MX2007008565A - Sales de tetrazolio solubles en agua. - Google Patents

Abstract

Las sales de tiazolil-tetrazolio con solubilidad incrementada en soluciones acuosas tienen sustituyentes de alquilamonio-alcoxi, preferiblemente sustituyentes de grupos trimetil-amonio-propoxi, en los anillos de fenilo unidos al anillo de tetrazolio. Las sales de tiazolil-tetrazolio con solubilidad incrementada en soluciones acuosas tienen sustituyentes de alquil-amonio-alcoxi, preferiblemente sustituyentes de grupos trimetil-amonio-propoxi, en los anillos de fenilo unidos al anillo de tetrazolio, por ejemplo los compuestos de la formula general mostrada posteriormente. Formula (A-)a. (ver formula (A-)a).

Description

SALES DE TETRAZOLIO SOLUBLES EN AGUA CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere al análisis de muestras biológicas para propósitos médicos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El análisis de muestras biológicas implica frecuentemente métodos en los cuales se desarrolla un color que es proporcional a la cantidad de un analito en la muestra. Por ejemplo, se pueden emplear enzimas para oxidar el analito de interés y el grado de reacción es mostrado por un cambio de color de un compuesto indicador. En este documento es de interés particular la familia de sales de tetrazolio que se utilizan como indicadores. Estas sales son reducidas a tintes de formazan por medio de sustancias reductoras. Para medir un analito, una enzima (por ejemplo una enzima deshidrogenasa dependiente de NAD) oxida al analito para producir la forma reducida (por ejemplo, NADH) que reacciona con una sal de tetrazolio para producir un formazon coloreado. Puede ser necesario un mediador para facilitar la reacción. Puesto que la cantidad de NADH producida por la reacción del analito es proporcional a la cantidad de formazan producido, la cantidad del analito puede medirse indirectamente por el color formado.

Las sales de tetrazolio se han utilizado en varias aplicaciones. Pero, en particular, se han utilizado en el campo médico para medir los analitos en varios fluidos biológicos tales como la sangre, orina, plasma y suero. Estos indicadores se utilizan frecuentemente con sistemas de reactivos colocados sobre tiras de prueba las cuales, cuando están en contacto con una muestra de fluido, reaccionan con el analito de interés y exhiben un color que indica la cantidad del analito presente. Aunque en algunos casos, el cambio de color puede leerse visualmente por referencia a diagramas de cromaticidad, las lecturas más precisas pueden hacerse de manera espectrofotométrica por medio de instrumentos que están diseñados para ese propósito. Típicamente, la luz es dirigida sobre la tira de prueba y la luz reflejada es medida para determinar el efecto del cambio de color sobre la tira. Las sales de tetrazolio deben producir formazanes que absorben la luz en longitudes de onda que evitan la interferencia por sustancias en la muestra, tal como la hemoglobina en la sangre entera. Consecuentemente, se ha desarrollado una familia de sales de tiazolil-tetrazolio que producen formazanes que absorben la luz que tiene longitudes de onda superiores a aproximadamente 640 nm, tales como aquellas producidas por diodos emisores de luz (LEDs, por sus siglas en ingles) utilizados como fuentes de luz. Los LEDs proporcionan un intervalo reducido de longitudes de onda que puede variar solo por aproximadamente ± 5 nm. Estas sales de tiazolil-tetrazolio son descritas en varias patentes norteamericanas tales como las Patentes Norteamericanas Nos. 5,126,275; 5,322,680; 5,300, 637 y 5,290,536. La mayoría de muestras biológicas son de carácter acuoso, de manera que es deseable que los indicadores sean solubles en la muestra. Sin embargo, muchas de las sales de tetrazoilo no son muy solubles. Un proveedor de sales de tetrazoilo, Doj indo Laboratories, tiene una línea de indicadores que se ha hecho más soluble por la adición de grupos de ácido sulfónico a la molécula indicadora. Véase la Patente Norteamericana No. 6,063,587 y las solicitudes de patente japonesas publicadas JP58113181 A2 y JP58113182 A2. Sus series WST de indicadores de sal de tetrazolio son mencionadas frecuentemente en patentes que describen métodos analíticos. Un ejemplo se encuentra en la Patente Norteamericana No. 6,586,199. Se reporta que la solubilidad de las series WST de sales de tetrazolio es aproximadamente 10 mg/mL de agua. La solubilidad también puede incrementarse cuando se utilizan ciertos contraiones de sulfonato y fosfonato de las sales de tetrazoilo tal como se describe en la Patente Norteamericana No. 5,250,695. Otras patentes que describen indicadores de sales de tetrazolio incluyen EP0476455 Bl; US 2004/0132004 Al; WO 98/37157; Patente Norteamericana No. 6,183,878 Bl ; Patente Norteamericana No. 6,207,292 Bl; Patente Norteamericana No. 6,277,307 Bl; DE 21 47 466; Patente Norteamericana No. 5,185,450; Patente Norteamericana No. 5,196,314. Los presentes inventores deseaban mejorar la solubilidad de las sales de tiazolil-tetrazolio mientras que retenía su capacidad para proporcionar una respuesta espectral relativamente plana de sus formazanes en la región de 600 a 640 nm en respuesta a la luz incidente proporcionada por LEDs. Como se observará en la descripción de la invención posterior, han tenido éxito al proporcionar sales de tiazolil-tetrazolio que tienen mayor solubilidad, mientras que retienen la respuesta espectral deseada.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención incluye sales novedosas de tiazolil-tetrazolio. Se ha descubierto que algunas tienen mejor solubilidad en agua que una sal de tiazolil-tetrazolio patentada, relacionada. El mejoramiento de la solubilidad hace que sean aplicadas más fácilmente a tiras de prueba utilizadas para medir analitos en muestras biológicas (por ejemplo, glucosa en muestras de sangre) . Las sales de tetrazolio están caracterizadas por tener un sustituyente de alquil -amonio-alcoxi que incrementa la solubilidad. De acuerdo con una modalidad, las sales de tetrazolio son definidas en la siguiente fórmula. donde A = contraión X = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o heteroalquilo a = 1-3 b = 0-3 Rx - alquilo de 1 a 6 átomos de carbono uno de R2 y R3 es alquilo y el otro es XN+Hb(R?)3-b o R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi uno de R4 o R5 es halógeno y el otro es alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, uno o ambos de R y R5 son X +Hb (Rx) 3.b, o R4 y R5 se unen para formar un anillo aromático o heteroaromático o un anillo aromático sustituido o heteroaromático sustituido. La fórmula dibujada anteriormente representa sales novedosas de tiazolil-tetrazolio, es decir que contienen un anillo de tlazol unido al anillo de tetrazolio en la posición de nitrógeno 2. Además, cada una tiene un anillo de fenilo unido en la posición de nitrógeno 3 y otro anillo de fenilo unido en la posición 5 en el anillo de tetrazolio. La solubilidad incrementada con relación a una sal de tiazolil-tetrazolio patentada que se designa en este documento como HTC-045 se logra al unir uno o más grupos alquil-amonio-alcoxi a la sal de tiazolil-tetrazolio. Los grupos alquil-amonio-alcoxi pueden unirse al anillo de tiazolilo como R4 y/o R5, o pueden sustituirse en un anillo aromático o heteroaromático formado por R4 y R5. En las modalidades preferidas, los grupos alquil -amonio-alcoxi son sustituyentes en los anillos de fenilo unidos al anillo de tetrazoilo. En las modalidades más preferidas, el grupo alquil-amomo-alcoxi es tpalquil-amonio-propoxi . Las sales de benzotiazolil-tetrazolio son compuestos preferidos que tienen una solubilidad incrementada. En otro aspecto de la invención, la sales de tiazolil-tetrazolio se utilizan como indicadores cromogénicos para detectar la presencia de sustancias reductoras (por ejemplo, NADH), en el análisis de muestras biológicas utilizando enzimas para oxidar analitos, tal como en la determinación del contenido de glucosa de la sangre.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es un diagrama de un primer método para preparar los compuestos de los ejemplos. La Figura 2 es un diagrama de un segundo método para preparar los compuestos de los ejemplos. La Figura 3 muestra los compuestos comparativos reportados en los ejemplos. Las Figuras 4a-4b muestran los compuestos de la invención hechos en los ejemplos. Las figuras 5a y 5b son diagramas de la absorbancia de sal de tetrazolio contra la longitud de onda de la luz.

DESCRIPCIÓN DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS Definiciones Las siguientes definiciones se aplican a los sustituyentes de las sales de tiazolil-tetrazolio de la invención. "1 a 6 átomos de carbono" - significa un residuo que tiene de 1 a 6 átomos de carbono "alquilo" - significa residuos de hidrocarburo lineales o ramificados de la fórmula general CnH2n+1 "heteroalquilo" - significa residuos de hidrocarburo lineales o ramificados que contienen heteroátomos unidos a los átomos de carbono adyacentes "alcoxi" - significa el residuo -OR donde R es alquilo "metilendioxi" - significa el residuo divalente de la fórmula -0-CH2-0- "halógeno" - significa flúor, cloro, yodo y bromo "alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno" - significa un residuo lineal o ramificado que tiene la fórmula general CnH2n-?Y2 donde Y es un halógeno "anillo aromático" - significa un anillo de benceno o naftaleno "anillo heteroaromático" - significa un anillo de piridina o quinolina "contraion" - significa un residuo iónico de reactivos utilizados en la preparación de las sales de tetrazolio (por ejemplo, nitrito, fosfato, fosfato de hidrógeno, fosfato de dihidrógeno, sulfato de hidrógeno, sulfato, carbonato de hidrógeno, carbonato, metanosulfonato, fluoroborato, bromuro, cloruro, yoduro o combinaciones de los mismos) "sal de tet" - es una abreviación de sal de tetrazolio Sales de tiazolil-tetrazolio Como se describiera en la Patente Norteamericana No. 5,126,275, los formazanes de sales de tiazolil-tetrazolio se caracterizan por tener un espectro de reflectancia que exhibe una meseta extendida superior a aproximadamente 600-650 nm, lo cual es útil en un equipo que utiliza LEDs como una fuente de luz. Una muestra se pone en contacto con un sistema de reacción que produce un color que indica la cantidad de un analito presente en la muestra. La luz regresada del área de prueba es detectada y correlacionada con el contenido de analito. En un ejemplo importante, una glucosa deshidrogenasa en presencia de NAD+ cataliza la oxidación de la glucosa en muestras de sangre. La NADH reducida es oxidada nuevamente por un mediador enzimático, tal como diaforasa, el cual cataliza la reducción de la sal de tetrazolio a un formazan. El cambio de color producido es proporcional a la cantidad de NADH producida a partir de la oxidación de glucosa y es indirectamente proporcional a la cantidad de glucosa presente en la muestra. El cambio de color de la conversión de sales de tiazolil-tetrazolio al formazan coloreado puede medirse al exponerlo a una fuente de luz. La luz regresada del área de prueba coloreada es detectada y convertida por un algoritmo adecuado en la cantidad de analito en la muestra. Aunque son descritas en este documento con respecto a NAD-NADH, las sales de tetrazolio de la invención tienen aplicaciones más amplias, inclusive su uso con enzimas deshidrogenasa que tienen otros co-factores, tales como PQQ y FAD. Puesto que las sales de tiazolil-tetrazolio y sus formazanes correspondientes deben ser solubles en la mezcla de reacción aplicada a las tiras de prueba utilizadas para detectar analitos, un objetivo de los inventores fue mejorar la solubilidad de las sales de tiazol-tetrazolio, mientras que mantenían su capacidad para proporcionar formazanes que tienen un espectro de reflectancia relativamente plano en el intervalo de 600-640 nm. Los inventores han descubierto una familia de sales novedosas de tiazolil-tetrazolio que incluyen compuestos los cuales alcanzan sus objetivos. Estas sales son representadas por la siguiente fórmula general : donde A = contraión X = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o heteroalquilo a = 1-3 b = 0-3 Ri = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono uno de R2 y R es alquilo y el otro es XN+Hb (Ri) 3- o R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi uno de R4 o R5 es halógeno y el otro es alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, uno o ambos de R4 y R5 son XN+Hb (Rx) 3_b, o R4 y R5 se unen para formar un anillo aromático o heteroaromático o un anillo aromático sustituido o heteroaromático sustituido. Las sales de tetrazolio de la invención también pueden separarse en sales de tiazolil-tetrazolio sustituido y sales de benzotiazolil-tetrazolio sustituido, como se muestra en las siguientes fórmulas de interés particular. donde : A = contraión X = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono a = 1-3 b = 0-3 Ri = alquilo de 1 a 3 átomos de carbono uno de R2 y R3 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono y el otro es XN+Hb (Ri) 3_b, o R2 y R3 se unen como un grupo mutilen-dioxi R4 = CHF2 R5 = halógeno contraion X = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono a = 1-3 b = 0-3 Ri = alquilo de 1 a 3 átomos de carbono uno de R2 y R3 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono y el otro es XN+Hb (Ri) 3-b, o R2 y R3 se unen como un grupo mutilen-dioxi R4 y R5 son H, o R4 y R5 se unen para formar un anillo aromático R6 = alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, hidrógeno o halógeno . La solubilidad de estos compuestos (I y II) será mostrada en los ejemplos posteriores. El mejoramiento de la solubilidad de las sales de tiazolil-tetrazolio debe reducir el tiempo requerido para obtener resultados de prueba y para proporcionar una mejor linealidad a niveles de analitos altos. También, la solubilidad en agua mejorada debe facilitar la formulación de una mezcla de un reactivo, la cual será más fácil y menos costosa en su fabricación.

Métodos para Hacer las Sales de Tetrazolio de la Invención En la Patente norteamericana No. 5,126,275, se describen métodos para hacer sales de tiazolil-tetrazolio. Los métodos implican la reacción de una hidrazona con anilina diazotada para producir el formazan, el cual entonces es oxidado a la sal de tetrazolio. Los nuevos métodos que se describen para hacer los compuestos de la invención se desarrollaron para introducir uno (Esquema 1) o dos (Esquema 2) grupos polares en las sales de tetrazolio preferidas de los compuestos I o II. Las Figuras 1 y 2 ilustran estos dos métodos. Los siguientes ejemplos ilustran adicionalmente esta invención. El Esquema 1 se utiliza para producir sales de tetrazolio en las cuales el sustituyente de fenilo en la posición 5 en el anillo de tetrazolio tiene un sustituyente de metilen-dioxi. En el Esquema 1, un grupo de trimetil -amonio-propoxi es sustituido en el sustituyente de fenilo en la posición 3 en el anillo de tetrazolio. En el Esquema 1, el O-nitrofenol se hace reaccionar con bromuro de 3-bromopropil -trimetil -amonio para formar el bromuro de 3- (2-nitrofenoxi) propiltrimetil -amonio y luego es hidrogenado a la anilina equivalente. La reacción de ese compuesto con una hidrazona que contiene un anillo de tiazolilo sustituido y un anillo de fenilo con un sustituyente de metilen-dioxi produce el formazan. El formazan entonces es oxidado a la sal de tetrazolio. La hidrazona se forma a partir de la reacción de un benzaldehído sustituido con una hidrazina sustituida que contiene los sustituyentes deseados para la sal de tetrazolio. El Esquema 2 se utiliza para producir sales de tetrazolio en las cuales el sustituyente de fenilo en la posición 5 en el anillo de tetrazolio tiene grupos trimetil -amonio-propoxi sustituidos en la posición ya sea 3 o 4 (o ambas) . Como en el Esquema 1, un grupo trimetil -amonio-propoxi es sustituido en el sustituyente de fenilo en la posición 3 en el anillo de tetrazolio. En el Esquema 2, el 4-hidroxi-3 -metoxi -benzaldehído se hace reaccionar con bromuro de 3 -bromopropiltrimetilamonio para agregar un grupo trimetilamonio-propoxi al benzaldehído. El producto se hace reaccionar con una hidrazina sustituida para producir una hidrazona. La hidrazona se hace reaccionar con el bromuro de 3- (2 -aminofenoxi) propil-trimetil-amonio producido en el primer paso del Esquema 1 para producir el formazan, el cual se convierte a la sal de tetrazolio. Se observará en los resultados posteriores que la solubilidad parece ser afectada por los contraiones asociados con las sales de tetrazolio. Los contraiones resultan de reactivos utilizados en el proceso y pueden variarse para proporcionar los contraiones preferidos. Alternativamente, los contraiones pueden reemplazarse, por ejemplo, por medio de métodos de intercambio de iones. En los siguientes ejemplos no limitantes, los productos de cada paso se identificaron por medio de métodos espectrofotométricos y se presentaron los resultados para cada producto.

Ejemplo 1 Preparación de la sal de nitrito de bromo del 5-benzo[l,3 dioxol-5-il] -3- [2- (3 -trimetilamonio) propoxi-fenil] -2- (5-cloro-4 -difluorometil -tiazol -2 -il) -2H-tetrazolio Como se muestra en el Esquema 1, el o-nitrofenol se hace reaccionar con bromuro de 3-bromopropiltrimetilamonio para formar el bromuro de 3- (2-nitrofenoxi) propiltrimetilamonio, el cual luego se hidrogena a la anilina equivalente. La anilina se hace reaccionar con una hidrazona que contiene un anillo de tiazolilo sustituido y un anillo de fenilo con un sustituyente de mutilen-dioxi para producir el formazan. El formazan entonces se oxida a la sal de tetrazolio. El proceso se describe de manera más completa en el siguiente ejemplo: A una solución color amarillo de o-nitrofenol (Aldrich, 6.3 g, 45 mmol) en DMF (150 mL) en un matraz seco de fondo redondo de un cuello con capacidad para 250 L bajo nitrógeno se agregó carbonato de potasio (6.6 g, 48 mmol) . La mezcla se volvió color anaranjado. Después de agitar 10 minutos, se agregó bromuro de 3-bromopropiltrimetilamonio (Aldrich, 12.9 g, 45 mmol) . La mezcla resultante se calentó a 125°C durante 3 horas. Después de enfriar la mezcla de reacción a temperatura ambiente, el residuo se filtró y el producto precipitado se lavó con DMF (2x20 mL) . El producto filtrado se agregó lentamente a EtOAc (750 mL) causando que se formara un producto precipitado. La mezcla resultante se agitó 30 minutos. El producto precipitado se filtró y se lavó con una solución de EtOAc:DMF, 5:1 (3x100 mL) , luego EtOAc (100 mL) y hexano (100 mL) . Después del secado con aire del sólido color amarillo claro durante 5 minutos, el producto se agregó a una solución de EtOAc :DMF, 10:1 (550 mL) y se agitó 1 hora. El sólido se filtró, se lavó con EtOAc (100 mL) y hexano (100 mL) . El sólido resultante se filtró para proporcionar un producto color beige claro (14.54 g, >100%) , p.f (178°-181°C) identificado por las siguientes propiedades. RMN 13C (400 MHz, DMSO d6) : d 151, 139.45, 134.71, 125.14, 121, 115.39, 66.59, 62.84, 52.39, 22.48 RMN XH (400 MHz, DMSO-d6) : d 7.90 (dd, J = 8.1 Hz, J = 1.7 Hz, 1H) , 7.58 (dt, J = 8.2 Hz, J = 1.7 Hz, 1H) , 7.39 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.15 (d, J = 1.7 Hz, 1H) , 4.25 (t, J = 6 Hz, 2H) , 3.45 (m, 2H) , 3.11 (s, 9H) , 2.23 (m, 2H) . ESI-MS: m/z 239 (100%, M2+) . Una suspensión espesa de bromuro de 3- (2-nitrofenoxi) propiltrimetilamomo (7 g, 21.94 mmol), Pd al 10%/C (725 mg) , MeOH (70 mL) y agua (70 mL) se hidrogenó a 2.457 kg/cm2 (35 lb/pg2) durante 2.5 horas en un aparato de hidrogenación Parr. Después de 30 minutos, la presión descendió a 1.544 kg/cm2 (22 lb/pg2) . La mezcla resultante se filtró a través de una almohadilla de Celite 521. La almohadilla de catalizador color negro/Celite se lavó con MeOH (2x10 mL) . El producto filtrado se concentró en un evaporador giratorio bajo presión reducida a 40-45°C. Cuando no se había formado un producto adicional, la solución color rosa claro se transfirió a otro matraz y se concentró por medio del secado por congelamiento durante 2 días para producir un derivado de anilina color beige claro (5.92 g, 93%) identificado por las siguientes propiedades espectrales. RMN 13C (400 MHz, DMSO-d6) : d 145.19, 137.76, 121.39, 116.15, 114.09, 111.86, 64.79, 63.27, 52.36, 22.78 RMN XH (400 MHz, DMSO-d.) : d 6.78 (d, J = 4 Hz , 1H) , 6.66 (m, 2H) , 6.53 (d, J = 6 Hz, 1H) , 4.82 (s amplio, 2H) , 3.99 (t, J = 6 Hz, 2H) , 3.54 (m, 2H) , 3.11 (s, 9H) , 2.17 (m, 2H) . ESI-MS: m/z 209 (100%, M2+) . A una solución del derivado de anilina anterior (7.7 g, 26.64 mmol) en agua (80 ml ) en un baño de agua helada se agregó gota a gota HCl concentrado (7.2 ml) . Después de que la solución se agitó durante 5 minutos, se agregó gota a gota una solución de nitrito de sodio (2.2 g, 32 mmol) en agua (16 mL) . El color de la solución cambió de café claro a amarillo dorado. La solución resultante se agitó durante 30 minutos. Una solución de hidrazona (Bayer, 9.8 g, 27.98 mmol) en piridina (400 mL) se agitó en un matraz de 3 cuellos con capacidad de 2 litros equipado con un agitador mecánico y un embudo de adición con camisa en un baño de sal/hielo/agua (-15° a -20°C) . La solución de diazo que se acababa de hacer se agregó gota a gota a la solución de hidrazona por vía de un embudo de adición con camisa rellenado con hielo/agua. Después de las primeras gotas, el color de la reacción cambió de amarillo a azul oscuro. Después de 1/3 de la adición, la mezcla de reacción color azul oscuro se volvió muy viscosa. Cuando se completó la adición, la mezcla se agitó durante 30 minutos. Entonces la reacción se calentó a 3-5°C por vía de un baño de hielo/agua. La reacción se agitó durante 1 hora. La mezcla se transfirió a un matraz de fondo redondo con capacidad de 2 litros con MeOH (500 mL) . La mezcla se concentró en un evaporador giratorio bajo presión reducida a 45°C hasta que no se formó un producto destilado adicional. Se agregó nuevamente MeOH (500 mL) y la mezcla se concentró. El proceso se repitió. El sólido resultante se secó bajo vacío durante toda la noche. Luego, el matraz se enjuagó con MeOH (100 mL) y se diluyó con EtOAc (500 mL) . La suspensión espesa se agitó en un baño de hielo/agua durante 30 minutos. El producto se filtró y se lavó con EtOAc (100 mL) , MeOH frío (50 mL) , EtOAc (150 mL) y hexano (150 mL) . El producto color azul oscuro resultante se transfirió a una botella color ámbar y se secó bajo vacío para proporcionar el formazan deseado (13, 11.3 g, 67%) identificado por las siguientes propiedades espectrales. RMN 19F: (376 MHz, DMSO d6) : d -177.77 (d, J = 59.2 Hz) , RMN 13C (400 MHz, DMSO-d6) : d 169.57, 153.6, 148.1, 147.8, 144.81, 141.9, 137.1, 132.74, 128.82, 121.53, 121.5, 121.1, 115.89, 113.96, 108.8, 108.22, 106.68, 101.33, 66.21, 63.03, 51.99, 22.35 RMN H (400 MHz, DMSO-ds:d 11.78 (s amplio, 1H) , 8.05 (dd, J = 8.1 Hz, J = 1.5 Hz, 1H) , 7.55 (dd, J = 8.2 Hz, J = 1.6 Hz, 1H) , 7.48 (dd, J = 8.2 Hz, J = 1.7 Hz, 1H) , 7.43 (d, J = 1.7 Hz, 1H) , 7.32 (dd, J = 8 Hz, J = <1 Hz, 1H) , 7.16 (t, J = 7.9 Hz, 1H) , 7.15 (t, JHF = 59.2, 1H) , 7.04 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 6.11 (s, 2H) , 4.32 (t, J = 6 Hz, 2H) , 3.49 (m, 2H) , 3.05 (s, 9H) , 2.38 (m, 2H) . ESI-MS: m/z 611 (100%, M-Ms), 258 (26%, M2+) . A una mezcla del formazan anterior (2.16 g, 3.4 mmol) , agua (1.4 mL) y THF (40 mL) se agregó ácido metanosulfónico (0.68 mL, 10.24 mmol) . La mezcla se agitó durante 5 minutos. Luego el nitrito de sodio (720 mg, 10.24 mmol) se agregó en una porción. La mezcla se agitó durante 3 días. El color de la suspensión espesa cambió de azul oscuro a anaranjado. El ppt color anaranjado se filtró y se lavó con THF (2x10 mL) . El producto se secó bajo vacío durante toda la noche. Luego el sólido se mezcló espesamente con MeOH (80 mL) , se filtró y el residuo se lavó con MeOH (2x5 mL) . El producto filtrado se concentró en un evaporador giratorio bajo presión reducida a 40°C. El producto resultante se secó durante 2 días bajo vacío para proporcionar una sal de tet color anaranjado (2.86 g >100%) identificada por las siguientes propiedades espectrales. RMN 19F: (376 MHz, DMSO-d6) : d-181.13 (d, J = 52.1 Hz) , RMN 13C (400 MHz, DMSO-d6) : d 165.1, 152.52, 152.27, 148.85, 146.68, 142.72, 142.45, 137.07, 135.95, 128.44, 123.87, 121.87, 121.86, 121.39, 115.57, 114.68, 110.80, 109.84, 108.43, 107.14, 106.06, 102.78, 100.49, 66.92, 62.23, 52.21, 22.08 RMN 1H (400 MHz, DMSO-d6) : d 7.98 (dd, J = 8.0 Hz, J = 1.5 Hz, 1H) , 7.91 (m, 2H) , 7.82 (d, J = 1.8 Hz, 1H) , 7.53 (d, J = 8.2. Hz, 1H) , 7.37 (m, 1H) , 7.31 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.25 (t, JHF = 59.2, 1H) , 6.27 (s, 2H) , 4.17 (t, J = 6 Hz, 2H) , 3.49 (m, 2H) , 2.93 (2, 9H) , 2.02 (m, 2H) . ESI-MS: m/z 663 (22%, M2+ +TFA) , 645 (17%, M+) , 275 (100%, M2+) .

Ejemplo 2 Preparación de la sal de tetrafluoroborato de bromo del 5-benzo [1,3 -dioxol-5-il] -3 - [2 - (3 -trimetilamonio) propoxi -fenil] -2- (5-cloro-4-difluorometil-tiazol-2 -il) -2H-tetrazolio La sal se preparó como en el Ejemplo 1 excepto que se utilizó ácido tetrahidrofluorobórico al 48% con el mismo formazan para producir la sal de tetrazolio color anaranjado deseada. RMN 13C (400 MHz, DMSO d6) : d 137, 128, 124, 121, 114, 111, 110, 108, 107, 106, 103, 68, 63, 53, 28 RMN 19F: (376 MHz, DMSO-dg): d-181.13 (d, J = 59.2 Hz), RMN XH (400 MHz, DMS0-d6) : d 7.92 (m, 3H) , 7.82 (d, J = 1.8 Hz, 1H) , 7.52 (d amplio, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.37 (m, 1H) , 7.31 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.25 (t, JHF = 59.2, 1H) , 6.27 (s, 2H) , 4.17 (t, J = 6 Hz, 2H) , 3.35 (m, 2H) , 2.93 (2, 9H) , 2.02 (m, 2H) . ESI-MS: m/z 637 (100%, M+-Br) .

Ejemplo 3 Preparación de la sal de nitrito de bromo del 5-benzo-[l,3 dioxol-5-il] -3- [2- (3 -dimetilhidrogenoamonio) propoxi-fenil] -2- (5-cloro-4-difluorometil-tiazol-2-il) -2H-tetrazolio A una solución color amarillo de o-nitrofenol (Aldrich, 2.1 g, 45 mmol) en DMF (50 mL) en matraz seco de fondo redondo de un cuello con capacidad de 100 mL bajo nitrógeno se agregó carbonato de potasio (4.4 g, 32 mmol) . La mezcla se volvió color anaranjado. Después de la agitación durante 10 minutos, se agregó cloruro ácido de 3 -cloropropildimetilamonio (Aldrich, 2.4 g, 16.5 mmol) . La mezcla resultante se calentó a 125°C durante un día. Después de enfriar la mezcla de reacción a temperatura ambiente, el residuo se filtró y el producto precipitado se lavó con MeOH (2x10 mL) . El producto filtrado se concentró bajo vacío a 40°C hasta 5 mL . Luego se agregó EtOAc (100 mL) . Se formó un ppt. y se filtró. Se agregó agua (100 mL) y EtOAc (150 mL) al producto filtrado, las capas se mezclaron y se separaron. La capa acusa se extrajo con EtOAc (3x25 mL) . Los extractos de EtOAc combinados se lavaron con cloruro de sodio acuoso, saturado (25 mL) , se secaron sobre sulfato de magnesio (5 g) , se filtraron y se concentraron para proporcionar un aceite color amarillo (2.55 g, 81%). RMN XH (400 MHz, DMSO-d6) : d 7.80 (dd, J = 8.1 Hz, J = 1.7 Hz, 1H) , 7.58 (dt, J = 8.2 Hz, J = 1.7 Hz, 1H) , 7.05 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 6.65 (d, J = 1.7 Hz, 1H) , 4.25 (t, J = 6 Hz, 2H) , 2.45 (m, 2H) , 2.15 (s, 9H) , 1.9 (m, 2H) . ESI-MS: m/z 225 (100%, M+l) . El nitrofenol alquilado se trató de la misma manera que en el Ejemplo 1 para producir la sal de tet deseada. RMN 13C (400 MHz, DMSO d5) : d 127, 124, 121, 115, 110, 109, 108, 107, 104, 102, 64, 48, 36, 28 RMN 19F : (376 MHz, DMSO-d6) (d, J = 59.2 Hz) : d-119.13, RMN XH (400 MHz, DMSO-d6): d 7.95 (m, 3H) , 7.80 (d, J = 1.8 Hz, 1H) , 7.50 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.35 (t, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.31 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.25 (t, JHF = 59.2, 1H) , 6.27 (s, 2H) , 4.20 (t, J = 6 Hz, 2H) , 3.45 (m, 2H) , 2.65 (d, j = 1.8 Hz, 6H) , 1.98 (m, 2H) . ESI-MS: m/z 535 (100%, M2+) .

Ejemplo 4 Preparación de la sal de nitrito de bromo del 5-benzo[l,3-dioxol-5-il] -3- [2- (3 -trimetilamonio) ropoxi-fenil] -2-(benzotiazol -2-il) -2H-tetrazolio La hidrazona de piperonal-benzotiazol -2 -ilo se hizo reaccionar con el bromuro de 3- (2-aminofenoxi) ropiltrimetilamonio como en el Ejemplo 1 para hacer el formazan, el cual entonces se convirtió a la sal de tetrazolio correspondiente. La hidrazona de piperonal-benzotiazol -2 -ilo (Bayer, 2.5 g, 10.5 mmol) se hizo reaccionar con el derivado de anilina del ejemplo 1 (2.85 g, 9.6 mmol) bajo condiciones similares a aquellas utilizadas en la elaboración del formazan en el Ejemplo 1 para proporcionar un sólido color púrpura oscuro (4.7 g, 82%) identificado por las siguientes propiedades espectrales. RMN XH (400 MHz, DMSO-dg) : d 11.78 (s amplio, 1H) , 7.98 (dd, 2H) , 7.73 (m, 1H) , 7.60 (m, 2H) , 7.50 (m, 1H) , 7.41 (m, 2H) , 7.29 (m, 1H) , 7.05 (d, 1H) , 6.14 (s, 2H) , 4.39 (t, 2H) , 3.55 (m, 2H) , 3.05 (s, 9H) , 2.48 (m, 2H) . ESI-MS: m/z 517 (100%, M+) . El formazan anterior (600 mg, 1.01 mmol) se convirtió a la sal de tetrazolio (870 mg, >100%) bajo las mismas condiciones que en el Ejemplo 1. La sal de tetrazolio fue identificada por las siguientes propiedades espectrales. RMN 13C (100 MHz, DMSO-dg) : d 164.98, 152.59, 152.26, 148.91, 136.64, 132.74, 135.08, 129.27, 128.88, 128.24, 124.77, 123.97, 123.7, 122.6, 121.97, 115.81, 114.56, 109.86, 107.12, 102.82, 66.88, 62.26, 52.2, 22.02. RMN ^"H (400 MHz, DMSO-dg) : d 8.42 (dd, J = 8.2 Hz, J = 0.8 Hz, 1H) , 8.03 (dd, J = 7.7 Hz, J = 1.6 Hz, 1H) , 8.02 (dd, J = 8.1 Hz, J = 0.9 Hz, 1H) , 7.97 (dd, J = 8.2 Hz, J = 1.8 Hz, 1H) , 7.93 (m, 1H) , 7.86 (d, J = 1.7 Hz, 1H) , 7.76 (m, 1H) , 7.73 (m, 1H) , 7.55 (dd, J = 8.6 Hz, J = 0.9 Hz, 1H) , 7.39 (m, 1H) , 7.32 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 6.28 (s, 2H) , 4.12 (t, J = 6 Hz, 2H) , 3.16 (m, 2H) , 2.91 (s, 9H) . ESI-MS: m/z 561.2 (100%, M+) .

Ejemplo 5 Preparación de la sal de nitrito de bromo del 5-benzo- [1 , 3 -dioxol-5-il] -3- [2- (3 -trimetilamonio) propoxi-fenil] -2- (6-metoxinaftiltiazol -2 -il) -2H-tetrazolio El 6-metoxi-2-hidrazino-naftiltiazol se utilizó en lugar del 2 -hidrazino-benzotiazol en el Ejemplo 4 para hacer la hidrazona apropiada. Entonces la hidrazona se sujetó a las mismas condiciones para producir el formazan deseado (44% en total) RMN 13C (400 MHz, DMSO-dg) : d 135, 130, 125, 122, 121, 120, 115, 114, 113, 110, 65, 64, 55, 52, 38, 22 RMN XH (400 MHz, DMSO-dg) : d 8.61 (d, J = 8.1 Hz, 1H) , 8.29 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 8.05 (dd, J = 8.1 Hz , J = 1.8 Hz, 1H) , 7.82 (dt, J = 8.2 Hz, J = 1.7 Hz, 1H) , 7.68 (m, 2H) , 7.61 (dd, J = 8.1 Hz, J = 1.6 Hz, 1H) , 7.55 (d, J = 1.8 Hz) , 7.37 (dd, J = 8.2 Hz, J = 1.8 Hz, 1H) , 7.31 (dd, J = 8.2 Hz, J = 1.8 Hz, 1H) , 7..27 (dt, J = 8.1 Hz, J = 1.7 Hz, 1H) , 7.08 (d, J = 8.1 Hz , 1H) , 6.12 (s, 2H) , 4.45 (t, J = 6 Hz, 2H) , 4.10 (s, 3H) , 3.60 (m, 2H) , 2.95 (s, 9H) , 2.65 (m, 2H) . ESI-MS: m/z 597 (100%, M+) . A una solución de ácido acético (5 mL) y tetrahidrofurano (5 mL) en un baño de hielo/sal/agua, se agregó nitrito de sodio (143 mg, 2.08 mmol) . Después de la agitación durante 10 minutos, se agregó el formazan anterior (340 mg, .051 mmol) . Después de 1 hora, la reacción se dejó calendar a temperatura ambiente y se agitó durante toda la noche. La mezcla color marrón oscuro se filtró y el sólido se lavó con ácido acético (3x5 mL) , acetato de etilo (2x10 mL) y hexano (10 mL) . El producto filtrado se concentró en un evaporador giratorio a 30°C luego se secó bajo vacío durante toda la noche. El residuo se mezcló espesamente con acetato de etilo (15 mL) , se asentó y se decantó. Este proceso se repitió. Luego se agregó hexano (10 mL) . El producto se filtró y se secó durante toda la noche para proporcionar la sal de tet color marrón, deseada (260 mg, 75%) RMN 13C (400 MHz, DMSO-dg) : d 129, 128, 126, 123, 121, 119, 115, 114, 112, 108, 105, 101, 98, 66, 63, 57, 51, 22 RMN XH (400 MHz, DMSO-dg): d 8.32 (m, 1H) , 8.02 (m, 4H) , 7.87 (d, J = 1.8 Hz, 1 Hz) , 7.78 (m, 3H) , 7.66 (d, 8.2 Hz, 1H) , 7.47 (t, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.33 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 6.28 (s, 2H) , 4.13 (s, 3H) , 3.15 (m, 2H) , 2.85 (s, 9H) , 1.87 (m, 2H) . ESI-MS: m/z 298 (100%, M2+) , 709 (20%, M++TFA) .

Ejemplo 6 Preparación de la sal de nitrito de dibromo del 5- [4- (3-trimetilamonio) propoxi -3 -metoxi-fenil] -3- [2- (3-trimetilamonio) propoxi-fenil] -2- (5-cloro-4-difluorometil-tiazol-2-il) -2H-tetrazolio El 4 -hidroxi-3 -metoxibenzaldehído se hizo reaccionar con el bromuro de 3 -bromopropiltrimetilamonio 7 para introducir otro sustituyente de trimetilamoniopropoxi . El producto se hizo reaccionar con 5-cloro-4-difluorometil-2 -hidrazino-tiazol para producir una hidrazona. La hidrazona se hizo reaccionar con el bromuro de 3- (2-aminofenoxi) propiltrimetilamonio como se describiera en el Ejemplo 1 para producir el formazan, el cual se convierte a la sal de tetrazolio correspondiente. El 4-hidroxi-3-metoxi -benzaldehído (Vanillin, Aldrich, 4.56 g, 30 mmol) fue alquilado con el bromuro de 3 -bromopropiltrimetilamonio (8.8 g, 34 mmol) bajo las mismas condiciones que aquellas utilizadas en el Ejemplo 1 para preparar un producto color blanquecino (9.73 g, 97%) identificado por las siguientes propiedades espectrales. RMN 13C (400 MHz, DMSO-dg): d 192.5, 155, 150, 130, 125.75, 112.6, 110, 66.5, 63.4, 56, 25.5. RMN XH (400 MHz, DMSO-dg): d 9.88 (s, 1H) , 7.58 (dd, J = 8.2 Hz , J = 1.9 Hz, 1H) , 7.41 (d, J = 1.9 Hz, 1H) , 7.22 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 4.35 (t, J = 6.4 Hz, 2H) , 3.49 (m, 2H) , 3.14 (s, 9H) , 2.30 (m, 2H) . ESI-MS: m/z 252.2 (100%, M+) . A una suspensión espesa del benzaldehído alquilado anterior (6.8 g, 20.5 mmol) y 5-cloro-4-difluorometil-2 -hidrazino-tiazol (Bayer, 3.72 g, 18.6 mmol) en MeOH (60 mL) se agregó ácido acético (0.55 mL) . La suspensión espesa casi se disolvió después de 5 minutos. La mezcla resultante se calentó a 80°C durante toda la noche. Después de enfriar la reacción a temperatura ambiente, la solución se agregó lentamente a EtOAc (650 mL) . Se formó un producto precipitado color gris claro. La mezcla se agitó durante 30 minutos. El sólido se filtró y se lavó con EtOAc y hexano. El producto color gris claro se transfirió a una botella color ámbar y se secó bajo vacío durante toda la noche para proporcionar la hidrazona deseada (8.7 g, 87%) identificada por las siguientes propiedades. RMN 19F : (376 MHz, DMSO-dg) : d 111.08 (d, J = 47 Hz) , RMN 13C (400 MHz, DMSO-d6) : d 143, 121, 114, 109, 108.5, 66, 63, 55, 53, 39, 22. RMN ?K (400 MHz, DMSO-dg) : 12.37 (s, 1H) , 7.29 (d, J = 1.9 Hz, 1H) , 7.19 (dd, J = 10 Hz, J = 1.8 Hz, 1H) , 7.06 (t J = 7.7 Hz, 1H) , 7.18 (mm, 1H) , 6.95 (t, JHF = 47, 1H) , 4.09 (t, J = 6.1 Hz, 2H) , 3.83 (s, 3H) , 3.47 (m, 2H) , 3.47 (m, 2H) , 3.29 (s, 9H) , 2.50 (m, 2), 2.20 (m, 2H) . ESI-MS: m/z 433.1 (100%, M+) . La hidrazona anterior (7.08 g, 13.86 mmol) se hizo reaccionar con el derivado de anilina del Ejemplo 1 (6 g, 20.76 mmol) bajo condiciones similares a aquellas del Ejemplo 1 para proporcionar un formazan color azul oscuro (8.56 g, 76%) identificado por las siguientes propiedades espectrales. RMN 19F: (376 MHz, DMSO-dg) : d 177.77 (d, J = 59.2 Hz) RMN 13C (400 MHz, DMSO-d5.) : d 153, 148.98, 148.63, 144.5, 136.5, 132.73, 132.74, 127, 121.59, 119.53, 115.54, 113.96, 113.58, 110.98, 108.92, 66.10, 65.79, 62.77, 55.54, 52.15, 22.45, 22.25. RMN H (400 MHz, DMSO-dg) : d:11.78 (s amplio, 1H) , 8.03 (dd, J = 8.1b Hz, J = 1.5 Hz, 1H) , 7.56 (m, 1H) , 7.52 (dt, J = 8.5 Hz, J = 2 Hz, 1H) , 7.50 (d, J = 2 Hz, 1H) , 7.35 (dd, J = 8.5 Hz, J = 1 Hz, 1H) , 7.30 (d, J = 7.9 Hz, 1H) , 7.18 (mm, 1H) , 7.17 (t, JHF = 59.2, 1H) , 4.35 (t, J = 5.8 Hz, 2H) , 4.13 (t, J = 6.1 Hz, 2H) , 3.88 (s, 3H) , 3.55 (m, 2H) , 3.50 (m, 2H) , 3.14 (s, 9H) , 3.07 (s, 9H) , 2.50 (m, 2H) , 2.30 (m, 2H) . ESI MS : m/z 652.2 (45%, M+) , 326.8 (100%, M+) . El formazan anterior (2.44 g, 3 mmol) se convirtió a la sal de tetrazolio bajo condiciones similares a aquellas utilizadas en el Ejemplo 1 excepto que la mezcla de reacción se calentó a 40°C durante 15 horas. El producto se identificó por las siguientes propiedades espectrales. RMN 13C (100 MHz, DMSO-dg) : d 136.7, 128.5, 121.9, 121.8, 114.5, 113.5, 110.2, 108.1, 105.7, 66.7, 66.1, 62.5, 62.1, 56.1, 52.1, 51.8, 21.8, 21.2. RMN ?U (400 MHz, DMSO-d6) : d 8.06 (dd, J = 8.1 Hz, J = 1.5 Hz, 1H) , 7.93 (m, 8H) , 7.77 (d, J = 2 Hz, 1H) , 7.53 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 7.38 (t, J = 8.5 Hz, 2H) , 7.26 (d, J = 52.2 Hz, 1H) , 4.23 (t, J = 6H, 2H) , 4.17 (t, J = 6.1 Hz, 2H) , 3.94 (s, 3H) , 3.53 (m, 2H) , 3.32 (m, 2H) , 3.14 (s, 9H) , 3.01 (s, 9H) , 2.26 (m, 2H) , 2.03 (m, 2H) , ESI MS : m/z 652.2 (45%, M+) , 326.8 (100%, M+) , 326.8 (100%, M2+) .

Ejemplo 7 Preparación de la sal de nitrito de dibromo del 5- [4- (3-trimetilamonio) ropoxi-3 -metoxi-fenil] -3- [2- (3-trimetilamonio) ropoxi-fenil] -2- (6-etoxi-benzotiazol-2-il) -2H-tetrazolio El 6-etoxi-2-hidrazino-benzotiazol se hizo reaccionar con el benzaldehído alquilado elaborado como en el Ejemplo 6 para formar una hidrazona, la cual entonces se hace reaccionar con la anilina sustituida elaborada en el Ejemplo 1 para hacer el formazan. El formazan se convirtió a la sal de tetrazolio equivalente. El 6-etoxi-2-hidrazino-benzotiazol (Acros, 4.62 g, 22 mmol) se hizo reaccionar con el 4- (3-trimetilamoniopropoxi) -3 -metoxi -benzaldehído bajo condiciones similares a las del Ejemplo 6 para proporcionar un producto color gris claro (10.23 g, 95%) identificado por las siguientes propiedades. RMN 13C (400 MHz, DMSO-d6) : d 165.58, 153.82, 153.74, 149.24, 148.96, 142.42, 128.01, 120.16, 118.24, 113.62, 113.54, 108.66, 106.49, 101.33, 65.83, 63.51, 62.86, 55.32, 52.16, 22.51, 14.6. RMN ?H (400 MHz, DMSO-dg): d 11.98 (s amplio, 1H) , 8.03 (s, 1H) , 7.38 (d, J = 2.2 Hz, 1H) , 7.34 (d, J = 8.7 Hz, 1H) , 7.32 (d, J = 1.8 Hz, 1H) , 7.20 (dd, J = 8.4 Hz, J = 1.8 Hz, 1H) , 7.07 (d, J = 8.4 Hz, 1H) , 6.89 (dd, J = 8.7 Hz, J = 2.5 Hz, 1H) , 4.09 (t, J = 6.1H, 2H) , 4.03 (t, J - 7 Hz, 2H) , 3.84 (m, 3H) , 3.49 (m, 2H) , 3.12 (s, 9H) , 2.22 (m, 2H) , 1.33 (t, J = 7 Hz) . ESI-MS: m/z 561.2 (100%, M+) . ESI-MS: m/z 443.1 (78%, M+) , 222.1 (100%, M+2) . La hidrazona preparada anteriormente (3.6 g, 6.93 mmol) se hizo reaccionar con la anilina del Ejemplo 1, (3 g, 10.38 mmol) bajo condiciones similares a aquellas utilizadas en el Ejemplo 1 para preparar el formazan excepto que se utilizó una mezcla de piridina y DMF 3:1 como solvente para proporcionar el producto color azul oscuro deseado (3.8 g, 66%) identificado por las siguientes propiedades espectrales. RMN 13C (400 MHz, DMSO-dg): d 130.5, 123.2, 121.8, 118.8, 116, 115.3, 114.1, 113.8, 109.8, 106.3, 67.1, 66.5, 63.6, 52.5, 22.6, 22.5, 14.2. RMN XH (400 MHz, DMSO-dg): d 11.78 (s amplio, 1H) , 8.01 (d amplio, J = 8 Hz, 1H) , 7.81 (s amplio, 1H = 8.8 Hz, 1H) , 7.62 (m, 3H) , 7.48 (t, J = 8 Hz, 1H) , 7.33 (d, J = 8.3 Hz, 1H) , 7.16 (m, 1H) , 7.10 (dd, J = 8.8 Hz, J = 2.4 Hz, 1H) , 4.38 (t, J = 5.8 Hz, 2H) , 4.13 (m, 2H) , 3.91 (s, 3H) , 3.55 ( , 2H) , 3.50 (m, 2H) , 3.13 (s, 9H) , 3.08 (s, 9H) , 2.54 (m, 2H) , 2.25 (m, 2H) , 1.38 (t, J = 7 Hz, 3H) . ESI MS : m/z 776 (12%, M+'+TFA) 662.2 (45%, M+) , 331.8 (100%, M+2) . El formazan anterior (1.24 g, 1.5 mmol) se convirtió a la sal de tetrazolio (2 g, >100%) bajo condiciones similares a aquellas utilizadas en el Ejemplo 1. El producto fue identificado por las siguientes propiedades espectrales. RMN 13C (400 MHz, DMSO-dg): d 136.8, 128.1, 125.4, 121.5, 121.4, 114, 113.5, 109.8, 106.8, 66.6, 66.2, 64.5, 62.5, 62.2, 56.1, 52.2, 52.1, 22.1, 21.5, 13.5. RMN XH (400 MHz, DMSO-dg): d 8.04 (dd, J = 8 Hz, J = 1.5 Hz, 1H) , 7.95 (m, 4H) , 7.78 (d, J = 2 Hz, 3H) , 7.54 (d, J = 8.5 Hz, 1H) , 7.40 (t, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.38 (d, J = 8.6 Hz, 1H) , 4.23 (t, J = 6.1H, 2H) , 4.1 (q, J = 8 Hz, 2H) , 4.12 (m, 2H) , 3.96 (s, 3H) , 3.53 (m, 2H) , 3.50 (m, 2H) , 3.18 (m, 2H) , 3.15 (s, 9H) , 2.92 (2, 9H) , 2.30 (m, 2H) , 1.89 (m, 2H) , 1.40 (t, J = 7 Hz, 2H) . ESI MS : m/z 220.8 (100%, M+3) .

Ejemplo 8 Preparación de la sal de nitrito de dibromo del 5- [4- (3-trimetilamonio) ropoxi -3 -metoxi-fenil] -3- [2- (3-trimetilamonio) propoxi-fenil] -2- (6-bromo-benzotiazol-2 -il) -2H-tetrazolio El 6-bromo-2-hidrazino-benzotiazol se utilizó en lugar del 6-etoxi-2 -hidrazino-benzotiazol en el Ejemplo 7 para hacer la hidrazona apropiada. Entonces la hidrazona se sujetó a las mismas condiciones para producir el formazan deseado (44% en total) RMN XH (400 MHz, DMSO-d6) , d 7.90 (dd, J = 8.1 Hz, J = 1.7 Hz, 1H) , 7.58 (dt, J = 8.2 Hz, J = 1.7 Hz, 1H) , 7.39 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.15 (d, J = 1.7 Hz, 1H) , 4.25 (t, J = 6 Hz , 2H) , 3.45 (m, 2H) , 3.11 (s, 9H) , 2.48 (m, 2H) , 2.25 (m, 2H) . ESI-MS: m/z 249 (100%, M2+) . El formazan (322 mg, 0.375 mmol) se sujetó a las mismas condiciones que en el Ejemplo 7 para formar la sal de tetrazolio excepto que la reacción se calentó a 40°C durante toda la noche para producir la sal de tetrazolio deseada (478 mg, >100%) . RMN 13C (100 MHz, DMSO-dg) : d 151, 139.45, 134.71, 125.14, 121, 115.39, 66.59, 62.84, 52.39, 22.48: d 7.90 RMN ?K (400 MHz, DMSO-dg), 8.74 (d, J = 2.1 Hz, 1H) , 7.95 (m, 5H) , 7.78 (d, J = 2.1 Hz, 1H) , 7.51 (d, J = 7.8 Hz, 1H) , 7.39 (m, 2H) , 4.2 (m, 2H) , 4.08 (m, 2H) , 3.96 (s, 3H) , 3.53 (m, 2H) , 3.19 (m, 2H) , 3.11 (s, 9H) , 2.91 (s, 9H) , 2.24 (m, 2H) , 1.87 (m, 2H) . ESI-MS: m/z 233 (100%, M3+) .

Ejemplo 9 Preparación de la sal de tribromuro del 5- [4- (3 -trimetilamonio) propoxi -3 -metoxi -fenil] -3- [2- (3 -trimetilamonio) -propoxi-fenil] -2- (6-etoxi-benzotiazol-2-il) -2H-tetrazolio A una suspensión espesa de formazan (del Ejemplo 7, 1.18 g, 1.43 mmol) en acetonitrilo (15 mL) se agregó n-bromosuccinimida (300 mg, 1.69 mmol) a temperatura ambiente. Después de 1 hora, todo se disolvió. Después de 3 horas, se formó un ppt color anaranjado. La reacción se agitó durante toda la noche. El ppt se filtró y se lavó con acetonitrilo (3x5 mL) . El producto color anaranjado resultante se secó bajo vacío durante toda la noche. (1.07 g, 83%) RMN 13C (100 MHz, DMSO d6) : d 151, 139.45, 134.71, 125.14, 121, 115.39, 66.59, 62.84, 52.39, 22.48 RMN XH (400 MHz, DMSO-dg): d 8.08 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 8.04 (d, J = 1.7 Hz, 1H) , 7.94 (m, 3H) , 7.79 (s amplio, 1H) , 7.55 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.40 (d, J = 8.2 Hz, 1H) , 7.30 (dd, J = 8.2 Hz, J = 1.7 Hz, 1H) , 4.23 (t, J = 6 Hz, 2H) , 4.15 (q, J = 8.2 Hz, 2H) , 4.10 (m, 2H) , 3.95 (s, 3H) , 3.57 (m, 2H) , 3.22 ( , 2H) , 3.15 (s, 9H) , 2.95 (s, 9H) , 2.30 (m, 2H) , 1.90 (m, 2H) , 1.4 (t, J = 8.2 Hz) . ESI-MS: m/z 221 (100%, M3+) . La solubilidad de las sales de tetrazolio hechas en los Ejemplos 1 a 9 se determinó al agregar el amortiguador de fosfato 0.2M, pH ~ 7.5, a temperatura ambiente a una cantidad conocida de cada compuesto hasta que el compuesto se disolvió. Los resultados se muestran en la Tabla 1, donde se comparan con WST-4, una sal de tiazolil-tetrazolio de Dojindo Laboratories, HTC-045, una sal de tiazolil-tetrazolio de Bayer Corp. y una HTC-045 modificada donde el grupo metoxi fue reemplazado por un grupo 3-sulfonatopropoxi (Véase la Figura 3) . Tabla 1 Aunque la solubilidad mejorada de las sales de tetrazolio se ha obtenido al agregar sustituyentes de trialquil-amonio-propoxi a las sales de tiazolil-tetrazolio, este mejoramiento no se predijo fácilmente, basándose en la técnica anterior. La técnica anterior predeciría que la adición de un grupo 3-sulfonatopropoxi en la molécula mejoraría la solubilidad en agua de la molécula. La introducción de un grupo ácido sulfónico en una molécula fue utilizada por Doj indo Laboratories. Sin embargo, la sustitución de un grupo 3-sulfonato-propoxi por el grupo metoxi en el grupo fenilo unido al anillo de tetrazolio (véase la HTC-045 modificada, Figura 3) dio por resultado una solubilidad más baja, 8 mM que HTC-045 (21 mM) . De esta manera en la estructura molecular, este fenómeno no fue evidente. Se descubrió que un grupo polar diferente mejoraría la solubilidad en agua. Sin embargo, se observaron otros efectos inesperados, como será descrito posteriormente. La sustitución de un grupo trimetil-amonio-propoxi por el grupo metoxi incrementó la solubilidad de 21 mM (HTC-045) a 33 mM (Ejemplo 1) y la adición de un segundo grupo trimetil -amonio-propoxi (Ejemplo 6) incrementó sustancialmente la solubilidad a 181 mM . Sin embargo, la solubilidad se disminuyó sustancialmente cuando un contraión de tetrafluoro-borato fue sustituido por el nitrato. (Comparar el Ejemplo 2 con el Ejemplo 1) . La solubilidad de la sal de tetrazolio en el Ejemplo 1 se disminuyó en el ejemplo 3 cuando el grupo trimetil-amonio-propoxi se modificó a un grupo dimetil -amonio-propoxi . El incremento sustancial en la solubilidad resultante de la adición de dos grupos trimetil-amonio-propoxi (Ejemplo 6) también se descubrió inesperadamente en el Ejemplo 4 (167 mM) donde solo se incluyó un grupo trimetil -amonio-propoxi , pero el grupo tiazolil sustituido fue reemplazado por un grupo benzotiazoilo no sustituido. Sin embargo, la adición suplementaria al grupo tiazoilo, mostrada en el Ejemplo 5 donde se utilizó un grupo naftil-tiazoilo sustituido, se descubrió que tiene pobre solubilidad (5 mM) . En otro resultado inesperado, mostrado en el Ejemplo 7, la adición de dos grupos trimetil -amonio y un grupo benzotiazoilo, ambos que proporcionaron incrementos significativos en cuanto a la solubilidad, pareció no tener un efecto complementario. El Ejemplo 7 tuvo una solubilidad de 167 mM. Otro incremento sustancial en la solubilidad resultó cuando el grupo etoxi en el grupo benzotiazoilo del Ejemplo 7 fue reemplazado por un grupo bromo en el Ejemplo 8. La solubilidad incrementó de 169 mM a 290 M, el valor más alto mostrado en este punto. Un resultado similar se descubrió cuando el contraión en el Ejemplo 7, el ion de nitrito, fue reemplazado por un ion de bromuro en el Ejemplo 9. La solubilidad incrementó de 169 mM a 260 mM. Parece que la inclusión de bromuro es un medio efectivo para mejorar la solubilidad de esta familia de sales de tetrazolio . Los compuestos preparados y sometidos a prueba por su solubilidad tuvieron propiedades espectrales algo diferentes. Los espectros de absorción de cada formazan formado a partir de la sal de tetrazolio y sometido a prueba por la solubilidad en la Tabla 1 se midieron con un espectrofotómetro UV-Vis de red de diodos Hewlett Packard Modelo 8453. Las soluciones de 100 µM de una sal de tetrazolio se prepararon en amortiguador de fosfato de potasio 100 mM. Los espectros de formazan se midieron después de la adición de una sal de ácido de ascorbato en un exceso de 5 veces para convertir las sales de tet a sus formazanes. Los resultados se presentan en las Figuras 5a y 5b. Como se observara previamente, los formazanes de sales de tiazoliltetrazolio se propusieron para absorber la luz en longitudes de onda superiores a 640 nM y era deseable una respuesta plana. En ambas Figuras 5a y 5b, la absorbancia de HTC-045 y WST-4 ha sido colocada en un diagrama para comparación. Mientras que WST-4 demuestra una absorbancia máxima en el intervalo de aproximadamente 560 nM, la HTC-045 muestra una absorbancia relativamente plana entre aproximadamente 460 nM a 660 nM . Sin embargo, su solubilidad es más baja que WST-4. La adición del grupo trimetil -amonio-propoxi alteró las curvas espectrales. Los Ejemplos 1, 2, 3, 4, 6, 7 y 8 tienen una absorbancia más baja que HTC-045, pero las curva son relativamente planas por todo el intervalo mostrado. Parece que la sal de tet del Ejemplo 5, que incluye un grupo naftil-tiazoilo no únicamente tuvo baja solubilidad sino que mostró un asenso en la absorbancia contra la curva de longitud de onda, no demostrando regiones planas comparables a la HTC-045 o los compuestos modificados de los Ejemplos 1, 2, 3, 4, 6, 7 y 8. El Ejemplo 9 mostró una curva espectral que tenía una respuesta relativamente plana entre 400 y 640 nM así como también mostró ser sumamente soluble. Idealmente, una sal de tetrazolio debe producir un formazan que tenga alta absorbancia dentro de un amplio intervalo de longitudes de onda de manera que el color desarrollado cuando se hace reaccionar un analito pueda medirse de manera fácil y confiable. De esta manera, es mucho más deseable una curva relativamente plana. Como se puede observar a partir de las solubilidades de los formazanes resultantes de las sales de tet sometidas a prueba, todas éstas con la posible excepción del Ejemplo 5 parecen prometedoras como indicadores útiles. La sal de tetrazolio del Ejemplo 5 es un compuesto novedoso y podría utilizarse como un indicador, pero no se preferiría sobre aquellas que tienen curvas espectrales más uniformes y mayor solubilidad.

Uso de Sales de Tetrazolio Mientras que las sales de tetrazolio son indicadores útiles para muchas aplicaciones, son particularmente valiosas cuando se utilizan en tiras de prueba utilizadas para medir analitos en muestras biológicas. Una aplicación importante es en la medición del contenido de glucosa en la sangre. Las tiras de prueba comprenden típicamente un 4 portador y una composición reactiva. Los reactivos (por ejemplo glucosa deshidrogenasa) y un co- factor (por ejemplo, NAD o PQQ) reaccionan con el analito (por ejemplo glucosa) en las muestras biológicas y un mediador (por ejemplo PMS o la enzima diaforasa) reduce la sal de tiazolil-tetrazolio a su formazan coloreado correspondiente. El color resultante se mide usualmente de manera más precisa en un medidor diseñado para ese propósito. Una fuente de luz (por ejemplo un LED) suministra luz incidente sobre la tira de prueba. La luz reflejada de la tira de prueba es medida por un detector de luz y correlacionada con la cantidad del analito que se ha hecho reaccionar. Los indicadores de tiazolil-tetrazolio de la invención proporcionan el espectro amplio disponible a partir de los indicadores descritos en la Patente Norteamericana No. 5,126,275 y otros mencionados al principio. Pero, como se muestra en los Ejemplos, muchos de los nuevos indicadores de tiazolil-tetrazolio tienen una solubilidad mejorada en comparación con la HTC-045, proporcionando con lo cual tiempos de prueba más rápidos y resultados más precisos. La invención se resume en la siguiente modalidad alternativa .

Modalidad Alternativa A Un compuesto que tiene la fórmula en donde A = contraión a = 1-3 b = 0-3 X = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o heteroalquilo Ri = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono uno de R2 y R3 es alquilo y el otro es XN+Hb (R_) 3_b, o R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi uno de R4 y R5 es halógeno y el otro es alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, uno o ambos de R4 y R5 son XN+Hb (R ) 3_b, o R4 y R5 se unen para formar un anillo aromático o heteroaromático o un anillo aromático sustituido o un anillo heteroaromático sustituido. Modalidad Alternativa B El compuesto de la modalidad alternativa A que tiene la fórmula en donde: A = contraión X = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono a = 1-3 b = 0-3 Ri = alquilo de 1 a 3 átomos de carbono uno de R2 y R3 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono y el otro es XN+Hb (Ri) 3_b, o R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi R4= CHF2 R5 = Halógeno. Modalidad Alternativa C El compuesto de la modalidad alternativa B en donde X es propilo b es cero Ri es metilo R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi R4 es CHF2 R5 es Cl . Modalidad Alternativa D El compuesto de la modalidad alternativa B en donde X es propilo b es 1 R es metilo R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi R4 es CHF2 R5 es Cl . Modalidad Alternativa E El compuesto de la modalidad alternativa B en donde X es propilo b es cero Ri es metilo R2 es trimetilamonio-propilo R3 es metoxi R4 es CHF2 R5 es Cl. Modalidad Alternativa F El compuesto de la modalidad alternativa A que tiene la fórmula en donde : a = 1-3 A = contraión X = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono b = 0-3 Ri = alquilo de 1 a 3 átomos de carbono uno de R2 y R3 es alquilo y el otro es XN+Hb (Rx) 3-b, o R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi uno de R4 y R5 es halógeno y el otro es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, o R4 y R5 son hidrógeno R6 = alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, hidrógeno o halógeno . Modalidad Alternativa G El compuesto de la modalidad alternativa F en donde X es propilo b es cero Ri es metilo R2 es trimetilamonio-propilo R3 es metoxi R4 , R5 y R6 son hidrógeno. Modalidad Alternativa H El compuesto de la modalidad alternativa F en donde X es propilo Ri es metilo b es cero R2 es trimetilamonio-propilo R3 es metilo R4 y R5 forman un anillo aromático R6 es metoxi. Modalidad Alternativa I El compuesto de la modalidad alternativa F en donde X es propilo b es cero Ri es metilo R2 es trimetilamonio-propilo R3 es metilo R y R5 son hidrógeno R6 es etoxi.

Modalidad Alternativa J El compuesto de la modalidad alternativa F en donde X es propilo b es cero Ri es metilo R2 es trimetilamonio-propilo R3 es metilo R y R5 son hidrógeno Rg es bromo . Modalidad Alternativa K El compuesto de la modalidad alternativa A en donde al menos este contraión es nitrito, fosfato, fosfato de hidrógeno, fosfato de dihidrógeno, sulfato de hidrógeno, sulfato, carbonato de hidrógeno, carbonato, metanosulfonato, fluoroborato, bromuro, cloruro, yoduro o combinaciones de los mismos. Proceso Alternativo L Un método para medir un analito contenido en un fluido biológico, el analito está adaptado para producir un cambio de color proporcional con una reacción, el método comprende las acciones que consisten en: proporcionar una sal de tetrazolio como un indicador, la sal de tetrazolio que tiene la fórmula de en donde A = contraión a = 1-3 b = 0-3 X = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o heteroalquilo Ri = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono uno de R2 y R3 es alquilo y el otro es XN+Hb (Ri) 3_b, o R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi uno de R4 y R5 es halógeno y el otro es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, uno o ambos de R y R5 son XN+Hb (Rx ) 3_b, o R y R5 se unen para formar un anillo aromático o heteroaromático o un anillo aromático sustituido o un anillo heteroaromático sustituido; y determinar la concentración del analito en el fluido biológico con la ayuda de la sal de tetrazolio como el indicador.

Proceso Alternativo M El método del proceso alternativo L en donde el analito es glucosa. Proceso Alternativo N El método del proceso alternativo M en donde el fluido biológico es sangre entera. Proceso Alternativo 0 El método del proceso alternativo M en donde la sal de tetrazolio tiene la fórmula en donde : A = contraión X = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono a = 1-3 b = 0-3 Ri = alquilo de 1 a 3 átomos de carbono uno de R2 y R3 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono y el otro es XN+Hb (Ri) 3_b, o R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi R4 = CHF2 R5 = Halógeno. Proceso Alternativo P El método del proceso alternativo 0 en donde X es propilo b es cero Ri es metilo R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi R4 es CHF2 R5 es Cl . Proceso Alternativo Q El método del proceso alternativo 0 en donde X es propilo b es 1 Ri es metilo R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi R4 es CHF2 R5 es Cl . Proceso Alternativo R El método del proceso alternativo O en donde X es propilo b es cero Ri es metilo R2 es trimetilamonio-propilo R3 es metoxi R4 es CHF2 R5 es Cl . Proceso Alternativo S El método del proceso alternativo L que tiene la fórmula en donde : a = 1-3 A = contraión X = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono b = 0-3 Ri = alquilo de 1 a 3 átomos de carbono uno de R2 y R3 es alquilo y el otro es XN+Hb (Rx ) 3.b, o R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi uno de R4 y R5 es halógeno y el otro es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, o R4 y R5 son hidrógeno R6 = alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, hidrógeno o halógeno . Proceso Alternativo T El método del proceso alternativo S en donde X es propilo b es cero Ri es metilo R2 es trimetilamonio-propilo R3 es metoxi R4, R5 y R6 son hidrógeno. Proceso Alternativo U Un método del proceso alternativo S en donde X es propilo Ri es metilo b es cero R2 es trimetilamonio-propilo R3 es metilo R4 y R5 forman un anillo aromático R6 es metoxi . Proceso Alternativo V El método del proceso alternativo S en donde X es propilo b es cero Ri es metilo R2 es trimetilamonio-propilo R3 es metilo R4 y R5 son hidrógeno R6 es etoxi . Proceso Alternativo W El método del proceso alternativo S en donde X es propilo b es cero Ri es metilo R2 es trimetilamonio-propilo R3 es metilo R4 y R5 son hidrógeno R6 es bromo. Proceso Alternativo X El método del proceso alternativo L en donde al menos este contraión es nitrito, fosfato, fosfato de hidrógeno, fosfato de dihidrógeno, sulfato de hidrógeno, sulfato, carbonato de hidrógeno, carbonato, metanosulfonato, fluoroborato, bromuro, cloruro, yoduro o combinaciones de los mismos. Proceso Alternativo Y Un método para incrementar la solubilidad de sales de tiazolil-tetrazolio que tienen el grupo tiazoilo unido en el tercer átomo de nitrógeno del anillo de tetrazolio, el método comprende agregar al menos un grupo trialquil-amonio-alcoxi como un sustituyente a la sal de tiazolil-tetrazolio. Proceso Alternativo Z El método del proceso alternativo Y en donde la sal de tiazolil-tetrazolio tiene sustituyentes de fenilo en el tercer átomo de nitrógeno y en el átomo de carbono del anillo de tetrazolio. Proceso Alternativo AA El método del proceso alternativo Z en donde al menos este grupo trialquil-amonio-alcoxi es un grupo trimetil-amonio-propoxi . Proceso Alternativo BB El método del proceso alternativo Z en donde al menos este grupo trialquil-amonio-alcoxi es un sustituyente de los grupos fenilo. Proceso Alternativo CC El método del proceso alternativo Z en donde al menos un grupo trialquil-amonio-alcoxi es un sustituyente de ambos sustituyentes de fenilo. Proceso Alternativo DD El método del proceso alternativo Z en donde el grupo tiazoilo es un grupo benzotiazoilo. Proceso Alternativo EE El método del proceso alternativo Z en donde la sal de tiazolil-tetrazolio tiene contraiones de nitrito, fosfato, fosfato de hidrógeno, fosfato de dihidrógeno, sulfato de hidrógeno, sulfato, carbonato de hidrógeno, carbonato, metanosulfonato, fluoroborato, bromuro, cloruro, yoduro o combinaciones de los mismos. Proceso Alternativo FF El método del proceso alternativo EE en donde los contraiones son nitrito de bromo, nitrito de dibromo o tribromuro .

Claims (32)

1. REIVINDICACIONES Un compuesto, caracterizado porque tiene la fórmula en donde: A = contraión, a = 1-3, b = 0-3, X = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o heteroalquilo, Ri = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, uno de R2 y R3 es alquilo y el otro es XN+Hb (Ri) 3_b, o R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi, uno de R4 y R5 es halógeno y el otro es alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, uno o ambos de R4 y R5 son XN+Hb (Ri) 3-b, o R4 y R5 se unen para formar un anillo aromático o heteroaromático o un anillo aromático sustituido o un anillo heteroaromático sustituido.
2. 2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene la fórmula en donde: A = contraión, X = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, a = 1-3, b = 0-3, Rx = alquilo de 1 a 3 átomos de carbono, uno de R2 y R3 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono y el otro es XN+Hb(R?)3 b, o R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi , R4= CHF2, R5 = Halógeno.
3. 3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque X es propilo, b es cero, Rx es metilo, R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi , R4 es CHF2, R5 es Cl .
4. 4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque X es propilo, b es 1, Ri es metilo, R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi , R4 es CHF2, R5 es Cl .
5. 5. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado porque X es propilo, b es cero, Ri es metilo, R2 es tpmetilamonio-propilo, R3 es metoxi, R4 es CHF2 , R5 es Cl .
6. 6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque tiene la fórmula en donde: a = 1-3, A = contraión, X = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, b = 0-3, Rx = alquilo de 1 a 3 átomos de carbono, uno de R2 y R3 es alquilo y el otro es XN+Hb (R_) 3_b, o R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi, uno de R4 y R5 es halógeno y el otro es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, o R4 y R5 son hidrógeno, R6 = alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, hidrógeno o halógeno.
7. 7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque X es propilo, b es cero, Ri es metilo, R2 es trimetilamonio-propilo, R3 es metoxi, R4 , R5 y R6 son hidrógeno.
8. 8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque X es propilo, Ri es metilo, b es cero, R2 es trimetilamonio-propilo, R3 es metilo, R4 y R5 forman un anillo aromático, Rs es metoxi.
9. 9. El compuesto de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque X es propilo, b es cero, Ri es metilo, R2 es trimetilamonio-propilo, R3 es metilo, R4 y R5 son hidrógeno, R6 es etoxi.
10. 10. El compuesto de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque X es propilo, b es cero, Ri es metilo, R2 es trimetilamonio-propilo, R3 es metilo, R4 y R5 son hidrógeno, R6 es bromo.
11. 11. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque al menos el contraión es nitrito, fosfato, fosfato de hidrógeno, fosfato de dihidrógeno, sulfato de hidrógeno, sulfato, carbonato de hidrógeno, carbonato, metanosulfonato, fluoroborato, bromuro, cloruro, yoduro o combinaciones de los mismos.
12. 12. Un método para medir un analito contenido en un fluido biológico, el analito está adaptado para producir un cambio de color proporcional con una reacción, el método está caracterizado porque comprende las acciones que consisten en: proporcionar una sal de tetrazolio como un indicador, la sal de tetrazolio que tiene la fórmula de en donde: A = contraión, a = 1-3, b = 0-3, X = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono o heteroalquilo, Ri = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, uno de R2 y R3 es alquilo y el otro es XN+Hb (Ri) 3-b, o R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi, uno de R4 y R5 es halógeno y el otro es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, uno o ambos de R4 y R5 son XN+Hb (Rx) 3_b, o R4 y R5 se unen para formar un anillo aromático o heteroaromático o un anillo aromático sustituido o un anillo heteroaromático sustituido; y determinar la concentración del analito en el fluido biológico con la ayuda de la sal de tetrazolio como el indicador.
13. 13. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque el analito es glucosa .
14. 14. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque el fluido biológico es sangre entera.
15. 15. El método de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado porque la sal de tetrazolio tiene la fórmula en donde: A = contraión, X = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, a = 1-3, b = 0-3, R_ = alquilo de 1 a 3 átomos de carbono, uno de R2 y R3 es alquilo de 1 a 4 átomos de carbono y el otro es XN+Hb (R? ) 3_b, o R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi, R4 = CHF2 , R5 = Halógeno.
16. 16. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque X es propilo, b es cero, Ri es metilo, R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi, R4 es CHF , R5 es Cl .
17. 17. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque X es propilo, b es 1, Ri es metilo, R2 y R3 forman un grupo metilen-dioxi, R4 es CHF2, R5 es Cl .
18. 18. El método de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado porque X es propilo, b es cero, Ri es metilo, R2 es trimetilamonio-propilo, R3 es metoxi, R4 es CHF2, R5 es Cl .
19. 19. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque tiene la fórmula en donde: a = 1-3, A = contraión, X = alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, b = 0-3, Ri = alquilo de 1 a 3 átomos de carbono, uno de R2 y R3 es alquilo y el otro es XN+Hb ( R ) 3_b, o R y R3 forman un grupo metilen-dioxi, uno de R4 y R5 es halógeno y el otro es un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono sustituido por halógeno, o R4 y R5 son hidrógeno, R6 = alcoxi de 1 a 4 átomos de carbono, hidrógeno o halógeno.
20. 20. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque X es propilo, b es cero, Ri es metilo, R2 es trimetilamonio-propilo, R3 es metoxi, R , R5 y R6 son hidrógeno.
21. 21. Un método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque X es propilo, Ri es metilo, b es cero, R2 es trimetilamonio-propilo, R3 es metilo, R4 y R5 forman un anillo aromático, R6 es metoxi.
22. 22. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque X es propilo, b es cero, Ri es metilo, R2 es trimetilamonio-propilo, R3 es metilo, R4 y R5 son hidrógeno, R6 es etoxi.
23. 23. El método de conformidad con la reivindicación 19, caracterizado porque X es propilo, b es cero, Ri es metilo, R2 es trimetilamonio-propilo, R3 es metilo, R4 y R5 son hidrógeno, R6 es bromo.
24. 24. El método de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado porque al menos un contraión es nitrito, fosfato, fosfato de hidrógeno, fosfato de dihidrógeno, sulfato de hidrógeno, sulfato, carbonato de hidrógeno, carbonato, metanosulfonato, fluoroborato, bromo, cloro, yodo o combinaciones de los mismos.
25. 25. Un método para incrementar la solubilidad de sales de tiazolil-tetrazolio que tienen el grupo tiazoilo unido en el tercer átomo de nitrógeno del anillo de tetrazolio, el método está caracterizado porque comprende agregar al menos un grupo trialquil-amonio-alcoxi como un sustituyente a la sal de tiazolil-tetrazolio.
26. 26. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque la sal de tiazolil-tetrazolio tiene sustituyentes de fenilo en el tercer átomo de nitrógeno y en el átomo de carbono del anillo de tetrazolio .
27. 27. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque al menos este grupo trialquil-amonio-alcoxi es un grupo trimetil-amonio-propoxi.
28. 28. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque al menos este grupo trialquil-amonio-alcoxi es un sustituyente de los grupos fenilo .
29. 29. El método de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque al menos un grupo trialquil-amonio-alcoxi es un sustituyente de ambos sustituyentes de fenilo.
30. 30. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque el grupo tiazoilo es un grupo benzotiazoilo.
31. 31. El método de conformidad con la reivindicación 25, caracterizado porque la sal de tiazolil-tetrazolio tiene contraiones de nitrito, fosfato, fosfato de hidrógeno, fosfato de dihidrógeno, sulfato de hidrógeno, sulfato, carbonato de hidrógeno, carbonato, metanosulfonato, fluoroborato, bromuro, cloruro, yoduro o combinaciones de los mismos.
32. 32. El método de conformidad con la reivindicación 31, caracterizado porque los contraiones son nitrito de bromo, nitrito de dibromo o tribromuro.