MXPA04011227A

MXPA04011227A - Metodos y composiciones para el tratamiento de la reperfusion isquemica.

Info

Publication number: MXPA04011227A
Application number: MXPA04011227A
Authority: MX
Inventors: L Bisgaier Charles
Original assignee: Esperion Therapeutics Inc
Priority date: 2002-05-17
Filing date: 2003-05-16
Publication date: 2005-01-25
Also published as: JP2006502976A; US20040038891A1; CA2485989A1; KR20050010006A; EP1556413A1; CN1668645A; WO2003097696A1; BR0310100A; EP1556413A4; NZ537006A; AU2003234625A1; IL165253A0; PL374126A1

Abstract

La invencion proporciona metodos y composiciones para el tratamiento o prevencion del dano por reperfusion isquemica. Los metodos de la presente invencion comprenden la administracion de composiciones que comprenden apolipoproteinas, lecitina-colesterol-aciltransferasa o paraoxo para tratar, reducir o prevenir el dano por reperfusion isquemica.

Description

MÉTODOS Y COMPOSICIONES PARA EL TRATAMIENTO DE LA REPERFUSION ISQUÉMICA 1. CAMPO TÉCNICO La invención proporciona métodos para tratar, reducir o prevenir los daños por reperfusión isquémica con composiciones que comprenden apolipoproteínas o agonistas de apolipoproteína . 2. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La isquemia seguida por reperfusión es la causa principal de daños esqueléticos y del músculo cardiaco en mamíferos. La isquemia es causada por una reducción en el oxígeno suministrado a los tejidos u órganos como resultado de un flujo sanguíneo reducido y puede llevar a la disfunción de los órganos. El suministro reducido de sangre puede resultar de la oclusión de la diversión de sangre debida a la trombosis vascular, tal como infarto al miocardio, estenosis, daño vascular accidental, o procedimientos quirúrgicos. El restablecimiento subsecuente de un suministro adecuado de sangre oxigenada al tejido puede resultar en un daño incrementado, un proceso conocido como daño por reperfusión isquémica o daño por reperfusión de oclusión. Las complicaciones que surgen del daño por reperfusión isquémica incluyen apoplejía, infarto al miocardio fatal o no fatal, remodelación del miocárdica, aneurismas, enfermedad vascular periférica, necrosis nerviosas, falla de los ríñones, y perdida post -quirúrgica del tono muscular. La isquemia puede resultar secundaria a los eventos oclusivos que incluyen la estenosis o trombosis. La estenosis puede resultar debido a una condición médica tal como aterosclerosis o inducida durante un procedimiento quirúrgico. Por ejemplo, los procedimientos quirúrgicos (cirugías de rodilla, manos, cadera y hombros), el transplante de tejidos, los procedimientos cardiacos ¦ incluyendo injerto de derivación arterias coronarias (CABG) y angioplastia coronaria transluminal percutánea (PTCA) pueden todas reducir o detener el flujo sanguíneo e inducir y establecer el escenario para daño por reperfusión. Además, el tejido y los órganos recolectado del donador son también susceptibles de daño por reperfusión mientras están en transito y enseguida del transplante en un receptor. Se considera que los radicales libres de oxígeno son componentes importantes involucrados en la patof isiología de la reperfusión isquémica. (Ver, Banerjee et al., 2002, BMC Pharmacol . 2(1) :16; Demir e Inal-Erden 1998, Clin. Chim. Acta 275(2) : 127-35; Fakuzawa et al., 1995, Transplantation 58(1) :6-9; Sewerynek et al., 1996, Hepatogastroenterology 43 (10) : 898-905; Serteser et al., 2002, J. Surg . Res. 107(2) 234-40) . En los modelos animales, ha sido demostrado que las especies reactivas con el oxígeno están involucradas en las daño por reperfusión a una variedad de tejidos y órganos, incluyendo los ríñones, el cerebro, hígado y corazón. (Sener et al., 2002, J. Pineal Res. 32 (2 ) : 120 -6 ; Sener et al., 2003, Life Sci. 72 (24) =2707-18; Ding-Zhou et al., 2003, J. Pharmacol . Exp . Ther. [e-publícación previo a la impresión del 2 de mayo del 2003 ] PMID : 12730357 ; Katamaya et al., 1997, Tokai J. Exp. Clin. Med. 22 (2 ) : 33 -44 ; Grech et al., 1996, Am. J. Cardiol . 77 (2) : 122-7) . En los humanos, se piensa que las especies reactivas con el oxígeno también median las daño por reperfusión isquémica. La enzima xantina oxidasa es responsable de la liberación de radicales libres de oxígeno durante la reperfusión miocárdiea (Ver, Guan et al., 1999, Jpn. Cir. J. 63 ( 12 ) : 924 - 8 ) . El pretratamiento con alopurinol, un inhibidor de la xantina oxidasa, para los pacientes que experimentan cirugía de las arterias coronarias o PTCA después del infarto al miocardio, proporciona una salud cardiaca mejorada. Por ejemplo, los pacientes pretratados con alopurinol mostraron episodios decrecientes de arritmia y función del ventrículo izquierdo mejorada cuando se comparan con el grupo de control (Bochenek et al., 1990, Eur . J. Cardiothorac . Surg . 4 ( 10 ) : 538 -42 ; Guan et al., J. Cardiovas. Pharmacol . 41 (5) : 699-705) . Las daño por isquemia pueden ocurrir también debido a la liberación de citosinas pro- inflamatorias , quimiocinas y otros mediadores tales como el factor de necrosis de tumores, interleucinas e interferonas de células epiteliales y endoteliales (Furuicha et al., 2002, Drug News Perspect . 15 (8) :477-82 ; Donnahoo et al., 1999, J. Urol . 162 (1) : 196-203 ; Yoshimoto et al., 1997, Acta Neuropathol . (Berl) 93(2); 154-8; Sung et al., 2002, Kidney Int. 62 (4) : 1160- 7 ; Maekawa et al., 2002, J. Am. Coll . Cardiol . 39 (7) : 1229-35) . La liberación de citocinas, a su vez, atrae una multitud de células tales como leucocitos, incluyendo neutrófilos, monocitos y macrófagos los cuales contribuyen a una cascada inflamatoria (Taub 1996, Cytokine Growth Factor Rev. 7 (4) : 355-76 ; Krishnadasan et al., 2003, J. Thorac . Cardiovasc . Surg . 125(2) :261; Krishnaswamy et al., 1999, J. Interferon Cytokine Res. 19 (2 ) : 91 - 104 ; Sener et al., 2003, Life Sci . 73(1) .-81-91; Yue et al., 2001, Circulation 104 (21) : 2588-94) . Se ha estudiado una variedad de fármacos como agentes potencialmente efectivos en el tratamiento o prevención de daño por reperfusión isquémica, incluyendo, pentoxifilina, N-acetilcisteina, ajo, melatonina, vitamina C y BN 80993 (un inhibidor de la óxido nítrico sintasa neuronal y antioxidante) con éxito limitado (Demir e Inal-Erden 1998, Clin. Chim. Acta 275 (2) : 127-35) ; Banerjee et al., 2002, BMC Pharmacol . 2(1) :16; Fukuzawa et al . , 1995, Transplantation 58(1) :6-9; Sener et al., 2002, J. Pineal Res. 32 (2) : 120-6; Ding-Zhou et al., 2003, J. Pharmacol. Exp. Ther. [e-publicación antes del 2 de mayo del 2003]PMID: 12730357; Guan et al., 1999, Jpn . Cir. J. 63 (12) : 924-8) . La terapia actual para la isquemia se enfoca en restablecer el flujo sanguíneo tan rápido como sea posible. El tratamiento rápido, por ejemplo, enseguida del infarto al miocardio agudo (AMI) , es vital para prevenir lesiones a largo plazo. El tratamiento trombolítico más de 24 horas después del ataque de AMI no mejora el resultado clínico. El uso de PTCA para revascularizar después del AMI permanece controversial pero los estudios indican que la PCTA llevada a cabo en el lapso de 24 horas después del AMI es benéfico. Los beneficios notados incluyen, por ejemplo, prevenir la remodelación del ventrículo izquierdo, disminuir la remodelación del ventrículo izquierdo y los aneurismas, mejorar el movimiento de la pared del ventrículo izquierdo y disminuir los eventos cardiacos durante un periodo de 5 años después de la AMI . (Kanamasa et al., 2000, J. Thromb. Thrombolysis 9(1) :47-51; Kanamasa et al., 1996, J. Cardiol. 28 (4) : 199-205 ; Horie et al., 1998, Circulation 98 (22) : 2377-82 ; Kanamasa et al., 2000, Angiology 51 (4) :281-8) .

Aunque a terapia trombolítica y la PTCA se usan para la reperfusión ambas tienen desventajas significativas. Por ejemplo, la terapia trombolítica está contraindicada en pacientes con sangrado interno activo, una historia de accidentes cerebro vasculares, cirugía intracraneal o intraespinal o trauma, malformaciones arteriovenosas o aneurismas, neoplasma intracraneal, diátesis sangrante e hipertensión descontrolada severa (Drug Facts and Comparisons, actualizada mensualmente , Enero 2003, Facts and Comparisons, Wolter Kluwer Company., St Louis, MO) . La PCTA es un procedimiento invasivo y lleva su propio grupo de riesgos incluyendo, muerte, infarto al miocardio y apoplejía, y está contraindicada relativamente en pacientes con pobre salud cardiaca preexistente y coagulopatias (The Merck Manual, i7ava Ed. (Beers y Berkow, Eds . ) Merck Research Laboratoires>, Whitehouse Station, N.J., 1999, p. 1628-9). Aún cuando las terapias trombolíticas o la PCTA pueden ser usadas en un paciente en necesidad de reperfusión, ninguna de las dos actúa para tratar o prevenir las daño por reperfusión isquémica. Son necesarios nuevos métodos y composiciones para tratar o mejorar los síntomas de las daño por reperfusión isquémica. 3. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN por consiguiente, la invención proporciona métodos y composiciones para tratar, reducir o prevenir el daño por reperfusión isquémica. Los métodos se proporcionan para tratar, reducir o prevenir daño por reperfusión isquémica usando composiciones que comprenden apolipoproteínas , lecitina colesterol acil transferasa o paraoxonasa. Los métodos de la presente invención comprenden la administración de agentes contra daño por reperfusión isquémica de la invención. Sorprendentemente, se ha descubierto que la administración de agentes contra daño por reperfusión isquémica pueden tratar, reducir o proteger a un individuo contra daño por reperfusión isquémica . En un aspecto, la presente invención proporciona métodos para tratar, reducir o prevenir daño por reperfusión isquémica mediante la administración de una cantidad efectiva de un agente contra el daño por reperfusión isquémica. En ciertas modalidades de la invención, . El agente puede ser una apolipoproteína, lecitina colesterol aciltransferasa o paraoxonasa. En modalidades particulares, el agente contra la reperfusión isquémica es una apolipoproteína. La apolipoproteína puede ser cualquier apolipoproteína incluyendo, por ejemplo, apolipoproteína A-I o una variante o fragmento de la misma. En ciertas modalidades la apolipoproteínas es una apolipoproteína que contiene tiol. En modalidades preferidas de la invención, la apolipoproteínas es la apolipoproteína A-I Milano (ApoA-IM) . En ciertas modalidades, el agente contra reperfusión isquémica puede ser administrado en forma de un complejo que comprende una apolipoproteína y un lípido. Preferiblemente, el lípido es un fosfolípido. El fosfolípido puede ser cualquier fosfolípido conocido por aquellas personas con experiencia en la técnica. En las modalidades preferidas de la invención, el fosfolípido puede ser fosfatidilcolina o un derivado o análogo de la misma tal como l-palmitoíl-2-oleoil fosfatidilcolina . Los métodos y composiciones de la invención pueden ser útiles en cualquier contexto donde pudieran ser útiles el tratamiento, reducción o protección del daño por reperfusión isquémica. En ciertas modalidades, los métodos y composiciones de la invención pueden proteger los músculos u órganos tales como, por ejemplo, el corazón, hígado, ríñones, cerebro, pulmones, baso y órganos esteroidogenicos (por ejemplo, la tiroides, glándulas suprarrenales y gónadas) del daño como resultado de daño por reperfusión isquémica. En ciertas modalidades, los métodos y composiciones de la invención pueden proteger los tejidos, músculos u órganos durante la recolección de transplantes, el transito e implantación en un receptor de transplantes. 4. DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La FIG. 1 proporciona un diagrama de dos cadenas de apol ipoproteína A-I Milano; La FIG. 2 proporciona un diagrama de un Aparato de Langendorff para tratar ex vivo y monitorear la función cardiaca en el corazón aislado de un conejo; La FIG. 3 proporciona una vista más cercana del corazón montado en el Aparato de Langerdorff; La FIG. 4 proporciona un ejemplo de un protocolo en donde los corazones aislados se trataron con vehículo o ETC-216 antes del ataque de isquemia; La Fig. 5 proporciona la actividad de la creatina cinasa en el efluente de las venas coronarias; La FIG. 6 proporciona el monitoreo en tiempo real de la función cardiaca colectada de un corazón de conejo aislado tratado con vehículo y ETC-216 en el Aparato de Langendorff; La FIG. 7 proporciona los cambios temporales en la presión desarrollada por el ventrículo izquierdo (LVDP) en corazones de conejo aislados, antes, durante y después de 30 minutos de arresto isquémico global y 60 minutos de la reperfusión; La FIG. 8 proporciona los cambios temporales en la presión diastólica final del ventrículo izquierdo (LVEDP) en corazones de conejo aislados, antes, durante y después de 30 minutos del arresto global isquémico y 60 minutos de la reperfusión ; La FIG. 9 proporciona los cambios temporales en la presión de perfusión coronaria (CPP) en corazones de conejo aislados, antes, durante y después de 30 minutos de arresto de isquemia global y 60 minutos de la reperfusión; La FIG. 10 proporciona el contenido de hidroperoxido de lípido en homogeneizados de tejido de los corazones de conejo tratados con vehículo y ETC-216 sometidos al arresto isquémico global por 30 minutos seguidos por reperfusión de 60 minutos; La FIG. 11 proporciona imágenes de microscopía electrónica de muestras de músculo cardiaco de corazones de conejo tratados con vehículo y ETC-216; La FIG. 12 proporciona un protocolo adicional de la presente invención en donde se administró un pretratamiento antes del ataque de isquémica en el grupo de administración aguda y dos pretratamientos se administraron antes del ataque de isquemia en el grupo de administración crónica; La FIG. 13 proporciona un protocolo para la determinación del tamaño del infarto; La Fig . 14 proporciona el por ciento de infarto del área de riesgo, el por ciento de infarto del ventrículo izquierdo, y el área en el por ciento de riesgo del ventrículo izquierdo en conejos tratados una vez (es decir, el tratamiento agudo) o tratados dos veces (es decir, el tratamiento crónico) con ETC-216 (100 mg/kg) o un volumen equivalente del vehículo; La Fig. 15 proporciona un protocolo adicional de la presente invención en donde los conejos se pretrataron antes del ataque de isquemia ya sea con vehículo (Grupo 1) o 10, 3 o 1 mg/kg de ETC-216 (grupo 2) ; La FIG. 16 proporciona el por ciento de infarto del área de riesgo, el por ciento de infarto del ventrículo izquierdo, y el por ciento de área de riesgo del ventrículo izquierdo determinado en conejos tratados una vez (es decir, el tratamiento agudo) con 10, 3 o 1 mg/kg de ETC-216 o con un volumen equivalente de vehículo de sucrosa-manitol por cada grupo ; La FIG. 17 proporciona los cambios temporales en el colesterol no esterificado de lipoproteína ; La FIG. 18 proporciona un protocolo adicional de la presente invención en donde un sólo tratamiento del vehículo o ETC-216 se administró durante los últimos 5 minutos del periodo isquémico de 30 minutos; y La FIG. 19 proporciona el por ciento de infarto del área en riesgo; el por ciento de infarto del ventrículo izquierdo, y el por ciento de área en riesgo del ventrículo izquierdo, determinados en conejos. 5. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La invención proporciona métodos para tratar, reducir o prevenir el daño por reperfusión isquémica con un agente contra daño por reperfusión isquémica. El agente puede ser cualquier agente contra daño por reperfusión isquémica representativo descrito aquí, incluyendo, por ejemplo, una apolipoproteínas , lecitina colesterol aciltransferasa o paraoxonasa . 5.1 Apolipoproteína En un aspecto, la presente invención proporciona métodos para el tratamiento, reducción o prevención de daño por reperfusión isquémica administrando una composición que comprende una apolipoproteína. Como se usa aquí, el término "apolipoproteínas" se refiere a las apolipoproteínas conocidas por aquellas personas con experiencia en la técnica y las variantes y fragmentos de las mismas y a agonistas de apolipoproteínas, análogos o fragmentos de los mismos descritos abajo. La apolipoproteínas puede ser cualquier apolipoproteínas que es efectiva para el tratamiento o prevención de daño por reperfusión isquémica. Las apolipoproteínas adecuadas incluyen, pero no se limitan a, ApoA-I, ApoA-II, ApoA-IV, ApoA-V y ApoE, y las formas polimorfitas, isoformas, variantes y mutantes así como fragmentos de formas truncadas de los mismos. En ciertas modalidades, la apolipoproteínas es una apolipoproteína que contiene tiol. "Apolipoproteínas que contiene tiol" se refiere a una apolipoproteínas, variante, fragmento o isoforma que contiene al menos un residuo de cisterna. Las apolipoproteínas que contienen tiol más comunes son la ApoA-I Milano (ApoA-IM) Y ApoA-I París (ApoA-IP) las cuales contienen un residuo de cisteína (Jia et al., 2002, Biochem. Biophys . Res. Comm. 297:2006-13; Bielicki y Oda, 2002, Biochemistry 41: 2089-96). ApoA-II, ApoE2 y ApoE3 son también apolipoproteínas que contienen tiol. En ciertas modalidades, la apolipoproteína no es una apolipoproteínas que contiene tiol, tal como ApoA-I. En ciertas modalidades la apolipoproteína puede estar en su forma madura, en su forma de preproapolipoproteínas o en forma de proapolipoproteínas . Los homo- y heterodímeros (donde sea factible) de la pro- y ApoA-I madura (Duvenger et al., 1996, Arterioscler . Thromb. Vasc. Biol . 16 (12) : 1424-29) , ApoA-I Milano (Klon et al., 2000 Biophys. J. 79 : (3 ) 1679-8 ; Franceschini et al., 1985, J. Biol. Chem. 260:1632-35) ApoA-I París (Daum et al., 1999, J. Mol. Med. 77:614-22), ApoA-II (Shelness et al., 1985 J. Biol. Chem. 260 ( 14 ) : 8637-46 ; Shelness et al., 1984, J. Biol. Chem. 259 (15) : 9929-35) ; ApoA-IV (Duvenger et al., 1991, Euro. J. Biochem. 2001 (2 ) : 373 -83 ) ; y ApoE (Malean et al., 1983, J. Biol. Chem. 258 ( 14 ) : 8993 - 9000 ) pueden ser utilizadas también dentro del ámbito de la invención . En ciertas modalidades, la apolipoproteína puede ser un fragmento, variante o isoforma de la apolipoproteína . El término "fragmento" se refiere a cualquier apolipoproteína que tiene una secuencia de aminoácido más corta que la de una apolipoproteína nativa y el cual fragmento retiene la actividad de la apolipoproteína nativa, incluyendo las propiedades de enlace de lípidos. Por "variante" se quiere decir substituciones o alteraciones en las secuencias de aminoácidos de la apolipoproteína, las cuales substituciones o alteraciones, por ejemplo, adiciones o eliminaciones de residuos de aminoácidos, no suprimen la actividad de la apolipoproteína nativa, incluyendo las propiedades de enlace de lípidos. Por lo tanto una variante puede comprender una proteínas o péptido que tiene una secuencia de aminoácido substancialmente idéntica a una apolipoproteína nativa proporcionada aquí en la cual uno o más residuos de aminoácidos han sido substituidos conservativamente con aminoácidos químicamente similares. Ejemplos de substituciones conservativas incluyen la substitución de al menos un residuo hidrofóbico tal como isoleucina, valina, leucina o metionina por otro. Del mismo modo, la presente invención contempla, por ejemplo, la substitución de la menos un residuo hidrofílico tal como, por ejemplo, entre arginina y lisina, entre glutamina y asparagina, y entre glicina y serina (ver, las Patentes Norteamericanas Nos. 6,004,925, 6,037,323 y 6,046,166). El término "isoforma" se refiere a una proteína que tiene la misma función, mayor o parcial y una secuencia similar o idéntica o parcial, y puede o puede no ser el producto del mismo gen y usualmente específica del tejido (ver eisgraber 1990, J. Lipid Res. 31 (8) : 1503-11; Hixson y Po ers 1991, J. Lipid Res. 32 (9) : 1529-35 ; Lackner et al., 1985 J. Biol . Chem. 260 (2 ) : 703 -6 ; Hoeg et al., 1986, J. Biol . Chem. 261 ( 9) : 3911-4 ; Gordon et al., 1984, J. Biol. Chem. 259(1) :468-74; Powell et al., 1987, Cell 50 (6) : 831-40 ; Aviram et al., 1998, Arterioscler . Thromb . Vasc . Biol. 18 (10) : 1617-24 ; Avira, et al., 1998, J. Clin. Invest . 10 (8 ): 1581- 90 ; Billecke et al., 2000, Drug Metab. Dispos. 28 (11) : 1335-42 ; Draganov et al., 2000 J. Biol. Chem. 275 (43 ) : 33435-42 ; Steinmetz y Utermann 1985, J. Biol. Chem. 260 (4 ) : 2258 - 64 ; Widler et al., 1980 J. Biol. Chem. 255 (21) : 10464-71 ; Dyer et al., 1995, J. Lipid Res. 36(l):80-8; Sacre et al., 2003, FEBS Lett . 540 ( 1 - 3 ) : 181 - 7 ; Weers, et al., 2003, Biophys. Chem. 100(1-3) :481- 92; Gong et al., 2002, J. Biol. Chem. 277 (33) : 29919-26 ; Ohta et al., 1984, J. Biol. Chem. 259 (23 ): 14888-93 y Patente Norteamericana No. 6,372,886). En ciertas modalidades, los métodos y composiciones de la presente invención incluyen el uso de una construcción quimérica de una apolipoproteína . Por ejemplo, una construcción quimérica de una apolipoproteína puede estar comprendida de un dominio de apolipoproteína con alta capacidad de enlace de lípidos asociada con un dominio de apolipoproteína que contiene propiedades protectoras contra reperfusión isquémica. Una construcción quimérica de una apolipoproteína puede ser una construcción que incluye regiones separadas dentro de una apolipoproteína (es decir, una construcción homologa) o una construcción quimérica puede ser una construcción que incluye regiones separadas entre diferentes apolipoproteínas (es decir, construcciones heterologas) . Las composiciones que comprenden una construcción quimérica pueden incluir también segmentos que son variantes o segmentos de apolipoproteína diseñados para tener un carácter específico (por ejemplo, propiedades de enlace de lípidos, enlace del receptor, enzimático, de activación de encimas, antioxidantes o de oxidación-reducción) (ver eisgraber 1990, J. Lipid Res. 31 (8) : 1503-11.-; Hixson y Powers 1991, J. Lipid Res. 32 (9) : 1529-35 ; Lackner et al., 1985, J. Biol. Chem. 260 (2 ) : 703-6 ; Hoeg et al., 1986, J. Biol . Chem. 261 ( 9) : 3911 -4 ; Gordon et al., 1984, J. Biol. Chem. 259 (1) :468-74; Powell et al., 1987, Cell 50 (6) : 831-40 ; Aviram et al., 1998, Arterioscler . Thromb. Vasc. Biol. 18(10) :1617-24; Aviram et al., 1998, J. Clin. Invest . 101 (8) : 1518-90; Billecke et al., 2000 Drug Metab. Dispos. 28 (11) : 1332-42 ; Draganov et al., 2000, J. Biol. Chem. 275 (43 ) : 33435-42 ; Steinmetz y Utermann 1985 J. Biol. Chem. 260 (4) : 2258-64 ; Widler et al., 1980 J. Biol . Chem. 255 (21) : 1046 -71 ; Dyer et al . , 1995, J. Lipid Res. 36(l):80-8; Sorenson et al . , 1999, Arterioscler Thromb . Vasc. Biol . 19 (9) : 2214 -25 ; Palgunachari 1996, Arterioscler, Thromb. Vasc . Biol . 16 (2 ) : 328-38 : Thirberg et al., J. Biol. Chem. 271 (11) : 6062 -70 ; Dyer 1991, J. Biol . Chem. 266(23)150009-15; Hill 1998, J. Biol . Chem. 273 (47) : 30979-84) . Las apolipoproteínas utilizadas en la invención incluyen también apolipoproteínas recombinantes , sintéticas, semi-sintéticas o purificadas. Los métodos para obtener apolipoproteínas o equivalentes de las mismas, utilizadas por la invención son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, las apolipoproteínas pueden ser separadas del plasma o productos naturales, por ejemplo, mediante centrifugación por gradiente de densidad o cromatografía de inmunoafinidad, o producidas sintéticamente, semi -sintéticamente o usando las técnicas de ADN recombinante conocidas por aquellos de la técnica (ver, por ejemplo, Mulugeta et al., 1998, J. Chromatogr. 798 ( 1 -2 ) : 83 - 90 ; Cheng et al., 1980, J. Lipid Res. 21 (3) :284-91; Cheung et al., 1987, J. Lipid Res. 28 (8 ) : 913 -29 ; Persson et al., 1998, J. Chromatogr. 711:97-109; Patentes Norteamericanas Nos. 5,059,528, 5,834,596, 5,876,968 y 5,721,114; y Publicaciones PCT WO 86/04920 y WO 87/02062). Las apolipoproteínas utilizadas en la invención incluyen además agonistas de apolipoproteína tales como péptidos y análogos de péptidos que imitan la actividad de la ApoA-I, ApoA-I Milano (ApoA-IM) , ApoA-I París (ApoA-IP), ApoA-II, ApoA-IV, y ApoE . Por ejemplo, la apolipoproteína pede ser cualquiera de aquellas descritas en las Patentes Norteamericanas Nos. 6,004,925, 6,037,323, 6,046,166, y 5,840,688, los contenidos de las cuales se incorporan aquí como referencia en sus totalidades. Los péptidos de agonistas de apolipoproteína o análogos de péptidos pueden ser sintetizados o fabricados usando cualquier técnica para síntesis de péptidos conocida en la técnica, incluyendo, por ejemplo, las técnicas descritas en las Patentes Norteamericanas Nos. 6,004,925, 6,037,323, 6,046,166. Por ejemplo, los péptidos pueden ser preparados usando la técnica sintética en fase sólida descrita inicialmente por errifield (1963, J. Am. Chem. Soc . 85:2149-2154) . Otras técnicas de síntesis de péptidos pueden ser encontradas en Bodanszky et al., Peptide Synthesis, John Wiley & Sons, 2d Ed., (1976) y otras referencia fácilmente disponibles para aquellas personas experimentadas en la técnica. Un resumen de las técnicas de síntesis de polipéptidos puede ser encontrado en Stuart y Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Company, Rockford, 111., (1984). Los péptidos pueden ser sintetizados también mediante métodos en solución como se describen en The Proteins, Vol . II 3d Ed., Neurath et al., Eds . P. 105-237, Academia Press, Nueva York, N.Y. (1976) . Los grupos protectores apropiados para usarse en diferentes síntesis de péptidos se describen en los textos mencionados arriba así como en McOmie, Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press, Nueva York, N.Y. (1973). Los péptidos de la presente invención podrían ser preparados también mediante la escisión química o enzimática de porciones más grandes, por ejemplo, la apolipoproteína A-I. En ciertas modalidades, la apolipoproteína puede ser una mezcla de apolipoproteínas . En una modalidad, la apolipoproteína puede ser una mezcla homogénea, es decir, un sólo tipo de apolipoproteína. En otra modalidad, la apolipoproteína puede ser una mezcla homogénea de apolipoproteína, es decir, una mezcla de dos o más apolipoproteínas diferentes. Las modalidades de mezclas heterogéneas de apolipoproteínas pueden comprender, por ejemplo, una mezcla de una apolipoproteína de una fuente animal y una apolipoproteína de una fuente semi- sintética. En ciertas modalidades, una mezcla heterogénea puede comprender, por ejemplo, una mezcla de ApoA-I y ApoA-I Milano. En ciertas modalidades, una mezcla heterogénea puede comprender, por ejemplo, una mezcla de ApoA-I Milano y ApoA-I París. Las mezclas adecuadas para el uso en los métodos y composiciones de la invención, serán parapentes para una persona con experiencia en la técnica. Si la apolipoproteína se obtiene de fuentes naturales, puede ser obtenida de una fuente vegetal o animal . Si la apolipoproteína se obtiene de una fuente animal, la apolipoproteína puede ser de cualquier especie. En ciertas modalidades, la apolipoproteína puede ser obtenida de una fuente animal. En ciertas modalidades, la apolipoproteína puede ser obtenida de una fuente humana. En modalidades preferidas de la invención, la apolipoproteína se deriva de la misma especie que el individuo al cual se administra la apolipoproteína . 5.3 Lecitina Colesterol Aciltransferasa En otro aspecto, la presente invención proporciona métodos para el tratamiento, reducción o prevención de daño por reperfusión isquémica administrando una composición que comprende lecitina colesterol aciltransferasa (LCAT) . Como se usa aquí, el término "LCAT" se refiere a la enzima que cataliza la transacilación de la lecitina conocida por aquellas personas con experiencia en la técnica y variantes y fragmentos de la misma (ver, Jauhiainen et al., 1988, J. Biol . Chem. 263 (14) : 6525-33 ; Patente Norteamericana No. 6,498,019 los contenidos de los cuales se incorporan aquí en su totalidad como referencia) . La LCAT puede ser cualquier LCT que sea efectiva para el tratamiento o prevención del daño por reperfusión isquémica. La LCAT utilizada por la invención también incluye LCAT recombinante o purificada. Los métodos para obtener la LCAT o equivalentes de la misma, utilizada por la invención son bien conocidos en la técnica (ver Jauhiainen et al., 1988 J. Biol . Chem. 2S3 (14) : 6525-33 ; Vakkilainen et al., 2002. J. Lipid Res. 43 (4) : 598-603 ; Jiang et al., 1999, J. Clin. Invest . 103 (6) : 907-14 ; Lee et al., 2.003, J. Biol. Chem. 278 (5) : 13539-45; Gamberra 1995, CR. Cenases Soc . Biol. Fil . (artículo en Francés) 189 (5) : 883 - 8 ; Joñas 2000, Biochim. Biophys. Acta 1529 (1-3) :245-56; Patente Norteamericana No. 6,498,019 los contenidos de los cuales se incorporan aquí como referencia en sus totalidades) . 5.4. Paraoxonasa En otro aspecto, la presente invención proporciona métodos para el tratamiento, reducción o prevención de daño por reperfusión isquémica administrando una composición que comprende paraoxonasa. Como se usa aquí, "paraoxonasa" se refiere a la enzima encontrada originalmente por ser responsable de la hidrólisis de la paraoxonasa y esta asociada físicamente con una apolipoproteína (ApoA-I) y lipoproteína de alta densidad que contiene clusterina y previene a la lipoproteína de baja densidad de la peroxidación de lípidos (Laplaud et al., 1998 Clin. Chem. Lab. Med. 36 ( 7 ) : 431 -41 ; Paragh et al., 19.98, Nephron 81 (2) : 166-70; Ayub et al., 1999 Arterioscler . Thromb . Vasc . Biol . 19(2) :330-5; Tanimoto et al., 2003, Life Sci . 72 (25) : 2877-85 ; Patentes Norteamericanas Nos. 6,521,226, 6,391,298 y 6,242,186) . 5.5. Complejos de Fosfolípidos En ciertas modalidades de la invención, la apolipoproteína, la lecitina colesterol acil transíerasa o la paraoxonasa pueden ser administrados en un complejo que comprende un lípido y la apolipoproteína, la lecitina colesterol aciltransferasa o la paraoxonasa. El lípido puede ser cualquier lípido conocido por aquellas personas con experiencia en la técnica. En ciertas modalidades de la invención, el lípido es un fosfolípido. El fosfolípido puede ser obtenido de cualquier fuente conocida por aquellas personas con experiencia en la técnica. Por ejemplo, el fosfolípido puede ser obtenido de fuentes comerciales, fuentes naturales o mediante medios sintéticos o semi- sintéticos conocidos por aquellas personas con experiencia en la técnica (Mel'nichuk et al., 1987, Ukr. Biokhim. Zh. 59 (6) .-75-7; Mel'nichuk et al., 1987, Ukr. Biokhim. Zh. 59 (5) :66-70; Ramesh et al., 1979, J. Am. Oil Chem. Soc. 56 (5) : 585 -7 ; Patel y Sparrow, 1978, J. Chromatogr. 150 (2) :542-7; Kaduce et al . , 1983, J. Lipid Res. 24 ( 10) : 1398 -403; Schlueter et al . , 2003, Org. Lett . 5(3) :255-7; Tsuj i et al., 2002, Nippon Yakurigak Zasshi 120 ( 1 ) : 67P- 69P) . El fosfolípido puede ser cualquier fosfolípido conocido por aquellas personas con experiencia en la técnica. Por ejemplo, el fosfolípido puede ser un fosfolípido de cadena de alquilo pequeña, fosfatidilcolina, fosfat idilcolina de huevo, fosfatidilcolina de soya, dipalmitoilfosfatidilcolina, dimiristoilfosfatidilcolina , diestearilfosfatidilcolina, dilaurilfosfatidilcolina, l-miristoil-2 -palmitoilfosfatidilcolina, 1 -palmitoil -2 -miristoilfosfatidilcolina , 1 -palmitoil -2 -estearoilfosfatidilcolina , 1 -estearoil -2 -palmitoilfosfatidilcolina, dioleoilfosfatidilcolina, 1-palmitoil-2-oleilfosfatidilcolina, l-oleil-2-palmitoilfosfatidilcolina, dioleilfosfatidiletanolamina , dilauroilfosfatidilglicerol , fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina , fosfatidilinositol , fosfatidilglicerol , difosfatidilglicerol , dimiristoilfosfatidilglicerol , dipamitoilfosfatidilglicerol , diestearoilfosfatidilglicerol , dioleilfosfatidilglicerol , ácido fosfatídico, ácido dimiristoilfosfatidico, ácido dipamitoilfosfatídico, dimiristoilfosfatidiletanolamina, dipalmitoilfosfatidiletanolamina, dimiristoilfosfatidilserina, dipamitoilfosfatidilserina, fosfatidilserina cerebral, esfingomielina , esfingolípidos , esfingomielina cerebral, dipalmi oilesfingomielina, diestearoilesfingomielina , galactocerebrosida, gangl iosidas , cerebrosidas , (1,3) -D-manosil- ( 1 , 3 ) diglicérido, aminofenilglicósido, glicolípidos de 3 -colesteril -6 ' - (glicosiltio) hexil éter, y colesterol y sus derivados. Los fosfolípidos pueden ser también los derivados o análogos de cualquiera de los fosfolípidos de arriba. En ciertas modalidades, la composición puede comprender una combinación de dos o más fosfolípidos. En las modalidades preferidas de la invención, la apolipoproteína se administra en un complejo con 1-palmitoil -2 -oleil fosfatidilcolina ("POPC") . En una modalidad preferida de la invención, la apolipoproteína es una apolipoproteína A-I Milano (ApoA-I Milano) recombinante complejada con l-palmitoil-2 -oleil fosfatidilcolina en una relación uno a uno en peso este complejo se conoce como ETC-216. Las composiciones pueden comprender cualquier cantidad de fosfolípido y cualquier cantidad de apolipoproteína, lecitina colesterol aciltransferasa o paraoxonasa efectiva para tratar o prevenir el daño por reperfusión isquémica. En ciertas modalidades, la composición puede comprender un complejo de una apolipoproteína y un fosfolípido en una relación de aproximadamente uno a aproximadamente uno. sin embargo, las composiciones pueden comprender complejos con otras relaciones de fosfolípido a apolipoproteína tales como aproximadamente 100:1, aproximadamente 10:1, aproximadamente 5:1, aproximadamente 3:1, aproximadamente 2:1, aproximadamente 1:1, aproximadamente 1:2, aproximadamente 1:3, aproximadamente 1:5, aproximadamente 1:10, y aproximadamente 1:100. La optimización de la relación de fosfolípido a apolipoproteína está dentro de la experiencia de aquellos en la técnica. 5.3 Métodos para Preparar Complejos de Apolipoproteína- lapido En un aspecto, la presente invención proporciona métodos para el tratamiento, reducción o prevención de daño por reperfusión isquémica administrando una composición que comprende una apolipoproteína, lecitina colesterol aciltransferasa o paraoxonasa complejada con un lípido. En una modalidad, la composición está comprendida de un complejo de apolipoproteína-lípido . Un complejo que comprende una apolipoproteína y un lípido puede ser preparado en una variedad de formas, incluyendo, pero no limitados a vesículas, liposomas, o proteoliposomas , y partículas discoidales. Una variedad de métodos bien conocidos por. aquellas personas experimentadas en la técnica pueden ser usados para preparar el complejo que comprende una apolipoproteína y un lípido (un complejo apolipoproteína-lípido) . Un número de técnicas disponibles para preparar liposomas o proteoliposomas pueden ser usadas. Por ejemplo, una apolipoproteina puede ser sometida a co-tratamiento con sonido (usando un sonicador de baño o sonda) con el lípido apropiado para formar complejos. Alternativamente, la apolipoproteina puede ser combinada con vesículas de lípidos preformadas resultando en la formación espontánea de complejos que comprenden una apolipoproteina y un lípido. Los complejos de apolipoproteína-lípido pueden ser formados también mediante un método de diálisis de detergente, por ejemplo, una mezcla de apolipoproteina, lípido y un detergente tal como colato se somete a diálisis para remover el detergente y se reconstituye para formar complejos de Apolipoproteína-lípido (ver, por ejemplo, Joñas et al., 1986, Methods Enzymol . 128:553-82), o usando un dispositivo de extrusión o mediante homogeneización . Otros métodos se describen, por ejemplo, en las Patentes Norteamericanas Nos. 6,004,925, 6,037,323 y 6,046,166, incorporadas aquí como referencia en sus totalidades. Los métodos ejemplares para preparar complejos de apolipoproteina lípido mediante co-liofilización se describen en la Patente Norteamericana No. 6,287,590, el contenido de la cual se incorpora por ese motivo como referencia en su totalidad. Otros métodos para preparar complejos de apolipoproteína-lípido serán aparentes para aquellas personas con experiencia en la técnica. En ciertas modalidades, el complejo comprende lecitina colesterol aciltransferasa y un lipido. En otra modalidad, el complejo comprende paraoxonasa y un lipido. 5.3.1. Formulaciones Farmacéuticas La invención proporciona métodos y composiciones útiles para tratar, reducir o prevenir daño por reperfusión isquémica. En ciertas modalidades, las composiciones de la invención son composiciones farmacéuticas. En una modalidad, la composición farmacéutica comprende una apolipoproteína, lecitina colesterol aciltransferasa o paraoxonasa y un lipido en una composición farmacéuticamente aceptable. Una composición farmacéuticamente aceptable, como se describirá abajo, incluye, por ejemplo, un diluyente, excipiente o portador. En modalidades preferidas, las composiciones farmacéuticas comprenden una apolipoproteína. En otra modalidad preferida, las composiciones farmacéuticas comprenden un complejo de apolipoproteína-lípido. Para los propósitos de esta sección de la solicitud, el término "apolipoproteína" se refiere ya sea a una apolipoproteína o a una composición que comprende un complejo de una apolipoproteína y un lipido ("complejo apolipoproteína-lípido") .

Las composiciones farmacéuticas de la presente invención comprenden la apolipoproteína , lecitina colesterol aciltransferasa o paraoxonasa en una composición farmacéuticamente aceptable adecuada para la administración y entrega in vivo o a un tejido u órgano extracorporal (ex vivo) . Las composiciones farmacéuticas pueden comprender la apolipoproteína, lecitina colesterol aciltransferasa o paraoxonasa en una forma de sal. Por ejemplo, ya que las proteínas pueden comprender terminaciones y/o cadenas laterales acidas y/o básicas, las proteínas pueden ser incluidas en las composiciones farmacéuticas ya sea en forma de ácidos o bases libres, o en forma de sales farmacéu icamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables pueden incluir ácidos adecuados los cuales son capaces de formar sales con las proteínas de la presente invención incluyendo, por ejemplo, ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido perclórico, ácido nítrico, ácido tiociánico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico y los similares; y ácidos orgánicos tales como ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido láctico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido malónico, ácido succínico, ácido maléico, ácido fumárico, ácido antranilico, ácido naftaleno sulfónico, ácido sulfanilico y los similares, las bases adecuadas capaces de formar sales con las proteínas objetivos pueden incluir, por ejemplo, bases inorgánicas tales como hidróxido de sodio, hidróxido de amonio, hidróxido de potasio y las similares; y bases orgánicas tales como mono, di y trialquilaminas (por ejemplo, trietil amina, diisopropil amina, metil amina, dimetil amina, y las similares) y etanolaminas opcionalmente substituidas (por ejemplo, etanolamina, dietanolamina y las similares) . La composición farmacéutica puede estar en una variedad de formas adecuadas para cualquier ruta de administración, incluyendo pero no limitadas a parenteral, enteral, tópica, o inhalación. Administración parenteral se refiere a cualquier ruta de administración que no es a través del canal alimenticio, incluyendo pero no limitados a, administración inyectable (es decir, intravenosa, intramuscular y Las similares como se describe abajo) . Administración enteral se refiere a cualquier ruta de administración la cual es oral, incluyendo pero no limitadas a, tabletas, cápsulas, soluciones orales, suspensiones, rociadores y las similares, como se describe abajo. Para los propósitos de esta sección, administración enteral también se refiere a las rutas de administración rectal y vaginal. Administración tópica se refiere a cualquier ruta de administración a través de la piel, incluyendo, pero no limitadas a, cremas, ungüentos, geles y parches transdérmicos , como se describe abajo (ver también, Remington's Pharmaceut ical Sciences, 18va Edición Gennaro et al., Eds . ) Mack Printing Company, Easton, Pennsylvania , 1990) . Las composiciones farmacéuticas parenterales de la presente invención pueden ser administradas mediante inyección, por ejemplo en una vena (intravenosamente), una arteria (intrarterialmente) , un músculo (intramuscularmente) , bajo la piel (subcutáneamente o en una composición de depósito) , al pericardio, a las arterias coronarias, o usadas como soluciones para administración a un tejido u órgano (por ejemplo, el uso en una maquina de derivación cardiopulmonar o para bañar tejidos u órganos de transplante, como se describe abaj o) . Las composiciones farmacéuticas inyectables pueden s:er suspensiones, soluciones o emulsiones estériles de la apolipoproteína, lecitina colesterol aciltransferasa o paraoxonasa o complejos del lipidos de los mismos en vehículos acuosos o aceitosos. Las composiciones pueden comprender también agentes de formulación o excipientes tales como, agentes de suspensión, estabilizantes y/o dispersantes. Las formulaciones para inyección pueden ser presentadas en forma de dosificaciones unitarias, por ejemplo, en ampolletas o en recipientes de múltiples dosis, y pueden comprender preservativos agregados. En ciertas modalidades, las composiciones farmacéuticas contienen amortiguadores tales como tris (hidroximetil) aminometano o THAM (trimetamina) . Las composiciones inyectables puede ser composiciones farmacéuticamente apropiadas para cualquier ruta de administración inyectable, incluyendo, pero no limitadas a, intravenosa, intrarterial , intracoronaria, pericárdica, perivascular, intramuscular, subcutánea e intrarticular . Las composiciones farmacéuticas inyectables pueden ser composiciones farmacéuticas apropiadas para administración directamente en el corazón, el pericardio o las arterias coronarias . Las composiciones farmacéuticas parenterales pueden ser composiciones farmacéuticamente apropiadas, adecuadas para bañar los te idos u órganos de transplantes antes, durante, o después del transito al receptor pretendido. Tales composiciones pueden ser usadas antes o durante la preparación del tejido u órgano para el transplante (por ejemplo, antes o durante la recolección) . Además, la preparación puede ser una solución cardioplégica administrada durante la cirugía cardiaca. En ciertas modalidades, la composición farmacéutica puede ser usada, por ejemplo, en conjunción con una maquina de derivación cardiopulmonar para proporcionar la composición farmacéutica al corazón. Tales preparaciones pueden ser usadas durante las etapas de inducción, mantenimiento o reperfusión de la cirugía cardiaca (ver, Chang et al., 2003 Masui 52 (4) :356-62 ; Ibrahim et al., 1999, Eur . J, Cardiothorac . Surg. 15(l):75-83; von Oppel et al., 1991, J. Thorac , Cardiovasc. Surg .102 (3 ) : 405 - 12 ; Ji et al., 2002, J. Extra Corpor. Technol . 34 (2) : 107-10) . En ciertas modalidades, la composición farmacéutica puede ser administrada vía un dispositivo mecánico tal como una bomba o perfusor (por ejemplo, PerDUCER®) (Hou y de Marzo de 2003, J. Invasive Cardiol. 15(l):13-7; Maisch et al., 2001, Am. J. Cardiol . 88 (11) : 1323-6 ; Macris e Igo 1999, Clin. Cardiol. 22(1, Suppl 1) : 136-9) . Alternativamente, la composición farmacéutica inyectable puede ser suministrada en forma de polvo para reconstitución con un vehículo adecuado, incluyendo pero no limitados a agua estéril libre de pirógenos, amortiguador, solución de dextrosa etc., antes del usarse. Para este fin, la apolipoproteína , lecitina colesterol aciltransferasa o paraoxonasa pueden ser liofilizadas, o co-liofilizadas con un lípido, según sea apropiado. Las composiciones farmacéuticas pueden ser suministradas en formas de dosificación unitaria y reconstituidas antes del uso in vivo. Los métodos para preparar los complejos de apolipoproteína lípido mediante co-liofilización se describen, por ejemplo, en la patente norteamericana 6,287,590, el contenido de la cual se incorpora aquí como referencia en su totalidad. Para administración prolongada, la composición farmacéutica puede ser proporcionada como una preparación de depósito, para administración mediante implantación, por ejemplo, inyección subcutánea, intradérmica, o intramuscular. Por lo tanto, por ejemplo, la composición farmacéutica puede ser formulada con materiales poliméricos o hidrofóbicos adecuados (por ejemplo, tal como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o como derivados moderadamente solubles, por ejemplo, como una forma de sal moderadamente soluble de la apolipoproteína . Alternativamente, pueden ser usados los sistemas de administración transdérmica fabricados como un disco o parche adhesivo que libera lentamente el ingrediente activo para absorción percutánea . Para este fin, los mej oradores de permeación pueden ser usados para facilitar la penetración transdérmica del ingrediente activo. Un beneficio particular puede ser logrado incorporando los complejos de Apo-SM utilizados por la invención en un parche de nitroglicerina para usarse en pacientes con enfermedad cardiaca isquémica e hipercolesterolemia . Para administración oral, las formulaciones farmacéuticas puede tomar la forma de, por ejemplo, tabletas o cápsulas preparadas mediante medios convencionales con excipientes farmacéuticamente aceptable tales como agentes aglutinantes (por ejemplo, almidón de maíz pregelatinizado , polivinilpirrolidona o metilcelulosa de hidroxipropilo) , rellenadores (por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina o fosfato hidrógeno de calcio) ; lubricantes (por ejemplo, estereato de magnesio, talco o sílice) ; desintegrantes (por ejemplo, almidón de papa o glicolato almidón de sodio) ; o agentes humidificantes (por ejemplo, laurel sulfato de sodio). Las tabletas pueden ser revestidas mediante los métodos bien conocidos en la técnica (ver, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ava Edición Gennaro et al., eds . ) ack Printing Company, Easton, Pennsylvania, 1990). Las composiciones farmacéuticas liquidas para administración oral pueden tomar la forma de, por ejemplo, soluciones, jarabes o suspensiones, o pueden ser un producto seco para constitución con agua u otro vehículo adecuado antes de usarse. Tales composiciones farmacéuticas liquidas pueden ser preparadas mediante medios convencionales con aditivos farmacéuticamente aceptables tales como agentes de suspensión (por ejemplo, jarabe de sorbitol, derivados de celulosa o grasas comestibles hidrogenadas) ; agentes emulsificantes (por ejemplo lecitina o acacia) ; vehículos no acuosos (por ejemplo, aceite de almendra, ésteres aceitosos, alcohol etílico o aceites vegetales fraccionados) ; y preservativos (por ejemplo, p-hidroxibenzoatos de metilo o propilo o ácido sórbico) . Las composiciones farmacéuticas pueden comprender también sales amortiguadoras, agentes saborizantes, colorantes y edulcorantes según sea apropiado. Las composiciones farmacéuticas para administración oral pueden ser preparadas adecuadamente para proporcionar liberación controlada de la apolipoproteina, la lecitina colesterol aciltransferasa o la paraoxonasa o los complejos de lípidos de las mismas. Las composiciones farmacéuticas entérales pueden ser aceptables para administración bucal, por ejemplo, en forma de tabletas, comprimidos, o pastillas. Para las rutas de administración rectal o vaginal, la apolipoproteina, la lecitina colesterol aciltransferasa o la paraoxonasa o los complejos de lípidos de las mismas pueden ser preparadas como soluciones (por ejemplo, para enemas de retención) supositorios o ungüentos. Las composiciones farmacéuticas entérales pueden ser adecuadas para mezclarlas en mezclas alimenticias, tales como para mezclas con mezclas de nutrición parenteral total (TPN) o para suministro mediante un tubo de alimentación (ver, Dudrick et al., 1998, Surg. Technol . Int. VII : 174-184 ; Mohandas et al., 2003, Nati. Med. J. India 16 (1) :29-33 ; Bueno et al., 2003, Gastrointest . Endose. 57 (4) : 536-40 Shike et al., 1996, Gastrointest. Endose. 44 (5) : 536-40) . Para administración mediante inhalación, la apolipoproteína, la lecitina colesterol aciltransferasa o la paraoxonasa o los complejos de lípidos de las mismas pueden ser administrados convenientemente en forma de una presentación de rociador de aerosol de paquetes presurizados o un nebulizador, con el uso de un propelente adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano , diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado la unidad de dosificación puede ser determinada proporcionando una válvula para administrar una cantidad medida. Pueden ser formuladas cápsulas y cartuchos de, por ejemplo, gelatina para usarse en un inhalador o insuflador, que comprenden mezcla pulverizada del compuesto y una base de polvo adecuada tal como lactosa- o almidón. Las composiciones f rmacéuticas inhaladas pueden ser útiles, por ejemplo, para tratar o prevenir el daño del tejido de los pulmones durante o después del transplante de corazón-pulmón . Si se desea, las composiciones pueden ser presentadas en un empaque o dispositivo dispensador que puede comprender una o más formas de dosificación unitarias que comprenden la apolipoproteína, lecitina colesterol aciltransferasa o paraoxonasa o complejos de lípido de las mismas. El empaque puede comprender, por ejemplo, una hoja fina de metal o plástico, tal como un empaque de burbuja. El empaque o dispositivo dispensador puede estar acompañado por instrucciones para la administración. Varias modalidades de las composiciones farmacéuticas han sido descritas. Las descripciones y ejemplos se destinan para ser ilustrativos de la invención y no limitantes. En realidad, será aparente para aquellas personas con experiencia en la técnica que las modificaciones a las composiciones farmacéuticas pueden ser hechas para las varias modalidades de la invención descrita sin apartarse del espíritu de la invención . 5.4. Métodos de Tratamiento Los métodos y composiciones de la presente invención pueden ser usados para tratar o prevenir cualquier condición asociada con el daño por reperfusión isquémica o reducir el daño por reperfusión isquémica. El daño por reperfusión isquémica puede estar asociadas con la deprivación de oxígeno, la activación de neutrofilos y la producción de mieloperoxidasa . El daño por reperfusión isquémica puede ser el resultado de un número de estados enfermizos o pueden ser inducidas iatrogenicamente , por ejemplo, los coágulos sanguíneos, la estenosis o la cirugía pueden todos causar daño por reperfusión isquémica. Para los propósitos de esta sección y la sección 5.6 de abajo, un "paciente" o "individuo" se refiere a un animal, incluyendo un humano, en necesidad del tratamiento, mejoramiento o reducción del daño por reperfusión isquémica . En ciertas modalidades, los métodos y composiciones de la presente invención pueden ser usados para tratar o prevenir las condiciones asociadas con la deprivación de oxígeno, activación de neutrófilos, y producción de mieloperoxidasa . En ciertas modalidades, los métodos y composiciones pueden ser usados para tratar, reducir o prevenir el daño por reperfusión isquémica debidas a coágulos sanguíneos (ya sea uno o más de un coágulo), estenosis, cirugía u obstrucción mecánica. En ciertas modalidades, los métodos y composiciones de la presente invención pueden ser usados para tratar o prevenir la apople ía, infarto al miocardio fatal o no fatal, enfermedad vascular periférica, necrosis de tejidos, y falla de los ríñones, y pérdida post -quirúrgica del tono muscular resultante del daño por reperfusión isquémica. En ciertas modalidades,- los métodos y composiciones de la presente invención reducen o mitigan la extensión del daño por reperfusión isquémica. La creatina cinasa puede ser una medida del daño de los tejidos u órganos. Por lo tanto, en ciertas modalidades, los métodos y composiciones de la presente invención reducen la cantidad de creatina cinasa de los te idos u órganos. En ciertas modalidades, los métodos y composiciones de la presente invención pueden ser usados para tratar, reducir o prevenir el daño por reperfusión isquémica asociadas con la oclusión o diversión de sangre debidas a estenosis vascular, trombosis, lesiones vasculares accidentales, o procedimiento quirúrgicos. La estenosis puede ser el resultado de una condición médica, tal como la aterosclerosis o inducida iatrogenicamente , tal como un procedimiento quirúrgico. Los procedimientos quirúrgicos, por ejemplo, en las rodillas, manos, cadera y hombros, transplantes de tejidos y los procedimientos cardiacos incluyendo injerto de derivación de las arterias coronarias, angioplastia coronaria transluminal percutánea, pueden todas reducir o detener el flujo sanguíneo, inducir la isquemia y establecer el estado para las daño por reperfusión. En ciertas modalidades, los métodos y composiciones de la presente invención pueden ser usados para tratar, reducir o prevenir el daño por reperfusión isquémica debidas a la estenosis, incluyendo la aterosclerosis o cirugías, incluyendo, pero no limitadas a cirugías en las rodillas, manos, cadera y hombros, transplantes de tejidos y procedimientos cardiacos incluyendo injertos de derivación de las arterias coronarias, angioplastia coronaria transluminal percutánea. Los métodos y composiciones de la presente invención pueden ser usados también para tratar o prevenir otras condiciones asociadas con la reperfusión isquémica tales como infarto al miocardio, apoplejía, claudicación intermitente, enfermedad arterial periférica, síndrome coronario agudo, enfermedades cardiovasculares y daño de los músculos como resultado de la oclusión de un vaso sanguíneo. En ciertas modalidades, los métodos y composiciones de la invención pueden ser usados para tratar, prevenir o reducir el daño por reperfusión isquémica en tejidos u órganos extracorporales . Los tejidos u órganos extracorporales son tejidos u órganos que no están en un individuo (también, llamados ex vivo) tales como en transplantes. Para el transplante de tejidos y órganos, el tejido y los órganos removido del donador son también susceptibles a daño por reperfusión durante la recolección, mientras están en tránsitos y enseguida del transplante en el receptor. Los métodos y composiciones pueden ser usados para incrementar la viabilidad de un tejido u órgano transplantable , por ejemplo, suplementando las soluciones usadas para mantener o preservar los tejidos u órganos transplantables . Por ejemplo, los métodos y composiciones pueden ser usados para bañar el tejido u órgano transplantable durante el transporte o pueden ser puestos en contacto con el tejido u órgano transplantable antes de, durante o después del transplante.

En ciertas modalidades, los métodos y composiciones pueden ser usados para reducir o aun obviar la necesidad de cirugía de derivación de las arterias coronarias en un individuo. En otras modalidades, los métodos y composiciones de la invención pueden ser usados para tratar o prevenir las condiciones asociadas con la angioplastia coronaria transluminal percutánea, tales como la oclusión inducida por la angioplastia coronaria transluminal percutánea. En modalidades adicionales, los métodos y- composiciones de la invención pueden ser usados para reducir el tiempo de recuperación de cualquier procedimiento quirúrgico. En ciertas modalidades, · los métodos y composiciones pueden ser composiciones farmacéuticamente aceptables para la administración la administración pericárdica, intracoronaria o intratecal durante la cirugía cardiaca. En ciertas modalidades, la composición farmacéuticamente aceptable puede ser administrada mediante un dispositivo mecánico tal "como una bomba o perfusor (por ejemplo, perDUCE ®) . Los métodos y composiciones pueden ser usados en conjunción con la cirugía cardiaca, por ejemplo, en o con soluciones cardioplégicas para prevenir o minimizar las daño por isquemia o reperfusión al miocardio. En ciertas modalidades, los métodos y composiciones pueden ser usados con una maquina de derivación cardiopulmonar durante la cirugía cardiaca para prevenir o reducir el daño por reperfusión isquémica al miocardio. En ciertas modalidades, los métodos y composiciones pueden ser practicados como una dosis de una sola vez o crónicamente. Por crónico se quiere decir que los métodos y composiciones de la invención se practican más de una vez a un individuo dado. Por ejemplo, la administración crónica pueden ser múltiples dosis de una composición farmacéutica administrada a un animal, incluyendo un individuo, en una base diaria, o más o menos frecuentemente, como será aparente para aquellas' personas con experiencia en la técnica. En otra modalidad, los métodos y composiciones se practican de manera aguda. Por aguda se quiere decir que los métodos y composiciones de la invención se practican en un periodo de tiempo cercano a, o contemporáneo con el evento isquémico u oclusivo. Por ejemplo, la administración aguda puede ser una sola dosis o múltiples dosis de una composición farmacéutica administrada al inicio del infarto al miocardio agudo, tras la primera manifestación de, por ejemplo, una apoplejía, o antes durante y después de un procedimiento quirúrgico. Un periodo de tiempo cercano a, o contemporáneo con un evento isquémico u oclusivo variará de acuerdo al evento isquémico pero puede ser, por ejemplo, en el lapso de 30 minutos de experimentar los síntomas de un infarto al miocardio, apoplejía o claudicación intermitente. En ciertas modalidades, la administración aguda es la administración en el lapso de aproximadamente una hora del evento isquémico. En ciertas modalidades, la administración aguda es la administración en el plazo de aproximadamente 2 horas, aproximadamente 6 horas, aproximadamente 10 horas, aproximadamente 12 hora, aproximadamente 15 horas o aproximadamente 24 horas después de un evento isquémico. Por dosis múltiples, se quiere decir que la composición se administra más de una vez. Las dosis múltiples pueden ser, por ejemplo, una dosis administrada aproximadamente diario en más de un día, más de una dosis administrada en un día o dosis múltiples administradas en múltiples días. 5.5. Terapia de Combinación La apolipoproteína, la lecitina colesteroi. aciltransíérasa o paraoxonasa o los complejos de lípidos de las mismas o las composiciones farmacéu icas de las mismas pueden ser usadas individualmente o en terapia de combinación con otros fármacos en los métodos de la presente invención. Tales terapias incluyen, pero no se limitan a la administración simultánea o secuencial de los fármacos involucrados . Por ejemplo, las apolipoproteínas , la lecitina colesteroi aciltransferasa o la paraoxonasa o los complejos de lípidos de las mismas o composiciones farmacéuticas de las mismas pueden ser administradas con otros agentes farmacéuticamente activos incluyendo, pero no limitados a, antagonistas alfa/beta adrenérgicos , agentes antiadrenérgicos , antagonistas alfa-1 adrenérgicos, antagonistas beta adrenérgicos, activadores de AMP cinasa, inhibidores de la enzima que convierta la angiotensina (ACE) , antagonistas del receptor de angiotensina II, bloqueadores del canal del calcio, agentes antiarrítmicos, vasodilatadores, nitratos, vasopresores , agentes inotrópicos, diuréticos, agentes anticoagulación, agentes antiagregación de plaquetas, agentes trombolíticos , agentes antidiabéticos, antioxidantes, agentes anti-inflamatorios, secuestrantes de ácidos biliares, estatinas, inhibidores de la proteína de transferencia de colesterol éster (CETP) , agentes reductotres de colesterol/reguladores de lípidos, fármacos que bloquean £a conversión del ácido araquidonico , terapia de reemplazo de estrógenos, análogos de ácidos grasos, inhibidores de la síntesis de ácidos grasos, fibratos, histidina, derivados de ácido nicotínico, agonistas o antagonistas del receptor activador del proliferador de peroxisoma, inhibidores de la -oxidación de ácidos grasos, talidomina o tiazolidinodionas (Drug Facts and Comparisons, actualizado mensualmente , Enero 2003, Wolters Kluwer Company, St Louis, MO; Physicians Desk Referente (56a edición, 2002) Medical Econoraics) . Tales agentes pueden tener efectos aditivos o sinergistas para prevenir el daño por reperfusión isquémica. Otros agentes individualmente o en combinación, que puede sumar o sinergizar las propiedades benéficas de la apolipoproteína para proteger los tejidos y órganos de un mamífero de el daño por reperfusión isquémica incluyen pero no se limitan a: Agonistas Alfa/Beta adrenérgicos tales como, carvediol (Coreg®) ; labetalol HC1 , (Normodina®) ; Agentes Antiadrenergicos tales como guanadrel, (Hylorel®) ; guanotidina, (Ismelin®) ; reserpina, clonidina, (Catapres® y Catapres-TTS®) ; guanfacina, (Tenex®) ; guanabenz, ( itensina®)- ; metildopa y metildopato, (Aldomet®) ; Antagonista Alfa-1 Adrenérgico tal como doxozina, (Cardura®) ; prazosina, (Minipress®) ; terazosina, (Vitrina®) ; y pentolamina, (Regitina®) ; Antagonistas Beta adrenérgicos tales como Sotalol, (Betapace AF®) y Betapace®) ; timolol, (Blocadren®) , propanolol, (InderalLA® e Inderal®) ; betaxolol, (Kerlona®) ; acetbutolol , (Sectral®) ; atenolol, (Tenormina®) ; metoprolol, (Lopressor® y Toprol-XL®) ; bisoprolol, (Zebata®) ; carteolol, (Cartrol®) ; esmolol, (Brevibloc®) ; naldolol, (Corgard®) ; penbutolol, (Levatol®) ; y pindolol, (Visken®) ; activadores de AMP cinasa tales como ESP"31015, (ETC-1001); ESP 31084, ESP 31085, ESP 15228, ESP 55016 y ESP 24232; gemcabeno 8PD 72953 y CI-1027) ; y MÉDICA 16; inhibidores de la Enzima de Conversión de Angiotensina (ACE) tales como quinapril, (Accupril®) ; benazepril, (Lotensin®) ; captopril, (Capoten®); enalapril, (VAsotec®) ; ramipril, (Altace®) ; fosinopril (monopril®) ; moexipril, (Univasc®) ; lisinopril, (Prinivil® y Zestril®) ; trandolapril , (Mavik®) , perondopril, (Aceon®) ; y Antagonistas del Receptor de Amgiotensina II tales como candesaartan, (Atacand®) ; irbesartan, (Avapro®) ; losartan, (Cozaar®) , valsartan, (Diovan®) ; telmisartan, (Micardis®) ,· eprosartan, (Tevetan®) ; y olmesartan, (Benicar®) ; Bloqueadores del Canal de Calcio tales como nifedipina, (Adalat®, Adalat CC®, Procardia® y Procardia XL®) ; verapamil, (Calan®, CalanSR®, Covera-HS®, IsoptinSR®, Vérelan® y VerelanPM®) ; diltiazem, (Cardiazem®, CardizemCD®, y Tiazac®) ,- nimodipina, (Nimotop®) ; amlodipina, (Norvasc®) ; felodifina, (Plendil®) ,· nisoldipina, (Sular®) ; bepridil, (Vascor®) ; isradipina, (DinaCirc®, y nicardipina, (Cárdeno®) ; Antiarrítmicos tales como varias quinidinas; procainamida, (Pronestyl® y Procan®) ,- lidocaina, (Xilocaina®) ; mexilitina, (Mexitil®) ; tocainida, (Tonocard®) , flecainida, (Tambocor®) ; propafenona (Ritmol®) , moricizina, (Ethmozina®) ; ibutilida, (Convert®) ; diisopiramida, (Norpace®) , bretillo, (Bretilol®) ; aminodarona, (Cordarona®) ; adenosida, (Adenocard®) ; dofetilida (Tikosyn®) ; y digoxina, (Lanoxin®) ; Vasodilatadores tales como diazoxida, (Hypertat IV®) ; hidralazina, (Apresol ina®) ; fenoldopam, (Corolpam®) ; minoxidil, (loniten®) ; y nitroprussida , (Niprida®) ; nitratos tales como dinitrato de isosorburo; (Isordil® y Sorbitrato®) ; mononitrato de isorburo; (Imdur®, Ismo® y Monoket®) pasta de Nitroglicerina, (Nitrol®) ; varios parches de nitroglicerina; nitroglicerina SL, (Nitrostat®) , aerosol Nitrolingual ; y nitroglicerina IV, (Tridil®) ; Vasopresores tales como norepinefriña, (Levophed®) ; y fenilefrina, (Neo-Sinefriña®) ; Agentes Ionotrópicos tales como amrinona; (Inocor®); dopamina, (Intropina®) ; dobutamina, (Dobutrex®) ; epinefrina, (Adrenalina®); isoprotenol, (Isuprel®) , milrinona, (Primacor®) ; Diuréticos tales como espironolactona, (Aldactona®) ; torsemida, (Demadex®) ; hidroflumetiazida, (Diucardina®) ; clorotiazina, (Diuril®) ; ácido etacrinico, (Edecrin®) ; hidroclorotiazida, (hidroDIURIL® y Microzida®) ; amilorida, (Midamor®) ; clortalidona, (Thalitona® e Hygroton®)- ,· bumetanida, (Bumex®) ; furosemida, (Lasix®) ; indapamida, (Lozol®) : metolazona, (Zaroxolin®) ; triamtereno, (Dyrenium®) ; y combinaciones de triamtereno e hidroclorotiazida (Diazida® y Mazida®) ; Anticoagulantes/Antiplaquetas tales como bivalirudina, (Angiomax®) ; lepirudina, (Refludan®) ; varias heparinas, danaparoida, (Orgaran®) ; varias heparionas de bajo peso molecular; dalteparina, (Fragmina®) ; enoxaparina, (Lovenox®) ; tinzaparina, (Innohep®) ; warfarina, (Coumadina®) ; dicumarol, (Dicoumarol®) ; anisindiona, (Miradona®) ; aspirina; argatroban, (Argatroban®) ; abciximab, (Reopro®) ; aptifibatida , (Integrilina®) ; tirofiban, (Aggrastato® ; clopidogrel, (Plavix®) ; triclopidina , (Ticlida®) ; ' y dipiridamol, (Persantina®) ; Trombolíticos tales como alteplasa, (Activasa®) ; activador del plasminogeno del tejido (TPA) , (Activasa®) ; anistreplasa, APSAC, (Eminasa®) ; reteplasa, rPA, (Retavasae®) ; esteptocinasa, SK, (Esteptasa®) ; urocinasa, (Abbokinasa®) ; agentes Antidiabéticos tales como metformina, (Glucofago®) ; glipizida, (Glucotrol®) ; clorpropamida, (Diabinesa®) ; acetohexamida , (Dymelor®) ; tolazamida, (Tolinasa®) ; glimeprida, (Amaryl®) ; gliburida, (DiaBeta® y Micronasa®) ; acarbosa, (Precosa®) ; miglitol, (Glyset®) ; repaflinida, (Prandin®) ; nateglinida, (Starlix®) ; rosiglitazona, (Arandia®) ; y pioglitazona (Actos®) ; "agentes Antioxidantes y antiinflamatorios; Secuestrantes de Ácidos Biliares tales como colestiramina , (LoCholes®, Prevalite® y Questran®) ; colestipol, (Colestid®) ; y colesevelam, (Welchol®) ; Estatinas tales como rovastatina, (Crestor®) ; fluvastatina, (Lescol®) ; atorvastatina, (Lipitor®) ; lovastatina, (Mevacor®) ; pravastatina, (Pravachol®) ; y simvastatina , (Zocor®) ; inibidores de CETP; fármacos que bloquean la conversión de ácido araquidonico : Terapia de reemplazo de estrógenos, análogos de ácidos grasos tales como PD 72953, MEDICA 16, ESP 24232, y ESP 31015; Inhibidores de la síntesis de ácidos grasos; inhibidores de la oxidación de ácidos grasos, ranolazina, (Ranexa®) ; Fibratos tales como clofibrato, (Atromid-S®) ; gemfibrozil , (Lopid®) ; cápsulas de fenobirato micronizado, (Tricor®) ; benzafibrato y ciprofibrato ; histidina; Derivados de Ácido Nicotínico tales como tabletas de liberación prolongada de niacina, (Niaspan®) ; agonistas y antagonistas del receptor activador del proliferador de peroxisomas; thalidomida, (Thalomida®) y los compuestos descritos en las Patentes Norteamericanas Nos. 6,459,003, 6,506,799 y las Publicaciones de Solicitudes Norteamericanas Nos. 20030022865, 20030018013, 200200773316, y 20030078239 los contenidos de las cuales se incorporan aquí como referencia en sus totalidades. 5.6. Métodos de Administración La apolipoproteína , la lecitina colesterol aciltransferasa o la paraoxonasa o los complejos de lípidos de las mismas pueden ser administrados mediante cualquier ruta adecuada conocida por aquellas personas con experiencia en la técnica, que asegure la biodisponibilidad en la circulación. La ruta de administración puede ser indicada por el tipo de composición farmacéutica, por ejemplo, las composiciones inyectables pueden ser administradas parenteralmente , incluyendo pero no limitadas a, inyecciones intravenosas (IV) ,, intramusculares (IM) , intradérmicas , subcutáneas (SC) , intracoronarias , intraarterialmente , pericadialmente , intraarticular e intraperitoneal (IP) . En ciertas modalidades, la administración es mediante una bomba mecánica o dispositivo de administración, por ejemplo, un dispositivo de administración pericárdica (PerDUCER®) o una maquina de derivación cardiopulmonar . En ciertas modalidades, las composiciones se administran mediante inyección, vía una bomba o preparación de depósito implantables subcutáneamente, en cantidades que logren una concentración de suero circulante igual a la obtenida a través de la administraron parenteral, como se describe arriba. Los métodos de la invención proporcionan la administración de la apolipoproteína , lecitina colesterol aciltransferasa o paraoxonasa o complejos de lípidos de las mismas o composiciones farmacéuticas de los mismos a través de una variedad de regímenes de tratamiento diferentes. Por ejemplo, como se describe arriba, los métodos proporcionan la administración de dosis crónicas o individuales. Los métodos proporcionan, por ejemplo, la administración aguda (por ejemplo, contemporánea con o relacionada cercanamente de manera temporal con el evento isquémico u oclusivo) . En ciertas modalidades, la administración crónica pueden ser varias inyecciones intravenosas administradas periódicamente durante un sólo día. En otra modalidad, la administración crónica puede ser una inyección intravenosa administrada como un bolo o como una infusión continua diaria, aproximadamente cada dos días, aproximadamente cada 3 a 15 días, preferiblemente aproximadamente cada 5 a 10 días, y más preferiblemente aproximadamente cada 10 días. Preferiblemente, la dosis administrada es menor que una dosis toxica. Preferiblemente, durante el tratamiento, la dosis y el itinerario de dosificación proporcionarán niveles suficientes o en estado permanente de una cantidad efectiva de uno o más componentes de la composición para tratar o prevenir el daño por reperfusión isquémica. En ciertas modalidades, puede ser administrada una dosis escalonada. En ciertas modalidades, la composición se administra intermitentemente. Dependiendo de las necesidades del individuo, la administración puede ser mediante infusión lenta con una duración de más de aproximadamente una hora, mediante infusión rápida de aproximadamente una hora o menos, o mediante una sola inyección de bolo. En otra modalidad, la administración aguda puede ser al inicio del evento isquémico u oclusivo o tras la manifestación de los síntomas del evento isquémico u oclusivo, en una modalidad, los métodos proporcionan la administración aguda de las composiciones de la invención, por ejemplo, por los técnicos médicos de emergencia o personal calificado (por ejemplo, bomberos o policías entrenados médicamente) respondiendo a una llamada de emergencia por un posible infarto al miocardio. En otra modalidad, los métodos pueden ser practicados agudamente, por ejemplo, administrando las composiciones después de las manifestaciones de una apoplejía.

La dosis actual de las composiciones de la invención variará con la ruta de administración, la altura, peso, edad y severidad de la enfermedad del paciente, la presencia de condiciones médicas concomitantes y los similares. las composiciones de la invención se usaran de manera general en una cantidad efectiva para alcanzar el propósito pretendido, por supuesto, deberá entenderse que la cantidad usada dependerá de la aplicación particular. Por ejemplo, para usarse para prevenir el daño por reperfusión isquémica, puede ser aplicada o administrada una cantidad profilácticamente efectiva de la composición, a un animal o humano en necesidad de la misma. Por cantidad profilácticamente efectiva se quiere decir una cantidad de la composición de la invención que inhibe o reduce los síntomas del daño por reperfusión isquémica. La cantidad profilácticamente efectiva actual dependerá de la aplicación particular. Un técnico ordinariamente experimentado será capaz de determinar las cantidades profilácticamente efectivas de las composiciones particulares para las aplicaciones particulares sin experimentación indebida, usando, por ejemplo, los ensayos in vitro e in vivo conocidos por aquellas personas con experiencia en la técnica. Los ensayos ejemplares se describen en los ejemplos de abajo. = Para usarse para tratar o prevenir las enfermedades relacionadas con el daño por reperfusión isquémica, las composiciones de la invención pueden ser administradas o aplicadas en una cantidad terapéuticamente efectiva. Por cantidad terapéuticamente efectiva se quiere decir una cantidad efectiva para mejorar los síntomas de, o mejorar, tratar o prevenir el daño por reperfusión isquémica. La determinación de las cantidades terapéuticamente efectivas está también dentro de las capacidades de aquellas personas experimentadas en la técnica, especialmente a la luz de la descripción detallada proporcionada aquí. Para la administración sistémica, una dosis terapéuticamente efectiva puede ser estimada inicialmente a partir de los ensayos in vitro. Por ejemplo, puede ser formulada una dosis en modelos animales para lograr un rango de concentraciones de composición circulante benéfico. Las dosificaciones iniciales pueden ser estimadas también a partir de los datos in vivo, por ejemplo, modelos animales, usando las técnicas que son bien conocidas en la técnica. Tal información puede ser usada para determinar más exactamente las dosis útiles en humanos. Una persona que tiene experiencia ordinaria en la técnica podría optimizar fácilmente la administración a los humanos en base de los datos en animales.

La toxicidad de las composiciones descritas aquí puede ser determinada mediante los procedimientos farmacéuticos estándar en cultivos celulares o animales experimentales, por ejemplo, determinando la LD50 (la dosis letal para el 50% de la población) o la LDi0o (la dosis letal para el 100% de la población) . La relación de dosis entre el efecto tóxico y terapéutico es el índice terapéutico. Las composiciones las cuales exhiben altos índices terapéuticos se prefieren. Los datos obtenidos a partir de estos ensayos de cultivos celulares pueden ser usados para formular un rango de dosificación que no es toxico para usarse en humanos. La dosificación de la composición descrita aquí cae preferiblemente dentro de un rango de concentraciones circulantes que incluyen la dosis efectiva con poca o ninguna toxicidad. La dosis puede variar dentro de este rango dependiendo de la forma de dosificación empleada y la ruta de administración utilizada. La ruta de administración exacta y la dosis de las composiciones pueden ser elegidos por un medico individual en vista de la condición del paciente. (Ver, por ejemplo, Fingí et al., 1975, En: The Pharmacological Basis of Therapeutics, C 1, p. 1) . 6. EJEMPLOS 6.1. Ejemplo 1: Langerndorff Ex Vivo Este ejemplo demuestra el efecto cardioprotector de la ETC-216 profiláctica en corazones de conejos isquémicos aislados, reperfusados . Conejos Blancos de Nueva Zelanda Machos, obtenidos de Charles River pesando aproximadamente 2-3 kg se usaron en el estudio. El conejo Blanco de Nueva Zelanda macho se selecciono como el sistema de prueba adecuado para los propósitos de este estudio. El corazón de conejo reperfusado, isquémico, aislado es un modelo del infarto al miocardio humano. Tras su llegada, se asignaron a los animales números de identificación únicos. Los animales se alojaron en jaulas de acero inoxidable de acuerdo con las directivas del University of Michigan Committee on the Use and Care of Animáis. El cuidado Veterinario fue proporcionado por la University of Michigan Unit for the Laboratory Animal Medicine. La Universidad de Michigan está acreditada por la American Association of Accreditation of Laboratory Animal Health Care, y el cuidado animal usa el programa conforma a los estándares en la Guide for the Care and use of Laboratory Animáis, DEG (NH) Publ . No. 86-23. La ETC-216 es un complejo de apolipoproteína A-I Milano recombinante/l-palmitoil-2-oleoil fosfatidilcolina en una relación uno a uno en peso (FIG. 1) . Las soluciones base de ETC-216 contenían 14 mg de proteína/ml en un amortiguador de sucrosa mannitol . Como el amortiguador de sucrosa-mannitol fue incompatible con el amortiguador de Krebs-Henseleit, y para controlar cualquiera de los efectos independientes del mannitol sólo, el ETC-216 se dializó para obtener un amortiguador de respaldo comprendido de 2% de glucosa en fosfato de sodio 4 mM, pH 7.4. El ETC-216 se diluyó con amortiguador de Krebs-Henseleit para dar una concentración del fármaco de 0.45 mg/ml . El vehículo se diluyó de manera similar. La selección de la dosis fue en base a los datos históricos para las dosis usadas en los experimentos clínicos de seguridad de la dosis Fase I Humana del Esperion, donde se administraron dosis hasta de 100 mg/kg de ETC-216 a humanos, para los estudios resumidos en este protocolo una concentración de 0.5 mg/ml es aproximadamente equivalente a una dosis intravenosa de 25 mg/kg administrada a un humano. Los experimentos se condujeron usando un aparato de Langendorff (FIGS. 2 y 3) a corazones de conejos perfumados. Los conejos se desmayaron mediante dislocación cervical y los corazones se removieron rápidamente y se conectaron a una cánula para perfusión a través de la aorta. El medio de perfusión consintió de un amortiguador de Krebs-Henseleit (pH 7.4, 37°C; "KH" ) que se expuso con inuamente a una mezcla de 95% de 02/5¾ de C02 y se administró a una velocidad constante de 20-25 ml/min. Los corazones se mantuvieron controlados a ritmo a través del protocolo vía electrodos conectados al atrio derecho. Los estímulos de control del ritmo se administraron desde un generador de onda cuadrada de laboratorio (10% arriba del control del ritmo fisiológico, duración de 1 mseg, Grass 588, Quince, MA) . La arteria pulmonar se canuló con tubería Silastic™ para facilitar la recolección del efluente de la arteria pulmonar que representa el retorno venoso coronario al seno coronario. La vena cava superior e inferior y las venas pulmonares se ligaron para prevenir la pérdida de perfumado desde los vasos de otra manera cercenados. Un drenaje del ventrículo izquierdo, sonda de permisor, y globo de lates se insertaron vía el atrio izquierdo y se colocaron en el ventrículo izquierdo. El globo de látex llenado con fluido se conecto con la tubería rígida a un transductor de presión Millar Catéter para permitir la medición de la presión desarrollada por el ventrículo izquierdo. El globo intraventricular se expandió con agua destilada para alcanzar una presión diastólica final del ventrículo izquierdo, de línea base de aproximadamente 10 mmHg. La presión de perfusión coronaria se midió con un transductor de presión conectado a un brazo lateral de la cánula aórtica. Como la velocidad de la perfusión de la arteria coronaria se mantuvo constante, las alteraciones en la presión de perfusión de la arteria coronaria sirvieron como un indicador del cambio en la resistencia de la arteria coronaria. Todas las variables hemodinámicas se monitorearon continuamente usando una grabadora multicanal tal como Grass Polygraph 79D (Quince, MA) interconectada a un Sistema de Adquisición de Datos Por Programas POlyview. Los corazones se mantuvieron a 37 °C a través del periodo experimental, encerrando los corazones en una cámara de vidrio de lumen doble con temperatura regulada y haciendo pasar el medio de perfusión a través de un recipiente calentado y entregado al sistema . Se usaron dos grupos de Tratamiento para los Procedimientos Experimentales como se muestra abajo.

Grupo Tratamiento Sustancia de Concfmg/ml) Prueba 1 Isquemia y Q Reperrusion 2 Isquemia y ETC-216 0.45 Reperrusion Los corazones se trataron experimentalmente como se muestra en la FIG. 4. Los corazones aislados se estabilizaron bajo condiciones normoxicas (nivel normal de oxígeno) por 20 minutos antes de la inducción de la isquemia global. Durante, los primeros 10 minutos de este periodo los corazones se expusieron al amor iguador de KH sólo, y después por 10 minutos adicionales al amortiguador de KH conteniendo ya sea el vehículo (Grupo 1) o ETC-216 (Grupo 2) . Los corazones se sometieron entonces a un periodo de 30 minutos de isquemia seguido por un periodo de 60 minutos de reperfusión con amortiguador de KH conteniendo el vehículo (Grupo 1) o ETC-216 (Grupo 2) . La inducción de la isquemia global se logró deteniendo el flujo de perfusado al corazón, y la reperfusión del corazón se logró encendiendo la bomba para restablecer la velocidad de flujo original. Las alícuotas del efluente de la arteria pulmonar se recolectaron de los corazones en todos los grupos en la línea base (pre-isquemia) , e inicialmente cada minuto hasta los 5 minutos, y cada 5 minutos después durante el periodo de reperfusión. Los efluentes se analizaron por la concentración de creatina cinasa (FIG. 5) , un índice de la lesión del tejido. La creatina cinasa es una enzima citosólica liberada desde las células dañadas irreversiblemente. Las funciones cardiacas se monitorearon continuamente (FIG. 6) . Se hicieron determinaciones del punto final cardiaco por: 1 -Electrocardiograma- velocidad del corazón (controlado a ritmo) para detectar la presencia o ausencia de arritmias; 2 -La presión desarrollada por el ventrículo izquierdo (FIG. 7) (los datos se muestran como el promedio + el error estándar del promedio para el número indicado de corazones en cada grupo) ; 3-dP/dt del ventrículo derecho 4-presión diastólica final del ventrículo izquierdo (FIG. 8) (los datos se muestran como el promedio ± del error estándar del promedio para el número indicado de corazones en cada grupo) ; 5-Presión de perfusión coronaria (FIG. 9) (los datos se muestran como el promedio ± del error estándar del promedio para el número indicado de corazones en cada grupo) ; 6-recolección del drenaje linfático para determinar la liberación de creatina cinasa del tejido antes y después de la perfusión (FIG. 5) . A la conclusión del protocolo experimental las biopsias cardiacas de hasta cinco corazones de cada grupo de tratamiento se sumergieron inmediatamente en nitrógeno líquido y se almacenaron a -80°C para el análisis de hidroperoxidos de lípido subsecuente. Las muestras homogeneizadas se normalizaron al contenido de proteína antes de conducir un ensayo por peróxidos de lípidos (FIG. 10) . El ETC-216 redujo los hidroperoxidos de lípidos cardiacos en 46% en este ejemplo . Tras la completación del protocolo diseñado, dos corazones de cada grupo se preusaron por 3 minutos con 2.5% de glutaraldehído y 1% de LaCl3 en amortiguador de calcodilato de sodio 0.1 M (pH 7.4). El LaCl3 osmofílico bajo condiciones normales se retiene en la unión del compartimiento vascular con la pared de los vasos y sirve como un indicador de la integridad de los vasos sanguíneos. La extravasación del LaCl3 en el espacio extravascular se uso para indicar la presencia de lesiones vasculares. Las muestras de tejido del miocardio ventricular izquierdo se removieron y cortaron en segmentos de aproximadamente 1 mm de un lado. Las muestras se fijaron durante 2 horas adicionales a 40°C en el amortiguador mencionado arriba. Después, las muestras se deshidrataron en una serie de etanol y se embebieron en E bed-812 (Electrón Microscopy Sciences, Ft, Washington, PA) . Los bloques se seccionaron con un ultramicrótomo Reichert y se colocaron sobre rejillas de cobre revestidas con formvar seguido por teñido con acetato de uranilo al 4%. Las secciones se observaron con un microscopio electrónico Phillips CM-10. Se uso microscopía electrónica de transmisión para examinar los especímenes miocárdicos de cada uno de los grupos de estudio. Las imágenes muestran que las características estructurales de los carcomeros de los corazones tratados con vehículo están erradicadas y están presentes bandas de contractura. Las mitocondrias están marcadamente hinchadas con cristales rotos y cuerpos de inclusión osmofílieos. En los corazones tratados con ETC-216, la estructura del sarcomero es relativamente normal y las mitocondrias parecen intactas sólo con inchamiento mínimo. La virtual ausencia de bandas de contracción representa un marcado contraste con las observadas en los corazones de control. La habilidad de la ETC-216 para prevenir la necrosis de bandas de contracción es consistente con la observación de que los corazones pretratados con ETC-216 no exhiben un incremento en LVEDP tras la reperfusión. Tanto la necrosis de bandas de contracción y el incremento sostenido en LVEDP se asocian con un incremento en la sobrecarga de calcio intracelular y el daño celular irreversible. La presencia de disolución de micofibrillas en las bandas Z, y la ruptura de la arquitectura microfibrilar son indicativas de daño extensivo. Otros daños morfológicos esperados incluyen crestas y matrices de las mitocondrias desintegradas así como cuerpos electrónicos densos, grandes en las mitocondrias. El factor de magnificación fue de 7900x en ambas micrografías (FIG. 11) . El análisis de las concentraciones de creatina cinasa (FIG. 5) indica que la fase rápida de la liberación de la enzima en el fluente venoso ocurre en el momento de la reperfusión. Los corazones de control (tratados con vehículo) mostraron una marcada liberación de la creatina cinasa en comparación con los corazones tratados con ETC-216. además, los corazones tratados con ETC-216 mostraron presión diastólica final reducida del ventrículo izquierdo (FIGS. 6 y 8), presión elevada desarrollada en el ventrículo izquierdo (FIG. 7) , presión de perfusión disminuida de la arteria coronaria (FIG. 9) e hidroperoxido de lipido (LHP) disminuidos en comparación con los corazones de control. Además, el ETC-216 protege contra los cambios morfológicos en el miocardio. Estos resultados demuestran los efectos protectores del ETC-216 cuando se administra antes del evento isquémico. 6.2. Ejemplo 2: Administración aguda y crónica en corazones de conejo ocluidos-reperfusados con LAD a 100 mg/kg este ejemplo demuestra los efectos cardioprotectores del ETC-216 en un modelo in vivo de isquemia y reperfusión al miocardio regionales. Los conejos Blancos de Nueva Zelanda se seleccionaron como el sistema de prueba apropiado para los propósitos de este estudio a causa de su carencia de suministro de sangre colateral al corazón haciendo necesario por lo tanto emplear determinaciones del flujo sanguíneo al miocardio. En este estudio, se usaron diferentes regímenes de dosificación en grupos separados de conejos que se sometieron a 30 minutos de isquemia regional al miocardio mediante ligación y reperfusión de la arteria coronaria. Se usaron dos regímenes de dosificación. En el primer protocolo, el ETC-216 se probó como un Pretratamiento individual en el cual el corazón se expuso a 100 mg/kg del agente justo antes del inicio de la isquemia regional, en tanto que en el segundo protocolo, se administraron dos pretratamientos de 100 mg/kg (un día antes e inmediatamente después) del ataque de isquemia regional. Estos protocolos se muestran en la (FIG. 12) . Este estudio se enfoca sobre los efectos del ETC-216 como un agente cardioprotector en un estudio in vivo en el cual los corazones de conejos se sometieron a isquemia regional al miocardio por un periodo de 30 minutos, seguido por reperfusión durante un mínimo de cuatro horas. Este ejemplo demuestra que el ETC-216 es un agente cardioprotector cuando se da después del evento isquémico . Los procedimientos usados en este estudio están de acuerdo con las directivas del University of Michigan Committee on the Use and Care of Animáis. El cuidado Veterinario fue proporcionado por la University of Michigan Unit for the Laboratory Animal Medicine. La Universidad de Michigan . está acreditada por la American Association of Accreditation of Laboratory Animal Health Care, y el cuidado animal usa el programa conforme a los estándares en la Guide for the Care and use of Laboratory Animáis, DEG (NH) Publ . No. 86-23. Conejos Blancos de Nueva Zelanda obtenidos de Charles River pesando aproximadamente 2-3 kg se usaron en el estudio. Tras su llegada, se asignaron a los animales números de identificación únicos. Los conejos se anestesiaron con una mezcla de xilazina (3.0 mg/kg) y cetamina (35 mg/kg) intramuscularmente ; seguido por una inyección intravenosa de pentobarbital de sodio (30 mg/kg) . La anestesio se mantuvo con inyecciones intravenosas de una solución de pentobarbital (30 mg/ml) . Un tubo endotraqueal doblado se insertó, y los animales se colocaron sobre una ventilación de presión positiva con aire ambiental. La vena yugular derecha se aisló y se canuló para la administración de ETC-216 o un volumen igualado de vehículo. Se aisló la arteria carótida derecha, y se instrumentó con un transductor de presión de micropunta de catéter Millar™ colocado inmediatamente arriba de las válvulas carótidas para monitorear la presión sanguínea aórtica y para obtener la primera derivada del pulso de presión (dP/dt) . Un electrocardiograma líder II se monitoreó a través del experimento. Se llevaron a cabo una toracotomia y pericardiotomia, seguidas por la identificación de la arteria coronaria descedente anterior izquierda (LAD) . Una sutura de seda (3.0; Deknatel, Fall River, MA) detrás se hizo pasar detrás de la arteria y ambos extremos de la sutura se insertaron en una tubería de polietileno de longitud corta. La presión descendente en el tubo de polietileno mientras se ejercía tensión hacia arriba sobre los extremos libres de la sutura, comprime la arteria coronaria inferior resultando en la oclusión del vaso y la isquemia regional al miocardio. La oclusión se mantuvo por 30 minutos después de los cual se liberó la tensión sobre la sutura y la tubería de polietileno se retiro permitiendo a .la reperfusión ocurrir. La isquemia regional del miocardio se verificó por la presencia de una región en el área de distribución del vaso ocluido y por los cambios en el electrocardiograma consistente con la presencia de isquemia regional del miocardio transmural (elevación del segemento ST) . La determinación del punto final principal consistió de mediciones del tamaño del infarto como un por ciento del ventrículo izquierdo y como un por ciento del área en riesgo (FÍGS. 13 y 14) . En la conclusión del estudio, se proporcionó a los conejos, mientras estaban anestesiados, heparina (1,000U intravenosamente) después de los cual se eutanizaron. Se cortó el corazón y después se preparó para ser perfusado vía la aorta en un aparato de Langendorff con Amortiguador de Krebs-Henseleit a un flujo constante de 22-24 ml/min. Los corazones se lavaron con amortiguador por 10 minutos para asegurar que el tejido estaba limpio. Cuarenta y cinco mililitros de una solución al 1% de cloruro de trifeniltetrazolio (TTC) en amortiguador de fosfato (pH 7.4) se perfusaron a través del corazón. La TTC demarca el miocardio no infartado dentro del área en riesgo con un color rojo ladrillo, indicando la presencia de precipitado de formazan resultante de la reducción de TTC por las coenzimas presentes en el tejido miocárdico viable. El tejido lesionado irreversiblemente, carente de deshidrogenasas citosolicas es incapaz de formar precipitado de formazan y parece amarillo pálido. La arteria descendente anterior izquierda (LAD) se ligó en una posición idéntica al área ligada durante la inducción de la isquemia regional del miocardio. La bomba de reperfusión se detuvo y 2 mi de solución al 0.25% de Azul de Evans se inyectaron lentamente a través de un orificio del brazo lateral conectado a la cánula aórtica. En tinte se hizo pasar a través del corazón por 10 segundos para asegurar a distribución equitativa del tinte. La presencia de Azul de Evans se usó para demarcar el tejido del ventrículo izquierdo que no estuvo sometido a la isquemia regional, en oposición a la región de riesgo. El corazón se removió del aparato de perfusión y se cortó en secciones transversales a ángulos rectos al eje vertical. El ventrículo derecho, el ápice y el tejido atrial se desecharon. Ambas superficies de cada sección transversal se trazaron sobre hojas de acetato limpias. Las imágenes se fotografiaron y agrandaron. Se exploraron las fotocopias y se descargaron en el Adobe Photoshop (Adobe Systems Inc . , Seattle, WA) . Las áreas del ventrículo izquierdo normal (NLV) , sin regiones de riesgo, el área en riesgo, y el infarto se determinaron calculando el número de píxeles ocupando cada área usando el Programa Adobe Photo Shop . El área total en riesgo se expresa como el porcentaje del ventrículo izquierdo, el tamaño del infarto se expresa como el porcentaje del área en riesgo (ARR) (FIG. 13 y 14) . El por ciento de infarto del área en riesgo, el por ciento de infarto del ventrículo izquierdo, y el por ciento de área en riesgo del ventrículo izquierdo en los conejos tratados una vez (es decir, el tratamiento agudo) o tratados dos veces (es decir, el tratamiento crónico) con ETC-216 (100 mg/kg) o un volumen equivalente de vehículo. Los datos son el promedio ± del error estándar del promedio para n=6 animales por grupo. Los asteriscos en la FIG. 14 indican diferencia significativa del control respectivo. Se hicieron otras determinaciones del punto final. El tamaño del infarto final puede estar influenciado por incrementos y decrementos en la utilización del oxígeno miocárdico. Dos importantes, determinantes de la compensación del oxígeno miocárdico son la velocidad del corazón y la carga de presión. El producto de presión de velocidad (velocidad del corazón x presión sanguínea arterial media) proporciona una aproximación de un cambio en los requerimientos de oxígeno miocárdico por el corazón. Por lo tanto, el producto velocidad-presión se calculó para determinar si una reducción observada en el tamaño del infarto se correlaciona con el cambio en el producto de velocidad presión. La velocidad del corazón y la presión aórtica media se monitorearon continuamente a través del protocolo experimental y los datos se usaron para calcular el producto velocidad presión en puntos de tiempo específicos en el estudio para cada uno de los grupos experimentales. El por ciento de área en riesgo del ventrículo izquierdo disminuyó en los corazones tratados con ETC-216 cuando se comparan con los controles tanto para la administración crónica y aguda, sin embargo, los resultados no fueron estadísticamente significativos. El por ciento del infarto del área en riesgo y el por ciento de infarto del ventrículo izquierdo fueron disminuidos significativamente en los corazones tratados con ETC-216 en comparación con los controles tanto para la administración aguda y crónica. Estos resultados indican que el ETC-216 es cardioprotector cuando se administra tanto agudamente y crónicamente. La actividad de la creatina cinasa del tejido miocárdico y las regiones sin riesgo pueden ser comparadas. El principio del ensayo se basa en un incremento en la absorbancia de la mezcla de reacción a 340 nm como resultad de la reducción equimolar de NAD a NADH. La velocidad del cambio en la absorbancia es directamente proporcional a la actividad de la creatina cinasa. Una unidad se define como la cantidad de enzima que produce un micromol de NADPH por minuto bajo las condiciones del procedimiento de ensayo. El tejido miocárdico sometido a un periodo prolongado de deprivación del flujo sanguíneo (isquemia) sin reperfusión experimentará cambios morfológicos característicos de la necrosis junto con la presencia de células inflamatorias. La apariencia morfológica de la muerte celular inducida por la isquemia difiere de la que ocurre como resultado de la reperfusión. La última se caracteriza por bandas de contracción y se conoce como necrosis de bandas de contracción. El tejido cardiaco de cada uno de los grupos se preservó y preparó para la examinación mediante microscopía electrónica . El daño por reperfusión isquémica se asocia con la acumulación de células inflamatorias, predominantemente neutrófilos, en el área en riesgo. La mieloperoxidasa (MPO) es una enzima presente casi exclusivamente en los neutrófilos (Liu et al., J. Pharmacol . Exp. Ther. 287:527-537, 1998). Por lo tanto, se anticipa que el tejido de las regiones respectivas del corazón puede ser ensayadas por la actividad de la MPO como un indicador de la lesión. Se anticipa también que una intervención capaz de reducir la respuesta inflamatoria estaría asociada con una reducción en la actividad de la MPO en la región de riesgo reperfusada en comparación con el tejido cardiaco de la región de riesgo de los animales no tratados. Por lo tanto, el presente cambio en la actividad de la MPO (región de riesgo/sin riesgo) sería reducida en los corazones tratadas con el fármaco en comparación con los corazones tratados con el vehículo de control . Al final del experimento, se determinó la actividad de la mieloperoxidasa (MPO) en el te ido en un ensayo preliminar, no controlado, no validado. Las muestras de tejido cardiaco se obtuvieron de la región de riesgo y la región sin riesgo y se homogeneizaron en bromuro de hexadeciltrimetil amonio al 0.5% y se disolvieron en amortiguador de fosfato de potasio 50 mM, pH 6 (ver también Liu et al., 1998 J. Pharmacol . Exp . Ther. 287 : 527-537) . Los homogenados se sometieron a centrifugación a 12,500 g a 4°C por 30 minutos. Los sobrenadantes se recolectaron y se hicieron reaccionar con 0.167 mg/ml de clorhidrato de o-dianisidina (Sigma) y 0.0005 por ciento de H202 en amortiguador de fosfato de potasio 50 mM, pH 6.0. El cambio en la absorbencia se midió espectrofotometricamente a 460 nm. Una unidad de MPO se definió como aquella cantidad de enzima que hidroliza 1 mmol de H202/minuto a 25°C. Los resultados de este experimento preliminar, no presentados aquí, parecen indicar que no existieron diferencias entre los corazones tratados con ETC-216 y vehículo en términos de daño por reperfusión isquémica, sin embargo, los resultados deben aun ser validados, por ejemplo, mediante comparación de los niveles de MPO antes del el daño por reperfusión isquémica. Como se demuestra por el por ciento disminuido de infarto de área en riesgo y el por ciento de infarto del ventrículo derecho, los corazones tratados con ETC-216 fueron protegidos de el daño por reperfusión isquémica. La cardioprotección fue conferida por ambos protocolos de dosificación, es decir, el ETC-216 administrado como una dosis individual de 100 mg/kg antes del ataque de isquemia o el ETC-216 administrado en dos dosis de 100 mg/kg, una dosis dada un día antes a la isquemia y una segunda dosis dada inmediatamente antes de la isquemia. 6.3. Ejemplo 3: Determinación de la dosis efectiva mínima para la administración aguda en corazones de conejo ocluidos-reperfusados por LAD Este ejemplo demuestra la eficacia profiláctica de varias dosis de ETC-216 cuando se administran como un Pretratamiento individual justo antes del ataque de isquemia regional. El estudio en el ejemplo 2 se enfocó en los efectos del ETC-216 como agente cardioprotector en un estudio in vivo en el cual los corazones de conejo se sometieron a isquemia miocárdica regional por un periodo de 30 minutos seguida por reperfusión durante un mínimo de cuatro horas. Se usaron dos regímenes de dosificación. En el primer protocolo, el ETC-216 se probó como un Pretratamiento individual en el cual la circulación sistémica se expuso a 100 mg/kg de agente justo antes del ataque de isquemia regional, en tanto que el segundo protocolo, dos pretratamientos de 100 mg/kg se administraron antes de (un día antes e inmediatamente antes) del ataque de isquemia regional . Ambos regímenes mostraron que ya sea uno o dos tratamientos con 100 mg/kg de ETC-216 son cardioprotectores . Por lo tanto, el ETC-216 se probó como un pretratamiento individual en el cual los corazones se expusieron a dosis individuales del agente o un volumen equivalente de vehículo justo antes del ataque de isquemia regional para determinar los efectos sobre la cardioprotección . Los corazones se analizaron mediante los mismos métodos usados en el ejemplo 2. Además, se diseñó este protocolo para encontrar una dosis efectiva mínima del ETC-216 para tratar los corazones de conejo para la protección de la isquemia. Para encontrar la dosis efectiva mínima de ETC-216, se uso el mismo protocolo para el tratamiento agudo (ver, la FIG. 12) en el cual los animales recibieron tratamientos individuales ya sea de 10, 3 o 1 mg/Kg de ETC-216 o un volumen equivalente de vehículo como se muestra en la FIG. 15. El área en riesgo (AAR) o región isquémica expresada como un por ciento del ventrículo izquierdo total para el grupo de tratamiento de 10 mg/kg fue similar en el grupo de control y en el grupo de tratamiento (FIG. 16) . Los conejos tratados con 10 mg/kg de ETC-216 desarrollaron infartos más pequeños (p<0.0005) expresados como un por ciento de la AAR en comparación con los conejos tratados con el vehículo (FIG. 16) . Se observó también una reducción en el tamaño del infarto al miocardio (p<0.0001) cuando los datos se expresaron como un por ciento del ventrículo izquierdo total (FIG. 16). Resultados similares se observaron con una dosis de 3 mg/kg. La AAR expresada como un por ciento del ventrículo izquierdo total fue similar en los grupos tratados con ETC-216 y tratados con vehículo (FIG. 16) . Los conejos tratados con 3 mg/kg de ETC-216 desarrollaron infartos más pequeños (p<0.05) expresados como un por ciento del área en riesgo en comparación con los conejos tratados con vehículo (FIG. 16) . Se observó una reducción en el tamaño del infarto al miocardio (p<0.05) cuando los datos se expresaron como un por ciento del ventrículo izquierdo total (FIG. 16) . No se notaron diferencias significativas con una dosis de 1 mg/kg entre el ETC-216 y el vehículo en el tamaño de la AAR cuando se expresa como el por ciento del ventrículo izquierdo (FIG. 16) . A 1 mg/kg, no se notaron diferencias significativas entre los grupos como un por ciento de AAR (FIG. 16) y en el tamaño del infarto al miocardio expresado como un por ciento del ventrículo izquierdo total (FIG. 16) . Un resumen de los datos de cada uno de los grupos de tratamiento agudo (es decir, 100, 10, 3 y 1 mg/kg) y sus controles respectivos se muestra en la FIG. 16. La AAR del infarto fue similar en cada uno de los cuatro grupos. Entre los cuatro regímenes de dosificación, el tamaño del infarto, tanto expresado como el por ciento de la región de riesgo o el por ciento del ventrículo izquierdo, en comparación con los controles respectivos fue reducido con las dosis de ETC-216 de 100, 10 y 3 mg/Kg. En contraste, el tamaño del infarto en el grupo de animales que recibieron 1 mg/kg no difiere del observado en el grupo tratado con el vehículo respectivo. La FIG. 17 muestra los cambios temporales en el colesterol no esterificado con lipoproteína . Muestras de sangre se obtuvieron de los conejos justo antes de y periódicamente enseguida de la administración de 1 , 3, 10 o 100 mg/kg de ETC-216 o vehículo. Se muestran los perfiles de colesterol no esterificado obtenidos en las muestras temporales de suero sanguíneo representativas donde las lipoproteínas del suero se separaron sobre la base del tamaño mediante cromatografía de filtración en gel con análisis del colesterol no esterificado en línea. Nótese la elevación en el colesterol de alta densidad no esterificado a los 45 minutos después de la administración de ETC-216, especialmente a 100mg/Kg y en menor extensión a 10 mg/kg a pesar de la ausencia virtual de colesterol no esterificado en el agente de prueba ETC-216 administrado intravenosamente. Nótese también la elevación prominente retardada en el colesterol no esterificado de lipoproteí a de muy baja densidad a los 210 y 270 minutos enseguida de la administración ya sea de 10 mg/kg o 100 mg/kg de ETC-216. Nótese también que los cambios en el colesterol no esterificado de lipoproteína no fueron aparentes en la dosis de tratamiento de ETC-216 de 3 mg/kg en los puntos de tiempo evaluados, esta dosis fue cardioprotectora como se muestra en la FIG. 16. Los resultados demuestran que las dosis de 100 mg/kg, 10 mg/kg y 3 mg/kg son dosis profilácticamente efectivas de ETC-216. 6.4. Ejemplo 4: El ETC-216 previene las daño por isquemia-reperfusión cuando se administran después del ataque de la oclusión de LAD en corazones de conejo ocluidos - reperfusados Este ejemplo demuestra la eficacia del ETC-216 para prevenir o reducir el daño por reperfusión isquémica cando de administran después del evento isquémico u oclusivo. Los estudios en los Ejemplos 2 y 3 ilustran el beneficio profiláctico de tratar el músculo cardiaco antes del ataque de isquemia. Por lo tanto, para determinar si el ETC-216 podría proteger el músculo 'cardiaco después del ataque de isquemia, la LAD se ocluyó antes de la administración del agente de prueba o vehículo. En este protocolo, el ETC-216 se probó como un tratamiento individual en el cual el corazón se expuso a 10 mg/kg del agente o un volumen equivalente de vehículo administrados durante los últimos 5 minutos de la isquemia regional y continuados a través de los primeros 55 minutos de la reperfusión (FIG. 18) . La ARR o región isquémica expresada como un por ciento del ventrículo izquierdo total para el grupo de tratamiento con 10 mg/kg fue similar en el grupo de control (FIG. 9) . Los conejos tratados con ETC-216 desarrollaron infartos más pequeños (p<0.001) expresados como un por ciento de la AAR en comparación con los conejos tratados con el vehículo (FIG. 19). Se observó también una reducción en el tamaño del infarto al miocardio (p<0.0005) cuando los datos expresaron un pro ciento del ventrículo izquierdo total (FIG. 19) . Este ejemplo demuestra que un tratamiento individual administrado después de un evento isquémico, mitiga o disminuye el daño por reperfusión isquémica.

Varias modalidades de la invención han sido descritas. Las descripciones y ejemplos se destinan para ser ilustrativos de la invención y no limitantes. En realidad, será aparente para aquellas personas con experiencia en la técnica que pueden hacerse modificaciones a las varias modalidades de la invención descrita sin apartarse del espíritu de la invención o el ámbito de las reivindicaciones anexas expuestas abajo. Todas las referencias citadas aquí se incorporan por ese motivo aquí como referencia en sus totalidades.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un método para tratar o reducir el daño por reperfusión isquémica en un tejido u órgano, caracterizado porque comprende poner en contacto el tejido u órgano con una cantidad efectiva de una apolipoproteína .
2. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque la apolipoproteína no es una apolipoproteína que contiene tiol .
3. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque la apolipoproteína es una apolipoproteína que contiene tiol.
4. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque, la apolipoproteína es apoA-I, apoA-II, apoA-IV, apoA-V, apoE o una variante o fragmento de las mismas.
5. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque la apolipoproteína' es de origen humano o no humano.
6. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque la apolipoproteína es una apolipoproteína natural o sintética, o una variante o fragmento de la misma.
7. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque la apolipoproteína es una mezcla homogénea de apolipoproteínas .
8. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque la apolipoproteína es una mezcla heterogénea de apolipoproteínas .
9. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque la apolipoproteína es una apolipoproteína de longitud completa, un fragmento de una apolipoproteína natural o sintética, o una variante de los mismos.
10. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque la apolipoproteína es la apolipoproteína A-I, apolipoproteína A-I Milano o apolipoproteína A-I Paris.
11. El método de la reivindicación 10, caracterizado porque, la apolipoproteína es la apolipoproteína A-I Milano.
12. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque la apolipoproteína está en forma de un complejo que comprende la apolipoproteína y un lípido.
13. El método de la reivindicación 12, caracterizado porque el lípido comprende uno o más de fosfolípidos , colesterol, un triglicérido y un colesterol éster.
14. El método de la reivindicación 13, caracterizado porque, el fosfolípido de selecciona a partir del grupo que consiste de fosfolípidos de cadena de alquilo pequeña, fosfatidilcolina, fosfatidilcolina de huevo, fosfatidilcolina de soya, dipalmitoilfosfatidilcolina, dimiristoilfosfatidilcolina, diestearoilfosfatidilcolina , dilaurilfosfatidilcolina, l-miristoil-2 -palmitoil fosfatidilcolina, l-palmitoil-2 -miristoilfosfatidilcolina, l-palmitoil-2 -estearoilfosfatidiIcolina, 1 -estearoil-2 -palmitoilfosfatidilcolina, dioloilfosfatidilcolina, 1-palmitoil-2 -oleilfosfatidilcolina, l-oleil-2-palmitoilfosfatidilcolina, dioleilfosfatidiletanolamina , dilauroilfosfatidilglicerol , fosfatidilserina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol , fosfatidilglicerol , difosfatidilglicerol , dimiristoilfosfa idilglicerol , dipamitoilfosfatidilglicerol , diestearoilfosfatidilglicerol , dioleil osfatidilglicerol , ácido fosfatidico, ácido dimiristoilfosfatidico , ácido dipamitoilfosfatidico, dimiristoilfosfatidiletanolamina , dipalmitoilfosfatidiletanolamina , dimiristoilfosfatidilserina, dipamitoilfosfatidilserina, fosfatidilserina cerebral, esfingomielina, esfingolipidos , esfingomielina cerebral, dipalmitoilesfingomielina, diestearoilesfingomielina, galactocerebrosida, gangliosidas , cerebrosidas , (1,3) -D-manosil - ( 1 , 3 ) diglicérido , aminofenilglicósido, glicolípidos de 3 -colesteril -6 ' - (glicosiltio) hexil éter, y colesterol y derivados de colesterol .
15. El método de la reivindicación 13, caracterizado porque el fosfolípido es una fosfatidilcolina o un análogo de la misma.
16. El método de la reivindicación 15, caracterizado porque el fosfolípido es l-palmitoil-2-oleil fosfatidilcolina .
17. El método de la reivindicación 12, caracterizado porque el lípido y la apolipoproteína forman una estructura liposómica .
18. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque la apolipoproteína reduce los productos oxidaos de tejidos y órganos.
19. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque la apolipoproteína reduce la creatina cinasa de tejidos y órganos .
20. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque el método es un tratamiento terapéutico.
21. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque el método es profiláctico o preventivo.
22. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque el método reduce el daño por reperfusión isquémica.
23. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque los tejidos u órganos están en un individuo.
24. El método de la reivindicación 23, caracterizado porque el daño por reperfusión isquémica se debe al infarto al miocardio, estenosis, al menos un coágulo sanguíneo, claudicación intermitente, enfermedad arterial periférica, síndrome coronario agudo, enfermedad cardiovascular o daño muscular como resultado de la oclusión de un vaso sanguíneo.
25. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque el tejido u órgano es extracorporal.
26. El método de la reivindicación 25, caracterizado porque el te ido u órgano es un tejido u órgano transplantados .
27. El método de la reivindicación 26, caracterizado porque la apolipoproteína se pone en contacto con el tejido u órgano transplantado durante el tránsito.
28. El método de la reivindicación 26, caracterizado porque la apolipoproteína se pone en contacto con el tejido transplantado durante el transplante.
29. El método de la reivindicación 24, caracterizado porque, la apolipoproteína se pone en contacto con el tejido u órgano agudamente después de la isquemia.
30. El método de la reivindicación 23, caracterizado porque el daño por reperfusión isquémica se deben a cirugía de un individuo y poner en contacto el tej ido u órgano comprende administrar una composición farmacéutica que comprende una apolipoproteína al individuo.
31. El método de la reivindicación 30, caracterizado porque la cirugía es cirugía cardiaca.
32. El método de la reivindicación 31, caracterizado porque la apolipoproteína se administra durante la cirugía cardiaca.
33. El método de la reivindicación 30, caracterizado porque la cirugía cardiaca es cirugía de derivación de la arteria coronaria o angiografía coronaria transluminal percutánea .
34. El método de la reivindicación 23 caracterizado porque se reduce la necesidad de cirugía de derivación de la arteria coronaria.
35. El método de la reivindicación 23, caracterizado porque se reduce la necesidad de la angiografía coronaria transluminal percutánea.
36. El método de la reivindicación 30, caracterizado porque se reduce el tiempo de recuperación quirúrgico.
37. El método de la reivindicación 23, caracterizado porque la estenosis es causada por uno o más vasos sanguíneos enfermos .
38. El método de la reivindicación 23, caracterizado porque la estenosis se induce mecánicamente ocluyendo uno o más vasos sanguíneos .
39. El método de la reivindicación 23, caracterizado porque la lesión es causada por uno o más coágulos sanguíneos.
40. El método de la reivindicación 39, caracterizado porque, el coagulo sanguíneo es causado por una ruptura de placa .
41. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque la lesión es a un músculo.
42. El método de la reivindicación 41, caracterizado porque el músculo es el músculo cardiaco.
43. El método de la reivindicación 41, caracterizado porque el músculo es músculo esquelético.
44. El método de la reivindicación 41, caracterizado porque el músculo es músculo liso.
45. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque, la lesión es a un órgano.
46. El método de la reivindicación 45, caracterizado porque el órgano es el corazón, pulmones, ríñones, baso, hígado o cerebro.
47. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque, la apolipoproteína está en forma de una relación 1:1 de apolipoproteína A-I Milano y 1 -palmitoil -oleoil fosfatidilcolina .
48. El método de la reivindicación 11, caracterizado porque la apolipoproteína se administra parenteralmente.
49. El método de la reivindicación 23, caracterizado porque la apolipoproteína se administra intravenosamente, intraarterialmente , pericardialmente, perivascularmente , o en las arterias coronarias.
50. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque comprende además administrar un agente trombolítico.
51. El método de la reivindicación 50, caracterizado porque el agente trombolítico es el activador de plasminogenos del tejido (TPA) , estreptocinasa , anistreplasa, reteplasa o urocinasa .
52. El método de la reivindicación 1, caracterizado porque comprende además, administrar un anticoagulante o agente antiplaquetas.
53. El método de la reivindicación 53, caracterizado porque el agente es aspirina, clopidogrel o heparina .
54. Un método para prevenir o tratar una condición asociada con la deprivación de oxígeno seguida por suministro incrementado de oxígeno a un tejido u órgano en necesidad del mismo, caracterizado porque, comprende poner en contacto el tejido u órgano con una cantidad efectiva de una apolipoproteína .
55. El método de la reivindicación 54, caracterizado porque la condición asociada con la deprivación de oxígeno es la activación de neutrofilos .
56. El método de la reivindicación 54, caracterizado porque la condición asociada con la reprivación de oxígeno es la producción de mieloperoxidasa .
57. El método de la reivindicación 54, caracterizado porque el método reduce la severidad de la condición asociada con la deprivación de oxígeno.
58. El método de la reivindicación 54, caracterizado porque, la apolipoproteína se pone en contacto con el tejido u órgano agudamente después de la deprivación de oxígeno.