JP2005514435A - コラーゲンおよびメタロプロテアーゼインヒビターを含む組成物 - Google Patents

Abstract

コラーゲンおよび少なくとも１つのメタロプロテアーゼインヒビターを含む組成物、ならびに、これらを製造および使用する方法が、提供される。本発明は、一般的に、薬学的な組成物および方法に関し、さらに詳細には、移植されたコラーゲン物質の活性を増強するための組成物および方法に関する。本発明はまた、コラーゲンおよび少なくとも１つのメタロプロテアーゼインヒビターを含む組成物、ならびに、皮膚または組織の回復あるいは増殖のための方法を開示する。

Description

（発明の背景）
（発明の分野）
本発明は、一般的に、薬学的組成物および方法に関し、より詳細には、移植されたコラーゲン材料の活性の持続時間を向上させるための組成物および方法に関する。

（関連技術の説明）
コラーゲンは、哺乳動物において最も豊富なタンパク質の１つであり、ヒトの身体の乾燥重量の３０％までに相当する（Ｌ．Ｃ．ＪｕｎｑｕｅｉｒａおよびＪ．Ｃａｒｎｅｉｒｏ，Ｂａｓｉｃ Ｈｉｓｔｒｏｌｏｇｙ，４版，Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ，Ｃａｌｉｆ．，１９８３，ｐｐ．８９−１１９を参照のこと）。コラーゲンは、皮膚、毛髪および爪に強度および可撓性を提供し、そしてまた、筋肉、腱、靱帯、関節および血管の主要かつ必須の成分である。

コラーゲンは、７つの異なる細胞型によって産生される、少なくとも５つの異なる天然に存在する形態で見出され得る。タイプＩコラーゲンは、最も豊富な形態のコラーゲンであり、身体全体を通じて見出され得る。このタイプＩコラーゲンは、線維芽細胞、骨芽細胞、象牙芽細胞、および軟骨芽細胞によって産生され、そして骨、象牙質、真皮、および線維軟骨において見出され得る。タイプＩＩコラーゲンは、軟骨芽細胞によって産生され、そして主に軟骨において見出され得る。タイプＩＩＩコラーゲンは、平滑筋線維芽細胞、細網細胞、シュワン細胞、および肝細胞によって産生される。その主要な機能は、器官の構造を維持することであり、そして平滑筋、神経内膜、動脈、子宮、肝臓、脾臓、腎臓、および肺の組織において見出され得る。

タイプＩＶコラーゲンは、主に、支持および濾過に関与していると考えられ、上皮および内皮の基底板および基底膜において見出され得る。タイプＶコラーゲンは、胎児膜、血管、および胎盤基底膜において見出される。

コラーゲンは、種々の医療的適用の処置（例えば、美容外科、関節炎、皮膚再生、移植、器官置換、ならびに創傷および火傷の処置を含む）における使用ついて提案されている（例えば、米国特許第６，３０９，６７０号、同第５，９２５，７３６号、同第５，８５６，４４６号、同第５，８４３，４４５号、同第５，８００，８１１号、同第５，７８３，１８８号、同第５，７２０，９５５号、同第５，３８３，９３０号、同第５，１０６，９４９号、同第５，１０４，６６０号、同第５，０８１，１０６号、同第４，８３７，３７９号、同第４，６０４，３４６号、同第４，４８５，０９７号、同第４，５４６，５００号、同第４，５３９，７１６号、および同第４，４０９，３３２号を参照のこと）。

しかし、コラーゲンは、医療的適用と関連していくつかの問題を呈している。例えば、移植の状況において、不純物を有するコラーゲン調製物は、炎症応答を刺激し得る強力な免疫原である。同様に、コラーゲンの非ヒト形態（例えば、ウシコラーゲン）は、慢性の細胞性炎症反応に関連しており、これは、瘢痕組織および癒着の形成、および一過性の軽度の発熱を生じ得る。さらに、移植可能なコラーゲンの持続期間は限定されており、規則的な基準で繰り返される手順（特に、美容的向上）を必要とする。

本発明は、コラーゲンベースの移植片の活性を延長するための新規な組成物、デバイスおよび方法を開示し、そしてさらに他の関連する利点を提供する。

（発明の要旨）
簡単に述べると、本発明は、コラーゲンベースの移植片の活性を延長するための組成物および方法を提供する。コラーゲンベースの生体材料は、美容目的（皺、瘢痕、輪郭欠損）のための皮膚注入、失禁の管理のための尿道周囲バルキング剤、および脈管穿刺手順に続く止血を作り出すための脈管「プラグ」を含む種々の医療手順における構造および支持を提供するために使用される。非常に有効ではあるものの、コラーゲン移植片は、インビボにおいて短い持続期間の活性を有する。なぜなら、この材料は、移植片に隣接する白血球および結合組織細胞（線維芽細胞）によって放出される分解酵素（主に、コラーゲナーゼおよび他のマトリクスメタロプロテイナーゼ酵素）によって、迅速に分解されるからである。コラーゲン移植手順が、機能的活性を維持するために頻繁な間隔で繰り返されなければならないという結果になる。

コラーゲナーゼの活性を阻害する種々の天然に存在する分子および合成的に作製された分子（総称的に、「マトリクスメタロプロテイナーゼインヒビター」または「コラーゲナーゼインヒビターとして公知）は、他の目的（例えば、悪性疾患、関節炎および他の障害の処置）のために開発されている。本発明は、コラーゲンとインビボでの向上した持続期間を有するコラーゲンベースの移植片を作製するためのコラーゲナーゼの活性を阻害する化合物とが組み合わさった組成物（「Ｃｏｌｌａｊｏｌｉｅ」）を記載する。特に好ましい化合物または因子は、活性ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−１３、および／またはＭＭＰ−１４を阻害する。本発明において使用するのに適切なＭＭＰＩの代表的な例としては、ＴＩＭＰ−１、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）、Ｍａｒｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）、ＲＯ−１１３０８３０、ＣＧＳ ２７０２３Ａ、ＢＭＳ−２７５２９１、ＣＭＴ−３、Ｓｏｌｉｍａｓｔａｔ、Ｉｌｏｍａｓｔａｔ、ＣＰ−５４４４３９、Ｐｒｉｎｏｍａｓｔａｔ、ＰＮＵ−１４２７６９０、ＳＵ−５４０２、およびＴｒｏｃａｄｅが挙げられる。

従って、本発明の１つの局面において、コラーゲンおよびＭＭＰＩを含む組成物が提供される。特定の実施形態において、ＭＭＰＩは、マトリクスメタロプロテイナーゼの組織インヒビター（例えば、ＴＩＭＰ−１、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３、またはＴＩＭＰ−４）である。他の実施形態において、ＭＭＰＩは、テトラサイクリン、またはそのアナログもしくは誘導体（例えば、ミノサイクリン、またはドキシサイクリン）；ヒドロキサメート（例えば、Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ、Ｍａｒｉｍｉｓｔａｔ、またはＴｒｏｃａｄｅ）；あるいは、ＲＯ−１１３０８３０、ＣＧＳ ２７０２３Ａ、ＣＭＴ−３、Ｓｏｌｉｍａｓｔａｔ、Ｉｌｏｍａｓｔａｔ、ＣＰ−５４４４３９、Ｐｒｉｎｏｍａｓｔａｔ、ＰＮＵ−１４２７６９０、ＳＵ−５４０２、またはＢＭＳ−２７５２９１がある。他の実施形態において、コラーゲンは、タイプＩコラーゲンまたはタイプＩＩコラーゲンである。なお他の実施形態において、本明細書中で提供される組成物は、他の化合物または組成物（例えば、トロンビンおよび／または色素を含む）を含み得る。さらなる実施形態において、組成物は、ヒト投与のために適切な様式で滅菌され得る。

本発明の特定の局面において、本明細書中に記載される組成物を作製するための方法が、提供され、この方法は、本明細書中に記載されるように、コラーゲンおよび１つ以上のＭＭＰＩを混合する工程を包含する。関連の実施形態において、このような方法は、色素またはトロンビンを混合する工程をさらに包含し得る。さらなる実施形態において、組成物は、滅菌され得る。

本発明の他の局面において、上記の組成物は、種々の医学的状態を処置および／または予防するために利用され得る。例えば、本発明の一局面において、皮膚または組織の修復および／または増強のための方法が提供され、この方法は、その皮膚または組織に上記の組成物を注射する工程を包含する。種々の実施形態において、このような組成物は、口唇を修正または魅力を高めるために口唇に注射され得るか、あるいは皮膚に（例えば、瘢痕を修正するためまたはしわを減少させるために顔面に）注射され得る。

本発明の他の局面において、尿失禁を処置または予防するための方法が提供され、この方法は、患者に上記の組成物を投与する工程を包含する。特定の実施形態において、この組成物は、尿道周囲にまたは尿道経由でのいずれかで投与され得る。

本発明のなお他の局面において、手術部位をシールするための方法が提供され、この方法は、患者に上記の組成物を投与する工程を包含する。このような手術部位の代表的例としては、脈管接近の部位が挙げられる（例えば、シーラントは、脈管シーラントとして使用され得る）。

別の局面において、本発明は、コラジョリーを作製する方法を提供し、この方法は、コラーゲンと少なくとも１つのＭＭＰＩとを混合する工程を包含する。特定の実施形態において、少なくとも２つのＭＭＰＩを有するコラジョリーが作製される。特定の実施形態において、コラーゲンは、Ｉ型コラーゲンまたはＩＩ型コラーゲンである。他の実施形態において、ＭＭＰＩは、マトリクスメタロプロテイナーゼの組織インヒビター（ＴＩＭＰ）（例えば、ＴＩＭＰ−１、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３またはＴＩＭＰ−４）である。なお他の実施形態において、ＭＭＰＩは、テトラサイクリン、またはそのアナログもしくは誘導体（例えば、ミノサイクリンまたはドキシサイクリン（ｄｏｘｙｃｌｉｎｅ））である。なお別の実施形態において、ＭＭＰＩは、ヒドロキサメート（例えば、Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ、Ｍａｒｉｍｉｓｔａｔ、またはＴｒｏｃａｄｅ）である。他の実施形態において、ＭＭＰＩは、ＲＯ−１１３０８３０、ＣＧＳ−２７０２３ＡまたはＢＭＳ−２７５２９１である。さらなる実施形態において、ＭＭＰＩは、ポリペプチドインヒビター（例えば、メタロプロテアーゼ成熟酵素のインヒビター）である。さらなる実施形態において、ＭＭＰＩは、メルカプトベースの化合物である。他の実施形態において、ＭＭＰＩは、以下の構造（１）を有するビスホスホネートである：

ここでＲ’およびＲ”は、独立して、水素、ハロゲン（例えば、塩素）、ヒドロキシ、必要に応じて置換されたアミノ基、必要に応じて置換されたチオ基、または必要に応じて置換されたアルキル、アルカニル（ａｌｋａｎｙｌ）、アルケニル、アルキニル、アルキルジイル、アルキレノ（ａｌｋｙｌｅｎｏ）、ヘテロアルキル、ヘテロアルカニル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルカニル、ヘテロアルキルジイル、ヘテロアルキレノ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルである。他の実施形態において、コラーゲンと混合する前に、上記ＭＭＰＩは、まず、少なくとも１つのポリマーと混合される。関連の実施形態において、このポリマーは、生体分解性である（例えば、アルブミン、ゼラチン、澱粉、セルロース、デキストラン、ポリサッカリド、フィブリノゲン、ポリ（エステル）、ポリ（Ｄ，Ｌラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌラクチド−コ−グリコリド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ｅ−カプロラクトン）、ポリ（ヒドロキシブチレート）、ポリ（アルキルカーボネート）、ポリ（無水物）、またはポリ（オルトエステル）、およびこれらのコポリマーおよびブレンド）。別の実施形態において、コラジョリーを作製する上述の方法のいずれかは、上記混合物を滅菌する工程をさらに包含する。

本発明のこれらおよび他の局面は、以下の詳細な説明および添付の図面を参照すると明らかになる。さらに、より詳細に特定の手順または組成物（例えば、化合物、タンパク質、ベクター、およびそれらの生成など）を記載する種々の参考文献が、本明細書中に記載され、従って、それらの全体が、本明細書中に参考として援用される。ＰＣＴ出願が言及される場合、基礎のまたは引用される米国特許出願がまた、それらの全体が本明細書中に参考として援用されることもまた理解される。

（発明の詳細な説明）
本発明を記載する前に、本明細書中以降で使用される特定の用語の定義を示すことは、本発明の理解に役立ち得る。

本明細書中で使用される場合「コラーゲン」とは、本明細書中で記載されまたは言及されるようなコラーゲンの全ての形態（プロセスまたは改変されているコラーゲンを含む）をいう。代表的な例としては、Ｉ型コラーゲンおよびＩＩ型コラーゲンが挙げられる。コラーゲンは、ヒト供給源または動物供給源から調製され得るか、あるいは組換え技術を使用して生成され得る。

「マトリクスメタロプロテイナーゼインヒビター」または「ＭＭＰＩ」とは、マトリクスメタロプロテイナーゼ活性を阻害する化合物、薬剤または組成物をいう。ＭＭＰインヒビター（「ＭＭＰＩ」）の代表例としては、メタロプロテイナーゼの組織インヒビター（ＴＩＭＰ）（例えば、ＴＩＭＰ−１、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３、またはＴＩＭＰ−４）、α_２−マクログロブリン、テトラサイクリン（例えば、テトラサイクリン、ミノサイクリン、およびドキシサイクリン）、ヒドロキサメート（例えば、Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ、ＭａｒｉｍｉｓｔａｔおよびＴｒｏｃａｄｅ）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ、システイン、アセチルシステイン、Ｄ−ペニシラミン、および金の塩）、合成ＭＭＰフラグメント、スクシニルメルカプトプリン、ホスホンアミデート、およびヒドロキサム酸（ｈｙｄｒｏｘａｍｉｎｉｃ ａｃｉｄ）が挙げられる。

本明細書中で引用される任意の濃度または百分率は、別段示されない限り、その範囲または端数内の任意の整数の濃度（例えば、整数の１０分の１および１００分の１）を含むことが理解されるべきである。

本明細書中で使用される場合、「約」または「を本質的に含む」とは、±１５％を意味する。

（Ｉ．コラーゲン）
コラーゲンは、皮膚、軟骨、骨、および結合組織の主要な成分であり、いくつかの異なる型または形態で存在し、Ｉ型、ＩＩ型、ＩＩＩ型、およびＩＶ型が最も一般的である。コラーゲンは、代表的には、天然の供給源（例えば、ウシの骨、軟骨または皮）から単離されてきた。骨は、通常、脱脂され、粉砕され、乾燥され、鉱物質除去されて、コラーゲンが抽出される。対照的に、ウシ軟骨または皮は、通常、細かく挽かれ、（夾雑タンパク質を除去するために）コラゲナーゼ以外の酵素で消化される。コラーゲンはまた、ヒト組織（患者自身の組織またはドナー組織）から、または組換え法により調製され得る。

本発明の特定の実施形態において、好ましいコラーゲンは、非免疫反応性滅菌組成物として調製される。コラーゲンは、可溶性（例えば、市販のＶｉｔｒｏｇｅｎ（登録商標）１００溶液コラーゲン）、または再構成された原線維アテロペプチド（ａｔｅｌｏｐｅｐｔｉｄｅ）コラーゲンの形態（例えば、Ｚｙｄｅｒｍ（登録商標）Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｉｍｐｌａｎｔ（ＺＣＩ））であり得る。

コラーゲン含有組成物、デバイス、ならびにこのような組成物およびデバイスを生成および／または送達する方法を開示する特許の代表例としては、以下米国特許が挙げられる：

（ＩＩ．マトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）インヒビター）
メタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）は、天然に存在する亜鉛依存性酵素の一群であり、細胞外マトリクス高分子の分解および代謝回転（ｔｕｒｎｏｖｅｒ）に関与する。今日までに２３種以上のメタロプロテイナーゼが同定されており、それらは、コラゲナーゼ、ストロメリシン、ゲラチナーゼ、エラスターゼ、およびマトリリジンとして公知の酵素ファミリーに広く分類されている。メタロプロテイナーゼは、好中球、単球、マクロファージ、および繊維芽細胞を含む種々の細胞型に由来する。

ＭＭＰは、インビボでのコラーゲンの分解および正常な代謝回転に関与する主要な酵素である。多くのＭＭＰは、コラーゲンを含むいくつかの結合組織要素を分解し得るが、コラーゲンに対して最も高い特異性を有する酵素は、コラゲナーゼファミリー由来（例えば、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−１３、およびＭＭＰ−１４）である。メタロプロテイナーゼ活性は、「メタロプロテイナーゼの組織インヒビター」または「ＴＩＭＰ」として公知のインヒビターファミリーによって、天然にインビボで阻害される。ＴＩＭＰは、メタロプロテイナーゼ酵素の活性領域に結合してそれを不活性化する。それは、酵素活性と、生理学的条件下での細胞外マトリクスの代謝率を調節する阻害との間の天然のバランスである。

ＭＭＰ阻害を測定するアッセイは、当該分野ですでに公知であり、そして例えば、以下が挙げられる：Ｃａｗｓｔｏｎ Ｔ．Ｅ．，Ｂａｒｒｅｔｔ Ａ．Ｊ．，「Ａ ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ ｕｓｉｎｇ ［１４Ｃ］ ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ」，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５：１９６１−１９６５（１９６３）；Ｃａｗｓｔｏｎ Ｔ．Ｅ．，Ｍｕｒｐｈｙ Ｇ．，「Ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅｓ」，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ８０：７１１（１９８１）；Ｋｏｓｈｙ Ｐ．Ｔ．Ｊ．，Ｒｏｗａｎ Ａ．Ｄ．，Ｌｉｆｅ Ｐ．Ｆ．，Ｃａｗｓｔｏｎ Ｔ．Ｅ．，「９６−Ａｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｉｎｇ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｕｓｉｎｇ （３）Ｈ−ａｃｅｔｙｌａｔｅｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ」，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．９９：３４０−３４５（１９７９）；Ｓｔａｃｋ Ｍ．Ｓ．，Ｇｒａｙ Ｒ．Ｄ．，「Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｖｅｒｔｅｂｒａｔｅ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ ａｎｄ ｇｅｌａｔｉｎａｓｅ ｕｓｉｎｇ ａ ｎｅｗ ｆｌｕｏｒｏｇｅｎｉｃ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｐｅｐｔｉｄｅ」，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：４２７７−４２８１（１９８９）；およびＫｎｉｇｈｔ Ｃ．Ｇ．，Ｗｉｌｌｅｎｂｒｏｃｋ Ｆ．，Ｍｕｒｐｈｙ Ｇ．，「Ａ ｎｏｖｅｌ ｃｏｕｍａｒｉｎ−ｌａｂｅｌｌｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｆｏｒ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ａｓｓａｙｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ」，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ ２９６：２６３−２６６（１９９２）。本発明の関係で、ＭＭＰＩは、好ましくは、ｍＭ〜ｎＭ（１０−３〜１０−９）の範囲の阻害濃度（ＩＣ）を有する。

コラーゲンが治療手順の一部として移植される場合、ＭＭＰファミリー由来の酵素により、完全に吸収されるまで徐々に代謝される。このコラーゲン移植物の酵素分解による構造的一体性の段階的な喪失は、移植の失敗を導く機能的活性の喪失を引き起こし、そして最終的には、その後の再介入の必要性を生じる。コラーゲン移植物の活性を延長する試みは、酵素分解を遅くするようにコラーゲン移植物を架橋することに向いている。本発明は、コラーゲン保存に有利なように生理学的バランスを傾けるために、ＭＭＰ活性を阻害し得る薬剤をコラーゲン移植物に組み込むことを記載する。本発明は、コラーゲン移植物の残留時間を増加させるよう設計されたストラテジー（例えば、コラーゲン架橋）と適合しており、かつそれと組み合わせて使用され得る。

ＭＭＰの病的生成は、種々の臨床的に重要な疾患プロセス（例えば、腫瘍転移）および慢性的な炎症状態の進行（例えば、骨粗鬆症および慢性関節リウマチ）と関連するので、ＭＭＰ活性を阻害する多くの天然に存在する薬剤および合成薬剤が開発されている。ＭＭＰ活性の調節は重要であり、インビボで高度調節されているプロセスであることは、驚くべきことではない。結果として、ＭＭＰ生成を導く経路において、ＭＭＰ合成または活性を阻害し得る分子を開発することが可能な多くの部位が存在する。ＭＭＰ活性を阻害し得る薬剤の型は、以下により詳細に記載されている。

簡単にいうと、種々のサイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、ＦＧＦなど）は、ＭＭＰ産生を導く経路を刺激し得る。これらのサイトカインのインヒビターまたはそれらの細胞レセプターをブロックする薬剤は、特定の環境下でＭＭＰ合成を阻害することが実証されており、本発明の使用に適している。その細胞レセプターに結合した後、ＭＭＰ生成の刺激は、種々のセカンドメッセンジャーおよび細胞シグナル伝達分子（例えば、ｊｕｎキナーゼ、ＪＮＫなど）の生成を誘導し、これらの分子の阻害はまた、ＭＭＰの生成を低下させる。種々の転写因子（例えば、ｃ−ｆｏｓ、ｃ−ｊｕｎ、ＮＦκ−Ｂ、ｃ−ｍｙｃ）は、ＭＭＰ遺伝子の転写に関与する。これらの転写因子およびその産物（例えば、ＡＰ−１タンパク質）の阻害はまた、転写されるＭＭＰの量を低減し、そしてこれらは、本発明の目的に利用され得る。同様に、ＭＭＰ遺伝子自体（例えば、遺伝子ノックアウト）を阻害するストラテジーが、コラーゲン移植物またはＭＭＰ ＲＮＡ（例えば、アンチセンス、リボザイム、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン）の周囲の領域における活性なＭＭＰ酵素の量を低減するために、本発明において使用され得る。

さらに、メタロプロテイナーゼが細胞から分泌された後に、そのメタロプロテイナーゼの機能および活性を阻害することが、可能である。ＭＭＰは、細胞から不活性前駆タンパク質（プロＭＭＰと呼ばれる）として分泌され、その後、非常に特異的な酵素切断（例えば、プラスミン、肥胖細胞プロテアーゼ、カテプシンＧ、血漿カリクレインなどの酵素により触媒される）を介して活性酵素へと変換されるので、ＭＭＰがその不活性状態から活性状態へと変換するのを阻害すること（それにより、ＭＭＰを不活性形態で維持すること）は、可能である。ＭＭＰが不活性状態から活性状態へと変換するのを担う酵素のインヒビターもまた、本発明のために利用され得る。最後に、いくつかの機構（例えば、ＭＭＰの亜鉛金属活性中心のキレート化（例えば、ＥＤＴＡ、システイン、アセチルシステイン、Ｄ−ペニシルアミン、金塩；ヒドロキシアミン（例えば、バチミスタット（Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ）、マリミスタット（Ｍａｒｉｍｉｓｔａｔ）、トロカド（Ｔｒｏｃａｄｅ）、アクチノニン（Ａｃｔｉｎｏｎｉｎ）、マチリスタチン（Ｍａｔｙｌｙｓｔａｔｉｎ）；ホスホン酸インヒビター；ホスホネート；ホスホンアミデート；触媒亜鉛と単座配位を形成する、チオールおよびスルホジイミン；触媒亜鉛と二座配位を形成するカルボキシレート；スクシニルメルカプトケトンおよびメルカプトアルコール）を介して、活性化したＭＭＰの機能を直接阻害することが、可能である。これらの化合物は、ＭＭＰ活性を阻害するのに極めて有効であり、本発明の目的のために特に有用である。ＭＭＰＩの重量な種類は、ＭＭＰへの特異的な結合を介してその効果を発揮し、不活性複合体の形成をもたらす。これらの化合物は、メタロプロテイナーゼ組織インヒビター（例えば、ＴＩＭＰ−１、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３、およびＴＩＭＰ−４）としても公知であり、これらのＭＭＰの事実上すべての活性を阻害し得る。ＴＩＭＰのいずれもが本発明の目的のために適切であるが、ＴＩＭＰ−１（およびより低い程度でＴＩＭＰ−２）が、特に好ましい。なぜなら、それらは、コラゲナーゼの阻害について最高の特異性を有するからである。ＴＩＭＰの生成を増加したどの化合物も、コラーゲン維持を支持する影響を与え、本発明において有用であり得ることもまた、留意されるべきである。なお他のインヒビターは、ＭＭＰがその基質（例えば、合成ＭＭＰフラグメント、合成コラーゲンフラグメント）に結合するのを防ぐことによって作用し、そしてまた、単独でも、または他のＭＭＰＩと組み合わせて、本発明の目的のために利用され得る。特定の阻害機構に関わらず、ＭＭＰ酵素の生成、活性化、または酵素機能を阻害し得る因子が、本発明の目的のための理想的因子であることが、当業者には明らかであるはずである。

ＭＭＰＩの代表的例としては、アクチノニン（３−［［１−［［２−（ヒドロキシメチル）−１−ピロリジニル］カルバモイル］−オクタノ−ヒドロキシアミノ酸）；ブロモ環状アデノシン一リン酸；Ｎ−クロロタウリン；バチマスタット（ｂａｔｉｍａｓｔａｔ）（ＢＢ−９４としても公知である）；ＣＴ１１６６（Ｎ１｛Ｎ−［２−モルホリノスルホニルアミノ）−エチル］−３−シクロヘキシル−２−（Ｓ）−プロパンアミジル｝−Ｎ４−ヒドロキシ−２−（Ｒ）−［３−（４−メチルフェニル）プロピル］−スクシンアミドとしても公知（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０８：１６７〜１７５（１９９５））；エストラムスチン（エストラジオール−３−ビス（２−クロロエチル）カルバメート）；エイコサ−ペンタン酸；マリマスタット（ＢＢ−２５１６）；マトリスタチン−Ｂ；ペプチジルヒドロキシアミノ酸（例えば、ｐＮＨ_２−Ｂｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨＯＨ（Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９９：１４４２〜１４４６（１９９４））；Ｎ−ホスホンアルキルジペプチド（例えば、Ｎ−［Ｎ−（（Ｒ）−１ホスホノプロピル）−（Ｓ）−ロイシル］−（Ｓ）−フェニルアラニン−Ｎ−メチルアミド（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１５８〜１６９（１９９４））；プロトカテクアルデヒド（３，４−ジヒドロキシベンズアルデヒド）；Ｒｏ−３１−７４６７（２−［（５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−６−ヒドロキシ−１，３−ジオキソ−１Ｈベンズ［デ］イソキノリン−２−イル）メチル］（ヒドロキシ）−［ホスフィニル］−Ｎ−（２−オキソ−３−アザシクロトリデカニル）−４−メチルバレルアミドとしても公知）；テトラサイクリン（例えば、（４−（ジメチルアミノ）−１，４，４ａ，５，５ａ，６，１１，１２ａ−オクタヒドロ−３，６，１０，１２，１２ａ−ペンタヒドロキシ−６−メチル−１，１１−ジオキソ−２−ナフタセンカルボキサミド）、ドキシサイクリン（α−６−デオキシ−５−ヒドロキシ−テトラサイクリン）、ミノサイクリン（７−ジメチルアミノ−６−ジメチル−６−デオキシテトラサイクリン）、およびメタサイクリン（６−メチレンオキシテトラサイクリン）；トリフルオロアセテート（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３６：４０３０〜４０３９（１９９３））；ならびに１，１０−フェナントロリン（ｏ−フェナントロリン［４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２Ｒ−イソブチル−３Ｓ−（チオペン−２−イルチオメチル）−スクシニル］−Ｌ−フェニルアラニン−Ｎ−メチルアミドカルボキシアルキルアミノベース化合物（例えば、Ｎ−［１−（Ｒ）−カルボキシ−３−（１，３−ジヒドロ−２Ｈ−ベンズ［ｆ］イソインドール−２−イル）プロピル］−Ｎ’，Ｎ’−ジメチル−Ｌ−ロイシンアミド）が挙げられる。

他の代表的なＭＭＰＩとしては、例えば、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ、システイン、アセチルシステイン、Ｄ−ペニシルアミン、および金塩）、ビス（ジオキソピペラジン（Ｌｉａｎｇら、米国特許第５，８６６，５７０号を参照のこと）、ネオバスタット（ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−９、およびＭＭＰ−１２についてゼラチン溶解性活性およびエラスチン溶解性活性を阻害する、Ａｅｔｅｒｎａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅの米国特許第６，１６８，８０７号を参照のこと）；ＫＢ−Ｒ７７８５（Ａｋｚｏ Ｎｏｂｅｌ）；イロマスタット（Ｉｌｏｍａｓｔａｔ）（Ｇｌｙｃｏｍｅｄ／Ｌｉｇａｎｄ；米国特許第５，８９２，１１２号）；ＲＰＲ−１２２８１８（Ａｖｅｎｔｉｓ）；ソリマスタット（ｓｏｌｉｍａｓｔａｔ）（Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｂｉｏｔｅｃｈ，ＷＯ ９９／２５６９３）、ＢＢ−１１０１、ＢＢ−２９８３、ＢＢ−３６４４（Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｂｉｏｔｅｃｈ）；ＢＭＳ−２７５２９１（Ｒｉｚｖｉら、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ １９９９ ＡＡＣＲ ＮＣＩ ＥＯＲＴＣ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ＃７２６ 「Ａ Ｐｈａｓｅ Ｉ，ｓａｆｅｔｙ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ｔｒｉａｌ ｏｆ ＢＭＳ−２７５２９１、ａ ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｏｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（ＭＭＰＩ），ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｄｖａｎｃｅｄ ｏｒ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ」）、Ｄ−１９２７、Ｄ−５４１０、ＣＨ−５９０２、ＣＨ−１３８（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ）；ＣＭＴ−３、デルモスタット（ｄｅｒｍｏｓｔａｔ）（ＣｏｌｌａＧｅｎｅｘ−米国特許第５，８３７，６９６号）；ＤＡＣ−ＭＭＰＩ（ＣｏｎｊｕＣｈｅｍ）；ＲＳ−１１３０８３０およびＲＳ−１１３−０８０（Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ）；ＧＭ−１３３９（Ｌｉｇａｎｄ）；ＧＩ−１５５７０４Ａ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈ Ｋｌｉｎｅ）；ＯＮＯ−４８１７（ＯＮＯ）；ＡＧ−３４３３、ＡＧ−３０８８、プリノマスタット（ｐｒｉｎｏｍａｓｔａｔ）（Ａｇｏｕｒｏｎ；米国特許第５，７５３，６５３号）、ＣＰ−５４４４３９（Ｐｆｉｚｅｒ，米国特許第６，１５６，７９８号）；ＰＯＬ−６４１（Ｐｏｌｉｆａｒｍａ）；ＳＣ−９６４、ＳＤ−２５９０、ＰＮＵ−１４２７６９（Ｐｈａｒｍａｃｉａ；ＷＯ ９７／３２８４６）、ＳＵ−５４０２（Ｐｈａｒｍａｃｉａ；ＷＯ ９８／５０３５６）；ＰＧＥ−２９４６９７９、ＰＧＥ−４３０４８８７（Ｐｒｏｃｔｅｒ ＆ Ｇａｍｂｌｅ）；フィブロラーゼ結合体（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−ＡＧ）；ＥＦ−１３（Ｓｃｏｔｉａ−Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；Ｓ−３３０４（Ｓｈｉｏｎｏｇｉ）；ＣＧＳ−２５０１５およびＣＧＳ−２７０２３Ａ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＸＲ−１６８（Ｘｅｎｏｖａ）、およびＲＯ １１３０８３０（Ｆｉｓｈｅｒら、２１９ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ、２０００年３月２６日〜３０日、「ＯＲＧＮ ８３０「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ＲＯ １１３０８３０，ａ Ｍａｔｒｉｘ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ：Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｃｈｅｍｅ ｔｏ Ｐｉｌｏｔ−Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ」）。他のＭＭＰＩは、米国特許第４，２３５，８８５号；同第４，２６３，２９３号；同第４，２７６，２８４号；同第４，２９７，２７５号；同第４，３６７，２３３号；同第４，３７１，４６５号；同第４，３７１，４６６号；同第４，３７４，７６５号；同第４，３８２，０８１号；同第４，５５８，０３４号；同第４，７０４，３８３号；同第４，９５０，７５５号；同第５，２７０，４４７号；同第６，２９４，６９４号；および同第６，３２９，５５０号が挙げられる。

下記により詳細に考察されるＭＭＰＩの種類の代表的な例としては、（１）基質メタロプロテイナーゼ組織インヒビター（ＴＩＭＰ）、（２）テトラサイクリン、（３）ヒドロキサメート、（４）合成ＭＭＰフラグメント（例えば、ペプチドインヒビター）、（５）メルカプトベース化合物、および（６）ビスホスホネートが挙げられる。

（１．マトリクスメタロプロテアーゼの組織インヒビター）
マトリクスメタロプロテアーゼ（ＴＩＭＰ）の組織インヒビターを、メタロプロテアーゼを阻害するそのインヒビターの能力、互いの構造類似性、二次構造において重要なジスルフィド結合を形成する１２システイン、およびメタロプロテアーゼの金属イオンと相互作用をするＶＩＲＡＦモチーフの存在に基づいて分類した。ＴＩＭＰの核酸配列およびアミノ酸配列は、以下に記載される：ＴＩＭＰ−１（Ｄｏｃｈｅｒｔｙ Ａ Ｊ Ｐら（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１８：６６−６９）、ＴＩＭＰ−２（Ｂｏｏｎｅ Ｔ Ｃら（１９９０）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ８７ ２８００−２８０４；Ｓｔｅｔｌｅｒ−Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎ Ｗ Ｇら（１９９０）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６５：１３９３３−３８）、およびＴＩＭＰ−３（Ｗｉｌｄｅ Ｃ Ｇら（１９９４）ＤＮＡ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １３：７１１−１８；Ａｐｔｅら，「Ｔｈｅ Ｇｅｎｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｔｉｓｓｕｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ」（ＴＩＭＰ）−３ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ Ｄｅｆｉｎｅ ｔｈｅ Ｄｉｓｔｉｎｃｔ ＴＩＭＰ Ｇｅｎｅ Ｆａｍｉｌｙ）；（また、Ｂｏｏｎｅ Ｔ．Ｃ．，ら，「ｃＤＮＡ ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：２８００−２８０４（Ａｐｒｉｌ １９９０），Ｆｒｅｕｄｅｎｓｔｅｉｎ，ｍＲＮＡ ｏｆ ｂｏｖｉｎｅ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ：Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｂｏｖｉｎｅ ｏｖａｒｉａｎ ｔｉｓｓｕｅ，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，１７１：２５０−２５６（１９９０）、米国特許第５，６４３，７５２号および同第６，３００，３１０号を参照のこと）。

ＴＩＭＰ−１は、３０ｋＤのタンパク質であり、そして、その最も一般的に発現されているＴＩＭＰ分子である。これは、炭化水素結合部位として作用する２つのアスパラギン残基を含み、これらのアルギニン残基のうちの１つは、ループ１にあり、そしてもう１つはループ２にある（ＭｕｒｐｈｙおよびＤｏｃｈｅｒｔｙ，前出）。さらに、その分子のはじめの３つのループのみを含むＴＩＭＰ−１の短縮形態は、ＭＭＰを阻害し得る。ＴＩＭＰ−１は、ＴＩＭＰ−２よりも良好な間質性のコラゲナーゼのインヒビターであり（Ｈｏｗａｒｄ Ｅ Ｗら（１９９１）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６６：１３０７０−７５）、その２３ｋＤのＴＩＭＰ−２分子は、ゼラチナーゼＡおよびゼラチナーゼＢの最も効率的なインヒビターである。ＴＩＭＰ−３は、コラゲナーゼ１、ストロメライシン、ならびにゼラチナーゼＡおよびゼラチナーゼＢを阻害する２１ｋＤのタンパク質であり（Ａｐｔｅ Ｓ．Ｓ．ら（１９９５）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０：１４３１３−１８）、かつマイトジェンにによって誘導され得る（Ｗｉｃｋら（１９９４）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６９：１８９５３−６０）。

上述のように、４つのＴＩＭＰ分子のうちのいずれかが、これまでに同定されたＭＭＰの事実上全ての活性を阻害し得、そして、本発明の目的のために適切である。しかし、ＴＩＭＰ−１（コラゲナーゼの阻害についての高い特異性を有している）は、コラゲナーゼ移植物に組み込むことについて特に好ましい。

（２．テトラサイクリン）
テトラサイクリンは、抗生物質としてのそれらの用途についてもともと知られている、１群のアナログおよび誘導化合物である。多くのテトラサイクリン（テトラサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、および他のものを含む）は、ＭＭＰの産生および活性を阻害することが実証されている。その正確な構造は完全には理解されていないが、ＭＭＰ阻害は、ＭＭＰ発現のダウンレギュレーションおよび／または亜鉛金属活性部位の転写後のキレート化を介して生じ得る。これらの広範な用途および低い毒性があたえられると、これらの化合物は、コラーゲン移植物に対する取り込みについて特に有用である。

テトラサイクリンファミリーのペアレント化合物である、テトラサイクリンは、以下の一般構造を有している：

複数の環核は、以下のように番号がふられる：

。

テトラサイクリン、ならびにその５−ＯＨ（オキシテトラサイクリン）誘導体および７−Ｃｌ（クロロテトラサイクリン）誘導体は、天然に存在しており、かつ周知の抗生物質である。他のテトラサイクリンとしては、例えば、以下が挙げられるが、これらに限定されない：アピサイクリン（ａｐｉｃｙｃｌｉｎｅ）、ケロカルジン（ｃｈｅｌｏｃａｒｄｉｎ）、クロモサイクリン（ｃｌｏｍｏｃｙｃｌｉｎｅ）、デメクロサイクリン（ｄｅｍｅｃｌｏｃｙｃｌｉｎｅ）、デオキシサイクリン（ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ）、エタモサイクリン（ｅｔａｍｏｃｙｃｌｉｎｅ）、グアメサイクリン（ｇｕａｍｅｃｙｃｌｉｎｅ）、リメサイクリン（ｌｙｍｅｃｙｃｌｉｎｅ）、メグルサイクリン（ｍｅｇｌｕｃｙｃｃｌｉｎｅ）、メフィサクリン（ｍｅｐｙｃｙｈｃｌｉｎｅ）、ミノサイクリン（ｍｉｎｏｃｙｃｌｉｎｅ）、メタサイクリン（ｍｅｔｈａｃｙｃｌｉｎｅ）、ペニメピサイクリン（ｐｅｎｉｍｅｐｉｃｙｃｌｉｎｅ）、ピアサイクリン（ｐｉａｃｙｃｌｉｎｅ）、ロリテトラサイクリン、およびサンサイクリン（ｓａｎｃｙｃｌｉｎｅ）。

テトラサイクリンはまた、それらのテトラサイクリンが抗生物質に対するそれらの構造的に関連性を保持するが、それらの抗生物質活性が、化学的改変によって実質的または完全に低減されるように改変され得る。化学的に改変したテトラサイクリン（ＣＭＴ）の例示的な例としては、例えば、以下が挙げられる：ＣＭＴ−１（４−デ（ジメチルアミン）−テトラサイクリン）、ＣＭＴ−２（テトラサイクリノニトリル（ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｏｎｉｔｒｉｌｅ））、ＣＭＴ−３（６−デメチル−６−デオキシ−４−デ（ジメチルアミノ）テトラサイクリン）、ＣＭＴ−４（７−クロロ−４−デ（ジメチルアミノ）テトラ−サイクリン）、ＣＭＴ−５（テトラサイクリンピラゾール）、ＣＭＴ−６（４−ヒドロキシ−４−デ（ジメチルアミノ）テトラ−サイクリン）、ＣＭＴ−７（４−デ（ジメチルアミノ）−１２α−デオキシテトラサイクリン）、ＣＭＴ−８（６−デオキシ−５α−ヒドロキシ−４−デ（ジメチルアミノ）テトラサイクリン、ＣＭＴ−９（４−デ（ジメチルアミノ）−１２α−デオキシアンヒドロ−テトラサイクリン）、およびＣＭＴ−１０（４−デ（ジメチルアミノ）ミノサイクリン。

テトラサイクリン（テトラサイクリン誘導体を含む）の代表例は、以下に記載される：米国特許第３，６２２，６２７号（Ｂｌａｃｋｗｏｏｄらに与えられた）、米国特許第３，８４６，４８６号（Ｍａｒｃｕｓに与えられた）、米国特許第３，８６２，２２５号（Ｃｏｎｏｖｅｒらに与えられた）、米国特許第３，８９５，０３３号（Ｍｕｒａｋａｍｉらに与えられた）、米国特許第３，９０１，９４２号（Ｂｅｒｎａｒｄｉらに与えられた）、米国特許第３，９１４，２９９号（Ｍｕｘｆｅｌｄｔに与えられた）、米国特許第３，９２５，４３２号（Ｇｉｌｌｃｈｒｉｅｓｔらに与えられた）、米国特許第３，９２７，０９４号（Ｖｉｌｌａｘに与えられた）、米国特許第３，９３２，４９０号（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚらに与えられた）、米国特許第３，９５１，９６２号（Ｍｕｒａｋａｍｉらに与えれた）、米国特許第３，９８３，１７３号（Ｈａｒｔｕｎｇらに与えられた）、米国特許第３，９９１，１１１号（Ｍｕｒａｋａｍｉらに与えられた）、米国特許第３，９９３，６９４号（Ｍａｒｔｉｎらに与えられた）、米国特許４，０６０，６０５号（Ｃｏｔｔｉらに与えられた）、米国特許第４，０６６，６９４号（Ｂｌａｃｋｗｏｏｄらに与えられた）、米国特許第４，０８１，５２８号（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇに与えられた）、米国特許第４，０８６，３３２号（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇに与えられた）、米国特許第４，１２６，６８０号（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇに与えられた）、米国特許第４，８５３，３７５号（Ｋｒｕｐｉｎらに与えられた）、米国特許第４，９１８，２０８号（Ｈａｓｅｇａｗａら）、ならびに米国特許第５，５３８，９５４号（Ｋｏｃｈらに与えられた）；一般的には、Ｍｉｔｓｃｈｅｒ、Ｌ．Ａ．，Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ，第６章，Ｍａｒｃｅｌｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８）を参照のこと。

テトラサイクリン誘導体のさらなる例は、以下に記載される：米国特許第４，６６６，８９７号（Ｇｏｌｕｂらに与えられた）、米国特許第４，７０４，３８３号（ＭｃＮａｍａｒａらに与えられた）、米国特許第４，９０４，６４７号（Ｋｕｌｃｓａｒらに与えられた）、米国特許第４，９３５，４１２号（ＭｃＮａｍａｒａらに与えられた）、米国特許第５，２２３，２４８号（ＭｃＮａｍａｒａらに与えられた）、米国特許第５，２４８，７９７号（Ｓｕｍらに与えられた）、米国特許第５，２８１，６２８号（Ｈｌａｖｋａらに与えられた）、米国特許第５，３２６，７５９号（Ｈｌａｖｋａらに与えられた）、米国特許第５，２５８，３７１号（Ｇｏｌｕｂらに与えられた）、米国特許第５，３０８，８３９号（Ｇｏｌｕｂらに与えられた）、米国特許第５，３２１，０１７号（Ｇｏｌｕｂらに与えられた）、米国特許第５，３２６，７５９号、米国特許第５，４０１，８６３号（Ｈｌａｖｋａらに与えられた）、米国特許第５，４５９，１３５号（Ｇｏｌｕｂらに与えられた）、米国特許第５，５３０，１１７号（Ｈｌｖａｋａらに与えられた）、米国特許第５，５６３，１３０号（Ｂａｃｋｅｒらに与えられた）、米国特許第５，５６７，６９３号（Ｂａｃｋｅｒらに与えられた）、米国特許第５，５７４，０２６号（Ｂａｃｋｅｒらに与えられた）、米国特許第５，６９８，５４２号（Ｚｈｅｎｇらに与えられた）、米国特許第５，７７３，４３０号（Ｓｉｍｏｎらに与えられた）、米国特許第５，８３４，４５０号（Ｓｕに与えられた）、米国特許第５，８４３，９２５号（Ｂａｃｋｅｒらに与えられた）、米国特許第５，８５６，３１５号（Ｂａｃｋｅｒらに与えられた）、米国特許第６，０２８，２０７号（Ｚｈｅｎｇらに与えられた）、米国特許第６，１４３，１６１号（Ｈｅｇｇｉｅらに与えられた）、ならびに米国特許第６，１６５，９９９号（Ｖｕに与えられた）ならびにＰＣＴ公開番号ＷＯ ９９／３３４５５、ＷＯ ９９／３７３０６、ＷＯ ９９／３７３０７、ＷＯ ００／１８３５３およびＷＯ ００／２８９８３。

（３．ヒドロキサメート）
ＭＭＰを阻害するさらなるクラスの化合物は、ヒドロキサメート（またはヒドロキサム酸）である。ＭＭＰ阻害の正確な機構は、正確には知られていないが、これらの化合物は、酵素中の亜鉛金属活性部位との相互作用を介して（例えば、三方両錐（ｔｒｉａｇｏｎａｌ ｂｉｐｙｒｉｍｉｄａｌ）形状を取るような二座様式で、触媒的亜鉛と配位することによって）、その効果を主に発揮すると考えられる。種々のヒドロキサメートが合成され、そして混合された臨床結果を有する、いくつかの疾患状態において試験されている。しかし、ＭＭＰに対するそれらの選択的活性およびその優れた安全性および耐容性を考慮して、これらの薬剤は、移植物の持続期間を増強するための、コラーゲン移植物への取り込みのために特に好ましい。

ヒドロキサメート（またはヒドロキサム酸）は、以下に示される一般構造（および酸性または塩基性のいずれかである、これらのヒドロキサメート化合物の薬学的に受容可能な塩）：

を有し、
ここで、Ａは、ＨＮ（ＯＨ）−ＣＯ−またはＨＣＯ−Ｎ（ＯＨ）−であり；Ｒ^１は、Ｃ_２〜Ｃ_５アルキルであり；Ｒ^２は、保護され得る天然αアミノ酸の特徴的な基であり、但し、Ｒ^２は、Ｈでもメチルでもない；Ｒ^３は、Ｈ、ＮＨ_２、ＯＨ、ＳＨ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルアミノ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルチオ、アリール（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）もしくはアミノ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）、ヒドロキシ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）、メルカプト（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）またはカルボキシ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）であり、ここで、アミノ基、ヒドロキシ基、メルカプト基またはカルボキシル基は保護され得、アミノ基がアシル化され得るか、またはカルボキシル基がアミド化され得；Ｒ^４は、Ｈまたはメチルであり；Ｒ^５は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）、ジ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ）メチレン、カルボキシ、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）カルボニル、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ）カルボニル、アリールメトキシカルボニル、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）アミノカルボニルまたはアリールアミノカルボニルであり；そしてＲ^６は、Ｈまたはメチルであるか；あるいは、Ｒ^２およびＲ^４は、一緒になって、基（ＣＨ_２）_ｎを形成し、ここで、ｎは、４〜１１の整数であるか；あるいはＲ^４およびＲ^５は、一緒になって、トリメチレン基を形成する。これに関して、例えば、ＥＰ−Ａ−０２３６８７２を参照のこと。

ここで、Ｒ^１は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；Ｒ^２は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、ベンジル、ヒドロキシベンジル、ベンジルオキシベンジル、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ）ベンジルまたはベンジルオキシ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）であり；Ａは、（ＣＨＲ^３−ＣＨＲ^４）基または（ＣＲ^３＝ＣＲ^４）基であり；Ｒ^３は、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、フェニルまたはフェニル（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）であり；そしてＲ^４は、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６アルキル、フェニル（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）、シクロアルキルまたはシクロアルキル（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）である。これに関して、例えば、ＥＰ−Ａ−０２１４６３９を参照のこと。

ここで、Ｒ^１は、水素またはヒドロキシであり、Ｒ^２は、水素またはアルキルであり、Ｒ^３は、Ｃ_３〜Ｃ_６アルキルであり、Ｒ^４は、水素、アルキル、−ＣＨ_２Ｚであり、ここで、Ｚは、必要に応じて置換されたフェニルまたはヘテロアリールであるか、あるいはＲ^４は、基Ｃ（ＨＯＲ^８）Ｒ^９であり、ここで、Ｒ^８は、水素、ＣＨ_２Ｐｈのアルキルであり、ここで、Ｐｈは、必要に応じて置換されたフェニルであり、そしてＲ^９は、水素またはアルキルであり；そしてＲ^５は、水素またはアルキルである。これに関して、例えば、ＥＰ−Ａ−３２０１１８を参照のこと。

ここで、Ｒ^１は、水素、アルキルまたは必要に応じて置換されたアリールであり、Ｒ^２は、水素またはアシル（例えば、ＣＯアルキルまたはＣＯＺ）であり、ここで、Ｚは、必要に応じて置換されたアリールであり；Ｒ^３は、Ｃ_３〜６アルキルであり、Ｒ^４は、水素、アルキル、−ＣＨ_２Ｒ^１０であり、ここで、Ｒ^１０は、必要に応じて置換されたフェニルまたはヘテロアリールであるか、あるいはＲ^４は、基Ｃ（ＨＯＲ^１１）Ｒ^１２であり、ここで、Ｒ^１１は、水素、アルキルまたはＣＨ_２Ｐｈであり、ここで、Ｐｈは、必要に応じて置換されたフェニルであり，そしてＲ^１２は、水素またはアルキルであり；そしてＲ^５は、水素、アルキルまたは基Ｃ（ＨＲ^１３）ＣＯＲ^１４であり、ここで、Ｒ^１３は、水素またはアルキルであり、そしてＲ^１４は、ヒドロキシ、アルコキシまたは−ＮＲ^６Ｒ^７であり、ここで、Ｒ^６またはＲ^７の各々は、水素またはアルキルであるか、あるいは、Ｒ^６およびＲ^７は、これらが結合する窒素原子と一緒になって、環中に任意の酸素原子もしくは硫黄原子、またはアルキルによって必要に応じて置換されたさらなる窒素原子を有する、５員環、６員環または７員環を形成する。これに関して、例えば、ＥＰ−Ａ−０３２２１８４を参照のこと。

ここで、Ｒ^１およびＲ^２は、独立して、Ｈ、アルキル、アルコキシ、ハロゲンまたはＣＦ_３であり、Ｒ^３は、Ｈ、アシル（例えば、ＣＯアルキルまたはＣＯＺ）であり、ここで、Ｚは、必要に応じて置換されたアリールまたは基ＲＳであり、ここで、Ｒは、有機残基であり、その結果、基ＲＳは、インビボで切断可能なジスルフィド結合を提供し；Ｒ^４は、Ｃ_３〜Ｃ_６アルキルであり、Ｒ^５は、Ｈ、アルキル、−ＣＨ_２Ｒ^１０であり、ここで、Ｒ^１０は、必要に応じて置換されたフェニルもしくはヘテロアリール、または基Ｃ（ＨＯＲ^１１）Ｒ^１２であり、ここで、Ｒ^１１は、水素、アルキルまたはＣＨ_２Ｐｈであり、ここで、Ｐｈは、必要に応じて置換されたフェニルであり、そしてＲ^１２は、水素またはアルキルであり；そしてＲ^６は、水素、アルキルまたは基Ｃ（ＨＲ^１３）ＣＯＲ^１４であり、ここで、Ｒ^１３は、水素またはアルキルであり、そしてＲ^１４は、ヒドロキシ、アルコキシまたは−ＮＲ^７Ｒ^８であり、ここで、Ｒ^７またはＲ^８の各々は、水素またはアルキルであるか、あるいはＲ^７およびＲ^８は、これらが結合する窒素原子と一緒になって、環中に任意の酸素原子、硫黄原子、または必要に応じて置換された窒素原子を有する、５員環、６員環または７員環を形成するか；あるいはＲ^５およびＲ^６は、（ＣＨ_２）_ｍとして一緒に連結され、ここで、ｍは、４〜１２の整数であり；Ｘは、（ＣＨ_２）_ｎであり、ここで、ｎは、０、１または２であり；そしてＹはＣＨ_２である。これに関して、例えば、ＥＰ−Ａ−３５８３０５を参照のこと。

ここで、Ｒは、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルまたは必要に応じて置換されたベンジルであり、Ｒ^１は、水素またはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり、Ｒ^２は、Ｃ_３〜Ｃ_６アルキルであり、Ｒ^３は、水素、アルキル、−ＣＨ_２Ｚであり、ここで、Ｚは、必要に応じて置換されたフェニルまたはヘテロアリールであるか、あるいはＲ^３は、基Ｃ（ＨＯＲ^７）Ｒ^８であり、ここで、Ｒ^７は、水素、アルキルまたはＣＨ_２Ｐｈであり、ここで、Ｐｈは、必要に応じて置換されたフェニルであり、そしてＲ^８は、水素またはアルキルであり；そしてＲ^４は、−ＣＨ_２−（ＣＨ_２）_ｎＯＲ^５、−ＣＨ_２−（ＣＨ_２）_ｎＯＣＯＲ^６または−ＣＨ（Ｒ^９）ＣＯＲ^１０であり、ここで、ｎは、１〜６の整数であり；Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^９は、水素またはＣ_１〜Ｃ_６アルキルであり；そしてＲ^１０は、ヒドロキシまたはＯ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）またはＮＲ^５Ｒ^６であり、ここで、Ｒ^５およびＲ^６は、連結されて複素環式環を形成し得るか；あるいは、Ｒ^３およびＲ^４は、（ＣＨ_２）_ｍとして一緒に連結され、ここで、ｍは、４〜１２の整数である。これに関して、例えば、ＥＰ−Ａ−０４０１９６３を参照のこと。

ならびにその塩およびＮ−オキシドであって、ここで、Ｒ^１は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル基、フェニル基、チエニル基、置換フェニル基、フェニル（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基、ヘテロシクリル基、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルカルボニル基、フェナシル基もしくは置換フェナシル基であるか；またはｎが０である場合、Ｒ^１は、ＳＲ^ｘを表し、ここで、Ｒ^ｘは、以下の式：

の基を表し、そしてＲ^２は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１〜Ｃ_６アルケニル基、フェニル（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基、シクロアルキル（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基またはシクロアルケニル（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基であり；Ｒ^３は、アミノ酸側鎖またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基、ベンジル基、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルコキシ）ベンジル基、ベンジルオキシ（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）基またはベンジルオキシベンジル基であり；Ｒ^４は、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基であり；Ｒ^５は、Ｈまたはメチル基であり；ｎは、０、１または２であり；そしてＡは、１つ以上のＣ_１〜Ｃ_６アルキル基、フェニル基または置換フェニル基で必要に応じて置換された、Ｃ_１〜Ｃ_６炭化水素鎖を表す。これに関して、例えば、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９０／０５７１９を参照のこと。

あるいはその塩および／またはＮ−オキシドおよび／または（この化合物がチオ化合物である場合には）そのスルホキシドもしくはスルホンであって、ここで、Ｒ^１は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、フェニル、フェニル（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルチオメチル、フェニルチオメチル、置換フェニルチオメチル、フェニル（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルチオメチル基、もしくはヘテロシクリルチオメチルであるか、またはＲ^１は、−ＳＲ^ｘを表し、ここで、Ｒ^ｘは、以下の基：

を表し、そしてＲ^２は、水素原子、またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルケニル、フェニル（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、シクロアルキル（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、もしくはシクロアルケニル（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルを表し；Ｒ^３は、アミノ酸側鎖またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基、ベンジル基、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルコキシベンジル基、ベンジルオキシ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基、もしくはベンジルオキシベンジル基を表し；Ｒ^４は、水素原子、またはメチル基を表し；ｎは、１〜６の整数であり、そしてＡは、基−ＮＨ_２、置換非環式アミンまたは複素環式塩基を表す。これに関して、例えば、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９０／０５７１６を参照のこと。

あるいはその塩および／またはＮ−オキシドおよび／または（この化合物がチオ化合物である場合には）そのスルホキシドまたはスルホンであって、ここで、Ｒ^１は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル基、Ｃ_１〜Ｃ_６アルケニル基、フェニル基、フェニル（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルチオメチル基、フェニルチオメチル基、置換フェニルチオメチル基、フェニル（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルチオメチル基もしくはヘテロシクリルチオメチル基であるか；またはＲ^１は、−Ｓ−Ｒ^ｘを表し、ここで、Ｒ^ｘは、以下の基：

を表し、そしてＲ^２は、水素原子、またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルケニル、フェニル（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、シクロアルキル（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、またはシクロアルケニル（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルであり；Ｒ^３は、アミノ酸側鎖またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基、ベンジル基、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルコキシベンジル基、ベンジルオキシ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル基またはベンジルオキシベンジル基を表し；Ｒ^４は、水素原子またはメチル基を表し；Ｒ^５は、基（ＣＨ_２）_ｎＡを表すか；またはＲ^４およびＲ^５が一緒になって、基：

を表し、そしてＱは、ＣＨ_２またはＣＯを表し；ｍは、１〜３の整数であり；ｎは、１〜６の整数であり、そしてＡは、ヒドロキシ基、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルコキシ基、（Ｃ_２〜Ｃ_７）アシルオキシ基、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルチオ基、フェニルチオ基、（Ｃ_２〜Ｃ_７）アシルアミノ基、またはＮ−ピロリドン基を表す。これに関して、例えば、ＰＣＴ国際公開番号ＷＯ９１／０２７１６を参照のこと。

またはその塩であって、ここで、Ｒ^１は、Ｈ、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、フェニル、置換フェニル、フェニル（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、もしくはヘテロシクリルであるか；またはＲ^１は、ＡＳＯ_ｎＲ^７であり、ここで、Ａは、必要に応じて１つ以上のＣ_１〜Ｃ_６アルキル基、フェニル基もしくは置換フェニル基で置換された、Ｃ_１〜Ｃ_６炭化水素鎖を表し、ｎは、０、１、または２であり、そしてＲ^７は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、フェニル、置換フェニル、フェニル（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）、ヘテロシクリル、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）アシル、チエニルまたはフェナシルであり；Ｒ^２は、水素、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルケニル、フェニル（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）またはシクロアルキル（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）であり；Ｒ^３およびＲ^４は、水素、ハロゲン、シアノアミノ、アミノ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、アミノジ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、アミノ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルアシル、アミノフェナシル、アミノ（置換）フェナシル）、アミノ酸もしくはその誘導体、ヒドロキシ、オキシ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、オキシアシル、ホルミル、カルボン酸、カルボキサミド、カルボキシ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルアミド、カルボキシフェニルアミド、カルボキシ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、ヒドロキシ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルオキシ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルもしくはアシルオキシ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルカルボン酸、または（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルカルボキシ（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルから選択されるか；あるいはＲ^３は、ＯＣＨ_２ＣＯＲ^８であり、そしてＲ^４は、水素であり、ここでＲ^８は、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_６オキシアルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６オキシアルキルフェニル、アミノ、Ｃ_１〜Ｃ_６アミノアルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６アミノジアルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６アミノアルキルフェニル、アミノ酸またはその誘導体であるか；またはＲ^３は、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＲ^９であり、そしてＲ^４は、水素であり、ここで、Ｒ^９は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルフェニル、フェニル、置換フェニル、（Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル）アシル、もしくはフェナシルであるか；またはＲ^３は、ＯＣＨ_２ＣＮであり、そしてＲ^４は、水素であり；Ｒ^５は、水素またはＣ_１〜Ｃ_６アルキル、もしくは（Ｃ_１〜Ｃ_６）アルキルフェニルであり；Ｒ^６は、水素またはメチルである。これに関して、例えば、ＰＣＴ国際出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９２／００２３０を参照のこと。

本発明において使用する２つの好ましい化合物（これらは、米国特許第５，８７２，１５２号中で言及される）は、以下である：以下の構造を有する、［４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２Ｒ−イソブチル−３Ｓ−チエニルチオメチル）スクシニル］−Ｌ−フェニルアラニン−Ｎ−メチルアミド

および以下の構造を有する、［４−（Ｎ−ヒドロキシアミノ）−２Ｒ−イソブチル−３Ｓ−フェニルチオメチル）スクシニル］−Ｌ−フェニルアラニン−Ｎ−メチルアミド

ヒドロキサム酸部分を有するＭＭＰインヒビターを記載するために本明細書中で用いられる場合、以下の用語は、示した意味を有する。用語「Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル」とは、１〜６個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖の炭化水素基をいい、ここで、例示的なアルキル基は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、ネオペンチルおよびヘキシルである。用語「Ｃ_１〜Ｃ_６アルケニル」とは、１〜６個の炭素原子を有し、かつ、さらに、１以上の二重結合を有し、適用可能な場合、Ｅ立体配置またはＺ立体配置の各々のいずれかの、直鎖または分枝鎖の炭化水素基をいい、ここで、この用語は、例えば、α，β−不飽和メチレン、ビニル、１−プロペニル、１−ブテニルおよび２−ブテニルならびに２−メチル−２−プロペニルを包含し、ここで、好ましい実施形態では、Ｃ_１〜Ｃ_６アルケニルは、Ｃ_２〜Ｃ_６アルケニル基である。用語「Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル」とは、３〜６個の炭素原子を有する脂環式基をいい、ここで、例示的なシクロアルキル基は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルである。用語「Ｃ_４〜Ｃ_６シクロアルケニル」とは、４〜６個の炭素原子を有し、かつさらに、１以上の二重結合を有する、脂環式基をいい、ここで、例示的なシクロアルケニル基は、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニルおよびシクロオクテニルである。用語「ハロゲン」とは、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素をいう。用語「アミノ酸側鎖」とは、以下のＲアミノ酸またはＳアミノ酸における−ＣＨ（ＮＨ_２）（ＣＯＯＨ）部分に結合した特有の側鎖をいう：グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、トレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン、グルタミン、リジン、ヒスチジン、アルギニン、グルタミン酸およびアスパラギン酸。

ヒドロキサメートの代表例、およびヒドロキサメートを合成するための方法は、以下の米国特許において詳細に記載される：

代表的外国出願および国際出願ならびに刊行物としては、以下が挙げられる：

多くのヒドロキサメートもまた、種々の商業的供給源から容易に入手可能である。

（４．ポリペプチドインヒビター）
本発明の他の局面では、マトリックスメタロプロテイナーゼのポリペプチド（ポリペプチド誘導体を含む）インヒビターを利用して、コラーゲンの持続期間および有用性を拡げ得る。ポリペプチドインヒビターの代表例としては、米国特許第５，３００，５０１号、同第５，５３０，１２８号、同第５，５６９，６６５号、同第５，７１４，４９１号、および同第５，８８９，０５８号に開示されるポリペプチドインヒビターが挙げられる。

（５．メルカプトに基づく化合物）
メルカプトに基づく化合物もまた、ＭＭＰＩとして利用され得る。代表例としては、メルカプトケトン化合物およびメルカプトアルコール化合物（例えば、米国特許第５，８３１，００４号、同第５，８４０，６９８号、および同第５，９２９，２７８号に記載される化合物）；メルカプトスルフィド（例えば、米国特許第５，４５５，２６２号に記載されるメルカプトスルフィド）が挙げられる。

（６．ビスホスホネート）
ビスホスホネートは、無機ピロホスホン酸に関連する化合物である（一般に、Ｈ．Ｆｌｅｉｓｃｈ，Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｖ．，１９（１）：８０−１００（１９９８）を参照のこと；Ｈ．Ｆｌｅｉｓｃｈ，Ｂｉｓｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓ ｉｎ Ｂｏｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅ：Ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｔｏ ｔｈｅ Ｐａｔｉｅｎｔ （１９９７，第３版）．Ｔｈｅ Ｐａｒｔｈｅｎｏｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ，Ｎｅｗ ＹｏｒｋおよびＬｏｎｄｏｎも参照のこと）。一般に、ビスホスホネートは、以下の構造を有する：Ｐ−Ｃ−Ｐ。特に好ましいビスホスホネートは、以下の構造を有する：

ここで、置換基Ｒ’およびＲ’’は、独立して、水素またはハロゲン原子、ヒドロキシ、必要に応じて置換されたアミノまたは必要に応じて置換されたチオ基または必要に応じて置換された炭化水素基を表す。１つの局面において、Ｒ’およびＲ’’のうちの１つは、ヒドロキシ、水素または塩素である。

ビスホスホネートの代表的な例としては、例えば、以下が挙げられる：アレンドロネート（ａｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ）（（４−アミノ−１−ヒドロキシブチリデン）ビスホスホン酸）；クロドロネート（ｃｌｏｄｒｏｎａｔｅ）（ジクロロメタンビスホスホン酸）；エチドロネート（ｅｔｉｄｒｏｎａｔｅ）（（１−ヒドロキシエチリデン）ビスホスホン酸）；パミドロネート（ｐａｍｉｄｒｏｎａｔｅ）（（３−アミノ−１−ヒドロキシプロピリデン）ビスホスホン酸）；リセンドロネート（ｒｉｓｅｄｒｏｎａｔｅ）（［−ヒドロキシ−２−（３−ピリジニル）エチリデン］ビスホスホン酸）；チルドロネート（ｔｉｌｕｄｒｏｎａｔｅ）（（［（４−クロロ−フェニル）チオ］−メチレン］ビスホスホン酸）；ゾレンドロネート（ｚｏｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ）；［１−ヒドロキシ−３−（メチル−ペンチル−アミノ）−プロピリデン］ビス−ホスホネート（ＢＭ２１．０９５５）；［（シクロヘプチルアミノ）メチレン］−ビスホスホネート（ＹＭ１７５）；１−ヒドロキシ−３−（１−ピロリジニル）−プロピリデン］ビスホスホネート（ＥＢ−１０５３）；［１−ヒドロキシ−２−（１Ｈ−イミドゾール−１−イル）エチリデン］ビスホスホネート（ＣＧＰ ４２’４４６）および（１−ヒドロキシ−２−イミダゾ−［１，２−ａ］ピリジン−３−イル−エチリデン）ビスホスホネート（ＹＭ ５２９）。

ビスホスホネートの代表的な例は、米国特許第５，６５２，２２７号および同第５，９９８，３９０号に記載される。

（７．ＭＭＰＩの組み合わせ）
本発明の特定の実施形態において、１種より多いＭＭＰＩが利用され得る（すなわち、２種以上のＭＭＰＩが組み合わせて使用され得る）。相乗ＭＭＰＩ（ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ ＭＭＰＩ）としては、例えば、テトラサイクリンおよびビスホスホネート（例えば、米国特許第５，９９８，３９０号および同第６，１１４，３１６号を参照のこと）。ＭＭＰＩの他の組み合わせが同様に利用され得、このＭＭＰＩとしては、例えば、異なる段階でＭＭＰを阻害するＭＭＰＩ（例えば、ヒドロキサメートおよびテトラサイクリン）が挙げられる。

（ＩＩＩ．処方物）
上記のように、コラーゲンは、天然の供給源から入手され得るかまたは組換え的に生成され得る繊維状タンパク質である。米国特許（米国特許第６，１６６，１３０号、同第６，０５１，６４８号、同第５，８７４，５００号、同第５，７０５，４８８号、同第５，５５０，１８７号、同第５，５２７，８５６号、同第５，５２３，２９１号、同第４，５８２，６４０号、同第４，４２４，２０８号および同第３，９４９，０７３号が挙げられる）の代表的な実施例は、コラーゲンベースの組成物およびこのような組成物を調製する方法を記載する。

本発明のＭＭＰＩ組成物は、種々の方法で調製され得る。例えば、ＭＭＰＩは、コラーゲン溶液中に直接溶解され得る。ＭＭＰＩがコラーゲン溶液中で安定である場合、コラーゲンおよびＭＭＰＩを含有する組成物が、単一用途の装置中で調製され得る。ＭＭＰＩがコラーゲン溶液中で有意な長さの時間の間安定でない場合、この組成物は、２成分系として作製され得、この中でこれらの成分は、使用直前に混合される。

本発明のＭＭＰＩ組成物はまた、キャリア中にＭＭＰＩ因子を配置することによってもまた、生成され得る。キャリアの代表的な例としては、ポリマーキャリアおよび非ポリマーキャリア（例えば、リポソームまたはビタミンベースのキャリア）の両方が含まれ得、そして生分解性かまたは非生分解性のいずれかであり得る。生分解性組成物の代表的な例としては、アルブミン、ゼラチン、デンプン、セルロース、デキストラン、ポリサッカライド、フィブリノゲン、ポリ（エステル）［例えば、ポリ（Ｄ，Ｌラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コグリコリド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ｅ−カプロラクトン）、コポリマーおよびこれらのブレンド］ポリ（ヒドロキシブチレート）、ポリ（アルキルカーボネート）、ポリ（無水物）およびポリ（オルトエステル）（一般的には、Ｉｌｌｕｍ，Ｌ．，Ｄａｖｉｄｓ，Ｓ．Ｓ．（編）「Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」Ｗｒｉｇｈｔ，Ｂｒｉｓｔｏｌ，１９８７；Ａｒｓｈａｄｙ，Ｊ．，Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ １７：１−２２（１９９１）；Ｐｉｔｔ，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ ５９：１７３−１９６（１９９０）；Ｈｏｌｌａｎｄら，Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ４：１５５−０１８０（１９８６）を参照のこと）。非分解性ポリマーの代表的な例としては、エチレンオキシドとプロピレンオキシドのコポリマー［プルロン酸（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）ポリマー−ＢＡＳＦ］、ＥＶＡコポリマー、シリコーンゴム、ポリ（メタクリレート）ベースのポリマーおよびポリ（アクリレート）ベースのポリマーが挙げられる。特に好ましいポリマーキャリアとしては、ポリ（Ｄ，Ｌ−乳酸）オリゴマーおよびポリマー、ポリ（Ｌ−乳酸）オリゴマーおよびポリマー、ポリ（グリコール酸）、乳酸とグリコール酸とのコポリマー、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（吉草酸）、ポリ無水物、カプロラクトンおよび／または乳酸と、ポリエチレングリコールまたはメトキシポリエチレングリコールおよびこれらのブレンドのコポリマーが挙げられる。

ポリマーキャリアは、種々の形態で構築され得、この形態としては、例えば、棒形状デバイス、ペレット、スラブ、またはカプセルが挙げられる（例えば、Ｇｏｏｄｅｌｌら，Ａｍ．Ｊ．Ｈｏｓｐ．Ｐｈａｒｍ．４３：１４５４−１４６１（１９８６）；Ｌａｎｇｅｒら，「Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｆｒｏｍ ｐｏｌｙｍｅｒｓ」；Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ｆｏｒ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ｕｓｅ，Ｇｏｌｄｂｅｒｇ，Ｅ．Ｐ．，Ｎａｋａｇｉｍ，Ａ．（編）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．１１３−１３７，１９８０；Ｒｈｉｎｅら，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６９：２６５−２７０（１９８０）；Ｂｒｏｗｎら，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．７２：１１８１−１１８５（１９８３）；およびＢａｗａら，Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ １：２５９−２６７（１９８５）を参照のこと）。ＭＭＰＩ因子は、ポリマーのマトリクス中の占有部によって連結され得るか、共有結合によって結合され得るか、またはマイクロカプセル中にカプセル化され得る。本発明の特定の好ましい実施形態において、ＭＭＰＩ組成物は、ミクロスフェア（ナノメートルからミクロメートルの範囲のサイズ）、ペースト、種々のサイズの糸、フィルムおよびスプレーで提供される。

好ましくは、本発明のＭＭＰＩ組成物（これは、特定の実施形態内で、１つ以上のＭＭＰＩ因子、およびポリマーキャリアを含む）は、意図する用途に適切な様式で形成される。本発明の特定の局面において、ＭＭＰＩ組成物は、生体適合性であるべきであり、数日〜数ヶ月の期間にわたって１つ以上のＭＭＰＩ因子を放出するべきである。例えば、７〜１０日の期間にわたって１０％、２０％、または２５％より多いＭＭＰＩ因子（例えば、テトラサイクリン）を放出する「迅速放出」または「破裂」ＭＭＰＩ組成物が、提供される。このような「迅速放出」組成物は、特定の実施形態内で、所望のＭＭＰＩ因子の化学療法レベル（適用可能な場合）を放出し得るべきである。他の実施形態内で、７〜１０日の期間にわたって５％（ｗ／ｖ）未満のＭＭＰＩ因子を放出する「低放出」ＭＭＰＩ組成物が、提供される。さらに、本発明のＭＭＰＩ組成物は、好ましくは、数ヶ月間安定であるべきであり、滅菌条件下で生成および維持され得るべきである。

本発明の特定の局面において、ＭＭＰＩ組成物は、約０．０５０ｎｍ〜約５００μｍの範囲の任意の大きさで形成され得、特定の用途に依存する。例えば、美容組織増大（以下に論じられるように）の目的について使用される場合、一般的に、約０．１と約１００μｍとの間、好ましくは、約０．５と約５０μｍとの間、そして最も好ましくは、約１と約２５μｍとの間のマイクロスフィアにおいて、ＭＭＰＩ組成物を形成することが好ましい。あるいは、このような組成物はまた、ＭＭＰＩがミセル中で可溶化される溶液としても適用され得る。ミセルの組成物は、本質的にポリマー性であり得る。ポリマーミセルとしての用途についての最も好ましいポリマー性組成物は、ＭｅＰＥＧとポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）とのコポリマーである。あるいは、このような組成物はまた、ＭＭＰＩがリポソーム中にカプセル化される溶液としても適用され得る（上記を参照のこと）。あるいは、このような組成物はまた、ＭＭＰＩがエマルジョンまたはマイクロエマルジョンの油相中にカプセル化される溶液としても適用され得る。

本発明のＭＭＰＩ組成物はまた、種々の「ペースト」形態またはゲル形態で調製され得る。例えば、本発明の１つの実施形態において、ある温度（例えば、３７℃より高い温度（例えば、４０℃、４５℃、５０℃、５５℃または６０℃））で液体であり、別の温度（例えば、周囲の身体温度または３７℃より低い任意の温度）で固体または半固体であるＭＭＰＩ組成物が、提供される。このような「熱ペースト」は、本明細書に提供される開示により容易に作製され得る。

ＭＭＰＩ因子の取り込みの代表的な例（例えば、上記のようなポリマーキャリアへの取り込み）は、実施例において以下でより詳細に記載される。

本発明のさらなる局面において、疎水性化合物を含有および放出するように適合されたポリマーキャリアが提供され、このキャリアは、糖、タンパク質またはポリペプチドと組み合わせて疎水性化合物を含む。特定の実施形態において、ポリマーキャリアは、１つ以上の疎水性化合物の領域、ポケット、または顆粒を含有するか、または含む。例えば、本発明の１つの実施形態において、疎水性化合物は、疎水性化合物を含むマトリックス内に取り込まれ得、続いて、ポリマーキャリア内へマトリックスが取り込まれる。種々のマトリックスが、この点に関して利用され得、これらとしては、例えば、糖ならびにポリサッカリド（例えば、デンプン、セルロース、デキストラン、メチルセルロース、およびヒアルロン酸）、タンパク質またはポリペプチド（例えば、アルブミン、コラーゲンおよびゼラチン）が挙げられる。代替の実施形態において、疎水性化合物は、疎水性コア内に含まれ得、そしてこのコアは、親水性殻内に含まれる。例えば、実施例において以下で記載されるように、パクリタキセルは、親水性殻を有する疎水性コア（例えば、ポリＤ，Ｌ乳酸−ＰＥＧまたはＭｅＰＥＧ集合体）に取り込まれ得る。

（１．コラーゲン−ＭＭＰプロドラッグ）
本発明の特定の局面において、ＭＭＰＩ組成物は、ＭＭＰＩが、特定の適用において使用されるコラーゲンへ共有結合されるような様式で形成され得る。ＭＭＰＩは、コラーゲンに直接結合され得るか、またはリンカー分子（例えば、ポリ（エチレングリコール））を介して結合され得る。一旦、コラーゲン−ＭＭＰプロドラッグ系が、所望の部位に導入／適用されると、コラーゲンになお結合されながら、ＭＭＰＩは、ＭＭＰを阻害し得るか、または、コラーゲンから切断（加水分解および／または酵素切断）された後でもＭＭＰを阻害し得る。

ＴＩＭＰについて、ヘテロ二官能性架橋剤（例えば、Ｓｕｌｆｏ−ＥＭＣＳ［Ｐｉｅｒｃｅ］）を使用して、ＴＩＭＰをコラーゲンに共有結合させ得る。より詳細には、ＴＩＭＰは、Ｓｕｌｆｏ−ＥＭＣＳと反応し得、その結果、マレイミド基は、ＴＩＭＰ配列に含まれるシステインの−ＳＨ基と反応する。活性化されたＴＩＭＰは、次いで、コラーゲン溶液と反応され得る。コラーゲン−ＴＩＭＰ結合体は、次いで、組織増大適用に使用され得る。

（２．さらなる組成物）
本発明の特定の実施形態において、本明細書に提供されるコラーゲン／ＭＭＰＩ組成物は、それらの有用性を増強するためにさらに改変され得る。例えば、１つの実施形態において、色素または他の着色剤が加えられて、コラーゲン／ＭＭＰＩ組成物の可視化を増強させ得る。色素または着色剤は、永久的か、または一時的（例えば、メチレンブルー）であり得る。他の実施形態において、凝血を補助する化合物または因子（例えば、トロンビン）が、本明細書に記載される組成物に加えられ得る。

（ＩＶ．臨床的適用）
（１．真皮注射）
種々の注射可能コラーゲン製品は、顔面瘢痕を矯正し、顔面の皺（ｌｉｎｅ）を減らし、そして唇を補強するための軟組織増強のために、開発されてきた。特に、このような移植片は、種々の輪郭欠損症を処置（挫瘡瘢痕、疾患もしくは外傷由来の萎縮症、眉間に走る皺、鼻唇のひだ、または鼻形成術、皮膚移植もしくは他の外科手術に対する二次的な欠損症および他の軟組織欠損の矯正が挙げられる（が、これらに限定されない））するために示される。

数種の市販の製品が、この目的のために使用される。これらの製品としては、Ｚｙｄｅｒｍ Ｉ（登録商標）（０．３％リドカインを含む生理食塩水中、３．５％ウシコラーゲン）、Ｚｙｄｅｒｍ ＩＩ（登録商標）（６．５％ウシコラーゲン）、Ｚｙｐｌａｓｔ（登録商標）（ＭｃＧｈａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ；０．３％リドカインを含有するリン酸緩衝化生理学的生理食塩水中に分散されたグルタルアルデヒドと架橋した、３．５％ウシ真皮コラーゲン）およびＦｉｂｒｅｌ（Ｓｅｒｏｎｏ Ｌａｂｓ−ゼラチン、ε−アミノカプロン酸および注射前に１：１の割合で患者の血漿と合わせた生理食塩水の組み合わせ）が挙げられる。他のコラーゲンベースの注射可能製品（非ウシ供給源または非ヒト供給源由来のものを含む）が、同様に、この実施形態において使用され得る。

不幸にも、長期にわたってコラーゲン移植片を破壊するメタロプロテイナーゼ（例えば、コラゲナーゼ）を産生する宿主結合組織細胞および炎症性細胞によって、この移植片がコロニー形成される場合、反復の「触診（ｔｏｕｃｈ ｕｐ）」手順が、しばしば必要とされる。メタロプロテイナーゼインヒビター（ＭＭＰＩ）を含有する注射可能コラーゲン（上記）は、単独でかまたは徐放性調製物中のいずれかで、移植片の耐久性を増大させ、そして引き続く反復注射の回数を減少させる。

以前に記載されたいずれのメタロプロテイナーゼインヒビターも真皮コラーゲン注射に組み込むのに適切であり得るが、以下のものが、さらに好ましい：ＴＩＭＰ−１、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）、Ｍａｒｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）、Ｒｏ−１１３０８３０、ＣＧＳ ２７０２３Ａ、ＢＭＳ−２７５２９１、ＣＭＴ−３、Ｓｏｌｉｍａｓｔａｔ、Ｉｌｏｍａｓｔａｔ、ＣＰ−５４４４３９、Ｐｒｉｎｏｍａｓｔａｔ、ＰＮＵ−１４２７６９０、ＳＵ−５４０２、およびＴｒｏｃａｄｅ。

利用される処方物にかかわらず、ＭＭＰＩを充填したコラーゲン注射の投与は、以下の様式で進められる。物質の投与前に、患者は、アレルギー反応について試験するために、２回の皮膚試験（２週間隔離して行う）を終えなければならない。これらの試験がネガティブである場合、ＭＭＰＩを充填したコラーゲン注射が、患者に投与され得る。３０９ｃｃ以下の移植片を含む、微細ゲージ（３０または３２ゲージ）の針を有する、予め充填した冷蔵したシリンジを、使用する。患者は、背もたれをわずかに倒した座位に置かれる。局所的なリドカインおよび／またはプリロカインが、麻酔のために使用され得る。この針は、一定角度で皮膚に挿入され、その表面の真皮組織内に前進される。十分量の移植片物質が押出され、軟組織輪郭欠損を修復する。ＭＭＰＩを充填したＺｙｄｅｒｍ（登録商標）の場合、過剰矯正（ｏｖｅｒｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ）（究極的には、より多量の材料の注射が必要とされる）は、有意な割合の注射物質が注射後数時間で分散する場合に必要とされる。ＭＭＲＩを充填したＺｙｐｌａｓｔ（登録商標）は、代表的に、より深い皺を矯正するために使用され、真皮により深く注射される。この物質がより剛性である場合、過剰矯正は必要ではない。

上記のように、引く続く触診注射は、最大矯正を維持するのに必要とされ得る。しかし、メタロプロテイナーゼインヒビターを充填したコラーゲン注射は、その充填されていない対応物より持ちが良く、長期にわたる矯正を与え、かつ反復注射の必要性を減少させる。

注射される物質の総量は、矯正される輪郭欠損部位に依存するが、この注射される物質の総量は、コラーゲンベースの製品について３０ｃｃを超えてはいけない。以下のＭＭＲＩを充填した組成物は、１ｃｃ基準あたりの用量について記載されている。

（ａ．Ｍａｒｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）を充填したコラーゲン真皮注射）
好ましい組成物は、コラーゲン／生理食塩水懸濁液１ｃｃあたり０．００１％〜３０％のＭａｒｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）（すわわち、１μｇ重量〜３０ｍｇ重量のＭａｒｉｍｉｓｔａｔ（登録商標））である。特に好ましい投薬量は、コラーゲン／生理食塩水懸濁液１ｃｃあたり、０．０１〜１．５％のＭａｒｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）（すなわち、１０μｇ〜１．５ｍｇ）である。従って、３０ｃｃでの処置において送達される総投薬量は、４５ｍｇ（十分に見積った許容的な単回一日用量（５０ｍｇ）未満）を超えない。１つの実施形態において、０．００１〜３０％のＭａｒｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）が、ＰＬＧＡミクロスフェアまたは他のポリマーベースのミクロスフェアに充填され、次いでこれらは、コラーゲンに充填され、数日から数ヶ月の範囲の期間にわたってその物質の徐放を生じる。注射可能なコラーゲンの任意の供給源（例えば、ウシ、ヒト、または組換え体（架橋されているかまたは架橋されていない））は、上記のものと組み合わせて所望の最終製品を作製するのに適している。

（ｂ．Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）負荷コラーゲンの注射）
好ましい組成物は、注射可能コラーゲン／生理食塩水懸濁液１ｃｃあたり０．００１〜３０％のＢａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）（すなわち、重量で、１μｇ〜３０ｍｇのＢａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標））である。特に好ましい投薬量は、コラーゲン／生理食塩水懸濁液１ｃｃあたり０．０１〜５％（重量で、１０μｇ〜５ｍｇ）である。従って、３０ｃｃの処置において送達される全投薬量は、１５０ｍｇのＢａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）を超えない（または、３００ｍｇ／ｍ^２の確立された十分に許容された単回用量未満）。一実施形態において、非常に不溶性のＢａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）を、ＰＬＧＡマイクロスフェアまたは他のポリマーベースのマイクロスフェアに負荷し、次いで、これを、コラーゲンに負荷し、数日から数ヶ月にわたる期間にわたって薬剤の持続性放出を生じさせる。注射可能コラーゲン（例えば、ウシ、ヒトまたは組換え体；架橋または非架橋）の任意の供給源が、所望の最終製品を製造するために、上記のものと組み合わされるのに適している。

（ｃ．ドキシサイクリン負荷コラーゲンの経皮注射）
好ましい組成物は、注射可能コラーゲン／生理食塩水懸濁液１ｃｃあたり０．００１〜３０％のドキシサイクリン（重量で、１μｇ〜３０ｍｇのドキシサイクリン）である。特に好ましい投薬量は、コラーゲン／生理食塩水懸濁液１ｃｃあたり０．０１〜３％のドキシサイクリン（重量で、１０μｇ〜３ｍｇのドキシサイクリン）である。従って、３０ｃｃの処置において投与される全投薬量は、９０ｍｇを超えない（または、１００ｍｇの十分に許容された一日あたりの投薬量未満）。一実施形態において、０．００１％〜３０％のドキシサイクリンを、ＰＬＧＡマイクロスフェアまたは他のポリマーベースのマイクロスフェアに負荷し、次いで、これを、コラーゲンに負荷し、数日から数ヶ月にわたる期間にわたって薬剤の持続性放出を生じさせる。注射可能コラーゲン（例えば、ウシ、ヒトまたは組換え体；架橋または非架橋）の任意の供給源が、所望の最終製品を製造するために、上記のものと組み合わされるのに適している。

（ｄ．テトラサイクリン負荷コラーゲンの経皮注射）
好ましい組成物は、注射可能コラーゲン／生理食塩水懸濁液１ｃｃあたり０．００１〜３０％のテトラサイクリン（重量で、１μｇ〜３０ｍｇのテトラサイクリン）である。特に好ましい投薬量は、コラーゲン／生理食塩水懸濁液１ｃｃあたり０．０１〜３０％のテトラサイクリン（重量で、１０μｇ〜３０ｍｇのテトラサイクリン）である。従って、３０ｃｃの処置において投与される全投薬量は、９００ｍｇを超えない（または、１ｇの十分に許容された一日あたりの投薬量未満）。一実施形態において、０．００１％〜３０％のテトラサイクリンを、ＰＬＧＡマイクロスフェアまたは他のポリマーベースのマイクロスフェアに負荷し、次いで、これを、コラーゲンに負荷し、数日から数ヶ月にわたる期間にわたって薬剤の持続性放出を生じさせる。注射可能コラーゲン（例えば、ウシ、ヒトまたは組換え体；架橋または非架橋）の任意の供給源が、所望の最終製品を製造するために、上記のものと組み合わされるのに適している。

（ｅ．ミノサイクリン負荷コラーゲンの経皮注射）
好ましい組成物は、注射可能コラーゲン／生理食塩水懸濁液１ｃｃあたり０．００１〜３０％のミノサイクリン（重量で、１μｇ〜３０ｍｇのミノサイクリン）である。特に好ましい投薬量は、コラーゲン／生理食塩水懸濁液１ｃｃあたり０．０１〜６％のミノサイクリン（重量で、１０μｇ〜６ｍｇのミノサイクリン）である。従って、３０ｃｃの処置において投与される全投薬量は、１８０ｍｇを超えない（または、２００ｍｇの十分に許容された一日あたりの投薬量未満）。一実施形態において、０．００１％〜３０％のミノサイクリンを、ＰＬＧＡマイクロスフェアまたは他のポリマーベースのマイクロスフェアに負荷し、次いで、これを、コラーゲンに負荷し、数日から数ヶ月にわたる期間にわたって薬剤の持続性放出を生じさせる。注射可能コラーゲン（例えば、ウシ、ヒトまたは組換え体；架橋または非架橋）の任意の供給源が、所望の最終製品を製造するために、上記のものと組み合わされるのに適している。

（ｆ．トロカード（ｔｒｏｃａｄｅ）負荷コラーゲンの経皮注射）
好ましい組成物は、注射可能コラーゲン／生理食塩水懸濁液１ｃｃあたり０．００１〜３０％のトロカード（重量で、１μｇ〜３０ｍｇのトロカード）である。特に好ましい投薬量は、コラーゲン／生理食塩水懸濁液１ｃｃあたり０．０１〜５％のトロカード（重量で、１０μｇ〜５ｍｇのトロカード）である。従って、３０ｃｃの処置において投与される全投薬量は、１５０ｍｇを超えない。一実施形態において、０．００１％〜３０％のトロカードを、ＰＬＧＡマイクロスフェアまたは他のポリマーベースのマイクロスフェアに負荷し、次いで、これを、コラーゲンに負荷し、数日から数ヶ月にわたる期間にわたって薬剤の持続性放出を生じさせる。注射可能コラーゲン（例えば、ウシ、ヒトまたは組換え体；架橋または非架橋）の任意の供給源が、所望の最終製品を製造するために、上記のものと組み合わされるのに適している。

（２．尿失禁）
注射可能コラーゲンは、切迫尿失禁の処置においてしばしば使用される。以下に記載される実施形態は、メタロプロテイナーゼインヒビター負荷コラーゲン生成物の組成物、およびこの一般的な医学的状態の処置におけるそれらの使用方法を詳述する。

簡単には、失禁、すなわち、不随意の尿漏れは、生涯のある時点で、女性の２０％および男性の１〜２％が罹患している一般的な医学的状態である。最も一般的な形態の失禁は、ストレス失禁、すなわち、腹腔内圧の増加を生じる活動（例えば、くしゃみ、咳または力み（ｓｔｒａｉｎｉｎｇ））に応答する尿の不慮の漏れである。これは、膀胱内圧（膀胱内の圧力）が、尿道内の圧力を超えた場合に生じ、排尿筋（膀胱筋）の収縮なしで、尿を膀胱から尿道に出す。以下を含むいくつかの状態は、ストレス失禁を生じると考えられる：
（１）膀胱頸部および内尿道括約筋（ｉｎｔｅｒｎａｌ ｕｒｅｔｈｒａｌ ｓｐｉｎｃｔｅｒ）の腹からの下垂。

（２）外傷、手術、出産または悪性腫瘍に起因する内因性尿道括約筋不全。

矯正手段は、主に、外科的または非外科的手段によって、腹腔内の近位尿道および膀胱頸部を支持することを目的とする。第２のアプローチは、尿道圧を増加させそしてストレス失禁を減少するように設計された尿道バルキング剤（コラーゲンを含む）の使用を包含する。

尿道周辺および経尿道コラーゲン注射は、ストレス失禁の対処において非常に首尾良く使用されているが、ほとんどの場合は、コラーゲン移植片の制限された耐久性に起因して、１回より多くの処置を必要とする。ＭＭＰＩ負荷コラーゲン注射を使用することは、移植片の活性を保持し得、そして引き続く尿道周辺および経尿道注射の必要性および頻度を減少させ得る。

いくつかの市販されているコラーゲンベースの製品が、復圧性失禁の管理のために利用可能である。Ｃｏｎｔｉｇｅｎ（登録商標）（ＣＲ Ｂａｒｄ（登録商標）を介して入手可能な、３５ｍｇ／ｍｌでリン酸緩衝化生理食塩水中分散された精製ウシ皮膚グルタルアルデヒド架橋コラーゲン）は、広く用いられる尿道充填剤である。他のコラーゲンベースの注入可能製品（非ウシ供給源、非ヒトまたは非組換え由来のものを含む）がまた、この実施形態において利用され得る。Ｃｏｎｔｉｇｅｎ（登録商標）を用いると、架橋コラーゲンが、約１２週間で分解し始め、１０〜１９ヶ月内に完全に分解する。治療後に失禁の改善を示す患者のパーセンテージが、初期には５８〜１００％の範囲にわたるが、コラーゲン再吸収により、患者の大多数における上述の時間間隔内で、この手順を繰り返す必要が生じる。本発明において、ＭＭＰＩが、徐放形態でコラーゲンベースの注入可能物に添加されて、移植物分解速度を減少させ、コラーゲンのみで見られるよりも高くインビボでの活性を延長する（すなわち、一貫して患者の大多数において１年間よりも長く、そしてそのほかの患者の有意なパーセンテージにおいて２年間を超える）。

（経尿道技術）
利用される処方物に関わらず、ＭＭＰＩを充填したコラーゲン経尿道注射の投与が、以下の様式で進行する。物質の投与の前に、アレルギー反応について試験するために、患者は２つの皮膚試験を完了するべきである（２週間間隔を空けて行なわれる）。これらの試験が陰性である場合、ＭＭＰＩを充填したコラーゲン注射が、患者に投与され得る。２．５ｍｌの移植物質を含む、細いゲージの針を備える冷蔵した単回使用の、予め充填されたシリンジ（安定化カニューレを備える２３ゲージ経尿道注射針）を用いる。患者を、砕石位に配置し、１０ｍｌの２％リドカインを麻酔のために尿道に挿入する。女性において、膀胱頚部は、膀胱鏡検査で可視化される。膀胱鏡の注射部分を介して、針が、４時の位置で、鋭角にて、膀胱頚部に対して１〜１．５ｃｍ遠位にて、膀胱粘膜のちょうど下の面へと挿入する。次いで、針を、膀胱頚部の粘膜のちょうど下にくるまで尿道の長軸と平行に、膀胱鏡を用いて進める。ＭＭＰＩが充鎮されたコラーゲンを、この部位にゆっくりと注入する。次いで、この手順を、８時の位置で繰り返す。メチレンブルーまたは他の無毒の着色剤を、注射の可視化を助けるために移植物に加え得る。

（尿道周囲注射）
ＭＭＰＩを充鎮したコラーゲンの尿道周囲注射をまた、失調の処置のために用い得る。上に記載されたように、物質の投与の前に、アレルギー反応について試験するために、患者は２つの皮膚試験を完了するべきである（２週間間隔を空けて行なわれる）。これらの試験が陰性である場合、ＭＭＰＩを充鎮したコラーゲン注射が、患者に投与され得る。２．５ｍｌの移植物質を含む、細いゲージの針（尿道周囲注射針）を備える、冷蔵した単回使用の、予め充鎮したシリンジを用いる。患者を、砕石位に配置し、１０ｍｌの２％リドカインを麻酔のために尿道に挿入し、膀胱頚部を、膀胱鏡検査で可視化する（男性において、尿道はまた、恥骨上膀胱鏡（ｃｙｓｔｏｏｓｃｏｐｉｃ）アプローチを介して可視化される）。この針を、尿道のすぐ近隣の側面の領域に経膣的にかまたは恥骨上に挿入する。この針が膀胱頚部の近くの適切な位置に達した時に、ＭＭＰＩが充鎮されたコラーゲンを、この位置にゆっくりと注射する。メチレンブルー（膀胱鏡によって上記のように観察される）または他の無毒の着色剤を、注射の可視化を助けるために移植物に加え得る。

可能性のある任意のＭＭＰＩが充鎮されたコラーゲン注射は、失調の経尿道処置または尿道周囲処置のために適切であり得るが、ＴＩＭＰ−１、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）、Ｍａｒｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）、Ｒｏ−１１３０８３０、ＣＧＳ ２７０２３Ａ、ＢＭＳ−２７５２９１、ＣＭＴ−３、Ｓｏｌｉｍａｓｔａｔ、Ｉｌｏｍａｓｔａｔ、ＣＰ−５４４４３９、Ｐｒｉｎｏｍａｓｔａｔ、ＰＮＵ−１４２７６９０、ＳＵ−５４０２、およびＴｒｏｃａｄｅのようなＭＭＰＩが、特に好ましい。以下の組成物が、尿充填剤としての使用に理想的に適切である。

（ａ．Ｍａｒｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）充填コラーゲン尿道周囲／経尿道注射）
好ましい組成物は、１ｃｃ当たり０．００１％〜３０％の Ｍａｒｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）（すなわち、重量で１μｇ〜３０ｍｇのＭａｒｉｍｉｓｔａｔ）のコラーゲン／生理食塩水懸濁液である。特に好ましい投与量は、コラーゲン／生理食塩水懸濁液の１ｍＬ当たり０．０１％〜１５％の Ｍａｒｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）（すなわち、１０μｇ〜１５ｍｇ）である。従って、２．５ｍＬ処置において送達される総投与量は、４５ｍｇを超えない（すなわち、確立された十分許容される単一日用量５０ｍｇより少ない）。１つの実施形態において、０．００１〜３０％のＭａｒｉｍｉｓｔａｔが、ＰＬＧＡミクロスフィアまたは他のポリマーベースのミクロスフィアに充填され、これらのミクロスフィアは、その後数日から数ヶ月にわたる期間の間に物質の徐放を生じるように、コラーゲンに充填される。注射可能コラーゲンの任意の供給源（例えば、ウシ供給源、ヒト供給源、または組換え供給源；架橋したものまたは架橋していないもの）が、所望の最終生成物を作り出すために上記と組み合わされるのに適切である。

（ｂ．Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）が充鎮されたコラーゲン尿道周囲／経尿道注射）
好ましい組成物は、１ｍＬ当たり０．００１〜３０％のＢａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）（すなわち、重量で１μｇ〜３０ｍｇのＢａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標））のコラーゲン／生理食塩水懸濁液である。特に好ましい投与量は、コラーゲン／生理食塩水懸濁液の１ｍＬ当たり０．０１％〜３０％（すなわち、重量で１０μｇ〜１５ｍｇ）である。従って、２．５ｃｃ処置において送達される総投与量は、７５ｍｇのＢａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）を超えない（すなわち、確立された十分許容される単一投与量３０ｍｇより少ない）。１つの実施形態において、０．００１〜３０％のＢａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）が、ＰＬＧＡミクロスフィアまたは他のポリマーベースのミクロスフィアに充填され、これらのミクロスフィアがその後、数日から数ヶ月にわたる期間の間に物質の徐放を生じるように、コラーゲンに充填される。注射可能コラーゲンの任意の供給源（例えば、ウシ供給源、ヒト供給源、または組換え供給源；架橋したものまたは架橋していないもの）が、所望の最終生成物を作り出すために上記と組み合わされるのに適切である。

（ｃ．ドキシサイクリンが充填されたコラーゲン尿道周囲／経尿道注射）
好ましい組成物は、１ｍＬ当たり０．００１〜３０％のドキシサイクリン（重量で１μｇ〜３０ｍｇのドキシサイクリン）のコラーゲン／生理食塩水懸濁液である。特に好ましい投与量は、コラーゲン／生理食塩水懸濁液の１ｍＬ当たり０．０１〜３０％ドキシサイクリン（重量で１０μｇ〜３０ｍｇのドキシサイクリン）である。従って、２．５ｍＬ処置において投与される総投与量は、７５ｍｇを超えない（すなわち、十分許容される日用量１００ｍｇより少ない）。１つの実施形態において、０．００１％〜３０％のドキシサイクリンが、ＰＬＧＡミクロスフィアまたは他のポリマーベースのミクロスフィアに充填され、これらのミクロスフィアがその後、数日から数ヶ月にわたる期間の間に物質の徐放を生じるように、コラーゲンに充填される。注射可能コラーゲンの任意の供給源（例えば、ウシ供給源、ヒト供給源、または組換え供給源；架橋したものまたは架橋していないもの）が、所望の最終生成物を作り出すために上記と組み合わされるのに適切である。

（ｄ．テトラサイクリンロードコラーゲン尿道周囲／経尿道注入）
好ましい組成物は、注入可能なコラーゲン／生理食塩水懸濁液の１ｍＬ当り０．００１〜３０％テトラサイクリン（重量で１μｇ〜３０ｍｇのテトラサイクリン）である。特に好ましい用量は、コラーゲン／生理食塩水懸濁液の１ｍＬあたり０．０１％〜３０％テトラサイクリン（重量で１０μｇ〜３０ｍｇテトラサイクリン）である。従って、２．５ｍＬを取り扱う際に投与される全量は、７５ｍｇ（または１ｇの日常用量に耐えられるウェルより少ない量）を超過しない。一つの実施形態において、０．００１％〜３０％のテトラサイクリンは、数日〜数ヶ月の範囲の期間にわたって薬剤の徐放性を生じるために、コラーゲンにロードされるＰＬＧＡミクロスフェアまたは他のポリマーベースミクロスフェアにロードされる。注入可能なコラーゲンのいくつかの供給供給源（例えば、ウシ、ヒト、または組み換え体；架橋されたまたは非架橋された）は、所望の最終生成物を生成するため、上記と組み合されるために適切である。

（ｅ．ミノサイクリンロード尿道周囲／経尿道コラーゲン注入）
好ましい組成物は、注入可能なコラーゲン／生理食塩水懸濁液の１ｃｃ当り０．００１〜３０％のミノサイクリン（重量で１μｇ〜３０ｍｇのテトラサイクリン）である。特に好ましい用量は、コラーゲン／生理食塩水懸濁液の１ｃｃ当り０．０１〜６％のミノサイクリン（重量で１０μｇ〜６ｍｇのミノサイクリン）である。従って、３０ｃｃを取り扱う際に投与される全量は、１８０ｍｇ（または２００ｍｇの日常用量に耐えられるウェルより少ない量）を超過しない。一つの実施形態において、０．００１％〜３０％のミノサイクリンは、数日〜数ヶ月の範囲の期間にわたって薬剤の徐放性を生じるために、コラーゲンにロードされるＰＬＧＡミクロスフェアまたは他のポリマーベースミクロスフェアにロードされる。注入可能なコラーゲンのいくつかの供給源（例えば、ウシ、ヒト、または組み換え体；架橋されたまたは非架橋された）は、所望の最終生成物を生成するため、上記と組み合されるために適切である。

（ｆ．トロケードロードコラーゲン尿道周囲／経尿道注入）
好ましい組成物は、注入可能なコラーゲン／生理食塩水懸濁液の１ｍＬ当り０．００１％〜３０％のトロケード（重量で１μｇ〜３０ｍｇのトロケード）である。特に好ましい用量は、コラーゲン／生理食塩水懸濁液の１ｍＬあたり０．０１％〜５％のトロケード（重量で１０μｇ〜５ｍｇのトロケード）である。従って、２．５ｍＬを取り扱う際に投与される全量は、７５ｍｇを超過しない。一つの実施形態において、０．００１％〜３０％のトロケードは、数日〜数ヶ月の範囲の期間にわたって薬剤の徐放性を生じるために、コラーゲンにロードされるＰＬＧＡミクロスフェアまたは他のポリマーベースミクロスフェアにロードされる。注入可能なコラーゲンのいくつかの供給源（例えば、ウシ、ヒト、または組み換え体；架橋されたまたは非架橋された）は、所望の最終生成物を生成するため、上記と組み合されるために適切である。

（３．外科的密封材）
コラーゲンは、外科的密封材；特に、血管アクセスおよび外科手術の間の止血について、大腿の穿刺後の出血を止めるための血管密封材として広く使用されている。

大腿動脈のカニューレ挿入は、多くの共通の医療処置（例えば、冠状血管造影、大脳血管造影、冠状血管形成、冠状ステント術、大脳血管動脈瘤修復、ステント移植片を有する腹動脈瘤およびいくつかの他の処置）の一部分として血管系へのアクセスを得る際の最初の工程である。多くのこれらの指示のため、比較的大きなデバイスは、動脈上の「カットダウン」処置を必要とする大腿動脈に導入されなければならない。いったん、介入が完全になされ、そしてカテーテル鞘が、引っ込まれると、大腿穿刺部位から出血するのを病的圧迫することは、しばしば困難である（特に、多くの患者は、抗凝固性治療を施されているので）。コラーゲンベース血管密封材は、創傷「密封」し、および動脈切開の開始治癒を開始する穿刺部位に関する適用のために開発された。これは、患者がより早く歩き回れるようになることを可能にし得、そして深刻な合併症（例えば、血腫形成、または重症の場合、出血および重大な血液減少）を妨げ得る。止血コラーゲン密封材はまた、結紮による出血のコントロールが、有効でないまたは可能でない場合、外膜（外部の）を密封するため、または止血の調節として、外科手術の間、血管、器官、骨および組織の表面をカットするために使用される。これらの産物は、心臓血管の処置、一般的な処置、肝の処置および整形外科の処置において使用される。

いくつかのコラーゲンベース密封材は、市販されており、Ｖａｓｏｓｅａｌ^ＴＭ（Ｄａｔａｓｃｏｐｅ（登録商標）によって製造される）およびＣｏＳｔａｓｉｓ^ＴＭ（Ｃｏｈｅｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（登録商標）によって製造される）を含む。ＭＭＰＩロードコラーゲンベース密封材を製造することは、コラーゲン移植物の活性を長くし、そして完全な治癒工程が、移植物の吸収より先に生じることを可能にする。このことは、外科的止血のコンロトールにおいて特定の用途を有し得、手術後に血管修復部位に容易にアクセスすることは、不可能であり得る。

Ｖａｓｏｓｅａｌ^ＴＭは、大腿動脈の穿刺修復についてのコラーゲン「栓」キットの例である。簡単にいうと、血管処置鞘を除去する前に、発育不全（ａｔｅｒｉｏｔｏｍｙ）配置器は、導入器を使用して鞘に挿入される。動脈が圧迫される場合、処置的鞘および導入器は、いったん発育不全配置器が、正しい位置に動かされると、除去される。組織拡張器は、配置器上を前進され、そして鞘は、拡張器上を前進され、その結果、鞘は、発育不全部位の外部表面上に配置される；次いで、配置器および拡張器は、除去される。コラーゲンカートリッジ（精製されたウシのコラーゲンの８０ｍｇ〜１００ｍｇの栓を含む）は、鞘に挿入され、そしてコラーゲン栓は、動脈中の穿刺創傷上に注入される（２回の注入が、必要とされ得る）。ＭＭＰＩロード大腿動脈密封材は、正確に同じ様式において配備されるが、完全な治癒が生じることを可能にするようより長く決まった位置に存在し、従って、数日後に再出血する危険を減少する。ＭＭＰＩロードコラーゲン栓処方物の例は、以下に提供される。

ＣｏＳｔａｓｉｓ^ＴＭは、ＭＭＰＩの添加から利益を得るコラーゲンベースの止血外科的密封材の例である噴霧可能な液体である（例えば、米国特許第５，２９０，５５２号、同第５，６１４，５８７号、同第５，７４４，５４５号、同第５，７８６，４２１号、同第５，９３６，０３５号、同第６，０９６，３０９号、および同第６，２８０，７２７号を参照のこと）。系を配備するため、患者自身の血漿が、収集され、そして結合デバイスに接着されるシリンジに止められる。コラーゲン懸濁液（４０ｍＭ ＣａＣｌ_２緩衝液中の２０ｍｇ／ｍＬ ウシコラーゲンおよび少なくとも３００Ｕ／ｍｌ ウシトロンビン）シリンジは、結合体中の他の門脈に接着される。結合デバイスは、コラーゲン／トロンビンシリンジの内容物を患者血漿シリンジの内容物と混ぜる。ウシトロンビンは、自己フィブリノーゲンをフィブリンに転換し、コラーゲンの存在下、出血部位に粘着するコラーゲン／フィブリンゲルマトリックスを形成する。次いで、混合物は、出血部位の全体にわたってシリンジによって噴霧される。ＭＭＰＩは、以下に記載されるように、コラーゲン／トロンビン懸濁液の成分として加えられる。ＭＭＰＩロードコラーゲン密封材は、外科的処置において多大な利用性があり、そして長時間の止血は、組織治癒が生じるまで必要とされ得る。

（ａ．Ｍａｒｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）負荷型コラーゲン外科的密封材）
好ましい組成は、コラーゲン／トロンビン懸濁液（４０ｍＭのＣａＣｌ_２緩衝液中における、２０ｍｇ／ｍｌのウシコラーゲンおよび少なくとも３００Ｕ／ｍｌのウシトロンビン）の１ｍｌ当たり０．００１％〜１０％（すなわち、１μｇ重量％〜３０ｍｇ重量％）のＭａｒｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）である。特に好ましい投与量は、コラーゲン／トロンビン懸濁液１ｍｌ当たり０．０１％〜１０％（すなわち、１０μｇ〜１０ｍｇ）のＭａｒｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）である。従って、５．０ｍｌ処置で送達される総投与量は、５０ｍｇを超えない（すなわち、確立された、十分許容され得る１日の単一量の５０ｍｇに等しい）。１つの実施形態では、数日〜数ヶ月の期間に亘って、０．００１％〜１０％のＭａｒｉｍｉｓｔａｔの持続的放出を生じるために、そのＭａｒｉｍｉｓｔａｔが、ＰＬＧＡミクロスフィアまたは他のポリマーベースのミクロスフィアにロードされ、それらは、順に、コラーゲン／トロンビン懸濁液へとロードされる。任意の注入可能な（例えば、ウシ、ヒト、または組換えであって、架橋されているかまたは架橋されていない）コラーゲンの供給源は、上述のものと組み合わせて所望の最終産物を生成することに適している。

（ｂ．Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）負荷型コラーゲン外科的密封材）
好ましい組成は、注入可能なコラーゲン／トロンビン懸濁液（４０ｍＭのＣａＣｌ_２緩衝液中における、２０ｍｇ／ｍｌのウシコラーゲンおよび少なくとも３００Ｕ／ｍｌのウシトロンビン）の１ｍｌ当たり０．００１％〜３０％（すなわち、１μｇ重量％〜３０ｍｇ重量％）のＢａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）である。特に好ましい投与量は、コラーゲン／トロンビン懸濁液１ｍｌ当たり０．０１％〜３０％（すなわち、１０μｇ〜３０ｍｇ）のＢａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）である。従って、５．０ｍｌ処置で送達される総投与量は、１５０ｍｇを超えない（すなわち、確立された、十分許容され得る１日の単一量３００ｍｇ／ｍ^２）。１つの実施形態では、数日〜数ヶ月の期間に亘って、０．００１％〜３０％のＢａｔｉｍｉｓｔａｔの持続的放出を生じるために、そのＢａｔｉｍｉｓｔａｔが、ＰＬＧＡミクロスフィアまたは他のポリマーベースのミクロスフィアにロードされ、それらは、順に、コラーゲン／トロンビン懸濁液へとロードされる。任意の注入可能な（例えば、ウシ、ヒト、または組換えであって、架橋されているかまたは架橋されていない）コラーゲンの供給源は、上述のものと組み合わせて所望の最終産物を生成することに適している。

（ｃ．ドキシサイクリン 負荷型コラーゲン外科的密封材）
好ましい組成は、注入可能なコラーゲン／トロンビン懸濁液（４０ｍＭのＣａＣｌ_２緩衝液中における、２０ｍｇ／ｍｌのウシコラーゲンおよび少なくとも３００Ｕ／ｍｌのウシトロンビン）の１ｍｌ当たり０．００１％〜２０％（すなわち、１μｇ重量％〜３０ｍｇ重量％）のドキシサイクリンである。従って、５．０ｍｌ処置で送達される総投与量は、１００ｍｇを超えない（すなわち、十分許容され得る１日の単一量の１００ｍｇに等しい）。１つの実施形態では、数日〜数ヶ月の期間に亘って、０．００１％〜２０％のドキシサイクリンの持続的放出を生じるために、そのドキシサイクリンが、ＰＬＧＡミクロスフィアまたは他のポリマーベースのミクロスフィアにロードされ、それらは、順に、コラーゲン／トロンビン懸濁液へとロードされる。任意の注入可能な（例えば、ウシ、ヒト、または組換えであって、架橋されているかまたは架橋されていない）コラーゲンの供給源は、上述のものと組み合わせて所望の最終産物を生成することに適している。

（ｄ．テトラサイクリン 負荷型コラーゲン外科的密封材）
好ましい組成は、コラーゲン／トロンビン懸濁液（４０ｍＭのＣａＣｌ_２緩衝液中における、２０ｍｇ／ｍｌのウシコラーゲンおよび少なくとも３００Ｕ／ｍｌのウシトロンビン）の１ｍｌ当たり０．００１％〜３０％（すなわち、１μｇ重量％〜３０ｍｇ重量％）のテトラサイクリンである。特に好ましい投与量は、コラーゲン／トロンビン懸濁液１ｍｌ当たり０．０１％〜３０％（すなわち、１０μｇ〜１０ｍｇ）のテトラサイクリンである。従って、５．０ｍｌ処置で送達される総投与量は、１５０ｍｇを超えない（すなわち、十分許容され得る１日量の１ｇ以下）。１つの実施形態では、数日〜数ヶ月の期間に亘って、０．００１％〜３０％のテトラサイクリンの持続的放出を生じるために、そのテトラサイクリンが、ＰＬＧＡミクロスフィアまたは他のポリマーベースのミクロスフィアにロードされ、それらは、順に、コラーゲン／トロンビン懸濁液へとロードされる。任意の注入可能な（例えば、ウシ、ヒト、または組換えであって、架橋されているかまたは架橋されていない）コラーゲンの供給源は、上述のものと組み合わせて所望の最終産物を生成することに適している。

（ｅ．ミノサイクリン 負荷型コラーゲン外科的密封材）
好ましい組成は、コラーゲン／トロンビン懸濁液（４０ｍＭのＣａＣｌ_２緩衝液中における、２０ｍｇ／ｍｌのウシコラーゲンおよび少なくとも３００Ｕ／ｍｌのウシトロンビン）の１ｍｌ当たり０．００１％〜３０％（すなわち、１μｇ重量％〜３０ｍｇ重量％）のミノサイクリンである。特に好ましい投与量は、コラーゲン／トロンビン懸濁液１ｍｌ当たり０．０１％〜２０％（すなわち、１０μｇ〜２０ｍｇ）のミノサイクリンである。従って、５．０ｍｌ処置で送達される総投与量は、１００ｍｇを超えない（すなわち、十分許容され得る１日量の２００ｍｇ以下）。１つの実施形態では、数日〜数ヶ月の期間に亘って、０．００１％〜３０％のミノサイクリンの持続的放出を生じるために、そのミノサイクリンが、ＰＬＧＡミクロスフィアまたは他のポリマーベースのミクロスフィアにロードされ、それらは、順に、コラーゲン／トロンビン懸濁液へとロードされる。任意の注入可能な（例えば、ウシ、ヒト、または組換えであって、架橋されているかまたは架橋されていない）コラーゲンの供給源は、上述のものと組み合わせて所望の最終産物を生成することに適している。

（ｆ．Ｔｒｏｃａｄｅ 負荷型コラーゲン外科的密封材）
好ましい組成は、コラーゲン／トロンビン懸濁液（４０ｍＭのＣａＣｌ_２緩衝液中における、２０ｍｇ／ｍｌのウシコラーゲンおよび少なくとも３００Ｕ／ｍｌのウシトロンビン）の１ｍｌ当たり０．００１％〜３０％（すなわち、１μｇ重量％〜３０ｍｇ重量％）のＴｒｏｃａｄｅである。特に好ましい投与量は、コラーゲン／トロンビン懸濁液１ｍｌ当たり０．００１％〜３０％（すなわち、１μｇ〜３０ｍｇ）のＴｒｏｃａｄｅである。従って、５．０ｍｌ処置で送達される総投与量は、５０ｍｇを超えない。１つの実施形態では、数日〜数ヶ月の期間に亘って、０．００１％〜３０％のＴｒｏｃａｄｅの持続的放出を生じるために、そのＴｒｏｃａｄｅが、ＰＬＧＡミクロスフィアまたは他のポリマーベースのミクロスフィアにロードされ、それらは、順に、コラーゲン／トロンビン懸濁液へとロードされる。任意の注入可能な（例えば、ウシ、ヒト、または組換えであって、架橋されているかまたは架橋されていない）コラーゲンの供給源は、上述のものと組み合わせて所望の最終産物を生成することに適している。

（ｇ．Ｍａｒｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）充填コラーゲン大腿穿刺封入剤）
好ましい組成は、コラーゲンの用量（８０〜１００ｍｇ コラーゲン栓）あたり、０．００１％〜１０％ Ｍａｒｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）（すなわち、１重量μｇ〜３０重量ｍｇのＭａｒｉｍｉｓｔａｔ）である。特に好ましい投薬量は、コラーゲン栓あたり０．０１〜１０％ Ｍａｒｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）（すなわち、１０μｇ〜１０ｍｇ）である。１つの実施形態において、数日から数ヶ月の範囲の期間にわたる物質の持続放出を生じるために、ＰＬＧＡマイクロスフェアまたは他のポリマーベースのマイクロスフェア内に０．００１％〜１０％ Ｍａｒｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）を充填し、次いで、コラーゲンに充填する。注射用コラーゲン（例えば、ウシ、ヒトまたは組換え型；架橋または非架橋）の任意の供給源は、上記のものと結合させて所望の最終生成物を得るのに適する。

（ｈ．Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）充填コラーゲン大腿穿刺封入剤）
好ましい組成は、コラーゲンの用量（８０〜１００ｍｇ コラーゲン栓）あたり、０．００１％〜３０％ Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）（すなわち、１重量μｇ〜３０重量ｍｇのＢａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標））である。特に好ましい投薬量は、コラーゲン栓あたり０．０１〜３０％（１０重量μｇ〜３０重量ｍｇ）である。１つの実施形態において、数日から数ヶ月の範囲の期間にわたる薬剤の持続放出を生じるために、ＰＬＧＡマイクロスフェアまたは他のポリマーベースのマイクロスフェア内に０．００１％〜３０％ Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ（登録商標）を充填し、次いで、コラーゲンに充填する。注射用コラーゲン（例えば、ウシ、ヒトまたは組換え型；架橋または非架橋）の任意の供給源は、上記のものと結合させて所望の最終生成物を得るのに適する。

（ｉ．ドキシサイクリン充填コラーゲン大腿穿刺封入剤）
好ましい組成は、コラーゲンの用量（８０〜１００ｍｇ コラーゲン栓）あたり、０．００１％〜２０％ ドキシサイクリン（１重量μｇ〜３０重量ｍｇのドキシサイクリン）である。特に好ましい投薬量は、コラーゲン栓あたり０．０１〜２０％ ドキシサイクリン（１０重量μｇ〜２０重量ｍｇのドキシサイクリン）である。１つの実施形態において、数日から数ヶ月の範囲の期間にわたる薬剤の持続放出を生じるために、ＰＬＧＡマイクロスフェアまたは他のポリマーベースのマイクロスフェア内に０．００１％〜２０％ ドキシサイクリンを充填し、次いで、コラーゲンに充填する。注射用コラーゲン（例えば、ウシ、ヒトまたは組換え型；架橋または非架橋）の任意の供給源は、上記のものと結合させて所望の最終生成物を得るのに適する。

（ｊ．テトラサイクリン充填コラーゲン大腿穿刺封入剤）
好ましい組成は、コラーゲンの用量（８０〜１００ｍｇ コラーゲン栓）あたり、０．００１％〜３０％ テトラサイクリン（１重量μｇ〜３０重量ｍｇのテトラサイクリン）である。特に好ましい投薬量は、コラーゲン栓あたり０．０１〜３０％ テトラサイクリン（１０重量μｇ〜３０重量ｍｇのテトラサイクリン）である。１つの実施形態において、数日から数ヶ月の範囲の期間にわたる薬剤の持続放出を生じるために、ＰＬＧＡマイクロスフェアまたは他のポリマーベースのマイクロスフェア内に０．００１％〜３０％ テトラサイクリンを充填し、次いで、コラーゲンに充填する。注射用コラーゲン（例えば、ウシ、ヒトまたは組換え型；架橋または非架橋）の任意の供給源は、上記のものと結合させて所望の最終生成物を得るのに適する。

（ｋ．ミノサイクリン充填コラーゲン大腿穿刺封入剤）
好ましい組成は、コラーゲンの用量（８０〜１００ｍｇ コラーゲン栓）あたり、０．００１％〜３０％ ミノサイクリン（すなわち、１重量μｇ〜３０重量ｍｇのテトラサイクリン）である。特に好ましい投薬量は、コラーゲン栓あたり０．０１〜２０％ ミノサイクリン（すなわち、１０重量μｇ〜２０重量ｍｇのミノサイクリン）である。１つの実施形態において、数日から数ヶ月の範囲の期間にわたる薬剤の持続放出を生じるために、ＰＬＧＡマイクロスフェアまたは他のポリマーベースのマイクロスフェア内に０．００１％〜３０％ ミノサイクリンを充填し、次いで、コラーゲンに充填する。注射用コラーゲン（例えば、ウシ、ヒトまたは組換え型；架橋または非架橋）の任意の供給源は、上記のものと結合させて所望の最終生成物を得るのに適する。

（ｌ．トロケード充填コラーゲン大腿穿刺封入剤）
好ましい組成は、コラーゲンの用量（８０〜１００ｍｇ コラーゲン栓）あたり、０．００１％〜３０％ トロケード（すなわち、１重量μｇ〜３０重量ｍｇのトロケード）である。特に好ましい投薬量は、コラーゲン栓あたり０．０１〜１０％ トロケード（すなわち、１０重量μｇ〜１０重量ｍｇのトロケード）である。１つの実施形態において、数日から数ヶ月の範囲の期間にわたる薬剤の持続放出を生じるために、ＰＬＧＡマイクロスフェアまたは他のポリマーベースのマイクロスフェア内に０．００１％〜３０％ トロケードを充填し、次いで、コラーゲンに充填する。注射用コラーゲン（例えば、ウシ、ヒトまたは組換え型；架橋または非架橋）の任意の供給源は、上記のものと結合させて所望の最終生成物を得るのに適する。

前述のＭＭＰＩのいずれかまたはその誘導体およびアナログが、本発明の精神および範囲を逸脱することなく、上記の組成物のバリエーションを作成するために利用され得ることは、当業者に対し、容易に明白であるべきである。

（実施例１）
（コラーゲンの調製）
（コラーゲン供給源）
新たに屠殺したウサギから皮膚を剥ぐ。剥いだ皮膚を剃毛し、鋭く切り裂くことにより脂肪を除き、２ｃｍ^２の正方形に切る。この正方形の皮膚を室温で２４時間凍結乾燥し、次いで固体ＣＯ_２の補助により、製粉機内で挽き、粉末を生成する。

（可溶化）
粉末にした皮膚の懸濁液を、粉末にした材料を０．５Ｍ酢酸溶液に添加することにより、皮膚濃度が皮膚乾燥重量５ｇ／ｌになるよう、調製する。懸濁液を１０℃に冷却する。新たに調製したペプシン溶液（１０ｍｌの０．０１Ｎ ＨＣｌ中に０．５ｇ）を、皮膚懸濁液に添加し、そしてこの混合物を５日間、１０℃で、時折攪拌しながらインキュベートした。

（ペプシン除去）
酵素処理後、混合物中の残存ペプシンを５ｍｌのＴｒｉｓベースの添加および４℃で、３Ｎ ＮａＯＨを用いて、ｐＨを７．０に調節することにより変成した。３０ｇ ＮａＣｌを混合物に攪拌しながら入れ、溶液中にコラーゲンを維持し続ける。４時間後、この混合物を３０，０００ｇで３０分間遠心分離し、沈殿したペプシンを除去する。

（精製）
酵素的に処理したコラーゲンを、さらなる１４０ｇのＮａＣｌを添加することにより、上清から沈殿する。溶液を攪拌し、４時間４℃で静置する。沈殿したコラーゲンを、３０，０００ｇで３０分間遠心分離する。生じるコラーゲンペレットを、２００ｍｌの脱イオン水中に再懸濁する。０．５Ｎの酢酸を添加し、最終容量を１リットルにする。コラーゲンを、５０ｇのＮａＣｌの添加により、この溶液から沈殿し、この溶液を５時間４℃で静置し、そして３０，０００ｇで３０分間遠心分離する。

（滅菌）
コラーゲンペレットを、２００ｍｌの蒸留水に再懸濁し、滅菌透析管に移し、そして５０容量の１Ｎ酢酸に対し、７２時間、透析する。次いで、このコラーゲンを、この期間の間に溶液を３回取り替えながら、５０容積の０．００１Ｎ酢酸に対し、２４時間透析した。次いで、この透析した溶液を、透析管を層流細菌障壁中の滅菌吸収タオル上に移すことにより、濃度が１２〜１５ｍｇコラーゲン／ｍｌ溶液に達するまで、濃縮する。次いで、濃縮した溶液を、５０容量の０．００１Ｎ酢酸に対し、２４時間透析する。次いで、このコラーゲン溶液を、滅菌バイアル中、４℃で保存する。

（重合プロモーターの濃縮液への添加）
使用の直前に、緩衝化塩溶液（ＮａＣｌ ２．５ｍＭ／ｌ，ＮａＨＰＯ_４ ０．１ｍＭ／ｌ，ｐＨ７．４）を、４℃で、コラーゲン溶液に、１０：１の容量：容量の比（コラーゲン：緩衝液）で添加し、そして緩衝化した濃縮液を、冷却した（４℃）シリンジに移す。特別な用途（例えば、美容組織増強）のため、緩衝化塩溶液はまた、０．３〜１％（ｗ／ｖ）の局所麻酔薬（例えば、リドカイン）を含有し得る。

（実施例２）
（Ｗ／Ｏ／Ｗ法を用いた、ＴＩＭＰ−１を負荷した微小球の調製）
具体的には、１００ｍｇの５０／５０ ＰＬＧＡコポリマー（ＩＶ＝０．１５）を１２ｍＬのジクロロメタンに添加する。これに、８００μＬのリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）溶液またはＰＢＳ中のＴＩＭＰ−１（代表的な濃度は１〜１０ｍｇ／ｍＬ）を添加する。次いでこの混合物を、ホモジナイズする（６，０００ｒｐｍで２０秒）。一度形成したこの混合物を、１００ｍＬの１．０％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）水溶液に分散し、そしてすぐにホモジナイズし（８，０００ｒｐｍで４０秒）、水中油中水二重エマルジョンを形成する。多分散微粒子（大部分が、１０ミクロン未満のサイズを有する）を、これら条件下で形成する。次いで、溶媒を、エバポレーションによりゆっくり除去し、そしてこの微小球を遠心分離により回収する。この粒子を脱イオン化水で洗浄し（５回）、次いでドライアイス／アセトン浴で凍結し、そして一晩凍結乾燥し、微小球の白色自由流動粉末を得る。

より長い分解プロフィールを有する微小球を、前記の方法を用いて８５／１５ ＰＬＧＡ（ＩＶ＝０．６８）を用いて調製する。

上記の方法を使用してまた、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３およびＴＩＭＰ−４を含有する微小球を調製する。

（実施例３）
（Ｗ／Ｏ／Ｗ法を用いた、テトラサイクリンを負荷した微小球の調製）
テトラサイクリンを負荷した微小球を、テトラサイクリン塩酸塩を使用する以外は、上記の実施例に記載した方法と同じ方法で、調製する。

（実施例４）
（Ｗ／Ｏ／Ｗ法を用いた、ドキシサイクリンを負荷した微小球の調製）
ドキシサイクリンを負荷した微小球を、ドキシサイクリン塩酸塩を使用する以外は、上記の実施例に記載した方法と同じ方法で、調製した。

（実施例５）
（Ｗ／Ｏ／Ｗ法を用いた、ミノサイクリンを負荷した微小球の調製）
ミノサイクリンを負荷した微小球を、ミノサイクリン塩酸塩を使用する以外は、上記の実施例に記載した方法と同じ方法で、調製した。

（実施例６）
（水中油法を用いた、Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔを負荷した微小球の調製）
（ＰＶＡ溶液調製）
１０００ｍｌビーカー中に、１０００ｍｌの蒸留水および１００ｇのＰＶＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ １３−２３Ｋ、９８％加水分解された）を添加する。２インチの攪拌子をビーカー中に置く。懸濁液を、攪拌しながら７５〜８０℃まで加熱する。一度ＰＶＡが完全に溶解したら（透明な溶液を形成する）、ＰＶＡ溶液（ｗ／ｖ）を室温に冷却し、そしてシリンジインラインフィルターを用いてろ過する。

（Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔを用いたＰＬＧＡ溶液調製）
１００ｍｇのＢａｔｉｍｉｓｔａｔおよび９００ｍｇのＰＬＧＡ（５０／５０、ＩＶ＝０．１５）の重さを計り、そして２０ｍｌシンチレーターバイアルに移す。１０ｍＬのＨＰＬＣグレードジクロロメタン（ＤＣＭ）を、バイアルに添加し、ＰＬＧＡおよびＢａｔｉｍｉｓｔａｔを溶解する。ポリマーとＢａｔｉｍｉｓｔａｔが溶解するまで、サンプルを回転式振盪機に置いた（設定４）。

（２５μｍ未満の直径を有する微小球の調製）
１００ｍｌの１０％ＰＶＡ溶液を、４００ｍｌビーカーに移す。ビーカーを、両面接着テープを用いてスタンドに固定する。３刃のかき混ぜ棒の刃をビーカーに設置し、ビーカー底より約０．５ｃｍ上の高さに調節する。攪拌モーター（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製のＤｙｎａ−Ｍｉｘ）のスイッチを、最初は２．５に入れる。攪拌の間、１０ｍｌのＰＬＧＡ／Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ溶液をＰＶＡ溶液に注ぐ。攪拌速度を５の設定に徐々に増やす。攪拌を、２．５〜３．０時間続ける。得られた微小球を、任意の大きな物質を除去するために、２つの金属ふるい（５３μｍ（上）および２５μｍ（下））を通して１００ｍｌのビーカーにフィルター処理した。微小球を、フィルター処理の間、蒸留水で洗浄する。ろ液に回収された微小球を、遠心分離し（１０００ｒｐｍ、１０分）、微小球を沈殿させる。上清を、パスツールピペットを用いて除去し、そしてペレットを１００ｍｌの蒸留水で再懸濁する。このプロセスを、さらに２回繰り返す。

洗浄した微小球を、ガラスの容器に移す。移動は、少量の蒸留水（２０〜３０ｍｌ）でビーカーをリンスすることにより、完了する。容器をパラフィルムで密封し、そして−２０℃のフリーザーに一晩置く。次いで、凍結した微小球溶液を凍結乾燥機を用いて約３日間凍結乾燥する。乾燥した微小球を、２０ｍｌのシンチレーションバイアルに移し、そして−２０℃に保存する。次いで、少なくとも２．５Ｍｒａｄのコバルト−６０（Ｃｏ−６０）ｘ線を用いる放射線照射によって、微小球を一定期間、滅菌する。

（実施例７：水中油法を使用するＭａｒｍｉｓｔａｔ充填ドミクロスフェアの調製）
Ｍａｒｍｉｓｔａｔ充填ミクロスフェアを、ＭａｒｍｉｓｔａｔをＢａｔｉｍｉｓｔａｔの代わりに使用することを除いて、上記の実施例に記載される様式と類似の様式で調製する。

（実施例８：水中油法を使用するＴｒｏｃａｄｅ充填ミクロスフェアの調製）
Ｔｒｏｃａｄｅ充填ミクロスフェアを、ＴｒｏｃａｄｅをＢａｔｉｍｉｓｔａｔの代わりに使用することを除いて、上記の実施例に記載される様式と類似の様式で調製する。

（実施例９：ミセル状Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔを含むコラーゲン溶液の製造）
（ポリマーの調製）
ポリマーを、ＤＬ−ラクチドおよびメトキシポリ（エチレングリコール）［ＭｅＰＥＧ ２０００］を使用して、０．５％ ｗ／ｗ第一スズオクトアートの存在下で、バルク開環重合によって合成する。

簡単にいうと、反応ガラス製品を洗浄し、そして洗浄用滅菌水ＵＳＰでリンスし、３７℃にて乾燥し、次いで２５０℃で少なくとも１時間、発熱物質を除去（ｄｅｐｙｒｏｇｅｎａｔｉｏｎ）する。ＭｅＰＥＧ ２０００およびＤＬ−ラクチドを秤量し（それぞれ２４０ｇおよび１６０ｇ）、そしてステンレス鋼漏斗を使用して丸底フラスコに移す。２インチのＴｅｆｌｏｎ（登録商標）コートされた磁性棒を、フラスコに添加する。ガラスストッパーをフラスコを密閉するために使用し、次いで予め温めた油浴中に、フラスコを首までつける。油浴を、温度制御ホットプレートを使用して１４０℃に維持する。ＭｅＰＥＧおよびＤＬ−ラクチドが溶解し、そして１４０℃に達した後、２ｍＬの９５％第一スズオクトアート（触媒）をフラスコに添加する。急速な混合を保証するような添加のすぐ後に、このフラスコを激しく撹拌し、次いで油浴に戻す。この反応を、加熱しそして撹拌しながら６時間進行させる。次いで、この液体ポリマーをステンレス鋼トレイに注ぎ、覆いをし、そして換気フード中で、一晩（約１６時間）静置する。このポリマーは、トレイ中で固化する。トレイの上部をＰａｒａｆｉｌｍ（登録商標）を使用してシールする。ポリマーを含むシールされたトレイを、フリーザー中に、−２０℃±５℃にて０．５時間配置する。次いで、ポリマーをフリーザーから取り出し、そしてガラス製保存ビンに移して２〜８℃で保存する。

（ミセル状Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ（Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ／ポリマーマトリクス）の調製）
反応ガラス製品を洗浄し、そして洗浄用滅菌水ＵＳＰでリンスし、３７℃にて乾燥し、次いで２５０℃で少なくとも１時間、発熱物質を除去する。まず、リン酸緩衝液、０．０８Ｍ、ｐＨ７．６を調製する。緩衝液を、バイアル１つあたり１ｍＬの容量に分配する。このバイアルを９０℃で２時間加熱し、緩衝液を乾燥させる。次いで、温度を１６０℃まで上昇させ、そしてバイアルを、さらに３時間乾燥させる。

ポリマーを、攪拌および加熱しながら１０％ｗ／ｖの濃度でＴＨＦ中に溶解する。次いで、このポリマー溶液を、３０００ｒｐｍで３０分間遠心分離する。その上清を注ぎ出し、廃棄する。さらなるＴＨＦを、その沈殿物に加え、そして３０００ｒｐｍで３０分間遠心分離する（２回）。２回目の上清を１回目の上清と共にプールする。Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔを秤量し、次いで、上清プールに加える。この溶液を、ＴＨＦで最終的な所望の容量にし、１．１％のＢａｔｉｍｉｓｔａｔを含有する９．９％ポリマー溶液を生成する。

最終生成物バイアルのディベロップメントバッチを製造するため、ミセル状Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔを、バイアル１つあたり１ｍＬの容量の乾燥リン酸緩衝液を含むバイアル中に分配する。このバイアルを５０℃の真空オーブンに入れる。真空を８０ｋＰａにし、そしてこのバイアルをオーブンで一晩（１５〜２４時間）維持する。このバイアルを、テフロン（登録商標）表面グレイブチルストッパーで栓をし、そしてアルミニウムシールでシールする。Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ／ポリマーマトリクスを、２．５Ｍｒａｄ γ線照射を用いて滅菌する。各バイアルは、約１１ｍｇのＢａｔｉｍｉｓｔａｔ、９９ｍｇのポリマー、および１１ｍｇのリン酸塩を含有する。このバイアルを、構成まで２〜８℃で保存する。

（ミセル状Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ／コラーゲンゲルの調製）
滅菌した生物安全キャビネットにおいて、２ミリリットルの滅菌生理食塩水を、（上記で調製した）約１１ｍｇのＢａｔｉｍｉｓｔａｔ、９９ｍｇのポリマー、および１１ｍｇのリン酸塩を含有するバイアルに添加する。バイアルの内容物を、定期的にボルテックスしながら３７℃の水槽中に３０分間バイアルを置くことにより、２ｍＬの滅菌生理食塩水に溶解する。滅菌した１ｍＬシリンジを用いて、ミセル状Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ溶液の１ｍＬアリコートをバイアルから取りだし、そして２９ｍＬのコラーゲンゲルに注入した。このサンプルを混合して、コラーゲンゲル中に均一なミセル状Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔの溶液を生成する。次いで、このサンプルを、インビボ実験において使用するために、１ｍＬシリンジに充填する。

（実施例１０：２成分ミセルキットの調製）
（凍結乾燥ミセル状Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔの調製）
水性コラーゲン含有媒体との構成の際にミセルを形成し得る固体組成物を、以下のようにして調製する。

簡単にいうと、４１．２９ｇのＭｅＰＥＧ（ＭＷ＝２，０００ｇ／ｍｏｌ）を、ステンレス鋼ビーカー中で、４１２．８４ｇの６０：４０ ＭｅＰＥＧ：ポリ（ＤＬ−ラクチド）ジブロックコポリマー（上記で提供した実施例を参照のこと）と合わせて、鉱油浴中で７５℃に加熱し、そしてオーバーヘッド攪拌ブレードによって攪拌する。一旦、澄んだ液体が得られれば、その混合物を５５℃まで冷却する。この混合物に、テトラヒドロフラン中４５．８７ｇのＢａｔｉｍｉｓｔａｔの２００ｍｌ溶液を加える。溶媒を約４０ｍｌ／分で加え、そしてその混合物を、５５℃にて４時間攪拌する。この時間混合した後、液体組成物をステンレス鋼パンに移し、そして５０℃の強制送風オーブン（ｆｏｒｃｅｄ ａｉｒ ｏｖｅｎ）に約４８時間置いて、残留する溶媒を除去した。次いで、この組成物を周囲温度まで冷却し、そして固化してＢａｔｉｍｉｓｔａｔ−ポリマーマトリクスを形成する。

リン酸緩衝液を、２３７．８ｇの二塩基性リン酸ナトリウム五水和物、１５．１８ｇの一塩基性リン酸ナトリウム一水和物を１６００ｍｌの水中で合わせることにより調製する。このリン酸緩衝液に、３２７ｇのＢａｔｉｍｉｓｔａｔ−ポリマーマトリクスを添加し、そして２時間攪拌して固体を溶解させる。澄んだ溶液が達成された後、さらなる水で容量を２０００ｍｌに調整する。バイアルを、この溶液の１５ｍｌアリコートで満たし、そして、−３４℃に冷却し、５時間保持し、圧力を０．２ｍｍＨｇ未満に低下させつつ−１６℃に加熱し、６８時間保持し、低圧を維持しつつ３０℃に加熱し、その後、さらに２０時間保持することによって凍結乾燥する。この結果は、透明なミセル溶液を形成するよう構成され得る凍結乾燥マトリクスである。

（２成分キットの調製）
４０ｍｇの凍結乾燥されたミセル系Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ材料を、蓋付き１ｍＬシリンジ中に計量する。プランジャーを取替え、シリンジを、ヒートシーラーを使用して、プラスチックパウチ中でシールする。サンプルを、２．５Ｍｒａｄのγ線照射を使用して滅菌する。適用の直前に、滅菌された凍結乾燥材料を含むプラスチックパウチを、開放し、そして二重シリンジコネクター（Ｓｕｐｐｌｉｅｒ、カタログ番号）に連結する。２ｍＬの３．５％ウシコラーゲン（９５％Ｉ型および５％ＩＩＩ型）を含むシリンジを、二重シリンジコネクターの残りの端部に接続する。コラーゲン材料を含むシリンジのプランジャーを押し、コラーゲン材料をミセル系材料を含むシリンジに移す。材料を、一様な溶液が得られるまで、一方のシリンジから他方のシリンジまで急速に通過させる。次いで、材料を、元々コラーゲンを含むシリンジに移す。このシリンジを、コネクターから取り外し、３０ゲージの針を、このシリンジに連結する。ここで、材料は、適用のために準備される。

（実施例１１）
（２成分ミクロスフィアキットの調製）
４０ｍｇの凍結乾燥されたミクロスフィアＢａｔｉｍｉｓｔａｔ材料を、蓋付き１ｍＬシリンジ中に計量する。プランジャーを取替え、シリンジを、ヒートシーラーを使用して、プラスチックパウチ中でシールする。サンプルを、２．５Ｍｒａｄのγ線照射を使用して滅菌する。適用の直前に、滅菌された凍結乾燥材料を含むプラスチックパウチを、開放し、そして二重シリンジコネクターに連結する。２ｍＬの３．５％ウシコラーゲン（９５％Ｉ型および５％ＩＩＩ型）を含むシリンジを、二重シリンジコネクターの残りの端部に接続する。コラーゲン材料を含むシリンジのプランジャーを押し、コラーゲン材料をミセル系材料を含むシリンジに移す。材料を、一様な溶液が得られるまで、一方のシリンジから他方のシリンジまで通過させる。次いで、材料を、元々コラーゲンを含むシリンジに移す。このシリンジを、コネクターから取り外し、３０ゲージの針を、このシリンジに連結する。ここで、材料は、適用のために準備される。

（実施例１２）
（リポソーム調製）
（ＭＬＶリポソーム）
全１００ｍｇの卵フォスファチジルコリン（Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ）およびコレステロール（Ｓｉｇｍａ）［５：１モル比］を、５０ｍＬ丸底フラスコ中の５ｍＬジクロロメタンに添加する。一旦溶解すると、３ｍｇのＢａｔｉｍｉｓｔａｔを、この溶液に添加する。溶媒を、ロータバップ（ｒｏｔａｖａｐ）を使用して、わずかな圧力下で除去する。脂質−薬物混合物を、減圧下で一晩乾燥する。５ｍＬの０．９％ ＮａＣｌ溶液を、乾燥された脂質−薬物混合物に添加する。溶液を、ロータバップおよび３７℃に設定された水浴を使用して穏やかに１時間回転する。５％マルトースを０．９％ ＮａＣｌ構成溶液に添加する場合、サンプルを、アセトンドライアイス中で凍結し、凍結乾燥し、固体生成物を得る。

必要とされる特定の容量に依存して、特定量の凍結乾燥されたミクロスフィアＢａｔｉｍｉｓｔａｔ材料（上記の通りに調製される）を、蓋付き１ｍＬシリンジ中に計量する。プランジャーを取替え、シリンジを、ヒートシーラーを使用して、プラスチックパウチ中でシールする。サンプルを、２．５Ｍｒａｄのγ線照射を使用して滅菌する。適用の直前に、滅菌された凍結乾燥材料を含むプラスチックパウチを、開放し、そして二重シリンジコネクターに連結する。３．５％ウシコラーゲン（９５％Ｉ型および５％ＩＩＩ型）を含むシリンジを、二重シリンジコネクターの残りの端部に接続する。コラーゲン材料を含むシリンジのプランジャーを押し、コラーゲン材料をミセル系材料を含むシリンジに移す。材料を、一様な溶液が得られるまで、一方のシリンジから他方のシリンジまで通過させる。次いで、材料を、元々コラーゲンを含むシリンジに移す。このシリンジを、コネクターから取り外し、３０ゲージの針を、このシリンジに連結する。ここで、材料は、適用のために準備される。

（ＳＵＶリポソーム）
上記で調製したリポソームは、サンプルを超音波浴（４５℃）中に１０分間配置することによって大きさを小さくする。溶液は、不透明（ミルク様溶液）から青色がかった透明溶液まで変化した。この溶液を、凍結乾燥されたものとして使用するか、または凍結乾燥し、固体生成物を得る。この固体生成物を使用して、上記される様式と類似の様式でコラーゲン溶液を調製し得る。

前述から、本発明の特定の実施形態が例示の目的のために本明細書中で記載されるが、種々の改変が、本発明の意図および範囲から逸脱することなくなされ得ることが理解される。従って、本発明は、添付の特許請求の範囲による場合を除いて限定されない。

Claims (62)

1. コラーゲンおよび少なくとも１つのメタロプロテアーゼインヒビター（ＭＭＰＩ）を含む組成物。
2. 前記ＭＭＰＩが、マトリックスメタロプロテイナーゼの組織インヒビター（ＴＩＭＰ）である、請求項１に記載の組成物。
3. 前記ＴＩＭＰが、ＴＩＭＰ−１またはＴＩＭＰ−２である、請求項２に記載の組成物。
4. 前記ＭＭＰＩが、ＴＩＭＰ−３またはＴＩＭＰ−４である、請求項２に記載の組成物。
5. 前記ＭＭＰＩが、テトラサイクリンあるいは、そのアナログまたはその誘導体である、請求項１に記載の組成物。
6. 前記ＭＭＰＩが、テトラサイクリンである、請求項５に記載の組成物。
7. 前記テトラサイクリンが、ミノサイクリンまたはドキシサイクリンである、請求項６に記載の組成物。
8. 前記ＭＭＰＩが、ヒドロキサメートである、請求項１に記載の組成物。
9. 前記ヒドロキサメートが、Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ、ＭａｒｉｍｉｓｔａｔまたはＴｒｏｃａｄｅである、請求項８に記載の組成物。
10. 前記ＭＭＰＩが、ＲＯ−１１３０８３０、ＣＧＳ−２７０２３ＡまたはＢＭＳ−２７５２９１である、請求項１に記載の組成物。
11. 前記ＭＭＰＩが、ポリペプチドインヒビターである、請求項１に記載の組成物。
12. 前記ポリペプチドインヒビターが、メタロプロテアーゼ成熟酵素である、請求項１１に記載の組成物。
13. 前記ＭＭＰＩが、メルカプトベース化合物である、請求項１に記載の化合物。
14. 前記ＭＭＰＩが、以下の構造（Ｉ）：
    

    

    を有するビスホスホネートであって、
    ここで、Ｒ’およびＲ’’が、独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、必要に応じて置換されるアミノ基、必要に応じて置換されるチオ基、または必要に応じて置換される、アルキル、アルカニル、アルケニル、アルキニル、アルキルジイル、アルキレノ、ヘテロアルキル、ヘテロアルカニル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルカニル、ヘテロアルキルジイル、ヘテロアルキレノ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルである、請求項１に記載の組成物。
15. 前記ＭＭＰＩが、ビスホスホネートであり、Ｒ’およびＲ’’が、ヒドロキシ、水素または塩素である、請求項１４に記載の組成物。
16. 少なくとも２つのＭＭＰＩを含む、請求項１に記載の組成物。
17. 前記少なくとも２つのＭＭＰＩが、テトラサイクリン、またはそのアナログ、もしくは、その誘導体およびビスホスホネートを含む、請求項１６に記載の組成物。
18. 前記少なくとも２つのＭＭＰＩが、テトラサイクリン、またはそのアナログ、もしくは、その誘導体およびヒドロキシメートを含む、請求項１６に記載の組成物。
19. コラーゲン、少なくとも１つのメタロプロテアーゼインヒビター（ＭＭＰＩ）および、少なくとも１つのポリマーを含む、組成物。
20. 前記ポリマーが、生分解性である、請求項１９に記載の組成物。
21. 前記生分解性ポリマーが、アルブミン、ゼラチン、デンプン、セルロース、デキストラン、ポリサッカライド、フィブリノーゲン、ポリ（エステル）、ポリ（Ｄ、Ｌラクチド）、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリ（グルコリド）、ポリ（ｅ−カプロラクトン）、ポリ（ヒドロキシブチレート）、ポリ（アルキルカーボネート）、ポリ（無水物）および（オルトエステル）、ならびにこれらのコポリマーおよび混合物からなる群から選択される、請求項２０に記載の組成物。
22. 前記ポリマーが、非生分解性であり、ここで、該生分解性ポリマーが、エチレンオキシドおよびプロピレンオキシドのコポリマー、エチレン酢酸ビニルコポリマー、シリコーンゴム、ポリ（メタクリレート）ベースポリマー、およびポリ（アクリレート）ベースポリマーからなる群から選択される、請求項１９に記載の組成物。
23. 前記ポリマーが、ロッド、ペレット、スラブまたはカプセルの形態である、請求項２０に記載の組成物。
24. 前記ポリマーが、ミクロスフィア、ペースト、熱ペースト、糸、フィルムまたはスプレーの形態である、請求項２０に記載の組成物。
25. 前記ＭＭＰＩが、ポリマーマトリックス内の封入によってか、共有結合によってか、またはカプセル化によって、ポリマーに結合される、請求項１９に記載の組成物。
26. 前記ＭＭＰＩが、コラーゲンに直接的にかまたはリンカーを介して共有結合する、請求項１に記載の組成物。
27. 前記コラーゲンに結合されるＭＭＰＩが、共有結合の化学的切断か、または酵素的切断によって放出される、請求項２５に記載の組成物。
28. 前記ＭＭＰＩが、マトリックス内に組み込まれ、該マトリックスは、炭水化物、ポリサッカライド、デンプン、セルロース、デキストラン、メチルセルロース、ヒアルロン酸、ポリペプチド、アルブミン、コラーゲンおよびゼラチンからなる群から選択される、マトリックスをさらに含包する、請求項１９に記載の組成物。
29. 前記コラーゲンが、タイプＩまたはタイプＩＩである、請求項１に記載の組成物。
30. 前記コラーゲンが、タイプＩまたはタイプＩＩである、請求項１９に記載の組成物。
31. 前記組成物が、滅菌的である、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の組成物。
32. トロンビンまたは色素をさらに含包する、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の組成物。
33. 薬学的に受容可能な希釈剤、キャリアまたは賦形剤をさらに含包する、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の組成物。
34. 皮膚または組織の回復あるいは増殖のための方法であって、請求項３０に記載の組成物を、該皮膚または組織に注射することをさらに含包する、方法。
35. 前記注射が、唇への注射である、請求項３３に記載の方法。
36. 前記注射が、顔の皮膚への注射である、請求項３３に記載の方法。
37. 尿失禁を処置または予防するための方法であって、請求項３０に記載の組成物を患者に投与し、その結果、該尿失禁が、処置されるか、または予防される、方法。
38. 前記組成物が、尿道周囲的に投与される、請求項３６に記載の方法。
39. 前記組成物が、経尿道的に投与される、請求項３７に記載の方法。
40. 外科手術部位を封するための方法であって、請求項３０に記載の組成物を、患者に投与する工程を含包する、方法。
41. 前記部位が、血管アクセスの領域である、請求項３９に記載の方法。
42. コラジョリーを製造するための方法であって、コラーゲンおよび少なくとも１つのＭＭＰＩを混合する工程を含包する、方法。
43. 前記コラーゲンが、タイプＩコラーゲンまたはタイプＩＩコラーゲンである、請求項４１に記載の方法。
44. 前記ＭＭＰＩが、マトリックスメタロプロテイナーゼの組織インヒビター（ＴＩＭＰ）である、請求項４１に記載の方法。
45. 前記ＴＩＭＰが、ＴＩＭＰ−１またはＴＩＭＰ−２である、請求項４３に記載の方法。
46. 前記ＴＩＭＰが、ＴＩＭＰ−３またはＴＩＭＰ−４である、請求項４３に記載の方法。
47. 前記ＭＭＰＩが、テトラサイクリンあるいは、そのアナログまたはその誘導体である、請求項４１に記載の方法。
48. 前記ＭＭＰＩが、テトラサイクリンである、請求項４６に記載の方法。
49. 前記テトラサイクリンが、ミノサイクリンまたはドキシサイクリンである、請求項４７に記載の方法。
50. 前記ＭＭＰＩが、ヒドロキサメートである、請求項４１に記載の方法。
51. 前記ヒドロキサメートが、Ｂａｔｉｍｉｓｔａｔ、ＭａｒｉｍｉｓｔａｔまたはＴｒｏｃａｄｅである、請求項４９に記載の方法。
52. 前記ＭＭＰＩが、ＲＯ−１１３０８３０、ＣＧＳ−２７０２３ＡまたはＢＭＳ−２７５２９１である、請求項４１に記載の方法。
53. 前記ＭＭＰＩが、ポリペプチドインヒビターである、請求項４１に記載の方法。
54. 前記ポリペプチドインヒビターが、メタロプロテアーゼ成熟酵素のインヒビターである、請求項５２に記載の方法。
55. 前記ＭＭＰＩが、メルカプトベース化合物である、請求項４１に記載の方法。
56. 前記ＭＭＰＩが、以下の構造（Ｉ）：
    

    

    を有するビスホスホネートであって、
    ここで、Ｒ’およびＲ’’が、独立して、水素、ハロゲン、ヒドロキシ、必要に応じて置換されたアミノ基、必要に応じて置換されたチオ基、または必要に応じて置換された、アルキル、アルカニル、アルケニル、アルキニル、アルキルジイル、アルキレノ、ヘテロアルキル、ヘテロアルカニル、ヘテロアルケニル、ヘテロアルカニル、ヘテロアルキルジイル、ヘテロアルキレノ、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキルである、請求項４１に記載の方法。
57. 前記ＭＭＰＩが、ビスホスホネートであって、Ｒ’およびＲ’’が、ヒドロキシ、水素または塩素である、請求項５５に記載の方法。
58. 少なくとも２つのＭＭＰＩを含む、請求項４１に記載の方法。
59. コラーゲンと混合剤する前に、前記ＭＭＰＩが、最初に少なくとも１つのポリマーと混合される、請求項４１に記載の方法。
60. 前記ポリマーが、生分解性である、請求項５８に記載の方法。
61. 前記生分解性ポリマーが、アルブミン、ゼラチン、デンプン、セルロース、デキストラン、ポリサッカライド、フィブリノーゲン、ポリ（エステル）、ポリ（Ｄ、Ｌラクチド）、ポリ（Ｄ、Ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリ（グルコリド）、ポリ（ｅ−カプロラクトン）、ポリ（ヒドロキシブチレート）、ポリ（アルキルカーボネート）、ポリ（無水物）およびポリ（オルトエステル）、ならびにこれらのコポリマーおよび混合物からなる群から選択される、請求項５９に記載の方法。
62. 前記混合物を、無菌化する工程をさらに含包する、請求項４１の方法。