MXPA02009757A - Derivados de hidroxifenil-piperidin-4-iliden-metil-benzamida para el tratamiento del dolor. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a compuestos de la formula general (I); (ver formula) en donde R1 se selecciona de cualquiera de fenilo, piridinilo, tienilo, furanilo, imidazolilo, triazolilo y tiazolilo; en donde cada anillo fenilo R1 y anillo heteroaromatico R1 puede opcionalmente e independientemente, ser ademas sustituido por 1, 2 o 3 sustituyentes seleccionados de alquilo de C1-C6 lineal y ramificado, NO2, CF3, alcoxi de C1-C6, cloro, fluor, bromo, y yodo. Las sustituciones en el anillo fenilo y en el anillo heteroaromatico pueden tomar lugar en cualquier posicion en los sistemas de anillo; se describen y reivindican en la presente solicitud, asi como tambien, sales y composiciones farmaceuticas que comprenden los nuevos compuestos y su uso en terapia, en particular en el manejo del dolor.

Description

DERIVADOS DE HIDROXIFENIL-PIPERIDIN-4-ILIDEN-METIL-BENZAMIDA PARA EL TRATAMIENTO DEL DOLOR Campo de la Invención La presente invención se dirige a nuevos compuestos, a un proceso para su preparación, su uso y composiciones farmacéuticas que comprenden los nuevos compuestos. Los nuevos compuestos son empleados en terapia, y en particular, para el tratamiento del dolor.

Antecedentes y técnica anterior El receptor d se ha identificado por tener un papel en muchas funciones corporales tales como sistemas circulatorios y del dolor. Los ligandos para el receptor d pueden por lo tanto, hallar uso potencial como analgésicos, y/o agentes anti-hipertensivos . Los ligandos para el receptor d también han mostrado poseer actividades inmunomodulatorias . La identificación de al menos tres diferentes poblaciones de receptores opioides (µ, d y K) , está ahora bien establecida y todas las tres son aparentes en sistemas nerviosos, tanto central como periférico de muchas especies, incluyendo el hombre. La analgesia se ha observado en varios REF: 142148 modelos animales, cuando uno o más de estos receptores se han activado. Con algunas excepciones, los ligandos d opioides selectivos actualmente disponibles, son peptídicos en la naturaleza y no son adecuados para la administración por rutas sistémicas. Un ejemplo de un d-agonista no peptídico es SNC80 {Bilsky E. J. et al . , Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 273 (1) , pp . 359-366 (1995) ) . Existe sin embargo, todavía una necesidad de d-agonistas selectivos que tienen no solamente selectividad mejorada, sino también un perfil de efecto colateral mejorado. De este modo, el problema fundamental de la presente invención es hallar nuevos analgésicos que tengan efectos analgésicos mejorados, pero también con un perfil de efecto colateral mejorado sobre los agonistas µ actuales, así como también que tengan eficacia sistémica mejorada. Los analgésicos que se han identificado y que existen en la técnica anterior tienen muchas desventajas, en que sufren de escasa farmacocinética y no son analgésicos cuando se administran por rutas sistémicas. También, se ha documentado que los compuestos d agonistas preferidos, descritos dentro de la técnica anterior, muestran efectos convulsivos significantes cuando se administran sistémicamente . Se ha encontrado que ciertos compuestos no descritos específicamente, pero incluidos dentro del ámbito de WO 98/28275, presentan propiedades d-agonistas sorprendentemente mejoradas y potencia in vivo .

Breve Descripción de la invención Los nuevos compuestos de conformidad con la presente invención, están definidos por la Fórmula I en donde R1 se selecciona de cualquiera de (i) fenilo; (ii) piridinilo (iii) tienilo (iv) furanilo A (v) imidazolilo (vi) triazolilo (vii) tiazolilo en donde cada anillo fenilo R1 y anillo heteroaromático R1 puede opcionalmente e independientemente, ser -además sustituido por 1, 2 ó 3. sustituyentes seleccionados de alquilo de C-C6 lineal y ramificado, N02, CF3, alcoxi de Cj-C., cloro, flúor, bromo, y yodo. Las sustituciones en el anillo fenilo y en el anillo heteroaromático pueden tomar lugar en cualquier posición en dichos sistemas de anillos; Una modalidad preferida de la presente invención es un compuesto de conformidad con la figura I, en donde R1 es como se define anteriormente y cada anillo fenilo R1 y anillo heteroaromático R1, puede independientemente, ser además sustituido por un grupo metilo. Una modalidad más preferida de la presente invención, es un compuesto de conformidad con la figura I, en donde R1 es piridinilo, tienilo o furanilo. Dentro del ámbito de la invención, están también sales y enantiómeros de los compuestos -de fórmula I, incluyendo sales de enantiómeros. Cuando el (los) anillo (s) heteroaromáticos y el anillo fenilo son sustituidos, los sustituyentes preferidos se seleccionan de cualquiera de CF3, metilo, yodo, bromo, flúor y cloro. . El paso de reacción en el Esquema de Reacción 1, vide infra, se realiza haciendo reaccionar un compuesto intermediario de la fórmula general II p en donde PG es un grupo protector similar a bencilo o uretano, tal como Boc, con ácido 3-hidroxifenil borónico, usando un catalizador de paladio, por ejemplo Pd(PPh3)4, en la presencia de una base, por ejemplo Na2C03, para producir los compuestos de la fórmula general III, los cuales se desprotegen después, bajo condiciones estándar y bajo condiciones reductoras alquiladas con un compuesto de la fórmula general R1-CH0 para producir los compuestos de la fórmula general I. • Los catalizadores de paladio adecuados incluyen, pero no se limitan a, PdCl2 (con una fosfina), Pd(0Ac)2 (con una fosfina) ,' Pd(dba) 2, PdCl2 (dppf) CH2C12, Pd(PPh3)4, Pd/C. Las bases adecuadas incluyen, pero no se limitan a, trietilamina, carbonato de sodio y potasio. Los agentes de reducción adecuados para ser usados incluyen, pero no se limitan a, cianoborohidruro de sodio y triacetoxiborohidruro de sodio. Los nuevos compuestos de la presente invención son empleados en terapia, especialmente para el tratamiento de varias condiciones de dolor, tal como dolor crónico, dolor neuropático, dolor agudo, dolor por cáncer, dolor causado por artritis reumatoide, migraña, dolor visceral, etc. Esta lista no debe sin embargo, ser interpretada como exhaustiva. Los compuestos de la invención son empleados como inmunomoduladores, especialmente para padecimientos autoinmunes, tal como artritis, para injertos de piel, transplantes de órgano y necesidades quirúrgicas similares, para padecimientos de colágeno, varias alergias, para uso como agentes anti-tumorales y agentes anti-virales. Los compuestos de invención son empelados en estados de padecimientos, en donde la degeneración o disfunción de receptores opioides está presente o implicada en tal paradigma. Esto puede involucrar el uso de versiones isotópicamente etiquetadas de los compuestos de la invención en técnicas de diagnóstico y en aplicaciones que forman imágenes tal como tomografía de emisión de positrón (PET) . Los compuestos de la invención son empleados para el tratamiento de diarrea, depresión, ansiedad, incontinencia urinaria, varias enfermedades mentales, tos, edema pulmonar, varios trastornos gastrointestinales, lesión espinal y adicción a fármacos, que incluyen el tratamiento de abuso de alcohol, nicotina, opioides y otros fármacos y para trastornos del sistema nervioso simpático por ejemplo, hipertensión . Los compuestos de la invención son útiles como agentes analgésicos para el uso durante el cuidado de anestesia monitoreado y anestesia general. Las combinaciones de agentes con diferentes propiedades son a menudo usadas para lograr un balance de los efectos necesarios para mantener el estado anestésico (por ejemplo, amnesia, analgesia, relajación del músculo y sedación) . Incluida en esta combinación están anestésicos inhalados, hipnóticos, anxiolíticos, bloqueadores neuromusculares y opioides. También dentro del ámbito de la invención, está el uso de cualquiera de los compuestos de conformidad con la fórmula I anterior, para la manufactura de un medicamento para el tratamiento de cualquiera de las condiciones discutidas anteriormente. Un aspecto adicional de la invención es un método para el tratamiento de un sujeto que sufre de cualquiera de las condiciones discutidas anteriormente, con ello una cantidad efectiva de un compuesto de conformidad con la fórmula I anterior, es administrada a • un paciente en necesidad de tal tratamiento.

Un aspecto adicional de la presente invención es los intermediarios de la fórmula general II, en donde PG es un grupo protector similar a bencilo o uretano, tal como Boc-.

Métodos de Preparación Los compuestos de conformidad con la presente invención, pueden ser preparados siguiendo los procedimientos conocidos descritos en por ejemplo "Advanced Organic Chemistry" tercera edición , por Jerry March, John Wiley and Sons Inc . ; New York (1985) ; Paso (a) : p848; Paso (b) : p848; Paso -(C) : p657 ; Paso (d) : p875; Paso (e) : p371 -373; Paso (f) : p364-366; Paso (g) : N. Miyaura and A. Suzuki , Chem . Rev. , 95, 2457-2483 (1995) ; Paso (h) : "Protectíve Groups in Organic synthesis" p 327-329, por Theodora W. Greene and Peter G.M. Wuts , Segunda Edición, John Wiley and Sons Inc . ; New York (1991) . Estas referencias se incorporan por este medio en totalidad.

EJEMPLOS La invención ahora se describirá con más detalle por los siguientes Ejemplos, los cuales no se construyen como limitantes de la invención.

Esquema de Reacción 1 Ejemplo 1 Preparación de N^N-dietil-4- (3-hidroxifenil) -piperidin-4-iliden-metil) -benzamida (compuesto 7) (i) Preparación de éster terc-butílico del ácido 4-(4-metoxi-carbonil-benciliden) -piperidin-1-carboxílico (compuesto 3) Una mezcla del compuesto 1 (11.2 g, 49 mmol) y trimetil fosfito (25 mL) se sometió a reflujo bajo N2 por 5 horas. El exceso de trimetil fosfito se removió por co-destilación con tolueno para producir el compuesto 2 en rendimiento cuantitativo: XH RMN (CDC13) d 3.20 (d, 2H, J = 22 Hz), 3.68 (d, 3H, 10.8 Hz) , 3.78 (d, 3H, 11.2 Hz) , 3.91 (s, 3H) , 7.38 (m, 2H) , 8.00 (d, 2H, J = 8 Hz) . (ii) A una solución del producto anterior (compuesto 2) en THF seco (200 mL) se adicionó por goteo diisopropilamida de litio' (32.7 mL, 1.5 M en hexanos, 49 mmol) a -78°C. La mezcla de reacción luego se dejó calentar a temperatura ambiente previo a la adición de N-terc-butoxicarbonil-4-piperidona (9.76 g, 49 mmol en 100 L de THF seco). Después de 12 horas, la mezcla de reacción se enfrió con agua (300 mL) y se extrajo con acetato de etilo (3. x 300 mL) . Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgS04 y se evaporaron para producir un producto crudo, el cual se purificó por instantánea para proporcionar el compuesto 3 como un sólido blanco (5.64 g, 35%) : IR (tfaCl) 3424, 2974, 2855, 1718, 1688, 1606, 1427, 1362, 1276 cm"1; XH RMN (CDC13) d 1.44 (s, 1H) , 2.31 (t, J = 5.5 Hz, 2H) , 2.42 (t, J = 5.5 Hz, 2H) , 3.37 (t, J = 5.5 Hz, 2H) , 3.48 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H) , 6.33 (s, 1H) , 7.20 (d J = 6.7 Hz, 2H) , 7.94 (d, J = 6.7 Hz, 2H) ; 13C RMN (CDCI3) d 28.3, 29.2, 36.19, 51.9, 123.7, 127.8, 128.7, 129.4, 140.5, 142.1, 154.6, 166.8. (iii) Preparación de éster terc-butílico del ácido 4-bromo-4-[bromo- (4-metoxicarbonil-fenil) -metil] -piperidin-1-carboxílico (compuesto 4) A una mezcla del compuesto 3 (5.2 g, 16 mmol) y K2C03 (1.0 g) en diclorometano seco (200 mL) se "adicionó una solución de bromo (2.9 g, 18 mmol) en 30 mL de CH2C12 a 0°C. Después de 1.5 horas a temperatura ambiente, la solución después de la filtración de K2C03 se condensó. El residuo luego se disolvió en acetato de etilo (200 mL) , se lavó con agua (200 mL) , HCl 0.5 M (200 mL) y salmuera (200 mL) , y se secó sobre MgS04. La remoción de los solventes proporcionó un producto crudo, el cual se recristalizó a partir de metanol para producir el compuesto 4 como un sólido blanco (6.07 g, 78%) : IR (NaCl) 3425, 2969, 1725, 1669, 1426, 1365, 1279, 1243 cm"1; 1H RMN (CDC13) d 1.28 (s, 9H) , 1.75 (m, 2H) , 1.90 (m, 2H) , 2.1 (m, 4H) , 3.08 (br, 4H) , 3.90 (s, 3H) , 4.08 (br, 4H) , 5.14 (s, 1H) , 7.57 (d, J = 8.4 Hz, 2H) , 7.98 (d, J = 8.4 Hz, 2H) ; 13C RMN (CDCI3} d 28.3, 36.6, 38.3, 40.3, 52.1, 63.2, 72.9, 129.0, 130.3, 130.4, 141.9, 154.4, 166.3. (iv) Preparación de éster terc-butilico del ácido 4-[bromo- (4-carboxi-fenil) -metilen] -piperidin-1-carboxílico (compuesto II Una solución del compuesto 4 ((5.4 g, 11 mmoi) en metanol (300 mL) y NaOH 2.0M (100 mL) se calentó a 40°C por 3 horas. El sólido se colectó por filtración, y se secó durante la noche bajo vacío. La sal seca se .disolvió en agua/acetonitrilo al 40%, y se ajustó a pH 2 usando HCl concentrado. El producto deseado el compuesto 5 (3.8 g, 87%) se aisló como un polvo blanco por filtración: 1H RMN (CDC13) d 1.45 (s, 9H) , 2.22 (dd, J = 5.5 Hz, 6.1 Hz, 2H) , 2.64 (dd, J = 5.5 Hz, 6.1 Hz, 2H) , 3.34 (dd, J = 5.5 Hz, 6.1 Hz, 2H) , 3.54 (dd, J = 5.5 Hz, 6.1 Hz, 2H) , 7.35 (d, J = 6.7 Hz, 2H} , 8.08 (d, J = 6.7 Hz, 2H) ; 13C RMN (CDC13) d 28.3, 31.5, 34.2, 44.0, 115.3, 128.7, 129.4, 130.2, 137.7, 145.2, 154.6, 170.3; (v) Preparación de éster terc-butílico del ácido 4- [bromo- (4-dietilcarbamoil-fenil) -metilen] -piperidin-1-carboxílico (compuesto 6) A una solución del compuesto 5 (1.0 g, 2.5 mmol) en diclorometano seco (10 mL) a -20°C se adicionó isobutilcloroformiato (450 mg, 3.3 mmol). Después de 20 min a -20°C se adicionó dietilamina (4 L) y la reacción se dejó calentar a temperatura ambiente. Después de 1.5 horas los solventes se evaporaron y el residuo se dividió entre acetato de etilo y agua. La fase orgánica se lavó con salmuera y se secó sobre MgS04. La remoción de solventes proporcionó un producto ' crudo, el cual se purificó por cromatografía instantánea para producir el compuesto 6 como agujas blancas (800 mg, 73%) : IR (NaCl) 3051, 2975, 1694, 1633r 1416, 1281, 1168, 1115 cm"1; XH RMN (CDC13) d 1.13 (br, 3H) , 1.22 (br, 3H) , 1.44 (s, 9H) , 2.22 (t, J = 5.5 Hz, 2H) , 2.62 (t, J = 5.5 Hz, 2H) , 3.33 (m, 4H) , 3.55 (m, 2H) , 7.31 (d, J = 8.0 Hz, 2H) , 7.36 (d, J = 80 Hz, 2H) ; 13C RMN (CDC13) d 12.71, 14.13, 28.3, 31.5, 34.2, 39.1, 43.2, 79;7, 115.9, 126.3, 129.3, 136.8, 137.1, 140.6, 154.6, 170.5, (vi) Preparación de ácido 3-hidroxilfenil borónico El 3-bromofenol (8.65 g, 50 mmol) en THF seco (150 mL) se trató con hidruro de sodio (60%, 2.4 g, 60 mmol) a temperatura ambiente. Después de 1 h, se adicionó por goteo sec-butillitio (1.3M, 50 mL, 65 mmoL) a la solución de reacción a -78 °C. La mezcla de reacción luego se dejó agitar a la misma temperatura por 30 minutos previo a la adición de trimetil borato (15 mL) . Después del calentamiento a temperatura ambiente por 2 horas, la mezcla" de reacción se enfrió con agua (50 L) , y se extrajo con diclorometano (2 x 100 mL) . Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgS04 y se evaporaron para producir el compuesto del título como un sólido blanco (4.0 g, 58%'), el cual se usó sin purificación adicional en las reacciones de acoplamiento Suzuki. (vii) • Preparación de N, N-dietil-4- (3-hidroxilfenil-piperidin-4-iliden-metil) -benzamida (compuesto 7) Una mezcla del compuesto 6 (451 mg, 1.0 mmol), ácido 3-hidroxilfenil borónico (230 mg, 1.7 mmol), Na2C03 2M (2.5 mL) , y tetraquis (trifenilfosfina) paladio (0) (20 mg) en tolueno (desgasificado, 5 mL) y etanol (desgasificado, 5 mL) se sometió a reflujo a 90 °C por 4 horas bajo N2. La mezcla de reacción luego se enfrió por debajo de la temperatura ambiente, y se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 mL) . Las fases orgánicas combinadas se secaron sobre MgS04 y se evaporaron para producir un producto crudo. El producto anterior se trató con HCl 4. OM en dioxano a 50 °C por 2 horas. Después de la evaporación, el residuo se disolvió en HCl 1M (100 mL) y las impurezas se extrajeron con éter dietílico (3 x 100 mL) . La fase acuosa se hizo básica con NH40H y se extrajo con diclorómetano (3 x 100 mL) . Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgS04 y se evaporaron para producir el compuesto del título 7 (305 mg, 88%): XH-RMN (400 MHz, CDC13) d 1.12 (3H, br m, CH3CH2-) , 1.23 (3H, br m, CH3CH2-) , 2.33 (4H, m, piperidina CH-) , 2.89 (4H, m, piperidina CH-) , 3.29 (3H, br m, NH y CH3CH2N-) , 3.53 (2H, br m, CH3CH2N-) , 4.71 (1H, s, OH), 6.57 (2H, m, ArH), 6.65 (1H, m, ArH), 7.09 (1H, m, ArH), 7.12 (2H, d, J = 8.0 Hz, ArH), 7.28 J2H, d, J = 8.0 Hz, ArH); sal de HCl: p.f.*> 130°C (Dec.); IR (NaCl) 2975, 1598, 1442, 1293 cm"1.

Ejemplo 2 Preparación de N, N-dietil-4- (3-hidroxilfenil-N-bencil-piperidin-4-iliden-metil) -benzamida (compuesto 9) (i) Preparación de N, N-dietil-4- (bromo-N-bencil-piperidin-4-iliden-metil) -benzamida (compuesto 8) El compuesto 6 preparado en el Ejemplo 1 (v) anterior (2.26 g, 5.0 mmoL) , se trató con TFA (25 mL) en diclorometano (25 L) a temperatura ambiente. Después de 2 horas, la mezcla de reacción se condensó para producir un residuo, el cual se disolvió en acetonitrilo (20 mL) , y se hizo reaccionar con bromuro de bencilo (5.0 mmol) a temperatura ambiente por 2 horas. La mezcla" de reacción se condensó, y luego se disolvió en acetato de etilo (100 mL) . La solución orgánica se lavó con NH0H 1N y salmuera, se secó sobre MgS04. La remoción de los solventes proporcionó un producto crudo, el cual se purificó por cromatografía instantánea para producir el compuesto 8 como un aceite (1.0 g, 45%): -IR (NaCl) 2971, 1630, 1427, 1287, 1094 cm"1; XH RMN (CDC13) d 1.13 (br, 3H) , 1.23 (br, 3H) , 2.28 (m, 2H) , 2.37 (m, 2"H) , 2.55 (m, 2H) , 2.69 (m, 2H) , 3.27 (m 2H) , 3.53 (br, 4H) , 7.31 (m, 4H) . (ii) Preparación de N,N-dietil-4- (3-hidroxilfenil-N-bencil-piperidin-4-iliden-metil) -benzamida (compuesto 9) Una mezcla del compuesto 8 preparado en el paso (i) anterior (600 mg, 1.36 mmol), ácido 3-hidroxilfenil borónico (414 mg, 3.0 iranol) , Na2C03 2M (3.0 L) , y tetraquis (trifenilfosfina) paladio (0) (20 mg) en tolueno (desgasificado, 5 L) y etanol (desgasificado, 5 L) se sometió a reflujo a 90°C por 2 horas bajo N2. La mezcla de reacción luego se enfrió por debajo de la temperatura ambiente, y se extrajo con acetato de etilo (2 x 100 L) . Las fases orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgS04. La remoción de los solventes proporcionó un producto crudo, el cual se purificó por cromatografía instantánea para producir el compuesto 9 del título deseado (482 mg, 78%) : IR (NaCl) 3350, 2974, 1606, 1441, 1291 cm"1; 1H-RMN (400 MHz, CDC13) d 1.11 (3H, br m, CH3CH2-) , 1.24 (3H, br m, CH3CH2-), 2.36 (4H, , piperidina CH-) , 2.46 (4H, . piperidina CH-) , 3.26 (-2H, br m, CH3CH2N~) , 3.53 (4H, br m. PhCH2N y' CH3CH2N-) , 6.53 (1H, , ArH), 6.57 (1H, , ArH), 6.63 (1H, m, ArH), 7.07 (3H, m. ArH), 7.25 (7H, m, ArH).

Ejemplos 3-11 Los compuestos 10-18 de los Ejemplos 3-11, se prepararon siguiendo los procedimientos sintéticos del Esquema de Reacción 2 posterior.

Esquema de Reacción 2: 1(3) 12 Esquema de Reacción 2: 2(3) 15 Esquema de Reacción 2: 3(3) 18 0 Ejemplo 3 Preparación de N, N-dietil-4-{ (3-hidroxifenil) [l-(2-tienilmetil) -4-piperidiniliden] metil }benzamida (compuesto 10) A una solución de amina secundaria a temperatura ambiente (600 mg; 1.65 mmol) en metanol (15 ml) se adicionó tiofen-2-carboxaldehído (153.8 µl; 1.65 mmol), seguido por ácido acético (1 ml) . La mezcla se agitó por dos horas luego se adicionó cianoborohidruro de sodio (311 mg; 4.95 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche, luego se adicionó agua y la mezcla se extrajo con cloruro de metileno. Los extractos de cloruro de metileno combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. Purificación de fase inversa. (M+l) calculado: 461.64, (M+l) observado: 461.06. Análisis calculado para (C28H32N2O2S X 1.60 C2H02F3 X 0.20 H20) : C: 57.-95%; H:5.30%; N:4.33%; encontrado: C: 5-7.9.0%; H:5.34%; N:4.36% XH RMN (CD3OD) : 7.54 (dd, 1H, J = 5.2, 1.6Hz), 7.25 (d, 2H, J = 8 Hz), 7.23-7.24 • (m, 1H) , 7.15 (d, 2H, J = 8?z), 7.03-7.08 (m, 2H) , 6.58-6.62 (dd, 1H, J = 8.0, 2.8 Hz) , 6.52-6.55 (dd, 1H, J = 7.6,' 1.6 Hz), 6.44-6.46 (dd, 1H, J = 2.8, 1.6 Hz) , 4.50 (s, 2H) , 3.40-3.50 (m, 4H) , 3.15-3.25 (m, 2H) , 2.95-3.05 (m, 2H) , 2.60-2.80 (m, 2H) , 2.35-2.45 (m, 2H) , 1.10-1.15 (m, 3H) , 1.00-1.05 (m, 3H) .

Ejemplo 4 Preparación de N, N-dietil-4-{ (3-hidroxifenil) [l-(3-tienilmetil) -4-piperidiniliden] metil }benzamida (compuesto 11) A una solución de amina secundaria a temperatura ambiente (500 mg; 1.37 mmol) en metanol (13 ml) se adicionó tiofen-3-carboxaldehído (144.0 µl; 1.65 mmol'), seguido por ácido acético (1 ml) . La mezcla se agitó por tres horas luego se adicionó cianoborohidruro de sodio (258 mg; 4.11 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche, luego se adicionó agua y la mezcla se extrajo con cloruro de metileno.

La fase acuosa se neutralizó con bicarbonato de potasio y se extrajo de nuevo con cloruro de metileno. Los extractos de cloruro de metileno combinados se secaron sobre sulfato de sodio' anhidro, se filtraron y se concentraron .bajo presión reducida. Purificación de fase inversa. (M+l) calculado: 461.64, (M+l) observado: 461.07. Análisis calculado para (C28H32 2O2S X 1.10 C2H02F3 X 0.50 H20) : C:60.96%; H:5.78%; N:4.71%; encontrado: C:60.97%; H:5.78%; N:4.65% XH RMN (CD3OD) : 7.59 (dd, 1H, J = 3.2, 1.6Hz), 7.49 (dd, 1H, J = 5.2, 3.2 Hz), 7.26 (d, 2H, J = 8.0 Hz) , 7.16 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 7.15 (m, 1H) , 7.07 (dd, 1H, J = 8.0, 7.2 Hz) , 6.61 (dd, 1H, J = 8.0, 2.0 Hz) , 6.55 (d, 1H, J = 7.2 Hz) , 6.47 (dd, .1H, J = 2.0, 1.6 Hz), 4.29 (s, 2H) , 3.40-3.50 (m, 4H) , 3.15-3.25 (m, 2H) , 2.95-3.05 (m, 2H) , 2.60-2.80 (m, 2H) , 2.35-2.45 (m, 2H) , 1.15-1.20 (t, 3H, J = 6.4 Hz) , 1.00-1.05 (t, 3H, J = 6.4 Hz) .

Ejemplo 5 Preparación de N, N-dietil-4- [ [1- (2-furilmetil) -4-piperidiniliden] (3-hidroxifenil) metil] benzamida (compuesto 12) A una solución de amina secundaria a temperatura ambiente (500 mg; 1.37 mmol) en metanol (13 ml) se adicionó 2-furaldehído (136.0 µl; 1.65 mmol), seguido por ácido acético (1 ml) . La mezcla se agitó por tres horas luego se adicionó cianoborshidruro de sodio (258 mg; -4.11 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche, luego se adicionó agua y la mezcla se extrajo con cloruro de metileno. La fase acuosa se neutralizó con bicarbonato de potasio y se extrajo de nuevo con cloruro de metileno. Los extractos de cloruro de metileno combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. Purificación de fase inversa. (M+l) calculado: 445.57, (M+l) observado: 445.13. Análisis calculado para (C28H32N203 X 1.30 C2H02F3 X 0.10 H20) : C:61,81%; H: 5.68%; N: 4.71%; encontrado: C:61.88%; H:5.74%; N:4.73% XH RMN (CD30D) : 7.58 (d, 1H, J = 1.6Hz), 7.26 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 7.16 (d, 2H, J = 8.0 Hz) , 7.07 (t, 1H, J = 8.0 Hz) , 6.62-6.64 (m, 1H) , 6.60-6.61 (m, 1H) , 6.53-6.55 (m, 1H) , 6.46-6.47 (m, 1H) , 6.43-6.45 (m, 1H) , 4.34 { s; 2H) , 3.40-3.50 (m, 4H) , 3.15-3.25 (m, 2H) , 2.95-3.05 (m, 2H) , 2.55-2.80 (m, 2H) , 2.35-2.50 (m, 2H) , 1.15-1.20 (t, 3H, J = 6.4 Hz) , 1.00-1.05 (t, 3H, J = 6.4' Hz) Ejemplo 6 Preparación de N,N-dietil-4- [ [1- (3-furilmetil) -4-piperidiniliden] (3-hidroxifenil) metil] benzamida (compuesto 13) • . A una solución de amina secundaria a temperatura ambiente (300 mg; 0.82 mmol) en metanol (8 ml) se adicionó 3-furaldehído (214.0 µl; 2.47 mmol), seguido por ácido acético (0.5 ml) y cianoborohidruro de sodio (155 mg; 2.47 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche, se enfrió con bicarbonato de sodio y se extrajo con cloruro de metileno.

Los extractos de cloruro de metileno combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. Purificación de fase inversa . (M+l) calculado: 445.57, (M+l) observado: 445.15. Análisis calculado para (C28H32N2O3 X 0.50 C2H02F3 X 0.10 H20) : C:69.20%; H:6.55%; N:5.56%; encontrado: C:69.14%; H:6.57%; N:5.28% XH RMN (CD3OD) : 7.75 (s, 1H) , 7.61-7.62 (m, 1H) , 7.33 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 7.23 (d, 2H, J = 8.0 Hz) , 7.13 (dd, 1H, J = 8.4, 8.0 Hz), 6.66-6.69 (m, 1H) , 6.57-6.63 (m, 2H) , 6.51-6.53 (m, 1H) , 4.22 (s, 2H) , 3.45-3.55 (m, 4H) , 3.25-3.30 (m, 2H) , 2.95-3.10 (m, 2H) , 2.65-2.85 (m, 2H) , 2.40-2.55 (m, 2H) , 1.15-1.25 (m, 3H) , 1.05-1.15 (m. 3H) .

Ejemplo 7 Preparación de N,N-dietil-4-{ (3-hidroxifenil) [l-(2-piridinilmetil) -4-piperidiniliden] metil }benzamida (compuesto 14) A una solución de amina secundaria a temperatura ambiente (384.3 mg; 1.05 mmol) en metanol (10 ml) se adicionó 2-piridincarboxaldehído (201.0 µl; 2.11 mmol), seguido por ácido acético (1 ml) . La mezcla se agitó por 30 minutos luego se adicionó cianoborohidruro de sodio (199 mg; 3.16 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche, luego se adicionó agua y la mezcla se extrajo con cloruro de metileno. La fiase acuosa se neutralizó con bicarbonato de potasio y se extrajo de nuevo con cloruro de metileno. Los extractos de cloruro de metileno combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. Purificación de fase inversa. (M+l) calculado: 456.60, (M+l) observado: 456.12. Análisis calculado para (C29H33N302 X 1.70 C2H02F3 X 0.40 H20) : C:59.26%; H:5.45%; N:6.40%; encontrado: C:59.21%; H:5.46%; N:6.35% XH RMN (CD30D) : 8.57 (d, 1H, J = 5.2 Hz) , 7.78 (dt, 1H, J = 8.0, 1.2 Hz), 7.38 (d, 1H, J = 8.0 Hz) , 7.34 (dd, 1H, J = 8.0, 5.2 Hz), 7.24 (d, 2H, J = 8.0 Hz) , 7.15 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 7.05 (t, 1H, J = 8.0 Hz) , 6.59 (dd, 1H, J = 8.0, 2.4 Hz),' 6.54 (d, 1H, J = 8.0 Hz) , 6.45 (dd, 1H, . J = 2.4, 1.2 Hz), 4.39 (s, 2H) , 3.40-3.46 (m, 2H) , 3.26-3.34 ( , 4H) , 3.16-3.22 (m, 2H) , 2.54-2.64 ( , 4H) , 1.13 (t, 3H, J = 6.4 Hz) , 1.01 (t, 3H, J = 6.4 Hz) . Ejemplo 8 Preparación de N,N-dietil-4-{ (3-hidroxifenil) [l-(4-piridinil etil) -4-piperidiniliden] metil }benzégpida (compuesto 15) A una solución de amina secundaria a temperatura ambiente (300 mg; 0.82 mmol) en metanol (8 ml) se adicionó 4-piridincarboxaldehído (236 µl; 2.47 mmol) , seguido por ácido acético (0.5 ml) . La mezcla se agitó por 30 minutos luego se adicionó cianoborohidruro de sodio (155 mg; 2.47 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante la noche, se enfrió con bicarbonato de sodio y se extrajo con cloruro de metileno. Los extractos de cloruro de metileno combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. Purificación de fase inversa. (M+l) calculado: 456.60, (M+l) observado: 456.10. Análisis calculado para (C29H33N302 X 1.80 C2H02F3 X 0.40 H20) : C:58.61%; H:5.37%; N:6.29%; encontrado: C:58.64%; H:5.32%; N:6.46% XH RMN (CD30D) : 8.64 (s, 2H) , 7.61 (d, 2H, J = 5.2 Hz) , 7.25 (2H, " J = 8.0 Hz), 7.14 (d, 2H, J = 8.0 Hz) . -7.05 (t, 1H, J = 8.0 Hz), 6.59 (dd, 1H, J = 8.0, 1.6 Hz) , 6.53 (d, 1H, J = 8.0 Hz), 6.43-6.46 (m, 1H) , 4.34 (s, 2H) , 3.42-3.44 ( , 2H) , 3.18-3.24 8?t?, 6H9, 2.54-2.57 (m, 4H) . 1.13 (t, 3H, J = 6.4 Hz) , 1.02 (t, 3H, J = 6.4 Hz) . Ej emplo 9 Preparación de N,N-dietil-4- { (3-hidroxifenil) [1- (1H-imidazol-2-ilmetil) -4-piperidiniliden] metil }benzamida (compuesto 16) A una solución de amina secundaria a temperatura ambiente (300 mg; 0.82 mmol) en metanol (8 ml) se adicionó 2-imidazolcarboxaldehído (237.3 mg; 2.47 mmol), seguido por ácido acético (0.5 ml) y cianoborohidruro de sodio (155 mg; 2.47 mmol) . La mezcla de reacción se agitó durante la noche, se enfrió con bicarbonato de sodio y se extrajo con cloruro de metileno. Los extractos de cloruro de metileno combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, sé filtraron y se concentraron bajo presión reducida. Purificación de fase inversa. (M+l) calculado: 445.58, (M+l) observado: 445.16. Análisis calculado para (C27H32N402 X 2.10 C2H02E'3 X 0.50 H20) : C:54.07%; H:5.11%; N:8.08%; encontrado: C:54.04%; H:5.05%; N:8.09% XH RMN (CD30D) : 7.38 (s, 2H) , 7.20-7.22 (m, 2H) , 7.11 (d, 2H, J = 8.0 Hz), 7.0 (t, 1H, J = 8.0 Hz) , 6.55 (dd,. 1H, J = 8.0, 3.6 Hz), 6.49-6.50 (m, 1H) , 6.42-6.43 ( , 1H9, 4.08 (s, 2H) , 3.41-3.43 ( , 2H) , 3.18-3.20 (m, 3H) , 2.79-2.82 ( , 4H) , 2.39-2.45 (m, 4H) , 1.08-1.16 (m, 3H) , 0.96-1.16 ( , 3H) . Ejemplo 10 Preparación de N,N-dietil-4-{ (3-hidroxifenil) [1- (lH-imidazol-4-ilmetil) -4-piperidiniliden] metil }benzamida (compuesto 17) A una solución de amina secundaria a temperatura ambiente (300 mg; 0.82 mmol) en metanol (10 ml) se adicionó 4 (5) -imidazolcarboxaldehído (94.9 mg; 0.99 mmol), seguido por ácido acético (0.5. mi). La mezcla se agitó 1 hora luego se adicionó cianoborohidruro de sodio (62.1 mg; 0.99 mmol) . La mezcla de reacción se agitó durante la noche, se enfrió con bicarbonato de sodio y se extrajo con cloruro de metileno. Los extractos de cloruro de metileno combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. Purificación de fase inversa. (M+l) calculado: 445.58, (M+l) observado: 445.16. Análisis calculado para (C27H32N402 X 2.20 C2H02F3) : C:54.23%; H:4.96%; N:8.06%; encontrado: C:54.43%; H:4.99%; N:7.73% XH RMN (CD30D) : 8.54 (s, 1H) , 7.57 (s, 1H) , 7.23 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 7.13 (d, 2H, J - 8.0 Hz) , 7.03 (dd, 1H, J = 8.0, 7.6 Hz) ,' 6.57-6.59 ( , 1H) , 6.51-6.53 (m, 1H) , 6.43t6.44 (m, 1H) , 4.35 (s, 2H) , 3.41-3.43 ( , 2H) , 3.18-3.23 ( , 8H) , 2.53-2.56 (m, 4H) , 1.08-1.16 (m, 3H) , 0.96-1.04 (m, 3H) . Ejemplo 11 Preparación de N,N-dietil-4-{ (3-hidroxifenil) [1- (1, 3-tiazol-2-ilmetil) -4-piperidiniliden] etil }benzamida (compuesto 18) A una solución de amina secundaria a temperatura ambiente (143.2 mg; 0.39 mmol) en metanol (4 ml) se adicionó 2-tiazolcarboxaldehído (41.4 µl; 0.47 mmol), seguido por ácido acético (0.2 ml) . La mezcla se agitó 1 hora luego cianoborohidruro de- sodio (129.6 mg; 1.48 mmol) . La mezcla de reacción se agitó durante la noche, se enfrió con bicarbonato de sodio y se extrajo con cloruro de metileno. Los extractos de cloruro de metileno combinados se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. Purificación de fase inversa. (M+l) calculado: 462.63, (M+l) observado: 462.10. Análisis calculado para (C27H3?N302S X 1.10 C2H02F3 X 1.10 H20) : C:57.79%; H:5.70%; N:6.92%; encontrado: C:57.75%; H:5.60%; N:7.13% 2H RMN (CD30D) : 7.86 (d, 1H, J = 4.0 Hz), 7.68 (d, 1H, J = 4.0 Hz) , 7.26 (d, 2H, J = 8.09 Hz) , 7.16 (d, 2H, J = 8.0 Hz) , 7.07 (dd, 1H, J = 8.4, 8.0 Hz) , 6.60-6.62 (m, 1H) , 6.54-6.56 (m, ÍH) , 6.46-6.47 (m, 1H) , 4.65 (s, 2H) , 3.21--3.45 (m, 8H) , 2.56-2.58 (m, 4H) , 1.12-1.20 ( , 3H9, 1.00-1.08 (m, 3H) .

Composiciones farmacéuticas Los nuevos compuestos de acuerdo con la presente invención se pueden administrar en forma oral, intramuscular, subcutánea, tópica, intranasal, intraperitoneal, intratorácica, intravenosa, epidural, intratecal, intracerebroventricular y por inyección en las articulaciones . Una vía de administración preferida es oral, intravenosa o intramuscular. La dosificación dependerá de la vía de administración, la severidad de la enfermedad, edad y peso del paciente y otros factores normalmente considerados por el médico tratante, cuando se determina el régimen individual y el nivel de dosificación como el más apropiado para un paciente particular. Para preparar las composiciones farmacéuticas de los compuestos de esta invención, los portadores farmacéuticamente aceptables, inertes, pueden ser ya sea sólidos o líquidos. Las preparaciones de forma sólida incluyen polvos, tabletas, granulos dispersables, cápsulas, comprimidos, y supositorios. Un portador sólido puede ser una o más substancias las cuales también pueden actuar como diluyentes, agentes saborizantes, solubilizantes, lubricantes, agentes formadores de suspensión, aglutinantes, o agentes desintegrantes de tabletas; el mismo también puede ser un material de encapsulado .

En polvos, el portador es un sólido finamente dividido el cual está en una mezcla con el componente activo finamente dividido. En tabletas, el componente activo se mezcla con el portador que tiene las propiedades de unión necesarias en proporciones adecuadas y se compacta en la forma y tamaño deseado. Para preparar composiciones para supositorio, primero se funde una cera de bajo punto de fusión tal como una mezcla de glicéridos de ácido graso y manteca de cacao, y el ingrediente activo se dispersa en este, por ejemplo, por agitación. La mezcla homogénea fundida se vierte entonces en moldes de tamaño conveniente y se deja enfriar y solidificar. Los portadores adecuados son carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, lactosa, azúcar, pectina, dextrina', fécula, tragacanto, metilcelulosa, carboximetil celulosa de sodio, una cera de bajo punto de fusión, manteca de cacao, y semejantes. Las sales incluyen, pero no están limitadas a sales farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables dentro del alcance de la presente invención incluyen: acetato, bencensulfonato, benzoato, bicarbonato, bitartrato, bromuro, acetato de calcio, camsilato, carbonato, cloruro, citrato, diclorhidrato, edetato, edisilato, estolato, esilato, fumarato, glucaptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, hidrabamina, bromhidrato, clorhidrato, hidroxinaftoato, isetionato, lactato, lactobionato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilbromuro, metilnitrato, metiisulfato, mucato, napsilato, nitrato, pamoato -(embonato), pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, sulfato, tanato, tartrato, teocla'to, trietioduro, benzatina, cloroprocaina, colina, dietanolamina, etilendiamina, eglumina, procaína, aluminio, calcio, litio, magnesio, potasio, sodio, y zinc. Los ejemplos de sales farmacéuticamente inaceptables dentro del alcance de la presente invención incluyen: yodhidrato, perclorato, y tetrafluoroborato. Las sales farmacéuticamente aceptables, preferidas, son los clorhidratos, sulfatos y bitartratos..Las sales de clorhidrato y sulfato son particularmente preferidas. El término composición se pretende que incluya la formulación del componente activo con material de encapsulado como un portador que provee una cápsula en la cual el componente activo (con o sin otros portadores) está rodeado por un portador el cual está así en asociación con éste. De manera similar, se incluyen los comprimidos. Las tabletas, polvos, comprimidos y cápsulas se pueden usar como formas de dosificación sólidas adecuadas paradla administración oral. Los líquidos de las composiciones incluyen soluciones, suspensiones, y emulsiones. Las soluciones de propilenglicol con agua o agua estéril de los compuestos activos se pueden mencionar como un ejemplo de las preparaciones líquidas adecuadas para la" administración parenteral. Las composiciones líquidas también se pueden formular en solución en la solución acuosa de polietilenglicol . Las soluciones acuosas para la administración oral se pueden preparar disolviendo el componente activo en agua y adicionando colorantes ' adecuados, agentes saborizantes, estabilizadores, y agentes espesantes como se desee. Las suspensiones acuosas para el uso oral pueden .estar hechas por la dispersión del componente activo finamente dividido en agua conjuntamente con un material viscoso tales como gomas sintéticas y naturales, resinas, metil celulosa, carboximetilcelulosa de sodio, y otros agentes formadores de suspensión conocidos en la técnica de formulación farmacéutica.

Preferiblemente, las composiciones farmacéuticas están en la forma de dosificaciones unitarias . En tal forma, la composición se divide en dosis unitarias que contienen cantidades apropiadas del componente activo. La forma de dosificación unitaria puede ser una preparación empacada, el empaque que contiene cantidades discretas de las preparaciones, por ejemplo, tabletas empacadas, cápsulas, y polvos en viales o ampollas. La forma de dosificación unitaria también puede ser una cápsula, comprimido, o tableta por sí misma, o puede ser el número apropiado de cualquiera de estas formas de empacado.

EVALUACIÓN BIOLÓGICA Modelo in vitro Cultivo celular A. Células 293S humanas que expresan receptores µ, d, y K humanos clonados y resistencia á neomicina, se hicieron crecer en suspensión a 37°C y C02 al 5% en frascos sacudidores que contienen DMEM10% FBS libre de calcio, 5% BCS, 0.1% de Pluronic F-68, y 600 µg/ml de geneticina. B. Los cerebros de ratón y rata se pesaron y enjuagaron en PBS enfriado con hielo (que contiene EDTA 2.5 mM, pH 7.4). Los cerebros se homogeneizaron con un politrón por 15 seg (ratón) o 30 seg (rata) en solución amortiguadora de lisis enfriada con hielo (Tris 50 mM, pH 7.0, EDTA 2.5 mM, con fluoruro de fenilmetilsulfonilo adicionado hasta previo el uso a 0.5 M . de una solución concentrada 0.5 M en DMSO ¡etanol) .

Preparación de membrana Las células se hicieron pelotillas y se volvieron a suspender en solución amortiguadora de lisis" (Tris 50 mM, pH 7.0, EDTA 2.5 mM, con PMSF adicionado previo al uso a 0.1 mM de una solución concentrada 0.1 M en etanol), se incubaron en hielo por 15 min, luego se homogeneizaron con un politrón por 30 seg. La suspensión se centrifugó en lOOOg (max) por 10 mín a 4°C. El sobrenadante se recuperó en hielo y las pelotillas se volvieron a suspender y centrifugaron como anteriormente.

Los sobrenadantes de ambos centrifugados se combinaron y se centrifugaron a 46,000 g (max) por 30 min. Las pelotillas se volvieron a suspender en solución amortiguadora Tris fría (Tris/Cl 50 mM, pH 7.0) y de nuevo se centrifugaron. Las pelotillas finales se volvieron a suspender en solución amortiguadora de membrana (Tris 50 mM, sucrosa 0.32 M, pH 7.0). Las alícuotas (1 ml) en tubos de polipropileno se congelaron en hielo seco/etanol y se almacenaron a -70°C hasta su uso. Las concentraciones de proteína se determinaron por un ensayo de Lowry modificado con SDS.

Ensayos de Enlaces . Las membranas se descongelaron a 37 °C, se enfriaron sobre hielo, se hicieron pasar 3 veces a través de una aguja de calibre 25, y se diluyeron en solución amortiguadora de enlace (Tris 50 mM, MgCl23 mM, 1 mg/ml BSA (Sigma A-7888), pH 7.4, la cual se almacenó a 4°C después de "la filtración a través de un filtro de 0.22 m, y a la cual se había adicionado recientemente 5 µg/ml de aprotinina, bestatina lOµM, diprotina A 10 µM, sin DTT) . Se adicionaron alícuotas de 100 µl a tubos de polipropileno de 12 x 75 mm enfriados que contienen 100 µl del radioligando apropiado y 100 µl del compuesto de prueba a varias concentraciones. Los enlaces totales (ET). y no específicos (NE) se determinaron en la ausencia y presencia de naloxona 10 µM respectivamente. Los tubos se sometieron a vórtice y se incubaron a 25°C por 60-75 minutos, después de este tiempo los contenidos se filtraron a vacío rápidamente y se lavaron con aproximadamente 12 ml/tubo de solución amortiguadora enfriada de lavado (Tris 50 mM, pH 7.0, MgCl2 3 mM) a través de filtros GF/B (Whatman) pre-remojados por al menos 2h en polietilenimina al 0.1%. La radioactividad (dpm) retenida en los filtros se midió con un contador de partícula beta después de pre-remojar los filtros por al menos 12 h en miniviales que contienen 6-7 ml de fluido de escintilación. Si el ensayo se desarrolla en placas de pocilios profundos de 96 espacios, la filtración es sobre unifiltros remojados con PEÍ de 96 espacios, los cuales se lavaron con 3 x 1 ml de solución amortiguadora de lavado, y se secarón en un horno a 55°C por 2h. Las placas de filtro se contaron en un TopCount (Packard) después de agregar 50 µl de fluido de escintilación MS-20/pocillo.

Ensayos Funcionales La actividad agonista de los compuestos se midió determinando el grado al cual el complejo receptor de los compuestos activa el enlace de GTP a proteínas G a las cuales los receptores se acoplan. En el ensayo de enlace GTP, el GTP [?] 35S se combina con los compuestos de prueba y membranas de las células HEK-293S que expresan los receptores del opioide humano clonado o del cerebro del ratón y rata homogeneizado. Los agonistas estimulan el enlace GTP [?] 35S en estas membranas . Los valores EC50 y Emax de los compuestos se determinan de las curvas de respuesta a la dosis. Los cambios convenientes de la curva de respuesta a la dosis por el naltrindol delta antagonista se realizaron para verificar que la actividad agonista es mediada a través de los delta receptores.

Análisis de Datos El enlace específico (EE) se calculó como TB-NS, y el EE en la presencia de varios compuestos de prueba se expresó como el porcentaje de control de EE. Los valores de IC50 y coeficiente de Hill (nH) para ligandos en el desplazamiento específicamente de unión de redioligando se calcularon de programas de ajuste de curvas o diagramas logit tal como Ligand, GraphPad Prism, SigmaPlot, o ReceptorFit. Los valores de K_ se calcularon a partir de la ecuación de Cheng-Prussoff . El promedio + valores S.E.M. de IC50, K_ y nH se reportaron para ligandos sometidos a prueba, en al menos tres curvas de desplazamiento. Los datos biológicos se tabularon en la Tabla 1 en las siguientes páginas.

Tabla 1 Tabla 1 (continuación) : Datos biológicos Experimentos de saturación del receptor Los valores Kd del radioligando se determinaron realizando los ensayos de enlace en membranas celulares con los radioligandos apropiados a concentraciones que varían de 0.2 a 5 veces el Kd estimado (hasta 10 veces si las cantidades del radioligando requerido son factibles) . El enlace del radioligando específico se expresó como pmoles/mg de proteína de membrana. Los valores de Kd y Bma? de los experimentos individuales se obtuvieron de ajustes no lineales del radioligando específicamente de enlace (B) contra nM libre (L) de individuos de acuerdo .con un modelo de un solo sitio.

DETERMINACIÓN DE MECANO-ALODINIA USANDO PRUEBA DE VON FREY La prueba se realizó entre las 08:00 y 16:00 horas usando el método descrito por Chaplan et al. (1994) . Las ratas se colocaron en cajas Pexiglas en la parte superior de una malla metálica inferior la cual dejó pasar la pata, y se dejaron habituar por 10-15 minutos. El área sometida a prueba fue el centro de la planta de la pata posterior izquierda, evitando las almohadillas de la pata menos sensibles. La pata se tocó con una serie de 8 pelos Von Frey con inflexibilidad logarítmicamente progresiva (0.41, 0.69, 1.20, 2.04, 3.63, 5.50, 8.51, y 15.14 gramos; Stoelting III, USA). El pelo von Frey se aplicó por debajo del piso de la malla perpendicular a la superficie de la planta con fuerza suficiente para originar una ligera flexión lateral contra la pata, y se mantuvo por aproximadamente 6-8 segundos. Se notó una respuesta positiva si la pata se aisla abruptamente. La contracción inmediatamente de la extracción del pelo también se consideró una respuesta positiva. Lo ambulatorio se consideró una respuesta ambigua, y en tales casos los estímulos se repitieron.

PROTOCOLO DE PRUEBA Los animales se sometieron a prueba en el día 1 post-operatorio para el grupo tratado con FCA. El 50% del umbral de extracción se determinó usando el método alternativo de Dixon (1980) . La prueba se inició con el pelo de 2.-04 g, en la mitad de la serie. Los estímulos se presentaron siempre de una forma consecutiva, ascendiendo o descendiendo. En la ausencia de una respuesta de extracción de la pata al pelo seleccionado inicialmente, se presentó un estímulo fuerte; en el evento de extracción de la pata, se eligió el siguiente estímulo débil. El cálculo de umbral óptimo por este método requiere 6 respuestas en la cercanía inmediata del 50% de umbral, y el conteo de estas 6 respuestas comenzó cuando ocurrió el primer cambio en la respuesta, por ejemplo, el umbral primero se cruza. En los casos donde los umbrales caen fuera del intervalo de estímulos, los valores de 15.14 (sensibilidad normal) ó 0.41 (máximamente alodínico) son asignados respectivamente. La configuración resultante de las respuestas positivas y negativas se tabuló usando la regla convencional, X = sin extracción; 0 = extracción; y el 50% de umbral de extracción se interpoló usando la fórmula: 50% g de umbral = 10(Xf + V/10, 000 donde Xf = valor del último pelo Von Frey usado (unidades logarítmicas); k = valor tabular (de Chaplan et al. (1994)) para la configuración de respuestas positivas/negativas; y d = promedio de diferencia entre los estímulos (unidades logarítmicas) . En este punto d = 0.224.

Los umbrales de Von Frey se convirtieron a por ciento de efecto posible máximo (%EPM) , de acuerdo con Chaplan et al. 1994. La siguiente ecuación se usó para calcular el % de EPM.

% EPM = Umbral tratado con fármaco (g) - umbral de alodinia (g) X 100 Umbral de control (g) - umbral de alodinia (g) ADMINISTRACIÓN DE LAS SUSTANCIAS DE PRUEBA Las ratas se inyectaron (subcutáneamente, intraperitonealmente, intravenosamente u oralmente) con una sustancia de prueba previo a la prueba de von Frey, el tiempo entre la administración del compuesto de prueba y la prueba de von Frey varía dependiendo de la naturaleza del compuesto de prueba.

PRUEBA DE RETORCIMIENTO El ácido acético conducirá a contracciones abdominales cuando se administra intraperitonealmente en ratones. Estos luego extenderán su cuerpo en una configuración típica. Cuando los fármacos analgésicos se administran, este movimiento descrito se . observa menos frecuentemente y el fármaco se selecciona como un candidato de buen potencial. Un reflejo del Retorcimiento completo y típico se considera solamente cuando los siguientes elementos están presentes: el animal no está en movimiento; la parte posterior inferior está ligeramente reprimida; el aspecto de la planta de ambas patas es observable. En este ensayo, los compuestos de la presente invención demuestran inhibición significativa de las respuestas de retorcimiento después de la dosificación oral de 1-100 µmol/kg. (i) Preparación de soluciones Ácido acético (AcOH) : 120 µL de ácido acético se adicionó a 19.88 ml de agua destilada para obtener un volumen final de 20 ml con una concentración final de AcOH al 0. 6% . La solución luego se mezcló (vórtice) y se dejó lista para la inyección. Compuesto (fármaco) : cada compuesto se preparó y se disolvió en el vehículo más adecuado de acuerdo con los procedimientos estándar. (ii) Administración de las soluciones El compuesto (fármaco) se administra oralmente, intraperitonealmente (i.p.), subcutáneamente (s.c.) o intravenosamente (i.v.) a 10 ml/kg (considerando el peso corporal promedio de los ratones) 20, 30 ó 40 minutos (de acuerdo con la clase de compuesto y sus características) previo a la prueba. Cuando el compuesto se libera centralmente: se administra un volumen de 5 µL Intraventricularmente (i. c.v.) o intratrequealmente (i.t.). El AcOH se administra intraperitonealmente (i.p.) en dos sitios a 10 ml/kg (considerando el peso corporal promedio de los ratones) inmediatamente previo a la prueba. (iii) Prueba El animal (ratón) se observa por un período de 20 minutos y el número de ocasiones (Reflejo dé retorcimiento) se anota y recopila al final del experimento. Los ratones se mantienen en cajas individuales "caja de zapatos" con almohadillas de contacto. Un total de 4 ratones se observan usualmente a la misma vez: uno de control y tres de dosis de fármaco. - Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es -el que resulta claro a partir de la presente descripción de la invención.

Claims (9)

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un compuesto de la Fórmula I caracterizado porque R1 se selecciona de cualquiera de (i) fenilo; (íi) piridinilo (iii) tienilo Ax v / (iv) furanilo (~- / y \ (v) imidazolilo (vi ) triazolilo N-N (vii) tiazolilo en donde cada anillo fenilo R1 y anillo heteroaromático R1 puede independientemente, ser además sustituido por 1, 2 ó 3 sustituyentes' seleccionados de alquilo de C?-C6 lineal y ramificado, N02, CF3, alcoxi de C].-C6, cloro, flúor, bromo, y yodo, así como también sales de los mismos.

2. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque cada anillo fenilo R1 y anillo heteroaromático R1 puede independientemente, ser además sustituido por 1, 2 ó 3 sustituyentes seleccionados de metilo, CF3, cloro, fluoro, bromo y yodo.

3. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque cada anillo fenilo R1 y anillo heteroaromático R1 puede independientemente, ser además sustituido por un grupo metilo.

4. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque R1 es piridinilo, tienilo o furanilo.

5. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque se selecciona de cualquiera de- • N,N-dietil-4- (3-hidroxilfen±l-?-bencil-piperidin-4-iliden-metil) -benzamida; • N,N-dietil-4- { (3-hidroxifenil) [1- (2-tienilmetil) - 4-piperidiniliden]metil}benzamida; • N,N-dietil-4- { (3-hidroxifenil) [1- (3-tienilmetil) -4-piperidiniliden] metil }benzamida; • N,N-dietil-4- [ [1- (2-furilmetil) -4-piperídin-iliden] (3-hidroxifenil)metil] benzamida; • N, N-dietil-4- [ [1- (3-furilipeti.l) -4-piperidin-iliden] (3-hidroxifenil) metil] benzamida; • ?ir,i\J'-dietil-4-{ (3-hidroxifenil) [1- (2-piridin-ilmetil) -4-piperidiniliden] metil] benzamida; • l\í,?/-dietil-4-{ (3-hidroxifenil) [1- (4-piridin-ilmetil) -4-piperidiniliden]metil] benzamida; • N,N-dietil-4- { (3-hidroxifenil) [1- (lH-imidazol-2-ilmetil) -4-piperidiniliden]metil] benzamida; • N,N-dietil-4- { (3-hidroxifenil) [1- (lH-imidazol-4-ilmetil) -4-piperidiniliden]metil] benzamida; y • N N-dietil-4- { (3-hidroxifenil) [1- (1, 3-tiazol-2-ilmetil) -4-piperidiniliden]metil] benzamida .

6. Un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque está en forma de sus sales de clorhidrato, diclorhidrato, sulfato, tartrato., ditrifluoroacetato o citrato.

7. Un proceso para preparar un compuesto de fórmula I, caracterizado porque comprende la reacción de, hacer reaccionar un compuesto de la fórmula general I.I en donde PG es un grupo protector similar a bencilo o uretano, tal como Boc, con ácido 3-hidroxifenil borónico, usando un catalizador de paladio en la presencia de una base para producir los compuestos de la fórmula general III, los cuales después se desprotegen, bajo condiciones estándar y bajo condiciones reductoras alquiladas con un compuesto de la fórmula general R1-CHT para producir los compuestos de la fórmula general I.

8. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 1 para uso en terapia.

9. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la terapia es el manejo del dolor. 10-. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la terapia se dirige hacia trastornos gastrointestinales. 11. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la terapia se dirige hacia lesiones espinales. 12. Un compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque la terapia se dirige a trastornos del sistema nervioso simpático. 13. Uso de un compuesto de conformidad con la fórmula I de la reivindicación 1, para la manufactura de un medicamento para uso en el tratamiento del dolor., trastornos gastrointestinales o lesiones espinales . 14. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un compuesto de la fórmula I de conformidad con la reivindicación ' 1, como un ingrediente activo, junto con un portador farmacéuticamente adecuado. 15. Un método para el tratamiento del dolor, caracterizado porque una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula I de conformidad con la reivindicación 1, se administra a un sujeto en necesidad del manejo .del dolor. 16. Un método para el tratamiento de trastornos gastrointestinales, caracterizado porque una cantidad efectiva de un compuesto de la fórmula I de conformidad con la re-ivindicación 1, se administra a un sujeto que sufre de dichos trastornos gastrointestinales. 17. Un método para el tratamiento de lesiones espinales, caracterizado porque una cantidad efectiva de un •compuesto de la fórmula í de conformidad con la reivindicación 1, se administra a un sujeto que sufre de dicha lesión espinal. Un compuesto de la fórmula general II caracterizado porque PG es un grupo protector similar a bencilo o uretano. 0 -5 0