MX2012006081A - Metodo para determinar selectivamente un agente que es util para el tratamiento de ojo seco y/o lesion de la cornea y la conjuntiva y una composicion farmceutica obtenida por el metodo. - Google Patents

Abstract

La presente invención provee un método para determinar selectivamente un agente que es útil para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del Seminario Internacional sobre Ojo Seco (Reporte del DEWS (2007) y una composición farmacéutica que comprende el agente; la presente invención además provee un método para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007) usando el agente.

Description

MÉTODO PARA DETERMINAR SELECTIVAMENTE UN AGENTE QUE ES ÚTIL PARA EL TRATAMIENTO DE OJO SECO Y/O LESIÓN DE LA CÓRNEA Y LA CONJUNTIVA Y UNA COMPOSICIÓN FARMACÉUTICA OBTENIDA POR EL MÉTODO CAMPO TÉCNICO DE LA INVENCIÓN La presente invención provee un método para determinar selectivamente un agente que es útil para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del Seminario Internacional sobre Ojo Seco (Reporte del DEWS) (2007) y una composición farmacéutica que comprende el agente. La presente invención además provee un método para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007) usando el agente.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El reporte del DEWS (2007) es una revisión de conocimiento actual sobre ojo seco por 70 expertos internacionales de ojo seco y subcomités de DEWS proveen detalles de ojo seco incluyendo la definición y clasificación, epidemiología, diagnóstico y monitoreo, y manejo y terapia. El reporte está publicado en "The Ocular Surface (APRIL 2007, VOL 5, NO.2 pp. 65-204)" (literatura que no es patente 1 , incorporada aquí por referencia) y se puede ver en un sitio web (www.tearfilm.org).

De conformidad con el reporte del DEWS (2007), ojo seco se define como sigue (véase "The Definition and Classification of Dry Eye Disease" (p75-92)): "Ojo seco es una enfermedad multifactorial de las lágrimas y superficie ocular que ocasiona síntomas de malestar, perturbación visual, e inestabilidad de película de lágrima con daño potencial a la superficie ocular. Está acompañada de osmolaridad incrementada de la película de lágrima e inflamación de la superficie ocular".

Puesto que el ojo seco es una enfermedad multifactorial como se definió antes, los tratamientos de ojo seco varían dependiendo de sus condiciones y síntomas. El reporte del DEWS (2007) clasifica el nivel de severidad de ojo seco en 4 niveles (véase "Management and Therapy of Dry Eye Disease" (p 163-178) y el cuadro 2 (p173)) y provee recomendaciones de tratamiento para cada nivel de severidad (véase "Management and Therapy of Dry Eye Disease" y el cuadro 4) (p174)).

De conformidad con el reporte del DEWS (2007), existen varios agentes recomendados para los niveles de severidad de ojo secos 1 y 2. Sin embargo, para el nivel de severidad de ojo seco 3 o más, particularmente para lesión de superficie ocular tal como la córnea y la conjuntiva, no hay agente recomendable distinto que el suero. Además, el suero debe ser derivado de sangre de un paciente que ha de ser tratado (es decir, suero autólogo) y debe ser diluida apropiadamente cuando se administre a los ojos.

En la actualidad, sustancialmente, no hay agente efectivo para ojo seco de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007). Por lo tanto, se ha requerido establecer un modelo animal que represente ojo seco de conformidad con la clasificación del Reporte del DEWS (2007), en particular ojo seco de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte, específicamente lesión de superficie ocular tal como la córnea y la conjuntiva. También, al usar el modelo animal para determinación selectiva de fármaco, se ha requerido proveer una composición farmacéutica que es útil para ojo seco de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007), específicamente lesión de superficie ocular tal como la córnea y la conjuntiva.

Referencias de la técnica anterior Literatura que no es patente The Ocular Surface (APRIL 2007, VOL 5, NO.2 pp. 65-204) BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN Problema que ha de ser resuelto por la invención Un objeto de la presente invención es proveer un método para determinar selectivamente un agente que es útil para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007). Además, un objeto de la presente invención es proveer una composición farmacéutica para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva como se definió antes.

Medios para resolver el problema La presente solicitud provee las siguientes invenciones: (1) Un método para determinar selectivamente un agente que es útil para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del Seminario Internacional sobre Ojo Seco (Reporte del DEWS (2007), que comprende preparar un modelo de lesión de la córnea y la conjuntiva en conejo que tiene abrasión epitelial de la córnea y la conjuntiva al instilar solución de n-heptanol a un ojo de un conejo; y administrar un agente de prueba al ojo del modelo de conejo y determinar un efecto de restaurar el tejido de la córnea del agente de prueba. (2) Una composición farmacéutica para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007), que comprende un agente obtenido por el método de (1). (3) La composición farmacéutica de (2), en donde el agente es albúmina humana. (4) Una composición farmacéutica para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007), que comprende albúmina humana como un agente activo. (5) La composición farmacéutica de (4), en donde la albúmina humana es albúmina de suero humana. (6) Un método para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva, que comprende administrar una cantidad efectiva de un agente obtenido por el método de (1) a un paciente que tiene ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007). (7) Un método para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva, que comprende administrar una cantidad efectiva de albúmina humana a un paciente que tiene ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007). (8) El uso de un agente obtenido por el método de (1 ) para la fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007). (9) El uso de albúmina humana para la fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007).

Efecto de la invención De conformidad con la presente solicitud, se ha hecho posible proveer un método para determinar selectivamente un agente que es útil para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007). El agente que se ha determinado que tiene un efecto de restauración de tejido de la córnea de conformidad con el método de determinación selectiva de la presente invención es útil para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007). Además, de conformidad con la presente solicitud, se ha hecho posible proveer un método para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007) al usar el agente.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS MODALIDADES De conformidad con el reporte del DEWS (2007), el nivel de severidad de ojo seco se clasifica como sigue (véase "Management and Therapy of Dry Eye Disease" (p163-178) y el cuadro 2 (p173)).

CUADRO 1 Esquema de grados de severidad de ojo seco *Debe tener signos Y síntomas. TBUT: tiempo de ruptura lagrimal con fluoresceína. MGD: enfermedad de glándula de Meibomio El "ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007)" como se usa en la presente se refiere a ojo seco correspondiente al nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con la clasificación anterior, y/o lesión de la córnea y la conjuntiva que muestra cualquiera de los signos y síntomas de dicho ojo seco.

El término "aproximadamente", como se usa en la presente, cuando se usa con cualquier elemento numérico, se refiere a +/- 30% y +/-20%, y preferiblemente +/- 10%.

El modelo de conejo de lesión de la córnea y la conjuntiva usado en el método de determinación selectiva de la presente invención se prepara instilando solución de n-heptanol a un ojo de un conejo. Generalmente, el modelo de conejo se puede preparar anestesiando a un conejo por inyección intramuscular de un agente anestésico y después por administración ocular de un agente anestésico tópico, instilando solución de n-heptanol a uno de los ojos del conejo de tal manera que la solución de n-heptanol se disemina sobre la córnea y conjuntiva bulbar, y forzando al conejo a parpadear.

Las especies de conejo usadas en la presente invención pueden ser, pero sin limitarse a, conejo blanco de Nueva Zelanda, blanco japonés, y holandés, y el blanco de Nueva Zelanda es preferiblemente usado. El agente anestésico administrado por inyección intramuscular puede incluir ketamina, xilazina y medetomidina, y preferiblemente, ketamina y xilazina se usan en combinación. El agente anestésico tópico para administración ocular puede incluir oxibuprocaína, lidocaína y bupivacaína, y la oxibuprocaína es preferiblemente usada.

La solución de n-heptanol instilada en un ojo es una solución que consiste de n-heptanol únicamente, o una mezcla de n-heptanol y etanol. La mezcla de n-heptanol y etanol es preferida porque tiene carácter hidrofílico mejorado y puede diseminarse fácilmente sobre la superficie ocular e induce eficientemente lesión. La relación de n-heptanol y etanol es aproximadamente 9: 1 a aproximadamente 7: 3, preferiblemente de aproximadamente 8: 2. El volumen de aplicación de solución de n-heptanol es aproximadamente 0.01 a aproximadamente 0.1 mi, preferiblemente de aproximadamente 0.03 a aproximadamente 0.05 mi en total y es preferiblemente instilado varias veces (2-4 veces) de tal manera que la solución de n-heptanol se disemina eficientemente sobre la córnea y la conjuntiva bulbar.

Después de la instilación de solución de n-heptanol a un ojo, el conejo es forzado a parpadear (1-5 veces, preferiblemente 2-4 veces), y forzado a cerrar el ojo durante varios minutos (aproximadamente 0.5 a aproximadamente 5 min, preferiblemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 3 min). Como resultado, ocurre abrasión epitelial de la córnea y la conjuntiva. De conformidad con la presente invención, se puede preparar un modelo de lesión de la córnea y la conjuntiva estable.

Al determinar un efecto de restauración de tejido de la córnea de un agente de prueba usando el modelo de conejo de lesión de la córnea y la conjuntiva de la presente invención, es posible determinar selectivamente un agente que es útil para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007).

En el método de determinación selectiva de la presente invención, la frecuencia de administración ocular de un agente de prueba es generalmente, pero no limitado a, 1-6 veces al día. Para determinar la potencia de un agente de prueba con respecto al efecto de restaurar el tejido de la córnea, la frecuencia de administración ocular por día se prefiere que sea más bajo y preferiblemente dos veces por día en general. La duración de la administración ocular de un agente de prueba puede variar dependiendo de factores tales como el tiempo de la prueba y la especie de conejo. Generalmente, el efecto de un agente de prueba se puede determinar en 10 días a partir del inicio de su administración ocular.

Generalmente, el efecto de restaurar el tejido de la córnea de un agente de prueba se puede determinar como sigue. Las condiciones de la córnea y la conjuntiva se observan al teñir un ojo con un colorante antes y después de la instilación de solución de n-heptanol; antes de la administración por primera vez del agente de prueba cada día; después de la administración por segunda vez del agente de prueba en cada uno de los días 4, 5 y 6; y un día después de la administración final del agente de prueba. El colorante para tinción puede incluir fluoresceína, rosa de bengala, y verde de lisamina y fluoresceína es preferiblemente usada. El grado de lesión de la córnea se califica al observar y fotografiar condiciones de tinción de la córnea.

Una calificación de tinción alta representa un alto grado de lesión de la córnea y una calificación de tinción baja representa un grado bajo de lesión de la córnea.

Para la calificación, se puede usar cualquier método convencional. Por ejemplo, la córnea se divide en 5 áreas (central, superior, temporal, nasal e inferior) y la intensidad de tinción de cada área se califica de 3 y la calificación total (de 15) se usa para la determinación. La intensidad de tinción se califica 0 para cuando no hay tinción; 1 para tinción parcial; 2 para tinción de aproximadamente dos terceras partes del área; y 3 para tinción total.

En la presente invención, el efecto de restaurar el tejido de la córnea de un agente de prueba se determina que sea significativo cuando la diferencia significativa entre la calificación de tinción que muestra el grado de lesión de la córnea del ojo al que se administra el agente de prueba y el del ojo al que se administra solución salina se determina en cada observación de la córnea y la conjuntiva y el nivel de importancia es menor que 5%. La diferencia significativa se puede determinar por cualquier método de manera apropiada, y por ejemplo, por prueba de t de Student pareada.

Para agentes cada uno recomendado para el nivel de severidad de ojo seco 1 , 2 ó 3 en el reporte del DEWS (2007), el efecto de restaurar el tejido de la córnea fue confirmado al usar el modelo de conejo de lesión de la córnea y la conjuntiva de la presente invención. Los agentes recomendados en el reporte del DEWS (2007) para el nivel de severidad de ojos secos 1 y 2, tales como una formulación que contiene componente viscoso (Hyalein® mini-solución oftálmica al 0.3%: Santen Pharmaceutical (Japón): aprobada en Japón) o una formulación que contiene electrolito (Cationorm®: Novagali Pharma (Francia): aprobada en Europa) para el nivel de severidad de ojo seco 1 , y una formulación que contiene un agente anti-inflamatorio (Restasis®: AllerganC US) : aprobada en E.U.A.) para el nivel de severidad de ojo seco 2, no mostró un efecto significativo de restaurar el tejido de la córnea. Por otra parte, el suero, que es recomendado para el nivel de severidad de ojo seco 3 (acervos de suero humano: Kohjin Bio (Japón)) mostró un efecto significativo de restauración de tejido de la córnea. Por consiguiente, el método para determinar el efecto de restaurar el tejido de la córnea usando el modelo de conejo de lesión de la córnea y la conjuntiva de la presente invención se entiende que es útil para determinar selectivamente un agente que es útil para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007).

Además, de conformidad con el método de determinación selectiva de la presente invención, se ha revelado que la albúmina de suero humana tiene un efecto significativo de restaurar el tejido de la córnea en el modelo de conejo de lesión de la córnea y la conjuntiva de la presente invención, similar al agente recomendado en el reporte del DEWS (2007) para el nivel de severidad de ojo seco 3 (suero). Por lo tanto, se entiende que la albúmina humana es útil para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007).

En la presente invención, la albúmina humana es preferiblemente albúmina de suero humana. En la presente invención se puede usar cualquier albúmina de suero humana, con la condición de que tenga pureza para propósitos médicos generales. De manera específica, se prefiere que contenga 80% o más de albúmina cuando se analice por electroforesis. Además, se prefiere que sea tratada con calor para inactivación de virus u otros. Particularmente, la albúmina de suero humana comercialmente disponible como un medicamento es preferida. Las albúminas de suero humanas recombinantes producidas por microorganismos también se usan preferiblemente para la presente invención. Los métodos para preparar albúminas de suero humanas recombinantes usando tecnología de recombinación de genes son conocidos en la técnica. Por ejemplo, un vector que contiene un gen que codifica albúmina de suero humana se prepara y se introduce en células hospederas de tal manera que las células son transformadas. Entonces, las células transformadas que producen albúmina de suero humana son seleccionadas y cultivadas, y de las células o el medio de cultivo de las mismas, la albúmina de suero humana es aislada y purificada. La célula hospedera puede incluir microorganismos comúnmente usados en la técnica para producción de proteína, tales como levaduras y E. Coli. Ejemplos de levaduras pueden incluir aquellos que pertenecen al género Kluyveromyces, Saccharomyces y Pichia, y en particular, Kluyveromyces laactis, Saccharomyces cerevisiae y Pichia pastoris se usan preferiblemente. Sin embargo, es preferible usar la cepa CBS2360 de Kluyveromyces laactis, la cepa AH22 de Saccharomyces cerevisiae (a, his 4, leu 2, can 1) y la cepa GTS115 de Pichia pastoris (his 4) como la levadura hospedera.

Como se usa en la presente, el término "tratamiento" o "tratar" se refiere a cualesquiera medios de control de las condiciones, incluyendo prevención, cura y alivio de las condiciones y detención o alivio del desarrollo de la condición.

La composición farmacéutica de la presente invención puede estar en cualquier forma de dosis para administración tópica a los ojos. Es particularmente preferido que sean soluciones oftálmicas o gotas para los ojos.

En el caso de que la composición de la presente invención se formule como una solución oftálmica que comprende albúmina humana como un agente activo, la composición puede contener albúmina humana en una cantidad de aproximadamente 1 a 1000 mg/ml (0.1-100% p/v), muy preferiblemente de aproximadamente 10 a 1000 mg/ml(1-100% p/v), y en especial, de aproximadamente 10 a 250 mg/ml (1-25% p/v). La composición además puede contener un diluyente farmacéuticamente aceptable.

Como se usa en la presente, el "diluyente farmacéuticamente aceptable" puede ser cualquier diluyente que se usa para composición oftálmica conocida por los expertos en la técnica, por ejemplo, agua, solución salina fisiológica, solución de lágrimas artificial, y similares. La composición farmacéutica de la presenté invención además puede comprender varios componentes que se usan generalmente en composiciones oftálmicas, tales como estabilizadores, esterilizadores, agentes reguladores de pH, agentes isotónicos, agentes quelatadores, ajustadores de pH, agentes tensoactivos, y similares. Cuando la composición se formula como una solución oftálmica o gotas para los ojos, el pH de la composición es ajustado preferiblemente de 5 a 8.

La composición farmacéutica de la presente invención se puede administrar en una cantidad de aproximadamente 1 a aproximadamente 100 µ?/ojo, preferiblemente de aproximadamente 10 a aproximadamente 50 µ?/ojo, y muy preferiblemente de aproximadamente 30 a 50 µ?/ojo para una administración.

En un aspecto diferente, la presente invención provee el uso de albúmina humana para la fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007).

En un aspecto diferente adicional, la presente invención provee un método para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del DEWS (2007), que comprende administrar a un sujeto que necesita el mismo una cantidad efectiva de albúmina humana.

En estos métodos de la presente invención, la "cantidad efectiva" de albúmina humana es una cantidad requerida para el tratamiento deseable, y se puede seleccionar un óptimo de conformidad con los síntomas del paciente, edad, sexo, peso corporal, dieta, otros fármacos usados en combinación y varios factores que son reconocidos por los expertos en el campo médico. Esta cantidad efectiva también puede variar dependiendo del tipo o actividad de la albúmina humana, además de los factores anteriores. En estos métodos de la presente invención, la composición farmacéutica se puede administrar en una cantidad de de aproximadamente 1 a aproximadamente 100 µ?/ojo, preferiblemente de aproximadamente 10 a aproximadamente 50 µ?/ojo y muy preferiblemente de aproximadamente 30 a 50 µ?/ojo, de aproximadamente 1 a aproximadamente 20 veces al día y muy preferiblemente, 1 a 10 veces al día, pero no se pretende limitar el alcance de la invención.

La composición farmacéutica usada en la presente invención puede ser co-administrada con otro compuesto farmacéuticamente activo a menos que no interfiera con el efecto de la presente invención. El término "coadministrar" puede incluir administrar el otro compuesto farmacéuticamente activo antes, simultáneamente con y después de administrar la composición farmacéutica de la presente invención. Cuando el otro compuesto farmacéuticamente activo se administra simultáneamente con la composición farmacéutica de la presente invención, la composición de la presente invención y el otro compuesto se pueden formular juntos en una sola forma de dosis o respectivamente en formas de dosis separadas. Por ejemplo, solución de lágrimas artificiales, sulfato de polisacárido tal como ácido hialurónico y sulfato de condroitina, ciclosporina, glutatión, flavina-nucleótido de adenina sódico, corticosteroide, tetraciclina, vitamina A (retinol) y sus derivados tales como ésteres de vitamina A incluyendo palmitato de retinol y acetato de retinol, y factor de crecimiento celular tal como factor de crecimiento de hepatocitos(HGF), factor de crecimiento epidérmico(EGF), factor de crecimiento de fibroblastos(FGF), factor de crecimiento similar a la insulina(IGF), factor de crecimiento de nervio(NGF), factor de crecimiento derivado de plaquetas(PDGF), factor de crecimiento transformante(TGF-a y TGF-ß) y factor de crecimiento de queratinocitos(KGF) se puede coadministrar con la composición farmacéutica de la presente invención.

La presente invención se explicará posteriormente en vista de ejemplos de prueba mostrados más adelante. Los ejemplos de prueba no deben usarse para limitar el alcance de la presente solicitud de ninguna manera.

EJEMPLOS Ejemplo de prueba 1 Preparación de modelo de lesión de la córnea y la conjuntiva Se anestesiaron conejos (std:NZW) por inyección intramuscular de ketamina (10 mg/kg) y xilazina (4 mg/kg) y después por administración ocular de 0.4% de oxibuprocaína (2 gotas por ojo). Los conejos se mantuvieron en una posición reclinada y se les instiló 0.04 mi (0.01 mi X 4 veces) de solución de n-heptanol (n-heptanol:etanol = 8: 2), preparada inmediatamente antes de usarse, en uno de los ojos, de tal manera que la solución de n-heptanol se diseminara sobre la córnea y conjuntiva bulbar. Después, los conejos fueron forzados a parpadear 3 veces y a cerrar los ojos durante 2 min después del tercer parpadeo. Este procedimiento se siguió para ambos ojos. Por lo tanto, los modelos de lesión de la córnea y la conjuntiva se prepararon.

Administración de agentes de prueba Empezando a partir del dia de preparación de lesión de la córnea y la conjuntiva, se administró suero o formulación de hialuronato de sodio al 0.3% repetidamente 2 veces al día durante 10 días. Se administró solución salina de la misma manera a los otros ojos distintos de aquellos a los que se administró el agente de prueba. Todos se administraron en un volumen de 50 µ?/ojo/tiempo.

Para usarse como suero, acervos de suero humano (Kohjin Bio (Japón)) fue esterilizado por filtración (MILLEX GV, PVDF, 0.22 µ??, MILUPORE) y se diluyó 5 veces con solución salina de conformidad con el método conocido para preparar solución oftálmica en suero usada en terapia con suero autólogo para ojo seco.

La formulación de hialuronato de sodio al 0.3% fue mini-solución oftálmica Hyalein® al 0.3% (Santen Pharmaceutical (Japón)).

Grupos de prueba CUADRO 2 Los conejos fueron asignados a cada grupo por distribución aleatoria estratificada sobre peso corporal.

Determinación de lesión de la córnea Condiciones de la córnea y la conjuntiva se observaron antes del tratamiento de solución de n-heptanol (un día antes de la primera administración del agente de prueba); inmediatamente después del tratamiento con solución de n-heptanol; antes de la administración por primera vez del agente de prueba en cada día; después de la administración por segunda vez del agente de prueba en cada uno de los días 4, 5 y 6; y un día después de la administración final del agente de prueba.

Dos µ? de fluoresceína al 1% se instiló en los ojos. Después de 2 min, la tinción de la córnea y la conjuntiva fue fotografiada y observada a través de un microscopio digital (VHX-900, KEYENCE CORPORATION (Japón)) con un filtro de azul de cobalto (FUJI FILTER BPB45) en la sección emisora de luz y un filtro amarillo (FUJI FILTER SC52) en frente del lente, y después se calificó el grado de lesión de la córnea. Para la calificación, cada córnea se dividió en 5 áreas (central, superior, temporal, nasal e inferior). La intensidad de la tinción con fluoresceína de cada área se calificó como 3 y la calificación total (de 15) se usó para determinación. La intensidad de la tinción se calificó como 0 para cuando no hubo tinción; 1 para tinción parcial; 2 para tinción de aproximadamente dos terceras partes del área; y 3 para tinción total.

La fluoresceína al 1% se preparó disolviendo sal de sodio de fluoresceína con solución salina.

Resultado Las calificaciones de tinción con fluoresceína de la córnea después del tratamiento con solución de n-heptanol se muestran en el cuadro 3. En todos los animales, las calificaciones de tinción con fluoresceína de la córnea antes del tratamiento con solución de n-heptanol fueron 0.

Como se muestra en el cuadro 3, en los ojos a los que se administró suero, un efecto significativo de restaurar el epitelio de la córnea (p<0.05) se observó el día 4 del tratamiento de lesión.

Por otra parte, no se observó efecto de restauración del epitelio de la córnea con la administración de hialuronato de sodio al 0.3%.

CUADRO 3 Puntuaciones de fluoresceína en córnea de conejos con lesión de la conjuntiva de queratocon inducida por n-heptanol después de repetir administración de suero o hialuronato al 0.3% a un ojo y solución salina al otro ojo 2 veces al día durante 10 días Puntuaciones de tinción con fluoresceína (media y error estándar de 6 casos) Grupo de prueba Oía i 3.5 •1 4.5 5.5 6 10 media 15.00 15.00 15.00 15.00 14.17 13.33" 12.17 10.00 8.67 6.33 S.17 3.50 2.17 1.50 Suero EE 0.00 0.00 0.00 0.00 048 0.76 1.05 1.00 0.85 0.S8 1.01 1.18 0.87 0.43 media 15.00 15.00 15.00 15.00 14.83 14.67 13.00 11.00 ?.17 7.50 5.43 4.50 2.50 1.83 Solución Salina EE 0.00 0.00 0.00 0.00 0.17 0.33 O.GS 1.13 1.05 0.89 87 0.56 0.C2 0.40 Hialuronato de media 15.00 15.00 15.00 15.00 14.67 14.17 12.50 10.17 7.50 6.83 4.50 2.50 2.00 1.33 sodio al 0.3% EE 0.00 0.00 0.00 0.00 0.21 0.48 0.80 1.25 1.23 1.08 0.89 0.56 0.86 0.85 media 15.00 15.00 15.00 15.00 15.00 13.83 12.83 11.17 7.67 0.33 4.07 2.83 1.33 1.17 Solución Salina EE 0.00 0.0IJ 0.00 0.00 0.00 0.S-1 0. ?? 0.70 0.92 0.71 0. 5 0.17 0.42 0.10 Día 0: El día de tratamiento con n-heptanol (el día de inicio de administración de los agentes de prueba) Cada córnea se dividió en 5 áreas, se calificaron 3 y se evaluó con la puntuación total (de 15).

Mientras más pequeño el número, más alto fue el efecto restaurador.

*, **: Prueba t de Student pareada, p<0.05 (*), 0.01 (**).

EJEMPLO DE PRUEBA 2 La preparación de modelo de lesión de la córnea y la conjuntiva, administración de agentes de prueba, y determinación de lesión de la córnea se realizaron como se describe en el ejemplo de prueba .

El agente de prueba fue formulación de ciclosporina al 0.05% o emulsión catiónica. Como formulación de ciclosporina al 0.05%, se usó Restasis® (Allergan, lnc( E.U.A.) ). Como emulsión catiónica, se usó Cationorm® (Novagali Pharma SA (Francia)).

Grupos de prueba CUADRO 4 Los conejos fueron asignados a cada grupo por distribución aleatoria estratificada sobre peso corporal.

Resultado Las calificaciones de tinción con fluoresceína de la córnea después del tratamiento con solución de n-heptanol se muestran en el cuadro 5. En todos los animales, las calificaciones de tinción con fluoresceína de la córnea antes del tratamiento con solución de n-heptanol fueron 0.

Como se muestra en el cuadro 5, la administración de cualquiera de ciclosporina al 0.05% y emulsión catiónica no mostró un efecto de restauración de epitelio de la córnea.

De conformidad con los resultados de los ejemplos de prueba 1 y 2, se confirmó que el agente recomendado en el reporte del DEWS (2007) para el nivel de severidad de ojo seco 3 (suero), pero no los agentes recomendados para el nivel de severidad de ojo secos 1 y 2, muestra un efecto significativo de restauración de tejido de la córnea en el sistema de determinación usando el modelo de conejo de la presente invención. Por consiguiente, se entiende que el modelo de conejo de lesión de la córnea y la conjuntiva de la presente invención es útil como un modelo animal que representa ojo seco de conformidad con la clasificación del reporte del DEWS (2007), particularmente ojo seco de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte, específicamente lesión de superficie ocular tal como la córnea y la conjuntiva.

CUADRO 5 Puntuaciones de fluoresceína en córnea de conejos con lesión de la conjuntiva de queratocon inducida por n-heptanol después de repetir administración de formulación de ciclosporina al 0.05% o emulsión catiónica a un ojo y solución salina al otro ojo 2 veces al día durante 10 días Puntuaciones de tinción con fluoresceína (media y error estándar de 6 casos) Grupo de prueba .

Día 0 2 3 3.5 4 4.6 5 5.6 6 7 8 9 10 Ciclosporina al media 15.00 15. 00 15. 00 15.00 14.50 13.17 11.67 10.17 9. 17 7.17 5.67 5.00 3.33 3.67 0.05% EE O.OO 0. 00 0. 00 0.00 0.22 0.70 1.05 0.98 0. 83 0.87 0.76 0.86 1.02 0.92 media 15.00 15. 00 14. 83 14.50 14.33 13.50 12.00 9.83 8. 50 7.00 3.83 3.00 1.83 1.67 Solución Salina EE 0.00 0. 00 0. 17 0.50 0.49 0.96 1.07 1.35 1. 43 1.55 0.98 1.34 1. II 0.62 Emulsión media 15.00 18. 00 15. 00 15.00 14.50 14.17 12.67 10.17 9. 33 7.50 5.33 4.33 2.33 2.67 catiónica EE 0.00 0. 00 0. 00 0.00 0.34 0.40 0.96 1.35 1. 11 0.99 1.23 l.14 l.11 1.31 2 media 15. 0 .15. 00 15. oo 15.00 15.00 14.50 13.50 11.00 9. 67 8.67 5.50 4.17 2.50 2.17 Solución Salina EE 0.00 0. oo 0. 00 0.00 0.00 0.34 0.56 1.07 1. 11 1.54 1.41 1.45 1.36 1.28 Día 0: El día de tratamiento con n-heptanol (el día de inicio de administración de los agentes de prueba) Cada córnea se dividió en 5 áreas, se calificaron 3 y se evaluó con la puntuación total (de 15).

Mientras más pequeño el número, más alto fue el efecto restaurador.

EJEMPLO DE PRUEBA 3 La preparación de modelo de lesión de la córnea y la conjuntiva, administración de agentes de prueba, y determinación de lesión de la córnea se realizaron como se describe en el ejemplo de prueba 1.

El agente de prueba fue nHSA al 10%.

Para usarse como nHSA al 10%, enketsu albumin-Wf (formulación de albúmina de suero humana al 25%, Mitsubishi Tanabe Pharma) se diluyó con solución de cloruro de sodio de tal manera que la presión osmótica fuera casi igual a la solución salina.

Grupos de prueba CUADRO 6 Resultado Las calificaciones de tinción con fluoresceína de la córnea después del tratamiento con solución de n-heptanol se muestran en el cuadro 7. En todos los casos, las calificaciones de tinción con fluoresceína de la córnea antes del tratamiento con solución de n-heptanol fueron 0.

Como se muestra en el cuadro 7, las calificaciones de tinción con fluoresceína de la córnea fueron significativamente reducidas con la administración de nHSA al 10% comparada con solución salina en los días 4, 4.5, 5, 5.5, 6 y 10 del tratamiento de lesión, lo que indica el efecto de restauración del epitelio de la córnea de nHSA al 10% (Días 4, 5, 5.5, 6 y 10: p<0.05; Día 4.5: p<0.01).

De conformidad con el resultado anterior, se entiende que la albúmina de suero humana tiene un efecto de restaurar el tejido de la córnea igual a o más que el del suero que es recomendado en el reporte del DEWS (2007) para el nivel de severidad de ojo seco 3 (ejemplo de prueba 1).

CUADRO 7 Puntuaciones de fluoresceína en córnea de conejos con lesión de la conjuntiva de queratocon inducida por n-heptanol después de repetir administración de nHSA al 10% a un ojo y solución salina al otro ojo 2 veces al día durante 10 días Puntuaciones de tinción con fluoresceína (media y error estándar de 6 casos) Grupo de prueba Día 0 1 ¿ 3 3.5 4 4.5 5 5. S C 7 8 9 10 medía 15.00 15.00 15.00 11.83 13.83 12.83* 11.00 " 7.17* 6.17' 4-83' 3.17 1.83 1.50 1.50* nHSA al 10% EE 0.00 0.00 .0O 0.17 0.54 0.70 1.03 0.83 0.95 0.48 0.87 0.48 0.43 0.S0 1 media 15.00 15.00 15.00 15.00 14.67 14.33 13.17 10.50 8.67 6.67 4. SO 2.83 2.00 2.50 Solución Salina EE 0.00 0.00 .OO 0.00 0.33 0.49 0.95 1,20 1,36 0,80 0,85 0.79 0.51 0.43 Día 0: El día de tratamiento con n-heptanol (el día de inicio de administración de los agentes de prueba) Cada córnea se dividió en 5 áreas, se calificaron 3 y se evaluó con la puntuación total (de 15).

Mientras más pequeño el número, más alto fue el efecto restaurador.

Claims (7)

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1. Un método para determinar selectivamente un agente que es útil para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el reporte del Seminario Internacional sobre Ojo Seco (Reporte del DEWS (2007), que comprende determinar un efecto de restaurar el tejido de la córnea del agente de prueba en un modelo de lesión de la córnea y la conjuntiva en conejo que tiene abrasión epitelial de la córnea y la conjuntiva preparado al instilar solución de n-heptanol a un ojo de un conejo.

2. Una composición farmacéutica para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el Reporte del DEWS (2007), que comprende un agente obtenido por el método de la reivindicación 1.

3. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 2, caracterizada además porque el agente es albúmina humana.

4. Una composición farmacéutica para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el Reporte del DEWS (2007), que comprende albúmina humana como un agente activo.

5. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 4, caracterizada además porque la albúmina humana es albúmina de suero humana.

6. El uso de un agente obtenido por el método de la reivindicación 1 para la fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el Reporte del DEWS (2007).

7. El uso de albúmina humana para la fabricación de una composición farmacéutica para el tratamiento de ojo seco y/o lesión de la córnea y la conjuntiva de nivel de severidad de ojo seco 3 o más de conformidad con el Reporte del DEWS (2007).