOH concentrada y luego se selló en un recipiente a presión y el calentamiento se continuó durante 2 horas. La mezcla de reacción luego se enfrió y se trató con 100 mL de CHC13. La mezcla de reacción luego se lavó con H2O, solución de Na2CC>3 al 1% (2 X) y salmuera. La porción orgánica se secó sobre Na2S04 y se concentró para dar 10.6 g de 2-{2- [4-amino-2- (2-metoxietil) -lff-imidazo [4, 5-c] quinolin-l-il] etoxi}etilcarbamato de ter-butilo como una espuma café. Parte J 2-{2- [4-amino-2- (2-metoxietil) -lJí-imidazo [4, 5-c] -quinolin-l-il] etoxi}etilcarbamato de ter-butilo (10.6 g, 24.6 mmol) se trató con 75 mL de HC1 2M en etanol y la mezcla se calentó a reflujo con agitación. Después de 1.5 horas, la mezcla de reacción se enfrió y se filtró para dar un sólido gomoso. El sólido se lavó con etanol y Et2Ü y se secó bajo vacio para dar la sal de clorhidrato como un sólido café claro. La base libre se hizo al disolver la sal de clorhidrato en 50 mL de ¾0 y el tratamiento con una solución de NaOH al 10%. La suspensión acuosa luego se concentró a sequedad y el residuo se trató con CHC13. Las sales resultantes se retiraron por filtración y el filtrado se concentró para dar 3.82 g de 1- [2- (2-aminoetoxi) etil] -2- (2-metoxietil) -líf-imidazo [4, 5-c] quinolin-4-amina como un polvo de color canela.

MS 330 fM+Hf: 1H1S1M (300 MHz, DMSO-<¾) 88.10 (d,J= 8.1 Hz, 1 H); 7.66 (4 J= 8.2 Hz, 1 H); 7.40 (m, 1 H); 7.25 (m, 1 H); 6.88 (br s, 2 H); 4.78 (t, J = 5.4 Hz, 2 H); 3.89 (t3 J = .8 Hz, 2 H); 3.84 (t,/= 6.9 Hz, 2H); 3.54 (t,J= 5.4 Hz, 2 H); 3.31 (s, 3 H); 3.23 (t,J= 6.6 Hz, 2H); 2.88 (t, J= 5.3 Hz, 2 H).

Parte K Bajo una atmósfera de nitrógeno, una solución de (azidosalicilamido) hexanoato de N-hidroxisulfosuccinimidilo (100 mg, 0.204 mmol de Sulfo-rLC-NHS-ASA de Pierce Biotechnology, Inc, Rockford, IL, USA) en DMF (2-4 mL) se adicionó a una solución de 1- [2- (2-aminoetoxi) etil] -2- (2-metoxietil) -líf-imidazo [4, 5-c] quinolin-4-amina (66 mg, 0.201 mmol) en DMF (5 mL) . Después de 3.5 horas el análisis mediante HPLC mostró que no estuvo presente material de partida. La mezcla de reacción se agitó durante la noche y luego se concentró bajo presión reducida. La reacción se purificó mediante la cromatografía de evaporación instantánea (2 X 15 cm de Si02 eluyendo con metanol al 8% en cloroformo) para proporcionar 55 mg del producto como un cristal incoloro. El cristal se transfirió usando diclorometano a un matraz cónico que se concentró para proporcionar una espuma. La espuma se secó durante la noche bajo alto vacio y luego en un horno al vacio a 50 °C durante 5 horas para proporcionar 45 mg del producto como un sólido esponjoso blanco. El análisis mediante HPLC indicó la pureza de >95¾. Compuesto IRM 3 (IRM3) : N- (2- {2- [4-amino-2- (2-metoxietil) -líf-imidazo [4, 5-c] quinolin-l-il] etoxi}etil) hexa-decanamida.

Bajo una atmósfera de nitrógeno, una suspensión de 1- [2- (2-aminoetoxi) etil-2- (2-metoxietil) -líf-imidazo [4, 5-c] quinolin-4-amina (140.5 mg, 0.428 mmol) en una mezcla de diclorometano (3.5 mL) y trietilamina (150 ÍL, 1.07 mmol) se enfrió a 0°C. Se adicionó lentamente cloruro de palmitoilo (130 µ?,, 0.428 mmol) . La mezcla de reacción se dejó agitando a 0°C durante 2 horas tiempo en el cual el análisis mediante la cromatografía de capa fina indicó que no se dejó material de partida. La mezcla de reacción se diluyó con diclorómetaño (30 mL) , se lavó con una solución de bicarbonato de sodio saturada (2 x 5 mL) , se secó sobre sulfato de magnesio y luego se concentró bajo presión reducida. El residuo resultante se purificó mediante la cromatografía en columna (12 g de gel de sílice eluido con metanol al 2% en diclorometano) para proporcionar 183 mg ¦ de N- (2- {2- [4-amino-2- (2-metoxietil) -líf-imidazo [4, 5-c] quinolin-l-il] etoxi}etil) -hexadecanamida como un polvo blanco. Análisis Calculado para C33H53N5O3: %C, 69.80; %H, 9.41; %N, 12.33; Encontrado: %C, 69.60; %H, 9.28; %N, 11.99. Ejemplo 1: Reticulación del Modificador de Respuesta Inmune a Ovalbúmina IRM1 se suspendió en sulfóxido de dimetilo (DMSO) a 10 mg/ml . La ovalbúmina se suspendió en solución salina regulada de fosfato (PBS) a 10 mg/ml y el pH se ajustó a >10.0 mediante la adición de NaOH. 500 µ? de la solución de ovalbúmina (5 mg de ovalbúmina) se mezclaron con 100 µ? de la solución de IRM1 (1 mg de IRM1) en una sola cavidad de una placa de cultivo de tejido de 12 cavidades. La placa se colocó en hielo y una fuente de luz de UV de longitud de onda larga se colocó directamente sobre la placa tan cercana a la cavidad que contiene la mezcla de IRM1/ovalbúmina como sea posible. La mezcla se irradió durante 15 minutos. El conjugado resultante se retiró de la cavidad y se resuspendió en PBS a una concentración final de 5 mg/ml de ovalbúmina, 0.5 mg/ml de IRM1 y se dializó contra PBS para remover cualquier IRM no conjugado. Ejemplo 2: Inmunizaciones Ratones C57BL/6 se inmunizaron con el conjugado (1 mg de ovalbúmina y 200 ]iq de IRM1, preparado como en el Ejemplo 1) en 200 µ? de PBS ya sea subcutáneamente o intraperitonealmente. Los ratones de control se inmunizaron con 1 mg de ovalbúmina en 200 µ? en PBS. Para el análisis de las respuestas primarias, los ratones se sacrificaron 5-7 días después de la inmunización. Para el análisis de respuestas secundarias, los ratones se reforzaron 7-15 días después de la inmunización inicial y se sacrificaron 5.7 días posteriormente. A menos que se indique de otra manera, los ganglios linfáticos se recolectaron de los ratones inmunizados subcutáneamente para el análisis y las células del bazo se recolectaron de los ratones inmunizados intraperitonealmente para el análisis. Ejemplo 3: Reactivos Anticuerpos marcados con fluorocromo específicos para ratón CD8, CDllc y CD44 se obtuvieron de Pharmingen (San Diego, CA) . El anticuerpo monoclonal 25D1.16 (Dr. Ron Germain, NIH) especifico para el péptido de ovalbúmina dominante (SIINFEKL) enlazado a la molécula H-2Kb de MHC clase I. Porgador y colaboradores, Jnmmunity 6:715-26. La ovalbúmina se obtuvo de Sigma Chemical Company (St. Louis, MO) . Los tetrámeros de la molécula H-2Kb de MHC de clase I enlazada al péptido de ovalbúmina dominante SI1NFEKL se produ eron como es descrito en Kedl y colaboradores, J Exp Med, 192:1105-13 (2000). La linea de células de melanoma que expresan ovalbúmina B16ova se hizo mediante lipofección de la linea de células B16-F10 (ATCC #CRL-6475) con un plásmido que codifica la ovalbúmina de longitud completa. Ver Kedl y colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 98:10811-6. La captura de citoquina y los reactivos de detección fueron de Miltyeni Biotech (Auburn, CA) . Ejemplo 4 Ratones experimentales se inmunizaron con el conjugado como es preparado en el Ejemplo 1 ya sea subcutáneamente o intraperitonealmente como es descrito en el Ejemplo 2. Los ratones de control se inmunizaron con ovalbúmina como es descrito en el Ejemplo 2. Siete dias después, los ganglios linfáticos o el bazo se removieron y las células se mancharon con anticuerpos específicos para CD8, CD44 y los tetrámeros H-2Kb/SIINFEKL y se analizaron mediante la citometría de flujo. Los resultados se muestran en las Figuras 1-3. Las células que manchan positivamente para todos los marcadores identifican células T CD8+ específicos de ovalbúmina, activadas, que se desarrollaron como un resultado de la inmunización.

Cada una de las Figuras 1-3 incluyen el porcentaje de todas las células T CD8+ examinadas que se identificaron como células T CD8+ especificas de ovalbúmina, activadas. En los ratones de control, 0.07% de células T CD8+ fueron células T CD8+ especificas de ovalbúmina activadas. La inmunización subcutánea con conjugado generó 0.52% de células T CD8+ especificas de ovalbúmina activadas. La inmunización intraperitoneal con el conjugado generó 0.92% de células T CD8+ especificas de ovalbúmina activadas. La inmunización con el péptido de ovalbúmina dominante (SIINFEKL) conjugado con IRM1 (100 \ig de péptido reticulado a 200 µg de IRM1) también indujo la activación de las células T CD8+ especificas de ovalbúmina. Ejemplo 5 Ratones de control se inmunizaron con ovalbúmina como es descrito en el Ejemplo 2. Los ratones experimentales se inmunizaron con conjugado como es preparado en el Ejemplo 1 ya sea subcutáneamente o intraperitonealmente como es descrito en el Ejemplo 2. Células inmunes apropiadas se recolectaron siete días después de la inmunización y se incubaron in vitro durante cuatro horas con el péptido SIINFEKL. Las células T CD8÷ que producen interferona gamma (IFN-?) se identificaron usando un ensayo de captura y de detección de IFN-? acoplado con la citometria de flujo. Las células T CD8+ se generaron al inmunizar con la IFN-? producida del conjugado de IRMl-ovalbúmina en respuesta a la estimulación de antigenos subsecuentes (Figuras 4-6) . Ejemplo 6 Los ratones se inmunizaron con el conjugado como es preparado en el Ejemplo 1 como es descrito en el Ejemplo 2 y luego se reforzaron con una cantidad igual de conjugado en el día 15. Las células del bazo y los ganglios linfáticos de los animales reforzados se analizaron siete dias después del refuerzo. El análisis mostró un porcentaje incrementado de células T CD8+ especificas de ovalbumina activadas sobre aquellas de ratones que han recibido solamente la inmunización primaria (Figura 7) . Ejemplo 7 Ratones se inyectaron intradérmicamente con la linea de células de melanoma que expresa ovalbumina B16ova (1 X 105 células) . En el dia 7, los ratones se inyectaron subcutáneamente con ya sea 1 mg de ovalbumina (control) o con conjugado como es preparado en el Ejemplo 1. En el dia 14, los ratones se reforzaron subcutáneamente con ovalbumina o conjugado como en el dia 7. En el dia 20, el tamaño de tumor se midió con calibradores en dos dimensiones. La inmunización con el conjugado dio por resultado el tamaño del tumor reducido como es comparado con el control (Figura 8) . Ejemplo 8 Ratones se inyectaron intradérmicamente con las lineas de células de melanoma que expresan ovalbúmina B16ova (1 x 105 células) . Siete y 14 días después, los ratones se inyectaron intraperitonealmente con ya sea 1 mg de ovalbúmina (control) o con conjugado como es preparado en el Ejemplo 1. Veinte días después de la estimulación con la línea de células de melanoma, los bazos y tumores se retiraron y las células de cada fuente se mancharon con anticuerpo específico para CD8 y CD44 así como los tetrámeros H-2Kb/SIINFEKL . El análisis citométrico de flujo reveló una expansión significante de las células T CD8+ específicas de albúmina activadas tanto en el bazo (Figura 9) como dentro del tumor (Figura 10) . Ejemplo 9 Ratones se inmunizaron intravenosamente con ovalbúmina, ovalbúmina e IRM1 no emparejado: 1- (2-amino-2-metilpropil) -2- (etoximetil) -liT-imidazo [4, 5-c] quinolina-4-amina (IRM1 antes de la unión al grupo enlazador - el producto de la Parte G de la síntesis . de IRM1) , o con conjugado como es preparado en el Ejemplo 1. Catorce horas después, los bazos se removieron, se trataron con colagenasa y las células se mancharon con anticuerpos específicos para CD8, CDllc y el anticuerpo 25D1.16, que es específico para el péptido de ovalbúmina SIINFEKL formado en complejo con la molécula H-2Kb de MHC de clase I. El análisis citométrico de flujo indicó que la inmunización de los ratones con el conjugado de IRMl-ovalbúmina (Figura 14) generó porcentaje más grande de células dendriticas CDllc+, CD8+ que estuvieron presentando Kb/SIIFEKL que la inmunización de los ratones con ovalbumina sola (Figura 11) o una mezcla de ovalbumina e IRM1 no emparejada (Figura 12) . Ejemplo 10 Ratones se inmunizaron el Dia 0 subcutáneamente como es descrito en el Ejemplo 2 con ovalbumina (control) o con el conjugado IRM1 como es preparado en el Ejemplo 1. Los ratones recibieron inmunizaciones de refuerzo en el Dia 14. Los ratones luego se estimularon intradérmicamente con la linea de células de melanoma que expresa una ovalbumina de B16ova (1 x 105 células en el dia 28 y se inspeccionaron para el crecimiento de tumor. En el dia 75, 80% de ratones inmunizados con conjugado sobrevivieron y aparecieron sanos, mientras que todos los ratones inmunizados con solamente ovalbumina murieron (Fig. 14) . Ejemplo 11 Una solución de extracto de IRM3 se preparó al disolver IRM3 en DMSO a una concentración de 10 mg/ml . Ovalbumina se disolvió en PBS a una concentración de 50 mg/ml. 50 µ? de la solución de extracto IRM3 se adicionó a 150 µ? de PBS y luego se mezcló mediante la formación de vórtice. 50 µL de la ovalbumina se adicionó a la solución de " IRM3 y se mezcló mediante la formación de vórtice. Resultó una suspensión coloidal turbia de IRM3 y ovalbúmina. Los ratones se inmunizaron en el Día 0 subcutáneamente como es descrito en el Ejemplo 2 con ya sea (a) ovalbúmina sola o (b) 50 µ? de la suspensión coloidal de ovalbúmina e IEM3. En el día 6, los ganglios linfáticos drenando se retiraron, se homogenizaron y se mancharon con el tetrámero H-2Kb/SIINFEKL para identificar las células T especificas de ovalbúmina. La Figura 15 muestra los datos de citometría de flujo de un ratón de control inmunizado con ovalbúmina sola; las Figuras 16 y 17 muestran datos de dos diferentes ratones que se. inmunizaron con la suspensión coloidal . Ejemplo 12 Un conjugado de IRM2 y ovalbúmina se preparó como es descrito en el Ejemplo 1, excepto que IRM2 se usó en lugar de I M1. Veinticuatro ratones se dividieron en ocho grupos de tres. Cuatro grupos de tres ratones se inmunizaron subcutáneamente como es descrito en el Ejemplo 2 en el Dia 0, con cada grupo que recibe cantidades incrementadas de conjugado de IRMl-ovalbúmina. Los cuatro grupos restantes se inmunizaron de manera similar en el Dia 0 con el conjugado de IRM2-ovalbúmina. En el dia 6, los ratones se sacrificaron y los ganglios linfáticos drenando se retiraron y se mancharon con el tetrámero H-2Kb/SIINFEKL para identificar las células T especificas de ovalbúmina . El porcentaje de células T especificas de ovalbúmina se calculó para cada ratón. La Figura 18 resume los resultados. Ejemplo 13 Ratones se transfirieron adoptivamente con aproximadamente 2 x 106 células T transgénicas especificas de ovalbúmina 0T1 (The Jackson Laboratory, Bar Harbor, Maine) . Ratones se inmunizaron subcutáneamente en el Día 9 como es descrito en el Ejemplo 2 con ya sea (a) 100 ig ovalbúmina, (b) 100 ig de ovalbúmina + 50 µg de CpG (Ova+CpG, (c) 100 ]ig de ovalbúmina + 50 ygde IRMl no emparejado (Ova x IRM) , o (d) 100 µgde ovalbúmina conjugada con 50 ]iq de IRMl (Ova x IRM) . En el dia 5, los ganglios linfáticos drenando se removieron y las células se mancharon con el tetrámero H-2Kb/SIINFEKL para identificar las células R especificas de ovalbúmina. La Figura 19 muestra la expansión plegada de las células T especificas de - ovalbúmina en los grupos Ova+CpG + CpG, Ova + IRM y Ova x IRM sobre los ratones inmunizados con albúmina sola. Las descripciones completas de las patentes, documentos de patente y publicaciones citadas en la presente son incorporadas por referencia en su totalidad como si cada una se incorporara individualmente. En caso de conflicto, la presente especificación, incluyendo las definiciones, lo controlará.

Varias modificaciones y alteraciones de esta invención llegarán a ser evidentes para aquellos expertos en la técnica sin apartarse del alcance y espíritu de esta invención. Las modalidades ilustrativas y los ejemplos se proporcionan como ejemplos solamente y no se proponen para limitar el alcance de la presente invención. El alcance de la invención está limitado solamente por las reivindicaciones expuestas como sigue.

Claims (49)

1. REIVINDICACIONES 1. Una composición inmunoestimuladora, caracterizada porque comprende: una porción de modificador de respuesta inmune emparejada con una porción antigénica.
2. 2. La composición inmunoestimuladora de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la porción de modificador de respuesta inmune es un agonista del receptor similar a Toll 2, receptor similar a Toll 4, receptor similar a Toll 6, receptor similar a Toll 7 o receptor similar a Toll 8.
3. 3. La composición inmunoestimuladora de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la porción de modificador de respuesta inmune comprende una imidazoquinolina amina; una tetrahidroimidazoquinolina amina; una imidazopiridina amina; una imidazopiridina amina sustituida con aril éter; una imidazoquinolina amina con puente 1,2; una cicloalquilimidazopiridina amina 6,7-fusionada; una imidazonaftiridina amina; una tetrahidroimidazonaftiridina amina; una oxazoloquinolina amina; una tiazoloquinolina amina; una oxazolopiridina amina; una tiazolopiridina amina; una oxazolonaftiridina amina; o una tiazolonaftiridina amina.
4. 4. La composición inmunoestimuladora de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la porción de modificador de respuesta inmune comprende una porción orgánica que tiene un peso molecular de menos de aproximadamente 1000 Daltons .
5. 5. La composición inmunoestimuladora de .conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la porción de modificador de respuesta inmune y la porción antigénica son acopladas covalentemente .
6. 6. La composición inmunoestimuladora de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la porción de modificador de respuesta inmune y la porción antigénica son emparejadas por una asociación física o química diferente al acoplamiento covalente que limita la difusión independiente de la porción de modificador de respuesta inmune con respecto a la porción antigénica.
7. 7. La composición inmunoestimuladora de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la composición comprende una suspensión coloidal.
8. 8. La composición inmunoestimuladora de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la porción antigénica comprende una secuencia de aminoácidos, una secuencia de nucleótidos, un lipopolisacárido, un prión, una bacteria, un virus o un hongo.
9. 9. La composición inmunoestimuladora de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada porque la secuencia de aminoácidos es un polipéptido.
10. 10. La composición inmunoestimuladora de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el polipéptido es una proteina.
11. 11. La composición inmunoestimuladora de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque la porción de modificador de respuesta inmune es un compuesto de la fórmula: Ri es un grupo enlazador; R2 es seleccionado del grupo que consiste -hidrógeno; -alquilo; -alquenilo; -arilo; -arilo sustituido; -heteroarilo ; -heteroarilo sustituido; -alquil-O-alquilo; -alquil-S-alquilo; -alquil-O-arilo; -alquil-S-arilo; -alquil-O-alquenilo; -alquil-S-alquenilo; y -alquilo o alquenilo sustituido por uno o más 5 sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de: -OH; -halógeno; -N(R5)2; 10 -CO-N(R5)2; -CS-N(R5)2; -S02-N(R5)2; -NR5-CO-alquilo de Ca_i0; -NR5-CS-alquilo de Ca_i0 15 -NR5-S02-alquilo de Ci_i0; -CO-alquilo de Ci-io; -CO-O-alquilo de Cx-ld; -N3; -arilo; 20 -arilo sustituido; -heteroarilo; -heteroarilo sustituido; -heterociclilo; -heterociclilo sustituido; 25 -CO-arilo; -CO- (arilo sustituido) ; -CO-heteroarilo; y -CO- (heteroarilo sustituido) ; R son cada uno independientemente; -hidrógeno; -halógeno; -alquilo; -alquenilo; -O-alquilo; -S-alquilo; y -N(RS)2; o cuando se toman conjuntamente, R3 y F forman un grupo arilo o heteroarilo fusionado que está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de: -halógeno; -alquilo; -alquenilo; -O-alquilo; -S-álquilo; y -N(R5)2; o cuando se toman conjuntamente, R3 y R4 forman un anillo saturado de 5 a 7 miembros fusionado-, que opcionalmente contiene uno o más heteroátomos y opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de: -halógeno; -alquilo; -alquenilo; -O-alquilo; -S-alquilo; y -N(R5)2; y cada R5 es independientemente hidrógeno o alquilo
12. 12. Un conjugado inmunoestimulador de la fórmula: en donde: i es un grupo enlazador; R2 es seleccionado del grupo que consiste de: -hidrógeno; -alquilo; -alquenilo; -arilo; -arilo sustituido; -heteroarilo; - eteroarilo sustituido; -alquil-O-alquilo; 5 -alquil-S-alquilo; -alquil-O-arilo; -alquil-S-arilo; -alquil-O-alquenilo; -alquil-S-alquenilo; y 10 -alquilo o alquenilo sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de: -OH; -halógeno; 15 -?(¾)2; -CO-N(R5)2; -CS-N(R5)2; -SO2-N(R5)2; -NRs-CO-alquilo de C1-10; 20 -NR5-CS-alquilo de Ci_i0; -NR5-S02-alquilo de Ci_i0; -CO-alquilo de Ci_10; -CO-O-alquilo de Ci_10; -N3; 25 -arilo; -arilo sustituido; -heteroarilo; -heteroarilo sustituido; -heterociclilo; 5 -heterociclilo sustituido; -CO-arilo; -C0- (arilo sustituido) ; -CO-heteroarilo; y -CO- (heteroarilo sustituido) ; 10 R3 y j son cada uno independientemente; -hidrógeno; -halógeno; -alquilo; -alquenilo; 15 -0-alquilo; -S-alquilo; y -N(R5)2; o cuando se toman conjuntamente, R3 y R4 forman un grupo arilo o heteroarilo fusionado que 20 está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de: -halógeno; -alquilo; 25 -alquenilo;
13. -O-alquilo; -S-alquilo y -N(R5)2; o cuando se toman con untamente, R3 y R4 forman un anillo saturado de 5 a 7 miembros fusionado, que opcionalmente contiene uno o más heteroátomos y opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de: -halógeno; -alquilo; -alquenilo; -O-alquilo; -S-alquilo; y -N(R5)2; cada R5 es independientemente hidrógeno o alquilo de C1-10 y n es 1 a 10; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 13. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque R2 es seleccionado del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo y alquil-O-alquilo .
14. 14. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque R2 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, metilo, etilo, propilo, butilo, ciclopropilmetilo, etoximetilo y metoxietilo .
15. 15. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque R3 y R4 se toman conjuntamente para formar un anillo de benceno.
16. 16. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque R3 y R4 se toman conjuntamente para formar un anillo de piridina.
17. 17. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque R3 y R4 se toman conjuntamente para formar un anillo saturado de 6 miembros.
18. 18. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque R3 y R4 se toman conjuntamente para formar un anillo saturado de 6 miembros que contiene un átomo de nitrógeno.
19. 19. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque R3 y R se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno y alquilo.
20. 20. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque Ri tiene la fórmula : en donde X· es un grupo alquileno opcionalmente interrumpido por uno o más de : -0-; -S(0)0-2- -N(R5)-C(0)- -N (R5)-S(02)-; -N (R5) -C(0)-N(R5)-; -N(R5)-C(S)-N(R5)-; y -C(0)-N(RS)-; Y es un enlace o se selecciona del grupo que consiste de: -N(Rs)-; -N(R5)-C(0)-; -N(R5) -C (O)-ciclohexilo; -N (R5) -C (0) -fenileno-; y -fenileno- ; Z es el grupo de enlace divalente que se forma cuando el grupo reactivo ZA se acopla covalen emente al antígeno; ZA es un grupo reactivo que reacciona con el antigeno para formar un enlace covalente; y cada R5 es independientemente hidrógeno o alquilo de Ci_io.
21. 21. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque ZA es un grupo que reacciona con aminas primarias.
22. 22. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 21, caracterizado porque ZA es un éster de N-hidroxisuccinimida o un éster de N-hidroxisulfosuccinimida .
23. 23. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque ZA es un grupo que reacciona con un grupo sulfhidrilo.
24. 24. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque ZA es una maleimida o un grupo yodoacetilo.
25. 25. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque ZA es un grupo fotorreactivo .
26. 26. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque ZA es una fenil azida.
27. 27. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque ZA se selecciona del grupo que consiste de 4-azidofenilo, 2-hidroxi-4-azidofenilo, 2-nitro-4-azidofenilo y 2-nitro-3-azidofenilo .
28. 28. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 20, caracterizado porque selecciona del grupo que consiste de: -C(0)-; -C(0)-CH2-; en donde R es hidrógeno, hidroxi o nitro,
29. 29. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el" antígeno comprende una secuencia de aminoácidos, una secuencia de nucleótidos o un lipopolisacárido.
30. 30. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado porque la secuencia de aminoácidos es un polipéptido.
31. 31. El conjugado inmunoestimulador de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque el polipéptido es una proteina.
32. 32. Un compuesto de la fórmula: caracterizado porque: X es un grupo alquileno opcionalmente interrumpido por uno o más de : -0-; -N(R5)-; -N(R5)-C(0)- -N(Rs)-S (02)-; -N(R5)-C(0)-N(R5)-; -N(R5)-C(S)-N(R5)-; y -C(0)-N(R5)-; Y es un enlace o se selecciona del grupo que consiste de: -N(Rs)-; -N(Rs)-C(0)-; -N (R5) -C (O) -ciclohexilo-; -N(R5)-C(0)-fenileno-; y -fenileno-; ZA es un grupo reactivo que reacciona con el antigeno para formar un enlace covalente; R2 es seleccionado del grupo que consiste de: -hidrógeno; -alquilo; -alquenilo; -arilo; -arilo sustituido; - eteroarilo; -heteroarilo sustituido; -alquil-O-alquilo; 5 -alquil-S-alquilo; -alquil-O-arilo; -alquil-S-arilo; -alquil-O-alquenilo; -alquil-S-alquenilo; y 10 -alquilo o alquenilo sustituido por uno o más sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste de: -OH; -halógeno; 15 -N(R5)2; -CO-N(R5)2; -CS-N(R5)2; -S02-N(R5)2; -NR5-CO-alquilo de Ci_i0 ; 20 -NR5-CS-alquilo de Ci_i0; -NR5-S02-alquilo de QL-IO; -CO-alquilo de Ci_io ; -CO-O-alquilo de Ci-io ; -N3; 25 -arilo; -arilo sustituido; -heteroarilo; -heteroarilo sustituido; -heterociclilo; -heterociclilo sustituido; -CO-arilo; -C0- (arilo sustituido) ; -CO-heteroarilo; y -CO- (heteroarilo sustituido) ; R3 y 1¾ son cada uno independientemente; -hidrógeno; -halógeno; -alquilo; -alquenilo; -0-alquilo; -S-alquilo; y -N(R5)2 o cuando se toman conjuntamente, R3 y R4 forman un grupo arilo o heteroarilo fusionado que está opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de: -halógeno; -alquilo; - -alquenilo; -O-alquilo; -S-alquilo; y -N(R5)2; o cuando se toman conjuntamente, R3 y FU forman un anillo saturado de 5 a 7 miembros fusionado, que opcionalmente contiene uno o más heteroátomos y opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de: -halógeno; -alquilo; -alquenilo; -O-alquilo; -S-alquilo; y -N(Rs)2; cada R5 es independientemente hidrógeno o alquilo de Ci-io; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
33. 33. Un método para estimular células T de un paciente, el método caracterizado porque comprende: a) proporcionar una composición inmunoestimuladora que comprende una porción de modificador de respuesta inmune emparejada con una porción antigénica; b) permitir que la composición inmunoestimuladora enlace a las células que presentan antigeno, para de esta manera activar las células que presentan antigeno: y c) permitir que las células que presentan antigeno activadas estimulen las células T del paciente.
34. 34. El método de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque la porción de modificador de respuesta inmune es un agonista del receptor similar a Toll 2, receptor similar a Toll 4, receptor similar a Toll 6, receptor similar a Toll 7 o receptor similar a Toll 8.
35. 35. El método de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque la porción de modificador de respuesta inmune comprende una imidazoquinolina amina; una tetra idroimidazoquinolina amina; una imidazopiridina amina; una imidazopiridina amina sustituida con aril éter; una imidazoquinolina amina con puente 1,2; una cicloalquilimidazopiridina amina 6, 7-fusionada; una imidazonaftiridina amina; una tetrahidroimidazonaftiridina amina; una oxazoloquinolina amina; una tiazoloquinolina amina; una oxazolopiridina amina; una tiazolopiridina amina; una oxazolonaftiridina amina; o una tiazolonaftiridina amina.
36. 36. El método de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque la porción de modificador de respuesta inmune y la porción antigénica son acopladas covalentemente .
37. 37. El método de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque la porción de modificador de respuesta inmune y la porción antigénica son emparejadas por una asociación física o química diferente al acoplamiento covalente que limita la difusión independiente de la porción de modificador de respuesta inmune con respecto a la porción antigénica.
38. 38. El método de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque la composición inmunoestimuladora comprende una suspensión coloidal .
39. 39. El método de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque la composición inmunoestimuladora se permite que enlace a las células que presentan antígeno in vi tro.
40. 40. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque la etapa de permitir que la composición inmunoestimuladora enlace a las células que presentan antígeno comprende: a) proporcionar un cultivo de células que comprende células que presentan antígeno; y b) poner en contacto una cantidad de la composición inmunoestimuladora efectiva para estimular las células que presentan antígeno con el cultivo de células.
41. 41. El método de conformidad con la reivindicación 39, caracterizado porque la etapa de permitir que las células que presentan antígeno activadas estimulen las células T del paciente comprende inyectar las células que presenta antígeno activadas en el paciente.
42. 42. El método de conformidad con la reivindicación 33, caracterizado porque la composición inmunoestimuladora se permite que enlace a las células que presentan antigeno In vivo.
43. 43. El método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque la etapa de permitir que la composición inmunoestimuladora enlace a las células que presentan antigeno comprende: a) proporcionar la composición inmunoestimuladora como un componente de una vacuna; y b) vacunar al paciente con la vacuna.
44. 44. El método de conformidad con la reivindicación 42, caracterizado porque la composición inmunoestimuladora comprende una porción antigénica especifica de tumor.
45. 45. Un método para estimular células que producen anticuerpo, el método caracterizado porque comprende: a) proporcionar una composición inmunoestimuladora que comprende una porción de modificador de respuesta inmune emparejada con una porción antigénica; b) permitir que la composición inmunoestimuladora enlace a las células que presentan anticuerpo.
46. 46. El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque la porción de modificador de respuesta inmune comprende un agonista del receptor similar a Toll 2, receptor similar a Toll 4, receptor similar a Toll 6, receptor similar a Toll 7 o receptor similar a Toll 8.
47. 47. El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque la porción de modificador de respuesta inmune comprende una imidazoquinolina amina; una tetrahidroimidazoquinolina amina; una imidazopiridina amina; una imidazopiridina amina sustituida con aril éter; una imidazoquinolina amina con puente . 1/2; una cicloalquilimidazopiridina amina 6, 7-fusionada; una imidazonaftiridina amina; una tetrahidroimidazonaf iridina amina; uña oxazoloquinolina amina; una tiazoloquinolina amina; una oxazolopiridina amina; una tiazolopiridina amina; una oxazolonaftiridina amina; o una tiazolonaftiridina amina.
48. 48. El método de conformidad con la reivindicación 45, .caracterizado porque la porción de modificador de respuesta inmune y la porción antigénica están acopladas covalentemente .
49. 49. El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque la porción de modificador de respuesta inmune y la porción antigénica son emparejadas por una asociación física o química diferente al acoplamiento covalente que limita la difusión independiente de la porción de modificador de respuesta inmune con respecto a la porción antigénica. 50 El método de conformidad con la reivindicación-49, caracterizado porque la composición inmunoestimuladora comprende una suspensión coloidal. 51. El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque la composición inmunoestimuladora se permite que enlace a las células que producen anticuerpo in vivo. 52. El método de conformidad con la reivindicación 51, caracterizado porque la etapa de permitir que la composición inmunoestimuladora enlace a las células que presentan antigeno comprende: a) proporcionar la composición inmunoestimuladora como un componente de una vacuna; y b) introducir la vacuna en un paciente que tiene células que producen anticuerpo. 53. El método de conformidad con la reivindicación 51, caracterizado porque la composición inmunoestimuladora comprende una porción antigénica específica de tumor. 54. El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque la composición inmunoestimuladora se permite que enlace a las células que presentan antígeno in vitro. 55. El método de conformidad con la reivindicación 54, caracterizado porque la etapa de permitir que la composición inmunoestimuladora enlace a las células que presentan antígeno comprende: a) proporcionar un cultivo de células que comprende células que presentan antigeno; y b) poner en contacto el cultivo de células con una cantidad de la composición inmunoestimuladora efectiva para estimular las células que producen anticuerpo. 56. El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque además comprende recolectar anticuerpos producidos por las células que producen anticuerpo estimuladas . 57. El compuesto 1- (2-amino-2-metilpropil) -2- (etoximetil) -IH-imidazo [4, 5-c] quinolin-4-amina, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. 58. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto o sal de la reivindicación 57.