MXPA02011081A - Proteinas de subunidad de receptor de citocina de mamifero, reactivos y metodos relacionados. - Google Patents

Abstract

Acidos nucieicos que codifican receptores de mamifero, por ejemplo de primates, proteinas de receptor purificadas y fragmentos de las mismas; tambien se proveen anticuerpos tanto policlonales como monoclonales; se describen metodos de uso de las composiciones para utilidad diagnostica y terapeutica.

Description

PROTEÍNAS DE SUBUNIDAD DE RECEPTOR DE CROCINA DE MAMÍFERO, REACTIVOS Y MÉTODOS RELACIONADOS CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a composiciones y métodos para afectar la fisiología de un mamífero, incluyendo la función del sistema inmune. En particular, provee métodos para regular el desarrollo y/o el sistema inmune. También se describen usos diagnósticos y terapéuticos de estos materiales.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La tecnología de ADN recombinante se refiere generalmente a técnicas que integran en vectores información genética de una fuente donadora para procesamiento subsecuente, por ejemplo mediante su introducción en un hospedero, por medio de lo cual la información genética transferida es copiada y/o expresada en el nuevo medio. Comúnmente, la información genética existe en la forma de ADN complementario (ADNc) derivado de ARN mensajero (ARNm) que codifica para un producto de proteína deseado. El vehículo es frecuentemente un plásmido que tiene la capacidad de incorporar el ADNc para su posterior replicación en un hospedero y, en algunos casos, controlar realmente la expresión del ADNc y así dirigir la síntesis del producto codificado en el hospedero. Véase, por ejemplo, Sambrook y otros (1989) "Molecular Cloning: A Laboratory Manual" (2a. edición) vol. 1-3, CSH Press, New York. Durante algún tiempo se ha sabido que la respuesta inmune del mamífero se basa en una serie de complejas interacciones celulares denominadas "la red inmune". Investigaciones recientes han provisto nuevas ideas sobre los trabajos internos de esta red. Aunque sigue siendo claro que gran parte de la respuesta inmune, de hecho, gira en tomo a las interacciones típicas de red de linfocitos, macrófagos, granulocitos y otras células, ahora los inmunólogos por lo general opinan que las proteínas solubles, conocidas como linfocinas, citocinas o monocinas, desempeñan funciones críticas en el control de estas interacciones celulares. De esta manera, hay un interés considerable en el aislamiento, caracterización y mecanismos de acción de los factores moduladores de células, cuya comprensión conducirá a avances significativos en el diagnóstico y terapia de muchas anormalidades médicas, por ejemplo trastornos del sistema inmune. Aparentemente las linfocinas median las actividades celulares en varias formas. Véase, por ejemplo, Paul (ed., 1996) "Fundamental Immunology" 3a edición, Raven Press, New York; y Thomson (ed. 1994) "The Cytokine Handbook", 2a edición, Academic Press, San Diego. Se ha visto que sostienen la proliferación, el crecimiento, y/o la diferenciación de células troncales hematopoyéticas pluripotenciales en vastos números de progenitores que comprenden diversos linajes celulares que integran un sistema inmune complejo. Para una respuesta inmune sana, son necesarias interacciones apropiadas y balanceadas entre los componentes celulares. Los diferentes linajes celulares responden de una manera diferente cuando se administran linfocinas en conjunto con otros agentes. Los linajes celulares especialmente importantes para la respuesta inmune incluyen dos clases de linfocitos: células B, que pueden producir y secretar inmunoglobulinas (proteínas con la capacidad de reconocer y unirse a material extraño para efectuar su eliminación), y células T de varios subgrupos que secretan linfocinas e inducen o suprimen células B y otras varias células (incluyendo otras células T) que integran la red inmune. Estos linfocitos interaccionan con muchos otros tipos de células. La investigación para entender mejor y tratar varios trastornos inmunes ha sido obstaculizada por la incapacidad general de mantener in vitro las células del sistema inmune. Los inmunólogos han descubierto que el cultivo de muchas de estas células se puede realizar mediante el uso de sobrenadantes de células T y otros sobrenadantes de células, que contienen varios factores de crecimiento, incluyendo muchas de las linfocinas. Existen varios factores de crecimiento y reguladores que modulan el desarrollo morfogenético. Se conocen muchos receptores de citocinas. Frecuentemente hay por lo menos dos subunidades en el receptor funcional. Véase, por ejemplo, Heinrich y otros (1998), Biochem J. 334:297-314; Gonda y D'Andrea (1997) Blood 89:355-369; Presky y otros (1996) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 93:14002-14007; Drachman y Kaushansky (1995) Curr.

Opin. Hematol. 2:22-28; Theze (1994) Eur. Cytokine Netw. 5:353-368; y Lemmon y Schlessinger (1994) Trends Biochem. Sci. 19:459-463. De lo anterior, es evidente que el descubrimiento y desarrollo de nuevas proteínas solubles y sus receptores, incluyendo similares a linfocinas, debe contribuir a nuevas terapias para una amplia gama de condiciones degenerativas o anormales que implican directamente o indirectamente desarrollo, diferenciación o función, por ejemplo, del sistema inmune y/o de células hematopoyéticas. En particular, sería muy ventajoso el descubrimiento y comprensión de receptores novedosos de moléculas similares a linfocina que incrementen o potencien las actividades benéficas de otras linfocinas. La presente invención provee nuevos receptores para ligandos, que exhiben similitud con composiciones similares a citocina y compuestos relacionados, y métodos para su uso.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención está dirigida a receptores novedosos relacionados con receptores de citocina, por ejemplo estructuras moleculares típicas de receptor de citocina de primate, designadas como subunidades de receptor de citocina DNAX (DCRS), y sus actividades biológicas. En particular, provee la descripción de una subunidad, designada DCRS5. Incluye ácidos nucleicos que codifican para los mismos polipéptidos y métodos para su producción y uso. Los ácidos nucleicos de la invención están caracterizados en parte por su homología con secuencias de ADN complementario (ADNc) clonado abarcadas en la presente. Adicionalmente, la invención provee apareamiento del ligando p40/IL-B30 con subunidades de receptor DCRS5 y IL-12Rß1 , dicho apareamiento da una idea de las indicaciones de uso de los agonistas y antagonistas basados en reactivos dirigidos a los mismos. La presente invención provee un polipéptido sustancialmente puro o recombinante que comprende por lo menos diez aminoácidos contiguos de la porción intracelular de SEQ ID NO:2. En ciertas modalidades, el polipéptido comprende por lo menos 25 aminoácidos contiguos de la porción intracelular de SEQ ID NO:2; es recombinante, comprendiendo la porción intracelular de SEQ ID NO:2; comprende además por lo menos diez aminoácidos contiguos de la porción no intracelular de SEQ ID NO:2; comprende por lo menos 25 aminoácido de la porción extracelular de SEQ ID NO:2; comprende la SEQ ID NO:2 madura; o es un polipéptido natural sustancialmente puro. En otras, el polipéptido recombinante: consiste de la secuencia madura del cuadro 1 ; es un polipéptido no glicosilado; es de un humano; comprende por lo menos 40 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO:2; exhibe por lo menos tres segmentos no traslapantes de por lo menos quince aminoácidos contiguos de SEQ ID NO:2; es una variante polimórfica natural de SEQ ID NO:2; tiene una longitud de por lo menos aproximadamente 30 aminoácidos; exhibe por lo menos dos epítopes no traslapantes que son específicos para una DCRS5 de primate; tiene un peso molecular de por lo menos 30 kD con glicosilación natural; es un polipéptido sintético; está en una forma estéril; está en una solución acuosa o amortiguadora; está unido a un substrato sólido; está conjugado con otra porción química; o está físicamente asociado con un polipéptido IL-12Rß1. Otras modalidades de la invención proveen: un polipéptido sustancialmente puro o recombinante que comprende por lo menos dos segmentos no traslapantes distintos de por lo menos seis aminoácidos contiguos de la porción intracelular de SEQ ID NO:2; un polipéptido sustancialmente puro o recombinante que comprende por lo menos doce aminoácidos contiguos de la porción intracelular de SEQ ID NO:2; o un polipéptido de secuencia natural sustancialmente puro que comprende la SEQ ID NO:2 madura. En formas particulares, el polipéptido que comprende por lo menos dos segmentos no traslapantes distintos de por lo menos seis aminoácidos contiguos de la porción intracelular de SEQ ID NO: 2, será en donde: los distintos segmentos no traslapantes: incluyen uno de por lo menos doce aminoácidos; incluyen uno de por lo menos siete aminoácidos y un segundo de por lo menos nueve aminoácidos; incluyen un tercer segmento distinto de por lo menos seis aminoácidos; o comprenden uno de R355-L373, P378-L405, V407-D426, K428-D439, P441-V452, I454-G460, I465-T587 o N592-606; o el polipéptido comprende además por lo menos dos distintos segmentos no traslapantes de por lo menos seis aminoácidos contiguos de la porción extracelular de SEQ ID NO:2. Alternativamente, el polipéptido que comprende por lo menos doce aminoácidos contiguos de la porción ¡ntracelular de SEQ ID N0:2, será uno en donde: el segmento de doce aminoácidos contiguos (por lo menos doce) comprende uno de: R355-L373, P378-L405, V407-D426, K428-D439, P441-V452, I454-G460, I465-T587 o N-592-606; o el polipéptido comprende además por lo menos dos distintos segmentos traslapantes de por lo menos seis aminoácidos contiguos de la porción extracelular de SEQ ID NO:2. O, el polipéptido puro de secuencia natural que comprende la SEQ ID NO:2 madura puede comprender además un epítope de purificación o detección. Dichos polipéptidos pueden: consistir de la secuencia madura del cuadro 1 ; ser un polipéptido no glicosilado; ser de un humano; comprender por lo menos 40 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO:2; exhibir por lo menos tres segmentos no traslapantes de por lo menos quince aminoácidos contiguos de SEQ ID NO:2; ser una variante polimórfica natural de SEQ ID NO:2; tener una longitud de por lo menos aproximadamente 30 aminoácidos; exhibir por lo menos dos epítopes no traslapantes que son específicos para DCRS5 de primate; tener un peso molecular de por lo menos 30 kD con glicosilación natural; ser un polipéptido sintético; estar en una forma estéril; estar en una solución acuosa o amortiguadora; estar unido a un substrato sólido; estar conjugado con otra porción química; o estar físicamente asociado con un polipéptido IL-12Rß1. Se proveen varias otras composiciones, por ejemplo, que comprenden: un polipéptido sustancialmente puro combinado con la proteína IL-12Rß1 ; o dicho polipéptido es un vehículo, en donde el vehículo es: un compuesto acuoso incluyendo agua, solución salina y/o amortiguadora, y/o formulado para administración oral, rectal, nasal, tópica o parenteral. Se proveen equipos que comprenden dicho polipéptido y: un compartimiento que comprende el polipéptido; un compartimiento que comprende un polipéptido IL-12Rß1 ; un compartimiento que comprende un polipéptido p40, IL-B30 o p40/IL-B30; o instrucciones para usar o desechar los reactivos del equipo. Se proveen anticuerpos y otros compuestos de unión, por ejemplo que comprenden un sitio de unión de antígeno de un anticuerpo, que se unen específicamente a la porción intracelular de DCRS5, en donde: el compuesto de unión está en un recipiente; el polipéptido es de un humano; el compuesto de unión es un fragmento Fv, Fab o Fab2; el compuesto de unión está conjugado con otra porción química; o el anticuerpo: está desarrollado contra una secuencia peptídica de un polipéptido maduro del cuadro 1 ; está desarrollado contra una DCRS5 madura; está desarrollado para una DCRS5 humana purificada; es inmunoseleccionado; es un anticuerpo policlonal; se une a una DCRS5 desnaturalizada; exhibe una Kd para antígeno de por lo menos 30 µM; está unido a un substrato sólido, incluyendo un glóbulo o membrana de plástico; está en una composición estéril; o está marcado detectablemente, incluyendo marcas radioactivas o fluorescentes. También se proveen equipos que comprenden el compuesto de unión y: un compartimiento que comprende un polipéptido p40; un polipéptido IL-B30; un polipéptido DCRS5; y/o un polipéptido IL-12Rß1 ; un compartimiento que comprende un anticuerpo que se une selectivamente a: un polipéptido p40; un polipéptido IL-B30; un polipéptido DCRS5; y/o un polipéptido IL-12Rß1; o instrucciones para uso o desecho de los reactivos del equipo. También se proveen métodos, por ejemplo, de producción de un complejo antígeno-anticuerpo, que comprenden poner en contacto bajo condiciones apropiadas un polipéptido DCRS5 de primate con un anticuerpo, permitiendo así la formación del complejo. Dicho método puede ser tal que: el complejo se purifica de otros receptores de citocina; el complejo se purifica de otro anticuerpo; el contacto es con una muestra que comprende un interferon; el contacto permite detección cuantitativa del antígeno; el contacto es con una muestra que comprende el anticuerpo; o el contacto permite detección cuantitativa del anticuerpo. Se proveen otras composiciones, por ejemplo una composición que comprende: un compuesto de unión estéril, o el compuesto de unión y un vehículo, en donde el vehículo es: un compuesto acuoso que incluye agua, solución salina y/o solución amortiguadora; y/o están formuladas para administración oral, rectal, nasal, tópica o parenteral. La invención también provee un ácido nucleico aislado o recombinante que codifica el polipéptido DCRS5, en donde: el DCRS5 es de un humano; o el ácido nucleico: codifica una secuencia de péptido antigénico del cuadro 1 ; codifica una pluralidad de secuencias de péptido antigénico del cuadro 1 ; exhibe identidad sobre por lo menos trece nucleótidos con un ADNc natural que codifica el segmento; es un vector de expresión; comprende además un origen de replicación; es de una fuente natural; comprende una marca detectable; comprende una secuencia de nucleótidos sintética; es menor de 6 kb, preferiblemente menor de 3 kb; es de un primate; comprende una secuencia codificadora natural de longitud completa; es una sonda de hibridación para un gen que codifica el DCRS5; o es un iniciador de PCR, producto de PCR, o iniciador de mutagénesis. Se proveen células que comprenden el ácido nucleico recombinante, que incluyen en donde la célula es: una célula procariótica; una célula eucariótica; una célula bacteriana; una célula de levadura; una célula de insecto; una célula de mamífero; una célula de ratón; una célula de primate; o una célula humana. Modalidades de equipo incluyen las que comprenden el ácido nucleico y: un compartimiento que comprende el ácido nucleico; un compartimiento que comprende un ácido nucleico que codifica: un polipéptido p40; un polipéptido IL-B30; un polipéptido DCRS5; y/o un polipéptido IL-12Rß1 ; un compartimiento que comprende: un polipéptido p40; un polipéptido IL-B30; un polipéptido DCRS5; y/o un polipéptido IL-12Rß1 ; un compartimiento que comprende un anticuerpo que se une selectivamente a: un polipéptido p40; un polipéptido IL-B30; un polipépfido DCRS5; y/o un polipéptido IL-12Rß1 ; o instrucciones para uso o desecho de los reactivos del equipo. Otras modalidades de ácido nucleico incluyen aquellas en las que: híbrida bajo condiciones de lavado de 30 minutos a 30°C y sal de menos de 2M con la porción de SEQ ID NO:1 que codifica la porción intracelular; o exhibe identidad sobre un tramo de por lo menos alrededor de 30 nucleótidos con la porción intracelular de una DCRS5 de primate. Preferiblemente, dicho ácido nucleico será uno en donde: las condiciones de lavado sean de 45°C y/o sal 500 mM; o 55°C y/o sal 150 mM; o el tramo sea de por lo menos 55 o 75 nucleófidos. Los usos terapéuticos incluyen métodos para modular la fisiología o desarrollo de una célula, que comprenden poner en contacto la célula con: un antagonista de p40/IL-B30 que es un complejo que comprende: la porción extracelular de una DCRS5 de primate y/o la porción extracelular de un IL-12Rß1 de primate; un antagonista de p40/IL-B30 que es un anticuerpo que se une a un complejo que comprende: DCRS5 de primate y/o IL-12Rß1 de primate; un antagonista de p40/IL-B30 que es un anticuerpo que se une a DCRS5; un antagonista de p40/IL-B30 que es un anticuerpo para IL-12Rß1 ; un antagonista de p40/IL-B30 que es un ácido nucleico de antisentido para DCRS5 o IL-12Rß1 ; o un agonista de p40/IL-B30 que es un anticuerpo que se une a un complejo que comprende DCRS5 de primate y/o IL-12Rß1 de primate. En un tipo de método, el contacto es con un antagonista, y el contacto es en combinación con un antagonista para IL-12, IL-18, TNF, y/o IFN?; o la célula es de un hospedero que: exhibe signos o síntomas de una enfermedad crónica mediada por THI ; exhibe síntomas o signos de esclerosis múltiple, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad inflamatoria del intestino, diabetes, psoriasis o sepsis; o recibe un transplante alogénico. Contrariamente, el método puede consistir en poner en contacto con un agonista, y: el contacto es en combinación con IL-12, IL-18, TNF o IFNy; o la célula es de un hospedero que: exhibe signos o síntomas de una respuesta crónica de Th2; sufre de un tumor, crecimiento viral o micótico; recibe una vacuna; o sufre de una respuesta alérgica.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS COMPENDIO I. Generalidades II. Actividades III. Ácidos nucleicos A. fragmentos, secuencias y sondas de codificación B. mutaciones, quimeras, fusiones C. preparación de ácidos nucleicos D. células que comprenden vectores IV. Proteínas, péptidos A. fragmentos, secuencia, ¡nmunógenos, antígenos B. muteínas C. agonistas/antagonistas, equivalentes funcionales D. preparación de proteínas V. Preparación de ácidos nucleicos, proteínas A. sintéticos B. recombinantes C. fuentes naturales VI. Anticuerpos A. policlonales B. monoclonales C. fragmentos; Kd D. anticuerpos anti-idiotípicos E. líneas celulares de hibridoma Vil. Equipos, diagnosis y cuantificación A. ELISA B. ensayo de codificación de ARNm C. análisis cualitativo/cuantitativo D. equipos VIII. Composiciones y métodos terapéuticos A. composiciones de combinación B. dosis unitarias C. administración IX. Selección I. Generalidades La presente invención provee la secuencia de aminoácidos y la secuencia de ADN de moléculas de una subunidad típica de receptor de citocina de primate; esta subunidad designada como subunidad 5 de receptor de citocina DNAX (DCRS5) teniendo propiedades particulares definidas, tanto estructurales como biológicas. Varios ADNcs que codifican estas moléculas se obtuvieron de colecciones de secuencias de ADNc de primate, por ejemplo humano. También serían convenientes las contrapartes de otros primates o de otros mamíferos. Adicionalmente, la invención provee apareamiento del ligando p40/IL-B30 con las subunidades de receptor DCRS5 y IL-12Rß1 , dicho apareamiento provee una idea de las indicaciones de uso de los agonistas y antagonistas basados en reactivos dirigidos a los mismos. Algunos de los métodos estándares aplicables los describen o refieren, por ejemplo, Maniatis y otros (1982) en "Molecular Cloning, A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Press; Sambrook y otros (1989) en "Molecular Cloning: A Laboratory Manual" (2a edición) vols. 1 3, CHS Press, New York; Ausubel y otros en "Biology", Greene Publishing Associates, Brooklyn, New York; o Ausubel y otros (1987 y suplementos periódicos) "Current Protocols in Molecular Biology", Greene/Wiley, New York; cada uno de los cuales se incorpora aquí como referencia. En el cuadro 1 se muestra la secuencia de nucleótidos (SEQ ID NO:1) y la secuencia de aminoácidos correspondiente (SEQ ID NO:2) de un segmento codificador de DCRS5 de un primate, por ejemplo de humano. Se indica la secuencia de señal predicha, pero puede depender del tipo de célula, o puede ser unos pocos residuos en cualquier dirección. Sitios potenciales de N-glicosilación están en los residuos de asparagina 6, 24, 58, 118, 157, 209 y 250. Probablemente se encuentran enlaces disulfuro entre residuos de cisteína en las posiciones 29 y 78; y un motivo C_CXW conservado se encuentra en las posiciones 110/121/123. Son notables el triptófano en 219 y el motivo WxxWS de 281-285. El segmento de aproximadamente 1-101 es un dominio de Ig; de aproximadamente 102-195 es un dominio 1 de unión de citocina; de aproximadamente 196-297 es un dominio 2 de unión de citocina; de aproximadamente 298-330 es un enlazador; de aproximadamente 329-354 es un segmento de transmembrana; y de aproximadamente 356-606 es un dominio intracelular. Las características intracelulares incluyen sitios de unión de SH2 putativos en Y374-I377, Y461-Q464 y Y588-Q591 ; y residuos de tirosina potencialmente importantes en 406, 427, 440 y 453. Estos sitios y fronteras son notables. El ORF contiene una secuencia de señal putativa; se predice que esta es cortada en ...CHG/GIT... como se mostró arriba. Un dominio extracelular predicho de 328 aminoácidos es seguido por un segmento de transmembrana putativo y finalmente un dominio citoplásmico de aproximadamente 252 aminoácidos. Se predice que las funciones de unión de ligando residen en el dominio extracelular. En el cuadro 2 se provee la secuencia de traducción inversa del ácido nucleico.

CUADRO 1 Secuencias de nucleótido y polipéptido de modalidades de subunidad típica de receptor de citocina DNAX (DCRS5): modalidad de primate, por ejemplo humano (véase SEQ ID NO: 1 y 2): se indica la secuencia de señal predicha. pero puede variar por unas pocas posiciones dependiendo del tipo de célula; posiciones identificadas de variación están en los nucleótidos 127 y 563: que son G y G apareadas (traduciéndose a la combinación de Q y 6), o T y A (traduciéndose a H y gtggtacggg aattccattg tgttgggcag ccaacaaggg tggcagcctg gctctgaagt 60 ggaattatgt gcttcaaaca ggttgaaaga gggaaacagt cttttcctgc ttccagac 118 atg aat cak gtc act att caa tgg gat gca gta ata gcc ctt tac ata 166 Met Asn Xaa Val Thr lie Gln Trp Asp Ala Val lie Ala Leu Tyr lie -20 -15 -10 ctc ttc age tgg tgt cat gga gga att acá aat ata aac tgc tet ggc 214 Leu Phe Ser Trp Cys His Gly Gly lie Thr Asn lie Asn Cys Ser Gly -5 -1 1 5 cae ate tgg gta gaa cca gcc acá att ttt aag atg ggt atg aat ate 262 His He Trp Val Glu Pro Ala Thr He 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Phe Asn Arg Ser Phe Arg Thr Gly He 350 355 360 aaa aga agg ate tta ttg tta ata cca aag tgg ctt tat gaa gat att 1318 Lys Arg Arg He Leu Leu Leu He Pro Lys Trp Leu Tyr Glu Asp He ' 365 370 375 cct aat atg aaa aac age aat gtt gtg aaa atg cta cag gaa aat agt 1366 Pro Asn Met Lys Asn Ser Asn Val Val Lys Met Leu Gln Glu Asn Ser 380 385 390 gaa ctt atg aat aat aat tcc agt gag cag gtc cta tat gtt gat ccc 1414 Glu Leu Met Asn Asn Asn Ser Ser Glu Gln Val Leu Tyr Val Asp Pro 395 400 405 atg att acá gag ata aaa gaa ate ttc ate cca gaa cae aag cct acá 1462 Met He Thr Glu He Lys Glu He Phe He Pro Glu His Lys Pro Thr 410 415 420 425 gac tac aag aag gag aat acá gga ccc ctg gag acá aga gac tac ceg 1510 Asp Tyr Lys Lys Glu Asn Thr Gly Pro Leu Glu Thr Arg Asp Tyr Pro 430 435 440 caa aac tcg cta ttc gac aat act acá gtt gta tat att cct gat ctc 1558 Gln Asn Ser Leu Phe Asp Asn Thr Thr Val Val Tyr He Pro Asp Leu 445 450 455 aac act gga tat aaa ccc caa att tea aat ttt ctg cct gag gga age 1606 Asn Thr Gly Tyr Lys Pro Gln He Ser Asn Phe Leu Pro Glu Gly Ser 460 465 470 cat ctc age aat aat aat gaa att act tcc tta acá ctt aaa cca cca 1654 His Leu Ser Asn Asn Asn Glu He Thr Ser Leu Thr Leu Lys Pro Pro 475 480 485 gtt gat tcc tta gac tea gga aat aat ccc agg tta caa aag cat cct 1702 Val Asp Ser Leu Asp Ser Gly Asn Asn Pro Arg Leu Gln Lys His Pro 490 495 500 505 aat ttt gct ttt tet gtt tea agt gtg aat tea cta age aac acá ata 1750 Asn Phe Ala Phe Ser Val Ser Ser Val Asn Ser Leu Ser Asn Thr He 510 515 520 ttt ctt gga gaa tta age ctc ata tta aat caa gga gaa tgc agt tet 1798 Phe Leu Gly Glu Leu Ser Leu He Leu Asn Gln Gly Glu Cys Ser Ser 525 530 535 cct gac ata caa aac tea gta gag gag gaa acc acc atg ctt ttg gaa 1846 Pro Asp He Gln Asn Ser Val Glu Glu Glu Thr Thr Met Leu Leu Glu 540 545 550 aat gat tea ccc agt gaa act att cca gaa cag acc ctg ctt cct gat 1894 Asn Asp Ser Pro Ser Glu Thr He Pro Glu Gln Thr Leu Leu Pro Asp 555 560 565 gaa ttt gtc tcc tgt ttg ggg ate gtg aat gag gag ttg cca tet att 1942 Glu Phe Val Ser Cys Leu Gly He Val Asn Glu Glu Leu Pro Ser He 570 575 580 585 aat act tat ttt cca caa aat att ttg gaa age cae ttc aat agg att 1990 Asn Thr Tyr Phe Pro Gln Asn He Leu Glu Ser His Phe Asn Arg He 590 595 600 tea ctc ttg gaa aag tagagctgtg tggtcaaaat caatatgaga aagctgcctt 2045 Ser Leu Leu Glu Lys 605 gcaatctgaa cttgggtttt ccctgcaata gaaattgaat tctgcctctt tttgaaaaaa 2105 atgtattcac atacaaatet tcacatggac acatgttttc atttcccttg gataaatacc 2165 taggtagggg attgctgggc catatgataa gcatatgttt cagttctacc aatcttgttt 2225 ccagagtagt gacatttctg tgctcctacc atcaccatgt aagaattece gggagctcca 2285 tgccttttta attttageca ttcttctgcc tmatttetta aaattagaga attaaggtcc 2345 cgaaggtgga acatgettea tggtcacaca tacaggcaca aaaacagcat tatgtggacg 2405 cctcatgtat tttttataga gtcaactatt tectetttat tttccctcat tgaaagatgc 2465 aaaacagctc tctattgtgt acagaaaggg taaataatgc aaaatacctg gtagtaaaat 2525 aaatgctgaa aattttcctt taaaatagaa tcattaggcc aggcgtggtg gctcatgctt 2585 gtaatcccag cactttggta ggctgaggtr ggtggatcac ctgaggtcag gagttcgagt 2645 ccagcctggc caatatgetg aaaccctgtc tctactaaaa ttacaaaaat tagccggcca 2705 tggtggcagg tgcttgtaat cccagctact tgggaggctg aggcaggaga atcacttgaa 2765 ccaggaaggc agaggttgca ctgagctgag attgtgccac tgcactccag cctgggcaac 2825 aagagcaaaa ctctgtctgg aaaaaaaaaa aaaa 2859 MW (O/H) VTIQ DAVIAIiYILFS CHsGIT^IMCSGHIWVEPATTPK pMWTRTVPQ??T Tp?ppjr^HF YKNGIKERFQITRINK TARLV GK F EPHAS YCTAECPKHFQBTLICG DISSGYPPDIPDEVTCVIY EYSGNMTCTWNA (G/R) KLT?IDTKY?TRAVKSLETEEEQQYLTSSYINISTDSLQGGKKYLVWVQAAANAL GMEESKQLQ:ffiI?DDIVIPSAAVISRAETI?lATTO J^TYVQQSE ?I?PNI YVFQVRCQETGKRYWQPWSSPF???GPETVPQV SKAFQH^ TGHLTSPmGDisLLLsMrVFA I^SILSLIGIFiraSFRTGTra^ QENSELMHKINSSEQVLYVDPMI EIKEI^ Gyj^QISNF PEGS?LSMMlffiITSLTL PPVDSU3SGiroPRLQKHPMPAFSVSSV^ LNQGECS SPDIQNSVEEETTMLL?NDS PSETIPEQTLLPDEFVS CLGIWEELPS ?TO Y-FPßKriL? SHFN RISLLEK CUADRO 2 Traducción inversa de DCRS5 de primate, por ejemplo de humano (SEQ ID NO:3) ATGAAYCAYGmAO^THCARTGGGAYGCNGTNATHGa N^^ HACNAAYATHAAYTGYWSNGGNCAYATHTGGGTNGARCCNGOT TOT YTGYO?GaffGCi THA RA YTGYCMCC™^ T YOiRATHACiraGNATHAAYAARACMACMGaMGNYTN GGTAYAARÍA GTAYTG?ACNGra?GARTGYCaHAARCAYTTYCM^ OTCCNGAYATHCatfGAYGARGTNACOTGYG AiOT^ MGNAARYTNAOÍ?.AYATHGAYACMAARTAYGING^ YYTNACNWSlfflSNTAYATHAAYATHWSNAC^sAYWSNYTN^ CTG^ YGC NGGN TGGARG RWSN AB.C^YTN^^ GOTQT TEWSimGNGCMGARACMATHAAYGC^ NATHGARAARGTlTOSOTGYGARATGMGm.AYAARGCNACNACl^ CraAYTTYACOTAYGTNCARC^WSNsARTTYTAY^ ^G RACNGGNA RMGira YTGGC^CCNTGGWSJWSNC RGTNAaWSNAARG8TTYC^CAYGAYACNTGGAAYWSNGGN^^ TN a&WSNG YA YMGNGGNG Y THGGj rmrY^ WSK? NATHGGNATHTTYAAY Gl^SNT YMGNACTGsNAT^^ GYTNTAYGARGAYATHCCNAAY&TGA^^ AYAAYAAYWSNWSNGARO ?GaJ?TN AYGTNGAYCasrATGATHACMGARATHAA^ CAYAARCCNACOTGAYTAYAARAARGARAAYAC^GsNCCa>rY NGARACMMs YGAYAAYACNAOTGTNGTNTAYATHCaffGAYY?I^^ ARGGNWSNCAYYTNWSNAAYAAYAAYGARATHAClWSrr?TNAC^ GGNAAYAAYCOMGNY NC?SAARCAYCaJAAYT^ N THTTYYTNGGNGARYTOTSim HYTl^ RG RGM?O^C TGYTNYT AIU^YG YWSNCC^ GARTTYGTIWSNTGYYOWGGNATHGTNAAYGARGARYT CCNWSNATHAAYACNTAYTI^ NGARWSKC^YTGYAAYMCOTATHWS????]^ GARAAR CUADRO 3 Alineación de varías subunidades de receptor de citocina: la proteína gp130 de receptor de I L-6 de humano es SEQ ID NO:4 (GenBank 57230): la subunidad beta 2 de receptor de IL-12 de humano es SEQ ID NO:5 (GenBank U64198) h.t?IL-12R 2 1 iL?HTFRGCSLAFMFIITVaLIKAKIDACKRGDVTVKPSHVILLGSTVN 48 hugpl30 1 MLT QTWWQALFIFLTTESTGELLDPCG YISPESPWQLHSNFT 45 h.uDCRS5. 1 IWE?TlQV?AVXM^tii-F?^CRGGXT ^CS-QS- t-m?iP TlFlQiGJ XS -4S h.UlL-12R 2 49 ITCSL PRQGCFHYSRRipaiLYKIT»RRINFHHGHSLNSQVTsLPLG .95 hugpl30 4S AVCVLKEKCM>YF? r.Al?YIWKT^ 95 h DCRS5 50 IYCQAAIKN--CQP---RKLHFYiajGiraR-FQITRIIíKTTARL YKl!TFI. '93 hUl -12R 2 96 --TTLFVCKLACINSD-?IQICGAEIFVGVAPEQPQNLSCIQKGEQGTVA 142 hugpl30 96 SLWIQLTOTILTFGQL-EQW?GITIISGLPP?KPKl^SCrVN^ 143 huDCRSS 94 EPHASMYCTAECPKHFQETLICGKDISSGYPPDIPDEV CVIYEYSGNMT 143 h IL-12R 2 143 C lTORGR? ?IiYTEYTLQLSGPKlJLTWQKQC DIYCDYLDFGIN TPESP 192 h gpl30 144 C3pmGGRETHLETNFTLKS--EWAT?KFADCKAÍ^ 190 huDCRSS 144 CITOARKLTYIDTKYVVHVKSLETEEEQQYIiTSSYIOT 189 huIL-12R 2 193 ESNFTAKV AVNSLGSSSSLPSTFTFLDIVRPLPP DIRIKFQKASVSRC 242 hugpl30 191 VNIEVWVEAEN LGKVTSDH^^ 240 huDCRSS 190 -KK?JVWVQAAHALG^ESKQLQIHIJDDIVIPSAAVISRAETIKA VPKT 238 * * *,** * * * huI -12R 2 243 TLYWHD EG VLLNR1RYRPSNSR WNMVN VTKA GRHDLLDLK 285 hugpl30 241 lOTW OTSIKSVII KYl^QYRTE?ASTWSQIPP?DTAS RSSFTVQDLK 290 huDCRSS 239 IIYVTOS--QTTIEKVSCEMRYKATTNQTW VKEFD- 1ÍGFTYVQQSEFOIE 285 huIL-12R 2 286 PFTEYEFQISSKLH YKGSWSD SESLRAQTP?EEPTGiyEjDVWYMKR?ID 335 hugpl30 291 PFTEYVFRIRCMKEDGKGYWSD SE?ASGITYEDRPSKAPSF YKIDPSH 340 huDCRS5 286 PNIK?VFQVRCQ-ETGKRYWQP SSPFFHKTPE VP 320 htiI -12R 2 336 YS-RQQISLFWKOTÍSVSEARGKITJHYQVTLQELTGGKAMTQNITGHTS T 384 hugpl30 341 TQGYRTVQ V KTLPPFEMÍGK: 0YEVT---LTRWKSHLQ3 ?TVKATKIJ 387 huDCRSS 321 QVTSKAFQHDTWNSGLTY JISTG--- -HLTSDN--RGDIGL 357 ?mI -12R 2 385 TVIPRTGNWAVAVSAANS GSSLPTRINIMNLCEAGLLAPRQVSANSEG 434 hugpl30 388 TVmt DRYIATLTVRHTjVGKSDAAVLTIP-ACDFQ 436 huDCRSS 358 GMIVFAVMLSILSLIGIFÜRSFRTGIKRR 387 huIL- 12R 2 435 DlTILV WQPPRKDPSAVQEY p/EWREr^PG-GDTQVP l^LRSRPyMVSA 483 hugpl30 437 NMLWVEWTTPRE SVK YILEWCVLS DKAPCITD QQEDGTVHRT 480 huDCRSS ' 388 ILLLIPKWLYEDIP3MK S1TVVKMLQEN SE 417 huIL- 12R 2 484 LISENIKSYICYEIRVYALSGDQ-GGCSSILGNSKHKAPLSGPHINAITE 532 hugpl30 481 YLRGN AESKCYLITV PVYADGPGSPESIKAYLKQAPPSKGP ?VRT KV 530 huDCRSS 418 LMNNNSSE QVLYVDP MITEIKEIFIPEHKPTDYKKE- 453 huI -12R 2 533 EKGSILISWNSIPVQEQMGCL HYRIYWK?RDSNSQPQLCEIPYRVSQNS 582 hugpl30 531 GKNEAVLEWDQLPVDVQNGFIENYTIFYRTI1GN ETAVNVDSS?TE :-¿7S huDCRSS 454 --NTGPLETRDYP QNSLFDNTTWYIPDLNTG YKPQISN-- 490 * * . * huIL-12R 2 583 HPINSLQPRVTYVLMTA TAAGESSHGNEREFCLQGKAN-WMAFVAPSI 631 hugpl30 577 Y LSSLTSDT Y VRMAAYTDEG-GKDGP?FTFTTPKFAQGEIEAIWPV 625 huDCRSS 491 FLPEG - 495 * huIL-12R 2 632 CI.AIIIWG1FSTHYFQQKVFVLLAALRP Q CSREIPDPA 670 hugpl30 626 CL^LLTlI.LGVLFCFNKRDLIKKHI PNVPDPSKSHIAQ SPHTPPRmj 675 huDCRSS 496 SHLSNNN-EITSLTLKP PVDSLT'SG 519 huIL-12R 2 671 NSTCAK YPIA?E TQLPLDRLLID-WPTPEDPEPLVIS--EVLHQVTPV -717 hugpl30 676 FNSKDQMySDGNFTDVSVVEIEAlTOKKPFPED KSLDLFK EKINTEsHS 725' huDCRSS . 520 NKPRLQKHPN-FAFSVSSVNSLSNT 1 FLGELSLI 552 huIL-12R 2 718 FRHPPCSNWPQREKGIQGHQASEKDMMHSASSPPPPRALQAESRQLVDLY 767 hugpl30 726 SGIGGSSC SSSRPSISSSDENESSQNTSSTVQYSTWHSGYRHQVPSVQ 775 huDCRSS 553 L QGECS S--PDIQNSVEE?TTMLLEHDSP - 580 . * * * huIL-12R 2 768 KVLESRGSDPKPENPACP TVLPAGDLP HDGYLPSN---IDDLPSHEAP 814 huero130 776 VFSRSESTQPLLDSEERPEDLQLVDHVDGGDGILPRQQYFKQNCSQHESS 825 huDCRS? 581 —SETIPEQ LLPDEFVSCLG1VHEELPSINTYFPQN---ILESHFNR-- 623 huIL-12R 2 815 LADSLEELEPQHISLS VFPSSSLHPLTFSCG 845 hugpl30 826 PDISHFERSKQVSSVNEEDFVRLKQQISD?ISQSCGSGQMK FQEVSAAD 875 huDCRSS 624 --ISLLEK 629 hUl -12R 2 846 DKLTLDQL MRCDSLML 862 hugpl30 876 AFGPGTEGQVERFETVGMEAATDEGMPKSYLPQTVRQGGYMPQ 918 huDCRSS 630 629 Los parientes más cercanos del dominio extracelular de "IL-30R" son el transductor de señal de IL-6 gp130 y IL-12Rß1. Parientes un poco menos cercanos son el receptor de GCSF, el receptor de leptina, el receptor del factor inhibidor de leucemia y el receptor de CNTF. De esta manera, "IL-30R" es un miembro de la rama de clase 1 de la superfamilia de receptores de citocina y está muy relacionado con la familia de IL-6R/IL-12R. El cuadro 3 muestra una comparación de las secuencias disponibles de subunidades de receptor de primate con la DCRS5 de primate, por ejemplo de humano (IL-30R). La DCRS5 muestra similitud con la subunidad gp130 del receptor de IL-6 (por ejemplo la subunidad IL-6R) y la subunidad IL-12Rß2. La DCRS5 exhibe características estructurales de una subunidad beta, pero la secuencia real de las interacciones de proteína y señalización permanece sin resolver. Como se usa aquí, el término DCRS5 será usado para describir una proteína que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en el cuadro 1. En muchos casos, un fragmento sustancial de la misma será funcionalmente o estructuralmente equivalente, incluyendo por ejemplo segmentos extracelulares adicionales. La invención también incluye una variación de proteína del alelo de DCRS5 respectivo cuya secuencia se provee; por ejemplo, una muteína u otra construcción. Típicamente, dichas variantes exhibirán diferencias de secuencia de menos de aproximadamente 10% con la región objetivo, y así, a menudo tendrán sustituciones de entre 1 y 11 veces, por ejemplo 2, 3, 5, 7 veces, y otras. También abarca variantes alélicas y otras variantes, por ejemplo polimorfismos naturales de la proteína descrita. Típicamente, se unirá a su ligando biológico correspondiente, quizás en un estado dimerizado con una subunidad de receptor alfa, con alta afinidad, por ejemplo por lo menos aproximadamente 100 nM, usualmente más de aproximadamente 30 nM, de preferencia más de aproximadamente 10nM y de preferencia más de aproximadamente 3 nM. El término también se usará aquí para referirse a formas naturales relacionadas, por ejemplo alelos, variantes polimórficas y variantes metabólicas de la proteína de mamífero. Las formas preferidas de los complejos de receptor se unirán al ligando apropiado con una afinidad y selectividad apropiadas para una interacción ligando-receptor. Esta invención también abarca combinaciones de proteínas o péptidos que tienen identidad sustancial de secuencia de aminoácidos con la secuencia de aminoácidos del cuadro 1. Incluirá variantes de secuencia con relativamente pocas sustituciones, preferiblemente menos de 3-5, aproximadamente. Un "fragmento" o "segmento" sustancial de polipéptido es un tramo de residuos de aminoácido de por lo menos aproximadamente 8 aminoácidos, por lo general al menos 10 aminoácidos, más generalmente al menos 12 aminoácidos, frecuentemente al menos 14 aminoácidos, más frecuentemente al menos 16 aminoácidos, típicamente al menos 18 aminoácidos, más típicamente al menos 20 aminoácidos, usualmente al menos 22 aminoácidos, más usualmente al menos 24 aminoácidos, de preferencia al menos 26 aminoácidos, de preferencia al menos 28 aminoácidos, y en modalidades particularmente preferidas, al menos alrededor de 30 aminoácidos o más. Las secuencias de segmentos de diferentes proteínas se pueden comparar una con otra sobre tramos de longitud apropiada. En muchas situaciones, los fragmentos pueden exhibir propiedades funcionales de las subunidades intactas, por ejemplo, el dominio extracelular del receptor de transmembrana puede retener las características de unión de ligando, y se puede usar para preparar un complejo soluble típico de receptor. La homología de secuencia de aminoácidos, o la identidad de secuencia, es determinada optimizando apareamientos de residuos. En algunas comparaciones se pueden introducir huecos, según se requiera. Véase, por ejemplo, Needleham y otros (1970), J. Mol. Biol. 48:443-453; Sankoff y otros (1983), capítulo 1 en "Time Warps, String Edits and Macromolecules: The Theory and Practice of Sequence Comparison", Addison-Wesley, Reading, Massachusetts; y paquetes de software de IntelliGenetics, Mountain View, California, y del grupo Genetics Computer Group (GCG) de la University of Wisconsin, Madison, Wisconsin; cada una de las cuales se incorpora aquí como referencia. Esto cambia cuando se consideran sustituciones conservativas como apareamientos. Las sustituciones conservativas incluyen típicamente sustituciones dentro de los siguientes grupos: glicina, alanina, valina, isoleucina, leucina; ácido aspártico, ácido glutámico; asparagina, glutamina; serina, treonina; lisina, arginina; y fenilalanina, tirosina. Se considera que las secuencias homologas de aminoácidos incluyen variaciones alélicas naturales y variaciones entre especies en la secuencia de citocina. Proteínas o péptidos homólogos típicos tendrán de 50 100% de homología (si se pueden introducir huecos), a 60 100% de homología (si se incluyen sustituciones conservativas) con un segmento de secuencia de aminoácidos del cuadro 1. Las mediciones de homología serán de por lo menos aproximadamente 70%, en general por lo menos 76%, más generalmente de por lo menos 81 %, frecuentemente por lo menos 85%, más frecuentemente de por lo menos 88%, típicamente por lo menos 90%, más típicamente de por lo menos 92%, usualmente por lo menos 94%, más usualmente de por lo menos 95%, de preferencia por lo menos 96%, y muy de preferencia de por lo menos 97%, y en modalidades particularmente preferidas, de por lo menos 96% o más. El grado de homología varía con la longitud de los segmentos comparados. Proteínas o péptidos homólogos, tales como las variantes alélicas, compartirán la mayoría de las actividades biológicas con las modalidades descritas en el cuadro 1 , particularmente la porción intracelular. Como se usa aquí, el término "actividad biológica" se usa para describir, sin limitación, efectos de señalización, respuestas inflamatorias, inmunidad innata, y/o desarrollo morfogénico por ligandos típicos de citocina. Por ejemplo, estos receptores deben mediar actividades de fosfatasa o fosforilasa; dichas actividades se miden fácilmente mediante procedimientos estándares. Véase, por ejemplo, Hardie y otros (eds. 1995) "The Protein Kinase FactBook" Vols. I y II, Academic Press, San Diego, California; Hanks y otros (1991) Meth. Enzymol. 200:38-62; Hunter y otros (1992) Cell 70:375-388; Lewin (1990) Cell 61 :743-752; Pines y otros (1991 ) Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 56:449-463; y Parker y otros (1993) Nature 363:736-738. Los receptores, o porciones de los mismos, pueden ser útiles como enzimas de marcación de fosfato para marcar substratos generales o específicos. Las subunidades también pueden ser ¡nmunógenos funcionales para evocar anticuerpos de reconocimiento o antígenos capaces de unirse a anticuerpos. Los términos ligando, agonista, antagonista y análogo de, por ejemplo, una petición de DCRS5, caracterizan interacciones ligando-receptor, por ejemplo, en donde el receptor es un receptor natural o un anticuerpo. Las respuestas celulares probablemente son mediadas a través de rutas de receptor de tirosina cinasa. También, un ligando es una molécula que sirve ya sea como un ligando natural al cual se une dicho receptor, o un análogo del mismo; o una molécula que es un análogo funcional del ligando natural. El análogo funcional puede ser un ligando con modificaciones estructurales, o puede ser una molécula completamente no relacionada que tiene una forma molecular que interacciona con los determinantes apropiados de unión de ligando. Los ligandos pueden servir como agonistas o antagonistas, véase, por ejemplo, Goodman y otros (eds., 1990) "Goodman & Gilman's: The Pharmacological Bases of Therapeutics", Pergamon Press, New York. El diseño racional de fármacos también se puede basar en estudios estructurales de las formas moleculares de un receptor o anticuerpo y otros efectores o ligandos. Véase, por ejemplo, Herz y otros (1997) J. Recept. Signal Transduct. Res. 17:671-776; y Chaiken y otros (1996) Trends Biotechnol. 14:369-375. Los efectores pueden ser otras proteínas que median otras funciones en respuesta a la unión de ligando, u otras proteínas que normalmente interaccionan con el receptor. Un medio para determinar los sitios que interaccionan con otras proteínas específicas, es una determinación de la estructura física, por ejemplo, cristalografía de rayos X o técnicas de RMN bidimensional. Estos darán una guía sobre cuales son los residuos de aminoácido que forman regiones de contacto molecular. Para una descripción detallada de determinación estructural de proteínas, véase, por ejemplo, Blundell y Johnson (1976) "Protein Crystalography", Academic Press, New York, que se incorpora aquí como referencia.

II. Actividades Las proteínas típicas de receptor de citocina tendrán varias actividades biológicas diferentes, por ejemplo, señalización intracelular por ejemplo a través de STAT4, modulación de la proliferación celular, o en el metabolismo del fosfato, siendo agregado o removido de substratos específicos, típicamente de proteínas. Esto por lo general dará como resultado la modulación de una función inflamatoria, otra respuesta inmune innata, o un efecto morfológico. La subunidad probablemente tendrá una unión a ligando con afinidad específica baja.

La DCRS5 tiene los motivos característicos de un receptor que señaliza a través de la ruta JAK. Véase, por ejemplo, Ihle y otros (1997) Stem Cells 15 (suplemento 1 ):105-111 ; Silvennoinen y otros (1997) APMIS 105:497-509; Levy (1997), Cytokine Growth Factor Review 8:81-90; Winston y Hunter (1996) Current Biol. 6:668-671 ; Barrett (1996) Baillieres Clin. Gastroenterol. 10:1-15; y Briscoe y otros (1996) Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 351 :167-171. Son de particular interés los motivos de unión de SH2 arriba descritos. Las actividades biológicas de las subunidades de receptor de citocina estarán relacionadas con la adición o remoción de porciones de fosfato a substratos, típicamente de una manera específica, pero ocasionalmente de una manera no específica. Los substratos se pueden identificar, o se pueden analizar las condiciones para la actividad enzimática, por medio de métodos estándares, por ejemplo como los describen Hardie y otros (eds., 1995) "The Protein Kinase FactBook", vols. I y II, Academic Press, San Diego, California; Hanks y otros (1991) Meth. Enzymol. 200:38-62; Hunter y otros (1992) Cell 70:375-388; Lewin (1990) Cell 61 :743-752; Pines y otros (1991) Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 56:449-463; y Parker y otros (1993) Nature 363:736-738. Las subunidades de receptor se pueden combinar para formar complejos funcionales, que pueden ser útiles por ejemplo para unión de ligando o preparación de anticuerpos. Estos tendrán usos diagnósticos sustanciales, incluyendo detección o cuantificación. El enlace funcional del receptor con el ligando p40/IL-B30, provee ideas importantes sobre las indicaciones clínicas para las que será de utilidad el receptor. De esta manera, los antagonistas y agonistas tendrán efectos funcionales predichos. lll. Ácidos nucleicos Esta invención contempla el uso de ácido nucleico aislado o fragmentos del mismo, por ejemplo que codifica estas proteínas o proteínas estrechamente relacionadas, o fragmentos de las mismas, por ejemplo para codificar un polipéptido correspondiente, preferiblemente uno que sea biológicamente activo. Además, esta invención cubre ADNs aislados o recombinantes que codifican combinaciones de dichas proteínas o polipéptidos que tienen secuencias características, por ejemplo de las DCRSds solas o en combinación con otras tales como una subunidad de IL-12Rß1 (véase Showe y otros (1996), Ann. N. Y. Acad. Sci., 795:413-425; Gately y otros (1998), Ann. Rev. Immunol. 16:495-521 ; GenBank U03187, NM:005535). Típicamente, el ácido nucleico es capaz de hibridar bajo condiciones apropiadas con un segmento de la secuencia de ácido nucleico mostrada en el cuadro 1 , pero preferiblemente no con un segmento correspondiente de otros receptores descritos en el cuadro 3. Dicha proteína o polipéptido biológicamente activo pueden ser una proteína de longitud completa, o fragmento, y tendrá típicamente un segmento de secuencia de aminoácidos altamente homologa, por ejemplo, exhibiendo tramos significativos de identidad, a la que se muestra en el cuadro 1. Además, esta invención cubre el uso de ácido nucleico aislado o recombinante, o fragmentos de los mismos, que codifican proteínas que tienen fragmentos que son equivalentes a las proteínas DCRS5, por ejemplo, porciones intracelulares. Los ácidos nucleicos aislados pueden tener secuencias reguladoras respectivas en los flancos 5' y 3', por ejemplo promotores, incrementadores, señales de adición de poli-A, y otras del gen natural. Como se describió, también se proveen combinaciones, por ejemplo combinando la DCRS5 con la IL-12Rß1 , o sus porciones extracelulares de unión de ligando, como antagonistas de ligando. Las utilidades diagnósticas también son claramente importantes, por ejemplo, de variantes polimórficas y otras variantes. Un ácido nucleico "aislado" es un ácido nucleico, por ejemplo un ARN, ADN o un polímero mixto, que está sustancialmente puro, por ejemplo separado de otros componentes que acompañan naturalmente una secuencia natural, tales como ribosomas, polimerasas y secuencias genómicas flanqueadoras de las especies donde se originan. El término abarca una secuencia de ácido nucleico que ha sido removida de su medio natural e incluye aislados de ADN recombinantes o clonados, que son así distinguibles de composiciones naturales, y análogos sintetizados químicamente o análogos sintetizados biológicamente por sistemas heterólogos. Una molécula sustancialmente pura incluye formas aisladas de la molécula, ya sea completamente o sustancialmente pura. Un ácido nucleico aislado será generalmente una composición homogénea de moléculas, pero en algunas modalidades contiene heterogeneidad, preferiblemente menor. Esta heterogeneidad se encuentra típicamente en los extremos del polímero o en porciones no críticas para una función o actividad biológica deseada. Un ácido nucleico "recombinante" se define típicamente por su método de producción o su estructura. En referencia a su método de producción, por ejemplo un producto hecho por medio de un procedimiento, el procedimiento es el uso de técnicas de recombinación de ácido nucleico, que incluyen por ejemplo la intervención humana en la secuencia de nucleótidos. Típicamente, esta intervención incluye manipulación in vitro, aunque bajo ciertas circunstancias puede incluir técnicas de reproducción animal más clásicas. Alternativamente, puede ser un ácido nucleico hecho generando una secuencia que comprende la fusión de dos fragmentos que no son naturalmente contiguos entre sí, pero se entiende que excluye productos naturales, por ejemplo mutantes naturales como se encuentran en su estado natural. De esta manera, por ejemplo, se abarcan productos hechos transformando células con un vector no natural, como son ácidos nucleicos que comprenden una secuencia derivada usando cualquier procedimiento de oligonucleótido sintético. Dicho procedimiento a menudo se hace para reemplazar, por ejemplo, un codón con un codón redundante que codifica el mismo aminoácido o un aminoácido conservativo, típicamente mientras se introduce o remueve un sitio de reconocimiento de secuencia de enzima de restricción, o para algún análisis de estructura-función. Alternativamente, el procedimiento se realiza para unir segmentos de ácido nucleico de funciones deseadas, para generar una sola entidad genética que comprende una combinación deseada de funciones no encontrada en las formas naturales comúnmente disponibles, por ejemplo codificar una proteína de fusión. Los sitios de reconocimiento de enzima de restricción son a menudo el blanco de dichas manipulaciones artificiales, pero se pueden incorporar en el diseño otros blancos específicos de sitio, por ejemplo promotores, sitios de replicación de ADN, secuencias de regulación, secuencias de control u otros rasgos característicos útiles. Se considera un concepto similar para un polipéptido recombinante, por ejemplo de fusión. Esto incluirá una repetición dimérica o fusión del DCRS5 con la subunidad IL-12Rß1. Se incluyen específicamente ácidos nucleicos sintéticos que, por redundancia del código genético, codifican polipéptidos equivalentes a fragmentos de DCRS5 y fusiones de secuencias de varias moléculas relacionadas diferentes, por ejemplo otros miembros de la familia de receptores de citocina. Un "fragmento" en el contexto de un ácido nucleico es un segmento contiguo de por lo menos aproximadamente 17 nucleófidos, por lo general por lo menos 21 nucleótidos, más generalmente por lo menos 25 nucleótidos, ordinariamente por lo menos 30 nucleótidos, más ordinariamente por lo menos 35 nucleótidos, a menudo por lo menos 39 nucleótidos, más frecuentemente por lo menos 45 nucleótidos, típicamente por lo menos 50 nucleótidos, más típicamente por lo menos 55 nucleótidos, usualmente por lo menos 60 nucleótidos, más usualmente por lo menos 66 nucleótidos, preferiblemente por lo menos 72 nucleótidos, más preferiblemente por lo menos 79 nucleótidos, y en modalidades particularmente preferidas, será de por lo menos 85 nucleótidos o más, incluyendo 90, 100, 120, 140, 160, 180, 200, etc. Típicamente, se pueden comparar fragmentos de diferentes secuencias genéticas unos con otros sobre tramos de longitud apropiada, particularmente segmentos definidos tales como los dominios descritos más abajo. Un ácido nucleico que codifica para la DCRS5 será particularmente útil para identificar genes, ARNm y especies de ADNc que codifican para las mismas proteínas o proteínas estrechamente relacionadas, así como también ADNs que codifican para variantes polimórficas, alélicas u otras variantes genéticas, por ejemplo de diferentes individuos o especies relacionadas. Las sondas preferidas para dichas selecciones son aquellas regiones del receptor que están conservadas entre diferentes variantes polimórficas, o que contienen nucleótidos que carecen de especificidad, y serán preferiblemente de longitud completa o casi completa. En otras situaciones serán más útiles las secuencias específicas de variantes polimórficas. También se pueden diagnosticar combinaciones de variantes polimórficas de DCRS5 con variantes de IL-12Rß1. Esta invención cubre además moléculas y fragmentos de ácido nucleico recombinante que tienen una secuencia de ácido nucleico idéntica o altamente homologa al ADN aislado que se indica en la presente. En particular, frecuentemente las secuencias estarán ligadas operativamente a segmentos de ADN que controlan la transcripción, traducción y replicación de ADN. Típicamente, estos segmentos adicionales ayudan a la expresión del segmento de ácido nucleico deseado. Las secuencias de ácido nucleico homologas o altamente idénticas, cuando se comparan entre sí, por ejemplo las secuencias de DCRS5, exhiben similitud significativa. Los estándares de homología en ácidos nucleicos son medidas de homología usadas generalmente en la técnica por comparación de secuencias, o están basados en las condiciones de hibridación. Más abajo se describen en mayor detalle condiciones de hibridación comparativas. Identidad sustancial en el contexto de comparación de secuencias de ácido nucleico, significa que los segmentos o sus cadenas complementarias sean idénticos cuando se comparan al estar alineadas óptimamente con inserciones o supresiones apropiadas de nucleótidos, a por lo menos aproximadamente 60% de los nucleótidos, generalmente por lo menos 66%, ordinariamente por lo menos 71%, frecuentemente por lo menos 76%, más frecuentemente por lo menos 80%, usualmente por lo menos 84%, más usualmente por lo menos 88%, típicamente por lo menos 91%, más típicamente por lo menos alrededor de 93%, preferiblemente por lo menos alrededor de 95%, más preferiblemente por lo menos alrededor de 96 a 98% o más, y en modalidades particulares, hasta aproximadamente 99% o más de los nucleótidos, incluyendo por ejemplo segmentos que codifican dominios estructurales u otros segmentos descritos. Alternativamente, existirá identidad sustancial cuando los segmentos hibriden bajo condiciones de hibridación selectivas con una cadena o su complemento, usando típicamente una secuencia derivada del cuadro 1. Típicamente ocurrirá hibridación selectiva cuando haya por lo menos aproximadamente 55% de homología sobre un tramo de por lo menos aproximadamente 14 nucleótidos, más típicamente por lo menos alrededor de 65%, preferiblemente por lo menos alrededor de 75%, y más preferiblemente por lo menos alrededor de 90%. Véase Kanehisa (1984) Nucí. Acids Res. 12:203-213, que se incorpora aquí como referencia. La longitud de comparación de homología, como se describe, puede ser sobre tramos más largos, y en ciertas modalidades será sobre un tramo de por lo menos aproximadamente 17 nucleótidos, generalmente por lo menos alrededor de 20 nucleótidos, ordinariamente por lo menos alrededor de 24 nucleófidos, usualmente por lo menos alrededor de 28 nucleótidos, típicamente por lo menos alrededor de 32 nucleótidos, más típicamente por lo menos alrededor de 40 nucleótidos, preferiblemente por lo menos alrededor de 50 nucleótidos, y de preferencia por lo menos alrededor de 75 a 100 nucleótidos o más. Esto incluye, por ejemplo, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, etc., y otras longitudes. Condiciones severas, en referencia a homología en el contexto de hibridación, serán condiciones severas combinadas de sal, temperatura, solventes orgánicos y otros parámetros controlados típicamente en reacciones de hibridación. Las condiciones severas de temperatura usualmente incluirán temperatura de más de aproximadamente 30°C, más usualmente más de aproximadamente 37°C, típicamente más de aproximadamente 45°C, más típicamente más de aproximadamente 55°C, de preferencia más de aproximadamente 65°C, y es muy preferido más de aproximadamente 70°C. Las condiciones severas de sal ordinariamente serán de menos de aproximadamente 500 mM, usualmente menos de aproximadamente 400 mM, más usualmente menos de aproximadamente 300 mM, por lo regular menos de aproximadamente 200 mM, de preferencia menos de aproximadamente 100 mM, y muy de preferencia menos de aproximadamente 80 mM, incluso más baja, hasta menos de aproximadamente 50 o 20 mM. Sin embargo, la combinación de parámetros es mucho más importante que la medida de cualquier parámetro solo. Véase, por ejemplo, Wetmur y Davidson (1968) J. Mol. Biol. 31 :349-370, que se incorpora aquí como referencia. El ADN aislado se puede modificar fácilmente mediante sustituciones de nucleótido, supresiones de nucleótido, inserciones de nucleótido e inversiones de tramos de nucleótido. Estas modificaciones dan como resultado secuencias novedosas de ADN que codifican esta proteína o sus derivados. Estas secuencias modificadas se pueden usar para producir proteínas mutantes (muteínas) o incrementar la expresión de especies variantes. El incremento de expresión puede incluir amplificación de gen, incremento de transcripción, incremento de traducción y otros mecanismos. Dicha DCRS5 mutante deriva del DCRS5 que se indicó arriba, pero tiene una secuencia de aminoácidos que difiere de otras proteínas típicas de receptor de citocina como se encuentran en la naturaleza, ya sea por medio de supresión, sustitución o inserción. En particular, "DCRS5 mutante específico de sitio" abarca una proteína que tiene identidad sustancial de secuencia con una proteína del cuadro 1 , y típicamente comparte la mayor parte de las actividades biológicas o efectos de las formas aquí descritas. También serán identificadas varias secuencias variantes polimórficas naturales. Aunque los sitios de mutación específica de sitio son predeterminados, no se requiere que los mutantes sean específicos de sitio. Se puede lograr mutagénesis de DCRS5 de mamífero haciendo inserciones o supresiones de aminoácido en el gen, acoplado con expresión. Se pueden generar sustituciones, supresiones, inserciones o muchas combinaciones para llegar a una construcción final. Las inserciones incluyen fusiones terminales amino o carboxi. Se puede realizar mutagénesis aleatoria en un codón blanco y después se pueden seleccionar los mutantes expresados de DCRS5 de mamífero de acuerdo con la actividad deseada, proveyendo algún aspecto de una relación estructura-actividad. Los métodos para hacer mutaciones de sustitución en sitios predeterminados en ADN que tiene una secuencia conocida, son bien conocidos en la técnica, por ejemplo, por medio de mutagénesis de iniciador M13. Véase también Sambrook y otros (1989) y Ausubel y otros (1987 y los suplementos periódicos). Construcciones particularmente útiles serán las porciones extracelulares de la DCRS5 asociadas con segmentos de IL-12Rß1. Las mutaciones en el ADN normalmente no deben colocar secuencias fuera de los marcos de lectura y preferiblemente no crearán regiones complementarias que se pudieran hibridar para producir estructura secundaria de ARNm, tal como lazos o horquillas. El método de fosforamidita descrito por Beaucage y Carruthers (1981 ), Tetra. Letts. 22:1859-1862, producirá fragmentos sintéticos de ADN adecuados. Frecuentemente se obtendrá un fragmento de doble cadena sintetizando la cadena complementaria y apareando la cadena bajo condiciones apropiadas o añadiendo la cadena complementaria usando ADN polimerasa con una secuencia iniciadora apropiada. Frecuentemente se pueden aplicar en mutagénesis técnicas de reacción en cadena de polimerasa (PCR). Alternativamente, los iniciadores de mutagénesis son métodos usados comúnmente para generar mutaciones definidas en sitios predeterminados. Véase, por ejemplo, Innis y otros (eds., 1990), "PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications", Academic Press, San Diego, California; y Dieffenbach y Dveksler (1995, eds.) "PCR Primer: A Loboratory Manual", Cold Spring Harbor Press, CSH, New York. Algunas modalidades de la invención están dirigidas a composiciones de combinación que comprenden las secuencias de receptor descritas. En otras modalidades, se pueden unir porciones funcionales de secuencias para codificar proteínas de fusión. En otras formas, se pueden sustituir con variantes de las secuencias descritas.

IV. Proteínas, péptidos Como se describió arriba, la presente invención abarca DCRS5 de primate, por ejemplo cuyas secuencias se presentan en el cuadro 1 y se describen arriba. También se contemplan variantes alélicas y otras variantes, incluyendo por ejemplo proteínas de fusión que combinan porciones de dichas secuencias con otras, incluyendo por ejemplo IL-12Rß1 , marcas de epítope y dominios funcionales. La presente invención también provee proteínas recombinantes, por ejemplo proteínas de fusión heterólogas, usando segmentos de estas proteínas de primate o roedor. Una proteína de fusión heteróloga es una fusión de proteínas o segmentos que naturalmente no están fusionadas normalmente de la misma forma. De esta manera, el producto de fusión de una DCRS5 con otro receptor de citocina es una molécula de proteína continua que tiene secuencias fusionadas en un enlace peptídico típico, hecho por lo regular como un solo producto de traducción y exhibiendo propiedades tales como secuencia o antigenicidad derivadas de cada péptido fuente. Se aplica un concepto similar a secuencias de ácido nucleico heterólogas. También se proveen combinaciones en complejos de varias proteínas diseñadas. Además, se pueden hacer construcciones nuevas combinando dominios funcionales o estructurales similares de otras proteínas relacionadas, por ejemplo receptores de citocina o receptores típicos de Toll, incluyendo variantes de especies. Por ejemplo, se pueden "intercambiar" segmentos de unión de ligando u otros segmentos entre diferentes polipéptidos o fragmentos de fusión nuevos. Véase, por ejemplo, Cunningham y otros (1989) Science 243:1330-1336; y O'Dowd y otros (1988) J. Biol. Chem. 263:15985-15992, cada una de las cuales se incorpora en la presente como referencia. De esta manera, del enlace funcional de especificidad de unión de receptor, resultarán polipéptidos quiméricos nuevos que exhiben nuevas combinaciones de especificidad. Por ejemplo, se pueden agregar los dominios de unión de ligando de otras moléculas de receptor relacionadas, o pueden reemplazar otros dominios de esta proteína u otras proteínas relacionadas. La proteína resultante tendrá a menudo función y propiedades híbridas. Por ejemplo, una proteína de fusión puede incluir un dominio de dirección que puede servir para secuestrar la proteína de fusión y llevarla a un organelo subcelular particular. Socios y secuencias de fusión candidatos se pueden seleccionar de varias bases de datos de secuencias, por ejemplo GenBank, también IntelliGenetics, Mountain View, California; y BCG, Biotechnology Computing Group de la University of Wisconsin, Madison, Wisconsin, que se incorporan aquí como referencia. En particular, las combinaciones de secuencias de polipéptido provistas en los cuadros 1 y 3 son particularmente preferidas. Formas variantes de las proteínas pueden reemplazar a las formas de las combinaciones descritas. La presente invención provee particularmente muteínas que se unen a ligandos típicos de citocina, y/o que son afectadas en la transducción de señal. La alineación estructural de DCRS5 de humano con otros miembros de la familia de receptores de citocina muestra rasgos característicos/residuos conservados. Véase el cuadro 3. La alineación de la secuencia de DCRS5 de humano con otros miembros de la familia de receptores de citocina indica varias características estructural y funcionalmente compartidas. Véase también Bazan y otros (1996) Nature 379:591 ; Lodi y otros (1994) Science 263:1762-1766; Sayle y Milner-White (1995) TIBS 20:374-376; y Gronenberg y otros (1991 ) Protein Engineering 4:263-269. Se prefieren particularmente las sustituciones con secuencias de ratón o secuencias de humano. A la inversa, sustituciones conservativas lejos de las regiones de interacción de unión de ligando, probablemente conservarán la mayoría de las actividades de señalización; y sustituciones conservativas lejos de los dominios intracelulares, probablemente conservarán la mayoría de las propiedades de unión. Los "derivados" de la DCRS5 de primate incluyen mutantes de secuencia de aminoácidos, variantes de glicosilación, derivados metabólicos y conjugados covalentes o agregados con otras porciones químicas. Los derivados covalentes se pueden preparar mediante enlace de funcionalidades a grupos que se encuentran en las cadenas laterales o en los extremos N de los aminoácidos de DCRS5, por ejemplo por medios que son bien conocidos en la técnica. Estos derivados pueden incluir, sin limitación, esteres alifáticos o amidas del extremo carboxilo, o de residuos que contienen cadenas laterales carboxilo, derivados O-acilo de residuos que contienen grupos hidroxilo, y derivados N-acilo de residuos que contienen grupos amino terminal, aminoácido o amino, por ejemplo lisina o arginina. Los grupos acilo se seleccionan del grupo de porciones alquilo que incluyen alquilo normal de C3 a C18, formando así especies alcanoil aroilo. En particular, se incluyen alteraciones de glicosilación hechas por ejemplo modificando los patrones de glicosilación de un polipéptido durante su síntesis y procesamiento, o en pasos de procesamiento ulteriores. Los medios particularmente preferidos para llevar a cabo esto son exponiendo el polipéptido a enzimas de glicosilación derivadas de células, que normalmente proveen dicho procesamiento, por ejemplo enzimas de glicosilación de mamífero. También se contemplan enzimas de desglicosilación. También se abarcan versiones de la misma secuencia primaria de aminoácidos que tienen otras modificaciones menores, incluyendo residuos de aminoácido fosforilado, por ejemplo fosfotirosina, fosfoserina o fosfotreonina. Un grupo mayor de derivados son los conjugados covalentes de los receptores o fragmentos de los mismos con otras proteínas o polipéptidos. Estros derivados se pueden sintetizar en cultivo recombinante tal como fusiones N-terminales, o mediante el uso de agentes conocidos en la técnica por su utilidad en entrelazamiento de proteínas a través de grupos laterales reactivos. Sitios de derivación preferidos con agentes de entrelazamiento están en grupos amino libres, porciones de carbohidrato y residuos de cisteína.

También se proveen polipéptidos de fusión entre los receptores y otras proteínas homologas o heterólogas. Los polipéptidos homólogos pueden ser fusiones entre diferentes receptores, dando como resultado, por ejemplo, una proteína híbrida que exhibe especificidad de unión para múltiples ligandos de citocina diferentes, o un receptor que puede tener especificidad ampliada o debilitada de efecto de substrato. Asimismo, se pueden construir fusiones heterólogas que exhibirían una combinación de propiedades o actividades de las proteínas derivadas. Ejemplos típicos son fusiones de un polipéptido reportero, por ejemplo luciferasa, con un segmento o dominio de un receptor, por ejemplo un segmento de unión a ligando, de modo que se pueda determinar fácilmente la presencia o localización de un ligando deseado. Véase por ejemplo Dull y otros, patente de E.U.A. No. 4,859,609, que se incorpora en la presente como referencia. Otros socios de fusión de gen incluyen glutatión-S-transferasa (GST), ß-galactosidasa bacteriana, trpE, Proteína A, ß-lactamasa, alfa-amilasa, alcohol deshidrogenasa y factor de apareamiento alfa de levadura. Véase, por ejemplo, Godowski y otros (1988) Science 241 :812-816. Las proteínas frecuentemente serán reemplazadas por proteínas marcadas en las combinaciones de proteínas descritas. Las asociaciones de la DCRS5 con la IL-12Rß1 son particularmente significativas, como se describe. El método de fosforoamidita descrito por Beaucage y Carruthers (1981 ), Tetra. Letts. 22:1859-1862, producirá fragmentos sintéticos de ADN adecuados. Frecuentemente se obtendrá un fragmento de doble cadena sintetizando la cadena complementaria y apareando la cadena bajo condiciones apropiadas o añadiendo la cadena complementaria usando ADN polimerasa con una secuencia iniciadora apropiada. Dichos polipéptidos también pueden tener residuos de aminoácido que se han modificado químicamente por fosforilación, sulfonación, biotinilación, o la adición o remoción de otras porciones, particularmente aquellas que tienen formas moleculares similares a grupos fosfato. En algunas modalidades, las modificaciones serán reactivos de marcación útiles, o servirán como blancos de purificación, por ejemplo ligandos de afinidad. Las proteínas de fusión típicamente serán hechas por métodos de ácido nucleico recombinante o por métodos sintéticos de polipéptido. Técnicas para manipulación y expresión de ácido nucleico se describen en general, por ejemplo, en Sambrook y otros (1989), "Molecular Cloning: A Laboratory Manual" (2a edición) vols. 1 3, Cold Spring Harbor Laboratory, y Ausubel y otros (1987 y suplementos periódicos) "Current Protocols in Molecular Biology", Greene/Wiley, New York, que se incorporan aquí como referencia. Las técnicas para la síntesis de polipéptidos se describen por ejemplo en Merrifield (1963), J. Amer. Chem. Soc. 85:2149-2156; Merrifield (1986) Science 232:341-347; y Atherton y otros (1989) "Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach" IRL Press, Oxford; cada uno de los cuales se incorpora aquí como referencia. Véase también Dawson y otros (1994), Science 266:776-779 para métodos de preparación de polipéptidos más grandes. Esta invención también contempla el uso de derivados de una DCRS5 diferentes de variaciones en la secuencia de aminoácidos o glicosilación. Dichos derivados pueden incluir asociación covalente o de agregación con porciones químicas. Estos derivados se clasifican generalmente en tres clases: (1 ) sales, (2) modificaciones covalentes terminales y de cadena lateral, y (3) complejos de adsorción, por ejemplo con membranas celulares. Dichos derivados covalentes o de agregación son útiles como inmunógenos, como reactivos en inmunoensayos o en métodos de purificación, tales como purificación de afinidad de un receptor u otra molécula de unión, por ejemplo un anticuerpo. Por ejemplo, un ligando de citocina se puede inmovilizar mediante unión covalente a un soporte sólido tal como Sepharose activado con bromuro de cianógeno, mediante métodos que son bien conocidos en la técnica, o se puede adsorber sobre superficies de poliolefina, con o sin entrelazamiento de glutaraldehído, para usar en el ensayo o purificación de un receptor de citocina, anticuerpos u otras moléculas similares. El ligando también se puede marcar con un grupo detectable, por ejemplo se puede radioyodar por medio del procedimiento de cloramina T, se puede unir covalentemente a quelatos de tierras raras, o se puede conjugar con otra porción fluorescente para usar en ensayos diagnósticos. Una combinación de esta invención, que incluye por ejemplo una DCRS5, se puede usar como un inmunógeno para la producción de antisuero o anticuerpos específicos, esto es, capaces de distinguir entre otros miembros de la familia de receptores de citocina, para las combinaciones descritas. Los complejos se pueden usar para seleccionar anticuerpos monoclonales o fragmentos de unión de antígeno preparados por inmunización con varias formas de preparaciones impuras que contienen la proteína. En particular, el término "anticuerpos" también abarca fragmentos de unión de antígeno de anticuerpos naturales, por ejemplo Fab, Fab2, Fv, etc. La DCRS5 purificada también se puede usar como un reactivo para detectar anticuerpos generados en respuesta a la presencia de niveles elevados de expresión, o a trastornos inmunológicos que conducen a la producción de anficuerpo para el receptor endógeno. Adicionalmente, los fragmentos de DCRS5 también sirven como inmunógenos para producir los anticuerpos de la presente invención, como se describe inmediatamente abajo. Por ejemplo, esta invención contempla anticuerpos que tienen afinidad de unión para las secuencias de aminoácidos mostradas en el cuadro 1 , fragmentos de las mismas, o varios péptidos homólogos, o que son desarrollados contra dichas secuencias. En particular, esta invención contempla anticuerpos que tienen afinidad de unión para fragmentos específicos, o que se han desarrollado contra dichos fragmentos, que se espera sean expuestos en la superficie exterior de proteína de la DCRS5 nativa. También serán de utilidad complejos de combinaciones de proteínas, y se pueden hacer preparaciones de anticuefo para las mismas. En algunas modalidades, construcciones solubles, por ejemplo de los segmentos de unión de ligando extracelulares de la DCRS5 con la IL- 12Rß1, pueden ser composiciones de unión para el ligando y pueden ser útiles como antagonistas de ligando o como antígenos para bloquear la señalización mediada por ligando. Esto puede ser útil ya sea diagnósticamente, por ejemplo para marcación histológica de ligando, o terapéuticamente, por ejemplo como antagonistas de ligando. El bloqueo de la respuesta fisiológica para los ligandos de receptor puede resultar de la inhibición de unión del ligando al receptor, probablemente a través de inhibición competitiva. De esta manera, los ensayos in vitro de la presente invención frecuentemente usarán anticuerpos o segmentos de unión de antígeno de estos anticuerpos, construcciones solubles de receptor, o fragmentos unidos a substratos de fase sólida. Estos ensayos también permitirán la determinación diagnóstica de los efectos de mutaciones y modificaciones de la región de unión a ligando, u otras mutaciones y modificaciones, por ejemplo que afectan la señalización o función enzimática. Esta invención también contempla el uso de ensayos de selección competitiva de fármaco, por ejemplo en donde anticuerpos neutralizantes para los complejos o fragmentos de receptor compiten con un compuesto de prueba para unirse a un ligando u otro anticuerpo. De esta manera, los anticuefos neutralizantes o fragmentos se pueden usar para detectar la presencia de un polipéptido que comparte uno o más sitios de unión para un receptor, y también pueden ser usados para ocupar sitios de unión sobre un receptor, que de otra manera se podrían unir a un ligando.

Las construcciones solubles de receptor que combinan los dominios extracelulares o de unión de ligando de la DCRS5 con IL-12Rß1 , pueden ser útiles antagonistas para unión competitiva del ligando p40/IL-B30.

V. Preparación de ácidos nucleicos v proteína Se puede obtener ADN que codifica la proteína o fragmentos de la misma mediante síntesis química, o seleccionando de colecciones de ADNc o seleccionando de colecciones genómicas preparadas de una amplia variedad de líneas celulares o muestras de tejido. Se pueden aislar secuencias naturales usando métodos estándares y las secuencias provistas en la presente, por ejemplo en el cuadro 1. Las contrapartes de otras especies se pueden identificar mediante técnicas de hibridación, o mediante varias técnicas de PCR, combinadas con, o buscando en bases de datos de secuencias, por ejemplo GenBank. Este ADN se puede expresar en una amplia variedad de células hospederas para la síntesis de un receptor de longitud completa, o fragmentos, que a su vez, por ejemplo, se pueden usar para generar anticuerpos policlonales o monoclonales; para estudios de unión; para construcción y expresión de unión de ligando modificada o dominios de cinasa/fosfatasa; y para estudios de estructura/función. Las variantes o fragmentos pueden ser expresadas en células hospederas que son transformadas o transfectadas con vectores de expresión apropiados. Estas moléculas pueden estar sustancialmente libres de proteína o contaminantes celulares, aparte de los derivados del hospedero recombinante, y por lo tanto son particularmente útiles en composiciones farmacéuticas cuando se combinan con un vehículo y/o diluyente farmacéuticamente aceptable. La proteína o porciones de la misma, puede ser expresada como fusiones con otras proteínas. Las combinaciones de las proteínas descritas, o los ácidos nucleicos que las codifican, son particularmente interesantes. Los vectores de expresión son típicamente construcciones de ADN o ARN autorreplicantes que contienen el gen del receptor deseado, sus fragmentos, o genes de combinación, usualmente ligados operativamente a elementos de control genético adecuados que son reconocidos en una célula hospedera adecuada. Estos elementos de control son capaces de efectuar la expresión dentro de un hospedero adecuado. Múltiples genes pueden ser expresados coordinadamente, y pueden estar en un mensaje policistrónico. El tipo específico de los elementos de control necesarios para efectuar la expresión dependerá de la célula hospedera final utilizada. Generalmente, los elementos de control genético pueden incluir un sistema de promotor procariótico o un sistema de control de expresión de promotor eucariótico, e incluyen típicamente un promotor de transcripción, un operador opcional para controlar el inicio de transcripción, ¡ncrementadores de transcripción para elevar el nivel de expresión de ARNm, una secuencia que codifica un sitio de unión de ribosoma adecuado, y secuencias que terminan la transcripción y la traducción. Los vectores de expresión también contienen usualmente un origen de replicación que permite al vector replicarse independientemente de la célula hospedera. Los vectores de esta invención incluyen aquellos que contienen ADN que codifica una combinación de proteínas, como se describió, o un polipéptido equivalente biológicamente acfivo. El ADN puede estar bajo el control de un promotor viral y puede codificar un marcador de selección. Esta invención contempla además el uso de dichos vectores de expresión que son capaces de expresar ADNcs eucarióticos que codifican para dichas proteínas en un hospedero procariótico o eucariótico, en donde el vector es compatible con el hospedero y en donde los ADNcs eucarióticos son insertados en el vector, de modo que el crecimiento del hospedero que contiene el vector expresa los ADNcs en cuestión. Usualmente, los vectores de expresión están diseñados para replicación estable en sus células hospederas, o para amplificación para incrementar en gran medida el número total de copias de los genes deseados por célula. No siempre es necesario que un vector de expresión se replique en una célula hospedera, por ejemplo, es posible efectuar expresión transitoria de la proteína o sus fragmentos en varios hospederos usando vectores que no contienen un origen de replicación que sea reconocido por la célula hospedera. También es posible usar vectores que ocasionen la integración de las porciones que codifican proteína en el ADN del hospedero por recombinación. Los vectores, como se usa aquí, comprenden plásmidos, virus, bacteriófagos, fragmentos integrables de ADN y otros vehículos que permiten la integración de fragmentos de ADN en el genoma del hospedero. Los vectores de expresión son vectores especializados que contienen elementos de control genético que efectúan la expresión de genes ligados operativamente. Los plásmidos son la forma usada mas comúnmente de vector, pero todas las otras formas de vectores que sirven para una función equivalente y que son conocidas en la técnica o se lleguen a conocer, son adecuadas para usar aquí. Por ejemplo, véase Pouwels y otros (1985 y suplementos) "Cloning Vectors: A Laboratory Manual", Elsevier, New York, y Rodríguez y otros (eds. 1988) "Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses", Buttersworth, Boston, que se incoforan aquí como referencia. Las células transformadas son células, preferiblemente de mamífero, que han sido transformadas o transfectadas con vectores construidos usando técnicas de ADN recombinante. Las células hospederas transformadas, usualmente expresan las proteínas deseadas, pero para fines de clonación, amplificación y manipulación de su ADN, no es necesario que expresen las proteínas presentes. Esta invención también contempla cultivar las células transformadas en un medio nutriente, permitiendo así la acumulación de las proteínas. Las proteínas se pueden recuperar, ya sea del cultivo o en ciertos casos del medio de cultivo. Para los fines de esta invención, las secuencias nucleicas están ligadas operativamente cuando están relacionadas funcionalmente entre sí. Por ejemplo, un ADN para una presecuencia o secuencia guía secretora se liga operativamente a un polipéptido si este es expresado como una preproteína o participa en la dirección del polipéptido hacia la membrana celular o en la secreción del polipéptido. Un promotor se liga operativamente a una secuencia codificadora si controla la transcripción del polipéptido; un sitio de unión de ribosoma se liga operativamente a una secuencia codificadora si está colocado para permitir la traducción. Usualmente, ligado operativamente significa contiguo y en el marco de lectura; sin embargo, ciertos elementos genéticos tales como genes represores no están ligados contiguamente pero aun así se unen a* secuencias operadoras que a su vez controlan la expresión. Las células hospederas adecuadas incluyen procariotes, eucariotes inferiores y eucariotes superiores. Los procariotes incluyen organismos tanto gram negativos como gram positivos, por ejemplo E. coli y B. subtilis. Los eucariotes inferiores incluyen levaduras, por ejemplo S. cerevisiae y Pichia, y especies del género Dictyostelium. Eucariotes superiores incluyen líneas de células de cultivo de tejido establecidas de células animales, tanto de origen no mamífero, por ejemplo células de insecto y aves, como de origen mamífero, por ejemplo humanos, primates y roedores. Los sistemas de vector de hospedero procariótico incluyen una amplia variedad de vectores para muchas especies diferentes. Como se usa aquí, E. coli y sus vectores se usarán genéricamente para incluir vectores equivalentes usados en otros procariotes. Un vector representativo para amplificar ADN es pBR322 o muchos de sus derivados. Los vectores que se pueden usar para expresar el receptor o sus fragmentos incluyen, sin limitación, vectores tales como los que contienen el promotor lac (serie pUC); promotor trp (pBR322trp); promotor Ipp (la serie pIN); promotores lambda pP o pR (pOTS); o promotores híbridos tales como ptac (pDR540). Véase Brosius y otros (1988) "Expression Vectors Employing Lambda, and Ipp derived Promoters", en "Vectors: A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses", (eds. Rodríguez y Denhardt), Buttersworth, Boston, Capítulo 10, pp. 205-236, que se incorpora aquí como referencia. Eucariotes inferiores, por ejemplo levaduras y Dictyostelium, pueden ser transformados con vectores que contienen la secuencia DCRS5. Para los fines de esta invención, el hospedero eucariótico inferior mas común es la levadura de pan, Saccharomyces cerevisiae. Será usada para representar genéricamente eucariotes inferiores, aunque también están disponibles varias otras cepas y especies. Los vectores de levadura consisten típicamente de un origen de replicación (excepto de tipo de integración), un gen de selección, un promotor ADN que codifica el receptor o sus fragmentos, y secuencias para terminación de traducción, poliadenilación, y terminación de transcripción. Los vectores de expresión adecuados para levadura incluyen promotores constitutivos tales como 3-fosfoglicerato cinasa y varios otros promotores de gen de enzima glicolítica o promotores inducibles tales como el promotor de alcohol deshidrogenasa 2 o promotor de metalotionina. Los vectores adecuados incluyen derivados de los siguientes tipos: auto-replicativos de bajo número de copias (tales como la serie YRp), auto- replicativos de alto número de copias (tales como la serie YEp); tipos de integración (tales como la serie Ylp), o minicromosomas (tales como la serie YCp). Las células eucarióticas superiores de cultivos de tejido son normalmente las células hospederas preferidas para la expresión de la interleucina o proteínas de receptor funcionalmente activas. En principio, funcionan muchas líneas celulares eucarióticas superiores en cultivos de tejido, por ejemplo sistemas de expresión de baculovirus de insecto, ya sea de una fuente de invertebrado o vertebrado. Sin embargo, se prefieren las células de mamífero. La transformación o transfección y propagación de dichas células se ha hecho un procedimiento de rutina. Ejemplos de líneas celulares útiles incluyen células HeLa, líneas celulares de ovario de hámster chino (CHO), líneas celulares de riñon de rata infantil (BRK), líneas celulares de insecto, líneas celulares de ave, y líneas celulares de mono (COS). Los vectores de expresión para dichas líneas celulares incluyen usualmente un origen de replicación, un promotor, un sitio de iniciación de traducción, sitios de empalme de ARN (si se usa ADN genómico), un sitio de poliadenilación, y un sitio de terminación de transcripción. Usualmente estos vectores también contienen un gen de selección o un gen de amplificación. Los vectores de expresión adecuados pueden ser plásmidos, virus o retrovirus, que llevan promotores derivados por ejemplo de fuentes tales como adenovirus, SV40, parvovirus, virus de vaccinia o citomegalovirus. Ejemplos representativos de vectores de expresión adecuados incluyen pCDNAl; pCD, véase Okayama y otros (1985) Mol. Cell Biol. 5:1142; pMCI neo PoIyA, véase Thomas y otros (1987) Cell 51 :503 512; y un vector de baculovirus tal como pAC373 o pAC610. Para proteínas secretadas y algunas proteínas de membrana, un marco de lectura abierto usualmente codifica un polipéptido que consiste de un producto maduro o secretado enlazado covalentemente en su extremo N con un péptido de señal. El péptido de señal es cortado antes de la secreción del polipéptido maduro o activo. El sitio de corte puede ser predicho con un alto grado de exactitud a partir de reglas empíricas, por ejemplo von-Heine (1986) Nucleic Acids Research 14:4683-4690 y Nilsen y otros (1997) Protein Eng. 10:1-12, y la composición precisa de aminoácidos del péptido señal frecuentemente no parece ser crítica para su función; por ejemplo véase Randall y otros (1989) Science 243:1156-1159; Kaiser y otros (1987) Science 235:310-317. Las proteínas maduras de la invención pueden ser determinadas fácilmente usando métodos estándares. Frecuentemente se buscara expresar estos polipéptidos en un sistema que provea un patrón de glicosilación específico o definido. En este caso, el patrón usual será el provisto naturalmente por el sistema de expresión. Sin embargo, el patrón será modificable exponiendo el polipéptido, por ejemplo una forma no glicosilada, a proteínas de glicosilación apropiadas introducidas en un sistema de expresión heterólogo. Por ejemplo, el gen del receptor puede ser cotransformado con uno o más genes que codifican enzimas de glicosilación de mamífero u otras. Usando este enfoque, serán obtenibles ciertos patrones de glicosilación de mamífero en células de procariote u otras células. La expresión en células de procariote conducirá típicamente a formas no glicosiladas de proteína. La fuente de DCRS5 puede ser un hospedero eucariótico o procariótico que expresa DCRS5 recombinante, tal como se describe arriba.

La fuente puede ser también una línea celular, pero también están contempladas por esta invención otras líneas celulares de mamífero, siendo la línea celular preferida la de especie humana. Ahora que se conocen las secuencias se puede preparar la DCRS5 de primate, fragmentos o derivados de la misma, por medio de procedimientos convencionales para síntesis de péptido. Estos incluyen procedimientos como los que describen Stewart y Young (1984) "Solid Phase Peptide Synthesis", Pierce Chemical Co, Rockford, Illinois; Bodanszky y Bodanszky (1984) "The Practice of Peptide Synthesis", Springer Verlag, New York; y Brodanszky (1984) "The Principies of Peptide Synthesis", Springer Verlag, New York; todas las cuales se incoforan aquí como referencia. Por ejemplo, se puede usar un procedimiento de azida, un procedimiento de cloruro de ácido, un procedimiento de anhídrido de ácido, un procedimiento de anhídrido mixto, un procedimiento de éster activo (por ejemplo éster de p-nitrofenilo, éster de N-hidroxisuccinimida, o éster de cianometilo), un procedimiento de carbodiimidazol, un procedimiento de óxido-reducción o un procedimiento aditivo de diciclohexilcarbodiimida (DCCD). Las síntesis en fase sólida y en fase de solución son aplicables a los procedimientos anteriores. Se pueden usar técnicas similares con secuencias parciales de DCRS5. Las proteínas DCRS5, sus fragmentos o sus derivados, son preparados adecuadamente de acuerdo con los procedimientos anteriores, como se usan típicamente en la síntesis de péptidos, generalmente mediante un procedimiento denominado por pasos, que comprende condensar un aminoácido con el aminoácido terminal, uno a uno en secuencia, o acoplando fragmentos de péptido al aminoácido terminal. Por lo regular, los grupos amino que no están siendo usados en la reacción de acoplamiento se deben proteger para impedir acoplamiento en una localización incorrecta. Si se adopta una síntesis en fase sólida, el aminoácido C-terminal se enlaza a un vehículo o soporte insoluble a través de su grupo carboxilo. El vehículo insoluble no está limitado particularmente en tanto tenga una capacidad de unión con un grupo carboxilo reactivo. Ejemplos de dichos vehículos insolubles incluyen resinas de halometilo, tales como resina de clorometilo o resina de bromometilo, resinas de hidroximetilo, resinas de fenol, resinas de ter-alquiloxicarbonilhidrazida, y similares. Para sintetizar el péptido paso a paso, un grupo aminoácido protegido se enlaza en secuencia por condensación de su grupo carboxilo activado y el grupo amino reactivo del péptido o cadena previamente formado. Después de sintetizar la secuencia completa, el péptido se separa del vehículo insoluble para producir el péptido. Este enfoque de fase sólida lo describen en general Merrifield y otros (1963) en J. Am. Chem. Soc. 85:2149 2156, que se incorpora en la presente como referencia. La proteína preparada y sus fragmentos se pueden aislar y purificar de la mezcla de reacción por medio de separación de péptido, por ejemplo, por extracción, precipitación, electroforesis, varias formas de cromatografía, inmunoafinidad y similares. Los receptores de esta invención se pueden obtener en varios grados de pureza, dependiendo de los usos deseados. La purificación se puede llevar a cabo mediante el uso de las técnicas de purificación de proteína que aquí se describen, véanse mas adelante, o mediante el uso de los anticuerpos que se describen en los métodos de cromatografía de afinidad de inmunoabsorbente. Esta cromatografía de afinidad de inmunoabsorbente se lleva a cabo enlazando primero los anticuerpos a un soporte sólido y después poniendo en contacto los anticuerpos enlazados con lisados solubilizados de células apropiadas, lisados de otras células que expresan el receptor, o lisados o sobrenadantes de células que producen la proteína como resultado de técnicas de ADN, véase mas adelante. Generalmente, la proteína purificada será por lo menos aproximadamente 40% pura, por lo regular por lo menos aproximadamente 50% pura, usualmente por lo menos alrededor de 60% pura, típicamente por lo menos alrededor de 70% pura, mas regularmente por lo menos alrededor de 80% pura, de preferencia por lo menos alrededor de 90% pura, y de preferencia por lo menos alrededor de 95% pura, y en modalidades particulares 97%-99% o más. La pureza usualmente será en base al peso, pero también puede estar en una base molar. Se aplicarán diferentes ensayos según sea apropiado. Las proteínas individuales se pueden purificar y después combinar.

VI. Anticuerpos Se pueden desarrollar anticuerpos para las diversas proteínas y fragmentos de DCRS5 de mamífero, por ejemplo de primate, tanto en formas naturales como en sus formas recombinantes, siendo la diferencia que los anticuerpos para el receptor activo mas probablemente reconocen epítopes que están presentes solamente en conformaciones naturales. También se contemplan anticuerpos que reconocen epítopes presentados por la combinación, por ejemplo funcionalmente, de la DCRS5 con la IL-12Rß1. La detección de antígeno desnaturalizado puede ser también de utilidad por ejemplo en análisis Western. También se contemplan anticuerpos anti-idiotípicos, que serían útiles como agonistas o antagonistas de un receptor natural o un anticuerpo. Se pueden desarrollar anticuerpos, incluyendo fragmentos de unión y versiones de una sola cadena, contra fragmentos predeterminados de la proteína, por medio de inmunización de animales con conjugados de los fragmentos con proteínas inmunogénicas. Se preparan anticuerpos monoclonales de células que secretan el anticuerpo deseado. Estos anticuerpos se pueden seleccionar para unión a proteína normal o defectuosa, o se pueden seleccionar para actividad agonista o antagonista. Estos anticuerpos monoclonales usualmente se unirán por lo menos con una KD de aproximadamente 1 mM, mas usualmente a por lo menos alrededor de 300 µM, típicamente por lo menos alrededor de 100 µM, mas típicamente por lo menos alrededor de 30 µM, de preferencia por lo menos alrededor de 10 µM, y de preferencia por lo menos alrededor de 3 µM, o más. Los anticuerpos, incluyendo fragmentos de unión de antígeno de esta invención, pueden tener valor diagnóstico o terapéutico significativo. Pueden ser potentes antagonistas que se unen al receptor e inhiben la unión con el ligando, o inhiben la capacidad del receptor para provocar una respuesta biológica, por ejemplo actuar sobre su substrato. También pueden ser útiles como anticuerpos no neutralizantes y se pueden acoplar a toxinas o radionúclidos para unirse a células productoras, o células localizadas para la fuente de la interleucina. Además, estos anticuerpos se pueden conjugar con fármacos u otros agentes terapéuticos directamente o indirectamente por medio de un enlazador. Los anticuefos de esta invención también pueden ser útiles en aplicaciones diagnósticas. Como anticuerpos de captura o no neutralizantes, se podrían unir al receptor sin inhibir la unión de ligando substrato. Como anticuerpos neutralizantes, pueden ser útiles en ensayos de unión competitiva. También pueden ser útiles en la detección o cuantificación de ligando. Se pueden usar como reactivos para análisis de Western blot, o para inmunoprecipitación o inmunopurificación de la proteína respectiva.

Asimismo, se pueden inmovilizar ácidos nucleicos y proteínas a substratos sólidos para métodos de purificación o detección de afinidad. Los substratos pueden ser por ejemplo glóbulos de resina sólida o láminas de plástico. Los fragmentos de proteína se pueden unir a otros materiales, particularmente polipéptidos, como polipéptidos fusionados o unidos covalentemente, para usar como inmunógenos. Los receptores de citocina de mamífero y sus fragmentos se pueden fusionar o enlazar covalentemente con una variedad de inmunógenos, tales como hemocianina de lapa, seroalbúmina de bovino, toxoide del tétanos, etc., véase "Microbiology", Hoeber Medical División, Harper and Row, 1969; Landsteiner (1962), "Specificity of Serological Reactions", Dover Publications, New York; y Williams y otros (1967) "Methods in Immunology and Immunochemistry", Vol. 1 , Academic Press, New York; cada una de las cuales se incorpora aquí como referencia para descripciones de métodos de preparación de antisuero policlonal. Un método típico implica hiperinmunización de un animal con un antígeno. Después, la sangre del animal se extrae brevemente después de las inmunizaciones repetidas y se aisla la gamma-globulina. En algunos casos es conveniente preparar anticuerpos monoclonales de varios hospederos mamíferos, tales como ratones, roedores, primates, humanos, etc. Se puede encontrar una descripción de las técnicas para preparar dichos anticuefos monoclonales, por ejemplo, en Stites y otros (eds.) "Basic and Clinical Immunology" (4a ed.), Lange Medical Publications, Los Altos, California, y referencias ahí citadas; Harlow y Lañe (1988) "Antibodies: A Laboratory Manual", CSH Press; Goding (1986), "Monoclonal Antibodies: Principies and Practice" (2a ed.) Academic Press, New York; y particularmente en Kohler y Miltein (1975) en Nature 256:495 497, que expone un método general para generar anticuerpos monoclonales. Cada una de estas referencias se incorpora aquí como referencia. Resumido brevemente, este método incluye inyectar un inmunógeno a un animal. Después se sacrifica el animal y se toman células de su bazo, que después se fusionan con células de mieloma. El resultado es una célula híbrida o "hibridoma" que es capaz de reproducirse in vitro. Después se examina la población de hibridomas para aislar clonas individuales, cada una de las cuales secreta una sola especie de anficuerpo para el inmunógeno. De esta manera, las especies de anticuerpo individual obtenidas son los productos de células B individuales inmortalizadas y clonadas del animal inmune, generados en respuesta a un sitio específico reconocido en la sustancia inmunogénica. Otras técnicas adecuadas incluyen la exposición in vitro de linfocitos a los polipéptidos antigénicos, o alternativamente la selección de colecciones de anticuerpos en fagos o vectores similares. Véase Huse y otros (1989) "Generation of a Large Combinatorial Library of the Immunoglobulin Repertoire in Phage Lambda", Science 246: 1275-1281 ; y Ward y otros (1989) Nature 341 :544-546, cada una de las cuales se incorpora aquí como referencia. Los polipéptidos y anticuerpos de la presente invención se pueden usar con o sin modificación, incluyendo anticuefos quiméricos o humanizados. Frecuentemente, los polipéptidos y anticuerpos estarán marcados mediante unión, covalente o no covalente, de una sustancia que provee una señal detectable. Se conoce una amplia variedad de marcas y técnicas de conjugación, y se reportan extensamente en la literatura científica y de patentes. Las marcas adecuadas incluyen radionúclidos, enzimas, substratos, cofactores, inhibidores, porciones fluorescentes, porciones quimioluminiscentes, partículas magnéticas y similares. Las patentes que enseñan el uso de dichas marcas incluyen las patentes de los E.U.A. Nos. 3,817,837; 3,850,752; 3,939,350; 3,996,345; 4,227,437; 4,275,149; y 4,366,241. También se pueden producir inmunoglobulinas recombinantes o quiméricas; véase Cabilly, patente de los E.U.A. No. 4,816,567; o se pueden preparar en ratones transgénicos, véase Méndez y otros (1997) Nature Genetics 15:146-156. Estas referencias se incorporan aquí como referencia. Los anticuerpos de esta invención también se pueden usar para cromatografía de afinidad en el aislamiento de proteínas o péptidos DCRS5. Se pueden preparar columnas en donde los anticuerpos se enlazan a un soporte sólido, por ejemplo partículas tales como agarosa, Sephadex, o similares, en donde un lisado celular se puede pasar a través de la columna, la columna se lava, seguido por concentraciones crecientes de un desnaturalizante suave, por medio de lo cual se puede liberar la proteína purificada. Alternativamente, la proteína se puede utilizar para purificar anticuerpo. Se pueden aplicar absorciones o supresiones cruzadas apropiadas.

Los anticuerpos también se pueden usar para examinar colecciones de expresión para seleccionar productos de expresión particulares. Usualmente, los anticuerpos usados en dicho procedimiento serán marcados con una porción que permite fácil detección de la presencia de antígeno por unión de anticuerpo. Los anticuerpos desarrollados contra un receptor de citocina también serán utilizados para desarrollar anticuerpos anti-idiotípicos. Esto será de utilidad en la detección o diagnosis de varias condiciones inmunológicas relacionadas con la expresión de la proteína o células que expresan la proteína. También serán de utilidad como agonistas o antagonistas del ligando, los cuales pueden ser inhibidores de receptor competitivos, o sustitutos de ligados naturales. Ciertos anticuefos para subunidades o combinaciones de receptor pueden servir como anficuerpos activadores, los cuales pueden efectuar señalización, sirviendo así por ejemplo como agonistas de ligando. Una proteína de receptor de citocina que se une específicamente, o que es específicamente inmunorreactiva con un anficuerpo generado contra un inmunógeno definido, tal como un inmunógeno que consiste de la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, es determinada típicamente en un inmunoensayo. Ei inmunoensayo utiliza típicamente un antisuero policlonal que fue desarrollado, por ejemplo, para una proteína de SEQ ID NO: 2. Este antisuero se selecciona para tener una baja reactividad cruzada contra otros miembros de la familia de receptores de citocina, por ejemplo la subunidad de receptor IL-12Rß2 o la subunidad de receptor de IL-6 gp130, preferiblemente de las mismas especies; y cualquier reactividad cruzada es removida por inmunoabsorción antes de usar en el inmunoensayo. Para producir antisuero para usar en un inmunoensayo, la proteína, por ejemplo de SEQ ID NO: 2, se aisla como se describe aquí. Por ejemplo, se puede ser producir proteína recombinante en una línea celular de mamífero. Se inmuniza un hospedero apropiado, por ejemplo una especie endogámica de ratones tal como Balb/c, con la proteína seleccionada, usando típicamente un adyuvante estándar tal como adyuvante de Freund, y un protocolo estándar de inmunización de ratón (véase Harlow y Lañe, mas arriba). Alternativamente, se puede usar como inmunógeno un péptido sintético derivado de las secuencias aquí descritas, y conjugarse con una proteína de vehículo. Se recolecta suero policlonal y se titula contra la proteína inmunogénica en un inmunoensayo, por ejemplo un inmunoensayo de fase sólida, con el inmunógeno inmovilizado sobre un soporte sólido. Se selecciona antisuero policlonal con un título de 104 o mayor, y se prueba su reactividad cruzada contra otros miembros de la familia de receptores de citocina, por ejemplo gp130 o IL-12Rß1, usando un ¡nmunoensayo de unión competitiva como el que describen Harlow y Lañe, mas arriba, en las páginas 570-573. Preferiblemente se usan por lo menos dos miembros de la familia de receptores de citocina en esta determinación. Estos miembros de la familia de receptores de citocina se pueden producir como proteínas recombinantes, y se pueden aislar usando técnicas estándares de biología molecular y de química de proteínas como se describe en la presente. Se pueden usar inmunoensayos en el formato de unión competitiva para determinaciones de reactividad cruzada. Por ejemplo, la proteína de SEQ ID NO: 2 puede ser inmovilizada en un soporte sólido. Las proteínas agregadas al ensayo compiten con la unión del antisuero al antígeno inmovilizado. La capacidad de las proteínas anteriores para competir con la unión del antisuero a la proteína inmovilizada se compara con la de las proteínas, por ejemplo de gp130 o IL-12Rß2. Se calcula el porcentaje de reactividad cruzada de las proteínas anteriores usando cálculos estándares. Los antisueros con menos de 10% de reactividad cruzada con cada una de las proteínas listadas arriba se seleccionan y se concentran. Los anticuerpos de reactividad cruzada se remueven entonces del antisuero concentrado por medio de inmunoabsorción con las proteínas arriba listadas. El antisuero inmunoabsorbido y concentrado se usa entonces en un inmunoensayo de unión competitiva como se describió arriba, para comprar una segunda proteína con la proteína inmunogénica (por ejemplo la proteína similar a DCRS5 de SEQ ID NO:2). Para hacer esta comparación, las dos proteínas se analizan en una amplia escala de concentraciones y se determina la cantidad requerida de cada proteína para inhibir 50% de la unión del antisuero a la proteína inmovilizada. Si la cantidad requerida de la segunda proteína es menor a dos veces la cantidad requerida de la proteína o proteínas seleccionadas, entonces se dice que la segunda protéína se une específicamente a un anticuerpo generado para el inmunógeno. Se entiende que estas proteínas de receptor de citocina son miembros de una familia de proteínas homologas que comprenden muchos genes identificados. Para un producto gen particular, tal como la DCRS5, el término se refiere no solo a las secuencias de aminoácidos descritas en la presente, sino también a otras proteínas que son variantes alélicas, no alélicas o de especies. También se entiende que los términos incluyen mutaciones no naturales introducidas por mutación deliberada usando tecnología recombinante convencional, tal como mutación en un solo sitio, o extirpando secciones cortas de ADN que codifican las proteínas respectivas, o sustituyendo con aminoácidos nuevos, o añadiendo nuevos aminoácidos. Dichas alteraciones menores típicamente mantienen sustancialmente la inmunoidentidad de la molécula original y/o su actividad biológica. De esta manera, estas alteraciones incluyen proteínas que son específicamente inmunorreactivas con una proteína DCRS5 designada natural. Las propiedades biológicas de las proteínas alteradas se pueden determinar expresando la proteína en una línea celular apropiada, y midiendo el efecto apropiado, por ejemplo sobre linfocitos transfectados. Las modificaciones de proteínas particulares consideradas como menores incluirían sustitución conservativa de aminoácidos con propiedades químicas similares, como se describe arriba para la familia de receptores de citocina en su conjunto. Alineando una proteína óptimamente con la proteína de los receptores de citocina y usando los inmunoensayos convencionales descritos en la presente para determinar la inmunoidentidad, se pueden determinar las composiciones de proteína de la invención. Además, los anticuerpos contra las subunidades de receptor pueden servir para bloquear estéricamente la unión de ligando con el receptor funcional. Dichos anficuerpos se pueden desarrollar para cualquier subunidad sola, o para la combinación de DCRS5 con IL-12Rß1. Resultarían antagonistas de anticuerpo.

Vil. Equipos, diagnosis v cuantificación Tanto las formas naturales como las formas recombinantes de las moléculas típicas de receptor de citocina de esta invención son particularmente útiles en equipos y métodos de ensayo. Por ejemplo, estos métodos serían aplicados también para examinar la actividad de unión, por ejemplo, ligados para estas proteínas. Se han desarrollado varios métodos de ensayos automáticos en los últimos años a fin de permitir el examen de decenas de miles de compuestos por año. Véase por ejemplo una estación de trabajo automática BIOMEK, de Beckman Instruments, Palo Alto, California, y Fodor y otros (1991) Science 251:767-773, que se incorpora aquí como referencia. Esta última describe medios para probar la unión por medio de una pluralidad de polímeros definidos sintetizados sobre un substrato sólido. El desarrollo de ensayos adecuados para examinar y seleccionar un ligando o proteínas homologas agonistas/antagonistas, puede facilitarse mucho por la disponibilidad de grandes cantidades de receptores de citocina solubles purificados en un estado activo, tales como los que son provistos por esta invención. La DCRS5 purificada se puede depositar directamente sobre placas para usar en las técnicas de selección de ligando antes mencionadas.

Sin embargo, se pueden usar anticuerpos no neutralizantes para estas proteínas como anticuerpos de captura para inmovilizar el receptor respectivo sobre la fase sólida, útiles por ejemplo en usos diagnósticos. Esta invención también contempla el uso de DCRS5, fragmentos de la misma, péptidos y sus productos de fusión en una variedad de equipos diagnósticos y métodos para detectar la presencia de la proteína o su ligando. Alternativamente, o adicionalmente, se pueden incorporar anticuerpos contra las moléculas en los equipos y métodos. Típicamente, el equipo tendrá un compartimiento que contiene un péptido DCRS5 o un segmento de gen o un reactivo que reconoce uno o el otro. Típicamente, reactivos de reconocimiento, en el caso de péptidos, serían un receptor o anticuerpo, o en el caso de un segmento de gen, usualmente sería una sonda de hibridación. Otros componentes del equipo pueden incluir otras proteínas o reactivos relacionados con los péptidos p40, IL-B30 o IL-12Rß1 del apareamiento ligando/receptor. Un equipo preferido para determinar la concentración de DCRS5 en una muestra, comprendería típicamente un compuesto marcado, por ejemplo ligando o anticuerpo, que tiene afinidad de unión conocida por DCRS5, una fuente de DCRS5 (natural o recombinante) como control positivo, y un medio para separar el compuesto marcado ligado del compuesto marcado libre, por ejemplo una fase sólida para inmovilizar la DCRS5 en la muestra de prueba. Normalmente se proveerán compartimientos que contienen reactivos e instrucciones. También se proveen equipos que contienen ácido nucleico o proteína adecuados. Los anticuerpos, incluyendo fragmentos de unión de antígeno, específicos para DCRS5 de mamífero, o un fragmento de péptido, o fragmentos de receptor, son útiles en aplicaciones diagnósticas para detectar la presencia de niveles elevados de ligando y/o sus fragmentos. Los ensayos diagnósticos pueden ser homogéneos (sin un paso de separación entre el reactivo libre y el complejo anticuerpo-antígeno) o heterogéneos (con un paso de separación). Existen varios ensayos comerciales, tales como radioinmunoensayo (RÍA), ensayo de inmunosorbente ligado a enzima (ELISA), inmunoensayo de enzima (ElA), técnica de ¡nmunoensayo multiplicado de enzima (EMIT), inmunoensayo fluorescente de substrato marcado (SLFIA) y similares. Por ejemplo, se pueden emplear anticuerpos no marcados usando un segundo anticuerpo que está marcado y que reconoce el anticuerpo para un receptor de citocina o para un fragmento particular del mismo. Estos ensayos también se han expuesto extensamente en la literatura. Véase por ejemplo Harlow y Lañe (1988) "Antibodies: A Laboratory Manual", CCSH., and Coligan (ed. 1991 , y suplementos periódicos) "Current Protocols In Immunology" Greene/Wiley, New York.

Anticuerpos anti-idiotípicos pueden tener uso similar para servir como agonistas o antagonistas de receptores de citocina. Estos deben ser útiles como reactivos terapéuticos bajo circunstancias apropiadas. Frecuentemente, los reactivos para ensayos diagnósticos son suministrados en equipos, a fin de optimizar la sensibilidad del ensayo. Para la presente invención, dependiendo de la naturaleza del ensayo, el protocolo y la marcación, se provee anticuerpo marcado o no marcado, o ligando marcado. Esto es usualmente en conjunto con otros aditivos, tales como amortiguadores, estabilizadores, materiales necesarios para la producción de señal tales como substratos para enzimas, y similares. Preferiblemente, el equipo también contendrá instrucciones para uso y desecho apropiado del contenido después de usar. Típicamente, el equipo tiene compartimientos para cada reactivo útil, y contendrá instrucciones para el uso y desecho apropiado de los reactivos. Convenientemente, los reactivos están provistos como un polvo liofilizado seco, en donde los reactivos pueden ser reconstituidos en un medio acuoso que tiene concentraciones apropiadas para realizar el ensayo. Los constituyentes antes mencionados de los ensayos diagnósticos se pueden usar sin modificación o pueden ser modificados de diferentes formas. Por ejemplo, se puede lograr marcación uniendo covalentemente o no covalentemente una porción que provea directamente o indirectamente una señal detectable. En muchos de estos ensayos, se puede marcar un compuesto de prueba, receptor de citocina o anticuerpos para el mismo, ya sea directamente o indirectamente. Las posibilidades para marcación directa incluyen grupos de marca: radiomarcas tales como 125l, enzimas (patente de los E.U.A. No. 3,645,090) tales como peroxidasa y fosfatasa alcalina, y marcas fluorescentes (patente de los E.U.A. No. 3,940,475) capaces de monitorear el cambio de intensidad de fluorescencia, desviación de longitud de honda o polarización de fluorescencia. Ambas patentes se incorporan aquí como referencia. Las posibilidades para marcación indirecta incluyen biotinilación del constituyente, seguido por unión a avidina acoplada a uno de los grupos de marcación anteriores. También hay muchos métodos de separación del ligando unido del ligando libre, o alternativamente el ligando unido del compuesto de prueba libre. El receptor de citocina puede ser inmovilizado sobre varias matrices seguido por lavado. Las matrices adecuadas incluyen plástico tal como una placa de ELISA, filtros y glóbulos. Los métodos para inmovilizar el receptor a una matriz incluyen, sin limitación, adhesión directa a plástico, el uso de un anticuerpo de captura, acoplamiento químico y biotina avidina. El último paso en este enfoque incluye la precipitación de complejo anticuerpo/antígeno por medio de cualquiera de varios métodos que incluyen los que utilizan, por ejemplo, un solvente orgánico tal como polietilenglicol o una sal tal como sulfato de amonio. Otras técnicas de separación adecuadas incluyen, sin limitación, el método de partícula magnetizable de anticuerpo de fluoresceína descrito por Rattle y otros (1984) Clin. Chem. 30(9):1457 1461 , y la doble separación de partícula magnética de anticuerpo como se describe en la patente de los E.U.A. NO. 4,659,678, cada una de las cuales se incorpora aquí como referencia. Los métodos para ligar proteínas o fragmentos a varias marcas han sido reportados extensamente en la literatura y no requieren discusión detallada en la presente. Muchas de las técnicas incluyen el uso de grupos carboxilo activos, ya sea través del uso de carbodiimida o de esteres activos para formar enlaces peptídicos; la formación de tioéteres por reacción de un grupo mercapto con un halógeno activado tal como cloroacetilo; o una olefina activada tal como maleimida para enlace, o similares. Las proteínas de fusión también encontrarán uso en estas aplicaciones. Otro aspecto diagnóstico de esta invención incluye el uso de secuencias de oligonucleótido o polinucleótido tomadas de las secuencias de un receptor de citocina. Estas secuencias se pueden usar como sondas para detectar niveles del respectivo receptor de citocina en pacientes sospechosos de tener un trastorno inmunológico. La preparación de secuencias de nucleótidos de ARN y ADN, la marcación de las secuencias y el tamaño preferido de las secuencias, han recibido amplia descripción y exposición en la literatura. Normalmente, una sonda de oligonucleótido tendría por lo menos alrededor de 14 nucleótidos, usualmente por lo menos alrededor de 18 nucleótidos, y las sondas de polinucleótido pueden ser de hasta varias kilobases. Se pueden emplear varias marcas, mas comúnmente radionúclidos, particularmente 32P. Sin embargo, también se pueden emplear otras técnicas, por ejemplo usando nucleótidos modificados con biotina para introducción en un polinucleótido. La biotina sirve entonces como el sitio de unión de avidina o anticuerpos, que puede ser marcado con una amplia variedad de marcas, tales como radionúclidos, fluorescentes, enzimas o similares. Alternativamente, se pueden emplear anticuerpos que pueden reconocer cadenas dobles específicas, incluyendo cadenas dobles de ADN, cadenas dobles de ARN, cadenas dobles híbridas de ADN y ARN, o cadenas dobles de ADN y proteínas. Los anticuerpos a su vez se pueden marcar y el ensayo se puede llevar a cabo cuando la cadena doble se enlaza a una superficie, a fin de que después de la formación de la cadena doble en la superficie, pueda ser detectada la presencia de anticuerpo unido a la cadena doble. El uso de sondas para el ARN de antisentido novedoso se puede llevar a cabo en técnicas convencionales tales como hibridación de ácido nucleico, selección mas y menos, sondeo recombinante, traducción de híbrido liberado (HRT), y traducción de híbrido detenida (HART). Esto incluye también técnicas de amplificación tales como reacción en cadena de polimerasa (PCR). También están contemplados los equipos diagnósticos que también analizan la presencia cualitativa o cuantitativa de otros marcadores. La diagnosis o prognosis puede depender de la combinación de indicaciones múltiples usadas como marcadores. De esta manera, los equipos pueden probar combinaciones de marcadores. Véase por ejemplo Viallet y otros (1989) "Progress in Growth Factor Res." 1 :89-97. La detección de variaciones polimórficas, que puede reflejar diferencias funcionales de señalización de receptor, puede ser útil en la determinación de la estrategia terapéutica. Las variaciones que reflejan mayor o menor respuesta a ligando pueden permitir la subclasificación de conjuntos de pacientes sensibles /no sensibles.

VIII. Utilidad terapéutica Esta invención provee reactivos con valor terapéutico significativo. Véase por ejemplo Levitzki (1996), Curr. Opin. Cell Biol. 8:239-244. Los receptores de citocina (naturales o recombinantes), fragmentos de los mismos, receptores de muteína y anticuerpos, junto con compuestos identificados por tener afinidad de unión con los receptores o anticuerpos, serían útiles en el tratamiento de condiciones que exhiben expresión anormal de los receptores o sus ligandos. Dicha anormalidad será manifestada típicamente por trastornos inmunológicos. Véase WO 01/18051 , que se incorpora aquí como referencia. Adicionalmente, esta invención proveería valor terapéutico en varias enfermedades o trastornos asociados con la expresión anormal o la activación anormal de respuesta al ligando. Por ejemplo, se ha sugerido que el ligando p40/IL-B30 está involucrado en el desarrollo de inmunidad mediada por células, por ejemplo actividad antitumoral, montaje de inmunidad humoral y celular, y efectos antivirales. En particular, parece que el ligando activa células NK y T. La terapia se puede combinar con terapia de IL-18, IL-12. TNF, IFN?, terapia de radiación/quimioterapia, adyuvantes o compuestos antitumorales, antivirales o antihongos.

Contrariamente, los antagonistas, que se pueden combinar con antagonistas de TNF, IFN?, IL-18, o IL-12, o con IL-10 o esteroides, pueden estar indicados en enfermedades crónicas mediadas por Th1 , autoinmunidad o situaciones de transplante y/o rechazo, esclerosis múltiple, psoriasis, condiciones inflamatorias crónicas, artritis reumatoide, osteoartritis o enfermedades inflamatorias del intestino. Los antagonistas pueden tomar la forma de anticuerpos contra las subunidades de receptor, construcciones solubles de receptor o ácidos nucleicos de antisentido para una o más de las subunidades de receptor. El apareamiento del ligando p40/IL-B30 con las subunidades de receptor DCRS5 y IL-12Rß1 , provee una idea de las indicaciones para usar los agonistas y antagonistas. Terapéuticamente, en base a las actividades descritas de p40/IL-B30, pueden ser efectuados antagonistas de la citocina, por ejemplo mediante DCRS5 soluble, con o sin IL-12Rß1 soluble, o anticuerpos para cualquier subunidad del receptor. Los antagonistas pueden ser útiles como inhibidores de respuestas inmunes o inflamatorias indeseables, para células T de memoria objetivo, o en combinación con antagonistas de IL-12/IL-12R u otros antiinflamatorios o inmunosupresores. Las indicaciones clínicas pueden ser inflamación crónica o situaciones de transplante. Varios polimorfismos pueden incrementar o disminuir la función del receptor, y si son dominantes, podrían ser de utilidad como terapéuticos. La identificación de dichas variantes permitiría la subclasificación de conjuntos de pacientes sensibles y no sensibles. Los reactivos pueden ser útiles como reactivos de detección o marcación o reactivos de ablación para células T de memoria y/o células NK. La terapia génica puede hacer poblaciones celulares deseadas sensibles a ligando p40/IL-B30, por ejemplo, como adyuvantes para inmunoterapia de tumor, para facilitar la activación de linfocitos de infiltración de tumor, células T o células NK. Se pueden aplicar estrategias de antisentido, por ejemplo para prevenir la sensibilidad al receptor. Por medio de análisis Northern blot se ha visto que varias condiciones anormales que son conocidas en tipos celulares muestran la producción tanto de ARNm de IL-12 p40 como de IL-B30. Véase Berkow (ed.) "The Merck Manual of Diagnosis and Therapy", Merck & Co., Rahway, New Jersey; Thorn y otros "Harrison's Principies of Intemal Medicine", McGraw-Hill, New York; y Weatherall y otros (eds.) "Oxford Textbook of Medicine", Oxford University Press, Oxford. Muchas otras condiciones médicas y enfermedades serán sensibles al tratamiento con un agonista o antagonista provisto en la presente. Véase por ejemplo Stites y Terr (eds.; 1991 ) "Basic and Clinical Immunology" Appleton and Lange, Norwalk, Connecticut; y Samter y otros (eds.) "Immunological Diseases" Little, Brown and Co.. Otras probables indicaciones de tratamiento incluyen remodelación de hueso, disfunción sexual, prevención de enfermedades degenerativas, demencia, estrés y otras. Estos problemas serían susceptibles de prevención o tratamiento usando las composiciones aquí provistas.

Receptores de citocina recombinantes, muteínas, anticuerpos agonistas o antagonistas para los mismos, o anticuerpos, se pueden purificar y después administrar a un paciente. Estos reactivos se pueden combinar para uso terapéutico con ingredientes activos adicionales, por ejemplo en vehículos o diluyentes convencionales farmacéuticamente aceptables, junto con estabilizadores y excipientes fisiológicamente innocuos. Estas combinaciones pueden ser estériles, por ejemplo filtradas, y se pueden colocar en formas dosificadas para liofilización en frascos de dosis o almacenarse en preparaciones acuosas estabilizadas. Esta invención también contempla el uso de anticuerpos o fragmentos de unión de los mismos que no son de unión de complemento. Se puede realizar selección de ligando usando receptor de citocina o fragmentos del mismo para identificar moléculas que tienen afinidad de unión para los receptores. Después se pueden utilizar ensayos biológicos subsecuentes para determinar si un ligando putativo puede proveer unión competitiva, que puede bloquear actividad estimuladora intrínseca. Se pueden usar fragmentos de receptor como un bloqueador o antagonista que bloquea la actividad del ligando. Asimismo, un compuesto que tiene actividad estimuladora intrínseca puede activar el receptor y de esta manera es un agonista ya que estimula la actividad de ligando, por ejemplo induciendo señalización. Esta invención contempla además el uso terapéutico de anticuerpos para receptores de citocina como antagonistas.

Las cantidades de reactivos necesarios para terapia efectiva dependerán de muchos factores diferentes, incluyendo los medios de administración, el sitio objetivo, la vida fisiológica del reactivo, la vida farmacológica, el estado fisiológico del paciente y otros medicamentos administrados. De esta manera, las dosis de tratamiento deben ser tituladas para optimizar la seguridad y eficacia. Típicamente, las dosis usadas in vitro pueden proveer una guía útil de las cantidades útiles para administración in situ de estos reactivos. El análisis en animales de dosis efectivas para tratamiento de trastornos particulares, proveerá indicación predictiva adicional de la dosificación para humanos. Se describen varias consideraciones, por ejemplo, en Gilman y otros (eds., 1990) "Godman and Gilman's The Pharmacological Bases of Therapeutics", 8a edición, Pergamon Press; y "Remington's Pharmaceutical Sciences", 17a edición (1990), Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania; cada una de las cuales se incorpora aquí como referencia. Métodos para administración se exponen ahí mismo y más adelante, por ejemplo para administración oral, intravenosa, intraperitoneal o intramuscular, difusión transdérmica y otros. Los vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen agua, solución salina, soluciones amortiguadoras y otros compuestos que se describen por ejemplo en el "Merck Index", Merck|& Co., Rahway, New Jersey. Debido a la afinidad de unión o números de recambio probablemente altos entre un ligando putativo y sus receptores, sería de esperar inicialmente que dosis bajas de estos reactivos fueran efectivas. Y la ruta de señalización sugiere que cantidades extremadamente bajas de ligando pueden tener efecto. De esta manera, ordinariamente se esperaría que las escalas de dosificación estén en cantidades menores de 1 mM, típicamente concentraciones menores de aproximadamente 10 µM, usualmente menores de aproximadamente 100 nM, de preferencia menores de aproximadamente 10 pM (picomolar), y muy preferiblemente menores de aproximadamente 1 fM (femtomolar), con un vehículo apropiado. Las formulaciones de liberación lenta, o aparatos de liberación lenta serán utilizadas frecuentemente para administración continua. Los receptores de citocina, fragmentos de los mismos y, anticuerpos o sus fragmentos, antagonistas y agonistas, se pueden administrar directamente al hospedero por tratar o, dependiendo del tamaño de los compuestos, puede ser conveniente conjugarlos con proteínas vehículo tales como ovoalbúmina o seroalbúmina antes de su administración. Las formulaciones terapéuticas se pueden administrar en muchas formulaciones de dosis convencionales. Aunque es posible que el ingrediente activo sea administrado solo, de preferencia está presente como una formulación farmacéutica. Las formulaciones comprenden por lo menos un ingrediente activo, como se definió arriba, junto con un o más vehículos aceptables del mismo. Cada vehículo debe ser tanto farmacéuticamente como fisiológicamente aceptable en el sentido de ser compatible con los otros ingredientes y no nocivo para el paciente. Las formulaciones incluyen aquellas adecuadas para administración oral, rectal, nasal, o parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa e intradérmica). Las formulaciones se pueden presentar convenientemente en forma de dosis unitaria y se pueden preparar mediante métodos bien conocidos en la técnica de farmacia. Véase por ejemplo Gilman y otros (eds. 1990) "Goodman and Gilman's: The Pharmacological Bases of Therapeutics", 8a ed., Pergamon Press; y "Remington's Pharmaceutical Sciences", 17a ed. (1990), Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania; Avis y otros (eds. 1993) "Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications" Dekker, New York; Lieberman y otros (eds. 1990) "Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets" Dekker, New York; y Lieberman y otros (eds. 1990) "Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems" Dekker, New York. La terapia de esta invención puede ser combinada o usada en asociación con otros agentes terapéuticos, particularmente agonistas o antagonistas de otros miembros de la familia de receptores de citocina.

IX. Selección Se puede realizar una selección de fármacos usando DCRS5 o fragmentos del mismo para identificar compuestos que tiene afinidad de unión para la subunidad de receptor, incluyendo aislamiento de componentes asociados. Después se pueden utilizar ensayos biológicos subsecuentes para determinar si el compuesto tiene actividad estimuladora intrínseca y si por lo tanto es un bloqueador o antagonista que bloquea la actividad del ligando. Además, el apareamiento del ligando p40/IL-B30 con el receptor funcional de DCRS3 con IL-12Rß1, permite seleccionar antagonistas y agonistas con un control de señalización positivo. Se puede hacer selección de anticuerpo o molécula pequeña. Un método de selección de fármacos utiliza células hospederas eucarióticas o procarióticas que son transformadas establemente con moléculas de ADN recombinante que expresan la DCRS5, en combinación con otra subunidad de receptor de citocina, por ejemplo la IL-12Rß1. Se cree que la señalización usa STAT4. Se pueden aislar las células que expresan un receptor en aislamiento de otros receptores funcionales. Dichas células, ya sea en forma viable o fija, se pueden usar para ensayos estándares de unión anticuerpo/antígeno o ligando/receptor. Véase también Parce y otros (1989) Science 246:243-247; y Owicki y otros (1990) Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 87:4007-4011 , que describen métodos sensibles para detectar respuestas celulares. Los ensayos competitivos son particularmente útiles, en donde las células se ponen en contacto y se incuban con un receptor o anticuerpo marcado que tiene afinidad de unión conocida para el ligando, tal como 125l-anticuerpo, y una muestra de prueba cuya afinidad de unión a la composición de unión se está midiendo. Después se separan las composiciones de unión marcadas libres y enlazadas para determinar el grado de unión del ligando. La cantidad de compuesto de prueba enlazado es inversamente proporcional a la cantidad de unión de receptor marcado a la fuente conocida. Se pueden usar muchas técnicas para separar ligando enlazado de ligando libre para determinar el grado de unión de ligando. Este paso de separación podría incluir típicamente un procedimiento tal como adhesión a filtro, seguido por lavado, adhesión a plástico seguido por lavado, o centrifugación de las membranas celulares. Las células viables también se podrían usar para explorar los efectos de fármacos sobre funciones mediadas por citocina, por ejemplo, señalización de STAT4 y otras. Algunos métodos de detección permiten la eliminación de un paso de separación, por ejemplo un sistema de detección sensible a cercanía. El amplio alcance de esta invención se entiende mejor con referencia a los siguientes ejemplos, que no pretenden limitar la invención a las modalidades específicas.

EJEMPLOS I. Métodos generales Algunos de los métodos estándares se describen o refieren por ejemplo en Maniatis y otros (1982) "Molecular Cloning, A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Press; Sambrook y otros (1989) "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", (2a ed.), vols. 1-3, CSH Press, New York; o Ausubel y otros (1987 y suplementos) "Current Protocols in Molecular Biology", Greene/Wiley, New York. Los métodos para purificación de proteína incluyen métodos tales como precipitación con sulfato de amonio, cromatografía en columna, electroforesis, centrifugación, cristalización y otros. Véase por ejemplo Ausubel y otros (1987 y suplementos periódicos); Coligan y otros (ed. 1996), y suplementos periódicos, "Current Protocols In Protein Science" Greene/Wiley, New York; Deutscher (1990) "Guide to Protein Purification" en Methods in Enzymology, vol 182, y otros volúmenes de esta serie; y la literatura de los fabricantes sobre el uso de productos de purificación de proteína, por ejemplo Pharmacia, Piscataway, New Jersey, o Bio-Rad, Richmond, California. La combinación con técnicas recombinantes permite la fusión con segmentos apropiados, por ejemplo a una secuencia FLAG o un equivalente, que se puede fusionar mediante una secuencia de proteasa removible. Véase por ejemplo Hochuli (1990) "Purification of Recombinant Proteins with Metal Chelate Absorbent" en Setlow (ed.) "Genetic Engineering, Principie and Methods" 12:87-98, Plenum Press, New York; y Crowe y otros (1992) "QIAexpress: The High Level Expression & Protein Purification System" QUIAGEN, Inc., Chastsworth, California. Se realiza análisis de secuencia por computadora usando por ejemplo programas de software disponible que incluyen los de las fuentes GCG (U. Wisconsin) y GenBank. También se usaron bases de datos de secuencias públicas, por ejemplo de GenBank y otros. Muchas técnicas aplicables a receptores de IL-10 se pueden aplicar a la DCRS5, como se describe por ejemplo en la patente de los E.U.A. No. 5,789,192 (receptor IL-10), que se incorpora en la presente como referencia.

II. Clonación funcional Se observó que el anticuerpo anti-hlL-12Rß1 bloqueó respuestas de células T humanas para p40/IL-B30, y la p40/IL-B30 se enlazó a IL-12Rß1. Esto sugirió que IL-12Rß1 era una subunidad del complejo de receptor para p40/IL-B30. Se identificó una población de células T de ratón que respondió a p40/IL-B30, pero no a IL-12, y otra población que respondió a IL-12 pero no a p40/IL-B30. Además, se observó que células Ba/F3 que expresan mlL-12Rß1 y mlL-12Rß2 recombinantes, respondieron a IL-12, pero no a p40/IL-B30. Estos resultados indican colectivamente que el complejo de receptor para p40/IL-B30, contenía la IL-12Rß1 y por lo menos otra subunidad que no era IL-12Rß2. Por consiguiente, se diseñó una estrategia de clonación de expresión para aislar este segundo componente de receptor. Se preparó una colección de ADNc a partir de ARNm aislado de células Kit225, una línea de células T humanas dependientes de IL-2, que responde tanto IL-12 como a p40/IL-B30. La colección de ADNc se hizo usando un vector de expresión retroviral, pMX. Células Ba/F3 que expresan hlL-12Rß1 recombinante fueron infectadas con esta colección de ADNc; se les dejó recuperar 3-4 días en IL-3, entonces se lavaron y sembraron en placa a -15,000 células/pozo en placas de 96 pozos en medio conteniendo 50 ng/ml de hiper-hp40/hlL-B30. Véase WO 01/18051. Los cultivos se suplementaron cada ~5 días con mas hiper-hp40/IL-B30. Después de aproximadamente dos semanas, 5-10% de los pozos exhibieron crecimiento de células. Las células se recuperaron de cada pozo, se expandieron individualmente en cultivos más grandes en hiper-hp40/hlL-B30, y se analizó su dependencia de crecimiento con respecto a hiper-hp40/hlL-B30. Las células que fueron dependientes de p40/IL-B30 para crecer, se analizaron por PCR para insertos de ADNc retroviral. De entre más de 40 aislados analizados, todos menos uno contenían ADNcs que codifican el receptor novedoso DCRS5. Este ADNc humano candidato se clonó en un vector de expresión y se transfectó en células Ba/F3 que expresan hlL-12Rß1. Estas células se hicieron sensibles a p40/IL-B30; de esta manera, se concluye que el ADNc novedoso codificó la DCRS5 deseada, funcionalmente una subunidad del receptor IL-B30.

III. Características de DCRS5 de longitud completa; localización cromosómica El dominio citoplásmico de DCRS5 no está estrechamente relacionado en general con otros dominios citoplásmicos de receptor de citocina, una observación común en esta familia de moléculas. El dominio citoplásmico contiene siete residuos tyr, por lo menos tres de los cuales son parte de motivos de unión SH2 reconocibles: YEDI, YKPQ, y YFPQ. El motivo YEDI es similar a sitios de unión identificados para la tirosina fosfatasa shp2. Los últimos dos motivos son muy similares a secuencias conocidas que se unen a Stat1/Stat3, o Stat3, respectivamente. El motivo YKPQ, junto con secuencias flanqueadoras cercanas, también se asemeja un cierto grado a los motivos en Stat4 y IL-12Rß2, que se sabe se unen a Stat1-3. Esto es consistente con datos preliminares que sugieren que p40/IL-B30, igual que IL-12, activa Stat4. Se usan iniciadores de PCR derivados de la secuencia DCRS5 para sondear una colección de ADNc humano. Las secuencias pueden ser derivadas, por ejemplo del cuadro 1 , preferiblemente las adyacentes a los extremos de las secuencias. Se clonan ADNcs de longitud completa para DCRS5 de primate, roedor u otras especies, por ejemplo examinando hibridación de ADN del fago ?gt10. Las reacciones de PCR se llevan a cabo usando ADN polimerasa Taqplus de T. aquaticus (Stratagene) bajo condiciones apropiadas. Se preparan extensiones de cromosoma. Se realiza hibridación in situ sobre preparaciones de cromosoma obtenidas de linfocitos humanos estimulados con fitohemaglutinina cultivados durante 72 horas. Se les agregó 5-bromodesoxiuridina durante las siete horas finales de cultivo (60 µg/ml de medio), para asegurar la formación de bandas cromosómicas posteriores a hibridación de buena calidad. Un fragmento de PCR, amplificado con la ayuda de iniciadores, se clona en un vector apropiado. El vector se marca por traducción de corte con 3H. La sonda radiomarcada es hibridada a extensiones de metafase a una concentración final de 200 ng/ml de solución de hibridación como lo describen Mattei y otros (1985) Hum. Genet. 69:327-331.

Después de cubrir con emulsión de rastreo nuclear (KODAK NTB2), se exponen las diapositivas. Para evitar cualquier resbalamiento de granos de plata durante el procedimiento de formación de bandas, las extensiones de cromosoma primero se marcan con solución amortiguadora Giemsa y se fotografían en metafase. Después se desarrollan las bandas R mediante el método de fluorocromo-fotólisis-Giemsa (FPG), y las metafases se vuelven a fotografiar antes de análisis. Se usan métodos apropiados similares para otras especies.

IV. Localización de ARNm de DCRS5 Se compraron tejido múltiple humano (Cat# 1 , 2) y blots de línea celular de cáncer (Cat# 7757-1 ), conteniendo aproximadamente 2 µg de ARN poli(A)+ por carril, de Clontech (Palo Alto, California). La sondas se radiomarcaron con [a-32P]dATP, por ejemplo utilizando el equipo de marcación aleatoria de iniciador Amersham Rediprime (RPN1633). Se realizó prehibridación e hibridación, por ejemplo a 65 °C en Na2HPO40.5 M, SDS 7%, EDTA 0.5 M (pH 8.0). Se realizaron lavados de alta severidad, por ejemplo a 65 °C con dos lavados iniciales en SSC 2x, SDS 0.1% durante 40 minutos, seguido por un lavado subsecuente en SSC 0.1 x, SDS 0.1% durante 20 minutos. Después se expusieron las membranas a -70°C a película de rayos X (Kodak) en presencia de pantallas intensificadoras. Se realizaron estudios mas detallados mediante Southems de colecciones de ADNc con clonas seleccionadas apropiadas de DCRS5 de humano para examinar su expresión en células hematopoyéticas y otros subgrupos de células. Alternativamente, se seleccionan dos iniciadores apropiados del cuadro 1. Se usa RT-PCR en una muestra apropiada de ARNm seleccionada por la presencia de mensaje para producir un ADNc, por ejemplo una muestra que expresa el gen. Mediante hibridación de colecciones de ADNc de tejidos apropiados preseleccionados por medio de señal de PCR se pueden aislar clonas de longitud completa. Se pueden realizar Northern blots. El mensaje para los genes que codifican DCRS5 será analizado mediante tecnología apropiada, por ejemplo PCR, inmunoensayo, hibridación u otros. Están disponibles preparaciones de ADNc de tejido y órgano, por ejemplo de Clontech, Mountain View, California. Como se describe, es útil la identificación de fuentes de expresión naturales. Y la identificación del apareamiento de la subunidad funcional del receptor permite predecir que células expresan la combinación de subunidades de receptor que dará como resultado sensibilidad fisiológica a cada uno de los ligados de citocina. Para distribución en ratón, se puede realizar por ejemplo análisis Southern: se digiere ADN (5 µg) de una colección de ADNc amplificado primario con enzimas de restricción apropiadas para liberar los insertos, se corre sobre un gel de agarosa al 1 % y se transfiere a una membrana de nylon (Schleicher and Schuell, Keene, New York).

Las muestras para aislamiento de ARNm de ratón incluyen: línea de células L fibroblásticas de ratón en reposo (C200); células transfectadas con Bra ER (fusión de Braf a receptor de estrógeno), control (C201 ); células T polarizadas con TH1 (Mell4 bright, células CD4+ de bazo, polarizadas durante 7 días con IFN-? y anti-IL-4; T200); células T polarizadas con TH2 (Mell4 bright, células CD4+ de bazo, polarizadas durante 7 días con IL-4 y anti-IFN-?; T201 ); células T altamente polarizadas con TH1 (véase Openshaw y otros 1995) J. Exp. Med. 182:1357-1367; activadas con anti-CD3 concentradas 2, 6, 16 h; T202); células T altamente polarizadas con TH2 (véase Openshaw y otros (1995) J. Exp. Med. 182:1357-1367; activadas con anti-CD3 concentradas 2, 6, 16 h; T203); células CD44-CD25+pre T separadas de timo (T204); clona D1.1 de células TH1 , en reposo durante 3 semanas después de la última estimulación con antígeno (T205); clona D1.1 de células T TH1 , esfimuladas 15 h con ConA 10 µg/ml (T206); clona CDC35 de células T TH2, en reposo 3 semanas después de la última estimulación con antígeno (T207); clona CDC35 de células T TH2, estimuladas 15 h con ConA 10 µg/ml (T208); células T intactas Mell4+ de bazo, en reposo (T209); células T Mell4+, polarizadas a Th1 con IFN-?/IL-12/anti-IL-4 concentradas 6, 12, 24h (T210); células T Mell4, polarizadas a Th2 con IL-4/anti-IFN-? concentradas 6, 13, 24 h (T211 ); línea celular A20 de leucemia de células B maduras no estimuladas (B200); línea CH12 de células B no estimuladas (B201 ); células B grandes no estimuladas de bazo (B202); células B de bazo total, activadas con LPS (B203); células dendríticas enriquecidas con metrizamida de bazo, en reposo (D200); células dendríticas de médula ósea, en reposo (D201 ); línea celular de monocitos RAW 264.7 activadas con LPS 4 h, (M200); macrófagos de médula ósea derivados con GM y M-CSF (M201 ; línea celular de macrófago J774, en reposo (M202); línea de células de macrófago J774+LPS+anti-IL-10 concentradas a 0.5, 1 , 3, 6, 12 h (M203); línea celular de macrófago J774+LPS+IL-10, concentradas 0.5, 1 , 3, 5, 12 h (M204); tejido de pulmón de ratón expuesto a aerosol, iniciadores Th2, expuestos a aerosol OVA concentrados 7, 14, 23 h (véase Garlisi y otros (1995) Clinical Immunology and Immunopathology 75:75-83; X206); tejido de pulmón infectado con nipostrongulo (véase Coffman y otros (1989) Science 245:308-310; X200); pulmón total de adulto normal (O200); pulmón total, rag-1 (véase Schwarz y otros (1993) Immunodeficiency 4:249-252; O205); bazo IL-10-K.O (véase Kuhn y otros (1991 ) Cell 75:263-274; X201 ); bazo total de adulto normal (O201 ); bazo total rag-1 (O207); placas de Peyer IL-10-K.O. (O202); placas de Peyer totales, normales (0210); nodos linfáticos mesentéricos IL-10-K.O. (X203); nodos linfáticos totales mesentéricos, normales (0211 ); colon IL-10-K.O. (X203); colon total normal (0212); páncreas de ratón NOD (véase Makino y otros (1980) Jikken Dobutsu 29:1-13; X205); timo total rag-1 (O208); riñon total, rag-1 (O209); corazón total, rag-1 (O202); cerebro total, rag-1 (O203); testículos totales, rag-1 (O204); hígado total, rag-1 (O206); tejido de articulación normal de rata (O300); y tejido de articulación artrítica de rata (X300).

Las muestras para aislamiento de ARNm de humano pueden incluir: células mononucleares de sangre periférica (monocitos, células T, células NK, granulocitos, células B) en reposo (T100); células mononucleares de sangre periférica activadas con anti-CD3 concentradas 2, 6, 12 h (T101 ); clona Mot72 de células T THO en reposo (T102); clona Mot72 de células T THO, activada con anti-CD28 y anti-CD3 concentradas 3, 6, 12 h (T103); clona Mot72 de células T THO, tratadas anérgicamente con péptido específico, concentradas 2, 7, 12 h (T104); clona HY06 de células T TH1 , en reposo (T107); clona HY06 de células T TH1 , activada por anti-CD28 y anti-CD3, concentradas 3, 6, 12 horas (T108); clona HY06 de células T Th1 , anérgica tratada con péptido específico concentrada 2, 6, 12 h (T109); clona HY935 de células T TH2, en reposo (T110); clona HY935 de células T, TH2, activada con anti-CD28, y anti-CD3 concentrada 2, 7, 12 h (T111 ); células T CD4+CD45RO polarizadas 27 días en anti-CD28 y anti-IFN?, polarizadas con TH2, activadas con anti-CD3 y anti-CD28 4 h (T116); líneas de tumor de células T Jurkat y Hut78, en reposo (T117); clonas de células T, concentradas AD130.2, Tc783.12, Tc783.13, Tc783.58, Te 782.69, en reposo (T118); clonas de células T aleatorias ?d T en reposo (T119); esplenocitos en reposo (B100); esplenocitos activados con anti-CD40 y IL-4 (B101 ); líneas EBV de células B concentradas WT49, RSB, JY, CVIR, 721.221 , RM3, HSY, en reposo (B102); línea JY de células B activadas con PMA y ionomicina concentrada 1 , 6 h (B103); clonas NK 20 concentradas, en reposo (K100); clonas NK 20 concentradas, activadas con PMA y ionomicina durante 6 h (K101 ); clona NKL derivada de sangre periférica de paciente con leucemia LGL, tratado con IL-2 (K106); clona citotóxica de NK 640-A30-1 , en reposo (K107); línea TF1 precursora hematopoyética, activada con PMA y ¡onomicina, concentrada 1 , 6 h (C100); línea premonocítica U937, en reposo (M100); línea de premonocito U937 activada con PMA y ionomicina concentrada 1 , 6 h (M101 ); monocitos elutritiados, activados con LPS, IFN?, anti-IL-10, concentrados 1 , 2, 6, 12, 24 h (M102); monocitos elutritiados activados con LPS, IFN?, IL-10 concentrados 1 , 2, 6, 12, 24 h (M103); monocitos elutritiados, activados con LPS, IFN?, anti-IL-10 concentrados 4, 16 h (M106); monocitos elutritiados activados por LPS, IFN?, IL-10 concentrados 4, 16 h (M107); monocitos elutritiados, activados con LPS por 1 h (M108); monocitos elutritiados, activados por LPS durante 6 h (M109); DC 70% CD1a+, de CD34+GM-CSF, TNFa de 12 días, en reposo (D101); DC 70% CD1a+, de CD34+GM-CSF, TNFa de 12 días, activado con PMA y ionomicina durante 1 hora (D102); DC 70% CD1a+, de CD34+GM-CSF, TNFa 12 días activado con PMA y ionomicina durante 6 horas (D103); DC 95% CD1a+, de CD34+GM-CSF, TNFa separado por FACS 12 días, activado con PMA y ionomicina, concentrado 1 , 6 horas (D104); DC 95% CD14+, ex CD34+GM-CSF, TNFa separado por FACS 12 días, activado con PMA y ionomicina, concentrado 1 , 6 horas (D105); DC CD1a+CD86+, de CD34+GM-CSF, TNFa separado por FAC 12 días, activado con PMA y ionomicina concentrado 1 , 6 horas (K106); DC de monocitos GM-CSF, IL-4 de 5 días, en reposo (D107); DC de monocitos GM-CSF, IL-4 de 5 días en reposo (D108); DC de monocitos GM-CSF, IL-4 de 5 días, activado con LPS concentrado 4, 16 h (D109); DC de monocitos GM-CSF, IL-4 de 5 días, activado con TNFa, mezcla de monocitos concentrada 4, 16 h (D110); tumor benigno L11 de leiomioma (X101 ); miometrio normal M5 (0115); GS1 de leiomiosarcoma maligno (X103); línea MRC5 de sarcoma de fibrolasto de pulmón, activado con PMA y ionomicina, concentrado 1 , 6 h (C101 ); línea celular CHA de carcinoma epitelial de riñon, activado con PMA y ionomicina concentrado 1 , 6 h (C102); riñon fetal de macho de 28 semanas (0100); pulmón fetal de macho de 28 semanas (0101); hígado fetal de macho de 28 semanas (0102); corazón fetal de macho de 28 semanas (O103); cerebro fetal de macho de 28 semanas (0104); vesícula biliar fetal de macho de 28 semanas (0106); intestino delgado fetal de macho de 28 semanas (O107); tejido adiposo fetal de macho de 28 semanas (0108); ovario fetal de hembra de 25 semanas (0109); útero fetal de hembra de 25 semanas (0110); testículos fetales de macho de 28 semanas (0111 ); bazo fetal de macho de 28 semanas (0112); placenta de adulto de 28 semanas (0113); y amígdalas inflamadas de 12 años de edad (X100). Muestras similares se pueden aislar en otras especies para su evaluación.

V. Clonación de contrapartes de especies de DCRS5. Se usan varias estrategias para obtener contrapartes de especies de la DCRS5, preferiblemente de otros primates o roedores. Un método es mediante hibridación cruzada usando sondas de ADN de especies estrechamente relacionadas. Puede ser útil ir a través de especies de evolutivamente similares como pasos intermedios. Otro método es usando indicadores de PCR específicos basados en la identificación de bloques de similitud o diferencia entre genes, por ejemplo áreas de secuencia de polipéptido o nucleótido altamente conservadas o no conservadas. Las búsquedas en bases de datos pueden identificar secuencias similares y permitir la producción de sondas apropiadas.

VI. Producción de proteína DCRS5 de mamífero Se diseña una construcción de fusión apropiada, por ejemplo GST, para la expresión por ejemplo en E coli. Por ejemplo, se construye un plásmido IGIF pGex de ratón y se transforma en E. coli. Se desarrollan células recientemente transformadas en medio LB conteniendo 50 µg/ml de ampicilina y se inducen con IPTG (Sigma, St. Louis, Missouri). Después de inducción durante la noche, las bacterias se cosechan y se aislan las pellas que contienen la proteína DCRS5. Las pellas de homogeneizan, por ejemplo en amortiguador TE (Tris-base 50 mM pH 8.0, EDTA 10 mM y pefabloc 2 mM) en dos litros. Este material se pasa tres veces a través de un microfluidizador (Microfluidics, Newton, Massachusetts). El sobrenadante fluidizado se hace girar en un rotor Sorvall GS-3 durante 1 hora a 13,000 rpm. El sobrenadante resultante que contiene la proteína de receptor de citocina se filtra y se pasa sobre una columna de glutation-SEPHAROSE, equilibrada con tris-base 50 mM pH 8.0. Las fracciones que contienen la proteína de fusión DCRS5-GST se reúnen y se cortan por ejemplo con trombina (Enzyme Research Laboratories, Inc., South Bend, Indiana). El producto reunido cortado se pasa entonces sobre una columna Q-SEPHAROSE equilibrada en Tris-base 50 mM. Las fracciones que contienen DCRS5 se reúnen y diluyen en H20 destilada fría, para reducir la conductividad, y se vuelven a pasar sobre una columna nueva de Q-Sepharose, sola o en sucesión con una columna de anticuerpo de inmunoafinidad. Se reúnen las fracciones que contienen la proteína DCRS5, se toman alícuotas y se guardan en el congelador a -70 °C. La comparación del espectro CD con proteína de receptor de citocina puede sugerir que la proteína se ha plegado correctamente. Véase Hazuda y otros (1969) J. Biol. Chem. 264:1689-1693.

Vil. Preparación de anticuerpos específicos para DCRS5 Se inmunizan intraperitonealmente ratones Balb/c endogámicos con formas recombinantes de la proteína, por ejemplo DCRS5 purificada o células NIH-3T3 transfectadas establemente. Se aplican refuerzos de la proteína a los animales en puntos de tiempo apropiados, con o sin adyuvante adicional, para estimular mas la producción de anticuerpo. Se recolecta suero o hibridomas producidos con bazos cosechados. Alternativamente, se inmunizan ratones Balb/c con células transformadas con el gen o fragmentos del mismo, ya sea células endógenas o exógenas, o con membranas aisladas enriquecidas para la expresión del antígeno. Se recolecta suero en el fiempo apropiado, típicamente después de numerosos administraciones adicionales. Pueden ser úfiles varias técnicas de terapia de genes, por ejemplo en la producción in situ de proteína, para generar una respuesta inmune. Preparaciones de suero o anticuerpo pueden ser absorbidas cruzadamente o inmunoseleccionadas para preparar anticuerpos sustancialmente purificados de especificidad definida y alta afinidad. Se pueden preparar anticuerpos monoclonales. Por ejemplo, se fusionan esplenocitos con un socio de fusión apropiado y se seleccionan hibridomas en un medio de crecimiento mediante procedimientos estándares. Los sobrenadantes de hibridoma se examinan para detectar la presencia de anticuerpos que se unen a DCRS5, por ejemplo mediante ELISA u otro ensayo. También se pueden seleccionar o preparar anficuerpos que reconocen específicamente modalidades especificas de DCRS5. En otro método, se presentan péptidos sintéticos o proteína purificada a un sistema inmune para generar anticuerpos monoclonales o policlonales. Véase por ejemplo Coligan (ed. 1991) "Current Protocols in Immunology" Wiley/Greene; y Harlow y Lañe (1989) "Antlbodies: A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Press. En situaciones apropiadas, el reactivo de unión se marca como se describió arriba, por ejemplo con florescencia o de otra manera, o se inmoviliza con un substrato para métodos de purificación. También se pueden introducir ácidos nucleicos en las células en un animal para producir el antígeno, que sirve para provocar una respuesta inmune. Véase por ejemplo Wang y otros (1993) Proc. Nat'l. Acad. Sci. 90:4156-4160; Barry y otros (1994) BioTechniques 16:616-619; y Xiang y otros (1995) Immunity 2:129-135.

VIII. Producción de proteínas de fusión con DCRS5 Se hacen varias construcciones de fusión con DCRS5, incluyendo modalidades de combinación con la secuencia de IL-12Rß1. Una porción del gen apropiado se fusiona con una marca de epítope, por ejemplo una marca FLAG, o con una construcción de sistemas de dos híbridos. Véase por ejemplo Fields y Song (1989) Nature 340:245-246. La marca de epítope se puede usar en un procedimiento de clonación de expresión con detección con anticuerpos anti-FLAG para detectar un socio de unión, por ejemplo un ligando, para el respectivo receptor de citocina. El sistema de dos híbridos también se puede usar para aislar proteínas que se unen específicamente a DCRS5.

IX. Relación estructura-actividad Se determina información sobre la parte crítica de residuos particulares usando procedimientos y análisis estándares. Se realiza análisis de mutagénesis estándar, por ejemplo generando muchas variantes diferentes en posiciones determinadas, por ejemplo en las posiciones arriba identificadas, y se evalúan las actividades biológicas de las variantes. Esto se puede realizar al grado de determinar posiciones que modifican la actividad, o para enfocarse sobre posiciones específicas para determinar los residuos que pueden ser sustituidos para retener, bloquear o modular la actividad biológica. Alternativamente, el análisis de variantes naturales puede indicar cuales posiciones toleran mutaciones naturales. Esto puede resultar de análisis poblacional de variación entre individuos, o a través de cepas o especies. Se analizan muestras de individuos seleccionados, por ejemplo mediante análisis de PCR y secuenciación. Esto permite la evaluación de polimorfismos de población.

X. Coexpresión de DCRS5 v IL-12RB1 Se puede transfectar en una célula un vector o vectores que codifican los genes respectivos. Preferiblemente, dicho vector tendrá marcadores de selección para identificar las células que han sido transformadas exitosamente. La coexpresión de los dos genes permitirá que los productos de gen se asocien apropiadamente para formar los complejos de receptor activos. Alternativamente está disponible el uso de métodos que producen asociación de dímeros funcionales. Véase por ejemplo O'Shea y otros (1989) Science 245:646-648; Kostelny y otros (1992) J. Immunol. 148:1547-1553; y Patel y otros (1996) J. Biol. Chem. 271 :30386-30391. La expresión de dominios extracelulares, y la asociación física, por ejemplo manejada por afinidad de cierre de leucina Fos/Jun, resultará en construcciones de unión de ligando que deben actuar como compuestos de unión para usos diagnósticos o terapéuticos. Todas las citas se incorporan en la presente como referencia en la misma extensión como si se indicara específicamente e individualmente que cada publicación o solicitud de patente individual se incorpora como referencia. Se pueden hacer muchas modificaciones y variaciones de esta invención sin apartarse de su espíritu y alcance, como será evidente para el experto en la materia. Las modalidades especificas aquí descritas se ofrecen a manera de ejemplo solamente, y la invención se limita por los términos de las reivindicaciones anexas, junto con el alcance completo de los equivalentes que pertenecen dichas reivindicaciones; y la invención no está limitada por las modalidades específicas que se han presentado aquí a manera de ejemplo.

LISTADO DE SECUENCIAS <110> Schering Corporation <120> Proteínas de receptor de ma ifero; reactivos y métodos relacionados <130> DX01074 <150> US 60/203,426 <151> 2000-05-10 <160> 5 <170> Patentln Ver. 2.0 <210> 1 <211> 2859 <212> ADN <213> Desconocido <220> <223> Descripción de organismo desconocido: primate; se presume de homo sapiens <220> <221> CDS <222> (119) .. (2005) <220> <221> mat_peptide <222> (188) .. (2005) <220> <221> misc_feature <222> (1) .. (2859) <223> Traducciones Xaa dependen del código genético <400> 1 gtggtacggg aattccattg tgttgggcag ccaacaaggg tggcagcctg gctctgaagt 60 ggaattatgt gettcaaaca ggttgaaaga gggaaacagt cttttcctgc ttccagac 118 atg aat cak gtc act att caa tgg gat gca gta ata gcc ctt tac ata 166 Met Asn Xaa Val Thr He Gln Trp Asp Ala Val He Ala Leu Tyr He -20 -15 -10 ctc ttc age tgg tgt cat gga gga att acá aat ata aac tgc tet ggc 214 Leu Phe Ser Trp Cys His Gly Gly He Thr Asn He Asn Cys Ser Gly -5 -1 1 5 cae ate tgg gta gaa cca gcc acá att ttt aag atg ggt atg aat ate 262 His He Trp Val Glu Pro Ala Thr He Phe Lys Met Gly Met Asn He 10 15 20 25 tet ata tat tgc caa gca gca att aag aac tgc caa cca agg aaa ctt 310 Ser He Tyr Cys Gln Ala Ala He Lys Asn Cys Gln Pro Arg Lys Leu 30 35 40 cat ttt tat aaa aat ggc ate aaa gaa aga ttt caa ate acá agg att 358 His Phe Tyr Lys Asn Gly He Lys Glu Arg Phe Gln He Thr Arg He 45 50 55 aat aaa acá acá gct cgg ctt tgg tat aaa aac ttt ctg gaa cca cat 406 Asn Lys Thr Thr Ala Arg Leu Trp Tyr Lys Asn Phe Leu Glu Pro His 60 65 70 gct tet atg tac tgc act gct gaa tgt ccc aaa cat ttt caa gag acá 454 Ala Ser Met Tyr Cys Thr Ala Glu Cys Pro Lys His Phe Gln Glu Thr 75 80 85 ctg ata tgt gga aaa gac att tet tet gga tat ceg cca gat att cct 502 Leu He Cys Gly Lys Asp He Ser Ser Gly Tyr Pro Pro Asp He Pro 90 95 100 105 gat gaa gta acc tgt gtc att tat gaa tat tea ggc aac atg act tgc 550 Asp Glu Val Thr Cys Val He Tyr Glu Tyr Ser Gly Asn Met Thr Cys 110 115 120 acc tgg aat gct rgg aag ctc acc tac ata gac acá aaa tac gtg gta 598 Thr Trp Asn Ala Xaa Lys Leu Thr Tyr He Asp Thr Lys Tyr Val Val 125 130 135 cat gtg aag agt tta gag acá gaa gaa gag caa cag tat ctc acc tea 646 His Val Lys Ser Leu Glu Thr Glu Glu Glu Gln Gln Tyr Leu Thr Ser 140 145 150 age tat att aac ate tcc act gat tea tta caa ggt ggc aag aag tac 694 Ser Tyr He Asn He Ser Thr Asp Ser Leu Gln Gly Gly Lys Lys Tyr 155 160 165 ttg gtt tgg gtc caa gca gca aac gca cta ggc atg gaa gag tea aaa 742 Leu Val Trp Val Gln Ala Ala Asn Ala Leu Gly Met Glu Glu Ser Lys 170 175 180 185 caa ctg caa att cae ctg gat gat ata gtg ata cct tet gca gcc gtc 790 Gln Leu Gln He His Leu- Asp Asp He Val He Pro Ser Ala Ala Val 190 195 200 att tcc agg gct gag act ata aat gct acá gtg ccc aag acc ata att 838 He Ser Arg Ala Glu Thr He Asn Ala Thr Val Pro Lys Thr He He 205 210 215 tat tgg gat agt caa acá acá att gaa aag gtt tcc tgt gaa atg aga 886 Tyr Trp Asp Ser Gln Thr Thr He Glu Lys Val Ser Cys Glu Met Arg 220 225 230 tac aag gct acá acá aac caa act tgg aat gtt aaa gaa ttt gac acc 934 Tyr Lys Ala Thr Thr Asn Gln Thr Trp Asn Val Lys Glu Phe Asp Thr 235 240 245 aat ttt acá tat gtg caa cag tea gaa ttc tac ttg gag cca aac att 982 Asn Phe Thr Tyr Val Gln Gln Ser Glu Phe Tyr Leu Glu Pro Asn He 250 255 260 265 aag tac gta ttt caa gtg aga tgt caa gaa acá ggc aaa agg tac tgg 1030 Lys Tyr Val Phe Gln Val Arg Cys Gln Glu Thr Gly Lys Arg Tyr Trp 270 275 280 cag cct tgg agt tea ceg ttt ttt cat aaa acá cct gaa acá gtt ccc 1078 Gln Pro Trp Ser Ser Pro Phe Phe His Lys Thr Pro Glu Thr Val Pro 285 290 295 cag gtc acá tea aaa gca ttc caa cat gac acá tgg aat tet ggg cta 1126 Gln Val Thr Ser Lys Ala Phe Gln His Asp Thr Trp Asn Ser Gly Leu 300 305 310 acá gtt gct tcc ate tet acá ggg cae ctt act tet gac aac aga gga 1174 Thr Val Ala Ser He Ser Thr Gly His Leu Thr Ser Asp Asn Arg Gly 315 320 325 gac att gga ctt tta ttg gga atg ate gtc ttt gct gtt atg ttg tea 1222 Asp He Gly Leu Leu Leu Gly Met He Val Phe Ala Val Met Leu Ser 330 335 340 345 att ctt tet ttg att ggg ata ttt aac aga tea ttc cga act ggg att 1270 He Leu Ser Leu He Gly He Phe Asn Arg Ser Phe Arg Thr Gly He 350 355 360 aaa aga agg ate tta ttg tta ata cca aag tgg ctt tat gaa gat att 1318 Lys Arg Arg He Leu Leu Leu He Pro Lys Trp Leu Tyr Glu Asp He 365 370 375 cct aat atg aaa aac age aat gtt gtg aaa atg cta cag gaa aat agt 1366 Pro Asn Met Lys Asn Ser Asn Val Val Lys Met Leu Gln Glu Asn Ser 380 385 390 gaa ctt atg aat aat aat tcc agt gag cag gtc cta tat gtt gat ccc 1414 Glu Leu Met Asn Asn Asn Ser Ser Glu Gln Val Leu Tyr Val Asp Pro 395 400 405 atg att acá gag ata aaa gaa ate ttc ate cca gaa cae aag cct acá 1462 Met He Thr Glu He Lys Glu He Phe He Pro Glu His Lys Pro Thr 410 415 420 425 gac tac aag aag gag aat acá gga ccc ctg gag acá aga gac tac ceg 1510 Asp Tyr Lys Lys Glu Asn Thr Gly Pro Leu Glu Thr Arg Asp Tyr Pro 430 435 440 caa aac tcg cta ttc gac aat act acá gtt gta tat att cct gat ctc 1558 Gln Asn Ser Leu Phe Asp Asn Thr Thr Val Val Tyr He Pro Asp Leu 445 450 455 aac act gga tat aaa ccc caa att tea aat ttt ctg cct gag gga age 1606 Asn Thr Gly Tyr Lys Pro Gln He Ser Asn Phe Leu Pro Glu Gly Ser 460 465 ' 470 cat ctc age aat aat aat gaa att act tcc tta acá ctt aaa cca cca 1654 His Leu Ser Asn Asn Asn Glu He Thr Ser Leu Thr Leu Lys Pro Pro 475 480 485 gtt gat tcc tta gac tea gga aat aat ccc agg tta caa aag cat cct 1702 Val Asp Ser Leu Asp Ser Gly Asn Asn Pro Arg Leu Gln Lys His Pro 490 495 500 505 aat ttt gct ttt tet gtt tea agt gtg aat tea cta age aac acá ata 1750 Asn Phe Ala Phe Ser Val Ser Ser Val Asn Ser Leu Ser Asn Thr He 510 515 520 ttt ctt gga gaa tta age ctc ata tta aat caa gga gaa tgc agt tet 1798 Phe Leu Gly Glu Leu Ser Leu He Leu Asn Gln Gly Glu Cys Ser Ser 525 530 535 cct gac ata caa aac tea gta gag gag gaa acc acc atg ctt ttg gaa 1846 Pro Asp He Gln Asn Ser Val Glu Glu Glu Thr Thr Met Leu Leu Glu 540 545 550 aat gat tea ccc agt gaa act att cca gaa cag acc ctg ctt cct gat 1894 Asn Asp Ser Pro Ser Glu Thr He Pro Glu Gln Thr Leu Leu Pro Asp 555 560 565 gaa ttt gtc tcc tgt ttg ggg ate gtg aat gag gag ttg cca tet att 1942 Glu Phe Val Ser Cys Leu Gly He Val Asn Glu Glu Leu Pro Ser He 570 575 580 585 aat act tat ttt cca caa aat att ttg gaa age cae ttc aat agg att 1990 Asn Thr Tyr Phe Pro Gln Asn He Leu Glu Ser His Phe Asn Arg He 590 595 600 tea ctc ttg gaa aag tagagctgtg tggtcaaaat caatatgaga aagctgcctt 2045 Ser Leu Leu Glu Lys 605 gcaatctgaa cttgggtttt ccctgcaata gaaattgaat tctgcctctt tttgaaaaaa 2105 atgtattcac atacaaatet tcacatggac acatgttttc atttcccttg gataaatacc 2165 taggtagggg attgetgggc catatgataa gcatatgttt cagttctacc aatcttgttt 2225 ccagagtagt gacatttctg tgctcctacc atcaccatgt aagaattece gggagctcca 2285 tgccttttta attttageca ttcttctgcc tmatttetta aaattagaga attaaggtcc 2345 cgaaggtgga acatgettea tggtcacaca tacaggcaca aaaacagcat tatgtggacg 2405 cctcatgtat tttttataga gtcaactatt tcctctttat tttccctcat tgaaagatgc 2465 aaaacagctc tctattgtgt acagaaaggg taaataatgc aaaatacctg gtagtaaaat 2525 aaatgctgaa aattttcctt taaaatagaa tcattaggcc aggcgtggtg gctcatgctt 2585 gtaatcccag cactttggta ggctgaggtr ggtggatcac ctgaggtcag gagttcgagt 2645 ccagcctggc caatatgetg aaaccctgtc tctactaaaa ttacaaaaat tagccggcca 2705 tggtggcagg tgcttgtaat cccagctact tgggaggctg aggcaggaga atcacttgaa 2765 ccaggaaggc agaggttgca ctgagctgag attgtgccac tgcactccag cctgggcaac 2825 aagagcaaaa ctctgtctgg aaaaaaaaaa aaaa 2859 <210> 2 <211> 629 <212> PRT <213> Desconocido <400> 2 Met Asn Xaa Val Thr He Gln Trp Asp Ala Val He Ala Leu Tyr He -20 -15 -10 Leu Phe Ser Trp Cys His Gly Gly He Thr Asn He Asn Cys Ser Gly -5 -1 1 5 His He Trp Val Glu Pro Ala Thr He Phe Lys Met Gly Met Asn He 10 15 20 25 Ser He Tyr Cys Gln Ala Ala He Lys Asn Cys Gln Pro Arg Lys Leu 30 35 40 His Phe Tyr Lys Asn Gly He Lys Glu Arg Phe Gln He Thr Arg He 45 50 55 Asn Lys Thr Thr Ala Arg Leu Trp Tyr Lys Asn Phe Leu Glu Pro His 60 65 70 Ala Ser Met Tyr Cys Thr Ala Glu Cys Pro Lys His Phe Gln Glu Thr 75 80 85 Leu He Cys Gly Lys Asp He Ser Ser Gly Tyr Pro Pro Asp He Pro 90 95 100 105 Asp Glu Val Thr Cys Val He Tyr Glu Tyr Ser Gly Asn Met Thr Cys 110 115 120 Thr Trp Asn Ala Xaa Lys Leu Thr Tyr He Asp Thr Lys Tyr Val Val 125 130 135 His Val Lys Ser Leu Glu Thr Glu Glu Glu Gln Gln Tyr Leu Thr Ser 140 145 150 Ser Tyr He Asn He Ser Thr Asp Ser Leu Gln Gly Gly Lys Lys Tyr 155 160 165 Leu Val Trp Val Gln Ala Ala Asn Ala Leu Gly Met Glu Glu Ser Lys 170 175 180 185 Gln Leu Gln He His Leu Asp Asp He Val He Pro Ser Ala Ala Val 190 195 200 He Ser Arg Ala Glu Thr He Asn Ala Thr Val Pro Lys Thr He He 205 210 215 Tyr Trp Asp Ser Gln Thr Thr He Glu Lys Val Ser Cys Glu Met Arg 220 225 230 Tyr Lys Ala Thr Thr Asn Gln Thr Trp Asn Val Lys Glu Phe Asp Thr 235 240 245 Asn Phe Thr Tyr Val Gln Gln Ser Glu Phe Tyr Leu Glu Pro Asn He 250 255 260 265 Lys Tyr Val Phe Gln Val Arg Cys Gln Glu Thr Gly Lys Arg Tyr Trp 270 275 280 Gln Pro Trp Ser Ser Pro Phe Phe His Lys Thr Pro Glu Thr Val Pro 285 290 295 Gln Val Thr Ser Lys Ala Phe Gln His Asp Thr Trp Asn Ser Gly Leu 300 305 310 Thr Val Ala Ser He Ser Thr Gly His Leu Thr Ser Asp Asn Arg Gly 315 320 325 Asp He Gly Leu Leu Leu Gly Met He Val Phe Ala Val Met Leu Ser 330 335 340 345 He Leu Ser Leu He Gly He Phe Asn Arg Ser Phe Arg Thr Gly He 350 355 360 Lys Arg Arg He Leu Leu Leu He Pro Lys Trp Leu Tyr Glu Asp He 365 370 375 Pro Asn Met Lys Asn Ser Asn Val Val Lys Met Leu Gln Glu Asn Ser 380 385 390 Glu Leu Met Asn Asn Asn Ser Ser Glu Gln Val Leu Tyr Val Asp Pro 395 400 405 Met He Thr Glu He Lys Glu He Phe He Pro Glu His Lys Pro Thr 410 415 420 425 Asp Tyr Lys Lys Glu Asn Thr Gly Pro Leu Glu Thr Arg Asp Tyr Pro 430 435 440 Gln Asn Ser Leu Phe Asp Asn Thr Thr Val Val Tyr He Pro Asp Leu 445 450 455 Asn Thr Gly Tyr Lys Pro Gln He Ser Asn Phe Leu Pro Glu Gly Ser 460 465 470 His Leu Ser Asn Asn Asn Glu He Thr Ser Leu Thr Leu Lys Pro Pro 475 480 485 Val Asp Ser Leu Asp Ser Gly Asn Asn Pro Arg Leu Gln Lys His Pro 490 495 500 505 Asn Phe Ala Phe Ser Val Ser Ser Val Asn Ser Leu Ser Asn Thr He 510 515 520 Phe Leu Gly Glu Leu Ser Leu He Leu Asn Gln Gly Glu Cys Ser Ser 525 530 535 Pro Asp He Gln Asn Ser Val Glu Glu Glu Thr Thr Met Leu Leu Glu 540 545 550 Asn Asp Ser Pro Ser Glu Thr He Pro Glu Gln Thr Leu Leu Pro Asp 555 560 565 Glu Phe Val Ser Cys Leu Gly He Val Asn Glu Glu Leu Pro Ser He 570 575 580 585 Asn Thr Tyr Phe Pro Gln Asn He Leu Glu Ser His Phe Asn Arg He 590 595 600 Ser Leu Leu Glu Lys 605 <210> 3 <211> 1887 <212> ADN <213> traducción inversa <220> <221> misc_feature <222> (1) .. (1887) <223> n puede ser a, c, g, o t <400> 3 atgaaycayg tnacnathca rtgggaygcn gtnathgcny tntayathyt nttywsntgg 60 tgycayggng gnathacnaa yathaaytgy snggncaya thtgggtnga rccngcnacn 120 athttyaara tgggnatgaa yathwsnath taytgycarg cngcnathaa raaytgycar 180 ccnmgnaary tncayttyta yaaraayggn athaargarm gnttycarat hacnmgnath 240 aayaaracna cngcn gnyt ntggtayaar aayttyytng arccncaygc n snatgtay 300 tgyacngcng artgyccnaa rcayttycar garacnytna thtgyggnaa rgayath sn 360 snggntayc cnccngayat hccngaygar gtnacntgyg tnathtayga rtaywsnggn 420 aayatgacnt gyacntggaa ygcnmgnaar ytnacntaya thgayacnaa rtaygtngtn 480 caygtnaar snytngarac ngargargar carcartayy tnacn sn s ntayathaay 540 ath snacng ay snytnca rggnggnaar aartayytng tntgggtnca rgcngcnaay 600 gcnytnggna tggargar s naarcarytn carathcayy tngaygayat hgtnathccn 660 wsngcngcng tnathwsnmg ngcngaracn athaaygcna cngtnccnaa racnathath 720 taytgggayw sncaracnac nathgaraar gtnwsntgyg aratg gnta yaargcnacn 780 acnaaycara cntggaaygt naargartty gayacnaayt tyacntaygt ncarcar sn 840 garttytayy tngarccnaa yathaartay gtnttycarg tnmgntgyca rgaracnggn 900 aarmgntayt ggcarccntg g snwsnccn ttyttycaya aracnccnga racngtnccn 960 cargtnacnw snaargcntt ycarcaygay acntggaay snggnytnac ngtngcnwsn 1020 athwsnacng gncayytnac nwsngayaay mgnggngaya thggnytnyt nytnggnatg 1080 athgtnttyg cngtnatgyt nwsnathytn wsnytnathg gnathttyaa ymgnwsntty 1140 mgnacnggna thaarmgnmg nathytnytn ytnathecna artggytnta ygargayath 1200 ccnaayatga araaywsnaa ygtngtnaar atgytncarg araaywsnga rytnatgaay 1260 aayaay snw sngarcargt nytntaygtn gayccnatga thaengarat haargarath 1320 ttyathccng arcayaarec nacngaytay aaraargara ayacnggncc nytngaracn 1380 mgngaytayc cncaraayws nytnttygay aayacnaeng tngtntayat hcengayytn 1440 aayacnggnt ayaarecnca rathwsnaay ttyytnccng arggnwsnca yytnwsnaay 1500 aayaaygara thacnwsnyt nacnytnaar ccnccngtng aywsnytnga ywsnggnaay 1560 aayccnmgny tncaraarca yccnaaytty gcnttywsng tnwsnwsngt naaywsnytn 1620 wsnaayacna thttyytngg ngarytnwsn ytnathytna aycarggnga rtgywsnwsn 1680 cengayathe araaywsngt ngargargar acnacnatgy tnytngaraa ygaywsnccn 1740 wsngaracna theengarca raenytnytn cengaygart tygtnwsntg yytnggnath 1800 gtnaaygarg arytnccnws nathaayacn tayttyccnc araayathyt ngarwsncay 1860 ttyaay gna thwsnytnyt ngaraar 1887 <210> 4 <211> 918 <212> PRT <213> Desconocido <220> <223> Descripción de organismo desconocido: primate; se presume de homo sapiens <400> 4 Met Leu Thr Leu Gln Thr Trp Val Val Gln Ala Leu Phe He Phe Leu 1 5 10 15 Thr Thr Glu Ser Thr Gly Glu Leu Leu Asp Pro Cys Gly Tyr He Ser 20 25 30 Pro Glu Ser Pro Val Val Gln Leu His Ser Asn Phe Thr Ala Val Cys 35 40 45 Val Leu Lys Glu Lys Cys Met Asp Tyr Phe His Val Asn Ala Asn Tyr 50 55 60 He Val Trp Lys Thr Asn His Phe Thr He Pro Lys Glu Gln Tyr Thr 65 70 75 80 He He Asn Arg Thr Ala Ser Ser Val Thr Phe Thr Asp He Ala Ser 85 90 95 Leu Asn He Gln Leu Thr Cys Asn He Leu Thr Phe Gly Gln Leu Glu 100 105 110 Gln Asn Val Tyr Gly He Thr He He Ser Gly Leu Pro Pro Glu Lys 115 120 125 Pro Lys Asn Leu Ser Cys He Val Asn Glu Gly Lys Lys Met Arg Cys 130 135 140 Glu Trp Asp Gly Gly Arg Glu Thr His Leu Glu Thr Asn Phe Thr Leu 145 150 155 160 Lys Ser Glu Trp Ala Thr His Lys Phe Ala Asp Cys Lys Ala Lys Arg 165 170 175 Asp Thr Pro Thr Ser Cys Thr Val Asp Tyr Ser Thr Val Tyr Phe Val 180 185 190 Asn He Glu Val Trp Val Glu Ala Glu Asn Ala Leu Gly Lys Val Thr 195 200 205 Ser Asp His He Asn Phe Asp Pro Val Tyr Lys Val Lys Pro Asn Pro 210 215 220 Pro His Asn Leu Ser Val He Asn Ser Glu Glu Leu Ser Ser He Leu 225 230 235 240 Lys Leu Thr Trp Thr Asn Pro Ser He Lys Ser Val He He Leu Lys 245 250 255 Tyr Asn He Gln Tyr Arg Thr Lys Asp Ala Ser Thr Trp Ser Gln He 260 265 270 Pro Pro Glu Asp Thr Ala Ser Thr Arg Ser Ser Phe Thr Val Gln Asp 275 280 285 Leu Lys Pro Phe Thr Glu Tyr Val Phe Arg He Arg Cys Met Lys Glu 290 295 300 Asp Gly Lys Gly Tyr Trp Ser Asp Trp Ser Glu Glu Ala Ser Gly He 305 310 315 320 Thr Tyr Glu Asp Arg Pro Ser Lys Ala Pro Ser Phe Trp Tyr Lys He 325 330 335 Asp Pro Ser His Thr Gln Gly Tyr Arg Thr Val Gln Leu Val Trp Lys 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Phe Glu Ala Asn Gly Lys He Leu Asp Tyr Glu Val 355 360 365 Thr Leu Thr Arg Trp Lys Ser His Leu Gln Asn Tyr Thr Val Asn Ala 370 375 380 Thr Lys Leu Thr Val Asn Leu Thr Asn Asp Arg Tyr Leu Ala Thr Leu 385 390 395 400 Thr Val Arg Asn Leu Val Gly Lys Ser Asp Ala Ala Val Leu Thr He 405 410 415 Pro Ala Cys Asp Phe Gln Ala Thr His Pro Val Met Asp Leu Lys Ala 420 425 430 Phe Pro Lys Asp Asn Met Leu Trp Val Glu Trp Thr Thr Pro Arg Glu 435 440 445 Ser Val Lys Lys Tyr He Leu Glu Trp Cys Val Leu Ser Asp Lys Ala 450 455 460 Pro Cys He Thr Asp Trp Gln Gln Glu Asp Gly Thr Val His Arg Thr 465 470 475 480 Tyr Leu Arg Gly Asn Leu Ala Glu Ser Lys Cys Tyr Leu He Thr Val 485 490 495 Thr Pro Val Tyr Ala Asp Gly Pro Gly Ser Pro Glu Ser He Lys Ala 500 505 510 c Tyr Leu Lys Gln Ala Pro Pro Ser Lys Gly Pro Thr Val Arg Thr Lys 515 520 525 Lys Val Gly Lys Asn Glu Ala Val Leu Glu Trp Asp Gln Leu Pro Val 530 535 540 Asp Val Gln Asn Gly Phe He Arg Asn Tyr Thr He Phe Tyr Arg Thr 545 550 555 560 He He Gly Asn Glu Thr Ala Val Asn Val Asp Ser Ser His Thr Glu 565 570 575 0 Tyr Thr Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Thr Leu Tyr Met Val Arg Met 580 585 590 Ala Ala Tyr Thr Asp Glu Gly Gly Lys Asp Gly Pro Glu Phe Thr Phe 595 600 605 Thr Thr Pro Lys Phe Ala Gln Gly Glu He Glu Ala He Val Val Pro 610 615 620 Val Cys Leu Ala Phe Leu Leu Thr Thr Leu Leu Gly Val Leu Phe Cys 625 630 635 640 '5 p e Asn Lys Arg Asp Leu He Lys Lys His He Trp Pro Asn Val Pro 645 650 655 Asp Pro Ser Lys Ser His He Ala Gln Trp Ser Pro His Thr Pro Pro 660 665 670 Arg His Asn Phe Asn Ser Lys Asp Gln Met Tyr Ser Asp Gly Asn Phe 675 680 685 Thr Asp Val Ser Val Val Glu He Glu Ala Asn Asp Lys Lys Pro Phe 690 695 700 0 Pro Glu Asp Leu Lys Ser Leu Asp Leu Phe Lys Lys Glu Lys He Asn 705 710 715 720 Thr Glu Gly His Ser Ser Gly He Gly Gly Ser Ser Cys Met Ser Ser 725 730 735 Ser Arg Pro Ser He Ser Ser Ser Asp Glu Asn Glu Ser Ser Gln Asn 740 745 750 Thr Ser Ser Thr Val Gln Tyr Ser Thr Val Val His Ser Gly Tyr Arg 755 760 765 His Gln Val Pro Ser Val Gln Val Phe Ser Arg Ser Glu Ser Thr Gln 770 775 780 Pro Leu Leu Asp Ser Glu Glu Arg Pro Glu Asp Leu Gln Leu Val Asp 785 790 795 800 His Val Asp Gly Gly Asp Gly He Leu Pro Arg Gln Gln Tyr Phe Lys 805 810 815 Gln Asn Cys Ser Gln His Glu Ser Ser Pro Asp He Ser His Phe Glu 820 825 830 Arg Ser Lys Gln Val Ser Ser Val Asn Glu Glu Asp Phe Val Arg Leu 835 840 845 Lys Gln Gln He Ser Asp His He Ser Gln Ser Cys Gly Ser Gly Gln 850 855 860 Met Lys Met Phe Gln Glu Val Ser Ala Ala Asp Ala Phe Gly Pro Gly 865 870 875 880 Thr Glu Gly Gln Val Glu Arg Phe Glu Thr Val Gly Met Glu Ala Ala 885 890 895 Thr Asp Glu Gly Met Pro Lys Ser Tyr Leu Pro Gln Thr Val Arg Gln 900 905 910 Gly Gly Tyr Met Pro Gln 915 <210> 5 <211> 862 <212> PRT <213> Desconocido <220> <223> Descripción del organismo desconocido: primate; se presume de homo sapiens <400> 5 Met Ala His Thr Phe Arg Gly Cys Ser Leu Ala Phe Met Phe He He 1 5 10 15 Thr Trp Leu Leu He Lys Ala Lys He Asp Ala Cys Lys Arg Gly Asp 20 25 30 Val Thr Val Lys Pro Ser His Val He Leu Leu Gly Ser Thr Val Asn 35 40 45 He Thr Cys Ser Leu Lys Pro Arg Gln Gly Cys Phe His Tyr Ser Arg 50 55 60 Arg Asn Lys Leu He Leu Tyr Lys Phe Asp Arg Arg He Asn Phe His 65 70 75 80 His Gly His Ser Leu Asn Ser Gln Val Thr Gly Leu Pro Leu Gly Thr 85 90 95 Thr Leu Phe Val Cys Lys Leu Ala Cys He Asn Ser Asp Glu He Gln 100 105 110 He Cys Gly Ala Glu He Phe Val Gly Val Ala Pro Glu Gln Pro Gln 115 120 125 Asn Leu Ser Cys He Gln Lys Gly Glu Gln Gly Thr Val Ala Cys Thr 130 135 140 Trp Glu Arg Gly Arg Asp Thr His Leu Tyr Thr Glu Tyr Thr Leu Gln 145 150 155 160 Leu Ser Gly Pro Lys Asn Leu Thr Trp Gln Lys Gln Cys Lys Asp He 165 170 175 Tyr Cys Asp Tyr Leu Asp Phe Gly He Asn Leu Thr Pro Glu Ser Pro 180 185 190 Glu Ser Asn Phe Thr Ala Lys Val Thr Ala Val Asn Ser Leu Gly Ser 195 200 205 Ser Ser Ser Leu Pro Ser Thr Phe Thr Phe Leu Asp He Val Arg Pro 210 215 220 Leu Pro Pro Trp Asp He Arg He Lys Phe Gln Lys Ala Ser Val Ser 225 230 235 240 Arg Cys Thr Leu Tyr Trp Arg Asp Glu Gly Leu Val Leu Leu Asn Arg 245 250 255 Leu Arg Tyr Arg Pro Ser Asn Ser Arg Leu Trp Asn Met Val Asn Val 260 265 270 Thr Lys Ala Lys Gly Arg His Asp Leu Leu Asp Leu Lys Pro Phe Thr 275 280 285 Glu Tyr Glu Phe Gln He Ser Ser Lys Leu His Leu Tyr Lys Gly Ser 290 295 300 Trp Ser Asp Trp Ser Glu Ser Leu Arg Ala Gln Thr Pro Glu Glu Glu 305 310 315 320 Pro Thr Gly Met Leu Asp Val Trp Tyr Met Lys Arg His He Asp Tyr 325 330 335 Ser Arg Gln Gln He Ser Leu Phe Trp Lys Asn Leu Ser Val Ser Glu 340 345 350 Ala Arg Gly Lys He Leu His Tyr Gln Val Thr Leu Gln Glu Leu Thr 355 360 365 Gly Gly Lys Ala Met Thr Gln Asn He Thr Gly His Thr Ser Trp Thr 370 375 380 Thr Val He Pro Arg Thr Gly Asn Trp Ala Val Ala Val Ser Ala Ala 385 390 395 400 Asn Ser Lys Gly Ser Ser Leu Pro Thr Arg He Asn He Met Asn Leu 405 410 415 Cys Glu Ala Gly Leu Leu Ala Pro Arg Gln Val Ser .Ala Asn Ser Glu 420 425 430 Gly Met Asp Asn He Leu Val Thr Trp Gln Pro Pro Arg Lys Asp Pro 435 440 445 Ser Ala Val Gln Glu Tyr Val Val Glu Trp Arg Glu Leu His Pro Gly 450 455 460 Gly Asp Thr Gln Val Pro Leu Asn Trp Leu Arg Ser Arg Pro Tyr Asn 465 470 475 480 Val Ser Ala Leu He Ser Glu Asn He Lys Ser Tyr He Cys Tyr Glu 485 490 495 He Arg Val Tyr Ala Leu Ser Gly Asp Gln Gly Gly Cys Ser Ser He 500 505 510 Leu Gly Asn Ser Lys His Lys Ala Pro Leu Ser Gly Pro His He Asn 515 520 525 Ala He Thr Glu Glu Lys Gly Ser He Leu He Ser Trp Asn Ser He 530 535 540 Pro Val Gln Glu Gln Met Gly Cys Leu Leu His Tyr Arg He Tyr Trp 545 550 555 560 Lys Glu Arg Asp Ser Asn Ser Gln Pro Gln Leu Cys Glu He Ero Tyr 565 570 575 Arg Val Ser Gln Asn Ser His Pro He Asn Ser Leu Gln Pro Arg Val 580 585 590 Thr Tyr Val Leu Trp Met Thr Ala Leu Thr Ala Ala Gly Glu Ser Ser 595 600 605 His Gly Asn Glu Arg Glu Phe Cys Leu Gln Gly Lys Ala Asn Trp Met 610 615 620 Ala Phe Val Ala Pro Ser He Cys He Ala He He Met Val Gly He 625 630 635 640 Phe Ser Thr His Tyr Phe Gln Gln Lys Val Phe Val Leu Leu Ala Ala 645 650 655 Leu Arg Pro Gln Trp Cys Ser Arg Glu He Pro Asp Pro Ala Asn Ser 660 665 670 Thr Cys Ala Lys Lys Tyr Pro He Ala Glu Glu Lys Thr Gln Leu Pro 675 680 685 Leu Asp Arg Leu Leu He Asp Trp Pro Thr Pro Glu Asp Pro Glu Pro 690 695 700 Leu Val He Ser Glu Val Leu His Gln Val Thr Pro Val Phe Arg His 705 710 715 720 Pro Pro Cys Ser Asn Trp Pro Gln Arg Glu Lys Gly He Gln Gly His 725 730 735 Gln Ala Ser Glu Lys Asp Met Met His Ser Ala Ser Ser Pro Pro Pro 740 745 750 Pro Arg Ala Leu Gln Ala Glu Ser Arg Gln Leu Val Asp Leu Tyr Lys 755 760 765 Val Leu Glu Ser Arg Gly Ser Asp Pro Lys Pro Glu Asn Pro Ala Cys 770 775 780 Pro Trp Thr Val Leu Pro Ala Gly Asp Leu Pro Thr His Asp Gly Tyr 785 790 795 800 Leu Pro Ser Asn He Asp Asp Leu Pro Ser His Glu Ala Pro Leu Ala 805 810 815 Asp Ser Leu Glu Glu Leu Glu Pro Gln His He Ser Leu Ser Val Phe 820 825 830 Pro Ser Ser Ser Leu His Pro Leu Thr Phe Ser Cys Gly Asp Lys Leu 835 840 845 Thr Leu Asp Gln Leu Lys Met Arg Cys Asp Ser Leu Met Leu 850 855 860

Claims (41)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un polipéptido sustancialmente puro o recombinante que comprende por lo menos diez aminoácidos contiguos de la porción intracelular de SEQ ID NO:2.

2.- El polipéptido de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque: (a) dicho polipéptido comprende por lo menos 25 aminoácidos contiguos de la porción intracelular de SEQ ID NO:2; (b) dicho polipéptido es recombinante, comprendiendo la porción ¡ntracelular de SEQ ID NO:2; (c) dicho polipéptido comprende además por lo menos diez aminoácidos contiguos de la porción no intracelular de SEQ ID NO:2; (d) dicho poliRéptido comprende por lo menos 25 aminoácidos de la porción extracelular de SEQ ID NO:2; (e) dicho polipéptido comprende la SEQ ID NO:2 madura; o (f) dicho polipéptido es un polipéptido natural sustancialmente puro.

3.- El polipéptido recombinante de conformidad con ia reivindicación 1 , caracterizado además porque: (a) consiste de la secuencia madura del cuadro 1 ; (b) es un polipéptido no glicosilado; (c) es de un humano; (d) comprende por lo menos 40 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO:2; (e) exhibe por lo menos tres segmentos no traslapantes de por lo menos quince aminoácidos contiguos de SEQ ID NO:2; (f) es una variante polimórfica natural de SEQ ID NO:2; (g) tiene una longitud de por lo menos aproximadamente 30 aminoácidos; (h) exhibe por lo menos dos epítopes no traslapantes que son específicos para una DCRS5 de primate; (i) fiene un peso molecular de por lo menos 30 kD con glicosilación natural; (j) es un polipéptido sintético; (k) está en una forma estéril; (I) está en una solución acuosa o amortiguadora; (m) está unido a un substrato sólido; (n) está conjugado con otra porción química; o (o) está físicamente asociado con un polipéptido IL-12Rß1.

4.- Una composición de materia seleccionada de: (a) un polipéptido sustancialmente puro o recombinante que comprende por lo menos dos segmentos no traslapantes distintos de por lo menos seis aminoácidos contiguos de la porción intracelular de SEQ ID NO: 2; (b) un polipéptido sustancialmente puro o recombinante que comprende por lo menos 12 aminoácidos configuos de la porción intracelular de SEQ ID NO: 2; o (c) un polipéptido sustancialmente puro de secuencia natural que comprende la SEQ ID NO: 2 madura.

5.- El polipéptido que se reclama en: (1 ) la reivindicación 4a, caracterizado además porque: (a) dichos segmentos no traslapantes distintos (i) incluyen uno de por lo menos doce aminoácidos; (ii) incluyen uno de por lo menos siete aminoácidos y un segundo de por lo menos nueve aminoácidos; (iil) incluyen un tercer segmento distinto de por lo menos seis aminoácidos, o (iv) comprenden uno de R355-L373, P378-L405, V407-D426, K428-D439, P441-V452, I454-G460, I465-T587 o N592-606; o (b) dicho polipéptido comprende además por lo menos dos segmentos no traslapantes distintos de por lo menos seis aminoácidos contiguos de la porción extracelular de SEQ ID NO: 2; (2) la reivindicación 4b, caracterizado además porque: (a) dicho segmento de por lo menos doce aminoácidos contiguos comprende uno de R355-L373, P378-L405, V407-D426, K428-D439, P441-V452, I454-G460, I465-T587 o N592-606; o (b) dicho polipéptido comprende además por lo menos dos segmentos no traslapantes distintos de por lo menos seis aminoácidos contiguos de la porción extracelular de SEQ ID NO: 2; o (3) la reivindicación 4c, caracterizado además porque comprende un epítope de purificación o detección.

6.- El polipéptido de conformidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque: (a) consiste de la secuencia madura del cuadro 1 ; (b) es un polipéptido no glicosilado; (c) es de un humano; (d) comprende por lo menos 40 aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 2; (e) exhibe por lo menos tres segmentos no traslapantes de por lo menos quince aminoácidos contiguos de SEQ ID NO: 2; (f) es una variante polimórfica natural de SEQ ID NO: 2; (g) tiene una longitud de por lo menos aproximadamente 30 aminoácidos; (h) exhibe por lo menos dos epítopes no traslapantes que son específicos para una DCRS5 de primate; (i) tiene un peso molecular de por lo menos 30 kD con glicosilación natural; (j) es un polipéptido sintético; (k) está en una forma estéril; (I) está en una solución acuosa o en una solución amortiguadora; (m) está unido a un substrato sólido; (n) está conjugado con otra porción química; o (o) está asociado físicamente con un polipéptido IL-12Rß1.

7.- Una composición que comprende: (a) un polipéptido sustancialmente puro como el que se reclama en la reivindicación 4, combinado con la proteína IL-12Rß1 ; o (b) dicho polipéptido que se reclama en la reivindicación 4 y un vehículo, en donde dicho vehículo es (i) un compuesto acuoso, incluyendo agua, solución salina y/o solución amortiguadora, y/o (¡i) formulado para administración oral, rectal, nasal, tópica o parenteral.

8.- Un equipo que comprende un polipéptido como el que se reclama en la reivindicación 4 y: (a) un compartimiento que comprende dicho polipéptido; (b) un compartimiento que comprende un polipéptido IL-12Rß1 ; (c) un compartimiento que comprende un polipéptido p40, IL-B30 o p40/IL-B30; o (d) instrucciones para usar o desechar los reactivos de dicho equipo.

9.- Un compuesto de unión que comprende un sifio de unión de antígeno de un anticuerpo, que se une específicamente a la porción intracelular del polipéptido que se reclama en la reivindicación 1 , caracterizado porque: (a) dicho compuesto de unión está en un recipiente; (b) dicho polipéptido es de un humano; (c) dicho compuesto de unión es un fragmento Fv, Fab o Fab2; (d) dicho compuesto de unión está conjugado con otra porción química; o (e) dicho anticuerpo: (i) está desarrollado contra una secuencia de péptido de un polipéptido maduro del cuadro 1 ; (¡i) está desarrollado contra una DCRS5 madura; (iii) está desarrollado para una DCRS5 humana purificada; (iv) es inmunoseleccionado; (v) es un anticuerpo policlonal; (vi) se une a una DCRS5 desnaturalizada; (vii) exhibe una Kd para antígeno de por lo menos 30 µM; (viii) está unido a un substrato sólido, incluyendo un glóbulo o membrana de plástico; (ix) está en una composición estéril; o (x) está marcado detectablemente, incluyendo una marca radioactiva o fluorescente.

10.- Un equipo que comprende el compuesto de unión que se reclama en la reivindicación 9, y: (a) un compartimiento que comprende dicho compuesto de unión; (b) un compartimiento que comprende: (i) un polipépfido p40, (ii) un polipéptido IL-B30, (¡ii) un polipéptido DCRS5, y/o (¡v) un polipépfido IL-12Rß1 ; (c) un compartimiento que comprende un anticuerpo que se une selectivamente a: (i) un polipéptido p40, (ii) un polipéptido IL-B30, (iii) un polipéptido DCRS5, y/o (¡v) un polipéptido IL-12Rß1 ; o (d) instrucciones para el uso o desecho de los reactivos de dicho equipo.

11.- Un método para producir un complejo antígeno-anticuerpo, que comprende poner en contacto bajo condiciones apropiadas un polipéptido DCRS5 de primate con un anticuerpo como el que se reclama en la reivindicación 9, permitiendo con ello la formación de dicho complejo.

12.- El método de conformidad con la reivindicación 11 , caracterizado además porque: (a) dicho complejo se purifica de otros receptores de citocina; (b) dicho complejo se purifica de otro anticuerpo; (c) dicho contacto es con una muestra que contiene interferón; (d) dicho contacto permite la detección cuantitativa de dicho antígeno; (e) dicho contacto es con una muestra que comprende dicho anticuerpo; o (f) dicho contacto permite la detección cuantitativa de dicho anticuerpo.

13.- Una composición que comprende: (a) un compuesto de unión como el que se reclama en la reivindicación 9, estéril, o (b) el compuesto de unión que se reclama en la reivindicación 9 y un vehículo, en donde dicho vehículo (i) es un compuesto acuoso, incluyendo agua, solución salina y/o solución amortiguadora; y/o (ii) está formulado para administración oral, rectal, nasal, tópica o parenteral.

14.- Un ácido nucleico aislado o recombinante que codifica un polipépfido que comprende los aminoácidos 1-606 de SEQ ID NO: 2.

15.- Una célula o tejido que comprende el ácido nucleico recombinante que se reclama en la reivindicación 14.

16.- La célula de conformidad con la reivindicación 15, caracterizada además porque: (a) es una célula procariótica; (b) es una célula eucariótica; (c) es una célula bacteriana; (d) es una célula de levadura; (e) es una célula de insecto; (f) es una célula de mamífero; (g) es una célula de ratón; (h) es una célula de primate; o (i) es una célula de humano.

17.- Un equipo que comprende el ácido nucleico que se reclama en la reivindicación 14, y: (a) un compartimiento que comprende dicho ácido nucleico; (b) un compartimiento que comprende un ácido nucleico que codifica (i) un polipéptido p40, (ii) un polipéptido IL-B30, (iii) un polipépfido DCRS5, y/o (iv) un polipéptido IL-12Rß1; (c) un compartimiento que comprende (i) un polipéptido p40, (ii) un polipéptido IL-B30, (¡ii) un polipéptido DCRS5, y/o (iv) un polipépfido IL-12Rß1 ; (d) un compartimiento que comprende un anticuerpo que se une selectivamente a: (i) un polipéptido p40, (ii) un polipéptido IL-B30, (¡ii) un polipéptido DCRS5, y/o (¡v) un polipéptido IL-12Rß1 ; o (e) instrucciones para usar o desechar los reactivos de dicho equipo.

18.- Un método para modular la fisiología o desarrollo de una célula que comprende poner en contacto dicha célula con: (a) un antagonista de p40/IL-B30 que es un complejo que comprende: (i) la porción extracelular de una DCRS5 de primate; y/o (¡i) la porción extracelular de una IL-12Rß1 de primate; (b) un antagonista de p40/IL-B30 que es un anticuerpo que se une a un complejo que comprende: (i) una DCRS5 de primate , y/o (ii) una IL-12Rß1 de primate; (c) un antagonista de p40/IL-B30 que es un anticuerpo que se une a DCRS5; (d) un antagonista de p40/IL-B30 que es un anficuerpo para IL-12Rß1 ; (e) un antagonista de p40/IL-B30 que es un ácido nucleico de antisentido para DCRS5 o IL-12Rß1; o (f) un agonista de p40/IL-B30 que es un anficuerpo que se une a un complejo que comprende: (i) DCRS5 de primate, y/o (i¡) IL-12Rß1 de primate.

19.- El método de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque dicho contacto es con un antagonista, y: (a) dicho contacto es en combinación con un antagonista para: (i) IL-12, (¡i) IL-18, (iü) TNF, o (iv) IFN?; o (b) dicha célula es de un hospedero que: (i) exhibe signos o síntomas de una enfermedad crónica mediada por Th1 , (¡i) exhibe signos o síntomas de esclerosis múltiple, artritis reumatoide, osteoartritis, enfermedad inflamatoria del intestino, diabetes, psoriasis o sepsis, o (iii) recibe un transplante alogénico.

20.- El método de conformidad con ia reivindicación 18, caracterizado además porque dicho contacto es con un agonista, y: (a) dicho contacto es en combinación con (i) IL-12, (ii) IL-18, (¡ii) TNF, o (iv) IFN?; o (b) dicha célula es de un hospedero que: (i) exhibe signos o síntomas de una respuesta crónica de TH2, (ii) sufre de un tumor, de crecimiento viral o de crecimiento de hongos; (¡ii) recibe una vacuna, o (iv) sufre de una respuesta alérgica.

21.- El ácido nucleico de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado además porque comprende los nucleótidos 188-2005 de SEQ ID NO: 1.

22.- Un polipéptido antigénico sustancialmente puro o recombinante de la SEQ ID NO: 2.

23.- El polipéptido de conformidad con la reivindicación 22, caracterizado además porque comprende: (a) los residuos 1-101 de SEQ ID NO: 2; (b) los residuos 102-195 de SEQ ID NO: 2; (c) los residuos 196-297 de SEQ ID NO: 2; (d) los residuos 1-328 de SEQ ID NO: 2; o (e) los residuos 1-606 de SEQ ID NO: 2.

24.- Una composición heterodimérica que comprende el polipéptido que se reclama en la reivindicación 22 y IL-12Rß1.

25.- La composición de conformidad con la reivindicación 24, caracterizada además porque es capaz de unirse a IL-B30/p40.

26.- Un equipo que comprende el polipéptido que se reclama en la reivindicación 22, e instrucciones de uso.

27.- El equipo de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado además porque contiene: (a) polipéptido IL-12Rß1 ; y (b) polipéptidos p40, IL-B30, o IL-B30/p40.

28.- Una composición de unión que se une específicamente al polipéptido que se reclama en la reivindicación 22.

29.- La composición de unión de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada además porque es: (a) un anticuerpo poiiclonal; (b) un anticuerpo monoclonal; o (c) un fragmento Fab, Fab2 o Fv.

30.- La composición de unión de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada además porque se une específicamente al polipéptido que se reclama en la reivindicación 23.

31.- La composición de unión de conformidad con la reivindicación 30, caracterizada además porque es: (a) un anticuerpo policlonal; (b) un anticuerpo monoclonal; o (c) un fragmento Fab, Fab2 o Fv.

32.- Un equipo que comprende la composición de unión que se reclama en la reivindicación 28 e instrucciones de uso.

33.- Un método de producción de un complejo antígeno-anticuerpo, que comprende poner en contacto el anticuerpo que se reclama en la reivindicación 29 bajo condiciones adecuadas para la formación del complejo.

34.- Un polinucleótido aislado o recombinante que codifica un polipéptido como el que se reclama en la reivindicación 22.

35.- El polinucleótido de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado además porque codifica un polipéptido como el que se reclama en la reivindicación 23.

36.- El polinucleótido de conformidad con la reivindicación 34, caracterizado además porque comprende la SEQ ID NO: 1.

37.- Un vector de expresión que comprende el polinucleótido que se reclama en la reivindicación 34.

38.- Una célula hospedera que comprende el vector de expresión que se reclama en la reivindicación 37.

39.- La célula hospedera de conformidad con la reivindicación 38, caracterizada además porque es: (a) una célula de mamífero; (b) una célula de insecto; (c) una célula bacteriana; o (c) una célula de levadura.

40.- Un método para producir un polipéptido antigénico de la SEQ ID NO: 2, que comprende: (a) cultivar la célula hospedera que se reclama en la reivindicación 38 bajo condiciones adecuadas para la expresión del polipéptido; y (b) aislar o purificar el polipéptido.

41.- Un método para modular la fisiología o desarrollo de una célula, que comprende poner en contacto la célula con un agonista o antagonista de la SEQ ID NO: 2.