MX2013003875A

MX2013003875A - Forma de dosis de disolucion rapida de vacuna oral que usa almidon.

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Publication number: MX2013003875A
Application number: MX2013003875A
Authority: MX
Inventors: Wei Tian; Rosie Mclaughlin
Original assignee: Rp Scherer Technologies Llc
Priority date: 2010-10-08
Filing date: 2011-10-11
Publication date: 2013-06-24
Also published as: PT3095441T; CA2813146A1; RU2017137357A; WO2012048333A1; US9956169B2; CA2813146C; ES2602506T3; BR112013009255B1; PL3095441T3; RU2017137357A3; ES2842290T3; MX347101B; AU2011312107B2; RU2013119946A; AU2011312107A1; JP6061859B2; CN108434089A; CN103347494A; JP2013539766A; DK2624815T3

Abstract

Se describe una forma de dosis de disolución rápida (FDDF) para la distribución de una vacuna se prepara usando una formulación que contiene un almidón, opcionalmente, junto con al menos un agente formador de matriz, adicional, de manera preferente, una combinación de gelatina y mannitol, en donde se induce una respuesta inmunitaria en un paciente en necesidad de la misma.

Description

FORMA DE DOSIS DE DISOLUCION RAPIDA DE VACUNA ORAL QUE USA ALMIDON Campo de la Invención La invención se refiere a una forma de dosis de disolución rápida (FDDF, por sus siglas en inglés) que comprende un almidón como un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria, para la distribución de una vacuna. De manera más específica, la invención se refiere a una FDDF que contiene un almidón, y opcionalmente , manitol y gelatina como agentes formadores de matriz, adicionales, para la distribución de una vacuna oral para estimular la inmunidad a infección provocada por bacterias, virus tal como influenza, otros microorganismos o parásitos tal como protozoarios o lombrices.

Antecedentes de la Invención Se conocen una gran variedad de formas de dosis para ingestión oral y están fácilmente disponibles en el campo médico. La más común de estas es la tableta. Las limitaciones principales de las tabletas farmacéuticas incluyen pobre acatamiento del paciente debido a la dificultad en la deglución y carencia de biodisponibilidad del producto activo a través de disolución ineficaz de la tableta.

Las formas de dosis de disolución rápida (FDDF) son convenientes de usar y frecuentemente se usan para afrontar REF.240342 cuestiones de acatamiento del paciente. Hay muchas formas de FDDF, por ejemplo, tabletas comprimidas "de forma suelta" que comprenden una gran cantidad de agentes de absorción/desintegración, tabletas que comprenden una gran cantidad de agentes efervescentes, y tabletas liofilizadas . Más comúnmente, las formas de dosis de disolución rápida, liofilizadas, que se diseñan para liberar el ingrediente activo en la cavidad oral, se formulan usando matrices a base de gelatina rápidamente soluble. Estas formas de dosis son bien conocidas y se pueden usar para distribuir una amplia variedad de fármacos. La mayoría de las formas de dosis de disolución rápida utilizan gelatina y manitol como portadores o agentes formadores de matriz. (Seagar, H., "Drug-Delivery Products y Zydis Fast Dissolving Dosage Form" , J". Pharm. Pharmaco, vol . 50, p. 375-382 (1998) ) .

Frecuentemente se prefieren las FDDF elaboradas por el proceso de secado por congelación tal como la forma' de dosis Zydis"1*. Tienen las ventajas distintas de un más rápido tiempo de desintegración (es decir, menos de 5 segundos, como lo opuesto a 1 minuto para las tabletas comprimidas de forma suelta) , más suave sensación en la boca (es decir, libre de la sensación de arenilla asociada con los agentes de alta absorción en las tabletas comprimidas, potencial para absorción pre-gástrica mejorada (de este modo efectos secundarios reducidos y eficiencia mejorada para ciertos medicamentos) , y opciones incrementadas de almacenamiento.

Típicamente, se usa gelatina para dar suficiente resistencia a la forma de dosis para impedir la ruptura durante la remoción del envase, pero una vez puesta en la boca, la gelatina permite la dispersión inmediata de la forma de dosis. La gelatina hidrolizada de mamífero frecuentemente es el agente formador de matriz de elección en las FDDF debido a que rápidamente se forma en gel en el enfriamiento. También se puede usar gelatina de pescado que no se forma en gel. Durante el procesamiento, la solución/suspensión dosificada preferentemente se congela al hacerla pasar a través de un medio gaseoso. De este modo, la solución/suspensión se congela rápidamente lo que mejora la eficiencia de manufactura.

Las vacunas, que son importantes en la profilaxis contra la enfermedad, ejercen sus efectos al provocar una respuesta inmunitaria, el efecto de la cual es prevenir infección por el organismo estimulador, o el comienzo de los procesos de enfermedad que de otro modo se presentarían cuando el antígeno contra el cual se ha provocado la respuesta inmunitaria nuevamente estimula un tejido sensible. También se pueden usar vacunas de forma terapéutica para modificar la naturaleza o el nivel de la respuesta inmunitaria un antígeno para permitir que un hospedador elimine un patógeno al cual se ha expuesto ya.

La mayoría de las vacunas existentes se distribuyen por inyección, que es traumático, inconveniente, costoso y puede fallar en inducir una respuesta inmunogénica apropiada en los tejidos mucosos. La mayoría de las infecciones afectan, o empiezan, en las superficies mucosas. La inmunización activa contra estos agentes infecciosos puede depender de la inducción exitosa de una respuesta inmunitaria mucosa. Las vacunas mucosas exitosas pueden tanto proteger las superficies secretorias, es decir, inmunidad mucosa, y también inducir inmunidad sistémica por inducción de anticuerpos de circulación. Las vacunas mucosas también son más fáciles de administrar a pacientes y son menos costosas de elaborar que las vacunas convencionales. La distribución por inyección, por supuesto, no selecciona directamente como objetivo las superficies mucosas ni da las ventajas asociadas con las vacunas orales.

La inducción de inmunidad mucosa se evidencia por la aparición de inmunoglobulinas (Ig) , de las cuales los anticuerpos tipo IgA en el moco que está sobre la mucosa son particularmente significativos. La IgA ejerce múltiples efectos dentro de la mucosa. De forma más notable, actúa para neutralizar patógenos y componentes de patógenos, impidiéndoles que tengan acceso y que penetren a las capas epiteliales subyacentes, que es lo que provoca una infección. Se conoce que la estimulación de inmunidad en un sitio mucoso confiere protección a membranas mucosas en otros sitios en el cuerpo. Potencialmente , se pueden usar vacunas orales para inducir inmunidad contra patógenos orales, gastrointestinales, respiratorios, urogenitales y oculares. Esta capacidad para generar inmunidad en sitios en el cuerpo lejos del punto de estimulación antigénica original a conducir al concepto de un sistema inmunitario, mucoso, común. Hay indicaciones adicionales que la estimulación del sistema inmunitario mucoso puede inducir anticuerpos protectores de circulación en el sistema inmunitario sistémico, particularmente anticuerpos tipo IgG. Las vacunas mucosas óptimas también deben inducir respuestas de linfocitos T, tal como la producción de células T auxiliares que pueden soportar la producción de anticuerpos, y para patógenos particulares, células Thl7, Thl, Th2 y linfocitos T citotóxicos (CTL, por sus siglas en inglés) que actúan de forma local y/o sistémicamente .

Las vacunas distribuidas oralmente pueden estimular el tejido linfoide asociado nasalmente en la boca y la región nasofaríngea, los nodulos linfáticos, amígdalas y adenoides, y el tejido linfoide asociado al intestino en los parches de Peyer en el intestino delgado.

Las vacunas incorporan antígenos que pueden ser péptidos, proteínas, polisacáridos o fragmentos enteros o parciales o extractos de bacterias, virus u otros microorganismos, frecuentemente atenuados para remover componentes tóxicos. A fin de que las vacunas produzcan el efecto protector deseado, la exposición al antígeno debe ser suficiente para provocar una respuesta inmunitaria en el receptor. Un problema principal en los procedimientos de vacunación es asegurar que estos antígenos o compuestos antigénicos alcancen el sitio apropiado en cantidades suficientes para provocar la respuesta inmunitaria necesaria. Los dos aspectos del sistema inmunitario que pueden proporcionar la respuesta inmunitaria necesaria cuando se estimulan por un antígeno en un sistema de vacuna: el sistema inmunitario sistémico y el sistema inmunitario mucoso .

El sistema inmunitario mucoso consiste de áreas de tejidos linfoides inductores y efectores localizados en el tracto gastrointestinal, el tracto respiratorio, el tracto genitourinario y las membranas que circundan los órganos sensoriales. Los sitios inductores tienen usualmente una estructura linfoide organizada y la capacidad para detectar la presencia de antígenos en la mucosa. Las células que presentan el antígeno en áreas localizadas de tejido linfoide tienen la capacidad para extraer el antígeno absorbido y estimular respuestas de células T y B que dan por resultado la producción de células de plasma. Estas células de plasma pueden residir localmente o en sitos efectores a todo lo largo del cuerpo que segrega anticuerpos tal como IgA. Las moléculas de IgA segregadas resisten la proteólisis e impiden la colonización y la entrada de patógenos al neutralizarlos o aglutinarlos. En otras situaciones, las moléculas de IgA activan la citotoxicidad mediada por células T dependiente de anticuerpos, en casos donde un patógeno ha penetrado la barrera inicial. La estimulación de tejido mucoso puede también por resultado la producción de otros isotipos de anticuerpo, tal como IgG, Ig , e IgE. Estos otros isotipos de anticuerpo pueden ejercer efectos localmente en la mucosa, o tener efectos sistémicos, proporcionan de este modo protección adicional si los patógenos se manejan para penetrar la mucosa. Las respuestas de células T inducidas en la mucosa también pueden estar presentes en sitios mucosos o de manera sistémica, lo que mejora la protección de las superficies mucosas y la protección contra patógenos que penetran la mucosa.

La función principal de las células que forman el tejido linfoide es prevenir la absorción de patógenos y toxinas o inactivar estos patógenos y toxinas en la absorción al tejido mucoso. En general, se requieren dosis considerablemente mayores de antígenos para inmunización mucosa, especialmente cuando se propone por la ruta oral. Esto es debido a la existencia de barreras mecánicas y químicas efectivas y a la degradación y digestión de antígenos por enzimas y ácidos. Adicionalmente, hay una rápida depuración de material de los tractos respiratorio y digestivo superiores hacia el estómago por procesos mucosiliares , peristálticos y secretorios.

La mucosa ha evolucionado para impedir la inducción de respuestas inmunitarias efectoras contra antígenos inofensivos tal como alimentos y partículas inhaladas. En consecuencia, muchos antígenos que se introducen a las superficies mucosas inducen "tolerancia" en lugar de producir respuestas de células T y B. Por lo tanto hay la necesidad de superar estos procesos naturales a fin de producir vacunas efectivas .

Se ha encontrado dificultad en preparar formas de dosis sólidas orales para distribuir vacunas a través de la ruta mucosa en tanto que al mismo tiempo se conserve la facilidad de administración y comodidad del paciente. Ciertos pacientes que tienen deglución difícil son típicamente candidatos pobres para vacunas orales sólidas con residencia física incrementada en la cavidad oral de la forma de dosis .

Las vacunas orales, comercialmente disponibles, son ya sea vacunas vivas atenuadas (por ejemplo, polio, tifoidea, rotavirus) o vacunas inactivadas (por ejemplo, cólera) y son efectivas en producir una respuesta inraunitaria, mucosa, apropiada puesto que su sitio natural de infección es la mucosa intestinal y la unidad de vacuna activa los mecanismos de defensa inmunitaria natural del cuerpo. Sin embargo, aún no se han establecidos vacunas orales efectivas y seguras de vacunas de sub-unidades (que contienen fragmentos antigénicos de microbios) , vacunas de toxoides o vacunas de conjugados. La distribución oral de estas estrategias de vacuna a base de péptidos está significativamente impedida debido a su degradación en la exposición al ambiente ácido del estómago y enzimas proteolíticas que residen en el tracto gastrointestinal (GIT, por sus siglas en inglés) . También, el antígeno en general es demasiado grande para difundirse a través de la mucosa del GIT en la circulación sistémica y falla en experimentar transporte activo en la circulación sistémica. Por lo tanto, frecuentemente hay antígeno insuficiente que permanece para producir ya sea una respuesta inmunitaria sistémica o mucosa. Además, un pre-requisito de una respuesta mucosa dentro del GIT es la absorción de los antígenos por las células que presentan el antígeno (APC, por sus siglas en inglés) . La absorción de antígenos solubles por las APC es mucho menos eficiente que aquella de micropartículas de antígeno. Por lo tanto, los antígenos solubles frecuentemente fallan en lograr una respuesta inmunitaria adecuada, que puede conducir, en realidad, a tolerancia al antígeno.

Se han empleado varias estrategias para proteger los antígenos del ambiente duro del GIT y para facilitar una respuesta mucosa. Estas incluyen envolver el antígeno en liposomas, complejos inmunoestimuladores (ISCOM, por sus siglas en inglés), proteosomas y micropartículas . Sin embargo, estas estrategias aún pueden requerir que se distribuyan dosis muy altas de antígeno, junto con la coadministración de adyuvantes mucosos a fin de producir un anticuerpo humoral efectivo y respuesta mediada por células. Aún adicionalmente, muchos de los adyuvantes bajo estudio, tal como toxina de cólera, son altamente tóxicos en humanos. Estos problemas existen a pesar de la fuente del antígeno (bacteriana, viral, parásita, etc.).

Por consiguiente, existe la necesidad en el campo farmacéutico de formas mejoradas de dosis de vacuna, oral que distribuyan de manera efectiva cantidades inmunogénicas de preparaciones antigénicas y resistan las barreras químicas y mecánicas a la absorción antigénica. Adicionalmente existe la necesidad de formas sólidas de dosis oral que puedan inducir la respuesta inmunitaria tan efectivamente como la vacuna inyectable en tanto que sean fáciles de elaborar y fáciles y confortables de administrar.

La Publicación de Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. 2008-0014260 describe una forma de dosis de dispersión rápida, sólida, oral para la distribución de vacunas. Sin embargo, la Publicación describe una FDDF comprendida de manitol y de gelatina como los agentes formadoras de matriz. La Patente de los Estados Unidos No. 6,509,040 enseña una composición farmacéutica para administración oral en la forma de una forma de dosis de dispersión rápida esencialmente libre de gelatina de mamífero y que comprende al menos un agente formador de matriz y un almidón. Ninguna de estas referencias enseña o sugiere los beneficios logrados por la presente invención, específicamente, el efecto inmunopotenciador del almidón.

La presente invención es una nueva formulación de FDDF que usa un almidón como un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria, junto con agentes formadores de matriz, adicionales, opcionales tal como manitol y gelatina, para estimular la inmunidad a infección provocada por bacterias, virus, u otros organismos y para lograr mejor respuesta inmunitaria que las formulaciones de FDDF conocidas en la técnica. El efecto inmunopotenciador del almidón, descrito en la presente invención, no se describió anteriormente ni se sugirió en la técnica. También, el efecto inmunopotenciador se puede mejorar adicionalmente por ciertos agentes o componentes formadores de matriz, adicionales, que tampoco no se describió ni se sugirió anteriormente en la técnica. Hay una mejora significativa' en el estado de la técnica.

Breve Descripción de la Invención La presente invención se refiere a una forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida que comprende: (a) una cantidad inmunogénica de una preparación antigénica; y (b) al menos un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria, en donde ¿1 por lo menos un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria es un almidón. En una modalidad preferida de la invención, la preparación antigénica comprende un virus inactivado de influenza.

En ciertas modalidades preferidas, el almidón está presente en la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida en una cantidad de aproximadamente 2 % a aproximadamente 90 % en peso y/o se selecciona del grupo que consiste de almidón nativo, almidón modificado y combinaciones de estos. En una modalidad preferida de la invención, la forma de dosis se desintegra en un plazo de 60 segundos, de manera más preferente en un plazo de 30 segundos, de manera aún más preferente en un plazo de 10 segundos, y de manera mucho más preferente en un plazo de 5 segundos, después de que se coica en la cavidad oral.

Las formas de dosis de vacuna, sólidas, orales, de disolución rápida de la presente invención, se preparan de manera preferente por secado por congelación (liofilización) . Las formas de dosis, de vacuna, sólidas, orales, de disolución rápida pueden comprender agentes formadores de matriz, adicionales, tal como manitol y/o gelatina. En modalidades adicionales, las formas de dosis, de vacuna, sólidas, orales, de disolución rápida pueden comprender adicionalmente al menos un agente formador de matriz, adicional, seleccionado del grupo que consiste de gomas, preferentemente, goma de xantano, o un atente tensioactivo, de manera preferente Tween 80 o poloxámero. Las formas de dosis, de vacuna, sólidas, orales, de disolución rápida pueden comprender un adyuvante y/o un mucoad esivo.

En modalidades preferidas de la invención, una respuesta inmunitaria, por ejemplo, una respuesta de anticuerpos específicos de influenza, se induce cando la forma de dosis, de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida se administra a un paciente por colocación en la cavidad oral. De manera preferente, la colocación en la cavidad oral es colocación en o bajo la lengua o en la región bucal o faríngea.

La presente invención también se refiere a un método para inducir una respuesta inmunitaria, por ejemplo, una respuesta de anticuerpos específicos de influenza, en un paciente, el método que comprende el paso de: colocar la forma de dosis, de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida que comprende: (a) una cantidad inmunogénica de una preparación antigénica; y (b) al menos un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria, en donde el por lo menos un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria es un almidón, en la cavidad oral de una persona en necesidad de la respuesta inmunitaria. De manera preferente, la colocación en la cavidad oral es la colocación en o bajo la lengua o en la región bucal o faríngea.

Breve Descripción de las Figuras La Figura 1 muestra los títulos de punto terminal, medios por grupo (EPT, por sus siglas en inglés) +/- SEM (n=8 por grupo) a los 14, 28 y 59 días para una forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de la presente invención en comparación con formulaciones de los ejemplos comparativos y en comparación con ratones no tratados .

La Figura 2 muestra los resultados del análisis de la intensidad de Fluorescencia Media (MFI, por sus siglas en inglés) de clase II del complejo de histocompatibilidad principal (MHC, por sus siglas en inglés) de un estudio in vitro usando macrofagos esplénicos murinos en cultivo.

La Figura 3 muestra los resultado del análisis de CD25 MFI de un estudio in vitro usando macrofagos esplénicos murinos en cultivo.

La Figura 4 muestra los resultados del análisis de CD86 MFI de un estudio in vitro usando macrofagos esplénicos murinos en cultivo.

La Figura 5 muestra los resultados de un análisis de perfil de citocinas en un estudio in vitro usando macrofagos esplénicos murinos en cultivo.

La Figura 6 muestra el cambio en el peso corporal después de la inmunización e infección de ratones en la prueba in vivo.

La Figura 7 muestra puntuaciones químicas de enfermedad después de la inmunización e infección de ratones en la prueba in vivo.

La Figura 8 muestra la proporción de supervivencia después de 7 días de ratones infectados e inmunizados en la prueba in-vivo.

Las Figuras 9 hasta 11 muestran las respuestas de anticuerpo tipo IgG, IgGl, e IgG2a a las formulaciones del Ejemplo 2.

La Figura 12 muestra las respuestas de anticuerpos mucosos a través del análisis de lavados nasales.

Descripción Detallada de la Invención La presente invención soluciona problemas n la técnica al desarrollar una FDDF que distribuye una vacuna oral para provocar una respuesta inmunogénica mejorada para protección contra infecciones provocadas por bacterias, virus u otros microorganismos . Los inventores descubrieron que una FDDF de la presente invención, que emplea un almidón como un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria, opcionalmente, junto con al menos un agente formador de matriz, adicional, para distribución de vacunas, estimula mejor la inmunidad a infecciones en el cuerpo humano. La invención proporciona los resultados sorprendentes logrados en la respuesta inmunitaria cuando se usa una formulación que contiene un almidón para producir una FDDF, en donde el almidón potencia una respuesta inmunitaria que proporciona tanto una respuesta mediada por células como de anticuerpos, humoral, sistémica. Por lo tanto, puede ser efectiva contra una variedad de antígenos.

Un aspecto novedoso y sorprendente de la presente invención es que las formulaciones a base de almidón circunscriben obstáculos a la distribución oral de los antígenos de vacuna como se describe anteriormente. La capacidad para superar los procesos naturales que actúan como una barrera a la generación de una respuesta inmunitaria efectiva después de la distribución de la vacuna oral resulta de los atributos únicos de las formulaciones descritas en la presente. Las formulaciones de disolución rápida basada en almidón que son de una naturaleza de micropartículas facilita la absorción del antígeno dentro de la cavidad oral (de manera preferente mediante administración sublingual o bucal) , evitando de este modo los mecanismos de degradación del GIT. Este mecanismo de absorción comprende tanto una respuesta mucosai como de anticuerpos, humoral sin la necesidad de potentes adyuvantes.

El perfil de respuesta inmunitaria logrado muestra que la invención es aplicable a . cualquier vacuna de sub-unidades, vacunas de toxoides y conjugados de proteína, volviéndolas efectivas contra todos los agentes infecciosos, es decir, preparaciones de antígeno de virus, derivación bacteriana (fragmentos enteros o parciales o extractos de células bacterianas o partículas virales) , o parásita, tal como un protozoario o lombriz, que provoca enfermedad, o combinaciones de esto.

La primera modalidad se refiere a una forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida que comprende: (a) una cantidad inmunogénica de una preparación antigénica; y (b) al menos un agente formador dé matriz, potenciador de respuesta inmunitaria, en donde el por lo menos un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria es un almidón.

En la presente, las frases "de disolución rápida" , "de dispersión rápida" y "de desintegración rápida" se pueden usar de manera indistinta. Para propósitos de la presente invención, "disolución rápida" se refiere a la capacidad de la forma de dosis sólida inventiva para desintegrarse de manera preferente en un plazo de 60 segundos (un minuto) de la colocación en la cavidad oral y/o del contacto con saliva. En modalidades más preferidas, la forma de dosis se desintegra en un plazo de 30 segundos, en modalidades preferidas adicionales, en un plazo de 10 segundos, y en la mayoría de las modalidades preferidas, en un plazo de 5 segundos. Como se usa en la presente, "oral" y "forma de dosis oral" se refieren a una formulación farmacéutica que se administra por colocación en la cavidad oral de un humano o animal. "Cavidad oral", como se usa en la presente, se refiere a todos los espacios dentro de la boca y garganta de un humano o animal, incluyendo sobre o bajo la lengua (sublingual) o en la región bucal o faríngea.

Una "preparación antigénica" como se usa en la presente es una formulación que incorpora antígenos solubles o en partículas, que pueden ser péptidos, proteínas, polisacáridos , fragmentos enteros o parciales o extractos de células bacterianas o partículas virales, o se pueden derivar de un parásito, tal como un protozoario o lombriz, que provoca enfermedad o combinaciones de esto. Cualquier antígeno conocido en la técnica es adecuado para el uso en la presente invención, incluyendo aquellos comercialmente disponibles, o producidos por purificación de preparaciones de un patógeno, expresados recombinantemente en vectores inocuos, o producidos de manera sintética por aplicación normal. Los métodos para generar antígenos adecuados y preparaciones adecuadas de antígeno para la incorporación en una FDDF se conocen en la técnica, y en la presente invención se puede usar cualquiera de los métodos conocidos .

La preparación antigénica se incluye en la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de la presente invención en una cantidad, que es suficiente para volverla inmunogénica cuando se proporciona en la forma de la FDDF. La "cantidad inmunogénica" se define como la cantidad apropiada para provocar una respuesta inmunitaria deseada. Para influenza, la cantidad inmunogénica de la preparación antigénica es de manera preferente cerca de 1 g a aproximadamente 1 mg. Un experto en la técnica puede determinar fácilmente la cantidad inmunogénica para una enfermedad dada o infección dada en base a, entre otros factores, la edad y peso del paciente a quien se administrará la FDDF.

La forma de dosis de vacuna, oral, sólida, de disolución rápida de la presente invención se puede usar para distribuir vacunas que impide o reduce los síntomas (es decir, estimula la inmunidad al inducir la creación de anticuerpos y linfocitos T) de una amplia variedad de enfermedades. Para este fin, la preparación antigénica de la presente invención puede contener antígenos útiles en la provisión de protección contra la siguiente lista representativa de enfermedades, que no es exhaustiva: influenza, tuberculosis, meningitis, hepatitis, tos convulsiva, polio, tétanos, difteria, malaria, cólera, herpes, tifoidea, VIH, SIDA, sarampión, enfermedad de Lyme, diarrea del viajero, hepatitis A, B y C, otitis media, fiebre de dengue, rabia, parainfluenza, rubéola, fiebre amarilla, disenteria, enfermedades de los legionarios, toxoplasmosis , fiebre Q, fiebre hemorrágica, fiebre hemorrágica Argentina, caries, enfermedad de chagas, infección de tracto urinario provocada por E. coli, enfermedad pneumocóccica, paperas, chikungunya, y combinaciones de estas. Además, la preparación antigénica de la presente invención puede contener antígenos útiles en proporcionar protección contra la enfermedad provocada por la siguiente lista no exhaustiva de organismos causantes: especies de Vibrio, especies de Salmonella, especies de Bordetella, Especies de Haemophilus, Toxoplasmosis gondii, Cytomegalovirus , especies de Chlamydia, especies Estreptococxcas, Virus de Norwalk, Escherischia coli, Helicobacter pylori, Rotavirus, Neisseria gonorrhae, Neisseria meningiditis , Adenovirus, virus de Epstein Barr, virus de Encefalitis Japonesa, Pneumocystis carini', Herpes simplex, especies de Clostridia, Virus Sincitial Respiratorio, especies de Klebsiella, especies de Shigella, Pseudoitionas aeruginosa, Parvovirus, especies de Camylobacter, especies de Rickettsia, Varicela zoster, especies de Yersinia, Virus de Río Ross, Virus > de. J.C., Rhodococcus equi, Moraxella catarrhalis, Borrelia burgdorferi, Pasteurella haemolytica, y combinaciones de estos.

También se contemplan aplicaciones veterinarias de la presente invención. Por consiguiente, la preparación antigénica de la presente invención puede contener antígenos útiles en proporcionar protección contra la siguiente lista representativa de enfermedades veterinarias: cocidiosis, enfermedad de Newcastle, pneumonía enzootica, leucemia felina, rinitis atrófica, erisipelas, enfermedad de pies y boca, pneumonía de cerdos, y otras condiciones de enfermedad y otras infecciones que afectan a los animales de compañía y granja y combinaciones de estas.

La forma de dosis de vacuna, sólida, 1 oral de disolución rápida de la primera modalidad de la invención comprende al menos un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria, en donde el por lo menos un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria es un almidón. Como se usa en la presente, almidón no solo se refiere a almidones nativos sino también a una amplia variedad de productos relacionados a almidón, y de manera más general, a cualquier material que proporcioné la misma funcionalidad como el almidón en la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, y de disolución rápida de la presente invención. De manera preferente, el almidón se selecciona de almidón nativo, almidón modificado y combinaciones de estos. De manera preferente, el almidón modificado se selécciona de un grupo que consiste de almidón pre-gelatinizado, almidón sustituido, almidón reticulado almidón degradado y combinaciones de estos. Los almidones nativos de ejemplo incluyen sin limitación, almidón de patata, trigo, maíz (mazorca) , cassava (tapioca) , cebada, arrurruz, arroz, sagú, sorgo, avena, mijo y combinaciones de estos. Los almidones modificados de ejemplo incluyen además, sin limitación, almidones preparados de almidones nativos pero tratados de manera física, enzimática, de forma química o de otro modo tal como hidroxialquil-almidones (po ejemplo, hidroxipropil-almidón) , carboxialquil-almidones (por ejemplo, carboximetil-almidón) , almidones catiónicos de amonio cuaternario (por ejemplo, almidón-betainato) , ésteres de almidón (por ejemplo, di-almidón- fosfato acilado, octenilsuccinato de sodio de almidón, di-almidón-adipato acetilado, almidón-nitrato, almidón-sulfato, monoalmidón-fosfato, di-almidón-fosfato, almidón-carbato, etc.). Los almidones degradados de ejemplo, preparados por tratamiento físico, térmico, químico, enzimático o de otro modo, incluyen sin limitación, dextrina, maltodextrina, pululano, glucosa, ciclodextrina y combinaciones de estos.

La cantidad de almidón en una solución o suspensión subsiguientemente congelada para formar la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida, varía de manera preferente de aproximadamente 1 % a aproximadamente 12 %, de manera más preferente de aproximadamente 2 % a aproximadamente 10 %, y de manera mucho más preferente de aproximadamente 2 % a aproximadamente 8 % en peso. La solución o suspensión de antígeno se puede distribuir en cualquier cantidad para que se congele y se seque por congelación para proporcionar la cantidad final en el producto seco. Por ejemplo, si se distribuyen 30 mg de una solución al 2 % y luego se secan, la tableta seca contendrá 0.6 mg de almidón en tanto que si se distribuye 1 g de la misma solución y luego se seca, la tableta seca contendrá 20 mg de almidón. Esto proporciona la flexibilidad necesaria para dosificar a diferentes poblaciones de pacientes. De manera preferente, la cantidad de almidón presente en la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida varía de aproximadamente 2 % a aproximadamente 90 , de manera más preferente de aproximadamente 5 % a aproximadamente 80 %, y de manera mucho más preferente de aproximadamente 7 % a aproximadamente 75 % en peso.

Sin que se limite a una teoría, se cree que debido a que el almidón está constituido de múltiples partículas de estructura granular, esto potencia el muestreo, o absorción, de los antígenos sobre la superficie granular y cuando el almidón se absorbe en el torrente sanguíneo, los antígenos se absorben con este. Por lo tanto, se cree que el almidón tiene una funcionalidad más allá de actuar como un agente formador de matriz en la presente invención, por ejemplo, actúa1 como un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria. Además de mejorar la distribución de antígenos al cuerpo humano, se cree que el almidón ayuda y mejora la absorción de proteínas y péptidos en el cuerpo humano en general .

Cómo se usa en la presente, "potenciador de respuesta inmunitaria" significa que el agente formador de matriz es responsable, al menos en parte, del tipo o grado de respuesta inmunitaria lograda por la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de la presente invención.

En una modalidad preferida, la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, en solución rápida comprende además al menos un agente formador de matriz, adicional. Se pueden incorporar uno o más agentes formadores de matriz, adicionales, en la solución o. suspensión antes de la congelación para formar la forma de dosis de vacuna, sólida oral, de disolución rápida durante la elaboración. Es adecuado cualquier agente convencional formador de matriz para el uso en la presente invención como un agente formador de matriz, adicional. Los agentes formadores de matriz, adicionales, adecuados incluyen, sin limitación, materiales derivados de proteínas animales o vegetales, tal como las gelatinas, dextrinas y soja, proteínas de trigo y semilla de psyllium; gomas; polisacáridos ; alginatos; carboximetilcelulosas ,· carrageenanos ; dextranos; pectinas; polímeros sintéticos tal como polivinilpirrolidona; polipéptido/proteína o complejos de polisacárido tal como complejos de gelatina-acacia; azúcares tal como mannitol, dextrosa, lactosa, galactosa y trehalosa; azúcares cíclicos tal como ciclodextrina; sales inorgánicas tal como fosfato de calcio, cloruro de sodio y silicatos de aluminio; y aminoácidos que tiene de 2 a 12 átomos de carbono tal como una glicina, L-alanina, ácido L-aspártico, ácido L- glutámico, L-hidroxiprolina, L-isoleucina, L-leucina y L- fenilalanina, o combinaciones de estos. La cantidad del por lo menos un agente formador de matriz, adicional, presente 'en la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida, puede variar de manera preferente de aproximadamente 10 % a aproximadamente 98 %, de manera más preferente de aproximadamente 20 % a aproximadamente 95 %, y de manera mucho más preferente de aproximadamente 25 % a aproximadamente 93 % en peso. La cantidad del por lo menos un agente formador de matriz, adicional presente en una solución o suspensión subsiguientemente congelada para formar la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida varía de manera preferente de aproximadamente 0.01 % a aproximadamente 45 %, de manera más preferente de aproximadamente 0.01 % a aproximadamente 33 %, y de manera mucho más preferente de aproximadamente 0.01 % a aproximadamente 21 % en peso.

Además de formar la matriz, el agente formador de matriz puede ayudar a mantener la dispersión de cualquier preparación antigénica con una solución o suspensión. Esto es especialmente útil en el caso de preparaciones antigénicas que no son suficientemente solubles en agua y por lo tanto se deben suspender en lugar de disolver.

En una modalidad preferida, el por lo menos un agente formador de matriz, adicional es mannitol. En aún otra modalidad preferida, el por lo menos un agente formador de matriz, adicional es gelatina. En aún otra modalidad preferida, el por lo menos un agente formador de matriz, adicional comprende mannitol y gelatina, en combinación con almidón como el por lo menos un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria.

Cuando está presente, la cantidad de manitol en la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida varía de manera preferente de aproximadamente 2 % a aproximadamente 90 %, de manera más preferente de aproximadamente 5 % a aproximadamente 80 %, y de manera mucho más preferente de aproximadamente 7 % a aproximadamente 65 % en peso. Cuando está presente, la cantidad de manitol en una solución o suspensión subsiguientemente congelada para formar la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida varía de manera preferente de aproximadamente 1 % a aproximadamente 15 %, de manera más preferente de aproximadamente 2 % a aproximadamente 10 %, y de manera mucho más preferente de aproximadamente 2 % a aproximadamente 5 % en peso. Cuando está presente, la cantidad de gelatina en la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida varía de manera preferente de aproximadamente 2 % a aproximadamente 85 %, de manera más preferente de aproximadamente 2.5 % a aproximadamente 65 %, y de manera mucho más preferente de aproximadamente 3 % a aproximadamente 55 % en pesó. Cuando está presente, la cantidad de gelatina en una solución o suspensión subsiguientemente congelada para formar la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida varía de manera preferente de aproximadamente 1 % a aproximadamente 10 %, de manera más preferenté de aproximadamente 1 % a aproximadamente 7 %, y de manera mucho m s preferente de aproximadamente 1 % a aproximadamente 4 % en peso.

En una modalidad preferida de la invención, en la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida, la gelatina está presente en una cantidad de aproximadamente 3 % a aproximadamente 55 %; el manitol está presente en una cantidad de aproximadamente 7 % a aproximadamente 65 % ; y un almidón está presente en una cantidad de aproximadamente 7 % a aproximadamente 75 % en peso. En una modalidad preferida de la invención, en una solución o suspensión subsiguientemente congelada para formar la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida, la gelatina está presente en una cantidad de aproximadamente l % a aproximadamente 4 %; el manitol está presente en una cantidad de aproximadamente 2 % a aproximadamente 5 %; y está presente un almidón en una cantidad de aproximadamente 2 % a aproximadamente 8 % en peso .

En otra modalidad preferida, el por lo menos un agente formador de matriz, adicional es una goma tal como, pero no limitada a, goma de acacia, de guar, de agar, de xantano, de gelian, de carragenina, de curdlan, de konjac, de algarroba, de welan, goma de tragacanto, goma arábiga, goma de karaya, goma ghatti, pectinas, dextrano, glucomanano, y alginatos, o combinaciones de estos. Cuando está presente, la goma en la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida varía de manera preferente en una cantidad de aproximadamente 0.01 % a aproximadamente 80 % en peso. Cuando está presente, la goma en una solución o suspensión subsiguientemente congelada para formar la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida varía de manera preferente en una cantidad que varía de aproximadamente 0.01 % a aproximadamente 10 % en peso. En una modalidad más preferida, el por lo menos un agente formador de matriz, adicional es goma de xantano. Cuando está presente, la goma de xantano en la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida varía de manera preferente en una cantidad de aproximadamente 0.01 % a aproximadamente 80 % en peso. Cuando está presente, la goma de xantano en una solución o suspensión subsiguientemente congelada para formar la forma de' dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida varía de manera preferente en una cantidad que varía de aproximadamente 0.01 % a aproximadamente 10 % en peso. Cuando se adiciona goma de xantano a la solución o suspensión, se puede incrementar la respuesta potenciadora inmunitaria con respecto a IL-6 y TNF-alfa con respecto a soluciones o suspensiones que no contienen goma de xantano.

En una modalidad preferida, el por lo menos un agente formador de matriz, adicional comprende manitol, gelatina y goma de xantano. En una modalidad adicional preferida de la invención, en la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida, la gelatina está presente en una cantidad de aproximadamente 3 % a aproximadamente 55 %; el manitol está presente en una cantidad de aproximadamente 7 % a aproximadamente 65 %; está presente un almidón en una cantidad de aproximadamente 7 % a aproximadamente 75 %; y está presente goma de xantano en una cantidad de aproximadamente 0.01 % a aproximadamente 80 % en peso. En una modalidad preferida de la invención, en una solución o suspensión subsiguientemente congelada para formar la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida, la gelatina está presente en una cantidad de aproximadamente l % a aproximadamente 4 ; el manitol está presente en una cantidad de aproximadamente 2 % a aproximadamente 5 %; un almidón está presente en una cantidad de aproximadamente 2 % a aproximadamente 8 % en peso; y la goma de xantano está presente en una cantidad de aproximadamente 0.01 % a aproximadamente 10 % en peso.

En otra modalidad de la presente invención, la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida comprende además un tensioactivo. Cualquier tensioactivo conocido en la técnica es adecuado para el uso en la presente invención, incluyendo tensioactivos no iónicos, aniónicos y catiónicos. Los ejemplos de agentes tensioactivos no iónicos que se pueden usar en la presente invención incluyen, pero se limitan a, polietilen-alquil-éteres, polioxietilen-alquil-éteres , ésteres de ácido graso de polioxietilen-sorbitán (por ejemplo, Tweens) , estearatos de polioxietileno, ésteres de ácido grado de sorbitán (por ejemplo, Spans) y copolímeros de polioxietileno-polioxipropileno (por ejemplo, poloxámeros) . Los ejemplos de agentes tensioactivos aniónicos que se pueden usar en la presente invención incluyen, pero no se limitan a, lauril-sulfato de sodio, docusato sódico, y monooelato de glicerol. Los ejemplos de agentes tensioactivos catiónicos que se pueden usar en la presente invención incluyen, pero no se limitan a, cloruro de benzalconio, cetrimida, y cloruro de cetilpiridinio. De manera preferente, el tensioactivo se selecciona del grupo que consiste de Tween 80, poloxámero, y combinaciones de estos. Cuando está presente, el tensioactivo en la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida varía de manera preferente en una cantidad de aproximadamente 0.01 a aproximadamente 80 % en peso. Cuando está présente, el tensioactivo en una solución o suspensión subsiguientemente congelada para formar la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida varía de manera preferente en una cantidad de aproximadamente 0.01 % a aproximadamente 10 % en peso. Cuando se adiciona un tensioactivo a la solución o suspensión, la respuesta potenciadora inmunitaria se puede incrementar con respecto a soluciones o suspensiones que no contienen un tensioactivo .

En una modalidad preferida de la presente invención, el por lo menos un agente formador de matriz, adicional comprende manitol y gelatina y la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida comprende adicionalmente un tensioactivo. En una modalidad adicional preferida de la invención, en la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida, la gelatina está presente en una cantidad de aproximadamente 3 % a aproximadamente 55 %; el manitol está presente en una cantidad de aproximadamente 7 % a aproximadamente 65 %,· un almidón está presente en una cantidad de aproximadamente 7 % a aproximadamente 75 %; y un tensioactivo está presente en una cantidad de aproximadamente 0.01 % a aproximadamente 80 %. En una modalidad preferida de la invención,' en una solución o suspensión subsiguientemente congelada para formar la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida, la gelatina está presente en una cantidad de aproximadamente 1 % a aproximadamente 4 %; el manitol está presente en una cantidad de aproximadamente 2 % a aproximadamente 5 %; un almidón está presente en una cantidad de aproximadamente 2 % a aproximadamente 8 % en peso, y un tensioactivo está presente en una cantidad de aproximadamente 0.01 % a aproximadamente 10 % en peso.

La forma de dosis de la invención comprende además opcionalmente un adyuvante, que es útil para reforzar una respuesta inmunitaria a vacunas inactivadas o muertas, dando por resultado producción mejorada de anticuerpos y memoria inmunológica mejorada. Para ser más efectiva, la respuesta inmunitaria se asocia con la generación de una respuesta de memoria que proporciona protección de larga duración de la enfermedad específica. Una vez expuesto, el sistema inmunitario "Recuerda" el antígeno y la respuesta inmunitaria iniciada para inactivar el antígeno. La efectividad de un adyuvante para mejorar una respuesta inmunitaria puede ser independiente del antígeno con el cual se esté combinando. Los adyuvantes adecuados incluyen, pero no se limitan a: fragmentos bacterianos no tóxicos, toxina de cólera (y formas destoxificadas y fracciones de la misma) , quitosan, toxina térmicamente lábil de E. coli (y formas destoxificadas y fracciones de la misma) , homo + y co-polímeros de lactido/glicólido (PLA/GA) , polianhídrido, por ejemplo, trimelitilimido-L-tirosina, DEAE-dextrano, saponinas en complejo con antígenos de proteína de membrana (complejos inmunoestimuladores-ISCOMS) , productos bacterianos tal como lipopolisacárido (LPS) y muramil-dipéptido, (MDP) , liposomas, cocleatos, proteinoides , citocinas (interleucinas , interferones) , vectores microbianos vivos genéticamente manejados, toxina mutantes de tosferina no infecciosa, neurimidasa/galactosa-oxidasa, y toxinas bacterianas y virales atenuadas derivadas de cepas mutantes, y combinaciones de estos. Una cantidad adecuada de un adyuvante se puede determinar fácilmente por un experto en la técnica.

La forma de dosis de la presente invención promueve la distribución de una vacuna a un sitio objetivo, y en ciertas modalidades, un sistema mucoadhesivo se puede diseñar para mantener la vacuna en contacto con los tejidos linfoides mucosos objetivo en la cavidad oral y para incrementar el tiempo de residencia del elemento de vacuna en estas superficies potenciales de absorción. Como un producto para ingestión oral, del cual se libera rápidamente la vacuna una vez que se toma el producto, de esta manera se pueden distribuir rápidamente altas concentraciones de la vacuna a los sitios objetivos deseados.

Algunas formas de dosis, sólidas, de disolución rápida son inherentemente mucoadhesivas . Sin embargo, se puede adicionar opcionalmente un mucoadhesivo a la forma de dosis de disolución rápida de la presente invención, los que puede incrementar la residencia del antígeno en contacto con el tejido mucoso en la cavidad oral. Los mucoadhesivos adecuados que se pueden usar en la presente invención incluyen, pero no se limitan a, aquellos descritos en la Solicitud de Patente Europea No. 92109080.9 e incluyen: polímeros poliacrílieos tal como carbómero y derivados de carbómero (por ejemplo, PolycarbophilMR, CarbopolMR, y similares) ; derivados de celulosa tal como hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) , hidroxietilcelulosa (HEC) , hidroxipropilcelulosa (HPC) y carboximetilcelulosa sódica (NaCPC) , y polímeros naturales tal como gelatina, alginato de sodio y pectina. Las fuentes comerciales adecuadas para polímeros mucoadhesivos (bioádhesivos) representativos incluyen, pero no se limitan a, copólímero acrílico CarbopolMR (disponible de BF Goodrich Chemical Co., Cleveland, Ohio) ; hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) (disponible de Dow Chemical, Midland, MI) ; HEC (Natrosol) (disponible de Hercules Inc., Wilmington, Del.); HPC (KlucelMR) (disponible de Dow Chemical Co., Midland, MI); MaCMC (disponible de Hercules, Inc., Wilmington, Del.); gelatina (disponible de Deamo Chemical Corp., , Elmford, N.Y.); alginato de sodio (disponible de Edward Mandell Co., Inc., Carmel, NY) ; pectina (disponible de BDH Chemicals Ltd. , Poole, Dorset, RU) ; PolycarbophilMR (disponible de BF Goodrich Chemical Co., Cleveland, Ohio). Una cantidad adecuada de un mucoadhesivo se puede determinar fácilmente por un experto en la técnica.

La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de la presente invención también puede comprender otros componentes opcionales tal como conservadores, antioxidantes, mejoradores de viscosidad, agentes colorantes, agentes saborizantes, modificadores de pH, edulcorantes, agentes para enmascarar el sabor y combinaciones de estos. Los agentes colorantes adecuados incluyen, sin limitación, óxidos de hierro rojo, negro y amarillo y tintes FD&C tal como azul FD&C No. 2 y rojo FD&C rojo No. 40 disponibles en Ellis & Everard. Los agentes saborizantes adecuados incluyen, sin limitación, menta, frambuesa, regaliz, naranja, limón, toronja, caramelo, vainilla, sabores de cereza y uva, y combinaciones de estos. Los modificadores de pH adecuados incluyen, sin limitación, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido fosfórico, ácido clorhídrico, ácido maleico, hidróxido de sodio, carbonato de sodio y amortiguador Tris. Los edulcorantes adecuados incluyen, sin limitación, aspartame, sacarosa, sucralosa, acesulfame K y táumatina. Los agentes para enmascarar el sabor adecuado, incluyen, sin limitación, bicarbonato de sodio, y compuestos de inclusión de ciclodextrina . Un experto en la técnica puede determinar fácilmente las cantidades adecuadas de estos ingredientes opcionales para la inclusión en la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de la presente invención.

En una cierta modalidad de la invención, la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución' rápida, puede incluir opcionalmente microesferas que pueden ser biodegradables . El material de microesfera puede funcionar por sí mismo como un adyuvante o se puede usar en unión con otros adyuvantes. La preparación antigénica se puede absorber o incorporar sobre o en microesferas , formando de este modo un complejo de microesfera-antigénico . De esta manera, la preparación antigénica está disponible para absorción en el tejido linfoide efectivamente tan pronto como el tejido hace contacto con el complejo de la preparación de microesfera-antígeno .

Los materiales adecuados de microesfera que se pueden usar con la invención incluyen materiales poliméricos biodegradables. Particularmente adecuados son materiales hidrófobos tal como polímeros de poli (ácido láctico) y poli ( láctido-co-glicido) y copolímeros de látex. Estos materiales poliméricos también confieren resistencia a digestión enzimática e hidrolítica hasta su absorción en tejido linfoide, donde el antígeno liberado puede ejercer su efecto inmunológico . Los materiales poliméricos preferidos son materiales hidrófobos que mejoran la absorción en los tejidos objetivo. En modalidades preferidas, la microesfera es alginato de sodio o poli ( láctido-co-glicido) (PLGA) .

Cuando la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de la primera modalidad se administra a la cavidad oral de un paciente (humano o animal) en necesidad de protección contra enfermedad, se induce una respuesta inmunitaria. Una respuesta inmunitaria incluye la producción de anticuerpos específicos al patógeno del cual se deriva el antígeno dentro de la forma de dosis, la generación de anticuerpos adecuados de células T y en algunos casos, la producción de linfocitos T citotóxicos (CTL) . La respuesta inmunitaria también puede incluir la generación de una respuesta de memoria que proporcione protección de larga duración de la enfermedad específica.

En la presente invención, la colocación de la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida es de manera preferente en o bajo la lengua (sublingual) o en la región bucal o faríngea.

Las formas de dosis, de vacuna, sólidas, orales, de disolución rápida de la presente invención se pueden tomar sin agua y dispersar en volúmenes muy pequeños de saliva. Esto incrementa el revestimiento de tejidos mucosos que contienen el tejido linfoide, asociado, tonsilar e incrementa el tiempo de residencia de los antigenos dentro de estos tejidos. Las formas de dosis, sólidas, orales, de disolución rápida se conocen por dispersarse rápidamente y revestir las superficies mucosas en la boca y faringe, donde están localizados los tejidos linfoides, asociados a la mucosa. A este respecto, se hace referencia a un artículo de Wilson et al., International Journal of Pharmaceutics , 40 (1997), páginas 119-123, el texto de lo cual se incorpora en la presente como referencia. Por consiguiente, las formas de dosis, sólidas, orales, de disolución rápida mejoraran la dirección al objetivo de las vacunas a tejidos linfoides susceptibles en la boca, particularmente bajo la lengua y la faringe. En consecuencia, la concentración de la vacuna que hace contacto con estos tejidos, por ejemplo te ido, tejido linfoide susceptible en las áreas bucofaríngeas y sublinguales, se incrementa cuando se distribuyen mediante la FDDF.

De acuerdo con esta invención se puede usar cualquier método conocido para elaborar las formas de dosis de disolución rápida. De manera preferente, las forma de dosis de vacuna, sólidas, orales, de disolución rápida de la presente invención se secan por congelación (liofilizan) . Un forma de dosis, de disolución rápida, preferida para el uso con la invención es aquella descrita en la Patente de R.U. No. 1,548,022, que se refiere a una forma de dosis oral, sólida, de disolución rápida, que comprende una red del ingrediente activo y un portador soluble en agua o dispersable en agua que es inerte al ingrediente activo, la red que se ha obtenido al sublimar el solvente de una composición que comprende el ingrediente activo y una solución del portador en un solvente. La Patente de R.U. No. 1,548,022 falla en describir el uso de un almidón en una FDDF secada por congelación, pero el método en la misma se puede adaptar fácilmente para elaborar las formas de dosis de vacuna, sólidas, orales, de disolución rápida de la presente invención.

La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida es típicamente una tableta redonda, blanca formulada para desintegrarse rápidamente en la boca. Sin embargo, el color puede variar dependiendo de los materiales usados en la misma o la adición de colorantes. El tamaño de tableta en general de aproximadamente 5 mm a aproximadamente 25 mm y se forma de acuerdo al tamaño y forma de la cavidad de blíster en la cual se colocará durante la elaboración y/o almacenamiento. La tableta comprende una red altamente porosa que ayuda a la desintegración típicamente en un, plazo de 60 segundos, de manera más preferente en un plazo de 30 segundos, de manera aún más preferente en un plazo de 10 segundos, y de manera mucho más preferente en un plazo de 5 segundos, después de que se coloca en la cavidad oral. La tableta es físicamente fuerte a fin de resistir el manejo y remoción del envase de blíster sin ruptura.

En una segunda modalidad, la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida comprende: (a) una cantidad inmunogénica de virus inactivado de influenza,-y (b) al menos un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria, en donde el por lo menos un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria es un almidón.

Cualquier cepa de virus de influenza es adecuada para el uso en la presente invención. En la elaboración de vacunas por influenza, las organizaciones internacionales, tal como la Organización Mundial de la Salud, mónitorizan las cepas que provocan enfermedad y proporcionan anualmente información específica de las cepas más importantes para las cuales se requiere vacunación. Debido a la mutación continua de los antígenos claves en la superficie del virus de influenza, se mónitorizan continuamente las nuevas cepas y se elaboran nuevas vacunas. Las muestras de las cepas identificadas de influenza se hacen disponibles a los fabricantes de vacuna quienes las usan para la preparación de vacunas . Los virus se preparan en general para él uso en una vacuna, es decir, una preparación antigénica, dé acuerdo a procedimientos normales conocidos. El virus inactivado de influenza se puede incluir en la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de la invención en una cantidad inmunogénica . Típicamente, la cantidad de virus que se va a adicionar se identifica de estudios de inmunogenicidad en animales donde los niveles de anticuerpos funcionales como se definen en ensayos, tal como el ensayo de inhibición de hemaglutinación (HAI, por sus siglas en inglés) , alcanza un nivel deseado como se está de acuerdo por los reguladores de vacunas.

Los detalles señalados anteriormente con respecto a la cantidad inmunogénica, almidón, agentes formadores de matriz, agentes tensioactivos, microesferas, adyuvante, mucoadhesivo, etcétera, son los mismos para la segunda modalidad de la invención como para la primera modalidad de la invención.

Cuando la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de la segunda modalidad se administra a la cavidad oral de un paciente (humano o animal) en necesidad de protección de influenza, se induce una respuesta de anticuerpos específicos de influenza. Esta respuesta de anticuerpos neutraliza la capacidad del virus para infectar células mamíferas, como se mide por la Prueba de HAI o de Neutralización de Virus (VNT, por sus siglas en inglés) , que valora la capacidad funcional de la respuesta de anticuerpos. Otros aspectos deseados de la respuesta inmunitaria anti-influenza incluyen la generación de respuestas de células B y T de memoria en la presencia de CTL, que es capaz de aniquilar células infectadas por el virus . La mayoría de las vacunas actualmente se evalúan sólo para su capacidad para estimular una respuesta de anticuerpos. Sin embargo, se puede lograr la capacidad para producir vacunas capaces de conferir inmunidad protectora a cepas cruzadas de influenza al mejorar la capacidad de las nuevas vacunas para generar CTL. La colocación de la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida es de manera preferente en o bajo la lengua (sublingual) o en la región bucal o faríngea.

La tercera modalidad de la presente invención se refiere a un método para inducir una respuesta inmunitaria en un paciente, el método que comprende el paso de: colocar la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de la primera modalidad de la invención en la cavidad oral de una persona en necesidad de la respuesta inmunitaria. De manera preferente, la colocación en la cavidad oral es la colocación en o bajo la lengua (sublingual) o en la región bucal o faríngea.

En modalidades preferidas de la invención, la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida se administra para inducir una respuesta inmunitaria mayor que un control negativo y mayor que la administración de una FDDF sin la inclusión de un almidón como un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria. "Control negativo" como se define en la presente es un animal usado en experimentos que está sin tratar con el virus inactivado y no está infectado por el virus.

La cuarta modalidad de la presente invención se refiere a un método para inducir una respuesta de IgG específica de influenza en un paciente, el método que comprende el paso de: colocar la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de la segunda modalidad de la invención en la cavidad oral de una persona en necesidad de la respuesta inmunitaria. De manera preferente, la colocación en la cavidad oral es la colocación en o bajo la lengua (sublingual) o en la región bucal o faríngea.

La presente invención no se limitada a ninguna vacuna específica, sino a solucionar los problemas de administración oral de vacunas. Los siguientes ejemplos ilustrarán la práctica de la presente invención en algunas de las modalidades preferidas. Otras modalidades dentro del alcance de las reivindicaciones serán evidentes para aquellos expertos en la técnica.

Ejemplo 1 Se preparó una FDDF de la clase conocida en la técnica como se describe en Seager, H., "Drug Delivery-Products y Zydis Fast Dissolving Dosage Form" , J. Pharm. Pharmacol, volumen 50, páginas 375-382 (1998), pero con gelatina, manitol y almidón. La nueva formulación de matriz se preparó al combinar 1.5 % (375 mg) de gelatina de cuero bovino encalado, 2.5 % (625 mg) de hidroxipropil-almidón, 3.0 % (750 mg) de manitol y 25 mi de agua y calentando la mezcla a 75 °C durante 15 minutos. La solución se cubrió durante el calentamiento para reducir al mínimo la evaporación. La solución se enfrió subsiguientemente a temperatura ambiente, por ejemplo, 20-25°C, en un baño de agua enfriada. Se adicionaron 5.5 µ? de solución concentrada de influenza (A/Panama/2007/99H3N2 ) a 24.5 µ? de la nueva formulación de matriz de modo que cada tableta contuvo l g de influenza. Después de la adición de la influenza concentrada, las concentraciones finales de los agentes formadores de matriz en la formulación fueron como sigue: 2.0 % de almidón (p/v) , 2.4 % de manitol (p/v) y 1.2 % de gelatina (p/v) . La formulación entonces se dosificó en cavidades tipo blister usando una bomba de dosificación Hamilton se i-automática que distribuye 30 mg por dosis. Las formulaciones dosificadas entonces se congelaron rápidamente al ser colocadas en una cámara de nitrógeno líquido durante 5 minutos. Las formulaciones congeladas se secaron por congelación subsiguientemente usando un secador por congelación Edwards, Modulyo 4K unido a una bomba Ed ards RV5. Primero, el secador por congelación se activó durante un período de 15 minutos para pre-enfriar el sistema a -45 °C. Las formulaciones congeladas entonces se transfirieron inmediatamente sobre el soporte dentro de una cámara del congelador por congelación. La tapa se colocó en la cámara, y se encendió la bomba de vacío para asegurar que se cerrará la válvula de drenaje. El secador por congelación se dejó correr durante una noche para secar por congelación completamente las muestras. Una vez secas, se apagaron la bomba de vacío y el condensador y la derivación de drenaje se abrió lentamente para permitir aire en el sistema. Los envases tipo blíster, rellenos, completamente congelados entonces se removieron y se colocaron en bolsitas plegadas y se sellarlo en una jarra de vidrio que contiene desecante y se almacenaron a 4°C hasta el uso.

Las tabletas liofilizadas se inspeccionaron visualmente, no se encontraron defectos mayores. Las tabletas estuvieron todas intactas y se miraron normales de las que se levantaron ligeramente. Las tabletas se desintegraron instantáneamente, en un plazo de diez segundos, una vez que se colocan en agua purificada a 37 °C.

Las tabletas resultantes se administraron sublingualmente a ratones, y las muestras sanguíneas se probaron subsiguientemente en los días 14, 28 y 59. Se realizaron ELISA de sub-clase para valorar los niveles de IgGl e IgG2a específicos de influenza en muestras de suero recolectadas de los animales tratados. Las muestras se diluyeron para dar una concentración superior de 1 en 40. Entonces se realizó una dilución en serie 2 eces de las muestras en solución salina amortiguada con fosfato con albúmina de suero bovino (PBS/BSA) (1 %) a través la placa de 96 concavidades. Anticuerpos . de detección conjugados con peroxidasa de rábano (HRP) , conjugado de IgGl e IgG2a anti-ratón de cabra (Fe) :HRP (ambos de AbD Serotec) se diluyeron 1 en 1000 en PBS/BSA. El suero de los animales que estuvieron sin tratar y sin infectar se incluyó como un control negativo. Los resultados se muestran en la Figura 1 posterior como "Zydis + flu s.l (nueva matriz)".

Ejemplo Comparativo 1 Se preparó una FDDF de acuerdo a la preparación conocida en general de una tableta ZydisR. La tableta ZydisR se preparó al combinar 200 mg de gelatina con 3.3 mi de agua y calentando la mezcla a 60 °C durante 30 minutos. La solución se cubrió durante el calentamiento para reducir al mínimo la evaporación. La solución se enfrió subsiguientemente a aproximadamente 25 °C en un baño de agua enfriada. Después de esto, en tanto que se agita se adicionaron 150 mg de manitol. Se adicionó una solución concentrada de antígeno de influenza A/Panama/2007/99H3N2 para llevar el volumen a 5 mi de modo que cada tableta contuvo l g de influenza. La concentración final de los agentes formadores de matriz después de la adición de la influenza fue 4 % de gelatina (p/v) y 3 % de manitol (p/v) . La formulación se procesó bajo las mismas condiciones como en el Ejemplo 1, es decir, disolución, enfriamiento, congelación, secado por congelación. Las tabletas liofilizadas se inspeccionaron de la misma manera como en el Ejemplo 1. Las tabletas liofilizadas se inspeccionaron para defectos en superficie; no se encontraron defectos mayores y las tabletas estuvieron intactas. Una prueba de dispersión (al colocar una tableta 100 µ? de agua purificada a 37°C) se llevó a cabo en las tabletas ZydisMR y se disolvieron en menos de 10 segundos .

Ambos lotes se hicieron de acuerdo a este proceso. Las tabletas resultantes del primer lote se administraron sublingualmente a ratones, en tanto que 10 tabletas del segundo lote se disolvieron en 2 mi de agua calentada a 37°C y se administraron 200 µ? por animal de manera intragástrica (I.G.). Subsiguientemente se probaron las muestras sanguíneas ratones en cada grupo en los días 14, 28 y 59. Se realizaron ELISA de sub-clase para valorar los niveles de IgGl e IgG2a específicos de influenza en muestras de suero recolectadas de los animales tratados. Las muestras se diluyeron para dar una concentración superior de 1 en 40. Entonces se realizó una dilución en serie 2 veces de las muestras en PBS/BSA (1 %) a través de la placa de 96 concavidades. Anticuerpos de detección conjugados a HRP, conjugado de IgGl e IgG2a anti-ratón de cabra (Fe) : HRP (ambos de AbD Serotec) se diluyeron 1 en 1000 en PBS/BSA. El suero de animales que estuvieron sin tratar y sin infectar se incluyó como un control negativo.

Los resultados se muestran en la Figura 1 posterior como "Zydis + flu s.l." y como "Zydis + flu i.g.", respectivamente .

Ejemplo Comparativo 2 Se preparó una FDDF de acuerdo al Ejemplo Comparativo 1, excepto que antes de dosificar en las cavidades tipo blister, se adicionó a la formulación un virus de influenza A/Panama/2007/99 H3N2 microencapsulado en alginato de sodio de modo que cada tableta contuvo ^g de influenza. Para lograr esa cantidad final, se adicionaron por tableta 3 cuentas de influenza microencapsulada . La solución se procesó subsiguientemente bajos las mismas condiciones como en el Ejemplo 1, es decir, disolución, enfriamiento, congelación, secado por congelación. Las tabletas liofilizadas se inspeccionaron de la misma manera como en el Ejemplo 1.

Las tabletas liofilizadas se inspeccionaron para defectos en superficie; no se encontraron defectos mayores. Se llevó a cabo una prueba de dispersión (al colocar una tableta lOOpL de agua purificada a 37 °C) en las tabletas, y se disolvieron en menos de 10 segundos.

Las tabletas resultantes se administraron sublingualmente a ratones, y las muestras de sangre se probaron subsiguientemente en los días 14 y 28. Se realizaron ELISA de sub-clase para valorar los niveles de IgGl e IgG2a específicos de influenza en muestras de suero recolectadas de los animales tratados . Las muestras se ' diluyeron para dar una concentración superior de 1 en 40. Se realizó entonces una dilución en serie 2 veces de las muestras en PBS/BSA (1 %) a través de la placa de 96 concavidades. Anticuerpos de detección conjugados* con HRP, conjugado de IgGl e IgG2a anti-ratón de cabra (Fe) :HRP (ambos de AbD Serotec) se diluyeron 1 en 1000 en PBS/BSA. El suero de animales que estuvieron sin tratar y sin infectar se incluyó como un control negativo. Los resultados se muestran en la Figura 1 posterior como "Zydis + flu s.l. (cuentas de alguinato)".

Ejemplo Comparativo 3 Se preparó una FDDF de acuerdo al Ejemplo Comparativo 1, excepto que antes de la dosificación en cavidades tipo blister, se adicionó a la formulación virus de influenza A/Panamá/2007/99 H3N2 microencapsulado en PLGA a la formulación de modo que cada tableta contuvo 1 g de influenza. Para lograr esa cantidad final, se adicionó un total de 10 ul de cuentas de PLGA a 20 ul de mezcla de FDDF para lograr una cantidad de 10 µ? de cuentas de influenza microencapsulada por tableta. La solución se procesó subsiguientemente bajo las mismas condiciones como el Ejemplo 2, es decir, disolución, enfriamiento, congelación, secado por congelación. Las tabletas liofilizadas se inspeccionaron de la misma manera como en el Ejemplo 1.

Las tabletas liofilizadas se inspeccionaron para los defectos en superficie; no se encontraron defectos mayores en las FDDF preparadas. Se llevó a cabo en las tabletas una prueba de dispersión (al colocar una tableta en 100 µ? de agua purificada a 37°C) , y se disolvieron en 10 segundos .

Las tabletas resultantes se administraron sublingualmente a ratones, y subsiguientemente las muestras de sangre se probaron en los días 14, 28 y 59. Se realizaron ELISA de sub-clase . para valorar los niveles de IgGl e IgG2a específicas de influenza en muestras de suero recolectadas de los animales tratados. Las muestras se diluyeron para dar una concentración superior de 1 en 40. Entonces se realizó una dilución en serie de 2 veces de las muestras en PBS/BSA (1%) a través de la placa de 96 concavidades. Los anticuerpos de detección conjugados con HRP, conjugado de IgGl e lgG2a anti-ratón de cabra (Fe) :HRP (ambos de AbD Serotec) se diluyen 1 en 1000 en PBS/BSA. El suero de los animales que estuvieron sin tratar y sin infectar se incluyó como un control negativo. Los resultados se muestran en la Figura 1 posterior como "Zydis + flu s.l. (cuentas de PLGA) " .

Ejemplo 2 Como se demuestra por los ejemplos anteriores, la formulación ZydisMR es un medio efectivo para estimular respuestas sistémicas de anticuerpos a antígenos (Ag) después de la distribución sub-lingual. El perfil de la respuesta inmunitaria obtenida fue dependiente de la formulación ZydisMR e incluyó la alta respuesta de anticuerpos neutralizantes. Esto es importante al neutralizar toxinas bacterianas/virales extracelulares y antígenos presentes en la circulación sistémica. La formulación del f Ejemplo 1 también fue capaz de activar la expansión de células T citotóxicas (CTL) específicas del antígeno, que es una importante respuesta inmunitaria mediada por células para neutralizar la infección intracelular. Se llevó a cabo trabajo adicional para mejorar adicionalmente la respuesta mediada por células lograda por las formulaciones .

Después de estos primeros estudios, se llevaron a cabo estudios ín vitro adicionales usando macrofagos esplénicos murinos en cultivo y citometría de flujo para determinar sus niveles de activación y expresión de moléculas que son críticos al mediar la activación de células T. . Para los estudios in vitro, se usó como un control positivo lipopolisacárido (LPS) , un , potente estimulador conocido de muchos de estos factores. Las formulaciones se prepararon para el uso en el estudio in vitro usando macrofagos esplénicos murinos como se muestra en la Tabla 1 posterior.

Tabla 1 10 15 ?Procesado a 50°C. Todas las otras formulaciones se procesaron a 70°C Las formulaciones se prepararon como sigue. Se preparó una solución concentrada de antígeno de inflüenza a una concentración de 3.94mg/ml . De forma separada, se preparó un concentrado de matriz para cada formulación listada anteriormente. Una cantidad apropiada de solución concentrada de antígeno de influenza y concentrado de matriz de formulación entonces se combinó para dar un volumen final de 500µ1 de solución de formulación final. De está solución de formulación mezclada, final, se dispensaron alícuotas de 30mg, se congelaron y se secaron por congelación para producir tabletas que contienen ya sea lpg o 15ug de antígeno de influenza. La Tabla 2 resume esta preparación. Tabla 2 El concentrado de matriz se preparó al disolver la cantidad apropiada de cada componente en una cantidad de agua. Una cantidad apropiada del concentrado de: matriz, cuando se combina con la cantidad requerida de solución concentrada de antígeno, da por resultado el nivel de componente de matriz en la solución de formulación mezclada, final de acuerdo con los valores expuestos anteriormente.

Por ejemplo, para la formulación 1, la Tabla 3 demuestra la relación entre el concentrado de matriz y el por ciento en peso en la formulación final.

Tabla 3 Se aislaron células del bazo de ratones BALB/c adultos normales, se lavaron y luego los macrófagos CDllb+ se purificaron por separación por MACS usando una columna LS mantenida dentro del campo de un separador idi/ ACSMR. Los macrófagos se lavaron y cultivaron en medio de cultivo de tejido. Estos se pusieron en cultivo a 1.8 x 10+ células CDllb+ por concavidad de prueba. Se adicionó LPS a una concentración final de 100ng/ml para actuar como un control positivo. Una tableta ZydisMR para cada una de las 12 formulaciones se disolvió el medio de tejido de cultivo y se dividió entre tres réplicas. También, se preparó un control no estimulado que no contiene ni LPS ni ninguna de las formulaciones listadas. Después de 48 horas, los cultivos se recolectaron y los sobrenadantes se removieron para análisis de citocinas. Las células se lavaron y la activación de macrófagos se valoró usando citometría de flujo después de tinción con anticuerpos al complejo de histocompatibilidad principal (MHC, por sus siglas en inglés) clase II, CD25 y CD86.

Prueba A. Prueba In Vitro La naturaleza de la respuesta de células T y de anticuerpos a la estimulación antigénica se dicta por el estado de activación y las citocinas que se producen por células dendríticas/macrófagos/monocitos en el contacto con el antígeno. Los adyuvantes y vehículos de distribución manipulan estas respuestas a fin de activar respuestas de células T y B de tipos particulares. Por ejemplo, la estimulación de IL-12 por estas células es un determinante principal asociado con la promoción de respuestas inmunitarias Thl caracterizadas por anticuerpos fijadores de complemento, activación de fagocitos y producción de CTL. IL-4 es un activador principal de respuestas Th2 en tanto que IL-6 conjuntamente con TGFbeta es un activador principal de respuestas mucosas de IgA.

Se midieron varios marcadores como una indicación del nivel y tipo de activación de los macrófagos. Además, se evaluó una valoración de las citociñas claves que producen como un indicador de los tipos de reacción inmunitaria que pueden promover. 1. MHC Clase II El favorecimiento de la expresión de MHC clase II es un paso esencial en la mejora de la presentación del antígeno a fin de activar la respuesta de células T al antígeno. El favorecimiento de la expresión es un proceso que activa e incrementa la velocidad o grado de esa respuesta particular.

Una vez que el macrófago ingiere el antígeno (Ag) por fagocitosis, endocitosis o macropinocitosis , el Ag se rompe en fracciones peptídicas más pequeñas . Estas fracciones entonces se unen a MHC, que migra a la superficie de la célula y "presenta" el antígeno a células T. Esta presentación de antígeno es un paso necesario para activar la respuesta inmunitaria. Por lo tanto, la capacidad para incrementar los niveles de MHC clase II en macrófagos es predictiva de una capacidad mejorada de presentación de an ígeno .

Los datos en la Figura 2 muestran que todas las formulaciones (excepto F9) mejoran la expresión de MHC clase II, que produce niveles significativamente mayores de intensidad de fluorescencia media que controles no estimulados y los niveles favorables en comparación a los controles positivos (LPS) . 2. CD25 CD25 es una parte del receptor para IL-2. El favorecimiento de la expresión de esta molécula es una respuestas aguda a los estímulos de activación que son indicativos de un estado de activación resaltado y la disposición a funcionar como células presentadoras de antígeno .

Una vez presentados a células T sin tratamiento, ciertos factores co-estimuladores y citocinas sin influencia en la expansión y diferenciación tienen influencia en la expansión y diferenciación de células T. Como se muestra en la Figura 3, todas las formulaciones exhiben una mayor respuesta que el control no estimulado de una respuesta comparable a los controles positivos (LPS) . La formulación 6 (que contiene Tween 80) y la Formulación 7 (que contiene Poloxamero 188) muestra una respuesta incrementada con respecto a los controles positivos. 3. CD86 CD86 es un factor co-estimulador que tiene influencia tanto en las células T auxiliares como en las células T citotóxicas (necesarias para la inmunidad mediada por células) . CD86 proporciona una segunda señal crítica requerida a fin de activar respuestas de células T tanto auxiliares como citotóxicas. Normalmente se expresa a niveles muy bajos en células presentadoras de antígeno en reposo y su favorecimiento de expresión es un evento crítico al permitir que estas células interactúen productivamente con células T a fin de generar una respuesta inmunitaria.

Como se muestra en la Figura 4, todas las formulaciones, excepto aquellas procesadas a 50 °C (Formulaciones 5, 10, 11, 12) y la formulación que contiene Lecitina (Formulación 9) , fueron capaces de estimular la expresión incrementada de CD86, proporcionando una buen respuesta en comparación a controles positivos. 4. Perfil de Citocina El perfil de citocina se evalúa a la respuesta de citocinas, que es crítico en la estimulación e incidencia de la naturaleza de la respuesta de células T.

Los datos demuestran la capacidad potenciadora inmunitaria de las formulaciones a base de proteína y también la capacidad para activar respuestas de células T, es decir, estimulación y expansión (población incrementada de) células T.

La presencia de TNFalfa y IL12p40 (como una medida de IL-12) es importante al activar respuestas de células T citotóxicas y Thl, en tanto que IL-4 favorece la diferenciación de células T en células Th2, cuyo papel primario es en la estimulación de la producción de anticuerpo. IL-ß está comprendida tanto en la generación de respuestas Thl7, que están comprendidas en la promoción de la activación de neutrófilos, un aspecto que es importante al mediar la protección en ciertas enfermedades, y, también al promover la producción de anticuerpos por células B. IL-10 tiene la capacidad para reducir la expresión de otras respuestas inmunitarias . La reducción de la expresión es un proceso que reduce la activación o velocidad o. grado de activación de una respuesta.

Como se muestra en la Figura 5, todas las formulaciones exhiben un incremento significativo en la respuesta en IL-6, TNFalfa e IL-12p40 en comparación al control no estimulado. La Formulación 1, que contiene el nivel más bajo de Ag (1 ug) y almidón (2.0%), exhibió la respuesta más baja en términos de IL-6 y TNFalfa, aunque los niveles de IL-12p40 fueron comparables a o mayores que otras formulaciones .

El incremento del nivel de Ag solo en tanto que mantiene un bajo nivel de almidón (2%) , como en la Formulación 2, da por resultado un incremento en IL-6 y TNFalfa, pero es relativamente baja la respuesta de IL-12p40.

El incremento del nivel de almidón con un bajo nivel de antígeno, como en la Formulación 3, incrementa IL-6 y TNFalfa y produce una respuesta de IL-12p40 comparable a la Formulación 1. Esto demuestra las propiedades potenciadoras inmunitarias del almidón. Las Formulaciones 1 a 9 comprenden hidroxilpropil-almidón en tanto que la Formulación 10 comprende almidón de maíz, la Formulación 11 comprende almidón de maíz ceroso y la Formulación 12 comprende almidón de arroz . Los datos muestran que las diferentes fuentes de almidón pueden ejercer el mismo efecto inmunopotenciador .

El incremento del nivel tanto del antígeno como del almidón, como en la Formulación 4, muestra una respuesta mejorada inesperadamente superior con respecto: IL-6, TNFalfa e IL-12p40.

La Formulación 8 incluye goma de xantano y exhibe mayores respuestas que las otras formulaciones con respecto a IL-6 y TNFalfa.

Todas las formulaciones exhiben bajos niveles de IL-4. Se predispone la presencia de IL-4 muy temprano en las respuestas inmunitarias lejos de las respuestas de CTL y Thl . Por lo tanto, los bajos niveles de IL-4 son favorables en términos de, establecer una respuesta de CTL. IL-4 es importante en la provisión de un estímulo hacia la generación de células Th2 , que a su vez es importante para la promoción de respuestas de anticuerpos. Los bajos niveles de IL-4 son suficientes para este propósito y se conoce que otros tipos de células contribuyen a su producción.

Todas las formulaciones exhiben mayores niveles de IL-10 con relación al control no estimulado. IL-10 puede reducir la expresión de la respuestas de CTL y favorecer la respuesta Th2. Sin embargo, el control positivo LPS, también exhibe altos niveles de IL-10 y esto se conoce que es un potente activador de células que presentan el antígeno.

B. Prueba In Vivo 1. Prueba de Ejemplo 1 y Ejemplos Comparativos 1-3 Las muestras de sangre tomadas de ratones en los días 14, 28 y 59 se investigaron para la presencia de IgG específica de influenza en cada uno de los grupos de animales que se les dio una de las cinco formulaciones y en un grupo de animales no tratados (control negativo) . Las gráficas en la Figura 1 muestran los niveles de anticuerpo contra virus de influenza después de 1, 2 y 3 inmunizaciones con diferentes formulaciones. Todas las gráficas presentan los títulos de punto final, medios por grupo (EPT) +/- SEM (n=8 por grupo) .

Como se muestra en la Figura 1, la formulación ZydisMR que tiene la nueva formulación de matriz del Ejemplo 1 exhibe mayor valore de EPT a 14, 28 y 59 días que todos los Ejemplos Comparativos y los ratones no tratados. El grupo tratado con las nuevas tabletas de matriz más 1 pg de influenza fue los únicos animales que exhibieron respuestas de anticuerpos por arriba del fondo en los días 14 y 28. Adicionalmente , el título de punto final (EPT) de esta respuesta se incrementó del día 14 al día 28 al día 59, con inmunizaciones crecientes. 2. Prueba de Ejemplo 2 En base a los resultados del estudio in vitro mostraron el Ejemplo 2 usando cultivos de macrófagos, se seleccionaron ciertas formulaciones para el estudio de estimulación in vivo en ratones. Las formulaciones seleccionadas fueron: F8 (que contiene goma de xantano) ; F7 (que contiene poloxámero 188); FIO (que contiene almidón de maíz) ; F4 (que contiene almidón v) ; y F12 (que contiene almidón de arroz) .

Se inmunizaron cinco grupos de ratones BALB/c hembras en los días 0, 10 y 20 con una formulació de prueba como se muestra en la Tabla 1. En el día 27, los animales se sangraron para análisis de suero y entonces recibieron una estimulación intranasal (i.n.) de 50 µ? con el virus de influenza a/Puerto Rico/8/34 (PR8) H1N1. Los animales se monitorizaron para los signos de infección durante 7 días y se clasificaron de acuerdo al sistema de clasificación validada. La Tabla 4 muestra el programa de administración para las formulaciones.

Tabla 4 Resultados El peso corporal de cada grupo de ratones se monitorizó durante 7 días después de la estimulación. Los resultados se presentan en la Figura 6.

Los animales infectados con H1N1 PR8 sin inmunización (control infectado) perdieron peso rápidamente desde el día 3 después de la infección, alcanzando un punto final Home Office (HO) convenido para pérdida de peso de 20% por el día 6. Todos los animales inmunizados con una de las formulaciones que contienen antígenos de influenza mostraron pérdida reducida de peso. En particular, los animales que reciben antígeno en las Formulaciones 8, 7 y 4, mostraron una pérdida significativamente reducida de peso (P< 0.001, P<0.01 y P<0.05, respectivamente de acuerdo a la Prueba de Comparación Múltiple de Bonferroni y ANOVA Unidireccional) .

Para comparar el grado de enfermedad, los animales se clasificaron como 0, 0.5 o 1 (sin signos clínicos, signos clínicos medios y signos clínicos moderados, respectivamente) para cada uno de los siguientes parámetros, que da una posible puntuación máxima de 5 ; - Pilo-ereccion - Postura encorvada - Respiración errática - Movilidad afectada - Ojos llorosos Las puntuaciones se grafican contra el tiempo de días después de la infección y se muestran en la Figura 7. Como con los datos de pérdida de peso, todas las formulaciones se desempeñaron mejor que el control infectado no inmunizado. Las puntuaciones de enfermedad clínica también mostraron reducción significativa en la severidad entre grupos que reciben las formulaciones 8, 7 y 4 en comparación con infectado solo con el control, hasta el día seis después de la infección (P<0.01 y P<0.05 respectivamente) .

Debido a la pérdida de peso y comienzo de enfermedad clínica, varios animales alcanzaron el punto final humano Home Office (HO) en el día 7 y requirieron terminación en el día 6. La Figura 8 muestra la proporción de supervivencia en el día 7 después de la inmunización con una de las 5 formulaciones e infección con el virus H1N1. Se puede ver que 50% de los animales tratados con la Formulación 10, 70% de los tratados con la Formulación 4, y 60% de los animales tratados con la Formulación 12 sobrevivieron al día 7. Solo un animal tratado con la Formulación 8 tuvo que terminar en el día 6 y ninguno que recibe la Formulación 7 tuvo que terminar en el día 5.

Las muestras de suero derivadas de Sangrados tomados en el día 27 se analizaron por ELISA usando virus aniquilado de influenza como el antígeno de captura y ya sea IgG, IgGl o IgG2a de ratón como el anticuerpo detector. Los resultados se muestran en las Figuras 9, 10 y 11. Los tratamientos con cada una de las formulaciones seleccionada exhiben respuesta de anticuerpos tipo IgGl e IgG2a. El tratamiento de animales con la Formulación 8 estimuló títulos significativamente mayores de anticuerpo anti-HINl en comparación con otros grupos de tratamiento, Formulaciones 7, 10, 4 y 12, dando por resultado altos títulos de IgG (P<0.01), en particular el isotipo IgG2a (P<0.001) en comparación con la prueba de comparación múltiple de Benferonni y A OVA unidireccional). Los datos soportan los hallazgos clínicos reportados anteriormente (es decir, peso corporal, puntuaciones de enfermedad clínica y proporción de supervivencia) demostrando que las formulaciones seleccionadas pueden producir una apropiada y protectora respuesta inmunitaria.

La Figura 12 muestra la respuesta de IgA de lavados nasales tomados al final del estudio de estimulación in vivo. En ese momento, los ratones se terminaron y los lavados nasales se analizaron para IgA como un indicador de la respuesta mucosa de anticuerpos . Los resultados demostraron que todas las formulaciones fueron capaces de estimular una respuesta mucosa, con las Formulaciones 8 y 12 que dan los valores de título medio más altos .

De esta manera, hay numerosas ventajas en la formulación que comprende un almidón como un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria¦ para la elaboración de FDDF de vacunas orales. La FDDF resultante tiene la ventaja técnica inesperada de respuesta inmunitaria incrementada a infección bacteriana y viral, que no se conoce ni se sugiere en la técnica anterior.

Numerosas alteraciones, modificaciones y variaciones de las modalidades preferidas descritas en la presente serán evidentes para aquellos expertos en la técnica y se anticipan y contemplan toda para que estén dentro del espíritu y alcance de la invención reivindicada. Por ejemplo, aunque se han descrito en detalle modalidades específicas, los expertos en la técnica entienden que las modalidades anteriores y variaciones se pueden modificar para incorporar varios tipos de materiales sustitutos, adicionales o alternativos. Por consiguiente, aunque solo pocas variaciones, de la presente invención se describen en la presente, se va a entender que la práctica de estas modificaciones y variaciones adicionales y los equivalentes de esto, están dentro del espíritu y alcance de la invención como se define en las siguientes reivindicaciones. Todas las solicitudes de patente, patentes y otras publicaciones citadas en la presentes se incorporan como referencia en su totalidad .

Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la presente invención, es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones: 1. Una forma de dosis de vacuna sólida, oral, de disolución rápida, caracterizada porque comprende: (a) una cantidad inmunogénica de una preparación antigénica; y (b) al menos un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria, en donde el por lo menos un agente formador de matriz, potenciador o respuesta inmunitaria es un almidón. 2. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el almidón está presente en una cantidad de aproximadamente 2% a aproximadamente 90% en peso . 3. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque el almidón se selecciona del grupo que consiste de almidón nativo, almidón modificado, y combinaciones de esto. 4. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque se desintegra en un plazo; de 60 segundos después de que se coloca en la cavidad oral. 5. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada porque se desintegra en un plazo de 30 segundos de que se coloca en la cavidad oral . 6. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 5, caracterizada porque se desintegra en un plazo de 10 segundos de que se coloca en la cavidad oral . 7. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 6, caracterizada porque se desintegra en un plazo de 5 segundos de que se coloca en la cavidad oral. 8. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 1, . .. .... caracterizada porque se prepara por liofilizacion. 9. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque además comprende al menos un agente formador de matriz, adicional. ío. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el por lo menos un agente formador de matriz, adicional es mannitol. 11. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el por lo menos un agente formador de matriz, adicional es gelatina. 12. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 10, caracterizada porque el por lo menos un agente formador de matriz, adicional comprende adicionalmente gelatina,. 13. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada porque la gelatina está presente en una cantidad de aproximadamente 2.5% a aproximadamente 65%; el mannitol está presente en una cantidad de aproximadamente 5% a aproximadamente 80%; y el almidón está presente en una cantidad de aproximadamente 5% a aproximadamente 80% en peso . 14. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de . .„ disolución rápida de conformidad con la reivindicación 13 , caracterizada porque la gelatina está presente en una cantidad de aproximadamente 3% a aproximadamente 55%; el mannitol está presente en una cantidad de aproximadamente 7% a aproximadamente 65%; y el almidón está presente en una cantidad de aproximadamente 7% a aproximadamente' 75% en peso . 15. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque además comprende al menos un agente formador de matriz, adicional seleccionado del grupo que consiste de gomas. 16. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 15, caracterizada porque el por lo menos un agente formador de matriz, adicional es goma de xantano. 17. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque además comprende un tensioactivo. 18. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada porque el tensioactivo se selecciona del grupo que consiste de Tween 80 y poloxámero. 19. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque además comprende un adyuvante. 20. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque además comprende un mucoadhesxvo. 21. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque se induce una respuesta inmunitaria cuando se administra un paciente por colocación en la cavidad oral . 22. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque la colocación en la cavidad oral es la colocación en o bajo la lengua o en la región bucal o faríngea . 23. Una forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida, caracterizada porque comprende: (a) una cantidad inmunogénica de virus inactivado de influenza; y (b) al menos un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria; en donde el por lo menos un agente formador de matriz, potenciador de respuesta inmunitaria es un almidón. 24. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque el almidón está presente en la cantidad de aproximadamente 2% a aproximadamente 90% en peso. 25. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque el almidón se selecciona del grupo que consiste de almidón nativo, almidón modificado, y combinaciones de estos. 26. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque la forma de dosis se desintegra en un plazo de 60 segundos después de que se coloca en la cavidad oral . 27. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 26, caracterizada porque se desintegra en un plazo de 30 segundos de que se coloca en la cavidad oral . 28. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 27, caracterizada porque desintegra en un plazo de 10 segundos de que se coloca en la cavidad oral . 29. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 28, caracterizada porque se desintegra en un plazo de 5 segundos de que se coloca en la cavidad oral. 30. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque se prepara por liofilización. 31. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque además comprende al menos un agente formador de matriz, adicional. 32. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 31, caracterizada porque el por lo menos un agente formador de matriz, adicional es mannitol . 33. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 31, caracterizada porque al menos un agente formador de matriz, adicional es gelatina. 34. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 32, caracterizada porque al menos un agente formador de matriz, adicional es comprende adicionalmente gelatina. 35. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de _. disolución rápida de conformidad con la reivindicación 34, caracterizada porque la gelatina está presente en una cantidad de aproximadamente 2.5% a aproximadamente 65%; el mannitol está presente en una cantidad de aproximadamente 5% a aproximadamente 80%; y el almidón está presente en una cantidad de aproximadamente 5% a aproximadamente 80% en peso. 1.0 36. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 35, caracterizada porque la gelatina está presente en una cantidad de aproximadamente 3% a aproximadamente. 55%; el mannitol está presente en una cantidad de aproximadamente 5 7% a aproximadamente 65%; y el almxdon esta presente en una cantidad de aproximadamente 7% a aproximadamente 75% en peso . 37. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 31, caracterizada porque al menos un agente formador de matriz, adicional se selecciona del grupo que consiste de gomas. 38. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 37, caracterizada porque al menos un agente formador de' matriz, 5 adicional es goma de xantano. 39. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 31, caracterizada porque además comprende un tensioactivo. 40. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de o disolución rápida de conformidad con la reivindicación 39, caracterizada porque el tensioactivo se selecciona del grupo que consiste de Tween 80 y poloxámero. 41. La forma de dosis de vacuna, sólida,, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque además comprende un adyuvante. 10 42. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 23, caracterizada porque además comprende un mucoadhesivo. 43. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 23, 15 caracterizada porque se induce una respuesta de IgG específica de influenza cuando se administra a un paciente por colocación en la cavidad oral . 44. La forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 43, 20 caracterizada porque la colocación en la cavidad oral es colocación en o bajo la lengua o en la región bucal o faríngea . 45. Un método para inducir una respuesta inmunitaria en un paciente, caracterizado porque comprende 5 el paso de: colocar la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 1 en la cavidad oral de una persona en necesidad de la respuesta inmunitaria. 46. El método para inducir una respuesta inmunitaria en un paciente de conformidad con la reivindicación 45, caracterizado porque la colocación en la cavidad oral en la colocación en o abajo de la lengua en la región bucal o faríngea. 47. Un método para inducir una respuesta de anticuerpos específica de influenza en un paciente, caracterizado porque comprende el paso de: colocar la forma de dosis de vacuna, sólida, oral, de disolución rápida de conformidad con la reivindicación 23 en la cavidad oral de una persona en necesidad de respuesta de anticuerpos específicos de influenza. 48. El método para inducir una respuesta de anticuerpos específicos de influenza en un paciente de conformidad con la reivindicación 47, caracterizado porque la colocación en la cavidad oral es la colocación en o bajo la lengua o en la región bucal o faríngea. 49. El método para inducir una respuesta de anticuerpos específicos de influenza en un paciente de conformidad con la reivindicación 47, caracterizado porque la respuesta de anticuerpos específicos de influenza es una respuesta de IgG.