MXPA02009510A - Metodos para inhibir angiogenesis y crecimiento de tumor. - Google Patents

Abstract

La angiogenesis, crecimiento de tumor y la interaccion de metaloproteinasa 2 (MMP2) con la integrina aV°3 se inhibe utilizando un compuesto inhibidor de la formula (I): en la cual en la cual G1 y G2 son cada uno de manera independiente -NH- C(O)-O-R1, -NH-C(O)-O-(CH2)V -(C6H4)-X3, -NH-C(O) -NH- (CH2)V -(C6H4) -X 3, -O-C(O) -NH-(CH2)V -(C6H4)-X3, -O- C(O) -O- (CH2)V - (C6H4) -X3, o -NH-C(O) -CH2- (C6H4)-X3; Y1 y Y2 son cada uno de manera independiente OH, alquilo de C1-C4, hidroxialquilo de C1-C4, alcoxi de C1-C4, fenilo, bencilo, o -NH2; R1 es alquilo de C1- C4; X1 y X2 son cada uno de manera independiente halogeno o alcoxi de C1-C4; X3 es halogeno, nitro, alquilo de C1-C4, alcoxi de C1-C4, o perfluoroalquilo de C1-C4; Z es -C?C-, -C6H4-, cis-CH=CH-, trans- CH=CH-, cis-CH2CH=CH-CH2-, trans-CH2CH=CH-CH2,1,4- naftilo, cis-1,3-ciclohexilo, trans-1,3 - ciclohexilo, cis-1,4-ciclohexilo, o trans-1,4- ciclohexilo; A es H o un enlace covalente; m y n son cada uno de manera independiente un numero entero que tiene un valor de 0 o 1; t es un numero entero que tiene un valor de 0 o 1; y p, r y v son cada uno de manera independiente un numero entero que tiene un valor de 1 o 2; con las condiciones que cuando A sea H, t es 0; cuando A sea un enlace covalente, t es 1; cuando m sea 0, Y1 es hidroxialquilo de C1 - C4; y cuando n sea 0, Y2 es hidroxialquilo de C1 - C4.

Description

MÉTODOS PARA INHIBIR ANGIOGENESIS Y CRECIMIENTO DE TUMOR CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere a métodos para inhibir la angiogénesis y el crecimiento de tumor. De manera más particular, la invención se refiere a métodos para inhibir la angiogénesis y el crecimiento de tumor que utilizan compuestos que se unen de manera selectiva a la integrina ocvß3 y bloquean la interacción de la integrina vß3 con la metaloproteinasa de matriz 2 (MMP2) .

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La invasión de células vasculares a los tejidos requiere la interacción coordinada de numerosos factores incluyendo proteinasas, las cuales remodelan la arquitectura de la matriz extracelular, así como de moléculas para adhesión celular que reconocen esta matriz provisional. Los reportes recientes han implicado que la metaloproteinasa de matriz 2 (MMP2) de 72 kDa es un participante clave en el desarrollo vascular y la angiogénesis. Por ejemplo, Kitoh et al. ( J\ Cel l Sci . , 109, 953-8 (1996)) reporta que la MMP2 y su metaloproteinasa de matriz tipo 1 de membrana (MT1MMP) son expresadas en forma coordinada por las células del mesénquimo casi exclusivamente durante el desarrollo embrionario, lo que indica restricciones de remodelación de matriz específicas en estos tejidos. Además, la angiogénesis y el crecimiento de tumor correspondientes están reducidos en ratones con supresión de la expresión de MMP2 (véase Itoh et al., Cáncer Res . , 58 1048-51) (1998) ) . Como un aspecto interesante, Saftor et al. ( Proc . Na tl . Acad . Sci . U . S . A . , 89, 1557-61(1992)) han demostrado que la ligación de la integrina avß3 , por sí misma un mediador conocido de la angiogénesis, induce la producción de MMP2 , lo que sugiere una interacción coordinada de estas dos moléculas durante la remodelación vascular asociada con la formación de vasos sanguíneos (véase también Bafetti et al, J". Bi ol . Chem , 273, 143-9 (1998)) .

De hecho, la interacción directa entre MMP2 y la integrina avß3 ha sido demostrada por Brooks et al .

( Cel l , 85, 683-93 (1996)) . Brooks et al. demostraron posteriormente que la regulación negativa de MMP2 durante la invasión vascular y maduración es dependiente de la expresión de avß3 ( Cel l , 92, 391-400 (1998)) . Aunque la inhibición de angiogénesis y la supresión concomitante de crecimiento de tumor mediada por inhibidores, tanto naturales como sintéticos, de las MMP, incluyendo MMP2 , ha sido documentada, la traducción de dichas estrategias en modalidades clínicas ha tenido un éxito limitado, debido principalmente a los defectos secundarios perjudiciales de dichos inhibidores de amplio espectro. En términos generales, debido a que podría ser requerida la función de MMP para muchos procesos en el organismo adulto, es probable que la inhibición del sitio activo de la función enzimática tenga efectos trascendentales sobre los diversos procesos biológicos que impliquen la remodelación de tejido, tal como la curación de heridas. De hecho, se ha documentado que las terapias con inhibidores de MMP de amplio espectro en estudios clínicos de diversos tipos de cáncer ocasionan efectos secundarios graves, incluyendo tendinitis inflamatoria, poliartritis y síndromes de dolor musculoesquelét ico , los cuales limitan la dosis y con frecuencia persisten después de suspender la terapia. Sin embargo, dada la distribución limitada de la integrina avß3 en organismos adultos, se podría pronosticar que seleccionar como blanco la interacción entre MMP2 y avß3 a las áreas de neovascularización o de invasión celular debería limitar en forma correspondiente los efectos de dichas intoxicaciones relacionadas con el tratamiento. En efecto, el dominio de hemopexina recombinante carboxi - terminal , no catalítico de MMP2 (PEX), el cual es un mediador de la unión de MMP2 a la integrina avß3, ha demostrado actividad ant i - angiogénica y anti-tumor in vivo. La utilidad potencial de un fragmento de proteína grande como tal, pero con los impedimentos acompañantes (Por ejemplo problemas de producción a gran escala, aspectos referentes a la calidad FDA y control de seguridad y carácter antigénico) , sugieren la necesidad de una solución más práctica a este problema. Por lo tanto, existe la necesidad, de métodos para inhibir la angiogénesis y el crecimiento de tumor que utilicen compuestos químicos que inhiban de manera selectiva la actividad de MMP en los sitios de crecimiento de tumor con una inhibición mínima de MMP en otras regiones del cuerpo. También existe la necesidad de métodos para la unión específica al sitio de unión a MMP2 de la integrina avß3.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención provee un método para la inhibición de la interacción de MMP2 con integrina avß3 y un método para la inhibición de angiogénesis en células que contienen integrina avß3. Además, la invención provee un método para la inhibición de crecimiento de tumor mediante administración de inhibidores de la interacción MMP2-avß3. Los compuestos inhibidores activos representados por la fórmula (I) siguiente, se ponen en contacto con la integrina vß3 en una célula, lo cual, a su vez, inhibe la unión de MMP2 a la avß3. La inhibición de la unión de MMP2 a avß3 utilizando los métodos de la peseta invención da como resultado la inhibición de angiogénesis y por lo tanto el crecimiento de tumor. Además, vß3 ha sido implicada en la inflamación, por lo tanto los compuestos de la fórmula (I) , utilizados de conformidad con los métodos de la presente invención también pueden suprimir eventos inflamatorios en la cual G1 y G2 son cada uno de manera independiente -NH- C (O) -O-R1 , -NH-C (O) -O- (CH2) v-(CSH4)-X3, -NH-C (O) -NH- (CH2) v- (C6H4) -X3 , -0-C(0)-NH-(CH2) v- (C6H4) -X3, -O-C(O) -O- (CH2) v- (C6H4) -X3, o -NH-C (O) -CH2- (CSH4) -X3; Y1 y Y2 son cada uno de manera independiente OH, alquilo de C?-C4, hidroxialquilo de C?-C4, alcoxi de C?-C , fenilo, bencilo, o -NH2 • R1 es alquilo de C?-C4; X1 y X2 son cada uno de manera independiente halógeno o alcoxi de C?-C4; X3 es halógeno, nitro, alquilo de C?-C4, alcoxi de C? -C4 , o perfluoroalquilo de C?-C4; Z es -C=C-, -CeH4-, cis-CH=CH-, trans-CH=CH- , ci s - CH2CH=CH- CH2 - , trans-CH2CH=CH-CH2, 1,4-naftilo, cí s- 1 , 3 - c i clohexi lo , trans - 1 , 3 - ciciohexilo , ci s - 1 , 4 - ciciohexilo , o tran s - 1 , 4 - ciciohexilo ; A es H o un enlace covalente; m y n son cada uno de manera independiente un número entero que tiene un valor de O ó 1 ; t es un número entero que tiene un valor de 0 ó 1 ; y P r y v son cada uno de manera independiente un número entero que tiene un valor de 1 ó 2 ; con las condiciones que cuando A sea H, t es 0; cuando A sea un enlace covalente, t es 1 ; cuando m sea 0, Y1 es hidroxialquilo de C?-C4; y cuando n sea 0, Y2 es hidroxialquilo de C?-C4. Los compuestos preferidos dentro del ámbito de la formula estructural (I) se representan en la fórmula estructural (II) : en la cual R2 y R3 son cada uno de manera independiente H, alquilo de C?-C , fenilo o bencilo; X1 y X2 son cada uno de manera independiente halógeno o alcoxi de C1-C4; X4 y X5 son cada uno de manera independiente halógeno, nitro, alcoxi de Ci-C4 , alquilo de C?-C4, o perfluoroalquilo de C!-C4; A es H o un enlace covalente; y r soncada uno de manera independiente un número entero que tiene un valor de 1 ó 2 ; y t es un número entero que tiene un valor de 0 ó 1; con la condición que cuando A sea H, t es 0 y cuando A sea un enlace covalente, t es 1. Cuando A sea un enlace covalente y t sea 1, las porciones del derivado de iminodiacetamida pueden estar unidas al grupo enlazador benceno en la posición orto, me ta o para . Cuando los compuestos de las fórmulas (I) y (II) se ponen en contacto con células que contienen avß3, se inhibe la unión de vß3 con MMP2 , interfiriendo de esta manera con un mecanismo esencial en la angiogénesis. La interferencia con la angiogénesis también puede inhibir el crecimiento de tumor al evitar la vascularización del tumor, y de esta manera impedir que se nutra. Los compuestos que inhiben la angiogénesis y el crecimiento de tumor de la presente invención son por lo tanto agentes terapéuticos útiles para el tratamiento de pacientes con tumores o con trastornos angiogénicos. Debido a que los compuestos de la presente invención se unen a vß3 estos compuestos también se pueden utilizar para suprimir eventos inflamatorios. Los compuestos de la presente invención se pueden formular en matrices apropiadas farmacéuticamente aceptables. Las composiciones farmacéuticas de los compuestos activos se administran a un paciente que tiene un tumor para reducir o eliminar el crecimiento del tumor. Los compuestos activos se pueden administrar por vía parenteral mediante inyección o mediante infusión gradual con respecto al tiempo, o mediante cualquier otro método apropiado para la forma de dosificación particular.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS En las figuras anexas: La figura 1 es una ilustración esquemática que presenta la interacción de MMP2 con la i nt egr i na otvß3 y su participación en la angiogenesi s . La figura 2 muestra las subunidades estructurales A, B y C de un conjunto combinatorio de 600 compuestos descritos en Boger et al. , Bi oorg . Med . Chem . 6, 1347-1378 (1998) . La figura 3 ilustra en forma gráfica la unión de 60 mezclas combinatorias de los compuestos con integrina avß3 en competencia con MMP2. La figura 4 ilustra la unión de mezclas AxBlO con integrina vß3 y la unión de los 10 componentes individuales de A6B10C4. La figura 5 muestra las estructuras de análogos de A6B10C4. La figura 6A ilustra en forma gráfica la unión de análogos (compuestos 2-26) de A6B10C4 (compuesto 1) con la integrina avß3 en competencia con MMP2. La figura 6B ilustra forma gráfica la unión de los compuestos 9 y 19 con la integrina avß3 en comparación con MMP2. La figura 7 ilustra que el compuesto 19 marcado con [14C] se une en forma específica a avß3 y puede ser desplazado de manera competitiva de vß3 por un exceso de 25 veces del compuesto 19 no marcado, pero no por un exceso del compuesto 9, un péptido de tipo RGD o un péptido de tipo c(RGDfV) . La figura 8 muestra que el compuesto 19 altera la unión de MMP2 a la integrina avß3, pero no interfiere con la unión de vitronectina con la integrina avß3. La figura 9 muestra que el compuesto 19 no inhibe directamente la proteólisis de MMP2 activa puri f icada .

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La unión de MMP2 a la integrina avß3 es un mecanismo importante en el proceso de angiogénesis. La inhibición específica de esta interacción de unión da como resultado una reducción en la vascularización en tejidos en crecimiento tales como tumores, y de esta manera retarda el crecimiento del tumor. La interacción de MMP2 con la integrina vß3 se ilustra en forma gráfica en la figura 1. Una clase novedosa de inhibidores de angiogénesis y de crecimiento de tumor, descrita más adelante, se unen específicamente a la integrina avß3 en competencia con MMP2 permitiendo de esta manera obtener una herramienta importante, novedosa para tratamiento. Algunos compuestos de esta invención pueden poseer uno o más centros asimétricos y podrían existir en formas ópticamente activas. Los centros asimétricos adicionales pueden estar presentes en un grupo sustituyente, tal como un grupo alquilo. Se pretende que los isómeros S puros y los isómeros R puros, mezclas racémicas de los isómeros y mezclas de los mismos, queden dentro del campo de esta invención. Se contemplan las formas quirales de algunos compuestos de esta invención, y se incluyen en forma específica dentro del campo de la presente invención. El término "alcoxi" significa un átomo de oxigeno unido mediante un enlace tipo éter a un grupo alquilo, como el definido más adelante, del tamaño indicado. Los ejemplos de grupos alcoxi son metoxi, etoxi, t-butoxi y similares. El término "alquilo" significa un radical de carbono de cadena recta o ramificada del tamaño indicado. Los ejemplos de radicales alquilo son metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo, t-butilo, 2 -et ilhexi lo , n-octilo, 2,4-dimet ilpent ilo y similares. El término "hidroxialquilo" significa un grupo alquilo, como el definido anteriormente, del tamaño indicado, unido a un grupo hidroxilo. Los ejemplos incluyen hidroximetilo, 2 -hidroxiet ilo , 3 -hidroxi - 1 -propi lo , 2 -hidroxi - 1 -propilo , 4 -hidroxibut ilo y similares. El término "perfluoroalquilo" se refiere a un grupo alquilo del tamaño indicado, como el definido más adelante, que tiene sustituyentes fluoro en lugar de cada átomo de hidrógeno, por ejemplo trifluorometilo y pentafluoroetilo. Los términos "halo" o "halógeno" se refieren a bromo, cloro, fluoro y yodo. Los compuestos útiles en los métodos de la presente invención están representados por la fórmula (I) e incluyen derivados de iminodiacet amida químicamente unidos a un grupo enlazador : en la cual G1 y G2 son cada uno de manera independiente -NH- C (O) -O-R1 , -NH- C (O ) -O- ( CH2 ) v- (C6H4)-X3, -NH-C (O) -NH- (CH2) v- (C6H4) -X3, -0-C(0)-NH- (CHj)v- (C5H4) -X3, -O-C (0) -0- (CH2) v- (C6H4) -X3, NH- C (0) -CH2- (C6H4) -X3 ; Y1 y Y2 son cada uno de manera independiente OH, alquilo de C?-C4, hidroxialquilo de C?-C4, alcoxi de C1-C4, fenilo, bencilo, o -NH2 ; R1 es alquilo de C1-C4; X1 y X2 son cada uno de manera independiente halógeno o alcoxi de C?-C4; X3 es halógeno, nitro, alquilo de C?-C4, alcoxi de Ci- C4 , o perfluoroalquilo de C1-C4; Z es -C=C-, -C6H4-, cis-CH=CH-, trans-CH=CH- , ci s- CH2CH=CH- CH2 - , tran s -CH2CH=CH-CH2 , 1,4-naftilo, ci s - 1 , 3 - c i c lohexilo , trans- 1 , 3 - ciclohexi lo , ci s - 1 , 4 - ciciohexilo , o trans- 1 , 4 - ciclohexi lo ; A es H o un enlace covalente; m y n son cada uno de manera independiente un número entero que tiene un valor de 0 ó 1; t es un número entero que tiene un valor de 0 ó 1; y p, r y v son cada uno de manera independiente un número entero que tiene un valor de 1 ó 2; con las condiciones que cuando A sea H, t es 0; cuando A sea un enlace covalente, t es 1 ; cuando m sea 0, Y1 es hidroxialquilo de C?-C4; y cuando n sea 0, Y2 es hidroxialquilo de C?-C4. Los compuestos preferidos dentro del ámbito de la formula estructural (I) se representan en la fórmula estructural (II) e incluyen derivados de iminodiacet amida unidos a un grupo enlazador benceno en cualquiera de las orientaciones orto, meta o para : en la cual R2 y R3 son cada uno de manera independiente H, alquilo de C;L-C4, fenilo o bencilo; X1 y X2 son cada uno de manera independiente halógeno o alcoxi de C1-C4; X4 y X5 son cada uno de manera independiente halógeno, nitro, alcoxi de Cj.-C4 , alquilo de C]_-C4, o perfluoroalquilo de C?-C4; A es H o un enlace covalente; p y r son cada uno de manera independiente un número entero que tiene un valor de 1 ó 2; y t es un número entero que tiene un valor de 0 ó 1; con la condición que cuando A sea H, t es 0 y cuando A sea un enlace covalente, t es 1. De preferencia, los sustituyentes X1 y X2 están unidos al anillo fenilo en la posición 4 con relación a los grupos CH2 (es decir sustituyente en la posición para) . De manera preferida, por lo menos uno de X1 y X2 es fluoro, más preferido X1 y X2 son ambos para-f luoro. De preferencia r y p son 2. X4 y X5 de preferencia son perfluoroalquilo de Ci a C , más preferido son para- tri f luoromet ilo . Los grupos R2 y R3 preferidos son hidrógeno y metilo. Los sustituyentes X2 y X3 pueden ser iguales o diferentes, y los sustituyentes R2 y R3 pueden ser iguales o diferentes. Los compuestos de las fórmulas (I) y (II) se describen con mayor detalle, junto con métodos de síntesis de los mismos, en Boger et al. , Bi oorg .

Med . Chem . , 6, 1347-1378 (1998) , incorporada en la presente invención para referencia. Un miembro particularmente activo de la familia de compuestos representados por la fórmula (II) , en la cual A es un enlace covalente y t es 1, es el compuesto 19 en el esquema de reacción 1, siguiente : ESQUEMA DE REACCIÓN 1 1. HCl-dioxano 2. dicloruro de isoftaloilo, 60% La síntesis del compuesto 19 es un ejemplo de un método general para producir los compuestos de las fórmulas (I) y (II) descrito por Boger et al. El compuesto 19 se sintetiza en tres pasos empezando con el éster metílico de N-e-BOC- 1 isina comercialmente disponible. El carbamato se instala con un rendimiento 99% mediante reacción del alcohol 4 -( tri f luoromet il ) bencí 1 ico con carbonato de N , N-disuccinimidi lo y la adición posterior del producto activado con el grupo a-amino libre para proveer el compuesto intermediario 27. Este derivado de lisina se somete después a desprotección de N-BOC (HCl) y se copula con hexafluorofosfato de bromotripirrol idinofosfonio 1¡ (PyBrOP, 74%) al grupo funcional de ácido carboxílico libre de la monoamida del ácido iminodiacét ico del compuesto 28 para obtener la diamida del compuesto 29. Después de la desprotección de N-BOC (HCl) éste se dimeriza mediante reacción con dicloruro de isoftaloilo completando la síntesis y suministrando el compuesto 19 con un rendimiento de 60%. Se incorpora una marca radioactiva en la molécula mediante saponificación de los dos esteres metílicos (LiOH, 95%) suministrando el ácido dicarboxílico del compuesto 30, seguido por esterificación con [1 C] -metanol mediado por clorhidrato de 1 -( 3 - (dimet ilamino) propil )- 3 -etil -carbodiimida (EDCI) y 4 - dimet ilaminopiridina (DMAP) catalítica para obtener el [14C] - compuesto 1 con un 35% de rendimiento. Se pueden preparar preparados farmacéuticos de los compuestos de las fórmulas (I) y (II) formulando el compuesto en una matriz de vehículo farmacéuticamente aceptable. Las composiciones farmacéuticas que comprenden a los compuestos activos de las fórmulas (I) y (II) se administran a un hospedero que tiene un tumor para reducir o eliminar el crecimiento del tumor. Los compuestos activos se pueden administrar por vía parenteral mediante inyección, o mediante infusión gradual con respecto al tiempo. Aunque el tejido que será tratado con frecuencia se trata mediante administración por vía intraperitoneal o subcutánea, los compuestos activos también se pueden administrar por vía intraocular, intravenosa, intramuscular, int rasinovial , int racavidad , o transdérmica, y también se pueden suministrar utilizando medios peristálticos. El término "administración" de los compuestos o composiciones de la invención, tal como se utiliza en la presente invención, se refiere al uso sistémico tal como cuando se toma por vía oral, por vía parenteral, mediante rocío para inhalación, mediante administración por vía nasal, rectal o bucal, o por vía tópica en formulaciones de forma de dosificación unitaria que contienen vehículos, adyuvantes y portadores farmacéuticamente aceptables no tóxicos convencionales según se desee. El término "parenteral" tal como se utiliza en la presente invención incluye técnicas de inyección e infusión intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, int raesternal , subcutánea e intra - art icular .

Con el termino " f armacéut icamente aceptable" se quiere decir aquellas sales, amidas y esteres que son, dentro del campo del juicio médico razonado, apropiadas para ser utilizadas en contacto con los tejidos de humanos y animales inferiores ' sin la toxicidad, irritación, respuesta alérgica y similares, indebidas y que están conmensuradas con una relación de beneficio/riesgo razonable efectivas para su uso pretendido en el tratamiento de tumores de trastornos relacionados angiogénicos . Las sales farmacéuticamente aceptables son bien conocidas en la técnica. Por ejemplo, S.M Berge, et al. describen con mayor detalle sales farmacéuticamente aceptables en el documento J . Pharma ceu t i ca l Sci ences , 66: 1-19 (1977)) . Las sales acidas de adición representativas incluyen las sales clorhidrato, bromhidrato, sulfato, bisulfato, acetato, oxalato, valerato, oleato, palmitato, estearato, laurato, borato, benzoato, lactato, fosfato, toluensulfonato, metansulfonato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, ascorbato, glucohept anoato , lactobionato, lauri 1 sul fato y similares. Las sales de metales alcalinos o alcalinotérreos representativos incluyen las sales de sodio, calcio, potasio, magnesio y similares. Tal como se utiliza en la presente invención, el término "vehículos farmacéuticamente aceptables" significa un material de relleno, diluyente, material para encapsulación o auxiliares de formulación de cualquier tipo no tóxicos, sólidos, inertes, semisólidos o líquidos. Algunos ejemplos de los materiales que pueden servir como vehículos farmacéuticamente aceptables son azúcares, tales como lactosa, glucosa y sacarosa; almidones tales como almidón de maíz y almidón de papa, celulosa y sus derivados tales como carboximetilcelulosa de sodio, etilcelulosa y acetato de celulosa; tragacanto pulverizado; malta; gelatina; talco; excipientes tales como manteca de cacao y ceras para supositorios; aceites tales como aceite de cacahuate, aceite de semilla de algodón, aceite de cártamo, aceite de ajonjolí, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soya; glicoles tales como propilenglicol; polioles tales como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicoles; esteres tales como oleato de etilo y laurato de etilo; agar; agentes para regulación de pH tales como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; ácido algínico; agua libre de pirógenos; solución salina isotónica; solución de Ringer; alcohol etílico y soluciones reguladas con fosfato; así como otras substancias compatibles no tóxicas utilizadas en formulaciones farmacéuticas. En la composición también pueden estar presentes agentes humectantes, emulsificantes y lubricantes tales como lauri lsul fato de sodio y estearato de magnesio, así como agentes colorantes, agentes para liberación, agentes para recubrimiento, edulcorantes, saborizantes y agentes para perfume, conservadores y antioxidantes, de conformidad con el juicio del formulador. Los ejemplos de antioxidantes farmacéuticamente aceptables incluyen antioxidantes solubles en agua tales como ácido ascórbico, clorhidrato de cisteína, bisulfito de sodio, metabisulfito de sodio, sulfito de sodio, y similares; antioxidantes solubles en aceite tales como palmitato de ascorbilo, hidroxianisol butilado (BHA) , hidroxitolueno butilado (BHT) , lecitina, galato de propilo, alfa-tocoferol y similares; los agentes quelantes de metal tales como ácido cítrico, ácido et i lendiamint et ra-acét ico (EDTA) , sorbitol, ácido tartárico, ácido fosfórico y similares.

Con la frase "una cantidad terapéuticamente efectiva" del agente o compuesto de la invención se quiere decir una cantidad suficiente del compuesto para tratar tumores y trastornos angiogénicos relacionados en una relación de beneficio/riesgo razonable que pueda ser aplicada a cualquier tratamiento médico. Sin embargo, se entenderá que el uso diario total de los compuestos y composiciones de la presente invención será decidido por el médico encargado dentro del campo del juicio médico razonado. El nivel de dosis terapéuticamente efectiva específico para cualquier paciente en particular dependerá de una variedad de factores que incluyen el trastorno que está siendo tratado y la gravedad del trastorno; la actividad del compuesto específico utilizado; la composición específica utilizada; la edad; peso corporal; condición general de salud, sexo y dieta del paciente; el tiempo de administración, la vía de administración, y la velocidad de excreción del compuesto específico utilizado; la duración del tratamiento; los fármacos utilizados en combinación o en forma coincidente con el compuesto específico empleado; y factores similares bien conocidos en el campo médico.

Esta invención también provee composiciones farmacéuticas en formas de dosificación unitaria, que comprenden una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto (o compuestos) de esta invención en combinación con un vehículo farmacéutico convencional. Los preparados inyectables, por ejemplo, suspensiones acuosas u oleosas inyectables estériles se pueden formular de conformidad con la técnica conocida utilizando agentes dispersantes o humectantes apropiados y agentes suspensores . El preparado inyectable estéril también puede ser una solución, suspensión o emulsión inyectable estéril en un diluyente o solvente parenteralmente aceptable, no tóxico, por ejemplo, como una solución en 1, 3 -butanodiol . Entre los vehículos y solventes aceptables que se pueden utilizar, están el agua, la solución de Ringer, la solución de cloruro de sodio isotónica y grado U.S.P. Además, se utilizan en forma convencional aceites no volátiles como un solvente o medio para suspensión. Para este propósito se puede utilizar cualquier aceite no volátil blando, incluyendo mono- o diglicéridos sintéticos. Además, en la preparación de inyectables se utilizan ácidos grasos tales como ácido oléico. La formulación inyectable se puede esterilizar, por ejemplo, mediante filtración a través de un filtro que retenga bacterias, o incorporando agentes esterilizantes en forma de composiciones sólidas estériles que puedan ser disueltas o dispersas en agua estéril u otro medio inyectable estéril justo antes de utilizar. Con el fin de prolongar el efecto de un fármaco, con frecuencia es deseable disminuir la absorción de un fármaco desde la inyección subcutánea o intramuscular. La manera más común de conseguir esto es inyectar una suspensión de material cristalino o amorfo con una solubilidad baja en agua. La velocidad de absorción del fármaco depende entonces de la velocidad de disolución del fármaco, la cual, a su vez, depende del estado físico del fármaco, por ejemplo, el tamaño de cristal y la forma cristalina. Otra estrategia para retardar la absorción de un fármaco, es administrar el fármaco como una solución o suspensión en aceite. También se pueden elaborar formas para depósitos inyectables formando matrices de microcápsulas de fármacos y polímeros biodegradables tales como poliláctido-pol igl icol ido . Dependiendo de la relación de fármaco a polímero y de la composición de polímero, se puede controlar la velocidad de liberación del fármaco. Los ejemplos de otros polímeros biodegradables incluyen pol i - ortoésteres y poli-anhídridos. Los inyectables en depósito también se pueden elaborar encerrando el fármaco en liposomas o microemulsiones que sean compatibles con los tejidos corporales. Los supositorios para la administración del fármaco por vía rectal se pueden preparar mezclando el fármaco con un excipiente no irritante apropiado tal como manteca de cacao y polietilenglicol, los cuales son sólidos a la temperatura ambiente pero líquidos a la temperatura rectal y por lo tanto se funden en el recto y liberan el fármaco. Las formas de dosificación sólidas para la administración por vía oral pueden incluir cápsulas, tabletas, pildoras, pastillas, tiras y granulos. En tales formas de dosificación sólidas el compuesto activo se puede mezclar por lo menos con un diluyente inerte tal como sacarosa, lactosa o almidón. Dichas formas de dosificación también pueden comprender, como es la práctica normal, sustancias adicionales diferentes a los diluyentes inertes, por ejemplo, lubricantes para tableteado y otros auxiliares para tableteado, tales como estearato de magnesio y celulosa microcpstal ina . En el caso de cápsulas, tabletas y pildoras, las formas de dosificación también pueden comprender agentes reguladores de pH . Las tabletas y pildoras se pueden preparar, en forma adicional, con recubrimientos entéricos y otros recubrimientos que controlen la liberación. Las composiciones sólidas de un tipo similar también se pueden utilizar como materiales de relleno en cápsulas de gelatina suave y dura utilizando excipientes tales como lactosa o azúcar de leche así como pol íetilengl icoles de alto peso molecular y similares. Las formas de dosificación líquidas para la administración por vía oral pueden incluir emulsiones, microemulsiones , soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables que contengan diluyentes inertes utilizados en forma común en la técnica tales como agua. Dichas composiciones también pueden comprender adyuvantes, tales como agentes humectantes; agentes emul si ficantes y suspensores, edulcorantes; sabopzantes y esencias. Si se desea, los compuestos de la presente invención se pueden incorporar en sistemas de liberación lenta o de suministro dirigido tales como matrices poliméricas, liposomas y microesferas. Estos se pueden esterilizar, por ejemplo, mediante filtración a través de un filtro que retenga bacterias, o incorporando agentes esterilizantes en forma de composiciones sólidas estériles que se puedan disolver en agua estéril, o algún otro medio inyectable estéril inmediatamente antes del uso. Los compuestos activos también se pueden microencapsular con uno o más excipientes como se indicó anteriormente. Las formas de dosificación sólida de tabletas, grageas, cápsulas, pildoras y granulos se pueden preparar con recubrimientos y cubiertas tales como recubrimientos entéricos y otros recubrimientos bien conocidos en la técnica de formulación farmacéutica. Estas pueden contener en forma opcional agentes opacantes y también pueden estar en una composición tal que éstas liberen el ingrediente o ingredientes activos únicamente, o de preferencia, en cierta parte del tracto intestinal, opcionalmente en un modo retardado. Los ejemplos de composiciones para incrustación que se pueden utilizar incluyen sustancias poliméricas y ceras. Las formas de dosificación para la administración por vía tópica o transdérmica de un compuesto de esta invención incluyen también ungüentos, cremas, lociones, geles, polvos, soluciones, aspersiones, inhalantes o parches. El componente activo se mezcla bajo condiciones estériles con un vehículo farmacéuticamente aceptable y cualquiera de los conservadores o soluciones reguladoras necesarias, según se requiera. Se contempla que las formulaciones oftálmicas, gotas para los oídos, ungüentos oftálmicos, polvos y soluciones también están dentro del campo de esta invención. Los ungüentos, pastas, cremas y geles pueden contener, además de un compuesto activo de esta invención, excipientes tales como aceites, grasas, ceras de origen animal y vegetal, parafinas, almidón, tragacanto, derivados de celulosa, polietilenglicoles, silicones, bentonita, ácido silícico, talco y oxido de zinc, o mezclas de los mismos. Los polvos y aspersiones pueden contener, además de los compuestos de esta invención, excipientes tales como lactosa, talco, ácido silícico, hidróxido de aluminio, silicato de calcio y polvo de poliamida, o mezclas de estas sustancias. Las aspersiones pueden contener, de manera adicional, los propelentes acostumbrados tales como los clorof luorohidrocarburos . Los parches transdérmicos tienen la ventaja adicional de proveer el suministro controlado de un compuesto al cuerpo. Dichas formas de dosificación se pueden preparar disolviendo o dispersando el compuesto en el medio apropiado. También se pueden utilizar fomentadores de absorción para incrementar el flujo del compuesto a través de la piel. La velocidad se puede controlar ya sea suministrando una membrana para el control de velocidad o dispersando el compuesto en una matriz polimérica o gel . Las composiciones que contienen a los compuestos activos se administran en una forma compatible con la formulación de dosis y en una cantidad terapéuticamente efectiva. La cantidad a ser administrada y el tiempo de administración dependerá del hospedero que será tratado, la capacidad del sistema del hospedero para utilizar el ingrediente activo, y el grado de efecto terapéutico deseado. Las cantidades precisas de ingrediente activo requerido para ser administrado dependen del juicio del practicante, y son particulares para cada individuo.

Los intervalos de dosis adecuados para la aplicación sistémica se describen en la presente invención y dependen de la vía de administración. Los regímenes apropiados para la administración también varían, pero se tipifican mediante una administración inicial, seguido por dosis repetidas a uno o más intervalos predeterminados mediante una inyección posterior u otra ruta de administración. La presente invención también provee una composición farmacéutica útil para practicar los métodos terapéuticos descritos en la misma. Las composiciones contienen un compuesto activo descrito anteriormente en la presente invención, junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Los preparados para administración parenteral de los compuestos o composiciones de la presente invención incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones estériles, acuosas o no acuosas. Los ejemplos de solventes no acuosos son propilenglicol, polietilenglicol, aceites vegetales tales como aceite de oliva y esteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo. Los vehículos acuosos incluyen agua, soluciones alcohólicas/acuosas, emulsiones o suspensiones, incluyendo solución salina y medios regulados respecto al pH . Los vehículos parenterales incluyen solución de cloruro de sodio, dextrosa de Ringer, dextrosa y cloruro de sodio, solución de Ringer con lactato o aceites no volátiles. Los vehículos intravenosos incluyen reabastecedores de fluidos y de nutrientes, reabastecedores de electrolitos (tales como aquellos basados en la solución de dextrosa de Ringer) y similares. También pueden estar presentes conservadores y otros aditivos, tales como, por ejemplo, antimicrobianos, antioxidantes, agentes quelantes, gases inertes y similares . Otro aspecto de la presente invención provee un método para inhibir la interacción de MMP2 con avß3 y de esta manera la angiogénesis en un tejido tumoral. El método de inhibición comprende administrar al hospedero una composición que comprenda una cantidad inhibidora de angiogénesis de un compuesto descrito anteriormente en la presente invención. La interacción de MMP2 con avß3 se inhibe poniendo en contacto avß3 con un compuesto de la presente invención. La angiogénesis es la formación de una red neovascular a partir de los vasos preexistentes del hospedero y es requerida para el crecimiento tumoral más allá de 1-2 mm3. Para el propósito de la presente invención, la angiogénesis se inhibe en tanto que se disminuyan la angiogénesis y los síntomas de la enfermedad mediados por angiogénesis. Los intervalos de dosis para la administración del compuesto activo a un hospedero dependen del compuesto activo particular y de su potencia hacia un tumor o integrina particular. El experto en la técnica puede determinar fácilmente la dosis apropiada para un compuesto activo particular sin experimentación indebida. El hospedero puede ser cualquier mamífero. La dosis debe ser lo suficientemente grande para producir el efecto terapéutico deseado en el cual se reduzcan la angiogénesis y los síntomas de enfermedad mediados por la angiogénesis, y por lo general es una cantidad suficiente para mantener un nivel plasmático del compuesto activo en el intervalo de aproximadamente 0.01 hasta aproximadamente 100 micromolar (µM) , de preferencia aproximadamente 0.2 hasta aproximadamente 20 µM , más preferido aproximadamente 1 hasta aproximadamente 10 µM . Sin embargo, la dosis no debe ser tan grande como para que ocasione efectos secundarios adversos. La dosis por kilogramo (kg) de peso corporal puede variar desde 1 hasta 20 mg por dosis, en una o más administraciones de dosis diariamente, durante uno o varios días o de manera indefinida. Para la inhibición de angiogénesis, la cantidad terapéuticamente efectiva es una cantidad de compuesto activo suficiente para producir una inhibición mensurable de la angiogénesis en el tejido que está siendo tratado, es decir, una cantidad inhibidora de angiogénesis o una cantidad que inhiba la interacción MMP2-avß3. La inhibición de angiogénesis se puede medir in situ mediante inmunohistoquímica como se describe en la presente invención, o utilizando otros métodos conocidos por el experto en la técnica. La presente invención provee, en forma adicional, composiciones farmacéuticas útiles para practicar los métodos terapéuticos descritos en la misma. Las composiciones contienen un compuesto activo definido anteriormente en la presente invención junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable . La presente invención también provee un método para inducir apoptosis en células de tumor. Este método comprende administrar al hospedero una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto activo suficiente para iniciar la apoptosis de las células del tumor. Para el propósito de la presente invención, se induce la apoptosis de célula de tumor si se observa una apoptosis incrementada de célula de tumor en el tumor elegido como objetivo que está siendo tratado. La apoptosis de célula de tumor se puede medir utilizando métodos descritos en la presente invención o que se conozcan comúnmente en la técnica . Se proveen los siguientes ejemplos no limitativos para ilustrar varios aspectos de la presente invención.

Materiales y métodos Anticuerpos, células y reactivos Las células CS-1 de melanoma de hámster y las células CS-1 transfectadas con la subunidad ß3 de integrina de humano (células ß3CS-l) se describieron previamente ( Cel l , 85, 683-93 (1996) ; Cel l , 92, 391-400 (1998)) . Los anticuerpos monoclonales conjugados con peroxidasa de rábano (HRP por sus siglas en inglés) anti-biotina mAb BN- 34 y anti-actina mAb AC-40 se obtuvieron de Sigma (St. Louis, MO) . Los anticuerpos policlonales (pAb) Anti-Factor de von Willebrand (vWF) se obtuvieron de DAKO (Glostrup, Dinamarca) . Los péptidos cíclicos cRGDfV y cRADfV y la integrina avß3 fueron suministrados generosmanete por Merck KGaA (Darmstadt, Alemania) . La proMMP2 purificada y la integrina avß3 fueron suministradas por Chemicon International (Temecula, CA) . La MMP2 activa purificada se obtuvo de Calbiochem (La Jolla, CA) .

El factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF) fue suminstrado amablemente por Scios (Mountain View, CA) .

EJEMPLO 1 Pruebas de unión a integrina en fase sólida Las integrinas purificadas se adsorben durante la noche en cavidades para microtitulación (1-5 µg/ml, 50 µg/cavidad) antes de bloquear con Caseinblocker (Pierce, Rockford, IL) . A las cavidades se agrega MMP2 purificada conjugada con biotina (bMMP2, 3-5 nM) en solución reguladora para unión (Tris 50 mM , pH 8,150 mM de NaCl , 1 mM de MgCl2, 0.5 mM de MnCl2) en presencia o ausencia de los compuestos de prueba, péptidos RGD o RAD cíclicos, o vehículo de solución reguladora sólo. Las cavidades de control no reciben mtegrma. Como referencia se utiliza vitronectma conjugada con biotma (bVN, 1 µg/ml) . La proteína unida se detecta con mAb HRP- ant i -biot ma y se cuantifica a 450 nm con solución de 3, 3', 5,5'-tet ramet ilbencidma solution (TMB; un substrato para la peroxidasa) (BioRad, Hercules, CA) . Para la evaluación de la unión directa de mtegrma por parte del compuesto 19, se recubren cavidades de microt i tulación Immulon-4 (Dynatech Laboratories, Chantilly, VA) con avß3 y a5ß? (10 µg/ml, 50 µl/cavidad) , las cuales se bloquean sust ncialmenbte y se incuban con titulación del [14C] - compuesto 19 antes de agregar 150 µl de solución reguladora para unión que contiene 0.1% de Tween-20 y de aspirar todo el líquido. Las cavidades secas se separan y se sumergen en coctel para destello líquido BetaMax (ICN Biochemical s , Costa Mesa, CA) para la cuant i f icación . A partir de esta curva de unión se examina una concentración de sub- saturación (3 µM) del [14C] - compuesto 19 en presencia y ausencia de un exceso molar de 25 veces (75 µl ) del compuesto 19 o del compuesto 9 sin marcar, o 100 µM de péptido RGD o RAD cíclico. El control es bVN , que se utiliza y se detecta como se indicó anteriormente.

EJEMPLO 2 Pruebas de unión de MMP2 a células y de degradación de [3H] -colágeno IV Se incuban células CS-1 o células ß3CS-l en medio basal para fibroblasto con solución reguladora para adhesión (FBM) complementado con 0.5% de seroalbúmina bovina (BSA), 0.4 mM de MnCl2 y 10 µg/ml de aprotinina) que contiene ya sea 4 nM de MMP2 activa, purificada, sola, o en combinación con 10 µM del compuesto 19 o del compuesto 9 durante 45 minutos a 37°C antes del lavado y de la adición a las cavidades revestidas con [3H] - colágeno IV. Las cavidades se revisten durante la noche con 50 µl de [3H] -colágeno IV 0.414 mCi/ml (ICN Biochemicals, Costa Mesa, CA) y se lavan exhaustivamente hasta que la radioactividad en el lavado recuperado alcanza los niveles del fondo. De manera alternativa, las células se tratan como se indicó anteriormente en ausencia de MMP2 , o las soluciones de MMP2 se agregan directamente a las cavidades sin células, como controles. LA degradación del colágeno IV se cuantifica midiendo la radioactividad liberada en los 50 µl de medio de cultivo según se determina en una contadora de destello en líquido. Para la evaluación de la unión de MMP2 conjugada con biotina a las células CS-1, las células se suspenden en solución reguladora para adhesión y se incuban con bMMP2 12 nM durante 45 minutos a 37°C en presencia o ausencia de 10 µM del compuesto 19 o del compuesto 9. Las células se lavan posteriormente antes de la lísis y del procesamiento SDS-PAGE e immunoblot t ing con un mAb ant i -biot ina .

EJEMPLO 3 Síntesis del compuesto (27) Se trata una solución de carbonato de N,N'-disuccinimidilo (5.38 g, 21 mmoles) en acetonitrilo (150 ml ) con alcohol 4 -( tri f luoromet il ) bencíl ico (2.87 ml , 21 mmoles) y trietilamina (Et3N; 5.8 ml , 42 mmoles) y se agita a 25°C. Después de 3 horas, esta solución se agrega a un matraz que contiene éster metílico de N-e-BOC- 1 isina (4.2 g, 14 mmoles) en acetonitrilo y se agita durante otras 3 horas adicionales. Se evapora el solvente y el residuo se disuelve en CH2C12 (250 ml ) y se lava con ácido clorhídrico al 10% (2 x 200 ml ) y solución acuosa saturada de NaHC03 , (200 ml ) . La cromatografía de vaporización instantánea (Si02, CH2Cl2/EtOAc 3:1) permite obtener 6.4 g (99%) del compuesto 27 como un aceite de color amarillo pálido. [a]D25 -8.9 (c 5.55, CH30H) . 1H RMN (CDC13, 400 MHz) d 7.57 (d, J = 8.1 Hz, 2H) , 7.39 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 5.70 (d, J = 7.9 Hz, ÍH) , 5.13 (m, 2H), 4.71 (m, ÍH) , 4.28 (m, ÍH), 3.67 (s, 3H) , 3.03 (m, 2H), 1.78 (m, ÍH) , 1.64, (m, ÍH) 1.46-1.32 (m, 4H) 1.35 (s, 9H) . 13C RMN (CDC13, 100 MHz) d 172.9, 156.2, 155.8, 140.4, 130.1 (q, J = 32.0 Hz) , 127.8, 125.3, 122.9 (q, J = 270.0 Hz) , 79.05, 65.8, 53.7, 52.3, 39.8, 31.7, 29.5, 28.4, 22.2. IR (película) ?máx 3357, 2952, 1790, 1745, 1524 cm"1. FABHRMS (NBA-Nal) m/z 463.2044 (M + H+ , C2?H29F3N206 requiere 463.2056) .

EJEMPLO 4 Síntesis del compuesto 29 Se trata una solución del compuesto 27 (2.2 g, 48.8 mmoles) en CH2Cl2 (3 ml ) con HCl 4N-dioxano (10 ml) y se agita durante 20 minutos a 25°C. El solvente y el exceso de ácido se eliminan a presión reducida, y la sal clorhidrato cruda se disuelve en DMF (40 ml ) se trata con monoamida del ácido N- ((ter-butiloxi) carbonil) -N' - (2 - (4 -f luorof enil ) etil ) iminodiacét ico (compuesto 28) (1.68 g, 4.8 mmoles) , PyBrOP (3.3 g, 7.1 mmoles) y diisopropiletilamina (i-Pr2NEt; 5.0 ml , 29 mmoles) y se agita durante 1 hora a 25°C. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc (400 ml ) y se lava con HCl acuoso al 10% (2 x 300 ml ) solución acuosa saturada de NaHC03 (300 ml ) La cromatografía de vaporización instantánea (Si02, CH2Cl2/EtOAc 1:1) permite obtener 2.47 g (74%) del compuesto 29 como un sólido espumoso de color blanco. [a]D25 -7.1 [c 4.50, CH3OH) . 1H RMN (CDC13, 400 MHz) d 8.23 y 7.59 (m, juntos ÍH) , 7.58 (d, J = 8.1 Hz, 2H) , 7.43 (m, 2H), 7.13 (m, 2H) , 7.06 y 6.78 (m, juntos ÍH) , 6.94 (m, 2H) , 5.70 (dd, J = 12.9 y 8.2 Hz, ÍH) , 5.11 (m, 2H) , 4.31 (m, ÍH) , 3.85-3.72 (m, 4H) , 3.71 (s, 3H, 3.49 (m, 2H) , 3.22 (m, 2H) , 2.79 (m, 2H) , 1.81-1.39 (m, 6H) 1.38 (s, 9H) . 13C RMN (CDC13, 100 MHz) d 172.8, 170.0, 169.9, 155.8, 154.8, 161.4 (d, J = 242.7 Hz) , 140.2, 134.4, 130.1 (q, J = 33.4 Hz) , 130.0, 127.7, 125.3 (q, J = 3.0 Hz) , 123.8 (q, J = 299.9 Hz) , 115.0, 81.2 , 65.7, 53.9, 53.3 , 52.2 , 40.8, 38.6, 34.4, 31.5, 28.0, 22.4. IR (película) ?máx 3267, 2935, 1708, 1657, 1511 cm-1. FABHRMS (NBA-CsI) m/z 831.2026 (M+Cs+, C33H42F4N408 requiere 831.1993) .

EJEMPLO 5 Síntesis del compuesto 19 Se trata una solución del compuesto 29 (50 mg, 0.075 mmoles) en CH2C12 (1 ml ) con HCl 4N-dioxano (1 ml ) y se agita durante 1 hora a 25°C. El solvente y el exceso de ácido se eliminan bajo una corriente de N2 , y la sal clorhidrato cruda se suspende en CH2C12 (1 ml ) y se trata con dicloruro de isoftaloilo (7.6 mg , 0.038 mmoles) , e i-Pr2NEt (0.05 ml , 0.3 mmoles) y se agita durante 12 horas a 25°C. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc (50 ml ) y se lava con ácido clorhídrico al 10% (3x 30 ml ) , solución acuosa saturada de NaHC03 (30 ml ) y solución acuosa saturada de NaCl (30 ml ) . La cromatografía de vaporización instantánea (Si02, MeOH/CH2Cl2/EtOAc 1:4.5:4.5) permite obtener 30 mg (60%) del compuesto 19 como un polvo de color blanco . 1 RMN (CD3OD, 400 MHz) d 7.62 (m, 4H), 7.52 (m, 4H) , 7.42 (m, 4H) , 7.19 (m, 4H) , 6.96 (m, 4H) , 5.14 (m, 4H), 4.16 (m, 2H), 4.13 (m, 2H), 4.08 (m, 2H) , 3.99 (m, 4H) , 3.68 (s, 6H) , 3.45-3.35 (m, 4H) , 3.25-3.11 (m, 4H) , 2.82-2.70 (m, 4H) , 1.82 (m, 2H) , 1.69 (m, 2H) 1.60-1.34 (m 8H) . IR (película) ?má? 3291, 2936, 1725, 1651, 1326 cm-1 1. FABHRMS (NBA-CsI) m/z 1459.4015 (M+Cs+, C64H70F8N8O14 requiere 1459.3938) .

EJEMPLO 6 Síntesis del compuesto 30 Se trata una solución del compuesto 19 (13 mg , 0.01 mmoles) en ter-butanol (0.3 ml ) con LiOH«H20 (0.91 mg , 0.22 mmoles) disuelto en H20 (0.15 ml ) , y se agita durante 2 horas a 0°C. La mezcla de reacción se extingue después con HC02H (1 ml ) , diluido con EtOAc (10 ml ) y se lava con solución acuosa saturada de NaCl (2 x 10 ml ) . El secado (Na2S04) y la evaporación permiten obtener 12 mg (95%) del compuesto 30 como un polvo de color blanco . 1H RMN (DMS0-d6, 400 MHz) d 12.54 (br s,2H) , 8.63 (m, ÍH) , 8.43 (m, 2H) , 8.30 (m, ÍH) , 7.74 (m, 4H) , 7.69 (m, 2H) , 7.57 (m, 4H) , 7.40 (m, 4H) , 7.24 (m, 4H) , 7.09 (m, 4H) , 5.15 (m, 4H) , 4.14 (m, 2H) , 4.02-3.87 (m, 8H) , 3.31 (m, 4H) , 3.208 (m, 4H) , 2.74 (m, 4H) , 1.71 (m, 2H) , 1.62 (m, 2H) 1.50- 1.34 (m, 8H) . IR (película) ?máx 3287, 2928, 1705, 1659, 1320 cm"1; MALDIHRMS m/z 1321.4493 (M+Na+, CS2H66F8N8014 requiere 1321.4468) .

EJEMPLO 7 Síntesis del [14C] -compuesto 19 Se trata una solución del compuesto 27 (1.7 mg, 1.3 mmoles) y EDCI (2.0 mg , 10.3 mmoles) en DMF (20 ml ) con 0.3 ml de una solución de 14CH3OH en CH2C12 (57 mCi/mmol, 5.2 mmoles 14CH30H) y 35 ml de solución de reserva de DMAP en CH2C12 (0.6 mmoles de DMAP) y se agita durante 4 horas a 0°C. La mezcla de reacción se diluye después con EtOAc (3 1) y se lava con ácido clorhídrico al 10% (3 x 3 ml ) y solución acuosa saturada de NaHC03 (3 ml ) y se seca (Na2S04) . La purificación en CCFP (Si02, EtOH/CHCl3/EtOAc 2:3:3) permite obtener 0.6 mg (35%) del [14C] -compuesto 19 como una película de color blanco. Este material es idéntico al éster dimetílico del compuesto 1 sin marcar correspondiente mediante 1H RMN y HPLC. La actividad relativa es de aproximadamente 104 mCi/mmol. 1li RMN (CD3OD, 400 MHz) d 7.62 (m, 4H), 7.52 (m, 4H) , 7.42 (m, 4H), 7.19 (m, 4H), 6.96 (m, 4H) , 5.14 (m, 4H) , 4.16 (m, 2H) , 4.13 (m, 2H) , 4.08 (m, 2H) , 3.99 (m, 4H) , 3.68 (s, 6H) , 3.45-3.35 (m, 4H) , 3.25-3.11 (m, 4H), 2.82-2.70 (m, 4H) , 1.82 (m, 2H) , 1.69 (m, 2H) 1.60-1.34 (m, 8H) .

Resultados y discusión Los conjuntos combinatorios de los compuestos, incluyendo los compuestos de las fórmulas (I) y (II) se describe con mayor detalle, junto con los métodos de síntesis de los mismos, en Boger et al., Bi oorg . Med . Chem , 6, 1347-1378 (1998) . Boger et al. describen la preparación de un conjunto combinatorio de 60 mezclas de 10 compuestos cada una en las cuales los compuestos individuales en las mezclas están constituidos por tres subunidades acopladas juntas, se muestra en la figura 2. Las subunidades de los compuestos se designan como A, B y C. El conjunto se construye a partir de seis unidades A diferentes (Al - A6) , 10 unidades B diferentes (Bl - BIO) , y 10 grupos de enlace C diferentes (Cl - CÍO) . Cada unidad A se acopla a cada unidad B, para formar 60 compuestos AB distintos. Los compuestos AB individuales se acoplan después con mezclas de 10 grupos de enlace C diferentes, para formar 60 mezclas de 10 compuestos cada una, designadas AxBy en la cual los subíndices x e y indican las subunidades A y B individuales, respectivamente, que se incorporan en los compuestos de las mezclas. Las subunidades A, B y C del conjunto combinatorio de compuestos se muestran en la figura 2. La evaluación de las 60 mezclas descritas anteriormente en la presente invención en una prueba de unión competitiva a integrina avß3 , en competencia con MMP2 indica que varias de las mezclas inhiben la unión de MMP2 a la integrina avß3. Los resultados de la prueba de evaluación se presentan en la figura 3. Las mezclas particularmente activas incluyen A1B6 , A1B7 , A1B8, A4B1, A5B4, A5B5, A5B6 , A5B10, y A6B10. La mezcla más activa es A6B10, por lo tanto, los 10 compuestos individuales de la mezcla se sintetizan por separado y se examinan en la misma prueba, cuyos resultados se presentan en la figura 4. Todos los componentes individuales A6B10C1 hasta A6B10C10 son activos a una concentración de 3 µM en la prueba . También se evalúan los compuestos análogos (2 - 26) de A6B10C4 (compuesto 1) , mostrados en la figura 5. Los resultados de las pruebas de unión para los compuestos 2 - 26 se presentan en la figura 6A. todos los compuestos excepto los compuestos 8, 9 y 23 inhiben la unión de MMP2 a la integrina . Los inhibidores de la unión de MMP2 act iva/ int egrina avß3 de la presente invención son abarcados por las fórmulas (I) y (II) . El compuesto 19 se examina con mayor detalle para determinar su objetivo específico y para definir sus propiedades biológicas. La benzoilamida del compuesto 9 se selecciona como un compuesto de control negativo apropiado para muchos de sus estudios debido a que se encontró que carece de actividad antagonista en la prueba de unión, a pesar de su similitud estructural global y de sus propiedades físicas similares (por ejemplo solubilidad y carácter hidrofóbico) . El compuesto 19 presenta inhibición de unión de MMP2 a la integrina dependiente de la concentración, como se muestra en la figura 6B . Se incorpora una marca radioactiva de (14C) en el compuesto 19 en el sustituyente de tipo éster (actividad relativa de aproximadamente 104 mCi/mmol) . Después de incubar (a una concentración de 3 µM) con avß3 fija y del lavado subsiguiente, se encontró que este compuestos se adhiere a la integrina como se demuestra en la figura 7. La incubación en presencia de un exceso molar de 25 veces de compuesto 19 frío reduce, de manera significativa, la cantidad observada de agente unido, mientras que la incubación en presencia de un exceso molar de 25 veces del compuesto 9 de control (frío) no afecta la unión del [14C] -compuesto 19. En un experimento similar que mide la interacción del [14C] - compuesto 19 a MMP2 fija, no se observa unión. Esto resultados sugieren que el origen de la actividad antagonista observada en la prueba de unión de MMP2-avß3 se deriva de la unión específica del compuesto 19 a avß3. La naturaleza de la interacción compuesto 19-avß3 es independiente del sitio de integrina que reconoce la secuencia Arg-Gly-Asp. El péptido cíclico RGD ci cí o (Arg-Gly-Asp-D- Phe -Val ) no tiene efecto en la unión del [14C] -compuesto 19 (figura 7) . De hecho, como se muestra en la figura 8, el compuesto 19 no inhibe la unión de vitronectina, el ligando clásico de alta afinidad de avß3 , a la integrina, lo cual es consistente con el concepto de que el sitio de unión para el compuesto 19 es diferente de aquel que une a los ligandos RGD. También se estudia al compuesto 19 en una prueba celular, la cual mide la capacidad de las células endoteliales para utilizar MMP2 para degradar una matriz de proteína, un paso clave en la angiogénesis. Previamente se demostró que el alterar la unión de MMP2 a avß3 inhibe la degradación de colágeno IV. Se encontró que las células de melanoma CS-1 transfectadas con avß3 degradan el [3H] - colágeno IV inmovilizado en un grado mucho mayor que la degradación de las células CS-1 ß3-negativas (las cuales carecen de avß3) . Como se muestra en la figura 9, el tratamiento de estas células con el compuesto 19 reduce, en forma significativa, la degradación incrementada de matriz, lo cual es consistente con el hecho que las células no puedan utilizar MMP2 , la cual no se une a la superficie de la integrina. Sin embargo, el compuesto 19 no inhibe directamente la actividad proteolítica de MMP2 , debido a que la enzima purificada (activa) en ausencia de células puede degradar [3H] -colágeno IV hasta un grado similar en presencia o ausencia del compuesto 19. Estos resultados apoyan la propuesta que los compuestos de la fórmula (I) alteran la capacidad de las células de tumor de utilizar MMP2 para degradar las proteínas de la ECM en una forma análoga a PEX . Los compuestos de la fórmula (I) no interfieren con la unión de avß3 a sus ligandos clásicos de tipo RGD ni tampoco funcionan como inhibidores directos de la proteinasa. La descripción y los ejemplos anteriores se deben tomar como ilustrativos y no como limitaciones. Incluso son posibles otras variantes dentro del alcance campo de la presente invención y serán evidentes por sí mismas a los expertos en la técnica.

Claims (1)

1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito el presente invento se considera como novedad y por lo tanto se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes: REIVINDICACIONES 1.- Un método para inhibir la interacción de MMP2 con la integrina avß3 en una célula hospedera que comprende poner en contacto la integrina con una cantidad inhibidora de la interacción, de un compuesto representado por la fórmula : en la cual G1 y G2 son cada uno de manera independiente -NH-C (O) -O-R1 , -NH- C (O) -O- ( CH2 ) v-(C6H4)-X3, -NH-C (O) -NH- (CH2) v- (CSH4) -X3, -O-C(O) -NH¬ CH; : C 6 H4 ) -X O-C (O) -O- (CH2) v- (CSH4) -X: -NH-C (O) -CH2- (C6H4) -X3 ; Y1 y Y2 son cada uno de manera independiente OH, alquilo de C?-C4, hidroxialquilo de C?-C4, alcoxi de C?-C4, fenilo, bencilo, o -NH2 ; R1 es alquilo de C?-C4; X1 y X2 son cada uno de manera independiente halógeno o alcoxi de C?-C4; X3 es halógeno, nitro, alquilo de C?-C4, alcoxi de Cx-C4 , o perfluoroalquilo de Cx-C4; Z es -C=C-, -C6H4-, cis-CH=CH-, trans-CH=CH- , cí s- CH2CH=CH- CH2 - , trans -CH2CH=CH-CH2 , 1,4-naftilo, ci s - 1 , 3 - c ic lohexi lo , trans - 1 , 3 - ciciohexilo , ci s - 1 , 4 - ciclohexi lo , o trans - 1 , 4 - ciclohexi lo ,- A es H o un enlace covalente; m y n son cada uno de manera independiente un número entero que tiene un valor de 0 ó 1; t es un número entero que tiene un valor de 0 ó 1; y p, r y v son cada uno de manera independiente un número entero que tiene un valor de 1 ó 2; con las condiciones que cuando A sea H, t es 0; cuando A sea un enlace covalente, t es 1; cuando m sea 0, Y1 es hidroxialquilo de C?-C4; y cuando n sea 0, Y2 es hidroxialquilo de C?-C4. 2.- El método de la reivindicación 1 en el cual G1 y G2 son -NH- C (O) -O- ( CH2 ) v- ( CSH4 ) -X3 , A es un enlace covalente, y v es 1. 3.- El método de la reivindicación 2 en el cual X3 es trifluorometilo. El método de la reivindicación 2 en el cual Y1 y Y2 son OH, m es 1, y n es 1. 5.- El método de la reivindicación 2 en el cual por lo menos uno de X1 y X2 es para-fluoro. 6.- El método de la reivindicación 2 en el cual m es 1, n es 1, y por lo menos uno de R2 y R3 es met ilo. 7. - El método de la reivindicación 2 en el cual R2 y R3 son H, m y n son 1, X1 y X2 son fluoro, y X3 es trifluorometilo. 8.- Un método para inhibir la interacción de MMP2 con la integrina vß3 en una célula hospedera que comprende poner en contacto la integrina con una cantidad inhibidora de la interacción de un compuesto representado por la fórmula : en la cual R2 y R3 son cada uno de manera independiente H, alquilo de C?-C4/ fenilo o bencilo; X1 y X2 son cada uno de manera independiente halógeno o alcoxi de C1-C4; X4 y X5 son cada uno de manera independiente halógeno, nitro, alcoxi de Ci- C4 , alquilo de C1-C4, o perfluoroalquilo de C?-C4; A es H o un enlace covalente; p y r son cada uno de manera independiente un número entero que tiene un valor de 1 ó 2 ; y t es un número entero que tiene un valor de 0 ó 1; con la condición que cuando A sea H, t es 0 y cuando A sea un enlace covalente, t es 1. 9.- El método de la reivindicación 8 en el cual por lo menos uno de X4 y X5 es perfluoroalquilo de C?-C4, y A es un enlace covalente. 10.- El método de la reivindicación 8 en el cual por lo menos uno de R2 y R3 es H, y A es un enlace covalente. 11.- El método de la reivindicación 8 en el cual por lo menos uno de R2 y R3 es metilo, y A es un enlace covalente. 12. - El método de la reivindicación 8 en el cual X4 y X5 son trifluorometilo, R2 y R3 son cada uno metilo, y A es un enlace covalente. 13.- El método de la reivindicación 8 en el cual A es un enlace covalente, R2 y R3 son metilo, X4 y X5 son trifluorometilo, X1 y X2 son fluoro, m es 1 , y n es 1. 14.- Un método para inhibir angiogénesis en un hospedero que comprende administrar al hospedero una cantidad efectiva para inhibir la angiogénesis, de un compuesto representado por la fórmula: en la cual G1 y G2 son cada uno de manera independiente -NH-C (0) -0-R1 , -NH-C (O) -0- (CH2) v-(C6H4)-X3, -NH-C (O) -NH- (CH2) v- (C6H4) -X3, -0-C(0)-NH-(CH2) v- (C6H4) -X3, -0-C(0) -0- (CH2) v- (C6H4) -X3, o -NH-C (0) -CH2- (C6H4) -X3 ; Y1 y Y2 son cada uno de manera independiente OH, alquilo de Cx-C4, hidroxialquilo de Cx-Cj, alcoxi de C?-C4, fenilo, bencilo, o -NH2 ; R1 es alquilo de C?-C4; X1 y X2 son cada uno de manera independiente halógeno o alcoxi de C?-C4; X3 es halógeno, nitro, alquilo de C?-C4, alcoxi de Cx-C4 , o perfluoroalquilo de C?-C4; Z es -C=C-, -C6H4-, cis-CH=CH-, trans-CH=CH- , ci s - CH2CH=CH- CH2 - , tran s -CH2CH=CH-CH2 , 1,4-naftilo, ci s - 1 , 3 - c i c lohexi lo , trans - 1 , 3 - ciclohexi lo , ci s - 1 , 4 - c iclohexi lo , o tran s - 1 , 4-ciclohexilo; A es H un enlace covalente; m y n son cada uno de manera independiente un número entero que tiene un valor de 0 ó 1; t es un número entero que tiene un valor de 0 ó 1; y p, r y v son cada uno de manera independiente un número entero que tiene un valor de 1 ó 2; con las condiciones que cuando A sea H, t es 0; cuando A sea un enlace covalente, t es 1; cuando m sea 0, Y1 es hidroxialquilo de C?-C4; y cuando n sea 0, Y2 es hidroxialquilo de C?-C4. 15.- El método para inhibir la angiogénesis de conformidad con la reivindicación 14 en el cual G1 y G2 son -NH- C (O) -0- ( CH2 ) v- ( CSH4 ) -X3 , A es un enlace covalente, y v es 1. 16.- El método para inhibir la angiogénesis de conformidad con la reivindicación 15 en el cual X3 es trifluorometilo. 17.- El método para inhibir la angiogénesis de conformidad con la reivindicación 15 en el cual Y1 y Y2 son OH, m es 1, y n es 1. 18.- El método para inhibir la angiogénesis de conformidad con la reivindicación 15 en el cual por lo menos uno de X1 y X2 es para-fluoro. 19.- El método para inhibir la angiogénesis de conformidad con la reivindicación 15 en el cual m es 1, n es 1, y por lo menos uno de R2 y R3 es met ilo. 20.- El método para inhibir la angiogénesis de conformidad con la reivindicación 15 en el cual R2 y R3 son metilo, m y n son 1, X1 y X2 son fluoro, y X3 es trifluorometilo. 21.- El método para inhibir la angiogénesis de conformidad con la reivindicación 14 en el cual la administración comprende administración por vía intraperitoneal, subcutánea, intravenosa, transdérmica, int rasinovial , intramuscular u oral. 22.- Un método para inhibir el crecimiento de tumor en un hospedero que comprende administrar al hospedero una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto representado por la fórmula: en la cual G1 y G2 son cada uno de manera independiente -NH- C (0) -0-R1 , -NH-C (0) -0- (CH2) v-(C6H4)-X3, -NH-C (0) -NH- (CH2) v- (C6H4) -X3, -0-C(0)-NH-(CH2) v- (CSH4) -X3, -O-C (O) -O- (CH2) v- (C6H4) -X3, o -NH-C (O) -CH2- (C6H4) -X3 ; Y1 y Y2 son cada uno de manera independiente OH, alquilo de C?-C , hidroxialquilo de C1-C4, alcoxi de C?-C4, fenilo, bencilo, o -NH2 ; R1 es alquilo de C;,_-C4; X1 y X2 son cada uno de manera independiente halógeno o alcoxi de C?-C4; X3 es halógeno, nitro, alquilo de C1-C4, alcoxi de Ci-C4 , o perfluoroalquilo de C?-C4; Z es -C=C-, -C6H4-, cis-CH=CH-, trans-CH=CH- , ci s - CH2CH=CH- CH2 - , tran s -CH2CH=CH-CH2 , 1,4-naftilo, ci s - 1 , 3 - c iclohexi lo , trans - 1 , 3 - ciclohexi lo , ci s - 1 , 4 - ciciohexilo , o tran s - 1 , 4 - ciciohexilo ; A es H o un enlace covalente; m y n son cada uno de manera independiente un número entero que tiene un valor de 0 ó 1 ; t es un número entero que tiene un valor de 0 ó 1; y p, r y v son cada uno de manera independiente un número entero que tiene un valor de 1 ó 2 ; con las condiciones que cuando A sea H, t es 0; cuando A sea un enlace covalente, t es 1 ; cuando m sea 0, Y1 es hidroxialquilo de C?-C4; y cuando n sea 0, Y2 es hidroxialquilo de C?-C4. 23.- El método para inhibir el crecimiento de tumor de conformidad con la reivindicación 22 en el cual G1 y G2 son -NH-C (O) -O- ( CH2 ) v- ( C6H4 ) -X3 , A es un enlace covalente, y v es 1. 24.- El método para inhibir el crecimiento de tumor de conformidad con la reivindicación 23 en el cual X es trifluorometilo 25.- El método para inhibir el crecimiento de tumor de conformidad con la reivindicación 23 en el cual Y1 y Y2 son OH, m es 1, y n es 1. 26.- El método para inhibir el crecimiento de tumor de conformidad con la reivindicación 23 en el cual por lo menos uno de X1 y X2 es para-fluoro. 27.- El método para inhibir el crecimiento de tumor de conformidad con la reivindicación 23 en el cual m es 1, n es 1, y por lo menos uno de R2 y R3 es met ilo. 28.- El método para inhibir el crecimiento de tumor de conformidad con la reivindicación 23 en el cual R2 y R3 son metilo, m y n son 1, X1 y X2 son fluoro, y X3 es trifluorometilo. 29.- El método para inhibir el crecimiento de tumor de conformidad con la reivindicación 22 en el cual la administración comprende administración por vía intraperitoneal, subcutánea, intravenosa, transdérmica, int rasinovial , intramuscular u oral. 30.- Un método de inducción de apoptosis en las células de tumor que comprende administrar a las células del tumor una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto representado por la fórmula : en la cual G1 y G2 son cada uno de manera independiente -NH- C (O) -O-R1 , -NH- C (O ) -O- ( CH2 ) v-(C6H4)-X3, -NH-C (O) -NH- (CH2) v- (C6H4) -X3, -0-C(0)-NH-(CH2) v- (C6H4) -X3, -O-C(O) -O- (CH2) v- (C6H4) -X3, o -NH-C (O) -CH2- (C6H4) -X3 ; Y1 y Y2 son cada uno de manera independiente OH, alquilo de C?-C4, hidroxialquilo de C?-C4, alcoxi de C1-C4, fenilo, bencilo, o -NH2 ; R1 es alquilo de C -C4; X1 y X2 son cada uno de manera independiente halógeno o alcoxi de C?-C4; X3 es halógeno, nitro, alquilo de C?-C4, alcoxi de C?~ C4 , o perfluoroalquilo de C?-C ; Z es -C=C-, -C6H4-, cis-CH=CH-, trans-CH=CH- , ci s - CH2CH=CH- CH2 - , trans-CH2CH=CH-CH2, 1,4-naftilo, ci s - 1 , 3 - ciclohexi lo , trans- 1 , 3 - ciciohexilo , ci s - 1 , 4 - ciciohexilo , o trans - 1 , 4 - ciclohexi lo ; A es H o un enlace covalente; m y n son cada uno de manera independiente un número entero que tiene un valor de 0 ó 1 ; t es un número entero que tiene un valor de 0 ó 1 ; y p , r y v son cada uno de manera independiente un número entero que tiene un valor de 1 ó 2 ; con las condiciones que cuando A sea H, t es 0; cuando A sea un enlace covalente, t es 1; cuando m sea 0, Y1 es hidroxialquilo de C?-C ; y cuando n sea 0, Y2 es hidroxialquilo de C?-C4. 31.- El método de inducción de apoptosis de conformidad con la reivindicación 30 en el cual G1 y G2 son -NH-C (0) -0- (CH2) v- (C6H4) -X3, A es un enlace covalente, y v es 1. 32.- El método de inducción de apoptosis de conformidad con la reivindicación 31 en el cual X3 es trifluorometilo RESUMEN DE LA INVENCIÓN La angiogénesis, crecimiento de tumor y la interacción de metaloproteinasa 2 (MMP2) con la integrina avß3 se inhibe utilizando un compuesto inhibidor de la fórmula (I) : en la cual en la cual G1 y G2 son cada uno de manera independiente -NH-CÍOJ-O-R1, -NH-C (0) -0- (CH2) v- (C6H4) -X3, -NH-C(0)-NH-(CHj)v- (C6H4) -X3, -0-C(0) -NH- (CH2)V- (C6H4) -X3, -0-C (O) -0- (CH2) v- (C6H4) -X3, o -NH-C (O) -CH2- (C6H4) -X3; Y1 y Y2 son cada uno de manera independiente OH, alquilo de C?-C4, hidroxialquilo de C?-C , alcoxi de C?-C4, fenilo, bencilo, o -NH2 ; R1 es alquilo de C?~ C4 ; X1 y X2 son cada uno de manera independiente halógeno o alcoxi de C?-C4; X3 es halógeno, nitro, alquilo de C?-C4, alcoxi de C?-C4, o perfluoroalquilo de C?-C4; Z es -C=C-, -C6H4-, cis-CH=CH-, trans -CH=CH-, cis-CH2CH=CH-CH2- , trans- CH2CH=CH - CH2 , 1,4-naftilo, ci s - 1 , 3 - ciclohexi lo , trans - 1 , 3 -ciciohexilo, ci s - 1 , 4 - ciclohexi lo , o trans-1,4-ciclohexilo; A es H o un enlace covalente; m y n son cada uno de manera independiente un número entero que tiene un valor de 0 ó 1 ; t es un número entero que tiene un valor de 0 ó 1; y p, r y v son cada uno de manera independiente un número entero que tiene un valor de 1 ó 2; con las condiciones que cuando A sea H, t es 0; cuando A sea un enlace covalente, t es 1; cuando m sea 0, Y1 es hidroxialquilo de C?-C4; y cuando n sea 0, Y2 es hidroxialquilo de C?-C4.