MXPA01009283A

MXPA01009283A - Compuestos de tiofeno-etil tiourea y uso en el tratamiento de vih.

Info

Publication number: MXPA01009283A
Application number: MXPA01009283A
Authority: MX
Inventors: Fatih M Uckun
Original assignee: Parker Hughes Inst
Priority date: 1999-06-23
Filing date: 2000-06-23
Publication date: 2002-04-10
Also published as: ATE233758T1; IL144874A0; CA2375261A1; WO2000078755A1; EP1194427B1; AU6539900A; AU5635800A; EP1194427A1; US6124324A; CN1356997A; DE60001581D1; JP2003502423A; DE60001581T2; BR0009102A; KR20020012287A; WO2000078756A1; CN1196697C; ES2195905T3

Abstract

Nuevos compuestos de tiofeno-etil-tiourea (TET) como inhibidores de transcriptasa inversa y agentes eficaces para el tratamiento de infeccion de VIH, incluyendo cepas mutantes, sensibles al medicamento, y resistentes a multi-medicamentos de VIH.

Description

COMPUESTOS DE TIOFENO-ETIL TIOUREA Y USO EN EL TRATAMIENTO DE VIH Campo de la Invención La invención se refiere a inhibidores de transcriptasa inversa eficaz contra VIH, incluyendo cepas mutantes de VIH, y eficaz en el tratamiento de infección de VIH resistente a multi-medicamentos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Los agentes actualmente utilizados para tratar la infección de VIH intentan bloquear la replicación del virus de VIH al bloquear la transcriptasa inversa de VIH o al bloquear la proteasa de VIH. Estas categorías de agentes anti-retrovirales en uso clínico son análogos de nucleósido (tal como AZT), inhibidores de proteasa (tal como nelfinavir), y los inhibidores de transcriptasa inversa de no nucleósido (NNI), tal como neviparina. El desarrollo reciente de regímenes anti-retrovirales de combinación potente ha mejorado significativamente el pronóstico para personas con VIH y SIDA. Las terapias de combinación pueden ser un factor significativo en la reducción dramática en muertes por SIDA (una reducción en la tasa de muerte así como también número absoluto). Las combinaciones más comúnmente utilizadas incluyen dos análogos de nucleósido con o sin un inhibidor de proteasa. La neviparina es actualmente el único compuesto NNI que se ha utilizado en combinación con AZT y/o inhibidores de proteasa para el tratamiento de VIH. Una nueva serie de cocktailes de medicamentos eficaces más probablemente incluirá otros NNIs en combinación con nucleósido e inhibidores de proteasa como un tratamiento de triple acción para combatir el problema de crecimiento de resistencia al medicamento encontrada en estrategias de tratamiento con un solo medicamento. La velocidad de replicación elevada del virus desafortunadamente conduce a variantes genéticas (mutantes), especialmente cuando la presión selectiva se introduce en la forma de tratamiento de medicamento. Estos mutantes son resistentes a los agentes anti-virales previamente administrados al paciente. El cambio de agentes o el uso de terapias de combinación puede reducir o retrasar la resistencia, pero debido a que la replicación viral no se suprime completamente en el tratamiento con un solo medicamento o aún cuando una combinación de dos medicamentos, emergen cepas virales resistentes al medicamento. Las combinaciones de tres medicamentos que emplean uno (o dos) análogos de nucleósido y dos (o uno) RT de objetivo NN I proporciona una terapia muy prometedora para superar el problema de resistencia al medicamento. Las cepas mutantes de RT resistentes a tal combinación de tres medicamentos de triple acción más probablemente no serían capaz de funcionar. Docenas de cepas mutantes se han caracterizado como resistentes a compuestos NNI, incluyendo L1001 , K1 03N, V106A, E 1 38K, Y181 C y Y188H. En particular, los mutantes de Y1 81 C y K103N pueden ser los más difíciles de tratar, debido a que son resistentes a la mayoría de los compuestos NNI que se han examinado.

Recientemente, una estrategia propuesta que utiliza una concentración de eliminación de NNI demostró resultados muy prometedores. La idea clave en esta estrategia es administrar una concentración elevada de NNI en las etapas muy al comienzo de tratamiento para reducir el virus a niveles no detectables con objeto de evitar la emergencia de cepas resistentes al medicamento. El compuesto NNI ideal para uso óptimo en esta estrategia y en una combinación de triple acción debe satisfacer tres criterios: 1 ) citotoxicidad muy baja de manera que pueda aplicarse en dosis elevadas; / 2) potencia muy elevada de manera que pueda cesar completamente la maquinaria de replicación viral antes de que el virus tenga tiempo de desarrollar cepas mutantes resistentes; y 3) actividad anti-viral robusta contra las cepas mutantes resistentes al medicamento actualmente observadas. Los nuevos diseños de NNI capaces de reducir la inhibición de RT a concentraciones subnanomolares con robustez mejorada contra los mutantes más comúnmente observados y preferentemente capaces de inhibir los mutantes más problemáticos se necesitan urgentemente. Los nuevos medicamentos antivirales idealmente tendrán las siguientes características deseadas: (1 ) inhibición potente de RT; (2) citotoxicidad mínima; y (3) habilidad mejorada para inhibir cepas de VIH resistentes al medicamento conocidas. Actualmente, pocos agentes anti-VIH poseen todas estas características deseadas.

Dos inhibidores de no nucleósido (NNI) de RT de VIH que se han aprobado por la Administración de Medicamentos y Alimentos de E.U. para su licencia y venta en los Estados Unidos son neviparina (derivado de dipiridodiazepinona) y derivado de delavirdina (bis(heteroaril)piperacina (BHAP). Otros nuevos inhibidores de no nucleósido prometedores (NNIs) que se han desarrollado para inhibir RT de VIH incluyen derivados de dihidroalcoxibenciloxopirimidina (DABO), derivados de 1 -[(2-hidroxietoxi)metil]-6-(fen¡ltio)timina (HEPT), tetrahidrobenzondiacepina (TIBO), 2,,5'-Bis-O-(tert-butildimetilsil¡l)-3'-spiro-5',-(4"-amino-1 ",2"-oxatiola-2''-2'-dioxido)pipmidina (TSAO), derivados de carboxanilido de oxatin, derivados de quinoxalina, derivados de tiadiazola, y derivados de fenetiltiazoliltiourea (PETT). Se ha encontrado que los NNIs se unen a un sitio aloestérico específico de VIH-RT cercano al sitio de polimerasa e interfieren con la transcripción inversa al alterar ya sea la conformación o movilidad de RT, conduciendo así a una inhibición no competitiva de la enzima (Kolhstaedt, L.A. et al., Science, 1992, 256, 1 783-1790). Un número de estructuras de cristal de RT compuesto con NNIs se ha reportado (incluyendo a-APA, TIBO, Neviparina, y derivados de HEPT) y tale información estructural proporciona la base para la derivatización adicional de NNI propuesta en maximizar la afinidad de unión de RT. Sin embargo, se limita el número de estructuras de cristal disponibles de complejos de NNI de RT. Dada la falta de información estructural, los procedimientos de diseño alternos deben basarse en la preparación de inhibidores activos tales como derivados de DABO y PETT. Una de las primeras estrategias reportadas para síntesis sistemática de derivados de PETT fue el análisis de relaciones de estructura-actividad independientes de las propiedades estructurales de RT y condujo al desarrollo de algunos derivados de PETT con actividad anti-VIH significativa (Bell, F.W. et al., J. Med. Chem., 1 995, 38, 4929-4936; Cantrell, A.S. et al., J. Med. Chem., 1996, 39, 4261 -4274). Una serie de derivados de fenetiltiazoliltiourea (PETT) que tienen como objetivo el sitio de unión de NNI de transcriptasa inversa (RT) de VIH se sintetizaron y probaron para la actividad del virus de inmunodeficiencia anti-humana (VIH). La estructura en base al diseño y síntesis de estos derivados de PETT se auxilió por análisis biológicos y su actividad anti-VIH. Algunos de estos nuevos derivados fueron más eficaces que AZT o Troviridina y abrogaron la replicación de HIV en concentraciones nanomolares sin ninguna evidencia de toxicidad. Estos compuestos son útiles en el tratamiento de infección de VIH, y tienen particular eficacia contra las cepas mutantes, haciéndolas útiles en el tratamiento de VIH resistente a multi-medicamentos.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención proporciona nuevos compuestos de tiofeno-etil-tiourea (TET) como inhibidores de no nucleósido (NNI) recientemente identificados de transcriptasa inversa de VIH. Los nuevos compuestos de TET, composiciones, y métodos de la invención son útiles en el tratamiento de infección de VIH, con particular eficacia contra múltiples cepas de VIH, incluyendo cepas mutantes resistentes a multi- medicamentos. Los compuestos de TET, composiciones y métodos de la invención son útiles para inhibir la actividad de transcriptasa inversa e inhibir la replicación de múltiples cepas de VIH; incluyendo cepas resistentes a multi-medicamentos, resistentes al medicamento, y sin afectación a la terapia. En particular, los compuestos de TET de la invención son útiles para tratar infección retroviral en un sujeto, tal como una infección de VIH-1 , por la administración de los compuestos de TET de la invención, por ejemplo, en una composición farmacéutica. Los compuestos de TET de la invención contienen una estructura de tiofeno como se muestra en la Fórmula I. El tiofeno puede substituirse (Rn) o no substituirse. Ri es una porción cíclica que puede substituirse o no substituirse. La porción cíclica puede ser aromática y/o heterocíclica. Un compuesto de TET ejemplificativo de la invención es WH-443, que tiene la estructura específica mostrada en la Fórmula II.

Los compuestos de TET y composiciones útiles en la invención muestran citotoxicidad muy baja y potencia muy elevada contra VIH. Los compuestos específicos y métodos de la invención se describen de manera más completa en la Descripción Detallada y en los Ejemplos de abajo.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones Cuando se utilizan en la presente, los siguientes términos tienen los significados indicados: "NNI" significa inhibidor de no nucleósido. En el contexto de la invención, se definen los inhibidores de no nucleósido de transcriptasa inversa (RT) de VIH. "VIH mutante" significa una cepa de VIH que tiene uno o más aminoácidos alterados o mutados en comparación con el tipo silvestre. "HIV resistente a multi-medicamentos" significa una o más cepas de VIH que son resistentes al tratamiento con uno o más agentes quimioterapéuticos. "Cantidad terapéuticamente eficaz" es una dosis que proporciona algún beneficio terapéutico en la administración, incluyendo, en el contexto de la invención, actividad viral reducida o carga viral en un paciente, y también incluyendo la inhibición de actividad de RT viral y/o replicación del virus. Compuestos de la Presente Invención Los compuestos de la presente invención incluyen compuestos de tiofeno-etil-tiourea (TET) útiles como inhibidores de no nucleósido de RT que tienen la fórmula I: El tiofeno puede substituirse o no substituirse, por ejemplo, R puede ser H, halógeno, (Cí-Cn alquilo o alcoxi, amino, ciano, nitro, hidroxi y lo similar. El valor de n puede ser 0 a 4. R^ es una porción cíclica, que puede substituirse o no, tal como fenilo, piridilo, piperidinilo, piperonilo, morfolilo, furilo y lo similar, y puede ser, por ejemplo, ciclo(C3-C?2)alquilo, ciclo(C3-C12)alquenilo, isotiazolilo, tetrazoilo, triazolilo, piridilo, imidazolilo, fenilo, naftilo, benzoxazolilo, bencimidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, benzotiazolilo, pirazinilo, piridazinilo, tiadiazolilo, benzotriazolilo, pirolilo, indolilo, benzotienilo, tienilo, benzofurilo, quinolilo, isoquinolilo, pirazolilo, y lo similar. Los substituyentes adicionales en R^ incluyen, por ejemplo, (Ci-Csjalquilo, (C1-C3)alcoxi, halo e hidroxi. En una modalidad preferida, Ri es piridilo, opcionalmente substituido con uno o más substituyentes, por ejemplo, con un grupo alquilo, alcoxi, halo o hidroxi. Más preferentemente, Ri es piridilo substituido con un halógeno tal como bromo o cloro. Un compuesto ejemplificativo de la invención es N-[2-(2-tiofeno)etil-N-[2-(5-bromopiridil)]~ tiourea(HI-443), en donde Ri es piridilo, substituido con un halógeno, bromo. Los compuestos de la presente invención también incluyen compuestos de tiofeno-etil-tiourea útiles como inhibidores de no nucleósido de RT que tienen la fórmula II: El tiofeno puede substituirse o no substituirse, por ejemplo, R puede ser H, halógeno, (C?-C?2)alquilo o alcoxi, amino, ciano, nitro, hidroxi y lo similar. El valor de n puede ser 0 a 4. X puede ser S o O. Z puede ser -NH- o O. R2 es una porción cíclica, que puede substituirse o no, tal como fenilo, piridilo, piperidinilo, piperonilo, morfolilo, furilo, tiazolilo, 2',3'-dideoxitimidinilo (d4T) y lo similar, y puede ser, por ejemplo, ciclo(C3- C?2)alquilo, ciclo(C3-C12)alquenilo, isotiazolilo, tetrazoilo, triazolilo, piridilo, imidazolilo, fenilo, naftilo, benzoxazolilo, bencimidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, benzotiazolilo, pirazinilo, piridazinilo, tiadiazolilo, benzotriazolilo, pirolilo, indolilo, benzotienilo, tienilo, benzofurilo, quinolilo, ¡soquinolilo, pirazolilo, y lo similar. Los substituyentes opcionales de R2 incluyen, por ejemplo, H, (C?-C3)alquilo, (C?-C3)alcox¡, halo, -CO-alquilo e hidroxi. En otra modalidad preferida, R2 es tiazolilo, opcionalmente substituido con uno o más substituyentes, por ejemplo, con un grupo alquilo, alcoxi, halo o hidroxi. Más preferentemente, R2 es tiazolilo. Un compuesto ejemplificativo de la invención es ? -[2-(2-Tiofeniletil)]-?/'-[2- (tiazolil)]tiourea (DDE 530), en donde R2 es tiazolilo. Los compuestos preferidos de la fórmula II incluyen aquellos listados en la Tabla A. Tabla A Los compuestos de la invención preferentemente se unen a un sitio aloestérico específico de VIH-RT cercano al sitio de polimerasa e interfieren con la transcripción inversa, por ejemplo, al alterar ya sea la conformación o movilidad de RT. Sales acidas Los compuestos de la invención también pueden encontrarse en la forma de sales de adición acidas farmacéuticamente aceptables. Las sales de adición acidas farmacéuticamente aceptables se forman con ácidos orgánicos e inorgánicos. Los ejemplos de ácidos adecuados para la formación de sal son hidroclórico, sulfúrico, fosfórico, acético, cítrico, oxálico, malónico, salicílico, málico, glucónico, fumárico, succínico, ascórbico, maléico, metanosulfónico y lo similar. Las sales se preparan al contactar la forma de base libre con una cantidad suficiente del ácido deseado para producir ya sea una sal mono o di, etc., en la manera convencional. Las formas de base libre pueden regenerarse al tratar la forma de sal con una base. Por ejemplo, puede utilizarse soluciones diluidas de base acuosa. El hidróxido de sodio acuoso, diluido, carbonato de potasio, amonio, y soluciones de bicarbonato de sodio son adecuadas para este propósito. Las formas de base libre difieren de ya sea sus formas de sal respectivas de alguna manera en ciertas propiedades físicas tal como solubilidad en solventes polares, pero las sales son equivalentes de otra manera a sus formas de base libre respectivas para propósitos de la invención. El uso de base en exceso en donde R es hidrógeno, da la sal básica correspondiente. Métodos para Utilizar los Compuestos de la Invención Los compuestos de la invención son útiles en los métodos para inhibir la actividad de transcriptasa inversa de un retrovirus. La transcriptasa inversa retroviral se inhibe al contactar RT in vitro o in vivo, con una cantidad inhibidora eficaz de un compuesto de la invención. Los compuestos de la invención también inhiben la replicación de retrovirus, particularmente de VIH, tal como VIH-1 . La replicación viral se inhibe, por ejemplo, al contactar el virus con una cantidad inhibidora eficaz de un compuesto de la invención. Los métodos de la invención son útiles para inhibir la transcriptasa inversa y/o replicación de múltiples cepas de VIH, incluyendo cepas mutantes, e incluyen tratar una infección retroviral en un sujeto, tal como una infección de VIH-1 , al administrar una cantidad inhibidora eficaz de un compuesto o una sal de adición acida farmacéuticamente aceptable de un compuesto de la Fórmula I. El compuesto o inhibidor de la Fórmula I se administra preferentemente en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable, y puede combinarse con agentes de suministro específicos, incluyendo anticuerpos objetivo y/o citoquinas. El compuesto o inhibidor de la invención puede administrarse en combinación con otros agentes antivirales, inmunomoduladores, antibióticos o vacunas. Los compuestos de la Fórmula I pueden administrarse oralmente, parenteralmente (incluyendo inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraesternal o técnicas de infusión), por rocío de inhalación, tópicamente, por absorción a través de una membrana mucosa, o rectalmente, en formulaciones de dosis única que contienen vehículos farmacéuticamente aceptables no tóxicos, convencionales, adyuvantes o portadores. Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden encontrarse en la forma de suspensiones o tabletas adecuadas para la administración oral, rociadores nasales, cremas, preparaciones inyectables estériles, tales como supositorios o suspensiones oleaginosas o acuosas inyectables, estériles. En una modalidad, los compuestos de TET de la invención pueden aplicarse intravaginalmente y/o tópicamente, por ejemplo en forma de gel, para la prevención heterosexual de VIH. Para la administración oral como una suspensión , las composiciones pueden prepararse de acuerdo a las técnicas bien conocidas en la materia de formulación farmacéutica. Las composiciones pueden contener microcelulosa cristalina para impartir, ácido algínico, voluminoso, o alginato de sodio como un agente de suspensión . Como tabletas de liberación inmediata, las composiciones pueden contener celulosa microcristalina, almidón, estearato de magnesio y lactosa u otros excipientes, aglutinantes, extensores, desintegrantes, diluyentes y lubricantes conocidos en la materia. Para administración por inhalación o aerosol, las composiciones pueden prepararse de acuerdo a las técnicas bien conocidas en la matera de formulación farmacéutica. Las composiciones pueden prepararse como soluciones en salina, utilizando alcohol de bencilo y otros conservadores adecuados, promotores de absorción para aumentar la biodisponibilidad, fluorocarburos u otros agentes de dispersión o solubilizantes conocidos en la materia. Para administración como suspensiones o soluciones inyectables, las composiciones pueden formularse de acuerdo a técnicas bien conocidas en la materia, utilizando agentes dispersión o humectantes y de suspensión, tales como aceites estériles, incluyendo mono o diglicéridos sintéticos y ácidos grasos, incluyendo ácido oleico. Para administración rectal como supositorios, las composiciones pueden prepararse al mezclar con un excipiente no irritante adecuado, tal como manteca de cacao, esteres de glicérido sintéticos o glicoles de polietileno, que son sólidos a temperaturas ambientes, pero que se licúan o disuelven en la cavidad rectal para liberar el medicamento. Los niveles de dosis de aproximadamente 0.02 a 1 0.0 gramos de un compuesto de la invención por día son útiles en el tratamiento o prevención de infección retroviral, tal como infección de VIH, SIDA o complejo relacionado con SIDA (ARC), con dosis orales de 2 a 5 veces más elevadas. Por ejemplo, la infección de VIH puede tratarse por la administración de desde aproximadamente 0.1 a aproximadamente 1 00 miligramos de compuesto por kilogramo de peso corporal de una a cuatro veces por día. En una modalidad, las dosis de aproximadamente 1 00 a aproximadamente 400 miligramos de compuesto se administran oralmente cada seis horas a un sujeto. El nivel de dosis específico y frecuencia para cualquier sujeto particular variarán y dependerán de una variedad de factores, incluyendo la actividad del compuesto específico, la estabilidad metabólica y la duración de acción de ese compuesto, la edad, el peso corporal, ia salud general, sexo y dieta del sujeto, modo de administración, velocidad de excreción, combinación de medicamentos, y severidad de la condición particular. El compuesto de la Fórmula I puede administrarse en combinación con otros agentes útiles en el tratamiento de infección de VIH, SIDA o ARC. Por ejemplo, el compuesto de la invención puede administrarse en combinación con cantidades eficaces de un antivirai, inmunomodulador, anti-infectivo o vacuna. El compuesto de la invención puede administrarse antes, durante, o después de un periodo de exposición potencial o actual al retrovirus, tal como VIH. Conjugación a una Porción Objetivo El compuesto de la invención puede tener como objetivo el suministro específico a las células a tratarse por la conjugación de los compuestos a una porción objetivo. La porción objetivo útil para la conjugación a los compuestos de la invención incluyen anticuerpos, citoquinas, y ligandos receptores expresados en las células a tratarse. El término "conjugado" significa un complejo formado con dos o más compuestos. La frase "porción objetivo" significa un compuesto que sirve para suministrar el compuesto de la invención a un sitio específico para la actividad deseada. Las porciones objetivo incluyen, por ejemplo, moléculas con moléculas específicamente unidas presentes en una superficie celular. Tales porciones objetivo útiles en ia invención incluyen anticuerpos de antígeno de superficie anti-celular. Las citoquinas, incluyendo interleukinas, factores tales como el factor de crecimiento epidérmico (EGF) y lo similar, también son porciones objetivo específicas conocidas para unir las células que expresan niveles elevados de sus receptores. Las porciones objetivo particularmente útiles para tener como objetivo los compuestos de la invención a células para actividad terapéutica incluyen aquellos ligandos que unen los antígenos o receptores presentes en células infectadas con virus a tratarse. Por ejemplo, los antígenos presentes en las células T, tal como CD48, pueden unirse con anticuerpos. Los fragmentos de anticuerpo, que incluyen fragmentos de cadena única, también pueden utilizarse. Otros pares de unión de ligando-receptor se conocen en la literatura científica para unir tratamiento anti-virales a células objetivo. Los métodos para producir conjugados de los compuestos de la invención y las porciones objetivo son conocidos. Métodos para Hacer los Compuestos de la Invención Los compuestos de la invención pueden prepararse como se muestra en los Esquemas 1 y 2. En general, una amina apropiada (Ri-NH2) se reacciona con 1 , 1 '-tiocarbonilo-diimidazola o 1 , 1 '-carbonil, diimidazola en solvente de acetonitrilo a temperatura ambiente por aproximadamente 12 horas para formar un reactivo de carbonilo o tiocarbonilo. En un ejemplo, 2',3'-didehidro-2',3'-dideoxitimidina (d4T) puede substituirse por R^ H?. El producto de reacción se condensa entonces con una amina de tioetilo substituida o no substituida en un solvente aprótico tal como dimetil-formamida (DMF) a temperatura elevada, tal como 100°C, por un periodo de tiempo extendido tal como aproximadamente 15 horas. El compuesto deseado se purifica por cromatografía de columna.

Esquema 1 : Tiocarbonildiimidazola o carbonildiimidazola Esquema 2: Los compuestos de la invención pueden sintetizarse como se describe arriba, o por otros métodos sintéticos conocidos. EJEMPLOS La invención puede clarificarse además por referencia a los siguientes Ejemplos, que sirven para ejemplificar las modalidades, y no para limitar la invención de ninguna manera. Ejemplo 1 Comparación de Compuestos de Tiourea Substituidos Recientemente, se ha reportado que el reemplazo del anillo de piridilo plano de trovirdina con un anillo de piperazinilo o piperidinilo fruncido, el cual ocupa grandes volúmenes, podría llenar mejor el espacio de la región Wing2 de la cavidad de unión de NNI en forma de mariposa (Mao eí al., 1 998, Bioor. Medicinal Chem. Lett. 8:221 3-221 8). Tales anillos heterocíclicos son conformacionalmente más flexibles que un anillo aromático y por lo tanto probablemente tienen una ventaja adicional por ser capaces de ajustar una cavidad de unión no comprometedora de manera más eficaz, al pesar del costo pagado por la perdida de entropía en la unión. Los primores dos compuestos heterocíclicos fueron N-[2-(1 -piperidinileti J-N'^-íd-bromopiridi J-tiourea (HI-1 72) y N-[2-(1 -piperaziniletil)]-N'[2-(5-bromopiridil)]-tiourea (Mao et al., surpra). Cuando se analizan para actividad antiviral, ambos compuestos heterocíclicos fueron más potentes que trovirdina y abrogaron la replicación de la cepa HTLVniB de cepa HIV-1 sensible a NNI en células mononucleares sanguíneas periféricas (PBMC) en concentraciones nanomolares. Sin embargo, ni la trovirdina, ni otro compuesto inhibieron la replicación de cepas de HIV-1 resistentes a NNI (Mao er al., 1999, Bioorg. Med. Chem. Lett. 9: 1593-1598). Estos descubrimientos iniciales demostraron que el reemplazo del anillo de piridinilo de trovirdina con un anillo voluminoso produce compuestos útiles, sin embargo, el compuesto nuevo puede no retener la habilidad para inhibir las cepas de HIV-1 que tienen mutaciones de RT. Para entender más las relaciones de estructura-función de NNIs de RT y para descubrir nuevos NNIs eficaces, se reemplaza el anillo de piridilo de trovirdina con uno de ocho diferentes substituyentes heterocíclicos, incluyendo: a. pirrolidina de aminas heterocíclicas, 1 -metil-pirrolidina, morfolina, imidazola, indola; b. grupos aromáticos heterocíclicos furano y tiofeno; y c. el piperonilo de aldehido aromático.

Síntesis de Compuestos: Los compuestos de urea y tiourea se sintetizaron como se describe en los esquemas 3 y 4. En resumen , 2-amino-5-bromopiridina se condensó con 1 , 1 -tiocarbonilodiimidazola para proporcionar el derivado de tiocarbonilo precursor. La reacción adicional con amina de feniletilo apropiada substituida da el compuesto objetivo en buenas producciones. Específicamente, tiocarbonildiimidazola (8.90 g , 50 mmol) y 2-amino-5-bromo piridina (8.92 g, 50 mmol) se agregaron a 50 mL de acetonitrilo seco a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó por 12 horas y el precipitado se filtró, enjuagó con acetonitrilo frío (2x25 mL), y secó al vacío para proporcionar (1 1 .40 g, 80%) de compuesto A. A una suspensión de compuesto A (0.55 eqv) en formamida de dimetilo (1 5 mL) se agregó una amina apropiada (0.50 eqv). La mezcla de reacción se calentó a 100°C y agitó por 15 horas. La mezcla de reacción se vertió en agua fría y la suspensión se agitó por 30 minutos. El producto se filtró, enjuagó con agua, secó y purificó además por cromatografía de columna para proporcionar los compuestos objetivo en buenas producciones. Trovidina, un estándar comparativo, se preparó por el método descrito en Bell eí al., J. Med. Chem 1995, 38:4926-9; Ahgren eí al., 1995, Antimicrob. Agents. Chemotherapy 39: 1 329-1335. Esquema 3: Esquema 4: a = 1 , 1 '-tiocarbonil diimidazola, acetonitrilo, temperatura ambiente, 12 horas b = DMF, 100°C, 15 horas Ri se muestra en la Tabla 1 Caracterización de compuestos sintetizados. Los espectros de resonancia magnética nuclear de carbono y protón se registraron en un espectrómetro Varina utilizando una sonda de banda ancha automática. Al menos que se observe de otra manera, todos los espectros NMR se registraron en CDC3 a temperatura ambiente. Los cambios químicos reportados se encuentran en partes por millón relativas a silano de tetrametilo como estándar. La multiplicidad de las señales se diseñó como sigue: s, d, dd, t, q, m que corresponde a singlete, doblete, doblete de doblete, triplete, cuartete y multiplete, respectivamente. Los espectros de UIV se registraron de un espectrómetro Modelo Beckmann #DU 7400 UV/Vis utilizando una longitud de trayectoria de célula de 1 cm. Los espectros Infrarrojos de Transformación Fourier se registraron utilizando un instrumento FT-Nicolet modelo Protege#460. Los espectros infrarrojos de las muestras líquidas se pasaron como líquidos transparentes utilizando discos KBr. El análisis de espectro de masa se condujo utilizando ya sea un instrumento Finnigan MAT 95 o un espectrómetro de Desorción Láser Asistida Matriz de Hewlett-Packard (MALDI) modelo #G2025A. La matriz utilizada en el último caso fue ácido cinámico de hidroxi ciano. Los puntos de fusión se determinaron utilizando un aparato de Metí John's y fueron incorrectos. Los análisis elementales se realizaron por Atlantic Microlabs (Norcross, GA). La cromatografía de columna se realizó utilizando gel de sílice obtenido de la Compañía Baker. El solvente utilizado para elusión varió dependiendo del compuesto e incluyó uno de los siguientes: acetato de etilo, metanol, cloroformo, hexano, cloruro de metileno y éter. Los datos de caracterización para los compuestos sintetizados se muestran abajo: N-[2-(2-fIuorofenetil)]-N'-[2-(5-bromopiridil)]tiourea (HI-240): Producción: 71%, mp 156-157°C; UV (MeOH) ?max: 209, 256, 274, 305 nm; IR(KBr)v 3446, 3234, 3163, 3055, 2935, 1672, 1595, 1560, 1531, 1466, 1390, 1362, 1311, 1265, 1227, 1169, 1136, 1089, 1003, 864, 825, 756 cm"1; 1HNMR (CDCI3) d 11.36 (bs, 1H), 9.47 (bs, 1H), 8.05-8.04 (dd, 2H), 7.29-7.24 (m, 1H), 7.13-7.03 (m, 3H), 6.87-6.84 (d, 1H), 4.06-3.99 (q, 2H), 3.10-3.05 (t, 2H), 13C(CDCI3) d 179.1, 151.7. 146.2, 141.1, 131.2, 131.1, 128.5, 128.4, 124.1, 115.5, 113.6, 112.2, 45.8 y 28.2; 19F(CDCI3) d-42.58 &-42.55 (d); Masa Maldi Tof: 355 (M+1), masa calculada: 354; Anal. (C14H13BrFN3S) C, H, N, S; N-[2-(2-fluorofenetil)]-N'-[2-(5-bromopiridil)]tiourea (HI-230): Producción: 72%, mp 136-138°C; UV (MeOH) ?max: 203, 206, 252, 277, 306 nm, IR(KBr)v 3454, 3220, 3159, 3059, 2941, 2787, 1595, 1531, 1475, 1311, 1229, 1182, 1061, 1003, 864, 821, 706 cm"1; 1HNMR (CDCI3) d 11.53 (bs, 1H), 9.17 (bs, 1H), 8.19-8.11 (d, 1H), 7.73-7.69 (d, 1H), 6.82-6.79 (dd, 1H), 3.85-3.83 (q, 2H), 2.79 (t, 2H), 2.60 (bm, 4H), 1.81 (bm); 13C(CDCI3) d 178.7, 151.7, 146.5, 141.1, 113.4, 112.7, 53.8, 53.6, 44.9 y 23.7; Masa Maldi Tof: 329 (M+1), masa calculada: 328; Anal. (C12H?7BrN4S) Encontrado: C:42.64, H:4.80, N:16.71, S:7.72, Br:28.04; N-[2-(1-pi?eronil)]-N'-r2-(5-bromopiridil)]tiourea (HI-257): Producción: 70%, mp 159-162°C; UV (MeOH) ?max: 209, 276nm; IR(KBr)v 3450, 3215, 3082, 3009, 2931, 1591, 1562, 1529, 1500, 1475, 1305, 1238, 1168, 1086, 1041, 933, 858, 825, 794, 688 cm"1; 1HNMR (DMSO-d6) d 11.64 (bs, 1H), 10.68 (bs, 1H), 8.17-8.16 (s, 1H), 7.75-7.72 (d, 1H); 7.19-7.16 (d, 1H), 6.91-6.90 (s, 1H), 6.84-6.83 (d, 1H), 6.79-6.77 (d, 1H), 6.01 (s, 2H), 4.86-4.84 (d, 2H); 13C(CDCI3) d 178.7, 151.3, 146.4, 144.7, 139.7, 130.3, 119.5, 113.5, 110.9, 106.9, 99.7 y 47.3; Masa Maldi Tof: 366 (M+Na), masa calculada: 345; Anal. (C?4H?2BrN3O2S) C, H, N, S, Br; N-[2-(1 -piperidinoetil)]-N'-[2-(5-bromopiridil)]tiourea (HI-172): Producción: 74%, mp 150-152°C; Rf = 0.74 en CHCI3:MeOH (9:1); UV (MeOH) ?max: 306, 275 y 205 nm, IR(KBr)v 3155, 3077, 2935, 2850, 2360, 1591, 1525, 1465, 1319, 1226, 1095, 827 y 756 cm"1; 1HNMR (CDCI3) d 11.53 (s, 1H), 9.72 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.72-7.68 (d, 1H), 6.95-6.92 (d, 1H), 3.84-3.78 (q, 2H), 2.61-2.57 (t, 2H), 2.45 (bs, 4H), 1.64-1.48 (m, 6H); 13C(CDCI3) d 178.1, 151.8, 146.3m 140.8, 113.5, 112.6, 56.1, 54.0, 43.0, 26.3 y 24.3; Masa observada en MALDI TOF: 343.5: Masa Exacta = 343. Anal. (C13H19BrN4S) C, H, N, S, Br; N-[2-(1-metil-2-pirrolidiniletil)]-N'-[2-(5-bromopiridil)]tiourea (HI-206): Producción: 56%; Rf = 0.34 en CHCI3:MeOH (9:1); UV (MeOH) ?max: 307, 276, 256 y 207 nm, IR(KBr)v 3207, 2944, 2782, 2360, 1591, 1467, 1307, 1226, 1093 y 825 cm"1; 1HNMR (CDCI3) d 11.18 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.74-7.70 (d, 1H), 6.75-6.72 (d, 1H), 3.82-3.72 (q, 2H), 3.61-3.54 (m, 1H), 3.14-3.04 (t, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.19-1.60 (m, 6H); 13C(CDCI3) d 178.9, 146.9, 140.8, 113.3, 112.2, 64.2, 57.2, 43.4, 40.7, 32.4, 30.5 y 22.2; Masa observada en MALDI TOF: 343.6: Masa Exacta = 343. Anal. (C?3H?9BrN4S) Encontrado: C:45.49, H:5.58, N:16.32, S:9.34, Br:23.28; N-[2-(5-Bromopiridinil)]-N'-[2-(2-lmidiazoliletil)]tiourea (HI-436): Producción: 44%, mp 104-107°C; UV (MeOH) ?max: 208, 275, 305 nm, IR(KBr)v 3490, 3228, 3097, 2944, 2618, 1592, 1502, 1463, 1301, 1267, 1228, 1199, 1095, 937, 862, 827, 784, 750, 661, 595 cm"1; 1H NMR (DMSO) d 11.12 (bs, 1H), 10.13 (bs, 1H), 7.82-7.81 (d, 1H), 7.41-7.38 (dd, 1H), 7.33 (s, 1H), 6.80-6.77 (d, 1H), 6.61 (s, 1H), 4.89 (bs, 1H), 3.76-3.69 (q, 2H), 2.73-2.68 (t, 2H); 13C NMR (DMSO) d 178.3, 151.4, 144.8, 139.8, 134.0, 133.9, 116.2, 113.4, 111.1, 44.2, 25.4; MALDI TOF encontrado: 327.6; N-[2-(5-Bromopiridinil)]-N'-[2-(2-Tiofen¡letil)]tiourea (HI-443): Producción: 40%, mp 160-161 °C; UV (MeOH) ?ma?: 260, 276, 306 nm, IR(KBr)v 3218, 3151, 3087, 2935, 2873, 1594, 1552, 1531, 1332, 1297, 1265, 1224, 1188, 1134, 1089, 1076, 1006, 833, 811, 784, 742, 688, 582, 503 cm"1; 1HNMR (CDCI3) d 11.45 (bs, 1H), 10.40 (bs, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.68-7.64 (dd, 1H), 7.20-7.19 (d, 1H), 7.08-7.04 (dd, 1H), 6.99-6.95 (m, 1H), 6.91 (s, 1H), 4.04-3.97 (q, 2H), 3.24-3.20 (t, 2H) ; 13C NMR (CDCI3) d 179.1, 151.7, 145.1, 140.6, 140.1, 126.2, 124.8, 123.3, 113.8, 111.5, 46.1, 28.4; N-[2-(5-Bromopiridinil)]-N'-[2-(2-lndoliletil)]tiourea (HI-442): Producción: 44%, mp 208-209°C; UV (MeOH) ?max: 222, 274, 305 nm, IR(KBr)v 3351, 3207, 3147, 3079, 3035, 2915, 2869, 2840, 1591, 1556, 1531, 1465, 1421, 1328, 1299, 1230, 1189, 1105, 1004, 950, 906, 860, 831, 752, 644, 588, 509 cm"1; 1H NMR (CDCI3) d 11.30 (bs, 1H), 10.32 (bs, 1H), 10.20 (bs, 1H), 7.81 (d, 1H), 7.65-7.58 (m, 2H), 7.41-7.39 (d, 1H), 7.16-7.11 (t, 2H), 7.05-7.00 (t, 2H), 4.06-4.00 (q, 2H), 3.15-3.11 (t, 2H); 13C NMR (CDCI3) d 178.4, 151.6, 144.9, 139.8, 135.7, 126.4, 122.0, 120.6, 117.9, 117.7, 113.5, 111.1, 111.0, 110.7, 45.4, 23.7; N-[2-(5-Cloropiridinil)]-N'-[2-(2-!midazoliletil)]tiourea (HI-446): Producción: 56%, mp 175°C; UV (MeOH) ?max: 209, 274, 307 nm, IR(KBr)v 3494, 3226, 3089, 2944, 2620, 1598, 1556, 1531, 1465, 1390, 1311, 1267, 1230, 1197, 1110, 1008, 937, 864, 827, 784, 752, 663, 621, 597, 507, 474 cm"1; 1H NMR (CDCI3) d 11.38 (bs, 1H), 10.40 (bs, 1H), 7.99-7.98 (t, 1H), 7.72-7.68 (dd, 1H), 7.56-7.52 (dd, 2H), 7.13-7.10 (d, 1H), 6.86 (s, 1H), 4.02-3.96 (q, 2H), 2.98-2.94 (t, 2H); 13C NMR (CDCI3) d 178.4, 151.2, 142.5, 137.2, 133.9, 123.2, 112.9, 44.2, 25.5; N-[2-(5-Bromopiridinil)]-N'-[2-(2-Furilmetil)]tiourea (HI-503): Producción: 44%, mp 187-188°C; UV (MeOH) ?max: 209, 276, 307 nm, IR(KBr)v 3216, 3155, 3083, 3037, 2921 , 1594, 1 550, 1529, 1463, 1 307, 1228, 1 176, 1 135, 1093, 1006, 968, 864, 81 7, 71 9, 568 cm" 1 ; 1 H NMR (DMSO) d 1 1 .50 (t, 1 H), 10.86 (bs, 1 H), 8.32-8.31 (d, 1 H), 7.99-7.95 (dd, 1 H), 7.60 (t, 1 H), 7.17-7.14 (d, 1 H), 6.42-6.35 (m, 2H), 4.87-4.85 (d, 2H); 13C NMR (DMSO) d 179.8, 152.5, 151 .0, 146.3, 142.7, 141 .7, 1 14.8, 1 12.3, 1 10.8, 1 07.8, 41 .6; N-[2-(5-Bromopiridinil)]-N'-[2-(4-Morfolinoetil)]tiourea (HI-276): Producción: 43%, mp 159-160°C; UV (MeOH) ?max: 207, 275, 306 nm, IR(KBr)v 3209, 3153, 3079, 3025, 2942, 2852, 2807, 1592, 1562, 1533, 1465, 1334, 1299, 1228, 1199, 1143, 1112, 1018, 943, 912, 862, 831, 727, 700, 507 cm"1; 1H NMR (CDCI3) d 11.52 (bs, 1H), 9.24 (bs, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.76-7.72 (dd, 1H), 6.89-6.82 (t, 1H), 3.87-3.75 (m, 6H), 2.69-2.55 (m, 6H); 13C NMR (CDCI3) d 178.6, 151.7, 146.5, 141.1, 113.5, 112.8, 67.2, 55.9, 53.1, 42.5; N-[2-(5-Bromopiridinil)]-N'-[2-(Piridil)]tiourea (HI-142): Producción: 54%, mp 152-154°C; UV (MeOH) ?max: 208, 273, 306, 485 nm, IR(KBr)v 3224, 3156, 3085, 3039, 2931, 1583, 1558, 1531, 1465, 1432, 1361, 1319, 1263, 1228, 1166, 1135, 1095, 1012, 885, 825, 756, 700, 661, 567, 511 cm"1; 1H NMR (CDCI3) d 11.55 (bs, 1H), 9.56 (bs, 1H), 8.61-8.60 (d, 1H), 8.08-8.07 (d, 1H), 7.71-7.62 (m, 2H), 7.29-7.18 (m, 2H), 6.89-7.86 (d, 1H), 4.24-4.17 (q, 2H), 3.25-3.21 (t, 2H); 13C NMR (CDCI3) d 178.7, 158.6, 151.6, 148.9, 146.2, 140.9, 136.6, 123.6, 121.6, 113.5, 112.6, 44.9, 36.6; N-[2-(2-piridiletil)]-N'-[2-(piridil)]tiourea (HI-207): Producción: 49%; Rf = 0.68 en CHCI3:MeOH (9:1 ); UV (MeOH) ?max 293, 265, 247 y 209 nm, IR(KBr)v 341 5, 3222, 3050, 2360, 1600, 1 533, 1479, 1436, 1315, 1240, 1 151 y 775 cm"1; 1HNMR (CDCI3) d 1 1 .90 (s, 1 H), 8.8 (s, 1 H), 8.60-8.58 (d, 1 H), 8.03-8.01 (d, 1 H), 7.65-7.56 (m, 2H), 7.27-7.14 (m, 2H), 6.93-6.89 (d, 1 H), 6.80-6.77 (d, 1 H) 4.23-4.15 (q, 2H) y 3.41 -3.20 (t, 2H); 13C(CDCI3) d 179.2, 158.9, 153.0, 149.2, 145.5, 138.5, 136.4, 123.5, 121 .4, 1 17.7, 1 1 1 .8, 44.9 y 36.9; Masa observada en MALDI TOF: 257.1 : Masa Exacta = 258. Anal. (C?3H1 N4S) Encontrado: C, H, N, S; N-[2-(1 -piperiziniletil)]-N'-[2-(5-brornopiridii)]tiourea (HI-258): Producción: 75%; mp. 178-180° C; UV (MeOH) ?max 209, 275, 305, IR(KBr)v 3448, 3223, 3159, 3034, 2812, 1666, 1595, 1466, 1435, 1308, 1229, 1130, 1092, 1000, 833 cm"1; 1HNMR (CDCI3) d 1HNMR (CDCI3) d 11.50 (s, 1H), 9.77 (s, 1H), 8.19-8.11 (d, 2H), 7.75-7.71 (d, 1H), 6.97-6.95 (d, 1H), 3.87-3.86 (q, 2H), 3.63-3.60 (t, 2H), 3.45-3.42 (t, 2H), 2.74-2.69 (t, 2H), 2.59-2.52 (m, 4H); 13C(CDCI3) d 178.7, 160.8, 151.8, 146.1, 141.0, 113.7, 112.7, 55.2, 52, 51.9, 45.8, 42.5 y 40.1; Masa observada en MALDI TOF: 343.5: Masa Exacta = 343. Anal. (C12H18BrN5S) Encontrado: C:41.98, H:4.88, N:18.74, S:8.52, Br:21.58; ?M2-Tiofenoetil¡l)-W'-[2-(5-cloropir¡dil)]tiourea (DDE 524): Producción: 40%; mp. 163-164°C; UV (MeOH) ?max 206, 253, 274, 303 nm, IR: 3219, 3160, 3039, 2935, 2854, 1596, 1556, 1531, 1473, 1334, 1256, 1228, 1186, 1134, 1110, 815, 686 cm"1; 1HNMR (DMSO-d6) d 11.32 (t, 1H), 10.76 (s, 1H), 8.10 (dd, 1H, J=3.3); 7.87-7.83 (dd, 1H, J = 11.4), 7.37-7.35 (ddd, 1H, J=6.9), 7.18-7.15 (dd, 1H, J=9.6), 6.99-6.95 (m, 2H), 3.84 (q, 2H, J=5.4), 3.15 (t, 2H, J=6.9); 13C NMR (DMSO-d6) d 179.2, 152.1, 143.6, 141.2, 138.9, 127.1, 125.8, 124.5, 123.8, 114.1, 46.5, 28.6; MALDI-TOF 299.5 (M+2). ?-[2-(2-Tiofeniltili!)-W'-[2-(tiazolil)]tiourea (DDE 530): Producción: 36%; mp. 193-194°C; UV (MeOH) ?max 207, 212, 215, 232, 236, 255, 289 nm, IR: 3219, 3219, 3151, 3087, 3003, 2935, 1595, 1552, 1531, 1471, 1298, 1263, 1211, 1188, 1134, 1076, 846, 812, 686 cm"1; 1HNMR (DMSO-d6) d 11.66 (br s, 1H), 9.69 (br s, 1H), 7.34 (d, 2H, J=3.3), 7.08 (d, 1H, J=3.6), 6.97-6.93 (m, 2H), 3.78 (q, 2H), 3.12 (t, 2h); 13C NMR (DMSO-d6) d 178.3, 161.9, 141.1, 136.5, 127.1, 125.6, 124.4, 112.1, 45.9, 28.6; MALDI-TOF 270.7 (CKJH U NSSS+ I ). Análisis de RT Purificado para Actividad Anti-VIH Los compuestos sintetizados se probaron para actividad inhibidora de RT (IC5o[rRT] contra RT de VIH recombinante purificado utilizando el sistema Quan-T-RT libre de célula (Amersham, Arlington Heights, IL), que utiliza el principio de análisis de proximidad de centelleo como se describe en Bosworth eí al., 1 989, Nature, 341 : 167-168. En el análisis, un templado de ADN/ARN se une a perlas SPA a través de enlace de biotina/estrepavidina. El ADN primario es un oligo(T) 16-mer que se ha formado en anillo a un templado poli(A). El primario/templado se une a una perla SPA revestida con estrepavidina. 3H-TTP se incorpora en el primario por transcripción inversa . En resumen, 3H-TTP, en una concentración final de 0.5 µCi/muestra, se diluyó en regulador de análisis RT (49.5 mM Tris-CI, pH 8.0, 80 mM KCl, 1 0 Mm MgCI2, 10 mM DTT, 2.5 mM EGTA, 0.05% Nonidet-P-40) y se agrego al enlace de ADN/ARN en anillo unido a perlas SPA. El compuesto que se prueba se agrega a la mezcla de reacción en 0.001 µM-1 00 µM de concentraciones. La adición de 10 mU de RT de VIH recombinante y la incubación a 37°C por 1 hora dio como resultado la extensión del primario por la incorporación de 3H-TTP. La reacción se detuvo por la adición de 0.2 ml de 120 mM EDTA. Las muestras se contaron en una ventana abierta utilizando un instrumento Beckman LS 7600 y valores IC50 se calcularon al comparar las mediciones con las muestras no tratadas. Los datos se muestran abajo en la Tabla 1 .

Tabla 1. Actividad Inhibidora de VIH-RT de HI-443 Trovirdina 1 (Piridina) 0.6 12 HI-443 (Tiofeno) 0.8 15 HI-230 / .N~— (Pirrolidina) 4.9 >100 HI-436 HN ^— • (ImMazola) >100 >100 HI-442 CX/ H (,ndo"•, 0.9 >100 / \ (Morfolina) HI-276 >100 >100 HI-257 0.7 >100 HI-503 ?. (Furan°) 1.2 >100 o Como se muestra en la Tabla 1 , la substitución de su anillo de piridilo tuvo un mayor impacto en la función inhibidora de RT de trovirdina. Excepto para trovirdina, solamente el compuesto de tiofeno-etil tiourea (TET) N'-[2-(2-tiofeno)et¡l]-N'-[2-(5-bromopiridil)]-tiourea (HI-443) inhibió el RT recombinante in vitro por más del 90%. HI-443 inhibió RT recombinante con un valor de IC50 de 0.8 µM y un valor de IC90 de 12 µM. El grupo tiofeno de HI-443 ocupa la misma región Wing 2 de la cavidad de unión de NNI de RT como trovirdina, pero tienen un volumen molecular más pequeño. Además, la posición suprimida predicha de HI-443 en el sitio de unión RT oculta una geometría donadora unida de hidrógeno, óptima. Por lo tanto, no fue sorprendente que HI-443 tuvo una actividad inhibidora ligeramente inferior en RT recombinante que trovirdina (IC50=0.8 µM) o nuestro compuesto guía previamente publicado, HI-172, que tiene un piperidinilo substiíuyente heterocíclico voluminoso (IC50=0.6 µM) (Mao eí al., 1998, Bioorg. Med. Chem. Lett. 8:2213) (Ver Tabla 1 ). Ejemplo 3 Comparación de los Compuestos de TET con Otro NNI La actividad anti-VIH del compuesto de TET, HI-443 se comparó con aquella de trovirdina, así como también con NNI heterocíclico, HI-172 (Mao et al., 1998, Bioorg, Med. Chem. Lett. 8:2213) utilizando el RT recombinante purificado y sistema de análisis Quan-T-RT como se describe arriba para el Ejemplo 2. Además, la actividad anti-VIH de los compuestos se midió al determinar su habilidad para inhibir la replicación de las cepas de VIH-1 HTLVIIIB, RT-MDR-, A17 y variante de A1 7 en células mononucleares de sangre periféricas (PBMC) de donadores voluntarios saludables, utilizando el método descrito en Uckun eí al., 1998, Antimicrobial Agents and Chemotherapy 42:383. Las células mononucleares sanguíneas, periféricas humanas.

Normales (PBMNC) de donadores negativos de VIH se cultivaron 72 horas en RPMI 1640 complementado con 20% (v/v) de suero de bovino fetal inactivado por calor (FBS), 3% de interleukin-2,2- mM L-glutairina, 25 mM HEPES, 2 µL, NAHCO, 50 mg/mL de gentamicina, y 4 µg/mL de fitohemaglutinina antes de la exposición a VIH-1 u otra cepa de VIH. Las células se infectaron entonces con virus en una multiplicidad de infección (MOI) de 0.1 durante un periodo de absorción de una hora en microplacas de 96 cavidades (1 00 µL/cavidad; 2x106 células/mL, cavidades triplicadas) en la presencia de varias concentraciones de inhibidores. Los alícuotas de sobrenadantes de cultivo se removieron de las cavidades en el 7m0 día después de la infección para antígeno p24 de inmunoanálisis de enzima (ElA) p24, como se describe previamente en Erice eí al., 1993, Antimicrob, Ag. Chemoterapy 37:385-838. ElA p214 aplicado fue el análisis cinético no modificado comercialmente disponible de Coulter Corporation/lnmmunotech, Inc. (Westbook, ME). El por ciento de inhibición de replicación viral se calculó al comparar los valores p24 de las células infectadas tratadas con la substancia de prueba con valores de p24 de células infectadas no tratadas (es decir, controles de virus). Un Análisis de Tetrazooio de Microcultivo (MTA), utilizando hidróxido de 2,3-bis(2-metoxi-4-nitro-5-sulfenil)-5-[(fenilamino)-carbonil]-2H-tetrazolio (XTT), se realizó para evaluar ia citotoxicidad de los compuestos, utilizando los métodos descritos, por ejemplo, en Uckun eí al., 1998, Antimicrobial Agentes and Chemotherapy 42:383; y Mao eí al. , 1998, Antimicrobial Agents and Chemotherapy 42:383; y Mao eí al., 1998, Bioorg. Med. Chem. Lett. 8:2213. Actividad Contra Cepas de VIH Resistentes al Medicamento La actividad del compuesto de TET, HI-443, se probó contra cepas sensibles al medicamento (HTLV VIIIB), cepas resistentes a NNI (A17 y Variante de A17), así como también cepas VIH-1 resistentes a multi-medicamentos (RT-MDR) utilizando el método descrito en Uckun eí al., 1 998, Antimicrobial Agents and Chemotherapy 42:383 (ver Tabla 2). La actividad de los compuestos de TET, DDE-526, DDE-524, HI-443 y DDE530 se probó contra las cepas sensibles al medicamento (HTLV VIIIB), las cepas de VIH-1 resistentes al multi-medicamento (RT-MDR), así como también los aislados de VIH clínico de pacientes con SIDA utilizando el método arriba descrito (Ver Tabla 3). RT-MDR se obtuvo a través del Programa de Referencia e investigación de SIDA, de Dr. Bendan Larder, y se describe en Larder eí al., 1993, Nature, 365,451 -453. Los datos se presentan en la Tabla 2 y en la Tabla 3 como los valores de IC5o para la inhibición de la producción del antígeno p24 de VIH en PBMC (concentración en la cual el compuesto inhibe la producción de p24 por 50%). Sorprendentemente, el compuesto de TET, HI-443, fue 10 veces más eficaz contra la cepa VIH-1 resistente al multi-medicamento RT-MDR con una mutación de V106A así como también mutaciones adicionales que incluyen los residuos de RT 74V, 41 L y 215Y que contra HTL VIIIB. Tabla 2 ACTIVIDAD ANTI-VIH Compuesto ICso IC«, IC50 ?c50 IC50 CC50 r T HTLV IIIB RT-MDR A17 Variante de A17 MTA (µM) (µM) (V106A) (Y181C) (Y181C, K103N) (µM) (µM) (µM) (µM) HI-443 5.3 0.030 0.004 0.048 3.263 >100 Trovirdina 0.8 0.007 0.020 0.500 >100 >100 Neviparina 23 0.034 5.000 >100 >100 10.5 Delavirdina 1.5 0.009 0.400 50.0 >100 3.6 MKC-42 0.8 0.004 0.300 N.D. N.D. >100 AZT >100 0.004 0.200 0.006 0.004 >100 HI-172 0.6 O.001 >100 >100 >100 >100 HI-240 0.6 O.001 0.005 0.200 41 >100 Como se muestra en la Tabla 2, el compuesto de TET, HI-443, inhibió de manera eficaz la replicación de HTLVM|B de cepa VIH-1 en células mononucleares sanguíneas periféricas humanas (PBMC) en tres de tres experimentos independientes, con un valor de IC50 promedio de 0.03 µM. De acuerdo con un valor de IC50 más elevado de HI-443 contra RT recombinante, el valor de IC50 de HI-443 para la inhibición de replicación de HTLVIIIB fue 5 veces más elevado que el valor de IC50 de trovirdina y 30 veces más elevado que el valor de IC50 de HI-172. Sorprendentemente, HI-443 fue diez veces más eficaz contra la cepa de VIH-1 resistente a multi-medicamentos RT-MDR, que tiene una mutación V106A así como también mutaciones adicionales que incluyen los residuos RT, 74V, 41 L y 215Y, que fue de nuevo contra HTLVIIIB. Tabla 3 Valores de IC5o (µM) Aislados de VIH Clínicos, primarios en PBMC3 2 Cepa RT-MDR de VIH resistente a multi-medicamentos tipo mutante 3 Aislados clínicos de pacientes con SIDA HI-443 fue casi tan potente contra la cepa VIH-1 resistente a NNI A1 7 con una mutación Y181 C como fue de nuevo contra HTLVUIB(IC5O: 0.048 µm vs 0.030 µM), y fue capaz de inhibir la variante de A1 7 resistente a trovirdina con Y181 C más mutaciones de K1 03N en RT (IC5o:3.263 µm), oral con una potencia 100 veces inferior que HTLVIHB (Tabla 2). HI-443 fue 5 veces más potente que trovirdina, 1250 veces más potente que nevirapina, 1 00 veces más potente que delavirdina, 75 veces más potente que MKC-442, 25,000 veces más potente que HI-172, 1 .25 veces más potente que HI-240 (un derivado de PETT substituido con fluorina recientemente reportado con actividad anti-VIH potente) (Vig eí al., 1998, Bioorg. Med. Chem. 6: 1789), y 50 veces más potente que AZT contra la cepa de VIH-1 resistente a multi-medicamentos RT-MDR. De manera similar, HI-443 fue 10 veces más potente que trovirdina, 2083 veces más potente que nevirapina, 1042 veces más potente que delavirdina, 2083 veces más potente que HI-172 y 4.2 veces más potente que HI-240 contra la cepa de VIH resistente a NNI A17. Finalmente, Hl-443 inhibió la replicación de la cepa de VIH-1 resistente a NNI variante de A17 con un valor de IC5o de 3.263 µM, mientras que los valores de IC50 de trovirdina, neviparina, delavirdina, y HI-1 72 fueron todos > 1 00 µM y el valor de IC50 de HI-240 fue 41 µM (Tabla 2). Estos descubrimientos establecen el compuesto de TET HI-443 como un NNI nuevo con actividad antiviral potente contra cepas resistentes a NNI así como también a multi-medicamentos de VIH-1 . Todas las publicaciones, patentes y documentos de patente descritos en la presente se incorporan para referencia como se establece completamente. La invención descrita en la presente puede modificarse para incluir modalidades alternativas. Todas las alternativas obvias se encuentran dentro del espíritu y alcance de la invenció, como se reivindica abajo.

Claims

REIVINDICACIONES 1 . Un compuesto de la fórmula en donde n es 0 a 3; R es H, halógeno, (C?-C12)alquilo, (C?-C12)alcoxi, amino, ciano, nitro o hidroxi; y Ri comprende ciclo(C3-C12)alquilo, ciclo(C3-C12)alquenilo, isotiazolilo, tetrazoilo, triazolilo, piridilo, imidazolilo, naftilo, benzoxazolilo, bencimidazolilo, oxazolilo, benzotiazolilo, pirazinilo, piridazinilo, tiadiazolilo, benzotriazolilo, pirolilo, indolilo, benzotienilo, tienilo, benzofurilo, quinolilo, isoquinolilo, o pirazolilo opcionalmente substituido con uno o más substituyentes seleccionados del grupo que consiste de. (Ci-Csjalquilo, (d-C3)alcoxi, halo o hidroxi; o una sal de adición farmacéuticamente aceptable de los mismos.
2. Un compuesto de la fórmula: n es 0 a 3; X es S o O; Z es -NH- o O; R es H, halógeno, (C^C^alquilo, (C?-C12)alcoxi, amino, ciano, nitro o hidroxi; y R2 comprende ciclo(C3-C?2)alquilo, ciclo(C3-C12)alquenilo, isotiazolilo, tetrazoilo, triazolilo, piridilo, imidazolilo, naftilo, benzoxazolilo, bencimidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, benzotiazolilo, pirazinilo, piridazinilo, tiadiazolilo, benzotriazolilo, pirolilo, indolilo, benzotienilo, tienilo, benzofurilo, quinolilo, isoquinolilo, o pirazolilo opcionalmente substituido con uno o más substituyentes seleccionados del grupo que consiste de. H, (C?-C3)alquilo, (C?-C3)alcoxi, halo, -CO-alquilo, o hidroxi; o una sal de adición farmacéuticamente aceptable de los mismos.
3. Un compuesto de la fórmula: en donde R^ es piridilo que puede substituirse.
4. El compuesto según la reivindicación 3, caracterizado porque Ri es piridilo substituido con halógeno.
5. El compuesto según la reivindicación 3, caracterizado porque Ri es piridilo substituido con bromo o cloro.
6. El compuesto según la reivindicación 3 que tiene la estructura de [2-(2-tiofeno)etii-N-[2-(5-bromopiridil)]-tiourea (H I-443); o una sal de adición farmacéuticamente aceptable de la misma.
7. El compuesto según la reivindicación 4 que tiene la estructura de [2-(2-tiofeno)etil-N-[2-(5-cloropiridil)]-tiourea; o una sal de adición farmacéuticamente aceptable de la misma.
8. El uso de un compuesto según la reivindicación 2,3,4, 6 o 7 en la elaboración de un medicamento para tratar infección de VIH en un sujeto.
9. El uso de al menos un compuesto según la reivindicación 2,3,4,6 o 7 en la elaboración de un medicamento para tratar VIH resistente al medicamento o sin afectación a la terapia en un sujeto.
10. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del compuesto de la reivindicación 4 y un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable. 1 1 . El uso de un compuesto según la reivindicación 4 en la elaboración de un medicamento para inhibir la transcriptasa inversa de VIH. 12. El uso de al menos un compuesto de la fórmula en la elaboración de un medicamento para tratar VIH resistente al medicamento o sin afectación a la terapia en un sujeto, en donde n es 0 a 3; R es H, halógeno, (C?-C?2)alquilo, (C?-C12)alcoxi, amino, ciano, nitro o hidroxi; y Ri comprende ciclo(C3-C?2)alquilo, ciclo(C3-C?2)alquenilo, isotiazolilo, tetrazoilo, triazolilo, piridilo, imidazolilo, fenilo, naftilo, benzoxazolilo, bencimidazolilo, tiazolilo, oxazolilo, benzotiazolilo, pirazinilo, piridazinilo, tiadiazolilo, benzotriazolilo, pirolilo, indolilo, benzotienilo, tienilo, benzofurilo, quinolilo, isoquinolilo, o pirazolilo; o una sal de adición farmacéuticamente aceptable de los mismos. 13. Un método para trata VIH en un sujeto que comprende administra al sujeto una cantidad eficaz de al menos un compuesto de las reivindicaciones 1 ,2,3,4,5,6 o 7. 14. Un método para trata VIH resistente al medicamento o sin afectación a la terapia en un sujeto que comprende administra al sujeto una cantidad eficaz de al menos un compuesto de las reivindicaciones 1 ,2,3,4,5,6 o 7. 15. Un método para inhibir VIH que comprende contactar el virus con una cantidad eficaz de al menos un compuesto de las reivindicaciones 1 ,2,3,4,5,6 o 7.