MX2008008220A - Nueva coleccion de regiones hcdr3 y usos de las mismas. - Google Patents

Abstract

La presente invención se dirige a la preparación y uso de una colección de miembros de la región 3 determinante de complementaridad de cadena pesada de anticuerpo (HCDR3), en donde la diversidad de la colección es una función de la longitud de los miembros HCDR3. La diversidad de la colección de regiones HCDR3 representa sustancialmente la distribución de aminoácidos naturales de HCDR3 en el repertorio humano. Esta distribución de aminoácidos naturales puede representarse al desviar la distribución aleatoria completa de aminoácidos, de acuerdo con lo anterior, en la secuencia de ADN que codifica para HCDR3 al utilizar tecnología de mutagénesis de trinucleótidos (TRIM) Una colección de miembros HCDR3 de la invención puede cada uno estar comprendido dentro de una región variable de un anticuerpo (o fragmento del mismo) para formar una biblioteca de anticuerpos sintéticos o fragmentos de anticuerpo. Las bibliotecas de anticuerpos sintéticos de la presente invención pueden diseñarse para incluir características modulares, tales como regiones de estructura de "gen maestro" químicamente sintetizadas, que pueden contener sitios únicos de restricción que flanquean una o más regiones CDR, incluyendo una región HCDR3 preparada como se describe en la presente. La invención también proporciona moléculas de ácido nucleico que codifican para tales colecciones diversas y métodos para elaborar y utilizar las mismas.

Description

NUEVA COLECCIÓN DE REGIONES HCDR3 Y USOS PARA LAS MISMAS Esta solicitud reivindica la prioridad para la Solicitud Provisional Serie No. 60/751,633, presentada en Diciembre 20 de 2005, cuyo contenido se incorpora en la presente mediante la referencia en su totalidad. Antecedentes de la Invención La tercera región determinante de complementariedad de la cadena pesada de inmunoglobulina (H-CDR3) forma el centro del sitio clásico de enlace a antigeno y frecuentemente juega un papel dominante en la determinación de la especificidad y la afinidad del anticuerpo. En todas las especies conocidas con un sistema inmune adaptado, la H-CDR3 es más diversa que cualquiera de las otras cinco regiones CDR (H-CDR1, H-CDR2, L-CDR1, L-CDR2 o L-CDR3), que, conjuntamente, forman el limite externo del sitio de enlace a antigeno (Tonegawa, 1983; Chothia et al., 1989). Se ha descubierto que tanto la longitud promedio de la H-CDR3 como el rango de longitudes de la H-CDR3, que pueden tener gran influencia sobre el rango de estructuras de enlace a antigeno disponibles para las especies y, por tanto, en la función del repertorio de anticuerpos (Johnson & Wu, 1998; Collis et al., 2003), se incrementa de ratones a humanos a ganado (Wu et al., 1993). La diversidad de la H-CDR3 también puede regularse dentro de una especie. Por ejemplo, en humanos y ratones, el rango de las longitudes de la H-CDR3 y la diversidad de la H-CDR3 se incrementan durante la ontogenia (Feeney, 1992; Zemlin et al., 2002). Debido a su prominente papel en el enlace a antigeno, la región H-CDR3 se ha utilizado como un vehículo para la introducción de hipervariabilidad en bibliotecas de anticuerpos sintéticos que pueden utilizarse para diseñar anticuerpos terapéuticos (Knappik et al., 2000). La aleatorizacion de esta región con iniciadores degenerados produce una enorme diversidad de secuencias, pero muchas, si no la mayoría, de estas estructuras se distorsionan y no son funcionales (Zemlin et al., 2003). En consecuencia, se requieren muy grandes bibliotecas de anticuerpos sintéticos para obtener buenas afinidades contra un objetivo dado. Zemlin notó que las regiones H-CDR3 en humanos exhiben un mayor rango de longitudes en comparación a las regiones H-CDR3 murinas siguiendo el análisis de Zemlin de las regiones H-CDR3 murinas y humanas únicas, funcionales, publicadas. Zemlin notó también que la frecuencia de ciertos aminoácidos cambia a medida que se incrementa la longitud de la HCDR3. Por ejemplo, Zemlin reportó que la frecuencia de serina se incrementó con la longitud para secuencias de 8-14 residuos de aminoácido, pero desplegó un patrón mezclado en secuencias más mayores a 14 residuos de aminoácido. Recientemente, Hoet et al., Nature Biotech., 23: (3) Marzo de 2005, describieron la construcción de una biblioteca de anticuerpos que contiene secuencias pesadas variables (VH) que fueron parcialmente sintéticas, pero contenían regiones HCDR3 capturadas de donantes humanos. En particular, la porción de la cadena VH que no incluye la región HCDR3 (FR1-H-CDR1-FR2-H-CDR2-FR3) se produjo de manera sintética y se incorporó en un gen VH; y la porción de la 'cadena VH que incluye la región HCDR3 (H-CDR3-FR4) se derivó de pacientes humanos autoinmunes de origen natural. Hoet eligió incorporar las secuencias de HCDR3 capturadas de donantes humanos sobre la base de que no podría lograrse un grado similar de diversidad funcional de la biblioteca, y por tanto de calidad, mediante la incorporación de una región HCDR3 creada de manera sintética en una cadena VH. Esto no' fue sorprendente, dado que otros habían tomado el procedimiento de generar las así llamadas bibliotecas de HCDR3 enfocadas (ver, e.g., Solicitud de Patente Publicada de E.U. 2006/0257937A1) , en donde la diversidad se controla (limitando los análisis para segmentos V, D y J conocidos) en un esfuerzo por reducir la concentración de aglutinantes no funcionales, cuya sabiduría convencional ha enseñado que se espera sea alta en bibliotecas que pretenden incluir tanta diversidad como sea posible, haciendo así la selección de bibliotecas, más complicada de lo necesario (ver Solicitud de Patente ?937?1). En efecto, Hoet notó no solo que, en anticuerpos humanos de origen natural, la HCDR3 varía de 4 hasta más de 35 residuos y tiene una diversidad de secuencia no aleatoria, sino también que es imposible sintetizar el ADN que codifica tanto para la secuencia como para la diversidad de longitud encontradas en los repertorios de H-CDR3 naturales. Para ese fin, Hoet propone describir el uso de una biblioteca de HCDR3 mostrada en la Solicitud de Patente ,937A1 al anotar que los segmentos D de la línea germinal se han seleccionado para fomentar el doblamiento y el enlace apropiados de los miembros de la biblioteca de HCDR3, y que es deseable la inclusión de los segmentos D en una biblioteca. Un resultado práctico de una biblioteca enfocada mostrada en la Solicitud de Patente ?937?1, que es la que se construye con vista a un conjunto de datos limitado, es decir los segmentos V, D y J conocidos, es que falla en lograr una óptima diversidad o variación en cada residuo de aminoácido. En contraste con las enseñanzas de Hoet y. de la Solicitud de Patente ?937?1, la presente invención proporciona, inter alia, una colección de regiones H-CDR3 sintéticas de anticuerpo humano o humanizado que tiene una diversidad esencialmente como la encontrada en repertorios de H-CDR3 naturales, imitando la distribución natural de los aminoácidos al derivar la distribución aleatoria de los aminoácidos en la secuencia de ADN que codifica para la H-CDR3. En este sentido, la invención proporciona una biblioteca de anticuerpos que se construye de una manera que hasta ahora se consideraba imposible de construir. Sumario de la Invención La presente invención proporciona una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de rangos variables de aminoácidos, en donde la diversidad de la colección se genera diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de acuerdo con un primer factor de diversidad y diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un segundo rango de aminoácidos de acuerdo con un segundo factor de diversidad, en donde los factores de diversidad son diferentes. Un objetivo de la' presente invención es proporcionar una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados, en donde al menos una porción de las regiones H-CDR3 varia de aproximadamente 4 a aproximadamente 22 aminoácidos de longitud. Es también un objetivo de la presente invención proporcionar una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados, en donde el primer rango de aminoácidos es de aproximadamente 4 a aproximadamente 13 aminoácidos y en donde el segundo rango de aminoácidos es de aproximadamente 14 a aproximadamente 22 aminoácidos. En un aspecto, la invención proporciona una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados, en donde la diversidad de la colección se genera diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de acuerdo con un primer factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un segundo rango de aminoácidos de acuerdo con un segundo factor de diversidad, y diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un tercer rango de aminoácidos de acuerdo con un tercer factor de diversidad, en donde los factores de diversidad son diferentes. Tal colección de la presente invención puede contener diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados, en donde el primer rango de aminoácidos es de aproximadamente 4 a aproximadamente 9 aminoácidos y el segundo rango de aminoácidos es de aproximadamente 10 a aproximadamente 16 aminoácidos, en donde el tercer rango de aminoácidos es de aproximadamente 17 a aproximadamente 22 aminoácidos. En otro aspecto, la presente invención proporciona una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados, en donde la diversidad de la colección se genera diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de acuerdo con un primer factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un segundo rango de aminoácidos de acuerdo con un segundo factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un tercer rango de aminoácidos de acuerdo con un tercer factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un cuarto rango de aminoácidos de acuerdo con un cuarto factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un quinto rango de aminoácidos de acuerdo con un quinto factor de diversidad y diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un sexto rango de aminoácidos de acuerdo con un sexto factor de diversidad, en donde los factores de diversidad son diferentes. Tal colección de la presente invención puede contener diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados, en donde el primer rango de aminoácidos es de aproximadamente 4 a aproximadamente 6 aminoácidos, el segundo rango de aminoácidos es de aproximadamente 7 a aproximadamente 9 aminoácidos, el tercer rango de aminoácidos es de aproximadamente 10 a aproximadamente 12 aminoácidos, el cuarto rango de aminoácidos es de aproximadamente 13 a aproximadamente 15 aminoácidos, el quinto rango de aminoácidos es de aproximadamente 16 a aproximadamente 18 aminoácidos, en donde el sexto rango de aminoácidos es de aproximadamente 19 a aproximadamente 22 aminoácidos. Aún en otro aspecto, la presente invención proporciona una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados, en donde la diversidad de la colección se genera diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de acuerdo con un primer factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un segundo rango de aminoácidos de acuerdo con un segundo factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un tercer rango de aminoácidos de acuerdo con un tercer factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un cuarto rango de aminoácidos de acuerdo con un cuarto factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un quinto rango de aminoácidos de acuerdo con un quinto factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un sexto rango de aminoácidos de acuerdo con un sexto factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un séptimo rango de aminoácidos de acuerdo con un séptimo factor de diversidad, diversificando las re.giones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un octavo rango de aminoácidos de acuerdo con un octavo factor de diversidad, en donde los factores de diversidad son diferentes. Tal colección de la presente invención puede contener diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados, en donde el primer rango de aminoácidos es de aproximadamente 4 a aproximadamente 5 aminoácidos, el segundo, rango de aminoácidos es de aproximadamente 6 a aproximadamente 7 aminoácidos, el tercer rango de aminoácidos es de aproximadamente 8 a aproximadamente 9 aminoácidos, el cuarto rango de aminoácidos es de aproximadamente 10 a aproximadamente 11 aminoácidos, el quinto rango de aminoácidos es de aproximadamente 12 a aproximadamente 13 aminoácidos, el sexto rango de aminoácidos ¦ es de aproximadamente 14 a aproximadamente 15 aminoácidos, el séptimo rango de aminoácidos es de aproximadamente 16 a aproximadamente 17 aminoácidos, el octavo rango de aminoácidos es de aproximadamente 18 a aproximadamente 19 aminoácidos y en donde el noveno rango de aminoácidos es de aproximadamente 20 a aproximadamente 22 aminoácidos. Es también un objetivo de la presente invención proporcionar una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados, en donde el primer rango de aminoácidos es de aproximadamente 4 a aproximadamente 8 aminoácidos, y en donde el primer factor de diversidad requiere que: la alanina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 80% en la posición 1, la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 60% en la posición 2, la glicina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 40% en la posición 3, el ácido aspártico tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 50% en la posición 7 y la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 40% en la posición 8. En otro aspecto, la presente invención proporciona una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados , en donde el primer rango de aminoácidos es de aproximadamente 9 a aproximadamente 15 aminoácidos, y- en donde el primer factor de diversidad requiere que: la alanina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 90% en la posición 1, la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 70% en la posición 2, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20% en la posición 10, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20% en la posición 11, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 30% en la posición 12, la fenilalanina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 60% en la posición 13, el ácido aspártico tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 80% en la posición 14 y la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 40% en la posición 15. La presente invención proporciona una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados, en donde el primer rango de aminoácidos es de aproximadamente 16 a aproximadamente 22 aminoácidos, y en donde el primer factor de diversidad requiere que: la alanina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 90% en la posición 1, la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 60% en la posición 2, el ácido aspártico tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 30% en la posición 3, la glicina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20% en la posición 4, la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 10% en la posición 5, la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 10% en la posición 6, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20% en la posición 7, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 40% en la posición 15, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 50% en la posición 16, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 50% en la posición 17, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 60% en la posición 18, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 40% en la posición 19, la metionina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 50% en la posición 20, el ácido aspártico tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 95% en la posición 21 y la valina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 60% en la posición 22. En otro aspecto, la presente invención proporciona una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados, en donde, si la longitud del aminoácido de una región H-CDR3 de anticuerpo es de aproximadamente 9 hasta aproximadamente 15 aminoácidos, entonces la diversidad se genera mediante un alto contenido de glicina y serina dentro de la región H-CDR3. En el contexto de la presente invención, el término "alto contenido", con respecto a un aminoácido o a un grupo de los mismos, se define como una tasa de frecuencia de más de 10% de tal aminoácido o grupo de los mismos. Aún en otro aspecto, la presente invención proporciona una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados, en donde, si la longitud del aminoácido de una región H-CDR3 de anticuerpo es de aproximadamente 16 hasta aproximadamente 22 aminoácidos, entonces la diversidad se genera mediante un alto contenido de serina dentro de la región H-CDR3, un alto contenido de aminoácidos básicos en la parte final de la región H-CDR3, de ácido aspártico en la parte frontal de la HCDR3 y un alto contenido de aminoácido aromático sobre la región H-CDR3 completa . Es también un objetivo de la presente' invención proporcionar una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados, en donde, si la longitud del aminoácido de una región H-CDR3 de anticuerpos es de 5 aminoácidos, entonces la composición de aminoácidos es de 60% alanina, 20% treonina y una mezcla de 0.58% de todos los aminoácidos de origen natural, excepto cisteina en la posición 1, 30% arginina, 30% lisina, 30% treonina y una mezcla de 0.55% de todos los aminoácidos de origen natural excepto cisteina en la posición 2, 40% ácido aspártico, 40% fenilalanina y una mezcla de 0.58% de todos los aminoácidos de origen natural, excepto cisteina en la posición 3, 30% ácido aspártico, 30% glicina, 30% metionina y una mezcla de 0.63% de todos los aminoácidos de origen natural, excepto cisteina en la posición 4 y 30% tirosina, 30% ácido aspártico y una mezcla de 0.58% de todos los aminoácidos de origen natural, excepto cisteina en la posición 5. Otro objetivo de la presente invención es proporcionar una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados, en donde, si la longitud de una región H-CDR3 de anticuerpos es de 12 aminoácidos, entonces la composición de aminoácidos es de 85% alanina y 15% de una mezcla de treonina y valina en la posición 1, 70% arginina y 30% de una mezcla de serina, treonina, glicina y alanina en la posición 2, 20% de una mezcla de alanina, serina y tirosina y 0.63% de todos los aminoácidos de origen natural, excepto cisteina en la posición 9, 60% fenilalanina, 10% metionina y 0.58% de todos los aminoácidos de origen natural, excepto cisteina en la posición 10, 80% de ácido aspártico, 5% glicina y 0.58% de todos los aminoácidos de origen natural, excepto cisteina en la posición 11 y 50% tirosina, 10% de una mezcla de valina e isoleucina y 0.63% de todos los aminoácidos de origen natural, excepto cisteina en la posición 12. Es también un objetivo de la presente invención proporcionar una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados, en donde, si la longitud de una región H-CDR3 de anticuerpos es de 20 aminoácidos, entonces la composición de aminoácidos es de 100% alanina en la posición 1, 50% arginina y 50% lisina en la posición 2, 30% glicina y 0.55% de todos los aminoácidos de origen natural, excepto cisteina en la posición 3, 20% arginina, 20% glicina, 20% leucina y 0.63% de todos los aminoácidos de origen natural, excepto cisteina en la posición 4, 20% serina, 20% treonina, 20% cisteina y 0.63% de todos los aminoácidos de origen natural, excepto cisteina en la posición 14, 95% ácido aspártico en la posición 21 y 50% valina y 0.55% de todos los aminoácidos de origen natural, excepto cisteina en la posición 22. La invención también se refiere a una colección de diversas cadenas pesadas variables de anticuerpos humanos o humanizados que comprende una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de rangos variables de aminoácidos, en donde la diversidad de la colección se genera diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de acuerdo con un primer factor de diversidad y diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un segundo rango de aminoácidos de acuerdo con un segundo factor de diversidad. En otro aspecto, la invención proporciona también una colección de anticuerpos humanos o humanizados diversos o fragmentos funcionales de los mismos, que comprende una colección de cadenas pesadas variables de anticuerpos humanos o humanizados que comprende una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de rangos variables de aminoácidos de acuerdo con la presente invención . Aún en otro aspecto, la presente invención también proporciona una biblioteca de anticuerpos humanos o humanizados sintéticos que comprende una colección de anticuerpos humanos o humanizados diversos o fragmentos funcionales de los mismos que comprende una colección de cadenas pesadas variables de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la presente invención. En otra modalidad, la presente invención se refiere a un método para preparar una colección de moléculas de ácido nucleico que codifican para diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas, que comprende sintetizar una pluralidad de moléculas de ADN, en donde cada molécula de ADN codifica para una región H-CDR3, en donde las regiones H-CDR3 son de rangos variables, en donde las moléculas de ADN que codifican para las regiones H-CDR3 de un primer rango de aminoácidos, se sintetizan de acuerdo con un primer factor de diversidad y en donde las moléculas de ADN que codifican para las regiones de H-CDR3 de un segundo rango de aminoácidos, se sintetizan de acuerdo con un segundo factor de diversidad, y en donde los factores de diversidad son diferentes. La invención se refiere también a una colección de ácidos nucleicos que codifican para una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la presente invención. La invención también se refiere a una colección de ácidos nucleicos que codifican para una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de rangos variables de aminoácidos, en donde la diversidad de la colección se genera diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de acuerdo con un primer factor de diversidad y diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un segundo rango de aminoácidos de acuerdo con un segundo factor de diversidad, en donde los factores de diversidad son diferentes. Es también un objetivo de la presente invención proporcionar un método para obtener una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de longitudes variables, que comprende expresar la colección de ácidos nucleicos. En el contexto de la presente invención, debe entenderse que pueden mantenerse constantes 1 o más posiciones de aminoácidos en una región H-CDR3 de otra manera diversa. El técnico experto apreciará que para la eficiencia de la sintetización de mezclas de trinucleótidos para introducir la diversidad dentro de las regiones H-CDR3 y para la eficiencia de la clonación de las varias regiones H-CDR3 diversificadas, puede ser deseable insertar una o más posiciones constantes dentro de la región H-CDR3. Por tanto, es también un objetivo de la presente invención proporcionar una colección de diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas, en donde, si los miembros de la colección tienen una longitud de 4 a 8 aminoácidos, entonces el (los) factor (es) de diversidad que se aplica (n) a dichos miembros que tiene (n) de 4 a 8 aminoácidos, define (n) 0, 1, 2 o 3 posiciones constantes de aminoácidos dentro de las regiones H-CDR3 de dichos miembros que tienen dicha longitud. La invención se refiere también a una colección de diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas, en donde, si los miembros de la colección tienen una longitud de 9 a 10 aminoácidos, entonces el (los) factor (es) de diversidad que se aplica (n) a dichos miembros que tienen dicha longitud de 9 a 10 aminoácidos, define (n) 0, 1, 2 o 3 posiciones constantes de aminoácidos dentro de las regiones H-CDR3 de dichos - - miembros que tienen dicha longitud. La invención se refiere también a una colección de diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas, en donde, si los miembros de. la colección tienen una longitud de 11 a 13 aminoácidos, entonces el (los) factor (es) de diversidad que se aplica (n) a dichos miembros que tienen dicha longitud de 11 a 13 aminoácidos, define (n) 0, 1, 2 o 3 posiciones constantes de aminoácidos dentro de las regiones H-CDR3 de dichos miembros que tienen dicha longitud. También es un objetivo de la presente invención proporcionar una colección de diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas, en donde, si los miembros de la colección tienen una longitud de 14 aminoácidos, entonces el (los) factor (es) de diversidad que se aplica (n) a dichos miembros que tienen dicha longitud de 14 aminoácidos, define (n) 0, 1, 2, 3, 4 o 5 posiciones constantes de aminoácidos dentro de las regiones H-CDR3 de dichos miembros que tienen dicha longitud. La invención se refiere también a una colección de diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas, en donde, si los miembros de la colección tienen una longitud de 15 a 16 aminoácidos, entonces el (los) factor (es) de diversidad que se aplica (n) a dichos miembros que tienen dicha longitud de 15 a 16 aminoácidos, define (n) 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 posiciones constantes de aminoácidos dentro de las regiones H-CDR3 de dichos miembros que tienen dicha longitud.

También es un objetivo de la presente invención proporcionar una colección de diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas, en donde, si los miembros de la colección tienen una longitud de 16 a 17 aminoácidos, entonces el (los) factor (es) de diversidad que se aplica (n) a dichos miembros que tienen dicha longitud de 16 a 17 aminoácidos, define (n) 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 posiciones constantes de aminoácidos dentro de las regiones H-CDR3 de dichos miembros que tienen dicha longitud. .La invención se refiere también a una colección de diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas, en donde, si los miembros de la colección tienen una longitud de 18 aminoácidos, entonces el (los) factor (es) de diversidad que se aplica (n) a dichos miembros que tienen dicha longitud de 18 aminoácidos, define (n) 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 posiciones constantes de aminoácidos dentro de las regiones H-CDR3 de dichos miembros que tienen dicha longitud. La invención se refiere también a una colección de diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas, en donde, si los miembros de la colección tienen una longitud de 19 aminoácidos o mayor, entonces el (los) factor (es) de diversidad que se aplica (n) a dichos miembros que tienen dicha longitud de 19 aminoácidos o mayor, define (n) 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 posiciones constantes de aminoácidos dentro de las regiones H-CDR3 de dichos miembros que tienen dicha longitud . Breve Descripción de las Figuras : Figura 1: Alineación izquierda; cada etapa en la "casilla escalonada" representada en la Figura Ib, representa la secuencia -de consenso de, en promedio, 380 secuencias con una longitud de HCDR3 definida. En la alineación izquierda, se disponen diferentes longitudes introduciendo residuos de aminoácido adicionales a lo largo de la diagonal conforme al incremento de longitud de izquierda a derecha. Figura 2: Alineación derecha; cada etapa en la "casilla escalonada" representada en la Figura 2b , representa la secuencia de consenso de, en promedio, 380 secuencias con una longitud de HCDR3 definida. En la alineación derecha, se disponen diferentes longitudes introduciendo residuos de aminoácido adicionales a lo largo de la diagonal conforme al incremento de longitud de derecha a izquierda. Figura 3a + 3b + 3c: Alineación centrada (región lateral, región de espira, centrada mezclada) ; cada capa en la figura representada en la figura derecha representa la secuencia de consenso de, en promedio, 380 secuencias con una longitud de HCDR3 definida. En la alineación de la región lateral, se disponen diferentes longitudes introduciendo residuos de aminoácido adicionales alternando a lo largo de las diagonales conforme al incremento de longitud desde la mitad externa hasta el interior (desde la región lateral hacia la región de espira) . Los cuadrados en gris oscuro son ejemplos de nuevos residuos agregados . Figura 4: Ejemplo de esquemas de numeración de las regiones variables de anticuerpo. Descripción detallada de la invención : En un aspecto, la presente invención proporciona, inter alia, una colección de regiones H-CDR3 sintéticas de anticuerpo humano o humanizado que tiene una diversidad esencialmente como la encontrada en repertorios de H-CDR3 naturales, imitando la distribución natural de los aminoácidos; esto se logra desviando la distribución aleatoria de los aminoácidos en la secuencia de ADN que codifica para la H-CDR3 de acuerdo con la longitud de la región H-CDR3 particular. En lugar de utilizar solo un conjunto de datos limitado, es decir los segmentos V, D y J conocidos, las secuencias de anticuerpos humanos disponibles de bases de datos convencionalmente disponibles (e.g., Ig-BLAST) pueden analizarse y utilizarse como una base para determinar la distribución de los aminoácidos en las regiones H-CDR3. En este sentido, la invención proporciona una biblioteca de anticuerpos que se construye de una manera que hasta ahora se consideraba imposible de construir.

La presente invención proporciona también una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de longitudes variables de aminoácidos, en donde la diversidad de la colección se genera diversificando las i regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de acuerdo con un primer factor de diversidad y diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un segundo rango de aminoácidos de acuerdo con un segundo factor de diversidad. En el contexto de la presente invención, el término "factor de diversidad" se define, para cualquier rango dado de residuos de aminoácido en cada región H-CDR3, como la tasa de frecuencia en la cual aparecen los aminoácidos en una o más posiciones dadas en dicha región H-CDR3. En el contexto de la presente invención, la "tasa de frecuencia" de un aminoácido en una posición dada, se define como la probabilidad de tal aminoácido de aparecer en tal posición, en donde la frecuencia puede ser de desde 0% hasta 100% de acuerdo con las enseñanzas expuestas en la presente. En anticuerpos humanos de origen natural, las regiones H-CDR3 varían de aproximadamente 4 hasta 35 aminoácidos de longitud. Por consiguiente, la invención contempla que la longitud de los residuos de aminoácido en cada región H-CDR3 puede ser de entre 4 y 35, y preferentemente es de 4, 5, 6, 7,. 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 o 22 residuos de aminoácido de longitud, y que el rango de aminoácidos al cual se aplica un factor de diversidad particular puede variar, como se describe más completamente en la presente. Los anticuerpos y/o las regiones H-CDR3 de anticuerpos de la invención, que pueden ser humanos o humanizados, pueden utilizarse en muchos contextos, que se describen más completamente en la presente. En un aspecto, la presente invención proporciona la diversificación de regiones H-CDR3 de longitudes variables de aminoácidos de acuerdo con de dos a cuatro factores de diversidad. Por consiguiente, una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados puede generarse diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de acuerdo con un primer factor de diversidad y diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un segundo rango de aminoácidos de acuerdo con un segundo factor de diversidad. En el contexto de la presente invención, los primero y segundo factores de diversidad son diferentes. El primer rango de aminoácidos es de aproximadamente 4 a aproximadamente 13 aminoácidos y el segundo rango de aminoácidos es de aproximadamente 14 a aproximadamente 22 aminoácidos. La diversidad en una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados puede generarse aplicando: un primer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 4 a aproximadamente 9 aminoácidos, un segundo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 10 a aproximadamente 16 aminoácidos, y un tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 17 a aproximadamente 22 aminoácidos. Alternativamente, la diversidad en una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados se genera, por ejemplo, aplicando: un primer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 4.a aproximadamente 8 aminoácidos, un segundo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 9 a aproximadamente 13 aminoácidos, un tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 14 a aproximadamente 18 aminoácidos, y un cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 19 a aproximadamente 22 aminoácidos . En otro aspecto, la presente invención proporciona la diversificación de las regiones H-CDR3 de longitudes variables de aminoácidos de acuerdo con de cinco a siete factores de diversidad. La diversidad en una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados puede generarse aplicando: un primer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 4 a aproximadamente 7 aminoácidos, un segundo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 8 a aproximadamente 11 aminoácidos, un tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 12 a aproximadamente 15 aminoácidos, un cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 16 a aproximadamente 19 aminoácidos, y un quinto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 20 a aproximadamente 22 aminoácidos. La diversidad en una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados también puede generarse aplicando: un primer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 4 a aproximadamente 6 aminoácidos, un segundo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 7 a aproximadamente 9 aminoácidos, un tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 10 a aproximadamente 12 aminoácidos, un cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H- - - CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 13 a aproximadamente 15 aminoácidos, un quinto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 16 a aproximadamente 18 aminoácidos, y un sexto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 19 a aproximadamente 22 aminoácidos. La diversidad en una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados puede generarse aplicando: un primer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 4 a aproximadamente 6 aminoácidos, un segundo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 7 a aproximadamente 9 aminoácidos, un tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 10 a aproximadamente 12 aminoácidos, un cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 13 a aproximadamente 15 aminoácidos, un quinto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 16 a aproximadamente 18 aminoácidos, un sexto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 19 a aproximadamente 20 aminoácidos y un séptimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 21 a aproximadamente 22 aminoácidos. En otro aspecto, la presente invención proporciona la diversificación de las regiones H-CDR3 de longitudes variables de aminoácidos de acuerdo con de ocho a diez factores de diversidad. La diversidad en una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados puede generarse aplicando: un primer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 4 a aproximadamente 6 aminoácidos, un segundo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene · una longitud de aproximadamente ^ 7 a aproximadamente 8 aminoácidos, un tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 9 a aproximadamente 11 aminoácidos, un cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 12 a aproximadamente 14 aminoácidos, un quinto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 15 a aproximadamente 16 aminoácidos, un sexto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 17 a aproximadamente 18 aminoácidos, un séptimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 19 a aproximadamente 20 aminoácidos y un octavo , factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que ' tiene una longitud de aproximadamente 21 a aproximadamente 22 aminoácidos. Alternativamente, la diversidad en una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados puede generarse aplicando: un primer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 4 a aproximadamente 5 aminoácidos, un segundo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 6 a aproximadamente 7 aminoácidos, un tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 8 a aproximadamente 9 aminoácidos, un cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 10 a aproximadamente 11 aminoácidos, un quinto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 12 a aproximadamente 13 aminoácidos, un sexto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 14 a aproximadamente 15 aminoácidos, un séptimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 15 a aproximadamente 17 aminoácidos, un octavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 18 a aproximadamente 19 aminoácidos y un noveno factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 20 a aproximadamente 22 aminoácidos. La diversidad en una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados también puede generarse aplicando: un primer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 4 a aproximadamente 5 aminoácidos, un segundo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 6 a aproximadamente 7 aminoácidos, un tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 8 a aproximadamente 9 aminoácidos, un cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 10 a aproximadamente 11 aminoácidos, un quinto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 12 a aproximadamente 13 aminoácidos, un sexto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 14 a aproximadamente 15 aminoácidos, un séptimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 16 a aproximadamente 17 aminoácidos, un octavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente - - 18 a aproximadamente 19 aminoácidos, un noveno factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 20 a aproximadamente 21 aminoácidos y un décimo factor de diversidad . para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 22 aminoácidos. En otro aspecto, la presente invención proporciona la diversificación de las regiones H-CDR3 de longitudes variables de aminoácidos de acuerdo con de once a catorce factores de diversidad. La diversidad en una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados puede generarse aplicando: un primer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 4 a aproximadamente 5 aminoácidos, un segundo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 6 a aproximadamente 7 aminoácidos, un tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 8 aminoácidos, un cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 9 a aproximadamente 10 aminoácidos, un quinto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 11 aminoácidos, un sexto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 12 a aproximadamente 13 aminoácidos, un séptimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 14 a aproximadamente 15 aminoácidos, un octavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 16 a aproximadamente 17 aminoácidos, un noveno factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 18 a aproximadamente 19 aminoácidos, un décimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 20 aminoácidos y un onceavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 21 a aproximadamente 22 aminoácidos. La diversidad en una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados también puede generarse aplicando: un primer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 4 a aproximadamente 5 aminoácidos, un segundo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 6 aminoácidos, un tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 7 aminoácidos, un cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 8 a aproximadamente 9 aminoácidos, un quinto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 10 aminoácidos, un sexto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 11 a aproximadamente 12 aminoácidos, un séptimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 13 aminoácidos, un octavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 14 a aproximadamente 15 aminoácidos, un noveno factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 16 a aproximadamente 17 aminoácidos, un décimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 18 aminoácidos, un onceavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 19 a aproximadamente 20 aminoácidos, y un doceavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 21 a aproximadamente 22 aminoácidos. La diversidad en una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados puede generarse aplicando: un primer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 4 a aproximadamente 5 aminoácidos, un segundo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 6 aminoácidos, un tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 7 aminoácidos, un cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 8 a aproximadamente 9 aminoácidos, un quinto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 10 aminoácidos, un sexto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 11 a aproximadamente 12 aminoácidos, un séptimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 13 aminoácidos, un octavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 14 a aproximadamente 15 aminoácidos, un noveno factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 16 a aproximadamente 17 aminoácidos, un décimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 18 aminoácidos, un onceavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 19 a aproximadamente 20 aminoácidos, un doceavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 21 aminoácidos, y un décimo tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 22 aminoácidos. La diversidad en una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados alternativamente puede generarse aplicando: un primer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 4 a aproximadamente 5 aminoácidos, un segundo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 6 aminoácidos, un tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 7 aminoácidos, un cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 8 aminoácidos , un quinto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 9 aminoácidos, un sexto factor de diversidad para los. miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 10 a aproximadamente 11 aminoácidos, un séptimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 12 aminoácidos, un octavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 13 a aproximadamente 14 aminoácidos, · un noveno factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 15 a aproximadamente 16 aminoácidos, un décimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 17 aminoácidos, un onceavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 18 a aproximadamente 19 aminoácidos, un doceavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 20 aminoácidos, un décimo tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 21 aminoácidos, y un décimo cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 22 aminoácidos. Aún en otro aspecto, la presente invención proporciona la diversificación de las regiones H-CDR3 de÷ longitudes variables de aminoácidos de acuerdo con de quince a diecisiete factores de diversidad. La diversidad en una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados puede generarse aplicando: un primer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 4 a aproximadamente 5 aminoácidos, un segundo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 6 aminoácidos, un tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 7 aminoácidos, un cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 8 aminoácidos, un quinto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 9 aminoácidos, un sexto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 10 a aproximadamente 11 aminoácidos, un séptimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 12 aminoácidos, un octavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 13 aminoácidos, un noveno factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 14 a aproximadamente 15 aminoácidos, un décimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 16 aminoácidos, un onceavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 17 a aproximadamente 18 aminoácidos, un doceavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 19 aminoácidos, un décimo tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 20 aminoácidos, un décimo cuarto factor de diversidad para los - - miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 21 aminoácidos y un décimo quinto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 22 aminoácidos. La diversidad en una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados puede generarse aplicando: un primer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 4 a aproximadamente 5 aminoácidos, un segundo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 6 aminoácidos, un tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 7 aminoácidos, un cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 8 aminoácidos, un quinto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 9 aminoácidos, un sexto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 10 a aproximadamente 11 aminoácidos, un séptimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 12 aminoácidos, un octavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 13 aminoácidos, un noveno factor de diversidad para los miembros de la región H- CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 14 aminoácidos, un décimo factor de diversidad para los miembros e de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente aminoácidos, un onceavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 16 aminoácidos un doceavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 17 aminoácidos, un décimo tercer factor de diversidad para los miembros de la región H- CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 18 a aproximadamente 19 aminoácidos, un décimo cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 20 aminoácidos, un décimo quinto factor de diversidad para los miembros de la región H- CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 21 aminoácidos y un décimo sexto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 22 aminoácidos. La diversidad en una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados puede generarse aplicando: un primer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 4 aminoácidos, un segundo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 5 aminoácidos, un tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 6 a aproximadamente 7 aminoácidos, un cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 8 aminoácidos, un quinto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 9 aminoácidos, un sexto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 10 aminoácidos, un séptimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 11 aminoácidos, un octavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 12 aminoácidos, un noveno factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 13 aminoácidos, un décimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 14 aminoácidos, un onceavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 15 aminoácidos, un doceavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 16 aminoácidos, un décimo tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 17 a aproximadamente 18 aminoácidos, un décimo cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 19 aminoácidos, un décimo quinto factor de diversidad para los miembros' de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 20 aminoácidos, un décimo sexto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 21 aminoácidos y un décimo séptimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 22 aminoácidos. En otro aspecto, la presente invención proporciona la diversificación de las regiones H-CDR3 de longitudes variables de aminoácidos de acuerdo con de dieciocho a diecinueve factores de diversidad. La diversidad en una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados puede generarse aplicando: un primer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 4 aminoácidos, un segundo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 5 aminoácidos, un tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 6 aminoácidos, un cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 7 aminoácidos, un quinto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 8 aminoácidos, un sexto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 9 aminoácidos, un séptimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 10 aminoácidos, un octavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 11 aminoácidos, un noveno factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 12 aminoácidos, un décimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 13 aminoácidos, un onceavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 14 aminoácidos un doceavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 15 aminoácidos, un décimo tercer factor de diversidad para los miembros de la región H- CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 16 a aproximadamente 17 aminoácidos, un décimo cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 18 aminoácidos, un décimo quinto factor de diversidad para los miembros de la región H- CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 19 aminoácidos, un décimo sexto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 20 aminoácidos, un décimo séptimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 21 aminoácidos, y un décimo octavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 22 aminoácidos. La diversidad en una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados puede generarse también aplicando: un primer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 4 aminoácidos, un segundo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 5 aminoácidos, un tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 6 aminoácidos, un cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 7 aminoácidos, un quinto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 8 aminoácidos, un sexto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 9 aminoácidos, un séptimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 10 aminoácidos, un octavo factor de diversidad para los miembros de la región H÷CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 11 aminoácidos, un noveno factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 12 aminoácidos, un décimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 13 aminoácidos, un onceavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 14 aminoácidos, un doceavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 15 aminoácidos, un décimo tercer factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 16 aminoácidos, un décimo cuarto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 17 aminoácidos, un décimo quinto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 18 aminoácidos, un décimo sexto factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud . de aproximadamente 19 aminoácidos, un décimo séptimo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 20 aminoácidos, un décimo octavo factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 21 aminoácidos y un décimo noveno factor de diversidad para los miembros de la región H-CDR3 que tiene una longitud de aproximadamente 22 aminoácidos .

El técnico experto apreciará que el número de factores de diversidad puede totalizarse hasta el número de posiciones de aminoácidos en un miembro de la región H-CDR3 que tiene una longitud definida. Preferentemente, se utilizan hasta 19 factores de diversidad y pueden combinarse las colecciones de regiones H-CDR3 diversificadas de la invención para formar varias colecciones de regiones H-CDR3 diversificadas ya sea solas o como parte de un dominio de cadena pesada variable o de una cadena de inmunoglobulina de longitud total o sustancialmente de longitud total. Ej emplos Los siguientes ejemplos no limitantes definen más particularmente varias modalidades de la invención, especificando los parámetros para ciertos factores de diversidad que pueden aplicarse a las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un rango particular de aminoácidos (aa) . El técnico experto apreciará que se permite alguna desviación en la diversidad (frecuencia de aminoácidos) a partir de los diseños teóricos abajo mencionados, sin desviarse del alcance de la invención, dado que puede existir, por ejemplo, el deseo de implementar ciertas eficiencias de clonación en la construcción de una biblioteca en base, al menos en parte, a tales diseños teóricos . Recuperación y edición de las secuencias para la preparación de diseños de H-CDR3: Los conjuntos de datos para los análisis se obtuvieron del Ig-BLAST en el servidor NCBI. Se descargó el siguiente archivo, que contiene los registros de datos de Ig-BLAST: ftp : //ftp . ncbi-nih-gov/blast/db/FASTA/igSeqProt . gz .

En total se descargaron 40,808 registros de datos, que fueron ya sea humanos, de ratón o no asignados en la etiqueta del nombre de las entradas de datos en el formato FASTA. Al filtrar para datos con la palabra clave "humano" en la etiqueta del nombre en MS- ord, se extrajeron 22,500 entradas para anticuerpos humanos. De las 22,500 entradas para anticuerpos humanos, 13.235 se asignaron a cadenas pesadas y 5,490 a cadenas ligeras. El resto de los anticuerpos se asignaron adicionalmente a he, lc-kappa y lc-lambda, dado que no se encontraron palabras clave en' la etiqueta del nombre. Para las cadenas pesadas, se compiló una colección de H-CDR3 dependiente de la longitud utilizando diferentes hojas de trabajo para diferentes longitudes en MS-Excel. Para el análisis de H-CDR3, pudieron tomarse para análisis 8,886 de 13,235 secuencias para la cadena pesada. Diseño de H-CDR3 dependiente de la longitud: Como un ejemplo, se generaron los siguientes tres diseños separados de acuerdo con tres factores de diversidad: 4aa-7aa 8aa-14aa 15aa-23aa El contenido Y en la posición Kabat 102 muestra una disminución sobre la longitud 8aa-23aa de 50% a 5%, mientras que el contenido V en esta posición se incrementa de 12% a 65%. Adicionalmente, el contenido D en la posición 101 se incrementa de 75% a 100%. Para implementar los descubrimientos de los diferentes aa sobre la longitud, pero sin limitar el alcance de la presente invención, se decidió que se prefieren 2 diferentes factores de diversidad bajo un diseño en base al espira: uno de 8-14aa y otro de 15-23aa, mientras que el factor de diversidad que se aplica a las regiones H-CDR3 que tienen 4-7aa de longitud, puede ser de acuerdo con un diseño de la izquierda. Tipo de alineación: Para resumir un diseño de varias longitudes de aa, los siguientes tipos de alineación son alternativas representativas para el diseño de los miembros de la biblioteca que contienen 8-14aa y 15-23aa (tabla 1) : Alineación hacia la izquierda, alineación hacia la derecha y una alineación simétrica. Alineación: izquierda Alineación: derecha Alineación: simétrica Tabla 1: Tipos de alineación; las primeras tres posiciones y la última posición son posiciones de aminoácido constantes de las regiones de estructura que flanquean la región H-CDR3. Cada etapa de la "casilla escalonada" representa la secuencia de consenso de cierta longitud. Las primeras 3 posiciones representan partes de las regiones de estructura cercanas: la región CAR en las posiciones Kabat 92, 93 y 94 y la W del inicio de F 4 (WGQG) en la posición Kabat 103. Alineación izquierda (Tabla 1 + Figura 1) : Las primeras tres posiciones (posiciones Kabat 96, 97 y 98) se alinearon como bloque. Estas posiciones se encuentran en el limite entre el segmento V y el D y pueden encontrarse codificadas por V (= linea germinal) . Por tanto, estas posiciones pueden diferir en la composición del resto de la HCDR3 y se mantuvieron separadas. Las posiciones 96 y 97 difieren de otras posiciones de HCDR3, dado que aquí el contenido Y disminuye, mientras que en la posición 96, se eleva el contenido D. Las últimas cinco posiciones (posiciones Kabat 1, m, n, 101 y 102) incluyendo las secuencias de FDY dominantes, se alinearon como bloque. Las posiciones 101 y 103 se encuentran frecuentemente codificadas por el segmento J y, por tanto muestran distribuciones de aminoácidos similares. Primero, después de llenar las primeras tres y las últimas cinco posiciones con aa, la alineación a la izquierda se inició comenzando con la posición Kabat 99 y llenando sucesivamente el espacio entre la posición Kabat 99 y "1". Alineación derecha (Tabla 1 + Figura 2): Aquí, también las posiciones Kabat 96, 97 y 98 asi como las posiciones Kabat 1, m, n, 101 y 102, se alinearon como bloque, siguiendo las mismas consideraciones descritas para la alineación izquierda. Primero, después de llenar las primeras tres y las últimas cinco posiciones con aa, la alineación a la derecha se inició comenzando con la posición Kabat "1" y llenando sucesivamente el espacio entre las posiciones Kabat "1" y 99. Alineación centrada (Tabla 1 + Figura 3a, 3b, 3c) : Con referencia a los aspectos estructurales, una alineación simétrica es un tipo preferido de alineación y adicionalmente permite una rápida identificación del aa que interactúa en el espira. Aquí, se agregan nuevos aminoácidos simétricos a una cierta posición. La alineación simétrica se realizó centrada a la posición AHO 123 como se describe en "Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling an analysis tool" (Aún otro esquema de numeración para dominios variables de inmunoglobulina : un modelado automático una herramienta de análisis, A. Honegger, A. Pluckthun, J. Mol. Biol. (2001) 309, 657-670.

Son posibles dos alineaciones simétricas: Una alineación, colocando un espacio en la posición 123, cambiando las secuencias hacia la región de estructura y otra alineación cambiando las secuencias hacia la posición 123, con la posición 123 como eje simétrico, separando las secuencias en dos partes con el mismo número de aa. La primera alineación describe la distribución de aa de las regiones laterales (Figura 3a), mientras que la segunda alineación describe la punta de espira de la región H-CDR3 (Figura 3b), aunque pueden tomarse las mismas secuencias y disponerse de otra manera. Para él espira, se introducen nuevos aminoácidos simétricamente en la base del espira. En la alineación mezclada-centrada (Figura 3c), las secuencias se orientaron simétricamente a la posición AHO 123, pero combinando las alineaciones para el espira y para las regiones laterales. Un bloque de 5aa, rodeando la posición 123, se mantuvo constante, mientras que las otras secuencias se dispusieron hacia las regiones laterales. Ejemplos de sistemas de numeración que pueden utilizarse para los dominios variables de anticuerpo, se muestran en la Figura 4.

La Tabla 2 muestra el resultado de una alineación centrada (región lateral) para las regiones H-CDR3 que tienen una longitud de 4-7aa. "Todo" describe una distribución igual de todos los 19aa sin cisteina.

Tabla 2: Alineación centrada para regiones H-CDR3 con longitudes 4-7aa.

La Tabla 3 muestra el resultado de una alineación centrada (región de espira) para regiones H-CDR3 que tienen una longitud de 4-7aa. "Todo" describe una distribución igual de todos los 19aa sin cisteina. Resultado de todas las secuencias Regiones de espira, H-CDR3 , 4aa-7aa Tabla 3: Alineación centrada de regiones H-CDR3 longitudes de 4-7aa.

La Tabla 4 muestra el resultado de una alineación izquierda para regiones H-CDR3 que tienen una longitud de 4-. 7aa. "Todo" describe una distribución igual de todos los 19aa sin cisteina.

Tabla 4: Alineación izquierda de regiones H-CDR3 con longitudes de 4-7aa.

La Tabla 5 muestra el resultado de una alineación derecha para regiones H-CDR3 que tienen una longitud de 4-7aa. "Todo" describe una distribución igual de todos los 19aa sin cisteina.

Tabla 5: Alineación derecha de regiones H-CDR3 con longitude de 4-7aa.

La Tabla 6 muestra el resultado de una alineación centrada (región lateral) para regiones H-CDR3 que tienen una longitud de 8-14aa. "Todo" describe una distribución ig al de todos los 19aa sin cisteina. La Tabla 7 muestra el resultado de una alineación centrada (región de espira) para regiones H-CDR3 que tienen una longitud de 8-14aa. "Todo" describe una distribución igual de todos los 19aa sin cisteina. La Tabla 8 muestra el resultado de una alineación centrada (mezclada-centrada) para regiones H-CDR3 que tienen una longitud de 8-14aa. "Todo" describe una distribución igual de todos los 19aa sin cisteina. La Tabla 9 muestra el resultado de una alineación izquierda para regiones H-CDR3 que tienen una longitud de 8-14aa. "Todo" describe una distribución igual de todos los 19aa sin cisteina. La Tabla 10 muestra el resultado de una alineación derecha para regiones H-CDR3 que tienen una longitud de 8-14aa. "Todo" describe una distribución igual de todos los 19aa sin cisteina. La Tabla 11 muestra el resultado de una alineación centrada (región lateral) para regiones H-CDR3 que tienen una longitud de 15-23aa. "Todo" describe una distribución igual de todos los 19aa sin cisteina. La Tabla 12 muestra el resultado de una alineación centrada (región de espira) para regiones H-CDR3 que tienen una longitud de 15-23aa. "Todo" describe una distribución igual de todos los 19aa sin cisteina. La Tabla 13 muestra el resultado de una alineación centrada (mezclada-centrada) para regiones H-CDR3 que tienen una longitud de 15-23aa. "Todo" describe una distribución igual de todos los 19aa sin cisteina. La Tabla 14 muestra el resultado de una alineación izquierda para regiones H-CDR3 que tienen una longitud de 15-23aa. "Todo" describe una distribución igual de todos los 19aa sin cisteina. La Tabla 15 muestra el resultado de una alineación derecha para regiones H-CDR3 que tienen una longitud de 15-23aa. "Todo" describe una distribución igual de todos los 19aa sin cisteina. posición 95 96 97 98 99 100 a b c d m n 101 102 Kabat posición 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 137 138 AHO Nombre TRIM1 TRIM2 TRI 3 TRIM4 TRIM5 TRIM6 Fluctrim7 tuación Diseño 20%DG 10%G 15%GYS 20%Y 20%YA 50%F 80%D 45%Y 8%VEAS 10% 5%DRP 15%G 15%G 10%ML 20%A 15%VI 1.5%todo RSLP VALIT 10%S 10%W 1.6% 10%P 2.6%todo 0.8%todo 2.9% 5%P todo 3% todo 2.6% FHLNS todo 22%D 14%G 17%G 17%G 18%G 17%G 16%G 15%G 17%Y 20%Y 21 %Y 59%F 86%D 45%Y 19%G 12%R 12%S 13%S 15%S 15%S 15%S 14%Y 13%G 16%G 19%A 11%M 2%A 16%l 9%E 9%S 8%Y 9%Y 10%Y 10%Y 12%Y 12%S 11%S 11%D 15%G 10%L 2%E 13%V 7%V 8%L 7%R 7%A 7%A 8%A 8%T 7%T 6%A 8%S 7%W 3%l 2%G 8%P 6%A 8%P 6%A 7%D 7%T 7%T 6%A 6%A 6%L 7%N 6%P 3%Y 1 %H 4%L 6%R 6%T 6%V 6%T 6%V 6%D 6%V 6%V 6%T 5%T 6%S 2%G 1 %L 3%F 6%S 5%A 5%D 6%V 5%D 5%L 5%D 5%L 5%D 5%W 3%D 2%P 1 %N 3%H (0 4%L 5%V 5%L 5%L 4%L 5%R 5%W 5%R 5%R 4%A 3%H 2%S 1%P 3%S CZ (Q 3%H 5%Y 5%P 5%R 4%R 5%V 4%L 4%D 4%N 4%R 3%L 2%V 1 %Q 1 %D p 3%T 4%D 5%T 4%P 3%E 4%P 4%R 4%N 4%P 3%L 3%R 1%A 1%S 1%N c -o 2%l 4%l 4%l 4%W 3%l 4%W 3%F 4%P 4%V 3%P 3%T 1%H 0%C 0%A '? 2%N 3%E 4%W 3%E 3%N 3%N 3%N 4%W 4%W 2%E 2%E 1%T 0%F 0%C -O 2%P 3%F 3%E 3%F 3%W 2%E 3%P 2%C 3%F 2%F 2%F 1%W 0%l 0%E 2%Q 3%N 3%N 3%l 2%F 2%F 2%E 2%E 2%E 2%H 2%N 0%C 0%K 0%G ?3 1%C 3%Q 2%F 3%N 2%P 2%l 2%H 2%F 2%H 2%V 2%V 0%D 0%M 0%K 1%F 2%H 2%H 2%H 1%C 1%H 2%l 2%H 2%l 1%C 1%C 0%E 0%R 0%M 1%K 2%K 2%Q 2%Q 1%H 1%K 1%C 2%l 2%Q 1%l 1%l 0%K 0%T 0%Q 1%M 2%W 1 %C 1%C 1%K 1% 1%K 2%Q 1%C 1 %K 1%Q 0%N 0%V 0%R 1%W 1%C 1 %K 1%K 1%M 0%C 1%M 1%K 1%K 1%Q 0%K 0%Q 0%W 0%T 1%Y 1%M 1% 1%M 1%Q 0%Q 1%Q 1%M 1%M 0%M 0%M 0%R 0%Y 0%W Tabla 6: Alineación centrada de las regiones H-CDR3 con longitudes de 8-14 aa . posición 95 96 97 98 99 100 a b c d m n 101 102 Kabat posición 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 137 138 AHO Nombre TRIM1 TRI 2 TRI 3 TRIM4 TRIM5 TRIM5 TRIM5 TRIM5 TRI 5 Diseño 20%DG 20%GD 15%GS 15%GYS 20%Y 15%DYF 35%D 40%D 45%Y 9%AEVS 10%REV 5%DRV 7.5% 15%G 10%AG 25%F 25%Y 15%VI 0.7% 5%SALP 5% DRALTV 10%D 5%WLP 15% Y 10%IV 10%P 0.5% ALPEITY 0.5% 7.5%ASN 1.1% 5%IML 5%PLF 3% todo 0.26% todo 1.3% todo 0.52% 0.52% FHLNS todo todo todo 25%D 19%G 15%G 17%G 16%G 19%G 18%G 16%G 18%Y 17%Y 22%D 33%D 43%D 39%Y 16%G 18%D 10%D 10%S 13%S 14%S 15%S 14%Y 13%G 16%F 22%F 23%F 24%Y 17%V 9%A 9%R 10%R 9%D 9%Y 8%Y 11%Y 12%S 9%A 11%G 13%Y 14%Y 7%l 16%l 9%E 7%E 8%S 8%R 7%R 7%A 8%A 7%A 8%S 10%D 7%A 6%l 7%V 9%P 6%V 7%V 7%V 7%Y 6%A 7%T 6%D 6%D 7%D 8%A 7%G 5%M 5%P 5%L ra 5%R 6%S 6%A 6%A 6%D 6%D 6%T 6%T 6%F 5%W 4%L 4%L 3%L 3%H 4%H 5%A 6%L 6%L 6%L 5%L 6%V 5%L 5%L 4%L 4%M 3%V 2%F 3%S ra 4%L 5%L 6%P 6%T 6%T 5%V 5%L 5%R 5%T 4%P 3%P 2%P 2%H 2%F ra 4%S 4%P 5%E 6%V 6%V 4%R 5%R 4%N 5%W 4%S 3%W 2%S 2%S 1%D ra 10 3%P 4%T 4%l 5%P 4%l 4%W 4%W 4%V 4%N 3%N 2%H 1%A 1%E 1%N c •o 3%T 3%H 4%T 4%E 4%P 3%E 3%F 4%W 4%P 3%T 2%l 1%E 1%G 0%A o 2%l 3%l 4%Y 3%l 3%E 3%l 3%N 3%P 3%R 2%E 2%S 1%G 1 %N 0%C 2%M 2%F 3%Q 2%F 3%F 3%N 3%P 2%E 3%V 2%H 2%V 1%H 1%Q 0%E 2%N 2%N 2%F 2%H 3%N 3%P 2%E 2%F 2%E 2%l 1%E 1%N 0%A 0%G ¾ 1%C 2%Q 2%H 2%K 3%W 2%F 2%H 2%l 2%H 2%M 1%N 0%C 0%C 0%K 1%F 2%Y 2%K 2%N 2%H 2%Q 2%l 2%Q 2%l 2%R 1 %R 0%K 0%K 0%M 1%K 1%C 2%N 2%Q 2%Q 1%H 1%C 1%C 1%C 2%V 1 %T 0%Q 0%M 0%Q 1%Q 1%K 2%W 2%W 1%C 1%K 1%K 1%H 1%K 1%C 0%C 0%R 0%R 0%R 1%W 1%M 1%C 1%C 1%K 1%M 1%M 1%K 1%M 1%Q 0%K 0%T 0%T 0%T 1%Y 1%W 1% 1%M 1%M 0%C 1%Q 1%M 1%Q 0%K 0%Q 0%W 0% 0%W Tabla 7: Alineación centrada de las regiones H-CDR3 con longitudes de 8-14 aa . posición 95 96 97 98 99 100 a b c d m n 101 102 Kabat posición 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 137 138 AHO Nombre TRIM1 TRIM2 TRI 3 TRIM4 TRIM3 TRIM4 TRIM5 TRIM6 TRIM7 TRIM8 TRIM9 Diseño 20%DG 10%G 15% 15% 20%Y 20%YA 50%F 80%D 45%Y 8% 10% GYS GSY 15%G 15%G 10% 20%A 15%VI VEAS RSLP 10%AR 7.5% 10%D 10%W ML 10%P 1.5% 2.6% 5%DP DAPVT 7.5% 5%P 1.6% 3% todo todo VLIT 0.9% ASN 2.6% todo FHLNS 0.8% todo 1.3% todo todo todo 22%D 14%G 16%G 14%G 16%G 19%G 18%G 16%G 18%Y 25%Y 23%Y 60%F 86%D 45%Y 19%G 13%R 11 %S 13%S 13%S 14%S 15%S 14%Y 13%G 14%G 18%A 1%M 2%A 16%l 9%E 9%S 8%R 9%D 9%Y 8%Y 11%Y 12%S 9%A 12%D 15%G 9%L 2%E 13%V 7%V 8%L 8%Y 9%Y 7%R 7%A 8%A 7%A 8%S 7%N 8%W 3%l 2%G 8%P 6%A 8%P 7%V 8%A 6%A 7%T 6%D 6%D 7%D 6%S 6%P 3%Y 1%H 4%L 6%R 6%T 6%A 6%P 6%D 6%D 6%T 6%T 6%F 5%W 4%S 2%G 1%L 3%F i_ -3 6%S 5%A 6%D 6%V 6%L 5%L 6%V 5%L 5%L 4%R 3%H 2%P 1%N 3%H CD 4%L 5%V 5%L 5%L 6%T 5%V 5%L 5%R 5%T 4%T 3%T 2%S 1%P 3%S £_ CU 3%H 5%Y 5%P 5%T 6%V 4%R 5%R 4%N 5%W 3%L 2%D 2%V 1%Q 1%D (0 3%T 4%D 5%T 4%E 4%l 4%W 4%W 4%V 4%N 3%P 2%E 1%A 1 %S 1%N c •o 2%l 4%l 4%l 4%l 4%P 3%E 3%F 4%W 4%P 2%A 2%F 1%T 0%C 0%A ? 2%N 3%E 3%E 4%R 3%E 3%l 3%N 3%P 3%R 2%C 2%L 1%W 0%F 0%C 2%P 3%K 3%F 3%K 3%F 3%N 3%P 2%E 3%V 2%E 2%N 0%C 0%l 0%E ( ) 2%Q 3%Q 3%W 2%C 3%N 3%P 2%E 2%F 2%E 2%F 2%R 0%D 0%K 0%G Í-1 1 %C 2%F 2%C 2%F 3%W 2%F 2%H 2%l 2%H 2%H 2%V 0%E 0%M 0%K 1%F 2%H 2%H 2%N 2%H 2%Q 2%l 2%Q 2%l 2%l 1%C 0%H 0%R 0%M 1%K 2%N 2%N 2%W 2%Q 1%H 1%C 1%C 1%C 2%Q 1%l 0%K 0%T 0%Q 1 %M 2%W 2%Q 1%H 1%C 1%K 1%K 1%H 1%K 2%V 0%K 0%N 0%V 0%R 1%W 1 %C 1%K 1%M 1%K 1%M 1%M 1%K 1%M 1%K 0% 0%Q 0%W 0%T 1%Y 1%M 1% 1%Q 1%M 0%C 1%Q 1% 1%Q 0%M 0%Q 0%R 0%Y 0%W Tabla 8: Alineación centrada de las regiones H-CDR3 con longitudes de 8-14 aa . posición 95 96 97 98 99 100 a b c d m n 101 102 abat posición 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 137 138 AHO. Nombre TRIM1 TRIM2 TRI 3 TRIM4 TRIM5 TRIM6 FlucTRIM7 tuación Diseño 20%DG 10%G 15% 20%Y 20%YA 50%F 80%D 45%Y 8% 10% GYS 15%G 15%G 10% 20%A 15%VI VEAS RSLP 5%DRP 10%S 10%W ML 10%P 1.5% 2.6% VALIT 2.9% 5%P 1.6% 3% todo todo 0.8% todo 2.6% todo FHLNS todo todo 22%D 14%G 17%G 17%G 18%G 17%G 14%G 17%Y 22%Y 20%Y 21 %Y 59%F 86%D 45%Y 19%G 12%R 12%S 13%S 15%S 14%S 3%S 13%G 13%G 17%G 19%A 11 %M 2%A 16%l 9%E 9%S 8%Y 9%Y 10%Y 11%Y 13%Y 12%S 10%S 11%D 15%G 10%L 2%E 13%V 7%V 8%L 7%R 7%A 7%A 7%A 8%T 6%A 6%A 8%S 7%W 3%l 2%G 8%P 6%A 8%P 6%A 7%D 7%T 7%T 6%A 6%T 6%L 7%N 6%P 3%Y 1%H 4%L 6%R 6%T 6%V 6%T 6%V 6%D 6%L 5%L 5%P 5%W 6%S 2%G 1%L 3%F 6%S 5%A 5%D 6%V 5%D 6%L 6%V 4%D 5%T 4%A 3%D 2%P 1%N 3%H 4%L 5%V 5%L 5%L 4%L 5%V 5%D 4%N 4%D 4%R 3%H 2%S 1 %P 3%S 3%H 5%Y 5%P 5%R 4%R 4%P 5%R 4%P 4%R 4%T 3%L 2%V 1 %Q 1%D re 3%T 4%D 5%T 4%P 3%E 4%R 4%P 4%R 4%V 3%L 3%R 1%A 1%S 1%N c -o 2%l 4%l 4%l 3%E 3%l 4%W 4%W 4%V 4%W 2%E 3%T 1 %H 0%C 0%A o 2%N 3%E 4%W 3%F 3%N 3%N 3%F 4%W 3%F 2%F 2%E 1%T 0%F 0%C ja 2%P 3%F 3%E 3%l 3%W 2%E 3%N 3%F 3%l 2%H 2%F 1%W 0%l 0%E 2%Q 3%N 3%N 3%N 2%F 2%F 2%E 2%C 3%N 2%P 2%N 0%C 0%K 0%G 1%C 3%Q 2%F 3%W 2%P 2%l 2%l 2%E 2%E 2%V 2%V 0%D 0%M 0%K 1%F 2%H 2%H 2%H 1 %C 1%H 2%Q 2%H 2%H 1%C 1%C 0%E 0%R 0%M 1%K 2%K 2%Q 2%Q 1%H 1%K 1%C 2%l 1%C 1%l 1%l 0%K 0%T 0%Q 1%M 2%W 1%C 1%C 1%K 1 %M 1%H 2%K 1%K 1%K 1%Q 0%N 0%V 0%R 1%W 1%C 1%K 1%K 1%M 1 %Q 1%K 2%Q 1%M 1%Q 0%K 0%Q 0%W 0%T 1%Y 1% 1%M 1%M 1%Q 0%C 1%M 1%M 1%Q 0% 0%M 0%R 0%Y 0%W Tabla 9: Alineación izquierda de las regiones H-CDR3 con longitudes de 8-14 aa . posición 95 96 97 98 99 100 a b c d m n 101 102 Kabat posición 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 137 138 AHO Nombre TRI 1 TRIM2 TRIM3 TRIM4 TRIM5 TRIM6 FlucTRIM7 tuación Diseño 20%DG 10%G 15% 15%GS 20%YA 50%F 80%D 45%Y 8% 10% GYS 7.5% 15%G 10% 20%A 15%VI VEAS RSLP 5%DRP DATRV 10%W ML 10%P 1.5% 2.6% VAL IT 1.7% 5%P 1.6% 3% todo todo 0.8% todo 2.6% todo FHLNS todo todo 22%D 14%G 16%G 14%G 16%G 15%G 19%G 17%G 15%G 20%Y 21 %Y 59%F 86%D 45%Y 19%G 12%R 11%S 11%S 13%S 15%S 14%S 14%S 15%Y 17%G 19%A 11%M 2%A 16%l 9%E 9%S 9%R 9%Y 11%Y 8%Y 10%Y 11 %Y 12%S 11%D 15%G 10%L 2%E 13%V 7%V 8%L 7%V 7%D 7%A 7%A 7%A 7%A 7%A 8%S 7%W 3%l 2%G 8%P 6%A 8%P 7%Y 6%A 6%R 7%D 6%T 7%T 6%L 7%N 6%P 3%Y 1%H 4%L "(Ó 6%R 6%T 6%A 6%L 6%T 7%T 6%V 6%V 6%T 5%W 6%S 2%G 1%L 3%F 6%S 5%A 6%D 6%P 6%V 6%V 5%D 5%D 5%D 4%A 3%D 2%P 1%N 3%H «5 4%L 5%V 6%P 6%R 5%D 5%L 5%L 5%R 5%R 4%R 3%H 2%S 1%P 3%S cz (0 3%H 5%Y 5%L 6%T 5%L 5%R 4%R 4%L 5%V 4%T 3%L 2%V 1%Q 1%D (0 3%T 4%D 5%T 6%V 4%l 4%W 4%W 4%P 4%N 3%L 3%R 1%A 1%S 1 %N c •o 2%l 4%l 4%E 4%E 4%P 3%E 3%F 4%W 4%P 2%E 3%T 1 %H 0%C 0%A o ^ 2%N 3%E 4%l 4%l 3%F 3%l 3%l 3%N 4%W 2%F 2%E 1%T 0%F 0%C .a 2%P 3%F 3%F 3%W 2%C 3%N 3%N 2%E 3%F 2%H 2%F 1%W 0%l 0%E '_. co 2%Q 3%N 2%C 2%C 2%E 3%P 3%P 2%F 2%E 2%P 2%N 0%C 0%K 0%G TD 1%C 3%Q 2%H 2%F 2%H 2%F 2%E 2%l 2%H 2%V 2%V 0%D 0%M 0%K 1%F 2%H 2%M 2%H 2%N 2%Q 2%H 1%C 2%l 1%C 1%C 0%E 0%R 0%M 1%K 2%K 2%N 2%K 2%Q 1%H 1%C 1%H 2%Q 1%l 1%l 0%K 0%T 0%Q 1%M 2%W 2%W 2%N 2%W 1%K 1%K 1%K 1%C 1%K 1%Q 0%N 0%V 0%R 1%W 1 %C 1 %K 2%Q 1%K 1%M 1%M 1%M 1%K 1%Q 0%K 0%Q 0%W 0%T 1 %Y 1%M 1 %Q 1%M 1% 0%C 1%Q 1%Q 1%M 0%M 0%M 0%R 0%Y 0%W Tabla 10: Alineación derecha de las regiones H-CDR3 con longitudes de 8-14 aa .

Tabla 11: Alineación centrada de las regiones H-CDR3 con longitudes de 15-23 aa . 10 Tabla 12: Alineación centrada de las regiones H-CDR3 con longitudes de 15-23 aa .

Tabla 13: Alineación centrada de las regiones H-CDR3 con longitudes de 15-23 aa .

Tabla 14: Alineación izquierda de las regiones H-CDR3 con longitudes 15-23 aa.

Tabla 15: Alineación derecha de las regiones H-CDR3 con longitudes de 15-23 aa .

En otro ejemplo no limitante, la presente invención proporciona una colección de diversas regiones H-CDR3 de longitud variable, en donde la diversidad de las regiones H-CQR3 puede generarse diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de aproximadamente 4 a aproximadamente 8 aminoácidos, de acuerdo con un primer factor de diversidad; en donde el primer factor de diversidad requiere que: la alanina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 80% en la posición 1, la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 60% en la posición 2, la glicina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 40% en la posición 3, el ácido aspártico tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 50% en la posición 7 y la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 40% en la posición 8 (Tabla 16) .

Posición aa de HCDR3 1 2 3 4 5 6 7 8 A80 R60 G40 19 c/s C 19 c/s C 19 c/s C D50 Y40 T10 18 c/s Cys 18 c/s Cys G10 V20 17 c/s Cys A10 17 c/s Cys 16 c/s C Tabla 16: la tabla muestra un ejemplo para un factor de diversidad para diversificar regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de aproximadamente 4 a aproximadamente 8 aminoácidos. En otro ejemplo no limitante, la ^presente invención proporciona una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de longitudes variables, en donde la diversidad de las regiones H-CDR3 puede generarse diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de aproximadamente 9 a aproximadamente 15 aminoácidos, de acuerdo con un primer factor de diversidad, en donde el primer factor de diversidad requiere que: la alanina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 90% en la posición 1, la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 70% en la posición 2, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20% en la posición 10, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20% en la posición 11, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 30% en la posición 12, la fenilalanina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 60% en la posición 13, el ácido aspártico tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 80% en la posición 14 y la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 40% en la posición 15. Preferentemente, la diversidad de una región H-CDR3 humana o humanizada que tiene una longitud de aminoácidos de aproximadamente 9 a aproximadamente 15 aminoácidos, se genera mediante un alto contenido de glicina y serina dentro de la región H-CDR3 (tabla 17) Posición aa de HCDR3 A90 R70 G20 R15 G20 G20 G20 G20 G20 Y20 Y20 Y20 F60 D SC Y40 Tt5 K20 O20 G15 S16 S10 S10 S10 S10 G10 G20 G20 G10 )3c/s C V20 VS 1/C/s C 1/C/s C 17C/S C 17c/sC V10 V10 V10 Y10 S10 S10 A10 17c/sC P10 76c/s C 76c/sC 76c/s C 76c/sC 76c/s C 76c¾ C 76c/s C 76c/s C Tabla 17: la tabla muestra un ejemplo para un factor de diversidad para diversificar regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de aproximadamente 9 a aproximadamente 16 aminoácidos. Aún en otra modalidad no limitante, la presente invención proporciona una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de longitudes variables, en donde la diversidad de las regiones H-CDR3 puede generarse diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud de aproximadamente 16 a aproximadamente 22 aminoácidos, de acuerdo con un primer factor de diversidad, en donde el primer factor de diversidad requiere que: la alanina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 90% en la posición 1, la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 60% en la posición 2, el ácido aspártico tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 30% en la posición 3, la glicina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20% en la posición 4, la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 10% en la posición 5, la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 10% en la posición 6, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20% en la posición 7, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 40% en la posición 15, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 50% en la posición 16, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 50% en la posición 17, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 60% en la posición 18, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 40% en la posición 19, la metionina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 50% en la posición 20, el ácido aspártico tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 95% en la posición 21 y la valina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 60% en la posición 22 (tabla 18) .

Posición M de 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 HCDR3 A90 R60 D30 G20 RIO RIO Y20 S20 RIO G20 S20 S20 T5 K20 G20 PIO PIO Y10 G10 G10 DIO DIO G10 Y10 V5 T20 17 c/s C RIO G10 G10 PIO 110 G10 17 c/s C V20 G10 FIO FIO 110 MIO Y10 VIO 16 c/s C VIO 15 c/s C 15 c/s C 15 c/s C 15 c/s C 15 c/s C 15 c/s C 15c/s C 14 15 16 17 18 19 20 21 22 Y20 Y40 Y50 Y50 Y60 Y40 M50 D95 V60 IO G10 G10 18 c/s C 18 c/s C G40 F40 Q5 16 c/s C 17 C/S C 17 C/S C 17 c s C 17 C/S C 17 C/S C 16 c/s C Tabla 18: la tabla muestra un ejemplo para un factor de diversidad para diversificar regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de aproximadamente 16 a aproximadamente 22 aminoácidos. Además, la diversidad de una colección de regiones H-CDR3 humanas o humanizadas que tienen una longitud de aminoácidos de aproximadamente 16 a aproximadamente 22 aminoácidos puede generarse mediante un alto contenido de serina dentro de la región H-CDR3, un alto contenido de aminoácidos básicos en la parte final (terminal C) de la región H-CDR3, de ácido aspártico en la parte frontal (terminal N) de la región HCDR3 y un alto contenido de aminoácido aromático sobre la región H-CDR3 completa. En el contexto de la presente invención, se entiende que en cualquier posición de aminoácido dada en una región H-CDR3., la presencia de los aminoácidos no especificados con una tasa de frecuencia definida en una posición definida de aminoácido, puede ocurrir en proporciones sustancialmente iguales vis-a-vis entre si, o que algunos aminoácidos pueden tener una mayor tasa de frecuencia en comparación con otros aminoácidos en tal posición y, en algunos casos, que ciertos aminoácidos pueden omitirse en una o más posiciones de aminoácido definidas (e . g . , cisteina ) . En el contexto' de la presente invención, el diseño de las diversas regiones H-CDR3 puede efectuarse imitando la distribución natural conocida de los aminoácidos desviando la distribución aleatoria completa de los aminoácidos en la secuencia de ADN que codifica para H-CDR3. La generación de diversas regiones H-CDR3 puede efectuarse utilizando la tecnología de mutagénesis de trinucleótidos (TRIM) (Virnekas et al., 1994), que permite sintetizar cualquier mezcla deseada de aminoácidos a voluntad en cada posición individual, introduciendo así una desviación de aminoácido en cualquier posición. Generalmente, la tecnología TRIM se basa en el uso de trinucleótidos preensamblados como se introducen para la síntesis de ADN estándar, evitando así, desplazamientos de estructura, codones de paro o aminoácidos indeseables y produce una enorme diversidad de secuencia. En consecuencia, se requieren tamaños de bibliotecas muy grandes para generar un espacio de secuencia funcional suficientemente amplio. Correspondientemente, el conocimiento de la composición de aminoácidos dependiente de la longitud en combinación con la tecnología TRIM, debe permitir un diseño de una colección de regiones H-CDR3 mucho más pequeña con un contenido funcional mucho más alto. En otro aspecto, la presente invención proporciona una colección de diversas cadenas pesadas variables de anticuerpos humanos o humanizados, que comprende una colección de diversas regiones H-CDR3, en donde la diversidad de cada región H-CDR3 se genera diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de acuerdo con un primer factor de diversidad y diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un segundo rango de aminoácidos mediante un segundo factor de diversidad, en donde cada factor de diversidad es una función de la longitud de aminoácidos de cada región H-CDR3. Además, la invención proporciona una colección de diversos anticuerpos humanos o humanizados o fragmentos funcionales de los mismos, de los cuales cada uno contiene una cadena pesada variable de anticuerpo humano o humanizado de acuerdo con la invención. En el contexto de la presente invención, se entenderá que para la generación de una colección de diversos anticuerpos humanos o humanizados o fragmentos funcionales de los mismos, el técnico experto será capaz de modificar el diseño teórico de una colección de diversas regiones H-CDR3. El técnico experto apreciará que puede ser aceptable modificar el diseño con respecto a los aminoácidos que se presentan a baja tasa de frecuencia (e.g., aa de una frecuencia por debajo de 5% o preferentemente por debajo de 3%), agregando aquellos aminoácidos que aparecen por debajo de tal tasa de frecuencia en concentraciones equimolares vis-a-vis entre si, por ejemplo; por tanto, las colecciones de diversos anticuerpos humanos o humanizados o fragmentos funcionales de los mismos pueden generarse incluyendo mezclas de tales aminoácidos en tales concentraciones .

En otro aspecto, la presente invención proporciona una biblioteca sintética de anticuerpos humanos o humanizados que comprende una colección de diversos anticuerpos humanos o humanizados o fragmentos funcionales de los mismos. las secuencias de consenso sintéticas pueden cubrir el repertorio estructural de los anticuerpos codificados en el genoma humano. Una biblioteca sintética de anticuerpos humanos o humanizados puede basarse en anticuerpos o fragmentos de anticuerpo, preferentemente Fv, Fv enlazado a disulfuro, Fv monocatenario (scFv) o fragmentos Fab, que pueden utilizarse como fuentes de especificidades contra nuevos antigenos obj etivo . En el contexto de la presente invención, una biblioteca sintética de anticuerpos humanos o humanizados puede basarse en las secuencias de aminoácidos que se han diseñado in silico y codificadas por los ácidos nucleicos que se crean sintéticamente. El diseño en sílice de la secuencia de anticuerpo se logra, por ejemplo, analizando la base de datos de las secuencias humanas y diseñando una secuencia de polipéptido utilizando los datos obtenidos de la misma. Al analizar las secuencias conocidas de aminoácidos de línea germinal de dominios variables de inmunoglobulina humana, los genes del anticuerpo se agrupan en sub-familias de acuerdo con la homología de secuencia y las estructuras canónicas (Chothia et al., 1992; Tomlinson et al., 1995). Debido a la alta homología, en términos de secuencia de aminoácidos y estructuras canónicas, dentro de una sub-familia, las secuencias de consenso 7 VH y 7 VL (genes maestros) pueden diseñarse y combinarse para producir 49 combinaciones maestras de estructura (Knappik et al., 2000). Los genes maestros podrían sintetizarse químicamente generando así una estructura del gen completamente modular introduciendo sitios de restricción únicos que. flanquean todos los módulos funcionales . Los métodos para diseñar y obtener secuencias creadas in silico se describen, por ejemplo, en Knappik et al., J. Mol. Biol. (2000) 296:57; Krebs et al., J. Immunol . Methods (2001) 254:67; y la Patente de E.U. No. 6,300,064 expedida para Knappik et al., que se incorporan en la presente mediante la referencia en su totalidad. En otro aspecto, la presente invención proporciona métodos para preparar una colección de moléculas de ácido nucleico que codifican para diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas. Esto puede realizarse, por ejemplo, sintetizando una pluralidad de moléculas de ADN, en donde cada una codifica para una región H-CDR3, y en donde las regiones H-CDR3 son de rangos variables. Para este fin, las moléculas de ADN que codifican las regiones H-CDR3 de un primer rango de aminoácidos, se sintetizan de acuerdo con un primer factor de diversidad y las moléculas de ADN que codifican para las regiones H-CDR3 de un segundo rango de aminoácidos, se sintetizan de acuerdo con un segundo factor de diversidad, siendo diferentes los factores de diversidad. En un aspecto, la presente invención proporciona una colección de ácido nucleicos que codifican para una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de rangos variables de aminoácidos, en donde la diversidad de la colección se genera diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de acuerdo con un primer factor de diversidad y diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un segundo rango de aminoácidos de acuerdo con un segundo factor de diversidad, en donde los factores de diversidad son diferentes. También se proporcionan dentro de la invención métodos para obtener una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados. Esto puede lograrse expresando la colección de ácidos nucleicos que codifica una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la presente invención . En un aspecto, la presente invención proporciona métodos para identificar uno o más genes que codifican para una o más de las regiones H-CDR3 de la invención, que se enlazan a un objetivo dado. Esto se logra, e.g., expresando las regiones H-CDR3 y después seleccionándolas para aislar una o más de las regiones H-CDR3 que se enlazan a una molécula objetivo dada. Una región H-CDR3 puede comprenderse dentro de una cadena pesada variable de anticuerpo. La selección puede efectuarse utilizando uno de los métodos muy conocidos por el practicante en la técnica, tal como despliegue de fago o CysDisplay (descritos e.g., en la Patente de E.U. No. 6,753,136). En el contexto de la presente invención, una biblioteca de anticuerpos humanos o humanizados puede basarse en la combinación de fragmentos de gen de donantes humanos con el ADN sintético diseñado. Como un ejemplo, los fragmentos de fuente de donante humano que codifican para la región variable de cadena ligera y un rango de la región de cadena pesada, se combinan con ADN sintético que codifica para secuencias de anticuerpos humanos con la diversidad introducida en sitios específicos. La invención proporciona también anticuerpos mutados u optimizados (o fragmentos de los mismos) derivados de un anticuerpo o un fragmento del mismo, como se describe en la presente. Un anticuerpo se compone de dos cadenas de péptido, conteniendo cada una uno (de cadena ligera) o tres (de cadena pesada) dominios constantes y una región variable (VL, VH) , de los cuales, los últimos se componen cada uno de hasta cuatro regiones FR y tres CDRs interespaciadas . El sitio de enlace a antigeno se forma por una o más CDRs, sin embargo, las regiones FR proporcionan la estructura estructural para las CDRs y también pueden jugar un importante papel en el enlace a antigeno. Alterando uno o más de los residuos de aminoácido en una región CDR o FR, el técnico experto rutinariamente puede generar secuencias de anticuerpos mutadas o diversificadas, que pueden examinarse contra el antigeno, por ejemplo, por propiedades nuevas o mej oradas . También, como se utiliza en la presente, una "inmunoglobulina" (Ig) se define en la presente como una proteina que pertenece a la clase IgG, IgM, IgE, IgA o IgD (o cualquier sub-clase de la misma) , e incluye todos los anticuerpos convencionalmente conocidos y fragmentos funcionales de los mismos. Un "fragmento funcional" de un anticuerpo/inmunoglobulina en la presente, se define como un fragmento de un anticuerpo/inmunoglobulina (e.g., una región variable de una IgG) que retiene la región de enlace a antigeno. Una "región de enlace a antigeno" de un anticuerpo se encuentra típicamente en una o más de las regiones hipervariables de un anticuerpo, i.e., las regiones CDR-1, 2 y/o 3; sin embargo, las regiones de "estructura" variables también pueden jugar un importante papel en la unión al antígeno, tal como proporcionando un andamiaje para las CDRs. Preferentemente, la "región de enlace a antígeno" comprende al menos los residuos de aminoácido 4 a 103 de la cadena, ligera variable (VL) y 5 a 109 de la cadena pesada variable (VH) , más preferentemente, los residuos de aminoácido 3 a 107 de VL y 4 a 111 de VH, y particularmente preferidas son las cadenas VL y VH (posiciones de aminoácido 1 a 109 de VL y 1 a 113 de VH; numeración de acuerdo con la O 97/08320). Una clase preferida de inmunoglobulinas . para su uso en la presente invención es IgG. Los "Fragmentos funcionales" de la invención incluyen el dominio de un fragmento F(ab")2, un fragmento Fab y scFv. El F.(ab')2 o el Fab puede diseñarse para minimizar o retirar completamente las interacciones disulfuro intermoleculares que se presentan entre los dominios CH1 y CL. El término "región hipervariable" al utilizarse en la presente, se refiere a los residuos de aminoácido de un anticuerpo que son responsables del enlace a antigeno. La región hipervariable comprende los residuos de aminoácido de una "región determinante de complementariedad" o "CDR" (i.e., los residuos 24-34 (Ll), 50-56 (L2) y 89-97 (L3) en el dominio variable de cadena ligera y 31-35 (Hl), 50-65 (H2) y 95-102 (H3) en el dominio variable de cadena pesada; Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (Secuencias de proteínas de interés inmunológico) 5a edición, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)) y/o aquellos residuos de un (espira hipervariable" (i.e., residuos 26-32 (Ll) , 50-52 (L2) y 91-96 (L3) en el dominio variable de cadena ligera y 26-32 (Hl) , 53-55 (H2) y 96-101 (H3) en el dominio variable de cadena pesada; Chothia y Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). Residuos de "estructura" o "FR" son aquellos residuos de dominio variable diferentes a los residuos de región hipervariable, como se define en la presente. Un anticuerpo "humano" o fragmento de anticuerpo humano funcional, se define en la presente como uno que no es quimérico (e.g., no "humanizado") y no es (ya sea completo o en parte) de una especie no humana. Un anticuerpo humano o un fragmento de anticuerpo funcional puede derivarse de un humano o puede ser un anticuerpo humano sintético. Un "anticuerpo humano sintético" se define en la presente como un anticuerpo que tiene una secuencia derivada, completa o en parte, in silico a partir de secuencias sintéticas que se basan en el análisis de secuencias de anticuerpo humano conocidas. El diseño in silico de una secuencia de anticuerpo humano o fragmento de la misma, puede lograrse, por ejemplo, analizando una base de datos de secuencias de anticuerpo humano o de fragmento de anticuerpo y diseñando una secuencia de polipéptidos utilizando los datos obtenidos de la misma. Otro ejemplo de un anticuerpo humano o fragmento de anticuerpo funcional, es uno que se encuentra codificado por un ácido nucleico aislado de una biblioteca de secuencias de anticuerpo de origen humano (i.e., basándose tal biblioteca en los anticuerpos tomados de una fuente natural humana) . Un "anticuerpo humanizado" o fragmento de anticuerpo humanizado funcional, se define en la presente como uno que (i) se deriva, al menos en parte, de una fuente no humana (e.g., un ratón transgénico que porta un sistema inmune heterólogo) , cuyo anticuerpo se basa en una secuencia de linea germinal humana; o (ii) es quimérico, en donde al menos una porción del dominio variable se deriva de un origen no humano y el dominio constante se deriva de un origen humano o (iii) se encuentra injertado con CDR, en donde al menos una porción de las CDRs del dominio variable son de un origen no humano, mientras que una o más de las estructuras del dominio variable son de origen humano y el dominio constante (si existe) es de origen humano.

Claims (27)

1. REIVINDICACIONES 1. Una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de rangos variables de aminoácidos, en donde la diversidad de la colección se genera diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de acuerdo con un primer factor de diversidad y diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un segundo rango de aminoácidos de acuerdo con un segundo factor de diversidad, en donde dichos factores de diversidad son diferentes.
2. 2. Una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la reivindicación 1, en donde al menos una porción de las regiones H-CDR3 varia de aproximadamente 4 a aproximadamente 22 aminoácidos de longitud.
3. 3. Una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la reivindicación 2, en donde dicho primer rango de aminoácidos es de aproximadamente 4 a aproximadamente 13 aminoácidos y en donde dicho segundo rango de aminoácidos es de aproximadamente 14 a aproximadamente 22 aminoácidos.
4. 4. Una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la diversidad de la colección se genera: diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de acuerdo con un primer factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un segundo rango de aminoácidos de acuerdo con un segundo factor de diversidad, y diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un tercer rango de aminoácidos de acuerdo con' un tercer factor de diversidad, en donde dichos factores de diversidad son diferentes.
5. 5. Una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la reivindicación 4, en donde dicho primer rango de aminoácidos es de aproximadamente 4 a aproximadamente 9 aminoácidos, en donde dicho segundo rango de aminoácidos es de aproximadamente 10 a aproximadamente 16 aminoácidos, y en donde el tercer rango de aminoácidos es de aproximadamente 17 a aproximadamente 22 aminoácidos.
6. 6. Una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la diversidad de la colección se genera: diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de acuerdo con un primer factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un segundo rango de aminoácidos de acuerdo con un segundo factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un tercer rango de aminoácidos de acuerdo con un tercer factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un cuarto rango de aminoácidos de acuerdo con un cuarto factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un quinto rango de aminoácidos de acuerdo con un quinto factor de diversidad y diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un sexto rango de aminoácidos de acuerdo con un sexto factor de diversidad, en donde dichos factores de diversidad son diferentes .
7. 7. Una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la reivindicación 6, en donde dicho primer rango de aminoácidos es de aproximadamente 4 a aproximadamente 6 aminoácidos, en donde dicho segundo rango de aminoácidos es de aproximadamente 7 a aproximadamente 9 aminoácidos, en donde dicho tercer rango de aminoácidos es de aproximadamente 10 a aproximadamente 12 aminoácidos, en donde dicho cuarto rango de aminoácidos es de aproximadamente 13 a aproximadamente 15 aminoácidos, en donde dicho quinto rango de aminoácidos es de aproximadamente 16 a aproximadamente 18 aminoácidos, y en donde dicho sexto rango de aminoácidos es de aproximadamente 19 a aproximadamente 22 aminoácidos.
8. 8. Una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la diversidad de la colección se genera: diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de acuerdo con un primer factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un segundo rango de aminoácidos de acuerdo con un segundo factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un tercer rango de aminoácidos de acuerdo con un tercer factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un cuarto rango de aminoácidos de acuerdo con un cuarto factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un quinto rango de aminoácidos de acuerdo con un quinto factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un sexto rango de aminoácidos de acuerdo con un sexto factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un séptimo rango de aminoácidos de acuerdo con un séptimo factor de diversidad, diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un octavo rango de aminoácidos de acuerdo con un octavo factor de diversidad y diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un noveno rango de aminoácidos de acuerdo con un noveno factor de diversidad, en donde dichos factores de diversidad son diferentes.
9. 9. Una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la reivindicación 8, en donde dicho primer rango de aminoácidos es de aproximadamente 4 a aproximadamente 5 aminoácidos, en donde dicho segundo rango de aminoácidos es de aproximadamente 6 a aproximadamente 7 aminoácidos, en donde dicho tercer rango de aminoácidos es de aproximadamente 8 a aproximadamente 9 aminoácidos, en donde dicho cuarto rango de aminoácidos es de aproximadamente 10 a aproximadamente 11 aminoácidos, en donde dicho quinto rango de aminoácidos es de aproximadamente 12 a aproximadamente 13 aminoácidos, en donde dicho sexto rango de aminoácidos es de aproximadamente 14 a aproximadamente 15 aminoácidos, en donde dicho séptimo rango de aminoácidos es de aproximadamente 16 a aproximadamente 17 aminoácidos, en donde dicho octavo rango de aminoácidos es de aproximadamente 18 a aproximadamente 19 aminoácidos y en donde dicho noveno rango de aminoácidos es de aproximadamente 20 a aproximadamente 22 aminoácidos.
10. 10. Una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la reivindicación 2, en donde dicho primer rango es de aproximadamente 4 a aproximadamente 8 aminoácidos, y en donde dicho primer factor de diversidad requiere que la alanina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 80% en la posición 1, la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 60% en la posición 2, la glicina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 40% en la posición 3, el ácido aspártico tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 50% en la posición 7 y la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 40% en la posición 8.
11. 11. Una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con ' la reivindicación 2, en donde dicho primer rango es de aproximadamente 9 a aproximadamente 15 aminoácidos, y en donde dicho primer factor de diversidad requiere que la alanina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 90% en la posición 1, la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 70% en la posición 2, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20% en la posición 10, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20% en la posición 11, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 30% en la posición 12, la fenilalanina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 60% en la posición 13, el ácido aspártico tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 80% en la posición 14 y la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 40% en la posición 15.
12. 12. Una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la reivindicación 2, en donde dicho primer rango es de aproximadamente 16 a aproximadamente 22 aminoácidos, y en donde dicho primer factor de diversidad requiere que la alanina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 90% en la posición 1, la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 60% en la posición 2, el ácido aspártico tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 30% en la posición 3, la glicina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20% en la posición 4, la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 10% en la posición 5, la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 10% en la posición 6, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20% en la posición 7, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 40% en la posición 15, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 50% en la posición 16, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 50% en la posición 17, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 60% en la posición 18, la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 40% en la posición 19, la metionina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 50% en la posición 20, el ácido aspártico tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 95% en la posición 21 y la valina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 60% en la posición 22.
13. 13. Una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de ' acuerdo con la reivindicación 2, en donde dicho primer rango es de aproximadamente 9 a aproximadamente 15 aminoácidos y en donde dicho primer factor de diversidad requiere un alto contenido de glicina y serina en al menos dos posiciones de aminoácido dentro de dicho primer rango.
14. 14. Una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la reivindicación 2, en donde dicho primer rango es de aproximadamente 16 a aproximadamente 22 aminoácidos y en donde dicho primer factor de diversidad requiere (i) un alto contenido de serina en al menos una posición de aminoácido dentro de dicho primer rango, (ii) un alto contenido de aminoácidos básicos en la parte final de la región H-CDR3 y (iii) un alto contenido de ácido aspártico en la parte frontal de la HCDR3, y (iv) un alto contenido de aminoácidos aromáticos en al menos dos posiciones de aminoácido dentro de dicho primer rango.
15. 15. Una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la reivindicación 2, en donde dicho primer rango es de aproximadamente 5 aminoácidos y en donde dicho primer factor de diversidad requiere que, en la posición 1: la alanina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 60%, la treonina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20% y todos los otros aminoácidos, excepto cisteina, tengan una tasa de frecuencia de aproximadamente 0.58%; y dicho primer factor de diversidad requiere que, en la posición 2: la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 30%, la lisina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 30%, la treonina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 30% y todos los otros aminoácidos, excepto cisteina tengan una tasa de frecuencia de aproximadamente 0.55%; dicho primer factor de diversidad requiere que, en la posición 3: el ácido aspártico tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 40%, la fenilalanina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 40% y todos los otros aminoácidos, excepto cisteina tengan una tasa de frecuencia de aproximadamente 0.58%; dicho primer factor de diversidad requiere que, en la posición 4: el ácido aspártico tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 30%, la glicina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 30%, la metionina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 30% y todos los otros aminoácidos, excepto cisteina tengan una tasa de frecuencia de aproximadamente 0.63%; y dicho primer factor de diversidad requiere que, en la posición 5: la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 30%, el ácido aspártico tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 30% y todos los otros aminoácidos, excepto cisteina, tengan una tasa de frecuencia de aproximadamente 0.58%.
16. 16. Una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la reivindicación 2, en donde dicho primer rango es de aproximadamente 12 aminoácidos y en donde dicho primer factor de diversidad requiere que, en la posición 1: la alanina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 80%, la treonina y la valina, colectivamente, tengan una tasa de frecuencia de aproximadamente 15%; y dicho primer factor de diversidad requiere que, en la posición 2: la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 70%, y la serina, la treonina, la glicina y la alanina, colectivamente, tengan una tasa de frecuencia de aproximadamente 30%; y dicho primer factor de diversidad requiere que, en la posición 9: la alanina, la serina y la tirosina, colectivamente, tengan una tasa de frecuencia de aproximadamente 20%, y todos los otros aminoácidos, excepto cisteina, tengan una tasa de frecuencia de aproximadamente 0.63%; y dicho primer factor de diversidad requiere que, en la posición 10: la fenilalanina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 60%, la metionina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 10%, y todos los otros aminoácidos, excepto cisteina, tengan una tasa de frecuencia de aproximadamente 0.58%; y dicho primer factor de diversidad requiere que, en la posición 11: el ácido aspártico tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 80%, la glicina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 5% y todos los otros aminoácidos, excepto cisteina, tengan una tasa de frecuencia de aproximadamente 0.58%; y dicho primer factor de diversidad requiere que, en la posición 12: la tirosina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 50%, la valina y la isoleucina, colectivamente, tengan una tasa de frecuencia de aproximadamente 10% y todos los otros aminoácidos, excepto cisteina, tengan una tasa de frecuencia de aproximadamente 0.63%.
17. 17. Una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la reivindicación 2, en donde dicho primer rango es de aproximadamente 20 aminoácidos y en donde dicho primer factor de diversidad requiere que, en la posición 1: la alanina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 100%; y dicho primer factor de diversidad requiere que, en la posición 2: la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 50% y la lisina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 50%; y dicho factor de diversidad requiere que, en la posición 3: la glicina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 30% y todos los otros aminoácidos, excepto cisteina, tengan una tasa de frecuencia de aproximadamente 0.55%; y dicho primer factor de diversidad requiere que, en la posición 4: la arginina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20%, la glicina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20%, la leucina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20% y todos los otros aminoácidos, excepto cisteina tengan una tasa de frecuencia de aproximadamente 0.63%; y dicho factor de diversidad requiere que, en la posición 14: la serina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20%, la treonina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20%, la cisteina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 20% y todos los otros aminoácidos, excepto cisteina, tengan una tasa de frecuencia de aproximadamente 0.63%; y dicho primer factor de diversidad requiere que, en la posición 21: el ácido aspártico tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 95%; y dicho factor de diversidad requiere que, en la posición 22: la valina tenga una tasa de frecuencia de aproximadamente 50% y todos los otros aminoácidos, excepto cisteina, tengan una tasa de frecuencia de aproximadamente 0.55%.
18. 18. Una colección de diversas cadenas pesadas variables de anticuerpos humanos o humanizados que comprende una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la reivindicación 1.
19. 19. Una colección de diversos anticuerpos humanos o humanizados o fragmentos funcionales de los mismos, que comprende una colección de cadenas pesadas variables de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la reivindicación 18.
20. 20. Una biblioteca sintética de anticuerpos humanos o humanizados, que comprende una colección de diversos anticuerpos humanos o humanizados o fragmentos funcionales de los mismos de acuerdo con la reivindicación 19.
21. 21. Un método para preparar una colección de moléculas de ácido nucleico que codifican para diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas de rangos variables, que comprende la etapa de: sintetizar una pluralidad de moléculas de ADN, en donde cada molécula de ADN codifica para una región H-CDR3, en donde dichas regiones H-CDR3 son de rangos variables, en donde las moléculas de ADN que codifican para las regiones H-CDR3 de un primer rango de aminoácidos, se sintetizan de acuerdo con un primer factor de diversidad y en donde las moléculas de ADN que codifican para las regiones H-CDR3 de un segundo rango de aminoácidos, se sintetizan de acuerdo con un segundo factor de diversidad, y en donde dichos factores de diversidad son diferentes.
22. 22. Una colección de ácidos nucleicos que codifican para una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados producidos mediante el método de la reivindicación 21.
23. 23. Una colección de ácidos nucleicos que codifican para una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de rangos variables de aminoácidos, en donde la diversidad de la colección se genera diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un primer rango de aminoácidos de acuerdo con un primer factor de diversidad y diversificando las regiones H-CDR3 que tienen una longitud dentro de un segundo rango de aminoácidos de acuerdo con un segundo factor de diversidad, en donde dichos factores de diversidad son diferentes.
24. 24. Un método para obtener una colección de diversas regiones H-CDR3 de anticuerpos humanos o humanizados de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende la etapa de: expresar la colección de ácidos nucleicos de acuerdo con la reivindicación 22 o 23.
25. 25. Una colección de diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas de acuerdo con la reivindicación 1, en donde, si los miembros de dicha colección tienen una longitud de 4 a 8 aminoácidos, entonces dicho (s) factor (es) de diversidad que se aplica (n) a dichos miembros que tienen dicha longitud de 4 a 8 aminoácidos, define (n) 0, 1, 2 o 3 posiciones constantes de aminoácidos dentro de dichas regiones H-CDR3 de dichos miembros que tienen dicha longitud.
26. 26. Una colección de diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas de acuerdo con la reivindicación 1, en donde, si los miembros de dicha colección tienen una longitud de 9 a 10 aminoácidos, entonces dicho (s) factor (es) de diversidad que se aplica (n) a dichos miembros que tienen dicha longitud de 9 a 10 aminoácidos, define (n) 0, 1, 2 o 3 posiciones constantes de aminoácidos dentro de dichas regiones H-CDR3 de dichos miembros que tienen dicha longitud.
27. 27. Una colección de diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas de acuerdo con la reivindicación 1, en donde, si los miembros de dicha colección tienen una longitud de 11 a 13 aminoácidos, entonces dicho (s) factor (es) de diversidad que se aplica (n) a dichos miembros que tienen dicha longitud de 11 a 13 aminoácidos, define (n) 0, 1, 2 o 3 posiciones constantes de aminoácidos dentro de dichas regiones H-CDR3 de dichos miembros que tienen dicha longitud. 28, Una colección de diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas de acuerdo con la reivindicación 1, en donde, si los miembros de dicha colección tienen una longitud de 14 aminoácidos, entonces dicho (s) factor (es) de diversidad que se aplica (n) a dichos miembros que tienen dicha longitud de 14 aminoácidos, define (n) 0, 1, 2, 3, 4 o 5 posiciones constantes de aminoácidos dentro de dichas regiones H-CDR3 de dichos miembros que tienen dicha longitud. 29. Una colección de diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas de acuerdo con la reivindicación 1, en donde, si los miembros de dicha colección tienen una longitud de 15 a 16 aminoácidos, entonces dicho (s) factor (es) de diversidad que se aplica (n) a dichos miembros que tienen dicha longitud de 15 a 16 aminoácidos, define (n) 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 posiciones constantes de aminoácidos dentro de dichas regiones H-CDR3 de dichos miembros que tienen dicha longitud . 30. Una colección de diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas de acuerdo con la reivindicación 1, en donde, si los miembros de dicha colección tienen una longitud de 16 a 17 aminoácidos, entonces dicho (s) factor (es) de diversidad que se aplica (n) a dichos miembros que tienen dicha longitud de 16 a 17 aminoácidos, define (n) 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 posiciones constantes de aminoácidos dentro de dichas regiones H-CDR3 de dichos miembros que tienen dicha longitud. 31. Una colección de diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas de acuerdo con la reivindicación 1, en donde, si los miembros de dicha colección tienen una longitud de 18 aminoácidos, entonces dicho (s) factor (es) de diversidad que se aplica (n) á dichos miembros que tienen dicha longitud de 18 aminoácidos, define (n) 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 posiciones constantes de aminoácidos dentro de dichas regiones H-CDR3 de dichos miembros que tienen dicha longitud. 32. Una colección de diversas regiones H-CDR3 humanas o humanizadas de acuerdo con la reivindicación 1, en donde, si los miembros de dicha colección tienen una longitud de 19 aminoácidos o' mayor, entonces dicho (s) factor (es) de diversidad que se aplica (n) a dichos miembros que tienen dicha longitud de 19 aminoácidos o mayor, define (n) 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 o 7 posiciones constantes de aminoácidos dentro de dichas regiones H-CDR3 de dichos miembros que tienen dicha longitud. RESUMEN La presente invención se dirige a la preparación y uso de una colección de miembros de la región 3 determinante de complementariedad de cadena pesada de anticuerpo (HCDR3) , en donde la diversidad de la colección es una función de la longitud de los miembros HCDR3. La diversidad de la colección de regiones HCDR3 representa sustancialmente la distribución de aminoácidos naturales de HCDR3 en el repertorio humano. . Esta distribución de aminoácidos naturales puede representarse al desviar la distribución aleatoria completa de aminoácidos, de acuerdo con lo anterior, en la secuencia de ADN que codifica para HCDR3 al utilizar tecnología de mutagénesis de trinucleótidos (TRIM) . Una colección de miembros HCDR3 de la invención puede cada uno estar comprendido dentro de una región variable de un anticuerpo (o fragmento del mismo) para formar una biblioteca de anticuerpos sintéticos o fragmentos de anticuerpo. Las bibliotecas de anticuerpos sintéticos de la presente invención pueden diseñarse para incluir características modulares, tales como regiones de estructura de "gen maestro" químicamente sintetizadas, que pueden contener sitios únicos de restricción que flanquean una o más regiones CDR, incluyendo una región HCDR3 preparada como se describe en la presente. La invención también proporciona moléculas de ácido nucleico que codifican para tales colecciones diversas métodos para elaborar y utilizar las mismas