MXPA04006316A - COMPOSICIONES Y METODOS DE USO DEL IMPLANTE BASADO EN COLáGENA, COLLAJOLIE. - Google Patents

Abstract

Se proveen composiciones que comprenden colagena y por lo menos un inhibidor de metaloproteasa, y metodos para obtener y usar las mismas.

Description

COMPOSICIONES Y METODOS DE USO DEL IMPLANTE BASADO EN COLAGENA, COLLAJOLIE ANTECEDENTES DE LA INVENCION CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere en general a composiciones y métodos farmacéuticos, y más específicamente, a composiciones y métodos para mejorar la duración de actividad de materiales de colágena implantados.

DESCRIPCION DE LA TECNICA RELACIONADA La colágena es una de las proteínas más abundantes en los mamíferos, representando hasta 30% del peso seco del cuerpo humano (véase, L. C. Junqueira y J. Carneiro, Basic Histology, 4a. ed., Lange Medical Publications, Los Altos, Calif., 1983, pp. 89-119). La colágena provee resistencia y flexibilidad a la piel, el cabello y las uñas, y es también un componente importante y esencial de músculos, tendones, cartílago, ligamentos, articulaciones y vasos sanguíneos. La colágena puede encontrarse en por lo menos cinco formas diferentes de ocurrencia natural que son producidas por varios tipos de células diferentes. La colágena tipo I es la forma más abundante de colágena, y puede encontrarse por todo el cuerpo. Es producida por fibroblastos, osteoblastos, odontoblastos y condroblastos, y puede encontrarse en huesos, dentina, dermis y cartílago fibroso. La colágena tipo II es producida por condroblastos, y puede encontrarse principalmente en el cartílago. La colágena tipo III es producida por fibroblastos del músculo liso, células reticulares, células de Schwann y hepatocitos. Su función primaria es mantener la estructura de los órganos, y puede encontrarse en músculos lisos, endoneurio, arterias, útero, hígado, bazo, riñon y tejido pulmonar. Se piensa principalmente que la colágena tipo IV participa en el soporte y la filtración, y puede encontrarse en la lámina basal epitelial y endotelial y membranas básales. La colágena tipo V se encuentra en membranas fetales, vasos sanguíneos y membrana basal placentaria. Se ha sugerido a la colágena para su uso en el tratamiento de una variedad de aplicaciones médicas que incluyen, por ejemplo, cirugía cosmética, artritis, regeneración de piel, implantes, reemplazo de órganos y tratamiento de heridas y quemaduras (véase, por ejemplo, las patentes de E.UA Nos. 6,309,670, 5,925,736, 5,856,446, 5,843,445, 5,800,811 , 5,783,188, 5,720,955, 5,383,930, 5,106,949, 5,104,660, 5,081 ,106, 4,837,379, 4,604,346, 4,485,097, 4,546,500, 4,539,716 y 4,409,332). Sin embargo, la colágena ha presentado varios problemas asociados con aplicaciones médicas. Por ejemplo, en el contexto de implantes, las preparaciones de colágena con impurezas son inmunógenos potentes que pueden estimular una respuesta inflamatoria. En forma similar, las formas no humanas de colágena tales como la colágena de bovino, han sido asociadas con una reacción inflamatoria celular crónica que puede resultar en tejido cicatrizal y formación de adherencias y fiebres transitorias de grado reducido. Además, la duración de la colágena implantable es limitada, requiriendo que se repitan procedimientos (especialmente para mejora cosmética) sobre una base regular. La presente invención describe composiciones, dispositivos y métodos novedosos para prolongar la actividad de implantes basados en colágena, y provee además otras ventajas relacionadas.

BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION Expuesto en forma breve, la presente invención provee composiciones y métodos para prolongar la actividad de implantes basados en colágena. Se usan biomateriales basados en colágena para proveer estructura y soporte en una variedad de procedimientos médicos, que incluyen inyecciones dérmicas para propósitos cosméticos (arrugas, cicatrices, defectos del perfil), agentes de abultamiento periuretrales para el manejo de incontinencia, y "tapones" vasculares para producir hemostasis después de procedimientos de punción vascular. Aunque extremadamente efectivos, los implantes de colágena tienen una duración de actividad breve in vivo, puesto que el material es degradado rápidamente por enzimas degradantes (principalmente colagenasa y otras enzimas metaloproteinasas de matriz) liberadas por glóbulos blancos y células de tejido conectivo (fibroblastos) adyacentes al implante. El resultado es que el procedimiento de implante de colágena debe repetirse a intervalos frecuentes para mantener su actividad funcional. Se ha desarrollado una variedad de moléculas de ocurrencia natural y creadas en forma sintética para otros propósitos (por ejemplo, el tratamiento de malignidad, artritis y otros trastornos), que inhiben la actividad de colagenasa (conocidas en conjunto como "inhibidores de metaloproteinasa de matriz" o "inhibidores de colagenasa"). La presente invención describe composiciones que combinan colágena y un compuesto que inhibe la actividad de colagenasa, para producir un implante basado en colágena con durabilidad mejorada in vivo ("Collajolie"). Compuestos o factores particularmente preferidos inhiben la actividad de M P-1 , P-8, MMP-13 y/o P-14. Ejemplos representativos de MMPI adecuados para su uso dentro de la presente invención incluyen TIMP-1 , tetraciclina, doxiciclina, monociclina, Batimistat®, Marimistat®, RO-1 130830, CGS 27023A, BMS-275291 , CMT-3, Solimastat, llomastat, CP-544439, Prinomastat, PNU-1427690, SU-5402 y Trocade. Por lo tanto, dentro de un aspecto de la presente invención, se proveen composiciones que comprenden colágena y un MMPI. Dentro de ciertas modalidades, el MMPI es un inhibidor tisular de meloproteinasa de matriz (por ejemplo, ????-1 , TIMP-2, TIMP-3 o TIMP-4). Dentro de ciertas modalidades, el MMPI es tetraciclina, o un análogo o derivado de la misma (por ejemplo, minociclina o doxiciclina); un hidroxamato (por ejemplo, Batimistat, Marimistat o Trocade); o RO-1130830, CGS 27023A, CMT-3, Solimastat, llomastat, CP-544439, Prinomastat, PNU-1427690, SU-5402 o BMS-275291. Dentro de otras modalidades, la colágena es una colágena tipo I o tipo II. Dentro de otras modalidades, las composiciones provistas en la presente pueden contener otros compuestos o composiciones que incluyen, por ejemplo, trombina y/o colorantes. Dentro de otras modalidades, la composición puede esterilizarse en una forma adecuada para administración a humanos. Dentro de ciertos aspectos de la presente invención, se proveen métodos para obtener las composiciones descritas en la presente, los cuales comprenden el paso de mezclar una colágena y uno o más MMPl como se describe en la presente. Dentro de modalidades relacionadas, dichos métodos pueden comprender además el paso de mezclar un colorante o una trombina. Dentro de otras modalidades, la composición puede esterilizarse. Dentro de otros aspectos de la presente invención, las composiciones descritas anteriormente pueden usarse para tratar y/o prevenir una variedad de condiciones médicas. Por ejemplo, dentro de un aspecto de la presente invención, se proveen métodos para la reparación y/o el aumento de piel o tejido, que comprenden inyectar en la piel o el tejido una composición como se describió anteriormente. Dentro de varias modalidades, dichas composiciones pueden inyectarse en los labios para corregir o mejorar los labios, o pueden inyectarse en la piel (por ejemplo, en el rostro para corregir cicatrices o disminuir arrugas). Dentro de otros aspectos de la presente invención, se proveen métodos para tratar o prevenir incontinencia urinaria, los cuales comprenden administrar a un paciente una composición como se describió anteriormente. Dentro de ciertas modalidades, la composición puede administrarse periuretralmente o transuretralmente. Dentro de otros aspectos de la presente invención, se proveen métodos para sellar un sitio quirúrgico, los cuales comprenden el paso de administrar a un paciente una composición como se describió anteriormente. Ejemplos representativos de dichos sitios quirúrgicos, incluyen sitios de acceso vascular (por ejemplo, puede usarse el sellador como un sellador vascular). En otro aspecto, la presente invención provee métodos para obtener Collajolie, los cuales comprenden mezclar colágena y por lo menos un MMPI. Dentro de modalidades particulares, el Collajolie se hace teniendo por lo menos dos MMPIs. En ciertas modalidades, la colágena es colágena tipo I o tipo II. En otras modalidades, el MMPI es un inhibidor tisular de metaloproteinasa de matriz (TIMP), tal como TIMP-1, TIMP-2, TIMP-3 o TIMP-4. En otras modalidades, el MMPI es tetraciclina, o un análogo o derivado de la misma, tal como minociclina o doxiciclina. En otra modalidad, el MMPI es un hidroxamato tal como Batimistat, Marimistat o Trocade. Dentro de otras modalidades, el MMPI es RO-1130830, CGS-27023A o BMS-275291. Dentro de otras modalidades, el MMPI es un inhibidor de polipéptidos, tal como un inhibidor de una metaloproteasa maturasa. En otras modalidades, el MMPI es un compuesto basado en mercapto. Dentro de otras modalidades, el MMPI es un bisfosfonato con estructura (I): (I) O" R' O" I I I 0=P— C— P=0 O" R" O" en donde R' y R" son independientemente un hidrógeno, un halógeno tal como cloro, un hidroxi, un grupo amino opcionalmente sustituido, un grupo tio opcionalmente sustituido, o un grupo alquilo, alcanilo, alquenilo, alquinilo, alquildiilo, alquileno, heteroalquilo, heteroalcanilo, heteroalquenilo, heteroalcanilo, heteroalquildiilo, heteroalquileno, arilo, arllalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo opcionalmente sustituido. Dentro de otras modalidades, antes del mezclado con colágena, dicho MMPI se mezcla primero con por lo menos un polímero. En modalidades relacionadas, el polímero es biodegradable, tal como albúmina, gelatina, almidón, celulosa, dextranos, polisacáridos, fibrinógeno, poli(ésteres), poli(D,L lactida), poli(D,L-lactida-co-glicolida), poli(glicolida), poli(e-caprolactona), poli(hidroxibutirato), poli(alquilcarbonato), poli(anhídridos) o poli(ortoésteres), y copolímeros y mezclas de los mismos. En otra modalidad, cualquiera de los métodos mencionados anteriormente para obtener Collajolie, comprende además el paso de esterilizar dicha mezcla. Estos y otros aspectos de la presente invención, serán evidentes con relación a la siguiente descripción detallada y los dibujos anexos.

Además, se citan en la presente varias referencias que describen en más detalle ciertos procedimientos o composiciones (por ejemplo, compuestos, proteínas, vectores y su generación, etc.), y se incorporan por lo tanto en su totalidad en la presente como referencia. Cuando se hace referencia a solicitudes del PCT, se entenderá también que las solicitudes de E.U.A. citadas o subyacentes se incorporan también en su totalidad en la presente como referencia.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Antes de exponer la invención, puede ser útil un entendimiento de la misma para exponer definiciones de ciertos términos que se usarán más adelante. El término "colágena", como se usa en la presente, se refiere a todas las formas de colágena como se describen o se refieren en la presente, incluyendo las que han sido procesadas o modificadas. Ejemplos representativos incluyen colágena tipo I y tipo II. La colágena puede prepararse de fuentes humanas o animales, o puede producirse usando técnicas recombinantes. Ei término "inhibidor de metaloproteinasa de matriz" o "M PI" se refiere a un compuesto, agente o composición que inhibe la actividad de metaloproteinasa de matriz. Ejemplos representativos de inhibidores de MMP ("MMPI") incluyen inhibidores tisulares de metaloproteinasas (TIMPS) (por ejemplo, TIMP-1 , TIMP-2, TIMP-3 o TIMP-4), a2-macrogIobulina, tetraciclinas, (por ejemplo, tetracidina, minociclina y doxiciclina), hidroxamatos (por ejemplo, Batimistat, Marimistat y Trocade), quelantes (por ejemplo, EDTA, cisteína, acetilcisteína, D-penicilamina, y sales de oro), fragmentos de MMP sintéticos, succinil mercaptopurinas, fosfonamidatos, y ácidos hidroxamínicos. Se entenderá que cualquier escala de porcentaje o concentración incluida en la presente, incluye concentraciones de cualquier entero dentro de la escala y fracciones de la misma, tales como un décimo y un centésimo de un entero, a menos que se indique de otra manera. Como se usa en la presente, "aproximadamente" o "que comprende esencialmente de" significa ± 15%.

I. Colágena La colágena es el componente principal en la piel, el cartílago, el hueso y el tejido conectivo, y ocurre en varios tipos o formas diferentes, siendo más comunes los tipos I, II, III y IV. La colágena ha sido aislada típicamente de fuentes naturales, tales como hueso, cartílago o cuero de bovino. Los huesos son usualmente desgrasados, triturados, deshidratados y desmineralizados, para extraer la colágena. En contraste, el cartílago o cuero de bovino es usualmente desmenuzado y digerido con enzimas diferentes de la colagenasa (para remover las proteínas contaminantes). La colágena puede prepararse también de tejido humano (tejido del mismo paciente o tejido de donador), o puede prepararse mediante métodos recombinantes.

Dentro de ciertas modalidades de la invención, se preparan colágenas preferidas como composiciones estériles no inmunorreactivas. Pueden ser solubles (por ejemplo, colágena en solución Vitrogen® 100 disponible comercialmente), o pueden estar en forma de colágena reconstituida de atelopéptido fibriiar, por ejemplo, implante de colágena Zyderm® (ZCI). Ejemplos representativos de patentes que describen composiciones que contienen colágena, dispositivos y métodos para obtener y/o suministrar dichas composiciones y dispositivos, incluyen las patentes de E.U.A. Nos. 4,164,559, 4,424,208, 4,140,537, 4,563,350, 4,582,640, 4,642,117, 4,743,229, 4,776,890, 4,795,467, 4,888,366, 5,035,715, 5,162,430, 5,304,595, 5,324,775, 5,328,955, 5,413,791 , 5,428,022, 5,446,091 , 5,475,052, 5,523,348, 5,527,856, 5,543,441, 5,550,187, 5,565,519, 5,580,923, 5,614,587, 5,616,689, 5,643,464, 5,693,341, 5,744,545, 5,752,974, 5,756,678, 5,786,421 , 5,800,541 , 5,807,581 , 5,823,671 , 5,874,500, 5,895,833, 5,936,035, 5,962,648, 6,090,996, 6,096,039, 6,111 ,165, 6,165,489, 6,166,130, 6,280,727, 6,312,725 y 6,323,278.

II. Inhibidores de metaloproteinasa de matriz ( MP) Las metaloprotei nasas (MMPs), son un grupo de enzimas dependientes de zinc de ocurrencia natural que intervienen en la degradación y cambio de macromoléculas de matriz extracelular. Hasta la fecha, se han identificado más de 23 metaloproteinasas, y se han categorizado ampliamente en familias de enzimas conocidas como colagenasas, estromelisinas, gelatinasas, elastasas y matrilisinas. Las metaloproteinasas se derivan de una variedad de tipos de células que incluyen neutrófilos, monocitos, macrófagos y fibroblastos. Las M Ps son las enzimas principales que intervienen en la degradación y el cambio normal de la colágena in vivo. Aunque numerosas MMPs son capaces de degradar varios elementos de tejido conectivo que incluyen a la colágena, las enzimas con el mayor carácter específico por la colágena pertenecen a la familia de la colagenasa (por ejemplo, MMP-1 , MMP-8, MMP- 3 y MMP- 4). La actividad de metaloproteinasa es inhibida naturalmente in vivo por una familia de inhibidores conocida como "inhibidores tisulares de metaloproteinasa" o IMPs", que se unen a la región activa de la enzima metaloproteinasa, haciéndola inactiva. Es el equilibrio natural entre la actividad e inhibición enzimática, lo que regula la velocidad del metabolismo de la matriz extracelular bajo condiciones fisiológicas. Pruebas para medir la inhibición de MMP se conocen fácilmente en la técnica e incluyen, por ejemplo, las siguientes: Cawston T. E., Barrett A. J., "A rapid and reproducible assay for collagenase using [14C] acetylated collagen", Anal. Biochem. 35: 1961-1965 (1963); Cawston T. E., Murphy G., "Mammalian collagenases", Methods in Enzymology 80: 71 (1981 ); Koshy P. T. J., Rowan, A. D., Life P. F., Cawston T. E., "96-well píate assays for measuring collagenase activity using (3)H-acetylated collagen", Anal. Biochem. 99: 340-345 (1979); Stack M. S., Gray R. D., "Comparison of vertébrate collagenase and gelatinase using a new fluorogenic substrate peptide", J. Biol. Chem. 264: 4277-4281 (1989); y Knight C. G., Willenbrock F., Murphy G., "A novel coumarin-labelled peptide for sensitive continuous assays of the matrix metalloproteinases", FEBS Lett 296: 263-266 (1992). Dentro del contexto de esta invención, un MMPI tendría de preferencia una concentración inhibidora (IC) que varía de mM a nM (10-3 a 10-9). Cuando la colágena es implantada como parte de un procedimiento terapéutico, es también metabolizada gradualmente por enzimas de la familia de MMP, hasta que es resorbida por completo. Esta pérdida gradual de integridad estructural debido a degradación enzimática del implante de colágena, produce pérdida de actividad funcional que lleva a falla del implante y, finalmente, la necesidad de reintervención subsecuente. Los intentos por prolongar la actividad del implante de colágena, se han centrado en entrelazar el implante de colágena para retardar la degradación enzimática. La presente invención describe incorporar en el implante de colágena un agente o agentes capaces de inhibir la actividad de MMP, para inclinar el equilibrio fisiológico a favor de la preservación de la colágena. Esta invención es compatible y puede usarse en combinación con, estrategias tales como entrelazamiento de la colágena, diseñadas para aumentar el tiempo de residencia de un implante de colágena. Puesto que la producción patológica de MMPs ha sido asociada con una variedad de procesos de enfermedad clínicamente importantes, tales como metástasis tumoral y la progresión de condiciones inflamatorias crónicas tales como osteoartrltis y artritis reumatoide, se han desarrollado numerosos agentes sintéticos y de ocurrencia natural para inhibir la actividad de MMP. No sorprendentemente, la regulación de la actividad de MMP es un proceso importante y altamente regulado in vivo. Como resultado, existen numerosos sitios en la vía que llevan a la producción de MMP, en donde es posible desarrollar moléculas capaces de inhibir la síntesis o actividad de MMP. Los tipos de agentes capaces de inhibir la actividad de MMP, se describen en más detalle a continuación. Por poco tiempo, una variedad de citocinas (por ejemplo, FNT- , IL-1 , FGF y otros) son capaces de estimular la vía que lleva a la producción de MMPs. Se ha demostrado que inhibidores de estas citocinas o agentes que bloquean sus receptores celulares, inhiben la síntesis de MMP bajo ciertas circunstancias, y serian adecuados para su uso en esta invención. Después de la unión a su receptor celular, el estímulo para la producción de MMP desencadena la producción de una variedad de segundos mensajeros y moléculas de señalización celular (por ejemplo, jun cinasa, JKK, etc.) - la inhibición de estas moléculas puede reducir también la producción de MMPs. Se ha implicado a una variedad de factores de transcripción (por ejemplo, c-fos, c-jun, NFK-B, c-myc) en la transcripción de los genes de MMP. Los inhibidores de estos factores de transcripción y sus productos (por ejemplo, la proteína AP-1 ), pueden disminuir también la cantidad de MMPs transcritas, y pueden usarse para los propósitos de esta invención. En forma similar, pueden usarse en esta invención estrategias que inhiban el gen de MMP mismo (por ejemplo, bloqueo de la expresión de genes) o ARN de MMP (por ejemplo, antisentido, ribozimas, tetraciclina, doxiciclina, minociclina), para disminuir la cantidad de enzima de MMP activa en la región en tomo al implante de colágena. Además, es posible inhibir la función y actividad de metaloproteinasas, después de que han sido secretadas de la célula. Puesto que las MMPs se secretan de las células como proteínas precursoras inactivas (denominadas Pro-MMPs) que con convertidas subsecuentemente a la enzima activa a través de un desdoblamiento enzimático altamente específico (catalizado por enzimas tales como plasmina, proteasa de células cebadas, catepsina G, calicreína del plasma, y otras), es posible inhibir la conversión de la MMP de su estado inactivo a activo (manteniéndola de esta manera en una forma inactiva). Inhibidores de las enzimas responsables de la conversión de la MMP de su estado inactivo a activo, pueden usarse también para esta invención. Y, por último, es posible inhibir directamente la función de una MMP activada a través de varios mecanismos tales como quelación de su centro activo del metal zinc (por ejemplo, EDTA, cisteína, acetilcisteína, D-penicilamina, sales de oro; hidroxamatos tales como Batimistat, Marimistat, Trocade, Actinonina, Matilistatinas; inhibidores de ácido fosfónico; fosfonatos; fosfonamidatos; tioles y sulfodiiminas, que forman coordinación monodentada con el zinc catalítico; carboxilatos que forman coordinación bidentada con el zinc catalítico; succinil mercaptocetonas y mercaptoalcoholes). Estos compuestos son bastante efectivos para inhibir la actividad de MMP, y serían particularmente útiles para los propósitos de esta invención. Una clase importante de MMPIs ejerce su efecto a través de unión específica a la MMP, llevando a la formación de un complejo inactivo. Estos compuestos, conocidos como inhibidores tisulares de metaloproteinasas (TIMPs), tales como TIMP-1 , TIMP-2, TIMP-3 y TIMP-4, son capaces de inhibir la actividad de virtualmente todas las MPs. Aunque cualquiera de los TIMPs sería adecuado para los propósitos de esta invención, el TIMP-1 (y en menor grado el TIMP-2) se preferiría particularmente por su carácter específico más alto por la inhibición de la colagenasa. Debe observarse también que cualquier compuesto que aumente la producción de TIMPs, inclinaría el balance a favor de la preservación de la colágena, y podría ser de utilidad en esta invención. Otros inhibidores actúan previniendo la unión del MMP a su substrato (por ejemplo, fragmentos de MMP sintéticos, fragmentos de colágena sintéticos), y podrían usarse solos o en combinación con otros MMPIs, para los propósitos de esta invención). Debe quedar claro para los expertos en la técnica que sin importar el mecanismo de inhibición específico, cualquier agente capaz de inhibir la producción, activación o función enzimática de las enzimas de MMP, sería un agente ideal para los propósitos de esta invención. Ejemplos representativos de MMPIs incluyen actinonina (ácido 3-[[1 -[[2-(hidroximetil)-1 -pirrolidinil]carbamoil]-octano-hidroxám¡co); adenosín monofosfato bromocíclico; N-clorotaurina; Batimistat, conocido también como BB-94; CT1166, conocido también como N1{N-[2-(morfolmosulfonilamino)-etil]-3-ciclohex¡l-2-(S)-propanamidil}-N4-h¡droxi-2-(R)-[3-(4-metilfenil)propil]- succinamida (Bíochem. J. 308: 167-175 (1995)); estramustina (3-bis(2-cloroetil)carbamato de estradiol); ácido eicosapentanoico; Marimistat (BB-2516); matlistatina-B; ácidos peptidil hidroxinámicos tales como pNH2 -Bz-GIy-Pro-D-Leu-D-Ala-NHOH {Biophys, Biochem. Res. Comm. 199: 1442-1446 (1994)); dipéptidos de N-fosfonoaiquilo tales como N-[N-((R)-1-fosfonopropil)-(S)-leucil]-(S)-fenilalanina-N-metilamida (J. Med. Chem. 37: 158-169 (1994)); aldehido protocatéquico (3,4-dihidroxibenzaldehído); Ro-31-7467, conocido también como 2-[(5-bromo-2,3-dihidro-6-hidroxi-1 ,3-dioxo- 1 Hbenz[de]isoquinolin-2-il)metil](hidroxi)-[fosfin¡l]-N-(2-oxo-3-azaciclo-tridecanil)-4-metilvaleramida; tetraciclinas tales como (4-(dimetilamino)-l ^^a.S.Sa.e.H .^a-octahidro-S.ejO.^.^a-pentahidroxi-e-metil-I .H-dio o-2-naftacenocarboxamida), doxiciclina (a-6-desoxi-5-hidroxi-tetraciclina), minociclina (7-dimetilamino-6-dimetil-6-desoxitetraciclina), y metaciclina (6-metileno o oxitetraciclina); trifluoroacetato (J. Med. Chem. 36: 4030-4039 (1993)); y compuestos basados en 1 ,10-fenantrolina (o-fenantrolina [4-(N-hidroxiamino)-2R-isobutil-3S-(tiopen-2-iltiometil)-succinil]-L-fenilalanina-N-metilamidocarboxialquilamino, tales como N-[1-(R)-carboxi-3-(1 ,3-dihidro-2H-benz[f]isoindol-2-il)propil]-N',N'-dimetil-L-leucinamida. Otros MMPIs representativos incluyen, por ejemplo, quelantes (por ejemplo, EDTA, cisteína, acetilcisteína, D-penicilamina y sales de oro), bis(dioxopiperzaina (véase, patente de E.U.A. No. 5,866,570, a Liang et al.,), neovastat (que inhibe actividades gelatinolíticas y elastinolíticas para MMP-2, MMP-9 y MMP-12, véase patente de E.U.A. No. 6,168,807, Aeterna Laboratorie); KB-R7785 (Akzo Nobel); llomastat (Glycomed/Ligando; patente de E.U.A. No. 5,892,1 12); RPR-122818 (Aventis); solimastat (British Biotech, WO 99/25693), BB-1101 , BB-2983, BB-3644 (British Biotech); BMS-275291 (véase Rizvi et al., Proceedings of the 1999 ACCR NCI EORTC International Conference #726, "A Phase I, safety and pharmacokinetic trial of BMS-275291, a matrix metaloproteinase inhibitor (MMPI), in patients with advanced or metastatic cáncer"), D-1927, D-5410, CH-5902, CH-138 (Celltech); CMT-3, dermostat (CollaGenex - patente de E.U.A. No. 5,837,696); DAC-MMPI (ConjuChem); RS-1 30830 y RS-113-080 (Hoffmann-La Roche); GM-1339 (Ligando); GI-155704A (GlaxoSmith Kline); ONO-4817 (ONO); AG-3433, AG-3088, prinomastat (Agouron; patente de E.U.A. No. 5,753,653), CP-544439 (Pfizer; patente de E.U.A. No. 6,156,798); POL-64 (Polifarma); SC-964, SD-2590, PNU-142769 (Pharmacia; véase documento WO 97/32846), SU-5402 (Pharmacia; véase documento WO 98/50356); PGE-2946979, PGE-4304887 (Procter & Gamble); conjugado de fibrolasa (Schering-AG); EF-13 (Scotia-Pharmaceuticals); S-3304 (Shionogi); CGS-25015 y CGS-27023A (Novartis), XR-168 (Xenova) y RO 1130830 (Fisher et al., 219 American Chemical Society National Meeting, San Francisco, CA, marzo 26-30, 2000, "ORGN 830 "Shynthesis of RO 1130830, a Matrix Metalloproteinase Inhibitor: Evolution of a Research Scheme to Pilot-Plant Production"). Otros MMPIs se describen en las patentes de E.U.A. Nos. 4,235,885; 4,263,293; 4,276,284; 4,297,275; 4,367,233; 4,371 ,465; 4,371 ,466; 4,374,765; 4,382,081 ; 4,558,034; 5,704,383; 4,950,755; 5,270,447, 6,294,694 y 6,329,550.

Ejemplos representativos de clases de MMPIs que se describen en más detalle a continuación, incluyen (1 ) inhibidores tisulares de metaloproteinasas de matriz (TIMPs); (2) tetraciclinas, (3) hidroxamatos, (4) fragmentos de MMP sintéticos (por ejemplo, inhibidores de péptidos), (5) compuestos basados en mercapto, y (6) bisfosfonatos. 1. Inhibidores tisulares de metaloproteinasa de matriz Los inhibidores tisulares de metaloproteinasas de matriz (TIMPs) se clasifican con base en su capacidad para inhibir metaloproteinasas, similitud estructural entre sí, las 12 cisteínas que forman enlaces disulfuro importantes en la estructura secundaria, y la presencia de un motivo VIRAF que interactúa con el ión de metal de las metaloproteinasas. Se han descrito las secuencias de ácido nucleico y de aminoácidos de TIMPs: TIMP-1 (Docherty A J P et al. (1985) Nature 318: 66-69), TIMP-2 (Boone T C et al. (1990) Proc Nati Acad Sci 87: 2800-2804; Stetler-Stevenson W G et al. (1990) J Biol Chem 265: 13933-38) y TIMP-3 (Wilde C G et al. (1994) DNA Cell Biol 13: 711-18; Apte et al., "The Gene Structure of Tissue Inhibitor of Metalloproteinases" (TIMP)-3 and Its Inhibitory Activities Define the Distinct TIMP Gene Family); (véase también Boone, T. C, et al., "cDNA cloning and expression of a metalloprotemase inhibitor related to tissue inhibitor of metalloproteinases", Proc. Nati. Acad. Sci. USA, 87:2800-2804 (abr. 1990), Freudenstein, mRNA of bovine tissue inhibitor of metalloproteinase: Sequence and expression in bovine ovarían tissue, Biochem Biophys. Res. Comm., 171 : 250-256 (1990), patentes de E.U.A. Nos. 5,643,752 y 6,300,310). El TIMP-1 es una proteína de 30 kD, y es la molécula de TI P que se expresa más comúnmente. Contiene dos residuos de asparagina que actúan como sitios de unión a carbohidratos, uno en la asa 1 y uno en la asa 2 (Murphy y Docherty, citado anteriormente). Además, una forma truncada de TIMP-1 que contiene sólo las tres primeras asas de la molécula, es capaz de inhibir MMPs. Aunque el TIMP-1 es un mejor inhibidor de la colagenasa intersticial que TIMP-2 (Howard E W et al. (1991 ) J Biol Chem 266: 13070-75), la molécula de TIMP-2 de 23 kD es el inhibidor más efectivo de las gelatinasas A y B. El TIMP-3 es una proteína de 21 kD que inhibe colagenasa 1, estromelisina y gelatinasas A y B (Apte S. S. et al. (1995) J Biol Chem 270: 14313-18), y puede ser inducido por mitógenos (Wick et al. (1994) J Biol Chem 269: 18953-60). Como se describió anteriormente, cualquiera de las cuatro moléculas de TIMP es capaz de inhibir la actividad de virtualmente todas las MMPs identificadas hasta la fecha, y sería adecuada para los propósitos de esta invención. Sin embargo, el TIMP-1 , que tiene un alto carácter específico por la inhibición de la colagenasa, se preferiría particularmente para su incorporación en un implante de colágena. 2. Tetraciclinas Las tetraciclinas son una clase de compuestos análogos y derivados conocidos originalmente por su uso como antibióticos. Se ha demostrado que numerosas tetraciclinas, incluyendo tetraciclina, doxiciclina, minociclina y otras, inhiben la producción y actividad de MMPs. Aunque no se ha entendido por completo el mecanismo exacto, la inhibición de MMP puede ocurrir a través de subregulación de la expresión de MMP y/o post-traducción a través de quelación del sitio activo del metal zinc. Dado su uso generalizado y baja toxicidad, estos compuestos serían de utilidad particular para su incorporación en un implante de colágena. El compuesto precursor de la familia de la tetraciclina, la tetraciclina, tiene la estructura general siguiente: El núcleo de anillos múltiples puede numerarse de la manera siguiente: La tetraciclina, así como los derivados de 5-OH (oxitetraciclina) y 7-CI (clorotetraciclina) existen en la naturaleza, y son antibióticos bien conocidos. Otras tetraciclinas incluyen, por ejemplo, apiciclina, quelocardina, clomociclina, demeclociclina, doxiciclina, etamociclina, guameciclina, limeciclina, megluciclina, mepiciclina, minociclina, metaciclina, penimepiciclina, piaciclina, rolitetraciclina y sanciclina.

Las tetraciclinas pueden ser modificadas también a fin de que retengan su relación estructural con los antibióticos de tetraciclina, pero tengan su actividad antibiotica sustancialmente o completamente reducida mediante modificación química. Ejemplos representativos de tetraciclinas químicamente modificadas (CMT's) incluyen, por ejemplo, CMT-1 (4-de(dimetilamino)-tetraciclina), C T-2 (tetraciclinonitrilo), C T-3 (6-demetil-6-desoxi-4-de(dimetilamino)tetraciclina), CMT-4 (7-cloro-4-de(dimetilamino)tetra-ciclina), CMT-5 (tetraciclina pirazol), CMT-6 (4-h¡droxi-4-de(dimetilamino)tetra-ciclina), CMT-7 (4-de(dimetiIamino)-12a-desoxitetraciclina), C T-8 (6-desoxi-5 -hidroxi-4-de(dimetilamino)tetraciclina), CMT-9 (4-de(dimetiIamino)-12a-desoxianhidro-tetraciclina) y CMT-10 (4-(de(dimetilamino)minociclina). Ejemplos representativos de tetraciclinas (incluyendo derivados de tetraciclina), se describen en las patentes de E.U.A. Nos. 3,622,627 a Blackwood et al., 3,846,486 a Marcus, 3,862,225 a Conover et al., 3,895,033 a Murakami et al., 3,901 ,942 a Bemardi et al., 3,914,299 a Muxfeldt, 3,925,432 a Gillchríest, 3,927,094 a Villax, 3,932,490 a Fernández, 3,951 ,962 a Murakami et al., 3,983,173 Hartung et al., 3,9 ,1 1 a Murakami et al., 3,993,694 a Martin et al., 4,060,605 a Cotti, 4,066,694 a Blackwood et al., 4,081 ,528 a Armstrong, 4,086,332 a Armstrong, 4,126,680 a Armstrong, 4,853,375 a Krupin et al., 4,918,208 a Hasegawa et al., y 5,538,954 a Koch et al. (véase en general, Mitscher, L A., The Chemistry of Tetracycline Antibíotics, capítulo 6, Marcell Dekker, New York, 1978). Otros ejemplos de derivados de tetraciclina se describen en las patentes de E.U.A. Nos. 4,666,897 a Golub et al., 4,704,383 a McNamara et al., 4,904,647 a Kulcsar et al., 4,935,412 a McNamara et al., 5,223,248 a McNamara et al., 5,248,797 a Sum et al., 5,281 ,628 a Hlavka et al., 5,326,759 a Hlavka et al., 5,258,371 a Golub et al., 5,308,839 a Golub et al., 5,321 ,017 a Golub et al., 5,326,759, 5,401 ,863 a Hlavka et al., 5,459,135 a Golub et al., 5,530,117 a Hlvaka et al., 5,563,130 a Backer et al., 5,567,693 a Becker et al., 5,574,026 a Backer et al., 5,698,542 a Zheng et al., 5,773,430 a Simón et al., 5,834,450 a Su, 5,843,925 a Blacker et al., 5,856,315 a Backer et al., 6,028,207 a Zheng et al., 6,143,161 a Heggie et al. y 6,165,999 a Vu, así como en las publicaciones del PCT Nos. WO 99/33455, WO 99/37306, WO 99/37307, WO 00/18353 y WO 00/28983. 3. Hidroxamatos Otra clase de compuestos que inhiben MMPs, son los hidroxamatos (o ácidos hidroxámicos). Aunque no se conoce con precisión el mecanismo exacto de la inhibición de MMP, se piensa que estos compuestos ejercen su efecto principalmente a través de la interacción con el sitio activo del metal zinc en la enzima (por ejemplo, mediante coordinación con el zinc catalítico en una forma bidentada para adoptar una geometría bipiramidal triagonal). Una variedad de hidroxamatos se ha sintetizado y puesto a prueba en varios estados de enfermedad, con resultados clínicos mixtos. Sin embargo, dada su actividad selectiva contra MMPs y su seguridad y tolerancia excelentes, estos agentes serían particularmente preferidos para su incorporación en un implante de colágena para mejorar la durabilidad del implante. Los hidroxamatos (o ácidos hidroxámicos) tienen las estructuras generales mostradas a continuación: en donde A es HN(OH)-CO- o HCO-N(OH)-; R es alquilo de C2- C5; R2 es el grupo de caracterización de un alfa-aminoácido natural que puede ser protegido, siempre que R2 no sea H o metilo; R3 es H, NH2, OH, SH, alquilo de Ci-C6, alcoxi de CrC6, alquilamino de CrC6, alquiltio de C1-C6, aril(alquilo de C1-C-6), o amino(alquilo de C-i-C-6), hidroxi(alquilo de C-i-C6), mercapto(alquilo de Ci-CQ) o carboxi(alquilo de C-|-C6), en donde el grupo amino, hidroxi, mercapto o carboxilo puede ser protegido, el grupo amino puede ser adiado, o el grupo carboxilo puede ser amidado; R4 es H o metilo; R5 es H, alquilo de C-i-C6, alcoxi de CrC6(alquilo de C-i-Ce), di(alcoxi de Cr C6)metileno, carboxi, (alquilo de Ci-Ce)carbonilo, (alcoxi de CrC6)carbonilo, arilmetoxicarbonilo, (alquilo de Ci-C6)aminocarbonilo o arilaminocarbonilo; y RB es H o metilo; o R2y R4 forman en conjunto un grupo (CH2)n, en donde n es un entero de 4 a 1 ; o R4 y R5 forman en conjunto un grupo trimetileno, y sales farmacéuticamente aceptables de estos compuestos de hidroxamato que sean ácidas o básicas. A este respecto, véase, por ejemplo, el documento EP-A- 0236872. en donde R1 es alquilo de CrC6; R2 es alquilo de bencilo, hidroxibencilo, benciloxibencilo, (alcoxi de C-i-C6) bencilo o benciloxi (alquilo de C C6); A es un grupo (CHR3 - CHR4) o (CR3=CR4); R3 es hidrógeno, alquilo de ?-G??, fenilo o fenil(alquilo de Ci-Ce); y R4 es H o alquilo de Ci-C6, fenil(alquilo de d-C-6), cicloalquilo o cicloalquil(alquilo de Ci-C6). A este respecto, véase, por ejemplo, el documento EP-A-0214639. en donde R es hidrógeno o hidroxi, R2 es hidrógeno o alquilo, R3 es alquilo de C3-C6, R4 es hidrógeno, alquilo, -CH2Z, en donde Z es fenilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, o R4 es un grupo C(HOR8)R9, en donde R8 es hidrógeno, alquilo o CH2Ph, en donde Ph es fenilo opcionalmente sustituido, y R9 es hidrógeno o alquilo; y R5 es hidrógeno o alquilo. A este respecto, véase, por ejemplo, el documento EP-A-3201 18. en donde R es hidrógeno, alquilo o arilo opcionalmente sustituido, R2 es hidrógeno o acilo tal como CO alquilo o COZ, en donde Z es arilo opcionalmente sustituido; R3 es alquilo de C3-6, R4 es hidrógeno, alquilo, — CH2R10, en donde R10 es fenilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, o R4 es un grupo C(HOR11)R12, en donde R 1 hidrógeno, alquilo o CHbPh, en donde Ph es fenilo opcionalmente sustituido, y R12 es hidrógeno o alquilo; y R5 es hidrógeno, alquilo o un grupo C(HR 3)COR14, en donde R13 es hidrógeno o alquilo, y R14 es hidroxi, alcoxi o — NR6R7, en donde cada uno de R6 o R7 es hidrógeno o alquilo, o R6 y R7 junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo de 5, 6 ó 7 miembros con átomos de oxígeno o azufre opcionales en el anillo, o un átomo de nitrógeno adicional opcional sustituido opcionalmente por alquilo. A este respecto, véase, por ejemplo, el documento EP-A-0322184. en donde R1 y R2 son independientemente H, alquilo, alcoxi, halógeno o CF3, R3 es H, acilo tal como COalquilo o COZ, en donde Z es arilo opcionalmente sustituido, o un grupo RS, en donde R es un residuo orgánico tal que el grupo RS provee un enlace disulfuro divisible in vivo; R4 es alquilo de C3-C6, R5 es H, alquilo o — CH2R10, en donde R10 es fenilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, o un grupo C(HOR1 )R12, en donde R11 es hidrógeno, alquilo o CH2Ph, en donde Ph es fenilo opcionalmente sustituido, y R 2 es hidrógeno o alquilo; y R6 es hidrógeno, alquilo o un grupo C(HR13)COR14, en donde R13 es hidrógeno o alquilo, y R14 es hidroxi, alcoxi o — NR7R8, en donde cada uno de R7 o R8 es hidrógeno o alquilo, o R7 y R8 junto con el átomo de nitrógeno al cual están unidos, forman un anillo de 5, 6 ó 7 miembros con oxígeno opcional, azufre o átomo de nitrógeno opcionalmente sustituido en el anillo; o R5 y R6 se unen entre sí como (CH2)m, en donde m es un entero de 4 a 12; X es (CH2)n> en donde n es 0, 1 ó 2; e Y es CH2. A este respecto, véase, por ejemplo, el documento EP-A-358305. en donde R es hidrógeno, alquilo de Ci-C6 o bencilo opcionalmente sustituido, R1 es hidrógeno o alquilo de Ci-C6l R2 es alquilo de C3-C6, R3 es hidrógeno, alquilo, — CH2Z, en donde Z es fenilo o heteroarilo opcionalmente sustituido, o R3 es un grupo C(HOR7)R8, en donde R7 es hidrógeno, alquilo o CH2Ph, en donde Ph es fenilo opcionalmente sustituido, y R8 es hidrógeno o alquilo; y R4 es — CH2— (CH2)nOR5, — CH2— (CH2)nOCOR6 o — CH(R9)COR10, en donde n es un entero de 1 a 6; R5, R6 y R9 son hidrógeno o alquilo de Ci-C6; y R10 es hidroxi u 0(alquilo de C C6) o NR5R6, en donde R5 y R6 pueden enlazarse para formar un anillo heterocíclico; o R3 y R4 se unen entre sí como (CH2)m, en donde m es un entero de 4 a 12. A este respecto, véase, por ejemplo, el documento EP-A-0401963.

R^ n en donde R1 es H, alquilo de C C6, fenilo, tienilo, fenilo sustituido, fenil alquiIo(CrC6), heterociclilo, alqu¡lcarbonilo(C-i-C6), fenacílo o fenacilo sustituido; o, cuando n es 0, R representa SRX, en donde Rx representa un grupo de la fórmula: y R2 es H, alquilo de C C6, alquenilo de C C6, fenilalquilo(Cr C6), cicloalquilalquilo(Ci-C6) o cicloalquenilalquilo(Ci-C6); R3 es una cadena lateral de aminoácidos o un grupo alquilo de Ci-C6, bencilo, (alcoxi de CV C6)bencilo, benciloxi(alquilo de C C6) o benciloxibencilo; R4 es H o un grupo alquilo de C C6; R5 es H o un grupo metilo; n es 0, 1 ó 2; y A representa una cadena hidrocarburo de C1-C6, sustituida opcionalmente con uno o más grupos alquilo de C†-C6, fenilo o fenilo sustituido; y sus sales y N-óxidos. A este respecto, véase, por ejemplo, la publicación internacional del PCT No. WO90/05719. en donde R1 es H, alquilo de Ci-C6, alquenilo de C2-C6, fenilo, fenilalquilo(Ci-C6), alquiltiometilo de C<|-C6, feniltiometilo, feniltiometilo sustituido, fenilalquiltiometilo(CrC6) o heterocicliltiometilo, o R representa — SRX, en donde Rx representa un grupo: y R2 representa un átomo de hidrógeno, o un alquilo de Ci-C6, alquenilo de Ci-C6, fenilalquiIo(Ci-C6), cicloalquilalqu¡lo(CrC6) o cicloalquenilalquiIo(Ci-C6); R3 representa una cadena lateral de aminoácidos o un alquilo de CrC6, bencilo, alcoxibencilo(CrC6), benciloxialquilo(CrC6) o benciloxibencilo; R4 representa un átomo de hidrógeno o un grupo metilo; n es un entero de 1 a 6; y A representa el grupo — NH2, una amina acíclica sustituida o una base heterocíclica; o una sal y/o N-hidróxido y/o (en donde el compuesto sea un compuesto tio) un sulfóxido o sulfona del mismo. A este respecto, véase, por ejemplo, la publicación internacional del PCT No. WO90/057 6. en donde R es H, alquilo de C C6) alquenilo de Ci-C6, fenilo, fenilalquilo(Ci-C6), alquiltiometilo de C^-C6, feniltiometilo, feniltiometilo sustituido, fenilaIquiltiometilo(CrC6) o heterocicliltiometilo; o R1 representa — S — Rx, en donde Rx representa un grupo: y R2 representa un átomo de hidrógeno, o un alquilo de Ci-C6, alquenilo de C1-C6, fenilalquilo(Ci-C6), cicloalquilalquilo(CrC6) o cicloalquenilalquilo(C-i-C6); R3 representa una cadena lateral de aminoácidos o un alquilo de C-1-C6, bencilo, alcoxibencilo(Ci-C6), benciloxialquilo(CrC6) o benciloxibencilo; R4 representa un átomo de hidrógeno o un grupo metilo; R5 representa un grupo (CH2)nA; o R4 y R5 representan en conjunto un grupo: y Q representa CH2 o CO; m es un entero de 1 a 3; n es un entero de 1 a 6; y A representa un grupo hidroxi, alcoxi(C-i-C6), aciloxi(C2-C7), alquiltio(Ci-C-6), feniltio, acilamino(C2-C ) o N-pirrolidona; o una sal y/o N- hidróxido y/o (en donde el compuesto sea un compuesto tio) un sulfóxido o sulfona del mismo. A este respecto, véase, por ejemplo, la publicación internacional del PCT No. WO91/02716. en donde R es H, alquilo de Ci-C6, fenilo, fenilo sustituido, fenil(alquilo de C-j-Ce) o heterociclilo; o R1 es ASOnR7, en donde A representa una cadena de hidrocarburo de Ci-C6l opcionalmente sustituida con uno o más grupos alquilo de CrC6, fenilo o fenilo sustituido, n es 0, 1 ó 2, y R7 es alquilo de Ci-C6, fenilo, fenilo sustituido, fenil(alquilo de Ci-C6), heterociclilo, (alquilo de C-i-C^acilo, tienilo o fenacilo; R2 es hidrógeno, alquilo de Ci-C6, alquenilo de Ci-C6, feníl(alquilo de C-i-C6) o cicloalquil(alqu¡Io de Ci-C6); R3 y R4 se seleccionan de hidrógeno, halógeno, ciano, amino, aminoalquilo(Ci-C6), aminodialquilo(Ci-C6), aminoalquilacilo(Ci-C6), aminofenacilo, aminofenacilo (sustituido), aminoácido o derivado del mismo, hidroxi, oxialquilo(CrC6), oxiacilo, formilo, ácido carboxílico, carboxamida, carboxialquílamida(Ci-C6), carboxifenilamida, carboxiaIquiIo(Ci-C6), hidroxialquilo(Ci-C6), alquiloxi(Ci-C6) alquilo(CrC6) o aciloxialquilo(Ci-C6), ácido carboxílico de alquilo(Ci-C6) o alquilcarboxi(CrCB) alquilo(C C6); o R3 es OCH2COR8, y R4 es hidrógeno, en donde R es hidroxilo, oxialquilo de Ci-C6, oxialquilfenilo de Ci-C6, amino, aminoalquilo de C1-C6, aminodialquilo de C1-C6, aminoalquilfenilo de CrC6, un aminoácido o derivado del mismo; o R3 es OCH2CH20R9, y R4 es hidrógeno, en donde R9 es alquilo de C1-C6, alquilfenilo de C1-C6, fenilo, fenilo sustituido, (alquilo de C-i-C6)acilo o fenacilo; o R 3 es OCH2CN, y R4 es hidrógeno; R5 es hidrógeno o alquilo de CrC6 o alquilfenilo(C C6); R6 es hidrógeno o metilo; o una sal del mismo. A este respecto, véase, por ejemplo, la solicitud internacional del PCT No. PCT/GB92/00230. Dos compuestos preferidos para su uso en la presente invención, los cuales se mencionan en la patente de E.U.A. No. 5,872,152, son: [4-(N-hidroxiamino)-2R-isobutil-3S-tieniltiometil)succinil]-L-fenilalanina-N-metilamida, que tiene la estructura siguiente: y [4-(N-hidroxiamino)-2R-isobutil-3S-feniltiometil)succinil]-L-fenilalanina-N-metilamida, que tiene la estructura siguiente: Como se usa en la presente para describir inhibidores de M P que tienen una porción de ácido hidroxámico, los siguientes términos tienen los significados indicados. El término "alquilo de Ci-C6" se refiere a grupos hidrocarburo de cadena recta o cadena ramificada que tienen de 1 a 6 átomos de carbono, en donde grupos alquilo ilustrativos son metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, ter-butilo, pentilo, neopentilo y hexilo. El término "alquenilo de C-i-C6" se refiere a grupos hidrocarburo de cadena recta o cadena ramificada que tienen de 1 a 6 átomos de carbono, y que tienen además uno o más dobles enlaces, cada uno de estereoquímica E o Z en donde sea aplicable, en donde este término incluiría, por ejemplo, un metileno alfa, beta-insaturado, vinilo, 1-propenilo, 1- y 2-butenilo y 2-metil-2-propenilo, y en donde en una modalidad preferida el grupo alquenilo de Ci-C6 es un grupo alquenilo de C2-C6. El término "cicloalquilo de C3-C6" se refiere a un grupo alicíclico que tiene de 3 a 6 átomos de carbono, en donde grupos cicloalquilo ilustrativos son ciclopropilo, ciclobutílo, ciclopentilo y ciclohexilo. El término "cicloalquenilo de C4-C6" se refiere a un grupo alicíclico que tiene de 4 a 6 átomos de carbono, y que tiene además uno o más dobles enlaces, en donde grupos cicloalquenilo ilustrativos son ciclopentenilo, ciclohexenilo, cicloheptenilo y ciclooctenilo. El término "halógeno" se refiere a flúor, cloro, bromo o yodo. El término "cadena lateral de aminoácidos" se refiere a una cadena lateral característica unida a la porción -CH(NH2)(COOH) en los aminoácidos R o S siguientes: glicina, alanina, valina, leucina, isoleucina, fenilaianina, tirosina, triptófano, serina, treonina, cisteína, metionina, asparagina, glutamina, lisína, histídina, arginina, ácido glutámico y ácido aspártico. Ejemplos representativos de hidroxamatos, y métodos para sintetizar hidroxamatos, se describen en detalle en las patentes de E.U.A. Nos. 4,599,361 , 5,720,486, 4,743,587, 5,996,358, 5,183,900, 5,189,178, 5,239,078, 5,240,958, 5,256,657, 5,300,674, 5,304,604, 5,310,763, 5,412,145, 5,442,110, 5,473,100, 5,514,677, 5,530,161, 5,643,964, 5,652,262, 5,691 ,382, 5,696,082, 5,700,838, 5,747,514, 5,594,006, 5,763,621 , 5,821 ,262, 5,840,939, 5,849,951 , 5,859,253, 5,861 ,436, 5,866,717, 5,872,152, 5,902,791 , 5,917,090, 5,919,940, 5,932,695, 5,962,521 , 5,962,529, 6,017,889, 6,022,898, 6,028,110, 6,093,798, 6,103,739, 6,124,329, 6,124,332, 6,124,333, 6,127,427, 6,218,389, 6,228,988 y 6,258,851. Solicitudes y publicaciones internacionales y extranjeras representativas incluyen EP-A-0231081, EP-A-0236872, EP-A-0274453, EP-A-0489577, EP-A-0489579, EP-A-0497192, EP-A-0574758 y EP-A-0575844, así como los documentos WO 90/05716, WO 90/05719, WO 91/02716, WO 92/09563, WO 92/17460, WO 92/13831 , WO 92/22523, WO 93/09090, WO 93/09097, WO 93/20047, WO 93/24449, WO 93/24475, WO 94/02446, WO 94/02447, WO 94/21612, WO 94/21625, WO 94/24140, WO 94/25434, WO 94/25435 y WO 99/06361. Muchos hidroxamatos son también fácilmente disponibles de una variedad de fuentes comerciales. 4. Inhibidores de polipéptídos Dentro de otros aspectos de la invención, pueden usarse inhibidores de polipéptídos (incluyendo derivados de polipéptídos) de metaloproteinasas de matriz, para extender la duración y utilidad de la colágena. Ejemplos representativos de inhibidores de polipéptídos, incluyen los que se describen en las patentes de E.U.A. Nos. 5,300,501 , 5,530,128, 5,569,665, 5,714,491 y 5,889,058. 5. Compuestos basados en mercapto Compuestos basados en mercapto pueden usarse también como MMPls. Ejemplos representativos incluyen compuestos de mercaptocetona y mercaptoalcohol, tales como los que se describen en las patentes de E.U.A. Nos. 5,831 ,004, 5,840,698 y 5,929,278; y mercaptosulfuros tales como los que se describen en la patente de E.U.A. No. 5,455,262. 6. Bisfosfonatos Los bisfosfonatos son compuestos que se relacionan con ácido pirofosfónico inorgánico (véase en general H. Fleisch, Endocr. Rev., 19(1 ): 80-100 (1998); véase también, H. Fleisch, Bisphosphonates in Bone Disease: From the Laboratory to the Patient (1997, 3a. ed.)). The Parthenon Publishing Group, New York y Londres). En general, los bisfosfonatos tienen la estructura: P-C-P. Bisfosfonatos particularmente preferidos, tienen la estructura: O" R' O- I I I o=p— c— P=0 I I I O" R" O" en donde los sustituyentes R' y R" representan independientemente un átomo de hidrógeno o un átomo de halógeno, un grupo hidroxi, amino opcionalmente sustituido o tío opcionalmente sustituido, o un residuo de hidrocarburo opcionalmente sustituido. En un aspecto, uno de R' y R" es hidroxi, hidrógeno o cloro. Ejemplos representativos de bisfosfonatos incluyen, por ejemplo, alendronato ((ácido 4-amino-1-hidroxibutiliden)bisfosfónico); clodronato (ácido diclorometanbisfosfónico); etidronato ((ácido 1-hidroxietiliden)bisfosfónico); pamidronato ((ácido 3-amino-1-hidroxipropiliden)bisfosfónico); risedronato ([ácido hidroxi-2-(3-piridinil)-etiliden]bisfosfón¡co); tiludronato (([(ácido 4-clorofenil)tio]-metilen]-bisfosfónico); zolendronato; [1-hidroxi-3-(metif-pentilamino)-propiliden]bis-fosfonato (BM21.0955); [(cicloheptilamino)metilen]-bisfosfonato (YM175); 1-hidroxi-3-(1-pirroIidinil)-propiliden]b¡sfosfonato (EB- 1053); [1-hidroxi-2-(1 H-imidazol-1-il)-etiliden]bisfosfonato (CGP 42'446) y (1-hidroxi-2-imidazo-[1 ,2-a]piridin-3-il-etiliden)bisfosfonato (YM 529). Ejemplos representativos de bisfosfonatos se describen en las patentes de E.U.A. Nos. 5,652,227 y 5,998,390. 7. Combinaciones de MMPIs Dentro de ciertas modalidades de la invención, puede usarse más de un MMPI (es decir, pueden usarse dos o más MMPIs en combinación). Los MMPIs sinergísticos incluyen, por ejemplo, tetraciciinas y bisfosfonatos (véase, por ejemplo, las patentes de E.U.A. Nos. 5,998,390 y 6,114,316). Pueden usarse en forma similar otras combinaciones de MMPIs que incluyan, por ejemplo, MMPIs que inhiban MMPs en diferentes etapas (por ejemplo, hidroxamatos y tetraciciinas).

III. Formulaciones- Como se indicó anteriormente, la colágena es una proteína fibrosa que puede obtenerse de fuentes naturales, o puede producirse en forma recombinante. Ejemplos representativos de patentes de E.U.A. que describen composiciones basadas en colágena, y métodos para preparar dichas composiciones, incluyen las patentes de E.U.A. Nos. 6,166,130, 6,051,648, 5,874,500, 5,705,488, 5,550,187, 5,527,856, 5,523,291 , 4,582,640, 4,424,208 y 3,949,073. Las composiciones de MMPI de la presente invención pueden prepararse en una variedad de formas. Por ejemplo, el MMPI puede disolverse directamente en la solución de colágena. Si el MMPI es estable en la solución de colágena, puede prepararse la composición que contenga la colágena y el MMPI en un aparato de aplicación individual. Si el MMPI no es estable en una solución de colágena durante un tiempo significativo, la composición puede obtenerse como un sistema de dos componentes, en el cual los componentes se mezclan inmediatamente antes de su uso. Pueden obtenerse también composiciones de MMPI de la presente invención, colocando el factor de MMPI en un vehículo. Ejemplos representativos de vehículos pueden incluir vehículos poliméricos y no poliméricos (por ejemplo, liposomas o vehículos basados en vitaminas), y pueden ser biodegradables o no biodegradables. Ejemplos representativos de composiciones biodegradables incluyen albúmina, gelatina, almidón, celulosa, dextranos, polisacáridos, fibrinógeno, poli(ésteres) [por ejemplo, poli(D,L-lactida), poli(D,L-lactida-co-glicolida), poli(glicolida), poli(e-caprolactona), copolímeros y mezclas de los mismos] poli(hidroxibutirato), poli(alquilcarbonato), poli(anhídridos) y poli(ortoésteres) (véase, en general, lllum, L, Davids, S. S. (eds.) "Polymers in controlled Drug Delivery" Wright, Bristol, 1987; Arshady, J., Controlled Reléase 17:1-22 (1991); Pitt, Int. J. Pharm. 59:173-196 (1990); Holland et al., J. Controlled Reléase 4:155-0180 (1986)). Ejemplos representativos de polímeros no degradables incluyen copolímeros de óxido de etileno y óxido de propileno [polímeros Pluronic -BASF], copolímeros de EVA, caucho de silicón, y polímeros basados en poli(metacrílato) y basados en poli(acrilato). Vehículos poliméricos particularmente preferidos, incluyen oligómeros y polímeros de ácido poli(D,L-láctico), oligómeros y polímeros de ácido poli(L-láctico), ácido poli(glicólico), copolímeros de ácido láctico y ácido glicólico, poli(caprolactona), poli(valerolactona), polianhídridos, copolímeros de caprolactona y/o ácido láctico, y/o ácido glicólico con polietilenglicol o metoxipolietilenglicol, y mezclas de los mismos. Los vehículos poliméricos pueden configurarse en una variedad de formas que incluyen, por ejemplo, dispositivos en forma de varilla, pellas, placas o cápsulas (véase, por ejemplo, Goodell et al., Am. J. Hosp. Pharm. 43:1454-1461 (1986); Langer et al., "Controlled reléase of macromolecules from polymers", en Biomedical polymers, Polymeríc meteríais and pharmaceuticals for biomedical use, Goldberg, E. P., Nakagim, A. (eds.) Academic Press, pp. 113-137, 1980; Rhine et al., J. Pharm. Sci. 69:265-270 (1980); Brown et al., J. Pharm. Sci. 72:1181-1 185 (1983); y Bawa et al., J. Controlled Reléase 1 :259-267 (1985)). Los factores de MPI pueden enlazarse mediante oclusión en las matrices del polímero, unidos por enlaces covalentes, o encapsulados en microcápsulas. Dentro de ciertas modalidades preferidas de la invención, se proveen composiciones de MMPI en formulaciones no capsulares tales como microesferas (variando en tamaño de nanómetros a micrómetros), pastas, filamentos de varios tamaños, películas y rocíos). De preferencia, las composiciones de MMPI de la presente invención (que, dentro de ciertas modalidades comprenden uno o más factores de MMPI, y un vehículo polimérico), son configuradas en una forma adecuada para el uso deseado. Dentro de ciertos aspectos de la presente invención, la composición de MMPI debe ser biocompatible, y liberar uno o más factores de MMPI durante un período de varios días a meses. Por ejemplo, se proveen composiciones de MMPI de "liberación rápida" o de "descarga", que liberan más de 10%, 20% o 25% de un factor de MMPI (por ejemplo, tetraciclina), durante un período de 7 a 10 días. Dichas composiciones de "liberación rápida" deben ser capaces, dentro de ciertas modalidades, de liberar niveles quimioterapéuticos (en donde sea aplicable) de un factor de MMPI deseado. Dentro de otras modalidades, se proveen composiciones de MMPI de "liberación lenta" que liberan menos de 5% (en p/v) de un factor de MMPI durante un período de 7 a 10 días. Además, las composiciones de MMPI de la presente invención deben ser de preferencia estables durante varios meses, y ser capaces de ser producidas y mantenidas bajo condiciones estériles. Dentro de ciertos aspectos de la presente invención, las composiciones de MMPI pueden configurarse en cualquier forma que varíe de alrededor de 0.050 nm a aproximadamente 500 µ?t?, dependiendo del uso particular. Por ejemplo, cuando se usan con el propósito de aumento de tejido cosmético (como se describe más adelante), se prefiere en general configurar la composición de MMPI en microesferas de entre alrededor de 0.1 a aproximadamente 100 µ?t?, de preferencia entre alrededor de 0.5 y aproximadamente 50 µ?t?, y más preferiblemente entre alrededor de 1 y aproximadamente 25 µ??. En forma alternativa, dichas composiciones pueden aplicarse también como una solución en la cual el MMPI sea solubilizado en una micela. La composición de las micelas puede ser de naturaleza polimérica. La composición polimérica más preferible para uso como micelas poliméricas, sería un copolímero de MePEG y poli(D,L-lactida). En forma alternativa, dichas composiciones pueden aplicarse también como una solución en la cual el MMPI sea encapsulado en un liposoma (véase anteriormente). En forma alternativa, dichas composiciones pueden aplicarse también como una solución en la cual el MMPI sea encapsulado en la fase oleosa de una emulsión o microemulsión. Las composiciones de MMPI de la presente invención pueden prepararse también en una variedad de formas de "pasta" o gel. Por ejemplo, dentro de una modalidad de la invención, se proveen composiciones de MMPI que son líquidas a una temperatura (por ejemplo, temperatura mayor de 37°C, tal como 40°C, 45°C, 50°C, 55°C o 60°C), y sólidas o semisólidas a otra temperatura (por ejemplo, temperatura ambiente, temperatura corporal, o cualquier temperatura menor de 37°C). Dichas "termopastas" pueden prepararse fácilmente dada la descripción provista en la presente. Ejemplos representativos de la incorporación de factores de MMPI, tales como los descritos anteriormente en vehículos poliméricos, se describen en más detalle a continuación en los ejemplos. Dentro de otros aspectos de la presente invención, se proveen vehículos poliméricos que están adaptados para contener y liberar un compuesto hidrofóbico, el vehículo conteniendo el compuesto hidrofóbico en combinación con un carbohidrato, proteína o polipéptido. Dentro de ciertas modalidades, el vehículo polimérico contiene o comprende regiones, bolsas o gránulos de uno o más compuestos hidrofóbicos. Por ejemplo, dentro de una modalidad de la invención, los compuestos hidrofóbicos pueden incorporarse dentro de una matriz que contiene al compuesto hidrofóbico, seguido de incorporación de la matriz dentro del vehículo polimérico. Una variedad de matrices puede usarse a este respecto incluyendo, por ejemplo, carbohidratos y polisacáridos tales como almidón, celulosa, dextrán, metilcelulosa y ácido hialurónico, proteínas o polipéptidos tales como albúmina, colágena y gelatina. Dentro de modalidades alternativas, los compuestos hidrofóbicos pueden ser contenidos dentro de un núcleo hidrofóbico, y este núcleo contenido dentro de una coraza hidrofílica. Por ejemplo, como se describe más adelante en los ejemplos, puede incorporarse paclitaxel en un núcleo hidrofóbico (por ejemplo, del agregado de ácido poli(D,L láctico)-PEG o ePEG), el cual tiene una coraza hidrofílica. 1. Profármacos de colágena - MMP Dentro de ciertos aspectos de la presente invención, las composiciones de MMPI puede configurarse de tal forma que el MMPI se una covalentemente a la colágena usada en la aplicación específica. El MMPI puede unirse directamente a la colágena, o a través de una molécula de enlace (por ejemplo, poli(etilenglicol)). Una vez que el sistema de profármaco de eolágena-MMP se introduzca o aplique al sitio deseado, el MMPI podría inhibir al MMPI, mientras permanecería aún unido a la colágena, o podría inhibir a la MMP después de que ha sido desdoblado (desdoblamiento hidrolítico y/o enzimático) a partir de la colágena. Para los TIMPs, puede usarse un agente de entrelazamiento heterobifuncional (por ejemplo, Sulfo-EMCS [Pierce]) para unir covalentemente el TIMP a la colágena. Más específicamente, el TIMP se puede hacer reaccionar con Sulfo-EMCS, de modo que el grupo maleimida reaccione con el grupo -SH de la cisteína contenida dentro de la secuencia del TIMP. El TIMP activado se puede hacer reaccionar entonces con una solución de colágena. El conjugado de colágena-TIPM se puede usar entonces para aplicaciones de aumento de tejidos. 2. Otras composiciones Dentro de ciertas modalidades de la invención, las composiciones de colágena/MMPI provistas en la presente pueden modificarse además para mejorar su utilidad. Por ejemplo, dentro de una modalidad, puede añadirse un colorante u otro agente colorante para mejorar la visualización de la composición de colágena/MMPI. El colorante o agente colorante puede ser permanente, o transitorio (por ejemplo, azul de metileno). Dentro de otras modalidades, pueden añadirse compuestos o factores que faciliten la coagulación (por ejemplo, trombina), a las composiciones descritas en la presente.

IV. Aplicación clínica 1. Inyecciones dérmicas Se ha desarrollado una variedad de productos de colágena inyectables para el aumento de tejidos blandos para corregir cicatrices faciales, disminuir líneas de faciales y aumentar los labios. Específicamente, dichos implantes se indican para el tratamiento de una variedad de deficiencias del perfil que incluyen (pero no están restringidos a) corrección de cicatrices por acné, atrofia por enfermedad o trauma, líneas de entrecejo glabelares, pliegues nasolabiales, o defectos secundarios a rinoplastía, injerto de piel u otra cirugía y otros defectos de tejidos blandos. Varios productos disponibles comercialmente se usan para este propósito, incluyendo Zyderm I® (colágena de bovino a 3.5% en solución salina con lidocaína a 0.3%), Zyderm II® (colágena de bovino a 6.5%), Zyplast® (McGhan Medical Corporation; colágena de dermis de bovino a 3.5% entrelazada con glutaraldehído dispersado en solución salina fisiológica regulada en su pH con fosfato que contiene lidocaína a 0.3%) y Fibrel (Serano Labs - una combinación de gelatina, ácido épsilon-amino-caproico y solución salina combinada con el plasma del paciente a una relación de 1 :1 antes de la inyección). Otros productos inyectables basados en colágena, incluyendo los derivados de fuentes de humano o no de bovino, pueden usarse también en esta modalidad. Infortunadamente, se requieren con frecuencia procedimientos de "retoque" repetidos, ya que el implante es colonizado por células inflamatorias y células de tejido conectivo del hospedero que producen metaloproteinasas, tales como colagenasa, que degradan el implante de colágena con el tiempo. Una colágena inyectable (como se describió anteriormente) que contenga un inhibidor de metaloproteinasa (MMPI), ya sea sola o en una preparación de liberación sostenida, produciría una durabilidad incrementada del implante, y reduciría el número de inyecciones repetidas subsecuentes. Aunque cualquiera de los inhibidores de metaloproteinasa descritos anteriormente podría ser adecuado para su incorporación en una inyección de colágena dérmica, se prefieren particularmente los siguientes: TIMP-1 , tetraciclina, doxicielma, minociclina, Batimistat®, Marimistat®, Ro-1130830, CGS 27023A, BMS-275291 , CMT-3, Solimastat, llomastat, CP-544439, Prinomastat, PNU-1427690, SU-5402 y Trocade. Sin importar la formulación usada, la administración de la inyección de colágena cargada de MMPI se realizaría de la manera siguiente: Antes de la administración del material, el paciente debe haber concluido dos pruebas de piel (realizadas con una separación de 2 semanas) para poner a prueba una respuesta alérgica. Si estas pruebas son negativas, la inyección de colágena cargada de MMPI puede administrarse al paciente. Se usa una jeringa precargada refrigerada con una aguja de calibre fino (calibre 30 ó 32), que no contenga más de 309 cm3 del material del implante. Se coloca al paciente en posición sentada, con el respaldo de la mesa ligeramente reclinado. Pueden usarse lidocaína y/o prilocaína tópicas para la anestesia. Se inserta la aguja a un ángulo respecto de la piel, y se hace avanzar en el tejido superficial de la dermis. Se extruye una cantidad suficiente del material del implante para reparar el defecto del contorno del tejido blando. En el caso de Zyderm® cargada de MMPI se requiere corrección excesiva (inyección de más material del que se requiere finalmente), ya que una proporción significativa del material inyectado se disipa en las horas después de la inyección. Se usaría típicamente Zyplast® cargada de MMPI para corregir líneas más profundas, y se inyecta más profundamente en la dermis. Puesto que este material es más rígido, no se requiere corrección excesiva. Como se describió anteriormente, pueden requerirse inyecciones subsecuentes de retoque para mantener la corrección máxima. Sin embargo, una inyección de colágena cargada de inhibidor de metaloproteinasa durará más que su contraparte no cargada, proveerá corrección más duradera, y reducirá la necesidad de inyecciones repetidas. La cantidad total de material inyectado, depende del sitio de la deficiencia del perfil o contorno que se esté corrigiendo; sin embargo, la cantidad total de material inyectado no debe exceder 30 cm3 para un producto basado en colágena. Las siguientes composiciones cargadas de MMPI se describirán sobre una base de dosis por cm3: a. Invecciones dérmicas de colágena cargadas de Marimistat® La composición preferida es Marimistat® a 0.001 % - 30% por ce (es decir, 1 µ9-30 mg de Marimistat en peso) de suspensión de colágena/solución salina. Una dosificación particularmente preferida es Marimistat® a 0.01-1.5% (es decir, 10 9 a 1.5 mg) por ce de suspensión de colágena/solución salina. Por lo tanto, la dosificación total suministrada en un tratamiento de 30 ce no excedería 45 mg (o menos que la dosis diaria individual bien tolerada establecida de 50 mg). En una modalidad, se carga Marimistat a 0.001-30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero, que a su vez se cargan en la colágena, para producir liberación sostenida del material durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. b. Invecciones de colágena cargadas de Batimistat® La composición preferida es Batimistat® a 0.001 a 30% (es decir, 1 µg a 30 mg de Batimistat® en peso) por ce de suspensión inyectable de colágena/solución salina. Una dosificación particularmente preferida es 0.01 a 5% (10 µg a 5 mg en peso) por ce de suspensión de colágena/solución salina. Por lo tanto, la dosificación total suministrada en un tratamiento de 30 ce no excedería 50 mg de Batimistat® (o menos que la dosis individual bien tolerada establecida de 300 mg/m2). En una modalidad, el Batimistat® altamente insoluble es cargado en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero que a su vez se cargan en la colágena, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varia de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. c. Inyecciones dérmicas de colágena cargadas de doxiciclina La composición preferida es doxiciclina a 0.001 % - 30% (1 µ9 a 30 mg de doxiciclina en peso) por ce de suspensión inyectable de colágena/solución salina. Una dosificación particular preferida es doxiciclina a 0.01 a 3% (10 µg a 3 mg de doxiciclina en peso) por ce de suspensión de colágena/solución salina. Por lo tanto, la dosificación total administrada en un tratamiento de 30 ce no excedería 90 mg (o menos que la dosificación diaria bien tolerada de 100 mg). En una modalidad, se carga doxiciclina a 0.001 % a 30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero, que a su vez se cargan en la colágena, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. d. Invecciones dérmicas de colágena cargadas de tetraciclina La composición preferida es tetraciclina a 0.001 % - 30% (1 µ9 a 30 mg de tetraciclina en peso) por ce de suspensión inyectable de colágena/solución salina. Una dosificación particular preferida es tetraciclina a 0.01 a 30% (10 µg a 30 mg de tetraciclina en peso) por ce de suspensión de colágena/solución salina. Por lo tanto, la dosificación total administrada en un tratamiento de 30 ce no excedería 900 mg (o menos que la dosificación diaria bien tolerada de 1 g). En una modalidad, se carga tetraciclina a 0.001 % a 30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero, que a su vez se cargan en la colágena, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. e. Invecciones dérmicas de colágena cargadas de minociclina La composición preferida es minociclina a 0.001 % - 30% (1 9 a 30 mg de minociclina en peso) por ce de suspensión inyectable de colágena/solución salina. Una dosificación particular preferida es minociclina a 0.01 a 6% (10 µg a 6 mg de minociclina en peso) por ce de suspensión de colágena/solución salina. Por lo tanto, la dosificación total administrada en un tratamiento de 30 ce no excedería 180 mg (o menos que la dosificación diaria bien tolerada de 200 mg). En una modalidad, se carga minociclina a 0.001 % a 30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero, que a su vez se cargan en la colágena, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. f. Invecciones dérmicas de colágena cargadas de Trocade La composición preferida es trocade a 0.001 % - 30% (1 µg a 30 mg de trocade en peso) por ce de suspensión inyectable de colágena/solución salina. Una dosificación particular preferida es trocade a 0.01 a 5% (10 µg a 5 mg de trocade en peso) por ce de suspensión de colágena/solución salina. Por lo tanto, la dosificación total administrada en un tratamiento de 30 ce no excedería 150 mg. En una modalidad, se carga trocade a 0.001% a 30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero, que a su vez se cargan en la colágena, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. 2. Incontinencia urinaria Se usa con frecuencia colágena inyectable en el tratamiento de incontinencia urinaria. La modalidad descrita a continuación detalla composiciones de productos de colágena cargados de inhibidor de metaloproteinasa, y métodos para su uso en el tratamiento de esta condición médica común. Por poco tiempo, la incontinencia, o la pérdida involuntaria de orina, es una condición médica común que afecta a 20% de mujeres y de 1 a 2% de hombres en alguna etapa de su vida. La forma más común de incontinencia es incontinencia por esfuerzo, o la fuga inadvertida de orina en respuesta a actividades que causan un incremento en la presión intraabdominal (tales como estornudo, tos o distensión). Esto ocurre cuando la presión intravesical (presión en la vejiga) excede la presión en la uretra, forzando orina de la vejiga y en la uretra en ausencia de contracción del detrusor (músculo de la vejiga). Se piensa que varias condiciones producen incontinencia por esfuerzo, incluyendo: (1 ) Descenso del cuello de la vejiga y esfínter uretral interno fuera del abdomen. (2) Falla del esfínter uretral intrínseco debido a trauma, cirugía, parto o malignidad. Las medidas correctivas se enfocan principalmente en sostener el cuello uretral proximal y de la vejiga dentro de la cavidad abdominal mediante medios quirúrgicos o no quirúrgicos. Un segundo procedimiento implica el uso de agentes de abultamiento uretral (incluyendo colágena) diseñados para aumentar la presión uretral y reducir la incontinencia por esfuerzo. Aunque las inyecciones de colágena periuretrales y transuretrales se ha usado con mucho éxito en el manejo de incontinencia por esfuerzo, la mayoría de los casos requiere más de un tratamiento debido a la durabilidad limitada del implante de colágena. El uso de una inyección de colágena cargada de MMPI puede sustentar la actividad del implante, y reducir la necesidad y la frecuencia de inyecciones periuretrales y transuretrales subsecuentes. Varios productos basados en colágena disponibles comercialmente, están disponibles para el manejo de incontinencia por esfuerzo. Contigen® (colágena entrelazada con gíutaraldehído de dermis de bovino purificada dispersada en solución salina fisiológica regulada en su pH con fosfato a 35 mg/mL, disponible de CR Bard®), es un agente de abultamiento uretral usado ampliamente. Otros productos inyectables basados en colágena, incluyendo los derivados de fuentes no de bovino, humano o recombinante, pueden usarse también en esta modalidad. Con Contigen®, la colagenasa entrelazada comienza a degradarse en aproximadamente 12 semanas, y se degrada por completo dentro de 10 a 19 meses. Aunque el porcentaje de pacientes que muestran mejora en su incontinencia después de la terapia varía inicialmente de 58 a 100%, la resorción de la colágena da como resultado la necesidad de repetir el procedimiento dentro de los intervalos mencionados anteriormente en la mayoría de los pacientes. En la presente invención, un MMPI se añade al producto inyectable basado en colágena en la forma de liberación sostenida para disminuir la velocidad de degradación del implante, y prolongar su actividad in vivo más allá de lo que se observa con la colágena sola (es decir, consistentemente más de un año en la mayoría de los pacientes, y más allá de dos años en un porcentaje significativo de otros).

Técnica transuretral Sin importar la formulación usada, la administración de una inyección transuretral de colágena cargada de MMPI, se realizaría de la siguiente manera: Antes de la administración del material, el paciente debe haber concluido dos pruebas de piel (realizadas con una separación de 2 semanas) para poner a prueba una respuesta alérgica. Si estas pruebas son negativas, la inyección de colágena cargada de MMPI puede administrarse al paciente. Se usa una jeringa refrigerada de uso individual precargada con una aguja de calibre fino (aguja para inyección transuretral de calibre 23 con una cánula de estabilización) que contiene 2.5 mL del material del implante. Se coloca al paciente en la posición de litotomía, y se insertan 10 mL de lidocaína a 2% en la uretra para anestesia. En mujeres, se visualiza citoscópicamente el cuello de la vejiga. Mediante el orificio de inyección del citoscopio, se inserta la aguja a la posición de las 4 horas a un ángulo agudo, 1-1.5 cm distal al cuello de la vejiga en el plano justo debajo de la mucosa de la vejiga. Se hace avanzar entonces la aguja con el citoscopio paralelo al eje largo de la uretra, hasta que esté apenas debajo de la mucosa del cuello de la vejiga. Se inyecta lentamente en este sitio colágena cargada de MMPl. El procedimiento se repite entonces en la posición de las 8 horas. Puede añadirse al implante azul de metileno, u otros agentes colorantes no tóxicos, para facilitar la visualización de la inyección.

Invección periuretral Puede usarse también inyección periuretral de una inyección de colágena cargada de MMPl para el tratamiento de incontinencia. Como se describió anteriormente, antes de la administración del material, el paciente debe haber concluido dos pruebas de piel (realizadas con una separación de 2 semanas) para poner a prueba una respuesta alérgica. Si estas pruebas son negativas, la inyección de colágena cargada de MMPl puede administrarse al paciente. Se usa una jeringa refrigerada de uso individual precargada con una aguja de calibre fino (aguja para inyección periuretral) que contiene 2.5 mL del material del implante. Se coloca al paciente en la posición de litotomía, se insertan 10 mL de lidocaína a 2% en la uretra para anestesia, y se visualiza citoscópicamente el cuello de la vejiga (en hombres, la uretra puede visualizarse también mediante procedimientos citoscópicos o suprapúbicos). Se inserta la aguja transvaginalmente o suprapúbicamente en el área inmediatamente adyacente y lateral a la uretra. Cuando llega a la posición adecuada cerca del cuello de la vejiga (como se observa citoscópicamente y como se describió anteriormente), la colágena cargada de MMPI se inyecta lentamente en este sitio. Puede añadirse al implante azul de metileno, u otros agentes colorantes no tóxicos, para facilitar la visualización de la inyección. Aunque potencialmente cualquier inyección de colágena cargada de MMPI podría ser adecuada para el tratamiento transuretral y periuretral de la incontinencia, se prefieren particularmente MMPI's tales como TIMP-1 , tetraciclina, doxiciclina, minociclina, Batimistat®, Marimistat®, Ro-1130830, CGS 27023A, BMS-275291 , CMT-3, Solimastat, llomastat, CP-544439, Prinomastat, PNU-1427690, SU-5402 y Trocade. Las siguientes composiciones son idealmente adecuadas para su uso como agentes de abultamiento urinario: a. Invecciones periuretral/transuretral de colágena cargadas de Marimistat® La composición preferida es Marimistat® a 0.001 % a 30% por ce (es decir, 1 µ9 a 30 mg de Marimistat® en peso) de suspensión de colágena/solución salina. Una dosificación particularmente preferida es Marimistat® a 0.01 a 15% (es decir, 10 µg a 15 mg) por mL de suspensión de colágena/solución salina. Por lo tanto, la dosificación total suministrada en un tratamiento de 2.5 mL no excedería 45 mg (o menos que la dosis diaria individual bien tolerada establecida de 50 mg). En una modalidad, se carga Marimistat® a 0.001 a 30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero, las cuales a su vez se cargan en la colágena, para producir liberación sostenida del material durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. b. Invecciones periuretral/transuretral de colágena cargadas de Batimistat® La composición preferida es Batimistat® a 0.001% a 30% (es decir, 1 µ9 a 30 mg de Batimistat® en peso) por ml_ de suspensión inyectable de colágena/solución salina. Una dosificación particularmente preferida es Batimistat® a 0.01 a 30% (10 µ? a 30 mg en peso) por ml_ de suspensión de colágena/solución salina. Por lo tanto, la dosificación total suministrada en un tratamiento de 2.5 ce no excedería 75 mg de Batimistat® (o menos que la dosis individual bien tolerada establecida de 300 mg/m2). En una modalidad, se carga Batimistat® a 0.001 a 30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero, las cuales a su vez se cargan en la colágena, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. c. Invecciones periuretral/transuretral de colágena cargadas de doxiciclina La composición preferida es doxiciclina a 0.001% - 30% (1 µg a 30 mg de doxiciclina en peso) por mL de suspensión inyectable de colágena/solución salina. Una dosificación particular preferida es doxiciclina a 0.01 a 30% (10 9 a 30 mg de doxiciclina en peso) por mL de suspensión de colágena/solución salina. Por lo tanto, la dosificación total administrada en un tratamiento de 2.5 mL no excedería 75 mg (o menos que la dosificación diaria bien tolerada de 100 mg). En una modalidad, se carga doxiciclina a 0.001% a 30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero, que a su vez se cargan en la colágena, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. d. Invecciones periuretral/transuretral de colágena cargadas de tetraciclína La composición preferida es tetraciclina a 0.001% - 30% (1 µg a 30 mg de tetraciclina en peso) por mL de suspensión inyectable de colágena/solución salina. Una dosificación particular preferida es tetraciclina a 0.01 a 30% ( 0 µg a 30 mg de tetraciclina en peso) por mL de suspensión de colágena/solución salina. Por lo tanto, la dosificación total administrada en un tratamiento de 2.5 mL no excedería 75 mg (o menos que la dosificación diaria bien tolerada de 1 g). En una modalidad, se carga tetraciclina a 0.001 % a 30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero, que a su vez se cargan en la colágena, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. e. Invecciones periuretral/transuretral de colágena cargadas de minociclina La composición preferida es minociclina a 0.001 % - 30% (1 µg a 30 mg de minociclina en peso) por ce de suspensión inyectable de colágena/solución salina. Una dosificación particular preferida es minociclina a 0.01 a 6% (10 µ9 a 6 mg de minociclina en peso) por ce de suspensión de colágena/solución salina. Por lo tanto, la dosificación total administrada en un tratamiento de 30 ce no excedería 180 mg (o menos que la dosificación diaria bien tolerada de 200 mg). En una modalidad, se carga minociclina a 0.001% a 30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero, que a su vez se cargan en la colágena, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. f. Invecciones periuretral/transuretral de colágena cargadas de Trocade La composición preferida es trocade a 0.001 % - 30% (1 9 a 30 mg de trocade en peso) por mL de suspensión inyectable de colágena/solución salina. Una dosificación particular preferida es trocade a 0.01 a 5% (10 ? a 5 mg de trocade en peso) por mL de suspensión de colágena/solución salina. Por lo tanto, la dosificación total administrada en un tratamiento de 2.5 mL no excedería 75 mg. En una modalidad, se carga trocade a 0.001% a 30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero, que a su vez se cargan en la colágena, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), seria adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. 3. Selladores quirúrgicos La colágena se ha usado ampliamente como un sellador quirúrgico, particularmente como un sellador vascular para detener hemorragias después de punción femoral para lograr acceso vascular y en hemostasis durante la cirugía.

La canulación de la arteria femoral es el paso inicial para lograr acceso al sistema vascular como parte de numerosos procedimientos médicos comunes, tales como angiografía coronaria, angiografía cerebral, angioplastía coronaria, colocación de stent coronario, reparación de aneurisma vascular cerebral, reparación de aneurisma abdominal con injertos de stent, y varios otros procedimientos. Para muchas de estas indicaciones, deben introducirse dispositivos relativamente grandes en la arteria femoral que necesitan de un procedimiento de "reducción" en la arteria. Una vez que la intervención ha concluido y se ha retirado la vaina del catéter, con frecuencia es difícil taponar la hemorragia a partir del sitio de punción femoral (particularmente puesto que muchos de los pacientes están bajo terapia anticoagulante). Se han desarrollado selladores vasculares basados en colágena para aplicación sobre el sitio de punción para "sellar" la herida, e iniciar la curación de la arteriotomía. Esto puede permitir que los pacientes ambulen más pronto, y prevengan complicaciones serias tales como formación de hematomas, o en casos severos, hemorragia y pérdida importante de sangre. Se usan también selladores de colágena hemostáticos para sellar la superficie adventicia (exterior) o de corte de vasos sanguíneos, órganos, huesos y tejidos durante la cirugía, como un adyuvante a la hemostasis cuando el control de la hemorragia por ligadura no es efectivo o posible. Estos productos se usan en procedimientos quirúrgicos cardiovasculares, generales, hepáticos y ortopédicos. Varios selladores basados en colágena están disponibles comercialmente, incluyendo Vasoseal (producido por Datascope®) y CoStasis™ (producido por Cohesión Technologies®). La producción de un sellador basado en colágena cargada de MMPI prolongará la actividad del implante de colágena, y permitirá que ocurra el proceso de curación completo antes de la resorción del implante. Esto puede ser de uso particular en el control de hemorragia quirúrgica, en donde puede no ser posible lograr acceso fácil a un sitio de reparación vascular post-operatoriamente. Vasoseal™ es un ejemplo de un equipo de "tapón" de colágena para la reparación de punción de arteria femoral. Por poco tiempo, antes de remover la vaina del procedimiento vascular, se inserta un localizador de arteriotomía en la vaina usando un introductor. Con la arteria comprimida, se remueven el introductor y la vaina del procedimiento una vez que se mueve correctamente el localizador de arteriotomía en posición. Un dilatador de tejido se hace avanzar sobre el localizador, y se hace avanzar una vaina sobre el dilatador, de modo que la vaina es posicionada sobre la superficie exterior del sitio de arteriotomía; el localizador y el dilatador se remueven entonces. El cartucho de colágena (que contiene un tapón de 80-100 mg de colágena de bovino purificada) se inserta en la vaina, y el tapón de colágena se inyecta sobre la herida de la punción en la arteria (pueden requerirse dos inyecciones). Un sellador de arteria femoral cargado de MMPI sería desplegado en exactamente la misma forma, pero permanecería más tiempo en su sitio para permitir que ocurra la curación completa, reduciendo de esta manera el riesgo de hemorragia nueva en una fecha posterior. Ejemplos de formulaciones de tapón de colágena cargada de MMPI, se proveen a continuación: CoStasis™ es un líquido pulverizable que es un ejemplo de un sellador quirúrgico hemostático basado en colágena que se beneficiaría de la adición de un MMPI (véase, por ejemplo, las patentes de E.U.A. Nos. 5,290,552, 5,614,587, 5,744,545, 5,786,421 , 5,936,035, 6,096,309 y 6,280,727). Para desplegar el sistema, se colecta plasma del mismo paciente, y se extrae en una jeringa que se adhiere a un dispositivo de unión. La jeringa con suspensión de colágena (20 mg/mL de colágena de bovino y por lo menos 300 U/mL de trombina de bovino en un regulador de pH de CaCl2 a 40 mM) se adhiere al otro orificio en el dispositivo de unión. El dispositivo de unión mezcla los contenidos de la jeringa de colágena/trombina con los contenidos de la jeringa del plasma del paciente. La trombina de bovino convierte el fibrinógeno autólogo en fibrina, que en presencia de colágena, forma una matriz de gel de colágena/fibrina que se adhiere al sitio de la hemorragia. La mezcla se pulveriza entonces mediante la jeringa sobre el sitio de la hemorragia. El MMPI se añade como un componente de la suspensión de colágena/trombina como se describe más adelante. Un sellador de colágena cargado de MMPI sería de mayor utilidad en procedimientos quirúrgicos en donde puede requerirse hemostasis prolongada hasta que ocurra la cicatrización del tejido. a. Selladores quirúrgicos de colágena cargada de arimistat® La composición preferida es Marimistat® a 0.001 %-10% por mL (es decir, 1 µ9-30 mg de Marimistat® en peso) de suspensión de colágena/trombina (20 mg/mL de colágena de bovino y por lo menos 300 U/mL de trombina de bovino en un regulador de pH de CaCI2 a 40 mM). Una dosificación particularmente preferida es Marimistat® a 0.01 -10% (es decir, 10 9 a 10 mg) por mL de suspensión de colágena/trombina. Por lo tanto, la dosificación total suministrada en un tratamiento de 5.0 mL no excedería 50 mg (o igual a la dosis diaria individual bien tolerada establecida de 50 mg). En una modalidad, se carga Marimistat® a 0.001 -10% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero que se cargan a su vez en la suspensión de colágena/trombina, para producir liberación sostenida del material durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. b. Selladores quirúrgicos de colágena cargada de Batimistat® La composición preferida es Batimistat® a 0.001 a 30% (es decir, 1 µg a 30 mg de Batimistat® en peso) por mL de suspensión inyectable de colágena/trombina (20 mg/mL de colágena de bovino y por lo menos 300 U/mL de trombina de bovino en un regulador de pH de CaCI2 a 40 mM). Una dosificación particularmente preferida es Batimistat® a 0.01 a 30% (10 µg a 30 mg en peso) por mL de suspensión de colágena/trombina. Por lo tanto, la dosificación total suministrada en un tratamiento de 5 mL no excedería 150 mg de Batimistat® (o menos que la dosis individual bien tolerada establecida de 300 mg/m2). En una modalidad, se carga Batimistat® a 0.001 a 30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero que se cargan a su vez en la suspensión de colágena/trombina, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. c. Selladores quirúrgicos de colágena cargada de doxiciclina La composición preferida es doxiciclina a 0.001 a 20% (1 g a 30 mg de doxiciclina en peso) por mL de suspensión inyectable de colágena/trombina (20 mg/mL de colágena de bovino y por lo menos 300 U/mL de trombina de bovino en un regulador de pH de CaCl2 a 40 mM). Una dosificación particular preferida es doxiciclina a 0.01 a 20% (10 g a 20 mg de doxiciclina en peso) por mL de suspensión de colágena/trombina. Por lo tanto, la dosificación total administrada en un tratamiento de 5 mL no excedería 100 mg de doxiciclina (o igual a la dosificación diaria bien tolerada de 100 mg). En una modalidad, se carga doxiciclina a 0.001% a 20% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero que se cargan a su vez en la suspensión de colágena/trombina, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. d. Selladores quirúrgicos de colágena cargada de tetraciclina La composición preferida es tetraciclina a 0.001 a 30% (1 µ9 a 30 mg de tetraciclina en peso) por ml_ de suspensión inyectable de colágena/trombina (20 mg/mL de colágena de bovino y por lo menos 300 U/mL de trombina de bovino en un regulador de pH de CaC½ a 40 mM). Una dosificación particular preferida es tetraciclina a 0.01 a 30% (10 µ9 a 30 mg de tetraciclina en peso) por mL de suspensión de colágena/trombina. Por lo tanto, la dosificación total administrada en un tratamiento de 5 mL no excedería 150 mg de tetraciclina (o menos que la dosificación diaria bien tolerada de 1 g). En una modalidad, se carga tetraciclina a 0.001% a 30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero que se cargan a su vez en la suspensión de colágena/trombina, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. e. Selladores quirúrgicos de colágena cargada de minociclina La composición preferida es minociclina a 0.001 a 30% (1 µg a 30 mg de minociclina en peso) por mL de suspensión inyectable de colágena/trombina (20 mg/mL de colágena de bovino y por lo menos 300 U/mL de trombina de bovino en un regulador de pH de CaC^ a 40 mM). Una dosificación particular preferida es minociclina a 0.01 a 20% (10 µg a 20 mg de minociclina en peso) por mL de suspensión de colágena/trombina. Por lo tanto, la dosificación total administrada en un tratamiento de 5 mL no excedería 100 mg de tetraciclina (o menos que la dosificación diaria bien tolerada de 200 mg). En una modalidad, se carga minociclina a 0.001% a 30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero que se cargan a su vez en la suspensión de colágena/trombina, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. f. Selladores quirúrgicos de colágena cargada de trocade La composición preferida es trocade a 0.001 a 30% (1 µg a 30 mg de trocade en peso) por mL de suspensión inyectable de colágena/trombina (20 mg/mL de colágena de bovino y por lo menos 300 U/mL de trombina de bovino en un regulador de pH de CaC½ a 40 mM). Una dosificación particular preferida es trocade a 0.01 a 10% (10 µ? a 10 mg de trocade en peso) por mL de suspensión de colágena/trombina. Por lo tanto, la dosificación total administrada en un tratamiento de 5 mL no excedería 50 mg. En una modalidad, se carga trocade a 0.001 % a 30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero que se cargan a su vez en la suspensión de colágena/trombina, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. q. Selladores de punción femoral de colágena cargada de Marimistat® La composición preferida es Marimistat® a 0.001% a 10% (es decir, 1 µg a 30 mg de Marimistat® en peso) por dosis de colágena (80 a 100 mg de tapón de colágena). Una dosificación particular preferida es Marimistat® a 0.01 a 10% (es decir, 10 g a 10 mg) por tapón de colágena. En una modalidad, se carga Marimistat® a 0.001% a 10% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero que se cargan a su vez en la colágena, para producir liberación sostenida del material durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. h. Selladores de punción femoral de colágena cargada de Batimistat® La composición preferida es Batimistat® a 0.001 % a 30% (es decir, 1 µ9 a 30 mg de Batimistat® en peso) por dosis de colágena (80 a 100 mg de tapón de colágena). Una dosificación particular preferida es Batimistat® a 0.01 a 30% (10 µg a 30 mg en peso) por tapón de colágena. En una modalidad, se carga Batimistat® a 0.001 % a 30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero que se cargan a su vez en la colágena, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. i. Selladores de punción femoral de colágena cargada de doxicíclina La composición preferida es doxicíclina a 0.001 % a 20% (1 µg a 30 mg de doxicíclina en peso) por dosis de colágena (80 a 100 mg de tapón de colágena). Una dosificación particular preferida es doxicíclina a 0.01 a 20% (10 µg a 20 mg de doxicíclina en peso) por tapón de colágena. En una modalidad, se carga doxicíclina a 0.001 % a 20% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero que se cargan a su vez en la colágena, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. i. Selladores de punción femoral de colágena cargada de tetraciclina La composición preferida es tetraciclina a 0.001 % a 30% (1 a 30 mg de tetraciclina en peso) por dosis de colágena (80 a 100 mg de tapón de colágena). Una dosificación particular preferida es tetraciclina a 0.01 a 30% (10 µg a 30 mg de tetraciclina en peso) por tapón de colágena. En una modalidad, se carga tetraciclina a 0.001 % a 30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero que se cargan a su vez en la colágena, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado. k. Selladores de punción femoral de colágena cargada de minociclina La composición preferida es minociclina a 0.001 % a 30% (1 a 30 mg de minociclina en peso) por dosis de colágena (80 a 100 mg de tapón de colágena). Una dosificación particular preferida es minociclina a 0.01 a 20% (10 µ9 a 20 mg de minociclina en peso) por tapón de colágena. En una modalidad, se carga minociclina a 0.001% a 30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero que se cargan a su vez en la colágena, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo anterior para obtener el producto final deseado.

I. Selladores de punción femoral de colágena cargada de trocade La composición preferida es trocade a 0.001 % a 30% (1 µg a 30 mg de trocade en peso) por dosis de colágena (80 a 100 mg de tapón de colágena). Una dosificación particular preferida es trocade a 0.01 a 10% (10 g a 10 mg de trocade en peso) por tapón de colágena. En una modalidad, se carga trocade a 0.001 % a 30% en microesferas de PLGA u otras microesferas basadas en polímero que se cargan a su vez en la colágena, para producir liberación sostenida del agente durante un período que varía de varios días a varios meses. Cualquier fuente de colágena inyectable (por ejemplo, de bovino, humano o recombinante; entrelazada o no entrelazada), sería adecuada para ser combinada con lo antenor para obtener el producto final deseado. Debe ser fácilmente evidente para los expertos en la técnica que cualquiera de los MMPls mencionados anteriormente, o derivados o análogos de los mismos, pueden usarse para crear variación de las composiciones anteriores, sin desviarse del espíritu y alcance de la invención.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 Preparación de colágena Fuente de colágena Se remueve la piel de conejos recién sacrificados. La piel removida se afeita, se desgrasa mediante disección aguda, y se corta en cuadros de 2 cm2. Los cuadros de piel se deshidratan por congelación a temperatura ambiente durante 24 horas, y se muelen entonces con ayuda de C02 sólido, en un molino para producir un polvo.

Solubilización Se prepara una suspensión de la piel pulverizada, añadiendo el material pulverizado a una solución de ácido acético a 0.5 M, de modo que la concentración de la piel sea de 5 g de peso seco de piel/litro. La suspensión se enfría a 10°C. Se añade una solución de pepsina recién preparada (0.5 g en 10 mL de HCI a 0.01 N) a la suspensión de piel, y la mezcla se incuba durante 5 días a 10°C con agitación ocasional.

Remoción de la pepsina Después del tratamiento enzimático, la pepsina restante en la mezcla se desnaturaliza añadiendo 5 mL de base de Tris, y ajustando el pH a 7.0 con NaOH a 3 N a 4°C. Se agitan 30 g de NaCI en la mezcla para mantener la colágena en solución. Después de 4 horas, la mezcla se centrifuga a 30,000 g durante 30 minutos para remover la pepsina precipitada.

Purificación La colágena tratada enzimáticamente se precipita del líquido sobrenadante, añadiendo otros 140 g de NaCI. La solución se agita, y se deja reposando durante 4 horas a 4°C. La colágena precipitada se centrifuga a 30,000 g durante 30 minutos. La pella de colágena resultante se resuspende en 200 mL de agua desionizada. Se añade ácido acético a 0.5 N para llevar el volumen final a un litro. Se precipita la colágena de esta solución, añadiendo 50 g de NaCI, dejando que la solución repose durante 5 horas a 4°C, y centrifugando a 30,000 g durante 30 minutos.

Esterilización La pella de colágena se resuspende en 200 mL de agua destilada, se transfiere a tubería de diálisis esterilizada, y se dializa durante 72 horas contra 50 volúmenes de ácido acético a 1 N. La colágena se dializa entonces durante 24 horas contra 50 volúmenes de ácido acético a 0.001 N, cambiando la solución tres veces durante este período. La solución dializada se concentra entonces poniendo el tubo de diálisis sobre toallas absorbentes estériles en una barrera bacteriológica de flujo laminar, hasta que la concentración alcance 12-15 mg de colágena/mL de solución. La solución concentrada se dializa entonces contra 50 volúmenes de ácido acético a 0.001 N durante 24 horas. La solución de colágena se almacena entonces en recipientes estériles a 4°C.

Adición de promotor de polimerización al concentrado Inmediatamente antes del uso, se añade una solución salina regulada en su pH (NaCI 2.5 mM/l, NaHP04 0.1 mM/l, pH 7.4) a 4°C a la solución de colágena, a una relación de volumen/volumen de 10:1 (colágena: regulador de pH), y el concentrado regulado en su pH se transfiere a una jeringa enfriada (4°C). Para aplicaciones específicas (por ejemplo, aumento de tejido cosmético), la solución salina regulada en su pH puede contener también 0.3-1% (en p/v) de un anestésico local (por ejemplo, lidocaína).

EJEMPLO 2 Preparación de microesferas cargadas de TI P-1 usando un método de emulsión doble de agua en aceite en agua Específicamente, se añaden 100 mg de una mezcla 50/50 de copolímero de PLGA (IV = 0. 5) a 12 ml_ de diclorometano. A esto, se añaden 800 µ?. de solución salina regulada en su pH con fosfato (PBS) o TIMP-1 (concentración típicamente de 1 a 10 mg/mL) en PBS. Esta mezcla se homogeniza entonces (20 segundos a 6,000 rpm). Una vez formada, esta mezcla se dispersa en 100 mL de una solución acuosa a 1.0% de alcohol polivinílico (PVA), y se homogeniza de inmediato (40 segundos a 8,000 rpm) para formar una emulsión doble de agua en aceite en agua. Bajo estas condiciones, se forman micropartículas polidispersas (teniendo la mayoría un tamaño menor de 10 mieras). El solvente se remueve entonces lentamente mediante evaporación, y las microesferas se recogen mediante centrifugación. Las partículas se lavan (5 veces) con agua desionizada, y se congelan entonces en un baño de hielo seco/acetona, y se liofilizan durante la noche para dar un polvo de microesferas blancas de flujo libre. Se preparan microesferas con un perfil de degradación más largo, usando 85/15 de PLGA (IV = 0.68) usando el método descrito anteriormente. El método descrito anteriormente se usa también para preparar microesferas que contienen TIMP-2, TIMP-3 y TIMP-4.

EJEMPLO 3 Preparación de microesferas cargadas de tetraciclina usando un método de emulsión doble de agua en aceite en agua Se preparan microesferas cargadas de tetraciclina en una forma similar a la que se describe en el ejemplo anterior, salvo que se usa clorhidrato de tetraciclina.

EJEMPLO 4 Preparación de microesferas cargadas de doxiciclina usando un método de emulsión doble de agua en aceite en agua Se preparan microesferas cargadas de doxiciclina en una forma similar a la que se describe en el ejemplo anterior, salvo que se usa clorhidrato de doxiciclina.

EJEMPLO 5 Preparación de microesferas cargadas de minociclina usando un método de emulsión doble de agua en aceite en agua Se preparan microesferas cargadas de minociclina en una forma similar a la que se describe en el ejemplo anterior, salvo que se usa clorhidrato de minociclina.

EJEMPLO 6 Preparación de microesferas cargadas de batimistat usando un método de emulsión de aceite en agua Preparación de solución de PVA En un vaso de precipitado de 1000 mL, se añaden 1000 mL de agua destilada y 100 g de PVA (Aldrich 13-23K, 98% hidrolizado). Se coloca una barra agitadora de 5.08 cm en el vaso de precipitado. La suspensión se calienta hasta 75-80°C con agitación. Una vez que el PVA se disuelve por completo (forma una solución clara), la solución de PVA (en p/v) se enfría a temperatura ambiente, y se filtra a través de un filtro en línea con una jeringa.

Preparación de solución de PLGA con Batimistat Se pesan 100 mg de Batimistat y 900 mg de PLGA (50/50, IV = 0.15), y se transfieren a un recipiente de escintilación de 20 mL. Se añaden 10 mL de diclorometano (DCM) grado CLAR al recipiente, para disolver el PLGA y el Batimistat. La muestra se coloca en un agitador orbital (lectura 4), hasta que el polímero y el Batimistat se hayan disuelto.

Preparación de las microesferas con diámetro menor de 25 µ?? Se transfieren 100 mL de solución de PVA a 10% en un vaso de precipitado de 400 mL. El vaso de precipitado se asegura al soporte usando cinta adhesiva de doble lado. Se coloca una varilla de agitación de tres hojas en el vaso de precipitado, y se ajusta a una altura de aproximadamente 0.5 cm arriba del fondo del vaso de precipitado. El motor del agitador (Dyna-Mix de Fisher Scientific) se enciende primero a 2.5. Se vierte la solución de 10 mL de PLGA/Batimistat en la solución de PVA durante la agitación. Se incrementa gradualmente la velocidad de la agitación a una lectura de 5. La agitación se continúa durante 2.5 a 3.0 horas. Las microesferas obtenidas se filtran a través de dos tamices de metal (53 µ?t? (superior) y 25 µ?? (inferior)) en un vaso de precipitado de 100 mL, para remover cualquier material de mayor tamaño. Las microesferas se lavan con agua destilada mientras se filtran. Las microesferas que se recogen en el filtrado se centrifugan (1000 rpm, 10 minutos) para sedimentar las microesferas. Se remueve el sobrenadante usando una pipeta Pasteur, y la pella se resuspende con 100 mL de agua destilada. Este procedimiento se repite otras dos veces. Las microesferas lavadas se transfieren a un contenedor de vidrio. La transferencia concluye enjuagando el vaso de precipitado con una pequeña cantidad de agua destilada (20-30 mL). El contenedor se sella con Parafilm, y se coloca en un congelador a -20°C durante la noche. La solución de microesferas congeladas se deshidrata entonces por congelación usando un liofilizador durante aproximadamente 3 días. Las microesferas deshidratadas se transfieren a un recipiente de escintilación de 20 mL, y se almacenan a -20°C. Las microesferas se esterilizan entonces terminalmente mediante irradiación con por lo menos rayos X de cobalto-60 (Co-60) de 2.5 Mrad.

EJEMPLO 7 Preparación de microesferas cargadas de Marimistat usando un método de aceite en agua Se preparan microesferas cargadas de Marimistat en una forma similar a la descrita en el ejemplo anterior, salvo que se usa Marimistat en lugar de Batimistat.

EJEMPLO 8 Preparación de microesferas cargadas de Trocade usando un método de aceite en agua Se preparan microesferas cargadas de Trocade en una forma similar a la descrita en el ejemplo anterior, salvo que se usa Trocade en lugar de Batimistat.

EJEMPLO 9 Preparación de solución de colágena gue contiene Batimistat micelar Preparación del polímero Se sintetiza polímero usando DL-lactida y metoxi poli(etilenglicol) [MePEG 2000] en presencia de octanoato estanoso a 0.5% en p/p, a través de una polimerización global con apertura de anillo.

Por poco tiempo, se lava la cristalería de reacción, y se enjuaga con agua estéril para irrigación, USP, se seca a 37°C, seguida de despirogenación a 250°C durante por lo menos 1 hora. Se pesan MePEG 2000 y DL-lactida (240 g y 160 g, respectivamente), y se transfieren a un matraz de fondo redondo usando un embudo de acero inoxidable. Se añade al matraz una barra de agitación magnética recubierta de Teflón® de 5.08 cm. Se usa un tapón de vidrio para sellar el matraz, el cual se sumerge entonces, hasta el cuello, en un baño de aceite precalentado. El baño de aceite se mantiene a 140°C usando una placa caliente de temperatura controlada. Después de que el MePEG y la DL-lactida se han fundido y han alcanzado 140°C, se añaden al matraz 2 ml_ de octanoato estanoso (catalizador) a 95%. El matraz se agita vigorosamente de inmediato después de la adición para asegurar un mezclado rápido, y se regresa entonces al baño de aceite. Se deja que la reacción proceda durante 6 horas con calor y agitación. El polímero líquido se vierte entonces en una bandeja de acero inoxidable, se cubre y se deja durante la noche en la campana de ventilación (aproximadamente 6 horas). El polímero se solidifica en la bandeja. La parte superior de la bandeja se sella usando Parafilm®. La bandeja sellada que contiene al polímero se coloca en un congelador a -20°C ± 5°C durante 0.5 horas. El polímero se remueve entonces del congelador, y se transfiere a matraces de almacenamiento de vidrio, y se almacena a 2-8°C.

Preparación de Batimistat micelar (matriz de Batimistat/Dolímero) Se lava la cristalería de reacción, y se enjuaga con agua estéril para irrigación, USP, y se seca a 37°C, seguida de despirogenación a 250°C durante por lo menos 1 hora. Primero, se prepara un regulador de pH de fosfato, 0.08 M, pH 7.6. El regulador de pH se dispensa al volumen de 1 mL por recipiente. Los recipientes se calientan durante 2 horas a 90°C para secar el regulador de pH. La temperatura se eleva entonces a 160°C, y los recipientes se secan durante otras 3 horas. El polímero se disuelve en THF a una concentración de 10% en p/v con agitación y calor. La solución de polímero se centrifuga entonces a 3000 rpm durante 30 minutos. El sobrenadante se vierte y se deja a un lado. Se añade más THF al precipitado, y se centrifuga una segunda vez a 3000 rpm durante 30 minutos. El segundo sobrenadante se reúne con el primer sobrenadante. Se pesa Batimistat, y se añade entonces al depósito del sobrenadante. La solución se lleva al volumen final deseado con THF para obtener una solución de polímero a 9.9% que contiene Batimistat a 1.1%. Para fabricar lotes de desarrollo de recipientes de producto final, el Batimistat micelar se dispensa en los recipientes que contienen regulador de pH de fosfato deshidratado a un volumen de 1 mL por recipiente. Los recipientes se colocan en un homo de vacío a 50°C. El vacío se ajusta a - 80 kPa, y los recipientes se dejan en el horno durante la noche (15 a 24 horas). Los recipientes se tapan con tapones de butilo grises con superficie de Teflón, y se sellan con sellos de aluminio. La matriz de Batimistat/polímero se esteriliza usando irradiación con rayos gamma de 2.5 Mrad. Cada recipiente contiene aproximadamente 11 mg de Batimistat, 99 mg de polímero y 1 mg de sales de fosfato. Los recipientes se almacenan a 2°C a 8°C hasta constitución.

Preparación del qel de Batimistat micelar/coláqena En un gabinete de seguridad biológica estéril, se añaden 2 mL de solución salina estéril a un recipiente que contiene aproximadamente 11 mg de Batimistat, 99 mg de polímero y 11 mg de sales de fosfato (como se prepararon anteriormente). Los contenidos del recipiente se disuelven en 2 mL de solución salina estéril, colocando el recipiente en un baño de agua a 37°C durante aproximadamente 30 minutos con acción de remolino periódica. Mediante el uso de una jeringa estéril de 1 mL, se extrae del recipiente una alícuota de 1 mL de la solución de Batimistat micelar, y se inyecta en 29 mL del gel de colágena. La muestra se mezcla para obtener una solución homogénea del Batimistat micelar en el gel de colágena. La muestra se carga entonces en jeringas de 1 mL para su uso en los experimentos in vivo.

EJEMPLO 10 Preparación de un equipo micelar de dos componentes Preparación de Batimistat micelar deshidratado por congelación Una composición sólida capaz de formar micelas tras constitución con un medio acuoso que contiene colágena acuosa, se prepara de la manera siguiente: Por poco tiempo, se combinan 41.29 g de MePEG (PM = 2,000 g/mol) con 412.84 g de copolímero de dos bloques de 60:40 de MePEG: poli(DL-lactida) (véase el ejemplo provisto anteriormente) en un vaso de precipitado de acero inoxidable, se calienta a 75°C en un baño de aceite mineral, y se agita usando una hoja de agitación elevada. Una vez que se obtiene un líquido claro, la mezcla se enfría a 55°C. Se añade a la mezcla una solución de 200 ml_ de 45.87 de Batimistat en tetrahidrofurano. El solvente se añade a aproximadamente 40 mL/min, y la mezcla se agita durante 4 horas a 55°C. Después de mezclado durante este tiempo, la composición líquida se transfiere a un crisol de acero inoxidable, y se coloca en un horno de aire forzado a 50°C durante aproximadamente 48 horas, para remover el solvente residual. La composición se enfría entonces a temperatura ambiente, y se deja solidificando para formar la matriz de Batimistat-polímero. Se prepara regulador de pH de fosfato, combinando 237.8 g de fosfato de sodio dibásico heptahidratado con 15.18 g de fosfato de sodio monobásico monohidratado en 1600 mL de agua. Al regulador de pH de fosfato, se añaden 327 g de la matriz de Batimistat-polímero, y se agitan durante 2 horas para disolver los sólidos. Después de que se obtiene una solución clara, el volumen se ajusta a 2000 mL con más agua. Los recipientes se llenan con alícuotas de 15 mL de esta solución, y se deshidratan por congelación mediante enfriamiento a -34°C, reservación durante 5 horas, enfriamiento a -16°C mientras se reduce la presión a menos de 0.2 mm de Hg, reservación durante 68 horas, y calentamiento a 30°C mientras se mantiene la presión baja, seguido de reservación durante otras 20 horas. El resultado es una matriz deshidratada por congelación que podría constituirse para formar una solución micelar clara.

Preparación del equipo de dos componentes Se pesan 40 mg del material de Batimistat micelar deshidratado por congelación en una jeringa de 1 ml_ tapada. Se reemplaza el émbolo, y la jeringa se sella en una bolsa de plástico usando un sellador de calor. La muestra se esteriliza usando irradiación de rayos gamma de 2.5 Mrad. Poco antes de la aplicación, la bolsa de plástico que contiene al material deshidratado por congelación esterilizado se abre, y se conecta a un conector de doble jeringa (proveedor, # de categoría). Una jeringa que contiene 2 mL de colágena de bovino a 3.5% (tipo I a 95% y tipo III a 5%), se adhiere al extremo restante del conector de doble jeringa. El émbolo de la jeringa que contiene al material de colágena, se empuja para transferir el material de colágena a una jeringa que contiene al material micelar. El material se pasa rápidamente de una jeringa a la otra hasta que se obtenga una solución homogénea. El material se transfiere entonces a la jeringa que contenía originalmente a la colágena. Esta jeringa se desconecta del conector, y se conecta una aguja de calibre 30 a la jeringa. El material está listo ahora para aplicación.

EJEMPLO 11 Preparación de un equipo de microesferas da dos componentes Se pesan 40 mg del material de Batimistat de microesferas deshidratadas por congelación en una jeringa de 1 mL tapada. Se reemplaza el émbolo, y la jeringa se sella en una bolsa de plástico usando un seilador de calor. La muestra se esteriliza usando irradiación de rayos gamma de 2.5 rad. Poco antes de la aplicación, la bolsa de plástico que contiene al material deshidratado por congelación esterilizado se abre, y se conecta a un conector de doble jeringa. Una jeringa que contiene 2 mL de colágena de bovino a 3.5% (tipo I a 95% y tipo III a 5%), se adhiere al extremo restante del conector de doble jeringa. El émbolo de la jeringa que contiene al material de colágena, se empuja para transferir el material de colágena a una jeringa que contiene al material micelar. El material se pasa de una jeringa a la otra hasta que se obtenga una solución homogénea. El material se transfiere entonces a la jeringa que contenía originalmente a la colágena. Esta jeringa se desconecta del conector, y se conecta una aguja de calibre 30 a la jeringa. El material está listo ahora para aplicación.

EJEMPLO 12 Preparaciones de liposomas Liposomas de LV Se añade un total de 100 mg de fosfatidilcolina (Avanti Polar Lipids) y colesterol (Sigma) de huevo [relación molar de 5:1], a 5 mL de diclorometano en un matraz de fondo redondo de 50 mL. Una vez disueltos, se añaden 3 mg de Batimistat a la solución. El solvente se remueve bajo vacío ligero usando el evaporador rotatorio (rotavap). La mezcla de lípido-fármaco se seca durante la noche bajo vacío. Se añaden 5 mL de solución de NaCI a 0.9% a la mezcla de lípido-fármaco deshidratada. La solución se hace girar suavemente durante 1 hora usando un evaporador rotatorio, y un valor del baño de agua de 37°C. Cuando se añade maltosa a 5% a la solución de constitución de NaCI a 0.9%, las muestras se congelan en acetona-hielo seco, y se deshidratan por congelación para obtener un producto sólido. Dependiendo de la dosis específica requerida, se pesa una cierta cantidad del material de Batimistat de microesferas deshidratadas por congelación (preparadas como se describió anteriormente), en una jeringa de 1 mL tapada. Se reemplaza el émbolo, y la jeringa se sella en una bolsa de plástico usando un sellador de calor. La muestra se esteriliza usando irradiación de rayos gamma de 2.5 Mrad. Poco antes de la aplicación, la bolsa de plástico que contiene al material deshidratado por congelación esterilizado se abre, y se conecta a un conector de doble jeringa. Una jeringa que contiene de colágena de bovino a 3.5% (tipo l a 95% y tipo III a 5%), se adhiere al extremo restante del conector de doble jeringa. El émbolo de la jeringa que contiene al material de colágena, se empuja para transferir el material de colágena a una jeringa que contiene al material micelar. El material se pasa de una jeringa a la otra hasta que se obtenga una solución homogénea. El material se transfiere entonces a la jeringa que contenía originalmente a la colágena. Esta jeringa se desconecta del conector, y se conecta una aguja de calibre 30 a la jeringa. El material está listo ahora para aplicación.

Liposomas de SUV Los liposomas preparados anteriormente se reducen en tamaño, colocando la muestra en un baño ultrasónico (45°C) durante 10 minutos. La solución cambia de una solución opaca-lechosa a una solución transparente con un tinte azul. Esta solución se usa como está, o se deshidrata por congelación para obtener un producto sólido. El producto sólido puede usarse para preparar una solución de colágena en una forma similar a la descrita anteriormente. A partir de lo anterior, se apreciará que, aunque se han descrito en la presente modalidades específicas de la invención para propósitos de ilustración, pueden hacerse varias modificaciones sin desviarse del espíritu y alcance de la invención. Por consiguiente, la invención no es limitada salvo por las reivindicaciones anexas.

Claims (65)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES

1.- Una composición que comprende colágena y por lo menos un inhibidor de metaloproteasa (MMPI).

2.- La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada porque dicho MMPI es un inhibidor tisular de metaloproteinasa de matriz (TIMP).

3.- La composición de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque dicho TIMP es TIMP- o TIMP-2. 4. - La composición de conformidad con la reivindicación 2, caractenzada además porque dicho TIMP es TIMP-3 o TIMP-

4.

5. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque dicho MMPI es tetraciclina, o un análogo o derivado de la misma.

6. - La composición de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada además porque dicho MMPI es tetraciclina.

7. - La composición de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada además porque dicha tetraciclina es minociciina o doxiciclina.

8. - La composición de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada además porque dicho MMPI es un hidroxamato.

9. - La composición de conformidad con la reivindicación 8, caracterizada además porque dicho hidroxamato es Batimistat, Marimistat o Trocade.

10. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque dicho MPI es RO-1130830, CGS-27023A o BMS-275291.

11. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque dicho MMPI es un inhibidor de polipéptidos.

12. - La composición de conformidad con la reivindicación 11 , caracterizada además porque dicho inhibidor de polipéptidos es un inhibidor de una metaloproteasa maturasa.

13. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque dicho MMPI es un compuesto basado en mercapto.

14. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque dicho MMPI es un bisfosfonato con estructura (I): 0=P— C— P=O I ! I O" R" O" en donde R' y R" son independientemente un hidrógeno, un halógeno tal como cloro, un hidroxi, un grupo amino opcionalmente sustituido, un grupo tio opcionalmente sustituido, o un grupo alquilo, alcanilo, alquenilo, alquinilo, alquildiilo, alquileno, heteroalquilo, heteroalcanilo, heteroalquenilo, heteroalcanilo, heteroalquildiilo, heteroalquileno, arilo, arilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo opcionalmente sustituido.

15. - La composición de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada además porque dicho MMPI es un bisfosfonato, y uno de R' y R" es hidroxi, hidrógeno o cloro.

16. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque comprende por lo menos dos MMPI.

17. - La composición de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada además porque dicho MMPI (por lo menos dos) comprende una tetraciclina, o un análogo o derivado de la misma, y un bisfosfonato.

18. - La composición de conformidad con la reivindicación 16, caracterizada además porque dicho MMPI (por lo menos dos) comprende una tetraciclina, o un análogo o derivado de la misma, y un hidroxamato.

19. - Una composición que comprende colágena, por lo menos un inhibidor de metaloproteasa (MMPI) y por lo menos un polímero.

20. - La composición de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada porque dicho polímero es biodegradable.

21. - La composición de conformidad con la reivindicación 20, caracterizada además porque dicho polímero biodegradable se selecciona del grupo que consiste de albúmina, gelatina, almidón, celulosa, dextranos, polisacáridos, fibrinógeno, poli(ésteres), poli(D,L lactida), poli(D,L-lactida-co-glicolida), poli(glicolida), poli(e-caprolactona), poli(hidroxibutirato), poli(alquilcarbonato), poli(anhídridos) y poli(ortoésteres), y copolímeros y mezclas de los mismos.

22. - La composición de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada además porque dicho polímero es no biodegradable, en donde dicho polímero no biodegradable se selecciona del grupo que consiste de un copolímero de óxido de etileno y óxido de propileno, un copolímero de acetato etilenvinílico, un caucho de silicón, un polímero basado en poli(metracrilato) y un polímero basado en poli(acrilato).

23. - La composición de conformidad con la reivindicación 20, caracterizada además porque dicho polímero está en forma de una varilla, una pella, una placa o una cápsula.

24. - La composición de conformidad con la reivindicación 20, caracterizada además porque dicho polímero está en forma de una microesfera, una pasta, una termopasta, un filamento, una película o un rocío.

25. - La composición de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada además porque dicho M PI se asocia con el polímero mediante oclusión dentro de la matriz de polímero, mediante enlace covalente, o mediante encapsulación.

26. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque dicho MMPI se enlaza covalentemente a la colágena directamente o mediante un enlazador.

27. - La composición de conformidad con la reivindicación 26, caracterizada además porque dicho MMPI enlazado a la colágena es liberado mediante desdoblamiento químico o desdoblamiento enzímático, del enlace covalente.

28. - La composición de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada además porque comprende una matriz, en donde dicho MMPI se incorpora dentro de la matriz, dicha matriz siendo seleccionada del grupo que consiste de carbohidratos, polisacáridos, almidón, celulosa, dextrán, metilcelulosa, ácido hialurónico, polipéptidos, albúmina, colágena y gelatina.

29. - La composición de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizada además porque dicha colágena es de tipo I o de tipo II.

30. - La composición de conformidad con la reivindicación 19, caracterizada además porque dicha colágena es de tipo I o de tipo II.

31. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 30, caracterizada además porque dicha composición es estéril.

32. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 30, caracterizada además porque comprende trombina o un colorante.

33. - La composición de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 30, caracterizada además porque comprende un diluyente, vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

34.- El uso de una composición como se reclama en la reivindicación 31 , para preparar un medicamento para la reparación o el aumento de piel o tejido.

35.- El uso como se reclama en la reivindicación 34, en donde dicho medicamento es administrable por medio de inyección.

36. - El uso como se reclama en la reivindicación 35, en donde dicha inyección es en los labios.

37. - El uso como se reclama en la reivindicación 35, en donde dicha inyección es en la piel o el rostro.

38. - El uso como se reclama en la reivindicación 35, en donde dicha inyección es en los labios.

39. - El uso como se reclama en la reivindicación 35, en donde dicha inyección es en la piel o el rostro.

40.- El uso de una composición como se reclama en la reivindicación 31 , para preparar un medicamento para tratar o prevenir incontinencia urinaria en un paciente.

41.- El uso como se reclama en la reivindicación 40, en donde dicho medicamento es administrable periuretralmente.

42.- El uso como se reclama en la reivindicación 41 , en donde dicho medicamento es administrable transuretralmente.

43.- El uso de una composición como se reclama en la reivindicación 31 para preparar un medicamento para sellar un sitio quirúrgico en un paciente.

44.- El uso como se reclama en la reivindicación 43, en donde dicho sitio es un área de acceso vascular.

45.- Un método para fabricar Collajolie, que comprende mezclar colágena y por lo menos un MMPI.

46. - El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado además porque dicha colágena es colágena tipo I o colágena tipo II.

47. - El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado además porque dicho MMPI es un inhibidor tisular de metaloproteinasa de matriz (TIMP).

48. - El método de conformidad con la reivindicación 47, caracterizado además porque dicho TIMP es TIMP-1 o TIMP-2.

49. - El método de conformidad con la reivindicación 47, caracterizado además porque dicho TIMP es TIMP-3 o TIMP-4.

50. - El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado además porque dicho MMPI es tetraciclina, o un análogo o derivado de la misma.

51. - El método de conformidad con la reivindicación 50, caracterizado además porque dicho MMPI es tetraciclina.

52. - El método de conformidad con la reivindicación 51 , caracterizado además porque dicha tetraciclina es minociciina o doxiciclina.

53. - El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado además porque dicho MMPI es un hidroxamato.

54.- El método de conformidad con la reivindicación 53, caracterizado además porque dicho hidroxamato es Batimistat, Marimistat o Trocade.

55.- El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado además porque dicho MMPI es RO-1130830, CGS-27023A o BMS-275291.

56.- El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado además porque dicho MMPI es un inhibidor de polipéptidos.

57.- El método de conformidad con la reivindicación 56, caracterizado además porque dicho inhibidor de polipéptidos es un inhibidor de una metaloproteasa maturasa.

58. - El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado además porque dicho MMPI es un compuesto basado en mercapto.

59. - El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado además porque dicho MMPI es un bisfosfonato con estructura (I): O' R' O" (,) I I I O=P— c— P=O I I I O" R" O" en donde R' y R" son independientemente un hidrógeno, un halógeno tal como cloro, un hidroxi, un grupo amino opcionalmente sustituido, un grupo tío opcionalmente sustituido, o un grupo alquilo, alcanilo, alquenilo, alquinilo, alquildiilo, alquileno, heteroalquilo, heteroalcanilo, heteroalquenilo, heteroalcanilo, heteroalquildiilo, heteroalquileno, arilo, arilalquilo, heteroarilo o heteroarilalquilo opcionalmente sustituido.

60. - El método de conformidad con la reivindicación 59, caracterizado además porque dicho MMPI es un bisfosfonato, y uno de R' y R" es hidroxi, hidrógeno o cloro.

61.- El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado además porque comprende por lo menos dos MMPI.

62.- El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado además porque antes del mezclado con colágena, dicho MMPI se mezcla primero con por lo menos un polímero.

63.- El método de conformidad con la reivindicación 62, caracterizado además porque dicho polímero es biodegradable.

64.- El método de conformidad con la reivindicación 63, caracterizado además porque dicho polímero biodegradable se selecciona del grupo que consiste de albúmina, gelatina, almidón, celulosa, dextranos, polisacáridos, fibrinógeno, poli(ésteres), poli(D,L lactida), poli(D,L-lactida-co-glicolida), poli(glicolida), poli(e-caprolactona), poli(hidroxibutirato), poli(alquilcarbonato), poli(anhídridos) y poli(ortoésteres), y copoíímeros y mezclas de los mismos.

65.- El método de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado además porque comprende el paso de esterilizar dicha mezcla.