PREPARACIONES PARA LA APLICACIÓN TÓPICA DE SUBSTANCIAS ANTIANDRÓGENAMENTE ACTIVAS La alopecia andrógena es la forma más común de pérdida de cabello, que puede ocurrir tanto en hombre como en mujeres. El término "alopecia andrógena" significa estados de deficiencia de cabello usualmente ocasionados por una hipersensibilidad genéticamente determinada de la raiz del cabello a 5oc-dihidrotestosterona (DHT) . Un ejemplo tipico de alopecia andrógena es la calvicie común en hombres. Sin embargo, la alopecia andrógena también puede ocurrir en mujeres de edad sexualmente madura. Un requisito previo del tratamiento de pérdida de cabello andrógena es la interrupción temprana de los procesos patógenos que conducen a la degeneración del folículo de cabello. Para lograr la normalización del ciclo de cabello, es decir, una prolongación de la fase de crecimiento del cabello, es necesario reducir el estímulo de los receptores de DHT en la papila dérmica {raíz del cabelló) , es decir, la zona de crecimiento del tallo de cabello. Son apropiados en principio para este propósito receptores de bloqueo de andrógeno (DHT) y reducción de la cantidad biológicamente activa de andrógeno en la papila dérmica de los folículos . Si las endocrinopatías se eliminan y medicamentos que contienen testosterona u otras substancias que tienen actividad andrógena se discontinúan, es necesario inhibir el estimulo andrógeno en el órgano de meta. Consecuentemente, para lograr este objetivo, dos formas son teóricamente concebibles : en primer lugar inhibición de actividad de 5oc-reductasa y de esta manera reducción de la conversión de testosterona hacia 5oc-dihidrotestosterona, por ejemplo con estrógeno o inhibidor de 5a-reductasa, y en segundo lugar bloqueo de la proteina receptora sensible a la dihidrotestosterona, por ejemplo mediante antiandrógenos . Se espera que la segunda manera sea más efectiva debido a que no ocurre acumulación de testosterona, cuya actividad es más débil que aquella de DHT pero todavía es pronunciada. Puesto que todos los procedimientos terapéuticos para alopecia andrógena están dirigidos contra el efecto andrógeno, el uso sistémico del mismo es posible para mujeres de edad maternal solamente con contracepción simultánea. Después de la introducción del anticontraceptivo oral se derivó que el curso de alopecia andrógena y sus síntomas concomitantes es influencian favorable o desfavorablemente dependiendo del producto administrado, ya se estrógeno superior o teniendo un efecto antiadrógeno parcial o que tiene un efecto andrógeno residual. En ausencia de otra alternativa libre de riesgos de mayor actividad, a la fecha las lociones para el cabello que contienen estrógeno se han prescrito para tratamiento tópico de alopecia andrógena en hombre. En mujeres, esta terapia local se recomienda como medida de soporte, y se pone énfasis principal en el tratamiento sistémico con una combinación de una progestina que tiene un efecto antiandrogeno parcial y un estrógeno. La alopecia andrógena masculina además se puede tratar sistémicamente con la finasterida inhibidora de 5oc-reductasa, aún cuando con éxito limitado (Van Neste y col., Birg. J.Dermatol. 143, 804-10, 2000; McClellan & Markham, Drugs, 57, 111-26, 1999) . En el caso de terapia local, todos los pacientes son instruidos de tratar la región del cuero cabelludo en la que todavía hay presente cabello, y no las áreas que ya están calvas. En muchos casos es posible por estas medidas para aliviar o detener los episodios de pérdida de cabello. La regeneración de folículos de cabello que ya se han atrofiados (calvicie) no es posible. Los antiandrogenos tópicamente activos se describen en la patente francesa 2 693 461 y de E.Ü.A. 5,411,981 ( 4- [ 3- ( 4-hidroxibutil ) -4 , 4-dimetil-2 , 5-dioxo-l-imidazolidinil
-2- (trifluorometil)benzonitrilo) , pero actualmente todavía no están generalmente disponibles para los propósitos de terapia. Ambas clases de substancias muestran después de administración tópica una afinidad de enlace elevada para el receptor de andrógeno de la raíz de cabello y una ausencia virtual de actividad sistémica. Debido a la teratogenicidad, intrínseco a estas substancias, de antiandrógenos que tienen una influencia sobre diferenciación de sexo en la última etapa de preñez, dichas substancias no se pueden usar en la forma de lociones para el cabello hidroalcohólicas convencionales debido a que ocurren precipitados de la substancia en el sitio de aplicación después de evaporación del solvente, que está asociada con el riesgo toxicólogo de transferencia de la substancia a mujeres embarazadas. Además, la liberación retrasada de ingrediente activo durante un período prolongado para evitar concentraciones sistémicas elevadas de ingrediente activo, y la ocurrencia asociada con la misma, de efectos antiandrógenos sistémicos, no se asegura por preparaciones convencionales para aplicación al cuero cabelludo . A fin de poder proporcionar ingredientes antiandrógenos activos para terapia segura y efectiva en las patentes arriba mencionadas, por lo tanto fue necesario encontrar formulaciones que no tienen las desventajas descritas de composiciones convencionales para tratar el cuero cabelludo. El objeto se resuelve mediante las preparaciones de la invención que comprenden uno o más derivados antiandrogenos de la fórmula í y nanoparticulas de lipido o una nanoemulsión . La preparación de la invención es ventajosa debido a que las nanoparticulas de lipido y la nanoemulsión migran de preferencia a los folículos de cabello, y los derivados antiandrogenos de la fórmula I están conectados de manera suficientemente firme a los lipidos (solución, adsorción estable) y luego penetran en el folículo de cabello, mediante esterasas, para proporcionar los antiandrogenos activos. Además, las preparaciones de la invención impiden la precipitación no deseada de los antiandrogenos en el sitio de aplicación. Una contaminación de terceras partes se impide también por la buena miscibilidad de los lipidos portadores y de los lipidos epidérmicos . La conexión muy estrecha con los lipidos de piel endógena excede marcadamente a los agentes tópicos convencionales (crema, ungüento) . La invención, por lo tanto, se relaciona con una preparación farmacéutica que comprende cuando menos un tipo de nanoparticulas de lipido y por lo menos un compuesto de la fórmula I .
(i) y/o una forma estereoisomérica del compuesto de la fórmula I y/o una sal fisiológicamente tolerada del compuesto de la fórmula I, en la que Rl es - (C5-C17) -alquilo o
- (C5-C17) -alquenilo . Un aspecto adicional de la invención se relaciona con una preparación farmacéutica que comprende compuestos de la fórmula y, en la que Rl es - (C11-C15) -alquilo o
- (C11-C15) -alquenilo. Un aspecto adicional de la invención se relaciona con una preparación farmacéutica que comprende el compuesto de la fórmula II
Las preparaciones de la invención se distinguen principalmente por la capacidad de acumular el ingrediente activo en el folículo de cabello. Ventajas adicionales de la preparación de la invención que se deben mencionar son buena adhesión a la piel y protección del ingrediente activo de procesos de degradación en la forma de droga. Esto asegura que las concentraciones de antiandrógeno terapéuticamente efectivas se alcancen en el órgano de meta - la raíz. del cabello, durante un período prolongado sin concentraciones transientemente elevadas que ocurren en la sangre, que por su naturaleza conducen a esfuerzo sistémico para el paciente. Un aspecto adicional de la invención se relaciona con compuestos novedosos de la fórmula I
y/o una forma estereoisomérica del compuesto de la fórmula I y/o una sal fisiológicamente tolerada del compuesto de la fórmula I, en donde Rl se selecciona de - (C5-Ci7) -alquilo o
- (C5-Cn) -alquenilo. Un aspecto adicional de la invención se relaciona con un compuesto de la fórmula' I, en la que Rl es
- (C11-C15) -alquilo o - (Qu-Cis) -alquenilo . Un aspecto adicional de la invención se relaciona con el compuesto de la fórmula II
El término (C5-Cn ) -alquilo" significa radicales hidrocarburo cuya cadena de carbono es cadena recta o ramificada y comprende de 5 a 17 átomos de carbono, por ejemplo pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, 2, 3-dimetilbutilo, neohexilo, heptilo, octanilo, nonanilo, decanilo, dodecanilo, pentadecanilo o heptadecanilo . El término " (C5-Ci7) -alquenilo" significa radicales hidrocarburo como los radicales (C5-C17) -alquilo arriba mencionados cuya cadena de carbono es cadena recta o ramificada y comprende de 5 a 17 átomos de carbono, y que comprenden adicionalmente 1, 2 o 3 enlaces dobles, dependiendo de la longitud de cadena. Los antiandrógenos son conocidos y se pueden preparar mediante procesos conocidos de la literatura (EUA 5,411,981). Un aspecto adicional de la invención se relaciona con un proceso para preparar el compuesto de la fórmula I y/o de una forma estereoisomérica del compuesto de la fórmula I y/o "de una sal fisiológicamente tolerada del compuesto de la fórmula I, que comprende a) hacer reaccionar un compuesto de la fórmula III
- (III)
con un ácido graso activado de la fórmula IV
en la que Rl es como se define en la fórmula I, y X es un radical halógeno, para proporcionar un compuesto de la fórmula I, o b) fraccionar un compuesto de la fórmula y que se ha preparado mediante el proceso a) y que, debido a su estructura química, ocurre en formas enancioméricas, mediante formación de sal con ácidos o bases de enanciopuro, fases estacionarias de cromatografia o quirales o derivación usando compuestos quirales tales como aminoácidos, separación de los diasterómeros obtenidos de esta manera, y eliminación de los grupos quirales, hacia los enanciómeros puros, o c) ya sea aislar el compuesto de la fórmula I que se ha preparado mediante el proceso a) en forma libre, o en los casos en donde están presentes grupos acidicos o básicos, convertirlo en sales fisiológicamente toleradas. Las reacciones ocurren por ejemplo haciendo reaccionar un cloruro ácido con el grupo hidroxilo alcohólico en presencia de una base, por ejemplo trietilamina, y de un solvente orgánico, por ejemplo cloroformo. El producto de reacción se purifica mediante cromatografia. En el paso b) del proceso, el compuesto de la fórmula I, si ocurre en forma diastereoisomérica o enanciomérica y resulta como mezclas de las mismas en la síntesis seleccionada, separados hacia los estereoisómeros puros, ya sea mediante cromatografía o un material de soporte opcionalmente quiral o, si los compuestos racémicos de la fórmula I son capaces de forman sales, mediante cristalización fraccional de las sales diastereoméricas formadas con una base o ácido ópticamente activo como auxiliar. Los ejemplos de fases estacionarias apropiadas para separación cromatográfica de capa delgada o columna de enanciómeros son soportes de gel de sílice modificados
(llamados fases Pirkle) y carbohidratos de alto peso molecular tales como triacetilcelulosa . Los métodos cromatográficos de gas en fases estacionarias quirales también se pueden usar para propósitos analíticos después de derivación apropiada conocida por el trabajador experto. Para separar enanciómeros de los ácidos carboxílicos racémicos, se forman sales diastereoméricas que difieren en solubilidad utilizando una base ópticamente activa, usualmente disponible en el comercio, tal como (-) -nicotina,
(+) — y (-) -feniletilamina, bases de quinina, L-lisina o L- y D-arginina. El componente menos soluble se aisla como sólido, el diastereómero más soluble se deposita del licor madre, y los enanciómeros puros se obtienen de las sales diastereoméricas de esta manera. Es posible de la misma forma en principio convertir los compuestos racémicos de la fórmula I que contienen un grupo básico tal como un grupo amino con ácidos ópticamente activos tales como ácido (+) -canfor-10-sulfónico, ácido D- y L-tartárico, ácido D- y L-láctico y ácido (+) y (- } -mandélico hacia enanciómeros puros . Los compuestos quirales que contienen alcohol o funciones amina también se pueden convertir con aminoácidos de enanciopuro apropiadamente activados o, en donde sea apropiado, N-protegidos hacia los esteres o amidas correspondientes, o inversamente ácidos carboxilicos quirales se pueden convertir con aminoácidos de enanciopuro carboxilo-protegido hacia las amidas o con ácidos hidroxi carboxilicos de enanciopuro tales como ácido láctico hacia los ésteres quirales correspondientes. La quiralidad del aminoácido o residuo de alcohol introducido en forma enenciopura puede luego utilizarse para separar los isómeros llevando a cabo una separación de los diastereómeros que están ahora presentes mediante cristalización o cromatografía en fases estacionarias apropiadas, y luego eliminando la fracción quiral incluida por métodos apropiados. Los productos acídicos o básicos del compuesto de la fórmula I pueden existir en la forma de sus sales o en forma libre. Se da preferencia a sales farmacológicamente apropiadas, v.gr., sales de metal alcalino o metal alcalino térreo, e hidrocloruros, hidrobromuros, sulfatos, semisulfatos, todos los fosfatos posibles, y sales de aminoácidos, bases naturales o ácidos carboxilicos . Las sales fisiológicamente toleradas se preparan de compuestos de la fórmula I capaces de formar sales, incluyendo sus formas estereoisoméricas, como en el paso c) del proceso de una manera en si conocida. Los compuestos de la fórmula I forman con reactivos básicos tales como hidróxidos, carbonatos, bicarbonatos, alcoholados y amoniaco o bases orgánicas, por ejemplo, trimetil- o trietilamina, etanolamina o trietanolamina o bien aminoácidos básicos, por ejemplo lisina, ornitina o arginina, sales de metal alcalino estables, metal alcalino férreo u opcionalmente sales de amonio substituido. Cuando los compuestos de la fórmula I tienen grupos básicos, las sales de adición de ácido estables también se pueden preparar con ácidos fuertes. Son apropiados para este propósito ambos ácidos inorgánicos y orgánicos, tales como ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, fosfórico, metansulfónico, bencensulfónico o p-toluensulfónico, 4-bromobencensulfónico, ciclohexilsulfámico, trifuorometilsulfónico, acético, oxálico, tartárico, succínico o trifluoracético. La invención también se relaciona con medicamentos que tienen un contenido efectivo de cuando menos un compuesto de la fórmula I y/o una sal fisiológicamente tolerada del compuesto de la fórmula I y/o una forma opcionalmente estereoisornérica del compuesto de la fórmula I, junto con un portador farmacéuticamente apropiado y fisiológicamente tolerado, aditivo y/u otros ingredientes activos y excipientes . Un aspecto adicional de la invención se relaciona con un proceso para producir la preparación de la invención, que comprende homogeneización de alta presión del compuesto de la fórmula I en una solución de lipido/agente tensioactivo caliente, la inclusión del compuesto de la fórmula I ocurriendo, y subsecuentemente enfriando. Los resultados de enfriamiento en una dispersión de partículas de lípido sólidas comprendiendo el compuesto de la fórmula I . El tamaño de las partículas de lípido es menos de 1 um. Un aspecto adicional de la invención se relaciona con un proceso para producir la preparación de la invención, que comprende homogeneización a presión elevada del compuesto de la fórmula 1 con lípidos que son líquidos a temperatura ambiente.' Mediante temperatura ambiente se da a entender a este respecto temperaturas de 18 °C a 25°C. Los lípidos que se pueden emplear son, por ejemplo, Migliol. Este proceso de producción conduce a las llamadas nanoemulsiones que difieren de las nanopartículas de lípido sólidas a través del uso de lípidos que son líquidos a temperatura ambiente (v.gr., Migliol) en lugar de los sólidos. En general, las preparaciones de la invención se producen de una manera en sí conocida incorporando los compuestos de la fórmula I hacia las partículas mediante homogeneización a presión elevada. Para este propósito, un agente tensioactivo (v.gr., poloxámero 188) y agua, y el compuesto de la fórmula I y el lípido, se pesan por ejemplo hacia dos recipientes. Ambos recipientes se calientan en un baño de agua a la temperatura a la que la homogeneización en caliente va a ocurrir. Esta temperatura es usualmente cuando menos 10°C por encima del punto de fusión del lípido. El lípido se licúa durante esto. El compuesto de la fórmula I se disuelve en la fusión del lípido. Después de que las soluciones han alcanzado aproximadamente la temperatura del baño de agua, la solución de agente tensioactivo se añade a la solución de lípido del compuesto de la fórmula I. Esta mezcla se preemulsiona con un mezclador de rotor-estator (por ejemplo Ultra-Turrax) y luego se homogeneiza usando un homogeneizador de alta presión (v.gr., EmulsiFex-B3, Avestin; LAB 40, APV-Gaulin) (v.gr., 3 ciclos a 500 bar) . Después del proceso de producción, la nanodispersión de lípido se enfría en un baño de agua a, por ejemplo, 22°C, después de los cual el lípido se cristaliza para formar nanopartxculas de lípido. Las nanopartículas de lípido consisten de una fase de lípido sólida que se dispersa en una fase acuosa que contiene emulsionante. Los lípidos fisiológicamente bien tolerados se emplean como fase de lipido, por ejemplo behenato de glicerilo o palmitoestearato de glicerilo y/o fosfatidiletanolamina, con los que el compuesto de la fórmula I está en forma asociada después de que se han formado las partículas de lipido. La adición del agente tensioactivo sirve para estabilizar la dispersión de nanoparticula de lipido. El diámetro de partícula promedio de nanopartículas de lipido está en la escala de 50 nm a 1, 000 nm, frecuentemente en la escala de 200 nm a 400 nm. Las preparaciones de la invención se distinguen principalmente por transporte programado del compuesto de la fórmula I hacia los folículos de cabello y por liberación hecha lenta del compuesto de la fórmula I . Las preparaciones farmacéuticas son de preferencia preparaciones líquidas tales como lociones para el cabello o tónicos para el cabello, que pueden comprender como ingredientes principales agua y lípidos tales como Precirol, Compritol, Monosteol, Imwitor (monoestearato de glicerol), Softisan (aceite de palma hidrogenado) , migliol (ácido cáprico/tirglicérido] o fosfatildietanolamina, y agentes tensioactivos (v.gr., poloxámero) , pero también alcoholes de (Ci-C6) acuosos tales como por ejemplo, etanol, propanol, butanol, pentanol, hexanol o isopropanol, también lociones o preparaciones semisólidas tales como emulsiones, cremas, geles o ungüentos. Las preparaciones también pueden estar en forma de aerosol . Los aditivos que pueden estar presentes en las preparaciones de la invención son también cuando menos un compuesto que promueve el flujo de sangre, tal como dihidralazina, diisopropilamina, aminexilo, o bloqueadores de canal de diazóxido o calcio tales como nifedipina, nicardipina, verapamilo, diltiazem, nisoldipina, nitrendipina, nivaldipina, isradipina, felodipina, nimodipina, galopamilo, fendilina, flunarizina, amlodipina, diperdipina, fluspirileno, primozída, fantofarona, nicergolina o ciclandelato,
6-amino-4-piperidino-l, 2~dihidro-l-hidroxi-2~iminopirimidina (minoxidilo) , inhibidores de enzima de conversión de angiotensina tales como quinaprilo, lisinoprilo, benzazeprilo, captoprilo, ramiprilo, fosinoprilo, cifazaproilo o trandolaprilo, compuestos de metilxantina tales como pentoxifilina, propentofilina, torbafilina o mezcla de los mismos. Los aditivos apropiados son también cuando menos un abridor de canal de sodio tal como l-ciano-2- (1, 1-dimetil-propil) -3- (3-piridil) guanidina o inhibidores de
-alfa-reductasa tales como N-butilo terciario-3-oxo-4-aza- 5a-androst-l-eno-17p-carboxamida. Aditivos apropiados adicionales son también cuando menos un compuesto que promueve el crecimiento del cabello, tal como una sal interna de hidróxido de 2, 4-diamino-6-alcoxi-3-sulfoxipirimidina con la 6 átomos de carbono en el radical alcoxi como se describe en EP 0 427 625; v.gr., la sal interna de hidróxido de 2, 4-diamino-6-butoxi-3
-sulfoxipirimidina, o derivados de 1-óxido de piridina como se describen en WO 92 21317; v.gr.,
2, 6-diamino-4-piperidinopiridina, o derivados de
2, 6-diamino-l, 3, 5-triazina como se describen en WO 91/19701; v.gr., 1-óxido de 2, 6-diamino-4-butoxi-l, 3, 5-triazina. Las mezclas de dichos aditivos también son apropiadas. Aditivos adicionales que pueden contener las preparaciones de la invención son las substancias e ingredientes activos médicos de cuidado del cabello y cuero cabelludo acostumbrados en la cosmética, tales como por ejemplo, agentes contra la caspa, productos que tienen un efecto contra la seborrea, substancias que tienen un efecto queratolitico y queratoplástico tales como ácido salicilico, alantoina, productos de azufre, urea, ceramidas, antimicrobianos, vitaminas, extractos de planta o extractos de órgano, hormonas, corticoides, agentes hiperémicos tales como ácido nicotinico y derivados del mismo, ácidos orgánicos tales como ácido cítrico, ácido orótico, ácido lipóico, aminoácidos, alcoholes grasos polietoxilados, ácidos grasos, ésteres de ácido graso de sorbitán, fosfatos de alquilo y aceites, v.gr., ésteres de ácido graso, y además conservadores, colores y aceites de perfume. Es esencial que los aditivos sean compatibles con las substancias antiandrógenas y no inhiban el efecto de crecimiento de cabello de las mismas. Además no deben promoverla admisión sistémica del antiandrógeno. Las preparaciones de la invención se pueden utilizar para tratar alopecia andrógena de una manera segura y efectiva. Esto es un descubrimiento extremadamente importante en la luz de los pobres resultados de la terapia hasta la fecha. Las preparaciones de la invención también son apropiadas para el tratamiento de hirsutismo, es decir, para impedir crecimiento de cabello no deseado y para tratar seborrea y acné. La cantidad del ingrediente activo en las preparaciones de la invención es generalmente de 0.01% en peso a 10% en peso, de preferencia 0.1 a 5% en peso. La invención se relaciona además con el uso de las preparaciones de la invención en la cosmética. Ejemplo 1 Preparación del compuesto de la fórmula II 300 mg de 4- [3- (4-hidroxibutil) -4, 4-dimetil-2, 5-dioxo-l-imidazolidinil] -2- (trifluorometil ) benzonxtrilo, compuesto 1 a continuación, (8.13 x 10"4 mol) se hicieron reaccionar con 400 mg de cloruro de miristoilo (1.62 x 10~3 mol) en presencia de 0.5 mi de trletilamina en 10 mi de cloroformo absoluto con agitación durante 24 ' horas (h) . Después de la terminación de la reacción, la formación de un producto lipofilico se observó mediante una comprobación de TLC (placa de gel de silice, acetato de etilo eluyente) . Un Chromatotron de Harrison Research (Paloalto, EUA) se utilizó con cloruro de metileno como eluyente para remoción cuantitativa del éster presumido. La solución orgánica del producto, de reacción removido se evaporó, recristalizó con agua de metanol/cloroformo y se secó. El compuesto de la fórmula II se identificó sobre la base de espectroscopia de 1H N R (400 Mhz), espectroscopia de masa y análisis de C-H-N, y 13C NMR, y H-H y espectros C-H Cosy: 1H-NMR (CDCI3; 400, 132 Mhz, ppm) : 0.88 (m, 3 H, ' C¾); 1.25 (m, 20 H, C¾); 1.54 (S, 6 H, C¾) ; 1.69-1.81 (M, 6 H, CH2) ; 2.30 (m, 2 H, CH2) ; 3.39 (m, 2 H, CH2) ; 4.13 (m, 2 H, CH2) ; 7.91 (d, 1 H, ar) ; 8.01 (d, 1 H, ar) ; 8.16 (s, 1 H, ar) . 13C-NHMR (CDCI3; 100, 625MHz): señales distintas a ppm: 14.12; 22.69; 23.51; 25.0; 26.15; 26.30; 29.18; 29.28; 29.36; 29.48; 29.61; 29.65; 29.68;31.93; 34.32; 40.0; 61.87; 63.34; 1208.25; 115.02; 122.89; 122.94; 122.97; 123.04; 123.35; 127.85; 135.27; 136.50; 162.85; 173.67; 174.56. El punto de fusión del compuesto de la fórmula II es 70.7°C a 72.4°C. El rendimiento fue 260 mg (4.49 x 10"4 mol). Esto corresponde a un rendimiento de 55.2%.
Espectro de masa MS: 579.7 Composición molecular: C 64.23%; H 7.65%; F 9.83%; N 7.25%; 0 11.04% Análisis CHN Átomo Valor teórico la Medición 2a Medición
C 64.23 63.97 63.86 H 7.651 7.706 7.945 N 7.249 6.942 7.029 Ejemplo 2 La preparación de la invención, por ejemplo, tiene la siguiente composición (% en peso) : a) Compuesto de la fórmula II 0.1-1% Compritol (15% mono-, 50% di- y 35% 5% triglicérido de ácido behénico) Poloxámero 188 (polioxietileno/polimero de 1.25% polioxipropileno) b) Compuesto de la fórmula II 0.1-1% Precirol (estearato de palmitato de glicerol 5% Poloxámero 188 1.25% c) Compuesto de la fórmula II 0.1-1% Monosteol (estearato de palmitato de 5% oropilenglicol ) Poloxámero 188 1.25% E emplo 3 Producción de la preparación 0.05 g de poloxámero 188 y 3.746 mi de agua, y 0.004 g del compuesto del ejemplo 1, compuesto 2 a continuación, y 0.2 g del lipido (por ejemplo Precirol) , se pesaron hacia dos recipientes. Ambos recipientes se calentaron a una temperatura de 80°C en un baño de agua. El lipido se licuó durante esto. El Compuesto 2 se disolvió en la fusión del lipido. Después las soluciones hablan alcanzado la temperatura del ' baño de agua, la solución de agente tensioactivo se añadió a la solución de lipido o dispersión de lipido del compuesto de la fórmula I . Esta mezcla se preemulsionó con un mezclador de rotor-estator
(Ultra-Turrax) a 8,000 rpm durante 10 seg. Y luego se homogeneizó utilizando un homogeneizador de alta presión
(EmulsiFlex-B3, Avestin) con 3 ciclos a 500 bar. Después del proceso de producción, la nanodispersión de lipido obtenida se enfrió en el baño de agua a una temperatura de 22°C, después de lo cual el lipido se cristalizó para formar nanoparticulas de lipido. El rendimiento de lipido cristalino fue 98.3%. Las nanoparticulas producidas y la nanoemuisión tuvieron las siguientes características físicas: Cuadro 1: Difractometria Láser (LD) Día 3 (4) Dia 16 Día 44 Lípido LD 50% LD 95% LD 50% LD 95% LD 50% LD 95% (um) (um) (um) (um) (um) (um) Compritol con 0.214 0.563 0.211 0.640 n.d. n.d. Compuesto 2 Sin 0.249 0.586 0.260 0.615 n.d. n.d. Compuesto 2 Precirol con 0.199 1.963 0.181 1.544 0.108 0.295
Compuesto 2 Sin 0.151 0.843 0.185 1.877 0.089 0.249
Compuesto 2 Monosteol con 36.62 74.01 20.72 46.25 n.d. n.d.
Compuesto 2 Sin 19.47 112.5 16.65 51.01 n.d. n.d. Compuesto 2 Nanoemulsión 0.171 0.920 0.149 0.149 n.d. n.d.
(Miglyol) LD 50% (Ld 95%) : 50% (o 95%) de las partículas sonmenores que el diámetro manifestado (de conformidad con: ehnert & Mader, Adv.Drug Delivery Rev. 47, 165-196, 2001)
Cuadro 2: Espectroscopia de correlación de fotón (PCS) Diámetro promedio (um) Lípido SLN Dia 3 (4) Día 16 Día 44
Compritol con compuesto 2 0.255 0.214 n.d. sin compuesto 2 0.259 n.d. n.d.
Precirol con compuesto 2 0.214 n.d. 0.211 sin compuesto 2 0. 244 n . d. n.d. Monosteol con compuesto 2 0. 266 n.d. n.d. sin compuesto 2 0. 261 n.d. n.d. n.d. Significa no determinado (de conformidad con: Mehnert & Mader, Adv. Drug Delivery Rev. 47, 165-196, 2001) Los resultados muestran que el tamaño de partícula permanece estable durante almacenamiento. Además, la incorporación del ingrediente activo no tiene un efecto adverso sobre la estabilidad de la preparación. Además, distintas crestas de fusión en la investigación- de calorimetría diferencial prueban que están presentes partículas sólidas. Las investigaciones microscópicas no revelaron indicaciones de cristalización del compuesto 2. Ejemplo 4 Las investigaciones de la afinidad de receptor de los compuestos 1 y 2 ocurrió con 29+/GR+ células que expresan el receptor de andrógeno (List y col.; Exp. Cell Res. 250; 414-422; 1999). La afinidad se determinó mediante comparación con dihidrotestosterona (DHT) . Los valores de EC5o obtenidos fueron DHT 0.27 nM; compuesto 1 6.7 nM y compuesto 2 11.045 nM. Es probable que el enlace del compuesto 2 no se derive de la función de éster, sino de hidrólisis enzimática o espontánea del éster. El compuesto 2 consecuentemente es una prodroga del compuesto 1. La liberación del compuesto 1 activo de las partículas de lipido en las que están presentes como compuesto 2 se probó mediante investigaciones en cultivos de células de piel. Cultivos de monocapa de queratocitos de prepucio juvenil y fibroblastos y de células de la papila dérmica del cuero cabelludo occipital se incubaron con compuesto 2 en una concentración de 10"5 M bajo condiciones convencionales (5% de C02, 37°C) durante 24 . El medio de cultivo de célula luego se extrajo con cloroformo. La fase orgánica se evaporó y el residuo se tomó en acetonitrilo e investigó mediante análisis HPLC por su contenido de compuestos 1 y 2. Cuadro 3: Hidrólisis de compuesto 2 en células de piel humana cultivadas (DP, papiladérmica; FB, fibroblastos; KC, queratinocitos ) . Las células se cultivaron con compuesto 2 bajo condiciones convencionales (5% de C02, 37 °C) durante 24 h. Los extractos de los medios de analizaron mediante HPLC (n=3) . Formación de compuesto 1 Cepa pmol/ug de proteina % por mezcla
DP 03/99 177.9 + 23.4 49.6 + 6.5
FB x2712 166.7 + 24.7 34.2 + 5..1
FB xl412 158.9 + 17.0 56.1 + 6.0
FB xl 81.4 + 12.7 57.0 + 8.9 KC x608 21.6 + 0.8 21.6 + 0.8 C x709 20.3 ± 1.3 25.4 + 1.7 Se deriva de esto que la conversión significativa del compuesto 2 al compuesto 1 ocurre en células de la piel .
Esto también se aplica en particular a células de la papila dérmica, que representan la meta para antiandrógenos como el compuesto 1.