MX2012012461A - Conjugados peptidicos de agonistas del receptor de glp-1 y gastrina y su uso. - Google Patents

Conjugados peptidicos de agonistas del receptor de glp-1 y gastrina y su uso.

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Abstract

La presente invención se refiere a, entre otros, ciertos conjugados peptidicos y al uso de los conjugados en el tratamiento de diversas enfermedades y trastornos, incluidas la diabetes (de tipo 1 y/o de tipo 2) y a enfermedades o trastornos relacionados con la diabetes.

Description

CONJUGADOS PEPTÍDICOS DE AGONISTAS DEL RECEPTOR DE GLP-1 Y GASTRINA Y SU USO CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a, entre otros, ciertos conjugados peptídicos y al uso de los conjugados en el tratamiento de diversas enfermedades o trastornos, incluidas la diabetes (de tipo 1 y/o de tipo 2) y a enfermedades o trastornos relacionados con la diabetes.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La diabetes, principalmente la diabetes de tipo 1 y de tipo 2, junto con la obesidad, que se cree que es un factor causal fundamental en el desarrollo de, en concreto, la diabetes de tipo 2, constituye un problema de salud importante creciente y en todo el mundo. Las enfermedades o trastornos que se pueden desarrollar como consecuencia de la diabetes no tratada incluyen enfermedades cardiovasculares y de las arterias periféricas, y complicaciones micro y macrovasculares, ictus y, posiblemente, ciertas formas de cáncer.
La diabetes se caracteriza por una regulación fisiológica defectuosa de los niveles de glucosa en sangre y, entre las enfermedades subyacentes que pueden producir diabetes están la reducción o la pérdida de masa de células ß pancreáticas y de su función, con especial reducción o pérdida de la producción de insulina endógena y/o la resistencia a la insulina (menor sensibilidad a la insulina), es decir reducción o pérdida de la capacidad de la insulina endógena para provocar una regulación adecuada de los niveles de glucosa en sangre.
Varias hormonas que reducen los niveles de glucosa en sangre se liberan de la mucosa gastrointestinal en respuesta a la presencia y absorción de nutrientes en el intestino. Estas incluyen el péptido 1 similar al glucagón (GLP-1), el péptido insulinotrópico dependiente de glucosa (GIP) y secretina.
El GLP-1 /Véase, 0rskov, Diabetologia 35: 701-711 (1992)] es producido por el procesamiento tisular del proglucagon, un péptido de 180 aminoácidos [véase, por ejemplo, Drucker, Diabetes 47: 159-169 (1998)]. La secuencia global del proglucagon contiene la secuencia de 29 aminoácidos del glucagón, la secuencia de 36 o 37 aminoácidos del GLP-1, así como la secuencia de 34 aminoácidos del péptido 2 similar al glucagón (GLP-2, un péptido intestinotrófico).EI GLP-1 humano (7-37) tiene la secuencia de aminoácidos de HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG (SEC ID N° 114).
Se ha identificado que el GLP-1 tiene varias funciones. Es una hormona que aumenta la secreción glucoestimulada de la insulina en seres humanos normales (y, por tanto, pertenece a un grupo de hormonas conocidas como hormonas incretinas). Además, el GLP-1 disminuye las concentraciones de glucagón, retrasa el vaciado gástrico, estimula la biosíntesis de la (pro)insulina y aumenta la sensibilidad a la insulina [véase, por ejemplo, Nauck, Harm. Metab. Res. 47: 1253-1258 (1997)]. El GLP-1 también potencia la capacidad de las células ß para percibir y responder a la glucosa (mediante la secreción de insulina) en sujetos con alteración de la tolerancia a la glucosa [véase, por ejemplo, Byrne, Eur. J. Clin. Invest. 28: 72-78 (1998)]. El efecto insulinotrópico de GLP-1 en seres humanos aumenta la velocidad de desaparición de la glucosa y disminuye la producción de glucosa indígena, en parte debido al aumento de los niveles de insulina y en parte debido al aumento de la sensibilidad de la insulina [véase, por ejemplo, D'Alessio, 1994, Eur. J. Clin. Invest. 28: 72-78 (1994)]. No obstante, la corta semivida del GLP-1 nativo in vivo ha constituido un problema farmacológico importante en los intentos de explotar la hormona como fármaco. En seres humanos y ratas, el GLP-1 se degrada rápidamente por la acción de la dipeptidil peptidasa IV (DPP-IV) en GLP-1 (9-36)amida, que actúa como antagonista del receptor de GLP-1 endógeno. Se han propuesto varias estrategias que evitan este problema, algunas usan inhibidores de DPP-IV y otras, análogos de GLP-1 (7-36)amida resistentes a DPP-IV.
Las denominadas exendinas, que contituyen otro grupo de péptidos que reducen los niveles de glucosa en sangre, tienen cierta similitud de secuencia (53 %) con el GLP-1 (7-36) [véase, por ejemplo, Goke y col., J. Biol. Chem. 268: 19650-19655 (1993)]. Las exendinas se encuentran en la saliva de especies de Helodermatidae (lagartos de cuentas). La exendina-3 está presente en la saliva de Heloderma horridum (lagarto de cuentas mejicano), Mientras que la exendina 4 está presente en la saliva de Heloderma suspectum (monstruo de Gila). La secuencia de aminoácidos de la exendina 4, que difiere de la de la exendina 3 en las posiciones dos y tres es HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2 (SEC ID N° 115).
Se ha indicado que la exendina 4 es un potente agonista del receptor de GLP-1 en células de insulinoma de rata aisladas [Goke y col., loe. cit.]. El documento WO 99/07404 divulga que la exendina 4 administrada por vía sistémica disminuye los niveles de glucosa en sangre en un 40 % en ratones db/db diabéticos y también se ha comunicado un efecto hipoglucémico duradero de una inyección intraperitoneal una vez al día de exendina 4 en ratones ob/ob diabéticos [Grieg y col., Diabetologia 42: 45-50 (1999)].
El documento US 5,424,286 y el documento WO 98/05351 divulgan que los agonistas de exendina-3, exendina-4 y exendina se pueden usar para el tratamiento de la diabetes para reducir la motilidad gástrica y retrasar el vaciado gástrico, y para la prevención de la hiperglucemia, y el documento WO 98/30231 divulga además que se pueden usar para reducir la ingesta de alimentos.
La hormona peptídica Gastrina se secreta en las células de la mucosa gástrica y en las células G en el duodeno y entre los principales funciones fisiológicas de la hormona en seres humanos están la estimulación de la secreción de ácido gástrico (es decir, HCI) y ayudar a la motilidad gástrica. Otros efectos identificados de la gastrina incluyen la estimulación del crecimiento celular y hay indicaciones de que la gastrina puede desempeñar un papel en la neogénesis de los islotes, es decir estimulación del crecimiento de las células ß secretoras de insulina en los islotes pancreáticos [véase, por ejemplo, Korc, M., J. Clin. Invest, 92: 1113-1114 (1993); Rooman y col. Diabetes 51 : 686-690 (2002)], y de este modo contribuyen a la regulación de la glucosa en sangre.
La gastrina comparte receptores con otra hormona peptídica gastrointestinal, la colecistoquinina (CCK). Los receptores CCK-A R y CCK-B-R tienen diferentes afinidades por la gastrina y variantes de la CCK. La CCK-A R (o CCK R1) actúa principalmente como receptor de la CCK sulfatada, mientas que CCK-B R (o CCK R2) se une tanto a CCK como a la gastrina de igual forma. CCK-B R se considera el "receptor de la gastrina" debido a los mayores niveles de gastrina en comparación con la CCK en plasma [Foucaud y col. Reg. Peptides 145: 17-23 (2008)].
CCK-B R puede iniciar varias vías intracelulares tras la unión del ligando, que se considera la razón para los diversos papeles fisiológicos de CCK. Una vía principal cadena debajo de CCK-B R es la vía MAPK (proteínas quinasas activadas por mitógeno) o ERK (quinasas reguladas extracelulares), que también es activada por varias hormonas de crecimiento. Esta es una característica clave en la proliferación celular de la gastrina. Dado que CCK-B R se expresa en el páncreas, la gastrina puede contribuir a la proliferación celular y la regeneración de los islotes en este tejido.
En seres humanos, la gastrina se produce principalmente en tres formas, gastrina 34, gastrina 17 y gastrina 14 (con referencia al número total de aminoácidos en la secuencia en cuestión). También se ha identificado la gastrina 6. Las formas más cortas se generan mediante la escisión de la gastrina 34 amidada en C terminal; por tanto, la gastrina 17 consiste en los últimos 17 residuos en C terminal de la gastrina 34 (correspondiente a la progastrina (55-71), la gastrina 14 los últimos 14 residuos en C-terminal (correspondiente a la progastrina (58-71) y la gastrina 6 solo los últimos 6 residuos en C-terminal (correspondiente a la progastrina (66-71). Son las formas amidadas de la gastrina las que se unen con afinidad alta a CCK-B R y ejercen funciones de proliferación celular. En la gastrina 17 humana, el residuo aminoácido en N-terminal es un residuo de ácido piroglutámico (PyroGlu). Los 6 aminoácidos amidados en C-terminal son los residuos claves de unión al receptor de la gastrina.
El documento WO 2005/072045 divulga, entre otras cosas, combinaciones de "agonistas de GLP-1" y "compuestos de gastrina" que tienen efectos beneficiosos en la prevención y/o tratamiento de afecciones y/o enfermedades para las que se ha demostrado que un "agonista de GLP-1" o un "compuestos de gastrina" tienen un efecto terapéutico. El documento WO 2007/095737 divulga, entre otras cosas, combinaciones de "agonistas de exendina" y "compuestos de gastrina" que asimismo tienen efectos beneficiosos en la prevención y/o tratamiento de afecciones y/o enfermedades para las que se ha demostrado que los "agonistas de exendina" o "compuestos de gastrina" tienen un efecto terapéutico.
Los datos que derivan de estudios que emplean ratones diabéticos no obesos (NOD), ampliamente usados como modelo animal de la diabetes de tipo 1 humana] presentados en el documento WO 2005/072045 parecen indicar que ciertas combinaciones "agonista del GLP-1 /Compuesto de gastrina" descritas en el mismo pueden tener un efecto beneficioso con respecto a la normalización de los niveles de glucosa en sangre en ratones NOD con diabetes aguda en comparación con el efecto observado cuando se usa el "agonista del GLP-1" (o el "compuesto de gastrina") en cuestión solo. Los datos [que asimismo derivan de estudios que emplean ratones diabéticos no obesos (NOD)] presentados en el documento WO 2007/095737, parecen indicar que dichas combinaciones de "agonista de exendina/compuesto de gastrina" descritas en el mismo pueden tener un efecto beneficioso con respecto a la normalización de los niveles de glucosa y de los niveles de insulina en ratones NOD con diabetes aguda en comparación con el efecto observado cuando se usa el "agonista de exendina" (o el "compuesto de gastrina") en cuestión solo y que ciertas combinaciones de "agonista del receptor de GLP-1 "/gastrina descritos en el mismo pueden tener un efecto beneficioso con respecto a la inducción de la regeneración de las células del islote en comparación con el efecto observado cuando se usa el "agonista del receptor de GLP-1" solo.
Los documentos WO 2005/072045 y WO 2007/095737 también divulgan la posibilidad de formar conjugados que comprenden un "agonista de GLP-1" o un "agonista de exendina", respectivamente, y un "compuesto de gastrina" acoplado o unido de forma covalente (es decir, conjugado) entre sí, opcionalmente a través de un adaptador o espaciador intermedio. Como espaciador adecuado se menciona un mono o disacárido, un aminoácido, un sulfato, un succinato, un acetato o un espaciador o adaptador polimérico oligomérico que comprende uno o más de estos restos. También se describen procedimientos contemplados por los cuales se podrían preparar conjugados de los tipos en cuestión. No obstante, no se proporcionan datos preparativos o de otro tipo en ninguno de los últimos documentos en cuestión para sustanciar que cualquier conjugado del tipo en cuestión, de hecho, se habían preparado y caracterizado, o analizado, con respecto a sus propiedades o actividad biológicas/fisiológicas, en el momento de presentar la respectiva solicitud internacional.
Además, cabe mencionar que ni el documento WO 2005/072045 ni el documento WO 2007/095737 proporcionan ningún dato in vivo, in vitro o de otro tipo para sustanciar que las combinaciones de "agonista de GLP-1 "/"compuesto de gastrina" o "agonista de exendina'V'compuesto de gastrina", respectivamente, descritas y usadas en los mismos, podrían ser beneficiosos en el tratamiento de, por ejemplo, la diabetes de tipo 2.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Ahora se ha descubierto que ciertos conjugados que comprenden dos restos peptídicos acoplados o unidos covalentemente pueden exhibir una actividad terapéutica inesperadamente alta en el tratamiento de, por ejemplo, la diabetes (diabetes de tipo 1 y/o de tipo 2) o de otras varias enfermedades o trastornos relacionados con la diabetes, mediante comparación con la actividad terapéutica de una combinación de los dos péptidos individuales en cuestión.
En un aspecto amplio, la invención proporciona un conjugado peptídico de un agonista del receptor de GLP-1 y gastrina, en particular gastrina con una sustitución en la posición 15 seleccionada de Leu, Nle, Phe y Thr. Más particularmente, la invención proporciona conjugados peptídicos de exendina-4 y gastrina, además de conjugados peptídicos de GLP-1 y gastrina.
En un primer aspecto, la invención proporciona de este modo un conjugado peptídico que tiene la fórmula (I): R1 - Z - L - Y - R2 (I) en la que: R1 es H, alquilo Cu, acetilo, formilo, benzoílo o trifluoroacetilo; R2 es OH o NH2; Z comprende la secuencia de la exendina-4 (1-39) que tiene la secuencia His-Gly-Glu -Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu -Ser-Lys-GIn-Met-Glu -Glu-Glu-Ala-Val -Arg -Leu -Phe -He -Glu -Trp -Leu -Lys -Asn -Gly -Gly -Pro -Ser -Ser -Gly -Ala -Pro -Pro -Pro -Ser (SEC ID N° 115) o un análogo del mismo Za; L es un resto de adaptador opcional; y Y comprende la secuencia de gastrina 17 que tiene la secuencia Gln-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Y15-Asp-Phe (SEC ID N° 116) en la que Y15 se selecciona de Leu, Nle, Phe y Thr o un análogo del mismo Ya; Además, la invención proporciona un conjugado peptídico en el que: (i) Za tiene sustituciones en hasta 10 posiciones y/o comprende un truncamiento en C-terminal de 1 a 12 aminoácidos, con respecto a la secuencia de la exendina-4; y/o (ii) Ya tiene sustituciones en hasta 5 posiciones con respecto a la secuencia de la gastrina 17 y/o comprende un truncamiento en N-terminal de 1 a 13 aminoácidos, con respecto a la secuencia de la gastrina 17.
En una realización, la invención proporciona un conjugado peptídico en el que: Za es una secuencia peptídica que tiene la fórmula lia His-Z2-Z3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Z10-Z11 -Z12 -Z13 -Z14 -Glu -Z16 -Z17-Z18 -Z19 -Z20 -Z21 -Z22 -Z23 -Z24 -Z25 -Z26 -Z27 -Z28 -Z29 -Z30 -Z31 -Z32 -Z33 -Z34 -Z35 -Z36 -Z37 -Z38 -Z39 (lia) en la que Z2 se selecciona de Gly, Ala, Ser, Aib, Thr, Leu e lie; Z3 se selecciona de Glu y Asp; Z9 se selecciona de Asp y Glu; Z10 se selecciona de Leu, Val, lie y Ala; Z11 se selecciona de Ser y Aib; Z12 se selecciona de Ser, GIn, Arg, Cys, Lys, Glu y Orn; Z13 se selecciona de Arg, Ser, GIn, Tyr y Glu; Z14 se selecciona de Gly, Cys, Phe, Tyr, Trp, Lys, Met, Leu, NIe e He; Z16 se selecciona de Asp, Gly, Aib, Glu, Lys y Cys; Z17 se selecciona de Glu, Cys, Lys, Ser y GIn; Z18 se selecciona de Ala y Aib; Z19 se selecciona de Val, Leu, lie y Ala; Z20 se selecciona de Arg, Lys, Cys, Orn y Glu; Z21 se selecciona de Leu y Glu; Z22 se selecciona de Phe y Ala; Z23 se selecciona de He y Leu; Z24 se selecciona de Glu, Cys, Lys, Ala y Arg; Z25 se selecciona de Trp, Cys, Lys y Phe; Z26 se selecciona de Leu e lie; Z27 se selecciona de lie, GIn, Lys, Cys, Arg y Orn; Z28 se selecciona de Asn, Ser, Asp, Aib, GIn, Lys, Cys, Arg, Tyr, bAla, Glu, Orn y Leu o está ausente; Z29 se selecciona de Gly, Aib y bAla o está ausente; Z30 se selecciona de Gly, Cys, Lys y Arg o está ausente; Z31 se selecciona de Pro, Ser y Asp o está ausente; Z32 se selecciona de Ser y Lys o está ausente; Z33 es Ser o está ausente; Z34 se selecciona de Gly y Lys o está ausente; Z35 es Ala o está ausente; Z36 es Pro o está ausente; Z37 es Pro o está ausente; Z38 es Pro o está ausente; Z39 es Ser o está ausente; L es una secuencia peptídica que tiene la fórmula llb L1-L2-L3-L4 (llb) en la que L1 se selecciona de Ser, Ala, Lys, Orn, bAla, 8Aoc, DBF, Peg3, Cys y GIn o está ausente; L2 se selecciona de Ser, Ala, Lys, Orn, bAla, 8Aoc, DBF, Peg3, Cys y GIn o está ausente; L3 se selecciona de Ser, Ala, Lys, Orn, bAla, 8Aoc, DBF, Peg3, Cys y GIn o está ausente; L4 se selecciona de Ser, Ala, Lys, Orn, bAla, 8Aoc, DBF, Peg3, Cys y GIn o está ausente; Ya es una secuencia peptídica que tiene la fórmula lie Y1 -Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y1 0-Y11 -Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Y17 (I le) en la que Y1 es GIn o está ausente; Y2 es Gly o está ausente; Y3 es Pro o está ausente; Y4 es Trp o está ausente; Y5 es Leu o está ausente; Y6 es Glu o está ausente; Y7 es Glu o está ausente; Y8 es Glu o está ausente; Y9 es Glu o está ausente; Y10 es Glu o está ausente; Y1 1 es Ala o está ausente; Y12 se selecciona de Ala y Tyr o está ausente; Y13 se selecciona de Gly y Ala o está ausente; Y14 se selecciona de Trp, Phe, 1 Nal y Met; Y15 se selecciona de Leu, Nle, Phe y Thr; y Y17 se selecciona de Phe y 3-(3-Piridil)-alanina.
En otra realización, la invención proporciona un conjugado peptídico en el que: Za es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Illa His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Leu-Ser-Z12-Z13-Z14-Glu-Z16-Glu-Ala-Val-Z20-Leu-Phe-lle-Z24-Z25-Leu-Z27-Z28 (Illa) en la que Z9 se selecciona de Asp y Glu; Z12 se selecciona de Lys, Arg y Orn; Z13 se selecciona de Gln y Tyr; Z14 e selecciona de Met y Leu; Z16 se selecciona de Glu, Cys y Lys; Z20 se selecciona de Arg, Lys y Orn; Z24 se selecciona de Lys y Glu; Z25 se selecciona de Trp, Lys, Cys y Phe; Z27 se selecciona de Lys, Arg y Orn; Z28 se selecciona de Asn y Asp o está ausente; L es una secuencia peptídica que tiene la fórmula II Ib L1-L2-L3-L4 (lllb) en la que L1 se selecciona de Orn, Peg3, Cys, Lys y GIn está ausente; L2 se selecciona de Orn, Peg3, Cys, Lys y GIn está ausente; L3 se selecciona de Orn, Peg3, Cys, Lys y GIn está ausente; L4 se selecciona de Orn, Peg3, Cys, Lys y GIn está ausente; Ya es una secuencia peptídica que tiene la fórmula lile Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Y17 (lile) en la que Y12 se selecciona de Tyr y Ala o está ausente; Y13 se selecciona de Gly y Ala o está ausente; Y14 se selecciona de Trp, 1 Nal y Phe; Y15 se selecciona de Leu, Nle, Thr y Phe; y Y17 se selecciona de Phe y 3-(3-Piridil)-alanina.
En una realización adicional, la invención proporciona un conjugado peptídico en el que: Za es una secuencia peptídica que tiene la fórmula IVa His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Leu-Ser-Z12-Gln- et-Glu-Z16-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-lle-Glu-Trp-Leu-Z27-Z28 (IVa) en la que Z9 se selecciona de Glu y Asp; Z12 se selecciona de Lys y Orn; Z16 se selecciona de Glu y Lys; Z27 se selecciona de Lys y Orn; Z28 se selecciona de Asn y Asp o está ausente; L es una secuencia peptídica que tiene la fórmula IVb L1-L2-L3-L4 (IVb) en la que L1 se selecciona de Orn, Peg3, Cys, Lys y GIn está ausente; L2 se selecciona de Orn, Peg3, Cys, Lys y GIn está ausente; L3 se selecciona de Orn, Peg3, Cys, Lys y GIn está ausente; L4 se selecciona de Orn, Peg3, Cys, Lys y GIn está ausente; Ya es una secuencia peptídica que tiene la fórmula IVc Y12-Y13-Trp-Leu-Asp-Phe (IVc) en la que Y12 es Tyr o está ausente; y Y13 es Gly o está ausente; En una realización adicional más, la invención proporciona un conjugado peptídico en el que: Za es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Va His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Leu-Ser-Z12-Tyr-Leu-Glu-Z16-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-lle-Glu-Phe-Leu-Z27-Z28 (Va) en la que Z9 se selecciona de Glu y Asp; Z12 se selecciona de Lys y Orn; Z16 se selecciona de Glu y Lys; Z27 se selecciona de Lys y Orn; Z28 se selecciona de Asn y Asp o está ausente; L es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Vb L1-L2-L3-L4 (Vb) en la que L1 se selecciona de Orn, Peg3, Cys, Lys y Gln está ausente; L2 se selecciona de Orn, Peg3, Cys, Lys y Gln está ausente; L3 se selecciona de Orn, Peg3, Cys, Lys y Gln está ausente; L4 se selecciona de Orn, Peg3, Cys, Lys y Gln está ausente; Ya es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Ve Y12-Y13-Trp-Leu-Asp-Phe (Ve) en la que Y12 es Tyr o está ausente; y Y13 es Gly o está ausente; Además, la invención proporciona un conjugado peptídico en el que dicho puente intramolecular está formado entre las cadenas laterales de dos residuos de aminoácidos que están separados por tres aminoácidos en la secuencia de aminoácidos lineal de fórmula I.
Todavía más, la invención proporciona un conjugado peptídico en el que dicho puente intramolecular se forma entre las cadenas laterales de dos residuos de aminoácidos que están separados por tres aminoácidos en la secuencia de aminoácidos lineal de fórmula I.
En una realización específica, la invención proporciona un conjugado peptídico en el que el puente intramolecular se forma entre las cadenas laterales de los pares de residuos x y x+3, x+4, x+5 etc.
En otra realización específica, la invención proporciona un conjugado peptídico en el que el puente intramolecular es un anillo lactama.
En una realización específica adicional, la invención proporciona un conjugado peptídico en el que el puente intramolecular implica un par de residuos en el que Z12 es Lys y Z16 es Glu; Z12 es Glu y Z16 es Lys; Z16 es Glu y Z20 es Lys; Z16 es Lys y Z20 es Glu; Z20 es Glu y Z24 es Lys; Z20 es Lys y Z24 es Glu; En otro aspecto de la invención se proporciona un conjugado peptídico que tiene la fórmula VI: R1-X-L-Y-R2 (VI) en la que R1 es H, alquilo Ci-4, acetilo, formilo, benzoílo o trifluoroacetilo; R2 es OH o NH2; X comprende la secuencia del GLP-1 (7-36) que tiene la secuencia His-Ala-Glu -Gly-Thr -Phe -Thr-Ser-Asp -Val -Ser-Ser-Tyr -Leu-Glu -Gly-GIn -Ala-Ala -Lys -Glu -Phe -He -Ala -Trp -Leu -Val-Lys -Gly -Arg (SEC ID N° 114) o un análogo del mismo Xa; L es un adaptador que contiene hasta 4 aminoácidos naturales o no naturales, o combinaciones de los mismos, o está ausente; Y comprende la secuencia de gastrina 17 que tiene la secuencia Gln-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Y15-Asp-Phe en la que Y15 se selecciona de Leu, Nle, Phe y Thr o un análogo del mismo Ya.
En una realización, la invención proporciona un conjugado peptídico en el que: (i) Xa tiene sustituciones en hasta 5 posiciones y/o comprende un truncamiento en C-terminal de 1 a -2 aminoácidos, con respecto a la secuencia de GLP-1 ; y/o (i¡) Ya tiene sustituciones en hasta 5 posiciones con respecto a la secuencia de la gastrina 17 y/o comprende un truncamiento en N-terminal de 1 a 13 aminoácidos, con respecto a la secuencia de la gastrina 17.
En otra realización, la invención proporciona un conjugado peptídico en el que: Xa es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Vlla His-X8-Glu -Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp -Val -Ser-Ser-Tyr -Leu-Glu -Gly-GIn -Ala-Ala -X26 -Glu -Phe -He -Ala -Trp -Leu -Val-X34 -Gly -X36 (Vlla) en la que X8 se selecciona de Ala, Aib y Gly; X26 se selecciona de Arg y Lys; X34 se selecciona de Arg y Lys; X36 se selecciona de Arg y Lys; L es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Vllb L1-L2-L3-L4 (Vllb) en la que L1 se selecciona de Ser, Ala, Lys, Orn, bAla, 8Aoc, DBF, Peg3, Cys, GIn o está ausente; L2 se selecciona de Ser, Ala, Lys, Orn, bAla, 8Aoc, DBF, Peg3, Cys, GIn o está ausente; L3 se selecciona de Ser, Ala, Lys, Orn, bAla, 8Aoc, DBF, Peg3, Cys, GIn o está ausente; L4 se selecciona de Ser, Ala, Lys, Orn, bAla, 8Aoc, DBF, Peg3, Cys, GIn o está ausente; Ya es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Vllc Y1 -Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y1 O-Y1 -Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Y17 (Vllc) en la que Y1 es GIn o está ausente; Y2 es Gly o está ausente; Y3 es Pro o está ausente; Y4 es Trp o está ausente; Y5 es Leu o está ausente; Y6 es Glu o está ausente; Y7 es Glu o está ausente; Y8 es Glu o está ausente; Y9 es Glu o está ausente; Y10 es Glu o está ausente; Y1 1 es Ala o está ausente; Y12 se selecciona de Ala, Tyr o está ausente; Y13 se selecciona de Gly, Ala o está ausente; Y14 se selecciona de Trp, Phe, 1 Nal y Met; Y15 se selecciona de Leu, Nle, Phe y Thr; y Y17 se selecciona de Phe y 3-(3-Piridil)-alanina.
En otra realización más, la invención proporciona un conjugado peptídico en el que: Xa es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Villa His-X8-Glu -Gly-Thr-Phe-Thr-Ser -Asp -Val -Ser-Ser -Tyr -Leu-Glu -Gly-GIn -Ala-Ala -X26 -Glu -Phe -He -Ala -Trp -Leu -Val-X34 -Gly -X36 (Villa) en la que X8 se selecciona de Ala, Aib y Gly; X26 se selecciona de Arg y Lys; X34 se selecciona de Arg y Lys; X36 se selecciona de Arg y Lys; L es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Vlllb L1-L2-L3-L4 (Vlllb) en la que L1 se selecciona de Peg3, Orn, Cys, Lys, GIn o está ausente; L2 se selecciona de Ser, Ala, Orn, Cys, Lys, GIn o está ausente; L3 se selecciona de Lys, Ala, Cys, Orn, GIn o está ausente; L4 se selecciona de Lys, Orn, Ala, Peg3, Cys, Lys, GIn o está ausente; Ya es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Vllle Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Phe (Vllle) en la que Y12 se selecciona de Tyr, Ala o está ausente; Y13 se selecciona de Gly, Ala o está ausente; Y1 se selecciona de Trp y Phe; y Y15 se selecciona de Leu, Thr y Phe.
En una realización específica, la invención proporciona un conjugado peptídico en el que: Xa es una secuencia peptídica que tiene la fórmula IXa His-X8-Glu -Gly-Thr-Phe-Thr-Ser - Asp -Val -Ser-Ser -Tyr -Leu-Glu -Gly-Gln -Ala-Ala -X26-Glu -Phe-lle-Ala-Trp -Leu -Val-X34-Gly-X36 (IXa) en la que X8 se selecciona de Ala, Aib y Gly; X26 se selecciona de Arg y Lys; X34 se selecciona de Arg y Lys; X36 se selecciona de Arg y Lys; L es una secuencia peptidica que tiene la fórmula IXb L1-L2-L3-L4 (IXb) en la que L1 se selecciona de Orn, Peg3, Cys, Lys y Gln está ausente; L2 se selecciona de Orn, Peg3, Cys, Lys y Gln está ausente; L3 se selecciona de Orn, Peg3, Cys, Lys y Gln está ausente; L4 se selecciona de Orn, Peg3, Cys, Lys y Gln está ausente; Ya es una secuencia peptidica que tiene la fórmula IXc Y12-Y13-Trp-Leu-Asp-Phe (IXc) en la que Y12 es Tyr o está ausente; y Y13 es Gly o está ausente; En una realización específica adicional, la invención proporciona un conjugado peptídico en el que al menos uno de Lys o Cys está conjugado además con un sustituyente lipófilo.
Un aspecto adicional de la invención se refiere a un conjugado peptídico que tiene la fórmula: Exendina-4(1-39)-Peg3-Peg3-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (1) Exendina-4(1-39)-[G!n1 ,Leu 15]Gastrina17, Exendina-4(1-39)-K-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (3) Exendina-4(1 -39)-AAA-[Gln 1 , Leu 15]Gastrina17, (4) Exendina-4(1-39)-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (5) Exendina-4(1-39)-Peg3-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (6) Exendina-4(1-39)-8Aoc-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (7) Exendina-4(1-39)-DBF-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (8) Exendina-4(1-39)-8Aoc-8Aoc-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (9) Exend¡na-4(1-39)-[Leu4]Gastr¡na6, (10) Exend ina-4( 1 -39)-K-[Leu4]Gastrina6, (1 1) Exendina-4(1-39)-AAA-[Leu4]Gastrina6, (12) Exendina-4(1-39)-SKK-[Leu4]Gastrina6, (13) Exendina-4(1-39)-Peg3-SKK-[Leu4]Gastrina6, (14) Exendina-4(1-39)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6, (15) Exendina-4(1-39)-8Aoc-SKK-[Leu4]Gastrina6, (16) Exendina-4(1-39)-DBF-SKK-[Leu4]Gastrina6, (17) Exendina-4(1-39)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]Gastrina6, (18) Exendina-4(1-28)-[Gln1 ,Leu 15]Gastrina 7, (19) Exendina-4(1-28)-K-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (20) Exendina-4( 1 -28)-AAA-[Gln 1 , Leu 15]Gastrina 17, (21 ) Exendina-4(1-28)-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (22) Exendina-4(1-28)-Peg3-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (23) Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (24) Exend ina-4( 1 -28)-8Aoc-S KK-[Gln 1 , Leu 15]Gastr¡ na 17 , (25) Exendina-4(1-28)-DBF-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (26) Exendina^(1-28)-8Aoc-8Aoc- [Gln1 ,Leu 5]Gastr¡na 7, Exendina-4(1-28)-[Leu4]Gastrina6, (28) Exendina-4(1 -28)-K-[Leu4]Gastrina6, (29) Exendina-4(1 -28)-AAA-[Leu4]Gastrina6, (30) Exendina-4(1-28)-SKK-[Leu4]Gastrina6, (31 ) Exendina-4(1 -28)-Peg3-SKK-[Leu4]Gastrina6, (32) Exendina-4(1 -28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6, (33) Exendina-4(1-28)-8Aoc-SKK-[Leu4]Gastrina6, (34) Exendina-4(1 -28)-DBF-SKK-[Leu4]Gastrina6, (35) Exendina-4(1-28)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]Gastrina6, (36) GLP-1 (7-36)-[Gln1 , Leu15]Gastrina17, (37) GLP-1 (7-36)-K-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (38) GLP-1 (7-36)-AAA-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (39) GLP-1 (7-36)-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (40) GLP-1 (7-36)-Peg3-SKK-[Gln 1 ,Leu15]Gastrina17, (41 ) GLP-1 (7-36)-Peg3-Peg3-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (42) GLP-1 (7-36)-8Aoc-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (43) GLP-1 (7-36)-DBF-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (44) GLP-1 (7-36)-8Aoc-8Aoc-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (45) GLP-1 (7-36)-[Leu4]Gastrina6, (46) GLP-1 (7-36)-K-[Leu4]Gastrina6, (47) GLP-1 (7-36)-AAA-[Leu4]Gastrina6, (48) GLP-1 (7-36)-SKK-[Leu4]Gastrina6, (49) GLP-1 (7-36)-Peg3-SKK-[Leu4]Gastrina6, (50) GLP-1 (7-36)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6, (51 ) GLP-1 (7-36)-8Aoc-SKK- [Leu4]Gastrina6, GLP-1 (7-36)-DBF-SKK-[Leu4]Gastr¡na6 (53) o GLP-1 (7-36)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]Gastr¡na6, (54) En la que cada uno de los restos peptídicos de exendina-4 (1-39), exendina 4(1- 28) y de GLP-1 (7-36) está fijado covalentemente (es decir, unido o acoplado) a la parte restante de la respectiva molécula de conjugado a través de su C-terminal, y cada uno de restos peptídicos [Gln1 ,Leu15]Gastr¡na17 y [Leu4]Gastrina6 está fijado covalentemente (es decir, unido o acoplado) a la parte restante de la respectiva molécula conjugado a través de su N-terminal; o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptable del mismo.
En un aspecto específico, los conjugados peptídicos de la invención pueden fabricarse mediante procedimientos sintéticos estándar, mediante el uso de sistemas de expresión recombinantes o mediante cualquier otro procedimiento adecuado. Por tanto, los conjugados se pueden sintetizar de varios modos, incluidos, por ejemplo, procedimientos que comprenden: (a) sintetizar el conjugado peptídico por medio de una metodología convencional de fase sólida o de fase líquida, bien escalonada o bien mediante ensamblaje de fragmentos, y aislar y purificar el producto conjugado peptídico final; (b) expresar un constructo de ácido nucleico que codifica el conjugado peptídico en una célula huésped y recuperar el producto de expresión del cultivo de la célula huésped; o (c) expresar ¡n vitro sin células un constructo de ácido nucleico que codifica el conjugado peptídico y recuperar el producto de expresión; o mediante cualquier combinación de procedimientos de (a), (b) o (c) para obtener fragmentos del conjugado peptídico, ligando posteriormente los fragmentos para obtener el conjugado peptídico y recuperar el conjugado peptídico.
Entre otros aspectos de la invención están los procedimientos de tratamiento de diversas afecciones, enfermedades o trastornos [incluyendo la diabetes (de tipo 1 y de tipo 2) y varias afecciones, enfermedades o trastornos relacionados con la diabetes], que comprenden la administración de un conjugado peptídico de la invención (en forma libre o en forma de una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo), así como composiciones farmacéuticas que comprenden un conjugado peptídico o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo de la invención.
En un aspecto específico, los conjugados peptídicos de la presente invención también pueden ser útiles como agentes farmacéuticos para el tratamiento de la resistencia a la insulina, la intolerancia a la glucosa, pre-diabetes, niveles elevados de glucosa en ayunas, diabetes de tipo 1 y/o de tipo 2, hipertensión y/o dislipidemia (o una combinación de estos factores de riesgo metabólicos), aterosclerosis, arteriosclerosis, cardiopatía coronaria, enfermedad de las arterias periféricas e ictus. También pueden ser útiles en la prevención de la ganancia de peso, estimulación de la pérdida de peso, reducción del exceso de peso corporal y/o tratamiento de la obesidad (p. ej., mediante control del apetito, alimentación, ingesta de alimentos, ingesta de calorías y/o gasto de energía), incluyendo la obesidad mórbida, además de enfermedades, trastornos y estados de la salud asociados, incluyendo, entre otros, inflamación unida a la obesidad, enfermedad de la vejiga urinaria ligada a la obesidad "y apnea del sueño ligada a la obesidad. Los efectos de los conjugados peptídicos de la invención sobre estas afecciones pueden estar mediados, totalmente o en parte, por un efecto sobre el peso corporal o pueden ser independientes del mismo.
Otros aspectos de la presente invención se harán evidentes a partir de la siguiente divulgación.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Figura 1. Muestra la concentración plasmática media frente al tiempo (log-lineal) tras la administración i.v. y s.c. de 100 nmol/kg a ratones. A: Compuesto 33. B: Compuesto 1. Los datos representan la media ± SD, n= 3/puntos de datos.
Figura 2. Muestra la concentración plasmática media frente al tiempo (log-lineal) tras la administración s.c. de 100 nmol del compuesto/kg del compuesto 33, 74, 76, 77, 78 y 80 a ratones. n= 2/puntos de datos.
Figura 3 muestra datos del contenido total de insulina pancreática (en pg) en ratones diabéticos db/db tras la administración de (i) tres concentraciones (1 , 10 y 50 nmol/kg) del Compuesto 1 de la invención [Exendina-4(1-39)-Peg3-Peg3-[Gln1 , Leu15] Gastrina17; véase, más adelante], (ii) tres concentraciones correspondientes de una combinación aditiva 1 :1 de los péptidos Exendina-4(1-39) y h[Leu15]Gastrina17 (1 , 10 y 50 nmol/kg de cada péptido) y (iii) vehículo.
Figura 4. Muestra ?-Glucosa en sangre en ratones. Los datos se analizaron usando la prueba de Kruskal-Wallis, seguida de la prueba de comparación múltiple de Dunn, *** p<0,001. Comparación del Compuesto 33, Exendina-4 una combinación de Exendina-4(1-39) y h[Leu15]Gastrina17 y vehículo, respectivamente; n = 16-19 por grupo.
Figura 5. Muestra ?-lnsulina en plasma en ratones. Los datos se analizaron usando la prueba de Kruskal-Wallis, seguida de la prueba de comparación múltiple de Dunn, *** p<0,001. Comparación del Compuesto 33, Exendina-4 una combinación de Exendina-4(1-39) y h[Leu15]Gastr¡na17 y vehículo, respectivamente; n = 16-19 por grupo.
Figura 6. Muestra el contenido de insulina pancreática en ratones. Los datos se analizaron usando la prueba de Kruskal-Wailis, seguida de la prueba de comparación múltiple de Dunn, *** p<0,01. Comparación del Compuesto 33, Exendina-4 una combinación de Exendina-4(1-39) y h[Leu15]Gastrina17 y vehículo, respectivamente; n = 16-19 por grupo.
Figure 7. Muestra ?-HbAlc en ratones. Los datos se analizaron usando la prueba de Kruskal-Wailis, seguida de la prueba de comparación múltiple de Dunn, ** p<0,01 , ***p< 0,001. Comparación del Compuesto 33, Exendina-4 una combinación de Exendina-4(1-39) y h[Leu15]Gastrina17 y vehículo, respectivamente; n = 16-19 por grupo.
Figure 8. Muestra ?-Péptido C en plasma en ratones. Los datos se analizaron usando la prueba de Kruskal-Wailis, seguida de la prueba de comparación múltiple de Dunn, * p<0,05. Comparación del Compuesto 33, Exendina-4 una combinación de Exendina-4(1-39) y h[Leu15]Gastrina17 y vehículo, respectivamente; n = 16-19 por grupo.
Figura 9. Muestra el efecto de la administración de exendina 4, Liraglutida o Compuesto 33 sobre la tolerancia a la glucosa, medida mediante el área bajo la curva (AUC) tras una carga de glucosa en ratones db/db. Se aplicaron tres regímenes de tratamiento (A) Prevención, (B) Tratamiento o (C) Descanso. Los datos se proporcionan como medias ± SEM (n=8-13/grupo). Estadística: Los datos se compararon mediante un ANOVA de dos vías con la posprueba de Bonferroni. * p<0,05; ** p<0,01 ; *** p<0,001 vs. vehículo.
Figura 10. Muestra el efecto de la administración SC de Exendina-4, Liraglutida o Compuesto 33 en glucosa en sangre en ayunas de 8 horas en ratones db/db. Se aplicaron tres regímenes de tratamiento (A) Prevención, (B) Tratamiento o (C) Descanso. Los datos se proporcionan como medias ± SEM (n=8-13/grupo). Estadística: Los datos se compararon mediante un ANOVA de dos vías con la posprueba de Bonferroni. * p<0,05; ** p<0,01 ; *** p<0,001 vs. vehículo.
Figura 11. Mustra el efecto de la administración SC de Exendina-4, Liraglutida o Compuesto 33 en los últimos valores (día -93) de (A) péptido C en plasma, (B) insulina en plasma o (C) HbA1c (%). Los datos se proporcionan como medias ± SEM (n=8-13/grupo). Estadística: Los datos se compararon mediante un ANOVA de una vía en la prueba Kruskal-Wallis seguida por la prueba de MC de Dunn. *** p<0,001 , ** p<0,01 , * p<0,05 vs. vehículo.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Como ya se ha indicado anteriormente, un aspecto adicional de la presente invención se refiere a un conjugado peptídico que tiene la fórmula: Exendina-4(1-39)-Peg3-Peg3-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (1) Exendina-4(1-39)-[Gln1 ,Leu 15]Gastrina17, ( 2) Exendina-4(1-39)-K-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, ( 3) Exendina-4( 1 -39)-AAA-[Gln 1 , Leu 15]Gastrina 17 , (4) Exendina-4(1-39)-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, ( 5) Exendina-4( 1 -39)-Peg3-SKK-[Gln 1 , Leu 15]Gastrina 17 , ( 6) Exendina-4(1-39)-8Aoc-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, ( 7) Exendina-4(1-39)-DBF-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, ( 8) Exendina-4( 1 -39)-8Aoc-8Aoc-[Gln 1 , Leu 15]Gastrina 17, (9) Exendina-4(1 -39)- [Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-39)-K-[Leu4]Gastrina6, (11 ) Exendina-4(1-39)-AAA-[Leu4]Gastrina6, (12) Exendina-4(1-39)-SKK-[Leu4]Gastrina6, (13) Exendina-4(1-39)-Peg3-SKK-[Leu4]Gastrina6, (14) Exendina-4(1-39)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6, (15) Exend¡na-4(1-39)-8Aoc-SKK-[Leu4]Gastr¡na6, (16) Exendina-4(1-39)-DBF-SKK-[Leu4]Gastrina6, (17) Exendina-4(1-39)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]Gastrina6, (18) Exendina-4(1-28)-[Gln1 ,Leu 15]Gastrina17, (19) Exendina-4(1-28)-K-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (20) Exendina-4(1 -28)-AAA-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (21 ) Exendina-4(1-28)-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (22) Exendina-4(1-28)-Peg3-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (23) Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (24) Exendina-4(1-28)-8Aoc-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (25) Exendina-4(1-28)-DBF-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (26) Exendina-4(1-28)-8Aoc-8Aoc-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (27) Exendina-4(1-28)-[Leu4]Gastrina6, (28) Exendina-4(1-28)-K-[Leu4]Gastrina6, (29) Exendina-4(1-28)-AAA-[Leu4]Gastrina6, (30) Exendina-4(1-28)-SKK-[Leu4]Gastrina6, (31 ) Exendina-4(1-28)-Peg3-SKK-[Leu4]Gastrina6, (32) Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6, (33) Exendina-4(1-28)-8Aoc-SKK-[Leu4]Gastrina6, (34) Exendina-4(1 -28)-DBF-SKK- [Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1 -28)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]Gastrina6, (36) GLP-1 (7-36)-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (37) GLP-1 (7-36)-K-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (38) GLP-1 (7-36)-AAA-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (39) GLP-1 (7-36)-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (40) GLP-1 (7-36)-Peg3-SKK-[Gln 1 ,Leu15]Gastrina17, (41 ) GLP-1 (7-36)-Peg3-Peg3-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (42) GLP-1 (7-36)-8Aoc-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (43) GLP-1 (7-36)-DBF-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, (44) GLP-1 (7-36)-8Aoc-8Aoc-[Gin1 ,Leu15]Gastrina17, (45) GLP-1 (7-36)-[Leu4]Gastrina6, (46) GLP-1 (7-36)-K-[Leu4]Gastrina6, (47) GLP-1 (7-36)-AAA-[Leu4]Gastrina6, (48) GLP-1 (7-36)-SKK-[Leu4]Gastrina6, (49) GLP-1 (7-36)-Peg3-SKK-[Leu4]Gastrina6, (50) GLP-1 (7-36)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6, (51) GLP-1 (7-36)-8Aoc-SKK-[Leu4]Gastrina6, (52) GLP-1 (7-36)-DBF-SKK-[Leu4]Gastrina6 (53) o GLP-1 (7-36)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]Gastrina6, (54) en la que cada uno de los restos peptídicos de exendina-4 (1-39), exendina 4(1-28) y de GLP-1 (7-36) está fijado covalentemente a la parte restante de la respectiva molécula de conjugado a través de su C-terminal, y cada uno de restos peptídicos [Gln1 , Leu15]Gastrina17 y [Leu4]Gastrina6 está fijado covalentemente a la parte restante de la respectiva molécula conjugada a través de su N-terminal; o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.
En un aspecto adicional, la presente invención se refiere a un conjugado peptídico que tiene la fórmula: Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu3]Gastrina5 (55) Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Ala1 , Leu4]Gastrina6, (56) Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Ala2, Leu4]Gastrina6, (57) Exendina-4(1-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6, (58) Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu2]Gastrina4 (59) [Leu14]Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 (60) [Orn12]Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 (61 ) [Orn27]Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 62) [Phe25]Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 (63) [Asp28]Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 (64) [Tyr13]Exendina-4(1 -28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 65) [Orn20]Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 (66) Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6, (67) Exendina-4(1-28)-[Leu4]Gastrina6, (68) Exendina-4(1-27)-[Leu4]Gastrina11 , (69) Exendina-4(1-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6, (70) Exendina-4(1-27)-Peg3-[Leu3]Gastrina5, (71 ) Exendina-4(1-26)-Peg3-[Leu3]Gastrina5, (72) Exendina-4(1-27)-Peg3-[Leu3]Gastrina4, (73) [Tyr13, Leu14]Exendina-4(1-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastr¡na6 (74) [Tyr13,Leu14]Exendina-4(1-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 (75) [Tyr14, Phe25]Exendina-4(1- 27)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 n"yr13,Leu14]Exendina-4(1-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 (77) Cadena lateral-ciclo([Lys12,Glu16]Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3- [Leu4]Gastrina6 (78) Cadena lateral-ciclo([Glu16,Lys20]Exendina-4(1-28)-Peg3- Peg3-[Leu4]Gastrina6 (79) Cadena lateral-ciclo([Lys20,Glu24]Exendina-4(1 -28)-Peg3- Peg3-[Leu4]Gastrina6 (80) [Lys16]Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 ( 81) Exendina-4(1 -28)-Peg3-K-Peg3-[Leu4]Gastrina6, (82) Exendina-4(1 -28)-[Thr4]Gastrina6, (83) Exendina-4(1-28)-[Phe4]Gastrina6, (84) [Leu14]Exendina-4(1-28)-[1 Nal3, Leu4]Gastrina6 (85) [Leu 14]Exendina-4(1-28)-[Nle4]Gastrina6 (86) [Leu14]Exendina-4(1-28)-[Leu4,[3-(3-Piridil)-Ala]6]Gastrina6 ( 87) [Glu9, Leu14, Phe25, Tyr13] Exendina^(1-27)-Peg3-Peg3- [Leu4]Gastrina6 (88) [Leu14, Phe25, Tyr13] Exendina-4(1-27)-Peg3-Peg3-[Leu4, Phe3]Gastrina6 (89) [Glu9, Leu14, Phe25, Tyr13] Exendina-4(1-27)-Peg3-Peg3- [Leu4, Phe3]Gastrina6 (90) [Arg27, Leu14, Phe25, Tyr13]Exendina-4(1-27)-Peg3- [Leu4]Gastrina6 (91 ) [Arg12,27, Leu14, Lys16, Phe25, Tyr13]Exendina-4(1-27)- Peg3-[Leu4]Gastrian6 (92) [Arg12, 27, Leu14, Lys20, Phe25, Tyr13]Exendina-4(1-27)- Peg3-[Leu4]Gastrina6 (93) [Arg12,27 ,Leu14, Lys24, Phe25, Tyr13]Exendina-4(1-27)- Peg3-[Leu4]Gastrina6 (94) [Arg12, Leu14, Phe25, Tyr13]Exendina-4(1-27)-Peg3- [Leu4]Gastrina6 (95) [Glu9, Leu14, Phe25, Tyr 3]Exendina-4(1-27)-[Leu2] Gastrina4 (96) [Glu9, Leu 14, Phe25, Tyr13] Exendina-4(1-27)-Peg3- [Leu2]Gastrina4 (97) [Glu9, Leu 14, Phe25, Tyr13] Exendina-4(1-27)-Orn-Peg3- [Leu2]Gastrina4 (98) [Glu9, Leu14, Phe25, Tyr13] Exendina^(1-27)-Peg3-Orn- [Leu2]Gastrina4 (99) [Glu9, Leu14, Phe25, Tyr13]Exendina-4(1-27)-0rn-0rn- [Leu2]Gastrina4 (100) [Glu9, Leu14, Phe25, Tyr13]Exendina-4(1-27)-[Leu4] Gastrina6 (101) [Glu9, Leu14, Phe25, Tyr13]Exendina-4(1-27)-Peg3- [Leu4]Gastrina6 (102) [Glu9, Leu14, Phe25, Tyr13]Exendina-4(1-27)-Orn-Peg3- [Leu4]Gastrina6 (103) [Glu9, Leu14, Phe25, Tyr13]Exendina-4(1-27)-Peg3-Orn- [Leu4]Gastrina6 (104) [Glu9, Leu 14, Phe25, Tyr13]Exendina-4(1-27)- Orn-Orn- [Leu4]Gastrina6 (105) [Lys(Hexadecanoil-isoGlu)34]GLP-1 (7-37)-Peg3-Peg3- [Leu4]Gastrina6 (106) [Arg34,Lys(Hexadecanoil-isoGlu)26]GLP-1 (7-37)-Peg3-Peg3- [Leu4]Gastrina6 (107) [Arg26,34,Lys(Hexadecanoil-isoGlu)36]GLP-1 (7-37)-Peg3- Peg3-[Leu4]Gastrina6 (108) [Lys(Hexadecanoil-isoGlu)26]GLP-1 (7-37)-Peg3-Peg3- [Leu4]Gastrina6 (109) [Arg26,34,Gly8,Lys(Hexadecanoil-isoGlu)36]GLP-1 (7-37)- Peg3-Peg3[Leu4]Gastrina6 (110) [Aib8,Arg34,Lys(Hexadecanoil-isoGlu)26]GLP-1 (7-37)-Peg3- Peg3[Leu4]Gastrina6 (111 ) [Aib8,Arg34]GLP-1 (7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 (112) [Arg34]GLP-1 (7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 (113) o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.
Las fórmulas anteriores para los conjugados peptídicos de la invención, que se escriben usando las designaciones / abreviaturas de uso amplio y convencional para los diversos restos peptídicos en cuestión [es decir, Exendina-4(1-39), Exendina-4(1-28) y GLP-1 (7-36)], se pueden escribir en forma de la secuencia de aminoácidos completa convencional (con los restos de adaptadores resaltados en negrita): (SEC ID N° 1) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-Peg3-Peg3-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 2) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (sin adaptador) (SEC ID N° 3) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-K-QGPWLEEEEEAYGWLOF-NH2 (SEC ID N° 4) H-HGEGTFTSOLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-AAA-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 5) H-HGEGTFTSOLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-SKK-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 6) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-Peg3-SKK-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 7) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-8A0C-SKK-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 8) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- DBF-SKK-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 9) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-8A0C-8A0C-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 10) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPP SYGWLDF-NH2 (sin adaptador) (SEC ID N° 11) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-K-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 12) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-AAA-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 13) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- SKK-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 14) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-Peg3-SKK-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 15) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 16) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-8Aoc-SKK-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 17) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-DBF-SKK-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 18) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS- 8A0C-8A0C-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 19) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNQGPWLEEEEEA YGWLDF-NH2 (sin adaptador) SEC ID N° 20) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-K-QGPWLEEE EEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 21) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-AAA-QGPWLEE EEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 22) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-SKK-QGPWLE EEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 23) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-SKK-QGP WLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 24) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-Peg3-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 25) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-8A0C-SKK-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 26) H- HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-DBF-SKK- QGPWLEEEEEAYGWLDFNH2 (SEC ID N° 27) H-HGEGTFTSOLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-8AOC-8AOC-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 28) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-YGWLDF-NH2 (sin adaptador) (SEC ID N° 29) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-K-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 30) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-AAA-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 31) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-SKK-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 32) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-SKK-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 33) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 34) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-8Aoc-SKK- YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 35) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-DBF-SKK-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 36) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-8Aoc-8Aoc-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 37) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRQGPWL EEEEEAYGWLDF-NH2 (sin adaptador) (SEC ID N° 38) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-K-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 39) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-AAA- QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 40) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-SKK-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 41) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-Peg3-SKK- QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 42) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-Peg3-Peg3-QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 43) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-8A0C-SKK- QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 44) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-DBF-SKK- QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 45) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-8A0C-8A0C- QGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 46) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRYGWLDF-NH2 (sin adaptador) (SEC ID N° 47) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAA EFIAWLVKGR-K-YGWLDF- NH2 (SEC ID N° 48) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-AAA- YGWLDF- NH2 (SEC ID N° 49) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-SKK- YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 50) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-Peg3-SKK-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 51) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 52) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-8Aoc-SKK- YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 53) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-DBF-SKK-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 54) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-8Aoc-8Aoc-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 55) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-Peg3-GWLDF-NH2 (SEC ID N° 56) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-Peg3-AGWLDF-NH2 (SEC ID N° 57) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-Peg3- YAWLDF-NH2 (SEC ID N° 58) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 59) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFI EWLKN-Peg3-Peg3-WLDF-NH2 (SEC ID N° 60) H-HGEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 61) H-HGEGTFTSDLS-0m-QMEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 62) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWL-Orn-N-Peg3-Peg3- YGWLDF-N H2 (SEC ID N° 63) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEFLKN-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 64) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKD-Peg3-Peg3- YGWLDF-NH2 (SEC ID N0 65) H-HGEGTFTSDLSKYMEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 66) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAV-Orn-LFIEWLKN-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 67) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFI EWLKN-Peg3-YGWLDF-N H2 (SEC ID N° 68) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFI EWLKNYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 69) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKEEEEAYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 70) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 71) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK-Peg3-GWLDF-NH2 (SEC ID N° 72) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWL-Peg3-GWLDF-NH2 (SEC ID N° 73) H-HGEGTFTSDLSKQMEEE=AVRLFIEWLK-Peg3-WLDF-NH2 (SEC ID N° 74) H-HGEGTFTSDLSKYLEEEAVRLFIEWLK-Peg3-Peg3-YGWLDF- NH2 (SEC ID N° 75) H-HGEGTFTSDLSKYMEEEAVRLFIEFLK-Peg3-Peg3-YGWLDF- NH2 (SEC ID N° 76) H-HGEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEFLK-Peg3-Peg3-YGWLDF- NH2 (SEC ID N° 77) H-HGEGTFTSDLSKYLEEEAVRLFIEFLK-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 78) H-HGEGTFTSDLS-K()-QME-E()-EAVRLFIEWLKN-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 79) H-HGEGTFTSDLSKQME-E()-EAV-K()-LFIEWLKN-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 80) H-HGEGTFTSDLSKQME()-EAV-K()-LFI-E()-WLKN-Peg3-Peg3- YGWLOF-NH2 (SEC ID N° 81) H-HGEGTFTSDLSKQMEKEAVRLFIEWLKN-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 82) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-Peg3-K-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 83) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNYGWTDF-NH2 (SEC ID N° 84) H-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFI EWLKNYGWFDF-NH2 (SEC ID N° 85) H-HGEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEWLKNYG-1Nal-LDF-NH2 (SEC ID N° 86) H-HGEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEWLKNYGW-Nle-DF-NH2 (SEC ID N° 87) H-HGEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEWLKNYGWLD-[3-(3- Piridil)-alanil] -NH2 (SEC ID N° 88) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Peg3-Peg3-YGWLDF- N H2 (SEC ID N° 89) H-HGEGTFTSDLSKYLEEEAVRLFI EFLK-Peg3-Peg3-YGFLDF-NH2 (SEC ID N° 90) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Peg3-Peg3-YGFLDF- NH2 SEC ID N° 91) H-HGEGTFTSDLSKYLEEEAVRLFI EFLK-Peg3-Peg3-YGWLDF- NH2 (SEC ID N° 92) H-HGEGTFTSDLSRYLEKEAVRLFI EFLR-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 93) H-HGEGTFTSDLSRYLEEEAVKLFI EFLR-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 94) H-HGEGTFTSDLSRYLEEEAVRLFIKFLR-Peg3-YGWLDF-N H2 (SEC ID N° 95) H-HGEGTFTSDLSRYLEEEAVRLFI EFLK-Peg3-YGWLDF-N H2 (SEC ID N° 96) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLKWLDF-NH2 (SEC ID N° 97) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Peg3-WLDF-NH2 (SEC ID N° 98) H- HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Orn-Peg3-WLDF-NH2 (SEC ID N° 99) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Peg3-Orn-WLDF-NH2 (SEC ID N° 100) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Orn-Orn-WLDF-NH2 (SEC ID N° 101 ) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLKYGWLDF-NH2 (SEC ID N° 102) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 103) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Orn-Peg3-YGWLDF- NH2 (SEC ID N° 104) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Peg3-Orn-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 105) H-HGEGTFTSELSKYLEEEAVRLFIEFLK-Orn-Orn- YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 106) H-HAEGTFTSOVSSYLEGQAAKEFIAWLV-K(Hexadecanoil-isoGlu)-GRG -Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 107) H-HAEGTFTSOVSSYLEGQAA-K(Hexadecanoil-isoGlu)- EFIAWLVRGRG-Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 108) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAREFIAWLVRG- K(Hexadecanoil-isoGlu)-G- Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 109) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAA-K(Hexadecanoil-isoGlu)-EFIAWLVKGRG -Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 110) H-HGEGTFTSDVSSYLEGQAAREFIAWLVRG- K(Hexadecanoil-isoGlu)-G- Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 111) H-H-Aib-EGTFTSDVSSYLEGQAA-K(Hexadecanoil-isoGlu)-EFIAWLVRGRG -Peg3-Peg3-YGWLDF-NH2 (SEC ID N° 112) H-H-Aib-EGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVRGRG-Peg3- Peg3-YGWLDFH-NH2 (SEC ID N° 113) H-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVRGRG-Peg3-Peg3-YGWL0F-NH2 en las que las abreviaturas Peg3, 8Aoc,OBF, 1 Nal, bAla, Orn, DPR, Dbu, Gaba y Aib representan los siguientes restos de aminoácidos no naturales.
Peg3: -NH-CH2-CH2-O-CH2-CH2-0-CH2-C(O)- (derivado de ácido 8-amino-3,6-dioxaoctanoico); DBF: [derivado de ácido 4-(2-aminoetil)-6-dibenzofuranpropanoico]; 1 Nal: 1-naptilalanina bAla: beta-alanina Gaba: Ácido y-aminobutanoico Aib: Ácido a-aminoisobutanoico Dbu: Ácido diaminobutanoico DPR: Ácido diaminopropiónico Orn: Ornitina Por tanto, con respecto a la orientación del resto de adaptador en un conjugado peptídico de la invención, el resto de adaptador -Peg3-Peg3-, por ejemplo, designa el resto químico.
-NH-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-C(O)-NH-CH2-CH2-O-CH2-CH2-0-CH2-C(O)- El resto -NH- a la izquierda del resto de adaptador en cuestión está fijado covalentemente a la exendina-4 o al resto derivado de GLP-1 del conjugado peptídico en cuestión, y el resto ...-C(O)- a la derecha del resto de adaptador en cuestión está fijado al resto derivado de gastrina del conjugado peptídico en cuestión.
Con respecto a los restos de adaptadores especificados restantes, -K- designa un residuo del aminoácido lisina, -AAA- designa un residuo tripéptido Ala-Ala-Ala y -SKK-designa un residuo tripéptido -Ser-Lys-Lys-.
En algunos de los conjugados peptídicos de la invención, indicados anteriormente, se tiene que entender que el resto de la secuencia peptídica de GLP1 (7-36) deriva de la secuencia de GLP-1 (hGLP-1) humano o es un análogo del mismo.
En algunos otros de los conjugados peptídicos de la invención, indicados anteriormente, se tiene que entender que el resto de la secuencia peptídica de la exendina-4 (1-39) deriva de la secuencia de la secuencia de la exendina-4 de Heloderma suspectum o es un análogo del mismo.
Asimismo, los restos [Gln1 , Leu15]Gastrina17 y [Leu4]Gastrina6 en los conjugados derivan de la gastrina humana.
Se tiene que entender que la SEC ID N° 1 es igual al compuesto 1 , SEC ID N°: 2 igual al Compuesto 2 etc.
Debe entenderse que cada uno de los conjugados peptídicos anteriores 1-54 individualmente, es decir el compuesto 1 o el compuesto 2 o el compuesto 3 (etc., hasta el compuesto 54) y cada uno de los demás conjugados peptídicos 55-1 13 divulgados más adelante (véase la Tabla 2 y 3 del Ejemplo 2), individualmente, es decir el compuesto 55 o el compuesto 56... (Etc. hasta el compuesto 13), o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables de los mismos, constituye un aspecto individual adicional de la presente invención.
En el contexto de la presente invención, a menos que se haga referencia a los aminoácidos por su nombre completo (p. ej., alanina, arginina etc.), se designan por sus abreviaturas convencionales de tres letras y/o de una sola letra (p. ej., Ala o A para alanina, Arg o R para arginina etc.).
La expresión "conjugado peptídico" en el contexto de la presente invención se refiere a una molécula en la que está fijada (es decir, acoplada o unida) un primer resto peptídico bien directamente o mediante un resto químico de unión (es decir, un puente o un espacio), por medio de enlaces covalentes, a un segundo resto peptídico.
Los compuestos de la invención pueden llevar uno o más puentes lactama intramoleculares dentro de la secuencia peptídica. Cada uno de estos puentes indicados en la Tabla 2 (denominada por el prefijo "ciclo de la cadena lateral") se forma entre una cadena lateral que contiene un ácido carboxílico y otra cadena lateral que contiene una amina. Los dos residuos de aminoácidos habitualmente están separados por tres aminoácidos en la secuencia lineal.
En los conjugados peptídicos de la invención, la exendina-4 o Za pueden tener una identidad de al menos el 75 % con la exendina-4 nativa, por ejemplo de al menos el 80, 85, 90 o 95 %.
En los conjugados peptídicos de la invención, la gastrina o Ya pueden tener una identidad de al menos el 70 % con la gastrina nativa, por ejemplo de al menos e, 75, 80, 85, 90 o 95 %. En los conjugados peptídicos de la invención, el GLP-1 o Xa pueden tener una identidad de al menos el 85 % con el GLP-1 nativo, por ejemplo de al menos el 90 o 95 %.
En una realización, el polipéptido de la invención puede comprender la secuencia de aminoácidos indicada en una cualquiera de las SEC ID N° 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 , 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61 , 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71 , 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81 , 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91 , 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101 , 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111 , 112 y 113 o un fragmento/vahante funcional de las mismas que tenga una identidad de al menos aproximadamente el 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 97 %, 98 %, 99 %, 99,5 % con una o más de las secuencias citadas, o fragmentos/variantes funcionales de los mismos que tengan, como máximo, 20, 15, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, o 1 sustitución de aminoácidos en comparación con una o más de las secuencias citadas, con o sin la secuencia señal, con o sin sustitución de uno o más residuos de cisteína con otro residuo, tal como una serina, y segmentos contiguos de los mismos de al menos 2 aminoácidos de longitud.
En una realización, el polipéptido de la invención (i) comparte una identidad de secuencia de aminoácidos de al menos el 99 % con una cualquiera de las SEC ID N° 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 , 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 , 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 5152, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61 , 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71 , 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81 , 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91 , 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101 , 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 1 11 , 112 y 113, o con una porción de las mismas; o (ii) comprende al menos 31 , 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 , 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51 , 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 o 60 aminoácidos contiguos de una cualquiera de las SEQ ID NO: 1 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31 , 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41 , 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61 , 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71 , 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81 , 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91 , 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101 , 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111 , 112 y 113; o (iii) ambas cosas.
La expresión "sal farmacéuticamente aceptable" en el contexto de la presente invención (sal farmacéuticamente aceptable de un conjugado peptídico de la invención) pretende indicar una sal que no es dañina para un paciente o sujeto al que se administra la sal en cuestión. Puede ser adecuadamente una sal escogida entre, por ejemplo, sales de adición de ácido y sales básicas. Ejemplos de sales de adición de ácido incluyen las sales cloruro, las sales citrato y las sales acetato. Ejemplos de sales básicas en las que el catión se selecciona entre cationes de metales alcalinos, tales como iones sodio o potasio, cationes de metales alcalino-térreos, tales como iones calcio o magnesio, así como iones de amonio sustituidos, tales como iones del tipo N (R1)(R2)(R3)(R4), en los que R1, R2, R3, y R4 habitualmente designan de forma independiente hidrógeno, alquilo C1-6 opcionalmente sustituido o alquenilo C2-6 opcionalmente sustituido. Ejemplos de grupos alquilo C1-6 relevantes incluyen los grupos metilo, etilo, 1 -propilo y 2-propilo. Ejemplos de grupos alquenilo C2-6 de posible relevancia incluyen etenilo, 1-propenilo y 2-propenilo. Otros ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables se describen en "Remington's Pharmaceutical Sciences", 17th edition. Ed. Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, U.S.A., 1985 (y ediciones más recientes del mismo, en la Encyclopaedia of Pharmaceutical Technology, 3a edición, James Swarbrick (Ed.), Informa Healthcare USA (Inc.), NY, USA, 2007, y en J. Pharm. Sci. 66: 2 (1977).
El término "solvato" en el contexto de la presente invención se refiere a un complejo de estequiometría definida formada entre un soluto (in casu, un conjugado peptídico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la invención) y un disolvente. El disolvente a este respecto puede ser, por ejemplo, agua, etanol u otra especie orgánica habitualmente de peso molecular pequeño farmacéuticamente aceptable, tal como, entre otros, ácido acético o ácido láctico. Cuando el disolvente en cuestión es agua, dicho solvato normalmente se denomina hidrato.
Otro aspecto de la presente invención se refiere a un conjugado peptídico o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de acuerdo con la invención para su uso como medicamento. En un aspecto adicional, el medicamento en cuestión es un medicamento para usar en el tratamiento, en un sujeto que lo necesite, de una o más de las enfermedades o los trastornos siguientes y las afecciones asociadas: diabetes de tipo 1 , diabetes de tipo, pre-diabetes, síndrome de resistencia a la insulina, tolerancia alterada a la glucosa (IGT), estados patológicos asociados con niveles elevados de glucosa en sangre, hiperglucemia, hipertensión, dislipidemia aterogénica, arteriesclerosis (p. ej., aterosclerosis), cardiopatía coronaria, enfermedad de las arterias periféricas, ictus, enfermedad microvascular, enfermedad gástrica, síndrome metabólico, cáncer (p. ej., cáncer de colon), enfermedad intestinal inflamatoria (Ell) y síndrome del intestino irritable (Sil).
Otras enfermedades o trastornos de posible relevancia a este respecto incluyen obesidad, obesidad mórbida, inflamación relacionada con la obesidad, enfermedad de la vesícula biliar relacionada con la obesidad y apnea del sueño inducida con la obesidad.
En un aspecto adicional más, el medicamento en cuestión es un medicamento para usar en la inducción, en un sujeto que lo necesite, de neogénesis de los islotes pancreáticos (p. ej., estimulación de la formación de nuevas células ß- en los islotes del páncreas).
En un aspecto adicional más, el medicamento en cuestión es un medicamento para usar en la inducción, en un sujeto que lo necesite, de la supervivencia de las células ß- en los islotes del páncreas (p. ej., para prevenir la pérdida de células ß-en los islotes del páncreas).
En otro aspecto adicional más, el medicamento en cuestión es un medicamento para usar en la prevención, en un sujeto que lo necesite, de la apoptosis de las células ß en los islotes del páncreas (p. ej., para prevenir la pérdida de células ß- en los islotes del páncreas).
En un aspecto adicional, el medicamento en cuestión es un medicamento para usar en la reducción, en un sujeto que lo necesite, de los niveles de hemoglobina b1Ac (hemoglobina glicosilada, HbA1c) en sangre.
Un aspecto adicional de la invención se refiere al uso de un conjugado peptídico de la invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento, en un sujeto que lo necesite, de una o más de las siguientes afecciones, enfermedades o trastornos: diabetes de tipo 1 , diabetes de tipo, pre-diabetes, síndrome de resistencia a la insulina, tolerancia alterada a la glucosa (IGT), estados patológicos asociados con niveles elevados de glucosa en sangre, hiperglucemia, hipertensión, dislipidemia aterogénica, arteriosclerosis (p. ej., aterosclerosis), cardiopatia coronaria, enfermedad de las arterias periféricas, ictus, enfermedad microvascular, enfermedad gástrica, síndrome metabólico, cáncer (p. ej., cáncer de colon), enfermedad intestinal inflamatoria (Ell) y síndrome del intestino irritable (Sil).
Un conjugado peptídico de la invención puede además usarse en: la fabricación de un medicamento para inducir la neogénesis de los islotes pancreáticos en un sujeto que lo necesite; la fabricación de un medicamento para prevenir la apoptosis de las células ß en los islotes pancreáticos en un sujeto que lo necesite; o la fabricación de un medicamento para reducir los niveles de hemoglobina b1Ac (hemoglobina glicosilada; HbA1c) en la sangre de un sujeto que lo necesite; o Entre los aspectos adicionales relacionados de la invención están los correspondientes procedimientos de tratamiento de afecciones, enfermedades o trastornos entre los mencionados anteriormente. Por tanto, uno de estos aspectos adicionales de la invención se refiere a un procedimiento para el tratamiento, en un sujeto que lo necesite, de uno o más de las enfermedades o trastornos siguientes: diabetes de tipo 1 , diabetes de tipo, pre-diabetes, síndrome de resistencia a la insulina, tolerancia alterada a la glucosa (IGT), estados patológicos asociados con niveles elevados de glucosa en sangre, hiperglucemia, hipertensión, dislipidemia aterogénica, arteriesclerosis (p. ej., aterosclerosis), cardiopatía coronaria, enfermedad de las arterias periféricas, ictus, enfermedad microvascular, enfermedad gástrica, síndrome metabólico, cáncer (p. ej., cáncer de colon), enfermedad intestinal inflamatoria (Eli) y síndrome del intestino irritable (Sil), comprendiendo el procedimiento administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un conjugado peptídico o sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con la invención.
De nuevo, otras afecciones, enfermedades o trastornos de posible relevancia en el contexto de los procedimientos de tratamiento de acuerdo con la invención incluyen obesidad, obesidad mórbida, inflamación relacionada con la obesidad, enfermedad de la vesícula biliar relacionada con la obesidad y apnea del sueño inducida por obesidad.
Un aspecto adicional de la invención se refiere a un procedimiento para inducir neogénesis de los islotes pancreáticos en un sujeto que lo necesite, comprendiendo el procedimiento administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un conjugado peptídico o sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con la invención.
Un aspecto adicional de la invención se refiere a un procedimiento para estimula la supervivencia de las células ß en los islotes pancreáticos en un sujeto que lo necesite, comprendiendo el procedimiento administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un conjugado peptídico o sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con la invención.
Un aspecto adicional de la invención se refiere a un procedimiento para reducir o prevenir la apoptosis de las células ß en los islotes pancreáticos en un sujeto que lo necesite, comprendiendo el procedimiento administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un conjugado peptídico o sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con la invención.
Otro aspecto de la invención se refiere a un procedimiento para reducir los niveles de hemoglobina b1Ac (hemoglobina glicosilada; HbAlc) en la sangre de un sujeto que lo necesite, comprendiendo el procedimiento administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un conjugado peptídico o sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con la invención.
Otros aspectos adicionales más de la presente invención se refieren a los siguientes: un procedimiento de tratamiento en un sujeto que lo necesite de un estado patológico asociado con niveles elevados de glucosa en sangre; Un procedimiento para reducir los niveles de glucosa en sangre en un sujeto que lo necesite; Un procedimiento de estimulación de la liberación de insulina en un sujeto que lo necesite; Un procedimiento para regular el vaciado gástrico en un sujeto que lo necesite; y Un procedimiento para disminuir los niveles de lípidos en plasma en un sujeto que lo necesite; En cada uno de los procedimientos anteriores de la invención, el procedimiento comprende administrar al sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un conjugado peptídico o sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con la invención.
La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz", como se usa en el contexto de los procedimientos descritos anteriormente de tratamiento u otra intervención terapéutica de acuerdo con la invención se refiere a una cantidad que es suficiente para curar, mejorar, aliviar o detener parcialmente las manifestaciones clínicas de la enfermedad, trastorno o afección concreta que es objeto de tratamiento o de otra intervención terapéutica en cuestión. Una cantidad adecuada para conseguir esto se define como una cantidad terapéuticamente eficaz. La cantidad administrada y el procedimiento de administración se pueden adaptar para conseguir una eficacia óptima. Una cantidad eficaz para un fin dado dependerá, entre otros, de la gravedad de la enfermedad, trastorno o afección que es el objeto del tratamiento concreto u otra intervención terapéutica sobre el peso corporal y el estado general del sujeto en cuestión, sobre la dieta, sobre la posible medicación concurrente y sobre otros factores bien conocidos para los expertos en las técnicas médicas. La determinación de un tamaño de dosis y un régimen de dosificación adecuados más apropiados para la administración de un conjugado peptídico o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con la invención a un ser humano se puede guiar por los resultados obtenidos por la presente invención y se puede confirmar en ensayos clínicos diseñados adecuadamente. Una dosificación eficaz y el protocolo del tratamiento se pueden determinar por medios convencionales, comenzando con una dosis baja en animales de laboratorio y, después, incrementando la dosis al tiempo que se controlan los efectos, y variando sistemáticamente el régimen de dosificación también. Al determinar una dosificación óptima para un sujeto dado, el clínico puede tener en cuenta numerosos factores. Dichas consideraciones son bien conocidas por el experto.
Los términos "tratamiento" y sus variantes gramaticales (p. ej., "tratado", "que trata", "tratar") como se emplea en el presente contexto se refiere a un enfoque para obtener resultados clínicos beneficiosos o deseados. Para los fines de la presente invención, resultados clínicos beneficiosos o deseados incluyen, entre otros, alivio de los síntomas, disminución de la extensión de la enfermedad, estabilización de la enfermedad (es decir, que no empeora), retraso o ralentización de la progresión de la enfermedad, mejora o paliación del estado de la enfermedad y remisión (parcial o total), sea detectable o indetectable. "Tratamiento" también puede significar prolongar la supervivencia respecto al tiempo de supervivencia previsto si no está recibiendo tratamiento. "Tratamiento", en algunas realizaciones, puede ser una intervención realizada con la intención de prevenir el desarrollo, o alterar la patología, una afección, enfermedad o trastorno. De acuerdo con esto, "tratamiento" puede hacer referencia a la intervención terapéutica o a las medidas profilácticas o preventivas. Un sujeto (p. ej., un ser humano) que necesite tratamiento puede ser, por tanto, un sujeto que ya sufre la enfermedad o trastorno en cuestión, o un sujeto en el que hay que prevenir el trastorno. Por tanto, el término "tratamiento" incluye inhibición o reducción de un incremento de la gravedad de un estado patológico o de los síntomas (p. ej., ganancia de peso o hiperglucemia) respecto a la ausencia de tratamiento y no necesariamente implica el cese completo de la enfermedad, trastorno o afección relevante.
El término "agonista", como se usa en el contexto de la invención, se refiere a una sustancia (ligando) que activa el tipo de receptor en cuestión.
El término "agonista del receptor de GLP-1", como se usa en el contexto de la invención (en ocasiones denominado en otros lugares "agonista de GLP-1) se refiere a una sustancia (ligando) que activa el receptor de GLP-1 , tal como el receptor de GLP-1 humano. Las sustancias que activan el receptor de GLP-1 humano incluyen las hormonas peptídicas de GLP-1 nativo GLP-1 (7-37), GLP-1 (7-36) amida, oxintomodulina, exendina-3, exendina-4, glucagón, polipéptido inhibidor gástrico (GIP) y análogos peptídicos funcionales y derivados de los mismos.
El término "antagonista", como se usa en el contexto de la invención, se refiere a una sustancia (ligando) que bloquea, neutraliza o contrarresta el efecto de otra sustancia (ligando) que funciona como agonista frente al tipo de receptor en cuestión.
En el contexto de la invención, un sujeto que necesite el tratamiento concreto u otra intervención terapéutica a la que se hace referencia en relación con los diversos aspectos de la invención descritos anteriormente es, preferentemente, un mamífero y, más particularmente, es un ser humano.
Un aspecto adicional de la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende un conjugado peptídico, o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, de acuerdo con la invención, junto con un vehículo, excipiente o transportador farmacéuticamente aceptable.
Síntesis de conjugados peptídicos Los conjugados peptídicos de la invención pueden fabricarse mediante procedimientos sintéticos estándar, mediante el uso de sistemas de expresión recombinantes o mediante cualquier otro procedimiento adecuado. Por tanto, los conjugados se pueden sintetizar de varios modos, incluidos, por ejemplo, procedimientos que comprenden: (a) sintetizar el conjugado peptídico por medio de una metodología convencional de fase sólida o de fase líquida, bien escalonada o bien mediante ensamblaje de fragmentos, y aislar y purificar el producto conjugado peptídico final; (b) expresar un constructo de ácido nucleico que codifica el conjugado peptídico en una célula huésped y recuperar el producto de expresión del cultivo de la célula huésped; o (c) expresar in vitro sin células un constructo de ácido nucleico que codifica el conjugado peptídico y recuperar el producto de expresión; o mediante cualquier combinación de procedimientos de (a), (b) o (c) para obtener fragmentos del conjugado peptídico, ligando posteriormente los fragmentos para obtener el conjugado peptídico y recuperar el conjugado peptídico.
A menudo puede ser preferible sintetizar los conjugados de la invención por medio de síntesis peptídica en fase sólida o fase líquida. A este respecto, se puede hacer referencia al documento WO 98/11125 o, entre otros, Fields, G.B. y col., "Principies and Practice of Solid-Phase Peptide Synthesis"; en: Synthetic Peptides, Gregory A. Grant (ed.), Oxford University Press (2a edición, 2002) y los ejemplos de síntesis del presente documento.
Una o más de las cadenas laterales de aminoácidos en el compuesto de la invención se pueden conjugar además a un sustituyente lipófilo. El sustituyente lipófilo puede estar covalentemente unido a un átomo en la cadena lateral de aminoácidos o, como alternativa, puede estar conjugado a la cadena lateral de aminoácidos mediante un espaciador. El aminoácido puede formar parte del péptido Z o parte del péptido Y.
Sin desear quedar ligado a teoría alguna, se piensa que el sustituyente lipófilo se une a la albúmina en la circulación sanguínea, de modo que protege a los compuestos de la invención de la degradación enzimática que puede potenciar la semivida de los compuestos. El espaciador, cuando está presente, se usa para proporcionar un espacio entre el compuesto y el sustituyente lipófilo.
El sustituyente lipófilo puede estar unido a la cadena lateral de aminoácidos o al espaciador a través de un éster, un sulfoniléster, un tioéster, una amida o una sulfonamida. De acuerdo con esto, se entenderá que, preferentemente, el sustituyente lipófilo incluye un grupo acilo, un grupo sulfonilo, un átomo N, un átomo O o un átomo S que forma parte del éster, sulfoniléster, tioéster, amida o sulfonamida.
Preferentemente, un grupo acilo en el sustituyente lipófilo forma parte de una amida o éster con la cadena lateral de aminoácidos o el espaciador.
El sustituyente lipófilo puede incluir una cadena de hidratos de carbono que tiene de 4 a 30 átomos de C. Preferentemente tiene al menos 8 o 12 átomos de C y, preferentemente, tiene 24 átomos de C o menos, o 20 átomos de C o menos. La cadena de hidrocarburo puede ser lineal o ramificada y puede ser saturada o insaturada. Se entenderá que la cadena de hidrocarburo está, sustituida, preferentemente, con un resto que forma parte de la unión a la cadena lateral de aminoácidos o al espaciador, por ejemplo un grupo acilo, un grupo sulfonilo, un átomo de N, un átomo de O o un átomo de S. Más preferentemente, la cadena de hidrocarburo está sustituida con acilo y, en consecuencia, la cadena de hidrocarburo puede ser parte de un grupo alcanoílo, por ejemplo palmitoílo, caproílo, lauroílo, miristoílo o estearoílo.
En consecuencia, el sustituyente lipófilo puede tener la fórmula que se muestra a continuación: A puede ser, por ejemplo, un grupo acilo, un grupo sulfonilo, NH, N-alqu¡lo, un átomo de O o un átomo de S, preferentemente acilo. n es un número entero de 3 a 29, preferentemente al menos 7 o al menos 11 y, preferentemente 23 o menos, más preferentemente 19 o menos.
La cadena de hidrocarburo puede estar sustituida adicionalmente. Por ejemplo, además puede estar sustituido adicionalmente con hasta tres sustituyentes seleccionados de NH2, OH y COOH. Si la cadena de hidrocarburo está sustituido adicionalmente, preferentemente está sustituido adicionalmente con solo un sustituyente. Como alternativa o adicionalmente, la cadena de hidrocarburo puede incluir un cicloalcanos o heterocicloalcano, por ejemplo como se muestra a continuación: Preferentemente, el cicloalcanos o heterocicloalcano es un anillo de seis miembros. Más preferentemente, es piperidina.
Como alternativa, el sustituyente lipófilo puede estar basado en un esqueleto de ciclopentanofenantreno, que puede estar parcialmente o completamente insaturado, o saturado. Los átomos de carbono en el esqueleto pueden estar cada uno sustituido con Me u OH. Por ejemplo, el sustituyente lipófilo puede ser colilo, desoxicolilo o litocolilo.
Como se ha mencionado anteriormente, el sustituyente lipófilo puede estar conjugado con la cadena lateral de aminoácidos a través de un espaciador. Cuando está presente, el espaciador está unido al sustituyente lipófilo y a la cadena lateral de aminoácidos. El espaciador puede estar unido al sustituyente lipófilo y a la cadena lateral de aminoácidos de forma independiente a través de un éster, un sulfoniléster, un tioéster, una amida o una sulfonamida. De acuerdo con esto, puede incluir dos restos seleccionados de forma independiente de acilo, sulfonilo, un átomo de N, un átomo de O o un átomo de S. El espaciador puede tener la fórmula: En la que B y D se seleccionan cada uno de forma independiente de acilo, sulfonilo, NH, N-alquilo, un átomo de O o un átomo de S, preferentemente de acilo y NH. Preferentemente, n es un número entero de 1 a 10, preferentemente de 1 a 5. El espaciador puede estar sustituido adicionalmente con uno o más sustituyentes seleccionados de alquilo d-6, alquil Co-6-amina, alquil Co-6- idroxi y alquilo Co-6-carboxi.
Como alternativa, el espaciador puede tener dos o más unidades de repetición de la fórmula anterior. B, D y n se seleccionan cada uno de forma independiente para cada unidad de repetición. Las unidades de repetición adyacentes pueden estar unidas covalentemente entre sí a través de sus restos B y D respectivas. Por ejemplo, los restos B y D de las unidades de repetición adyacentes pueden, juntos, formar un éster, un sulfoniléster, un tioéster, una amida o una sulfonamida. Las unidades B y D libres en cada extremo del espaciador están unidas a la cadena lateral de aminoácidos y el sustituyente lipófilo como se ha descrito anteriormente.
Preferentemente, el espaciador tiene cinco o menos, cuatro o menos o tres o menos unidades de repetición. Más preferentemente, el espaciador tiene dos unidades de repetición o es una única unidad.
El espaciador (o una o más de las unidades de repetición del espaciador, si tiene unidades de repetición) puede ser, por ejemplo, un aminoácido natural o no natural. Se entenderá que para los aminoácidos que tienen cadenas laterales funcionarizadas, B y/o D pueden ser un resto dentro de la cadena lateral del aminoácido. El espaciador puede ser cualquier aminoácido natural o no natural. Por ejemplo, el espaciador (o una o más unidades de repetición del espaciador, si tiene unidades de repetición) puede ser Gly, Pro, Ala, Val, Leu, lie, Met, Cys, Phe, Tyr, Trp, His, Lys, Arg, Gln, Asn, a-Glu, ?-Glu, Asp, Ser, Thr, Gaba, Aib, ß-Ala, 5-aminopentanoílo, 6-aminohexanoílo, 7-aminoheptanoílo, 8-aminooctanoílo, 9-aminononanoílo o 10-aminodecanoílo.
Por ejemplo, el espaciador puede ser un único aminoácido seleccionado de y-Glu, Gaba, ß-Ala y a-Gly.
El sustituyente lipófilo puede estar conjugado con cualquier cadena lateral de aminoácidos en los compuestos de la invención. Preferentemente, la cadena lateral de aminoácidos incluye un grupo carboxi, hidroxi, tiol, amida o amina, para formar un éster, un sulfoniléster, un tioéster, una amida o una sulfonamida con el espaciador o el sustituyente lipófilo. Por ejemplo, el sustituyente lipófilo puede estar conjugado con Asn, Asp, Glu, Gln, His, Lys, Arg, Ser, Thr, Tyr, Trp, Cys o Dbu, Dpr u Orn. Preferentemente, el sustituyente lipófilo está conjugado con Lys o Cys. No obstante, cualquier aminoácido mostrado como Lys en las fórmulas proporcionadas en el presente documento pueden sustituirse con Dbu, Dpr u Orn cuando se añade un sustituyente lipófilo.
Un ejemplo de sustituyente lipófilo y un espaciador se muestra en la fórmula siguiente: Aquí, una Lys del compuesto de la presente invención (p. ej., de X) está unida covalentemente a ?-Glu (el espaciador) a través de un enlace amida. Un grupo palmitoílo está unido covalentemente al espaciador ?-Glu a través de un enlace amida.
Como alternativa o adicionalmente, una o más cadenas laterales de aminoácidos en el compuesto de la invención se pueden conjugar con un resto polimérico, por ejemplo con el fin de incrementar la solubilidad y/o la semivida un vivo (p. ej., en plasma) y/o la biodisponibilidad. Asimismo, se sabe que dicha modificación reduce el aclaramiento (p. ej., aclaramiento renal) de las proteínas y péptidos terapéuticos.
El resto polimérico es, preferentemente, hidrosoluble (anfifílico o hidrofílico), no tóxico y farmacéuticamente inerte. Los restos poliméricos adecuados incluyen polietilenglicol (PEG), homo o copolímeros de PEG, un polímero de PEG sustituido con monometilo (mPEG) o polioxietilenglicerol (POG). Véase el Ejemplo, Int. J. Hematology 68:1 (1998); Bioconjugate Chem. 6:150 (1995); y Crit. Rev. Therap. Drug Carrier Sys. 9:249 (1992).
Otros restos poliméricos adecuados incluyen poliaminoácidos tales como poli-lisina, poli-ácido aspártico y poli-ácido glutámico (véase, por ejemplo, Gombotz, et al. (1995), Bioconjugate Chem. , vol. 6 : 332-351 ; Hudecz, y col. (1992), Bioconjugate Chem. ,vol. 3, 49-57; Tsukada, y col., (1984), J. Nati. Cáncer Inst. , vol 73,: 721-729; y Pratesi, y col. (1985), Br. J. Cáncer, vol. 52: 841-848).
El resto polimérico puede ser lineal o ramificado. Puede tener un peso molecular de 500-40.000 Da, por ejemplo 500-10.000 Da, 1.000-10.000 Da, 10.000-20.000 Da o 20.000-40.000 Da.
Un compuesto puede comprender dos o más restos, en cuyo caso el peso molecular total de todos estos restos entrará, en general, dentro de los intervalos proporcionados anteriormente.
El resto polimérico puede estar acoplado (mediante enlace covalente) a un grupo amino, carboxilo o tiol de una cadena lateral de aminoácido. Ejemplos preferidos son el grupo tiol de residuos Cys y el grupo Epsilon-amino de residuos Lys y también se pueden usar los grupos carboxilo de los residuos Asp y Glu.
El lector experto conocerá técnicas adecuadas que se pueden usar para realizar la reacción de acoplamiento. Por ejemplo, un resto PEG que porta un grupo metoxi se puede acoplar a un grupo tiol de Cys mediante un enlace maleimido usando reactivos disponibles comercialmente en Nektar Therapeutics AL. Véase también el documento WO 2008/101017 y las referencias citadas para detalles de química adecuados.
Usos terapéuticos A continuación, se entenderá que la referencia al uso de un conjugado peptídico de la invención también abarca el uso de una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.
Los conjugados peptídicos de la invención pueden proporcionar una atractiva opción terapéutica para enfermedades o trastornos metabólicos, incluyendo diabetes, en concreto la diabetes de tipo 1 y/o de tipo 2, y, posiblemente, la obesidad.
La diabetes comprende un grupo de enfermedades metabólicas caracterizadas por hiperglucemia que resulta de defectos en la secreción de insulina, la acción de la insulina o ambos. Los signos agudos de diabetes incluyen un exceso de producción de orina, la resultante sed compensatoria y el incremento de la ingesta de fluidos, visión borrosa, inexplicada pérdida de peso, letargo y cambios en el metabolismo de la energía. La hiperglucemia crónica de la diabetes se asocia con complicaciones macro y microvasculares que pueden conducir a daños a largo plazo, disfunción y, en algunos casos, en última instancia, al fracaso de varios órganos, en particular los ojos (principalmente en forma de retinopatía diabética), los ríñones (en forma de nefropatía diabética), los nervios (en forma de neuropatía diabética), el corazón y los vasos sanguíneos La diabetes se puede subdividir en tres clases, v. diabetes de tipo 1 , diabetes de tipo 2 y diabetes gestacional, en base a las características patogenéticas.
La diabetes de tipo 1 representa el 5-10 % de todos los casos de diabetes y se debe a una destrucción autoinmunitaria de las células ß pancreáticas secretoras de insulina.
La diabetes de tipo 2 representa el 90-95 % de los casos de diabetes y es el resultado de un conjunto complejo de trastornos metabólicos. La diabetes de tipo 2 es la consecuencia de la producción de insulina endógena y/o la sensibilidad a la insulina del cuerpo entero que es insuficiente para mantener los niveles de glucosa en plasma por debajo de los umbrales diagnósticos.
La diabetes gestacional se refiere a cualquier grado de intolerancia a la glucosa identificado durante el embarazo.
También se reconoce una afección conocida como pre-diabetes. Incluye, por ejemplo, alteración de los niveles de glucosa en ayunas y alteración de la tolerancia a la glucosa, y se refiere, en general, a los estados que se producen cuando los niveles de glucosa en sangre son elevados, pero están por debajo de los niveles establecidos para el diagnóstico clínico de la diabetes.
Una gran proporción de sujetos con diabetes de tipo 2 y pre-diabetes presentan un riesgo mayor de morbididad y mortalidad debido a la elevada prevalencia de factores de riesgo metabólico adicionales, incluyendo obesidad abdominal (exceso de tejido graso alrededor de los órganos internos abdominales), dislipidemia aterogénica (trastornos de grasa en sangre, incluyendo niveles elevados de triglicéridos, niveles bajos de colesterol HDL y/o niveles altos de colesterol LDL, que estimulan la formación de placas en las paredes de las arterias), elevación de la presión arterial (hipertensión), un estado protrombótico (p. ej., niveles elevados del inhibidor 1 del activador de fibrinógeno o plasminógeno en sangre) y un estado proinflamatorio (p. ej., niveles elevados de la proteína C reactiva en sangre).
Por el contrario, la obesidad confiere un mayor riesgo de desarrollar, por ejemplo, pre-diabetes, diabetes de tipo 2, ciertos tipos de cáncer, apnea del sueño obstructiva y enfermedad de la vesícula biliar.
La dislipidemia se asocia con un mayor riesgo de enfermedad cardiovascular, Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) son de importancia clínica, ya que existe una correlación inversa entre las concentraciones de HDL en plasma y el riesgo de enfermedad aterosclerótica. La parte principal de colesterol almacenada en las placas ateroscleróticas se origina de las lipoproteínas de baja densidad (LDL) y, por tanto, las concentraciones elevadas de LDL se asocian estrechamente con la aterosclerosis. La proporción HDL/LDL es un parámetro usado en la evaluación del riesgo clínico de aterosclerosis y, en concreto, de la aterosclerosis coronaria.
Sin desear quedar ligados a teoría alguna, parece que los conjugados peptídicos de la invención pueden combinar, inesperadamente, los efectos fisiológicos de los agonistas del receptor de GLP-1 con los de los péptidos de gastrina véase anteriormente, de un modo tal que la actividad observada puede ser significativamente mayor que la observada cuando se emplea una correspondiente combinación aditiva (no conjugada) de los componentes peptídicos individuales. En consecuencia, se cree que los conjugados peptídicos de la invención pueden ser particularmente beneficiosos en el tratamiento de la pre-diabetes, la diabetes (principalmente la diabetes de tipo 1 y/o de tipo 2) y las afecciones, enfermedades o trastornos relacionados con la diabetes, tales como los tratados anteriormente, incluyendo el tratamiento para estimular la formación de células ß de los islotes pancreáticos (neogénesis de los islotes), y, de este modo, la producción de insulina, que será beneficiosa con respecto a la regulación de las concentraciones de glucosa en sangre. Por tanto, los conjugados peptídicos de la invención pueden ser valiosos para, entre otras cosas, limitar o detener la progresión de la enfermedad en la diabetes de tipo 1 y/o de tipo 2.
Los péptidos de la presente invención pueden ser útiles además para estimular la supervivencia e inhibir la apoptosis de las células ß en los islotes pancreáticos. Los efectos de GLP-1 y la gastrina incluyen efectos sobre la proliferación y maduración de las células ß, pero también en la prevención de la apoptosis de las de las células ß y la potenciación de la neogénesis, por tanto, los efectos de los péptidos de la invención pueden incluir dichos efectos y sus efectos sobre la mejor regulación de la insulina y la glucosa.
Por tanto, los conjugados peptídicos de la presente invención pueden ser útiles como agentes farmacéuticos para el tratamiento de la resistencia a la insulina, la intolerancia a la glucosa, pre-diabetes, niveles elevados de glucosa en ayunas, diabetes de tipo 1 y/o de tipo 2, hipertensión y/o dislipidemia (o una combinación de estos factores de riesgo metabólicos), aterosclerosis, arteriosclerosis, cardiopatía coronaria, enfermedad de las arterias periféricas e ictus. También pueden ser útiles en la prevención de la ganancia de peso, estimulación de la pérdida de peso, reducción del exceso de peso corporal y/o tratamiento de la obesidad (p. ej., mediante control del apetito, alimentación, ingesta de alimentos, ingesta de calorías y/o gasto de energía), incluyendo la obesidad mórbida, además de enfermedades, trastornos y estados de la salud asociados, incluyendo, entre otros, inflamación unida a la obesidad, enfermedad de la vejiga urinaria ligada a la obesidad y apnea del sueño ligada a la obesidad. Los efectos de los conjugados peptídicos de la invención sobre estas afecciones pueden estar mediados, totalmente o en parte, por un efecto sobre el peso corporal o pueden ser independientes del mismo.
Composiciones farmacéuticas A continuación, se entenderá que la referencia a la inclusión de uno o más conjugados peptídicos de la invención en una composición farmacéutica también abarca la inclusión de una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables de un conjugado peptídico de la invención.
Los conjugados peptídicos de la presente invención se pueden formular como composiciones farmacéuticas que son adecuadas para administrar con o sin conservación y que habitualmente comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un conjugados peptídico de la invención, junto con un transportador, excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable.
La expresión "vehículo farmacéuticamente aceptable" incluye cualquiera de los vehículos farmacéuticos estándar. Los vehículos farmacéuticamente aceptables para uso terapéutico son bien conocidos en la técnica farmacéutica y se describen, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, 17 edición, Alfonso R. Gennaro (Ed.), Mark Publishing Company, Easton, PA, USA, 1985. Por ejemplo, se puede usar solución salina estéril y solución salina tamponada con fosfato a pH ligeramente ácido o fisiológico.. Los agentes de tamponamiento de pH adecuados pueden ser fosfato, citrato, acetato, tris(hidroximetil)aminometano (TRIS), ácido N-Tris(hidroximetil)metil-3-aminopropanosulfónico (TAPS), bicarbonato amónico, dietanolamina, histidina, que es un tampón preferido, arginina, lisina o acetato (p. ej., acetato sódico) o mezclas de los mismos. El término abarca además cualquier agente transportador enumerado en la Farmacopea de EE.UU. para usar en animales, incluidos seres humanos.
Una composición farmacéutica de la invención puede estar en forma de dosificación unitaria. En dicha forma, la composición se divide en dosis unitarias que contienen cantidades adecuadas del componente o componentes activos. La forma de dosificación unitaria puede presentarse en una preparación empaquetada, en la que el paquete contiene cantidades pequeñas de la preparación, por ejemplo, comprimidos envasados, cápsulas o polvos en viales o ampollas. La forma de dosificación unitaria puede ser también, por ejemplo, una cápsula, gragea o comprimido, o puede ser el número adecuado de cualquiera de estas formas envasadas. También se puede proporcionar una forma de dosificación unitaria en forma inyectable de una única dosis, por ejemplo en forma de lápiz que contiene una composición de fase líquida (normalmente acuosa). Las composiciones pueden estar formuladas para cualquier vía y medio de administración adecuados. Vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables incluyen los usados en formulaciones adecuadas para, por ejemplo, administración oral, íntravítrea, rectal, vaginal, nasal, tópica, enteral o parenteral (incluidas subcutánea, intramuscular, intravenosa, intradérmica y transdérmica) o administración mediante inhalación. Las formulaciones pueden presentarse cómodamente en una forma de monodosis y pueden prepararse mediante cualquiera de los procedimientos bien conocidos en la técnica de la formulación farmacéutica.
Los modos de administración subcutánea o transdérmica pueden ser particularmente adecuados para los conjugados peptídicos de la invención.
Un aspecto adicional de la invención se refiere a dispositivos, formas de dosificación y envases usados para liberar las formulaciones farmacéuticas de la presente invención. Por tanto, al menos un conjugado peptídico o porción o variante especificada en las formulaciones o soluciones estables o conservadas descritas en el presente documento, se puede administrar a un paciente de acuerdo con la presente invención a través de diversos procedimientos de liberación, incluida la inyección SC o IM; transdérmica, pulmonar, transmucosa, implante, bomba osmótica, cartucho, microbomba u otros medios apreciados por el experto en la técnica, como es bien conocido en la técnica.
Uno aspecto adicional más de la invención se refiere a formulaciones y administración orales. Las formulaciones para uso oral pueden depender de la coadministración de adyuvantes (p. ej., resorcinoles y tensioactivos no iónicos tales como éter de polioxietilenoleílo y éter de n-hexadecilpolietileno) para aumentar artificialmente la permeabilidad de las paredes intestinales, así como la co-administración de inhibidores enzimáticos (p. ej., inhibidores de la tripsina pancreática, diisopropilfluorofosfato (DFF) y trasilol) para inhibir la degradación enzimática. El compuesto constituyente activo de la forma de dosificación de tipo sólido para administración oral se puede mezclar con al menos un aditivo, incluyendo sacarosa, lactosa, celulosa, manitol, trehalosa, rafinosa, maltitol, dextrano, almidones, agar, alginatos, quitinas, quitosanos, pectinas, goma tragacanto, goma arábica, gelatina, colágeno, caseína, albúmina, polímero sintético o semisintético y glicérido. Estas formas de dosificación también pueden contener otro(s) tipo(s) de aditivos, por ejemplo, agente de dilución activo, lubricante, tal como estearato de magnesio, paraben, agentes conservantes, tal como ácido sórbico, ácido ascórbico, alfa-tocoferol, antioxidantes tales como cisteína, disgregantes, aglutinantes, espesantes, agentes tampón, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes perfumantes etc.
Dosificaciones Una dosificación típica de un conjugado peptídico de la invención, como se usa en el contexto de la presente invención, puede estar en el intervalo de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal al día, tal como de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal al día, por ejemplo de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal al día, administrados en una o más dosis, tal como de una a tres dosis. Como ya se ha indicado en alguna medida anteriormente, la dosificación exacta empleada dependerá, entre otras cosas, de: La naturaleza y la gravedad de la enfermedad o trastorno que se va a tratar, el sexo, la edad, el peso corporal y el estado general del sujeto que se va a tratar; otras posibles enfermedades o trastornos concomitantes que están o van a estar en tratamiento; además de otros factores que conocerán un médico experto en la técnica.
Terapia de combinación Como se ha indicado anteriormente, se entenderá que la referencia a continuación a un conjugado peptídico de la invención también se extiende a una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, además de a una composición que comprende más de un conjugado peptídico diferente de la invención.
Un conjugado peptídico de la invención se puede administrar como parte de una terapia de combinación junto con otro agente activo para el tratamiento de la enfermedad o trastorno en cuestión, por ejemplo la diabetes, obesidad, síndrome metabólico, dislipidemía o hipertensión, y, en estos casos, los dos agentes activos se pueden administrar juntos o por separado, por ejemplo como constituyentes de la misma composición o formulación farmacéutica o como formulaciones separadas.
Por tanto, un conjugado peptídico de la invención se puede usar en combinación con un agente antidiabético de tipo conocido, incluidos, entre otros, metformina, una sulfonilurea, una glínida, un inhibidor de DPP-IV, una glitazona o insulina o un análogo de insulina. En una realización preferida, el conjugado peptídico de la invención se administra en combinación con insulina o un análogo de insulina, un inhibidor de DPP-IV, sulfonilurea o metformina, particularmente sulfonilurea o metformina, para alcanzar un control glucémico adecuado. En una realización más preferida, el conjugado peptídico se administra en combinación con insulina o un análogo de la insulina para alcanzar un control glucémico adecuado. Ejemplos de análogos de insulina adecuados incluyen, entre otros, Lantus™, Novorapid™, Humalog™, Novomix™, Actraphane HM™, HM Levemir™, Degludec™ y Apidra™. Otros agentes antidiabéticos relevantes a este respecto incluyen agonistas del receptor de GLP-1 , tales como exenatida (Byetta™; Exendina^) y liraglutida (Victoza™).
Un conjugado peptídico de la invención también se puede usar en combinación con un agente anti-obesidad de tipo conocido, incluidos, entre otros, el péptido YY o un análogo del mismo, el neuropéptido Y (NPY) o un análogo del mismo, un antagonista del receptor cannabinoide 1 , un inhibidor de la lipasa, un agonista del receptor 4 de la melanocortina o un antagonista del receptor 1 de la hormona de concentración de melanina.
Un conjugado peptídico de la invención puede además usarse en combinación con un agente anti-hipertensor de tipo conocido, incluidos, entre otros, un inhibidor de la enzima convertidora de la angiotensina (ECA), un bloqueante del receptor de la angiotensina II (arb), un diurético, un beta-bloqueante o un bloqueante de los canales de calcio.
Un conjugado peptídico de la invención puede también usarse en combinación con un agente anti-dislipidemia de tipo conocido, incluidos, entre otros, una estatina, un fibrato, una niacina y/o un inhibidor de la absorción de colesterol.
Un conjugado peptídico de la invención puede también usarse en combinación con un inhibidor de la bomba de protones (es decir, un agente farmacéutico que posee actividad farmacológica como un inhibidor de la W/K+-ATPasa de tipo conocido,, incluyendo, entre otros, un agente del tipo de derivados de bencimidazol o del tipo de derivados de imidazopiridina, tales como Omeprazol™, Lansoprazol™, Dexlansoprazol™, Esomeprazol™, Pantoprazol™, Rabeprazol™, Zolpidem™, Alpidem™, Saripidem™ o Necopidem™.
Un conjugado peptídico de la invención puede también usarse en combinación con un agente antiinflamatorio de tipo conocido, incluidos, entre otros: esteroides y corticosteroides, tales como beclometasona, metilpredinisolona, betametasona, prednisona, dexametasona e hidrocortisona; Agentes antiinflamatorios no esteroideos (AINE), tales como derivados de ácido propiónico (p. ej., alminoprofeno, benoxaprofeno, ácido buclóxico, carprofeno, fenbufeno, fenoprofeno, fluprofeno, flurbiprofeno, ibuprofeno, indoprofeno, ketoprofeno, miroprofeno, naproxeno, oxaprozina, pirprofeno, pranoprofeno, suprofeno, ácido tiaprofénico y tioxaprofeno); derivados de ácido acético (p. ej., indometacina, acemetacina, alclofenaco, clidanac, diclofenaco, fenclofenaco, ácido fenclózico, fentiazac, furofenac, ibufenac, isoxepac, oxpinac, sulindac, tiopinac, tolmetina, zidometacina y zomepirac); derivados de ácido fenámico (p.ej., ácido flufenámico, ácido meclofenámico, ácido mefenámico, ácido miflúmico y ácido tolfenámico); derivados de ácido bifenilcarboxílico (p.ej. diflunisal y flufenisal); oxicams (p.ej., isoxicam, piroxicam, sudoxicam y tenoxicam); salicilatos (p.ej., ácido acetilsalicílico y sulfasalazina); y pirazolonas (p.ej. apazona, bezpiperilona, feprazona, mofebutazona, oxifenbutazona y fenilbutazona); Inhibidores de la COX II, tales como rofecoxib y celecoxib; preparaciones de interferón beta (p. ej., interferón beta-1a o interferón beta-1b); y otros ciertos compuestos, tales como ácido 5-aminosalicílico y profármacos y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.
También se ha demostrado que la metformina tiene propiedades antiinflamatorias [véase, Haffner y col., Diabetes 54: 1566-1572 (2005)] y como tales también pueden ser útiles en el presente contexto.
Todas las publicaciones y solicitudes de patente citadas se incorporan en el presente documento por referencia en su totalidad.
Los ejemplos siguientes demuestran ciertas realizaciones específicas de la presente invención. Los ejemplos siguientes se llevaron a cabo usando técnicas estándar, que son bien conocidas y rutinarias para los expertos en la técnica, excepto donde se describa lo contrario en detalle. Debe entenderse que estos ejemplos son para fines ilustrativos únicamente y no deben interpretarse como completamente definitivos en lo que respecta a las condiciones o alcance de la invención. Como tales, de ningún modo deben interpretarse como limitantes del alcance de la presente invención.
EJEMPLOS Las abreviaturas empleadas en los ejemplos incluyen: NMP: N-metilpirrolidona DCM: diclorometano DMF: ?,?-dimetilformamida HATU: (hexafluorofosfato de 2-(7-aza-1 H-benzotriazol-1-il)-1 ,3,3-tetrametiluronio) DIPEA: diisopropiletilamina EtOH: etanol Et2Ü: éter dietílico Peg3: 8-amino-3,6-dioxaoctanoílo 8Aoc: 8-aminooctanoílo DBF: 4-(2-aminoetil)-6-dibenzofuranpropanoílo TFA: ácido trifluoroacético MeCN: acetonitrilo HPLC: cromatografía de líquidos de alto rendimiento.
EM: espectrometría de masas IB X: 3-isobutil-1-metilxantina BSA: seroalbúmina bovina AMPc: Adenosina monofosfato cíclica DMEM: Medio Eagle modificado de Dulbecco FCS: Suero bovino fetal HEPES: Ácido N-2-hidroxietilpiperazina-N'-etanosulfónico p-ERK: quinasa regulada extracelular fosforilada PBS: solución salina tamponada con fosfato.Boc: t-butoxicarbonilo NEP: N-metilpirrolidona Liraglutida: [Arg34,Lys(Hexadecanoil-isoGlu)26]GLP-1 (7-37) EJEMPLO 1 : Síntesis de compuestos y propiedades de los péptidos MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS A menos que se especifique lo contrario, los reactivos y disolventes empleados a continuación estaban disponibles comercialmente en reactivos de laboratorio estándar o de grado analítico y se usaron sin purificación adicional.
Procedimiento general para la síntesis de conjugados peptídicos de la invención La síntesis de péptidos en fase sólida se realizó en un sintetizador de péptidos GEM Liberty usando química Fmoc estándar. La resina TentaGel™ S Ram (1 g; 0,25 mmol/g) se hinchó en NMP (10 mi) antes de usar y se transfirió entre el tubo y el vaso de reacción usando DCM y NMP. En caso adecuado se usaron seudoprolinas, que son dipéptidos empleados para minimizar la agregación durante la síntesis peptídica, tales como Fmoc-Phe-Thr (?-Me, Me-Pro)-OH y Fmoc-Asp-Ser^-Me,Me-PiO)-OH, y se usaron los aminoácidos no naturales que forman los restos de adaptadores Peg3, 8Aoc y DBF (vide supra) como aminoácidos protegidos por Fmoc (es decir, Fmoc-Peg3-OH, Fmoc-8Aoc-OH y Fmoc-DBF-OH, respectivamente), y sin ningún cambio en el procedimiento general.
Acoplamiento: Se añadió un aminoácido Fmoc en NMP/D F/DCM (1 :1 :1 ; 0,2 M; 5 mi) a la resina en una unidad de microondas CEM Discover junto con HATU/NMP (0,5 M; 2 mi) y DIPEA/NMP (2,0 M; 1 mi). La mezcla de acoplamiento se calentó hasta 75 °C durante 5 minutos mientras se introdujeron burbujas a través de la mezcla. Después, la resina se lavó con NMP (4 x 10 mi).
Desprotección: A la resina se añadió piperidina/NMP (20 %; 10 mi) para desprotección inicial y la mezcla se calentó en microondas (40 °C; 30 s). El vaso de reacción se drenó y se añadió una segunda porción de piperidina/NMP (20 %; 10 mi) y se calentó (75 °C, 3 minutos) de nuevo. Después, la resina se lavó con NMP (6 x 10 mi).
Escisión: La resina se lavó con EtOH (3 x 10 mi) and Et2Ü (3 x 10 mi) y se secó hasta un peso constante a temperatura ambiente (TA). El péptido bruto se escindió de la resina mediante tratamiento con TFA/etanoditiol (95/5, 40 mi, 2 h; TA). La mayor parte del TFA se eliminó a presión reducida y el péptido bruto se precipitó y se lavó tres veces con Et20 y se secó hasta un peso constante a temperatura ambiente Purificación y caracterización: El péptido bruto se purificó hasta una pureza mayor del 90 % mediante HPLC preparativa de fase inversa usando una estación de trabajo PerSeptive Biosystems VISION Workstation equipada con una columna adecuada y un colector de fracciones, y se usó con un gradiente del tampón A (TFA al 0,1 %, ac.) y el tampón B (TFA al 0,1 %, MeCN ac. al 90 %).
Las fracciones se analizaron mediante HPLC analítica y EM, y las fracciones relevantes se combinaron y liofilizaron. El producto final se caracterizó mediante HPLC y EM.
Ejemplo de síntesis La Exendina-4(1-39)-Peg3-Peg3-[Gln1 ,Leu15] Gastrina17 (Compuesto 1) se sintetizó en un sintetizador CEM Liberty Peptide Synthesizer usando una resina TentaGel S Ram (0,67 g; 0,23 mmol/g) y química Fmoc como se ha descrito anteriormente. Se usaron ácido Fmoc-8-amino-3,6-dioxaoctanoico y pseudoprolinas Fmoc-Phe-Thr^-Me,MePro)-OH y Fmoc-Ser(tBu)-Ser^-Me,Me-Pro)-OH.
El péptido se escindió de la resina como se ha descrito anteriormente y la purificación se realizó en una columna Gemini-NX (5x25 cm; 10 pm; C18) con un flujo de 35 ml/min de una mezcla de tampón A (TFA al 0,1 %; ac.) y de tampón B (TFA al 0,1 %; MeCN al 90 % ac). El producto se eluyó con un gradiente lineal del 20 % al 50 % de tampón B durante 47 minutos y las fracciones (9 mi) se recogieron con un recolector de fracciones. Las fracciones relevantes se analizaron mediante HPLC analítico y EM, se combinaron y se liofilizaron, para dar un polvo blanco (122 mg), que se analizó mediante HPLC analítica con una pureza del 58 %.
El producto se purificó de nuevo en una columna LUNA (1 x 25 cm; 5 pm; C8) con un flujo de 4 ml/min de una mezcla de tampón A (TFA al 0,1 %; ac.) y de tampón B (TFA al 0,1 %; MeCN al 90 % ac). El producto se eluyó con un gradiente lineal del 20 % al 50 % de tampón B durante 47 minutos y las fracciones (2 mi) se recogieron con un recolector de fracciones. Las fracciones relevantes se analizaron mediante HPLC analítico y EM, se combinaron y se liofilizaron, para dar un polvo blanco (63 mg), que se analizó mediante HPLC analítica con una pureza del 82 %.
Otra porción del compuesto 1 se sintetizó usando la resina TentaGel S Ram (0,70 g; 0,23 mmol/g) y, por otro lado, las mismas condiciones que se han descrito anteriormente para síntesis y escisión.
La purificación se realizó en una columna Gemini-NX (5 x 25 cm; 10 pm; C18) con un flujo de 35 ml/min de una mezcla de tampón A (TFA al 0,1 %; ac.) y de tampón B (TFA al 0,1 %; MeCN al 90 % ac). El producto se eluyó con un gradiente lineal del 20 % al 50 % de tampón B durante 47 minutos y las fracciones (9 mi) se recogieron con un recolector de fracciones. Las fracciones relevantes se analizaron mediante HPLC analítico y EM, se combinaron y se liofilizaron, para dar un polvo blanco (113 mg), que se analizó mediante HPLC analítica con una pureza del 57 %.
El producto se purificó de nuevo en una columna LUNA (1 x 25 cm; 5 pm; C8) con un flujo de 4 ml/min de una mezcla de tampón A (TFA al 0,1 %; ac.) y de tampón B (TFA al 0,1 %; MeCN al 90 % ac). El producto se eluyó con un gradiente lineal del 20 % al 55 % de tampón B durante 47 minutos y las fracciones (2 mi) se recogieron con un recolector de fracciones. Las fracciones relevantes se analizaron mediante HPLC analítico y EM, se combinaron y se liofilizaron, para dar un polvo blanco (29 mg), que se analizó mediante HPLC analítica con una pureza del 77 %.
Los productos de la primera síntesis (63 mg; 82 %) y de la segunda síntesis (28 mg, 77 %) se combinaron y se purificaron una vez más en una columna Kromasil (1 x 25 cm; 10 pm; C8) con un flujo de 4 ml/min de una mezcla de tampón A (TFA al 0,1 %; ac.) y de tampón B (TFA al 0,1 %; MeCN al 90 % ac). El producto se eluyó con un gradiente lineal del 25 % al 65 % de tampón B durante 47 minutos y las fracciones (2 mi) se recogieron con un recolector de fracciones. Las fracciones relevantes se analizaron mediante HPLC analítico y EM, se combinaron y se liofilizaron, para dar un polvo blanco (33 mg), que se analizó mediante HPLC analítica con una pureza del 94 %. La masa fue 6553,39 Da, determinada mediante EM (Cale. 6553,06 Da).
La Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4] Gastrina6 (Compuesto 33) se sintetizó en un sintetizador CEM Liberty Peptide Synthesizer usando una resina TentaGel S Ram (0,55 g; 0,23 mmol/g) y química Fmoc como se ha descrito anteriormente. Se usaron ácido Fmoc-8-amino-3,6-dioxaoctanoico y pseudoprolina Fmoc-Phe-Thr(ljJ-Me,MePro)-OH.
El péptido se escindió de la resina como se ha descrito anteriormente y la purificación se realizó en una columna Gemini-NX (5x25 cm; 10 pm; C18) con un flujo de 35 ml/min de una mezcla de tampón A (TFA al 0,1 %; ac.) y de tampón B (TFA al 0,1 %; MeCN al 90 % ac). El producto se eluyó con un gradiente lineal del 25 % al 55 % de tampón B durante 47 minutos y las fracciones (9 mi) se recogieron con un recolector de fracciones. Las fracciones relevantes se analizaron mediante HPLC analítico y EM, se combinaron y se liofilizaron, para dar un polvo blanco (70 mg), que se analizó mediante HPLC analítica con una pureza del 90 %. La masa fue 4364,08 Da, determinada mediante EM (Cale. 4364,11 Da).
[Glu9,Leu14, Phe25,Tyr13]Exendina-4(1-27)-[Leu4]Gastrina6 (Compuesto 101) se sintetizó en un sintetizador CEM Liberty Peptide Synthesizer usando una resina TentaGel S Ram (1 ,15 g; 0,25 mmol/g) y química Fmoc como se ha descrito anteriormente usando Fmoc-Phe-Th^-Me,Me-Pro)-OH. Se usó NEP en lugar de NMP durante el acoplamiento y la desprotección.
El péptido se escindió de la resina como se ha descrito anteriormente y la purificación se realizó en una columna Gemini-NX (5x25 cm; 10 pm; C18) con un flujo de 35 ml/min de una mezcla de tampón A (TFA al 0,1 %; ac.) y de tampón B (TFA al 0,1 %; MeCN al 90 % ac). El producto se eluyó con un gradiente lineal del 20 % al 50 % de tampón B durante 47 minutos y las fracciones (9 mi) se recogieron con un recolector de fracciones. Las fracciones relevantes se analizaron mediante HPLC analítico y EM, se combinaron y se liofilizaron, para dar un polvo blanco (50 mg), que se analizó mediante HPLC analítica con una pureza del 85 %. La masa fue 3952.00,08 Da, determinada mediante EM (Cale. 3951 ,97 Da).
GLP-1 (7-36)-Peg3-Peg3-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17 (Compuesto 42) se sintetizó en un sintetizador CEM Liberty Peptide Synthesizer usando una resina TentaGel S Ram (1 ,16 g; 0,23 mmol/g) y química Fmoc como se ha descrito anteriormente. Se usaron ácido Fmoc-8-amino-3,6-dioxaoctanoico y pseudoprolina Fmoc-Ser(tBu)-Ser(Psi Me, Me pro)-OH .
El péptido se escindió de la resina como se ha descrito anteriormente y la purificación se realizó en una columna Gemini-NX (5x25 cm; 10 pm; C18) con un flujo de 35 ml/min de una mezcla de tampón A (TFA al 0,1 %; ac.) y de tampón B (TFA al 0,1 %; MeCN al 90 % ac). El producto se eluyó con un gradiente lineal del 25 % al 45 % de tampón B durante 47 minutos y las fracciones (9 mi) se recogieron con un recolector de fracciones. Las fracciones relevantes se analizaron mediante HPLC analítico y EM, se combinaron y se liofilizaron, para dar un polvo blanco (172 mg), que se analizó mediante HPLC analítica con una pureza del 86 %. La masa fue 5664,72 Da, determinada mediante EM (Cale. 5664,70 Da).
[Arg34,Lys(Hexadecanoil-isoGlu)26]GLP-1 (7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 (Compuesto 107) se sintetizó en un sintetizador CEM Liberty Peptide Synthesizer usando una resina TentaGel S Ram (1 ,30 g; 0,25 mmol/g) y química Fmoc como se ha descrito anteriormente. Se usó NEP en lugar de NMP durante el acoplamiento y la desprotección. Se usaron ácido Fmoc-8-amino-3,6-d¡oxaoctanoico y pseudoprolina Fmoc-Phe-Thr^-Me,MePro)-OH, además de Fmoc-Lys(Dde)-OH en el punto de fijación para la acilación.
El N-terminal del péptido unido a la fase sólida fue Boc protegido usando BOC2O (330 mg) y DIPEA (54 µ?) en DCM. Después, el grupo de protección Dde se escindió usando hidrazina hidrato/NEP (4 %; 2 x15 min) y la resina se lavó con NEP (8 x 2 min), DIEA/NEP (10 %; 5 x 5 min) y NEP (8 x 2 min). La síntesis se completó en un sintetizador CEM Liberty Peptide como se ha descrito anteriormente usando Fmoc-Glu-OtBu y ácido hexadecanoico. Se usó NEP en lugar de NMP durante el acoplamiento y la desprotección.
El péptido se escindió de la resina como se ha descrito anteriormente y la purificación se realizó en una columna Gemini-NX (5x25 cm; 10 pm; C18) con un flujo de 35 ml/min de una mezcla de tampón A (TFA al 0,1 %; ac.) y de tampón B (TFA al 0,1 %; MeCN al 90 % ac). El producto se eluyó con un gradiente lineal del 30 % al 70 % de tampón B durante 47 minutos y las fracciones (9 mi) se recogieron con un recolector de fracciones. Las fracciones relevantes se analizaron mediante HPLC analítico y EM, se combinaron y se liofilizaron, para dar un polvo blanco (60 mg), que se analizó mediante HPLC analítica con una pureza del 88 %. La masa fue 4819,95 Da, determinada mediante EM (Cale. 4819,45 Da).
EJEMPLO 2: Activación (CE50) del receptor de GLP-1 y del receptor CCK-B de gastrina in vitro por los conjugados peptídicos de la invención MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS Ensayo de eficacia del receptor del GLP-1 humano (GLP-1 R):_ Los efectos in vitro de los conjugados peptídicos de la invención se evaluaron midiendo la inducción de AMPc tras la estimulación del receptor por GLP-1 (7-36), Exendina-4(1-39) o se analizaron los conjugados de la invención usando el kit FlashPlate™ cAMP de Perkin-Elmer. En resumen, las células HEK293 que expresan el GLP-1 R humano (línea celular estable generada mediante transfección del ADNc par GLP-1 R y selección de clones estables) se sembraron a 40.000 células/pocilio en placas de microtitulación de 96 pocilios revestidos con 0,01 % de poli-L-lisina y se cultivaron durante 1 día en cultivo en 100 µ? de medio de crecimiento [DMEM, 10 % FCS, Penicilina (100 Ul/ml), estreptomicina (100 µ^???)]. El día del análisis, se retiró el medio de crecimiento y las células se lavaron una vez con 200 µ? de tampón Tyrode [sales de Tyrode (9,6 g/l), HEPES 10 mM, pH 7.4]. Las células se incubaron en 100 µ? de tampón Tyrode que contiene concentraciones crecientes de los compuestos de ensayo, IBMX 100 µ? y BSA al 0,1 % durante 15 minutos a 37 °C. La reacción se detuvo mediante la adición de 25 µ? de HCI 0,5M y se incubó en hielo durante 60 minutos. Para más detallas metodológicos, véase el documento WO 2008/152403.
Ensayo de eficacia del receptor de CCK-B (CCK-B R): Para analizar la unión y la activación de CCK-B R, los inventores produjeron líneas celulares estables que expresan uno de los receptores de CCK humanos o de ratón de un modo similar al de la producción de las líneas celulares de hGLP-1 R (véase anteriormente). En resumen, los inventores usaron células HEK293 para la transfección del ADNc para CCK-A R o CCK-B R humanos o de ratón [hCCK-A R (identidad génica: L19315), hCCK-B R (NM_176875), mCCK-AR (NM_009827) and mCCK-B R (NM_007627)] todos clonados en el plásmido de transfección plRESneo2dNGFR. Las células se cultivaron de acuerdo con el protocolo estándar en medio de crecimiento y se transfeccionaron con los plásmidos usando Lipofectamina (Invitrogen). Las células que expresaban de forma estable receptores de CCK se seleccionaron usando G418 en el medio de crecimiento (solo sobreviven las células que han captado e incorporado el plásmido de expresión de ADNc) y se propagan. Las reservas de células se congelaron para su uso posterior.
Los efectos in vitro de los conjugados peptídicos de la invención se estimaron midiendo p-ERK (usando el ensayo AlphaScreen™ SureFire p-ERK) en células HEK293 que expresan de forma estable el CCKB R humano y de ratón (receptor de alta afinidad de gastrina), respectivamente. Los ensayos de eficacia del receptor de la gastrina (ensayo AlphaScreen™ SureFire p-ERK) se realizaron del siguiente modo: Día 1. - Siembra de células Las células que expresan CCK-B R en cuestión se siembran a 20.000 células/pocilio en 100 µ? de medio de crecimiento [DMEM, 10 % de FCS, Penicilina (100 Ul/ml), estreptomicina (100 pg/ml)] en una placa de 96 pocilios revestidos con poli-D-lisina. Las células se incubaron en un incubador (37 1C, CO2 al 5 %) durante dos días.
Día 3:_Cambio a medio sin suero El medio de crecimiento se cambió a 80 µ? de medio sin suero [DMEM, penicilina (100 Ul/ml), estreptomicina (100 pg/ml)] por pocilio y la incubación de las células continuó durante 19 horas en el incubador (37 °C, CO2 al 5 %).
Día 4:_Estimulación del conjugado peptídico y ensayo AlphaScreen™ SureFire p-ERK L Tras 19 horas se añadieron 20 µ? de medio sin suero que contienen una de 5 concentraciones diferentes del conjugado peptídico (por triplicado para cada concentración) y las células se incubaron durante 5 minutos a temperatura ambiente. 2. El medio de estimulación se desechó poniendo rápidamente la placa boca abajo y se añadieron 60 µ? 1x de tampón de lisis (del kit de ensayo SureFire) por pocilio. 3. La placa se agitó en un agitador de placas durante 5 minutos y después se colocó en hielo. 4. Ensayo SureFire P-ERK : 4 µ? de cada sobrenadante se transfirieron a una placa de 384 pocilios (Perkin Elmer). 5. A las proxiplacas por duplicado se añadieron 4 µ? de cada uno de los dos lisados control (sin estimular y estimulados). 6. Se mezclaron 60 partes del tampón de reacción, 10 partes del tampón de activación, 1 parte de perlas aceptaras y 1 parte de esferas donantes (tampón de reacción + tampón de activación + esferas). En la proxiplaca se añadieron 7 µ? del último tampón de reacción + tampón de activación + esferas, resuspendiéndose la mezcla cuidadosamente antes de la adición a los pocilios. 7. La placa se incubó durante 2 horas en una caja oscura en un incubador a 22 °C. 8. La placa se analizó en un lector de placas de emisión de luz Envision™ (Perkin-Elmer) usando el programa de lectura adecuado (Perkin-Elmer).
Los conjugados peptídicos de la invención se analizaron en los ensayos descritos anteriormente (es decir, eficacia de la activación del GLP-1 R humano, eficacia de la activación de CCK-B R humano y eficacia de la activación de CCK-B R de ratón).
Se usaron GLP-1 (7-36) y Exendina-4(1-39) humanos como controles positivos en el ensayo de eficacia de la activación del receptor de GLP-1 (hGLP-1 R) y se usaron h[Gln1 ,Leu15]Gastrina17 y CCK-8 (que consiste en los 8 residuos de aminoácidos en C-terminal de CCK) como controles positivos en el ensayo de eficacia del receptor de CCK-B humano y el receptor de CCK-B de ratón (mCCK-B R).
En el presente estudio de activación del receptor de CCK se usó h[Gln1 ,Leu15]Gastrina17 (que tiene la secuencia HQGPWLEEEEEAYGWLDF-NH2) como compuesto control. El residuo de glutamina (GIn) puede reorganizarse en cierta medida a PyroGlu, pero sin pérdida de la actividad de unión al receptor.
Los resultados (valores de CE5o en mol/I) se resumen en las Tablas 1 , 1a y 2, más adelante.
Tabla 1. Eficacia in vitro (CE50 en mol/I) de los compuestos (conjugados peptídicos) de la invención en activación de hGLP-1 R, hCCK-B R y mCCK-B R.
Tabla 1a. Eficacia in vitro (CE50 en mol/1) de los compuestos (conjugados Tabla 2. Eficacia in vitro (CE5o en mol/I) de otros compuestos (conjugados peptídicos) de la invención en activación de hGLP-1 R y hCCK-B R.
Tabla 3. Eficacia in vitro (CE50 en mol/l) de los compuestos de GLP-1 (conjugados peptídicos) de la invención en activación de hGLP-1 R, hCCK-B R.
N.A.: No analizado Resultados Los resultados resumidos en las Tablas 1 , 1a, 2 y 3 anteriores indican que, en general, todos los conjugados peptídicos de la invención son potentes agonistas de los tres receptores en cuestión, y que exhiben niveles estrechamente similares de eficacia.
Ejemplo 3: Detección selectiva del Compuesto 73 sobre 92 GPCR peptídicos seleccionados.
El compuesto 73 se seleccionó para analizar en una gran selección de receptores peptídicos del tipo GPCR, con el fin de descubrir cualquier promiscuidad del receptor. Los receptores son de las familias del GPCR de clase A y B y el ensayo se llevó a cabo en Millipore usando su plataforma de detección selectiva de GPCR. Cada GPCR se activó mediante su ligando peptídico control (activador conocido de los respectivos receptores) o mediante el Compuesto 73 a una concentración de 100 nM. El agonismo sobre un receptor se proporciona como el % del péptido control (lo que da una activación del 100 % por definición). Solo el receptor previsto de GLP-1 y el receptor de CCKB (CCK2) se activaron significativamente (100 y 95 %, respectivamente) mediante el compuesto 73, lo que muestra que el péptido es específico para estos dos receptores.
Ejemplo 4: Farmacocinética (FC) de los compuestos 1 y 33 en ratones Procedimiento Se administró a tres ratones C57BI 100 nmol del compuesto 1 o 33 por kg como bolo i.v. o s.c. y se recogieron muestras de plasma hasta 240 minutos después de la dosis. Las muestras se recogieron de tres ratones en cada punto de tiempo. Se analizaron las muestras de plasma para determinar la presencia del compuesto 33 usando CUEM/EM (10 - 1000 nM).
Resultados Tabla 4. Parámetros FC tras la administración i.v. y s.c. de 100 nmol/kg en ratones Ambos compuestos exhibieron una biodisponibilidad (F) excelente tras la administración s.c, mostrando el compuesto 33 un perfil FC superior probablemente debido a que su semivida es más larga (Figura 1A, 1 B y Tabla 4).
EJEMPLO 5: FC DE LOS COMPUESTOS 33 Y 74-80 Procedimiento Se administró a ratones C57BI una única dosis subcutánea de 100 nmol/kg de cada péptido. Las muestras de sangre se tomaron tras 5 y 30 minutos, y tras 1 , 2, 4, 6, 16 y 24 horas. En cada punto de tiempo se tomaron muestras de dos ratones. Las muestras de plasma se analizaron tras extracción en fase sólida (SPE) mediante espectrometría de masas con cromatografía de líquidos (CL-EM/EM).
Tabla 5. T1/2tras la administración s.c. de 100 nmol /kg a los ratones Los péptidos muestran prometedores perfiles de T , siendo los compuestos 74 y 77 superiores al resto con respecto a la semivida y la exposición (Tabla 5 y Figura 2).
EJEMPLO 6: Actividad in vivo de los conjugados peptídicos de la invención en ratones db/db MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS El modelo con ratones db/db se ha usado anteriormente para evaluar los efectos conservantes de células ß de los posibles candidatos terapéuticos [Rolin, B. y col, Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 283: E745-E752 (2002)]. En varios estudios se ha demostrado una correlación entre el contenido de insulina pancreática y la masa de células ß [Rolin, B. y col. (loc.cit.); Suarez- Pinzón, W.L. y col., Diabetes 54: 2596-2601 (2005); Suarez-Pinzon W.L. y col., Diabetes 57: 3281-3288 (2008)].
En el presente estudio, se aclimató a ratones hembra de 6 semanas de edad db/db (BKS.Cg-m +/+ Lep^/J) (Taconic Europe A/S, Lille Skensved, Dinamarca) a su nuevo ambiente y se les proporcionó acceso libre al pienso normal y al agua. Los ratones se estabularon por parejas en un cuarto de humedad, luz y temperatura controlados. Se vigiló la progresión de la diabetes durante 2 semanas monitorizando os niveles de glucosa en sangre y, después, antes del tratamiento, se aleatorios a los ratones diabéticos de acuerdo con sus niveles de glucosa en sangre a los grupos de tratamiento (n = 10/grupo). Después, se simuló la inyección subcutánea (s.c.) en los animales con 100 µ? de vehículo (una vez al día) durante un periodo de tres días para aclimatar los animales a la manipulación y las inyecciones. Tras la aleatorizacion y la inyección simulada, se trató a los animales (s.c, dos veces al día) durante 16 días con combinaciones de h[Leu 5]Gastrina17 (1 , 10 y 50 nmol/kg) y Exendina-4(1-39) (1 , 10 y 50 nmol/kg), o con el compuesto 1 (conjugado peptídico de la invención) [es decir, Exendina-4(1-39)-Peg3-Peg3[Gln1 ,Leu15] Gastrina17] (1 , 10 y 50 nmol/kg), o con vehículo (tampón PBS; volumen de la inyección 5 ml/kg). Las inyecciones diarias se realizaron entre las 8 y las 9 de la mañana y entre las 15:00 y las 16:00, preparándose las soluciones frescas inmediatamente antes de la dosis.
Las muestras de sangre (200 µ?) se obtuvieron del plexo orbital y se introdujeron en tubos revestidos con EDTA antes de la dosis (día 1) y el día 8 y el día 16 del tratamiento. Cada muestra de sangre se centrifugó y el plasma (100 µ?) se almacenó a -80 °C durante el análisis posterior. Las muestras de sangre para las determinaciones de glucosa en sangre se tomaron de la vena de la cola. Después del último día de la dosis se sacrificó a todos los animales (día 16) mediante anestesia con CO2, seguida de dislocación cervical. Inmediatamente se aisló el páncreas de cada animal, se pesó y se almacenó para el posterior análisis del contenido en insulina.
Mediciones Se determinó la concentración de glucosa en sangre entera (mM) mediante el procedimiento de la glucosa oxidasa inmovilizada (Elite Autoanalyser, Bayer, Dinamarca). El péptido C en plasma se determinó usando un kit de radioinmunoensayo del péptido C en ratas (Linco/Millipore, kit RCP-21 K). El contenido en insulina pancreática se determinó usando un kit de radioinmunoensayo de insulina en ratas (Linco/Millipore, kit R1 -13).
Resultados Como queda claramente evidente en la Figura 3, se observó un contenido marcadamente mayor de insulina pancreática en animales tratados con el conjugado peptídico de la invención (compuesto 1) en comparación con el observado en animales tratados con una simple combinación de Exendina-4(1-39) and h[Leu15]Gastrina17 o tratados con vehículo.
Por tanto, parece que el efecto de los niveles de insulina pancreática que surgen como resultado del acoplamiento o unión covalente (conjugación) del resto Exendina 4 y el resto gastrina en el conjugado peptídico de la invención puede ser inesperadamente mayor que el conseguido cuando se emplea una correspondiente combinación aditiva de los dos componentes peptídicos individuales.
Ejemplo 7: Estudio de seis semanas Protocolo Se obtuvieron 125 ratones db/db (BKS.Cg-m +/+ Lep^/J) hembra (de 6 semanas cuando llegaron) de Taconic Europe A/S.
El día -4 se recogió sangre de animales en semi-ayunas para determinar los niveles de péptido C en plasma, de insulina en plasma, de glucosa en sangre y de HbA1c. Después, los animales se clasificaron en 5 grupos de tratamiento de n= 20 en base a los niveles de de péptido C y de HbA1c en plasma. Se inyectó en los animales por vía s.c. 100 µ? de vehículo dos veces al día durante al menos 3 días para aclimatar a los animales a la manipulación y los procedimientos experimentales.
Después, se inyectó en los animales por vía s.c. dos veces al día péptidos o vehículo durante un total de 42 días de acuerdo con la Tabla 6. Las inyecciones diarias se realizaron entre las 8 y las 9 de la mañana y entre las 15:00 y las 16:00 con soluciones recién preparadas. El último día de la dosis fue el día 42 por la mañana.
Tabla 6. Grupos y dosis El estudio finalizó el día 42. Los animales estaban en semi-ayunas y recibieron la última dosis por la mañana. Se obtuvieron muestras de sangre para determinar los niveles de péptido C en plasma, de insulina en plasma, de glucosa en sangre y de HbA1c. Después de obtener las muestras de sangre se sacrificó a los animales usando C02, seguido de dislocación cervical. Se aisló el páncreas, se pesó, se dividió en 3 trozos y se transfirió a tubos con 2 mi de alcohol acídico frío y se analizó en contenido en insulina.
El compuesto 33 disminuyó los niveles de glucosa en sangre (Figura 4) y elevó las concentraciones de insulina en plasma respecto al vehículo en los ratones db/db (Figura 5). Además, el tratamiento con el compuesto 33 produjo una reducción estadísticamente significativa de los niveles de HbA1c en comparación con los animales tratados con vehículo y los tratados con Gastina 7+Exendina-4 (Figura 6). Estos resultados sugieren que el Compuesto 33 mejoraba el control glucémico en los ratones diabéticos.
Asimismo, el compuesto 22 produjo un incremento estadísticamente significativo del contenido en insulina en el páncreas respecto al vehículo (Figura 7). Además, tanto el compuesto 22 como la exendina-4 produjeron un incremento significativo de los niveles del péptido C delta en plasma, lo que indica una mejora de la función pancreática en todos los grupos (Figura 8).
La coadministración de exendina-4 y gastrina no fue superior a la exendina-4 en lo que respecta a la mejora del control glucémico en ratones db/db. Por tanto, a las dosis usadas en este estudio no se observó ningún efecto sinérgico de la exendina-4 y la gastrina sobre la glucemia.
Los datos de los inventores muestran que el conjugado peptídico, Compuesto 22, aumenta el contenido en insulina pancreática y mejora el control glucémico en los ratones db/db significativamente, como evidencia la disminución del nivel de HbA1c Ejemplo 8: Estudio de descanso del fármaco Protocolo Se obtuvieron ratones macho db/db de 5-6 semanas de edad. Los animales se estabularon (5 ratones/jaula) en condiciones controladas (20-22 °C, humedad del 55-85 %) tras un ciclo de 12:12 horas de luz/oscuridad con luz a las 5 de la mañana. Se ofreció a loas animales comida a voluntad con dieta Altromin No. 1324 estándar y tenían acceso libre a agua corriente acidificada. En el momento del estudio los animales tenían de 8-9 semanas de edad. Todos los animales se aclimataron y manipularon al día como mínimo una semana antes del experimento.
Muestras de sangre: Antes de iniciar el tratamiento y el día 93 (antes de terminarlo) en ratones en ayunas (17 horas) se obtuvo una muestra de sangre (150 µ?) del plexo orbital con una micropipeta revestida con EDTA. Las muestras de sangre se introdujeron en tubos revestidos con EDTA y se mantuvieron en hielo. La muestra de sangre se centrifugó y el plasma resultante (al menos 50 µ?) se almacenó (a -80 °C) para el análisis posterior del péptido C y el nivel de insulina.Asimismo, el día -10/12 (antes de iniciar el tratamiento) el día 93 (antes de terminarlo) la muestra de sangre (50 µ?) obtenida del plexo orbital se analizó para BG (tiras) y HbA1c.
Estratificación Los días -6 a -4 antes de la primera dosis del fármaco, los animales en ayunas (17 h) se sometieron a una prueba de tolerancia oral a la glucosa (OGTT, véase más adelante). El área bajo la curva de concentración de glucosa en sangre en un periodo de 240 minutos (AUCo-24o', unidad: mM*min) se usó para estratificar a los animales en 5 grupos (A-E) de 26 animales cada uno con el fin de obtener tolerancias similares a la glucosa en ambos grupos- Tras los primeros 50 días de dosificación (periodo 1) se realizó un segundo OGTT- En base a esta segunda prueba de OGTT, cada grupo de ratones se estratificó mediante la AUC (como se ha indicado anteriormente) en do subgrupos que muestran similares tolerancias a la glucosa.
Dosificación: Los animales recibieron una dosis subcutánea (SC) una vez al día de vehículo (2 * n=26), Exendina4 (n=26) o Compuesto 33 (n= 26) y se administró la dosis de acuerdo con la Tabla 6 durante un periodo de 50 días. La dosificación se realizó entre las 14:00 y las 15:00 todos los días, con un volumen de inyección de 5 ml/kg. Tras 50 días de dosificación, se estratificó a los animales a 7 grupos, como se ilustra en la Tabla 1. Este régimen de dosificación continuó durante 40 días hasta que se sacrificó a los animales el día 93.
Ensayo de la tolerancia a la glucosa oral (OGTT): El OGTT se realizó los días -6/4, 50, 65, 78 y 91 del periodo de tratamiento en animales en ayunas desde la noche anterior (17 horas) tras la última inyección de vehículo o compuesto. Las muestras de sangre se tomaron de la punta de la cola y se midió la glucosa en sangre. Para evitar la ingesta de alimentos que puede confundir, se mantuvo a los animales en ayunas dura te los OGTT. Inmediatamente después de la muestra de sangre inicial (t = 0, nivel de glucosa en sangre en ayunas), se administró una dosis oral (1 g/kg) de glucosa (glucosa monohidrato, SAD 500 g/l) disueltos en agua MQ (5 ml/kg, 0,2 g/ml) y los animales fueron devueltos a sus jaulas (t= 0)). Los niveles de BGT se midieron a t = 15, 30, 60, 120, y 240 minutos.
Glucosa en sangre en ayunas Para monitorizar adicionalmente el estado diabético de los animales se midieron los niveles de glucosa en sangre en ayunas tras 8 horas de ayunas los días 0, 37, 44, 58, 72, y 85. Para minimizar el estrés, los animales se mantuvieron en ayunas durante el día (desde las 6 de la mañana cuando el consumo habitual de alimentos era bajo) y se determine la glucosa en sangre en ayunas a las 2:00 PM.
Tabla 6. Grupos estudio Vehículo: PBS: solución salina tamponada con fosfato Gibco (#70011 , pH=7.4). El agonista doble de GLP-1-Gastrina Compuesto 33 disminuyó el área bajo la curva de la glucosa (AUNC) tras una prueba de exposición oral a la glucosa y también se redujo la glucosa en sangre en ayunas en comparación con el vehículo control con independencia de si el paradigma del tratamiento era la prevención, e I tratamiento o el descanso (Figura 9 +10). Asimismo, los niveles en plasma de insulina y péptido C y los niveles en sangre de HbA1c fueron significativamente menores en los ratones tratados con el Compuesto 33 en comparación con los tratados con vehículo control (Figura 1). Estos datos muestran que el compuesto 33 mejora el control glucémico en ratones diabéticos db/db y en mayor medida que la exendina-4 y la liraglutida. Notablemente, el efecto de los compuestos sobre el control glucémico se mantuvo durante varios días después de finalizado el tratamiento, más pronunciado en los ratones tratados con el compuesto 33.

Claims (49)

REIVINDICACIONES
1. Un conjugado peptídico que tiene la fórmula I R1 - Z - L - Y - R2 (I) caracterizado porque R1 es H, alquilo C , acetilo, formilo, benzoílo o trifluoroacetilo; R2 es OH o NH2; Z comprende la secuencia de la exendina-4 (1-39) que tiene la secuencia His - Gly - Glu - Gly - Thr - Phe - Thr - Ser - Asp - Leu - Ser - Lys - Gln - Met - Glu - Glu - Glu - Ala - Val - Arg - Leu - Phe - He - Glu - Trp -Leu -Lys - Asn - Gly - Gly - Pro - Ser - Ser - Gly - Ala - Pro - Pro - Pro - Ser o un análogo del mismo Za; L es un resto de adaptador opcional; y Y comprende la secuencia de gastrina 7 que tiene la secuencia Gln-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Y15-Asp-Phe en la que Y15 se selecciona de Leu, Nle, Phe y Thr o un análogo del mismo Ya.
2. El conjugado peptídico de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque (i) Za tiene sustituciones en hasta 10 posiciones y/o comprende un truncamiento en C-terminal de 1 a 12 aminoácidos, con respecto a la secuencia de la exendina- 4; y/o (ii) Ya tiene sustituciones en hasta 5 posiciones con respecto a la secuencia de la gastrina 17 y/o comprende un truncamiento en N-terminal de 1 aminoácidos, con respecto a la secuencia de la gastrina 17.
3. El conjugado peptídico de conformidad con la reivindicación 1 o 2, caracterizado porque Za es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Ha His-Z2-Z3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser -Z9-Z10-Z11 -Z12 -Z13 -Z14 -Glu -Z16 -Z17-Z18 -Z19 - Z20 -Z21 -Z22 -Z23 -Z24 -Z25 -Z26 -Z27 -Z28 -Z29 -Z30 -Z31 -Z32 -Z33 -Z34 -Z35 - Z36 -Z37 -Z38 -Z39 (lia) en la que Z2 se selecciona de Gly, Ala, Ser, Aib, Thr, Leu e lie; Z3 se selecciona de Glu y Asp; Z9 se selecciona de Asp y Glu; Z10 se selecciona de Leu, Val, He y Ala; Z11 se selecciona de Ser y Aib; Z12 se selecciona de Ser, Gln, Arg, Cys, Lys, Glu y Orn; Z13 se selecciona de Arg, Ser, Gln, Tyr y Glu; Z14 se selecciona de Gly, Cys, Phe, Tyr, Trp, Lys, Met, Leu, NIe e lie; Z16 se selecciona de Asp, Gly, Aib, Glu, Lys y Cys; Z17 se selecciona de Glu, Cys, Lys, Ser y Gln; Z18 se selecciona de Ala y Aib; Z19 se selecciona de Val, Leu, He y Ala; Z20 se selecciona de Arg, Lys, Cys, Orn y Glu; Z21 se selecciona de Leu y Glu; Z22 se selecciona de Phe y Ala; Z23 se selecciona de lie y Leu; Z24 se selecciona de Glu, Cys, Lys, Ala y Arg; Z25 se selecciona de Trp, Cys, Lys y Phe; Z26 se selecciona de Leu e lie; Z27 se selecciona de lie, Val, GIn, Lys, Cys, Arg y Orn; Z28 se selecciona de Asn, Ser, Asp, Aib, GIn, Lys, Cys, Arg, Tyr, bAla, Glu, Orn y Leu o está ausente; Z29 se selecciona de Gly, Aib y bAla o está ausente; Z30 se selecciona de Gly, Cys, Lys y Arg o está ausente; Z31 se selecciona de Pro, Ser y Asp o está ausente; Z32 se selecciona de Ser y Lys o está ausente; Z33 es Ser o está ausente; Z34 se selecciona de Gly y Lys o está ausente; Z35 es Ala o está ausente; Z36 es Pro o está ausente; Z37 es Pro o está ausente; Z38 es Pro o está ausente; Z39 es Ser o está ausente; L es una secuencia peptídica que tiene la fórmula llb L1-L2-L3-L4 (llb) en la que L1 se selecciona de Ser, Ala, Lys, Orn, bAla, 8Aoc, DBF, Peg3, Cys y GIn o está ausente; L2 se selecciona de Ser, Ala, Lys, Orn, bAla, 8Aoc, DBF, Peg3, Cys y GIn o está ausente; L3 se selecciona de Ser, Ala, Lys, Orn, bAla, 8Aoc, DBF, Peg3, Cys y GIn o está ausente; L4 se selecciona de Ser, Ala, Lys, Orn, bAla, 8Aoc, DBF, Peg3, Cys y GIn o está ausente; Ya es una secuencia peptídica que tiene la fórmula lie Y1 -Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y11 -Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Y17 (I le) en la que Y1 es GIn o está ausente; Y2 es Gly o está ausente; Y3 es Pro o está ausente; Y4 es Trp o está ausente; Y5 es Leu o está ausente; Y6 es Glu o está ausente; Y7 es Glu o está ausente; Y8 es Glu o está ausente; Y9 es Glu o está ausente; Y10 es Glu o está ausente; Y11 es Ala o está ausente; Y 2 se selecciona de Ala y Tyr o está ausente; Y13 se selecciona de Gly y Ala o está ausente; Y14 se selecciona de Trp, Phe, 1Nal y Met; Y15 se selecciona de Leu, Nle, Phe y Thr; y Y17 se selecciona de Phe y 3-(3-Piridil)-alanina.
4. El conjugado peptídico de conformidad con una cualquiera de las reivindicaciones 1 -3, caracterizado porque Za es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Ha His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Leu-Ser-Z12-Z13-Z14-Glu-Z16-Glu-Ala-Val-Z20- Leu-Phe-lle-Z24-Z25-Leu-Z27-Z28 (Illa) en la que Z9 se selecciona de Asp y Glu; Z12 se selecciona de Lys, Arg y Orn; Z13 se selecciona de GIn y Tyr; Z14 e selecciona de Met y Leu; Z16 se selecciona de Glu, Cys y Lys; Z20 se selecciona de Arg, Lys y Orn; Z24 se selecciona de Lys y Glu; Z25 se selecciona de Trp, Lys, Cys y Phe; Z27 se selecciona de Lys, Arg y Orn; Z28 se selecciona de Asn y Asp o está ausente; L es una secuencia peptídica que tiene la fórmula lllb L1-L2-L3-L4 (lllb) en la que L1 se selecciona Peg3, GIn, Cys, Lys y Orn o está ausente; L2 se selecciona Peg3, GIn, Cys, Lys y Orn o está ausente; L3 se selecciona Peg3, GIn, Cys, Lys y Orn o está ausente; L4 se selecciona Peg3, GIn, Cys, Lys y Orn o está ausente; Ya es una secuencia peptídica que tiene la fórmula lile Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Y17 (lllc) en ia que Y12 se selecciona de Tyr y Ala o está ausente; Y13 se selecciona de Gly y Ala o está ausente; Y14 se selecciona de Trp, 1 Nal y Phe; Y15 se selecciona de Leu, Nle, Thr y Phe; y Y17 se selecciona de Phe y 3-(3-P¡ridil)-alanina.
5. El conjugado peptídico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -4, caracterizado porque Za es una secuencia peptídica que tiene la fórmula IVa His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Leu-Ser-Z12-Gln-Met-Glu-Z16-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-lle-Glu-Trp-Leu-Z27-Z28 (IVa) en la que Z9 se selecciona de Glu y Asp; Z12 se selecciona de Lys y Orn; Z16 se selecciona de Glu y Lys; Z27 se selecciona de Lys y Orn; Z28 se selecciona de Asn y Asp o está ausente; L es una secuencia peptídica que tiene la fórmula IVb L1-L2-L3-L4 (IVb) en la que L1 se selecciona Peg3, GIn, Cys, Lys y Orn o está ausente; L2 se selecciona Peg3, GIn, Cys, Lys y Orn o está ausente; L3 se selecciona Peg3, GIn, Cys, Lys y Orn o está ausente; L4 se selecciona Peg3, GIn, Cys, Lys y Orn o está ausente; Ya es una secuencia peptídica que tiene la fórmula IVc Y12-Y13-Trp-Leu-Asp-Phe (IVc) en el que Y12 es Tyr o está ausente; y Y13 es Gly o está ausente;
6. El conjugado peptídico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 -5, caracterizado porque Za es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Va His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Z9-Leu-Ser-Z12-Tyr-Leu-Glu-Z16-Glu-Ala-Val-Arg- Leu-Phe-lle-Glu-Phe-Leu-Z27-Z28 (Va) en la que Z9 se selecciona de Glu y Asp; Z12 se selecciona de Lys y Orn; Z16 se selecciona de Glu y Lys; Z27 se selecciona de Lys y Orn; Z28 se selecciona de Asn y Asp o está ausente; L es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Vb L1-L2-L3-L4 (Vb) en la que L1 se selecciona Peg3, Gln, Cys, Lys y Orn o está ausente; L2 se selecciona Peg3, Gln, Cys, Lys y Orn o está ausente; L3 se selecciona Peg3, Gln, Cys, Lys y Orn o está ausente; L4 se selecciona Peg3, Gln, Cys, Lys y Orn o está ausente; Ya es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Ve Y12-Y 3-Trp-Leu-Asp-Phe (Ve) en la que Y12 es Tyr o está ausente; y Y13 es Gly o está ausente.
7. El conjugado peptídico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la secuencia peptídica de fórmula I comprende uno o más puentes intramoleculares.
8. El conjugado peptídico de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado porque dicho puente intramolecular se forma entre las cadenas laterales de dos residuos de aminoácidos que están separados por tres aminoácidos en la secuencia de aminoácidos lineal de fórmula I.
9. El conjugado peptídico de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado porque el puente intramolecular se forma entre las cadenas laterales de los pares de residuos x y x+3, x+4 o x+5.
10. El conjugado peptídico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 9, caracterizado porque puente intramolecular es un anillo lactama.
11. El conjugado peptídico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 7 a 10, caracterizado porque puente intramolecular implica un par de residuos, en el que: Z12 es Lys y Z16 es Glu; Z12 es Glu y Z16 es Lys; Z16 es Glu y Z20 es Lys; Z16 es Lys y Z20 es Glu; Z20 es Glu y Z24 es Lys; Z20 es Lys y Z24 es Glu;
12. El conjugado peptidico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-11 , caracterizado porque Za tiene una identidad de al menos el 75 % con la exendina-4 nativa, por ejemplo de al menos el 80, 85, 90 o 95 %.
13. El conjugado peptidico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-11 , caracterizado porque Ya tiene una identidad de al menos el 70 % con la gastrina nativa, por ejemplo de al menos el 80, 85, 90 o 95 %.
14. El conjugado peptidico de conformidad co cualquiera de las reivindicaciones precedentes, caracterizado porque la secuencia peptídica de fórmula I tiene la secuencia: Exendina-4(1-39)-Peg3-Peg3-[Gln1,Leu15]Gastrina17, Exendina-4(1-39)-[Gln1 ,Leu 15]Gastrina17, Exendina-4(1-39)-K-[Gln1,Leu15]Gastrina17, Exendina-4( 1 -39)-AAA-[Gln 1 , Leu 15]Gastrina 17, Exendina-4(1-39)-SKK-[Gln1,Leu15]Gastrina17, Exendina-4(1-39)-Peg3-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, Exendina-4(1-39)-8Aoc-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastr¡na17, Exendina-4(1-39)-DBF-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, Exendina-4(1-39)-8Aoc-8Aoc-[Gln1,Leu15]Gastrina17, Exendina-4(1-39)-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1 -39)-K-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-39)-AAA- [Leu4]Gastrina6, Exend ina^( 1 -39)-SKK-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-39)-Peg3-SKK-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-39)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-39)-8Aoc-SKK-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-39)-DBF-SKK-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-39)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-28)-[Gln1 ,Leu 15]Gastrina17, Exendina-4(1-28)-K-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, Exendina-4(1-28)-AAA-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, Exendina-4(1-28)-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, Exendina-4(1-28)-Peg3-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, Exend ina-4( 1 -28)-Peg3-Peg3-[Gln 1 ,Leu 15]Gastrina 17, Exendina-4(1-28)-8Aoc-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, Exendina-4(1-28)-DBF-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, Exendina-4(1-28)-8Aoc-8Aoc-[Gln1,Leu15]Gastrina17, Exend ina-4( 1 -28)-[Leu4]Gastri na6 , Exendina-4(1-28)-K-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-28)-AAA-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-28)-SKK-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-28)-Peg3-SKK-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-28)-8Aoc-SKK-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-28)-DBF-SKK-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-28)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]Gastrina6, o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables
15. El conjugado peptídico de conformidad con las reivindicaciones 1 a 11 , caracterizado porque el péptido de fórmula I tiene la secuencia: Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu3]Gastrina5 Exend ina-4( 1 -28)-Peg3-Peg3-[Ala1 , Leu4]Gastrina6 Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Ala2,Leu4]Gastrina6 Exendina-4(1-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 Exendina-4(1 -28)-Peg3-Peg3-[Leu2]Gastrina4 [Leu14]Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 [Orn12]Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 [Om27]Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 [Phe25]Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 [Asp28]Exend¡na-4(1 -28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 [Tyr13]Exendina-4(1 -28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 [Orn20]Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 Exendina- (1-28)-Peg3-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-28)-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-27)-[Leu4]Gastrina11, Exendina-4(1-27)-Peg3-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-27)-Peg3-[Leu3]Gastrina5, Exendina-4(1-26)-Peg3-[Leu3]Gastrina5, Exendina-4(1-27)-Peg3-[Leu2]Gastrina4, [Tyr13,Leu14]Exendina-4(1-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 [Tyr13,Leu25]Exendina-4(1-27)- Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 [Leu14, Phe25]Exendina-4(1-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 [Tyr13,Leu14,Phe25]Exendina-4(1-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 Cadena lateral-ciclo([Lys12,Glu16]Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 Cadena lateral-ciclo([Glu16,Lys20]Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 Cadena lateral-ciclo([Lys20,Glu24]Exendina-4(1-28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 [Lys16]Exendina-4(1 -28)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 Exendina-4(1-28)-Peg3-K-Peg3-[Leu4]Gastrina6, Exendina-4(1-28)-[Thr4]Gastrina6, Exendina-4(1-28)-[Phe4]Gastrina6, [Leu14]Exendina-4(1-28)-[1 Nal3, Leu4]Gastrina6 [Leu14]Exendina^(1-28)-[Nle4]]Gastrina6 [Leu14]Exendina-4(1-28)-[Leu4,[3-(3-Piridil)-Ala]6]Gastrina6 [Glu9,Leu14,Phe25,Tyr13]Exendina-4(1-27)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 [Leu14,Phe25,Tyr13]Exendina-4(1-27)-Peg3-Peg3-[Leu4, Phe3]Gastrina6 [Glu9,Leu14,Phe25,Tyr13]Exendina-4(1-27)-Peg3-Peg3-[Leu4,Phe3] Gastrina6 [Arg27,Leu14,Phe25,Tyr13]Exendina-4(1-27)-Peg3-[Leu4]Gastrina6 [Arg12,27,Leu14,Lys16,Phe25,Tyr13]Exendina-4(1-27)-Peg3-[Leu4] Gastrina6 [Arg12,27,Leu14,Lys20,Phe25,Tyr13]Exendina-4(1-27)-Peg3-[Leu4] Gastrina6 [Arg12,27,Leu14,Lys24,Phe25,Tyr13]Exendina-4(1-27)-Peg3-[Leu4] Gastrina6 [Arg12, Leu 14, Phe25, Tyr13]Exendina-4(1-27)-Peg3-[Leu4]Gastrina6 [Glu9)Leu14,Phe25,Tyr13]Exendina-4(1-27)-[Leu2]Gastrina4 [Glu9,Leu14,Phe25,Tyr13]Exendina-4(1-27)-Peg3-[Leu2]Gastria4 [Glu9,Leu14,Phe25,Tyr13]Exendina-4(1-27)-Orn-Peg3-[Leu2]Gastrina4 [Glu9,Leu14,Phe25,TIR13]Exendina-4(1-27)-Peg3-Orn-[Leu2]Gastrina4 [Glu9,Leu14,Phe25,TIR13]Exendina-4(1-27)-Orn-Orn-[Leu2]Gastrina4 [Glu9,Leu14,Phe25,TIR13]Exendina-4(1-27)-[Leu4]Gastrina6 [Glu9,Leu14,Phe25,TIR13]Exend¡na-4(1-27)-Peg3-[Leu4]Gastr¡na6 [Glu9,Leu14,Phe25,Tyr13]Exendina-4(1-27)-Orn-Peg3-[Leu4]Gastr¡na6 [Glu9,Leu14,Phe25,Tyr13]Exendina-4(1-27)-Peg3-0rn-[Leu4]Gastr¡na6 [Glu9,Leu14,Phe25,TIR13]Exendina-4(1-27)-0rn-0rn-[Leu4]Gastrina6 o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.
6. Un conjugado peptídico que tiene la fórmula VI R1-X-L-Y-R2 (VI) caracterizado porque R1 es H, alquilo C-M, acetilo, formilo, benzoílo o trifluoroacetilo; R2 es OH o NH2; X comprende la secuencia de GLP-1 (7-36) que tiene la secuencia His - Ala - Glu - Gly -Thr - Phe - Thr - Ser - Asp - Val - Ser - Ser -Tyr -Leu - Glu - Gly - Gln - Ala - Ala - Lys - Glu - Phe - He - Ala - Trp - Leu -Val - Lys - Gly - Arg o un análogo del mismo Xa; L es un adaptador que contiene hasta 4 aminoácidos naturales o no naturales, o combinaciones de los mismos, o está ausente; Y comprende la secuencia de gastrina 17 que tiene la secuencia Gln-Gly-Pro-Trp-Leu-Glu-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Tf-Y15-Asp-Phe en el que Y15 se selecciona de Leu, Nle, Phe y Thr o un análogo del mismo Ya.
17. El conjugado peptídico de conformidad con la reivindicación 16, en el que (i) Xa tiene sustituciones en hasta 5 posiciones y/o comprende un truncamiento en C-terminal de 1-2 aminoácidos, con respecto a la secuencia de GLP-1 ; y/o (ii) Ya tiene sustituciones en hasta 5 posiciones con respecto a la secuencia de la gastrina 17 y/o comprende un truncamiento en N-terminal de 1 a 13 aminoácidos, con respecto a la secuencia de la gastrina 17.
18. El conjugado peptídico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 16-17, caracterizado porque Xa es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Vlla His - X8 - Glu - Gly - Thr - Phe - Thr - Ser - Asp - Val - Ser - Ser -Tyr -Leu - Glu - Gly - Gln - Ala - Ala - X26 - Glu - Phe - He - Ala -Trp - Leu - Val - X34 - Gly -X36 (Vlla) en la que X8 se selecciona de Ala, Aib y Gly; X26 se selecciona de Arg y Lys; X34 se selecciona de Arg y Lys; X36 se selecciona de Arg y Lys; L es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Vllb L1-L2-L3-L4 (Vllb) en la que L1 se selecciona de Ser, Ala, Lys, Orn, bAla, 8Aoc, DBF, Peg3, Cys, Gln o está ausente; L2 se selecciona de Ser, Ala, Lys, Orn, bAla, 8Aoc, DBF, Peg3, Cys, GIn o está ausente; L3 se selecciona de Ser, Ala, Lys, Orn, bAla, 8Aoc, DBF, Peg3, Cys, GIn o está ausente; L4 se selecciona de Ser, Ala, Lys, Orn, bAla, 8Aoc, DBF, Peg3, Cys, GIn o está ausente; Ya es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Vllc Y1 -Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y11 -Y12-Y13-Y14-Y15-Asp-Y17 (Vllc) en la que Y1 es GIn o está ausente; Y2 es Gly o está ausente; Y3 es Pro o está ausente; Y4 es Trp o está ausente; Y5 es Leu o está ausente; Y6 es Glu o está ausente; Y7 es Glu o está ausente; Y8 es Glu o está ausente; Y9 es Glu o está ausente; Y10 es Glu o está ausente; Y11 es Ala o está ausente; Y12 se selecciona de Ala, Tyr o está ausente; Y13 se selecciona de Gly, Ala o está ausente; Y14 se selecciona de Trp, Phe, 1Nal y Met; Y15 se selecciona de Leu, Nle, Phe y Thr; y Y17 se selecciona de Phe y 3-(3-Piridil)-alanina.
19. El conjugado peptídico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones -18, caracterizado porque Xa es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Villa His - X8 - Glu - Gly - Thr - Phe - Thr - Ser - Asp - Val - Ser - Ser - Tyr -Leu - Glu - Gly - GIn - Ala - Ala - X26 - Glu - Phe - lie - Ala -Trp - Leu -Val -X34 - Gly - X36 (Villa) en la que X8 se selecciona de Ala, Aib y Gly; X26 se selecciona de Arg y Lys; X34 se selecciona de Arg y Lys; X36 se selecciona de Arg y Lys; L es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Vlllb L1-L2-L3-L4 (Vlllb) en la que L1 se selecciona de Peg3, Orn, Cys, Lys, GIn o está ausente; L2 se selecciona de Ser, Ala, Orn, Cys, Lys, GIn o está ausente; L3 se selecciona de Lys, Ala, Cys, Orn, GIn o está ausente; L4 se selecciona de Lys, Orn, Ala, Peg3, Cys, Lys, GIn o está ausente; Ya es una secuencia peptídica que tiene la fórmula Vlllc Y 2-Y13-Y14-Y15-Asp-Phe (Vlllc) en la que Y12 se selecciona de Tyr, Ala o está ausente; Y13 se selecciona de Gly, Ala o está ausente; Y14 se selecciona de Trp y Phe; y Y15 se selecciona de Leu, Thr y Phe.
20. El conjugado peptídico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones -19, caracterizado porque Xa es una secuencia peptídica que tiene la fórmula IXa His - X8 - Glu - Gly - Thr - Phe - Thr - Ser - Asp - Val - Ser - Ser - Tyr -Leu - Glu - Gly - GIn - Ala - Ala - X26 - Glu - Phe - lie - Ala - Trp - Leu -Val - X34 - Gly - X36 (IXa) en la que X8 se selecciona de Ala, Aib y Gly; X26 se selecciona de Arg y Lys; X34 se selecciona de Arg y Lys; X36 se selecciona de Arg y Lys; L es una secuencia peptídica que tiene la fórmula IXb L1-L2-L3 (IXb) en el que L1 se selecciona Peg3, GIn, Cys, Lys y Orn o e¾tá ausente; L2 se selecciona Peg3, GIn, Cys, Lys y Orn o está ausente; L3 se selecciona Peg3, GIn, Cys, Lys y Orn o está ausente; L4 se selecciona Peg3, GIn, Cys, Lys y Orn o está ausente; Ya es una secuencia peptídica que tiene la fórmula IXc Y12-Y13-Trp-Leu-Asp-Phe (IXc) en el que Y12 es Tyr o está ausente; y Y13 es Gly o está ausente.
2 . El conjugado peptídico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 16-20, caracterizado porque Xa tiene una identidad de al menos el 85 % con la exendina-4 nativa, por ejemplo de al menos el 90, 95, 97, 98, 99 o 99,5 %.
22. El conjugado peptídico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 16-21 , caracterizado porque al menos una Lys o Cys está conjugada además con un sustituyente lipófilo.
23. El conjugado peptídico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 6-21 , caracterizado porque el péptido de la fórmula VI tiene la secuencia: GLP-1 (7-36)-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, GLP-1 (7-36)-K-[Gln1 ,Leu15]Gastr¡na17, GLP-1 (7-36)-AAA-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, GLP-1 (7-36)-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, GLP-1(7-36)-Peg3-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, GLP-1(7-36)-Peg3-Peg3-[Gln1 ,Leu15]Gastrina 7, GLP-1(7-36)-8Aoc-SKK-[Gln1 ,Leu15]Gastrina17, GLP-1 (7-36)-DBF-SKK-[Gln1,Leu15]Gastrina17, GLP-1 (7-36)-8Aoc-8Aoc-[Gln1 ,Leu 5]Gastrina 7, GLP-1 (7-36)-[Leu4]Gastrina6, GLP-1 (7-36)-K-[Leu4]Gastrina6, GLP-1 (7-36)-AAA-[Leu4]Gastrina6, GLP-1(7-36)-SKK-[Leu4]Gastrina6, GLP-1(7-36)-Peg3-SKK-[Leu4]Gastr¡na6, GLP-1 (7-36)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6, GLP-1 (7-36)-8Aoc-SKK- [Leu4]Gastrina6, GLP-1(7-36)-DBF-SKK-[Leu4]Gastrina6 GLP-1 (7-36)-8Aoc-8Aoc-[Leu4]Gastrina6, [Aib8,Arg34]GLP-1 (7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 [Arg34]GLP-1 (7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.
24. El conjugado peptidico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 16 a 22, caracterizado porque el péptido de la fórmula VI tiene la secuencia: [Lys(Hexadecanoil-isoGlu)34]GLP-1 (7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6, [Arg34,Lys(Hexadecanoil-isoGlu)26]GLP-1(7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 [Arg26,34,Lys(Hexadecanoil-isoGlu)36]GLP-1 (7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 [Lys(Hexadecanoil-isoGlu)26]GLP-1 (7-37)-Peg3-Peg3-[Leu4]Gastrina6 [Arg26,34,Gly8,Lys(Hexadecanoil-isoGlu)36]GLP-1 (7-37)-Peg3-Peg3- [Leu4]Gastrina6 [Aib8,Arg34,Lys(Hexadecanoil-¡soGlu)26]GLP-1 (7-37)-Peg3-Peg3- [Leu4]Gastrina6 o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo.
25. El conjugado peptidico o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, de conformidad con la reivindicación 1 a 24, para usar como medicamento.
26. El conjugado peptidico o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo de conformidad con la reivindicación 25, para usar como medicamento para el tratamiento, en un sujeto que lo necesite, de una enfermedad o un trastorno seleccionados del grupo constituido por: diabetes de tipo 1, diabetes de tipo 2, pre-diabetes, síndrome de resistencia a la insulina, tolerancia alterada a la glucosa (IGT), estados patológicos asociados con niveles elevados de glucosa en sangre, hiperglucemia, hipertensión, dislipidemia aterogénica, arteriesclerosis (p. ej., aterosclerosis), cardiopatía coronaria, enfermedad de las arterias periféricas, ictus, enfermedad microvascular, enfermedad gástrica, síndrome metabólico, cáncer (p. ej., cáncer de colon), enfermedad intestinal inflamatoria (Ell) y síndrome del intestino irritable (Sil).
27. El conjugado peptídico o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo de conformidad con la reivindicación 25, para usar como medicamento para inducir, en un sujeto que lo necesite, neogénesis de los islotes pancreáticos.
28. El conjugado peptídico o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo de conformidad con la reivindicación 25, para usar como medicamento para prevenir, en un sujeto que lo necesite, la apoptosis de las células ß en los islotes pancreáticos.
29. El conjugado peptídico o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 25 a 28, caracterizado porque dicho sujeto es un ser humano.
30. Un procedimiento de tratamiento en un sujeto que lo necesite de una enfermedad o un trastorno seleccionados del grupo constituido por: diabetes de tipo 1 , diabetes de tipo, pre-diabetes, síndrome de resistencia a la insulina, tolerancia alterada a la glucosa (IGT), estados patológicos asociados con niveles elevados de glucosa en sangre, hiperglucemia, hipertensión, dislipidemia aterogénica, arteriosclerosis (p. ej., aterosclerosis), cardiopatía coronaria, enfermedad de las arterias periféricas, ictus, enfermedad microvascular, enfermedad gástrica, síndrome metabólico, cáncer (p. ej., cáncer de colon), enfermedad intestinal inflamatoria (EN) y síndrome del intestino irritable (Sil), comprendiendo ell procedimiento administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un conjugado peptídico o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 29.
31. El procedimiento de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque dicho sujeto es un ser humano.
32. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un conjugado peptídico, o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, de conformidad con las reivindicaciones 1 a 29, junto con un soporte, excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptables.
33. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 32, para usar en la prevención de la ganancia de peso o en la estimulación de la pérdida de peso.
34. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29, para usar en un procedimiento para mejorar los niveles de glucosa en circulación, la tolerancia a la glucosa y/o los niveles circulantes de colesterol, disminuir los niveles de LDL circulantes y/o incrementar la proporción HDL/LDL.
35. El compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29, para usar en un procedimiento de tratamiento de una afección causada o caracterizada por un exceso de peso corporal, por ejemplo el tratamiento y/o la prevención de la obesidad, obesidad mórbida, inflamación relacionada con obesidad, enfermedad de la vesícula biliar relacionada con obesidad, apnea del sueño inducida por obesidad, síndrome metabólico, síndrome pre-diabetes, comprendiendo el procedimiento administrar a dicho sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de un conjugado peptídico o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29.
36. El uso de un compuesto como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29, para impedir la ganancia de peso o estimular la pérdida de peso en un individuo que lo necesite.
37. El uso de un compuesto como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 29 en un procedimiento de mejorar los niveles de glucosa en circulación, la tolerancia a la glucosa y/o los niveles circulantes de colesterol, disminuir los niveles de LDL circulantes y/o incrementar la proporción HDL/LDL en un individuo que lo necesite
38. Un compuesto, uso o procedimiento de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 37, caracterizado porque el compuesto se administra como parte de una terapia de combinación con un agente para el tratamiento de la diabetes, la obesidad, la dislipidemia o la hipertensión.
39. El compuesto, uso o procedimiento de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado porque el agente para el tratamiento de la diabetes es metformina, una sulfonilurea, una glinida, un inhibidor de DPP-IV, una glitazona, insulina o un análogo de insulina.
40. El compuesto, uso o procedimiento de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado porque el agente para el tratamiento de la obesidad es un agonista del receptor 1 del péptido similar al glucagón, el péptido YY o un análogo del mismo, un antagonista del receptor cannabinoide 1 , inhibidor de la lipasa, agonista del receptor 4 de la melanocortina o un antagonista del receptor 1 de la hormona de concentración de melanina.
41. El compuesto, uso o procedimiento de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado porque el agente para el tratamiento de la hipertensión es un inhibidor de la enzima convertidora de angiotensina, un bloqueante del receptor II de la angiotensina, un diurético, un beta-bloqueante o un bloqueante de los canales de calcio.
42. El compuesto, uso o procedimiento de conformidad con la reivindicación 38, caracterizado porque el agente para el tratamiento de la dislipidemia es una estatina, un fibrato, una niacina y/o un inhibidor de la absorción de colesterol.
43. Un procedimiento de fabricación mediante síntesis de un conjugado peptídico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 24.
44. Un procedimiento de fabricación mediante recombinación de un conjugado peptídico de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 24.
45. El uso de un compuesto como el que se reclama en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 24, en un procedimiento de mejorar los niveles de glucosa en circulación, la tolerancia a la glucosa y/o los niveles circulantes de colesterol, disminuir los niveles de LDL circulantes y/o incrementar la proporción HDULDL en un individuo que lo necesite, en el que se usa un régimen de dosificación de descanso del fármaco.
46. Un procedimiento para fabricar un compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones anteriores.
47. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende un conjugado peptídico, o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, de conformidad con las reivindicaciones 1 a 29, en combinación con uno o más conjugados peptídicos o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo de conformidad con la reivindicación 1 a 29, junto con un soporte, excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptables.
48. Un dispositivo que comprende al menos un conjugado peptídico, o una sal o un solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, de conformidad con las reivindicaciones 1 a 29, para proporcionar el conjugado peptídico a un sujeto.
49. Un kit que comprende al menos un conjugado peptídico, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptables del mismo, de conformidad con reivindicaciones 1 a 29, y que además comprende envase o instrucciones de uso.
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