MX2011005454A

MX2011005454A - Prediccion y prevencion de preeclampsia.

Info

Publication number: MX2011005454A
Application number: MX2011005454A
Authority: MX
Inventors: Dennis R Stewart; Kirk P Conrad; Arundhathi Jeyabalan
Original assignee: Corthera Inc
Priority date: 2008-11-24
Filing date: 2009-11-24
Publication date: 2011-06-20
Also published as: AU2009316278B2; JP5727938B2; US20110281801A1; JP2012510061A; CN102224420B; US8574851B2; RU2011125546A; CA2742792A1; EP2368114A2; KR20110106316A; RU2538661C2; CN102224420A; BRPI0920897A2; WO2010060102A3; JP2015051989A; AU2009316278A1; WO2010060102A2; EP2368114A4

Abstract

La presente descripción se refiere a métodos para evaluar el riesgo incrementado de preeclampsia en una mujer embarazada. Los métodos descritos en la presente solicitud emplean medir los niveles de relaxina, y opcionalmente medir los niveles de proteína C-reactiva en una muestra biológica de una mujer embarazada. La descripción también abarca métodos para reducir el riesgo de preeclampsia a través de la administración de una formulación farmacéutica de relaxina a una mujer embarazada.

Description

PREDICCION Y PREVENCION DE PREECLAMPSIA SOLICITUDES RELACIONADAS La presente solicitud reclama beneficio bajo 35 U.S.C. 119 (e) de la solicitud de patente E.U.A. provisional No. 61/200,150, presentada el 24 de noviembre de 2008, la cual se incorpora en la presente solicitud para referencia en su totalidad para todos los propósitos.

CAMPO DE LA INVENCION La presente descripción se refiere a métodos para evaluar el riesgo incrementado de preeclampsia en una mujer embarazada. Los métodos descritos en la presente solicitud emplean medir los niveles de relaxina, y opcionalmente medir los niveles de proteí,na C-reactiva en una muestra biológica de una mujer embarazada. La descripción también abarca métodos para reducir el riesgo de preeclampsia a través de la administración de una formulación farmacéutica de relaxina a una mujer embarazada.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION La preeclampsia (también conocida como toxemia) es una condición potencialmente letal que afecta las mujeres embarazadas, usualmente ta rd ía en el segu ndo o tercer trimestre , y a las mujeres posnatales en las primeras seis semanas después del parto. Esta se diagnostica mediante una n ueva aparición de prote ína en la ori na (proteinu ria) y presión sangu ínea alta. La condición afecta los ríñones, h ígado, cerebro, corazón y placenta de las mujeres embarazadas. La preeclampsia ocurre en aproximadamente 8 a 1 0% de los embarazos y únicamente se alivia terminando el embarazo, ya sea med iante i nd ucción de parto o cesárea. Su causa sigue siendo en su gran mayoría desconocida. La preeclampsia ocurre muy comúnmente d urante u n primer embarazo. Se sabe también q ue el riesgo de preeclampsia está incrementado en forma moderada pa ra ciertos g rupos de m ujeres embarazadas, incluyendo m ujeres con más de 35 años de edad o menos de 1 8 años de edad ; mujeres que están genéticamente pred ispuestas a esta cond ición ; mujeres q ue padecen de hipertensión preexistente, diabetes, enfermedades autoinmunes tales como lupus, varias trombofilias heredadas tales como el factor V de Leiden , o enfermedad renal; mujeres obesas, y en mujeres con gestaciones múltiples (gemelos, trillizos, y más) . El riesgo individual más sig nificativo para desarrollar preeclampsia es haber tenido preeclampsia en un embarazo anterior.

Aunq ue la preeclampsia normalmente se desarrolla después de la semana 20 del embarazo, ésta también puede empezar más antes, si existe una mola hidatiforme. La preeclampsia se puede desarrollar ya sea g radualmente o repentinamente, y puede permanecer ligera a través de todo el embarazo o volverse g rave.

Los síntomas comunes además de presión sanguínea alta y proteinuria son ácido úrico elevado, problemas de visión tal como luces parpadeantes o visión borrosa, dolores de cabeza persistentes, hinchazón extrema de manos y pies, retención de fluido, dolores en el abdomen derecho superior. Si no se trata, la preeclampsia puede dañar el hígado o ríñones de la madre, privar al feto de oxígeno, y ocasionar eclampsia (convulsiones). Una mujer embarazada con signos de preeclampsia debe ser monitoreada muy de cerca por un médico. La preeclampsia de moderada a grave con frecuencia se trata en el hospital con descanso en cama, sulfato de magnesio, y medicamento para presión sanguínea alta. Por desgracia, el parto sigue siendo la única "cura" verdadera para la preeclampsia. De hecho, cuando una mujer tiene preeclampsia severa o está cerca de dar a luz con preeclampsia ligera a moderada, el parto sigue siendo el mejor remedio hasta la fecha. Por lo tanto, el trabajo de parto se inicia con medicamento, a menos que se considere necesaria una cesárea. Dentro de los primeros días después del parto, la presión sanguínea de la madre generalmente regresa a la normal, sin embargo, con preeclampsia grave, podría tomar varias semanas para que la presión sanguínea regrese a lo normal.

Específicamente, la preeclampsia se diagnostica cuando una mujer embarazada desarrolla presión sanguínea alta (dos lecturas separadas tomadas por lo menos a cuatro horas de separación de 140/90 mm de Hg o mayor) y 300 mg de proteína en una muestra de orina de 24 horas (es decir proteinuria). ; La hinchazón o edema , (especialmente en las manos y cara) ha sido considerada desde hace mucho como un signo importante para una diagnosis de preeclampsia, pero en la práctica médica actual sólo son necesarias la hipertensión y proteinu ria para una diagnosis, debido a q ue hasta el 40% de las mujeres con emba razo normal también pueden tener edema . Sin embargo, el edema depresible, es decir, hinchazón i nusual, particularmente de las manos , pies, o cara , el cual es notorio porque deja una indentación cuando se presiona , puede ser significativo y debe ser reportado a un médico. Au nq ue la eclampsia es potencialmente fatal , la preeclampsia puede ser abiertamente asi ntomática , o se puede presentar con síntomas de malestares típicos asociados con el embarazo. El dolor epigástrico , por ejemplo, el cual refleja implicación hepática y es típico de u na forma severa de preeclampsia denominada el sínd rome H ELLP (es decir, hemolisis , enzimas hepáticas elevadas y cuenta plaquetaria baja) se puede confu ndir fácilmente con agru ras , u n problema muy comú n del embarazo. Por lo tanto, el diag nóstico presuntivo de preeclampsia es dependiente de los rasgos pre-eclámpticos coincidentes, en el q ue la diagnosis definitiva generalmente no es posible hasta que se observa la regresión del síntoma después del parto.

Aunque se han hecho avances en el campo de tamizaje de preeclampsia , el personal clínico contin úa luchando con estrategias óptimas para monitorear mujeres embarazadas que están en riesgo de preeclampsia. Se desea una estrateg ia que proteja tanto la mad re como al niño contra los efectos dañ inos de la preeclampsia. La presente descripción enfrenta esta necesidad al proveer métodos para determinar si una mujer embarazada tiene o está predispuesta o no a la preeclampsia .

BREVE DESCRI PCION DE LA I NVEN CION La presente descripción provee métodos para evaluar el riesgo y red ucir la probabilidad de desarrollar preeclampsia en mujeres embarazadas. U na ventaja importante de la presente descripción es q ue se puede evaluar el riesgo de desarrollar preeclampsia en etapas tempranas durante el embarazo de modo tal que la terapia se pueda iniciar en una manera puntual . Otra ventaja de la presente descripción es q ue las mujeres embarazadas a quienes se ha determinado que están en u n riesgo incrementado de preeclampsia se pueden tratar con n iveles relativamente bajos de relaxi na o u n agonista de la misma , para preven ir o aten uar la preeclampsia . La administración temprana de relaxina puede red ucir dramáticamente el número de complicaciones del embarazo debido a preeclampsia en mujeres embarazadas que son relativamente deficientes en relaxina H2 durante su primer trimestre del embarazo. Debido a q ue la relaxina se presenta de manera natural en las mujeres embarazadas , el tratamiento con relaxina exógena no debería estar acompañado por efectos secu ndarios perjudiciales. I ncluso otra ventaja de la presente descripción es q ue se puede seleccionar u na población enriquecida de pacientes para investigación y/o estudios clínicos para entender de manera más adecuada la preeclampsia , y el avance de la enfermedad en u n subg rupo de pacientes embarazadas que están predispuestas a la preeclampsia .

En u n aspecto, la presente descripción provee u n método para evaluar el riesgo de desarrollar preeclampsia en una mujer emba razada , incluyendo a seleccionar una mujer emba razada en el primer trimestre del embarazo , y detectar el nivel de la proteína relaxi na en la mujer embarazada para evaluar el riesgo del desarrollo de preeclampsia en dicha mujer. En otro aspecto , la presente descripción provee un método para evaluar el riesgo de desarrollo de preeclampsia en una m ujer embarazada, incluyendo seleccionar u na mujer embarazada en el seg undo trimestre del embarazo, y detectar el nivel de la proteína relaxina en la m ujer embarazada para evalua r el riesgo de desarrollo de preeclampsia en dicha mujer. En, otro aspecto, la presente descripción provee un método para evaluar el riesgo de desarrollo de preeclampsia en una mujer emba razada; que incluye seleccionar u na mujer embarazada antes de la man ifestación de los síntomas de preeclampsia , y detectar el nivel de la proteína relaxina en la mujer embarazada para evaluar el riesgo de desarrollo de preeclampsia en dicha mujer. La relaxina se puede detecta r en la sangre. De preferencia , la relaxi na se detecta utilizando un anticuerpo contra relaxina , tal como un anticuerpo monoclonal o u n anticuerpo policlonal . En u na modalidad de la descripción , la mujer embarazada ha estado embarazada por 5 a 14 semanas. En otra modalidad de la descripción, la mujer embarazada ha estado embarazada por 5 a 28 semanas. En otra modalidad de la descripción, la mujer embarazada está embarazada con más de un niño. En otra modalidad de la descripción, la mujer embarazada tiene más de 35 años de edad. Incluso en otra modalidad, la mujer embarazada no es mayor de 18 años de edad. Incluso en otra modalidad, la mujer embarazada está genéticamente predispuesta a la preeclampsia. En otro aspecto de la descripción, el método también incluye detectar el nivel de proteína C-reactiva (CRP) ,en la mujer embarazada. CRP se detecta en sangre. De preferencia, CRP se detecta utilizando un anticuerpo contra CRP, tal como un anticuerpo monoclonal o un anticuerpo policlonal.

En otro aspecto, la presente descripción provee un método para reducir la probabilidad de desarrollo de preeclampsia en una mujer embarazada, que incluye seleccionar una mujer embarazada en el primer trimestre de embarazo, en el cual la mujer embarazada tiene un nivel de relaxina menor de aproximadamente 500 pg/ml en su torrente sanguíneo. En otro aspecto, la presente descripción provee un método para reducir la probabilidad de desarrollo de preeclampsia en una mujer embarazada, que incluye seleccionar una mujer embarazada en el segundo trimestre de embarazo, en el cual la mujer embarazada tiene un nivel de relaxina menor de aproximadamente 500 pg/ml en su torrente sanguíneo. En otro aspecto, la presente descripción provee un método para reducir la probabilidad de desarrollo de preeclampsia en una mujer embarazada, que incluye seleccionar una mujer embarazada antes de la manifestación de los síntomas de preeclampsia, en el cual la mujer embarazada tiene un nivel de relaxina menor de aproximadamente 500 pg/ml en su torrente sanguíneo. El método también incluye administrar relaxina en una formulación farmacéutica a la mujer embarazada para reducir la probabilidad de desarrollar preeclampsia en la mujer embarazada. La relaxina se puede administrar a la mujer embarazada en una cantidad de aproximadamente 10 Mg/kg hasta aproximadamente 100 pg/kg de peso corporal del individuo por día. En una modalidad preferida, la relaxina se administra a la mujer embarazada en una cantidad de aproximadamente 30 Mg/kg de peso corporal del individuo por día. La administración de relaxina puede empezar tan pronto como se advierta la deficiencia y se puede continuar a través de toda la gestación. Por lo tanto, la relaxina se administra al individuo para mantener, por ejemplo, , una concentración de relaxina en suero de aproximadamente 10 ng/ml a través de todo el embarazo. La formulación farmacéutica de relaxina se puede administrar por vía subcutánea (SQ) o a través de otras vías de administración. Por ejemplo, la relaxina se puede suministrar a través de infusión continua mediante bombas de infusión.

La relaxina utilizada en las formulaciones farmacéuticas de la descripción puede ser, por ejemplo, relaxina sintética o recombinante, o un agonista o imitador de relaxina farmacéuticamente efectivo. En una modalidad de la descripción, la relaxina es relaxina H 1 de humano. En otra modalidad , la relaxina es relaxi na H2 de humano. Incluso en otra modalidad , la relaxina es relaxina H3 de h umano . En una modalidad adicional, la relaxiha es relaxi na de h umano sintética o recombinante , o un agonista de relaxina o imitador de relaxina farmacéuticamente efectivo. Por lo tanto, la mujer embarazada en riesgo de preeclampsia se puede tratar con una formulación farmacéutica de relaxina sintética o recombinante de humano o agonista o imitador de relaxina. En u na modalidad de la descripción , la mujer embarazada se trata con relaxina sintética de humano. En otra modalidad , la mujer embarazada se trata con relaxina recombinante de h umano. I ncluso en otra modalidad, la mujer embarazada se trata con un agonista o imitador de relaxi na farmacéuticamente efectivo. La relaxina se puede administrar a la mujer embarazada a través de un número de vías diferentes, incluyendo pero sin limitarse a, vía subcutánea , intramuscular, intravenosa , sublingual y mediante in halación. , U na vía de ad ministración preferida es la administración por vía subcutánea (SQ) .

La descripción también provee relaxina para uso en la evaluación del riesgo de desarrollo de preeclampsia en una mujer emba razada , q ue incluye seleccionar una mujer emba razada en el primer trimestre de embarazo, y detectar el n ivel de proteína relaxina en la mujer embarazada para evaluar el riesgo de desarrolló de preeclampsia en dicha m ujer. La descripción también provee relaxina para uso en la evaluación del riesgo de desarrollo de preeclampsia en u na mujer embarazada , que incluye seleccionar una mujer embarazada en el segundo trimestre de embarazo, y detectar el nivel de proteína relaxina en la mujer embarazada para evaluar el riesgo de desarrollo de preeclampsia en dicha mujer. La descripción también provee relaxina para uso en la evaluación del riesgo de desarrollo de preeclampsia en u na mujer embarazada , q ue i ncluye seleccionar u na mujer embarazada antes de la manifestación de los síntomas de preeclampsia , y detectar el nivel de proteína relaxina en la mujer embarazada para evaluar el riesgo de desarrollo de preeclampsia en dicha mujer. La descripción también provee relaxi na para uso en red ucir la probabilidad de desarrollo de preeclampsia en una mujer embarazada , que incluye seleccionar u na mujer emba razada en el primer trimestre de embarazo, en el cual la m ujer embarazada tiene un nivel de relaxina menor de aproximadamente 500 pg/ml en su torrente sa ng u íneo. La descripción también provee relaxina pa ra uso en red ucir la probabilidad de desarrollo de preeclampsia en u na mujer embarazada , q ue i ncluye seleccionar una mujer embarazada en el segundo trimestre de embarazo, en el cual la mujer embarazada tiene un nivel de relaxina menor de aproximadamente 500 pg/ml en su torrente sang u íneo. La descripción también abarca relaxina para uso en reducir la probabilidad de desarrollo de preeclampsia en u na mujer embarazada , que incluye seleccionar u na mujer embarazada antes de la manifestación de los síntomas de preeclampsia , en el cual la mujer embarazada tiene u n n ivel de relaxina menor de aproximadamente 500 pg/ml en su torrente sang u íneo.

De manera adicional , la presente descripción provee u n método para evaluar si u na mujer embarazada tiene o no un riesgo incrementado de desarrollar preeclampsia, que comprende: a) med ir la concentración de relaxina H2 en u na muestra biológica obtenida a partir de la mujer embarazada antes de la manifestación de un síntoma de preeclampsia; y b) determinar q ue la mujer embarazada tiene un riesgo incrementado de desarrollar preeclampsia cua ndo la concentración de relaxina H2 es menor de u n valor de corte para una concentración del cuartil más baja de la mujer embarazada. En algunas modalidades, la concentración de cuartil más baja és la concentración de relaxina H2 q ue separa el 25% inferior del 75% superior de las concentraciones de relaxina H2 med idas en u n grupo de mujeres embarazadas en u na edad gestacional similar y en una localidad similar. En algu nas modalidades, u na población similar de mujeres embarazadas de una edad gestacional similar para los propósitos de esta descripción es una población de mujeres embarazadas del mismo trimestre, de preferencia más o menos un mes de edad gestacional , o de manera más preferida más o menos dos semanas de edad gestacional que la del individ uo de prueba (por ejemplo, la mujer embarazada de los pasos a) y b) . En algunas modalidades, una población similar de mujeres embarazadas de una localidad similar para los propósitos de esta descripción es una población de mujeres embarazadas q ue residen en el mismo continente, mismo país, de preferencia dentro de 1 ,853 km , o de manera más preferida dentro de 926.65 km del ind ivid uo de prueba (por ejemplo, la mujer embarazada de los pasos a) y b). En algunas modalidades preferidas, la muestra biológica comprende plasma o suero. En algunas modalidades preferidas, la relaxina H2 se mide utilizando un anticuerpo para la relaxina H2, mientras que es un subconjunto de estas modalidades, la relaxina H2 se mide con una prueba de inmunosorbente ligado a enzima (ELISA). En algunas modalidades, antes de la manifestación de un síntoma de preeclampsia es durante el primer trimestre de la mujer embarazada que se extiende desde las semanas 5 a 15 del embarazo. La presente descripción también provee métodos en los cuales la mujer embarazada es parte de un grupo que está predispuesto a la preeclampsia, el grupo comprende uno o más de un primer embarazo, mayor de 35 años de edad, menor de 18 años de edad, gestaciones múltiples, y una condición preexistente. En algunas modalidades, la condición preexistente se selecciona a partir del grupo que consiste de hipertensión, diabetes, lupus, trombofilia, enfermedad renal, y obesidad. En algunas modalidades preferidas, el valor de corte para una concentración del cuartil más baja es de aproximadamente 500 pg/ml. Asimismo, la presente descripción provee métodos que también comprenden medir la concentración de proteína C-reáctiva (CRP) en la muestra biológica, y determinar que la mujer embarazada tiene un riesgo incrementado de desarrollar preeclampsia cuando la concentración de CRP es mayor de aproximadamente 13.5 mcg/ml, incluso cuando la concentración de relaxina H2 es mayor de aproximadamente 500 pg/ml. De manera alternativa, la presente descripción provee métodos q ue también comprenden medir la concentración de proteína C-reactiva (CRP) en la muestra biológica, y determinar que la mujer embarazada tiene u n riesgo incrementado de desarrollar preeclampsia cuando la concentración de CRP es menor de aproximadamente 1 .5 mcg/ml , incluso cuando la concentración de relaxina H2 es mayor de aproximadamente 500 pg/ml . La presente descripción también provee métodos para evaluar si una mujer embarazada tiene o no preeclampsia , q ue comprende: a) medi r la concentración de relaxina H2 en una muestra biológica obtenida a partir de la mujer embarazada ; y b) determinar que la mujer embarazada tiene preeclampsia cuando la concentración de relaxi na H2 es menor de un valor de corte para u na concentración del cuartil más baja de la mujer embarazada. En alg unas modalidades preferidas, la muestra biológ ica se obtiene a partir de la mujer embarazada cuando d icha mujer embarazada se ha presentado con por lo menos un síntoma de preeclampsia , y el método se utiliza en parte para diag nosticar q ue la mujer embarazada tiene preeclampsia. En un subconju nto de estas modalidades, d icho por lo menos un síntoma de preeclampsia comprende uno o más del g rupo q ue consiste de edema , dolor de cabeza severo, cambio en la visión , dolor abdominal superior, náusea, vómito, mareo, prod ucción de orina disminu ida , y ganancia de peso repentina de más de u n ki logramo por semana.

Además, la presente descripción provee métodos para red ucir la probabilidad de que u na mujer embarazada desarrolle preeclampsia, que comprende: a) seleccionar a una mujer embarazada que tiene una concentración de relaxina H2 en suero menor de aproximadamente 500 pg/ml en una muestra biológica obtenida durante su primer trimestre de embarazo; y b) administrar relaxina H2 en una formulación farmacéutica a la mujer embarazada para reducir la probabilidad de que dicha mujer desarrolle preeclampsia. En algunas modalidades, la relaxina H2 se administra a la mujer embarazada en una cantidad de aproximadamente 30 pg/kg de peso corporal por día a través de toda la parte terminal de la gestación (por ejemplo, posterior a la determinación de la concentración de relaxina H2). En algunas modalidades, la relaxina H2 se administra a la mujer embarazada para mantener una concentración de relaxina en suero de aproximadamente 10 ng/ml a través de todo el embarazo. En los métodos preferidos, la concentración de relaxina H2 en suero se determina mediante inmuno-ensayo. En algunas modalidades, el primer trimestre se extiende desde la semana 5 hasta la semana 15 del embarazo. En algunas modalidades, la mujer embarazada es parte de un grupo que está predispuesto a preeclampsia, grupo comprende uno o más de un primer embarazo, mayor de 35 años de edad, menor de 18 años de edad, gestaciones múltiples, y una condición preexistente. En un subconjunto de estas modalidades, la condición preexistente se selecciona a partir del grupo que consiste de hipertensión, diabetes, lupus, trombofilia, enfermedad renal, y obesidad. En algunas modalidades particularmente preferidas, la mujer embarazada es de Norteamérica. De manera más preferida, la mujer embarazada es de la región noreste industrial de Norteamérica (por ejemplo, dentro de 463 km de Pittsburgh).

Asimismo, la presente descripción provee un anticuerpo monoclonal reactivo con relaxina H2, el anticuerpo monoclonal producido por un hibridoma indicado como Depósito Americano de Cultivos Tipo (ATCC) PTA-8423. En modalidades adicionales, se provee un estuche para inmunoensayo que comprende el anticuerpo monoclonal producido mediante el hibridoma de PTA 8423, una microplaca, e instrucciones para medir la concentración de relaxina H2 de una muestra. En algunas modalidades preferidas, el inmuno-ensayo es una prueba de captura de relaxina H2, la cual también comprende un anticuerpo anti-relaxina policlonal.

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS La figura 1 muestra las concentraciones de relaxina en suero en mujeres pre-eclámpticas (PE) (grupos HPU y HP) con respecto a la edad gestacional. Las líneas conectan muestras provenientes del mismo individuo. Los diamantes representan muestras de mujeres embarazadas quienes posteriormente desarrollan preeclampsia y tienen niveles de relaxina endógena menores de 500 pg/ml en las primeras 15 semanas. Los cuadrados representan muestras de mujeres embarazadas quiénes posteriormente desarrollan preeclampsia pero que tienen niveles de relaxina endógena mayores de aproximadamente 500 pg/ml. Los diamantes representan muestras de mujeres embarazadas que no desarrollan preeclampsia. Se debe indicar que pocas de las mujeres que tienen resultados de embarazo normales tienen concentraciones de relaxina en las primeras 15 semanas que están por debajo dé 500 pg/ml.

La figura 2 es una ilustración de un histograma bi-variable (es decir racimo de preeclampsia) de la concentración de relaxina de la primera muestra recolectada a partir de los individuos del estudio. La primera muestra se obtiene a partir de la semanas 5 a 11 de edad gestacional, debido a que los individuos se reclutan en el estudio en tiempos diferentes.

La figura 3 es una ilustración de un árbol de clasificación y regresión (CART) para las gestaciones HPU y HP (es decir, mujeres pre-eclámpticas, en el cual el número de divisiones es uno y el número de nodos terminales es dos. La especificidad con relaxina (Rlx) es 96% mientras que la sensibilidad es de 37%. Los datos utilizados para este árbol de clasificación se muestran en la figura 1. Esto ilustra que la relaxina en suero se puede utilizar para identificar una población de mujeres que tienen un riesgo alto de desarrollar preeclampsia más tarde en sus embarazos. Esta predicción se puede hacer meses antes de la aparición de síntomas clínicos de preeclampsia.

La figura 4 muestra un análisis CART para gestaciones HPU y HP (es decir mujeres pre-eclámpticas), en el cual el número de divisiones es tres y el número de nodos terminales es cuatro. Con relaxina (Rlx) y proteína C-reactiva (CRP) la especificidad es de 93% mientras que la sensibilidad mejora hasta 83% en comparación con relaxina (Rlx) sola (véase figura 3). La adición de una medición de CRP hace posible identificar mujeres predispuestas a preeclampsia que no fueron identificadas mediante la determinación de la concentración de relaxina (Rlx) sola.

La figura 5 muestra un árbol de clasificación para gestaciones HPU, HU o HP (es decir mujeres hipertensas incluyendo mujeres pre-eclámpticas), en el cual el número de divisiones es tres y el número de nodos terminales es cuatro. Con las mediciones de relaxina (Rlx) y proteína C-reactiva (CRP) la especificidad es de 63% y la sensibilidad es de 96%.

La figura 6 muestra un árbol de clasificación para gestaciones HPU, HU o HP (es decir mujeres hipertensas incluyendo mujeres pre-eclámpticas), en el cual el número de divisiones es cinco y el número de nodos terminales es seis. Con las mediciones de relaxina (Rlx), proteína C-reactiva (CRP), y creatinina (CREAT) la especificidad es de 92% y la sensibilidad es de 87%.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Generalidades En un aspecto, la presente descripción se refiere métodos para evaluar el riesgo de desarrollar preeclampsia mujeres embarazadas. Los métodos descritos en la presente solicitud emplean medir el nivel de relaxina , y opcionalmente proteína C-reactiva (C RP) en una muestra biológica obtenida a partir de u na mujer emba razada durante su primer trimestre . Debido a que la preeclampsia es una de las principales razones por las cuales las mujeres son admitidas en el hospital durante el embarazo, ésta está asociada con u n costo elevado para el sistema pa ra el cu idado de la salud . La prog nosis para mujeres embarazadas q ue son admitidas con preeclampsia o síntomas de la misma hasta ahora ha sido funesta debido a que la preeclampsia con frecuencia lleva a la terminación temprana del embarazo mediante cesárea debido a preocupación por la salud de la mad re o del feto , especialmente en casos en los cuales la presión sangu ínea de la mad re se ha elevado por encima de 140/90 mm de Hg . Hasta la fecha no existe cura pa ra la preeclampsia aparte de la terminación del embarazo. Para mitigar este problema , la presente descripción provee una prueba que se puede utilizar para evaluar la probabilidad o riesgo de desarrollar preeclampsia . En modalidades preferidas , las pruebas se efectúan en el embarazo temprano (por ejemplo, primer trimestre) de modo tal que las mujeres se puedan mon itorea r y se pueda toma r la intervención apropiada para evitar q ue la preeclampsia llegue a desa rrol larse completamente . La conciencia temprana de u n riesgo elevado de preeclampsia permite que el médico encargado estabilice la condición de la paciente embarazada desde el i n icio. La intervención en forma de terapia para evitar o red ucir la presión sanguínea alta a su vez reduce el riesgo de mortalidad de la madre y el niño y también reduce el riesgo de terminación temprana del embarazo.

Como se describe en la presente solicitud, medir los niveles de relaxina en las mujeres embarazadas puede predecir si las mujeres desarrollarán o no preeclampsia. Por lo tanto, niveles bajos de relaxina son un indicador altamente específico de la condición. El término relaxina (relaxina natural y relaxina endógena) tal como se utiliza en la presente solicitud con referencia a individuos humanos se refiere a relaxina H2, a menos que se especifique de otra manera. Las Figuras 1 y 3 ilustran que cuando los niveles de relaxina en mujeres embarazadas están por debajo de 500 pg/ml, la probabilidad de que las mujeres desarrollen preeclampsia es tan alta como 96 por ciento (véase Figura 3 para análisis CART). De hecho, un tercio de las mujeres pre-eclámpticas que se identifican utilizando los datos en la Figura 1 tienen niveles de relaxina menores de 500 pg/ml. En modalidades adicionales, mediante medición de los niveles de proteínas C-reactiva (CRP) natural además de los niveles de relaxina, la prueba se vuelve incluso más sensible. Por ejemplo, la Figura 4 ilustra que cuando CRP es menor de aproximadamente 1.5 pg/ml o mayor de aproximadamente 13.5 pg/ml, la sensibilidad de la prueba se incrementa hasta 83 por ciento.

En otro aspecto, la descripción provee métodos para prevenir o reducir la probabilidad de desarrollo de preeclampsia a través de la administración de relaxina H2 o un agonista de relaxina H2 farmacéuticamente activo. De manera más específica , se puede administrar relaxina H2 exógena a mujeres embarazadas si los niveles de relaxina endógena son menores de 500 pg/ml con el fin de estabilizar a las mujeres du rante el embarazo y evitar que se desarrolle preeclampsia. Por lo tanto, las mujeres embarazadas se tratan con u na formu lación farmacéutica de relaxina humana sintética o recombinante o agonista de relaxina a través de toda la parte terminal de la gestación (por ejemplo, posterior a la medición de H2) , en la cual la relaxina funciona principalmente como agente profiláctico.

Defin iciones Los términos "relaxina endógena" o "relaxi na natural" se utilizan de manera intercambiable en la presente solicitud y se refieren a la hormona peptídica relaxina normalmente presente la cual es bien conocida en la técnica . En mujeres , la relaxina es prod ucida por el cuerpo lúteo del ovario , el tej ido mamario y, durante el embarazo, también por la placenta , corion , y decid ua . Los niveles de relaxina endógena se elevan después de la ovulación como resultado de su producción por el cuerpo lúteo y llegan al máximo en la fase lútea intermedia y ta rd ía del ciclo menstrual . Si en el ciclo no hay concepción , las concentraciones de relaxina declinan hasta niveles indetectables. Sin embargo, si en el ciclo ocurre concepción , las concentraciones de relaxina se incrementan rápidamente y llegan al máximo en el primer trimestre. Las concentraciones de relaxina después comienzan a declinar lentamente pero permanecen elevadas a través de toda la gestación. El término relaxina (relaxina natural y relaxina endógena) tal como se utiliza en la presente solicitud con referencia a individuos humanos se refiere a relaxina H2, a menos que se especifique de otra manera.

El término "relaxina exógena", tal como se utiliza n la presente solicitud, significa relaxina de humano no endógena, incluyendo relaxina de humano de longitud completa intacta o una porción de la molécula de relaxina que conserve actividad biológica. El término "relaxina exógena" abarca pre-prorrelaxina, prorrelaxina y relaxina H1 de humano; pre-prorrelaxina, prorrelaxina y relaxina H2 de humano; y pre-prorrelaxina, prorrelaxina y relaxina H3 de humano. El término "relaxina" también incluye relaxina biológicamente activa (también referida en la presente solicitud como "farmacéuticamente activa") proveniente de fuentes recombinantes, sintéticas o naturales así como variantes de relaxina, tales como variantes de secuencia de aminoácido. Por lo tanto, el término abarca relaxina sintética de humano y relaxina recombinante de humano, incluyendo relaxina H1, H2, y H3 sintética de humano y relaxina H1, H2 y H3 recombinante de humano. El término también abarca agentes activos con actividad tipo relaxina, tales como agonistas de relaxina, imitadores de relaxina y/o análogos de relaxina y porciones de los mismos que retienen actividad biológica, incluyendo todos los agentes que desplazan competitivamente la relaxina unida de un receptor de relaxina (por ejemplo el receptor LGR7, el receptor LGR8, GPCR135, GPCR142, etc.). Por lo tanto, un agonista o imitador de relaxina farmacéuticamente efectivo es cualquier agente con actividad tipo relaxina que sea capaz de unirse a un receptor de relaxina para provocar una respuesta tipo relaxina. Además, la secuencia de ácido nucleico de relaxina humana tal como se utiliza en la presente descripción no necesariamente tiene que ser 100% idéntica a la secuencia de ácido nucleico de relaxina humana (por ejemplo, H1, H2 y/o H3) pero puede ser por lo menos aproximadamente 40%, 50%, 60%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99% idéntica a la secuencia de ácido nucleico de relaxina humana. Relaxina, tal como se utiliza en la presente descripción, se puede elaborar mediante cualquier método conocido por los expertos en la técnica. Los ejemplos de dichos métodos se ilustran, por ejemplo, en la patente E.U.A. No. 5,759,807 así como en Büllesbach et al. (1991) The Journal of Biological Chemistry 266(17): 10754-10761. Los ejemplos de moléculas y análogos de relaxina se ilustran, por ejemplo, en la patente E.U.A. No.5,166,191.

La relaxina biológicamente activa normalmente presente en la Naturaleza se puede obtener a partir de fuentes humanas, múridas (es decir, rata o ratón), porcinas, u otras fuentes mamíferas. También se abarca la relaxina que se ha modificado para incrementar el tiempo de vida media in vivo, por ejemplo, relaxina modificada con PEG (es decir, relaxina conjugada a un poiieti leng I ico I) , modificaciones de aminoácidos en la relaxina que sean susceptibles de corte mediante enzimas degradadoras, y similares. El término también abarca relaxina que comprende cadenas A y B que tienen truncamientos N-terminales y/o C-terminales. En general, en relaxina H2, la cadena A se puede variar desde A(1-24) hasta A(10-24) y la cadena B desde B(1-33) hasta B(10-22); y en relaxina H1, la cadena A se puede variar desde A(1-24) hasta A(10-24) y la cadena B desde B(1-32) hasta B(10-22). También están incluidas dentro del alcance del término "relaxina" otras inserciones, sustituciones, o deleciones de uno o más residuos de aminoácido, variantes de glucosilación, relaxina no glucosilada, sales orgánicas e inorgánicas, derivados de relaxina modificados en forma covalente, prepro-relaxina, y pro-relaxina. También está abarcado en el término un análogo de relaxina que tenga una secuencia de aminoácido que difiere de una secuencia de tipo silvestre (por ejemplo, que se presente en forma natural), incluyendo, pero sin limitarse a, los análogos de relaxina descritos en la patente E.U.A. No. 5,811,395. Las posibles modificaciones a los residuos de aminoácido de relaxina incluyen la acetilación, formilación o protección similar de grupos amino libres, incluyendo los N-terminales, amidación de grupos C-terminales, o la formación de ésteres de grupos hidroxilo o carboxílicos, por ejemplo, modificación del residuo triptófano (Trp) en B2 mediante adición de un grupo formilo. El grupo formilo es un ejemplo típico de un grupo protector fácilmente removible. Otras posibles modificaciones incluyen reemplazo de uno o más de los aminoácidos naturales en las cadenas B y/o A con un aminoácido diferente (incluyendo la forma D de un aminoácido natural), incluyendo, pero sin limitarse a, reemplazo de la porción Met en B24 con norleucina (Nle), valina (Val), alanina (Ala), glicina (Gly), serina (Ser), u homoserina (HomoSer). Otras posibles modificaciones incluyen la deleción de un aminoácido natural de la cadena o la adición de uno o más aminoácidos adicionales a la cadena. Las modificaciones adicionales incluyen sustituciones de aminoácido en las uniones B/C y C/A de pro-relaxina, cuyas modificaciones facilitan el corte de la cadena C a partir de la pro-relaxina; y relaxina variante que comprende un péptido C a normalmente no presente en la Naturaleza como se describe, por ejemplo, en la patente E.U.A. No.5,759,807.

El término "relaxina" también abarca polipéptidos de fusión que comprenden relaxina y un polipéptido heterólogo. Un compañero de fusión de tipo polipéptido heterólogo (por ejemplo, un polipéptido de tipo no relaxina) puede ser C-terminal o N-terminal, con respecto a la porción de relaxina de la proteína de fusión. Los polipéptidos heterólogos incluyen polipéptidos que pueden ser detectados inmunológicamente (por ejemplo, "marcas de epítope"); polipéptidos que puedan generar una señal detectable (por ejemplo, proteína fluorescente verde, enzimas tales como fosfatasa alcalina, y otros conocidos en la técnica); polipéptidos terapéuticos, incluyendo, pero sin limitarse a, citocinas, quimiocinas, y factores de crecimiento. Todas de dichas variaciones o alteraciones en la estructura de la molécula de relaxina que den como resultado variantes están incluidas dentro del alcance de esta descripción en tanto que se mantenga la actividad funcional (biológica) de la relaxina. De preferencia, cualquier modificación de la secuencia de aminoácido o estructura de relaxina es aquella que no incrementa su inmunogenicidad en el individuo que está siendo tratado con la variante de relaxina. Aquellas variantes de relaxina que tengan la actividad funcional descrita se pueden identificar fácilmente utilizando pruebas in vitro e in vivo conocidas en la técnica.

En algunas modalidades, la presente descripción provee métodos que comprenden la administración de un agonista de relaxina. En algunos métodos, el agonista de relaxina activa uno o más de los receptores acoplados a proteína G (GPCR) relacionados con relaxina que se seleccionan a partir de pero sin limitarse a RXFP1, RXFP2, RXFP3, RXFP4, FSHR (LGR1 ), LHCGR (LGR2), TSHR (LGR3), LGR4, LGR5, LGR6 LGR7 (RXFP1) y LGR8 (RXFP2). En algunas modalidades, el agonista de relaxina comprende la secuencia de aminoácido de la Fórmula I del documento WO 2009/007848 de Compugen (incorporado en la presente solicitud para referencia para la enseñanza de secuencias de agonista de relaxina). Los ejemplos de agonistas de relaxina también se describen en la solicitud internacional PCT/US2009/044251 de Corthera, la cual se incorpora en la presente solicitud para referencia para la enseñanza de secuencias de agonista de relaxina de SEQ ID NOS:4-8.

La presente descripción también abarca homólogos' de polipéptidos de la Fórmula I, dichos homólogos pueden ser por lo menos 50%, por lo menos 55%, por lo menos 60%, por lo menos 65%, por lo menos 70%, por lo menos 75%, por lo menos 80%, por lo menos 85%, por lo menos 85%, por lo menos 90%, por lo menos 95% o más, por decir 100% idénticos a la secuencia de aminoácido de un agonista de relaxina de ejemplo (por ejemplo, SEQ ID NO:5 o SEQ ID NO:6 del documento PCT/US2009/044251 de Corthera), tal como se puede determinar utilizando el software BlastP del Centro Nacional de Información sobre Biotecnología (NCBI por sus siglas en inglés) utilizando parámetros predeterminados, opcionalmente y de preferencia que incluyan los siguientes: filtración activada (esta opción filtra de la secuencia de interés las secuencias repetitivas o de baja complejidad utilizando el programa Seg (proteína)), la matriz de puntuación es BLOSUM62 para proteínas, tamaño de palabra es 3, valor E es 10, los costos por espacio son 1 1, 1 (inicialización e (inicialización y extensión). Opcionalmente y de preferencia, la identidad/homología de la secuencia de ácido nucleico se determina con el software BlastN del Centro Nacional de Información sobre Biotecnología (NCBI por sus siglas en inglés) utilizando parámetros predeterminados, los cuales de preferencia incluyen utilizar el programa de filtro DUST, y de preferencia también incluye tener un valor E de 10, filtrar secuencias de baja complejidad y un tamaño de palabra de 1 1. Por último, la presente descripción también abarca fragmentos de los polipéptidos antes descritos y de polipéptidos que tienen mutaciones, tales como deleciones, inserciones o sustituciones de uno o más aminoácidos, ya sea que estén presentes normalmente en la Naturaleza o que se induzcan de manera artificial, ya sea en forma aleatoria o en un modo dirigido.

El término "embarazo" se refiere a los nueve meses (40 semanas a partir del último periodo menstrual) de embarazo que tradicionalmente se divide en tres trimestres, es decir, periodos distintos de casi tres meses en los cuales toman lugar fases diferentes de desarrollo fetal. El primer trimestre es un tiempo de diferenciación celular básica. Se cree que termina en la primera percepción de movimiento fetal (quickening) por parte de la madre, lo cual usualmente ocurre alrededor del final del tercer mes (o aproximadamente 12 hasta aproximadamente 14 semanas de la edad gestacional). El segundo trimestre es un periodo de rápido crecimiento y maduración de los sistemas del cuerpo (aproximadamente 15 hasta aproximadamente 28 semanas de la edad gestacional). Un feto de segundo trimestre nacido prematuramente podría ser viable, dependiendo del cuidado hospitalario. El tercer trimestre marca la etapa final de crecimiento fetal, en el cual los sistemas están terminados, la grasa se acumula bajo la piel del feto, y el feto se mueve hacia la posición para el nacimiento (aproximadamente 29 hasta aproximadamente 42 semanas de la edad gestacional). Este trimestre concluye con el nacimiento mismo.

El término "aproximadamente" cuando se utiliza en el contexto de un valor indicado, abarca un intervalo de hasta 10% por encima o por debajo del valor indicado (por ejemplo, 90-110% del valor indicado). Por ejemplo, una velocidad de infusión por vía intravenosa (IV) de aproximadamente 30 mcg/kg/día, abarca velocidades de infusión IV de 27 mcg/kg/día hasta 33 mcg/kg/día.

"Terapéuticamente efectivo(a)" se refiere a la cantidad de relaxina farmacéuticamente activa que pueda dar como resultado un beneficio médico o clínico deseado mensurable para un paciente, en comparación con el estatus de línea basal del paciente o con el estatus de un individuo no tratado o tratado con placebo (por ejemplo, no tratado con relaxina).

Preeclampsia La preeclampsia (o pre-eclampsia) puede ser ocasionada por una placenta implantada no muy profundamente que se vuelve hipóxica, lo que conduce a una reacción inmune caracterizada por secreción de mediadores inflamatorios regulados en forma positiva a partir de la placenta que actúan sobre el endotelial vascular. La implantación poco profunda puede surgir de la respuesta del sistema inmunitario materno hacia la placenta. Esta teoría se refiere a evidencia que sugiere una falta de tolerancia inmunológica establecida hacia los antígenos paternos proveniente del feto y su placenta. En algunos casos de preeclampsia se cree que la madre carece de los receptores para las proteínas que la placenta secreta para regular en forma negativa la respuesta inmunitaria materna (Moffett et al., Placenta Supl. A:S51-6, 2007). Sin embargo,, en muchos casos de preeclampsia, la respuesta materna a la placénta parece haber permitido que tome lugar la implantación normal. : Es posible que las mujeres con niveles de línea basal más altos de inflamación que surgen de condiciones subyacentes tales como hipertensión crónica o enfermedad autoinmune puedan tener menos tolerancia para el impacto inflamatorio del embarazo.

Muchas teorías han intentado explicar por qué surge la preeclampsia, y han relacionado el síndrome con la presencia de las siguientes condiciones, incluyendo, lesión de célula endotelial, rechazo inmune de la placenta, perfusión placentaria comprometida, reactividad vascular alterada, desequilibrio entre prostaciclina y tromboxano, tasa de filtración glomerular disminuida con retención de sal y agua, volumen intravascular disminuido, irritabilidad del sistema nervioso central incrementada, coagulación intravascular diseminada, estiramiento del músculo uterino (isquemia), factores dietéticos, incluyendo deficiencia de vitaminas, y factores genéticos.

La preeclampsia se entiende como un proceso de dos etapas, con una primera etapa altamente variable que predisponen la placenta a hipoxia, seguido por la liberación de factores solubles que dan como resultado, por ejemplo, lesión de célula endotelial, reactividad vascular alterada, la lesión clásica de endoteliosis glomerular, volumen intravascular disminuido, inflamación, y similares. Algunos estudios apoyan la noción de un suministro inadecuado de sangre a la placenta que da como resultado la liberación de hormonas o agentes químicos que, en las madres predispuestas a la condición, ocasionan daño al endotelio (recubrimiento de los vasos sanguíneos), alteraciones en el metabolismo, inflamación, y otras reacciones patológicas (Drife y Magowan (eds). Clinical Obstetrics and Gynaecology, Capítulo 39, páginas 367-370).

Algunos estudios sugieren que la hipoxia que resulta de perfusión inadecuada regula en forma positiva a sFlt-1, un antagonista de VEGF y PLGF, que conduce a daño del endotelio materno y restricción del crecimiento placentario (Maynard et al., J Clin Invest, 111 (5):649-58, 2003). Además, endoglina, un antagonista de TGF-beta, está elevada en mujeres embarazadas que desarrollan preeclampsia (Venkatesha et al., Nat Med, 12(6):642-649, 2006). La endoglina soluble probablemente es regulada en forma positiva por la placenta en respuesta a una regulación positiva de endoglina de superficie celular producida por el sistema inmunitario materno, aunque también existe el potencial que sEng sea producida por el endotelio materno. Los niveles tanto de sFlt-1 como de sEng se incrementan a medida que se incrementa la gravedad de la enfermedad, con niveles de sEng que exceden; los niveles de sFlt-1 en casos, síndrome HELLP. El síndrome HELLP es una variante grave de preeclampsia que presenta hemolisis, enzimas hepáticas elevadas, y cuentas plaquetarias bajas. Tanto sFlt-1 como sEng están reguladas en forma positiva hasta cierto grado en todas las mujeres embarazadas, lo que apoya la idea que la enfermedad hipertensiva en el embarazo es una adaptación normal del embarazo que fracasa. El rechazo materno inicial de los citotrofoblastos placentarios puede ser la causa de las arterias en espiral remodeladas en forma inadecuada en aquellos casos de preeclampsia asociada con implantación poco profunda, lo que lleva a hipoxia corriente abajo y a la aparición de síntomas maternos en respuesta a sFlt-1 y sEng reguladas en forma positiva.

También se ha documentado que las células fetales tales como los eritroblastos fetales, así como el ADN fetal libre de célula están incrementados en la circulación materna en mujeres que desarrollan preeclampsia. Estos hallazgos han dado origen a la hipótesis de que la preeclampsia es un proceso patológico mediante el cual una lesión placentaria tal como una lesión hipóxica permite que el material fetal incrementado entre a la circulación materna lo que lleva a una respuesta inmune y daño endotelial que finalmente resulta en preeclampsia y eclampsia.

Las estadísticas muestran que la preeclampsia y trastornos del embarazo relacionados, tales como eclampsia y trastornos hipertensivos del embarazo, son responsables de la mayoría de muertes maternas, así como muerte y enfermedad entre los infantes, en todo el mundo. Aproximadamente 76,000 mujeres fallecen anualmente debido a estos trastornos. La preeclampsia es especialmente peligrosa debido a que algunas mujeres no experimentan ningún síntoma. Esta es la razón por la cual las pruebas de tamizaje y predicción mejoradas son imperativas para diagnosticar esta condición. Después que las mujeres , se diagnostican con preeclampsia o gestación hipertensiva éstas pueden recibir cualquiera de uno o más de los siguientes medicamentos incluyendo metildopa, hidralazina, labetalol, nifedipina, sulfato de magnesio, betametasona y dexametasona.

Las estrategias preventivas tales como calcio, aspirina y antioxidantes (por ejemplo, vitaminas C y E) no han sido completamente satisfactorias. En algunos casos, podría haber una pequeña reducción en el riesgo de preeclampsia con aspirina basada en meta-análisis (colaboración PARIS), pero esto no es una cura. El control estricto de la presión sanguínea puede evitar morbidez materna grave tal como apoplejía, pero tampoco trata completamente la enfermedad.

Relaxina La relaxina endógena o natural es una hormona peptídica que es similar en tamaño y forma a la insulina. De manera más específica, la relaxina es una hormona endocrina y autocrina/paracrina que pertenece a la súper-familia del gen de insulina. La forma activa de la proteína codificada consiste de una cadena A y una cadena B, mantenidas juntas mediante puentes de disulfuro, dos ínter-cadenas y uno ¡ntra-cadena. Por lo tanto, la estructura se parece mucho a la insulina en la disposición de los puentes de disulfuro. En humanos, existen tres genes de relaxina no alélicos conocidos, relaxin-1 (RLN-1 o H1), relaxín-2 (RLN-2 o H2) y relaxin-3 (RLN-3 o H3). H1 y H2 comparten una homología de secuencia alta. Existen dos variantes de transcrito empalmadas en forma alternada que codifican para las diferentes isoformas descritas para este gen. H1 y H2 son expresadas en forma diferencial en los órganos reproductivos (véase patente E.U.A. No. 5,023,321; y Garibay-Tupas et al., Molecular and Cellular Endocrinology 219:115-125, 2004), mientras que H3 se encuentra principalmente en el cerebro. La evolución de la familia de péptido de relaxina y sus receptores se describe en la técnica (véase Wilkinson et al., BMC Evolutionary Biology 5(14):1-17, 2005; y Wilkinson y Bathgate, Capítulo 1, Relaxin and Related Peptides, Landes Bioscience and Springer Science + Business Media, 2007).

Se cree que relaxina activa los receptores de relaxina específicos, es decir, LGR7 (RXFP1) y LGR8 (RXFP2) así como GPCR135 y GPCR142. LGR7 y LGR8 son receptores acoplados a proteína G, que contienen repeticiones ricas en leucina (LGRs), los cuales representan un subgrupo exclusivo de receptores acoplados a proteína G. Estos contienen un dominio transmembrana heptahelicoidal y un ectodominio glucosilado grande, relacionado muy lejanamente con los receptores para las glucoproteohormonas, tales como el receptor de LH o el receptor de FSH. Estos receptores de relaxina se encuentran en el corazón, músculo liso, tejido conectivo, y sistema nervioso central y autónomo. Las relaxinas potentes tales como relaxina H1, H2, porcina y de ballena poseen una cierta secuencia en común. Las relaxinas que se desvían de la secuencia de H1 y H2 conservada, tales como las relaxinas de rata, tiburón, perro y caballo muestran una reducción en bioactividad a través de los receptores LGR7 y LGR8 (Bathgate et al., Ann NY Acad Sci, 1041:61-76, 2005; Receptors for Relaxin Family Peptides). Sin embargo, similar a la relaxina H2, la relaxina H3 activa al receptor LGR7 (Satoko et al., J Biol Chem, 278(10):7855-7862, 2003). Además, H3 ha demostrado activar al receptor GPCR135 (Van der Westhuizen, Ann NY Acad Sci, 1041:332-337, 2005) y al receptor GPCR142. GPCR135 y GPCR142 son dos receptores acoplados a proteína G estructuralmente relacionados. GPCR135 de rata y ratón presenta homología elevada (es decir, mayor de 85%) con el GPCR135 de humano y tiene propiedades farmacológicas muy similares a las de GPCR135 de humano. La relaxina 3 de humano y de ratón así como de rata se une a y activa GPCR135 de ratón, de rata, y de humano con una afinidad alta. En contraste, el GPCR142 de ratón está menos conservado (es decir, 74% de homología) con GPCR142 de humano. Se clonaron los genes de GPCR142 de mono, vaca, y cerdo y demostraron ser altamente homólogos (es decir, más de 84%) con GPCR142 de humano. La caracterización farmacológica de GPCR142 proveniente de especies diferentes ha demostrado que la relaxina 3 se une a GPCR142 proveniente de especies diferentes con alta afinidad (Chen et al., Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 312(1 ):83-95, 2005).

Relaxina y embarazo La función característica de la relaxina está asociada con la fisiología del tracto reproductivo femenino, la cual incluye la regulación de procesos bioquímicos involucrados en la remodeláción de la matriz extracelular del cuello uterino y la vagina durante el embarazo y la ruptura de las membranas fetales al momento del parto. Estas modificaciones permiten que la descendencia se mueva a través del canal de nacimiento y evitan la distocia (es decir, desaceleración significativa o cese del descenso del feto o dilatación del cuello uterino o ambos durante el parto). Además, la relaxina promueve el crecimiento uterino y placentario e influye en el desarrollo y proliferación vascular en el endometrio (Parry et al., Adv Exp Med Biol, 612:34-48, 2007).

En humanos, la relaxina encontrada en la circulación es producida principalmente por el cuerpo lúteo del ovario, en mujeres tanto embarazadas como no embarazadas. Esta se eleva hasta un máximo dentro de aproximadamente 14 días de la ovulación y después declina en ausencia de embarazo lo que da como resultado la menstruación. Durante el primer trimestre del embarazo los niveles en suero se elevan. Además, la relaxina es producida por la decidua y trofoblasto pero se cree que esta relaxina no entra a la circulación. El máximo de la relaxina se alcanza durante las 14 semanas del primer trimestre. La relaxina es notoria por el crecimiento y remodelación del tejido reproductivo y muchos otros tejidos durante el embarazo. Como se indicó anteriormente, la acción de la relaxina es mediada a través de los receptores de relaxina.

Los niños que nacen de madres pre-eclámpticas con frecuencia tienen peso bajo al nacer y están en mayor riesgo de condiciones cardiovasculares subsiguientes posteriormente en la vida. Las madres que dan a luz bebés con pesos bajos al nacer están en un mayor riesgo de enfermedad cardiaca isquémica y muerte. Específicamente, las mujeres pre-eclámpticas que dan a luz un infante pequeño prematuramente, tienen una tasa de admisión hospitalaria por enfermedad cardiaca isquémica o fallecimiento que es diez veces más alta que la de las mujeres de control. Existe una evidencia muy fuerte de que el riesgo cardiovascular está incrementado en mujeres con preeclampsia en comparación con mujeres que no padecen de esta condición. De hecho, cualquier trastorno hipertensivo del embarazo incrementa el riesgo posterior de hipertensión y apoplejía. También se sabe que dos a cuatro meses después del parto, dos tercios de las mujeres preeclámpticas siguen teniendo microalbuminuria (es decir, fuga de cantidades pequeñas de proteína, por ejemplo, albúmina, en la orina). En mujeres post-menopáusicas, la microalbuminuria es un factor de riesgo cardiovascular sustancial. Además, la preeclampsia está asociada con resistencia a insulina y niveles elevados de homocisteína, lo cual representa un riesgo a largo plazo en las mujeres (Davison et al., J Am Soc Nephrol, 15:2440-2448, 2004).

Durante el embarazo normal, la tasa de filtración glomerular (GFR) y el flujo plasmático renal se incrementan en 40 a 65 y 50 a 85 por ciento, respectivamente. De manera notable, la relaxina media la vasodilatación renal durante el embarazo. Se sabe que la relaxina incrementa la actividad de gelatinasa vascular, con lo cual convierte ET grande en ET -32, lo cual conduce a vasodilatación renal, hiperfiltración y reactividad miogénica reducida de las arterias renales pequeñas a través del receptor ETB endotelial y óxido nítrico (Jeyabalan et al., Frontiers in Bioscience 12:2425-2437, 2007).

El ácido úrico es el producto final del metabolismo de la purina. Las purinas son producidas de manera natural por el cuerpo y también se obtienen a partir de la dieta. En humanos, la mayoría del ácido úrico en circulación es producido por el hígado y aproximadamente 66 por ciento es excretado por el riñon, mientras que aproximadamente 33 por ciento es excretado por el tracto gastrointestinal. La concentración en suero de ácido úrico usualmente cae durante el embarazo normal como una consecuencia de GFR incrementada, re-absorción tubular proximal reducida, y posible alteración en la carga electrostática del filtro glomerular. Se cree que los factores anti-angiogénicos que provienen de la placenta en la preeclampsia podrían contribuir a la endoteliosis glomerular (es decir, las lesiones histológicas renales características de la preeclampsia), proteinuria, e hipertensión durante la enfermedadi En la mayoría de mujeres con preeclampsia, el flujo plasmático renal y la tasa de filtración glomerular están ligeramente disminuidas como consecuencia de resistencia arteriolar aferente incrementada y/o coeficiente de ultrafiltración reducido. Esta concentración de ácido úrico en suero se incrementa principalmente debido a depuración renal reducida. GFR reducida lleva a una carga filtrada disminuida de ácido úrico. Además, la contracción del volumen plasmático contribuye a la reabsorción tubular proximal incrementada acoplada a sodio. El incremento en la expresión de proteína urinaria en la preeclampsia ocurre en forma secundaria a las alteraciones en el tamaño y/o selectividad de carga del filtro glomerular, posibles incrementos en la presión capilar glomerular, y compromiso de la reabsorción tubular proximal (véase Jeyabalan et al., supra).

Durante un embarazo humano normal, se incrementa la excreción urinaria de proteína total, albúmina, proteínas de bajo peso molecular, y enzima tubular renal. En el embarazo preeclámptico, la función renal se reduce. De acuerdo con algunos estudios, GFR y el flujo plasmático renal efectivo (ERPF) están reducidos en un 32 por ciento y 24 por ciento, respectivamente (véase Jeyabalan et al., supra). El mecanismo preciso responsable del compromiso en la circulación renal en la preeclampsia sigue siendo desconocido. Se cree que el ERPF reducido se debe a resistencia vascular renal elevada. Una resistencia aferente renal elevada (pre-arteriolar glomerular) puede ser el principal contribuyente a la resistencia vascular renal total incrementada. En este caso, el tono arteriolar aferente incrementado en la preeclampsia podría proteger al glomérulo contra daño debido a presiones arteriales sistémicas altas. El ERPF reducido, el coeficiente de ultrafiltración , o ambos podrían ser posibles mecanismos para la GFR reducida en la preeclampsia (véase Jeyabalan et al., supra).

Sin desear estar limitado a la teoría, se piensa ampliamente que el mecanismo de acción subyacente de la relaxina está basado en estimular la vasodilatación y angiogénesis. En primer lugar, se cree que la relaxina estimula la angiogénesis en el útero para proveer una mejor conexión de los vasos sanguíneos fetales y maternos (es decir, para incrementar el número de arterias en espiral maternas, para modificar las arterias en espiral maternas y/o para promover la invasión de trofoblasto de las arterias en espiral maternas). El incremento de la angiogénesis y vasodilatación elige como blanco la patogénesis de la preeclampsia, específicamente un suministro insuficiente de sangre de la madre hacia el niño y perfusión de órganos maternos y placentaria reducida. Cuando se administra relaxina a mujeres embarazadas, la relaxina se une a los receptores en el útero y placenta y estimula la producción de VEGF. VEGF, a su vez, se une a las células endoteliales para estimular la angiogénesis. Esto provee un mejor suministro de sangre entre la madre y el niño. En segundo lugar, la relaxina es un potente vasodilatador y por lo tanto puede mejorar la perfusión de órganos sistémicos uteroplacentarios y maternos, de los cuales ambos están reducidos en mujeres con preeclampsia. La relaxina trabaja a través de la ruta de la óxido nítrico sintetasa, con lo cual estimula al óxido nítrico NO a que incremente la vasodilatación en humanos. Por lo tanto, la administración de relaxina durante el embarazo puede evitar el desarrollo de uno de los síntomas más perjudiciales de la preeclampsia (es decir, presión sanguínea alta a niveles de 140/90 mm de Hg o mayores). En tercer lugar, se sabe que la tasa de filtración glomerular (GFR) y el flujo plasmático renal (RPF) se reducen en la preeclampsia lo cual es una complicación hipertensiva grave del embarazo. Por lo tanto, la administración de relaxina también puede incrementar el flujo sanguíneo renal en mujeres embarazadas, con lo cual también reduce los riesgos de preeclampsia. Además, la relaxina tiene efectos anti-inflamatorios potenciales.

Proteína C-Reactiva (CRP) y embarazo CRP se refiere a una proteína plasmática que es producida por el hígado en respuesta a la inflamación en el cuerpo. La inflamación puede ser causada por una lesión, una infección o una condición tal como presión sanguínea alta. CRP es considerada como parte del sistema inmune innato y un marcador de inflamación sistémica crónica. CRP también es un pronosticador independiente de eventos cardiovasculares. Se cree que CRP se incrementa en el embarazo normal como un reactante de fase aguda, igual que la síntesis de albúmina decrece debido a IL-6 y otras citocinas que se incrementan en la circulación. De manera notable, los niveles de IL-1 e IL-6 son más altos en la preeclampsia, lo cual podría explicar1 por qué los niveles de CRP también son más altos en la preeclampsia. Este descubrimiento es consistente con la respuesta inflamatoria del embarazo normal, la cual es exagerada durante la preeclampsia. Por lo tanto, evaluar a las mujeres embarazadas respecto a los niveles de CRP en suero además de los niveles de relaxina en suero puede proveer información adicional respecto a qué tan probable es que estas mujeres desarrollen preeclampsia. Mediante el uso de CRP como otro factor, se incrementa la sensibilidad de la prueba para relaxina H2 descrita en la presente solicitud.

También se ha encontrado que CRP sérica está elevada en mujeres con un historial de eclampsia (por ejemplo, convulsiones durante el embarazo preeclámptico). De hecho, las mujeres con un historial de preeclampsia o eclampsia están en un riesgo incrementado de enfermedad cardiovascular después del embarazo por razones que siguen siendo desconocidas. Se cree que la inflamación, dislipidemia y resistencia a la insulina están asociadas con un riesgo más alto de preeclampsia, y que CRP, cuando está elevada, es un indicador de inflamación y de riesgo cardiovascular (Hubel et al., Hypertension 51:1499-1505, 2008).

Niveles bajos de relaxina predicen preeclampsia Se utiliza CART (árbol de clasificación y regresión) para analizar los datos obtenidos a partir de mujeres embarazadas durante el estudio descrito en los ejemplos experimentales. Los parámetros utilizados para predicción de preeclampsia son relaxina y, opcionalmente, proteína C-reactiva (CRP). Como se puede observar en la Figura 1, la edad gestacional durante el embarazo está dividida en tres periodos, es decir, 0-15 semanas (primer trimestre), 15-25 semanas (segundo trimestre), y 25-35 semanas (tercer trimestre). Es benéfico analizar a las mujeres embarazadas tan tempranamente como sea posible respecto a marcadores de preeclampsia con el fin de comenzar los tratamientos para evitar que la enfermedad: se desarrolle completamente. Por lo tanto, es preferible analizar a las mujeres en el primer trimestre que analizar a las mujeres durante el segundo o tercer trimestre del embarazo. Es posible analizar a las mujeres en el segundo y/o tercer trimestre del embarazo si el análisis no fue posible más antes.

CART es una técnica no paramétrica que produce un árbol ya sea de clasificación o de regresión, dependiendo de si la variable dependiente es categórica o numérica, respectivamente. Los árboles se forman mediante un grupo de reglas basadas en valores de ciertas variables en el conjunto de datos para modelado. Por lo tanto, las reglas se seleccionan tomando como base qué tan adecuadamente las divisiones basadas en los valores de las variables pueden diferenciar las observaciones basadas en la variable dependiente. Una vez que se selecciona una regla y se divide un nodo en dos, la misma lógica se aplica a cada nodo hijo (es decir, es un procedimiento repetitivo). Se pueden hacer altos en la división cuando CART no detecta ganancia adicional, o se cumplen algunas reglas de detención pre-establecidas. Cada rama del árbol termina en un nodo terminal. Cada observación cae en uno y exactamente un nodo terminal y cada nodo terminal queda definido en forma única por un conjunto de reglas.

La preeclampsia generalmente es definida por síntomas tales como hipertensión y proteinuria. Algunas mujeres embarazaidas también padecen de ácido úrico elevado. Por lo tanto, las mujeres preeclámpticas caen en dos grupos, aquellas que presentan hipertensión y proteinuria (HP) y aquellas que presentan hipertensión, proteinuria y ácido úrico (HPU). De manera notable, cuando las mujeres embarazadas no presentan síntomas de proteinuria generalmente se considera que éstas tienen un embarazo hipertensivo más que preeclampsia, tal como cuando éstas presentan hipertensión y ácido úrico elevado (HU). Para los propósitos del análisis CART discutido en la presente solicitud, los siguientes grupos se definen en la Tabla 1.

TABLA 1 Gestación normal HPU = hipertensión, proteinuria, ácido úrico HP = hipertensión, proteinuria HU = hipertensión, ácido úrico Preeclampsia = HPU y HP combinados Embarazo hipertensivo = HPU, HP y HU combinados Con referencia al árbol de clasificación de la Figura 3, el número de divisiones es uno y el número de nodos terminales es dos. De manera más específica, el recuadro superior muestra que existen 35 individuos clasificados como preeclámpticos (línea discontinua), y 24 individuos clasificados como normales (línea continua). De los 59 individuos totales del estudio, 14 individuos tienen un nivel de relaxina H2 menor de 476.7 pg/ml y 45 individuos tienen un nivel de relaxina H2 por encima de 476.7 pg/ml. Con el fin de determinar adicionalmente qué tan específica es la prueba de relaxina, los individuos preeclámpticos y normales se dividen en dos grupos, un recuadro en la izquierda muestra a aquellos con relaxina menor de 476.7 pg/ml y un recuadro a la derecha muestra a aquellos con relaxina mayor de 476.7 pg/ml. Como se puede observar a la izquierda, de aquellos con niveles de relaxina menores de 476.7 pg/ml de relaxina, 13 individuos desarrollan pre-eclampsia, mientras que solamente un individuo tiene un embarazo normal lo que hace que esta prueba sea altamente específica (véase ejemplo 2 para un análisis más detallado).

Se efectúa un estudio separado más pequeño utilizando muestras obtenidas a partir de una población definida en forma menos adecuada de mujeres embarazadas provenientes de Australia. En el segundo estudio, solamente dos muestras contienen menos de 500 pg/ml de relaxina, y de estas dos solamente una muestra se obtiene a partir de un individuo preeclámptico. Esto difiere del primer estudio más grande efectuado utilizando muestras tomadas en edades gestacionales definidas provenientes de mujeres embarazadas de Norteamérica (por ejemplo, Pittsburgh, PA). Además de las diferencias de muestreo sospechadas entre los dos estudios, se piensa que la población de estudio australiana es una población caucásica homogénea, mientras que alrededor del 30% de los individuos de la población de estudio norteamericana son afroamericanos. Por consiguiente, en las modalidades preferidas, las muestras de sangre se obtienen a partir de mujeres embarazadas durante el primer trimestre del embarazo. En algunas modalidades, las mujeres embarazadas son norteamericanas. En un subconjunto de estas modalidades, los individuos norteamericanos provienen de los Estados Unidos de Norteamérica y/o Canadá. En modalidades adicionales, los individuos estudio son descendientes de africanos.

La administración de relaxina previene el desarrollo de preeclampsia La pre-eclampsia es una condición peligrosa y puede aparecer en cualquier momento durante el embarazo, parto y hasta seis semanas después del parto, aunque ésta ocurre con mayor frecuencia en el trimestre final y muy frecuentemente no hasta las semanas 20-35 de la gestación. La pre-eclampsia se puede desarrollar gradualmente, o llegar en forma completamente repentina, incluso estallar en cosa de horas, aunque los signos y síntomas pudieran no haberse notado durante meses. Cuando la pre-eclampsia es silenciosa, apareciendo en forma inesperada durante un chequeo rutinario de la presión sanguínea y/o pruebas de orina y el bebé está casi por nacer (después de las 36 semanas), entonces se induce el trabajo de parto, el bebé nace y la madre se monitorea cuidadosamente. Si la pre-eclampsia se presenta más temprano en el embarazo, su impacto es incluso más profundo. Por ejemplo, se pueden prescribir descanso en cama, medicamentos e incluso hospitalización para mantener la presión sanguínea de la madre bajo control. Lo más conveniente para el bebé es que éste se mantenga in útero tanto como sea posible. Por desgracia, la única cura para la pre-eclampsia es el nacimiento del bebé, y podría ser lo más conveniente para la madre que éste nazca antes del término. El médico puede recetar medicamentos antihipertensivos, tales como beta-bloqueadores, bloqueadores del canal de calcio, hidralazina, alfa-metildopa, clonidina, y en casos raros, lasix o diuréticos (pildoras de agua), aunque esto último no es aconsejable. Si la presión sanguínea no se puede controlar con medicamentos y tratamiento y la salud de la madre y/o infante está en riesgo, entonces a la madre se le pueden administrar esteroides para ayudar en ia maduración de los pulmones del infante para que se pueda hacer nacer prematuramente un bebé viable.

La presente descripción provee un método para identificar mujeres embarazadas predispuestas a pre-eclampsia de modo tal que se puedan tomar medidas para reducir la probabilidad de que dicha mujer embarazada desarrolle pre-eclampsia. La presente descripción también provee métodos para reducir el riesgo de o para evitar la pre-eclampsia administrando relaxina H2 a una mujer embarazada en el primero y/o segundo trimestres del embarazo cuando se mide un nivel de relaxina H2 menor de aproximadamente 500 pg/ml en plasma o suero proveniente de una muestra de sangre obtenida durante su primer trimestre de embarazo. La relaxina H2 de preferencia se administra en forma profiláctica a las mujeres embarazadas ; tan pronto como se detectan niveles bajos de relaxina (por ejemplo, menores de 500 pg/ml). Sin embargo, la pre-eclampsia con frecuencia no se manifiesta hasta las semanas 20-35 de la gestación. Por lo tanto, si la relaxina se administra más tarde durante el embarazo antes de la manifestación de los síntomas, ésta podría seguir siendo benéfica para reducir la probabilidad de pre-eclampsia completamente desarrollada.

En una modalidad de la descripción, la relaxina es relaxina sintética de humano. En otra modalidad de la descripción, la relaxina es una relaxina recombinante de humano. Incluso en otra modalidad de la descripción, la relaxina es un agonista de relaxina o imitador de relaxina. Si se administra relaxina, está de preferencia es relaxina H2. En modalidades adicionales, la relaxina es una relaxina quimérica que comprende una cadena A o una cadena B de relaxina H2 y una cadena A o una cadena B de relaxina H1 o H2. Las relaxinas sintéticas de humano y las quimeras se pueden conseguir a partir de CBL Biopharma (Boulder, CO). En algunas modalidades, la relaxina es un agonista de relaxina H2 tal como aquellos producidos por Compugen (Tel Aviv, Israel). En otras modalidades menos preferidas, la relaxina es relaxina H1 de humano, o relaxina H3 de humano. La relaxina se puede administrar al individuo en una cantidad de aproximadamente 10 pg/kg hasta aproximadamente 100 Mg/kg de peso corporal del individuo por día una vez que se determina la deficiencia. En una modalidad preferida, la relaxina se administra al individuo en una cantidad de aproximadamente 30 pg/kg de peso corporal del individuo por día a través de toda la gestación o a través de una parte de la gestación. Por lo tanto, la relaxina se administra al individuo para mantener, por ejemplo, una concentración de relaxina en suero de aproximadamente 10 ng/ml a través de todo el embarazo. La formulación farmacéutica de relaxina se puede administrar por vía subcutánea (SQ) o a través de otras vías.

Se cree que el efecto benéfico de administrar relaxina a una mujer embarazada es un resultado directo de la relaxina que actúa como un agente específico de receptor que estimula tanto la angiogénesis como la vasodilatación. El incremento de angiogénesis elige como blanco la causa de la pre-eclampsia, en específico un suministro insuficiente de sangre de la madre al niño lo cual eventualmente lleva a una presión sanguínea peligrosamente alta en la madre. El incremento en la vasodilatación también ayuda a reducir la presión sanguínea así como a incrementar el flujo sanguíneo renal en el riñon lo cual también reduce los síntomas de pre-eclampsia. Por lo tanto, cuando la mujer embarazada recibe una composición farmacéutica con relaxina farmacéuticamente activa o agonista de relaxina farmacéuticamente efectivo que elige como blanco los receptores de relaxina específicos (por ejemplo, los receptores LRG7, LGR8, GPCR135, GPCR142) el resultado es la aminoración o prevención de pre-eclampsia.

Población humana enriquecida Una ventaja de la detección temprana es la de enriquecer un grupo de mujeres con mayor probabilidad de desarrollar la enfermedad para estudios de investigación y/o estudios clínicos y para facilitar el análisis de medidas profilácticas. La presente descripción permite un nuevo procedimiento de tamizaje que incluye la selección de una población enriquecida de pacientes para estudios clínicos y/o de investigación para entender de manera más adecuada la pre-eclampsia y el avance de la enfermedad y formas para combatirla. La población enriquecida de mujeres se puede definir a través de análisis respecto a niveles bajos de relaxina en el cual son necesarias muchas menos pacientes con el fin de lograr resultados científica y/o químicamente relevantes. Las mujeres embarazadas en el primer o segundo trimestre del embarazo o antes de la manifestación de síntomas de pre-eclampsia se pueden analizar respecto a niveles de relaxina en el torrente sanguíneo y aquellas con un nivel de relaxina menor de aproximadamente 500 pg/ml se seleccionan para la población enriquecida de pacientes. Sin este valioso procedimiento de selección, se podría requerir el tamizaje de cientos de mujeres con el fin de determinar si un nuevo fármaco o agente tiene o no un efecto sobre la pre-eclampsia. Por lo tanto, la descripción provee un método para el tamizaje de agentes novedosos para tratar o prevenir pre-eclampsia durante un estudio clínico y/o de investigación, que incluye seleccionar mujeres embarazadas que tienen una probabilidad más alta de desarrollar pre-eclampsia a partir de una población enriquecida y analizar a estas mujeres respecto a la efectividad de los agentes novedosos. La población enriquecida incluye mujeres en el primer y segundo trimestres de embarazo o antes de la manifestación de síntomas de pre-eclampsia con un nivel de relaxina en el torrente sanguíneo que es menor de aproximadamente 500 pg/ml.

Composiciones y formulaciones de relaxina La relaxina, agonistas de relaxina, imitadores de relaxina y/o análogos de relaxina se formulan como productos farmacéuticos que serán utilizados en los métodos de la descripción. En la descripción se puede utilizar cualquier composición o compuesto que pueda estimular una respuesta biológica asociada con la unión de relaxina biológicamente o farmacéuticamente activa (por ejemplo, relaxina sintética, relaxina recombinante) o un agonista de relaxina (por ejemplo, análogos de relaxina o modulador tipo relaxina o imitador de relaxina) a los receptores de relaxina como un producto farmacéutico. Los detalles generales sobre las técnicas para la formulación y administración están bien descritos en la literatura científica (véase Remington's Pharmaceutical Sciences, Maack Publishing Co, Easton Pa). Las formulaciones farmacéuticas que contienen relaxina farmacéuticamente activa se pueden preparar de conformidad con cualquier método conocido en la técnica para la fabricación de productos farmacéuticos. Las formulaciones que contienen relaxina o agonistas de relaxina farmacéuticamente activos utilizadas en los métodos de la descripción se pueden formular para administración en cualquier forma convencionalmente aceptable incluyendo, pero sin limita rse a vía de administración subcutánea (SQ) , intram uscular, intravenosa, sublingual , tópica , oral y mediante inhalación . Los ejemplos ilustrativos se indican más adelante. En una modalidad preferida, la relaxina se admin istra por vía subcutánea (SQ) .

Cuando los fármacos se suministran por vía subcutánea (SQ) , las formulaciones q ue contienen relaxina farmacéuticamente activa o un agon ista de relaxina farmacéuticamente efectivo pueden esta r en forma de u na preparación inyectable estéril , tal como u na suspensión acuosa u oleosa inyectable estéril . Por ejemplo,, la relaxi na se puede diluir en acetato de sod io a pH 5.0, en donde ésta es muy soluble y estable. Los pacientes se pueden tratar con u na composición de relaxina mediante infusión continua tanto como sea necesario. Por ejemplo , las bombas para infusión de relaxi na suministran relaxina a través de u na cánula hacia u na ag uja que se aplica en forma su bcutánea y las bombas se pueden portar en una cinta bajo las ropas del paciente. La relaxina también se puede administrar a través de inyecciones pu ntuales de relaxina mientras el paciente es monitoreado respecto a síntomas de pre-eclampsia. Las dosis se pueden ajusfar en una base paciente a paciente.

Las suspensiones de relaxina se pueden formular de conformidad con la técnica conocida utilizando aq uellos agentes dispersantes o humectantes apropiados y agentes para suspensión q ue han sido mencionados anteriormente. La preparación inyectable estéril también puede ser u na solución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o solvente parenteralmente aceptable no tóxico. Entre los vehículos y solventes aceptables que se pueden utilizar están agua y solución de Ringer, cloruro de sodio isotóhico. Además, se pueden utilizar en forma convencional aceites no volátiles estériles como un solvente o medio de suspensión. Para este propósito se puede utilizar cualquier aceite no volátil blando incluyendo monoglicéridos o diglicéridos sintéticos. Además, de igual manera se pueden utilizar ácidos grasos tales como ácido oleicó, en la preparación de inyectables.

Las suspensiones acuosas de la descripción contienen relaxina en mezcla íntima con excipientes apropiados para la fabricación de suspensiones acuosas. Dichos excipientes incluyen un agente para suspensión, tal como carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto y goma acacia, y agentes dispersantes o humectantes tal como un fosfátido de origen natural (por ejemplo, lecitina), un producto de condensación de un óxido de alquileno con un ácido graso (por ejemplo, estearato ' de polioxietileno), un producto de condensación de óxido de etileno con un alcohol alifático de cadena larga (por ejemplo, heptadecaetilen-oxicetanol), un producto de condensación de óxido de etileno con un éster parcial obtenido a partir de un ácido graso y un hexitol (por ejemplo, mono-oleato de polioxietilen-sorbitol), o un producto de condensación de óxido de etileno con un éster parcial obtenido a partir de un ácido graso y un anhídrido de hexitol (por ejemplo, mono- oleato de polioxietilen-sorbitán). La suspensión acuosa también puede contener uno o más conservadores tales como p-hidroxibenzoato de etilo o n-propilo, uno o más agentes colorantes, uno o más agentes saborizantes y uno o más agentes edulcorantes, tales como sacarosa, aspartame o sacarina. Las formulaciones se pueden ajusfar para osmolaridad.

Las suspensiones oleosas se pueden formular suspendiendo relaxina en un aceite vegetal, tal como aceite de cacahuate, aceite de oliva, aceite de ajonjolí o aceite de coco, o en un aceite mineral tai como parafina líquida. Las suspensiones oleosas pueden contener un agente espesante, tal como cera de abejas, parafina dura o alcohol cetílico. Se pueden agregar agentes edulcorantes para proveer una preparación oral agradable al gusto. Estas formulaciones se pueden conservar mediante la adición de un antioxidante tal como ácido ascórbico.

Los polvos y gránulos dispersables de la descripción apropiados para preparación de una suspensión acuosa mediante la adición de agua se pueden formular a partir de relaxina en mezcla íntima con un agente dispersante, para suspensión y/o humectante, y uno o más conservadores. Los agentes dispersantes o humectantes apropiados y los agentes para suspensión quedan ejemplificados por aquellos descritos anteriormente. También pueden estar presentes excipientes adicionales, por ejemplo agentes edulcorantes, saborizantes y colorantes.

Las formulaciones farmacéuticas de la descripción también pueden estar en forma de emulsiones aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal, tal como aceite de oliva o aceite de cacahuate, un aceite mineral, tal como parafina líquida, o una mezcla de los mismos. Los agentes emulsificantes apropiados incluyen gomas de origen natural, tales como goma acacia y goma tragacanto, fosfátidos de origen natural, tales como lecitina de soya, ésteres o ésteres parciales obtenidos a partir de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, tales como mono-oleato de sorbitán, y productos de condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno, tales como mono-oleato de polioxietilen-sorbitán. La emulsión también puede contener agentes edulcorantes y saborizantes. Los jarabes y elíxires se pueden formular con agentes edulcorantes, tales como glicerol, sorbitol o sacarosa. Dichas formulaciones también pueden contener un demulcente, un conservador, un saborizante o un agente colorante.

Administración y régimen de dosificación de formulaciones de relaxina Las formulaciones que contienen relaxina H2 farmacéuticamente activa o una quimera, agonista, o imitador de relaxina H2 farmacéuticamente efectivo utilizadas en los métodos de la descripción se pueden administrar en cualquier vía convencionalmente aceptable incluyendo, pero sin limitarse a, vía subcutánea, intramuscular, intravenosa, sublingual, tópica, oral y mediante inhalación. La administración puede variar con la farmacocinética y otras propiedades de los fármacos y con la condición de salud de los pacientes. Los lineamientos generales se presentan a contin uación .

Los métodos de la descripción reducen la probabilidad de desarrollo de pre-eclampsia en m ujeres embarazadas. La cantidad de relaxina sola o en combinación con otro agente o fármaco que es adecuada para log rar esto se considera la dosis terapéuticamente efectiva . El prog rama de dosificación y las cantidades efectivas para este uso , es decir, el "régimen de dosificación" , dependen de u na variedad de factores, incluyendo el estado general de salud del paciente , el estado físico del paciente , el tipo de embarazo (por ejemplo, embarazo sencillo contra embarazo m últiple) edad , y similares . En el cálculo del régimen de dosificación para u n paciente, también se toma en consideración el modo de administración . El régimen de dosificación también debe tomar en cuenta la farmacocinética, es decir, la velocidad de absorción , biodisponibilidad , metabolismo , depu ración , y similares . Tomando como base dichos principios, la relaxina se puede utilizar para reducir o prevenir el desarrollo de pre-eclampsia en m ujeres embarazadas. La descripción también provee relaxina o un agonista o imitador de relaxina y, opcionalmente, otro fármaco para ad ministración simu ltánea , por separado o secuencial. Por ejemplo, la descripción provee relaxina y, opcionalmente, u n medicamento pa ra h ipertensión para uso combinado en la terapia si fuera necesario . En otro ejemplo, la descripción también provee relaxina y , opcionalmente , MgS04 para la profilaxis de convulsiones en terapia combinada.

La descripción también provee el uso de relaxina en la fabricación de un medicamento para reducir o prevenir el desarrollo de pre-eclampsia en mujeres embarazadas. Por lo tanto, el medicamento se prepara para administración durante el embarazo. La descripción también provee relaxina o un análogo o imitador de relaxina para uso en un método para reducir la probabilidad de desarrollo de pre-eclampsia, en el cual la relaxina se prepara para administración a mujeres embarazadas.

El estado de la técnica permite al personal clínico determinar el régimen de dosificación de relaxina para cada mujer embarazada individual. Como un ejemplo ilustrativo, los lineamientos provistos más adelante para relaxina se pueden utilizar como guías para determinar el régimen de dosificación, es decir, el programa de dosis y niveles de dosificación, de formulaciones que contienen relaxina farmacéuticamente activa administrada cuando se practican los métodos de la descripción. Como un lineamiento general; se espera que la dosis diaria de relaxina (por ejemplo sintética, recombinante, análogo, agonista, imitador, etc.) H1, H2 y/o H3 de humano farmacéuticamente activa típicamente sea una cantidad en un intervalo de aproximadamente 10 hasta aproximadamente 100 pg/kg de peso corporal del individuo por día. En una modalidad preferida, la dosis de relaxina es de 30 pg/kg/día a través de toda la gestación. En otra modalidad, estas dosis dan como resultado, por ejemplo, concentraciones de relaxina en suero de aproximadamente 10 ng/ml. En una modalidad preferida, la relaxina o un agonista de la misma farmacéuticamente efectiva se administra aproximadamente a 30 pg/kg/día a través de toda la gestación o a través de una parte de la gestación. En otra modalidad preferida, la relaxina o un agonista de la misma farmacéuticamente efectiva se administra aproximadamente a 10 hasta aproximadamente 100 pg/kg/día a través de toda la gestación o a través de una parte de la gestación. En otra modalidad, la administración de relaxina se continúa para mantener una concentración de relaxina en suero desde aproximadamente 0.5 hasta aproximadamente 300 ng/ml, de manera más preferida desde aproximadamente 0.5 hasta aproximadamente 100 ng/ml, y de manera incluso más preferida desde aproximadamente 0.5 hasta aproximadamente 10 ng/ml. De manera más preferida, la administración de relaxina se continúa para mantener una concentración de relaxina en suero de 10 ng/ml o mayor a través de todo el embarazo. Estas concentraciones de relaxina pueden reducir la probabilidad de desarrollo de pre-eclampsia y con esto, los síntomas en la madre tales como hipertensión, presión sanguínea alta, proteinuria, insuficiencia renal y mortalidad. Asimismo, estas concentraciones de relaxina pueden reducir o prevenir la probabilidad de peso bajo al nacer en infantes y los riesgos asociados así como fallecimientos infantiles. Dependiendo del individuo, la administración de relaxina se mantiene durante un periodo de tiempo específico o en tanto sea necesario para lograr la estabilidad en la mujer embarazada y el infante Por ejemplo, la relaxina se puede administrar a través de infusión continua a través del final de la gestación. Esto se puede lograr mediante una bomba de infusión u otros medios. De manera alternativa, la relaxina se puede administrar durante el primero y/o segundo trimestre únicamente si fuera necesario.

Anticuerpos específicos de relaxina y específicos de CRP En la presente invención se describen métodos para la producción de anticuerpos que pueden reconocer específicamente epítopes de relaxina y/o CRP. Dichos anticuerpos pueden incluir, pero no se limitan a, anticuerpos policlonales, anticuerpos monoclonales (mAbs), anticuerpos de humano, humanizados o quiméricos, anticuerpos de cadena individual, fragmentos Fab, fragmentos F(ab')2, fragmentos producidos mediante una genoteca de expresión de Fab, anticuerpos anti-idiotípicos (anti-ld), y fragmentos de unión a epítope de cualquiera de los anteriores. Para la producción de anticuerpos para relaxina y/o CRP, se pueden inmunizar varios animales hospederos mediante inyección con una proteína relaxina o una proteína CRP, o una porción de cualquiera de las mismas. Dichos animales hospederos pueden incluir, pero no se limitan a conejos, ratones, y ratas. Se pueden utilizar varios coadyuvantes para incrementar la respuesta inmunológica, dependiendo de la especie hospedera, incluyendo pero sin limitarse a coadyuvante de Freund (completo e incompleto), geles minerales tales como hidróxido de aluminio, sustancias tensoactivas tales como lisolecitina, polioles de tipo pluronic, polianiones, péptidos, emulsiones oleosas, hemocianina de lapa, dinitrofenol; y coadyuvantes humanos potencialmente útiles tales como BCG (bacilo de Calmette-Guerin) y Corynebacterium parvum.

Los anticuerpos policlonales son poblaciones heterogéneas de moléculas de anticuerpo obtenidas a partir del suero de animales inmunizados con un antígeno, tal como relaxina o CRP, o un derivado funcional antigénico de relaxina o CRP. Para la producción de anticuerpos policlonales, se pueden inmunizar animales hospederos tales como aquellos descritos anteriormente, mediante inyección de relaxina o CRP. Se puede monitorear el titulo de anticuerpo en el animal inmunizado con respecto al tiempo utilizando técnicas estándar, tales como con una prueba con inmuno-sorbente ligado a enzima (ELISA) utilizando polipéptido inmovilizado. Si se desea, las moléculas de anticuerpo se pueden aislar a partir del animal (por ejemplo, a partir de la sangre) y purificar adicionalmente mediante técnicas bien conocidas, tales como cromatografía ; con proteína A para obtenerla fracción de IgG. Los anticuerpos monoclonales, los cuales son poblaciones homogéneas de anticuerpos para un antígeno particular tal como relaxina o CRP, se pueden obtener utilizando cualquier técnica que provea la producción de moléculas de anticuerpo utilizando líneas celulares continuas en cultivo las cuales son bien conocidas en la técnica. Dichos anticuerpos pueden ser de cualquier clase de inmunoglobulina incluyendo IgG, IgM, IgE, IgA, IgD y cualquier subclase de las mismas. El hibridoma que produce el mAb de esta descripción se puede cultivar in vitro o in vivo.

Como alternativa a la preparación de hibridomas que secretan anticuerpo monoclonal, se puede identificar un anticuerpo monoclonal dirigido contra relaxina y/o CRP y aislar mediante tamizaje de una genoteca de inmunoglobulina combinatoria recombinante (por ejemplo, una genoteca de despliegue en fago de anticuerpo) con relaxina, CRP o derivados de las mismas. Los ¿ estuches para generar y tamizar genotecas de despliegue en fago están comercialmente disponibles. De manera adicional, los anticuerpos recombinantes, tales como anticuerpos monoclonales quiméricos y humanizados, que comprenden porciones tanto humanas como no humanas, los cuales se pueden elaborar utilizando técnicas estándar de ADN recombinante, están dentro del alcance de la descripción. Un anticuerpo quimérico es una molécula en la cual porciones diferentes se obtienen a partir de especies animales diferentes, tales como aquellas que tienen una región variable obtenida a partir de un mAb de múrido y una región constante de inmunoglobulina de humano (por ejemplo, patentes E.U.A. Nos. 4,816,567 y 4,816,397). Los anticuerpos humanizados son moléculas de anticuerpo provenientes de especies no humanas que tienen una o más regiones determinantes de complementariedad (CDRs) provenientes de la especie no humana y una región de estructura base proveniente de una molécula de inmunoglobulina de humano (por ejemplo, patente E.U.A. No. 5,585,089). Dichos anticuerpos monoclonales quiméricos y humanizados se pueden producir utilizando técnicas de ADN recombinante conocidas en la técnica.: Los anticuerpos descritos en la presente solicitud se pueden utilizar en cualquier prueba en la cual se analiza la sangre de mujeres embarazadas respecto a niveles de relaxina con el fin de determinar si las mujeres están o no en un riesgo más alto de desarrollar preeclampsia que el de sus contrapartes sanas. Si los niveles de relaxina en sangre caen por debajo de aproximadamente 500 pg/ml entonces las mujeres están en un riesgo más alto de desarrollar preeclampsia y necesitan ser monitoreadas cuidadosamente y/o tratadas con relaxina durante toda o una parte de la gestación. De manera opcional, la sangre de las mujeres embarazadas también se puede analizar respecto a los niveles de CRP con el fin de lograr una prueba más sensible. Si los niveles de CRP en sangre están por debajo de 1.5 mcg/ml o por encima de 13.5 mcg/ml entonces las mujeres tienen incluso una mayor probabilidad de desarrollar preeclampsia. En la presente solicitud se puede utilizar cualquier prueba que permita la determinación exacta de los niveles de relaxina y/o CRP en sangre, incluyendo, ELISA, bio-ensayos, inmuno-ensayos y otros. También se pueden utilizar estuches comercialmente disponibles.

Experimental En la presente solicitud se utilizan las siguientes abreviaturas: mcg o g (microgramo); mi (mililitro); pg (picogramo); BMI (Indice de Masa Corporal); CART (árbol de clasificación y regresión); IC (intervalo de confianza); CREAT (creatinina); CRP (proteína C-reactiva); ELISA (prueba con inmuno-sorbente ligado a enzima); HP (hipertensión, proteinuria); HPU (hipertensión, proteinuria, ácido úrico); HU (hipertensión, ácido úrico); Rlx o RLX (relaxina).

Los siguientes ejemplos específicos pretenden ilustrar la descripción y no deben ser considerados como limitativos del alcance de las reivindicaciones.

EJEMPLO 1 Estudio de mujeres embarazadas preeclámpticas Relaxina, una hormona peptídica liberada a partir; del cuerpo lúteo del ovario, es un potente vasodilatador en el embarazo. Las concentraciones de H2 en suero se elevan durante el primer trimestre y alcanzan un máximo a inicios del segundo trimestre, que coincide con la marcada vasodilatación sistémica y renal materna. En contraste, la adaptación vasodilatadora inadecuada y la resistencia vascular sistémica incrementada son rasgos característicos de preeclampsia. Este ejemplo describe la medición de relaxina en suero durante el embarazo y la determinación de una asociación de relaxina en suero reducida durante el primer trimestre con un riesgo incrementado de desarrollar preeclampsia.

Se efectúa un estudio de control de caso anidado de 62 mujeres con gestación menor de 13 semanas. De las 62 mujeres del estudio, 37 mujeres desarrollan preeclampsia, como queda definido por la nueva aparición de hipertensión y proteinuria después de gestación de 20 semanas. Los individuos restantes son normotensivos y tienen embarazos sin complicaciones. La relaxina H2 se mide utilizando ELISA (aunque también son apropiadas otras pruebas para este propósito, tales como bioensayo, RT-PCR, etc). Se utiliza estadística descriptiva incluyendo regresión logística para el análisis de los datos.

Específicamente, la concentración de relaxina 2 de humano en suero se mide mediante inmuno-ensayo, utilizando el Servicio de Pruebas Analíticas de R&D Systems (Minneapolis, MN). El anticuerpo monoclonal específico de relaxina H2 utilizado en este inmuno-ensayo es una IgG 1 de ratón producida por el hibridoma 3F2.F2. El hibridoma 3F2.F2 fue desarrollado por BAS Medical, actualmente Corthera Inc. (San Mateo, CA), y se depositó conforme al Tratado de Budapest como Designación de Depósito de Patente del Depósito Americano de Cultivos Tipo (ATCC, Manassas, VA) PTA-8423. La prueba ELISA para relaxina H2 utilizando el anticuerpo 3F2.F2 está bien validada. No se observa reactividad cruzada significativa o interferencia con IGF-1, IGF-II, insulina (aminoácidos 25-100), tipo insulina 3, relaxina 1 (H1) y relaxina 3 (H3) recombinante de humano. Además, no se observa reactividad cruzada o interferencia significativa con relaxina 2 recombinante canina, porcina o de roedor (ratón y rata).

Las concentraciones de relaxina en suero no son significativamente diferentes entre mujeres preeclámpticas y los controles (rangos de la mediana e intercuartiies, 670.4 [456.9-1117.2] contra 802.3 [570.8-966.4] pg/ml, p = 0.47). Sin embargo, las mujeres con concentraciones de relaxina menores de 477 pg/ml, un corte que se aproxima al cuartil más bajo, tienen una relación de probabilidades de 6.2 (IC de 95% 1.3-30.7, p=0.025) de desarrollar preeclampsia. Después de ajusfar respecto a la edad gestacional en la recolección de muestras, índice de masa corporal (BMI), raza, y condición de fumador, estas mujeres tienen 7.4 veces más probabilidad de desarrollar preeclampsia (IC de 95% 1.4-38.9, p=0.02), lo cual es sorpresivamente alto. Esta asociación fuerte persiste en un subgrupo de mujeres con nueva aparición de hipertensión, proteinuria, e hiperuricemia, un subconjunto preeclámptico más homogéneo con tasa más alta de resultados adversos (ajustado OR 6.9, IC de 95% 1.2-40, p=0.03).

Este estudio indica que una concentración baja de relaxina en suero es un factor de riesgo independiente para preeclampsia. Las adaptaciones vasodilatadoras inadecuadas secundarias a la deficiencia de relaxina en el embarazo temprano también pueden contribuir a la patogénesis de preeclampsia.

EJEMPLO 2 Análisis estadístico de la predicción de preeclampsia Se utiliza CART (árbol de clasificación y regresión) para analizar los datos obtenidos a partir de las 69 mujeres embarazadas que tienen las características mostradas en la Tabla 2. Este análisis expandido se basa en los datos obtenidos a partir de los individuos del estudio original del Ejemplo 1, así como de varios individuos adicionales. Los parámetros utilizados para la predicción de preeclampsia son primero los niveles de relaxina H2, y después también los niveles de proteína C-reactiva (CRP). Como se puede observar en la Figura 1, la edad gestacional durante el embarazo se divide en tres períodos, es decir, 0-15 semanas (primer trimestre), 15-25 semanas (segundo trimestre), y 25-35 semanas (tercer trimestre). La Figura 1 muestra las concentraciones de relaxina en suero en mujeres preeclámpticas (grupos HPU y HP) con respecto a la edad gestacional. Las líneas conectan muestras provenientes del mismo individuo. Los triángulos representan muestras provenientes de mujeres embarazadas que posteriormente desarrollan preeclampsia y tienen niveles de relaxina H2 endógena menores de 500 pg/ml en las primeras 15 semanas. Los cuadrados representan muestras provenientes de mujeres embarazadas que posteriormente desarrollan preeclampsia pero que tienen niveles de relaxina H2 endógena de aproximadamente 500 pg/ml. Los diamantes representan muestras provenientes de mujeres que no desarrollan preeclampsia. Se debe indicar que pocas de estas mujeres tienen concentraciones de relaxina H2 en las primeras 15 semanas que están por debajo de 500 pg/ml.

TABLA 2 Características de las mujeres embarazadas En el análisis CART, se promedian todas las muestras de un individuo durante las primeras 15 semanas. Esto es porque existen números diferentes de muestras recolectadas y en tiempos diferentes durante la gestación para cada individuo. Con referencia al árbol de clasificación de la figura 3, el número de divisiones es uno, y el número de nodos terminales es dos. De manera más específica, el recuadro superior muestra que hay 35 mujeres preeclámpticas con niveles de relaxina H2 natural por debajo de 476.7 pg/ml (véase barra discontinua) y 24 mujeres normales con niveles de relaxina H2 naturales por encima de 476.7 pg/ml (véase barra de líneas continuas). Con el fin de determinar también la especificidad de la prueba de relaxina, las mujeres preeclámpticas y normales se dividen en dos grupos, el recuadro 2 a la izquierda muestra a aquellas mujeres con relaxina H2 en suero menor o igual a 476.7 pg/ml y el recuadro 3 a la derecha muestra a aquellas mujeres con relaxina H2 en suero mayor de 476.7 pg/ml. Como se puede observar en el recuadro 2 a la izquierda, de las mujeres con niveles de relaxina H2 menores que o iguales a 476.7 pg/ml de relaxina, 13 mujeres desarrollan preeclampsia mientras que solamente una mujer tiene un embarazo normal lo que hace a esta prueba altamente específica. Como se puede observar en el recuadro 3 a la derecha, de las mujeres con niveles de relaxina H2 mayores de 476.7 pg/ml, 23 mujeres tienen un embarazo normal y 22 mujeres desarrollan preeclampsia. Los resultados mostrados en el recuadro 3 a la derecha motivan la inclusión de un segundo parámetro para incrementar la sensibilidad de la prueba.

La figura 4 muestra el mismo árbol de clasificación que el de la figura 3, más una división adicional basada en los niveles de proteína C-reactiva (CRP). Las mujeres con niveles de relaxina H2 mayores de 476.7 se dividen en aquellas con niveles de CRP menores que o iguales a 13.481 mcg/ml y aquellas con niveles de CRP mayores de 13.481 mcg/ml. De manera notable, las mujeres con niveles de CRP mayores de 13.81 mcg/ml tienen mucha probabilidad de desarrollar preeclampsia, lo cual se muestra en el recuadro 5 que representa nueve mujeres embarazadas que desarrollan preeclampsia y una mujer embarazada que tiene un embarazo normal. El recuadro 4 se divide adicionalmente en aquellas con niveles de CRP menores que o iguales a 1.4681 mcg/ml y aquellas con niveles de CRP mayores de 1.4681 mcg/ml. Como se puede observar en el recuadro 6, siete mujeres desarrollan preeclampsia mientras que solamente una mujer tiene un embarazo normal, lo que hace a esta prueba más sensible. Mediante el uso de una medición de CRP, la sensibilidad de la prueba se incrementa hasta 83 por ciento.

La figura 5 muestra un árbol de clasificación para gestaciones hipertensivas (mujeres con HP, HPU y HU, véase también Tablas 1 y 2). Los individuos se dividen en cuatro grupos tomando como base las concentraciones de relaxina H2 y CRPxen suero durante la gestación temprana. A través del uso de estas dos mediciones, se obtiene un nivel de sensibilidad muy bueno. De hecho, utilizando las mediciones tanto de relaxina como de CRP, la especificidad es de 63% y la sensibilidad es de 96%.

La figura 6 muestra otro árbol de clasificación para gestaciones hipertensivas (es decir, 48 mujeres hipertensas incluyendo HP, HPU y HU y 25 mujeres normales). Los individuos se dividen tomando como base los niveles de relaxina H2 y CRP en suero como en la figura 5, así como los niveles de creatinina para refinar adicionalmente la predicción. Mediante el uso de estos tres analitos, se desarrolla un algoritmo muy sensible y específico para la predicción de embarazos que posteriormente desarrollarán hipertensión. Con relaxina, CRP, y creatinina (CREAT) la especificidad es de 92% y la sensibilidad es de 87%. Debido a que éstas mujeres no son preeclámpticas sino solamente candidatas para gestación hipertensiva, se utiliza CREAT para determinar la probabilidad de hipertensión además de relaxina H2 y CRP.

EJEMPLO 3 Predicción de preeclampsia en mujeres embarazadas Se recolecta una muestra de suero a partir de una mujer embarazada durante la gestación temprana. Se determinan la concentración de relaxina H2 y la concentración de CRP en suero mediante ELISA. Utilizando el algoritmo como se muestra en la figura 3, se determina la probabilidad de desarrollar preeclampsia. Por ejemplo si el nivel de relaxina H2 en suero es de 300 pg/ml, la paciente se colocan tratamiento para prevenir el desarrollo casi seguro de preeclampsia preeclampsia. Si el nivel de relaxina en suero es de 600 pg/ml, también se examina el nivel de CRP. Si el nivel de CRP es mayor de 1.5 mcg/ml y menor de 13.5 mcg/ml el embarazo se considera como una gestación normal. Sin embargo, si el nivel de CRP de la mujer embarazada cae fuera de este intervalo, entonces dicha mujer tiene un riesgo incrementado de desarrollar preeclampsia.

Varias modificaciones y variaciones de la presente descripción serán evidentes a los expertos en la técnica sin alejarse del alcance y campo de la descripción. Aunque la descripción se ha descrito en conexión con modalidades preferidas específicas, se debe entender que la descripción tal como se reclama no debe quedar indebidamente limitada a dichas modalidades específicas. En efecto, se pretende que varias modificaciones de los modos descritos para efectuar la descripción las cuales son entendidas por los expertos en la técnica queden dentro del alcance de las reivindicaciones.

Claims

REIVINDICACIONES

1. - Un método para evaluar si una mujer embarazada tiene un riesgo incrementado de desarrollar preeclampsia, que comprende: a) medir la concentración de relaxina H2 en una muestra biológica obtenida a partir de dicha mujer embarazada antes de la manifestación de un síntoma de preeclampsia; y b) determinar que dicha mujer embarazada tiene un riesgo incrementado de desarrollar preeclampsia cuando dicha concentración de relaxina H2 es menor que un valor de corte para una concentración de cuartil más bajo de mujeres embarazadas.

2. - El método de conformidad con la reivindicación 1, en donde dicha muestra biológica comprende plasma o suero.

3.- El método de conformidad con la reivindicación 2, en donde dicha relaxina H2 se mide utilizando un anticuerpo para dicha relaxina H2.

4. - El método de conformidad con la reivindicación 3, en donde dicha relaxina H2 se mide con una prueba con inmunosorbente ligado a enzima (ELISA).

5. - El método de conformidad con la reivindicación 2, en donde dicho antes de la manifestación de un síntoma de preeclampsia es durante el primer trimestre de dicho individuo que se extiende desde 5 hasta 15 semanas de embarazo.

6.- El método de conformidad con la reivindicación 2, en donde dicha mujer embarazada es parte de un grupo que éstá predispuesto a preeclampsia, dicho grupo comprende uno o mas de un primer embarazo, mayor de 35 años de edad, menor de 18 años de edad, gestaciones múltiples, y una condición pre-existente.

7.- El método de conformidad con la reivindicación 6, en donde dicha condición pre-existente se selecciona a partir del grupo que consiste de hipertensión, diabetes, lupus, trombofilia, enfermedad renal, y obesidad.

8. - El método de conformidad con la reivindicación 2, en donde dicho valor de corte para una concentración del cuartil más bajo es de aproximadamente 500 pg/ml.

9. - El método de conformidad con la reivindicación 8, que comprende además medir la concentración de proteína C-reactiva (CRP) en dicha muestra biológica, y determinar que dicha mujer embarazada tiene un riesgo incrementado de desarrollar preeclampsia cuando dicha concentración de CRP es mayor de aproximadamente 13.5 mcg/ml, incluso cuando dicha concentración de relaxina H2 es mayor de aproximadamente 500 pg/ml.

10. - El método de conformidad con la reivindicación 8, que comprende además medir la concentración de proteína C-reactiva (CRP) en dicha muestra biológica, y determinar que dicha mujer embarazada tiene un riesgo incrementado de desarrollar preeclampsia cuando dicha concentración de CRP es menor de aproximadamente 1.5 mcg/ml, incluso cuando dicha concentración de relaxina H2 es mayor de aproximadamente 500 pg/ml.

11. - Un método para evaluar si una mujer embarazada tiene preeclampsia, que comprende: a) medir la concentración de relaxina H2 en una muestra biológica obtenida a partir de dicha mujer embarazada; y b) determinar que dicha mujer embarazada tiene preeclampsia cuando dicha concentración de relaxina H2 es menor que un valor de corte para una concentración del cuartil más bajo de mujeres embarazadas.

12. - El método de conformidad con la reivindicación 11, en donde dicha muestra biológica se obtiene a partir de dicha mujer embarazada cuando dicha mujer embarazada se presenta con por lo menos un síntoma de preeclampsia, y dicho método se utiliza en parte para diagnosticar que dicha mujer embarazada tiene preeclampsia.

13.- El método de conformidad con la reivindicación 12, en donde dicho por lo menos un síntoma de preeclampsia comprende uno o más del grupo que consiste de edema, dolor de cabeza severo, cambio en la visión, dolor del abdomen superior, náusea, vómito, mareo, producción disminuida de orina, y ganancia repentina de peso de más de un kilogramo por una semana.

14.- Un método para reducir la probabilidad de que una mujer embarazada desarrolle preeclampsia, que comprende: a) seleccionar a una mujer embarazada que tiene una concentración de relaxina H2 menor de aproximadamente 500 pg/ml en una muestra biológica obtenida durante su primer trimestre de embarazo; y b) administrar relaxina H2 en una formulación farmacéutica a dicha mujer embarazada para reducir la probabilidad de que desarrolle preeclampsia.

15.- El método de conformidad con la reivindicación 14, en donde dicha relaxina H2 se administra a dicha mujer embarazada en una cantidad de aproximadamente 30 pg/kg de peso corporal por día a través de toda ia parte terminal de la gestación.

16. - El método de conformidad con la reivindicación 14, en donde dicha relaxina H2 se administra a dicha mujer embarazada para mantener una concentración de relaxina en suero; de aproximadamente 10 ng/ml a través de todo el embarazo.

17. - El método de conformidad con la reivindicación 14, en donde dicha concentración de relaxina H2 en suero se determina mediante inmuno-ensayo.

18. - El método de conformidad con la reivindicación 14, en donde dicho primer trimestre se extiende desde 5 hasta 15 semanas del embarazo.

19. - El método de conformidad con la reivindicación 14, en donde dicha mujer embarazada es parte de un grupo que está predispuesto a preeclampsia, dicho grupo comprende uno o más de un primer embarazo, mayor de 35 años de edad, menor de 18 años de edad, gestaciones múltiples, y una condición pre-existente.

20. - El método de conformidad con la reivindicación 19, en donde dicha condición pre-existente se selecciona a partir del grupo que consiste de hipertensión, diabetes, lupus, trombofilia, enfermedad renal, y obesidad.

21.- El método de conformidad con la reivindicación 14, en donde dicha mujer embarazada es de Norteamérica.

22.- Un anticuerpo monoclonal que reacciona con relaxina H2, dicho anticuerpo monoclonal es producido por un hibridoma indicado como Depósito Americano de Cultivos Tipo PTA-8423.

23. - Un estuche para inmuno-ensayo que comprende el anticuerpo monoclonal de conformidad con la reivindicación 22, una microplaca, e instrucciones para medir la concentración de relaxina H2 de una muestra.

24. - El estuche para inmuno-ensayo de conformidad con la reivindicación 23, en donde dicho inmuno-ensayo es una prueba de captura de relaxina H2, la cual también comprende un anticuerpo anti-relaxina policlonal.