MX2013009528A - Metodos para mejorar el desarrollo del cerebro y la funcion congnoscitiva al usar beta-hidroxi-beta-metilbutirato. - Google Patents

Abstract

Se describen los métodos para mejorar la función neuronal en un individuo, como un adulto mayor. Los métodos incluyen administrar las composiciones nutricionales que comprenden HMB al individuo. Las composiciones nutricionales proporcionan las ventajas para los individuos que tienen o pueden estar en riesgo de tener deterioro cognoscitivo, debilitación cognoscitiva, y disfunción neuronal, que resulta comúnmente en las enfermedades cognoscitivas asociadas con enfermedades neurodegenerativas.

Description

MÉTODOS PARA MEJORAR EL DESARROLLO DEL CEREBRO Y LA FUNCIÓN COGNOSCITIVA AL USAR B ET A -H ID ROXI -BETA- METI LBUTI RATO Campo de la Invención La presente descripción se refiere a 'los métodos seleccionados para mejorar el desarrollo neuronal y la función cognoscitiva en adultos y en adultos mayores al administrar productos nutricionales que comprenden beta-hidroxi-beta-metilbutirato (HMB, por sus siglas en inglés).

Antecedentes de la Invención Los líquidos y los polvos nutricionales fabricados que comprenden una selección objetivo de los ingredientes de nutrición son bien conocidos y ampliamente disponibles, algunos de los cuales pueden proporcionar una única fuente de nutrición mientras otros pueden proporcionar una fuente suplementaria. Estos nutricionales incluyen polvos que se pueden reconstituir con agua u otro líquido acuoso, así como líquidos nutricionales listos para infantes como leche o emulsiones a base de proteínas o líquidos no emulsionados. Estos líquidos nutricionales son especialmente útiles cuando se formulan con ingredientes nutricionales seleccionados.

Tal ingrediente nutricional es beta-hidroxi-beta-metilbutirato (HMB, por sus siglas en inglés). El HMB es un metabolito de aminoácido natural de leucina que se conoce para el uso en una variedad de productos y de suplementos nutricionales. El HMB se conoce para el uso en tales productos para ayudar a construir o para mantener la masa y la fuerza de músculos sanos en individuos seleccionados.

El HMB de calcio es una forma comúnmente usada de HMB cuando está formulado en los productos nutricionales orales, cuyos productos pueden incluir tabletas, cápsulas, polvos reconstituibles, líquidos nutricionales y emulsiones. Algunos de estos productos que contienen HMB contienen nutrientes adicionales como grasa, carbohidrato, proteína, vitaminas, minerales y así sucesivamente.

Recientemente, ha habido interés creciente en el diseño y en la comercialización de las llamadas "formulaciones eficientes" que incluyen los productos nutricionales específicamente diseñados para la salud y la alimentación. Muchos de estos productos específicamente se diseñan para mejorar la cognición y la prevención de la demencia y las condiciones y las enfermedades de deterioro cognoscitivo relacionado. Hasta la fecha, estas formulaciones y productos han tenido éxito limitado.

Como tal, hay una necesidad de composiciones y de métodos para fácilmente y efectivamente mejorar la cognición generalmente, y para tratar el deterioro cognoscitivo, la debilitación cognoscitiva, y la enfermedad ' cognoscitiva específicamente. Adicionalmente, sería beneficioso si las composiciones y los métodos se podrían usar por una gran variedad de individuos, y particularmente adultos mayores, independientemente de la salud total y el estado físico.

Breve Descripción de la Invención Se dirige la presente descripción a los métodos para mejorar la función cognoscitiva y/o prevenir/tratar/reducir el deterioro cognoscitivo, la debilitación cognoscitiva, y la enfermedad cognoscitiva en individuos, y en particular, en adultos mayores. Los métodos incluyen administrar a un individuo una cantidad efectiva de HMB.

Se dirige una modalidad a un método para mejorar la cognición en un adulto mayor. El método comprende administrar al adulto mayor una composición que incluye una cantidad de HMB efectiva para mejorar la cognición en el adulto mayor.

Se dirige otra modalidad a un método para tratar una enfermedad cognoscitiva asociada con una enfermedad neurodegenerativa en un adulto mayor. El método comprende administrar al adulto mayor una composición que incluye una cantidad de HMB efectiva para tratar la enfermedad cognoscitiva en el adulto mayor. La enfermedad neurodegenerativa puede incluir, por ejemplo, la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Huntington, la enfermedad de Parkinson, demencia, esclerosis lateral amiotrófica, accidente cerebrovascular, y esquizofrenia.

Se dirige otra modalidad a un método para mejorar la función cognoscitiva en un infante, un niño o un adolescente. El método comprende administrar al infante, al niño, o al adolescente una composición que incluye una cantidad de HMB efectiva para mejorar la función cognoscitiva en el infante, el niño o el adolescente.

Los métodos descritos en la presente pueden proporcionar protección al cerebro y al tejido neuronal en individuos y pueden proteger el cerebro y los tejidos neuronales contra la deterioración, de tal modo que previene y/o tratan las enfermedades cognoscitivas asociadas con enfermedades neurodegenerativas, particularmente en adultos mayores. Adicionalmente, al proporcionar neuroprotección al cerebro, la función neuronal se puede mejorar mediante la administración de un producto nutricional que incluye HMB.

Otros componentes para el uso en las composiciones y los suplementos nutricionales se pueden incluir con el HMB. Por ejemplo, en una o más modalidades, la composición puede incluir por lo menos uno de una proteína, un carbohidrato, una grasa, vitaminas y minerales.

Breve Descripción de los Dibujos La FIG. 1 es una gráfica que representa la concentración durante el transcurso del tiempo de HMB en microdializados del cerebro de la rata 1 como se evaluó en el Ejemplo 11.

La FIG. 2 es una gráfica que representa la concentración durante el transcurso del tiempo de HMB en microdializados del cerebro de la rata 2 como se evaluó en el Ejemplo 11.

La FIG. 3A es una gráfica que representa el efecto de HMB en el estado fosforilativo de mTOR en células Nuero 2A como se evaluó en el Ejemplo 12.

La FIG. 3B es una gráfica que representa el efecto de HMB en el estado fosforilativo de ERK1/2 en células Neuro 2A como se evaluó en el Ejemplo 12.

La FIG. 3C es una gráfica que representa el efecto de HMB en el estado fosforilativo de Akt en células Neuro 2A como se evaluó en el ejemplo 12.

La FIG. 4 es una gráfica que representa el efecto de HMB en índice de síntesis de proteína en células Neuro 2A como se evaluó en el Ejemplo 12.

Las FIGS. 5A-5D son gráficas que representan el efecto de HMB en la expresión del factor de transcripción de MEF2 en células Neuro 2A, en ausencia o presencia de diferentes inhibidores, como se evaluó en el Ejemplo 12.

La FIG. 6 es una gráfica que representa el efecto de HMB en la proliferación y la viabilidad de células Neuro 2A como se evaluó en el Ejemplo 12.

La FIG. 7 es una gráfica que representa el efecto de antidepresión de HMB como se midió por el estado latente a la inmovilidad en una prueba de nado forzado como se evaluó en el Ejemplo 13.

Descripción Detallada de la Invención Se dirigen los métodos de la presente descripción para usar las composiciones que contienen el HMB para mejorar la función cognoscitiva y para reducir el deterioro cognoscitivo, el empeoramiento cognoscitivo, y la enfermedad cognoscitiva, particularmente en adultos mayores. Éstos y otros elementos o limitaciones esenciales u opcionales de los métodos de la presente descripción se describen detalladamente de aquí en adelante.

El término "adulto mayor" como se usa en la presente, a menos que se especifique lo contrario, se refiere a un individuo de por lo menos 45 años de edad, que incluye por lo menos 50 años de edad, que incluye por lo menos 55 años-de edad, que incluye por lo menos 60 años de edad, que incluye por lo menos 65 años de edad, que incluye por lo menos 70 años de edad, que incluye por lo menos 75 años de edad, que incluye por lo menos 80 años de edad o mayor, y también que incluye a partir de aproximadamente 45 años de edad a aproximadamente 80 años de edad, además incluye a partir de aproximadamente 55 años de edad a aproximadamente 80 años de edad.

El término "HMB de calcio" como se usa en la presente, a menos que se especifique lo contrario, se refiere a la sal de calcio de beta-hidroxi-beta-metilbutirato (también referida como ácido beta-hidoxil-metilbutirico, ácido beta-hidroxiisovalérico, o HMB), que está más comúnmente en una forma de monohidrato. Todos los pesos, porcentajes, y concentraciones como se usan en la presente para caracterizar el HMB de calcio se basan en el peso del monohidrato de HMB de calcio, a menos que se especifique lo contrario.

El término "polvo secado por aspersión" como se usa en la presente, a menos que se especifique lo contrario, se refiere a un polvo nutricional donde la mayoría de los componentes, que incluyen HMB, se han homogeneizado y posteriormente se han sometido a un proceso de secado por aspersión durante la fabricación. Los ingredientes adicionales se pueden agregar al polvo secado por aspersión a través de la mezcla en seco siempre y cuando por lo menos el HMB se haya homogeneizado previamente y secado por aspersión.

Los términos "grasa" y "aceite" como se usa en la presente, a menos que se especifique lo contrario, se usan alternativamente para referirse a los materiales del lípido derivados o procesados a partir de plantas o de animales. Estos términos también incluyen materiales del lípido sintéticos siempre y cuando tales materiales sintéticos sean adecuados para la administración oral a humanos.

El término "estable en almacenamiento" como se usa en la presente, a menos que se especifique lo contrario, se refiere a un líquido nutricional que permanece comercialmente estable después de ser empaquetado y después se ser almacenado a 18-24°C por lo menos 3 meses, que incluye de aproximadamente 6 meses a aproximadamente 24 meses, y también incluye de aproximadamente 12 meses a aproximadamente 18 meses.

El término "función neuronal" como se usa en la presente, a menos que se especifique lo contrario, se refiere al funcionamiento del cerebro y del tejido neuronal para soportar y para mantener las capacidades cognoscitivas, por ejemplo, el aprendizaje y la memoria. Por el contrario, el término "disfunción neuronal" como se usa en la presente, a menos que se especifique lo contrario, se refiere a la memoria reducida o la función cognoscitiva. Por ejemplo, una capacidad de aprendizaje reducida o la capacidad de recordar la información se considera disfunción neuronal. La disfunción neuronal en algunas modalidades puede ser el resultado del envejecimiento o de la enfermedad neurodegenerativa.

El término "neuroprotección" como se usa en la presente, a menos que se especifique lo contrario, se refiere a la protección de neuronas existentes y al tejido neuronal contra apoptosis o degeneración; protección de neuronas existentes y tejido neuronal contra lesión física; y regeneración neuronal estimulante.

El término "cognición" como se usa en la presente, a menos que se especifique lo contrario, se refiere a los procesos mentales implicados en la adquisición y la comprensión de conocimiento, que incluye el pensar, conocer, recordar, juzgar y solucionar problemas. La "cognición" incluye las funciones de alto nivel del cerebro y comprende el lenguaje, la imaginación, la percepción, y la planificación.

Los términos "composición nutricional" o "producto nutricional" como se usa en la presente, a menos que se especifique lo contrario, se refieren a líquidos nutricionales y polvos nutricionales, donde los últimos pueden ser reconstituidos para formar un líquido nutricional, todos los cuales comprenden HMB y uno o más de grasa, proteína y carbohidrato y son adecuados para el consumo oral de un humano.

El término "líquido nutricional" como se usa en la presente, a menos que se especifique lo contrario, se refiere a productos nutricionales en la forma líquida lista para beber y a líquidos nutricionales hechos mediante la reconstitución de los polvos nutricionales descritos en la presente antes de uso.

El término "líquido sustancialmente transparente" como se usa en la presente, a menos que se especifique lo contrario, se refiere a líquidos nutricionales que son sustancialmente libres de grasa; es decir, los líquidos están desprovistos de grasa agregada a excepción de la grasa inherente en las materias primas o la grasa agregada a bajas concentraciones para la ayuda en la fabricación del líquido. En este contexto, el término "libre de grasa" se entiende que el líquido comúnmente contiene menos del 1.0%, más comúnmente menos del 0.5%, y más comúnmente menos del 0.1%, que incluye cero por ciento, de grasa en peso del líquido nutricional. Estos líquidos nutricionales sustancialmente transparentes son líquidos fluidos o potables de aproximadamente 1 a aproximadamente 25°C.

Todos los porcentajes, partes y relaciones como se usan en la presente, están en peso de la composición total, a menos que se especifique lo contrario. Todos tales pesos que pertenecen a los ingredientes listados se basan en el nivel activo y, por lo tanto, no incluyen solventes o subproductos que se pueden incluir en materiales comercialmente disponibles, a menos que se especifique lo contrario.

Todas las referencias a las características o las limitaciones singulares de la presente descripción todas incluirán la característica o la limitación plural correspondiente, y viceversa, a menos que se especifique lo contrario o claramente implicadas por el contrario por el contexto en el cual se hace referencia.

Todas las combinaciones de etapas de método o de proceso como se usa en la presente se pueden realizar en cualquier orden, a menos que se especifique lo contrario o claramente esté implicado lo contrario por el contexto en el cual se hace la combinación referida.

Varias modalidades de las composiciones nutricionales de la presente descripción pueden también estar sustancialmente libres de cualquier ingrediente o característica opcion-al o esencial seleccionada descrita en la presente, a condición de que el producto nutricional restante todavía contenga todos los ingredientes o características requeridas como se describe en la presente. En este contexto, y a menos que se especifique lo contrario, el término "sustancialmente libre" significa que el producto nutricional seleccionado contiene menos de una cantidad funcional del ingrediente opcional, comúnmente menos del 1%), que incluye menos del 0.5%>, que incluye menos del 0.1%, y también que incluye cero por ciento, en peso de tal ingrediente esencial opcional o seleccionado.

Las composiciones nutricionales y los métodos descritos en la presente pueden comprender, consistir en, o consistir esencialmente en los elementos esenciales de las composiciones y los métodos como se describe en la presente, así como cualquier elemento adicional u opcional descrito en la presente o de otra manera útil en las aplicaciones del producto nutricional.

Forma de producto Las composiciones que incluye el HMB útil en los métodos de la presente descripción se pueden formular en, cualquier forma de producto conocida o de otra manera adecuada para la administración oral o parenteral. Las formas de producto orales son generalmente preferidas e incluyen cualquier formulación sólida, líquida, o en polvo adecuada para el uso en la presente, a condición de que tal formulación permita la liberación oral segura y efectiva de los ingredientes esenciales y otros seleccionados de la forma de producto seleccionada.

Los ejemplos no limitantes de las formas de producto nutricional sólidas adecuadas para e! uso en la presente incluyen productos de reemplazo de bocadillo y de comida, que incluyen los formulados como barras, palillos, galletas o panes o tortas u otros productos horneados, líquidos congelados, dulces, cereales para el desayuno, polvos o sólidos granulados u otros elementos en partículas, trozos o bocadillos de botana, comida congelada o tratada por retorta y así sucesivamente.

Los ejemplos no limitantes de formas de producto líquido adecuados para el uso en la presente incluyen productos de reemplazo de bocadillos y comidas, bebidas calientes o frías, bebidas carbonatadas o no carbonatadas, jugos u otras bebidas acidificadas, leche o bebidas a base de soya, batidos, cafés, tés, composiciones de alimentación enteral, y así sucesivamente. Estas composiciones líquidas se formulan muy comúnmente como suspensiones o emulsiones, pero también se pueden formular en cualquier otra forma adecuada como líquidos transparentes, líquidos sustancialmente transparentes, soluciones, geles líquidos, y así sucesivamente.

Otros ejemplos no limitantes de formas de producto orales adecuadas incluyen composiciones semisólidas o semilíquidas (por ejemplo, pudines, geles), así como formas de producto más convencional como cápsulas, tabletas, comprimidos, pildoras, y así sucesivamente. La cantidad de la composición para proporcionar una cantidad efectiva de HMB al usuario objetivo se puede contener en una o una pluralidad de formas de dosificación individuales, por ejemplo, en una tableta o una pluralidad de tabletas que se puedan administrar en dosificaciones únicas o múltiples por día.

Para las formas de producto como pastillas, tabletas (por ejemplo masticable, revestidas, etc.), pastas, o geles, la mezcla de aminoácido se puede formular a concentracionés que oscilan más comúnmente de aproximadamente 5 a aproximadamente 50%, que incluyen de aproximadamente 15 a aproximadamente 33%, y también que incluyen de aproximadamente 15 a aproximadamente 25%, en peso de la forma de producto, toda en combinación con excipientes u otros ingredientes como carbohidratos, acidulantes, sabores, y colores.

Las composiciones que incluye HMB se pueden formular con suficientes clases y cantidades de nutrientes para proporcionar una sola fuente, primaria, o suplementaria de nutrición, o para proporcionar un producto nutricional especializado para el uso en individuos afectados con enfermedades o condiciones específicas o con una ventaja nutricional objetivo.

Beta-Hidroxi-Beta-Metilbutirato (HMB, por sus siglas en inglés) Las composiciones para el uso en los métodos de la presente descripción comprenden HMB, que significa que las composiciones, por lo tanto, están formuladas con la adición de HMB, más comúnmente como un monohidrato de calcio, o de otra manera son preparadas para contener calcio y HMB en el producto final. Cualquier fuente de HMB es adecuada para el uso en la presente con la condición de que el producto 'final contenga HMB, aunque tal fuente sea preferiblemente el HMB de calcio y se agregue más comúnmente como tal a las composiciones durante la formulación.

El término "HMB de calcio agregado" como se usa en la presente se entiende una sal de calcio de HMB, más comúnmente como sal de calcio del monohidrato de HMB, como la fuente de HMB agregada al producto nutricional.

Aunque el monohidrato del HMB de calcio sea la fuente preferida de HMB para el uso en la presente, otras fuentes adecuadas pueden incluir HMB como el ácido libre, una sal, una sal anhidra, un éster, una lactona, u otras formas de producto que proporcionen de otra manera una forma biodisponible de HMB a partir del producto nutricional. Los ejemplos no limitantes de sales adecuadas de HMB para el uso en la presente incluyen sales de HMB, hidratadas o anhidras, de sodio, de potasio, de magnesio, de cromo, de calcio, u otra forma de sal no tóxica. El monohidrato de HMB de calcio es preferido y está comercialmente disponible de Technical Sourcing International (TSI) de Salt Lake City, Utah.

La concentración de HMB en las composiciones líquidas nutricionales adecuadas para el uso en los métodos puede oscilar hasta 10%, que incluye de aproximadamente 0.01% a 10%>, y también que incluye de aproximadamente 0.1% a aproximadamente 5.0%, y también que incluye de aproximadamente 0.5%> a aproximadamente 2.0%, y también que incluye de aproximadamente 0.4% a aproximadamente 1.5%, en peso de la composición líquida nutricional. En una modalidad específica, el HMB está presente en la composición líquida nutricional en una cantidad de aproximadamente 0.67%, en peso de la composición líquida nutricional.

La concentración de HMB en las composiciones sólidas nutricionales adecuadas para el uso en los métodos puede oscilar hasta el 10%, que incluye de aproximadamente 0.01% a 10%>, y también que incluye de aproximadamente 0.1% a aproximadamente 7.0%, y también que incluye de aproximadamente 1.0% a aproximadamente 5.0%, y también que incluye de aproximadamente 1.0% a aproximadamente 4.0%, en peso de la composición sólida nutricional. En una modalidad específica, el HMB está presente en el sólido nutricional en una cantidad de aproximadamente 3.2%, en peso de la composición sólida nutricional.

Las composiciones nutricionales administradas a los individuos como se describe en la presente pueden proporcionar de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 10 gramos/día de HMB, que incluye de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 5.0 gramos/día de HMB. Por consiguiente, las composiciones nutricionales pueden proporcionar de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 2.5 gramos, que incluye de aproximadamente 1.0 a aproximadamente 1.7 gramos, que ' incluye de aproximadamente 1.5 gramos de HMB por porción, donde una porción puede ser de aproximadamente 240 mi del líquido nutricional listo para consumir o aproximadamente 240 mi de sólido nutricional reconstituido. En una modalidad específica, el HMB se proporciona en un nivel de aproximadamente 1.58 gramos por 240 mi. El individuo se le puede administrar una porción por día, dos porciones por día, tres porciones por día, o cuatro o más porciones por día para recibir la cantidad deseada de HMB de la composición nutricional.

Macronutrientes Las composiciones como se describe en la presente que incluye HMB para el uso en los métodos pueden además comprender uno o más otros macronutrientes que incluyen una fuente de grasa, una fuente de carbohidrato, y una fuente de proteína, todas además del HMB como se describe en la presente.

Los macronutrientes opcionales en combinación con los otros ingredientes esenciales o agregados pueden proporcionar hasta 1000 kcal de energía por porción o dosis, que incluyen de aproximadamente 25 kcal a aproximadamente 900'kcal, también que incluyen de aproximadamente 75 kcal a aproximadamente 700 kcal, también que incluyen de aproximadamente 100 kcal a aproximadamente 500 kcal, también que incluyen de aproximadamente 150 kcal a aproximadamente 400 kcal, y también que incluyen de aproximadamente 200 kcal a aproximadamente 300 kcal, por porción o dosis, más adecuadamente como una sola porción o dosis, sin dividir.

Muchas diferentes fuentes y tipos de proteínas, lípidos, y carbohidratos se conocen y se pueden usar en las composiciones que contienen HMB como se describe en la presente, a condición de que los nutrientes seleccionados sean seguros y efectivos para la administración oral y sean compatibles con los ingredientes esenciales y otros agregados.

Los carbohidratos adecuados para el uso en las composiciones pueden ser simples, complejos, o variaciones o combinaciones de los mismos. Los ejemplos no limitantes de carbohidratos adecuados incluyen almidón o maicena hidrolizada o modificada, maltodextrina, polímeros de glucosa, sucrosa, jarabe de maíz, sólidos de jarabe de maíz, carbohidratos derivados de arroz, glucosa, fructosa, lactosa, jarabe de maíz alto en fructosa, oligosacáridos indigeribles (por ejemplo, fructooligosacáridos), fibra soluble o insoluble, miel, alcoholes de azúcar (por ejemplo, maltitol, eritritol, sorbitol), y combinaciones de los mismos.

Las proteínas adecuadas para el uso en las composiciones, además del componente de HMB como se describe en la presente, incluyen proteínas hidrolizadas, parcialmente hidrolizadas o no hidrolizadas o fuentes de proteína, y se pueden derivar de cualquier fuente conocida o de otra manera adecuada como leche (por ejemplo, caseína, suero), animal (por ejemplo, carne, pescado), cereal (por ejemplo, arroz, maíz), vegetal (por ejemplo, soya), o combinaciones de los mismos.

Las grasas adecuadas para el uso en las composiciones incluyen aceite de coco, aceite de coco fraccionado, aceite de soya, aceite de maíz, aceite de oliva, aceite de cártamo, aceite de cártamo oleico superior, aceite de MCT (triglicéridos de cadena media), aceite de girasol, aceite de girasol oleico superior, aceites de palma y de semilla de palma, oleína de palma, aceite de cañóla, aceite marino, aceite de semilla de algodón, y combinaciones de los mismos.

La concentración o la cantidad de grasa, proteína, y carbohidrato en las composiciones de la presente descripción pueden variar considerablemente dependiendo de la forma de producto particular (por ejemplo, sólido, líquido, polvo) y de varias otras formulaciones y necesidades dietéticas objetivo. Estos macronutrientes se formulan más comúnmente dentro de cualquiera de los intervalos calóricos (modalidades A-D) descritas en la siguiente tabla.

*Cada valor numérico es precedido por el término "aproximadamente" Ingredientes Opcionales Las composiciones nutricionales que comprenden el HMB pueden comprender además otros ingredientes opcionales que pueden modificar las características físicas, ^ nutricionales, químicas, hedonistas o de procesamiento de los productos o servir como componentes nutricionales farmacéuticos o adicionales cuando se usan en la población objetivo. Muchos de tales ingredientes opcionales se conocen o de otra manera son adecuados para el uso en otras composiciones nutricionales y se pueden también usar en las composiciones nutricionales descritas en la presente, a condición de que tales ingredientes opcionales sean seguros y efectivos para la administración oral y sean compatibles con los ingredientes esenciales y otros en la forma de producto seleccionada.

Los ejemplos no limitantes de tales ingredientes opcionales incluyen agentes conservadores, antioxidantes, emulsionantes, amortiguadores, fructooligosacáridos, picolinato de cromo, activos farmacéuticos, nutrientes adicionales como se describe en la presente, agentes colorantes, saborizantes, espesantes y estabilizadores, y así sucesivamente.

Las composiciones pueden comprender además vitaminas o nutrientes relacionados, ejemplos no limitantes de las cuales incluyen vitamina A, vitamina D, vitamina E, vitamina K, tiamina, riboflavina, piridoxina, vitamina B12, carotenoides, niacina, ácido fólico, ácido pantoténico, biotina, vitamina C, colina, inositol, sales, y derivados de los mismos, y combinaciones de los mismos.

Las composiciones pueden comprender además minerales, ejemplos no limitantes de las cuales incluyen fósforo, magnesio, calcio, hierro, zinc, manganeso, cobre, sodio, potasio, molibdeno, cromo, selenio, cloruro, y combinaciones de los mismos.

Las composiciones pueden también incluir uno o más agentes saborizantes o enmascarantes. Los agentes saborizantes o enmascarantes incluyen dulcificantes naturales y artificiales, fuentes de sodio como cloruro sódico, e hidrocoloides, como goma de guar, goma de xantano, carragenina, goma gellan, goma de acacia y combinaciones de los mismos.

Métodos de Fabricación Las composiciones líquidas nutricionales que contienen HMB se pueden fabricar mediante cualquier método conocido o de otra manera adecuada para hacer líquidos nutricionales, que incluyen emulsiones como emulsiones nutricionales a base de leche.

En un proceso de fabricación adecuado, un líquido nutricional se prepara al usar por lo menos tres suspensiones separadas, que incluyen una suspensión de proteína en grasa (PIF, por sus siglas en inglés), una suspensión de carbohidrato-mineral (CHO-MIN, por sus siglas en inglés), y una suspensión de proteína en agua (PIW, por sus siglas en inglés). La suspensión de PIF es formada al calentar y mezclar los aceites seleccionados (por ejemplo, aceite de cañóla, aceite de maíz, aceite de pescado, etc.) y después agregar un emulsionante (por ejemplo, lecitina), vitaminas solubles en grasa, y una porción de la proteína total (por ejemplo, concentrado de proteína de leche, etc.) con calor y agitación continuos. La suspensión de CHO-MIN es formada mediante la adición con agitación calentada al agua: minerales (por ejemplo, citrato de potasio, fosfato de dipotasio, citrato de sodio, etc.), cantidades pequeñas y muy pequeñas de minerales (premezcla de TM/UTM), agentes espesantes o de suspensión (por ejemplo Avicel, gellan, carragenina), y HMB. La suspensión de CHO-MIN resultante se mantiene durante 10 minutos con calor y agitación continuos antes de agregar los minerales adicionales (por ejemplo, cloruro de potasio, carbonato de magnesio, yoduro de potasio, etc.) y/o carbohidratos (por ejemplo, fructooligosacárido, sucrosa, jarabe de maíz, etc.). La suspensión de PIW entonces es formada mediante la mezcla con calor y agitación de la proteína restante (por ejemplo, caseinato de sodio, concentrado de proteína de soya, etc.) en agua.

Las suspensiones resultantes entonces se mezclan junto con agitación calentada y el pH se ajusta al intervalo deseado, comúnmente de 6.6-7.0, después de lo cual la composición se somete al procesamiento de corto tiempo a alta temperatura (HTST, por sus siglas en inglés) durante el cual és tratada con calor, emulsionada y homogeneizada la composición, y después se deja enfriar. Se agregan vitaminas solubles en agua y ácido ascórbico, el pH se ajusta de nuevo al intervalo deseado si es necesario, se agregan sabores, y se agrega agua para alcanzar el nivel de sólido total deseado. La composición entonces asépticamente es empaquetada para formar una emulsión nutricional asépticamente empaquetada, o la composición se agrega a los envases estables para esterilización por retorta, y entonces se sometieron a la esterilización por retorta para formar las emulsiones nutricionales esterilizadas por retorta.

Los procesos de fabricación de las emulsiones nutricionales pueden llevarse a cabo de formas distintas a las establecidas en la presente sin apartarse del espíritu y del alcance de la presente descripción. Las presentes modalidades son, por lo tanto, consideradas en todos los aspectos ilustrativos y no restrictivos y que todos los cambios y equivalentes también vienen dentro de la descripción de la presente descripción.

El sólido nutricional, como un polvo nutricional secado por aspersión o polvo nutricional mezclado en seco, se puede preparar por cualquiera de las técnicas de recolección conocidas o de otra manera efectivas, adecuada para hacer y formular un polvo nutricional.

La etapa de secado por aspersión puede de otra manera adecuada incluir cualquier técnica de secado por aspersión para uso en la producción de polvos nutricionales. Muchos diferentes métodos y técnicas de secado por aspersión se conocen para el uso en el campo de la nutrición, que son adecuados para el uso en la fabricación de los polvos nutricionales secados por aspersión en la presente.

Un método para preparar el polvo nutricional secado por aspersión comprende formar y homogeneizar una suspensión o un líquido acuoso que comprende HMB, y opcionalmente proteína, carbohidrato, y grasa, y después secar por aspersión la suspensión o el líquido para producir un polvo nutricional secado por aspersión. El método puede comprender además la etapa de secar por aspersión, la mezcla seca, o de otra manera de agregar los ingredientes nutricionales adicionales, que incluye cualquiera de uno o más de los ingredientes descritos en la presente, al polvo nutricional secado por aspersión.

Los métodos de fabricación se formulan preferiblemente con HMB de calcio, el cual se formula más comúnmente como el monohidrato del HMB de calcio, como la fuente de HMB para el uso en los métodos.

Métodos de Uso Las composiciones que incluye HMB como se describe en la presente se pueden administrar a individuos generalmente, que incluye adultos, adultos mayores, infantes, niños y adolescentes, específicamente, para generalmente mejorar la cognición, o para tratar una enfermedad o una condición cognoscitiva específica, como una enfermedad cognoscitiva asociada con una enfermedad neurodegenerativa en un adulto mayor. El individuo puede estar generalmente sano, o puede sufrir de (o estar en riesgo de sufrir de) disminución cognoscitiva, deterioro cognoscitivo (que incluye deterioro cognoscitivo bajo (MCI, por sus siglas en inglés)), lapsos de memoria, degradación de la memoria, trastornos cognoscitivos, o una enfermedad neurodegenerativa como la enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntingto i, enfermedad de Parkinson, demencia, esclerosis lateral amiotrófica, accidente cerebrovascular, y esquizofrenia. Con respecto a infantes, niños, y adolescentes específicamente, las composiciones que contienen HMB pueden mejorar la función cognoscitiva total y el desarrollo del cerebro.

Las composiciones nutricionales que contienen HMB mejoran la función neuronal en individuos, que incluye adultos mayores que pueden beneficiarse sustancialmente de la función neuronal mejorada, puesto que la función neuronal disminuye generalmente con edad. Específicamente, adultos mayores que sufren de disfunción neuronal pueden ' beneficiarse particularmente de las composiciones que contienen HMB.

En modalidades específicas, el individuo que recibe la composición que contiene HMB puede ser un adulto mayor que tiene o que está en riesgo de desarrollar un trastorno cognoscitivo o en riesgo de desarrollar la disminución cognoscitiva o un deterioro cognoscitivo (que incluye MCI). Los individuos que están "en riesgo" de desarrollar la disminución cognoscitiva o un trastorno o un deterioro cognoscitivo incluyen individuos que tienen una forma específica de un gen referido como APOE-e4, hipertensión, diabetes mellitus, depresión, alta presión arterial, colesteroi elevado, y/o antecedentes familiares de disminución cognoscitiva, deterioro cognoscitivo, y/o trastorno/enfermedad cognoscitiva debido a la edad.

Los métodos descritos en la presente que usan las composiciones que contienen HMB se dirigen además para proporcionar al individuo durante la administración de tales composiciones, más comúnmente después de uso diario durante un periodo de tiempo extendido de aproximadamente 1 mes a aproximadamente 10 años, que incluye de aproximadamente 1 mes a aproximadamente 1 año, y además que incluye de aproximadamente 1 mes a aproximadamente 6 meses, uno o más de: (1) soporte y mantenimiento de la función neuronal de adultos y de adultos mayores; (2) función neuronal mejorada en adultos y adultos mayores; (3) neuroprotección a adultos y a adultos mayores; (4) prevención/tratamiento de enfermedad cognoscitiva asociada con una enfermedad neurodegenerativa en adultos y adultos mayores; (5) prevención/tratamiento de disminución cognoscitiva o deterioro cognoscitivo en adultos y adultos mayores; y (6) capacidad cognoscitiva mejorada de infantes, niños y adolescentes. En una modalidad, las composiciones que contienen HMB se administran diariamente por un período de por lo menos un año.

Los productos nutricionales se pueden administrar oralmente como sea necesario para proporcionar el nivel deseado de nutrición, más comúnmente en la forma de una a dos porciones diarias, en una o dos o más dosis divididas diarias, por ejemplo, los tamaños de porciones comúnmente oscilan de aproximadamente 100 a aproximadamente 300 mi, que incluyen de aproximadamente 150 a aproximadamente 250 mi, y que incluyen de aproximadamente 190 mi a aproximadamente 240 mi.

Ejemplos Los siguientes ejemplos ilustran las modalidades específicas y o las características de las composiciones nutricionales que contienen HMB y los métodos de la presente descripción. Los ejemplos se dan solamente con el propósito de ilustración y no deben ser interpretados como limitaciones de la presente descripción, como muchas variaciones de los mismos son posibles sin apartarse del espíritu y del alcance de la descripción. Todas las cantidades ejemplificadas son porcentajes en peso basados en el peso total del producto, a menos que se especifique lo contrario.

Las composiciones que contienen HMB ejemplificadas son productos nutricionales preparados de acuerdo con los métodos de fabricación bien conocidos en la industria de la nutrición para preparar emulsiones nutricionales y polvos nutricionales secados por aspersión.

Ejemplos 1-5 Los ejemplos 1-5 ilustran los polvos que contienen HMB nutricionales secados por aspersión adecuados para el uso en los métodos de la presente descripción, los ingredientes de los cuales se enumeran en la tabla a continuación. Estos productos son preparados mediante métodos de secado por aspersión en lotes separados y se reconstituyen con agua antes de uso a las concentraciones de ingrediente objetivo deseadas. Todas las cantidades de ingrediente se enumeran como kilogramo por lote de 1000 kilogramos de producto, a menos que se especifique lo contrario.

AN = como sea necesario Ejemplos 6-10 Los ejemplos 6-10 ilustran las modalidades de la emulsión nutricional que contiene HMB de la presente descripción, los ingredientes de los cuales se enumeran en la tabla a continuación. Todas las cantidades se enumeran como kilogramo por lote de 1000 kilogramos del producto, a menos que se especifique lo contrario.

Ejemplo 11 En este Ejemplo, el aspecto de HMB y su concentración durante el transcurso del tiempo en fluido intersticial del cerebro se analizaron después de la administración oral de HMB.

Inicialmente, las ratas Sprague-Dawley (Charles River, Francia) que pesan 400-500 g se alojaron en jaulas a temperatura ambiente constante (22±2°C) y 45-55% de humedad bajo un régimen de 12 horas luz/oscuridad. El alimento y el agua se permitieron libremente. Los procedimientos que implicaban animales y su cuidado se condujeron de conformidad con las normas institucionales que están de acuerdo con leyes nacionales y las políticas de EC para el Cuidado y Uso de los Animales de Laboratorio (RD 2101-2005, 86/609/CEE).

Una cánula de guía se insertó estereotáxicamente en el área del hipocampo de cada rata anestesiada en las coordenadas descritas en un atlas estereotáxico para las ratas. Las ratas se dejaron recuperarse de la cirugía por lo menos tres días. En el primer día del experimento, se insertó una sonda de microdiálisis del cerebro ( D-2204, BR-4, membrana de 4 mm, disponibles de BASi, West Lafayette, Indiana) en la cánula de guía de cada rata. La sonda se perfundió con solución de Ringer (aparato de aCFS Harvard, #597316) a una velocidad constante de 2 µ?/min. Se dejó la rata en la jaula, con espacio para movimiento relativamente libre. Se recolectaron las muestras de dializado automáticamente cada veinte minutos. Una dosis de bolo de HMB (250 mg/kg de peso corporal) se dio mediante alimentación por sonda 100 min después de comenzar el experimento y el muestreo se continuó por otro 160-220 min.

Se midió el HMB al usar UPLC-MS. Específicamente, las muestras de 30-40 µ? en aCSF se microfiltraron a través de filtros de nylon de 0.2 pm, se diluyeron con una cantidad igual de agua, y después se inyectaron en el UPLC-TQD (sistema Acuity-TQD disponible de Waters Corporation, Milford, Massachusetts). Se analizó el HMB al usar una columna BEH Hillic de 1.7 pm; 2.1x150 mm al usar un gradiente que consiste en H20:MeCN 0.1% de ácido fórmico. Se fijó el espectrómetro de masa al Modo de Ion ES + .

Se ensayaron dos ratas en diferentes días. La alimentación por sonda se dio en la fracción 5. Como se muestra en la FIG. 1, el HMB aparecía en el cerebro de la rata 1 40 minutos después de la administración (fracción 7), y aumentó considerablemente después de esto. Se tomaron las fracciones hasta más de 2.5 horas después de la alimentación por sonda. En aquel momento, el nivel de concentración de HMB no había disminuido. La concentración máxima de HMB medida fue 10.5 ppnri.

La FIG. 2 muestra los resultados de la rata 2. Esta vez, se tomaron las fracciones por un período más largo para detectar la disminución de concentración de HMB. La concentración durante el transcurso del tiempo de HMB en los microdializados del cerebro de la rata 2 siguió un patrón similar como en la rata 1. Se detectó por primera vez en la fracción 7 y aumentó considerablemente por 2 h y 20 min después de la administración (fracciones 12-13), donde se alcanzó la concentración máxima (más de 4 ppm). El nivel de concentración de HMB disminuyó después de esto, aunque al final del experimento (más de 3.5 h después de la alimentación por sonda), todavía no había alcanzado el nivel basal.

De acuerdo con los resultados, el HMB administrado oralmente aparece en los fluidos intersticiales del cerebro, que se entiende que, a pesar de sus propiedades relativamente hidrofílicas, el HMB podía cruzar la barrera hematoencefálica en un modelo experimental del microdiálisis en ratas.

Ejemplo 12 En este ejemplo, se analizaron los efectos de HMB en la regulación de las cascadas de señalización relacionadas con la síntesis de proteina y la proliferación celular en células neuronal (Neuro 2A). Particularmente, se analizaron los efectos de HMB como un componente nutricional para inducir el desarrollo y la plasticidad neuronales y para conferir la neuroprotección.

El desarrollo neuronal y la transmisión sináptica son los procesos plásticos que son influenciados al cambiar las condiciones extracelulares e intracelulares. Las proteínas cinasas son cruciales para la regulación de estos fenómenos y varias de ellas (por ejemplo, la proteína cinasa de activada por mitógeno (ERK, por sus siglas en inglés), fdsfoinositida-3' cínasa/AKT (PI3K/AKT, por sus siglas en inglés) y cinasas dependientes de calcio/calmodulina (CaMK, por sus siglas en inglés)) tienen papeles bien establecidos en el desarrollo neuronal y la plasticidad sináptica. Recientemente, ha habido un creciente interés en la proteína cinasa de serina/treonina, objetivo mamífera de rapamicina (mTOR, por sus siglas en inglés). De hecho, la mTOR tiene un papel fundamental como regulador de diferentes etapas del desarrollo neuronal así como en la dirección de axón, la morfogénesis espina dendrítica, y varias formas de plasticidad sináptica de largo plazo.

El factor mejorador de miocito 2 (MEF2, por sus siglas en inglés) también desempeña una función importante en la supervivencia neuronal. Las trayectorias que regulan la actividad de MEF2 en la supervivencia neuronal incluyen p38 MAPK (ERK, por sus siglas en inglés) y la fosforilación de PI3-AKT sobre el estímulo por las hormonas/factores o la despolarización de membrana. Además, en enfermedades neurodegenerativas, la macroautofagia es inducida fuertemente mediante la degradación de MEF2 o la supresión de la trayectoria de mTOR,,que lleva a la muerte neuronal. Aunque el mecanismo mediante el cual el mTOR regula MEF2 es desconocido, varias observaciones han precisado que la señalización combinada a través de mTORC2 y AKT/PKB se puede requerir para la maquinaria de supervivencia neuronal que activa MEF2.

Para los experimentos de transfección en este Ejemplo, las células Neuro-2A se usaron a confluencia del 80-90% crecida en el medio de Eagle modificado de Dulbecco. Se expusieron las células durante 5 horas al plásmido pGL3-4xMEF, que contiene 4 copias en tándem del MEF2D que une la secuencia de ADN antes de la secuencia de ADN que codifica para la luciferasa de luciérnaga. Se agregaron los efectores al medio durante 18 h y se determinó la actividad de la luciferasa. Para el estudio de inhibición de los factores de señalización, se agregaron los inhibidores de la cinasa de fosfatidil-inositol 3 (LY294002), ERK 1/2 (PD98059) y las activaciones de mTORCI (rapamicina) a las células.

Se determinó el efecto de H B en el índice de síntesis de proteína en células Neuro-2A midiendo la incorporación de [3H]- tirosina en la piscina de proteína celular. Se determinó el estado fosforilativo de mTOR y las proteínas cinasas hacia arriba/abajo (Akt, ERK 1/2) mediante inmunoelectrotransferencia. Se determinó la proliferación/viabilidad celular con el ensayo colorimétrico de MTT (bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio).

Se expresaron los datos como medio±SEM. Se usó la prueba t de Student para analizar los resultados.

Las FIGS. 3A-3C muestran el efecto de HMB en la fosforilación de mTOR y los reguladores corriente arriba en células Neuro-2A. Bajo las condiciones de cultivo celular descritas antes, el HMB produjo un aumento significante en la fosforilación de mTOR (FIG. 3A). Además, el HMB aumentó el estado fosforilativo de Akt (FIG. 3C) y ERK 1/2 (FIG. 3B) en esta línea celular, que son los dos reguladores corriente arriba principales de la trayectoria de señalización de mTOR en células mamíferas. Por otra parte, la activación de mTOR más alta inducida por HMB promovió un aumento en la síntesis de proteína (20% de HMB contra Control, FIG.4).

La FIG. 5A exhibe el efecto de HMB en la expresión del factor de transcripción de MEF2 en el Neuro-2A. La suplementación de los medios con HMB produjo un aumento significante en la actividad de la luciferasa de transcripción dependiente de MEF2. Los efectos de los inhibidores de LY294002, PD98059 y rapamicina en factor de transcripción de MEF2 se muestran también en las FIGS. 5B-5D. Cualquiera de LY294002 o PD98059 bloqueó totalmente el aumento mediado por HMB en MEF2. Sin embargo, la rapamicina no tenía ningún efecto en la expresión de MEF2 inducida por HMB. LY294002 y PD98059 actúan corriente arriba de mTOR para bloquear la expresión. Esto suprime la mayoría, si no todas las, de las actividades de mTOR. En cambio, la rapamicina alostéricamente afecta las interacciones del sustrato de mTOR y selectivamente bloquea solamente un subconjunto de actividades de mTOR, estas mediadas por el complejo de mTORCI, pero no otras mediadas por mTORC2. Esto es constante con hallazgos que la rapamicina no impide la supervivencia de la neurona, el crecimiento dendrítico y la complejidad o los potenciales de acción dirigidos por la activación de PI3/AKT. Los datos descritos antes muestran que las trayectorias de Ras/ER y de PI3/AKT se pueden ambos requerir para la actividad de MEF2 mediada por HMB, colocando MEF2 como un efector corriente abajo de las trayectorias de Ras/ERK y de PI3/AKT.

La FIG. 6 muestra el efecto de HMB en la proliferación y la viabilidad neuronales. Como se muestra en la Figura 6, la proliferación y la viabilidad neuronales se estimularon mediante HMB.

Los datos de este Ejemplo, que usan células Neuro-2A, demuestran que el HMB actúa como un efector capaz de modular las trayectorias de señalización claves como mTOR-raptor/rictor- MEF2 que regulan los procesos de célula fundamentales claves, como la síntesis y proliferación de la proteína. Por consiguiente, el HMB puede asistir en el desarrollo del sistema nervioso así como para el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas mediante la regulación de las trayectorias de señalización neuronales.

Ejemplo 13 En este ejemplo, se analizó el efecto de HMB en comportamiento de la ansiedad/depresión en ratas.

Este ejemplo se basa en la prueba de nado 'forzado (FST, por sus siglas en inglés) con depresión descrita por Porsolt, et al, 1978. Para comenzar el experimento, las ratas se colocaron individualmente dentro de los cilindros verticales internos (altura: 40 cm; diámetro: 21.5 cm) que contienen 30 cm de agua a 25°C durante 15 minutos (es decir, "preñado"). Después de este período de preñado, las ratas se retiraron y se dejaron secar en un recinto calentado antes de volver a sus jaulas. Las ratas entonces se administraron oralmente una dosis de 250 mg/kg de peso corporal o de 500 mg/kg de peso corporal de HMB.

Veinticuatro horas más tarde, se sometieron las ratas a la natación de prueba, en la cual se colocaron las ratas de nuevo en el cilindro durante 5 minutos y se evaluaron la duración total de los comportamientos de inmovilidad y de escape. Se grabaron las nataciones de prueba y determinaron posteriormente para el estado latente e inmovilidad, que es el punto en el cual ningún movimiento se observó y la rata estaba en la posición de "muerto" (es decir, cabeza arriba, cola abajo, patas delanteras ligeramente encorvadas, y patas posteriores señaladas hacia abajo). Las ratas se administraron oralmente sus dosis respectivas de 250 mg/kg de peso corporal o de 500 mg/kg de peso corporal de HMB cuatro horas y una hora antes de la natación de prueba.

Como se muestra en la FIG. 7, dosis más altas de HMB mejoraron el estado latente a inmovilidad (P = 0.07). Estos datos indican que la administración de HMB tiene efectos similares a antidepresivos.

Claims (15)

REIVINDICACIONES

1. Un método para mejorar la cognición en un adulto mayor, el método comprende administrar al adulto mayor una composición que comprende una cantidad de metilbutirato beta-hidroxi-beta efectiva para mejorar la cognición en el adulto mayor.

2. El método de la reivindicación 1, donde el adulto mayor es administrado diariamente con beta- idroxi-beta-metilbutirato.

3. El método de la reivindicación 2, donde el adulto mayor es administrado con aproximadamente 0.1 g/día a aproximadamente 10 g/día de beta-hidroxi-beta-metilbutirato.

4. El método de la reivindicación 2, donde el adulto mayor es administrado con aproximadamente 0.1 g/día a aproximadamente 5.0 g/día de beta-hidroxi-beta-metilbutirato.

5. El método de la reivindicación 1, donde la composición está en una forma seleccionada del grupo que consiste en un polvo nutricional, una emulsión nutriciona!, y un líquido transparente.

6. El método de la reivindicación 1, donde el adulto mayor está sufriendo de deterioro cognoscitivo.

7. El método de la reivindicación 1, donde el adulto mayor está sufriendo de disfunción neuronal.

8. El método de la reivindicación 1, donde el beta-hidroxi- beta-metilbutirato se administra por un período de por lo menos un año.

9. Un método para tratar una enfermedad cognoscitiva asociada con una enfermedad neurodegenerativa en un adulto mayor, el método comprende administrar al adulto mayor una composición que comprende una cantidad de beta-hidroxi-beta-metilbutirato efectiva para tratar la enfermedad cognoscitiva en el adulto mayor.

10. El método de la reivindicación 9, donde la enfermedad neurodegenerativa se selecciona del grupo que consiste en enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Huntington, y enfermedad de Parkinson, demencia, esclerosis lateral amiotrófica, accidente cerebrovascular, e esquizofrenia.

11. El método de la reivindicación 9, donde el adulto mayor es administrado diariamente con beta-hidroxi-beta-metilbutirato.

12. El método de la reivindicación 11, donde el adulto mayor es administrado con aproximadamente 0.1 g/día a aproximadamente 10 g/día de beta-hidroxi-beta-metilbutirato.

13. El método de la reivindicación 11, donde el adulto mayor es administrado con aproximadamente 0.1 g/día a aproximadamente 5.0 g/día de beta-hidroxi-beta-metilbutirato.

14. El método de la reivindicación 9, donde la composición está en una forma seleccionada del grupo que consiste en un polvo nutricional, una emulsión nutricional, y un líquido transparente.

15. Un método para mejorar la función cognoscitiva en un infante, niño, o adolescente, el método comprende administrar al infante, niño o adolescente una composición que comprende una cantidad de beta-hidroxi-beta-metilbutirato efectiva para mejorar la función cognoscitiva del infante, del niño, o del adolescente.