MX2012010367A - Metodos para el tratamiento de linfomas no hodgkin que usan lenalidomida y biomarcadores de genes y proteinas como un predictor. - Google Patents

Abstract

Se describen métodos para tratar o manejar cánceres específicos, incluyendo linfoma no Hodkin por la administración de 3-(4-amino-1-exo-1,3-dihidro-isoindol-2-il)-piperidina-2,6-dieno. También se describen métodos para usar biomarcadores de genes y proteínas como un predictor de linfoma no Hodkin responde al tratamiento con 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihidro-isoindol-2-il)piperid ina-2,6-diona.

Description

MÉTODOS PARA EL TRATAMIENTO DE LINFOMAS NO HODGKIN QUE USAN LENALIDOMIDA Y BIOMARCADORES DE GENES Y PROTEÍNAS COMO UN PREDICTOR Se reivindica la prioridad en este documento para la solicitud provisional de E.U.A. No. 61/313,670, presentada el 12 de marzo 2010. La solicitud mencionada anteriormente se incorpora en la presente por referencia en su totalidad. 1. CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se refiere al uso de biomarcadores de genes y proteínas como un predictor de la sensibilidad clínica para el linfoma no Hodgkin y la respuesta del ^paciente al tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2, 6-diona, que se conoce también como lenalidomida o Revimid®. En particular, la presente invención abarca métodos de tratamiento o manejo de los linfomas no Hodgkin, incluyendo pero no limitado a, linfoma de células B grandes difusas (DLBCL) , utilizando los factores de pronóstico. 2. ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN 2.1 Patobiologia del Cáncer El cáncer se caracteriza principalmente por un aumento en el número de células anormales derivadas de un tejido normal dado, invasión de tejidos adyacentes por estas células anormales, o diseminación linfática o sanguínea propagación de las células malignas a ganglios linfáticos regionales y a sitios distantes (metástasis) . Los datos clínicos y estudios de biología molecular indican que el cáncer es un proceso de múltiples pasos que comienza con cambios menores preneoplásicos, que no podrán en marcha ciertas condiciones para neoplasia. La lesión neoplásica puede evolucionar clonalmente y desarrollar una creciente capacidad de invasión, crecimiento, metástasis y heterogeneidad, especialmente bajo condiciones en que las células neoplásicas escapan de la vigilancia inmune del huésped. Roitt, I., Brostoff, J. y Kale, D., Inmunología, 17.1-17.12 (3a. ed., osby, St. Louis, Mo., 1993).

Existe una enorme variedad de cánceres que están descritos en detalle en la literatura médica. Los ejemplos incluyen cáncer de pulmón, colon, recto, próstata, mama, cerebro e intestino.

El linfoma se refiere al cáncer que se origina en el sistema linfático. El linfoma se caracteriza por neoplasias malignas de linfocitos, los linfocitos B y los linfocitos T (es decir, células B y células T) . El linfoma generalmente comienza en los ganglios linfáticos o colecciones de tejido linfático en los órganos, incluyendo, pero no limitado a, estómago o intestinos.

El linfoma puede implicar la médula ósea y sangre en algunos casos. El linfoma se puede diseminar de un sitio a otras partes del cuerpo.

El tratamiento de diversas formas de linfomas se describe, por ejemplo, en la patente de E.U.A. No. 7,468,363, cuya totalidad se incorpora en la presente por referencia. Los linfomas incluyen, pero no se limitan a, linfoma de Hodgkin, linfoma no hodgkin cutáneo de células B, linfoma de células B activadas, linfoma de células B grandes difusas (DLBCL) , el linfoma de células del manto (MCL) , linfoma de centro folicular, linfoma transformado, linfoma linfocitico de diferenciación intermedia, linfoma linfocitico intermedio (ILL) , linfoma difuso poco diferenciado linfocítica (PDL) , linfoma centrocítico, linfoma de células hendidas pequeñas difusas (DSCCL) , periféricos de linfomas de células T (PTCL), linfoma cutáneo de células T y linfoma de la zona del manto y linfoma folicular de bajo grado.

El linfoma no Hodgkin (NHL) es el quinto cáncer más común en hombres y mujeres en los Estados Unidos, con un estimado de 63,190 nuevos casos y 18,660 muertes en 2007. Jemal A, et al., CA Cáncer J Clin 2007; 57 (1) :43-66. La probabilidad de desarrollar NHL aumenta con la edad y la incidencia del NHL en los ancianos ha ido en constante aumento en los últimos diez años, causando preocupación por la tendencia al envejecimiento de la población de E.U.A. Id. Clarke C A, et al., Cáncer 2002; 94 (7 ): 2015-2023.

El linfoma de células B grandes difusas (DLBCL) representa aproximadamente un tercio de los linfomas no-Hodgkin. Mientras que algunos pacientes con DLBCL se curan con la quimioterapia tradicional, el resto muere de la enfermedad. Los fármacos anticancerosos causan agotamiento rápido y persistente de los linfocitos, posiblemente mediante la inducción de la apoptosis directa en las células T y B maduras. Ver K. Stahnke. et al., Blood 2001, 98:3066-3073. El recuento absoluto de linfocitos (ALC) se ha demostrado que es un factor de pronóstico en el linfoma folicular no Hodgkin y los resultados recientes han sugerido que el ALC en el diagnóstico es un factor de pronóstico importante en el linfoma de células B grandes difusas. Véase D. Kim et al., Journal of Clinical Oncology, ASCO 2007 Annual Meeting Actas Parte I. Vol. 25, No. 18S (Suplemento 20 de junio), 2007: 8082. DLBCL se dividen en diversos subgrupos, incluyendo el fenotipo de células B activadas (ABC) , el fenotipo germinal central B (GCB) , o fenotipo de Linfoma de células B primario mediastinico (PMBL). Ver Lenz & Staudt, NEJM 2010, 362: 1417-29.

Mientras que los pacientes que logran una remisión completa después del tratamiento inicial tienen una buena oportunidad para la curación, menos del 10% de los que no responden o recaen logran una cura o una respuesta que dura más de 3 años. Ver Cerny T, et al, Ann Oncol 2002; 13 Suppl 4:211-216.

Además, se sabe que el rituximab agota las células huésped B normales. Aklilu M. et al., Annals of Oncology 15: 1109-1114, 2004. Los efectos inmunológicos a largo plazo de agotamiento de células B con rituximab y las características de la reconstitución de combinación de células B en pacientes con linfoma no están bien definidas, a pesar del uso generalizado de esta terapia. Ver Jennifer H. Anolik et al., Clinical Immunology, vol. 122, número 2, febrero de 2007, páginas 139-145.

El enfoque para pacientes con enfermedad recurrente o refractaria se basa principalmente en tratamientos experimentales seguido por el trasplante de células madre, que pueden no ser apropiados para pacientes con un mal estado general o edad avanzada. Por lo tanto, existe una gran demanda de nuevos métodos que pueden ser utilizados para tratar pacientes con NHL.

La incidencia del cáncer sigue aumentando a medida que envejece la población en general, a medida que se desarrollan nuevos cánceres y a medida crecen las poblaciones vulnerables (por ejemplo, las personas infectadas con SIDA o excesivamente expuestas a la luz solar) . Por lo tanto existe una gran demanda de nuevos métodos y composiciones que se pueden utilizar para tratar pacientes con cáncer, incluyendo el NHL. 2.2. Métodos de Tratamiento La terapia del cáncer actual puede implicar cirugía, quimioterapia, terapia hormonal y/o tratamiento de radiación para erradicar las células neoplásicas en un paciente (véase, por ejemplo, Stockdale, 1998, Medicine, vol. 3, Rubenstein y Federman, eds., Capítulo 12, Sección IV). Recientemente, la terapia del cáncer también puede implicar terapia biológica o inmunoterapia . Todos estos enfoques plantean inconvenientes significativos para el paciente. La cirugía, por ejemplo, puede estar contraindicada debido a la salud de un paciente o puede ser inaceptable para el paciente.

Además, la cirugía no puede eliminar completamente el tejido neoplásico. La radioterapia es efectiva sólo cuando el tejido neoplásico presenta una mayor sensibilidad a la radiación de los tejidos normales. La radioterapia también a menudo puede provocar efectos secundarios graves. La terapia hormonal se da raramente en monoterapia. Aunque la terapia hormonal puede ser eficaz, a menudo se usa para prevenir o retrasar la recurrencia del cáncer después de que otros tratamientos han eliminado la mayoría de las células cancerosas. Las terapias biológicas e inmunoterapias son limitadas en número y pueden producir efectos secundarios como erupciones o inflamaciones, síntomas de tipo gripal, como fiebre, escalofríos y fatiga, problemas del tracto digestivo o reacciones alérgicas.

Con respecto a la quimioterapia, hay una diversidad de agentes quimioterapéuticos disponibles para el tratamiento de cáncer. La mayoría de los agentes quimioterapéuticos del cáncer actúan por inhibición de la síntesis de ADN ya sea directa, o indirectamente mediante la inhibición de la biosíntesis de los precursores de desoxirribonucleótidos trifosfato, para evitar la replicacion del ADN y la división celular concomitante. Gilman et al., Goodman y Gilman's: Las bases farmacológicas de la terapéutica, Décima Ed. (McGraw Hill, Nueva York) .

A pesar de la disponibilidad de una variedad de agentes quimioterapéuticos, la quimioterapia tiene muchos inconvenientes. Stockdale, Medicina, vol. 3, Rubenstein y Federman, eds . , Cap. 12, secc. 10, 1998. Casi todos los agentes quimioterapéuticos son tóxicos y la quimioterapia causa efectos secundarios significativos y a menudo peligrosos, incluyendo náuseas graves, depresión de la médula ósea e inmunosupresión . Además, incluso con la administración de combinaciones de agentes quimioterapéuticos, muchas células tumorales son resistentes o desarrollan resistencia a los agentes quimioterapéuticos. De hecho, las células resistentes a los agentes quimioterapéuticos que se usan en particular en el protocolo de tratamiento a menudo demuestran ser resistentes a otros fármacos, incluso si esos agentes actúan por mecanismos diferentes de los de los fármacos utilizados en el tratamiento especifico. Este fenómeno se conoce como medicamento pleiotrópico o de resistencia a múltiples fármacos. Debido a la resistencia a los fármacos, muchos cánceres demuestran ser refractarios a protocolos estándar de tratamientos quimioterapéuticos.

Sin embargo, existe una necesidad significativa de métodos seguros y eficaces de tratamiento, prevención y tratamiento del cáncer, en particular para los tumores que son refractarios a los tratamientos convencionales, tales como cirugía, radioterapia, quimioterapia y terapia hormonal, reduciendo o evitando las toxicidades y/o efectos secundarios asociados con las terapias convencionales.

Además, sigue habiendo una necesidad de la capacidad de predecir y controlar la respuesta a la terapia del cáncer con el fin de aumentar la calidad del cuidado de los pacientes de cáncer, evitar el tratamiento innecesario y aumentar el régimen de éxito en la terapia del cáncer en la práctica clínica. 3. SUMARIO DE LA INVENCIÓN En la presente se proporcionan métodos para el uso de biomarcadores de genes y proteínas como predictor de la sensibilidad clínica para el linfoma no Hodgkin y la respuesta del paciente al tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-1, 3-dihidro-isoindol-2- il) -piperidina-2, 6-diona .

También en la presente se proporcionan los métodos para el tratamiento o manejo de los linfomas no Hodgkin, incluyendo pero no limitado a, linfoma de células B grandes difusas (DLBCL) , utilizando los factores de pronósticos.

Los métodos establecidos en la presente abarcan métodos para seleccionar o identificar los pacientes de cáncer, por ejemplo, pacientes no-Hodgkin, linfoma de tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona . En particular, en este documento se proporcionan métodos para seleccionar pacientes que tienen un mayor régimen de respuesta a la terapia con 3- ( 4-amino-l-oxo-1, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona .

En una modalidad, en la presente se proporciona un método de predicción de la respuesta del tumor al tratamiento en un paciente con linfoma no Hodgkin, el método comprende la obtención de tejido tumoral del paciente, purificar la proteína o el ARN del tumor y la medición de la presencia o ausencia de un marcador biológico por análisis de la expresión por ejemplo, proteína o gen. La expresión puede ser monitoreada, por ejemplo, expresión de mRNA o expresión de la proteína. En ciertas modalidades, el biomarcador es un gen asociado con un fenotipo activo de células B de DLBCL. Los genes se seleccionan entre el grupo que consiste en IRF4/MUM1, FOXP1, SPIB, CARD 11 y BLIMP/PDRM1. En una modalidad, el biomarcador es NF-KB.

En una modalidad, el MRNA o la proteina se purificaron a partir del tumor y la presencia o ausencia de un biomarcador se mide por análisis de la expresión de genes o proteínas. En ciertas modalidades, la presencia o ausencia de un biomarcador se mide por PCR cuantitativa en tiempo real (QRT-PCR) , microdisposición, citometría de flujo o inmunofluorescencia. En otras modalidades, la presencia o ausencia de un biomarcador se mide por ligados a enzimas metodologías de prueba inmunoenzimático (basado en ELISA) u otros métodos similares conocidos en la técnica.

En otra modalidad, en la presente se proporciona un método de predicción de la respuesta del tumor al tratamiento en un paciente con linfoma no Hodgkin, el método comprende la obtención de células tumorales del paciente, el cultivo de las células en presencia o ausencia de 3-(4-amino-l -oxo-1,3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona, purificación de proteína o ARN de las células cultivadas y miden la presencia o ausencia de un marcador biológico mediante, por ejemplo, análisis de expresión de proteína o génica. La expresión puede ser monitoreada, por ejemplo, expresión de mRNA o expresión de la proteina.

En otra modalidad, proporcionado en la presente se provee un método para monitorear la respuesta tumoral al tratamiento de 3- ( 4-amino-l-oxo-l , 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona en un paciente con linfoma no Hodgkin. El método comprende obtener una muestra biológica del paciente, midiendo la expresión de un biomarcador en la muestra biológica, la administración de 3- ( 4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona al paciente, a partir de entonces obtener una muestra biológica segundo del paciente, midiendo la expresión de biomarcadores en la segunda muestra biológica y comparar los niveles de expresión, en donde un aumento del nivel de expresión de biomarcadores después del tratamiento indica la probabilidad de un respuesta tumoral eficaz. En una modalidad, una disminución del nivel de expresión de biomarcadores después del tratamiento indica la probabilidad de respuesta tumoral eficaz. La expresión de biomarcadores de seguimiento pueden ser, por ejemplo, expresión de mRNA o expresión de la proteina. La expresión en la muestra tratada puede aumentar, por ejemplo, en alrededor de 1.5 X, 2.0 X, 3X, 5X, o más.

En aún otra modalidad, se proporciona un método para monitorear el cumplimiento del paciente con un protocolo de tratamiento de fármacos. El método comprende obtener una muestra biológica del paciente, midiendo el nivel de expresión de al menos un biomarcador en la muestra y determinar si el nivel de expresión es aumentada o disminuida en la muestra del paciente en comparación con el nivel de expresión en una muestra de control no tratado, en el que una expresión aumentada o disminuida indica el cumplimiento del paciente con el protocolo de tratamiento de fármacos. En una modalidad, se incrementa la expresión de uno o más biomarcadores . La expresión de biomarcadores de seguimiento pueden ser, por ejemplo, expresión de mRNA o expresión de la proteina. La expresión en la muestra tratada puede aumentar, por ejemplo, en alrededor de 1.5 X, 2.0 X, 3X, 5X, o más.

En otra modalidad, en la presente se proporciona un método de predicción de la sensibilidad al tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona en un paciente con linfoma no Hodgkin, específicamente, un paciente con DLBCL. El método comprende obtener una muestra biológica del paciente, opcionalmente, aislar o purificar el MRNA de la muestra biológica, ampliar la transcripción de MRNA mediante, por ejemplo, RT-PCR, en donde un nivel de referencia más alto de un biomarcador específico indica una mayor probabilidad de que el cáncer sea sensible al tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona . En ciertas modalidades, el biomarcador es un gen asociado con un fenotipo de células B activo. Los genes se seleccionan entre el grupo que consiste en IRF4/MUM1, F0XP1, SPIB, CARD 11 y BLIMP/PDRMl.

En una modalidad, la presente proporciona un método para el tratamiento o manejo de linfoma no Hodgkin, que comprende: (i) identificar un paciente con linfoma no Hodgkin sensible al tratamiento con 3- ( 4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina 2,6-diona; y (ii) administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina 2,6-diona, que tiene la siguiente estructura : o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de los mismos (por ejemplo hidrato) .

En una modalidad, el linfoma no Hodgkin es linfoma de células B grandes difusas.

En otra modalidad, el fenotipo de linfoma células B no Hodgkin está en la forma activada.

En una modalidad, la identificación de un paciente con linfoma no Hodgkin sensible al tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-1, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona comprende la identificación de un gen asociado con el fenotipo de células B activado. En una modalidad, el gen asociado con fenotipo de células B activado se selecciona del grupo que consiste en IRF4/MUM1, F0XP1, SPIB, CARD11 y BLIMP/PDR 1.

En una modalidad, la identificación de un paciente con linfoma no Hodgkin sensible al tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-1, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona comprende medir el nivel de actividad de NF- ? en el paciente. En otra modalidad, la medición del nivel de actividad de NF-?? en el paciente comprende la medición de la linea de base del nivel de actividad de NF-KB en las células tumorales obtenidas del paciente.

También se proporcionan en este documento kits útiles para predecir la probabilidad de un tratamiento efectivo de NHL o para monitorear la efectividad de un tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona . El kit comprende un soporte sólido y un medio para detectar la expresión de la proteína de al menos un biomarcador en una muestra biológica. Dicho kit puede emplear, por ejemplo, una varilla, una membrana, un microcircuito, un disco, una tira de prueba, un filtro, una microesfera, una diapositiva, una placa de múltiples pozos, o una fibra óptica. El soporte sólido del kit puede ser, por ejemplo, un plástico, silicio, un metal, una resina, vidrio, una membrana, una partícula, un precipitado, un gel, un polímero, una lámina, una esfera, un polisacárido, un capilar, una película, una placa, o una diapositiva. La muestra biológica puede ser, por ejemplo, un cultivo de células, una línea celular, un tejido, un tejido oral, el tejido gastrointestinal, un órgano, un organelo, un fluido biológico, una muestra de sangre, una muestra de orina, o una muestra de piel. La muestra biológica puede ser, por ejemplo, una biopsia de nodulo linfático, biopsia de médula ósea, o una muestra de sangre periférica de células tumorales.

En una modalidad adicional, la presente invención proporciona un kit útil para predecir la probabilidad de un tratamiento efectivo de NHL o para monitorear la efectividad de un tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2- il ) -piperidina-2 , ß-diona . El kit comprende un soporte sólido, los ácidos nucleicos en contacto con el soporte, en donde los ácidos nucleicos son complementarios al menos a 20, 50, 100, 200, 350, o más bases de MRNA y un medio para detectar la expresión del MRNA en una muestra biológica.

En otra modalidad, en este documento se proporciona un kit útil para predecir la probabilidad de un tratamiento efectivo de NHL o para monitorear la efectividad de un tratamiento con 3- ( -amino-l-oxo-l, 3-dihidro'-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona . El kit comprende un soporte sólido, al menos un ácido nucleico en contacto con el soporte, en donde el ácido nucleico es complementario con al menos 20, 50, 100, 200, 350, 500, o más bases de MRNA y un medio para detectar la expresión del MRNA en una muestra biológica.

En ciertas modalidades, los kits proporcionados en este documento emplean medios para detectar la expresión de un biomarcador cuantitativo por PCR en tiempo real (QRT-PCR) , microdisposición, citometria de flujo o inmunofluorescencia . En otras modalidades, la expresión del biomarcador se mide por ELISA con base en metodologías u otros métodos similares conocidos en la técnica.

En los métodos particulares de la invención, 3- (4-amino-l-oxo-1 , 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona se administra en combinación con una terapia convencional usada para tratar, prevenir o controlar el cáncer. Los ejemplos de tales terapias convencionales incluyen, pero no se limitan a, cirugía, quimioterapia, radioterapia, terapia hormonal, terapia biológica e inmunoterapia .

También en este documento se proporcionan composiciones farmacéuticas, formas de dosificación unitarias individuales, los regímenes de dosificación y kits que comprenden 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona, o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato, hidrato, estereoisómero, clatrato, o profármaco del mismo y un segundo incluyen combinaciones especificas, o "cocteles" de fármacos. 4. BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figura 1: La lenalidomida exhibe mayor actividad antiproliferativa entre las lineas celulares de fenotipo de células B activadas de DLBCL en un panel de lineas celulares de diferentes características citogenéticas.

Figuras 2A a 2D: el análisis de la expresión génica muestra varias características típicas de tipo de células B de DLBCL activadas en RIVA sensible a lenalidomida, U2932 y células OCI-Ly3.

Figura 3A: las células DLBCL de tipo de células B activadas sensibles a lenalidomida muestran mayor actividad de NF-KB p65 que otros tipos de células DLBCL.

Figura 3B: las células DLBCL de tipo de células B activadas sensibles a lenalidomida muestran mayor actividad de NF-KB p50 que otros tipos de células DLBCL.

Figura 4: se observó correlación significativa entre el efecto antiproliferativo sobre las células DLBCL de la lenalidomida a 1 µ? en una línea de base y actividad de NFKB p50.

Figura 5A: Una concentración alcanzable clínica de lenalidomida (1 µ?) inhibe significativamente la actividad de NFKB p65 en células U2932.

Figura 5B: Una concentración alcanzable clínica de lenalidomida (1 µ ) inhibe significativamente la actividad de NFKB p50 en células U2932.

Figura 6A: lenalidomida inhibe significativamente la actividad de NFKB p65 en células B activadas por las células de tipo DLBCL del subtipo U2932.

Figura 6B: lenalidomida inhibe significativamente la actividad de NFKB p50 en células B activadas por las células de tipo DLBCL del subtipo U2932. 5. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Los métodos proporcionados en este documento se basan, en parte, en el descubrimiento de que la expresión de ciertos genes o proteínas asociadas con el fenotipo de células B activado en células de linfoma no Hodgkin se pueden utilizar como biomarcadores para indicar la eficacia o el progreso de un tratamiento de la enfermedad. En particular, estos biomarcadores se pueden utilizar para predecir, evaluar y realizar el seguimiento de la eficacia del tratamiento del paciente con 3- ( 4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona.

Sin limitarse a una teoría en particular compuestos inmunomoduladores, tales como 3- ( 4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona puede mediar la inhibición del crecimiento, la apoptosis e inhibición de los factores angiogénicos en ciertos tipos de cáncer, como el linfoma no Hodgkin. Al examinar la expresión de varios genes relacionados con el cáncer en varios tipos de células antes y después del tratamiento con 3- ( 4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona, se descubrió que los niveles de expresión de varios genes relacionados con el cáncer o proteínas se pueden utilizar como biomarcadores para predecir y supervisar los tratamientos del cáncer.

También se descubrió que el nivel de actividad de NF-?? es elevada en las células de fenotipo de células B activado en el linfoma con relación a otros tipos de células de linfoma no Hodgkin y que dichas células pueden ser sensibles a tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona . Esto sugiere que la actividad basal de actividad de NF-?? en las células del linfoma pueden ser un biomarcador predictivo de tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona en los pacientes con linfoma no Hodgkin.

Por lo tanto, en ciertas modalidades, en la presente se proporcionan métodos para predecir la respuesta del tumor al tratamiento en un paciente con linfoma no Hodgkin. En una modalidad, en la presente se proporciona un método de predicción de la respuesta del tumor al tratamiento en un paciente con linfoma no Hodgkin, el método que comprende obtención de tejido de tumor del paciente, la purificación de la proteina o el ARN del tumor y la medición de la presencia o ausencia de un biomarcador, por ejemplo, la proteina o el análisis de la expresión génica. La expresión puede ser monitoreada, por ejemplo, expresión de mRNA o expresión de la proteina. En ciertas modalidades, el biomarcador es un gen asociado con un fenotipo de células B de DLBCL activado. Los genes se seleccionan entre el grupo que consiste en IRF4/MUM 1, FOXP 1, CARD 11 y BLIMP/PDRMl. En una modalidad, el biomarcador es NF-KB .

En otra modalidad, el método comprende la obtención de células tumorales del paciente, el cultivo de las células en presencia o ausencia de 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona, purificación de ARN o de proteínas de las células cultivadas y medición de la presencia o ausencia de un marcador biológico, por ejemplo, por el análisis de la expresión de genes o proteínas.

En ciertas modalidades, la presencia o ausencia de un biomarcador se mide por cuantitativa en tiempo real PCR (QRT-PCR) , microdisposición, citometría de flujo o inmunofluorescencia . En otras modalidades, la presencia o ausencia de un biomarcador se mide por ELISA basadas en metodologías u otros métodos similares conocidos en la técnica .

Los métodos establecidos en la presente abarcan métodos para seleccionar o identificar a los pacientes con cáncer, por ejemplo, pacientes con linfoma no Hodgkin, para el tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina- 2,6-diona. En particular, en este documento se proporcionan métodos para seleccionar pacientes que tienen una mayor tasa de respuesta a una terapia con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona.

En una modalidad, el método comprende la obtención de células tumorales del paciente, el cultivo de las células en presencia o ausencia de 3- ( -amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona, purificación de ARN o de proteínas de las células cultivadas y medición de la presencia o ausencia de un marcador biológico específico. La expresión puede ser monitoreada, por ejemplo, expresión de mRNA o expresión de la proteína. La expresión en la muestra tratada puede aumentar, por ejemplo, en alrededor de 1.5 X, 2.0X, 3X, 5X o más. En ciertas modalidades, el biomarcador es un gen asociado con un fenotipo de células B activo. Los genes se seleccionan entre el grupo que consiste de IRF4/ UM1, F0XP1, CARD 11 y BLI P/PDRMI. En una modalidad, el biomarcador es NF-KB.

En otra modalidad, en la presente se provee un método de control de la respuesta del tumor al tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2,6-diona en un paciente con linfoma no Hodgkin. El método comprende obtener una muestra biológica del paciente, midiendo la expresión de uno o más biomarcadores en la muestra biológica, la administración de 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, ß-diona para el paciente, a partir de entonces obtener una segunda muestra biológica del paciente, midiendo la expresión de biomarcadores en la segunda muestra biológica y comparando los niveles de expresión de biomarcadores, en donde un aumento del nivel de expresión de biomarcadores después del tratamiento indica la probabilidad de una respuesta tumoral eficaz. En una modalidad, una disminución del nivel de expresión de biomarcadores después del tratamiento indica la probabilidad de respuesta tumoral eficaz. En ciertas modalidades, el biomarcador es un gen asociado con un fenotipo de células B activo. Los genes se seleccionan entre el grupo que consiste en IRF4/MU 1, FOXP1, CARD 11 y BLIMP/PDRMI. En una modalidad, el biomarcador es NF-KB.

En ciertas modalidades, el método comprende la medición de la expresión de uno o más genes marcadores biológicos asociados con un fenotipo de células B activo. Los genes se seleccionan entre el grupo que consiste en IRF4/MUM1, F0XP1, CARD 11 y BLIMP/PD M1. La expresión puede ser monitoreada, por ejemplo, expresión de mRNA o expresión de la proteina. La expresión en la muestra tratada puede aumentar, por ejemplo, en alrededor de 1.5 X, 2.0X, 3X, 5X o más .

En aún otra modalidad, un método para monitorear el cumplimiento del paciente con un protocolo de tratamiento de fármacos se proporciona. El método comprende obtener una muestra biológica del paciente, midiendo el nivel de expresión de al menos un biomarcador en la muestra y determinar si el nivel de expresión aumenta o disminuye en la muestra del paciente en comparación con el nivel de expresión en una muestra de control no tratado, en el que una expresión aumentada o disminuida indica el cumplimiento del paciente con el protocolo de tratamiento de fármacos. En una modalidad, se incrementa la expresión de uno o más biomarcadores . La expresión puede ser monitoreada, por ejemplo, expresión de mRNA o expresión de la proteina. La expresión en la muestra tratada puede aumentar, por ejemplo, en alrededor de 1,5 X, 2.0X, 3X, 5X o más. En ciertas modalidades, el biomarcador es un gen asociado con un fenotipo de células B activo. Los genes se seleccionan entre el grupo que consiste en IRF4/MU 1, FOXP1, CARD 11 y BLIMP/PDRM1. En una modalidad, el biomarcador es NF-KB.

En otra modalidad, se provee un método para predecir la sensibilidad al tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-1, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona en un NHL, específicamente, un paciente con DLBCL. El método comprende obtener una muestra biológica del paciente, opcionalmente, aislando o purificando el MRNA de la muestra biológica, amplificando de las transcripciones de MRNA mediante, por ejemplo, RT-PCR, en donde un nivel de referencia más alto de uno o más biomarcadores específicos indica una mayor probabilidad de que el cáncer será sensibles al tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, ß-diona. En una modalidad, el biomarcador es un gen asociado con un fenotipo de células B en estado activado seleccionado de entre el grupo que consiste en IRF4/MUM1, FOXP1, CARD 11 y BLIMP/PDRM1.

En otra modalidad, el método de predicción de la sensibilidad al tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona en un NHL, por ejemplo, un paciente con DLBCL, comprende obtener una muestra de tumor del paciente, la incorporación de la muestra de tumor en un embebido en parafina, fijado con bloque de formalina y la tinción de la muestra con los anticuerpos para CD20, CD10, bcl-6, IRF4/MUM1, bcl-2, ciclina D2 y/o FOXP1, como se describe en Hans et al, Blood, 2004, 103: 275-282, que se incorpora en la presente por referencia en su totalidad. En una modalidad, CD 10, bcl-6 y la tinción IRF4/MUM-1 puede ser usado para dividir el DLBCL en GCB y subgrupos no GCB para predecir un resultado.

En una modalidad, en la presente se proporciona un método para predecir la respuesta del tumor al tratamiento en un paciente con linfoma no Hodgkin, que comprende: (i) obtener una muestra biológica del paciente; (ii) medir la actividad de la vía de NF- ? en la muestra biológica; y (iü) comparar el nivel de actividad de NF-?? en la muestra biológica a la de una muestra biológica de un subtipo de linfoma no activado de células B; en donde un nivel aumentado de actividad de NF-KB relativa a no activadas de células B de células subtipo de linfoma indica una probabilidad de una respuesta eficaz del tumor del paciente a{ tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2 -il) -piperidina-2, 6-diona .

En una modalidad, la medición de la actividad de la vía de NF-?? en la muestra biológica comprende medir el nivel de NF-?? en la muestra biológica.

En una modalidad, en la presente se proporciona un método de control de la respuesta del tumor al tratamiento en un paciente con linfoma no Hodgkin, que comprende: (i) obtener una muestra biológica del paciente; (ii) medir el nivel de actividad de NF-?? en la muestra biológica; (iii) administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona, o una sal, solvato o hidrato del mismo al paciente; (iv) obtener una segunda muestra biológica del paciente; (v) medir el nivel de actividad de NF-?? en la segunda muestra biológica y (vi) comparar el nivel de actividad de NF- ? en la primera muestra biológica a que en la segunda muestra biológica; en donde una disminución del nivel de actividad de NF-?? en la segunda muestra biológica en relación con la primera muestra biológica indica una probabilidad de una respuesta tumoral eficaz del paciente.

En una modalidad, en la presente invención se proporciona un método para monitorear el cumplimiento del paciente con un protocolo de tratamiento de fármacos en un paciente con linfoma no Hodgkin, que comprende: (i) obtener una muestra biológica del paciente; (ii) medir el nivel de actividad de NF- ? en la muestra biológica; y (iii) comparar el nivel de actividad de NF-?? en la muestra biológica con una muestra control sin tratar; en donde una disminución del nivel de actividad de NF- ? en la muestra biológica con relación al control indica el cumplimiento del paciente con el protocolo de tratamiento de fármacos.

En una modalidad, el linfoma no Hodgkin es linfoma de células B grandes difusas.

En otra modalidad, el nivel de actividad de NF- B se mide por un prueba de inmunoabsorbente ligado a enzima.

En una modalidad, la presente proporciona un método para predecir la respuesta del tumor al tratamiento en un paciente con linfoma no Hodgkin, que comprende: (i) obtener una muestra biológica del paciente; (ii) cultivar las células de la muestra biológica; (iii) la purificación de una de las células cultivadas R; y (iv) la identificación de aumento de la expresión de un gen asociado con el fenotipo de linfoma no Hodgkin de células B activado en relación al control de fenotipo de linfoma no Hodgkin de células B no activado; en donde el aumento de expresión de un gen asociado con el fenotipo de linfoma no Hodgkin de células B activado indica una probabilidad de una respuesta de tumor del paciente eficaz al tratamiento con 3- ( 4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2- il) -piperidina-2 , 6-diona.

En una modalidad, el aumento de expresión es un incremento de alrededor de 1.5 X, 2.0X, 3X, 5X o más.

En una modalidad, el gen asociado con la activa fenotipo de células B se selecciona del grupo que consiste en IRF4/MUM1, F0XP1, CARD 11 y BLIMP/PDR 1.

En una modalidad, la identificación de la expresión de un gen asociado con el activado fenotipo de células B de linfoma no Hodgkin se realiza por PCR en tiempo real cuantitativo.

La presente invención también proporciona un método para el tratamiento o manejo de linfoma no Hodgkin, que comprende: (i) la identificación de un paciente con linfoma no Hodgkin sensible al tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona; y (ii) administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de 3- ( 4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona, que tiene la siguiente estructura : o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable.

En una modalidad, el linfoma no Hodgkin es linfoma de células B grandes difusas.

En otra modalidad, el linfoma no de Hodgkin es de la forma activada fenotipo de células B.

En otra modalidad, el linfoma de células B grandes difusas se caracteriza por la expresión de uno o más biomarcadores sobreexpresados en RIVA, U2932, TMD8 o OCI-LYLO lineas celulares.

En una modalidad, la identificación de un paciente con linfoma de sensible al tratamiento con 3- ( 4-amino-l-oxo-1, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona comprende la caracterización del fenotipo de linfoma del paciente.

En una modalidad, el fenotipo de linfoma se caracteriza como un activado de células B subtipo.

En una modalidad, el fenotipo de linfoma se caracteriza como un activado de células B grandes difuso subtipo de linfoma de células B.

En ciertas modalidades, la identificación del fenotipo de linfoma comprende obtener una muestra biológica de un paciente con linfoma. En una modalidad, la muestra biológica es un cultivo celular o muestra de tejido. En una modalidad, la muestra biológica es una muestra de las células tumorales. En otra modalidad, la muestra biológica es una biopsia de nodulo linfático, biopsia de médula ósea, o una muestra de sangre periférica de células tumorales. En una modalidad, la muestra biológica es una muestra de sangre.

En una modalidad, la identificación de un paciente con linfoma no Hodgkin sensible al tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-1, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona comprende la identificación de un gen asociado con un fenotipo de células B activo. En una modalidad, el gen asociado con el fenotipo de células B activo se selecciona del grupo que consiste en IRF4/MU 1, FOXP 1, CARD 11 y BLIMP/PDRM 1.

En una modalidad, la identificación de un paciente con linfoma no Hodgkin sensible al tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-1, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona comprende medir la nivel de actividad de NF- ? en el paciente. En otra modalidad, la medición del nivel de actividad de NF-?? en un paciente comprende la medición del nivel de actividad de la linea de base NF-KB en las células tumorales obtenidas del paciente.

En otra modalidad, el linfoma de células B grandes difusas se caracteriza por uno o más de los siguientes: (i) sobre-expresión de un factor hematopoyético especifico de transcripción de familia Ets necesario para la supervivencia de las células activadas del subtipo de células B; (ii) mayor expresión de IRF4/MUM1 constitutiva que las células del subtipo GCB; (iii) mayor expresión de F0XP1 constitutiva regulada ascendentemente por la trisomia 3; (iv) mayor expresión de Blimp 1 constitutiva, es decir, Prdml , ; y (v) mayor expresión génica de CARD 11 constitutiva; y (vi) un nivel incrementado de actividad de NF-?? en relación a células DLBCL del subtipo de células B no activadas .

Otros factores de pronóstico que se pueden utilizar concurrentemente con los que se proporcionan en la presente son factores de pronósticos de la carga de enfermedad (tumor) , recuento absoluto de linfocitos (ALC) , tiempo desde la última terapia con rituximab para los linfomas, o todo lo anterior.

También en este documento se proporcionan kits útiles para predecir la probabilidad de un tratamiento efectivo de NHL o para monitorear la efectividad de un tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina- 2,6-diona. El kit comprende un soporte sólido y un medio para detectar la expresión de un biomarcador en una muestra biológica. Dicho kit puede emplear, por ejemplo, una varilla, una membrana, un microcircuito, un disco, una tira de prueba, un filtro, una microesfera, una diapositiva, una placa de múltiples pozos, o una fibra óptica. El soporte sólido del kit puede ser, por ejemplo, un plástico, silicio, un metal, una resina, vidrio, una membrana, una partícula, un precipitado, un gel, un polímero, una lámina, una esfera, un polisacárido, una capilar, una película, una placa, o una diapositiva. La muestra biológica puede ser, por ejemplo, un cultivo de células, una línea celular, un tejido, un tejido oral, el tejido gastrointestinal, un órgano, un organelo, un fluido biológico, una muestra de sangre, una muestra de orina, o una muestra de piel. La muestra biológica puede ser, por ejemplo, una biopsia de nodulo linfático, biopsia de médula ósea, o una muestra de sangre periférica de células tumorales .

En una modalidad, el kit comprende un soporte sólido, los ácidos nucleicos en contacto el soporte, en donde los ácidos nucleicos son complementarios a por lo menos 20, 50, 100, 200, 350, o más bases de MRNA de un gen asociado con un fenotipo de células B activado en un NHL y un medio para detectar la expresión del MRNA en una muestra biológica. En una modalidad, el gen asociado con el genotipo de células B activo se selecciona del grupo que consiste en IRF4/MUM1, FOXP1, CARD 11 y BLIMP/PDRM1.

En una modalidad, se proporciona un kit útil para predecir la probabilidad de un tratamiento efectivo NHL o para monitorear la efectividad de un tratamiento con 3-(4-amino-l-oxo-l , 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina -2 , 6-diona . El kit comprende un soporte sólido y un medio para detectar la expresión de NF- ? en una muestra biológica. En una modalidad, la muestra biológica es un cultivo celular o muestra de tejido. En una modalidad, la muestra biológica es una muestra de las células tumorales. En otra modalidad, la muestra biológica es una biopsia de nodulo linfático, biopsia de médula ósea, o una muestra de sangre periférica de las células tumorales. En una modalidad, la muestra biológica es una muestra de sangre. En una modalidad, el NHL es DLBCL.

En ciertas modalidades, los kits proporcionado en este documento emplean medios para detectar la expresión de un biomarcador cuantitativa por PCR en tiempo real (QT-PCR) , microdisposición, citometria de flujo o inmunofluorescencia . En otras modalidades, la expresión del biomarcador se mide por ELISA basadas en metodologías u otros métodos similares conocidos en la técnica.

El mRNA adicional y técnicas de expresión de proteínas puede ser usado en relación con los procedimientos y kits proporcionados en este documento, por ejemplo hibridación de ADNc y métodos de disposición de perlas citométricas .

En una modalidad, en este documento se proporciona un kit para predecir la respuesta del tumor al tratamiento con 3- ( 4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2,6-diona en un paciente con linfoma no Hodgkin, que comprende : (i) un soporte sólido; y (ii) un medio para detectar la expresión de un biomarcador de un fenotipo de linfoma no Hodgkin de células B activo en una muestra biológica.

En una modalidad, el biomarcador es NF-KB.

En una modalidad, el biomarcador es un gen asociado con el fenotipo de células B activado y se selecciona del grupo que consiste en IRF4/MUM1, F0XP1, CARD 11 y BLIMP/PDRM1.

En los métodos particulares de la invención, una 3-(4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona se administra en combinación con una terapia convencional utilizado para tratar, prevenir o controlar el cáncer. Los ejemplos de dichas terapias convencionales incluyen, pero no se limitan a, cirugía, quimioterapia, radioterapia, terapia hormonal, terapia biológica e inmunoterapia .

También se proporcionan en este documento las composiciones farmacéuticas, formas de dosificación unitaria individuales, los regímenes de dosificación y kits que comprenden 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona, o una sal, solvato, hidrato, estereoisómero, clatrato, o profármaco farmacéuticamente aceptables del mismo y un segundo agente activo, o adicional. Los segundos agentes activos incluyen combinaciones especificas, o "cocteles" de fármacos.

En algunas modalidades, los métodos para tratar, prevenir y/o manejar linfornas proporcionados en este documento pueden ser utilizados en pacientes que no han respondido al tratamiento estándar. En una modalidad, el linfoma sufre de recaída, es refractario o resistente a la terapia convencional.

En otras modalidades, los métodos para tratar, prevenir y/o manejar los linfornas proporcionados en este documento pueden usarse en pacientes sin tratamiento previo, es decir, pacientes que aún no han recibido tratamiento.

En algunas modalidades, 3- ( 4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona, o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o hidrato se administra en combinación o alternancia con una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más agentes activos adicionales. En una modalidad, el agente activo adicional se selecciona del grupo que consiste de un agente alquilante, un análogo de adenosina, un glucocorticoide, un inhibidor de quinasa, un inhibidor de SYK, un inhibidor de PDE3, un inhibidor de PDE7, doxorrubicina, clorambucilo, vincristina, bendamustina, forskolina, rituximab, o una combinación de los mismos .

En una modalidad, el agente activo adicional es rituximab.

En una modalidad, el glucocorticoide es dexametasona o hidrocortisona.

En una modalidad, 3- ( 4 -amino-l-oxo-1 , 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona se administra en una cantidad de aproximadamente 5 a aproximadamente 50 mg por día .

En una modalidad, 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona se administra en una cantidad de aproximadamente 5 a aproximadamente 25 mg por día .

En otra modalidad, 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2, 6-diona se administra en una cantidad de aproximadamente 5, 10, 15, 25, 30 ó 50 mg por día .

En otra modalidad, 10 o 25 mg de 3- (4-amino-l-oxo-1, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona se administra por cada día.

En una modalidad, 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona se administra dos veces por día.

En una modalidad, 3- ( 4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona se administra oralmente.

En una modalidad, 3- ( 4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona se administra en una cápsula o tableta.

En una modalidad, 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona se administra durante 21 dias, seguido por siete días de descanso en un ciclo de 28 días .

También se proporcionan en este documento son composiciones farmacéuticas {por ejemplo, las formas individuales de dosificación unitaria) que se pueden utilizar en los métodos descritos en la presente. Las composiciones farmacéuticas particulares comprenden 3- ( 4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona, o una sal, solvato o hidrato farmacéuticamente aceptable y un segundo agente activo . 5.1 Definiciones Como se usa en la presente y a menos que se especifique lo contrario, los términos "tratar", "tratando" y "tratamiento" se refieren a una acción que se produce mientras un paciente está sufriendo de cáncer especificado, lo que reduce la gravedad del cáncer, o retarda o retrasa la progresión del cáncer.

El término "sensibilidad" y "sensible" cuando se hace con referencia a tratamiento con el compuesto es un término relativo que se refiere al grado de eficacia del compuesto en la pérdida o disminución del progreso de un tumor o enfermedad que se esté tratando. Por ejemplo, el término "aumento de la sensibilidad" cuando se utiliza con referencia al tratamiento de una célula o tumor en relación con un compuesto se refiere a un aumento de, al menos, un 5% más, o, en la eficacia del tratamiento del tumor.

Como se usa en la presente y a menos que se especifique lo contrario, el término "cantidad terapéuticamente efectiva" de un compuesto es una cantidad suficiente para proporcionar un beneficio terapéutico en el tratamiento o manejo de un cáncer, o para retrasar o minimizar uno o más síntomas asociados con presencia del cáncer. Una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto significa una cantidad de agente terapéutico, solo o en combinación con otras terapias, que proporciona un beneficio terapéutico en el tratamiento o manejo del cáncer. El término "cantidad terapéuticamente efectiva" puede abarcar una cantidad que mejora la terapia general, reduce o evita síntomas o causas de cáncer, o aumenta la eficacia terapéutica de otro agente terapéutico.

Como se usa en la presente, una "respuesta tumoral efectiva del paciente" se refiere a cualquier incremento en el beneficio terapéutico para el paciente. Una "respuesta tumoral efectiva del paciente" puede ser, por ejemplo, un 5%, 10%, 25%, 50%, o 100% de disminución en la tasa de progreso del tumor. Una "respuesta tumoral efectiva del paciente" puede ser, por ejemplo, un 5%, 10%, 25%, 50%, o 100% de disminución en los síntomas físicos de un cáncer. Una "respuesta tumoral efectiva del paciente" puede ser también, por ejemplo, un 5%, 10%, 25%, 50%, 100%, 200%, o más de aumento en la respuesta del paciente, medida por cualquier adecuado medios, tales como la expresión de genes, los recuentos de células, resultados de prueba, etc.

El término "probabilidad" se refiere generalmente a un aumento de la probabilidad de un evento. El término "probabilidad" cuando se usa en referencia a la eficacia de una respuesta tumoral paciente generalmente contempla una mayor probabilidad de que la tasa de progreso del tumor o crecimiento de células tumorales se reducirá. El término "probabilidad" cuando se usa en referencia a la eficacia de una respuesta tumoral paciente también puede significar el aumento general de indicadores, tales como el Sr. A o expresión de la proteína, que pueden evidenciar un aumento en el progreso en el tratamiento del tumor.

El término "predecir" significa generalmente para determinar o informar con anticipación. Cuando se usa para "predecir" la eficacia de un tratamiento contra el cáncer, por ejemplo, el término "predecir" puede significar que la probabilidad de que el resultado del tratamiento del cáncer se puede determinar, en primer lugar, antes de que el tratamiento haya comenzado, o antes del periodo de tratamiento haya progresado considerablemente.

El término "monitor", como se usa en la presente, se refiere generalmente a la vigilancia, supervisión, regulación, observación, o seguimiento de una actividad. Por ejemplo, el término "control de la eficacia de un compuesto" se refiere al seguimiento de la eficacia en el tratamiento de un cáncer en un paciente o en un cultivo de células de tumor. De manera similar, el "seguimiento", cuando se usa en relación con el cumplimiento del paciente ya sea individualmente, o en una prueba clínica, se refiere al seguimiento o la confirmación de que el paciente está realmente teniendo el compuesto inmunomodulador probado como se prescribe. El seguimiento se puede realizar, por ejemplo, siguiendo la expresión de mRNA o biomarcadores proteicos.

Una mejora en el cáncer o enfermedad relacionada con el cáncer puede ser caracterizada como una respuesta completa o parcial. "La respuesta completa" se refiere a la ausencia de la enfermedad clínicamente detectable con la normalización de los estudios radiográficos anormales anteriormente, la médula ósea y el líquido cerebroespinal (LCR) o mediciones de proteína monoclonal anormal. La "respuesta parcial" se refiere a al menos aproximadamente un 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, o 90% de disminución de toda la carga tumoral mensurable (es decir, el número de células malignas presentes en el sujeto, o la mayor medida de las masas tumorales o la cantidad de proteina monoclonal anormal) en ausencia de nuevas lesiones. El término "tratamiento" contempla tanto una respuesta completa como parcial .

"Tumor", tal como se utiliza en la presente, se refiere a todo el crecimiento celular neoplásico y proliferación ya sea maligno o benigno y todas las células pre-cancerosas y cancerosas y tejidos.

"Neoplásico", como se usa en la presente, se refiere a cualquier forma de crecimiento celular desregulado o no regulado ya sea maligno o benigno, resultando en un crecimiento anormal de tejido. Asi, "las células neoplásicas" incluyen las células malignas y benignas con el crecimiento celular desregulado o no regulado.

Los términos "cáncer" y "canceroso" se refieren o describen la condición fisiológica en mamíferos que se caracteriza típicamente por un crecimiento celular no regulado. Ejemplos de cáncer incluyen, pero no se limitan a, tumores transmitidos por la sangre (por ejemplo, mieloma múltiple linfoma y leucemia) y tumores sólidos.

El término "refractario o resistente" se refiere a una circunstancia en la que los pacientes, incluso después de tratamiento intensivo, tienen células cancerosas residuales (por ejemplo, leucemia o linfoma de. células) en su sistema linfático, sangre y/o tejidos que forman la sangre (por ejemplo, médula ósea) .

Como se usa en la presente, los términos "polipéptido" y "proteína" tal como se utiliza en la presente de forma intercambiable, se refieren a un polímero de aminoácidos de tres o más aminoácidos en una amplia serie, unidos a través de enlaces peptídicos. El término "polipéptido" incluye proteínas, fragmentos de proteínas, análogos de proteínas, oligopéptidos y similares. El término polipéptido como se usa en este documento también puede referirse a un péptido. Los aminoácidos que forman el polipéptido pueden ser de origen natural, o pueden ser sintéticos. El polipéptido puede ser purificado a partir de una muestra biológica.

El término "anticuerpo" se usa en la presente en el sentido más amplio y cubre completamente anticuerpos ensamblados, fragmentos de anticuerpos que retienen la capacidad de unirse específicamente al antígeno (por ejemplo, Fab, F(ab')2, Fv y otros fragmentos), solo anticuerpos de cadena, diacuerpos, quimeras de anticuerpos, anticuerpos híbridos, anticuerpos biespecíficos, anticuerpos humanizados y similares. El término "anticuerpo" abarca tanto los anticuerpos policlonales como monoclonales.

El término "expresado" o "expresión" como se usa en la presente se refiere a la transcripción de un gen para dar una molécula de ARN de ácido nucleico al menos en parte complementaria a una región de una de las dos hebras de ácido nucleico del gen. El término "expresado" o "expresión" como se usa en el presente documento también se refiere a la traducción de la molécula de ARN para dar una proteína, un polipéptido o una porción del mismo.

Un mRNA que es "regulado ascendentemente" se incrementa generalmente a un tratamiento o condición dada. Un mRNA que es "regulado descendentemente" se refiere generalmente a una disminución en el nivel de expresión del MRNA en respuesta a un tratamiento o condición dada. En algunas situaciones, el nivel de mRNA puede permanecer invariable en un tratamiento o condición dada.

Un MRNA de una muestra del paciente puede ser "regulado ascendentemente" cuando se trata con un compuesto inmunomodulador, en comparación con un control no tratado. Esta regulación ascendente puede ser, por ejemplo, un aumento de alrededor de 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 90%, 100%, 200%, 300%, 500%, 1000%, 5000% o más del nivel de mRNA de control comparativo.

Alternativamente, un MRNA puede ser "regulado descendentemente", o se expresa en un nivel inferior, en respuesta a la administración de ciertos compuestos inmunomoduladores u otros agentes. Un mRNA regulado descendentemente, por ejemplo, puede estar presente a un nivel de aproximadamente 99%, 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 1% o menos del nivel de MRNA de control comparativo .

Asimismo, el nivel de un biomarcador de polipéptido o proteina de una muestra del paciente se puede aumentar cuando se trata con un compuesto inmunomodulador, en comparación con un control no tratado. Este aumento puede ser de aproximadamente 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 90%, 100%, 200%, 300%, 500%, 1000%, 5000% o más del nivel de control de la proteina comparativa.

Alternativamente, el nivel de un biomarcador de proteina se puede disminuir en respuesta a la administración de ciertos compuestos inmunomoduladores u otros agentes. Esta disminución puede ser, por ejemplo, presente a un nivel de aproximadamente 99%, 95%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%), 20%) , 10%) , 1%) o menos del nivel de control de la proteina comparativa .

Los términos "determinar", "medir", "evaluar", "evaluación" y "prueba", como se usa en este documento se refieren en general a cualquier tipo de medida, e incluyen la determinación de si un elemento está presente o no. Estos términos incluyen determinaciones cuantitativas y/o cualitativas. La evaluación puede ser relativa o absoluta. "Evaluación de la presencia de" puede incluir la determinación de la cantidad de algo presente, asi como la determinación de si está presente o ausente.

Los términos "ácido nucleico" y "polinucleótido" se utilizan indistintamente en la presente para describir un polímero de cualquier longitud compuesta de nucleótidos, por ejemplo, desoxirribonucleótidos o ribonucleótidos , o compuestos producidos sintéticamente, que pueden hibridarse con los ácidos nucleicos de origen natural de una manera específica de secuencia análoga a la de dos ácidos nucleicos de origen natural, por ejemplo, pueden participar en las interacciones de apareamiento de bases de Watson-Crick. Tal como se utiliza en la presente en el contexto de una secuencia de polinucleótido, el término "bases" (o "base") es sinónimo de "nucleótidos" (o "nucleótido" ) , es decir, la subunidad de monómero de un polinucleótido. Los términos "nucleósido" y "nucleótido" se pretende que incluyan aquellos porciones que contienen no sólo la purina conocido y bases de pirimidina, sino también otras bases heterocíclicas que han sido modificadas. Tales modificaciones incluyen purinas o pirimidinas metiladas, purinas o pirimidinas aciladas, ribosas alquiladas u otros heterociclos . Además, los términos "nucleósido" y "nucleótido" incluyen aquellos porciones que contienen no sólo ribosa convencional y azúcares desoxirribosa, sino que otros azúcares también. Los nucleósidos o nucleótidos modificados también incluyen modificaciones en el resto de azúcar, por ejemplo, en los que uno o más de los grupos hidroxilo están sustituidos con átomos de halógeno o grupos alifáticos, o están funcionalizadas como éteres, aminas, o similares. Los "análogos" se refieren a moléculas que tienen características estructurales que son reconocidas en la literatura como miméticos, derivados, que tienen estructuras análogas, u otros términos similares, e incluyen, por ejemplo, los polinucleótidos de la incorporación de nucleótidos no naturales, nucleótidos miméticos tales como 2'- nucleósidos modificados, ácidos nucleicos peptídicos, fosfonatos oligoméricos de nucleósidos y cualquier polinucleótido que se ha añadido a grupos sustituyentes , tales como grupos protectores o porciones de unión.

El término "complementario" se refiere a la unión específica entre polinucleótidos basados en las secuencias de los polinucleótidos. Como se usa en la presente, un polinucleótido primero y un segundo polinucleótido que son complementarias si se unen entre sí en una prueba de hibridación en condiciones rigurosas, por ejemplo, si producen un nivel dado de señal o es detectable en una prueba de hibridación. Las porciones de los polinucleótidos son complementarias entre si al seguir reglas convencionales de emparejamiento de bases, por ejemplo, los pares A con T (o U) y pares de G con C, aunque pueden estar presentes pequeñas regiones {v.gr., menos de aproximadamente 3 bases) de desajuste, inserción, o eliminación de secuencia.

La "identidad de secuencia" o "identidad" en el contexto de dos secuencias de ácido nucleico se refiere a los residuos en las dos secuencias que son iguales cuando se alinean para una correspondencia máxima en una ventana de comparación especifica y puede tomar en consideración las adiciones, eliminaciones y sustituciones.

El término "identidad sustancial" u "homólogo" en sus diversas formas gramaticales en el contexto de polinucleótidos generalmente significa que un polinucleótido comprende una secuencia que tiene una identidad deseada, por ejemplo, al menos 60% de identidad, preferiblemente al menos 70% de identidad de secuencia, más preferiblemente al menos 80%, aún más preferiblemente al menos 90%, e incluso más preferiblemente al menos 95%, en comparación con una secuencia de referencia. Otra indicación de que las secuencias de nucleótidos son sustancialmente idénticas es si dos moléculas hibridan entre si en condiciones rigurosas.

Los términos "aislado" y "purificado" se refieren al aislamiento de una sustancia (por ejemplo, MRNA o proteina) de tal manera que la sustancia comprende una porción sustancial de la muestra en la que reside, es decir, mayor que la sustancia se encuentra normalmente en su estado natural o un-estado aislado. Típicamente, una parte sustancial de la muestra comprende, por ejemplo, mayor que 1%, 2% mayor que, mayor que 5%, mayor que 10%, mayor que 20%, mayor que 50%, o más, por lo general hasta aproximadamente 90%-100% de la muestra. Por ejemplo, una muestra de MRNA aislado puede comprender típicamente al menos aproximadamente 1% mRNA total. Las técnicas para purificar polinucleótidos son bien conocidos en la técnica e incluyen, por ejemplo, electroforesis en gel, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de afinidad, separación de flujo y la sedimentación según la densidad.

El término "muestra" como se utiliza en la presente se refiere a un material o mezcla de materiales, por lo general, aunque no necesariamente, en forma de fluido, que contiene uno o más componentes de interés.

"Muestra biológica" como se utiliza en la presente, se refiere a una muestra obtenida de un sujeto biológico, incluida la muestra de tejido biológico o de origen líquido, obtenido, recopilado, o recolectado in vivo o in situ. Una muestra biológica también incluye muestras de una región de un sujeto biológico que contiene células precancerosas o cáncer o tejidos. Dichas muestras pueden ser, pero no se limitan a, órganos, tejidos, fracciones y células aisladas de un mamífero. Ejemplos de muestras biológicas incluyen, pero no se limitan a lisado celular, un cultivo celular, una línea celular, un tejido, el tejido oral, tejido gastrointestinal, un órgano, un orgánulo, un fluido biológico, una muestra de sangre, una muestra de orina, una muestra de piel y similares. Muestras biológicas preferidas incluyen pero no se limitan a la sangre entera, parcialmente purificado sangre, PBMCs, biopsias de tejidos y similares.

El término "agente de captura", como se usa en la presente, se refiere a un agente que se une a un mARN o proteína a través de una interacción que es suficiente para permitir que el agente de atar y concentrar el mARN o proteína a partir de una mezcla homogénea.

El término "sonda", como se usa en la presente, se refiere a un agente de captura que se dirige a una secuencia objetivo específico de biomarcador de mARN. En consecuencia, cada sonda de una sonda conjunto tiene un biomarcador de MRNA objetivo respectivo. Un duplo de MRNA de sonda/objetivo es una estructura formada por la hibridación de una sonda a su biomarcador de MRNA objetivo.

El término "ácido nucleico" o "sonda de oligonucleótido" se refiere a un ácido nucleico capaz de unirse a un ácido nucleico diana de secuencia complementaria, tales como el biomarcador de MRNA dispuesto en el mismo, a través de uno o más tipos de enlaces químicos, normalmente a través de apareamiento de bases complementarias, por lo general mediante la formación de enlaces de hidrógeno. Como se usa en la presente, una sonda puede incluir natural {por ejemplo, A, G, C, o T) o bases modificadas (7-desazaguanosina, inosina, etc.). Además, las bases en una sonda pueden estar unidas por un enlace distinto de un enlace de fosfodiéster, con tal de que no interfiera con la hibridación. Se entenderá por un experto en la técnica que las sondas pueden unir secuencias diana que carecen de complementariedad completa con la secuencia de la sonda dependiendo de la rigurosidad de las condiciones de hibridación. Las sondas están preferiblemente marcadas directamente con isótopos, por ejemplo, cromóforos, lumiforos, cromógenos, o indirectamente marcado con biotina a la que más tarde un complejo de estreptavidina puede unirse. Por prueba de la presencia o ausencia de la sonda, se puede detectar la presencia o ausencia de un biomarcador de MRNA diana de interés.

El término "condiciones rigurosas de prueba" se refiere a condiciones que son compatibles para producir pares de unión de ácidos nucleicos, por ejemplo, sondas y mRNAs diana, de complementariedad suficiente para proporcionar el nivel deseado de especificidad en el prueba mientras que siendo generalmente incompatibles con la formación de pares de unión entre los miembros de unión de complementariedad suficiente para proporcionar la especificidad deseada. Las condiciones rigurosas plazo de prueba generalmente se refiere a la combinación de condiciones de hibridación y lavado.

Una "etiqueta" o un "resto detectable", en referencia a un ácido nucleico, se refiere a una composición que, cuando se enlaza con un ácido nucleico, hace que el ácido nucleico detectable, por ejemplo, por medios espectroscópicos, fotoquímicos, bioquímicos, inmunoquimicos, o químicas. Las etiquetas ilustrativas incluyen, pero no se limitan a, isótopos radiactivos, perlas magnéticas, perlas metálicas, partículas coloidales, colorantes fluorescentes, enzimas, biotina, digoxigenina, haptenos y similares. Un "ácido nucleico marcado o sonda de oligonucleótido" es generalmente uno que está unido, covalentemente, a través de un ligador o un enlace químico, o no covalentemente, a través de enlaces iónicos, fuerzas de Van der Waals, atracciones electrostáticas, interacciones hidrófobas o enlaces de hidrógeno, a una etiqueta de tal manera que la presencia del ácido nucleico o la sonda puede ser detectada mediante la detección de la presencia del marcador unido al ácido nucleico o la sonda.

Los términos "reacción en cadena de la polimerasa" o "PCR", como se usa en la presente se refiere generalmente a un procedimiento en el que pequeñas cantidades de un ácido nucleico, ARN y/o ADN, se amplifican como se describe, por ejemplo, en la Patente de E.U.A. No. 4,683,195 de Mullis. Generalmente, la información de secuencia de los extremos de la región de interés o más necesita estar disponible, de tal manera que se pueden diseñar los cebadores de oligonucleótidos; estos cebadores serán idénticos o similares en secuencia a cadenas opuestas del molde a amplificar. El nucleótido 5' termínale de los dos cebadores pueden coincidir con los extremos del material amplificado. La PCR puede utilizarse para amplificar secuencias de ARN específicas, secuencias de ADN específicas de ADN genómico total y ADNc transcrito de ARN celular total, bacteriófago o secuencias de plásmido, etc. véase en general Mullis et al., Cold Spring Harbor Symp. Quant . Biol., 51: 263 (1987); Erlich, ed., PCR Technology, (Stockton Press, NY, 1989) .

El término "número de ciclo" o "CT" cuando se usa en la presente en referencia a los métodos de PCR, se refiere al número de ciclo de PCR en la que el nivel de fluorescencia pasa de un nivel determinado umbral dado. La medición de CT se puede utilizar, por ejemplo, a niveles aproximados de mRNA en una muestra original. La medición de CT se utiliza a menudo en términos de "DCT" o la "diferencia en la CT" puntuación, cuando la CT de un ácido nucleico que se resta de la CT de otro ácido nucleico.

Como se usa en la presente y a menos que se indique lo contrario, el término "ópticamente puro" significa una composición que comprende un isómero óptico de un compuesto y está sustancialmente libre de otros isómeros de dicho compuesto. Por ejemplo, una composición ópticamente pura de un compuesto que tiene un centro quiral será sustancialmente libre del enantiómero opuesto del compuesto. Una composición ópticamente pura de un compuesto que tiene dos centros quirales será sustancialmente libre de otros diastereómeros del compuesto. Un compuesto ópticamente puro típico comprende más de aproximadamente 80% en peso de un enantiómero del compuesto y menos de aproximadamente 20% en peso de otros enantiómeros del compuesto, más preferiblemente más de aproximadamente 90% en peso de un enantiómero del compuesto y menos de aproximadamente 10% en peso de los otros enantiómeros del compuesto, incluso más preferiblemente mayor que aproximadamente 95% en peso de un enantiómero del compuesto y menos de aproximadamente 5% en peso de los otros enantiómeros del compuesto, más preferiblemente mayor de aproximadamente 97% en peso de un enantiómero del compuesto y menos de aproximadamente 3% en peso de los otros enantiómeros del compuesto y lo más preferiblemente mayor que aproximadamente 99% en peso de un enantiómero del compuesto y menos de aproximadamente 1% en peso de los otros enantiómeros del compuesto.

Como se usa en el presente documento y a menos que se indique lo contrario, el término "sal farmacéuticamente aceptable" abarca no tóxico ácido y sales de adición de base del compuesto a la que el término se refiere. No tóxicos aceptables sales de adición de ácido incluyen las derivadas de ácidos orgánicos e inorgánicos o bases conocidos en la técnica, que incluyen, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido metanosulfónico, ácido acético, ácido tartárico, láctico, ácido succínico, ácido cítrico, ácido málico, ácido maleico, ácido sórbico, ácido aconítico, ácido salicílico, ácido itálico, ácido embólico, ácido enántico y similares.

Los compuestos que son de naturaleza ácida son capaces de formar sales con diversas bases farmacéuticamente aceptables. Las bases que se pueden usar para preparar sales de bases farmacéuticamente aceptables de tales compuestos ácidos son aquellos que forman sales no tóxicas de adición de base, es decir, sales que contienen cationes farmacológicamente aceptables tales como, pero no limitado a, metal alcalino o sales de metales alcalinotérreos y las sales de calcio, magnesio, sodio o potasio en particular. Las bases orgánicas adecuadas incluyen, pero no están limitados a, N,N-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilendiamina, meglumaine (N-metilglucamina) , lisina y procaína .

Como se usa en el presente documento y a menos que se indique lo contrario, el término "solvato" significa un compuesto proporcionado en este documento o una sal del mismo, que incluye además una cantidad estequiométrica o no estequiométrica de disolvente unido por fuerzas no covalentes intermoleculares. Cuando el disolvente es agua, el solvato es un hidrato.

Como se usa en el presente documento y a menos que se indique lo contrario, el término "estereoméricamente puro" significa una composición que comprende un estereoisómero de un compuesto y está sustancialmente libre de otros estereoisómeros de este compuesto. Por ejemplo, una composición estereoméricamente pura de un compuesto que tiene un centro quiral será sustancialmente libre del enantiómero opuesto del compuesto. Una composición estereoméricamente pura de un compuesto que tiene dos centros quirales estará sustancialmente libre de otros diastereómeros del compuesto. Un compuesto estereoméricamente puro típico comprende más de aproximadamente 80% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente 20% en peso de otro estereoisómero del compuesto, más preferiblemente más de aproximadamente 90% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente 10% en peso de los otros estereoisómeros del compuesto, aún más preferiblemente mayor que aproximadamente 95% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente 5% en peso de los otros estereoisómeros del compuesto y lo más preferiblemente mayor que aproximadamente 97% en peso de un estereoisómero del compuesto y menos de aproximadamente 3% en peso de los otros estereoisómeros del compuesto. Como se usa en el presente documento y a menos que se indique lo contrario, el término "estereoméricamente enriquecido" significa una composición que comprende más de aproximadamente 60% en peso de un estereoisómero de un compuesto, preferiblemente más de aproximadamente 70% en peso, más preferiblemente mayor que aproximadamente 80% en peso de un estereoisómero de un compuesto. Como se usa en el presente documento y a menos que se indique lo contrario, el término "enantioméricamente puro" significa una composición estereoméricamente pura de un compuesto que tiene un centro quiral. Asimismo, el término "estereoméricamente enriquecido" significa una composición estereoméricamente enriquecido de un compuesto que tiene un centro quiral.

Cabe señalar que si hay una discrepancia entre una estructura representada y un nombre dado de la estructura, la estructura representada tendrá más peso. Además, si no están indicadas la estereoquímica de una estructura o una porción de una estructura, por ejemplo, con negritas o líneas discontinuas, se debe interpretar la estructura o porción de la estructura abarca todos los estereoisómeros de la misma.

Se utilizará la práctica de las modalidades proporcionadas en la presente, salvo que se indique lo contrario, las técnicas convencionales de biología molecular, microbiología, e inmunología, que están dentro de la experiencia de los que trabajan en la técnica. Tales técnicas se explican completamente en la literatura. Ejemplos de textos particularmente adecuados para consulta incluyen los siguientes: Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning, A Laboratory Manual (2d ed. ) ; DN Glover, ed. (1985) DNA Cloning, Volúmenes I y II, MJ Gait, ed. (1984) Oligonucleotide Síntesis; B.D. Hames y SJ. Higgins, eds. (1984) Nucleic Acid Hybridization; B.D. Hames & S.J. Higgins, eds. (1984) Transcripción y traducción; RI Freshney, ed. (1986) Cultivo de células animales, células inmovilizadas y enzimas (IRL Press, 1986) , Métodos inmunoquímicos en Biología Celular y Molecular (Academic Press, Londres) ; Scopes (1987) Protein Purification: Principios y Práctica (2a edición, Springer Verlag, NY.) Y DM Weir y C. C. Blackwell, eds. (1986) Handbook of Experimental Immunology, volúmenes I-IV. 5.2 Biomarcadores En la presente se proporcionan métodos relacionados con el uso de mRNA, o proteínas como biomarcadores para determinar la efectividad de la terapia del cáncer. Los niveles de mRNA o de proteína se pueden utilizar para determinar si es probable que un agente particular tenga éxito en el tratamiento de un tipo especifico de cáncer, por ejemplo, linfoma no Hodgkin.

Un marcador o "biomarcador"biológico es una sustancia cuya detección indica un estado biológico particular, tal como, por ejemplo, la presencia de cáncer. En algunas modalidades, los biomarcadores puede ser determinados individualmente, o varios biomarcadores se pueden medir simultáneamente .

En algunas modalidades, un "biomarcador" indica un cambio en el nivel de expresión de MRNA que se puede correlacionar con el riesgo o progresión de una enfermedad, o con la susceptibilidad de la enfermedad para un tratamiento dado. En algunas modalidades, el biomarcador es un ácido nucleico, tal como un mRNA o cDNA.

En modalidades adicionales, un "biomarcador" indica un cambio en el nivel de expresión del polipéptido o proteina que pueden estar en correlación con el riesgo, susceptibilidad al tratamiento, o la progresión de una enfermedad. En algunas modalidades, el biomarcador puede ser un polipéptido o proteina, o un fragmento del mismo. El nivel relativo de las proteínas específicas se puede determinar por métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, los métodos basados en anticuerpos, tales como una inmunotransferencia, ligado a enzimas (ELISA) , u otros métodos pueden ser utilizados . 5.3 Segundos agentes activos La 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona se puede combinar con otros compuestos farmacológicamente activos ("segundos agentes activos") en los métodos y composiciones proporcionado en la presente. Se cree que ciertas combinaciones actúan de forma sinérgica en el tratamiento de determinados tipos de cáncer. Segundos agentes activos pueden ser moléculas grandes (por ejemplo, proteínas) o moléculas pequeñas de (por ejemplo, inorgánicos sintéticos, organometálico, o moléculas orgánicas) .

Ejemplos de agentes activos de molécula grande incluyen, pero no están limitados a, factores de crecimiento hematopoyéticos, citoquinas y anticuerpos monoclonales y policlonales . Los agentes típicos molécula activa grandes son moléculas biológicas, tales como de origen natural o artificialmente proteínas. Las proteínas que son particularmente útiles en esta invención incluyen proteínas que estimulan la supervivencia y/o proliferación de células precursoras hematopoyéticas y células hematopoyéticas inmunológicamente activos in vitro o in vivo. Otros estimulan la división y diferenciación de progenitores eritroides comprometidos en células in vitro o in vivo. Las proteínas particulares incluyen, pero no se limitan a: interleucinas, tales como IL-2 (incluyendo IL-II recombinante ("rIL2") y canaripox IL-2) , IL-10, IL-12, e IL 18-interferones, ; tales como el interferón alfa-2a, interferón alfa-2b, interferón alfa-nl, interferón alfa-n3, interferón beta-la, e interferón gamma-Ib; GM-CF y GM-CSF y EPO.

Las proteínas particulares que se pueden utilizar en los métodos y composiciones proporcionados en este documento incluyen, pero no se limitan a: Filgrastim, que se vende en los Estados Unidos bajo el nombre comercial de Neupogen® (Amgen, Thousand Oaks, CA) ; sargramostim, que se vende en los Estados Unidos bajo el nombre comercial Leukine® (Immunex, Seattle, WA) y EPO recombinante, que se vende en los Estados Unidos bajo el nombre comercial Epogen® (Amgen, Thousand Oaks, CA) .

Las formas recombinantes y mutadas de GM-CSF se pueden preparar como se describe en las patentes de E.U.A. No. 5,391,485; 5,393,870; y 5,229,496, todas las cuales se incorporan en la presente por referencia. Las formas recombinantes y mutadas de G-CSF se pueden preparar como se describe en las patentes de E.U.A. No. 4,810,643; 4,999,291; 5,528,823; y 5,580,755, todas las cuales se incorporan en la presente por referencia.

Los anticuerpos que se pueden utilizar en combinación con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona incluyen anticuerpos monoclonales y policlonales .

Ejemplos de anticuerpos incluyen, pero no se limitan a, trastuzumab (Herceptin®) , rituximab (Rituxan®) , bevacizumab (Avastin™) , pertuzumab (Omnitarg™) , tositumomab (Bexxar®) , edrecolomab (Panorex®) y G250. Los compuestos de la invención también pueden combinarse con, o usarse en combinación con, anticuerpos anti-TNF-a.

Agentes de moléculas grandes activas pueden administrarse en forma de vacunas anti-cancerigenas . Por ejemplo, vacunas que secretan, o causan la secreción de, citoquinas tales como IL-2, G-CSF y GM-CSF se pueden utilizar en los métodos, composiciones farmacéuticas y kits proporcionados en la presente. Véase, por ejemplo, Emens, L.A., et al, Curr. Opinión Mol. Ther. 3 (1) :77-84 (2001).

Los segundos agentes activos que son moléculas pequeñas también se pueden utilizar en combinación con 3-(4-amino-l-oxo-1, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona como se describe en la presente. Ejemplos de agentes activos de moléculas pequeñas segundos incluyen, pero no se limitan a, agentes anticancerosos, antibióticos, agentes inmunosupresores y esteroides.

Ejemplos de agentes anti-cancerigenos incluyen, pero no se limitan a: acivicina; aclarubicina; acodazol clorhidrato; acronina; adocelesina; aldesleucina; altretamina; ambomicina; acetato de ametantrona; amsacrina; anastrozol; antramicina; asparaginasa; asperlina; azacitidina; azetepa; azotomicina; batimastat; benzodepa; bicalutamida; hidrocloruro de bisantreno; bisnafida dimesilato; bizelesina; sulfato de bleomicina; brequinar sodio; bropirimina; busulfan; cactinomicina; calusterona; caracemide; carbetimero; carboplatino; carmustina; carubicina clorhidrato; carzelesina; cedefmgol; celecoxib (inhibidor de COX-2); clorambucilo; cirolemicina; cisplatino; cladribina; mesilato de crisnatol; ciclofosfamida; citarabina; dacarbazina; dactinomicina; clorhidrato de daunorubicina; decitabina; dexormaplatina; dezaguanina; dezaguanina mesilato; diaziquona; docetaxel; doxorrubicina; clorhidrato de doxorubicina; droloxifeno; citrato de droloxifeno; propionato de dromostanolona; duazomicina; edatrexato; clorhidrato de eflornitina; elsamitrucina; enloplatino; enpromato; epipropidina; epirubicina hidrocloruro; erbulozol; esorubicina hidrocloruro; estramustina ; estramustina fosfato de sodio; etanidazol; etopósido; fosfato de etopósido; etoprina; clorhidrato de fadrozol; fazarabina; fenretinida; floxuridina; fosfato de fludarabina; fluorouracilo; flurocitabina; fosquidona; sodio fostriecina; gemcitabina; hidrocloruro de gemcitabina; hidroxiurea; idarrubicina clorhidrato; ifosfamida; ilmofosina; iproplatino; irinotecán; irinotecan clorhidrato; acetato de lanreotida; letrozol, acetato de leuprolida; lometrexol sodio; liarozol; clorhidrato lomustina; clorhidrato de losoxantrona; masoprocol; maitansina; clorhidrato de mecloretamina, acetato de raegestrol, acetato de melengestrol; melfalán; menogaril; mercaptopurina; metotrexato; metotrexato sódico; metoprina; meturedepa; mitindomida; mitocarcina; mitocromina; mitogilina; mitomalcina; mitomicina; mitosper; mitotano; clorhidrato de mitoxantrona, ácido micofenólico; nocodazol; nogalamicina; ormaplatino; oxisuran; paclitaxel; pegaspargasa; peliomicina; pentamustina ; peplomicina sulfato; perfosfamida; pipobromano; piposulfan; clorhidrato de piroxantrona; plicamicina; plomestano; porfimero sódico; porfiromicina; prednimustina; clorhidrato de procarbazina; puromicina; clorhidrato de puromicina; pirazofurina; riboprina; safingol; safmgol clorhidrato; semustina; simtrazeno; esparfosato de sodio; esparsomicina; clorhidrato de espirogermanio; espiromustina ; espiroplatino; estreptonigrina; estreptozocina; sulofenur; talisomicina; tecogalán de sodio; taxotere; tegafur; clorhidrato de teloxantrona; temoporfm; tenipósido; teroxirona; testolactona; tiamiprina; tioguanina; tiotepa; tiazofurina; tirapazamina; citrato de toremifeno, acetato de trestolona; fosfato de triciribina; trimetrexato; trimetrexato; glucuronato; triptorelina; clorhidrato de tubulozol; mostaza de uracilo; uredepa; vapreotida; verteporfina; sulfato de vinblastina, sulfato de vincristina; vindesina; sulfato de vindesina; sulfato de vinepidina; vinglicinato sulfato; sulfato de vinleurosina; tartrato de vinorelbina; sulfato de vinrosidina; sulfato de vinzolidina; vorozol; zeniplatino; zinostatina; e hidrocloruro de zorubicina.

Otros fármacos contra el cáncer incluyen, pero no están limitados a: 20-epi-l, 25 dihidroxivitamina D3, 5-etiniluracilo; abiraterona; aclarubicina; acilfulveno; adecipenol; adozelesina; aldesleucina; ALL-TK antagonistas; altretamine; ambamustina; amidox; amifostina; ácido aminolevulinico; amrubicina; amsacrina; anagrelida; anastrozol; andrografolida; inhibidores de la angiogénesis; antagonista D; G antagonista; antarelix; proteina morfogenética-1 anti-dorsalizina; antiandrógeno, carcinoma prostético; antiestrógeno; antineoplaston; oligonucleótidos antisentido; glicinato de afidicolina; moduladores de genes de apoptosis; reguladores de apoptosis; ácido apurinico; ara-CDP-DL-PTBA; desaminasa de arginina; asulacrina; atamestano; atrimustina; axinastatina 1; axinastatina 2; axinastatina 3; azasetrón; azatoxina; azatirosina; baccatina III derivados; balanol; batimastat; antagonistas de BCR/ABL; benzoclorinas ; benzoilestaurosporina, derivados de beta lactama; beta-aletina; betaclamicina B, ácido betulinico, inhibidor de bFGF; bicalutamida ; bisantreno; bisaziridinilspermina; bisnafida; bistrateno A; bizelesina; breflato; bropirimina; budotitano; butionina sulfoximina; calcipotriol ; calfostina C; derivados de camptotecina; capecitabina; carboxamida-amino-triazol; carboxiamidotriazol; CaRest M3; CARN 700; inhibidor derivado de cartílago; carzelesina; inhibidores de la caseína quinasa (ICOS); castanospermina; cecropina B; cetrorelix; clorinas; cloroquinoxalina sulfonamida; cicaprost; cis-porfirina; cladribina; análogos del clomifeno; clotrimazol ; colismicina A; colismicina B; combretastatina A4; combretastatina analógica; conagenina; crambescidina 816; crisnatol; criptoficina 8; derivados de criptoficina; curacina A; ciclopentantraquinonas ; cicloplatam; ciclosporina A; cipemicina; ocfosfato de citarabina, factor citolítico; citostatina; dacliximab; decitabina; dehidrodidemnina B; deslorelina; dexametasona; dexifosfamida; dexrazoxano; dexverapamil ; diaziquona; didemnina B; didox; dietilnorspermina; dihidro-5-azacitidina; dihidrotaxol 9; dioxamicina; difenil espiromustina; docetaxel; docosanol; dolasetrón; doxifluridina; doxorrubicina; droloxifeno; dronabinol; duocarmicina SA; ebselen; ecomustina; edelfosina; edrecolomab; eflornitina; elemeno; emitefur; epirubicina; epristerida; estramustina analógica; agonistas de estrogenos; antagonistas de estrogenos; etanidazol; etopósido fosfato; exemestano; fadrozol; fazarabina; fenretinida; filgrastim; finasterida; flavopiridol; flezelastina; fluasterona; fludarabina; clorhidrato de fluorodaunorunicina; forfenimex; formestano; fostriecina; fotemustina; texafirina de gadolinio; nitrato de galio; galocitabina ; ganirelix; inhibidores de la gelatinasa; gemcitabina; inhibidores de glutatión; hepsulfam; heregulina; hexametileno bisacetamida; hipericina, ácido ibandrónico, idarubicina; idoxifeno; idramantona; ilmofosina; ilomastat; imatinib (por ejemplo, Gleevec®) , imiquimod; péptidos inmunoestimulantes ; similar a la insulina del inhibidor del receptor del factor de crecimiento-1 ; agonistas de los interferones ; interferones , interleucinas , iobenguano; yododoxorubicina; ipomeanol 4 -; iroplact; irsogladina; isobengazol; isohomohalicondrina B; itasetrón; jasplaquinolida; Kahalalida F; lamelarina-N triacetato; lanreotida; leinamicina; lenograstim; sulfato de lentinan; leptolstatina; letrozol, factor inhibidor de la leucemia; leucocito interferón alfa; leuprolida + estrógeno + progesterona; leuprorelina, levamisol, liarozol; poliamina lineal analógica; disacárido lipofilico péptidos, compuestos lipofilicos platino; lisoclinamida 7; lobaplatino; lombricina; lometrexol; lonidamina; losoxantrona; loxoribina; lurtotecano; texafirina de lutecio; lisofilina; péptidos Uticos; maitansina; mannostatina A; marimastat; masoprocol; maspina; inhibidores de la matrilisina; matriz de inhibidores de la metaloproteinasa ; menogaril; merbarona; meterelina; metioninasa; metoclopramida; inhibidor de IF; mifepristona; miltefosina; milimostim; mitoguazona; mitolactol; análogos de la mitomicina; mitonafida; mitotoxina factor de crecimiento de fibroblastos-saporina; mitoxantroña ; mofaroteno; molgramostim; Erbitux, gonadotropina coriónica humana; monofosforil lipido A + sk de pared celular miobacteriana; mopidamol; agente anticanceroso de mostaza; micaperóxido B; celular micobacteriana extracto de pared; miriaporona, N-acetildinalina; benzamidas N-sustituidas ; nafarelina; nagrestip; naloxona + pentazocina; napavina; nafterpina; nartograstim; nedaplatino; nemorubicina ; ácido neridrónico; nilutamida; nisamicina; moduladores de óxido nítrico; nitróxido antioxidanto; nitrulina; oblimersén (Genasense®) ; 06-bencilguanina; octreotida; oquicenona; oligonucleótidos; onapristona; ondansetrón; ondansetrón; oracina; inductor de citoquinas oral; ormaplatino; osaterona; oxaliplatino; oxaunomicina; paclitaxel; análogos de paclitaxel, derivados de paclitaxel; palauamina; palmitoilrhizoxina; ácido pamidrónico; panaxitriol; panomifeno; parabactina; pazeliptina; pegaspargasa; peldesina; polisulfato de sodio pentosan; pentostatina; pentrozol; perflubrón; perfosfamida; alcohol perililico; fenazinomicina; fenilacetato, inhibidores de fosfatasa; picibanil; clorhidrato de pilocarpina; pirarubicina; piritrexim; placetina A; placetina B, inhibidor del activador del plasminógeno; complejo de platino, compuestos de platino; complejo de platino-triamina; porfímero sódico; porfiromicina; prednisona; bis-acridona de propilo; prostaglandina J2, inhibidores de proteasoma; basado en la proteina modulador inmune; inhibidor de la proteina quinasa C; inhibidores de proteina cinasa C, microalgal, inhibidores de proteina tirosina fosfatasa; inhibidores de purina nucleósido fosforilasa; purpurinas; pirazoloacridina; polioxietileno hemoglobina piridoxilada conjugado; antagonistas de raf; raltitrexed; ramosetron; inhibidores de ras farnesil proteina transferasa; inhibidores de ras; ras-GAP inhibidor; reteliptina desmetilada; renio Re 186 etidronato; rizoxina; ribozimas; retinamida RII; rohituquina; romurtida; roquinimex; rubiginona Bl; ruboxil; safmgol; saintopina; SarCNU; sarcofitol A; sargramostim; miméticos de Sdi 1; semustina; inhibidor 1 derivado de la senescencia; oligonucleótidos sentido; inhibidores de la transducción de señales; sizofiran; sobuzoxano; borocaptato de sodio; fenilacetato de sodio; solverol; proteina de unión para la somatomedina; sonermina; ácido esparfósico; espicamicina D; espiromustina; esplenopentina; espongistatina 1; escualamina; estipiamida, inhibidores de estromelisina ; sulfinosina; antagonistas superactivos de los péptidos intestinales vasoactivos; suradista; suramina; swainsonina; talimustina; metioduro de tamoxifeno; tauromustina; tazaroteno; tecogalán sodio; tegafur; telurapirilio; inhibidores de la telomerasa; temoporfm; tenipósido; tetraclorodecaóxido; tetrazomina; taliblastina; tiocoralina; trombopoyetina; mimético de la trombopoyetina; timalfasina ; agonista del receptor de timopoyetina; timotrinano, hormona estimulante de la tiroides; etil etiopurpurina estaño; tirapazamina; bicloruro de titanoceno; topsentina; toremifeno; inhibidores de la traducción; tretinoina; triacetiluridina; triciribina; trimetrexato; triptorelina; tropisetrón; turosterida; inhibidores de la tirosina quinasa; tirfostinas; inhibidores de la UBC; ubenimex; derivado del seno urogenital factor inhibidor del crecimiento, los antagonistas del receptor de uroquinasa; vapreotida; variolina B; velaresol; veramina; verdinas; verteporfina; vinorelbina; vinxaltina; vitaxina; vorozol; zanoterona; zeniplatino; cilascorbo; y zinostatina stimalamer .

Específicos de agentes activos segunda incluyen, pero no se limitan a, clorambucil, fludarabina, dexametasona (Decadron®) , hidrocortisona, metilprednisolona, cilostamida, doxorubicina (Doxil®) , forskolin, rituximab, ciclosporina A, cisplatino, vincristina, inhibidores de la PDE7, tales como BRL 50481and-IR-202, de doble PDE4/7 inhibidores como IR-284, cilostazol, meribendan, milrinona, vesnarionone, enoximona y pimobendan, los inhibidores de Syk como fostamatinib disódico (R406/R788), R343, Rl 12 y Excellair® (ZaBeCor Pharmaceuticals, Bala Cynwyd, PA) . 5.4 Métodos de tratamiento La presente se proporcionan métodos de tratamiento o gestión de linfoma, especialmente linfoma de no Hodgkin. En algunas modalidades, siempre presente documento métodos para el tratamiento o manejo de linfoma no Hodgkin (NHL) , incluyendo pero no limitado a, linfoma de células B grandes difusas (DLBCL) , utilizando los factores de pronóstico.

También en la presente se proporcionan métodos de tratamiento de pacientes que han sido tratados previamente de cáncer, pero que no responden a los tratamientos estándar, asi como aquellos que no han sido tratados previamente. La invención también abarca métodos de tratamiento de los pacientes, independientemente de la edad del paciente, aunque algunas enfermedades o trastornos son más comunes en ciertos grupos de edad. La invención abarca además métodos de tratamiento de pacientes que han sido sometidos a cirugía en un intento de tratar la enfermedad o afección en cuestión, así como los que no lo tienen. Dado que los pacientes con cáncer tienen manifestaciones clínicas heterogéneas y resultados clínicos variables, el tratamiento dado a un paciente puede variar, dependiendo de su pronóstico. El médico experto será capaz de determinar fácilmente sin agentes secundarios de experimentación excesiva específica, tipo de cirugía y el tipo de tratamiento no farmacológico basado en una estándar que se puede utilizar con eficacia para el tratamiento de un paciente con cáncer.

En una modalidad, el rango de dosis diaria recomendada de 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona para las condiciones descritas en la presente se encuentran dentro de la gama de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 50 mg por día, preferiblemente dada como una sola vez al día dosis, o en dosis divididas a lo largo de un día. Las dosis específicas por día incluyen 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 o 50 mg por día.

En una modalidad específica, la dosis de partida recomendada de 3- ( 4-amino-l-oxo-l , 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona puede ser de 10 mg o 25 mg por día . La dosis puede aumentarse a 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 y 50 mg/día. En una modalidad específica, el compuesto se puede administrar en una cantidad de aproximadamente 25 mg/día para pacientes con NHL (por ejemplo, el DLBCL) . En una modalidad particular, el compuesto se puede administrar en una cantidad de aproximadamente 10 mg/día para pacientes con NHL (por ejemplo, el DLBCL) . 5.5 terapia de combinación con un segundo agente activo Los métodos específicos de la invención comprenden la administración de 3- ( 4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo (por ejemplo hidrato) , en combinación con uno o más segundos agentes activos y/o en combinación con radioterapia, transfusiones de sangre, o cirugía. En la presente se describen ejemplos de segundos agentes activos.

La administración de 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona y el segundo agente activo a un paciente puede producirse simultáneamente o secuencialmente por la misma o diferentes vías de administración. La idoneidad de una ruta de administración particular empleada para un agente activo particular dependerá del propio agente activo (por ejemplo, si se puede administrar por vía oral sin descomponerse antes de entrar en la corriente sanguínea) y el cáncer a tratar. Una ruta de administración preferida para 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona es oral. Las vías preferidas de la administración de los segundos agentes o ingredientes activos de la invención son conocidos por los expertos normales en la técnica. Véase, por ejemplo, Physicians' Desk Reference, 1755-1760 (56a ed., 2002).

En una modalidad de la invención, el segundo agente activo se administra por vía oral, intravenosa o subcutánea y una vez o dos veces al dia en una cantidad de desde aproximadamente 1 a aproximadamente 1000 mg, de aproximadamente 5 a aproximadamente 500 mg, de aproximadamente 10 a aproximadamente 350 mg, o de aproximadamente 50 a aproximadamente 200 mg. La cantidad especifica del agente activo dependerá del segundo agente especifico utilizado, el tipo de cáncer que es tratado o manejado, la gravedad y etapa del cáncer y la cantidad (s) de 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona y cualesquiera agentes activos adicionales opcionales administrados simultáneamente al paciente.

En una modalidad, 3- ( 4-amino-l-oxo-l , 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona se administra a pacientes con linfoma no Hodgkin (por ejemplo, el DLBCL) antes, durante, o después de que el trasplante autólogo de células de progenitoras de sangre periférica.

En otra modalidad, 3- ( 4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona se administra a pacientes con NHL (por ejemplo, el DLBCL) después de un trasplante de células madre. 5.6 Terapia Cíclica En ciertas modalidades, los agentes terapéuticos de la invención se cíclicamente administra a un paciente con linfoma no Hodgkin (por ejemplo, el DLBCL) . La terapia cíclica incluye la administración de un agente activo durante un tiempo, seguido de un descanso durante un período de tiempo y repetir esta administración secuencial. Ciclismo terapia puede reducir el desarrollo de resistencia a uno o más de las terapias, evitar o reducir los efectos secundarios de una de las terapias y/o mejora la eficacia del tratamiento .

Por consiguiente, en una modalidad específica de la invención, 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-di idro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona se administra diariamente en una dosis única o dividida en un ciclo de cuatro a seis semanas, con un periodo de reposo de alrededor de una semana o dos semanas. La invención permite además la frecuencia, el número y duración de los ciclos de dosificación a ser incrementado. Así, otra modalidad específica de la invención abarca la administración de 3- (4-amino-l-oxo-lf 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, ß-diona para más ciclos que son típicos cuando se administra solo. En aún otra modalidad específica de la invención, 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona se administra durante un número mayor de ciclos que sería típicamente causan toxicidad limitante de dosis en un paciente al que un segundo ingrediente activo no está siendo administrado.

En una modalidad, 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona de la invención se administra a pacientes con NHL (por ejemplo, el DLBCL) diarias y continuamente durante tres o cuatro semanas a una dosis de aproximadamente 5 a aproximadamente 50 mg/d seguido de un descanso de una o dos semanas. En una modalidad, 3- (4-amino-l-oxo-1, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona se administra a pacientes con linfoma no Hodgkin (por ejemplo, el DLBCL) en una cantidad de aproximadamente 5, 10, 15, 20, 25, 30, 50 mg/d. 3- ( 4-amino-l-oxo-l , 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona se administra preferiblemente a pacientes con linfoma no Hodgkin (por ejemplo, el DLBCL) a una dosis inicial de 5 mg/d hasta una dosis máxima de 50 mg/d durante el tiempo que se tolera la terapia .

En una modalidad particular, el compuesto se administra a pacientes con NHL (por ejemplo, el DLBCL) en una cantidad de aproximadamente 10 o 25 mg/dia, preferiblemente en una cantidad de aproximadamente 25 mg/dia durante tres a cuatro semanas, seguido de uno semana o dos semanas de descanso en un ciclo de cuatro o seis semanas.

En una modalidad de la invención, 3- (4-amino-l-oxo-1, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona y un segundo ingrediente activo se administran a pacientes con NHL ( por ejemplo, el DLBCL) por via oral, durante un ciclo de cuatro a seis semanas. En otra modalidad de la invención, 3-(4-amino-1-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona se administra a los pacientes con NHL (por ejemplo, el DLBCL) por via oral y un segundo ingrediente activo se administra por infusión intravenosa durante aproximadamente 90 minutos cada ciclo.

En una modalidad especifica, un ciclo comprende la administración a pacientes con linfoma no Hodgkin (por ejemplo, el DLBCL) de aproximadamente 25 mg/dia de 3- (4-amino-l-oxo-1, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona y de alrededor de 50 a alrededor de 200 mg/m2/día de un segundo ingrediente activo diariamente durante 3 a 4 semanas y después una o dos semanas de descanso. En otra modalidad especifica, cada ciclo comprende la administración a pacientes con NHL (por ejemplo, el DLBCL) de desde aproximadamente 5 hasta aproximadamente 50 mg/dia de 3- (4-amino-l-oxo-1, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona y de alrededor de 50 a alrededor de 200 mg/m2/dia de un segundo ingrediente activo durante tres a cuatro semanas, seguido de una o dos semanas de descanso. Típicamente, el número de ciclos durante los cuales se administra el tratamiento combinatorio a un paciente será de aproximadamente uno a aproximadamente 24 ciclos, más típicamente de aproximadamente dos a aproximadamente 16 ciclos y aún más típicamente de aproximadamente cuatro a aproximadamente ocho ciclos.

En una modalidad, 3- (4-amino-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona se administra a pacientes con diversos tipos de linfornas (por ejemplo, NHL o DLBCL) que tienen valores de una enfermedad (tumor) carga de menos de 50 cm2, recuento absoluto de linfocitos mayor que 0,6 x 109/L, o no menos de 230 días transcurridos desde la terapia con rituximab último, en una cantidad de aproximadamente 10 mg, 15 mg, 20 mg, 25 mg o 30 mg por día durante 21 días, seguido por siete días de descanso en un ciclo de 28 días.

En una modalidad, 3- ( 4-amino-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona se administra a pacientes con NHL agresivo refractario o recidivante (por ejemplo, el DLBCL) que tiene favorable valores de los factores de pronóstico, en una cantidad de aproximadamente 25 mg por día durante 21 días seguido por siete días de descanso en un ciclo de 28 días. 5.7 Composiciones farmacéuticas Las composiciones farmacéuticas se pueden utilizar en la preparación de las formas individuales de dosis unitaria única. Las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación proporcionada en este documento comprenden un compuesto, o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato, hidrato, estereoisómero, clatrato, o profármaco del mismo. Las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación proporcionadas en este documento pueden comprender además uno o más excipientes.

Las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación proporcionadas en este documento también pueden comprender uno o más ingredientes activos adicionales. Por consiguiente, las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación proporcionadas en la presente comprenden los ingredientes activos descritos en la presente (por ejemplo, 3- ( 4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona y un segundo agente activo) . En la presente se dan a conocer ejemplos de segundo opcional, o ingredientes activos adicionales .

Las formas de dosis de dosificación unitarias son adecuadas para administración oral, mucosal (por ejemplo, nasal, sublingual, vaginal, bucal o rectal) , parenteral gotas para los ojos (por ejemplo, subcutánea, intravenosa, inyección de bolo, intramuscular, o intraarterial) , tópica (por ejemplo, u otras preparaciones oftálmicas) , transdérmica o transcutánea a un paciente. Ejemplos de formas de dosificación incluyen, pero no se limitan a: tabletas; caplets; cápsulas, tales como cápsulas blandas de gelatina elástica; sellos; trociscos, pastillas para chupar, dispersiones, supositorios, polvos, aerosoles (por ejemplo, pulverizadores nasales o inhaladores) ; geles líquidos; formas de dosificación adecuadas para administración oral o mucosal a un paciente, incluyendo suspensiones (por ejemplo, suspensiones líquidas acuosas o no acuosas, emulsiones de aceite-en-agua, o una emulsiones líquidas de agua-en-aceite) , soluciones y elixires; formas de dosificación líquidas adecuadas para la administración parenteral a un paciente; gotas oculares u otras preparaciones oftálmicas adecuadas para la administración tópica y sólidos estériles (por ejemplo, sólidos cristalinos o amorfos) que se pueden reconstituir para proporcionar formas de dosificación liquidas adecuadas para la administración parenteral a un paciente .

La composición, forma y tipo de formas de dosificación proporcionadas en este documento variará típicamente dependiendo de su uso. Por ejemplo, una forma de dosificación usada en el tratamiento agudo de una enfermedad puede contener mayores cantidades de uno o más de los ingredientes activos que comprende, que una forma de dosificación usada en el tratamiento crónico de la misma enfermedad. De manera similar, una forma de dosificación parenteral puede contener cantidades más pequeñas de uno o más de los ingredientes activos que comprende, que una forma de dosificación oral usada para tratar la misma enfermedad. Estas y otras maneras en que las formas de dosificación especificas proporcionadas en la presente pueden variar de uno a otro serán fácilmente evidentes para los expertos en la técnica. Véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed. , Mack Publishing, . Easton PA (1990).

Las composiciones farmacéuticas típicas y las formas farmacéuticas comprenden uno o más excipientes. Los excipientes adecuados son bien conocidos por los expertos en la técnica de la farmacia y ejemplos no limitantes de excipientes adecuados se proporcionan en la presente. Si un excipiente particular es adecuado para su incorporación en una composición farmacéutica o forma de dosificación depende de una variedad de factores bien conocidos en la técnica incluyendo, pero no limitado a, la manera en que se administra la forma de dosificación a un paciente. Por ejemplo, formas de dosificación oral tales como tabletas pueden contener excipientes no aptos para su uso en formas farmacéuticas parenterales . La idoneidad de un excipiente particular también puede depender de los ingredientes activos específicos en la forma de dosificación. Por ejemplo, la descomposición de algunos ingredientes activos puede ser acelerada por algunos excipientes tales como lactosa, o cuando se expone al agua. Los ingredientes activos que comprenden aminas primarias o secundarias son particularmente susceptibles a tal descomposición acelerada. Por consiguiente, en la presente se proporcionan composiciones farmacéuticas y formas de dosificación que contienen poca, si es que hay alguna, lactosa u otros mono- o di-sacáridos . Como se usa en la presente, la expresión "sin lactosa" significa que la cantidad de lactosa presente, si existe, es insuficiente para aumentar sustancialmente la velocidad de degradación de un ingrediente activo.

Las composiciones sin lactosa proporcionadas en este documento pueden comprender excipientes que son bien conocidos en la técnica y se enumeran, por ejemplo, en la Farmacopea de E.U.A. (ÜSP) 25-NF20 (2002). En general, las composiciones libres de lactosa comprenden ingredientes activos, un aglutinante/relleno y un lubricante en cantidades farmacéuticamente compatibles y farmacéuticamente aceptables. En una modalidad, las formas de dosificación sin lactosa comprenden ingredientes activos, celulosa microcristalina, almidón pregelatinizado y estearato de magnesio.

También se proporcionan en este documento composiciones farmacéuticas anhidras y formas de dosificación que comprenden ingredientes activos ya que el agua puede facilitar la degradación de algunos compuestos. Por ejemplo, la adición de agua (por ejemplo, 5%) es ampliamente aceptada en las técnicas farmacéuticas como medio de simular el almacenamiento a largo plazo a fin de determinar características tales como la vida útil o la estabilidad de las formulaciones con el tiempo. Véase, por ejemplo, Jens T.

Carstensen, Estabilidad de Fármacos: Principios y Práctica, 2a. Ed., arcel Dekker, NY, NY, 1995, págs . 379-80. En efecto, el agua y el calor aceleran la descomposición de algunos compuestos. Por lo tanto, el efecto del agua sobre una formulación puede ser de gran importancia puesto que la humedad y/o humedad se encuentran comúnmente durante la fabricación, manipulación, envasado, almacenamiento, envió y uso de formulaciones.

Las composiciones farmacéuticas anhidras y formas de dosificación se pueden preparar usando ingredientes anhidros o que contienen baja humedad y condiciones de baja humectación o de baja humedad. Las composiciones farmacéuticas y formas farmacéuticas que comprenden lactosa y al menos un ingrediente activo que comprende una amina primaria o secundaria son preferiblemente anhidras en caso de contacto sustancial con la humedad y/o humectación durante la fabricación, empaque y/o almacenamiento esperado.

Una composición farmacéutica anhidra debería ser preparada y almacenada de tal manera que se mantenga su naturaleza anhidra. Por consiguiente, las composiciones anhidras se empacan preferiblemente usando materiales conocidos para prevenir la exposición al agua de tal manera que puedan ser incluidos en los kits formalmente apropiados. Ejemplos de empaquetado adecuado incluyen, pero no están limitados a, láminas herméticamente selladas, plásticos, envases de dosis unitaria (por ejemplo, viales) , paquetes de ampolletas y paquetes de tiras.

También en este documento se proporcionan composiciones farmacéuticas y formas de dosificación que comprenden uno o más compuestos que reducen la tasa a la cual se descompondrá un ingrediente activo. Tales compuestos, que se denominan en la presente como "estabilizadores", incluyen, pero no se limitan a, antioxidantes tales como ácido ascórbico, soluciones reguladoras de pH, o soluciones reguladoras salinas.

Al igual que las cantidades y tipos de excipientes, las cantidades y tipos específicos de ingredientes activos en una forma de dosificación pueden diferir dependiendo de factores tales como, pero no limitado a, la ruta por la que se va a administrar a los pacientes. Sin embargo, las formas farmacéuticas típicas de la invención comprenden un compuesto o una sal, solvato, hidrato, estereoisómero, clatrato, o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo en una cantidad de desde aproximadamente 0.10 a aproximadamente 150 mg. Las formas típicas de dosificación comprenden un compuesto o una sal, solvato, hidrato, estereoisómero, clatrato, o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo en una cantidad de aproximadamente 5, 7.5, 10, 12.5, 15, 17.5, 20, 25, o 50 mg. En una modalidad particular, una forma de dosificación preferida comprende 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona en una cantidad de aproximadamente 5, 10, 20, 25 o 50 mg. En una modalidad especifica, una forma de dosificación preferida comprende 3-( 4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2, 6-diona en una cantidad de aproximadamente 5, 10, o 25 mg . Las formas típicas de dosificación comprenden el segundo ingrediente activo en una cantidad de 1 a aproximadamente 1000 mg, de aproximadamente 5 a aproximadamente 500 mg, de aproximadamente 10 a aproximadamente 350 mg, o de aproximadamente 50 a aproximadamente 200 mg. Por supuesto, la cantidad específica del fármaco anti-cáncer dependerá del agente específico utilizado, del tipo de cáncer a tratar o controlar y la cantidad (s) de 3- ( 4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona y cualesquiera agentes activos adicionales opcionales administrados simultáneamente al paciente. 5. T Formas de dosificación oral Las composiciones farmacéuticas que son adecuadas para administración oral se pueden presentar como formas de dosificación discretas, tales como, pero no se limitan a, tabletas (por ejemplo, tabletas masticables) , comprimidos oblongos, cápsulas y líquidos (por ejemplo, jarabes aromatizados) . Tales formas de dosificación contienen cantidades predeterminadas de ingredientes activos y se pueden preparar por métodos de farmacia bien conocidos por los expertos en la técnica. Véase, en general, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed. , Mack Publishing, Easton PA (1990) .

Las formas de dosificación oral típicas se preparan combinando los ingredientes activos en una mezcla íntima con al menos un excipiente de acuerdo con técnicas convencionales de composición farmacéutica. Los excipientes pueden tomar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para la administración. Por ejemplo, los excipientes adecuados para su uso en líquido oral o aerosol formas de dosificación incluyen, pero no se limitan a, agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes aromatizantes, conservantes y agentes colorantes. Los ejemplos de excipientes adecuados para uso en formas farmacéuticas sólidas orales (por ejemplo, polvos, comprimidos, cápsulas y comprimidos ovalados) incluyen, pero no se limitan a, almidones, azúcares, celulosa microcristalina, diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, aglutinantes y agentes disgregantes .

Debido a su facilidad de administración, las tabletas y cápsulas representan las formas unitarias de dosificación oral más ventajosas, en cuyo caso se emplean excipientes sólidos. Si se desea, los comprimidos se pueden recubrir mediante técnicas estándar acuosas o no acuosas.

Tales formas de dosificación se pueden preparar por cualquiera de los métodos de farmacia. En general, las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación se preparan mezclando uniforme e intimamente los ingredientes activos con vehículos líquidos, vehículos sólidos finamente divididos, o ambos y luego dar forma al producto en la presentación deseada si es necesario.

Por ejemplo, un comprimido puede prepararse por compresión o moldeo. Los comprimidos se pueden preparar comprimiendo en una máquina adecuada los ingredientes activos en una forma de flujo libre tal como polvo o gránulos, opcionalmente mezclados con un excipiente. Los comprimidos moldeados se pueden preparar moldeando en una máquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte.

Los ejemplos de excipientes que se pueden utilizar en formas de dosificación oral proporcionadas en este documento incluyen, pero no están limitados a, aglutinantes, cargas, desintegrantes y lubricantes. Los aglutinantes adecuados para uso en composiciones farmacéuticas y formas de dosificación incluyen, pero no se limitan a, almidón de maíz,, almidón de papa, u otros almidones, gelatina, gomas naturales y sintéticas tales como acacia, alginato de sodio, ácido algínico, otros alginatos, tragacanto en polvo, goma de guar, celulosa y sus derivados (por ejemplo, etil celulosa, acetato de celulosa, calcio carboximetil celulosa, carboximetil celulosa de sodio) , polivinilpirrolidona, metilcelulosa, almidón pre-gelatinizado, hidroxipropil metil celulosa, (por ejemplo, Nos. 2208, 2906, 2910), celulosa microcristalina y mezclas de los mismos.

Las formas adecuadas de celulosa microcristalina incluyen, pero no se limitan a, los materiales vendidos como AVICEL-PH-101, AVICEL-PH-103 AVICEL RC-581, AVICEL-PH-105 (disponible de FMC Corporation, American Viseóse División, Avicel Sales, Marcus Hook, PA) y mezclas de los mismos. Un aglutinante especifico es una mezcla de celulosa microcristalina y carboximetilcelulosa de sodio vendida como AVICEL RC-581. Los excipientes adecuados anhidros o de baja o aditivos incluyen AVICEL-PH-103™ y Starch 1500 LM.

Ejemplos de cargas adecuadas para uso en las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación descritos en este documento incluyen, pero no se limitan a, talco, carbonato de calcio (por ejemplo, gránulos o polvo) , celulosa microcristalina, celulosa en polvo, dextratos, caolín, manitol, ácido silícico, sorbitol, almidón, almidón pre-gelatinizado y mezclas de los mismos. El aglutinante o carga en las composiciones farmacéuticas de la invención típicamente está presente en por ciento en peso de aproximadamente 50 a aproximadamente 99 de la composición farmacéutica o forma de dosificación.

Los desintegrantes se utilizan en las composiciones para proporcionar tabletas que se desintegran cuando se exponen a un ambiente acuoso. Los comprimidos que contienen demasiado disgregante se pueden disgregar en el almacenamiento, mientras los que contienen demasiado poco pueden no desintegrarse a una velocidad deseada o bajo las condiciones deseadas. Por lo tanto, una cantidad suficiente de disgregante que no sea ni demasiado ni demasiado poco para modificar perjudicialmente la liberación de los ingredientes activos debe ser utilizado para formar formas farmacéuticas orales sólidas. La cantidad de disgregante usada varia basándose en el tipo de formulación y es fácilmente discernible para los de experiencia ordinaria en la técnica.

Las composiciones farmacéuticas típicas comprenden de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 15 por ciento en peso de desintegrante, preferiblemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 5 por ciento en peso de desintegrante.

Los disgregantes que se pueden usar en composiciones farmacéuticas y formas de dosificación incluyen, pero no se limitan a, agar-agar, ácido algínico, carbonato de calcio, celulosa microcristalina, croscarmelosa sódica, crospovidona, polacrilina de potasio, glicolato de almidón sódico, almidón de patata o tapioca, otro almidones, almidón pregelatinizado, otros almidones, arcillas, otras alginas, otras celulosas, gomas y mezclas de los mismos.

Los lubricantes que se pueden usar en composiciones farmacéuticas y formas de dosificación incluyen, pero no se limitan a, estearato de calcio, estearato de magnesio, aceite mineral, aceite mineral ligero, glicerina, sorbitol, manitol glicol, polietileno, otros glicoles, ácido esteárico, lauril sulfato de sodio, talco, aceite vegetal hidrogenado (por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodón, aceite de girasol, aceite de ajonjolí, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soya) , estearato de cinc, oleato de etilo, laurato de etilo, agar y mezclas de los mismos. Los lubricantes adicionales incluyen, por ejemplo, un gel de sílice siloide (AEROSIL200, fabricado por WR Grace Co. de Baltimore, MD) , un aerosol coagulado de sílice sintética (comercializado por Degussa Co. de Piano, TX) , CAB-O-SIL (un producto de dióxido de silicio pirógeno vendido por Cabot Co. de Boston, MA) y mezclas de los mismos. Si se usan, los lubricantes típicamente se usan en una cantidad de menos de aproximadamente 1 por ciento en peso de las composiciones farmacéuticas o formas farmacéuticas en las que se incorporan .

En una modalidad, una forma de dosificación oral sólida de la invención comprende 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, ß-diona, lactosa anhidra, celulosa microcristalina, polivinilpirrolidona, ácido esteárico, sílice anhidra coloidal y gelatina. 5.9 Tardías formas farmacéuticas de liberación Los ingredientes activos se pueden administrar por medios de liberación controlada o por dispositivos de administración que son bien conocidos para los expertos normales en la técnica. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a, los descritos en la patente de E.U.A. Nos.: 3,845,770; 3,916,899; 3,536,809; 3,598,123 y 4,008,719, 5,674,533, 5,059,595, 5,591,767, 5,120,548, 5,073.543, 5,639,476, 5,354,556 y 5,733,566, cada una de las cuales se incorpora en la presente por referencia. Tales formas de dosificación se pueden usar para proporcionar lenta o controladamente uno o más ingredientes activos usando, por ejemplo, hidropropilmetil celulosa, otras matrices poliméricas, geles, membranas permeables, sistemas osmóticos, recubrimientos multicapa, micropartículas , liposomas, microesferas , o una combinación de los mismos para proporcionar el perfil de liberación deseado en proporciones variables. Adecuadas formulaciones de liberación controlada conocidas por los expertos en la técnica, incluyendo los descritos en la presente, se pueden seleccionar fácilmente para uso con los ingredientes activos proporcionados en este documento. Por lo tanto, en este documento se proporcionan formas individuales de dosificación unitaria adecuadas para la administración oral tales como, pero sin limitarse a, comprimidos, cápsulas, cápsulas de gelatina y comprimidos oblongos que están adaptadas para la liberación controlada.

Todos los productos farmacéuticos de liberación controlada tienen un objetivo común de mejorar la terapia con medicamentos sobre la conseguida por sus contrapartidas no controladas. Idealmente, el uso de un diseño óptimo de preparación de liberación controlada en el tratamiento médico se caracteriza por un mínimo de sustancia del fármaco que.se emplea para curar o controlar la afección en una cantidad mínima de tiempo. Ventajas de las formulaciones de liberación controlada incluyen actividad prolongada del fármaco, frecuencia de dosificación reducida y el aumento de la conformidad del paciente. Además, formulaciones de liberación controlada se pueden utilizar para afectar el tiempo de aparición de acción u otras características, como los niveles en sangre del fármaco y por lo tanto puede afectar a la aparición de lado (por ejemplo, adversos) .

La mayoría de las formulaciones de liberación controlada están diseñadas para liberar inicialmente una cantidad de fármaco (ingrediente activo) que produce rápidamente el efecto terapéutico deseado y liberar gradualmente y continuamente otras cantidades de fármaco para mantener este nivel de efecto terapéutico o profiláctico durante un período prolongado de tiempo. Con el fin de mantener este nivel constante de fármaco en el cuerpo, el fármaco debe ser liberado desde la forma de dosificación a una velocidad que reemplace la cantidad de fármaco que está siendo metabolizada y excretada del cuerpo. La liberación controlada de un ingrediente activo puede ser estimulada por varias condiciones incluyendo, pero no limitado a, pH, temperatura, enzimas, agua u otras condiciones fisiológicas o compuestos . 5.10 Formas parenterales farmacéuticas Formas de dosificación parenteral pueden administrarse a los pacientes por diversas vías incluyendo, pero no limitado a, subcutánea, intravenosa (incluyendo inyección de bolo), intramuscular e intraarterial . Debido a que su administración típicamente evita las defensas naturales de los pacientes contra los contaminantes, las formas de dosificación parenterales son preferiblemente estériles o capaces de ser esterilizadas antes de la administración a un paciente. Ejemplos de formas de dosificación parenteral incluyen, pero no están limitados a, soluciones listas para inyección, productos secos listos para ser disueltos o suspendidos en un vehículo farmacéuticamente aceptable para inyección, suspensiones listas para inyección y emulsiones.

Los vehículos adecuados que se pueden usar para proporcionar formas de dosificación parenterales son bien conocidos para los expertos en la técnica. Los ejemplos incluyen, pero no se limitan a: Agua para Inyección USP, vehículos acuosos tales como, pero no limitados a, Inyección de Cloruro Sódico, Inyección de Ringer, Inyección de Dextrosa, Inyección de Dextrosa y Cloruro de Sodio y Inyección de Ringer Lactada; miscibles con agua, vehículos tales como, pero no limitado a, glicol de alcohol etílico, polietilenglicol y polipropilenglicol y vehículos no acuosos tales como, pero no limitado a, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuete, aceite de ajonjolí, oleato de etilo, miristato de isopropilo y bencilo benzoato de metilo.

Los compuestos que aumentan la solubilidad de uno o más de los ingredientes activos descritos en la presente también se pueden incorporar en las formas farmacéuticas parenterales proporcionados en este documento. Por ejemplo, ciclodextrina y sus derivados se pueden utilizar para aumentar la solubilidad de un compuesto y sus derivados. Véase, por ejemplo, la patente de E.U.A. No. 5,134,127, que se incorpora en la presente por referencia. 5.11 Formas de Dosificación Tópicas y Mucosales Formas de dosificación tópicas y mucosales proporcionadas en este documento incluyen, pero no se limitan a, pulverizaciones, aerosoles, soluciones, emulsiones, suspensiones, gotas oculares u otras preparaciones oftálmicas, u otras formas conocidas para un experto en la técnica. Véase, por ejemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 16a y 18a eds., Mack Publishing, Easton PA (1980 y 1990) y. Introducción a formas farmacéuticas, 4a ed., Lea & Febiger, Filadelfia (1985) . Las formas de dosificación adecuadas para tratar tejidos mucosales dentro de la cavidad oral pueden formularse como enjuagues bucales o como geles orales .

Los excipientes adecuados, por ejemplo, (v.gr., vehículos y diluyentes) y otros materiales que se pueden utilizar para proporcionar formas de dosificación tópica y mucosal son bien conocidos por los expertos en las técnicas farmacéuticas y dependen del tejido particular al cual una composición farmacéutica dada o forma de dosificación será aplicada. Con este hecho en mente, los excipientes típicos incluyen, pero no se limitan a, agua, acetona, etanol, etilenglicol, propilenglicol, butano-1, 3-diol, miristato de isopropilo, palmitato de isopropilo, aceite mineral y mezclas de los mismos para formar soluciones, emulsiones o geles, que son no tóxicos y farmacéuticamente aceptables. Hidratantes o humectantes también se pueden añadir a las composiciones farmacéuticas y formas de dosificación si se desea. Ejemplos de tales ingredientes adicionales son bien conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Ciencias de la Remington 's Pharmaceutical, 16 y 18 eds . , Mack Publishing, PA Easton (1980 y 1990) .

El pH de una composición farmacéutica o forma de dosificación también se puede ajustar para mejorar la entrega de uno o más ingredientes activos. Similarmente, la polaridad de un portador disolvente, su fuerza iónica o tonicidad se puede ajustar para mejorar la entrega. Compuestos tales como estearatos también se pueden añadir a las composiciones farmacéuticas o formas de dosificación para alterar ventajosamente la hidrofilia o lipofilia de uno o más ingredientes activos asi como para mejorar la entrega. A este respecto, los estearatos pueden servir como un vehículo de lípidos para la formulación, como un agente emulsionante o tensioactivo y como un agente que mejora la entrega o mejoran la penetración. Las diferentes sales, hidratos o solvatos de los ingredientes activos se pueden utilizar para ajustar aún más las propiedades de la composición resultante. 5.12 Kits En algunas modalidades proporcionadas en este documento, los ingredientes activos preferiblemente no se administran a un paciente al mismo tiempo o por la misma vía de administración. Por lo tanto, en la presente se proporcionan los kits que, cuando se utilizan por el médico, puede simplificar la administración de cantidades apropiadas de ingredientes activos a un paciente.

En una modalidad, un kit proporcionado en la presente comprende una forma de dosificación de 3- ( -amino-l-oxo-1, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , ß-diona, o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o hidrato. Los kits pueden comprender además agentes activos adicionales, incluyendo, pero no se limitan a las descritas en la presente .

Los kits proporcionados en la presente pueden comprender además dispositivos que se utilizan para administrar los ingredientes activos. Ejemplos de tales dispositivos incluyen, pero no se limitan a, jeringas, bolsas de goteo, parches e inhaladores.

Los kits puede comprender además células o sangre para trasplante asi como vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden ser utilizados para administrar uno o más ingredientes activos. Por ejemplo, si un ingrediente activo se proporciona en una forma sólida que se debe reconstituir para administración parenteral, el kit puede comprender un contenedor sellado de un vehículo adecuado en el que puede ser el ingrediente activo disuelto en partículas para formar una solución estéril sin que sea adecuada para la administración parenteral. Ejemplos de vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a: Agua para Inyección USP, vehículos acuosos tales como, pero no limitados a, Inyección de Cloruro Sódico, Inyección de Ringer, Inyección de Dextrosa, Inyección de Dextrosa y Cloruro de Sodio y Inyección de Ringer Lactada; agua miscibles en vehículos tales como, pero no limitados a, alcohol etílico, polietilenglicol y polipropilenglicol y vehículos no acuosos tales como, pero no limitados a, aceite de maíz, aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuete, aceite de ajonjolí, oleato de etilo, isopropilo benzoato de miristilo y bencilo. 6. EJEMPLOS Ciertas modalidades de la invención se ilustran mediante los siguientes ejemplos no limitantes. 6.1 Preparación de 3- (4-amino-l-oxo-l , 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona 6.1.1 2-bromometil-3-nitrobenzoato de metilo Una mezcla agitada de 2-metil-3-nitrobenzoato de metilo (14.0 g, 71.7 mmol) y N-bromosuccinimida (15.3 g, 86.1 mmol) en tetracloruro de carbono (200 mi) se calentó a reflujo suave durante 15 horas mientras que un foco de 100W situado a 2 cm de distancia brillaba en el matraz. La mezcla se filtró y el sólido se lavó con cloruro de metileno (50 mi) . El filtrado se lavó con agua (2x100 mi) , salmuera (100 mi) y se secó. El disolvente se eliminó a vacio y el residuo se purificó por cromatografía instantánea (hexano/acetato de etilo, 8/2) para dar 19 g (96%) del producto como un sólido amarillo: pf 70,0-71,5°C; XH RMN (CDC13) d 8.12 a 8.9 (dd, J = 1,3 y 7.8 Hz, 1H) , 7.97-7.94 (dd, J = 1.3 y 8.2 Hz, 1H) , 7.54 (t, J = 8.0 Hz, 1H) , 5.15 (s, 2H) , 4.00 (s, 3H) ; 13C RMN (CdCl3) d 165.85, 150.58, 134.68, 132.38, 129.08, 127.80, 53.06, 22.69, HPLC, agua Nove-Pak/C18 , 3.9x150 mm, 4 mieras, 1 mL/min, 240 nm, 40/60 CH3CN/0.1% H3P04 (aq) 7.27 min (98.92%); Anal. Calculado para C9H8N0Br: C, 39.44, H, 2.94, N, 5.11; Br, 29.15. Encontrado: C, 39.46; H, 3.00; N, 5.00; Br, 29.11. 6.1.2 N- (l-oxo-4-nitroisoindolin-2-il) -L-glutamina de t-butilo Se añadieron trietilamina (2.9 g, 28.6 mmol) por goteo a una mezcla agitada 2-bromometil-3-nitrobenzoato de metilo (3.5 g, 13.0 mmol) y clorhidrato de éster t-butílico de L-glutamina (3.1 g, 13.0 mmol) en tetrahidrofurano (90 mi). La mezcla se calentó a reflujo durante 24 horas. A la mezcla enfriada se le añadió cloruro de metileno (150 mi) y la mezcla se lavó con agua (2 x 40 mi) , salmuera (40 mi) y se secó. El disolvente se eliminó a vacio y el residuo se purificó por cromatografía ultrarrápida (3% CH3OH en cloruro de metileno), obteniéndose 2.84 g (60%) de producto bruto que se usó directamente en la siguiente reacción: 1H RMN (CdC13) d 8.40 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 8.15 (d, J = 7.5 Hz, 1H) , 7.71 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 5.83 (s, 1H) , 5.61 (s, 1H) . 5.12 ( d. J = 19.4 Hz, 1H), 5.04-4.98 (m, 1H) , 4.92 (d, J - 19.4 Hz, 1H) . 2.49-2.22 (m, 4H) , 1.46 (s, 9H) , HPLC, Waters Nova-Pak C18. 3.9x150 mm. 4 mieras. 1 ml/min. 240 nm, 25/75% CH3CN/0.1 H3PO4 (aq) 6.75 min (99.94%) . 6.1.3 N- (l-oxo-4-nitroisoindolin-2-il) -L-glutamina El cloruro de hidrógeno gaseoso se burbujea en una solución agitada de 5°C de N- (l-oxo-4-nitro-isoindolin-2-il) -L-glutamina de t-butilo (3.6 g, 9.9 mmol) en cloruro de metileno (60 mi) durante 1 hora. La mezcla se agitó entonces a temperatura ambiente durante otra hora. Éter (40 mi) se añadió y la mezcla resultante se agitó durante 30 minutos. La suspensión se filtró, se lavó con éter y se secó para dar 3,3 g del producto: 1H RMN (DMSO-d6) d 8,45 (d, J = 8,1 Hz, 1H) , 8,15 (d, J = 7,5 Hz, 1H) , 7,83 (t, J = 7,9 Hz. 1H) , 7,24 (s, 1H) , 6,76 (s, 1H) , 4,93 (s, 2H) , 4, 84-4, 78 (dd, J = 10,4 Hz 4.8amd, 1H) , 2,34 -2,10 (m, 4H) ; 13C R N (DMSO-ds) d 173, 03, 171.88, 165.96, 143.35, 137.49, 134.77, 130.10, 129.61, 126.95, 53.65, 48.13, 31.50, 24.69, Anal. Calculado para C13H13N306: C, 50.82, H, 4.26, N, 13.68. Encontrado: C, 50.53; H, 4.37, N, 13.22. 6.1.4 (S) -3- (l-oxo-4-nitroisoindolin-2-il) piperidina-2 , 6-diona Una mezcla de suspensión agitada de N- (l-oxo-4-nitroisoindolin-2-il ) -L-glutamina (3.2 g, 10.5 mmol) en cloruro de metileno anhidro (150 mi) se enfrió a -40°C con isopropanol/baño de hielo seco. Cloruro de tionilo (0.82 mi, 11.3 mmol) se añadió por goteo a la mezcla enfriada seguido de piridina (0.9 g, 11.3 mmol). Después de 30 min, trietilamina (1.2 g, 11.5 mmol) se añadió y la mezcla se agitó a -30 a -40°C durante 3 horas. La mezcla se vertió en agua con hielo (200 mi) y la capa acuosa se extrajo con cloruro de metileno (40 mi) . La solución de cloruro de metileno se lavó con agua (2 x 60 mi), salmuera (60 mi) y se secó. El disolvente se eliminó a vacío y el residuo sólido se suspendió con acetato de etilo (20 mi) para dar 2.2 g (75%) del producto como un sólido blanco: pf 285°C; XH RMN (DMS0-d6) d: 1.04 (s, 1H) , 8.49-8.45 (dd, J = 0.8 y 8.2 Hz, 1H) , 8.21-8.17 (dd, J = 7.3 Hz, 1H) , 7.84 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 5.23-5.15 (dd, J = 4.9 y 13.0 Hz, 1H) , 4.96 (dd, J = 19.3 y 32.4 Hz, 2H) , 3.00 a 2.85 (m, 1H) , 2.64-2.49 (m, 2H) , 2.08 a 1.98 (m, 1H) ; 13C RMN (D SO-d6) d 172.79, 170.69, 165.93, 143.33, 137.40, 134.68, 130.15, 129.60, 127.02, 51.82, 48.43, 31.16. 22.23; HPLC, Waters Nove-Pak/C18 , 3.9x150 mm, 4 mieras, 1 ml/min, 240 nm, 20/80 CH3CN/0.1¾ H3P04 (aq) 3.67 min (100%); Anal Calculado para C13Hn 305: C, 53.98, H, 3.83, N, 14.53. Encontrado: C, 53.92, H, 3.70, N, 14.10. 6.1.5 3- (4-amino-l-oxo-l , 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona Una mezcla de (S) -3- (l-oxo-4-nitroisoindolin-2-il) piperidina-2, 6-diona (1.0 g, 3.5 mmol) y 10% Pd/C (0.3 g) en metanol (600 mi) se hidrogenó en un aparato agitador Parr a 3.515 kg/cm2 de hidrógeno durante 5 horas. La mezcla se filtró a través de Celite y el filtrado se concentró a vacio. El sólido se suspendió en acetato de etilo caliente durante 30 min, se filtró y se secó para dar 0.46 g (51%) del producto como un sólido blanco: pf 235.5-239°C; XH RMN (DMSO-d3) d 11.01 (s, 1H) , 7.19 (t, J = 7.6 Hz, 1H) , 6.90 (d, J = 7.3 Hz, 1H) , 6.78 (d, J = 7.8 Hz, 1H) , 5.42 (s, 2H) , 5.12 (dd, J = 5.1 y 13.1 Hz, 1H) , 4.17 (dd, J = 17.0 y 28.8 Hz, 2H) , 2.92-2.85 (m, 1H) , 2.64-2.49 (m, 1H) , 2.34 a 2.27 (m, 1H) , 2.06-1.99 (m, 1H) ; 13C RMN (DMSO-d6) d 172.85, 171.19, 168.84, 143.58, 132.22, 128.79, 125.56, 116.37, 110.39, 51.48, 45.49, 31.20, 22.74; HPLC. Waters Nova-Pak/C18 , 3.9x150 mm, 4 mieras, 1 ml/min, 240 nm, 10/90 CH3CN/0.1% H3P04 (aq) 0.96 min (100%); análisis quiral, Daicel Chiral Pak AD, 40/60 hexano/IPA, 6,60 min (99.42%); Anal. Calculado para C13H13N3O3: C, 60.23, H, 5.05, N, 16.21. Encontrado: C, 59.96; H, 4.98, N, 15.84.

La 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona se puede preparar también por métodos conocidos en la técnica, por ejemplo, según lo dispuesto en Drugs of the Future, 2003, 28 (5) : 425-431, cuya totalidad se incorpora por referencia. 6.2 Efecto de lenalidomida sobre la proliferación de células DLBCL in v tro Un panel de lineas celulares de DLBCL de características citogenéticas diferentes se probó para determinar su sensibilidad a la actividad ant proliferativa de lenalidomida. Véase la Figura 1. Las células fueron tratadas con lenalidomida durante 5 días a 37 °C, la proliferación de las células se determinó utilizando método de incorporación de 3H-timidina. Los resultados de 3 experimentos independientes son mostrados (media ± SD) . Lenalidomida a partir de 0.1 -1 µ? significativamente (p <0.05) inhibió la proliferación de varias líneas de células DLBCL, en particular subtipo de células ABC tales como Riva, U2932, TMD8 y células OCI-LYLO. El subtipo de células ABC parece más sensible al efecto antiproliferativo de células incluyendo otro subtipo de células como GCB-DLBCL y células PMBL . 6.3 Análisis de reacción de cadena de transcriptasa-polimerasa inversa cuantitativa en tiempo real de niveles de expresión oncogénica de la linea de la base en células DLBCL Se realizó el análisis de expresión génica en un panel de lineas celulares DLBCL. Vea las Figuras 2A-2D. El ARN total fue purificado a partir de células DLBCL crecimiento en fase logarítmica, con RNeasy® Mini Kits en un sistema automatizado QiaCube ™ (Qiagen Inc, Valencia, CA) . La reacción en cadena de transcriptasa-polimerasa inversa cuantitativa en tiempo real (RT-PCR) con 25-100 ng de RNA total se realizó utilizando el kit de transcripción inversa y sondas TaqMan® PCR específicas para los genes de interés (Applied Biosystems Incorporar, Foster City, CA) de acuerdo con métodos estándar. La cantidad de producto se calculó utilizando la curva estándar y se normalizó para la gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa . Los resultados de dos experimentos independientes se muestran en la Figura 2 (media ± SD) .

Los resultados demuestran que Riva sensible a lenalidomida, U2932 y las células OCI-LY3 muestran varias características típicas del subtipo de células ABC-DLBCL tales como la sobreexpresión de SPIB (un factor de transcripción de familia de Ets específico hematopoyético necesario para la supervivencia de las células subtipo ABC) , la expresión superior constitutiva de IRF4/MUM1 que las células de subtipo GCB, mayor expresión constitutiva FOXP1 reguladas ascendentemente por la trisomía 3 y expresión constitutiva superior Blimp 1 (también conocida como Prdml) . Estos resultados sugieren que la lenalidomida puede tener un mayor potencial para la eficacia en pacientes con DLBCL del subtipo ABC. Por lo tanto, el análisis de la expresión génica de estos marcadores de células ABC-DLBCL puede ser capaz de predecir la sensibilidad de DLBCL con lenalidomida. 6.4 Actividad de NF-?? antes y durante el tratamiento con lenalidomida en DLBCL La actividad de NFKB se examinó en un panel de líneas celulares DLBCL con prueba de factor transcripción activa Motif utilizando extractos nucleares de células de crecimiento en fase logarítmica. Se muestran los resultados de tres experimentos independientes (media ± SD) . Véase la Figura 3. Los resultados sugieren que las células ABC-DLBCL sensibles a lenalidomida (Riva, U2932 y OCI-LylO) muestran una actividad mucho mayor que los tipos no-ABC de células DLBCL (tales como DB, OCI-Lyl9, SUDHL4 y WSU-DLCL2) .

La correlación entre el efecto antiproliferativo sobre las células DLBCL de lenalidomida en 1 µ?, una concentración clínica alcanzable y la línea base NFKB actividad p50 se determinó por método de análisis de correlación Pearson 2-cola. Una parte significativa (p <0.001) se observó correlación entre la actividad antiproliferativa de la lenalidomida en estas líneas celulares DLBCL y niveles básales de actividad de NFkB, particularmente la subunidad p50. Véase la Figura 4. 6.5 Efecto inhibidor sobre la actividad de lenalidomida NFKB en las células DLBCL Las células DLBCL fueron tratados con lenalidomida o un inhibidor de IKK1/2 doble (usado como un control inhibidor, positivo) durante 2 días. Actividad de NFKB se examinó con la prueba de factor de transcripción activa Motif utilizando extractos nucleares de células después del tratamiento. Resultados de experimentos independientes 3-4se muestran en la Figura 5 (media ± SD) . La lenalidomida en 1 µ?, una concentración clínica alcanzable, inhibe significativamente NFKB p65 (p <0.001) y p50 (p <0.05) la actividad. Se encontró que la lenalidomida inhibe la actividad de NFKB en algunas lineas DLBCL del subtipo ABC, tales como las células U2932.

Los resultados anteriores sugieren que el efecto sobre la transducción de señal de NFKB podrían estar implicados en la actividad antiproliferativa de lenalidomida contra células ABC-DLBCL y que la actividad de la línea de base NFKB puede ser un biomarcador predictivo de la respuesta del tumor a la terapia de linfoma lenalidomida.

La Tabla 1 presenta datos que demuestran que lenadidomida inhibe significativamente la actividad de NFKB y proliferación en ciertas líneas celulares (por ejemplo, ABC, U2392, RIVA, TMD8 y OCI-LyLO) , pero no en 0CI-Ly3 o PBML (KARPS-1160p) .

Tabla 1 Tratamientos Inhibición Valor P Inhibición Valor P P65 (%) P50 (%) U2392 Media ± SD Media 1 SD DMSO 0.3 ± 3.7 0.2 1 1.4 1 µ 40.0+3.7 <0. 001 32.5+14.3 <0. 05 lenalidomida 10 µ? 47+6.2 <0. 001 34.4+9.0 <0. 05 lenalidomida RIVA Media ± SD Media 1 SD DMSO 3.7 ± 26.1 0.5 1 1.7 1 µ? 19.3115.6 >0. 05 11.1+11.7 >0. 05 lenalidomida 10 µ? 41.7+26.8 <0. 001 28.6121.0 <0. 001 lenalidomida T D8 Media ± SD Media 1 SD DMSO 0.7 i 3.9 0.2 i 3.3 1 µ? 14.1±9.0 >0. 05 14.4+16.4 >0. 05 lenalidomida 10 µ? 49.7±32.8 <0. 05 48.5+40.2 <0. 01 lenalidomida OCI-Lyl0 Media i SD Media 1 SD DMSO -0.4 ± 2.8 0.7 i 2.0 1 µ? 27.6±20.7 <0. 001 22.7+18.7 <0. 05 lenalidomida 10 µ? 22.0+12.2 <0. 01 22.6+14.1 <0. 05 lenalidomida OCI-Ly3 Media ± SD Media + SD DMSO 0.3 ± 3.2 -0.9 i 2.8 1 µ? -17.4113.4 >0. 5 -10.3+19.7 >0. 5 lenalidomida 10 µ? -15.8+15.0 >0. 05 -9.5+19.1 >0. 05 lenalidomida KARPS-1160p Media i SD Media + SD DMSO 5.7 i 0.14 18.9+ 0.71 1 µ? 5.9+0.49 >0. 5 14.5+0.95 >0. 5 lenalidomida 10 µ? 5.4+0.35 >0. 05 16.4+0.28 >0. 05 lenalidomida La Tabla 2 muestra predictores de potencial para eficacia de lenalidomida en subtipos de células DLBCL.

Tabla 2 6.6 Modelo in vivo de xenógrafo en ratón para el subtipo de células OCI-LYLO La eficacia de lenalidomida contra el subtipo de células OClOLylO se investigó en un modelo in vivo de xenoinjertos de ratón. Los ratones hembra CB.17 SCID de edad de 6 a 12 semanas se les inyecta alrededor de 0.2mL/ratón de 1X107 células tumorales OCI-LylO en 100% Matrigel se en el flanco. El tratamiento con lenalidomida comienza una vez que el tumor alcanza un tamaño medio de 100 a 150 mg. El peso corporal se mide 5/2 y luego cada dos semanas hasta el final del estudio. La medida de calibre del tumor se realiza cada dos semanas. El criterio de valoración del estudio es el retraso del crecimiento tumoral (TGD) . Se calcula el porcentaje de TGD (% TGD) . Los animales se controlan individualmente. El criterio de valoración del estudio es un volumen de tumor de aproximadamente 1000 m3 o 60 días, lo que ocurra primero. Los respondedores a la terapia pueden ser seguidos por más tiempo. El plan de tratamiento se muestra a continuación en la Tabla 3.

Colección del tumor: los tumores se recopilan en ambiente libre de ARNasa (dividido en 3 partes) . La parte 1 se preserva a través de congelamiento rápido como un polvo para el análisis de proteínas futuro, el envío condición de -80°C. La Parte 2 se conserva en condición de embarque, sellada a presión para congelación posterior de RNA a -80°C.

La Parte 3 se conserva en formalina durante 24 horas, luego etanol al 70%, se embarca a temperatura ambiente a PAI para inclusión en parafina.

Tabla 3 De lo anterior, se apreciará que, aunque las modalidades específicas se han descrito en la presente con el propósito de ilustración, diversas modificaciones pueden ser hechas sin desviarse del espíritu y alcance de lo que se proporciona en la presente. Todas las referencias mencionadas anteriormente se incorporan en este documento por referencia en su totalidad.

Claims (38)

REIVINDICACIONES

1.- Un método para el tratamiento o el manejo de linfoma no Hodgkin, que comprende: (i) identificación de un paciente con linfoma no Hodgkin sensible al tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona; y (ii) administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de 3- ( 4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il ) -piperidina-2 , 6-diona, que tiene la siguiente estructura : o una sal farmacéuticamente aceptable, solvato o hidrato.

2. - El método de la reivindicación 1, en donde el linfoma no Hodgkin es linfoma de células B grandes difusas.

3. - El método de la reivindicación 1, en donde el linfoma no de Hodgkin es de la forma activada fenotipo de células B.

4. - El método de la reivindicación 2, en donde el linfoma de células B grandes difusas tienen fenotipo de células B en forma activada.

5. - El método de la reivindicación 4, en donde el linfoma de células B grandes difusas se caracteriza por la expresión de uno o más biomarcadores sobreexpresados en líneas celulares RIVA, U2932, TMD8 o OCI-LYLO.

6. - El método de la reivindicación 1, en donde la identificación de un paciente con linfoma no Hodgkin sensible al tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2 , 6-diona comprende caracterización del fenotipo el linfoma no Hodgkin del paciente como un subtipo de células B activado.

7. - El método de la reivindicación 6, en donde el fenotipo de linfoma no Hodgkin se caracteriza como un subtipo de células B grandes activado de linfoma de células B difuso.

8. - El método de la reivindicación 6, en donde el fenotipo de la no-Hodgkin linfoma se caracteriza por la expresión de uno o más biomarcadores sobreexpresados en RIVA, U2932, TMD8 o OCI-LYLO líneas celulares.

9. - El método de la reivindicación 1, en donde la identificación del fenotipo de linfoma no Hodgkin comprende obtener una muestra biológica de un paciente con linfoma.

10. - El método de la reivindicación 9, en donde la muestra biológica es una biopsia de nodulo linfático, biopsia de médula ósea, o una muestra de sangre periférica de células tumorales .

11. - El método de la reivindicación 1, en donde la identificación de un paciente con linfoma no Hodgkin sensible al tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona comprende la identificación de un gen asociado con el fenotipo de células B activado.

12. - El método de la reivindicación 11, en donde el gen asociado con el fenotipo de células B activado se selecciona del grupo que consiste en IRF4/ UM1, F0XP1, SPIB, CARD 11 y BLI P/PDRM1.

13. - El método de la reivindicación 1, en donde la identificación de un paciente con linfoma no Hodgkin sensible al tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona comprende medir el nivel de actividad de NF-?? en una muestra biológica obtenida del paciente .

14. - El método de la reivindicación 13, en donde la muestra biológica es una biopsia de nodulo linfático, biopsia de médula ósea, o una muestra de sangre periférica de células tumorales .

15. - El método de la reivindicación 6, en donde la caracterización del fenotipo de linfoma no Hodgkin del paciente como un subtipo de células B activado comprende medir uno o más de los siguientes: (i) la sobreexpresión de SPIB, un factor de transcripción especifico de la familia Ets hematopoyético necesario para la supervivencia de las células activadas del subtipo de células B; (ii) expresión constitutiva IRF4/MUM1 mayor que las células del subtipo GCB; (iii) expresión constitutiva FOXP1 mayor que la expresión regulada ascendentemente por trisomia 3; (iv) expresión constitutiva Blimp 1 mayor, es decir, PRDM1; (v) expresión génica CARD 11 constitutiva mayor; y (vi) un nivel incrementado de actividad de NF- B relativa a células B no activadas del subtipo de células DLBCL.

16.- El método de cualquiera de las reivindicaciones 1-15, que comprende además la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más agentes activos adicionales.

17.- El método de la reivindicación 16, en donde el agente activo adicional se selecciona del grupo que consiste de un agente alquilante, un análogo de adenosina, un glucocorticoide, un inhibidor de quinasa, un inhibidor de la SYK, un inhibidor de PDE3, un inhibidor de PDE7, doxorrubicina, clorambucil, vincristina, bendamustina, forskolina y rituximab.

18. - El método de la reivindicación 17, en donde el agente activo adicional es rituximab.

19. - El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-15, en donde el compuesto se administra en una cantidad desde aproximadamente 10 a aproximadamente 50 mg por día.

20. - El método de la reivindicación 19, en donde el compuesto se administra en una cantidad de aproximadamente 10, 15, 20, 25 o 50 mg por dia.

21.- El método de la reivindicación 19, en donde el compuesto se administra oralmente.

22. - El método de la reivindicación 21, en donde el compuesto se administra en una cápsula o tableta.

23. - El método de la reivindicación 22, en donde el compuesto se administra en 10 mg o 25 mg de una cápsula.

24. - El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en donde el linfoma de células B grandes difusas sufre de recaída, es refractario o resistente a la terapia convencional.

25.- El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, en donde el compuesto se administra durante 21 días, seguido por siete días de descanso en un ciclo de 28 días.

26.- Un método para predecir la respuesta del tumor al tratamiento en un paciente con linfoma no Hodgkin, que comprende : (i) obtener una muestra biológica del paciente; (ii) medir el nivel de actividad de NF-?? en la muestra biológica; y (iii) comparar el nivel de actividad de NF-?? en la muestra biológica a la de una muestra biológica de un subtipo de linfoma no activado de células B; en donde un nivel incrementado de actividad de NF-kB relativa a células de linfoma de subtipo de células B no activadas indica una probabilidad de una respuesta de tumor de paciente efectiva a tratamiento con 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2 -il) -piperidina-2 , 6-diona.

27.- Un método de control de la respuesta del tumor al tratamiento en un paciente con linfoma no Hodgkin, que comprende : (i) obtener una muestra biológica del paciente; (ii) medir el nivel de actividad de NF- ? en la muestra biológica; (iii) administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona, o una sal, solvato o hidrato del mismo al paciente; (iv) obtener una segunda muestra biológica del paciente; (v) medir el nivel de actividad de NF-?? en la segunda muestra biológica; y (vi) comparar el nivel de actividad de NF-?? en la primera muestra biológica a que en la segunda muestra biológica; en donde una disminución del nivel de actividad de NF-?? en la segunda muestra biológica en relación con la primera muestra biológica indica una probabilidad de una respuesta tumoral eficaz del paciente.

28.- Un método para monitorear el cumplimiento del paciente con un protocolo de tratamiento de fármacos en un paciente con linfoma no Hodgkin, que comprende: (i) obtener una muestra biológica del paciente; (ii) medir el nivel de actividad de NF-?? en la muestra biológica; y (iii) comparar el nivel de actividad de NF-?? en la muestra biológica con una muestra control sin tratar; en donde una disminución del nivel de actividad de NF- ? en la muestra biológica con relación al control indica el cumplimiento del paciente con el protocolo de tratamiento de fármacos.

29. - El método de una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 28, en los que el linfoma no Hodgkin es linfoma de células B grandes difusas.

30. - El método de una cualquiera de las reivindicaciones 26 a 28, en donde el nivel de actividad de NF-?? se midió mediante un prueba inmunoabsorbente ligado a enzima .

31. - Un método para predecir la respuesta del tumor al tratamiento en un paciente con linfoma no Hodgkin, que comprende : (i) obtener una muestra biológica del paciente; (ii) purificar la proteina o ARN de la muestra; y (iii) la identificación de aumento de la expresión de un gen asociado con el activado fenotipo de células B de linfoma no Hodgkin en relación al control no activado fenotipo de células B de linfoma no Hodgkin; en donde el aumento de expresión de un gen asociado con el fenotipo de células B activado de linfoma no Hodgkin indica una probabilidad de una respuesta eficaz al tratamiento al paciente con tumor 3- (4-amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, 6-diona.

32. - El método de la reivindicación 31, en donde la muestra biológica es tejido tumoral.

33. - El método de la reivindicación 31, en donde la expresión incrementada es un aumento de alrededor de 1,5 X, 2. OX, 5X 3X, o más.

34. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 31 a 33, en donde el gen asociado con la activa fenotipo de células B se selecciona del grupo que consiste en IRF4/MUM1, F0XP1, SPIB, CARD 11 y BLIMP/PDRMl.

35. - El método de una cualquiera de las reivindicaciones 31 a 33, en donde la identificación de la expresión de un gen asociado con fenotipo de células B activadas de linfoma no Hodgkin se realiza por PCR cuantitativa en tiempo real.

36. - Un kit para predecir la respuesta del tumor al tratamiento con 3- ( -amino-l-oxo-l, 3-dihidro-isoindol-2-il) -piperidina-2, ß-diona en un paciente con linfoma no Hodgkin, que comprende: (i) un soporte sólido; y (ii) un medio para detectar la expresión de un biomarcador de un fenotipo de células B activo de linfoma no Hodgkin en una muestra biológica.

37. - El kit de la reivindicación 36, en donde el biomarcador es NF-KB.

38. - El kit de la reivindicación 36, en donde el biomarcador es un gen asociado con el activado fenotipo de células B y se selecciona del grupo que consiste de IRF4/ U 1, FOXP1, SPIB, CARD 11 y BLIMP/PDRM 1.