MX2013001148A

MX2013001148A - Proteinas de fusion de fragmentos de proteinas humanas naturales para crear composiciones de fc de inmunoglobulinas multimerizadas ordenadamente.

Info

Publication number: MX2013001148A
Application number: MX2013001148A
Authority: MX
Inventors: David S Block; Henrik Olsen
Original assignee: Gliknik Inc
Priority date: 2010-07-28
Filing date: 2011-07-28
Publication date: 2014-02-27
Also published as: TWI542597B; US20220056087A1; IL268724A; CA2804512A1; HUE044869T2; BR112013002074A2; ES2719623T3; TW201207104A; WO2012016073A3; IL268724B; JP5826270B2; MX347343B; JP6225142B2; MX368531B; JP2013543483A; KR20180050429A; AR082404A1; JP2015227346A; CA2902942A1; HRP20190652T1

Abstract

La presente invención implica una serie de formas multimerizadas completamente recombinantes de Fc de inmunoglobulina que así presenta el Fc de inmunoglobulina polivalente a los receptores de las células inmune. Las proteínas de fusión existen tanto homodiméricas y fracciones multiméricas altamente ordenadas, denominadas estradómeros. En comparación con la fracción homodimérica, los estradómeros multiméricos purificados tienen mayor afinidad y avidez por los Fc?R con disociación más lenta y son útiles en el tratamiento y prevención de enfermedades. La presente invención demuestra que enlazar directamente las regiones Fc de IgG1 a dominios de multimerización conduce a multimerización y actividad biológica mejoradas.

Description

PROTEÍNAS DE FUSIÓN DE FRAGMENTOS DE PROTEÍNAS HUMANAS NATURALES PARA CREAR COMPOSICIONES DE FC DE INMUNOGLOBULINAS MULTIMERIZAPAS ORDENADAMENTE.

REFERENCIA CRUZADA CON SOLICITUDES RELACIONADAS: Esta solicitud reivindica prioridad de la solicitud provisional de Estados Unidos núm. : 61/368,465, presentada el 28 de julio de 2011, el contenido de la cual se incorpora en la presente como referencia en su totalidad.

DESCRIPCIÓN DEL TEXTO PRESENTADO ELECTRÓNICAMENTE El contenido del texto presentado electrónicamente adjunto se incorpora en la presente descripción como referencia en su totalidad: Una copia en formato legible por computadora de la lista de secuencias (nombre del expediente: GLIK__006_01US_SeqList_ST25.txt, fecha registrada: 26 de julio de 2011 tamaño del expediente 61 kilobytes) .

CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se relaciona generalmente con los campos de la inmunología, autoinmunidad, inflamación, e inmunología del tumor. Más específicamente, la presente invención se relaciona con moléculas biomiméticas biológicamente activas que comprenden dominios Fe de inmunoglobulina unidos naturalmente, composiciones que comprenden tales biomiméticos , y métodos para preparar y usar tales biomiméticos .

La invención se relaciona además con el tratamiento y profilaxis de afecciones patológicas mediadas por los linfocitos, células NK, células derivadas de monocitos y células inmunes que interactúan con las células derivadas de monocitos, y más particularmente con el uso de porciones funcionales estabilizadas de los fragmentos Fe de IgG unidos para tal tratamiento y profilaxis.

Los productos de inmunoglobulina a partir de plasma humano se han usado desde principios de los años 1950 para tratar trastornos de deficiencia inmune y más recientemente, y más comúnmente, para enfermedades autoinmunes e inflamatorias .

Inicialmente , los productos de inmunoglobulina se administraron por inyección intramuscular. Más recientemente, se ha usado la inmunoglobulina intravenosa (IVIG) y mostró inicialmente ser eficaz en el tratamiento de la enfermedad autoinmunitaria púrpura trombocitopénica idiopática (ITP) ( Imbach P, Barandun S, d'Apuzzo V, y otros: High-dose intravenous gammaglobulin for idiopathic thrombocytopenic purpura in childhood. Lancet 1981 Jun 6; 1(8232): 1228-31). La IVIG humana (referida en la presente descripción como "hlVIG") es una formulación de productos de inmunoglobulina G (IgG) estériles, purificados, fabricados a partir de plasma humano concentrado que típicamente contiene más de 95% de IgG no modificada, con solamente cantidades pequeñas y variables de inmunoglobulina A (IgA) o inmunoglobulina M (IgM) (ver, por ejemplo, Rutter A, Luger TA: High-dose intravenous immunoglobulins : an approach to treat severe immune-mediated and autoimmune diseases of the skin. J Am Acad Dermatol 2001 Jun; 44(6): 1010-24). Hoy el uso clínico más común de la hlVIG es en el tratamiento de la polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica.

Aunque la hlVIG es un tratamiento clínico efectivo, hay varios inconvenientes a los tratamientos con hlVIG, que incluyen la potencial de esterilidad inadecuada, la presencia de impurezas o agentes infecciosos lo que incluye virus y priones, falta de disponibilidad de este producto de sangre humana concentrada, variación lote a lote, alto costo, alta carga proteica que afecta la función renal, y largo tiempo de administración, generalmente durante muchas horas y algunas veces dos días consecutivos mensualmente . En particular las preparaciones de hlVIG pueden variar grandemente en su contenido de inmunoglobulina A (IgA) lo cual puede ser de preocupación porque las IgA pueden causar reacciones alérgicas y anafilácticas en receptores deficientes de IgA. En vista de los aspectos negativos de la hlVIG, existe la necesidad de un medio mejorado de tratamiento de las enfermedades autoinmunes e inflamatoria y en particular una necesidad de una fuente abundante de productos producidos recombinantemente con al menos una eficacia equivalente, mayor potencia, tiempos de administración más cortos y mayor pureza.

Adicionalmente, múltiples afecciones patológicas de una amplia variedad de tipos están mediadas por células derivadas de monocitos, linfocitos y células NK. Un nuevo agente terapéutico y/o profiláctico para usar en muchas, si no en todas, de tales afecciones satisfacerla una importante necesidad médica no satisfecha y seria comercialmente valioso .

Muchas de las propiedades inmuno-regulatorias de la hlVIG residen en el dominio Fe de las moléculas de IgG. Por ejemplo, en modelos murinos de ITP, la hlVIG no modificada y el fragmento Fe solos demonstraron eficacia terapéutica en la restauración del recuento de plaquetas, mientras que los fragmentos Fab de hlVIG aislados no son terapéuticos (Samuelsson, A., Towers, T. L. & Ravetch, J.V. Anti-inflammatory Activity of hlVIG Mediated Through the Inhibitory Fe Receptor. Science 291, 484-486 (2001)). Además, los fragmentos Fe, pero no los Fab de hlVIG, son terapéuticamente eficaces también en el tratamiento de la púrpura trombocitopénica idiopática en la niñez y en los adultos (Follea, G. y otros, Intravenous plasmin-treated gamma globulin therapy in idiopathic thrombocytopenic purpura. Nouv Rev Fr Hematol 27, 5-10 (1985); Solal-Celigny, P., Bernard, J. , Herrera, A. & Biovin, P. Treatment of adult autoimmune thrombocytopenic purpura with high-dose intravenous plasmin-cleaved gammaglobulins . Scand J Haematol 31, 39-44 (1983); Debre, M . & Bonnet, M.-C. Infusión of Fe gamma fragments for treatment of children with acute immune thrombocytopenic purpura . ' Lancet 342, 945-49 (.1993); Burdach, S.E., Evers, K. & Geurson, R. Treatment of acute idiopathic thrombocytopenic purpura of childhood with intravenous immunoglobulin G: Comparative efficacy of 7S and 5S preparations. J Pediatr 109, 770-775 (1986)).

Además de las familia de los receptores de Fe gamma clásicos, los cuales se pueden distinguir entre miembros activadores e inhibidores, el receptor de Fe neonatal (FcRn), que pertenece a la familia de las moléculas de clase I de mayor histocompatibilidad (MHC-I) y SignRl/DC-SIGN, que pertenece a la familia de lectinas tipo C, se pueden unir al fragmento Fe de la IgG (Nimmerjahn and Ravetch, Antibody-mediated modulation of immune responses, Immunological Reviews, 236: 265-275 (2010) . Además, hay receptores similares al receptor de Fe gamma a los cuales se pueden unir las moléculas de Fe y ejercer un efecto fisiológico. (Davis RS . "Fe Receptor-like molecules" Annu. Rev. Immunol . 2007. 25:525-60). El efecto terapéutico de la hlVIG es mediado inicialmente a través del receptor de Fe gamma (FcDR) y depende de la interacción de células dendriticas (DC)-macrófagos para sus efectos tolerogénicos a largo plazo. FcDRIIlá juega un papel fundamental en la fase iniciadora y FcDRIIb es requerido por la fase efectora en modelos murinos de ITP (Samuelsson, A., Towers, T.L. & Ravetch, J.V. Anti-inflammatory Activity of hlVIG Mediated Through the Inhibitory Fe Receptor. Science 291, 484-486 (2001) ; Siragam, V. y otros Intravenous immunoglobulin ameliorates ITP via activating FcD receptors on dendritic cells. Nat Med 12, 688 (2006) ) . Igualmente, los estudios en humanos demostraron que los anticuerpos del receptor anti-FcD son eficaces en el tratamiento de la ITP refractaria (Clarkson, S. y otros Treatment of refractory immune thrombocytopenic purpura with an anti-Fc gamma-receptor antibody. N Engl J Med 314, 1236-1239 (1986)).' Es importante que, los efectos tolerogénicos a largo plazo están mediados por interacciones célula-célula, ya que la transferencia adoptiva de DC tratadas con hlVIG es efectiva en el tratamiento de modelos murinos de ITP (Siragam, V. y otros, Intravenous immunoglobulin ameliorates ITP via activating FcD receptors on dendritic cells. Nat Med 12, 688 (2006)).

Los efectos inmunomoduladores de la hlVIG requieren la agregación de los FcDR. La agregación de los FcDR está mediada por "dimeros" de IgG presentes en la hlVIG (5-15% de la hlVIG total) (Bleeker, W.K. y otros, Vasoactive side effects of intravenous immunoglobulin preparations in a rat model and their treatment with recombinant platelet-activating factor acetylhydrolase . Blood 95, 1856-1861 (2000) ) . Por ejemplo, los efectos hipotensivos clínicos inmunocirculatorios conocidos de IVIG correlacionan con la presencia de "dimeros" en IVIG (Kroez M y otros, Hypotension with Intravenous Immunoglobulin Therapy: importance of pH and dimer formation. Biologicals 31 (2003) 277-286.) Por ejemplo, en un modelo murino de ITP, el tratamiento con hlVIG con un alto contenido de "dimeros" (dimeros de las moléculas de inmunoglobulina homodiméricas completas) mejoró el recuento de plaquetas mientras que los "monómeros" de hlVIG (moléculas de inmunoglobulina homodiméricas completas) no fueron efectivos (Teeling, J.L. y otros Therapeutic efficacy of intravenous immunoglobulin preparations depends on the immunoglobulin G dimers: studies in experimental immune thrombocytopenia . Blood 98, 1095-1099 (2001)). Más aun, a pesar del hecho de que resinas de intercambio iónico y fraccionamiento por polietilenglicol se usan de rutina en la fabricación de hlVIG para eliminar agregados de IgG, la eficacia clínica de la hlVIG correlaciona con la presencia de agregados en el suero de los pacientes (Augener, ., Friedman, B. & Brittinger, G. Are aggregates of IgG the effective part of high-dose immunoglobulin therapy in adult idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP)? Blut 50, 249-252 (1985)). Es importante que, el porcentaje de dimeros se correlaciona además con los efectos colaterales vasoactivos, los cuales son tratables con acetilhidrolasa (Bleeker, W.K. y otros Vasoactive side effects of intravenous immunoglobulin preparations in a rat model and their treatment with recombinant platelet-activating factor acetylhydrolase. Blood 95, 1856-1861 (2000) ) .

SUMARIO DEL INVENTO Hay una necesidad de una alternativa a la IVIG que resuelva el problema de las altas cargas de proteina, la dosificación inconveniente del paciente, el riesgo de infección, la anafilaxis a la IgA, y la limitada disponibilidad mientras se mantiene y mejora la eficacia de la fracción agregada de IVIG. La presente invención se refiere a moléculas de proteínas de fusión biomiméticas biológicamente activas que comprenden Fe de inmunoglobulinas humanas y un dominio sencillo de multimerización de origen natural, composiciones que comprenden las mismas, y métodos de uso de las mismas. Estos biomiméticos tienen una amplia aplicación para el tratamiento de enfermedades inmunológicas e inflamatorias que incluyen pero no se limitan a enfermedades autoinmunes, justo como la hlVIG por las cuales se modelaron estos biomiméticos . Más aun, algunos de estos biomiméticos además tienen utilidad como reactivos de laboratorio, tal como para el uso en ensayos inmunológicos para probar la función de células inmunes, en el diagnóstico de enfermedades y en el bloqueo de la unión no especifica de Fe en inmunoensayos basados en anticuerpos. Además, los biomiméticos y composiciones de la presente invención tienen la ventaja de sup'erar las limitaciones de la hlVIG enumeradas anteriormente asi como las limitaciones de la multimerización de los estradómeros biomiméticos precursores.

El documento WO 2008/151088 describe el uso de dominios Fe de inmunoglobulinas enlazados para crear biomiméticos de hlVIG de Fe de immunoglobulinas multimerizadas ordenadamente (multimeros ordenados biológicamente activos conocidos como estradómeros) para el tratamiento de condiciones patológicas que incluyen enfermedades autoinmunes y otras afecciones inflamatorias. Ver WO 2008/151088, incorporada como referencia en su totalidad. Las moléculas descritas se diseñaron para incluir secuencias extrañas, en relación con la Fe de la inmunoglobulina nativa, que incluyen sitios de restricción y etiquetas de afinidad en el monómero de Fe de inmunoglobulina. Estas secuencias extrañas representan en total una pequeña fracción de la composición total de aminoácidos del estradómero (aproximadamente 16 aminoácidos en total) y se colocaron entre dominios con funciones separables y distintas, es decir función de unión a FcR y función de multimerización. Generalmente hablando es una práctica común incluir secuencias de enlace pequeñas entre dominios con estructuras y /o funciones independientes para evitar impedimentos esféricos o disminuir las funciones independientes de los dominios flanco. Sin embargo, como se describe en la presente descripción, la eliminación de estos segmentos cortos puede proporcionar un aumento dramático de la formación de multimeros, la unión al receptor y/o la actividad biológica en general.

En una modalidad, la presente invención se refiere a una unidad de estradómero que comprende una secuencia líder, un dominio Fe de IgGl y un dominio de multimerización. En otra modalidad de la presente invención, la secuencia líder está directamente unida al dominio Fe de IgGl y el dominio Fe de IgGl está directamente unido al dominio de multimerización.

En otra modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradómero en donde la secuencia de aminoácidos del dominio Fe de IgGl es al menos 80% homologa a la sec. con núm. de ident.:2. En una modalidad adicional, la secuencia de aminoácido del dominio Fe de IgGl es al menos 90% homologa a la sec. con núm. de ident . : 2. En aún una modalidad adicional, la secuencia de aminoácido del dominio Fe de IgGl es al menos 95% homologa a la sec. con núm. de ident.: 2. Todavía en una modalidad adicional, la secuencia de aminoácido del dominio Fe de IgGl es al menos 99% homologa a la sec. con núm. de ident . : 2. En una modalidad adicional, la secuencia de aminoácido del dominio Fe de IgGl de la sec. con núm. de ident.: 2 está directamente unida a una secuencia líder y/o un dominio de multimerización. En algunas modalidades, la unidad de estradomero de la presente invención se une a FcDRIIIa o DC-SIGN/SIGN-R1 cuando se multimeriza .

En otra modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradomero en donde la secuencia de aminoácido del dominio de multimerización es al menos 80% homologa a la sec. con núm. de ident . : 3. En una modalidad adicional, el dominio de multimerización es al menos 90% homólogo a la sec. con núm. de ident . : 3. En aún una modalidad adicional, la unidad de estradomero de la presente invención en donde la secuencia de aminoácido del dominio de multimerización es al menos 95% homólogo a la sec. con núm. de ident.: 3. Todavía en una modalidad adicional, la unidad de estradomero de la presente invención en donde la secuencia de aminoácidos del dominio de multimerización es al menos 99% homólogo a la sec. con núm. de ident.: 3. En otra modalidad, el dominio de multimerización es capaz de multimerizar las unidades de estradómeros . En una modalidad adicional, el dominio de multimerización está directamente unido al terminal carboxilo del dominio Fe de IgGl. En algunas modalidades, el dominio de multimerización está directamente unido al terminal amino del dominio Fe de IgGl.

En otra modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradomero en donde la secuencia de aminoácidos del dominio de multimerización es al menos 80% homologa a la sec. con núm. de ident.:5. En una modalidad adicional, el dominio de multimerización es al menos 90% homólogo a la sec. con núm. de ident . : 5. En aún una modalidad adicional, la unidad de estradomero de la presente invención en donde la secuencia de aminoácidos del dominio de multimerización es al menos 95% homologa a la sec. con núm. de ident.: 5. Todavía en una modalidad adicional, la unidad de estradomero de la presente invención en donde la secuencia de aminoácido del dominio de multimerización es al menos 99% homologa a la sec. con núm. de ident.: 5. En otra modalidad, el dominio de multimerización es capaz de multimerizar las unidades de estradomero. En una modalidad adicional, el dominio de multimerización está directamente unido al terminal carboxilo del dominio Fe de IgGl. En algunas modalidades, el dominio de multimerización está directamente unido al terminal amino del dominio Fe de IgGl .

En otra modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradomero en donde la secuencia de aminoácido del dominio de multimerización es al menos 80% homologa a la sec. con núm. de ident.:26. En una modalidad adicional, el dominio de multimerización es al menos 90% homólogo a la sec. con núm. de ident.:26. En aún una modalidad adicional, la unidad de estradomero de la presente invención en donde la secuencia de aminoácido del dominio de multimerización es al menos 95% homologa a la sec. con núm. de ident.:26. Todavía en una modalidad adicional, la unidad de estradomero de la presente invención en donde la secuencia de aminoácido del dominio de multimerización es al menos 99% homologa a la sec. con núm. de ident.:26. En otra modalidad, el dominio de multimerización es capaz de multimerizar las unidades de estradomero. En una modalidad adicional, el dominio de multimerización está directamente unido al terminal carboxilo del dominio Fe de IgGl. En algunas modalidades, el dominio de multimerización está directamente unido al terminal amino del dominio Fe de IgGl.

En una modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradomero que comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio Fe de IgGl que está directamente unido a un dominio de multimerización bisagra IgG2 en donde la bisagra IgG2 crea multímeros de las unidades de estradómeros . En una modalidad, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 80% homólogo a la sec. con núm. de ident . : 4 En una modalidad adicional, la secuencia de aminoácidos de la unidad de estradómero es al menos 90% homologa a la sec. con núm. de ident.: 4. Todavía en una modalidad adicional, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 95% homologa a la sec. con núm. de ident.: 4. En aún otra modalidad, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 99% homologa a la sec. con núm. de ident.: 4. En una modalidad adicional, la secuencia líder (sec. con núm. de ident.: 1) se escinde de la proteína madura.

En una modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradómero que comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio Fe de IgGl que está directamente unido a un dominio de multimerización de cremallera de isoleucina en donde la cremallera de isoleucina crea multímeros de las unidades de estradómeros. En una modalidad, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 80% homologa a la sec. con núm. de ident.: 10 En una modalidad adicional, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 90% homologa a la sec. con núm. de ident.: 10. Todavía en una modalidad adicional, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 95% homologa a la sec. con núm. de ident.: 10. En aún otra modalidad, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 99% homologa a la sec. con núm. de ident.: 10. En una modalidad adicional, la secuencia líder (sec. con núm. de ident.: 1) se escinde de la proteína madura.

En una modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradómero que comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio Fe de IgGl que está directamente unido a un dominio de multimerización GPP en donde el dominio de multimerización crea multímeros de las unidades de estradómeros . En una modalidad, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 80% homologa a la sec. con núm. de ident.: 27 En una modalidad adicional, la secuencia de aminoácidos de la unidad de estradómero es al menos 90% homologa a la sec. con núm. de ident.: 27. Todavía en una modalidad adicional, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 95% homologa a la sec. con núm. de ident.: 27. En aún otra modalidad, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 99% homologa a la sec. con núm. de ident. :27. En una modalidad adicional, la secuencia líder (sec. con núm. de ident.: 1) se escinde de la proteína madura .

En una modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradómero que comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio de multimerizacion bisagra IgG2 el cual a su vez está directamente unido a un dominio Fe de IgGl en donde la bisagra IgG2 crea multímeros de las unidades de estradómeros . En una modalidad, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 80% homólogo a la sec. con núm. de ident .: 8 En una modalidad adicional, la secuencia de aminoácidos de la unidad de estradómero es al menos 90% homologa a la sec. con núm. de ident.: 8. Todavía en una modalidad adicional, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 95% homologa a la sec. con núm. de ident.: 8. En aún otra modalidad, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 99% homologa a la sec. con núm. de ident.: 8. En una modalidad adicional, la secuencia líder (sec. con núm. de ident.: 1) se escinde de la proteína madura .

En una modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradómero que comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio de multimerización de cremallera de isoleucina el cual a su vez está directamente unido a un dominio Fe de IgGl en donde la cremallera de isoleucina crea multímeros de las unidades de estradómeros . En una modalidad, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 80% homólogo a la sec. con núm. de ident.: 9 En una modalidad adicional, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 90% homologa a la sec. con núm. de ident.: 9. Todavía en una modalidad adicional, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 95% homologa a la sec. con núm. de ident.: 9. En aún otra modalidad, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 99% homologa a la sec. con núm. de ident.: 9. En una modalidad adicional, la secuencia líder (sec. con núm. de ident.: 1) se escinde de la proteína madura.

En una modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradómero que comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio de multimerización GPP el cual a su vez está directamente unido a un dominio Fe de IgGl en donde el dominio de multimerización GPP crea multímeros de la unidades de estradómeros. En una modalidad, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 80% homologa a la sec. con núm. de ident.: 28 En una modalidad adicional, la secuencia de aminoácidos de la unidad de estradómero es al menos 90% homólogo a la sec. con núm. de ident . : 28. Todavía en una modalidad adicional, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 95% homologa a la sec. con núm. de ident.: 28. En aún otra modalidad, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero es al menos 99% homologa a la sec. con núm. de ident.: 28. En una modalidad adicional, la secuencia líder (sec. con núm. de ident.: 1) se escinde de la proteína madura .

En otra modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradómero que comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio Fe de IgGl el cual a su vez está directamente unido a un dominio de multimeri zación en donde el dominio de multimerización crea multímeros de las unidades de estradómeros . En una modalidad adicional, el dominio de multimerización crea multímeros de orden superior de las unidades de estradómeros. Todavía en una modalidad adicional, al menos aproximadamente 35% de la composición de estradómero resultante contiene multímeros de las unidades de estradómeros. Todavía en una modalidad adicional, al menos aproximadamente 55% de la composición de estradómero resultante contiene multímeros de las unidades de estradómeros. Todavía en una modalidad adicional, al menos aproximadamente 65% de la composición de estradómero resultante contiene multímeros de las unidades de estradómeros . Todavía en una modalidad adicional, al menos aproximadamente 70% de la composición de estradómero resultante contiene multímeros de las unidades de estradómeros. Todavía en una modalidad adicional, al menos aproximadamente 75% de la composición de estradómero resultante contiene multímeros de las unidades de estradómeros .

En una modalidad adicional, En una modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradómero que comprende una secuencia líder, un dominio Fe de IgGl con una o más mutaciones y un dominio de multimerización . En una modalidad adicional de la presente invención, la secuencia líder está directamente unida al dominio Fe de IgGl con una o más mutaciones y el dominio Fe de IgGl con una o más mutaciones está directamente unido al dominio de multimerización .

En una modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradómero en donde la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero comprende la sec. con núm. de ident.:20. En una modalidad adicional, la invención se relaciona con un estradómero aglomerado que comprende al menos dos unidades de estradómero que comprenden la sec. con núm. de ident.:20. En una modalidad adicional, la secuencia líder (sec. con núm. de ident.: 1) se escinde de la proteína madura .

En una modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradómero en donde la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero comprende la sec. con núm. de ident.:24. En una modalidad adicional, la invención se relaciona con un estradómero aglomerado que comprende al menos dos unidades de estradómero que comprenden la sec. con núm. de ident.:24. En una modalidad adicional, la secuencia líder (sec. con núm. de ident.: 1) se escinde de la proteína madura .

En una modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradómero en donde la secuencia de aminoácido de la unidad de estradómero comprende la sec. con núm. de ident.: 21. En una modalidad adicional, la invención se relaciona con un estradómero aglomerado que comprende al menos dos unidades de estradómero que comprenden la sec. con núm. de ident. :21. En una modalidad adicional, la secuencia líder (sec. con núm. de ident.: 1) se escinde de la proteína madura .

En una modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradómero que comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio de multimerización en donde el dominio de multimerización está directamente unido a un dominio Fe de IgGl que carece del dominio bisagra IgGl, en donde el dominio de multimerización crea multimeros de las unidades de estradómeros . En otra modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradómero que comprende una secuencia lider directamente unida a un dominio de multimerización en donde el dominio de multimerización está directamente unido a una porción de un Fe de IgGl que es capaz de unirse a un FcR o en donde el dominio de multimerización directamente unido a una porción de un Fe de IgGl juntos son capaces de unirse a un FcR.

En una modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradómero que comprende una secuencia lider directamente unida a un dominio de multimerización el cual a su vez está directamente unido a un dominio Fe de IgGl que consiste de los dominios CH2 y CH3 de IgGl bisagra, en donde el dominio de multimerización crea multimeros de las unidades de estradómeros.

En una modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradómero que comprende una secuencia lider directamente unida a un dominio de multimerización el cual a su vez está directamente unido a un dominio Fe de IgGl que consiste de los dominios CH2 y CH3 de IgGl, en donde el dominio de multimerización crea multimeros de las unidades de estradómeros .

En una modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradomero que comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio Fe que comprende una bisagra IgG2, que está directamente unida a un dominio de CH2 de IgGl y CH3 de IgGl en donde la bisagra IgG2 crea multímeros de las unidades de estradómeros . En una modalidad, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradomero es al menos 80% homologa a la sec. con núm. de ident.: 18. En una modalidad adicional, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradomero es al menos 90% homologa a la sec. con núm. de ident.: 18. Todavía en una modalidad adicional, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradomero es al menos 95% homologa a la sec. con núm. de ident. : 18. En aún otra modalidad, la secuencia de aminoácido de la unidad de estradomero es al menos 99% homologa a la sec. con núm. de ident.: 18. En una modalidad adicional, la secuencia líder (sec. con núm. de ident.: 1) se escinde de la proteína madura .

En una modalidad, la presente invención se relaciona con una unidad de estradomero que comprende un dominio Fe de IgGl directamente unido a un dominio de multimerización . En una modalidad, el dominio Fe de IgGl es al menos aproximadamente 80%, o al menos aproximadamente 90% o al menos aproximadamente 95% o al menos aproximadamente 99% homólogo a la sec. con núm. de ident . : 2. En otra modalidad, el dominio Fe de IgGl es al menos aproximadamente 80%, o al menos aproximadamente 90% o al menos aproximadamente 95% o al menos aproximadamente 99% homólogo a la sec. con núm. de ident.:19. En una modalidad adicional, el dominio Fe de IgGl contiene una o más mutaciones. En una modalidad, el dominio de multimerización es al menos aproximadamente 80%, o al menos aproximadamente 90% o al menos aproximadamente 95% o al menos aproximadamente 99% homólogo a la sec. con núm. de ident.:3. En otra modalidad, el dominio de multimerización es al menos aproximadamente 80%, o al menos aproximadamente 90% o al menos aproximadamente 95% o al menos aproximadamente 99% homólogo a la sec. con núm. de ident.:5. Todavía en otra modalidad, el dominio de multimerización es al menos aproximadamente 80%, o al menos aproximadamente 90% o al menos aproximadamente 95% o al menos aproximadamente 99% homólogo a la sec. con núm. de ident.:26. En una modalidad, el dominio de multimerización está directamente unido al terminal N del dominio Fe de IgGl. En otra modalidad, el dominio de multimerización está directamente unido al terminal C del dominio Fe de IgGl.

En una modalidad, la presente invención se relaciona con un estradómero aglomerado que comprende al menos dos monómeros de estradómero donde cada uno comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio Fe de IgGl el cual a su vez está directamente unido a un dominio de multimerización . En una modalidad adicional, el estradomero aglomerado se une a FcDRIIIa. En una modalidad adicional, el estradomero aglomerado se une a FcDRIIb.

En otra modalidad, la presente invención se relaciona con un método para modular una respuesta inmune a un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un estradomero aglomerado que comprende al menos dos monómeros de estradomero donde cada uno comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio Fe de IgGl el cual a su vez está directamente unido a un dominio de multimerización. En una modalidad adicional, el estradomero aglomerado se une a FcDRIIIa. En una modalidad adicional, el estradomero aglomerado se une a FcDRIIb. En una modalidad adicional, la modulación de las respuestas inmunes comprende la inducción de CD86 en células dendríticas inmaduras.

En una modalidad adicional, la modulación de las respuestas inmunes se asocia con la apoptosis selectiva de ciertas células B de memoria con una producción de anticuerpos disminuida. En una modalidad adicional, la modulación se asocia con la apoptosis selectiva de células B de memoria activadas con una producción de anticuerpos disminuida. En otra modalidad, modulación inmune puede ser la modulación de células NK que conducen a un aumento de la citotoxicidad celular dependiente del anticuerpo. En aún otra modalidad, la modulación de la respuesta inmune puede resultar en un aumento de las poblaciones celulares que expresan CD8beta y CDllc. En todavía otra modalidad, la modulación inmune puede llevar a una disminución de las citocinas inflamatorias o citocinas que están normalmente elevadas en enfermedades autoinmunes tales como la IL-6 e IL-8. En otra modalidad, la modulación inmune puede llevar a la activación de las células NKT y la secreción y clivaje del TGF-beta.

En una modalidad adicional, la presente invención se refiere a un método de tratamiento de una enfermedad inflamatoria o autoinmune en un sujeto en necesidad del mismo que comprende administrar una cantidad efectiva de un estradómero que comprende al menos dos unidades de estradómero donde cada una comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio Fe de IgGl el cual a su vez se une directamente a un dominio de multimeri zación o que alternativamente comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio de multimerización el cual a su vez está directamente unido a un dominio Fe de IgGl. En una modalidad adicional, la enfermedad inflamatoria es una enfermedad autoinmunitaria . En aún una modalidad adicional, la enfermedad autoinmunitaria se selecciona del grupo que consiste de artritis reumatoide, esclerosis múltiple, diabetes mellitus tipo I, tiroiditis autoinmune, púrpura trombocitopénica idiopática, anemia autoinmune, polineuropatia desmielinizante inflamatoria crónica, esclerodermia , lupus eritematoso sistémico, soriasis, enfermedad inflamatoria del intestino, uveitis autoinmune, vasculitis positiva ANCA, enfermedad celiaca, pénfigo, dermatopolimiositis , enfermedad de Goodpasture, miastenia gravis, enfermedad de Grave, enfermedad de Ka asaki, crisis de células falciformes y dermatitis atópica. En aún una modalidad adicional, la enfermedad autoinmunitaria se asocia con el transplante de un órgano de un donante a un receptor. Todavía en una modalidad adicional, la enfermedad autoinmune es una enfermedad que no se caracteriza típicamente como una enfermedad autoinmune pero en la cual las células del sistema inmune juegan un papel importante tales como la enfermedad de Alzheimer, la enfermedad de Parkinson, la enfermedad de Huntingdon, la osteopenia, y la osteoporosis .

En una modalidad adicional el estradómero se administra por vía intravenosa, subcutánea, oral, nasal, intraperitoneal, sublingual, bucal, transdérmica, por implante subcutáneo o subdérmico, o intramuscularmente . En una modalidad, el estradómero aglomerado se administra por vía intravenosa. Debido a la eficacia mejorada de los estradómeros de la presente invención, en algunas modalidades los estradómeros pueden administrarse a una dosis inferior por vía intravenosa comparado con las moléculas predecesoras y/o IVIG. En una modalidad, el estradómero aglomerado se administra por vía intravenosa a una dosis de aproximadamente 0.01 mg/Kg a aproximadamente 1000 mg/Kg IV. En una modalidad adicional, el estradómero aglomerado se administra a aproximadamente 0.1 mg/Kg a aproximadamente 100 mg/Kg IV. En aún una modalidad adicional, el estradómero aglomerado se administra a aproximadamente 0.5 mg/Kg a aproximadamente 50 mg/Kg IV. Todavía en una modalidad adicional, el estradómero aglomerado se administra a aproximadamente 1 mg/Kg a aproximadamente 25 mg/Kg IV. Todavía en una modalidad adicional, el estradómero aglomerado se administra a aproximadamente 5 mg/Kg a aproximadamente 15 mg/Kg IV. En una modalidad, el estradómero aglomerado se administra por vía subcutánea. Debido a la eficacia mejorada de los estradómeros de la presente invención, en algunas modalidades los estradómeros pueden administrarse a una dosis inferior por vía subcutánea comparado con las moléculas predecesoras y/o IVIG. En una modalidad, el estradómero aglomerado se administra por vía subcutánea a una dosis de aproximadamente 0.01 mg/Kg a aproximadamente 1000 mg/Kg SQ. En una modalidad adicional, el estradómero aglomerado se administra a aproximadamente 0.2 mg/Kg a aproximadamente 150 mg/Kg SQ. En aún una modalidad adicional, el estradómero aglomerado se administra a aproximadamente 0.5 mg/Kg a aproximadamente 80 mg/Kg SQ. Todavía en una modalidad adicional, el estradómero aglomerado se administra a aproximadamente 2 mg/Kg a aproximadamente 50 mg/Kg SQ. Todavía en una modalidad adicional, el estradómero aglomerado se administra a aproximadamente 5 mg/Kg a aproximadamente 30 mg/Kg SQ.

En una modalidad, el estradómero aglomerado se administra covalentemente fijado a un dispositivo implantable. En una modalidad, el estradómero aglomerado se fija a una sutura. En otra modalidad, el estradómero aglomerado se fija a un injertar o endoprótesis . En otra modalidad, el estradómero aglomerado se fija a una válvula cardíaca, un reemplazo de articulación ortopédico, o cabezal electrónico implantado. En otra modalidad, el estradómero aglomerado se fija a y se incrusta dentro de una matriz implantable. En una modalidad preferida, el estradómero aglomerado se fija a y se incrusta dentro de un hidrogel implantable. En una modalidad, el hidrogel está compuesto de dextrano, alcohol polivinílico, poliacrilato de sodio, o polímeros de acrilato. En una modalidad adicional, el estradómero aglomerado se administra fijado en un hidrogel con tamaños de poro lo suficientemente grande para permitir la entrada de las células inmunes para interactuar con el el estradómero aglomerado fijado y después retornar a la circulación. En una modalidad adicional, el tamaño de poro del hidrogel es 5 a 50 mieras. En una modalidad preferida, el tamaño de poro del hidrogel es 25 - 30 mieras.

En una modalidad adicional, el estradómero se administra antes, durante o después de la administración de uno o más more agentes terapéutico y/o farmacéuticos adicionales. En una modalidad adicional, el agente farmacéuticamente activo adicional comprende un esferoide; un fármaco biológico anti-autoinmune tal como un anticuerpo monoclonal, una proteina de fusión, o una anti-citocina ; un fármaco anti-autoinmune no biológico; un inmunosupreso ; un antibiótico; y un agente anti-viral; una citocina; o un agente de cualquier otra forma capaz de actuar como un inmuno-modulador. Todavía en una modalidad adicional, el esferoide es prednisona, prednisolona, cortisona, dexametasona, mometesona testosterona , estrógeno, oxandrolona, fluticasona, budesonide, beclametasona, albuterol, o levalbuterol . Todavía en una modalidad adicional, el anticuerpo monoclonal es infliximab, adalimumab, rituximab, tocilizumab, golimumab, ofatumumab, LY2127399, belimumab, veltuzumab, o certolizumab . Todavía en una modalidad adicional, la proteína de fusión es etanercept o abatacept. Todavía en una modalidad adicional, el fármaco biológico anti-citocina es anakinra. Todavía en una modalidad adicional, el fármaco anti-reumático no biológico es ciclofosfamida, metotrexato, azatioprina, hidroxicloroquina , leflunomide, minociclina, compuestos orgánicos de oro, fostamatinib, tofacitinib, etoricoxib, o sulfasalazina . Todavía en una modalidad adicional, el inmunosupresor es ciclosporina A, tacrolimus, sirolimus, micofenolato mofetil, everolimus, OKT3, antithimocito globulina, basiliximab, daclizumumab, o alemtuzumab. Todavía en una modalidad adicional, el estradómero se administra antes, durante o después de la administración de un agente quimioterapéutico . Todavía en una modalidad adicional, el estradómero y el agente quimioterapéutico adicional exhiben sinergia terapéutica cuando se administran juntos. En una modalidad, el estradómero se administra antes de la administración del agente terapéutico adicional. En otra modalidad, el estradómero se administra al mismo tiempo que la administración del agente terapéutico adicional. En aún otra modalidad, el estradómero se administra después de la administración del agente terapéutico adicional.

Todavía en otra modalidad, la invención se refiere a un método de tratamiento de una enfermedad infecciosa en un sujeto en necesidad del mismo que comprende al menos dos unidades de estradómero donde cada una comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio Fe de IgGl el cual a su vez se une directamente a un dominio de multimerización o que alternativamente comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio de multimerización el cual a su vez está directamente unido a un dominio Fe de IgGl. En aún otra modalidad, la enfermedad infecciosa es una infección bacteriana. En aún otra modalidad, la enfermedad infecciosa es una infección viral. En una modalidad adicional, la enfermedad infecciosa es sepsis viral o bacterina. En una modalidad adicional el estradómero aglomerado se administra por vía intravenosa, subcutánea, oral, intraperitoneal, sublingual, bucal, transdérmica , por implante subcutáneo o subdérmico, o intramuscularmente . En una modalidad, el estradómero aglomerado se administra por vía intravenosa. En una modalidad, el estradómero aglomerado se administra por vía intravenosa. En una modalidad, el estradómero aglomerado se administra a una dosis de aproximadamente 0.01 mg/Kg a aproximadamente 1000 mg/Kg. En una modalidad adicional, el estradómero aglomerado se administra a aproximadamente 0.1 mg/Kg a aproximadamente 100 mg/Kg. En aún una modalidad adicional, el estradómero aglomerado se administra a aproximadamente 0.5 mg/Kg a aproximadamente 50 mg/Kg. Todavía en una modalidad adicional, el estradómero aglomerado se administra a aproximadamente 1 mg/Kg a aproximadamente 25 mg/Kg. Todavía en una modalidad adicional, el estradómero aglomerado se administra a aproximadamente 5 mg/Kg a aproximadamente 15 mg/Kg.

En otra modalidad, el estradómero aglomerado se administra para tratar humanos, primates no humanos (por ejemplo, monos, babuinos, y chimpancé), ratones, ratas, bovinos, caballos, gatos, perros, cerdos, conejos, cabras, venados, ovejas, hurones, jerbos, conejillo de Indias, hámsters, murciélagos, aves (por ejemplo, pollos, pavos, y patos) , peces y reptiles con moléculas de estradómeros quiméricas o específicas para especies. En aún otra modalidad, el humano es un adulto o un niño. En aún otra modalidad, el estradómero aglomerado se administra para prevenir la enfermedad autoinmunitaria . En una modalidad adicional, el estradómero aglomerado se administra para prevenir las afecciones autoinmunes asociadas con vacunas en animales de compañía y ganado.

En aún otra modalidad, la presente invención se relaciona con un método para bloquear la unión no específica de los anticuerpos en un ensayo in vitro o ex vivo que comprende incubar tejido objetivo o células objetivo con una composición que comprende una cantidad eficaz de un estradómero aglomerado que comprende al menos dos unidades de estradómeros donde cada uno comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio Fe de IgGl el cual a su vez está directamente unido a un dominio de multimerización o alternativamente que comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio de multimerización el cual a su vez está directamente unido a un dominio Fe de IgGl. En una modalidad, los anticuerpos son anticuerpos monoclonales . En otra modalidad, los anticuerpos son anticuerpos policlonales . En una modalidad, el ensayo in vitro o ex vivo es inmunohistoquímica, citometría de flujo, membrana de Western o un ensayo inmunofluorescente . En una modalidad adicional, el estradómero aglomerado es específico para especies para las especies de tejido o células objetivo.

En aún otra modalidad, la presente invención se relaciona con un método para reducir los niveles de endotoxina en una composición con una cantidad eficaz de un estradómero aglomerado que comprende al menos dos unidades de estradómeros donde cada una comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio Fe de IgGl el cual a su vez está directamente unido a un dominio de multimerización o alternativamente que comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio de multimerización el cual a su vez está directamente unido a un dominio Fe de IgGl. En una modalidad adicional, el estradómero aglomerado forma complejos con la endotoxina en la composición. En todavía una modalidad adicional, el método incluye eliminar el estradómero en complejo con la endotoxina de la composición. En una modalidad, el estradómero en complejo con la endotoxina se elimina por filtración de la composición. En una modalidad preferida, la composición es una composición farmacéutica .

En una modalidad, la presente invención se relaciona con un método para producir un estradómero aglomerado que comprende expresar una unidad de estradómeros que comprende una secuencia líder directamente unida a un dominio Fe de IgGl el cual a su vez está directamente unido a un dominio de multimerización o una secuencia líder directamente unida a un dominio de multimerización el cual a su vez está directamente unido a un dominio Fe de IgGl en donde el dominio de multimerización crea multímeros de las unidades de estradómeros a partir de una célula transfectada que comprende clonar la secuencia de ADN que codifica los estradómeros de la sec. con núm. de ident.:4, sec. con núm. de ident.:8, sec. con núm. de ident.: 9, sec. con núm. de ident . : 10 o sec. con núm. de ident.: 18 en un vector de expresión, transfectar el vector de expresión en un huésped bacteriano, aislar el ADN plásmido que contiene el ADN que codifica el estradómero de la sec. con núm. de ident.: 4, sec. con núm. de ident.:8, sec. con núm. de ident . : 9, sec. con núm. de ident.: 10 o sec. con núm. de ident.: 18 del cultivo bacteriano, linealizar el ADN plásmido que contiene el ADN que codifica el estradómero de la sec. con núm. de ident.: 4, sec. con núm. de ident.: 8, sec. con núm. de ident.: 9, sec. con núm. de ident.: 10 o sec. con núm. de ident.: 18 transfectar el ADN linealizado en células de mamífero, expandir las células positivamente transfectadas para obtener un concentrado de células establemente transectadas, cosechar la proteína del estradómero del medio, y purificar la proteína del estradómero, en donde la proteína del estradómero no contiene secuencias externas. En una modalidad, el vector de expresión contiene un marcador seleccionable . En una modalidad adicional, el marcador seleccionable es un gen de resistencia a antibióticos. En aún una modalidad adicional, el gen de resistencia a antibióticos es un gen de resistencia a la neomicina. En una modalidad, las células de mamífero son células CHO, células HEK293, células PER.C6, células CAP u otras células de mamífero comercialmente relevantes usadas para la producción de proteínas. En una modalidad, la proteína del estradómero se purifica por cromatografía de afinidad. En una modalidad adicional, la proteína se purifica además por filtración de gel. En una modalidad adicional, la proteína se purifica además por cromatografía de intercambio de iones. En una modalidad adicional la proteína se purifica además por cromatografía de interacción hidrófoba.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 es un esquemático de los estradómeros preferidos de la presente invención. La Figura la es un esquemático del estradómero G045c; la Figura Ib es un esquemático del estradómer G045old; la Figura le es un esquemático del estradómero G046; la Figura Id es un esquemático del estradómero G019; la Figúrale es un esquemático del estradómero G028, la Figura lf es un esquemático del estradómero G051, . la figura lg es un esquemático del estradómero G089 y la Figura lh es un esquemático del estradómero G096.

La Figura 2 A) es un gel de proteína que muestra las diferencias en la capacidad de multimerización entre compuestos estradómeros de primera generación y los compuestos estradómeros directos naturalmente enlazados de la presente invención. B) es una comparación entre la formación de multímero/monómero entre compuestos estradómeros de primera generación y los compuestos estradómeros directos naturalmente enlazados de la presente invención.

La Figura 3 muestra el mayor efecto de los estradómeros directos naturalmente enlazados (M045c) de la presente invención en comparación con aquel del compuesto estradomero previo que contiene la secuencia extraña ( 045old) en la severidad de la artritis inducida por colágeno.

La Figura 4 muestra el efecto sinérgico que tienen los compuestos estradómeros directos naturalmente enlazados de la presente invención cuando se administran con prednisolona en una artritis inducida por colágeno.

La Figura 5 muestra la actividad de unión aumentada de los compuestos M046, M045, M019 y M028 de la presente invención a FcDRIIIa, FcDRIIb y SIGN-R1 en comparación a los controles IgG2a.

La Figura 6 muestra la actividad de unión aumentada de los compuestos de la presente invención a (a) FcDRIIb y FcDRIIIa y (b) SIGN-R1. M045 Fl es una fracción del multimero de más alto peso molecular del estradomero mientras M045 F2 es la fracción de más bajo peso molecular del multimero del estradomero. M045 F3 es la fracción homodimero del estradomero.

La Figura 7 muestra el efecto del estradomero directo naturalmente enlazado 045c en la severidad de la púrpura trombocitopenia idiopática (ITP).

La Figura 8 muestra que los estradómeros bloquean más efectivamente la unión de anticuerpos anti-FcyR a FcyRs en relación al control de Fe de IgGl.

La Figura 9 muestra el efecto de los estradomeros enlazados naturalmente M045c, M019, M028, M046 y M051 en la severidad de la artritis inducida por colágeno en un modelo de ratón.

La Figura 10 A muestra el aumento de la unión del estradómero G075 al FcDRIIIa y la disminución de la unión del estradómero G075 al FcDRIIa y FcDRIIb. B muestra el aumento de la afinidad de unión del estradómero G076 al FcDRIIa y el FcDRIIb y la disminución de la afinidad de unión del estradómero G076 al FcDRIIIa.

La Figura 11 muestra el efecto de 051 en comparación a los controles IVIg y albúmina en (A) la pérdida de peso asociada con la neuritis autoinmune experimental en ratas (EAN) ; (B) puntuación clínica en ratas EAN; (C) amplitud de la cadera en ratas EAN; (D) amplitud del tobillo en ratas EAN; y (E) la velocidad de conducción del nervio motor en ratas EAN.

La Figura 12 muestra el efecto de M045c en comparación a los controles IVIg y albúmina en (A) pérdida de peso asociada con la neuritis autoinmune experimental en ratas (EAN) ; (B) puntuación clínica en ratas EAN; (C) amplitud de la cadera en ratas EAN; (D) amplitud del tobillo en ratas EAN; y (E) la velocidad de conducción del nervio motor en ratas EAN.

La Figura 13 muestra el mayor efecto de los estradomeros naturalmente enlazados M075 (A) , M096 (B) y M098 (C) pero no M076 (A) de la presente invención en comparación con el del vehículo control y el control positivo M045c en la severidad de la artritis inducida por colágeno.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION La aproximación al diseño molecular racional para los compuestos de reemplazo de la hlVIG que se describen en la presente descripción incluyen la creación recombinante y/o bioquímica de biomimético ( s ) biológicamente activos los cuales son sorprendentemente más eficientes en la multimerización y consecuentemente en la unión a los receptores de Fe gamma que moléculas previamente descritas que pretendían alcanzar esta meta. Los compuestos de remplazo tienen utilidad para el tratamiento, por ejemplo, de enfermedades autoinmunes, enfermedades inflamatorias, cáncer y sepsis. Debido a afinidad de unión superior a los receptores gamma de Fe en relación con la inmunoglobulina nativa, las composiciones tienen además la utilidad como reactivos de bloqueo de Fe en inmunoensayos basados en anticuerpos y en la eliminación de endotoxina de las composiciones farmacéuticas y de laboratorio. Cada modalidad se describe en detalles más abajo junto con las modalidades ilustrativas específicas.

Como se usa en la presente, el uso de la palabra "un" o "una" cuando se usa en conjunto con el término "que comprende" en las reivindicaciones y/o la descripción puede significar "uno," pero es consistente además con el significado de "uno o más," "al menos uno," y "uno o más de uno" .

Como se usa en la presente, los términos "biomimético" , "molécula biomimética" , "compuesto biomimético" y términos relacionados se refieren a un compuesto fabricado por el hombre que imita las funciones de otro compuesto, tal como hlVIG concentradas, un anticuerpo monoclonal, o el fragmento Fe de un anticuerpo. Biomiméticos "biológicamente activos" son compuestos que poseen actividades biológicas que son las mismas o similares a las de sus contrapartes de origen natural. Por "de origen natural" se entiende una molécula o porción de la misma que se encuentra normalmente en un organismo. Por "de origen 'natural" además se entiende sustancialmente de origen natural. Biomiméticos "inmunológicamente activos" son biomiméticos que exhiben una actividad inmunológica igual o similar a la de las moléculas inmunológicamente activas de origen natural, tales como anticuerpos, citocinas, interleucinas y otras moléculas inmunológicas conocidas en la materia. En modalidades preferidas, los biomiméticos de la presente invención son estradómeros , como se define en la presente descripción.

Por "directamente enlazado" se entiende dos secuencias conectados una a la otra sin intervenciones o secuencias extrañas, por ejemplo, sitios de reconocimiento de enzimas de restricción o fragmentos de clonación. El experto en la materia entenderá que "directamente enlazado" abarca la adición o eliminación de aminoácidos mientras la capacidad de multimerización no se afecte sustancialmente .

Por "homólogo" se entiende la identidad sobre la secuencia completa de una secuencia dada de ácidos nucleicos o aminoácidos. Por ejemplo, por "80% homólogo" se entiende que una secuencia dada comparte aproximadamente 80% de identidad con la secuencia reivindicada y puede incluir inserciones, deleciones, sustituciones, y desplazamiento del marco. El experto en la materia entenderá que deben realizarse los alineamientos de secuencia para tomar en cuenta las inserciones y deleciones para determinar la identidad de toda la longitud de una secuencia.

Los biomiméticos inmunológicamente activos de la presente invención se diseñan para poseer una o más actividades de inmuno modulación del dominio Fe de IgG y tienen al menos (i) un primer dominio Fe capaz de unirse a FcRn, DC-SIGN, SIGN-R1 y/o un FcDR que incluye FcDRI, FcDRII, FcDRIII y FcDRIV, y (ii) un segundo dominio Fe capaz de unirse a FcRn, DC-SIGN, SIGN-Rl y/o un FcDR, que incluye FcDRI, FcDRII, FcDRIII y FcDRIV. Específicamente, los compuestos inmunológicamente activos de la presente invención son multímeros de homodímeros . Cada homodímero posee la capacidad de unirse a FcRn, DC-SIGN, SIGN-Rl y/o y FCDR. Así, cuando se multimerizan, los biomiméticos inmunológicamente activos contienen al menos dos homodímeros donde cada uno posee la capacidad de unirse a FcRn, DC-SIGN, SIGN-Rl y/o y FCDR.

Los siguientes párrafos definen los bloques de construcción de los biomiméticos de la presente invención, tanto estructural como funcionalmente , y después definen los biomiméticos en si mismos. Sin embargo, primero es útil destacar, como se indicó anteriormente, que cada uno de los biomiméticos de la presente invención tiene al menos dos dominios Fe. Como mínimo, un dominio de Fe es un polipéptido dimérico (o una región dimérica de un polipéptido más largo) que comprende dos péptidos, cadenas o brazos (monómeros) que se asocian para formar un sitio de unión funcional para el receptor de FcD. Por lo tanto, la forma funcional de los fragmentos y dominios individuales que se discuten en la presente descripción generalmente existen en una forma dimérica (o multimérica) . Los monómeros de los fragmentos y dominios individuales que se discuten en la presente descripción son las simples cadenas o brazos que se deben asociar con una segunda cadena o brazo para formar una estructura dimérica funcional.

FRAGMENTO FC "Fragmento Fe" es un término de la técnica que se usa para describir la región de proteina o estructura plegada de la proteina que se encuentra rutinariamente en el terminal carboxilo de las inmunoglobulinas . El fragmento puede aislarse a partir de del fragmento Fab de un anticuerpo monoclonal a través del uso de la digestión enzimática, por ejemplo digestión de papaina, el cual es un proceso incompleto e imperfecto (ver Mihaesco C y Seligmann M. Papain Digestión Fragments Of Human IgM Globulins. Journal of Experimental Medicine, Vol 127, 431- 453 (1968)). En conjunto con el fragmento Fab (que contiene el dominio de unión al antigeno) el fragmento Fe constituye el holo-anticuerpo, que significa aquí el anticuerpo completo. El fragmento Fe consiste de una porción terminal carboxi de la cadena pesada del anticuerpo. Cada uno de las cadenas en un fragmento Fe es de entre aproximadamente 220-265 aminoácidos en longitud y las cadenas frecuentemente se enlazan a través de un enlace disulfuro. El fragmento Fe frecuentemente contiene uno o más plegamientos estructurales o subdominios funcionales independientes. En particular, el fragmento Fe abarca un dominio Fe, definido en la presente descripción como la mínima estructura que se une a un receptor de FcD. Un fragmento Fe aislado comprende dos monomeros de fragmentos Fe (por ejemplo, las dos porciones terminales carboxi de las cadenas pesadas del anticuerpo; más aun definidas en la presente descripción) que se dimerizan. Cuando dos monomeros de fragmentos Fe se asocian, el fragmento Fe resultante tiene actividad de unión al receptor de FcD.

FRAGMENTO PARCIAL FC Un "fragmento parcial Fe" es un dominio que comprende menos del fragmento Fe entero de un anticuerpo, el cual todavía retiene suficiente estructura para tener la misma actividad que el fragmento Fe, lo que incluye la actividad de unión al receptor de FcQ. Un fragmento parcial Fe puede por lo tanto carecer de parte o toda la región visagra, parte o todo el dominio CH2, parte o todo el dominio CH3, y/o parte o todo el dominio CH4, en dependencia del isotipo del anticuerpo a partir del cual se deriva el fragmento parcial Fe. Un ejemplo de un fragmento parcial Fe incluye una molécula que comprende las regiones visagra superior, núcleo e inferior más el dominio CH2 de IgG3 (Tan, LK, Shopes, RJ, Oi, VT and Morrison, SL, Influence of the hinge región on complement activation, CIq binding, and segmental flexibility in chimeric human inmunoglobulinas, Proc Nati Acad Sci USA. 1990 Enero; 87(1): 162-166). Así, en este ejemplo el fragmento parcial Fe carece del dominio CH3 presente en el fragmento Fe de IgG3. Otro ejemplo de un fragmento parcial Fe incluye una molécula que comprende los dóminos CH2 y CH3 de IgGl.En este ejemplo, el fragmento parcial Fe carece del dominio bisagra presente en IgGl. Los fragmentos parciales Fe están compuestos de dos monómeros del fragmento parcial Fe. Como se define más aun en la presente descripción, cuando dos de tales monómeros de fragmentos parciales Fe se asocian, el fragmento parcial Fe resultante tiene actividad de unión al receptor de FcD.

DOMINIO FC Como se usa en la presente descripción, "dominio Fe" describe la mínima región (en el contexto de un polipéptido más largo) o la menor estructura plegada de proteína (en el contexto de una proteína aislada) que se puede unir a o ser unida por un receptor de Fe (FcR) . En ambos un fragmento Fe y un fragmento parcial Fe, el dominio Fe es la mínima región de unión que permite la unión de la molécula a un receptor de Fe. Mientras un dominio Fe se puede limitar a un polipéptido discreto que se une a un receptor de Fe, además estará claro que un dominio Fe puede ser parte o todo de un fragmento Fe, así como parte o todo de un fragmento parcial Fe. Cuando se usa el término "dominio Fe" en esta invención se reconocerá por un técnico con experiencia que significa más de un dominio Fe. Un dominio Fe comprende dos monómeros de dominios Fe. Como se define más aún en la presente descripción, cuando dos de tales monómeros de dominios Fe se asocian, el dominio de Fe resultante tiene actividad de unión al receptor de Fe. Asi un dominio · Fe es una estructura dimérica que se puede unir a un receptor de Fe.

DOMINIO PARCIAL FC Como se usa en la presente descripción, "dominio parcial Fe" describe una porción de un dominio Fe. Dominios parciales Fe incluyen los dominios de la región constante de la cadenas pesadas individuales (por ejemplo, CH1, CH2, CH3 y CH4) y regiones bisagra de las diferentes clases y subclases de inmunoglobulinas . Asi, los dominios parciales Fe humanos de la presente invención incluyen los dominios CH1 de IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgAl, IgA2, IgD e IgE, los dominios CH2 de IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgAl, IgA2, IgD e IgE, los dominios CH3 de IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgAl, IgA2, IgD e IgE, los dominios CH4 de IgM e IgE, y las regiones bisagra de IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgAl, IgA2, IgD e IgE. Los correspondientes dominios parciales Fe en otras especies dependerán de las inmunoglobulinas presentes en aquellas especies y la denominación de las mismas. Preferentemente, los dominios parciales Fe de la presente invención incluyen los dominios CH1, CH2 y bisagra de IgGl y el dominio bisagra de IgG2. El dominio parcial Fe de la presente invención puede comprender además una combinación de más de uno de estos dominios y bisagras. Sin embargo, los dominios parciales Fe individuales de la presente invención y combinaciones de los mismos carecen de la capacidad de unir FcDR. Por lo tanto, los dominios parciales Fe y combinaciones de los mismos comprenden menos de un dominio Fe. Los dominios parciales Fe pueden enlazarse juntos para formar un péptido que tiene actividad de unión al receptor de Fcd, y asi formar un dominio Fe. En la presente invención, los dominios parciales Fe se usan con dominios Fe como los bloques de construcción para crear los biomiméticos de la presente invención, como se define en la presente descripción. Cada dominio parcial Fe comprende dos monómeros de dominios parciales de Fe. Cuando dos de tales monómeros de dominios parciales de Fe se asocian, se forma un dominio parcial Fe.

Como se indica anteriormente, cada uno de los fragmentos Fe, fragmentos parciales Fe, dominios Fe y dominios parciales Fe son proteínas o dominios diméricos. Así, cada una de estas moléculas comprende dos monómeros que se asocian para formar la proteína o dominio diméricos. Mientras que las características y actividad de las formas homodiméricas se discutió anteriormente los péptidos monoméricos se discuten como sigue.

MONÓ ERO DE FRAGMENTO FC Como se usa en la presente, un "monómero de fragmento Fe" es una proteína de cadena sencilla que, cuando se asocia con otro monómero de fragmento Fe, comprende un fragmento Fe. El monómero de fragmento Fe es así la porción carboxi terminal de una de las cadenas pesadas del anticuerpo que constituyen el fragmento Fe de un holo-anticuerpo (por ejemplo, la porción contigua de la cadena pesada que incluye la región bisagra, el dominio CH2 y el dominio CH3 de IgG) . En una modalidad el monómero de fragmento Fe comprende, como mínimo, una cadena de una región bisagra (un monómero bisagra) , una cadena de un dominio CH2 (un monómero dominio CH2) y una cadena de un dominio CH3 (un monómero dominio CH3), enlazados contiguamente para formar un péptido. En otra modalidad el monómero de fragmento Fe comprende, al menos una cadena de una región bisagra, una cadena de · un dominio CH2, una cadena de un dominio CH3, y una cadena de un dominio CH4 (un monómero de dominio CH4), enlazado contiguamente para formar un péptido. En una modalidad, los dominios CH2, CH3 y bisagra son de diferente isotipo. En una modalidad particular, el monómero de fragmento Fe contiene un dominio bisagra IgG2 y dominios CH2 y CH3 de IgGl .

"MONÓMERO DE DOMINIO FC" Como se usa en la presente descripción, "monómero de dominio Fe" describe la proteina de simple cadena que, cuando se asocia con otro monómero de dominio Fe, comprende un dominio Fe que puede unir un receptor de FcD. La asociación de dos monómeros de dominios Fe crea un dominio Fe. Un monómero de dominio Fe solo, que comprende solamente un lado de un dominio Fe, no puede unir un receptor de FcD. Los monómeros de dominios Fe de la presente invención no contienen secuencias extrañas como hicieron los monómeros de dominios Fe previamente descritos (Ver, por ejemplo, documento WO 2008/151088, Figuras 17 y 18). En lugar de esto, los monómeros de dominios Fe de la presente invención (sec. con núm. de ident . : 2) se enlazan directamente a la secuencia líder (sec. con núm. de ident.: 1) en un terminal ( por ejemplo, el terminal N del monómero de Fe) y al dominio de multimerización (sec. con núm. de ident.: 3) en el otro terminal (por ejemplo, el terminal C del monómero de Fe) . El monómero de estradómero resultante de sec. con núm. de ident .: 4 se denomina en la presente descripción G045c. En otra modalidad, el monómero de dominio Fe comprende un dominio bisagra de IgG2 y los dominios CH2 y CH3 de IgGl se enlazan directamente a la secuencia líder (sec. con núm. de ident. :1) en el terminal N. El monómero de estradómero resultante de sec. con núm. de ident.:18 se denomina en la presente descripción G051. Alternativamente, el dominio de mutimerización (sec. con núm. de ident.:3) se puede colocar al terminal amino del monómero de dominio Fe (sec. con núm. de ident.:2). El monómero de estradómero resultante de sec. con núm. de ident.:8 se denomina en la presente descripción G019. Alternativamente, el dominio de mutimerización puede comprender la sec. con núm. de ident . : 5 en lugar de la sec. con núm. de ident.: 3 y se puede colocar al terminal carboxi del monómero de dominio Fe, lo que resulta en la sec. con núm. de ident.: 10 o se puede colocar al terminal amino del monómero de dominio Fe, lo que resulta en la sec. con núm. de ident.: 9. Estos estradómeros se denominan en la presente descripción G046 y G028, respectivamente.

MONÓMERO DE DOMINIO PARCIAL FC Como se usa en la presente descripción, "monómero de dominio parcial Fe " describe la proteina de simple cadena que, cuando se asocia con otro monómero de dominio parcial Fe, comprende un dominio parcial Fe. La asociación de dos monómeros de dominio parcial Fe crea un dominio parcial Fe.

ESTRADÓMEROS En modalidades particulares, los biomiméticos de la presente invención incluyen estradómeros. Los estradómeros son compuestos biomiméticos capaces de unir uno o más receptores de Fe, preferentemente dos o más receptores de FcD, y con mayor preferencia que demuestren una unión significativamente mejorada en relación a un dominio Fe y con la máxima preferencia que demuestren una disociación lenta característica de avidez. En una modalidad preferida, los estradomeros de la presente invención se usan para unir FcRn, DC-SIGN, SIGN-R1 y/o receptores de FcD en células efectoras tales como las células NK y células dendriticas inmaduras y otras células derivadas de monocitos. En una modalidad, los receptores de FcD son receptores de FcD de baja afinidad. Un estradómero puede tener cuatro conformaciones físicas diferentes: serie, aglomerado, núcleo o fragmento Fe. Los estradomeros de la presente invención son preferentemente estradomeros aglomerados. Como será evidente, los fragmentos Fe, fragmentos parciales Fe, dominios Fe y dominios parciales Fe que se discuten anteriormente se usan en la construcción de varias conformaciones de estradómero. Más aun, son los monómeros de dominio Fe individuales y los monómeros de dominio parcial Fe, que se discutieron también anteriormente, los que se producen primero, y después se asocian por si mismos para formar estructuras diméricas que son los estradomeros de la presente invención.

Como se usa en la presente descripción, un "dímero de estradomeros" es una forma específica de un estradómero, compuesta solamente por dos monómeros de estradomero. En una modalidad, los dímeros de estradómeros son moléculas que se forman por auto-agregación de monómeros de estradómeros relevantes. En otra modalidad, los monómeros de estradómeros en los dimeros de estradómeros se enlazan físicamente a través de un enlace inter-monómero de estradomero, como se define en la presente descripción. Un "estradomero multimérico" se compone de tres o más estradómeros, que se forman ya sea por auto-agregación de monómeros de estradomero o a través de un enlace inter-monómero de estradomero, como se define en la presente descripción.

MONÓMERO DE ESTRADÓMERO Como se usa en la presente descripción, el término "monómero de estradomero" o "unidad de estradomero" se refiere a una molécula de péptido sencilla, contigua que, cuando se asocia con al menos un segundo monómero de estradomero, forma un polipéptido que comprende al menos dos dominios Fe. Aunque en modalidades preferidas los estradómeros aglomerados pueden comprender dos monómeros de estradomero asociados, un estradomero aglomerado puede además contener tres o más monómeros de estradomero. Los monómeros de estradomero se pueden asociar para formar estradómeros por enlaces inter-monómero de estradomero o pueden formar estradómeros a través de la auto-agregación.

Un monómero de estradomero puede tener una secuencia de aminoácidos que formará uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, .once, doce, trece, catorce o más dominios Fe cuando se asocian con otro monómero de estradomero para formar un estradomero. Un monómero de - estradomero puede además tener una secuencia de aminoácidos que formará uno, dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce, trece, catorce o más dominios parciales Fe cuando se asocia con otro monómero de estradomero para formar un estradomero.

Las regiones de monómeros de estradomero que formarán dominios Fe y dominios parciales Fe en el contexto de un estradomero pueden simplemente arreglarse a partir del terminal carboxi al terminal amino de regiones sucesivas de la molécula de monómero de estradomero. El arreglo de los monómeros de dominio Fe y los monómeros de dominio parcial Fe particulares que comprenden un monómero de estradómerono es critico. Sin embargo, el arreglo debe permitir la formación de dos dominios Fe funcionales a partir de la asociación de dos monómeros de estradomero. En una modalidad preferida, el estradomero de la presente invención contiene un enlace directo entre el terminal N del monómero Fe de IgGl (sec. con núm. de ident.:2) y el terminal C del péptido lider (sec. con núm. de ident.rl) el terminal C de IgGl Fe (sec. con núm. de ident.:2) el terminal N de la bisagra IgG2 del dominio de multimeri zación (sec. con núm. de ident.:3) o la cremallera de isoleucina (sec. con núm. de ident.:5) o el dominio GPP (sec. con núm. de ident.: 26) para formar el estradómero G045c de sec. con núm. de ident.: 4, el estradómero G046 de' sec. con núm. de ident.: 10, o el estradómero G089 de sec. con núm. de ident.: 27, respectivamente (Tabla 1) . En otra modalidad preferida, el estradómero de la presente invención contiene un enlace directo entre el terminal C del péptido líder (sec. con núm. de ident. :1) y el terminal N de la bisagra IgG2 del dominio de multimerización (sec. con núm. de ident.: 3), cremallera de isoleucina (sec. con núm. de ident.: 5) o el dominio GPP (sec. con núm. de ident.: 26) y un enlace directo entre el terminal C del dominio de multimerización (sec. con núms . de ident.: 3,5 ó 26) y el terminal N de Fe de IgGl para formar el estradómero G019 de sec. con núm. de ident.: 8, el estradómero G028 de sec. con núm. de ident.: 9 o el estradómero G096 de sec. con núm. de ident.: 28, respectivamente (Tabla 1) o un enlace directo entre el péptido líder (sec. con núm. de ident.: 1) y el terminal N del dominio de multimerización (sec. con núm. de ident.: 3) y el enlace directo entre el terminal C del dominio de multimerización (sec. con núms. de ident.: 3) y el terminal N del dominio parcial Fe de IgGl que contiene las porciones CH2 y CH3 de IgGl para formar el estradomero G051de sec. con núm. de ident.: 18 (Tabla 1).

TABLA 1 Como un ejemplo esclarecedor, el técnico con experiencia entenderá que las moléculas de estradomero de la presente invención se pueden construir al preparar una molécula de polinucleótido que codifica varias combinaciones de monómeros de dominio Fe y monómeros de dominio parcial Fe, cada uno con o sin mutaciones dirigidas seleccionadas, pero con una combinación que formará un mínimo de dos monómeros de dominio Fe. Tal molécula de polinucleótido, por ejemplo los polinucleótidos que codifican los estradomeros de sec. con núms . de ident.: 4,8, 9, 10 ó 18, pueden insertarse en un vector de expresión, el cual puede usarse para transformar una población de bacterias o transfectar una población de células de mamífero. Los monómeros de estradomeros pueden producirse después cultivando las bacterias transformadas o células de mamífero transíectadas bajo condiciones de cultivo adecuadas. Por ejemplo, una línea celular clonal que continúa un concentrado de células establemente transformadas se puede lograr al seleccionar las células con geneticina/G418. Alternativamente, las células pueden transfectarse transitoriamente con ADN que codifica el estradómero de la presente invención, es decir G045c (sec. con núm. de ident. :4), G019 (sec. con núm. de ident.: 8), G028 (sec. con núm. de ident.: 9) G046 (sec. con núm. de ident.: 10) o G051 (sec. con núm. de ident.: 18) bajo el control del promotor CMV. Los monómeros de estradómero expresados pueden después formar estradomeros funcionales a partir de ya sea la auto-agregación de los monómeros de estradómero o la asociación de monómeros de estradómero por medio del uso de enlaces inter-monómero de estradómero. Los estradomeros expresados se pueden purificar a partir del medio de cultivo celular por cromatografía de afinidad por medio del uso de, por ejemplo, de columnas de Proteina A o Proteina G. La presente invención abarca ambos estradómeros formados a través de la asociación de monómeros de estradómero que tienen secuencias de aminoácidos idénticas, monómeros de estradómero que tienen secuencias de aminoácidos sustancialmente similares, o monómeros de estradómero que tienen secuencias disímiles. En la última modalidad la secuencia de aminoácidos de los monómeros de estradómero que comprenden un estradómero necesitan solamente ser de tal similitud que se formen dos o más sitios de receptor de FcDR funcionales .

Sorprendentemente, el G045c (sec. con núm. de ident.:4) producido por los métodos de la presente invención que contiene las secuencias reivindicadas de la secuencia líder (sec. con núm. de ident.:l) directamente unida al terminal N de Fe de IgGl (sec. con núm. de ident.:2) la cual en cambio se enlaza directamente a través de su terminal al dominio de multimerización de la bisagra de IgG2 (sec. con núm. de ident.:3) lleva a la formación de multímeros de un orden más alto que el observado con las moléculas predecesoras que contenían secuencias extrañas que no se pensó previamente fueran de importancia funcional, tales como sitios de restricción en el monómero de Fe de IgGl, como se muestra en sec. con núms. de ident.: 6 y 7. De hecho, casi 74% de la preparación del estradómero G045c resultante contiene multímeros mientras que sólo aproximadamente 26% de la composición contiene monómeros . Esto es en contraste a las preparaciones que contienen las moléculas con las secuencias externas . Estas preparaciones contienen sólo aproximadamente 27% de multímeros y 72% de la composición está presente como monómeros. Además, los multímeros de orden superior producidos por los monómeros del estradómero de la sec. con núm. de ident.: 4 tuvieron sorprendentemente una eficacia superior cuando se compararon con los estradómeros que contenían la secuencia externa antigua previamente descritos. Por lo tanto, en una modalidad de la presente invención, el dominio de multimerización crea multímeros de orden superior de las unidades de estradómeros. Todavía en una modalidad adicional, al menos aproximadamente 35% de la composición de estradómero resultante contiene multímeros de la unidad de estradómeros. Todavía en una modalidad adicional, al menos aproximadamente 55% de la composición de estradómero resultante contiene multímeros de la unidad de estradómeros. Todavía en una modalidad adicional, al menos aproximadamente 65% de la composición de estradómero resultante contiene multímeros de la unidad de estradómeros. Todavía en una modalidad adicional, al menos aproximadamente 70% de la composición de estradómero resultante contiene multimeros de la unidad de estradómeros . Todavía en una modalidad adicional, al menos aproximadamente 75% de la composición de estradómero resultante contiene multimeros de la unidad de estradómeros .

Como se indicó anteriormente, un dominio Fe puede definirse funcionalmente por su capacidad de unirse los receptores FcRn, DC-SIGN, SIGN-R1 y/o un receptor FcD. Los compuestos de la presente invención se unen a receptores cognados que incluyen, FcDRIIIa, FcDRIIb y/o SIGN-R1 con mucha mayor afinidad que los controles de gG2a (Figuras 5 y 6) . Como un resultado, la secuencia de aminoácidos particular de un dominio Fe variará en base a los dominios parciales Fe que comprende el dominio Fe.. Sin embargo, en una modalidad de la presente invención el dominio Fe comprende la región bisagra y un dominio CH2 de una molécula de inmunoglobulina . En una modalidad preferida adicional, el dominio Fe comprende la región bisagra, un dominio CH2 y dominio CH3 de una molécula de inmunoglobulina. En una modalidad adicional, el dominio Fe comprende la región bisagra, un dominio CH2, dominio CH3 y dominio CH4 de una molécula de inmunoglobulina. En aún otra modalidad, el dominio Fe comprende la región bisagra, un dominio CH2 y dominio CH4 de una molécula de inmunoglobulina. En una modalidad preferida adicional, . el dominio Fe comprende un dominio CH2 y dominio CH3. En una modalidad preferida, el dominio Fe contiene la bisagra, dominio CH2 y CH3 de IgGl (sec. con núm. de ident.:2). En otra modalidad preferida, el dominio Fe contiene los dominios CH2 y CH3 de IgGl (sec. con núm. de ident . : 19) .

Enlace inter-monómeros de estradomero Un enlace separado que se encuentra en los compuestos biomiméticos de la presente invención es el "enlace inter-monómeros de estradomero" que ocurre entre dos o más monómeros de estradomero individuales que comprenden los estradómeros de la presente invención. Mientras los dominio de enlace son secuencias de aminoácidos cortas que sirven para enlazar uno al otro los monómeros de dominios Fe y monómeros de dominios parciales de Fe que comprenden monómeros de estradomero individuales del compuesto biomimético, el enlace inter-monómero de estradomero sirve para unir dos o más monómeros de estradomero individuales que comprenden el compuesto biomimético. El enlace inter-monómero de estradomero puede ser cualquier enlace capaz de asociar establemente los monómeros de estradomero individuales. En algunas modalidades, el enlace inter-monómero de estradomero puede ser un enlace covalente entre los monómeros de estradomero. Alternativamente, el enlace inter-monómero de estradomero entre monómeros de estradomero puede ser por entrecruzamiento químico directo. En modalidades preferidas, las estructuras de los monómeros de estradomero toman ventaja de las propiedades de auto-agregación naturales entre monómeros de dominio Fe para crear estradómeros auto-agregados. En ciertas de tales modalidades, la auto-agregación ocurre sin enlaces covalentes por puente disulfuro que se encuentran normalmente en la naturaleza. Sin estar atados por la teoría, la , IgGl intacta, por ejemplo, tiene 2 enlaces cisteína en la región bisagra (Dorai H. Role of inter-heavy and light chain disulfide bonds in the effector functions of human inmunoglobulina IgGl. Molecular Immunology. 29;12, 1992,1487-1491; Meulenbroek AJ y Zeijlemaker P. Human IgG Subclasses: Useful diagnostic markers for immunocompetence . ISBN 90-5267-011-0) mientras que los dominios bisagra IgGl, CH2 de IgGl, y CH3 de IgGl de G045 no mostraron enlaces intermonómeros ; en G045 todos los enlaces intermonómeros ocurren en el terminal C del dominio bisagra IgG2. En otras de tales modalidades se forman enlaces disulfuro entre los monómeros de estradomero individuales para formar los estradómeros. Los enlaces disulfuro se forman entre residuos de cisteína de los monómero de dominio Fe que comprenden las moléculas biomiméticas, por medio del uso ya sea de residuos de cisteína que ocurren en la secuencia natural del monómero de dominio Fe o residuos de cisteina que se incorporan en un monómero de dominio Fe por mu.tagénesis dirigida. Tales propiedades de auto-agregación se pueden usar además para formar enlaces inter-monómero de estradómero entre monómeros de estradómero individuales en multimeros de estradómeros . En una modalidad preferida, los residuos de cisteina que forman el enlace de monómero inter-estradómeros están en las posiciones 236, 237, 240, y 243 del dominio bisagra IgG2 de la proteina madura de G045. En una modalidad preferida, los residuos de cisteina que forman el enlace de monómero inter-estradómeros están en las posiciones 4, 5, 8, y 11 del dominio bisagra IgG2 de la proteina madura de G051. Las modalidades alternativas incluyen enlaces inter-monómeros de estradómero donde los enlaces disulfuro se forman entre los residuos de cisteina que se introducen a través de la mutagénesis dirigida en la secuencia de aminoácidos que comprende los monómeros de estradómero individuales.

Como se discutió anteriormente, en una modalidad preferida, el enlace inter-monómero de estradómero que forma un estradómero es un enlace que resulta a partir de la auto-agregación de monómeros de estradómero. En una modalidad, los dos monómeros de estradómero que comprenden el estradómero son péptidos idénticos, de forma tal que los dos monómeros de estradómero individuales que comprenden el estradómero son idénticos en secuencia. Sin embargo, el técnico con experiencia entenderá que otras modalidades incluyen estradómeros donde los monómeros de estradómero difieren uno del otro en la secuencia de aminoácidos.

Dos monómeros de estradómero pueden formar un estradómero por, por ejemplo, la alineación en paralelo de forma tal que el pareamiento tiene lugar entre monómeros de dominio parcial Fe idénticos, en los monómeros de estradómero. Sin embargo, la presente invención incluye además modalidades donde el pareamiento ocurre entre monómeros de dominio parcial Fe no idénticos, y modalidades donde el pareamiento ocurre entre monómeros de dominio parcial Fe idénticos en los monómeros de estradómero pero donde el alineamiento de los dos monómeros de estradómero está desplazado .

ESTRADÓMERO AGLOMERADO Un " estradómero aglomerado" es un biomimético que tiene una forma radial con una porción "cabeza" central y dos o más "piernas", en donde cada pierna comprende uno o más dominios Fe capaces de unir al menos un receptor de Fe gamma, lo que crea entonces un biomimético capaz de unir dos o más receptores de Fe gamma. Cada estradómero aglomerado se compone de más de una proteina dimérica, cada una llamada una "unidad de estradómero aglomerado". Cada unidad de estradómero aglomerado se compone de una región que multimeriza y una región "pierna" que comprende al menos un dominio funcional Fe. Las regiones de multimerización crean una "cabeza" de estradómero aglomerado cuando multimerizan con otra unidad de estradómero aglomerado. La región pierna es capaz de de unir tantos receptores de FcD como dominios Fe haya en cada región pierna. Entonces un estradómero aglomerado es un compuesto biomimético capaz de unir dos o más receptores de FcD lo que incrementa la afinidad y la avidez de la unión.

La región de multimerización puede ser una secuencia de péptido que causa que proteínas diméricas multimericen más aun o alternativamente la región de multimerización puede ser una glicosilación que aumenta la multimerización de las proteínas diméricas. Los ejemplos de regiones de multimerización de péptidos incluyen la bisagra IgG2, el dominio CH2 de IgE, cremallera de isoleucina, repetición glicina-prolina-prolina de colágeno ("GPP") y dedos de zinc. La influencia de la glicosilación en la multimerización de péptidos está bien descrita en la materia (por ejemplo, Role of Carbohydrate in Multimeric Structure of Factor VIII/V on Willebrand Factor Protein. Harvey R. Gralnick, Sybil B. Williams y Margaret E. Rick. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, Vol. 80, núm. 9, [Parte 1 : Biological Sciences] (1 de mayo de 1983), págs . 2771-277 '4; Multimerization and collagen binding of vitronectin is modulated by its glycosylation. Kimie Asanuma, Fumio Arisaka y Haruko Ogawa . International Congress Series Volume 1223, diciembre de 2001, Páginas 97-101) .

La región de multimerización puede ser una secuencia de péptidos que causa que los péptidos dimericen o multimericen e incluye la bisagra IgG2, el el dominio CH2 de IgE, una cremallera de isoleucina, colágeno GPP, y un dedo de zinc. Como se conoce en la materia, la región bisagra de IgG2 humana puede formar dimeros covalentes (Yoo, E.M. y otros J. Immunol. 170, 3134-3138 (2003); Salfeld Nature Biotech. 25, 1369-1372 (2007)). La formación del dimero de IgG2 se media potencialmente a través de la estructura bisagra de la IgG2 por enlaces C-C (Yoo y otros, 2003), lo que sugiere que la estructura bisagra sola puede mediar la formación del dimero. La cantidad de dimeros de IgG2 encontrados en el suero humano, sin embargo, es limitada. Se estima que la cantidad de IgG2 que existe como dimero del homodimero es menos del 10% del total de IgG2 (Yoo y otros, 2003) . Además, no hay evidencia cuantitativa del dominio de multimerización de IgG2 más allá del dimero de homodimero. (Yoo y otros 2003) . Esto es, la IgG2 nativa no se encontró que formara multimeros de orden más alto en el suero humano. Por lo tanto, los resultados presentados en la presente descripción son particularmente sorprendentes en que los estradómeros que contienen bisagra de IgG2 (es decir, G045c, G019 y G051) se presentan en múltimeros de orden alto y a diferencia de la IgG2 nativa en el suero humano en el cual las interacciones de la bisagra de IgG2 son variables y dinámicas, G045c se demostró que forma múltimeros altamente estables que se evidencian en geles de SDS-PAGE no reductores, por ultracentrifugación analítica y por estudio de estabilidad de 3 meses a 100% de humedad a 37° C. Más aun, es además sorprendente que la cantidad de múltimeros en las preparaciones de estradómeros que contienen bisagras de IgG2 son significativamente 10% más altas que el observado para la IgG2 en el suero humano. Por ejemplo, la cantidad de múltimeros, lo que incluye dímeros del homodímero en preparaciones de G045c es aproximadamente el 67%.

La secuencia de aminoácidos del monómero bisagra IgG2 humano es como sigue: ERKCCVECPPCP (sec. con núm. de ident . : 3) . La mutación de una cualquiera de las 4 cisteínas en la sec. con núm. de ident. :3 puede asociarse con una multimerización muy diminuida del estradómero. Existen dos porciones C-X-X-C del monómero bisagra IgG2. Así,- los monómeros de estradómero de la presente invención pueden comprender ya sea la secuencia completa de 12 amino-acidos del monómero de bisagra de IgG2, o cualquiera o ambos de los cuatro núcleos de aminoácidos, junto con monómeros de dominios Fe. Aunque el X-X de las estructuras núcleo puede ser cualquier aminoácido, en una modalidad preferida la secuencia X-X es V-E o P- P. El técnico con experiencia entenderá que el monómero de bisagra de IgG2 puede componerse de cualquier porción de la secuencia bisagra en adición a la estructura núcleo de cuatro aminoácidos, lo que incluye toda la secuencia de la bisagra de IgG2 y algunas o todas las secuencias de monómeros de los dominios de IgG2 CH2 y CH3. Sin atarse por la teoría, el dominio de multimerización de la bisagra de IgG2 puede formar multimeros al interactuar con cualquier porción del monómero de estradomero. Esto es, la bisagra IgG2 de un monómero de estradomero puede unir la bisagra de IgG2 de otro monómero de estradomero, y asi formar un dimero del homodimeros, o multimeros de orden más alto mientras retienen la unión funcional a los receptores de Fe aumentada en relación al Fe de IgGl natural. Alternativamente, el dominio bisagra de IgG2 de un monómero de estradomero puede unir la bisagra de IgGl de otro monómero de estradomero, y asi formar un dimero de homodimero, o multimeros de orden más alto, mientras retienen la unión funcional a los receptores de Fe aumentada en relación al Fe de IgGl natural. Es posible además que el dominio bisagra de IgG2 de un monómero de estradómero se una a otra porción del dominio Fe de IgGl, es decir el dominio CH2 o CH3 de otro monómero de estradómero para formar el dimero de homodimero, o multimeros de orden más alto mientras retienen la unión funcional a los receptores de Fe aumentada en relación al Fe de IgGl natural.

Las cremalleras de leucina e isoleucina pueden usarse además como la región de multimerización . Se conoce que las cremalleras de leucina e isoleucina (dominios super-hélice) facilitan la formación de dimeros, trímeros y tetrámeros de proteina (Harbury y otros Science 262:1401-1407 (1993); O'Shea y otros Science 243 :538 (1989)). Al tomar ventaja de la tendencia natural de una cremallera de isoleucina para formar un trímero, se pueden producir estradómeros aglomerados .

Aunque el técnico con experiencia comprenderá que diferentes tipos de cremalleras de leucina e isoleucina pueden usarse, en una modalidad preferida la cremallera de isoleucina del regulador- transcripcional GCN4 modificado como se describe (Morris y otros, Mol. Immunol. 44:3112-3121 (2007); Harbury y otros Science 262:1401-1407 (1993)) se usa: GGGSIKQIEDKIEEILSKIYHIENEIARIKKLIGERGHGGG (sec. con núm. de ident.:5). Esta secuencia cremallera de isoleucina es solamente una de muchas secuencias posibles que pueden usarse para la multimerización de los monómeros del dominio Fe. Mientras la secuencia completa que se muestra en sec. con núm. de ident . : 5 se puede usar, la porción subrayada de la secuencia representa la secuencia núcleo de la cremallera de isoleucina que se puede usar en los estradómeros aglomerados de la presente invención. Asi, los monómeros de estradómero de la presente invención pueden comprender ya sea la secuencia completa de aminoácidos de la cremallera de isoleucina, o el núcleo de 28 aminoácidos, junto con uno o más monómeros de dominios Fe. El técnico con experiencia además entenderá que la cremallera de isoleucina puede componerse de cualquier porción de la cremallera en adición a la estructura núcleo de 28 aminoácidos, y asi pueden componerse de más de 28 aminoácidos pero menos que la secuencia completa.

GPP es una secuencia de aminoácidos que se encuentra en el colágeno humano que causa la unión proteina : proteina del colágeno. Aunque que el técnico con experiencia entenderá que diferentes tipos de repeticiones GPP pueden usarse como un dominio de multimerización, en una modalidad preferida se usan las repeticiones glicina-prolina-prolina como se describió (Fan y otros, FASEB Journal 3796 vol 22 2008) : (sec. con núm. de ident.: 26). Esta secuencia de repetición glicina-prolina-prolina es solo una de las varias secuencias posibles que se pueden usar para la multimerización de monómeros de dominios Fe. Aunque se puede usar la secuencia completa mostrada en la sec. con núm. de ident.:26, puede ser posible usar además repeticiones de diferentes longitudes para multimerizar monómeros de dominios Fe. De igual forma, las repeticiones que contienen diferentes amino ácidos dentro de las repeticiones GPP pueden sustituirse tamibén.

Se entiende que los estradómeros y otras moléculas biomiméticas en la presente descripción se pueden derivar de cualquiera de una variedad de especies. De hecho, los dominios Fe, o dominios parciales Fe, en cualquiera de las moléculas biomiméticas de la presente invención se pueden derivar de inmunoglobulinas de más de una (por ejemplo, de dos, tres, cuatro, cinco, o más) especies. Sin embargo, ellas más comúnmente se derivarán de una única especie. Adicionalmente , se apreciará que cualquiera de los métodos descritos en la presente descripción (por ejemplo, métodos de tratamiento) se puede aplicar a cualquier especie. Generalmente, los componentes de un biomimético que se aplican a una especie de interés derivarán de esa especie. Sin embargo, se pueden usar además los biomiméticos en los cuales todos los componentes son de diferentes especies o son de más de una especie (que incluye o no incluye las especies a las cuales se aplica el método relevante) .

Los dominios CH1, CH2, CH3 y CH4 específicos y las regiones bisagra que componen los dominios Fe y los dominios parciales Fe de los estradomeros y otros biomiméticos de la presente invención pueden seleccionarse independientemente, ambos en términos de las subclases de inmunoglobulinas , así como del organismo, del cual se derivan. En consecuencia, los estradomeros y otros agentes biomiméticos descritos en la presente descripción pueden comprender dominios Fe y dominios parciales Fe que provienen independientemente de varios tipos de inmunoglobulina tales como IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgAl, IgAl, IgD, IgE, e IgM humana, IgG2a de ratón, o IgA o IgB de perro. Preferentemente, para los agentes terapéuticos humanos los dominios Fe de la presente invención son del isotipo de IgGl humana. Igualmente, cada dominio Fe y dominio parcial Fe puede derivarse de varias especies, preferentemente una especie de mamífero, que incluyen primates no humanos (por ejemplo, monos, babuinos, y chimpancé), humanos, murino, ratas, bovino, equino, felino, canino, porcino, conejos, cabras, venados, ovejas, hurones, jerbos, conejillo de Indias, hámsters, murciélagos, aves (por ejemplo, pollos, pavos, y patos), peces y reptiles para producir moléculas de estradomeros quiméricas o específicas para las especies.

Los dominios Fe individuales y los dominios parciales Fe pueden ser además humanizados. Un experto en la materia se percatará que los diferentes dominios Fe y dominios parciales Fe proporcionarán diferentes tipos de funcionalidades. Por ejemplo, los FcDR se unen específicamente a las inmunoglobulinas IgG y no bien a otras clases de inmunoglobulinas. Así, un experto en la materia, que pretenda diseñar un estradómero con capacidad de unión a mútiples • receptores de FcD, diseñaría un estradómero de dominios Fe que al menos incorpore las secuencias de unión al receptor de FcD bien caracterizadas de la IgG, lo que incluye aquellas en la región bisagra baja y/o los dominios de IgG CH2 & CH3. El experto en la materia entenderá además que varias consecuencias perjudiciales pueden asociarse con el uso de dominios de Ig particulares, tales como la anafilaxis asociada con las infusiones de IgA. Los biomiméticos descritos en la presente descripción deberían generalmente diseñarse para evitar tales efectos, aunque en circunstancias particulares tales efectos pudieran ser deseables. r La presente invención además abarcas estradómeros que comprenden dominios Fe y dominios parciales Fe que tienen aminoácidos que difieren de las secuencias de aminoácidos de origen natural del dominio Fe o dominio parcial Fe. Los dominios Fe preferidos para su inclusión en los compuestos biomiméticos de la presente invención tienen una afinidad de unión específica medible a un receptor de holo-FcD o la porción del dominio extracelular soluble de un FcDR. Las secuencia primaria de aminoácidos y las estructuras de cristalografía de rayos X de numerosos dominios Fe y monómeros de dominios Fe están disponibles en la materia. Ver, por ejemplo, oof JM, Burton DR. Human antibody-Fc receptor interactions illuminated by crystal structures. Nat Rev Immunol. 2004 Feb; ( 2 ) : 89-99. Los dominios Fe representativos con capacidad de unión al receptor de FcD incluyen los dominios Fe de IgGl humanas (sec. con núm. de ident.: 2) . Estas secuencias nativas se someten a un extensivo análisis estructura-función que incluye mapeo por mutagénesis dirigida de las secuencias funcionales. Basado en estos estudios anteriores de estructura-función y los datos de cristalografía disponibles, un experto en la materia puede diseñar variantes de secuencias de dominio Fe funcionales mientras preserva la capacidad de los dominios Fe de unirse al receptor de FcDR. Por ejemplo, se pueden adicionar residuos de cisteína para aumentar la unión de sulfuros entre monómeros ' o eliminarlos para alterar la interacción entre homodímeros del estradómero.

Los cambios de aminoácidos se pueden encontrar a todo lo largo de la secuencia del dominio Fe, o aislados a dominios parciales de Fe particulares que comprenden el dominio Fe. Las variantes funcionales del dominio Fe usadas en los estradómeros y otros biomiméticos de la presente invención tendrán al menos aproximadamente 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% de identidad de secuencia con un dominio Fe nativo. Igualmente, las variantes funcionales del dominio Fe parcial usadas en los estradómeros y otros biomiméticos de la presente invención tendrán al menos aproximadamente 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% de identidad de secuencia con un dominio parcial Fe nativo .

El técnico con experiencia apreciará que la presente invención además abarca el uso de variantes funcionales de monómeros de dominios Fe en la construcción de monómeros de fragmentos Fe, monómeros de fragmentos parciales de Fe, monómeros de estradómero y los otros monómeros de la presente invención. Las variantes funcionales de los monómeros del dominio Fe tendrán al menos aproximadamente 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% de identidad de secuencia con una secuencia del monómero del dominio Fe nativo.

Igualmente, la presente invención además abarca el uso de variantes funcionales de monómeros de dominio parcial Fe en la construcción de monómeros de fragmentos Fe, monómeros de fragmentos parciales de Fe, monómeros de dominios Fe, monómeros de estradómero y los otros monómeros de la presente invención. Las variantes funcionales de los monómeros del dominio parcial de Fe tendrán al menos aproximadamente 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% de identidad de secuencia con una secuencia del monómero del dominio Fe parcial nativo.

Los cambios de aminoácido pueden disminuir, aumentar, o permanecer inalterada la afinidad de unión del estradómero para el receptor FcD. Preferentemente tales cambios de aminoácido serán sustituciones conservativas de aminoácido, sin embargo, tales cambios incluyen deleciones, adiciones y otras sustituciones. Las sustituciones conservativas de aminoácido típicamente incluyen cambios dentro de los siguientes grupos: glicina y alanina; valina, isoleucina, y leucina; ácido aspártico y ácido glutámico; asparagina, glutamina, serina y treonina; lisina, istidina y arginina; y fenilalanina y tirosina. Además, el cambio de aminoácido puede aumentar la fuerza de la multimerización, por ejemplo, por la adición de residuos de cisteína.

Los cambios de aminoácido pueden ser cambios de aminoácido de origen natural que resultan en el polimorfismo de los dominios Fe, o los cambios de aminoácidos pueden introducirse, por ejemplo, por mutagénesis dirigida. Los cambios de aminoácido pueden ocurrir en cualquier lugar dentro del dominio Fe hasta tanto el dominio Fe retengan su función de unión al receptor y actividad biológica. En una modalidad preferida, el polimorfismo o mutaciones llevan a aumentar la unión al receptor y/o aumentar la multimerización o función biológica. El polimosfismo/mutación preferentemente ocurre en una o más de las posiciones de aminoácidos 233-435 de acuerdo con el índice EU como en Kabat y otros, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5ta Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991). Los polimorfismos/mutaciones específicas en estas posiciones de aminoácidos se conocen bien en la materia y se pueden encontrar, por ejemplo en Shields, y otros (2001) "High Resolution Mapping of the Binding Site on Human IgGl for FcDRI, FcDRII, FcDRIII and FcRn and Design of IgGl Variants with Improved Binding to the FcDR, " J. Biol. Chem., 276 (9) : 6591-6601, la cual se incorpora en la presente descripción como referencia en su totalidad.

En una modalidad preferida, el polimorfismo/mutación contiene una o más sustituciones de aminoácido de las posiciones 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 253, 254, 255, 256, 258, 264, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 280, 285, 286, 288, 290, 293, 295, 296, 297, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 315, 317, 322, 326, 327, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 337, 338, 339, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 392, 414, 415, 424, 430, 433, 434, 435, y/o 436 de Fe de IgGl. En una modalidad adicional, el polimorfismo/mutación contiene dos o más sustituciones de aminoácido de las posiciones 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 253, 254, 255, 256, 258, 264, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 280, 285, 286, 288, 290, 293, 295, 296, 297, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 315, 317, 322, 326, 327, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 337, 338, 339, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 392, 414, 415, 424, 430, 433, 434, 435, y/o 436 de Fe de IgGl. En una modalidad adicional, el polimorfismo/mutación contiene tres o más sustituciones de aminoácido de las posiciones 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 253, 254, 255, 256, 258, 264, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 280, 285, 286, 288, 290, 293, 295, 296, 297, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 315, 317, 322, 326, 327, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 337, 338, 339, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 392, 414, 415, 424, 430, 433, 434, 435, y/o 436 de Fe de IgGl. En una modalidad adicional, el polimorfismo/mutación contiene más de tres sustituciones de aminoácido de las posiciones 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 253, 254, 255, 256, 258, 264, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 280, 285, 286, 288, 290, 293, 295, 296, 297, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 315, 317, 322, 326, 327, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 337, 338, 339, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 392, 414, 415, 424, 430, 433, 434, 435, y/o 436 de Fe de IgGl.

El término "variante funcional" como se usa en la presente descripción se refiere a una secuencia que se relaciona por homología a una secuencia de referencia la cual es capaz de mediar el mismo efecto biológico que la secuencia de referencia (cuando es un polipéptido) , o la cual codifica un polipéptido que es capaz de mediar el mismo efecto biológico que un polipéptido codificado por la secuencia de referencia (cuando es un polinucleótido) . Por ejemplo, una variante funcional de cualquiera de los biomiméticos descritos en la presente descripción pudiera tener ua homología o identidad especificada y pudiera ser capaz de la inmuno modulación de monocitos o células dendríticas. Las variantes de secuencia funcionales incluyen ambos polinucleótidos y polipéptidos . La identidad de secuencia se ensaya generalmente por medio del uso de BLAST 2.0 (Basic Local Alignment Search Tool), que opera con los parámetros por defecto: Filtro-On, Matriz de puntuación- BLOSUM62, Tamaño de palabra -3, Valor E - 10, Costos de brecha - 11,1 y Alineamientos -50.

A partir de lo anterior, se apreciará que los estradómeros de la presente invención incluyen estradómeros que tienen: (a) solamente dominios Fe de origen natural; (b) una mezcla de dominios Fe de origen natural y dominios Fe con secuencias de aminoácidos alteradas; y (c) solamente dominios Fe con secuencias de aminoácidos alteradas. Todo lo que se requiere es que los estradómeros que contienen secuencias de aminoácidos alteradas tengan al menos 25%; 30%; 40%; 50%; 60%; 70%; 80%; 90%; 95%; 96%; 97%; 98%; 99%; 99.5%; o 100% o incluso más de la capacidad de un estradómero correspondiente que comprende dominios Fe con secuencias de origen natural para unirse a uno o más receptores FcDR.

Los sitios de unión al FcDmencionados anteriormente que ocurren en los estradómeros de la presente invención se pueden alterar en secuencia a través de la ingeniería genética para predictivamente derivar sitios de unión con capacidades de unión y afinidades alteradas en relación a una secuencia nativa. Por ejemplo, se pueden alterar residuos específicos que reducen la unión del dominio Fe del compuesto biomimético a FcCRIIb mientras aumentan la unión a FcDRIIIa. Un ejemplo de un análisis estructural extensivo basado en mutagénesis para secuencias de unión al receptor de FcD de hlgG es Robert L. Shields, y otros High Resolution Mapping of the Binding Site on Human IgGl for FcDRI, FcDRII, FcDRII I, and FcRn and Design of IgGl Variants with Improved Binding to the FcDR. J. Biol. Chem. , Feb 2001; 276: 6591 - 6604. Estudios similares se realizaron en Fe de IgG murina (mlgG Fe) . Basado en las homologías estructurales y de secuencia primaria de los dominios Fe de IgG nativas entre especies, un experto en la materia puede traducir el extenso conocimiento de estructura-función de Fe de IgG humana y Fe de IgG de ratón a la mutagénesis racional de todas las secuencias nativas de unión al receptor de FcD en los compuestos biomiméticos de la presente invención para diseñar sitios de unión con especificidades y afinidades de unión particulares del receptor de FcD.

Adicionalmente a la composición de secuencia de aminoácidos de los dominios Fe nativos, el contenido de carbohidratos del dominio Fe se conoce que juega un papel importante en la estructura e interacciones de unión del dominio Fe con el FcDR. Ver, por ejemplo, Robert L. Shields, y otros Lack of Fucose on Human IgGl N-Linked Oligosaccharide Improves Binding to Human FcDRIII and Antibody-dependent Cellular Toxicity. J. Biol. Chem. , Jul 2002; 277: 26733 -26740 (doi:10.1074/jbc.M202069200) ; Ann Wright y Sherie L. orrison. Effect of C2- Associated Carbohydrate Structure on Ig Effector Function: Studies with Chimeric Mouse-Human IgGl Antibodies in Glycosylation Mutants of Chínese Hámster Ovary Cells. J. Immunol, Abr 1998; 160: 3393 - 3402. El contenido de carbohidratos se puede controlar por medio del uso, por ejemplo, de sistemas de expresión de proteínas particulares que incluyen líneas celulares particulares o modificaciones enzimáticas in vitro. Así, la presente invención incluye estradómeros que comprenden dominios Fe con el contenido de carbohidratos nativo del holo-anticuerpo a partir del cual se obtuvieron los dominios, asi como aquellos compuestos biomiméticos con un contenido de carbohidratos alterado. En otra modalidad, componentes multimeros del estradómero se caracterizan por un patrón de glicosilación diferente en comparación con el componente homodimero del mismo estradómero. En una modalidad preferida, el estradómero está enriquecido en multimeros que comprenden un patrón de glicosilación que aumenta la unión al receptor Fe.

La adición a la cadena polipeptidica de un dominio parcial Fe, una región de multimerización, o cambios de glicosilación, puede crear un cambio conformacional en el dominio Fe que permita aumentar la unión del dominio Fe a un receptor de FcD. Asi, aparentemente cambios muy menores al polipéptido pueden además crear un estradómero capaz de aumentar la unión de múltiples receptores de FcDo un estradómero con capacidad disminuida para unir múltiples receptores de FcD.

DOMINIOS PARCIALES Y FRAGMENTOS PARCIALES.

El técnico con experiencia reconocerá más aun que los dominios Fe y los dominios parciales Fe que se usan en modalidades de la presente invención no necesitan ser las versiones de longitud total. Esto es, la presente invención abarca el uso de monómeros de dominios Fe y monómeros de dominio parcial Fe que carecen de los aminoácidos del terminal amino, el terminal carboxi o del medio de un monómero de dominio Fe particular y monómeros de dominio parcial Fe que comprenden los estradómeros y otros biomiméticos de la presente invención.

Por ejemplo, el sitio de unión en las inmunoglobulinas IgG humanas para el receptor de FcD.se describió (por ejemplo, Radaev, S., Sun, P., 2001. Recognition of inmunoglobulinas by FcD Receptors. Molecular Immunology 38, 1073 - 1083; Shields, R.L. y otros,' 2001. High Resolution Mapping of the Binding Site on Human IgGl for FcDRI, FcDRII, FcDRIII, and FcRn and Design of IgGl Variants with Improved Binding to the FcDR. J. Biol . Chem. 276 (9), 6591-6604). Basado en ese conocimiento, uno puede eliminar aminoácidos del dominio Fe de estas inmunoglobulinas y determinar el efecto sobre la interacción de unión entre el dominio Fe y el receptor. Asi, la presente invención abarca dominios Fe de IgG que tienen al menos aproximadamente 90% de los aminoácidos que abarcan las posiciones 233 a la 338 de la bisagra inferior y CH2 como se define en Radaev, S., Sun, P., 2001.

Los dominios parciales Fe de inmunoglobulinas IgG de la presente invención incluyen todo o parte de la región bisagra, todo o parte del dominio CH2, y todo o parte del dominio CH3.

Los dominios parciales Fe de IgG que tienen solamente una parte de la región bisagra, parte del dominio CH2 o parte del dominio CH3 se construyen a partir de monómeros de dominio parcial Fe. Asi, la presente invención incluye monómeros de la región bisagra de IgG que se derivan del terminal N de la región bisagra o el terminal C de la región bisagra. Estos pueden contener asi, por ejemplo, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26,, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48; 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, o 62 (hasta 15 para IgGl, hasta 12 para IgG2, hasta 62 para IgG3, hasta 12 para IgG4) aminoácidos de la región bisagra.

La presente invención incluye además los monómeros del dominio CH2 de IgG derivados del terminal N del dominio CH2 o el terminal C del dominio CH2. Estos pueden contener asi, por ej emplo, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, . 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, o 110 (hasta 110 para IgGl e IgG3, hasta 109 para IgG2 y IgG4) aminoácidos del dominio CH2.

La presente invención incluye además los monómeros del dominio CH3 de IgG derivados del terminal N del dominio CH3 o el terminal C del dominio CH3. Estos pueden contener asi, por ej emplo, 5, 6, 7, 8 , 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55r 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, . 102, 103, 104, 105, 106, o 107 (hasta 106 para IgGl e IgG3, hasta 107 para IgG2 e IgG4) aminoácidos del dominio CH3.

A partir de lo anterior, se apreciará que diferentes modalidades de la presente invención incluyen estradómeros que contienen: (a) dominios Fe de longitud completa; (b) una mezcla de dominios Fe de longitud completa y dominios parciales Fe; y (c) dominios parciales Fe. En cada una de estas modalidades, los estradómeros pueden además comprender dominios CH1. Como se discute en la presente descripción, en cada modalidad de los estradómeros de la presente invención, los estradómeros tienen la habilidad de unir dos o más receptores de FcD.

MODALIDADES PREFERIDAS DE ESTRADOMEROS Y MONÓMEROS DE ESTRADOMEROS Los términos "FcDR" y "receptor de FcD" como se usan en la presente descripción incluyen cada miembro de la familia de proteínas del receptor de Fe gamma que se expresan en la superficie de las células inmunes como se describe en Nimmerjahn F y Ravetch JV. FcD receptors: oíd friends and new family members. Immunity. 2006 Ene; 24(1): 19-28, o como puede definirse después. Se pretende que el término "FcDR" que se describe en la presente descripción abarque todos los miembros de las familias de los Fe gamma RI, RII, y RUI. El receptor de FcD incluye los receptores de Fe ? de alta afinidad y baja afinidad, incluyendo pero sin limitarse en humanos a FcDRI (CD64); FcDRII (CD32) y sus isotipos y alotipos FcDRIIa LR, FcDRIIa HR, FcDRI Ib, y FcDRIIc; FcDRI II (CD 16) y sus isotipos FcDRIIIa y FcDRIIIb. Un técnico con experiencia reconocerá que la presente invención, la cual incluye compuestos que se unen a FcDR y homólogos de FcDR tales como aquellos descritos en Davis, y otros (2004) "Differential B cell expression of mouse Fe receptor homologs," Int. Immunol . , 16 ( 9) : 1343-1353, se aplicará a los futuros FcDR e isotipos y alotipos asociados que pueden no haberse descubierto aún.

Se describió que hlVIG se une y satura totalmente el receptor de Fe neonatal ("FcRn") y que tal inhibición competitiva de FcRn puede jugar un papel importante en la actividad biológica de la hlVIG (por ejemplo Mechanisms of Intravenous inmunoglobulina Action in Inmune Thrombocytopenic Purpura. F. Jin, J. Balthasar. Human Immunology, 2005, Volumen 66, Asunto 4, Páginas 403-410.) Ya que las inmunoglobulinas que unen fuertemente el receptor de FcD se unen también al menos en algún grado a FcRn, un técnico con experiencia reconocerá que los estradómeros que son capaces de unirse a más de un receptor de FcD se unirán también a, y pueden saturar totalmente el FcRn.

"Capaz de unirse específicamente a un FcDRx" como se usa en la presente descripción se refiere a unirse a un FcDR, tal como FcDRIII. La unión específica se define generalmente como la cantidad de ligando marcado el cual es desplazable por un exceso subsecuente de ligando no marcado en un ensayo de unión. Sin embargo, esto no excluye otros medios para ensayar la unión específica los cuales están bien establecidos, en la materia (por ejemplo, Mendel CM, endel DB, ' on-specific ' binding. The problem, and a solution. Biochem J. 1985 Mayo 15 ; 228 ( 1 ) : 269-72 ) . La unión específica se puede medir en una variedad de formas bien conocidas en' la materia tal como la tecnología de resonancia de plasmones superficiales (SPR) (disponible comercialmente a través de BIACORE®) o interferometría de biocapa (disponible comercialmente a través de ForteBio®) para caracterizar ambas constantes de asociación y disociación de biomiméticos inmunológicamente activos (Asían K, Lakowicz JR, Geddes C. Plasmon light scattering in biology and medicine: new sensing approaches, visions and perspectives . Current Opinión in Chemical Biology 2005, 9:538-544).

"Actividad inmunológica de IgG nativa agregada" se refiere a las propiedades de las IgG multimerizadas las cuales impactan el funcionamiento del sistema inmune a partir de la exposición del sistema inmune a los agregados de IgG". Las propiedades específicas de IgG multimerizada nativa incluyen la unión específica alterada a los FcDR, entre-cruzamiento de FcDR en las superficies de las células inmunes, o una funcionalidad efectora de las IgG mutimerizadas tal como citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) , fagocitosis (ADCP) , o fijación del complemento (Ver, por ejemplo, Nimmerjahn F, Ravetch JV. The anti-inflammatory activity of IgG: the intravenous IgG paradox. J Exp Med. 2007; 204:11-15; Augener W, Friedman B, Brittinger G. Are aggregates of IgG the effective part .of high-dose inmunoglobulina therapy in adult idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP)? Blut. 1985;50:249-252; Arase N, Arase H, Park SY, Ohno H, Ra C, Saito T. Association with FcRgamma is essential for activation signal through NKR-P1 (CD161) in natural killer (NK) cells and NK1.1+ T cells. J Exp Med. 1997;186:1957-1963; Teeling JL, Jansen- Hendriks T, Kuijpers TW, y otros, Therapeutic efficacy of intravenous inmunoglobulina preparations depends on the inmunoglobulina G dimers: studies in experimental immune thrombocytopenia . Blood. 2001;98: 1095- 1099; Anderson CF, Mosser DM. Cutting edge : biasing immune responses by directing antigen to macrophage Fe gamma receptors. J Immunol. 2002; 168:3697-3701; Jefferis R, Lund J. Interaction sites on human IgG-Fc for FcDR: current models. Immunology Letters . 2002; 82:57; Banki Z, Kacani L, Mullauer B, y otros, Cross-Linking of CD32 Induces Maturation of Human Monocyte - Derived Dendritic Cells Via NF- {kappa} B Signaling Pathway. J Immunol. 2003;170:3963-3970; Siragam V, Brine D, Crow AR, Song S, Freedman J, Lazarus AH. Can antibodies with specificity for soluble antigens mimic the therapeutic effects of intravenous IgG in the treatment of autoimmune disease? J Clin Invest. 2005;1 15:155- 160). Estas propiedades se evalúan generalmente por comparación a las propiedades de la IgG homodimérica .

"Comparable o superior al entrecruzamiento de un receptor de FcD o una funcionalidad efectora de una pluralidad de inmunoglobulinas IgG agregadas de origen natural" como se usa en la presente descripción significa que el estradómero genera un valor del ensayo de entrecruzamiento del receptor de FcD de aproximadamente 70% o más del valor que se alcanza por medio del uso de una dosis o concentración similar de hlVIG. En algunas modalidades, el valor del ensayo está al menos dentro del error estándar de los valores del ensayo alcanzados por medio del uso de hlVIG. En otras modalidades, el valor del ensayo es 110% o más alto que el de la hlVIG a la misma dosis. Los ensayos para entrecruzamiento de FcD se conocen bien por aquellos expertos en la materia (ver por ejemplo, Nimmerjahn y Ravetch, (2008) "FcD receptors as regulators of immune responses," Nature Reviews Immunology, 8:34-47).

Aunque se demostró que los multimeros de orden más alto son efectivos en la modulación de la respuesta inmune, nosotros sorprendentemente encontramos que los homodímeros eran además moduladores inmunes efectivos. Sin estar atados por la teoría, se cree que los homodímeros son capaces de formar multimeros de orden más alto in vivo. Nosotros encontramos a través de experimentos de multimerización que de cualquier otra forma una población de homodímeros pura es capaz de multimerizar en presencia de bajos niveles de sangre o suero fetal bovino. Por lo tanto, mientras multímetros de orden más alto son más efectivos que la fracción de homodimeros en la modulación de la respuesta inmune, la fracción de homodimeros del estradómero naturalmente enlazado de la presente invención pueden ser además inmuno moduladores efectivos, en parte a través de la multimerización de los homodimeros en presencia de bajos niveles de sangre o suero. Por lo tanto, por "multimeros de orden más alto" queremos decir multimeros más allá del. homodimero que se forma en solución antes de la inyección a un sujeto asi como multimeros más allá del homodimero que se forma in vivo.

"Actividades inmuno moduladoras, " . "modulación del sistema inmune" e "inmuno modulación" significan alterar el sistema inmune al cambiar las actividades, capacidades y números relativos de una o más células inmunes, lo que incluye la maduración de un tipo de célula dentro de su tipo celular o en otros tipos celulares. Por ejemplo, la inmuno modulación de monocitos inmaduros puede llevar a mayores poblaciones de monocitos, células dendriticas, macrófagos, u osteoclastos más maduros, todos los que se derivan a partir de monocitos inmaduros. Como otro ejemplo, la inmuno modulación de células B de memoria puede llevar a la apoptosis selectiva de ciertas células B de memoria con la disminución concomitante en la producción de anticuerpos particulares. Como otro ejemplo, la inmuno modulación de las células NK puede llevar a un aumento de la citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos. Como otro ejemplo, las actividades inmuno moduladoras pueden llevar a aumentar las poblaciones de células con fenotipos que puedieran de cualquier otra forma no expresarse a altos niveles, tales como células CD8 beta + / CDllc +. Como otro ejemplo, las actividades inmuno moduladoras pueden llevar a la disminución de citocinas proinflamatorias o citocinas que están comúnmente elevadas en las enfermedades autoinmunes tales como IL-6 e IL-8. Como otro ejemplo, las actividades inmuno moduladoras pueden llevar a la activación de células NK con la subsecuente secreción y clivaje de TGF-beta. Por ejemplo, receptores de las células inmunes pueden unirse a biomiméticos inmunológicamente activos y activar la señalización intracelular para inducir cambios en varias células inmunes referidas separadamente como "activan la inmuno modulación" . El bloqueo de los receptores de las células inmunes para prevenir la activación del receptor también se abarca dentro de "immuno modulación" y se puede referir separadamente como "immuno modulación inhibitoria".

La modulación de las células dendriticas puede promover o inhibir la presentación de antigenos a las células T por ejemplo por la inducción de la expresión de CD86 y/o CDla en la superficie de las células dendriticas. CDla es una glicoproteina relacionada con el HC clase I que se expresa en la superficie de las células presentadoras de antigeno, particularmente las células dendriticas. CDla está involucrado en la presentación de antigenos lipidíeos a las células T. CD86 se expresa además en la superficie de las células presentadoras de antígeno y proporciona coestimulación a las células T. CD86 es un ligando de ambos CD28 y CTLA-4 en la superficie de las células T para enviar señales activadoras e inhibidoras, respectivamente. Por lo tanto, el nivel de expresión def CD86 y su receptor cognado, determina si se induce tolerancia o una respuesta inmune específica. En una modalidad preferida, los estradómeros de la presente invención son capaces de modular la respuesta inmune, en parte al inducir la expresión de CD86 y CDla en la superficie de células presentadoras de antígeno, particularmente células dendriticas.

La modulación de la maduración de monocitos se refiere a la diferenciación de monocitos en una DC, macrófago u osteoclasto maduros. La diferenciación se puede modular para acelerar la velocidad o dirección de la maduración y/o incrementar el número de monocitos que llevan a cabo la diferenciación. Alternativamente, la diferenciación se puede reducir en términos de velocidad de diferenciación y/o número de células que llevan a cabo la diferenciación.

El término polipéptido o péptido "aislado" como se usa en la presente descripción se refiere a un polipéptido o un péptido el cual ya sea que no tiene una contraparte de origen natural o se separó o purificó a partir de componentes que lo acompañan naturalmente, por ejemplo, en tejidos tales como el páncreas, hígado, bazo, ovario, testículo, músculo, tejido articular, tejido neural, tejido gastrointestinal, o tejido de la mama o tejido tumoral (por ejemplo, tejido de cáncer de mama) , o fluidos corporales tales como la sangre, el suero o la orina. Típicamente, el polipéptido o péptido se considera aislado cuando es al menos 70%, por peso seco, libre de proteínas y otras moléculas orgánicas de origen natural con las cuales se asocia naturalmente. Preferentemente, una preparación de un polipéptido (o péptido) de la invención es al menos 80%, con mayor preferencia al menos 90%, y con la máxima preferencia al menos 99%, por peso seco, del polipéptido (péptido), respectivamente, de la invención. Desde que un polipéptido o péptido que se sintetiza químicamente, por su naturaleza, se separa de los componentes que lo acompañan naturalmente, el polipéptido o péptido sintético está "aislado." Un polipéptido (o péptido) aislado de la invención se puede obtener, por ejemplo, por la extracción a partir de una fuente natural (por ejemplo, a partir de tejidos o fluidos corporales) ; por la expresión de un ácido nucleico recombinante que codifica el polipéptido o péptido; o por síntesis química. Un polipéptido o péptido que se produce en un sistema celular diferente de la fuente de la cual se origina naturalmente está "aislado" porque necesariamente estará libre de componentes que lo acompañan naturalmente. En una modalidad preferida, el polipéptido aislado de la presente invención contiene solamente secuencias que corresponden al péptido líder (sec. con núm. de ident.:l), el monómero de Fe de IgGl (sec. con núm. de ident.:2) o (sec. con núm. de ident.:19) y el dominio de multimerización de bisagra de IgG2 (sec. con núm. de ident.:3), el dominio de mutimerización de isloleucina (sec. con núm. de ident.:5) o el dominio de multimerización de GPP (sec. con núm. de ident . : 26) y no secuencias adicionales que pueden auxiliar en la clonación o purificación de la proteína (es decir sitios de reconocimiento de enzimas de restricción y etiquetas de purificación) . El grado de aislamiento o pureza se puede medir por cualquier método apropiado, por ejemplo, cromatografía en columna, electroforesis en gel 'de poliacrilamina, o análisis de HPLC.

COMPOSICIONES FARMACÉUTICAS La administración de las composiciones que se describen en la presente, descripción será a través de cualquier ruta común oralmente, parenteralmente o tópicamente. Las rutas ilustrativas incluyen, pero no se limitan a oral, nasal, bucal, rectal, vaginal, oftálmica, subcutánea, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, intraarterial, intratumoral, espinal, intracecal, intra-articular , intra-arterial , sub-aracnoide, sublingual, oral mucosal, bronquial, llinfática, intra-uterina, subcutánea, intratumoral, integrada en un dispositivo implantable tal como una sutura o un dispositivo implantable tal como un polímero implantable, intradural, intracortical, o dermal. Tales composiciones se administrarían normalmente como composiciones farmacéuticamente aceptables como se describe en la presente descripción. En una modalidad preferida el estradómero aislado se administra intravenosamente o subcutáneamente.

El término "portador farmacéuticamente aceptable " como se usa en la presente descripción incluye cualquiera y todos los solventes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos , agentes isotónicos y retardadores de la absorción, y similares. El uso de tales medios y agentes para las sustancias farmacéuticamente activas es bien conocido en la materia. Excepto en tanto cualquier medio o agente sea incompatible con los vectores o las células de la presente invención, se contempla su uso en composiciones terapéuticas. Además, se pueden incorporar ingredientes activos suplementarios en las composiciones.

Las composiciones de estradómero de la presente invención se pueden formular en forma neutra o de sal. Sales farmacéuticamente aceptables incluyen la adición de ácidos a la sal (que se forman con los grupos de amino libres de las proteina) y los cuales se forman con ácidos inorgánicos tales como, por ejemplo, ácidos hidroclóricos o fosfóricos, o ácidos orgánicos tales como acético, oxálico, tartárico, mandélico y similares. Las sales que se forman con los grupos carboxilo libres pueden además derivarse de bases inorgánicas tales como, por ejemplo, sodio, potasio, amonio, calcio, o hidróxidos férricos, y bases orgánicas tales como idopropilamina, trimetilamina , histidina, procaina y similares .

Las soluciones inyectables estériles pueden prepararse mediante la incorporación del estradómeroo en la cantidad requerida en el solvente adecuado con varios otros ingredientes enumerados anteriormente, según se requiera, seguido por la esterilización con filtración. Generalmente, las dispersiones se preparan mediante la incorporación de varios ingredientes activos esterilizados en un vehículo estéril que contiene un medio de dispersión básico y los otros ingredientes requeridos de los enumerados anteriormente. En el caso de polvos estériles para la preparación de soluciones inyectables estériles, los métodos de preparación preferidos son las técnicas de secado al vacio y liofilización que producen un polvo del ingrediente activo más cualquier ingrediente adicional deseado de una solución estéril previamente filtrada de éste.

Más aun, una modalidad es una composición de estradómero adecuada para la administración oral y se proporciona en un portador farmacéuticamente aceptable con o sin un diluyente neutro. El portador debe ser asimilable o comestible e incluye portadores líquidos, semi-sólidos, es decir pastas, o sólidos. Excepto en tanto cualquier medio, agente, diluyente o portador convencional sea perjudicial para el receptor o para la efectividad terapéutica de una preparación de estradómero contenida en la misma, su uso en una composición de estradómero administrable oralmente para su uso en la práctica de los métodos de la presente invención es apropiado. Los ejemplos de portadores o diluyentes incluyen grasas, aceites, agua, soluciones salinas, lipidos, liposomas, resinas, enlazadores, rellenos, y similares, o combinaciones de los mismos. El termino "administración oral" como se usa en la presente descripción incluye administración oral, bucal, enteral o intragástrica .

En una modalidad, la composición de estradómero se combina con el portador en cualquier manera conveniente y práctica, es decir, por solución, suspensión, emulsificación, mezcla, encapsulación, microencapsulación, absorción y similares. Tales procedimientos son rutina para aquellos expertos en la materia.

En una modalidad especifica, la composición de estradómero en forma de polvo se combina o mezcla completamente con un portador semi-sólido o sólido. La mezcla se puede llevar a cabo de cualquier manera conveniente tal como triturado. Los agentes estabilizadores pueden añadirse además en el proceso de mezcla para proteger la composición de la pérdida de la actividad terapéutica a través de, es decir, denaturalización en el estómago. Los ejemplos de estabilizadores para usar en las composiciones administrables oralmente incluyen amortiguadores, antagonistas a la secreción de ácidos del estómago, aminoácidos tales como glicina y lisina, carbohidratos tales como dextrosa, mañosa, galactosa, fructosa, lactosa, sacarosa, maltosa, sorbitol, manitol, etc., inhibidores de enzimas proteoliticas y similares. Con mayor preferencia, para una composición de administración oral, el estabilizador puede incluir además antagonistas de la secreción de ácidos del estómago.

Más aun, la composición de estradómero para la administración oral la cual se combina con un portador semi-sólido o sólido se puede formular además en una cápsula con capa de gelatina dura o blanda, tableta o pildora. Con mayor preferencia, las cápsulas de gelatina, las tabletas o las pildoras están recubiertas entéricamente. El recubrimiento entérico previene la denaturalización de la composición en el estómago o intestino superior donde el pH es acidico. Ver, por ejemplo, patente de los Estados Unidos núm. 5,629,001. Una vez alcanzado el intestino delgado, el pH básico en él disuelve el revestimiento y permite que la composición se libere para interactuar con las células intestinales, por ejemplo, células M de los parches de Peyer.

En otra modalidad, la composición de estradómero en forma de polvo se combina o mezcla completamente con materiales que crean una nanoparticula que encapsula el biomimético inmunológicamente activo o al cual se une el biomimético inmunológicamente activo. Cada nanoparticula tendrá un tamaño menor que o igual a 100 mieras. La nanoparticula puede tener propiedades mucoadhesivas que permiten la absorción gastrointestinal de un biomimético inmunológicamente activo que de cualquier otra forma no seria oralmente biodisponible .

En otra modalidad, una composición en polvo se combina con un portador liquido tal como, es decir, agua o una solución salina, con o sin agente estabilizador.

Una formulación especifica de estradómero que se puede usar es una solución de una proteina biomimética inmunológicamente activa en un amortiguador hipotónico basado en fosfato que es libre de potasio donde la composición del amortiguador es como sigue: 6 mM fosfato de sodio monobásico monohidrato, 9 mM fosfato de sodio dibásico heptahidratado, 50 mM cloruro de sodio, pH 7.0.+/- 0.1. La concentración de la proteina biomimética inmunológicamente activa en un amortiguador hipotónico puede estar en el intervalo de 10 microgramos/ml a 100 miligramos/ml . Esta fórmula se puede administrar a través de cualquier ruta de administración, por ejemplo, pero no se limita a la administración intravenosa.

Más aun, una composición de estradómero para la administración tópica la cual se combina con un portador semi-sólido se puede formular más aun en una crema o gel ungüento. Un portador preferido para la formación de un gel ungüento es un gel polímero. Los polímeros preferidos que se usan para la fabricación de una composición de gel de la presente invención incluyen, pero no se limitan a carbopol, carboximetilcelulosa, y polímeros plurónicos . Específicamente, una composición multímero de Fe en polvo se combina con un gel acuoso que contiene un agente de polimerización tal como Carbopol 980 a fortalezas entre 0.5% y 5% en peso/volumen para la aplicación a la piel para el tratamiento de enfermedades sobre o debajo la piel. El término "administración tópica" como se usa en la presente descripción incluye la aplicación a una superficie dérmica, epidérmica, subcutánea o mucosal.

Más aun, una composición de estradómero se puede formular en un polímero para la implantación subcutánea o subdermal. Una formulación preferida para el polímero implantable infundido con el fármaco es un agente generalmente considerado como seguro y puede incluir, por ejemplo, dextrano entrecruzado (Samantha Hart, tesis de Maestro en Ciencias, "Elution of Antibiotics from a Novel Cross-Linked Dextran Gel : Quantification" Virginial Polytechnic Insitute and State University, 8 de junio de 2009) dextrano-tiramina (Jin, y otros (2010) Tissue Eng . Parte A. 16 (8 ): 2429-40) , dextrano-polietilenglicol (Jukes, y otros (2010) Tissue Eng. Parte A., 16 ( 2 ) : 565-73 ) , o dextrano-gluteraldehído (Brondsted, y otros (1998) J. Controlled Reléase, 53:7-13). Un experto en la materia sabrá que muchos polímeros similares e hidrogeles se pueden formar al incorporar el estradómero fijado dentro del polímero o hidrogel y controlar el tamaño de poro al diámetro deseado.

Tras la formulación, las soluciones se administran en una manera compatible con la dosificación de la formulación y en tal cantidad como sea terapéuticamente efectiva para resultar en una mejoría o remedio de los síntomas. Las formulaciones son fácilmente administrables en una variedad de formas de dosificación tales como soluciones ingeribles, cápsulas de liberación de fármacos y similares. Algunas variaciones en la dosificación pueden ocurrir en dependencia de las condiciones del sujeto que se trata. La persona responsable por la administración puede, en cualquier evento, determinar la dosificación adecuada para el sujeto individual. Además, para la administración en humanos, las preparaciones alcanzan los estándares de esterilidad, seguridad general y pureza como se requiere por el Centro para la evaluación de biológicos y estándares de investigación FDA.

La ruta de administración variará, naturalmente, con la localización y naturaleza de la enfermedad que se trata, y puede incluir, por ejemplo, administración intradérmica, transdérmica, subdérmica, parenteral, nasal, intravenosa, intramuscular, intranasal, subcutánea, percutánea, intratraqueal , intraperitoneal , intratumoral, perfusión, lavado, inyección directa, y oral.

El término "administración parenteral" como se usa en la presente descripción incluye cualquier forma de administración en la cual el compuesto se absorbe en el sujeto sin involucrar la absorción a través de los intestinos. Las administraciones parenterales ilustrativas que se usan en la presente invención incluyen, pero no se limitan a la administración intramuscular, intravenosa, intraperitoneal , intratumoral , intraocular, nasal o intraarticular .

Adicionalmente , el estradómero de la presente invención puede opcionalmente administrarse antes, durante o después de otro agente farmacéutico. Por ejemplo, se encontró sorprendentemente que la administración concomitante del estradómero de la presente invención y la prednisolona alcanza resultados sinergisticamente superiores que los observados con la composición de estradómero o la prednisolona solos (ver la Figura 3) .

Más abajo hay ejemplos específicos de varias categorías de formulaciones farmacéuticas y rutas preferidas de administración, como se indica, para enfermedades ilustrativas específicas: Tabletas bucales o sublinguales disolubles: angina, poliarteritis nodosa.

Intravenosa: Púrpura Trombocitopénica Idiopática, miositis con cuerpos de inclusión, polineuropatía desmielinizante paraproteinémica de IgM, fascitis necrotizante, pénfigo, gangrena, dermatomiositís , granuloma, linfoma, sepsis, anemia aplásica, falla orgánica multisistémica, mieloma múltiple y gammapatía monoclonal de significado incierto, polirradiculoneuropatia desmielini zante inflamatoria crónica, miopatias inflamatorias, púrpura trombocitopénica trombótica, miositis, anemia, neoplasia, anemia hemolitica, encefalitis, mielitis, mielopatia especialmente asociada con el virus linfotrópico-1 de células T humanas, leucemia, esclerosis múltiple y neuritis óptica, asma, necrólisis epidérmica, síndrome de Lambert--Eaton miasténico, miastenia gravis, neuropatía, uveítis, síndrome de Guillain-Barré, enfermedad injerto contra huésped, síndrome del hombre rígido, degeneración cerebelosa paraneoplásica con anticuerpos anti-Yo, encefalomielitís paraneoplásica y neuropatía sensorial con anticuerpos anti-Hu, vasculitis sistémica, lupus eritematoso sistémico, neuropatía diabética autoinmune, neuropatía idiopática aguda disautonómica, síndrome de Vogt-Koyanagi-Harada, neuropatía motora multifocal, síndrome de la neurona motora naja asociado con anti-/G l, desmielinización, glomerulonefritis membranoproliferativa, miocardiopatía, enfermedad de Kawasaki, la artritis reumatoide y síndrome de Evan IM - ITP, CIDP, S, dermatomiositis , miastenia gravis, distrofia muscular. El término "administración intravenosa" como se usa en la presente descripción incluye todas las técnicas para suministrar un compuesto o composición de la presente invención a la circulación sistémica a través de una inyección o infusión intravenosa.

Gel dérmico, loción, crema o parche: vitíligo, herpes zorter, acné, quelitis.

Supositorio rectal, gel, o infusión: colitis ulcerativa, inflamación hemorroidal.

Oral como pildora, pastilla, encapsulada o con recubrimiento entérico: Enfermedad de Crohn, enfermedad celíaca, síndrome del intestino irritable, enfermedad inflamatoria del hígado, esófago de Barrett.

Intra-cortical : epilepsia, de Alzheimer, esclerosis múltiple, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntingdon.

Implante o infusión Intra-abdominal: endometriosis .

Gel o supositorio intra- vaginal: vaginitis bacteriana, trichomonal o fúngica.

Dispositivos médicos: Endoprótesis recubierta en la arteria coronaria, articulación prostética.

Los estradómeros que se describen en la presente descripción se pueden administrar en dosificaciones de aproximadamente 0.01 mg por kg a aproximadamente 300 mg por kg de peso corporal, y especialmente de 0.01 mg por kg de peso corporal a aproximadamente 1000 mg por kg de peso corporal, y se pueden administrar al menos una vez al día, semanal, bisemanal o mensual. Un régimen de dosificación bifásica se puede usar en donde la primera fase de dosificación comprende aproximadamente 0.1% a aproximadamente 300% de la dosificación de la segunda fase.

APLICACIONES TERAPÉUTICAS DE LOS ESTRADOMEROS Basándose en el diseño racional y en validaciones in vitro e in vivo, los estradómeros de la presente invención servirán como productos biofarmacéuticos importantes para el tratamiento de enfermedades autoinmunes y para la modulación de la función inmune en una variedad de otros contextos tales como la bioinmunoterapia para el cáncer y las enfermedades inflamatorias. Las afecciones médicas adecuadas para el tratamiento con los biomiméticos inmunológicamente activos descritos en la presente descripción incluyen las que actualmente se tratan habitualmente con hlVIG o en las que la hlVIG se ha encontrado que es clínicamente útil tales como las citopenias autoinmunes, polineuropatía desmielinizante inflamatoria crónica, síndrome de Guillain-Barré, miastenia gravis, enfermedad autoinmune anti-Factor VIII, dermatomiositis, vasculitis y uveítis (Ver, F. G. van der Meche, P. I. Schmitz, N. Engl. J. Med. 326, 1123 (1992); P. Gajdos y otros, Lancet i, 406 (1984); Y. Sultán, M. D. Kazatchkine, P. Maisonneuve, U. E. Nydegger, Lancet ii, 765 (1984); M. C. Dalakas y otros, N . Engl. J. Med. 329, 1993 (1993); D. R. Jayne, M. J. Davies, C. J. Fox, C. M. Black, C. M. Lockwood, Lancet 337, 1137 (1991); P. LeHoang, N. Cassoux, F. George, N. Kullmann, M. D. Kazatchkine, Ocul . Immunol . Inflamm. 8, 49 (2000)) y los cánceres o afecciones de enfermedad inflamatoria en las cuales se puede usar un anticuerpo monoclonal o ya está en uso clínico. Las afecciones incluidas entre aquellas que se pueden tratar eficazmente por los compuestos que son objeto de la presente invención incluyen una enfermedad inflamatoria con un desequilibrio en las redes de citocinas, un trastorno autoinmune mediado por autoanticuerpos patogénicos o células T autoagresivas , o una fase aguda o crónica de una enfermedad o proceso recidivante crónico autoinmune, inflamatorio o infeccioso .

Adicionalmente , otras afecciones médicas que tienen un componente inflamatorio se beneficiarán del tratamiento con estradómeros tales como la esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad de Huntington, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, infarto de miocardio, accidente cerebrovascular , Hepatitis B, Hepatitis C, inflamación asociada con el virus de la inmunodeficiencia humana, adrenoleucodistrofia, y trastornos epilépticos especialmente aquellos que se cree que están asociados con la encefalitis posvírica que incluyen el síndrome de Rasmussen, el síndrome de West, y el síndrome de Lennox-Gastaut .

El enfoque general para la terapia por medio del uso de los estradómeros aislados descritos en la presente descripción es administrar a un sujeto que tiene una enfermedad o afección, una cantidad terapéuticamente eficaz del biomimético inmunológicamente activo aislado para efectuar un tratamiento. En algunas modalidades, las enfermedades o afecciones se pueden categorizar en general como enfermedades inflamatorias con un desbalance en las redes de citocinas, un trastorno autoinmune mediado por autoanticuerpos patogénicos o células T autoagresivas, o una fase aguda o crónica de una enfermedad o proceso crónico recidivante.

El término "tratar" y "tratamiento" como se usa en la presente descripción se refiere a administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un estradómero de la presente invención de modo que el sujeto tiene una mejora en una enfermedad o afección, o un síntoma de la enfermedad o afección. La mejora es cualquier mejora o remedio de la enfermedad o afección, o síntoma de la enfermedad o afección. La mejora es una mejora observable o medible, o puede ser una mejora en la sensación general de bienestar del sujeto. Así, alguien con experiencia en la materia se da cuenta de que un tratamiento puede mejorar el estado de la enfermedad, pero puede no ser una cura completa de la enfermedad. Específicamente, las mejoras en los sujetos pueden incluir uno o más de: disminución de la inflamación; disminución de los marcadores de laboratorio de inflamación tales como la proteina C reactiva; disminución de la autoinmunidad como se evidencia por uno o más de: las mejoras en los marcadores autoinmunes tales como los autoanticuerpos o en el conteo de plaquetas, conteo de glóbulos blancos, conteo de . glóbulos rojos, disminución de la erupción cutánea o púrpura, disminución de la debilidad, adormecimiento u hormigueo, aumento de los niveles de glucosa en pacientes con hiperglucemia, disminución del dolor en las articulaciones, inflamación, hinchazón, o degradación, disminución de la frecuencia de los calambres y el volumen de la diarrea, disminución de la angina, disminución de la inflamación de los tejidos, o disminución de la frecuencia de las crisis; disminuciones en la carga tumoral del cáncer, aumento del tiempo hasta la progresión del tumor, disminución del dolor en el cáncer, aumento de la supervivencia o mejora de la calidad de vida; o retraso en la progresión o mejora de la osteoporosis .

El término "cantidad terapéuticamente eficaz" como se usa en la presente descripción se refiere a una cantidad que resulta en una mejora o remedio de los síntomas de la enfermedad o afección.

Como se usa en la presente descripción, "profilaxis" puede significar la prevención completa de los síntomas de una enfermedad, un retraso en el inicio de los síntomas de una enfermedad, o una disminución en la severidad de los síntomas de la enfermedad que se desarrollan posteriormente.

El término "sujeto" como se usa en la presente descripción, significa cualquier sujeto mamífero al que los estradómeros de la presente invención se le administran de acuerdo con los métodos descritos en la presente descripción. En una modalidad específica, los métodos de la presente descripción se emplean para tratar a un sujeto humano. Los métodos de la presente descripción además se pueden emplear para tratar primates no humanos (por ejemplo, monos, babuinos y chimpancés), bovinos, caballos, gatos, perros, cerdos, conejos, cabras, ciervos, ovejas, hurones, jerbos, conejillo de indias, hámsters, murciélagos, aves (por ejemplo, pollos, pavos y patos), peces y reptiles para producir moléculas de estradómeros específicas de especies o quiméricas.

Particularmente, los estradómeros de la presente invención se pueden usar para tratar afecciones que incluyen pero sin limitarse a, la insuficiencia cardiaca congestiva (CHF) , vasculitis, rosácea, acné, eczema, miocarditis y otras afecciones del miocardio, lupus eritematoso sistémico; diabetes, espondilopatías , fibroblastos sinoviales y el estroma de la médula ósea, pérdida de hueso; enfermedad de Paget, osteoclastoma ; raieloma múltiple; cáncer de mama; osteopenia por desuso; malnutrición, enfermedad periodontal, enfermedad de Gaucher, histiocitosis de las células de Langerhans, lesión de la médula espinal, artritis séptica aguda, osteomalacia, síndrome de Cushing, displasia fibrosa monoostótica, displasia fibrosa poliostótica, reconstrucción periodontal, y fracturas óseas; sarcoidosis; cáncer óseo osteolítico, cáncer de pulmón, cáncer de riñon y cáncer rectal; metástasis ósea, tratamiento del dolor óseo, e hipercalcemia humoral maligna, espondilitis anquilosante y otras espondiloartropatías ; rechazo al trasplante, infecciones virales, neoplasias hematológicas y afecciones similares a las neoplasias por ejemplo, linfoma de Hodgkin; linfornas no Hodgkin (linfoma de Burkitt, linfoma linfocítico pequeño/leucemia linfocítica crónica, micosis fungoide, linfoma de células del manto, linfoma folicular, linfoma difuso de células B grandes, linfoma de la zona marginal, leucemia de células peludas y leucemia linfoplasmacítica ) , tumores de las células precursoras de linfocitos, que incluyen leucemia/linforna linfoblástico agudo de células B, y leucemia/linforna linfoblástico agudo de células T, timoma, tumores de las células T y NK maduras, que incluyen leucemias de células T periféricas, leucemia de células T/linfoma de células T adultas y leucemia linfocítica granular grande, histiocitosis de células de Langerhans, neoplasias mieloides tales como leucemias mieloides agudas, que incluyen AML con maduración, AML sin diferenciación, leucemia promielocítica aguda, leucemia mielomonocitica aguda, y leucemias mielociticas agudas, síndromes mielodisplásicos y trastornos mieloproliferativos crónicos, que incluyen la leucemia mieloide crónica, tumores del sistema nervioso central, por ejemplo, los tumores del cerebro (glioma, neuroblastoma , astrocitoma, meduloblastoma, ependimoma, y retinoblastoma) , los tumores sólidos (cáncer nasofaríngeo, carcinoma de células básales, cáncer de páncreas, cáncer del conducto biliar, sarcoma de Kaposi, cáncer testicular, cáncer uterino, vaginal o cervical, cáncer de ovario, cáncer primario de hígado o cáncer de endometrio, tumores del sistema vascular (angiosarcoma y hemangiopericitoma)) u otro tipo de cáncer.

"Cáncer" en la presente descripción se refiere a o describe la afección fisiológica en mamíferos que está típicamente caracterizada por el crecimiento celular no regulado. Los ejemplos de cáncer incluyen pero sin limitarse a carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma (que incluyen liposarcoma, sarcoma osteogénico, angiosarcoma, endoteliosarcoma, linfangiosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, fibrosarcoma, mixosarcoma, condrosarcoma) , tumores neuroendocrinos, mesotelioma, cordoma, sinovioma, schwanoma, meningioma, adenocarcinoma, melanoma, y leucemia o tumores malignos linfoides. Ejemplos más particulares de dichos cánceres incluyen cáncer de células escamosas (por ejemplo, cáncer epitelial de células escamosas) , cáncer de pulmón que incluyen cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de pulmón de células no pequeñas, adenocarcinoma de pulmón y carcinoma escamoso de pulmón, carcinoma de pulmón de células pequeñas, cáncer del peritoneo, cáncer hepatocelular , cáncer gástrico o de estómago que incluyen cáncer gastrointestinal, cáncer pancreático, glioblastoma, cáncer cervical, cáncer de ovario, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, hepatoma, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer colorrectal, carcinoma endometrial o uterino, carcinoma de glándulas salivares, de cáncer renal o de riñon, cáncer de próstata, cáncer de vulva, cáncer de tiroides, carcinoma hepático, carcinoma anal, carcinoma de pene, cáncer testicular, cáncer de esófago, tumores del tracto biliar, tumor de Ewing, carcinoma de células básales, adenocarcinoma, carcinoma de glándula sudorípara, carcinoma de glándulas sebáceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, carcinoma de células renales, hepatoma, carcinoma del conducto biliar, coriocarcinoma , seminoma, carcinoma embrionario, tumor de Wilms, tumor testicular, carcinoma de pulmón, carcinoma de vejiga, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craneofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma acústico, oligodendroglioma, meningioma, melanoma, neuroblastoma, retinoblastoma , leucemia, linfoma, mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenstrom, enfermedad mielodisplásica, enfermedad de cadena pesada, tumores neuroendocrinos, Schwanoma, y otros carcinomas, asi como cáncer de cabeza y cuello.

Los estradómeros de la presente invención se pueden usar para tratar enfermedades autoinmunes. El término "enfermedad autoinmune" como se usa en la presente descripción se refiere a un grupo variado de más de 80 enfermedades y afecciones. En todas estas enfermedades y afecciones, el problema de fondo es que el sistema inmunológico del cuerpo ataca al propio cuerpo. Las enfermedades autoinmunes afectan a todos los sistemas principales del cuerpo que incluyen el te ido conectivo, los nervios, los músculos, el sistema endocrino, la piel, la sangre y los sistemas respiratorio y gastrointestinal. Las enfermedades autoinmunes incluyen, por ejemplo, el lupus eritematoso sistémico, la artritis reumatoide, la esclerosis múltiple, la miastenia gravis, y la diabetes tipo 1.

La enfermedad o afección que puede tratarse por medio del uso de las composiciones y métodos de la presente invención puede ser un proceso hematoinmunológico, que incluye pero sin limitarse a púrpura trombocitopénica idiopática, trombocitopenia aloinmune / autoinmune, trombocitopenia inmune adquirida, neutropenia autoinmune, anemia hemolitica autoinmune, aplasia de glóbulos rojos asociada al Parvovirus B19, autoinmunidad adquirida antifactor VIII, enfermedad de von Willebrand adquirida, mieloma múltiple y gammapatia monoclonal de importancia desconocida, sepsis, anemia aplásica, aplasia pura de glóbulos rojos, anemia de Diamond-Blackfan, enfermedad hemolitica del recién nacido, neutropenia mediada por el sistema inmune, refractariedad a transfusión de plaquetas, neonatal, púrpura post-transfusión, síndrome urémico hemolítico, vasculitis sistémica, púrpura trombocitopénica trombótica o síndrome de Evan.

La enfermedad o afección puede ser además un proceso neuroinmunológico, que incluye pero sin limitarse al síndrome de Guillain-Barre, polirradiculoneuropatía desmielinizante inflamatoria crónica, polineuropatía desmielinizante paraproteinémica IgM, síndrome miasténico de Lambert-Eaton, miastenia gravis, neuropatía motora multifocal, síndrome de neurona motora inferior asociado con anti-/GMl, desmielinación, esclerosis múltiple y neuritis óptica, síndrome del hombre rígido, degeneración cerebelosa paraneoplásica con anticuerpos anti-Yo, encefalomielitis paraneoplásica, neuropatía sensorial con anticuerpos anti-Hu, epilepsia, encefalitis, mielitis, mielopatía especialmente asociada al virus 1 linfotrópico de células T humanas, neuropatía diabética autoinmune, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, o neuropatía disautonómica idiopática aguda.

La enfermedad o afección puede ser además un proceso de enfermedad reumática, que incluye pero sin limitarse a la enfermedad de Kawasaki, artritis reumatoide, síndrome de Felty, vasculitis ANCA-positiva , polimiositis espontánea, dermatomiositis , síndromes de los antifosfolípidos , abortos espontáneos recurrentes, lupus eritematoso sistémico, artritis idiopática juvenil, síndrome de Raynaud, síndrome de CREST, o uveítis.

La enfermedad o afección puede ser además un proceso de enfermedad dermatoinmunológica, que incluye pero sin limitarse a necrólisis epidérmica tóxica, gangrena, granuloma, enfermedades autoinmunes de formación de burbujas en la piel que incluyen pénfigo vulgar, penfigoide bulloso, pénfigo foliáceo, vitíligo, síndrome de shock tóxico estreptocócico, esclerodermia, esclerosis sistémica que incluyen esclerosis sistémica cutánea difusa y limitada, o dermatitis atópica (especialmente dependientes de los-esferoides) .

La enfermedad o afección puede ser además un proceso de enfermedad inmunológica musculoesquelética, que incluye pero sin limitarse a la miositis con cuerpos de inclusión, fascitis necrotizante, miopatias inflamatorias, miositis, miopatia anti-decorina (antigeno BJ) , miopatía necrótica paraneoplásica, miopatia vacuolada ligada a X, polimiositis inducida por Penacillamine, aterosclerosis , enfermedad de las arterias coronarias o miocardiopatia .

La enfermedad o afección puede ser además un proceso de enfermedad inmunológica gastrointestinal, que incluye pero sin limitarse a anemia perniciosa, hepatitis activa crónica autoinmune, cirrosis biliar primaria, enfermedad celiaca, dermatitis herpetiforme , cirrosis criptogénica , artritis reactiva, enfermedad de Crohn, enfermedad de Whipple, colitis ulcerosa o colangitis esclerosante.

La enfermedad o afección puede ser además la enfermedad de injerto contra huésped, rechazo del injerto mediado por anticuerpos, rechazo después del trasplante de médula ósea, inflamación de la enfermedad postinfecciosa, linfoma, leucemia, neoplasias, asma, diabetes mellitus tipo 1 con anticuerpos anti-células beta, síndrome de Sjógren, enfermedad mixta del tejido conectivo, enfermedad de Addison, síndrome de Vogt-Koyanagi-Harada, glomerulonefritis membranoproliferativa, síndrome de Goodpasture, enfermedad de Graves, tiroiditis de Hashimoto, granulomatosis de egener, micropoliarteritis , síndrome de Churg-Strauss , poliarteritis nodosa o fallo multiorgánico .

En otra modalidad, los estradómeros descritos en la presente descripción se podrían utilizar en un sistema de inducción en donde la sangre se extrae de un paciente y se pone en contacto transitoriamente con el (los) estradómero ( s ) por un período de tiempo de aproximadamente una media hora a aproximadamente tres horas antes de introducirse de nuevo en el paciente. En esta forma de terapia celular, las células efectoras propias del paciente se exponen al estradómero que está fijo en una matriz ex vivo con el fin de modular las células efectoras por la exposición de las células efectoras al estradómero. La sangre que incluye las células efectoras moduladas después se infunden en el paciente. Tal sistema de inducción podría tener numerosas aplicaciones clínicas y terapéuticas .

Los estradómeros descritos en la presente descripción además se pueden aplicar fácilmente para alterar respuestas del sistema inmune en una variedad de contextos para afectar cambios específicos en los perfiles de la respuesta inmune.

Alterar o modular una respuesta inmune en un sujeto se refiere a aumentar, disminuir o cambiar la relación o los componentes de una respuesta inmune. Por ejemplo, los niveles de producción o secreción de citocinas se pueden aumentar o disminuir como se desee al dirigir la adecuada combinación de FcR con un estradómero designado para interactuar con esos receptores. La producción de anticuerpos además se puede aumentar o disminuir; la relación de dos o más citocinas o receptores del sistema inmune se puede cambiar; o tipos adicionales de citocinas o anticuerpos pueden causar que se produzcan. La respuesta inmune además puede ser una función efectora de una célula inmune que expresa un FcDR, que incluye el potencial fagocitico aumentado o disminuido de células derivadas de macrófagos monocitos, el aumento o disminución de la función de los osteoclastos , el aumento o disminución de la presentación del antigeno por las células presentadoras de antigenos (por ejemplo, los DC) , el aumento o disminución de la función de las células NK, el aumento o disminución de la función de las células B, en comparación con una respuesta inmune que no es modulada por un biomimético inmunológicamente activo descrito en la presente descripción .

En una modalidad preferida, un sujeto con cáncer o una enfermedad autoinmune o inflamatoria tiene su respuesta inmune alterada que comprende la etapa de administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un estradómero descrito en la presente descripción a un sujeto, en donde la cantidad terapéuticamente eficaz del estradómero altera la respuesta inmune en el sujeto. Idealmente esta intervención trata la enfermedad o afección en el sujeto. La respuesta inmune alterada puede ser un aumento o una disminución de la respuesta y puede implicar niveles alterados de citocinas que incluyen los niveles de cualquiera de IL-6, IL-10, IL-8, IL-23, IL-7, IL-4, IL-12, IL-13, IL-17, TNF-alfa e IFN-alfa. En una modalidad preferida, la 11-6 o la IL-8 están disminuidas en respuesta a la terapia. En una modalidad especialmente preferida, la IL-6 y la IL-8 están disminuidas en respuesta a la terapia. La invención sin embargo no está limitada por ningún mecanismo de acción particular de los biomiméticos descritos. La respuesta inmune alterada puede ser un nivel alterado de autoanticuerpos en el sujeto. La respuesta inmune alterada puede ser un nivel alterado de células T autoagresivas en el sujeto.

Por ejemplo, reducir la cantidad de producción de TNF-alfa en las enfermedades autoinmunes puede tener efectos terapéuticos. Una aplicación práctica de esto es la terapia de anticuerpo anti-TNF-alfa (por ejemplo, .REMICADE®) que está clínicamente probado para tratar la placa de soriasis, artritis reumatoide, artritis soriásioa, enfermedad de Crohn, colitis ulcerativa y espondilitis anquilosante. Estas enfermedades autoinmunes tienen etiologías diferentes, pero comparten componentes inmunológicos claves del proceso de la enfermedad relacionados a la inflamación y la actividad de las células inmunes. Un estradomero designado para reducir la producción de TNF-alfa será igualmente eficaz en estas y otras enfermedades autoinmunes. El perfil de respuesta inmune alterada además puede ser la modulación directa o indirecta para efectuar una reducción en la producción de anticuerpos, por ejemplo autoanticuerpos dirigidos a los tejidos propios de los sujetos, o alterados niveles de células T autoagresivas en el sujeto. Por ejemplo, la esclerosis múltiple es un trastorno autoinmune que implica células T autorreactivas que se pueden tratar por terapia con interferón beta. Ver, por ejemplo, Zafranskaya M, y otros, Interferon-beta therapy reduces CD4+ and CD8+ T-cell reactivity in múltiple sclerosis, Immunology 2007 Mayo; 121 (1) :29-39-Epub 2005 Diciembre 18. Un diseño de estradomero para reducir los niveles de células T autorreactivas será igualmente eficaz en la esclerosis múltiple y otras enfermedades autoinmunes que impliquen las células T autorreactivas.

Los estradómeros descritos en la presente descripción se pueden usar para modular la expresión de moléculas co-estimulatorias a partir de una célula inmune, que incluye una célula dendritica, un macrófago, un osteoclasto, un monocito, o una células NK o para inhibir en estas mismas células la diferenciación, la maduración, o la secreción de citocinas, que incluyen interleucina-12 (IL- 12), o de la creciente secreción de citocina, que incluyen interleucina-10 (IL- 10), o interleucina-6 (IL-6) . Un técnico con experiencia además puede validar la eficacia de un biomimético inmunológicamente activo al exponer una célula inmune al biomimético inmunológicamente activo y medir la modulación de la función de la célula inmune, en donde la célula inmune es una célula dendritica, un macrófago, un osteoclasto, o un monocito. En una modalidad, la célula inmune se expone al biomimético inmunológicamente activo in vitro y además comprende la etapa de determinar una cantidad de un receptor de la superficie celular o de una producción de citocinas, en donde un cambio en la cantidad del receptor de la superficie de la célula o la producción de citocina indica una modulación de la función de la célula inmune. En otra modalidad la célula inmune se expone al biomimético inmunológicamente activo in vivo en un modelo animal para una enfermedad autoinmune que además comprende una etapa de evaluación de un grado de mejora en la enfermedad autoinmune.

MÉTODOS QUE EMPLEAN EL FC FIJO Con el fin de entender el papel del Fe: las interacciones del receptor Fe gamma (FcDR, el receptor Fe para el Fe de IgG) y la importancia para la función de la hlVIG de su Fe que está biológicamente inmovilizado dentro de una inmunoglobulina, se compararon los efectos de la hlVIG tanto con una forma fija de un fragmento de Fe de IgGl recombinante (rFCF) y una forma soluble de un fragmento de Fe de IgGl recombinante (sFc) que contiene los dominios bisagra-CH2-CH3 en la función de los monocitos durante el proceso de diferenciación a partir de monocitos a células dendriticas inmaduras (iDC) .

La exposición de los monocitos cultivados en factor estimulador de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF) e interleucina-4 (IL-4), a rFCF inmovilizado y a hlVIG inmovilizada, pero no a bajas dosis de hlVIG soluble, aumentó la expresión de CD86, retrasó la expresión de CD1 Ic, y suprimió la expresión de CDIa en las células. Además, estos cambios probablemente no son secundarios a la inmovilización de proteínas no específicas del rFCF en el plástico, como agregados solubles al calor (sHA) de hlVIG, los sHA del rFCF o altas dosis de hlVIG (reconocido que contienen Fs multimérico) , indujo cambios similares a los observados con rFCF.

Tomados en conjunto, los datos indican que la exposición de iDC a hlVIG inmovilizada en la superficie de un sustrato sólido, semisólido, o gelatinoso resulta en una única población de DC (CD86 alto, CDIa bajo), capaz de orquestar la tolerancia inmune, y que las moléculas inmovilizadas que incluyen la porción funcional de fragmentos Fe de inmunoglobulina G (IgG) pueden ser útiles como mimético de hlVIG para el tratamiento de la inflamación local y sistémica, asi como una gran variedad de otras condiciones patológicas que son, directa o indirectamente, mediadas por células derivadas de monocitos (MDC) tales como las iDC. Además, la inmovilización de la parte funcional del Fe de IgG en los dispositivos, descritos en la presente descripción como "dispositivos de recubrimiento", que se ' implantan en los cuerpos o se unen a los cuerpos de los animales (por ejemplo, pacientes humanos) con moléculas que contienen la porción funcional del fragmento Fe de IgG puede disminuir, si no prevenir, la respuesta inflamatoria a tales dispositivos o tratar enfermedades sistémicas al afectar las células inmunes que después pasan a la circulación, alteradas por el contacto con el estradómero fijo en el recubrimiento o en el dispositivo implantado.

La invención proporciona un método de inhibición de la actividad de una célula derivada de monocito (MDC) . El método incluye poner en contacto la célula con una composición que comprende un sustrato con un reactivo Fe unido a éste. El contacto puede ser in vitro, in vivo, o ex vivo. Alternativamente, la célula puede estar en un animal. El animal puede ser uno que tiene, o está en riesgo de desarrollar, una afección mediada por células derivadas de monocitos (MDCMC) . La MDC puede ser, por ejemplo, una célula dendritica, un macrófago, un monocito, o un osteoclasto. [00260] La invención además proporciona un método de tratamiento o profilaxis. El método que incluye administrar a un animal una composición que contiene un sustrato que tiene un reactivo Fe unido a éste, el animal es uno que tiene o está en riesgo de desarrollar una MDCMC.

Además es posible que los estradómeros de la presente invención den lugar a un reactivo Fe fijo in vivo. Por "reactivo Fe fijo in vivo" se entiende el Fe fijo a la superficie de las células, es decir, las plaquetas, in vivo. Se ha observado que las plaquetas que expresan los FcDR están eficientemente recubiertas con los estradómeros de la presente invención y que éstas plaquetas recubiertas inducen tolerancia en un organismo hasta que ellas se aclaran. Se ha observado que sorprendentemente los estradómeros de la presente invención se unen eficientemente al porcentaje de plaquetas que expresan los FcyR. Como los complejos agregados ova : anti-ova y los complejos agregados RBC:anti-RBC inducen tolerancia y evitan la destrucción de las plaquetas en ITP, estas plaquetas recubiertas con estradómero pueden inducir tolerancia en un organismo. Este puede ser otro mecanismo por el que los estradómeros de la presente invención ejercen sus funciones de modulación inmune.

Basándose en la afinidad de unión a los receptores Fe gamma de los estradómeros mucho más alta en comparación con el Fe de la inmunoglobulina nativa contenida dentro del estradómero, es posible además que los estradómeros de la presente invención den lugar a un reactivo de control de Fe de inmunoglobulina fijo in vivo. Por "reactivo de control de Fe de inmunoglobulina fijoin vivo" se entiende el estradómero fijo a la superficie de las células, que incluye pero sin limitarse a los monocitos, las células dendríticas, las células T, las células T reguladoras, las células T gamma delta, y las plaquetas, in vivo. Al unirse a los receptores de superficie de las células que incluyen los receptores Fe gamma, los estradómeros bloquean la unión de otras inmunoglobulinas a estos receptores. Los anticuerpos monoclonales o policlonales se usan en- los ensayos de investigación tales como la citometría de flujo y en el diagnóstico clínico. Un aspecto importante de esta invención es la prevención de la unión no específica por el componente Fe de estos anticuerpos a los receptores Fe gamma y otros receptores de la superficie de la célula a los que el Fe de la inmunoglobulina se puede unir.

Como se usa en la presente descripción, el término "afección mediada por las células derivadas de monocitos (MDCMC) " se refiere a una afección patológica que se debe directa o indirectamente, parcial o totalmente, a la actividad de, o a factores producidos por, células derivadas de monocitos. Las células derivadas de monocitos incluyen, pero sin limitarse a, monocitos, macrófagos, células dendriticas interdigitales (generalmente referidas en la presente descripción como "células dendriticas" que comprenden células similares a las dendriticas y células similares a las dendriticas foliculares) (maduras e inmaduras), osteoclastos, células similares a las de la microglia, células similares a las células del islote que producen insulina derivadas de monocitos, células de mastocitos inmaduros derivadas de monocitos y microparticulas derivadas de monocitos.

Con respecto a los métodos que usan el Fe fijo, el término "reactivo Fe" se refiere a cualquier molécula, o complejo molecular, que incluye uno o más (por ejemplo, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 18, 20, o más) porciones funcionales de un fragmento Fe de una inmunoglobulina Ig (IgG). El fragmento Fe de la IgG consiste de las porciones C-terminal de las dos cadenas pesadas de una molécula de IgG, enlazadas entre si y consiste de las regiones bisagra, los dominios CH2, y los dominios CH3 de ambas cadenas pesadas enlazadas entre si. El "la porción funcional del fragmento Fe de la IgG" consiste de las regiones de bisagra, los dominios CH2, y opcionalmente , todos o algunos (por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, o 49) de los primeros 50 aminoácidos (a partir del extremo N) de los dominios CH3, de ambas cadenas pesadas enlazadas entre si. En humanos, (a) la región bisagra de IgGl . contiene 15 aminoácidos, el dominio CH2 contiene 110 aminoácidos, y el dominio CH3 contiene 106 aminoácidos; (b) la región bisagra de IgG2 contiene 12 aminoácidos, el dominio CH2 contiene 109 aminoácidos, y el dominio CH3 contiene 107 aminoácidos; (c) la región bisagra de IgG3 contiene 62 aminoácidos, el dominio CH2 contiene 104 aminoácidos, y el dominio CH3 contiene 106 aminoácidos; y (d) la región bisagra de IgG4 contiene 12 aminoácidos, el dominio CH2 contiene 109 aminoácidos, y el dominio CH3 contiene 107 aminoácidos.

Como en las moléculas de IgG de tipo salvaje, en los reactivos Fe descritos anteriormente las dos cadenas de polipéptido derivadas de las cadenas pesadas de la IgG son generalmente, pero no necesariamente, idénticas. Asi, un reactivo Fe puede ser, sin limitarse a, una molécula entera de IgG, una molécula entera de IgG enlazada a un polipéptido que no se deriva de inmunoglobulina, un fragmento FC de IgG, un fragmento Fe de IgG enlazado a un polipéptido que no se deriva de inmunoglobulina, una porción funcional de un fragmento Fe de IgG, una porción funcional de un fragmento Fe de IgG enlazado a un polipéptido que no se deriva de inmunoglobulina o multimeros (por ejemplo, dímeros, trímeros, tetrámeros, pentámeros, hexámeros, heptámeros, octámeros, nonámeros, o decámeros) de cualquiera de estos. Los reactivos Fe además pueden ser los estradómeros y estradocuerpos descritos anteriormente siempre que ellos caigan dentro de la anterior definición de un reactivo Fe.

En el Fe fijo, los componentes de la cadena pesada de la inmunoglobulina del reactivo Fe pueden tener secuencias de aminoácidos de tipo salvaje o pueden ser secuencias de aminoácidos de tipo salvaje pero con no más de 20 (por ejemplo, no más de: 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, o 1) sustituciones de aminoácidos. Tales sustituciones son preferentemente, pero no necesariamente, sustituciones conservadoras. Los cambios conservadores incluyen típicamente los cambios dentro de los siguientes grupos: glicina y alanina; valina, isoleucina, y leucina; ácido aspártico y ácido glutámico; asparagina, glutamina, serina y treonina; lisina, histidina y arginina; y fenilalanina y tirosina.

Un "reactivo Fe" de la invención tiene al menos 25% (por ejemplo, al menos: 30%; 40%; 50%; 60%; 70%; 80%; 90%; 95%; 98%; 99%; 99.5%; o 100% o aún más) de la capacidad de la molécula de IgG de la cual se derivaron los componentes del reactivo Fe de cadena pesada de IgG (la molécula de IgG de referencia) para unirse a un receptor Fe de interés. Cuando un "reactivo Fe" tiene componentes de cadena pesada derivadas de más de un tipo de molécula de IgG, la molécula de IgG de referencia es una que se une con la mayor avidez al receptor de Fe relevante de interés.

Como se usa en la presente descripción "Fe fijo" se refiere a un reactivo Fe que se une a un "sustrato" como se definió más abajo. Los términos "Fe fijo," "Fe unido" y "Fe estabilizado" son términos sinónimos. El Fe fijo está comprendido en la porción funcional de Fe (que incluyen pero sin limitarse a cualquier polipéptido que incluye la porción funcional de Fe) unido a un sustrato. El Fe fijo incluye, por ejemplo, la unión directa asi como la unión indirecta a través de polímeros de Fe al sustrato; la incorporación del Fe de IgG completo de manera aislada; la incorporación de sólo los dominios funcionales de Fe de IgG; o la incorporación de Fe de IgG completo o los dominios funcionales del Fe de IgG como parte de un polipéptido más grande tal como un anticuerpo, un estradómero, o un estradocuerpo . [00267] Tal como se aplica al Fe fijo, el término "sustrato" se refiere a un objetivo sólido, semisólido, o gelatinoso. El sustrato puede implantarse en, o unirse (o adherirse) a la superficie del cuerpo de un animal. Los sustratos pueden incluir, por ejemplo, componentes líquidos o gaseosos pero al menos una porción del sustrato es sólido, semi-sólido, o gelatinoso. Así, un sustrato puede ser una sustancia que es prácticamente insoluole en un disolvente acuoso pero soluble en un disolvente no acuoso. Tales sustancias incluyen lípidos (por ejemplo, fosfolípidos ) , ácidos grasos, y otros compuestos solubles en grasa, insolubles en disolventes acuosos. A partir de esto, estará claro que los sustratos incluyen liposomas. El sustrato puede ser poroso o no poroso. En ciertas modalidades, el sustrato es inerte a la superficie y/o el cuerpo al que se implanta, se une, o se adhiere.

El sustrato puede contener o ser fabricado de un polímero sintético, por ejemplo, nilón, teflón, dacron, cloruro de polivinilo, PEU (poli (éster uretano) ) , PTFE (politetrafluoetileno) , PMMA (metacrilato de metilo) PEEK, elastómeros termoplásticos, polímeros radioopacos, polietersulfona, siliconas, policarbonatos , poliuretanos , poliisobutileno y sus copolímeros, poliésteres, poliolefinas , poliisobutileno, copolímeros de etileno- alfaolefina, polímeros y copolímeros acrílieos ,· polímeros y copolímeros de haluro de vinilo tales como clorufo de polivinilo, éteres de polivinilo, polivinil metil éter, haluros de polivinilideno, fluoruro ' de polivinilideno, cloruro de polivinilideno, poliacrilonitrilo, cetonas de polivinilo, polivinilos aromáticos, poliestireno, ésteres de polivinilo, acetato de polivinilo, copolímeros de monómeros de vinilo, copolímeros de monómeros de vinilo y definas, copolímeros de etileno-metacrilato de metilo, copolímeros de propenonitrilo-estireno, resinas ABS, copolímeros de etileno- acetato de vinilo, poliamidas, nilón 66, policaprolactona , resinas alquídicas, polioxietilenos, poliimidas, poliéteres, resinas epoxi, rayón-triacetato, celulosa, acetato de- celulosa, butirato de celulosa, acetato butirato de celulosa, celofana, nitrato de celulosa, propionato de celulosa, éteres de celulosa, carboximetilcelulosa, colágenos, quitinas, ácido poliláctico, ácido poliglicólico, copolímeros de ácido poliláctico -óxido de polietileno, polisiloxanos, polisiloxanos sustituidos, copolímeros de acetato de etileno vinilo, elastómeros de poliolefina, y gomas EPDM, y combinaciones de los mismos.

El sustrato puede contener además o estar hecho de un metal o una aleación metálica, por ejemplo, acero inoxidable, platino, iridio, titanio, tántalo, aleación de níquel-titanio, o aleación de cobalto- cromo. Además, el sustrato puede incluir o ser un tejido animal o un producto de tejido animal, por ejemplo, un injerto de tejido u órgano. El tejido animal puede ser, por ejemplo, hueso (por ejemplo, hueso osteogénico) o cartílago. Además, el sustrato puede contener una proteína, por ejemplo, colágeno o queratina. El sustrato puede ser además o contener una matriz de tejido, por ejemplo, una matriz de tejido acelular. Las matrices acelulares particuladas y no particuladas se describen en detalle en, por ejemplo, las patentes de Estados Unidos núms . 5,336,616 y 6,933,326, cuyas descripciones se incorporan en la presente como referencia en su totalidad. El sustrato además puede ser o incluir una célula animal (por ejemplo, las células de reparación de tejidos, tales como fibroblastos; células madres mesenquimales) y puede ser, por ejemplo, un tapón de trasplante de cabello. El sustrato puede contener o ser un polisacárido, por ejemplo, agarosa. Además puede contener una sal, preferentemente una sal relativamente insoluble, por ejemplo, sulfato cálcico. El sustrato puede ser un gel o una crema. Además, puede contener silicio o silástico. Los sustratos pueden además contener una fibra natural, por ejemplo, seda, algodón, o lana.

Adicionalmente, el sustrato puede ser un dispositivo médico implantable. Puede ser, por ejemplo, una endoprótesis vascular (por ejemplo, una endoprótesis vascular tal como una endoprótesis de arteria coronaria; una endoprótesis de vías respiratorias tal como una endoprótesis endotraqueal o nasal; una endoprótesis gastrointestinal tal como una endoprótesis biliar o pancreática; o una endoprótesis urinaria tal como una endoprótesis ureteral) o .una sutura quirúrgica (por ejemplo, una trenza de seda, una cuerda crómica, nilón, plástico, o sutura metálica) o un grapa quirúrgica (por ejemplo, una grapa de aneurisma). El sustrato puede ser, por ejemplo, una cadera artificial, una articulación de cadera artificial, una rodilla artificial, una articulación de la rodilla artificial, un hombro artificial, una articulación del hombro artificial, un dedo o articulación del dedo artificiales, una placa ósea, una clavija ósea, un implante óseo de no unión, un implante de disco intervertebral, el cemento óseo, o un espaciador de cemento óseo. Además puede ser una derivación artero-venosa, un alambre implantable, un marcapasos, un corazón artificial, un dispositivo de asistencia cardiaca, un implante coclear, un desfibrilador implantable, un estimulador de la médula espinal, un estimulador del sistema nervioso central, o un implante de nervio periférico. Otros sustratos son prótesis dentales o coronas dentales.

En otras modalidades el sustrato puede ser un dispositivo o jaula de filtración embólica de los grandes vasos, un dispositivo percutáneo, un parche dérmico o sub-mucosa, o un dispositivo implantable de entrega de fármaco. El sustrato además puede ser un injerto de los grandes vasos sanguíneos, en el que el vaso sanguíneo es, por ejemplo, una arteria carótida, una arteria femoral, o una aorta. Además, el sustrato puede ser un implante subdérmico, un implante corneal, una lente infraocular o una lente de contacto.

El sustrato puede ser en forma de una hoja, una cuenta, una malla, una partícula de polvo, un hilo, una cuenta, o una fibra. Además incluye o es un sólido, un semisólido o una sustancia gelatinosa.

El sustrato además puede ser una célula que expresa el FcDR. Preferentemente el sustrato es una plaqueta.

Los polímeros útiles en la invención son preferentemente aquellos que son bioestable, biocompatibles , particularmente durante la inserción o la implantación del dispositivo en el cuerpo, y evitan la irritación de los tejidos del cuerpo.

Los reactivos Fe pueden estar recubiertos (es decir, fijos o estabilizados) sobre sustratos en cualquiera de una variedad de maneras. Por ejemplo, pueden estar recubiertos directamente sobre la superficie de los sustratos donde permanecen unidos por, por ejemplo, interacciones hidrofóbicas . Más abajo se describen unas pocas metodologías ((a) - (e) ) que implican el uso de polímeros: (a) El reactivo Fe se mezcla con una mezcla de polímeros miscibles que después se colocan en capas sobre la superficie del material sintético implantable, así se estabiliza el reactivo Fe. Los monómeros usados rutinariamente en la materia para hacer las mezclas de polímeros incluyen PLMA [poli- (metacrilato de laurilo) ] ; PEG [polietilenglicol] , PEO [óxido de polietileno] ; los polímeros de metacrilato de alquilo funcionalizados PMMA, PEMA. PPMA, y PBMA; itaconatos; fumaratos; y estirénicos. (b) Una capa de primera mano polimérica o una película de dimensión nanométrica se adhiere a la superficie del sustrato y después el reactivo Fe se adhiere a la capa de primera mano polimérica o a la película de dimensión nanométrica, así se estabiliza el reactivo Fe. (c) Una película fina de un monómero de polímero se aplica a la superficie del sustrato implantable y el monómero después se hace polimerizar, tales monómeros incluyen, por ejemplo, metano, tetrafluoroetileno, benceno, metanol, óxido de etileno, tetraglima, ácido acrílico, alilamina, metacrilato de hidroxietilo, N-vinilo pirrolidona, y mercaptoetanol . El reactivo Fe después se une al monómero resultante . (d) El sustrato se recubre con una proteina tal como la proteina A o la albúmina que se une al reactivo Fe, asi se estabiliza Fe a la superficie del sustrato. (e) El reactivo Fe se puede etiquetar con una cadena de aminoácidos hidrofóbicos que se unen a los materiales sintéticos implantables y provocan que el Fe estabilizado se oriente uniformemente.

Los métodos de la invención se pueden aplicar a cualquier especie animal y las moléculas de IgG a partir de la cual están hechas las porciones del reactivo Fe derivado de IgG pueden ser a partir de cualquier especie animal. Naturalmente, las especies animales relevantes son aquellas en las que se producen moléculas de IgG o similares a IgG. Generalmente las especies a la que se aplican los métodos y las especies a partir de la cual las porciones del reactivo Fe derivado de IgG usado en los métodos son las mismas. Sin embargo, no son necesariamente las mismas. Las especies de animales son preferentemente mamíferos e incluyen, sin limitarse a, humanos, primates no humanos (por ejemplo, monos, babuinos, y chimpancé) , caballos, animales bovinos (por ejemplo, toros, vacas, buey), cerdos, cabras, oveja, perros, gatos, conejos, jerbos, hámsters, ratas, y ratones. Las especies no mamiferas incluyen, por ejemplo, aves (por ejemplo, pollos, pavos, y patos) y peces.

Los términos "tratar", "tratamiento", y "profilaxis" tienen el mismo significado al usar Fe fijo como se describió anteriormente para los estradómeros .

Cuando los Fe fijos son dispositivos implantables recubiertos con reactivo Fe, se pueden implantar en, unir a, o adherir a órganos o tejidos internos relevantes o superficies del cuerpo de sujetos relevantes por medio del uso de métodos bien conocidos en la materia. Cuando se formulan como, por ejemplo, suspensiones, polvos, se pueden formular y administrar como se describió anteriormente para los estradómeros.

Los reactivos Fe fijos de la presente invención se pueden usar para tratar o prevenir afecciones que incluyen pero sin limitarse a cáncer, insuficiencia cardiaca congestiva (CHF) , vasculitis, rosácea, acné, eczema, miocarditis y otras afecciones del miocardio, lupus eritematoso sistémico, diabetes, espondilopatias , fibroblastos sinoviales y estroma de médula ósea, pérdida ósea, enfermedad de Paget, formación de hueso hipertrófico; osteopenia por desuso, malnutrición, enfermedad periodontal, enfermedad de Gaucher, histiocitosis de las células de Langerhans, lesiones de la médula espinal, artritis séptica aguda, osteomalacia, síndrome de Cushing, displasia fibrosa monoostótica, displasia fibrosa poliostótica , reconstrucción periodontal, y fracturas óseas, tratamiento del dolor óseo, y la hipercalcemia humoral maligna, la espondilitis anquilosante y otras espondiloartropatías ; el rechazo al 'trasplante, y las infecciones virales.

Todas las enfermedades autoinmunes pueden ser en parte o en su totalidad una MDCMD. El término "enfermedad autoinmune" como se usa en la presente descripción se refiere a un grupo variado de más de 80 enfermedades crónicas. En todas estas enfermedades, el problema de fondo es que el sistema inmunológico del cuerpo ataca al propio cuerpo. Las enfermedades autoinmunes afectan a todos los sistemas principales del cuerpo que incluyen el tejido conectivo, los. nervios, los músculos, el sistema endocrino, la piel, la sangre y los sistemas respiratorio y gastrointestinal.

La enfermedad o afección autoinmune puede ser un proceso hematoinmunológico, que incluye pero sin limitarse a púrpura trombocitopénica idiopática, trombocitopenia aloinmune/autoinmune, trombocitopenia inmune adquirida, neutropenia autoinmune, anemia hemolítica autoinmune, aplasia de glóbulos rojos asociada al Parvovirus B19, autoinmunidad adquirida antifactor VIII, enfermedad de von Willebrand adquirida, mieloma múltiple y gammapatia monoclonal de importancia desconocida, sepsis, anemia aplásica, aplasia pura de glóbulos rojos, anemia de Diamond-Blackfan, enfermedad hemolitica del recién nacido, neutropenia mediada por el sistema inmune, refractariedad a transfusión de plaquetas, neonatal, púrpura post-transfusión, síndrome urémico hemolítico, vasculitis sistémica, púrpura trombocitopénica trombótica o síndrome de Evan.

La enfermedad o afección autoinmune puede ser un proceso neuroinmunológico, que incluye pero sin limitarse a síndrome de Guillain-Barre, polirradiculoneuropatía desmielinizante inflamatoria crónica, polineuropatía desmielinizante de IgM paraproteinémica, síndrome miasténico de Lambert-Eaton, miastenia gravis, neuropatía motora multifocal, síndrome de neurona motora inferior asociado con anti-/GMI, desmielinación, esclerosis múltiple y neuritis óptica, síndrome del hombre rígido, degeneración cerebelosa paraneoplásica con anticuerpos anti-Yo, encefalomielitis paraneoplásica , neuropatía sensorial con anticuerpos anti-Hu, epilepsia, encefalitis, mielitis, mielopatía especialmente asociada al virus 1 linfotrópico de células T humanas, neuropatía diabética autoinmune, enfermedad de Alzheimer, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, o neuropatía disautonómica idiopática aguda.

La enfermedad o afección autoinmune puede ser un proceso ' de enfermedad reumática, que incluye pero sin limitarse a la enfermedad de Kawasaki, artritis reumatoide, síndrome de Felty, vasculitis ANCA-positiva , polimiositis espontánea, dermatomiositis , síndromes- de los antifosfolípidos , abortos espontáneos recurrentes, lupus eritematoso sistémico, artritis idiopática juvenil, síndrome de Raynaud, síndrome de CREST, o uveítis.

La enfermedad o afección autoinmune puede ser un proceso 'de enfermedad dermatoinmunológica, que incluye pero sin limitarse a necrólisis epidérmica tóxica, gangrena, granuloma, enfermedades autoinmunes de formación de burbujas en la piel que incluyen pénfigo vulgar, penfigoide bulloso, y pénfigo foliáceo, vitíligo, síndrome de shock tóxico estreptocócico, esclerodermia, esclerosis sistémica que incluyen esclerosis sistémica cutánea difusa y limitada, o dermatitis atópica (especialmente dependientes de los esferoides) .

La enfermedad o afección autoinmune puede ser un proceso de enfermedad inmunológica musculoesquelética, que incluye pero sin limitarse a la miositis con cuerpos de inclusión, fascitis necrotizante, miopatías inflamatorias, miositis, miopatía anti-decorina (antígeno BJ) , miopatía necrótica paraneoplásica, miopatía vacuolada ligada a X, polimiositis inducida por penicilamina, aterosclerosis , enfermedad de las arterias coronarias o miocardiopatia .

La enfermedad o afección autoinmune puede ser un proceso de enfermedad inmunológica gastrointestinal, que incluye pero sin limitarse a anemia perniciosa, hepatitis activa crónica autoinmune, cirrosis biliar primaria, enfermedad celiaca, dermatitis herpetiforme, cirrosis criptogénica, artritis reactiva, enfermedad de Crohn, enfermedad de Whipple, colitis ulcerosa o colangitis esclerosante.

La enfermedad o afección autoinmune puede ser enfermedad injerto contra huésped, rechazo del injerto mediado por anticuerpos, rechazo después del trasplante de médula ósea, inflamación de enfermedad postinfecciosa , linfoma, leucemia, neoplasias, asma, diabetes mellitus tipo 1 con anticuerpos anti-células beta, síndrome de Sjógren, enfermedad mixta del tejido conectivo, enfermedad de Addison, síndrome de Vogt-Koyanagi-Harada, glomerulonefritis membranoproliferativa , síndrome de Goodpasture, enfermedad de Graves, tiroíditis de Hashimoto, granulomatosis de Wegener, micropoliarteritis, síndrome de Churg-Strauss, poliarteritis nodosa o fallo multiorgánico .

"Cáncer" en la presente descripción se refiere a o describe la afección fisiológica en mamíferos que está típicamente caracterizada por el crecimiento celular no regulado. Los ejemplos de cáncer incluyen pero sin limitarse a carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma (que incluyen liposarcoma, sarcoma osteogénico, angiosarcoma, endoteliosarcoma, 1infangiosarcoma, linfangioendoteliosarcoma, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma , fibrosarcoma, mixosarcoma, condrosarcoma) , osteoclastoma, tumores neuroendocrinos , mesotelioma, cordoma, sinovioma, schwanoma, meningioma, adenocarcinoma, melanoma, y leucemia o tumores malignos linfoides. Los ejemplos más particulares de dichos cánceres incluyen cáncer de células escamosas (por ejemplo, cáncer de células escamosas epiteliales), cáncer de pulmón que incluye cáncer de pulmón de células pequeñas, cáncer de pulmón de células no pequeñas, adenocarcinoma de pulmón y carcinoma escamoso de pulmón, carcinoma de pulmón de células pequeñas, cáncer del peritoneo, cáncer hepatocelular, cáncer gástrico o de estómago que incluye cáncer gastrointestinal, cáncer pancreático, glioblastoma, cáncer cervical, cáncer ovario, cáncer de hígado, cáncer de vejiga, hepatoma, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer rectal, cáncer colorrectal, carcinoma endometrial o uterino, carcinoma de glándula salival, cáncer de riñon o renal, cáncer de próstata, cáncer de vulva, cáncer de tiroides, carcinoma hepático, carcinoma anal, carcinoma de pene, cáncer testicular, cáncer de esófago, tumores del tracto biliar, tumor de Ewing, carcinoma de células básales, adenocarcinoma , carcinoma de glándula sudorípara, carcinoma de glándulas sebáceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, cistadenocarcinoma, carcinoma medular, carcinoma broncogénico, carcinoma de células renales, hepatoma, carcinoma del conducto biliar, coriocarcinoma, seminoma, carcinoma embrionario, tumor de Wilms, tumor testicular, carcinoma de pulmón, carcinoma de vejiga, carcinoma epitelial, glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craneofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma , neuroma acústico, oligodendroglioma, meningioma, melanoma, neuroblastoma, retinoblastoma, leucemia, linfoma, mieloma múltiple, macroglobulinemia de Waldenstrom, enfermedad mielodisplásica, enfermedad de cadena pesada, tumores neuroendocrinos , schwanoma, y otros carcinomas, cáncer de cabeza y cuello, neoplasias mieloides tales como las leucemias mieloides agudas, que incluyen AML con maduración, AML sin diferenciación, leucemia promielocítica aguda, leucemia mielomonocítica aguda, leucemias monocíticas agudas y síndromes mielodisplásicos, trastornos mieloproliferativos crónicos, que incluyen leucemia mielógena crónica, tumores del sistema nervioso central, por ejemplo, tumores cerebrales (glioma, neuroblastoma, astrocitoma, meduloblastoma, ependimoma, y retinoblastoma ) , tumores sólidos (cáncer nasofaríngeo, carcinoma de células básales, cáncer pancreático, cáncer del conducto biliar, sarcoma de Kaposi, cáncer testicular, cáncer uterino, vaginal o cervical, cáncer de ovario, cáncer primario de hígado o cáncer de endometrio, tumores del sistema vascular (angiosarcoma y hemagiopericitoma) , neoplasias hematológicas y afecciones similares a las neoplásicas, por ejemplo, linfoma de Hodgkin; linfoma no Hodgkin (linfoma de Burkitt, linfoma linfocítico pequeño/leucemia linfocitica crónica, micosis fungoide, linfoma de células del manto, linfoma folicular, linfoma difuso de células B grandes, linfoma de zona marginal, leucemia de células peludas y leucemia linfoplasmacítica ) , tumores de células precursoras de linfocitos, que incluyen leucemia/linforna linfoblástico agudo de células B, y leucemia/linforna linfoblástico agudo de células T, timoma, tumores de las células maduras T y NK, que incluyen leucemias de células T periféricas, leucemia de células T adultas/linfornas de células T y leucemia linfocitica granular grande, cáncer de los huesos osteolítico, y metástasis ósea.

Como se usa en la presente descripción, un sujeto "en riesgo de desarrollar una enfermedad mediada por células derivadas de los monocitos (MDCMD) " es un sujeto que tiene una predisposición a desarrollar la MDCMD, es decir, una predisposición genética a desarrollar la MDCMD o se ha expuesto a condiciones que pueden resultar en la MDCMD. Un sujeto "sospechoso de tener una MDCMD" es uno que tiene uno o más síntomas de una MDCMD. A partir de lo anterior será evidente que ni' los sujetos "en riesgo de desarrollar una MDCMD" ni los sujetos "sospechosos de padecer una MDCMD" son todos los individuos dentro de una especie de interés.

En cualquiera de los métodos anteriores, la MDCMC puede ser una causada por el sustrato y el reactivo Fe sirve para prevenir o mejorar la MDCMC.

APLICACIONES EN ENSAYOS INMUNOLOGICOS Los biomiméticos inmunológicamente activos descritos en la presente descripción se pueden usar para realizar ensayos inmunológicos para probar las funciones de las células inmunes para las que los biomiméticos inmunológicamente activos se diseñaron para modular.

La señalización a través de la ruta del receptor FcD de baja afinidad requiere la agregación y el entrecruzamiento del receptor en la superficie celular. Estos parámetros de agregación y entrecruzamiento se postula que son apropiados a través de la unión del Fab a un antígeno objetivo específico con la posterior interacción entre la región Fe y los FcDR de baja afinidad en la superficie de las células que responden. En este contexto, los anticuerpos tienen el potencial de provocar respuestas celulares a través de dos rutas diferentes: 1. interacción/bloqueo del Fab con un epitopo objetivo especifico y 2. interacciones de Fe con los FcR. A pesar de este conocimiento, los controles actuales para la mayoría de los estudios terapéuticos que usan los anticuerpos monoclonales empleados in vivo no abordan adecuadamente las interacciones Fe: receptor FcD como contribuyentes a los efectos funcionales observados. Actualmente se emplean múltiples estrategias para eliminar las interacciones Fe: FcR como variables que confunden. Por ejemplo, algunos estudios emplean fragmentos Scv (regiones variables de cadena sencilla) o Fab, que conservan la especificidad de epitopo pero carecen de la región Fe. Estos enfoques están limitados por la corta vida media de estos reactivos y su limitado potencial para inducir la señalización. Otros - estudios emplean proteínas de fusión compuestas de un receptor o ligando fusionado a un fragmento Fe. Aunque estos tipos de enfoques ayudan a diferenciar los efectos específicos del Fab de aquellos observados con las interacciones receptor ligando, ellos no controlan eficazmente los efectos mediados por Fe. Las evaluaciones de las terapias basadas en anticuerpos en modelos animales pueden emplear además anticuerpos control de isotipo con un sitio de unión de Fab irrelevante . La razón de esta elección se basa en la presunta similitud funcional entre anticuerpos del mismo isotipo independientemente de su especificidad de unión o afinidad de Fab. Sin embargo, este uso de controles de isotipo irrelevantes tiene varios defectos- fundamentales: 1. Si los fragmentos de Fab de estos anticuerpos no se pueden unir a un ligando o epitopo antigénico, es probable que los fragmentos Fe no estimularán la señalización a través de las interacciones del FcR de baja afinidad debido a la ausencia de entrecruzamiento del receptor Fcü. Por lo tanto, las diferencias funcionales observadas entre los anticuerpos experimentales y de control no se pueden atribuir correctamente a la interacción del Fab con un epitopo objetivo especifico que carece de un medio para entrecruzar el FcDR. 2. Si estos isotipos se producen en las células que producen diferentes glicoformas o diferentes porcentajes relativos de glicoformas individuales que el anticuerpo parental, la unión a ambos FcR de baja y alta afinidad se alterará, aun si la afinidad del Fab es idéntica.

Aunque no hay un control perfecto para superar este problema, una opción es el uso de los estradómeros específicos de isotipo producidos en las mismas células que los anticuerpos parentales y dados a una dosis proporcional a los niveles de expresión del epitopo fijado como objetivo por el anticuerpo experimental. Por ejemplo, el control adecuado para un anticuerpo especifico de epitopo producido en ratas seria un estradómero especifico de rata capaz de agregar el receptor FcD en la superficie de las células efectoras.

Generalmente, una célula inmune está expuesta a una cantidad eficaz de un biomimético inmunológicamente activo para modular una actividad de una célula inmune de una manera conocida y esta modulación se compara con un compuesto o molécula de prueba para determinar si el compuesto de prueba tiene similar actividad de modulación inmune.

En otra modalidad, los estradómer'os agregados al calor, y las inmunoglobulinas agregadas se pueden usar como reactivos para los controles de laboratorio en varios ensayos inmunológicos descritos en la presente descripción y conocidos por aquellos con experiencia ordinaria en la materia .

Los ensayos inmunológicos pueden ser ensayos in vitro o ensayos in vivo y pueden implicar células inmunes humanas o no humanas por medio del uso de un estradómero que se corresponde con la especie o que no se corresponde con la especie. En una modalidad un ensayo inmunológico se realiza mediante el uso de una cantidad eficaz del biomimético inmunológicamente activo para modular una actividad de una célula inmune y comparar la modulación con una modulación de una célula inmune por un compuesto de prueba. El estradómero puede cumplir la función de un reactivo de control positivo en los ensayos que implican la prueba de otros compuestos para el efecto inmunológico . El ensayo puede comparar el efecto del anticuerpo monoclonal sujeto en comparación con el estradómero para la unión del receptor FcD de la célula efectora y la respuesta funcional medida por los cambios en el nivel de expresión del receptor, la liberación de citocina, y la función, tal como mediante el uso de una reacción de linfocitos mixtos. De esta manera, si un estradómero (que carece de Fab) genera una respuesta que es en parte similar a la del anticuerpo monoclonal después el efecto del anticuerpo monoclonal es, en alguna parte, no debida a la especificidad de su Fab sino al efecto general de unir y entrecruzar más de un receptor FcD en la célula efectora .

Si la actividad biológica de un anticuerpo especifico de la especie y especifico del isotipo se replica en parte o en su totalidad por un estradómero especifico de la especie y especifico del isotipo entonces está claro que la actividad de Fe - receptor FcD explica la porción de la actividad biológica observada atribuible al estradómero especifico de la especie y especifico del isotipo. Asi los estradómeros específicos de la especie y específicos del isotipo son útiles en la evaluación de anticuerpos terapéuticos potenciales para determinar si y en qué grado la actividad biológica observada es atribuible tanto a la porción Fab del anticuerpo de prueba o a un efecto no especifico de la porción Fe de la molécula de unir y entrecruzar más de un receptor FcD.

Los estradomeros de la presente invención además son útiles en bloquear la unión no especifica de los receptores Fe en los inmunoensayos basados en anticuerpos tales como la citometria de flujo, la transferencia de tipo Western, los ensayos de inmunohistoquimica e inmunofluorescencia . Tradicionalmente, en ensayos tales como estos los anticuerpos no específicos de la misma especie que el anticuerpo de prueba se usan para bloquear la unión no específica a los receptores Fe. Los estradomeros de la presente invención proporcionan un beneficio sobre los medios tradicionales de bloqueo de Fe en que cada estradómero tiene múltiples sitios de unión de FcR, y por lo tanto se puede usar mucho menos estradómero. Además, debido a que el estradómero de la presente invención carece de la porción Fab de unión al antígeno del anticuerpo, no se observará unión no específica a las células muertas, por ejemplo, como es usualmente el caso con las especies que se corresponden al control de IgG.

Se ha encontrado sorprendentemente que los estradomeros de la presente invención se unen a endotoxinas con muy alta afinidad. Los kits y las columnas estándar de eliminación de endotoxina no eliminaron porcentajes significativos de la endotoxina fuertemente unida de los estradómeros . Por lo tanto, las composiciones reivindicadas pueden ser útiles al actuar como un pool de unión de endotoxina, una herramienta útil para la eliminación de endotoxina en las preparaciones farmacéuticas y de laboratorio. Esto es beneficioso en que los complejos formados entre la endotoxina y los estradómeros tienen afinidad lo suficientemente alta para eliminar eficientemente la endotoxina de una preparación o composición farmacéutica. En una modalidad, los complejos de endotoxina-estradómero se eliminan de la composición por filtración.

Todas las referencias citadas en la presente descripción se incorporan como referencia en su totalidad.

EJEMPLOS Ejemplo 1 Producción y purificación de los estradómeros Las células HEK293F (Invitrogen, Carlsbad, CA) o células de ovario de hámster chino (CHO) se usaron para la expresión estable de G045/M045 y G051. Las células HEK293F o CHO se cultivaron en suspensión para el escalado de la expresión de proteina .

Los genes que codifican G045c (sec. con núm. de ident.:4), G045old (sec. con núm. de ident . : 7 ) G051 (sec. con núm. de ident.:18), G019 (sec. con núm. de ident . : 8), G028 (sec. con núm. de ident.: 9), G046 (sec. con núm. de ident.: 10), G075 (sec. con núm. de ident.: 20), G076 (sec. con núm. de ident.: 21), G096 (sec. con núm. de ident.: 28), G098 (sec. con núm. de ident.: 24), G089 (sec. con núm. de ident.: 27), o las correspondientes secuencias murinas de los estradómeros precedentes se clonaron en un vector que contenia un gen de resistencia a la neomicina tal como el pcDNA3.3 de Invitrogen (Carlsbad, CA) y bajo el control transcripcional del promotor de CMV para facilitar el alto nivel de expresión de G045 o G051. Los ADN de plásmido para la transfección se aisló del cultivo bacteriano por medio del uso de un kit de aislamiento de ADN de plásmido libre de endotoxina (Nucleobond, Macherey-Nagel ) . El ADN de plásmido de codificación de G045c/ G045old y G051 se linealizó con la enzima de restricción y se transfectó en la célula 293-F o las células CHO. Después de la transfección las células positivas que expresan G045c, G045old o G051 se seleccionaron con Geneticina/G418 para obtener un pool de células transíectadas . Para obtener una linea de células clonal el pool de células transfectadas establemente se diluyó a 1-2 célula por pocilio en una placa de 96 pocilios a partir de la cual se obtuvieron clones de células individuales de la linea de células estable. Los clones de células individuales se tamizaron por ELISA para la expresión de proteina. Los clones de células individuales se cultivaron y la proteina G045c, G045old, G051, G019, G028, G046, G075, G076, G096, G098, o G089, se cosechó a partir del medio como proteina secretada.

Para la producción de la proteina G045c, G045old, G051 G019, G028, G045, G075, G076, G096, G098, o G089 por transfección transitoria, las células HEK293 o las células CHO se transfectaron con el ADN que codifica las proteínas G045c, G045old, G051, G019, G028, G046, G075, G076, -G096, G098, o G089 bajo el control de un promotor CMV para asegurar un alto nivel de expresión de proteína. La transfección se realizó con uno de varios reactivos de transfección disponibles comercialmente . La proteína secretada G045c, G045old, G051, G019, G028, G046, G075, G076, G096, G098, o G089 se cosechó a partir del medio de cultivo de las células 4-5 días después de 'la transfección.

El medio de cultivo de las células de ya se de las células transfectadas de manera transitoria o las líneas de células estables se filtró por medio del uso de un filtro de 0.22 um y se ajustó a pH 7.2 con 1 volumen de amortiguador de unión (20 mM de fosfato sódico pH7.2 + 150 mM de NaCl) y se purificó por cromatografía de afinidad en una columna de afinidad de proteína A HiTrap Mabselect por medio del uso de un sistema de purificación AKTAXpress. (GE life sciences) Después de la elución en 0.1 M de citrato sódico pH3.3 la proteina se purificó en una columna de desalinización HiPrep 26/20 para el intercambio del amortiguador.

Para purificación adicional de la proteina G045c, G045old, G051, G019, G028, G046, G075, G076, G096, G098, o G089 se purificó por filtración de gel en una columna de filtración de gel HiLoad Superdex 200 (GE Lifesciences ) en 50 mM de tris-HCl pH7.5 + 150mM de NaCl seguido por la purificación en la columna de intercambio de iones Mono S (GE Lifesciences ) . La purificación de intercambio de iones se realizó en 20mM de amortiguador MES pH 6 con un gradiente de 0-1M de NaCl . Después de la cromatografía la proteína se ajustó a PBS por diálisis. Un esquema del estradómero G045c resultante se representa en la Figura 1.

Con el fin de probar la capacidad de multimerización de la proteína G045c resultante, se corrió un gel de poliacrilamina 10% que contenía concentraciones iguales de G045c producido por el método anterior, y G045old, producido por el método descrito previamente en el documento WO 2008/151088 y que contenía la clonación de secuencias extrañas . Sorprendentemente, la eliminación de los fragmentos extraños condujeron a un aumento dramático en la multimerización en G045c en comparación con G045old con G045c que muestra una concentración mucho más alta de multímeros de orden más alto en comparación con G045old. (Ver la Figura 2A) .

La formación del multimero de G045old vs G045c se analizó por medio del uso del sistema de formación de imágenes Gel-DocIT. Después de la detección de la densidad de las fotografías del gel se evaluó la cantidad de proteína en cada banda del gel. Sorprendentemente, la formación del multimero en la muestra de G045old se estimó que era aproximadamente 27.9% mientras que la eliminación de los fragmentos extraños para generar estradómeros enlazados de manera natural condujo a la formación del multimero en la muestra de G045c que fue significativamente mayor y se estimó que era aproximadamen-te 73.8% de la proteína total . (Ver la Figura 2B) .

Ejemplo 2 : Eficacia mejorada de M045c en comparación con M045old en un modelo murino de artritis Se realizó la evaluación de la eficacia de M045c en comparación con la de M045old en artritis inducida por colágeno. En el día 0 y el día 21 ratones DBA1/J se inmunizaron con colágeno bovino de tipo II (Chondrex, Inc., Cat. 20021) con una solución emulsionada con adyuvante incompleto de Freund 4mg/ml (Sigma, Cat #5506) . Los ratones se pesaron semanalmente y diariamente se calificaron los signos de artritis. Cada pata se calificó y la suma de las cuatro calificaciones se registró como el índice de artritis (AI) . El máximo AI posible fue 16 como sigue: 0 = ningún efecto visible de artritis, 1 = edema y/o eritema de un dedo, 2 = edema y/o eritema de 2 articulaciones, 3 = edema y/o eritema de más de 2 articulaciones, 4 = artritis severa de toda la pata, y los dedos que incluye la deformación del miembro y anquilosis de la articulación. A partir del día 22 (día de tratamiento 0) diez de los ratones inmunizados con colágeno se clasificaron en grupos de tratamiento basados en el AI promedio (3.3) y diez ratones no enfermos se designaron como el grupo no enfermo. El índice de artritis se midió durante 14 días de tratamiento después de lo cual los ratones se sacrificaron. Para el grupo de control positivo diez de los ratones se clasificaron en el tratamiento basados en el AI promedio (3.3) y se dosificaron oralmente con prednisolona 10 ml/kg cada día. Para el grupo tratado con M045c o M045old 20 de los ratones se clasificaron en el tratamiento basados en el AI promedio (3.3) y se dosificaron cada 4 días (día 0, día 4, día 8 y día 12) con 400 \iq de 045c o M045old (17.4 mg/kg) .

Los ratones tratados con M045c tuvieron la enfermedad estadísticamente menos grave en comparación con la de los ratones tratados M045old en casi todos los puntos de tiempo probados. (Ver la Figura 3). Por lo tanto, la eliminación del fragmento de clonación de 16 aminoácidos entre la secuencia líder y el Fe de IgGl conduce no sólo a mayor formación del multímero, sino además a una mayor eficacia contra la enfermedad inflamatoria.

La evaluación de la eficacia de M045c, M019, M028, M046 y M051 en la artritis inducida por colágeno se realizó de manera similar y en comparación con la eficacia de la prednisolona . La CIA se indujo en ratones como se describió anteriormente y se trataron los ratones del día 22 después de la inducción de la CIA con 400 de M045, M019, M028, M046 o M051 por vía intravenosa dos veces por semana o 10 mg/kg de prednisolona diarios y se calificaron por el AI durante dos semanas, como anteriormente. Los ratones que recibieron cada uno de los estradómeros probados tuvieron la enfermedad estadísticamente menos grave que los controles tratados con PBS (ver la Figura 9) .

Ejemplo 3: Efecto sinérgico de M045 y prednisolona en un modelo murino de artritis Se realizó la evaluación de la eficacia de M045c combinado con dosis bajas de prednisolona en un modelo de artritis inducida por colágeno. Brevemente en el día 0 y el día 21 ratones DBA1/J se inmunizaron con colágeno bovino de tipo II (Chondrex, Inc., Cat . 20021) con una solución emulsionada con adyuvante incompleto de Freund 4mg/ml (Sigma, Cat #5506) . Los ratones se pesaron semanalmente y diariamente se calificaron por los signos de artritis. Cada pata se calificó y la suma de las cuatro calificaciones se registró como el índice de artritis (AI) . El máximo AI posible fue 16 como sigue: 0 = ningún efecto visible de la artritis, 1 = edema y/o eritema de un dedo, 2 = edema y/o eritema de 2 articulaciones, 3 = edema y/o eritema de más de 2 articulaciones, 4 = artritis severa de toda la pata, y los dedos que incluye la deformación del miembro y anquilosis de la articulación. A partir del día 22 (día de tratamiento 0) diez de los ratones inmunizados con colágeno se clasificaron en grupos de tratamiento basados en el AI promedio (3.3) y diez ratones no enfermos se designaron como el grupo no enfermo. El índice de artritis se midió durante 14 días de tratamiento después de lo cual los ratones se sacrificaron. Para el grupo de control positivo diez de los ratones se clasificaron en el tratamiento basados en el AI promedio (3.3) y se dosificaron oralmente con prednisolona 10 ml/kg cada día. Para el grupo tratado con M045c diez de los ratones se clasificaron en el tratamiento basados en el AI promedio (3.3) y se dosificaron cada 4 días (día 0, día 4, día 8 y día 12) con 400 µg de M045c (17.4 mg/kg). Para medir la sinergia entre la prednisolona y 045c un grupo se trató con dosis baja de prednisolona 2 mg/kg diariamente, un grupo se trató con dosis baja de M045c 200 ug/dosis la dosificación cada 4 días y un grupo se dosificó con dosis baja de prednisolona 2mg/kg más dosis baja de M045c 200 g/dosis la dosificación cada 4 dias.

Mientras que una alta dosis de prednisolona (10 mg/kg) fue eficaz como agente único en la mejora de la artritis inducida por colágeno, la dosis baja de prednisolona (2 mg/kg) fue sólo marginalmente eficaz. Además, dosis baja de M045c (200 g/dosis o 9.1 mg/kg) además fue ineficaz en la disminución de la gravedad de la enfermedad en comparación con los controles no tratados. Sin embargo, sorprendentemente, los ratones tratados con dosis bajas de prednisolona combinada con dosis baja de M045c exhibió una disminución sinérgica (más que aditiva) en la gravedad de la enfermedad en comparación con los grupos de tratamientos individuales con prednisolona y M045c. (Ver la Figura 4) .

Ejemplo 4 : Análisis de unión de IgG2A, M045, M046, M028, M019 y G051 a los receptores murinos .

Los receptores FCYRIIIA, FcyRIIB y SIGN-R1 se inmovilizaron a un chip CM4 por medio del uso de la inmovilización a amina a 560, 500, y 1000RU, respectivamente para compensar por el tamaño de la proteina.

M045c (sec. con núm. de ident.:ll), M046 (sec. con núm. de ident.:15), M019 (sec. con núm. de ident.':13) y M028 (sec. con núm. de ident.:14) se diluyeron en serie a partir de 500n a 1.9nM en el amortiguador de corrida HBSS-EP y se inyectaron a 20ul/min durante 180seg. La regeneración se alcanzó mediante una inyección de 10 seg de 1M de MgCl a 100ul/min, seguido por un breve layado con amortiguador de corrida. Las KD se calcularon por medio del uso del software de evaluación T100.

Para FcyR3A y FcyR2b de ratón, los homodimeros de Fe de IgG2a de ratón se unen con menor afinidad y velocidad de disociación más rápida en comparación con cada uno de los estradómeros probados. Para SIGN-R1 de ratón, los homodimeros de Fe de IgG2a de ratón no se unen apreciablemente mientras que los estradómeros selectivos se asocian en mayor o menor grado y se disocian lentamente. (Ver la Figura 5) .

Las fracciones de M045c se ensayaron en este modelo. 045F primero se fraccionó en gel por medio del uso de un sistema de purificación de proteina AktaXpress y una columna grado prep GE HiLoad 16/60 Superdex 200. La fracción 1 (M045 Fl) contenia el componente de peso molecular más alto de los multimeros de M045 después de la separación de los multimeros de acuerdo con el tamaño. M045 F2 es el componente multimero con menor peso molecular y M045 F3 es la fracción homodimero del estradómero. Para FcYRIIIa, FcyRIIb de ratón (Ver la Figura 6a) , y SIGN-R1 (Ver la Figura 6b) la afinidad de unión es la más alta con una lenta velocidad de disociación para 045 Fl comparación con otras fracciones o con el control de Fe de IgG2a.

Para evaluar la unión de G051, se realizó un ensayo de interferometria de biocapa en un Octet 96 Red Instrument (ForteBio, Menlo Park CA) de acuerdo con las instrucciones del fabricante (la Guia de usuario de captación de datos 6.4 ForteBio) . Para el análisis de unión de las proteínas de ratón, el FCYRII (R&D system cat# 1460-CD) y FcyRIII R&D system cat# 1960) de ratón con una etiqueta His se cargaron por separado en los biosensores anti-penta-His (ForteBio cat # 18-5077) a 10ug/ml en el amortiguador de análisis cinético IX (ForteBio cat #18-5032) . Para el análisis de unión de la proteína humana, el FcyRIIb (R&D system cat# 1875-CD) y FcyRIIIa R&D system cat# 4325-Fc) humanos con una etiqueta His se cargaron por separado en los biosensores anti-penta- His (ForteBio cat # 18-5077) a 10ug/ml en el amortiguador de análisis cinético IX (ForteBio cat #18-5032) . Después de cargar la punta del sensor, se midió la asociación de la proteína por transferencia de las puntas a las preparaciones de cualquier fracción monomérica (sobre un intervalo de • concentraciones) o las fracciones multiméricas (sobre un intervalo de concentraciones) en amortiguador de análisis cinético IX y la disociación se midió mediante la transferencia de las puntas de los sensores a amortiguador cinético IX. El análisis fue como se describió (Guia de usuario de análisis de datos 6.4 ForteBio) . El análisis se estandarizó como se describió anteriormente al asignar un PM de 50 kD a los homodimeros y 150 kD para todas las otras preparaciones.

La Tabla 2 muestra que las fracciones de M051 del multimero de estradómero grandes se unen con mayor afinidad y avidez y más lenta disociación que las fracciones del multimero más pequeño que a su vez se unen con mayor afinidad y avidez y más lenta disociación que la fracción del homodímero .

TABLA 2 Para evaluar la cinética de unión de G045 o G051 relativa a G001 (Fe de IgGl natural), se realizó el ensayo de interferoraetria de biocapa en un Octet 96 Red Instrument, como anteriormente. Se midió la unión de G045 y G001 a FcDRIIb, FcDRIIIa humanos (tanto las variantes F y V) , FcDRIIIa de cinomolgo, FcDRIIIb de cinomolgo y FcDRIII de cinomolgo. G045 tiene una afinidad de unión significativamente superior con una disociación más lenta y evidencia de avidez por cada uno de los receptores probados comparados con G001. (Ver las Tablas 3 y 4) .

TABLA 3 TABLA 4 Igualmente se midió la unión de G051 y G001 a FcDRIIb, y FcDRIIIa humano. G051 tiene una afinidad de unión significativamente superior con una disociación más lenta y evidencia de avidez .por cada uno de los receptores probados comparados con G001. (Ver la Tabla 5).

TABLA 5 Ejemplo 5 : Los compuestos estradómeros enlazados de manera natural son eficaces en el tratamiento/prevención de ITP Para dilucidar el efecto de los estradómeros en la púrpura trombocitopénica idiopática (ITP) los estradómeros se probaron en un modelo murino preventivo de ITP. Se inducen bajos conteos de plaquetas después de la exposición al anticuerpo anti-integrina Ilb de ratón que recubre los receptores de integrina en las plaquetas. En resumen, los ratones C57BL/6 de 8 semanas de edad (Charles River) se inyectaron por la vena de la cola con el estradómero o el control el dial después de la extracción de sangre y el conteo de plaquetas. En el dia 2 después de la extracción de sangre y el conteo de plaquetas los ratones se trataron con MWReg30 (BD Pharmingen cat #553847) que se dio a una concentración de 2 \iq de anticuerpo en 200 µ? de solución salina regulada con fosfato que se administró por inyección intraperitoneal para inducir la pérdida de plaquetas. La extracción de sangre para el conteo de plaqueta y las inyecciones de MWReg30 continuaron en los dias 3, 4, y 5. El control positivo de IVIG se dosificó diariamente en los dias 2 a 5, los conteos de plaquetas se hicieron con el hemocitómetro Drew Scientific Hemavet 950. M045c y sus fracciones se dosificaron una vez al dia 2. La sangre se tomó mediante un corte en la vena de la cola y se mezcló con amortiguador citrato para prevenir la coagulación.

M045c fue significativamente protector en este modelo en relación tanto con el tratamiento de control de ITP sin fármaco y el control Fe de IgG2a y fue comparable tanto a la terapia preventiva de IVIG y los ratones que no recibieron el insulto de MWReg30 (Ver la Figura 7) . Las fracciones de M045c se hicieron como se describió en el Ejemplo 4. La Fracción 1 de M045 fue significativamente protectora en este modelo en relación al tratamiento de control de ITP sin fármaco mientras la Fracción 3 de M045 no lo fue.

Ejemplo 6: Eliminación de los complejos de endotoxina con los complejos de es radómeros enlazados de manera natural Para eliminar la endotoxina una solución de proteina que contenia endotoxina que contenia una proteina de interés se ajustó a pH 7.2 con 1 volumen de amortiguador de unión (20 mM de fosfato sódico pH7.2 +150 mM de NaCl) después de mezclar la endotoxina unida al estradómero a la solución. Para eliminar la endotoxina la solución que contenia la proteina se aplicó a una columna de cromatografía de afinidad (columna de afinidad de proteína A HiTrap Mabselect, GE Life Sciences) . La endotoxina unida al estradómero se unió a la columna de afinidad y la proteína purificada libre de endotoxina se eluyó en las fracciones del flujo a través de la misma.

En un enfoque alternativo al uso de los estradómeros para atrapar endotoxina, perlas magnéticas recubiertas de proteina A (New England BioLabs, MA) se mezclaron en la solución de proteina que contenia la endotoxina junto con los estradómeros unidos a endotoxina y los estradómeros unidos a endotoxina se eliminaron por separación magnética.

Ejemplo 7: Uso de los complejos de estradómeros enlazados de manera natural para bloquear Fe en los ensayos inmunológicos Mejora de la sensibilidad y la especificidad de las herramientas de investigación y de diagnóstico clínico basadas en los anticuerpos. La utilidad en la investigación y la utilidad en el diagnóstico clínico de los anticuerpos está limitada por la unión no específica. Esta puede suceder, por ejemplo, por la unión de la porción Fe de los anticuerpos monoclonal o policlonal a los receptores Fe gamma de alta afinidad y otros receptores de unión de Fe en las células que incluyen las células inmune y los tumores o por la unión de los agregados de anticuerpos o agregados celulares recubiertos con anticuerpo a los receptores Fe gamma de baja afinidad .

Para demostrar la capacidad de los estradómeros para bloquear las interacciones del receptor Fe gamma con anticuerpos específicos anti-receptor Fe gamma se realizó la citometría de flujo y se compararon dosis crecientes del estradómero G045c humano con el G001, un monómero homodimérico de Fe de IgGl, en su capacidad para bloquear la unión del anticuerpo anti-FcyR a los FcyR que se sabe están presentes en células especificas. Se encontró que los estradómeros bloquean efectivamente la unión de los anticuerpos anti-FcyR de unión a los FcyR en relación con el control de Fe de IgGl y de hacerlo de una manera dependiente de la concentración (Ver la Figura 8) .

Debido a su afinidad de unión muy alta por los receptores Fe gamma y otros receptores que se unen a las regiones Fe de las inmunoglobulinas, los estradómeros son sorprendentemente eficaces en el bloqueo de la unión e interacción incluso de anticuerpos monoclonales específicos anti-receptor Fe gamma. Los estradómeros por lo tanto son útiles como reactivos de control para disminuir la unión inespecífica de los anticuerpos administrados tanto para el ajuste de las herramientas de investigación y el ajuste del diagnóstico clínico.

Ejemplo 8: Los compuestos de estradómeros enlazados de manera natural son eficaces en el tratamiento de la neuritis autoinmune experimental La evaluación de la eficacia de M045c y M051, en cada caso en comparación con la de la IVIG y la albúmina, se realizó en un modelo de neuritis autoinmune experimental (EAN) en ratas. Los modelos murinos de EAN se usan ampliamente los modelos animales de polirradiculoneuropatia desmielinizante inflamatoria aguda humana. Brevemente, 45 ratas Lewis se inmunizaron con toda la mielina del nervio periférico bovino y se aleatorizaron en tres grupos. Al inicio de los déficits clínicos, que es generalmente el comienzo de la pérdida de peso el día 9 o 10, 15 ratas por grupo de tratamiento se trataron con IVIg (1 gm/1 Kg peso corporal), M045 (20 mg/Kg) o M051 (17.5 mg/Kg) o con albúmina, todos se dieron como dos dosis IV en dos días consecutivos. Todos los fármacos se administraron por la vía intravenosa mediante inyección de la vena de la cola.

Las ratas de EAN se evaluaron clínicamente, electrofisiológicamente , e histológicamente. La gravedad de la enfermedad clínica se evaluó por gradación clínica diaria y por los cambios de peso. Los estudios electrofisiológicos incluyeron examinar la amplitud de los potenciales de acción muscular compuesto (CMAP) y la velocidad de la conducción motora (MCV) . En el día 15 en el pico de la enfermedad, cinco ratas de cada grupo se sacrificaron, los nervios ciáticos se recogieron y se analizaron los cambios histopatológicos . La eficacia del tratamiento se comparó entre los grupos de IVIg y albúmina, y los grupos de M045c o M051 recombinante y albúmina .

Las ratas que recibieron el estradómero de prueba M045c tuvieron la enfermedad estadísticamente menos grave que los controles tratados con albúmina (ver la Figura 12) . Las ratas de EAN tratadas con albúmina presentaron mayor mortalidad (4 de 15) en comparación con las ratas tratadas con IVIg (1 de 15) y con las tratadas con 045c (0 de 15) . Los animales que recibieron tratamiento de M045c e IVIg exhibieron una pérdida de peso significativamente menos prominente. Hubo una mejoría estadísticamente significativa tanto en la velocidad de conducción motora (MCV) y las amplitudes de distal y proximal CMAP en las ratas tratadas con IVIg y M045c en comparación con aquellas tratadas con albúmina. Las ratas tratadas con albúmina mostraron pérdida axonal más grave y degeneración axonal activa en los nervios ciáticos en comparación con las ratas tratadas con IVIg o con M045c. Así, el estradómero M045c demostró mortalidad, peso, eficacia clínica, electrofisiológica, e histopatológica en comparación con la albúmina, comparable a la eficacia demostrada por el estándar de oro de la clínica la IVIg a aproximadamente 2% de la dosis de IVIg.

En un experimento separado con 11 ratas por grupo de prueba, las ratas que recibieron el estradómero de prueba M051 tuvieron enfermedad estadísticamente menos grave que los controles tratados con albúmina (ver la Figura 11) . En este estudio, 7 de 11 animales murieron en el grupo control (albúmina) en comparación a 4 en el grupo de 051. Las ratas que recibieron ya sea IglV o M051 demostraron pérdida de peso significativamente menor en comparación con las ratas que recibieron el control de albúmina. Las ratas que recibieron ya sea IglV o M051 demostraron una mejoría significativa en las puntuaciones clínicas en comparación con las ratas que recibieron control de albúmina . Hubo una mejora estadísticamente significativa tanto en la MCV y en la amplitud de CMAP después del tratamiento con IglV o M051. Así, el estradómero 051 demostró significativa mortalidad, peso, eficacia clínica, y electrofisiológica en comparación con la albúmina, comparable a la eficacia demostrada por el estándar de oro de la clínica, la IVIg, a aproximadamente 2% de la dosis de IVIg.

Ejemplo 9: Los compuestos de estradómeros enlazados de manera natural que contienen mutaciones en Fe exhiben mayor unión a los FcDR y son eficaces para el tratamiento en un modelo murino de artritis La unión de los estradómeros que contienen mutantes de Fe, G075 (sec. con núm. de ident.: 20) y G076 (sec. con núm. de ident.: 21) a FcDRIIIa, FcDRIIb y FcDRIIa se realizó mediante el ensayo de unión de Biacore como se describió anteriormente en Ejemplo 4. El G075 mostró un aumento en la unión al FcDRIIIa y una disminución en la unión a FcDRIIa y FcDRIIb mientras G076 mostró una disminución en la unión a FcDRIIIa y un aumento en la unión a FcDRIIa y FcDRIIb. (Ver las Figuras 10A y B) .

La evaluación de la eficacia de los estradómeros que contienen mutantes de Fe, M075 (sec. con núm. de ident.: 22), M076 (sec. con núm. de ident.: 23) y M098 (sec. con núm. de ident.: 25) en un modelo murino de artritis se determinó después como se hizo anteriormente en el Ejemplo 3. Los estradómeros que contienen mutantes de Fe se compararon con el vehículo y M045c. Ambos M098 y M075 fueron significativamente más eficaces al inhibir la progresión de CIA, mientras el estradómero M076 no lo fue. (Ver las Figuras 13 A y B) . Se espera que otras mutaciones de Fe de inmunoglobulina que se sabe que alteran la unión individual Fc-FcR o que alteran la citotoxicidad dependiente de complemento serán igualmente complementarias a los estradómeros que comprenden Fe de IgGl y presentarán Fe de IgGl polivalente a los receptores Fe.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCION Habiendo descrito el presente invento, se considera como una novedad y, por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes REIVINDICACIONES

1. Una unidad de estradomero que comprende: (a) una secuencia líder; (b) un dominio Fe de IgGl; y (c) un dominio de multimerización en donde la secuencia líder está directamente unida al dominio Fe de IgGl y en donde el dominio Fe de IgGl está directamente unido al dominio de multimerización o en donde la secuencia líder está directamente unida al dominio de multimerización y el dominio de multimerización está directamente unido al dominio Fe de IgGl.

2. La unidad de estradomero de la reivindicación 1 en donde la secuencia de aminoácido de dicho dominio Fe de IgGl es la menos 80% homologa a la SEC ID NO.: 2.

3. La unidad de estradomero de la reivindicación 1 en donde la secuencia de aminoácido de dicho dominio Fe de IgGl es la menos 90% homologa a la SEC ID NO. : 2.

4. La unidad de estradomero de la reivindicación 1 en donde la secuencia de aminoácido de dicho dominio Fe de IgGl es la menos 95% homologa a la SEC ID NO. : 2.

5. La unidad de estradómero de la reivindicación 1 en donde la secuencia de aminoácido de dicho dominio Fe de IgGl es la menos 99% homologa a la SEC ID NO. : 2.

6. La unidad de estradómero de la reivindicación 1 en donde el el dominio de multimerización se selecciona del grupo que consiste de una bisagra IgG2a, una cremallera de isoleucina y un dominio GPP y es capaz de multimerizar dichas unidades de estradómeros .

7. La unidad de estradómero de la reivindicación 6 en donde la secuencia de aminoácido de dicho dominio de multimerización es al menos 80% homologa a la SEC ID NO. : 3 y es capaz de multimerizar dichas unidades de estradómeros.

8. La unidad de estradómero de la reivindicación 6 en donde la secuencia de aminoácido de dicho dominio de multimerización es al menos 90% homologa a la SEC ID NO. : 3 y es capaz de multimerizar dichas unidades de estradómeros.

9. La unidad de estradómero de la reivindicación 6 en donde la secuencia de aminoácido de dicho dominio de multimerización es al menos 95% homologa a la SEC ID NO. : 3 y es capaz de multimerizar dicho estradómero.

10. La unidad de estradómero de la reivindicación 6 en donde la secuencia de aminoácido de dicho dominio de multimerización es al menos 99% homologa a la SEC ID NO. : 3 y es capaz de multimerizar dichas unidades de estradómeros.

11. La unidad de estradómero de la reivindicación 6 en donde la secuencia de aminoácido de dicho dominio de multimerización es al menos 80% homologa a la SEC ID NO. : 3 y es capaz de multimerizar dichas unidades de estradómeros .

12. La unidad de estradómero de la reivindicación 6 en donde la secuencia de aminoácido de dicho dominio de multimerización es al menos 90% homologa a la SEC ID NO. : 5 y es capaz de multimerizar dichas unidades de estradómeros.

13. La unidad de estradómero de la reivindicación 6 en donde la secuencia de aminoácido de dicho dominio de multimerización es al menos 95% homologa a la SEC ID NO. : 5 y es capaz de multimerizar dichas unidades de estradómeros.

14. La unidad de estradómero de la reivindicación 6 en donde la secuencia de aminoácido de dicho dominio de multimerización es al menos 99% homologa a la SEC ID NO. : 5 y es capaz de multimerizar dichas unidades de estradómeros.

15. La unidad de estradómero de la reivindicación 6 en donde la secuencia de aminoácido de dicho dominio de multimerización es al menos 80% homologa a la SEC ID NO. : 26 y es capaz de multimerizar dichas unidades de estradómeros.

16. La unidad de estradómero de la reivindicación 6 en donde la secuencia de aminoácido de dicho dominio de multimerización es al menos 90% homologa a la SEC ID NO. : 26 y es capaz de multimerizar dichas unidades de estradómeros.

17. La unidad de estradómero de la reivindicación 6 en donde la secuencia de aminoácido de dicho dominio de multimerización es al menos 95% homologa a la SEC ID NO . : 26 y es capaz de multimerizar dichas unidades de estradómeros .

18. La unidad de estradómero de la reivindicación 6 en donde la secuencia de aminoácido de dicho dominio de multimerización es al menos 99% homologa a la SEC ID NO. : 26 y es capaz de multimerizar dichas unidades de estradómeros.

19. La unidad de estradómero de la reivindicación 1 en donde el dominio de multimerización está directamente unido al terminal carboxilo del dominio.-Fe de IgGl.

20. La unidad de estradómero de la reivindicación 1 en donde el dominio de multimerización está directamente unido al terminal amino del dominio Fe de IgGl .

21. La unidad de estradómero de la reivindicación 1 en donde la unidad de estradómero comprende SEC ID NO. : 4, SEC ID NO.: 8, SEC ID NO . : 9 SEC ID NO.: 10, SEC ID NO . : 27 o SEC ID NO. : 28.

22. La unidad de estradómero de la reivindicación 1 en donde dicho dominio de multimerización crea multímeros de dichas unidades de estradómero.

23. La unidad de estradómero de la reivindicación 22 en donde los multímeros de dichas unidades de estradómeros son multímeros de orden alto.

24. Una composición de estradomero que comprende unidades de estradómeros de la reivindicación 23 en donde los multímeros están presentes a un porcentaje de al menos aproximadamente 45% de la composición de estradomero total.

25. Una composición de estradomero que comprende unidades de estradómeros de la reivindicación 23 en donde los multímeros están presentes a un porcentaje de al menos aproximadamente 55% de la composición de estradomero total

26. Una composición de estradomero que comprende unidades de estradómeros de la reivindicación 23 en donde los multímeros están presentes a un porcentaje de al menos aproximadamente 65% de la composición de estradomero total

27. Una composición de estradomero que comprende unidades de estradómeros de la reivindicación 23 en donde los multímeros están presentes a un porcentaje de al menos aproximadamente 70% de la composición de estradomero total

28. Una composición de estradomero que comprende unidades de estradómeros de la reivindicación 23 en donde los multímeros están presentes a un porcentaje de al menos aproximadamente 73% de la composición de estradomero total

29. La unidad de estradomero de la reivindicación 1 en donde el dominio Fe de IgGl es capaz de unirse a FcRn, DC-SIGN, SIGN-R1 o un FcyR . "

30. La unidad de estradomero de la reivindicación 1 en donde el FcyR es FcYRIIIa.

31. Un estradomero aglomerado que comprende al menos dos unidades de estradómeros de la reivindicación 1.

32. El estradomero aglomerado de la reivindicación 31, en donde dicho estradomero se une a FcYRIIIa.

33. Un método para modular una respuesta inmune en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un estradomero aglomerado de la reivindicación 31.

34. El método de la reivindicación 33 en donde dicha modulación comprende inducción de CD86 en las células dendríticas .

35. El método de la reivindicación 33 en donde dicha modulación comprende la inhibición de la expresión de CDla en las células dendríticas .

36. Un método para tratar la enfermedad inflamatoria en un sujeto que lo necesita que comprende administrar una cantidad eficaz de un estradomero aglomerado de la reivindicación 31.

37. El método de la reivindicación 36 en donde la enfermedad inflamatoria es una enfermedad autoinmune .

38. El método de la reivindicación 37 en donde la enfermedad autoinmune se selecciona del grupo que consiste de artritis, esclerosis múltiple, diabetes tipo I, tiroiditis autoinmune, púrpura trombocitopénica idiopática, polineuropatía inflamatoria crónica, esclerodermia, uveitis autoinmune, lupus eritematoso sistémico, miastenia gravis, y dermatitis atópica.

39. El método de la reivindicación 37 en donde la enfermedad autoinmune se asocia con el trasplante de un órgano de un donante a un receptor.

40. El método de la reivindicación 36 en donde la enfermedad inflamatoria es una enfermedad infecciosa.

41. El método de la reivindicación 36 en donde la enfermedad infecciosa es una infección bacteriana.

42. El método de la reivindicación 36 en donde la enfermedad infecciosa es una infección viral.

43. El método de la reivindicación 36 en donde dicho estradómero aglomerado se administra por vía intravenosa, subcutánea, oral, intraperitoneal , sublingual, bucal, transdérmica , por implante subdérmico, o intramuscularmente .

44. El método de la reivindicación 36 en donde dicho estradómero aglomerado se administra por vía intravenosa.

45. El método de la reivindicación 36 en donde dicho estradómero aglomerado se administra a una dosis de aproximadamente 0.1 mg/kg a aproximadamente 1000 mg/kg.

46. El método de la reivindicación 36 en donde dicho estradómero aglomerado se administra a una dosis de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 25 mg/kg.

47. Un método para bloquear la unión inespecífica de anticuerpos en un ensayo in vitro o ex vivo que comprende incubar el tejido objetivo o las células objetivo con una composición que comprende una cantidad eficaz del estradómero aglomerado de la reivindicación 31.

48. El método de la reivindicación 47 en donde los anticuerpos son anticuerpos monoclonales .

49. El método de la reivindicación 47 en donde los anticuerpos son anticuerpos policlonales .

50. El método de la reivindicación 47 en donde el ensayo in vitro o ex vivo es un ensayo de inmunohistoquimica, citometría de flujo, transferencia de tipo western, o inmunofluorescencia .

51. Un método para reducir los niveles de endotoxina en una composición que com rende tratar la composición con una cantidad eficaz del estradómero aglomerado de la reivindicación 31.

52. El método de la reivindicación 51 en donde el estradómero aglomerado forma complejo con dicha endotoxina en la composición.

53. El método de la reivindicación 51 que además comprende eliminar de la composición el estradómero en complejo con la endotoxina.

54. El método de la reivindicación 53 en donde el estradómero en complejo con la endotoxina se elimina de la composición por filtración.

55. El método de la reivindicación 53 en donde la composición es una composición farmacéutica.

56. Un método para producir un estradómero aglomerado que comprende expresar una secuencia seleccionada del grupo que consiste de SEC ID NO.: 4, SEC ID NO. : 8, SEC ID NO. : 9, SEC ID NO. : 10, SEC ID NO. : 18, SEC ID NO. : 20, SEC ID NO. : 21, SEC ID NO. : 28, SEC ID NO.: 24, y SEC ID NO. : 27 en un huésped.

57. El método de la reivindicación 56 que además comprende a) clonar un ADN que codifica el estradómero seleccionado del grupo que consiste de la SEC ID NO. : 4, SEC ID NO. :8, SEC ID NO . : 9 , SEC ID NO. :10 SEC ID NO. : 18, SEC ID NO. : 20, SEC ID NO. : 21, SEC ID NO. : 28, SEC ID NO.: 24, y SEC ID NO. : 27 en un vector de expresión. (b) transfectar el vector de expresión en un huésped bacteriano ; (c) aislar el ADN del plásmido que contiene el ADN clonado del cultivo bacteriano; (d) linealizar el ADN del plásmido que contiene el ADN clonado ; (e) transfectar el ADN linealizado en células de mamífero; (f) expandir las células transíectadas positivamente para obtener un pool de células transfectadas establemente; (g) cosechar la proteína estradomero a partir del medio; (h) purificar la proteína estradomero, en donde la proteína estradomero no contiene secuencias extrañas.

58. El método de la reivindicación 57 en donde el vector de expresión contiene un marcador seleccionable .

59. El método de la reivindicación 58 en donde el marcador seleccionable es un gen de resistencia a antibióticos .

60. El método de la reivindicación 59 en donde el gen de resistencia a antibióticos es un gen de resistencia a la neomicina .

61. El método de la reivindicación 57 en donde las células dé mamífero son células CHO o células HEK293.

62. El método de la reivindicación 57 en donde la proteína estradomero se purifica por cromatografía de afinidad .

63. El método de la reivindicación 62 en el que además se purifica el estradomero por cromatografía de intercambio de iones.

64. El método de la reivindicación 36 que además comprende administrar un agente adicional farmacéuticamente activo .

65. El método de la reivindicación 64 en donde el agente adicional farmacéuticamente activo comprende un esteroide, un anticuerpo monoclonal, un antibiótico, y un agente anti-viral, una citocina, o un agente de cualquier otra forma capaz de actuar como un inmunomodulador .

66. El método de la reivindicación 65 en donde el esteroide es prednisolona , cortisona, mometesona testosterona, estrógeno, oxandrolona, fluticasona, budesonide, beclametasona, albuterol, o levalbuterol .

67. El método de cualquiera de las reivindicaciones 64-66 en donde el agente adicional farmacéuticamente activo y el estradómero aglomerado exhiben sinergia terapéutica.

68. La unidad de estradómero de la reivindicación 1 en donde el dominio Fe de IgGl carece del dominio bisagra de IgGl.

69. La unidad de estradómero de la reivindicación 1, en donde el Fe de IgGl consiste de los dominios CH2 de IgGl y CH3 de IgGl de la SEC ID ÑO. : 19.

70. Una unidad de estradómero que comprende: (a) una secuencia líder; y (b) un dominio Fe que comprende (1) el dominio bisagra de IgG2 de SEC ID NO. : 3; y (2) los dominios CH2 y CH3 de IgGl de SEC ID NO. : 19

71. La unidad de estradomero de la reivindicación 70 en donde el dominio bisagra IgG2 crea multímeros de dichas unidades de estradómeros .

72. La unidad de estradomero de la reivindicación 70 en donde la unidad de estradomero es al menos 80% homologa a la SEC ID NO. : 18.

73. La unidad de estradomero de la reivindicación 70 en donde la unidad de estradomero es al menos 90% homologa a la SEC ID NO. : 18.

74. La unidad de estradomero de la reivindicación 70 en donde la unidad de estradomero es al menos 95% homologa a la SEC ID NO. : 18.

75. La unidad de estradomero de la reivindicación 70 en donde' la unidad de estradomero es al menos 99% homologa a la SEC ID NO. : 18.

76. La unidad de estradomero de la reivindicación 69 en donde el dominio Fe de IgGl es capaz de unirse a FcRn, DC-SIGN, SIGN-R1 o un FCYR .

77. La unidad de estradomero de la reivindicación 76 en donde el CYR es FcYRIIIa.

78. Un estradomero aglomerado que comprende al menos dos unidades de estradómeros de la reivindicación 70.

79. El estradomero aglomerado de la reivindicación 78, en donde dicho estradomero se une a FcYRIIIa.

80. Un método para modular una respuesta inmune en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un estradómero aglomerado de la reivindicación 78.

81. El método de la reivindicación 80 en donde dicha modulación comprende inducción de CD86 en las células dendríticas .

82. El método de la reivindicación 80 en donde dicha modulación comprende la inhibición de la expresión de CDla en las células dendríticas.

83. Un método para tratar la enfermedad inflamatoria en un sujeto que lo necesita que comprende administrar una cantidad eficaz de un estradómero aglomerado de la reivindicación 31.

84. El método de la reivindicación 83 en donde la enfermedad inflamatoria es una enfermedad autoinmune .

85. El método de la reivindicación 84 en donde la enfermedad autoinmune se selecciona del grupo que consiste de artritis, esclerosis múltiple, diabetes tipo I, tiroiditis autoinmune, púrpura trombocitopénica idiopática, polineuropatía inflamatoria crónica, esclerodermia, uveitis autoinmune, lupus eritematoso sistémico, miastenia gravis, y dermatitis atópica.

86. El método de la reivindicación 84 en donde la enfermedad autoinmune se asocia con el trasplante de un órgano de un donante a un receptor.

87. El método de la reivindicación 83 en donde la enfermedad inflamatoria es una enfermedad infecciosa.

88. El método de la reivindicación 83 en donde la enfermedad infecciosa es una infección bacteriana.

89. El método de la reivindicación 83 en donde la enfermedad infecciosa es una infección viral.

90. El método de la reivindicación 83 en donde dicho estradomero aglomerado se administra por vía intravenosa, subcutánea, oral, intraperitoneal , sublingual, bucal, transdérmica, por implante subdérmico, o intramuscularmente .

91. El método de la reivindicación 83 en donde dicho estradomero aglomerado se administra por vía intravenosa.

92. El método de la reivindicación 83 en donde dicho estradomero aglomerado se administra a una dosis de aproximadamente 0.1 mg/kg a aproximadamente 1000 mg/kg.

93. El método de la reivindicación 83 en donde dicho estradomero aglomerado se administra a una dosis de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 25 mg/kg.

94. Un método para bloquear la unión no específica de los anticuerpos en un ensayo in vi tro o ex vivo que comprende incubar el tejido objetivo o las células objetivo con una composición que comprende una cantidad eficaz del estradomero aglomerado de la reivindicación 78.

95. El método de la reivindicación 94 en donde los anticuerpos son anticuerpos monoclonales.

96. El método de la reivindicación 94 en donde los anticuerpos son anticuerpos policlonales .

97. El método de la reivindicación 94 en donde el ensayo in vitro o ex vivo es un ensayo de inmunohistoquímica, citometría de flujo, transferencia de tipo western, o inmunof luorescencia .

98. Un método para reducir los niveles de endotoxina en una composición que comprende tratar la composición con una cantidad eficaz del estradómero aglomerado de la reivindicación 78.

99. El método de la reivindicación 98 en donde el estradómero aglomerado forma complejos con dicha endotoxina en la composición.

100. El método de la reivindicación 98 que además comprende eliminar de la composición el estradómero en complejo con la endotoxina.

101. El método de la reivindicación 100 en donde el estradómero en complejo con la endotoxina se elimina de la composición por filtración.

102. El método de la reivindicación 100 en donde la composición es una composición farmacéutica.

103. El método de la reivindicación 83 que además comprende administrar un agente adicional farmacéuticamente activo .

10 . El método de la reivindicación 103 en donde el agente adicional farmacéuticamente activo comprende un esteroide, un anticuerpo monoclonal, un antibiótico, y un agente anti -viral, una citocina, o un agente de cualquier otra forma capaz de actuar como un inmunomodulador .

105. El método de la reivindicación 104 en donde el esteroide es prednisolona , cortisona, mometesona testosterona, estrógeno, oxandrolona, fluticasona, budesonide, beclametasona, albuterol, o levalbuterol .

106. La unidad de estradómero de la reivindicación 1, en donde el dominio Fe de IgGl contiene una o más mutaciones.

107. La unidad de estradómero de la reivindicación 106 en donde la unidad de estradómero ; comprende una secuencia de aminoácido seleccionada del grupo que consiste de SEC ID NO. : 20, SEC ID NO. : 21 O SEC ID NO . : 24.

108. La unidad de estradómero de la reivindicación 107 en donde la unidad de estradómero es al menos aproximadamente 80% homologa a la SEC ID NO. : 20.

109. La unidad de estradómero de la reivindicación 107 en donde la unidad de estradómero es al menos aproximadamente 90% homologa a la SEC ID NO. : 20.

110. La unidad de estradómero de la reivindicación 107 en donde la unidad de estradomero es al menos aproximadamente 95% homologa a la SEC ID NO. : 20.

111. La unidad de estradomero de la reivindicación 107 en donde la unidad de estradomero es al menos aproximadamente 99% homologa a la SEC ID NO. : 20.

112. La unidad de estradomero de la reivindicación 107 en donde la unidad de estradomero es al menos aproximadamente 80% homologa a la SEC ID NO. : 21.

113. La unidad de estradomero de la reivindicación 107 en donde la unidad de estradomero es al menos aproximadamente 90% homologa a la SEC ID NO. : 21.

114. La unidad de estradomero de la reivindicación 107 en donde la unidad de estradomero es al menos aproximadamente 95% homologa a la SEC ID NO.: 21.

115. La unidad de estradomero de la reivindicación 107 en donde la unidad de estradomero es al menos aproximadamente 99% homologa a la SEC ID NO. : 21.

116. La unidad de estradomero de la reivindicación 107 en donde la unidad de estradomero es al menos aproximadamente 80% homologa a la SEC ID NO. : 24.

117. La unidad de estradomero de la reivindicación 107 en donde la unidad de estradomero es al menos aproximadamente 90% homologa a la SEC ID NO. : 24.

118. La unidad de estradomero de la reivindicación 107 en donde la unidad de estradomero es al menos aproximadamente 95% homologa a la SEC ID NO.: 24.

119. La unidad de estradomero de la reivindicación 107 en donde la unidad de estradomero es al menos aproximadamente 99% homologa a la SEC ID NO.: 24.

120. La unidad de estradomero de la reivindicación 107 en donde el dominio Fe de IgGl es capaz de unirse a FcRn, DC-SIGN, SIGN-R1 o un FcyR .

121. La unidad de estradomero de la reivindicación 120 en donde el FCYR es FcYRIIIa.

122. Un estradomero aglomerado que comprende al menos dos unidades de estradómeros de la reivindicación 107.

123. El estradomero aglomerado de la reivindicación 122, en donde dicho estradomero se une a FcYRIIIa.

124. Un método para modular una respuesta inmune en un sujeto que comprende administrar al sujeto una cantidad eficaz de un estradomero aglomerado de la reivindicación 122.

125. El método de la reivindicación 124 en donde dicha modulación comprende inducción de CD86 en las células dendríticas .

126. El método de la reivindicación 124 en donde dicha modulación comprende la inhibición de la expresión de CDla en las células dendríticas.

127. Un método para tratar la enfermedad inflamatoria en un sujeto que lo necesita que comprende administrar una cantidad eficaz de un estradómero aglomerado de la reivindicación 122.

128. El método de la reivindicación 127 en donde la enfermedad inflamatoria es una enfermedad autoinmune .

129. El método de la reivindicación 128 en donde la enfermedad autoinmune se selecciona del grupo que consiste de artritis, esclerosis múltiple, diabetes tipo I, tiroiditis autoinmune, púrpura trombocitopénica idiopática, polineuropatía inflamatoria crónica, esclerodermia, uveitis autoinmune, lupus eritematoso sistémico, miastenia gravis, y dermatitis atópica.

130. El método de la reivindicación 128 en donde la enfermedad autoinmune se asocia con el trasplante de un órgano de un donante a un receptor.

131. El método de la reivindicación 127 en donde la enfermedad inflamatoria es una enfermedad infecciosa.

132. El método de la reivindicación 127 en donde la enfermedad infecciosa es una infección bacteriana.

133. El método de la reivindicación 127 en donde la enfermedad infecciosa es una infección viral.

134. El método de la reivindicación 127 en donde dicho estradómero aglomerado se administra por vía intravenosa, subcutánea, oral, intraperitoneal , sublingual, bucal, transdérmica, por implante subdérmico, o intramuscularmente .

135. El método de la reivindicación 127 en donde dicho estradómero aglomerado se administra por vía intravenosa.

136. El método de la reivindicación 127 en donde dicho estradómero aglomerado se administra a una dosis de aproximadamente 0.1 mg/kg a aproximadamente 1000 mg/kg.

137. El método de la reivindicación 127 en donde dicho estradómero aglomerado se administra a una dosis · de aproximadamente 1 mg/kg a aproximadamente 25 mg/kg.

138. Un método para bloquear la unión inespecífica de los anticuerpos en un ensayo in vi tro o ex vivo que comprende incubar el tejido objetivo o las células objetivo con una composición que comprende una cantidad eficaz del estradómero aglomerado de la reivindicación 122.

139. El método de la reivindicación 138 en donde los anticuerpos son anticuerpos monoclonales .

140. El método de la reivindicación 138 en donde los anticuerpos son anticuerpos policlonales .

141. El método de la reivindicación 138 en donde el ensayo in vitro o ex vivo es un ensayo de inmunohistoquímica, citometría de flujo, transferencia de tipo western, o inmunofluorescencia .

142. Un método para reducir los niveles de endotoxina en una composición que comprende tratar la composición con una cantidad eficaz del estradómero aglomerado de la reivindicación 122.

143. El método de la reivindicación 142 en donde el estradómero aglomerado forma complejo con dicha endotoxina en la composición.

144. El método de la reivindicación 142 que además comprende eliminar de la composición el estradómero en complejo con la endotoxina.

145. El método de la reivindicación 144 en donde el estradómero en complejo con la endotoxina se elimina de la composición por filtración.

146. El método de la reivindicación 144 en donde la composición es una composición farmacéutica.

147. El método de la reivindicación 127 que además comprende administrar un agente adicional farmacéuticamente activo.

148. El método de la reivindicación 147 en donde el agente adicional farmacéuticamente activo comprende un esteroide, un anticuerpo monoclonal, un antibiótico, y un agente anti-viral, una citocina, o un agente de cualquier otra forma capaz de actuar como un inmunomodulador .

149. El método de la reivindicación 148 en donde el esteroide es prednisolona, cortisona, mometesona testosterona, estrógeno, oxandrolona, fluticasona, budesonide, beclametasona, albuterol, o levalbuterol .

150. La unidad de estradomero de cualquiera de las reivindicaciones 1, 69 o 106 en donde la secuencia está clivada .

151. Una unidad de estradomero que comprende: (a) un dominio Fe de IgGl; y . (b) un dominio de multimerización, en donde el dominio Fe de IgGl está enlazado directamente al dominio de multimerización .

152. La unidad de estradomero de la reivindicación 151 en donde el dominio Fe de IgGl comprende la SEC ID NO. : 2 o la SEC ID NO. : 19.

153. La unidad de estradomero de la reivindicación 151 en donde el dominio Fe de IgGl comprende al menos la mutación de un aminoácido.

154. La unidad de estradomero de la reivindicación 151 en donde el dominio de multimerización se selecciona a partir del grupo que consiste de la SEC ID NO. : 3, SEC ID NO.: 5 y SEC ID NO. : 26.

155. Un estradomero aglomerado que comprende al menos 2 unidades de estradómeros de cualquiera de las reivindicaciones 151-154.

156. Un ácido nucleico que codifica la unidad de estradomero de SEC ID NO. : 4, SEC ID NO. : 8, SEC ID NO. : 9, SEC ID NO. : 10, SEC ID NO. : 18, SEC ID NO. : 20, SEC ID NO. : 21, SEC ID NO. : 28, SEC ID NO. : 24, y SEC ID NO. : 27.

157. Una unidad de estradomero que comprende: (a) una secuencia líder (b) un dominio Fe de IgGl; y (c) un dominio de multimerizacion; en donde la secuencia líder está directamente unida al dominio Fe de IgGl y en donde el dominio Fe de IgGl está directamente unido al dominio de multimerizacion o en donde la secuencia líder está directamente unida al dominio de multimerizacion y el dominio de multimerizacion está directamente unido al dominio Fe de IgGl.

158. La unidad de estradomero de la reivindicación 157 en donde el dominio Fe de IgGl es aproximadamente 90% homólogo a la SEC ID NO . : 2.

159. La unidad de estradomero de la reivindicación 157 en donde el dominio Fe de IgGl comprende los dominios CH2 y CH3 de IgGl.

160. La unidad de estradomero de las reivindicaciones anteriores en donde el dominio Fe de IgGl es al menos aproximadamente 90% homólogo a la SEC ID NO.: 19.

161. La unidad de estradomero de las reivindicaciones anteriores en donde el dominio de multimerizacion es una bisagra de IgG2.

162. La unidad de estradómero de las reivindicaciones anteriores en donde la secuencia de aminoácido de dicho dominio de multimerización es aproximadamente 90% homólogo a la SEC ID NO. : 3 y es capaz de multimerizar dichas unidades de estradómero.

163. La unidad de estradómero de las reivindicaciones anteriores en donde el dominio de multimerización está directamente unido al terminal amino del dominio Fe de IgGl o el terminal carboxi del dominio Fe de IgGl .

164. La unidad de estradómero de las reivindicaciones anteriores en donde la unidad de estradómero comprende: SEC ID NO. : 4, SEC ID NO.: 8 O SEC ID NO. : 18.

165. La unidad de estradómero de las reivindicaciones anteriores en donde el dominio de multimerización crea multímeros de dichas unidades de estradómero.

166. La unidad de estradómero de las reivindicaciones anteriores en donde los multímeros de dichas unidades de estradómero son multímeros de orden superior.

167. Una composición de estradómero que comprende las unidades de estradómero de las reivindicaciones anteriores en donde los multímeros están presentes en un porcentaje de aproximadamente 45% o aproximadamente 55% o aproximadamente 65% o aproximadamente 70% o aproximadamente 73% de la composición de estradómero total.

168. La unidad de estradomero de las reivindicaciones anteriores en donde el dominio Fe de IgGl es capaz de unirse a FcRn, DC-SIGN, SIGN-R1 o un FcyR .

169. Un estradomero aglomerado que comprende al menos dos unidades de estradomero de las reivindicaciones anteriores .

170. El uso del estradomero aglomerado de las reivindicaciones anteriores para la modulación de una respuesta inmune que comprende administrar una cantidad eficaz del estradomero aglomerado a un sujeto.

171. El uso del estradomero aglomerado de las reivindicaciones anteriores para tratar una enfermedad inflamatoria que comprende administrar una cantidad eficaz del estradomero aglomerado a un sujeto.

172. El uso de las reivindicaciones anteriores en donde la enfermedad inflamatoria es una enfermedad seleccionada de, neuropatía motora multifocal, enfermedad de Alzheimer, sepsis, artritis, esclerosis múltiple, diabetes tipo I, tiroiditis autoinmune, púrpura trombocitopénica idiopática, polineuropatía inflamatoria crónica, esclerodermia, uveítis autoinmune, lupus eritematoso sistémico, miastenia gravis, y dermatitis atópica o una enfermedad asociada con el trasplante de un órgano de un donante a un recetor; o una enfermedad infecciosa, una infección bacteriana o una infección viral .

173. Un método para bloquear la unión inespecífica de anticuerpos en un ensayo in vi tro o ex vivo que comprende incubar el tejido objetivo o las células objetivo con una composición que comprende una cantidad eficaz del estradomero aglomerado de las reivindicaciones anteriores.

174. Un método para producir una estradomero aglomerado que comprende expresar una secuencia seleccionada del grupo que consiste de SEC ID NO.: 4, SEC ID NO.: 8 o SEC ID NO. : 18 en un huésped.

175. El método de la reivindicación 174 que además comprende (a) clonar una ADN que codifica para el estradomero seleccionado del grupo que consiste de SEC ID N0.:4, SEC ID N0. :8, o SEC ID NO. : 18 en un vector de expresión. (b) transfectar el vector de expresión en un huésped bacteriano ; (c) aislar el ADN del plásmido que contiene el ADN clonado del cultivo bacteriano; (d) linealizar el ADN del plásmido que contiene el ADN clonado ; (e) transfectar el ADN linealizado en células de mamífero; (f) expandir las células transfectadas positivamente para obtener un pool de células transfectadas establemente (g) cosechar la proteína estxadómero a partir del med (h) purificar la proteína estradomero, en donde proteína estradomero no contiene secuencias extrañas.