CN108368472B - 血糖值测定试剂、血糖值测定芯片和血糖值测定装置套组 - Google Patents

血糖值测定试剂、血糖值测定芯片和血糖值测定装置套组 Download PDF

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Abstract

本发明的血糖值测定试剂在含有以葡萄糖为底物的酶、电子受体和发色色素的血糖值测定试剂中，进一步含有具有至少1个磺酸基的芳香族烃。本发明的血糖值测定芯片具备供给血液的供给口、在一端形成有该供给口的流路、以及设置于该流路内的试剂，且能够安装于测定上述血液中的血糖值的血糖值测定装置，上述试剂是含有以葡萄糖为底物的酶、电子受体、发色染料、以及具有至少1个磺酸基的芳香族烃的血糖值测定试剂。

Description

血糖值测定试剂、血糖值测定芯片和血糖值测定装置套组
技术领域
本发明涉及血糖值测定试剂、血糖值测定芯片和血糖值测定装置套组，特别涉及即使在作为样本的血液为全血的情况下，也可以抑制血液滴加前的发色，并且可以提高血液滴加后的发色速度的血糖值测定试剂，血糖值测定芯片和血糖值测定装置套组。
背景技术
以往一直广泛使用测定血液中的葡萄糖成分的血糖值测定装置(例如，参照专利文献1)。
在该血糖值测定装置中，例如，对具有含有酶和发色色素的试剂(例如，参照专利文献2)的血糖值测定芯片注入血液(全血)，对使试剂与血液(全血)反应时的显色程度进行光学测定，从而测定血液中的葡萄糖成分(例如，参照专利文献3)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本特开2006-215034号公报
专利文献2：日本专利第4381463号公报
专利文献3：国际公开第2014/049704号
发明内容
然而，全血的血糖值测定所使用的发色色素(例如，WST-4等的四唑
Figure GDA0001753426000000011
盐)由于试剂所含的缓冲剂的存在而存在在血液滴加前发色的问题。
为了解决这样的问题，研究了不添加缓冲剂的情况，但若不添加缓冲剂，则存在如下问题：血液滴加后的发色(即，吸光度)的变化速度变慢，即使血液滴加后经过规定时间后发色(即，吸光度)的变化也持续。
本发明的目的在于提供一种可以抑制血液滴加前的发色，并且可以提高血液滴加后的发色速度的血糖值测定试剂，血糖值测定芯片和血糖值测定装置套组。
作为本发明的第1方式的血糖值测定试剂的特征在于，在含有以葡萄糖为底物的酶、电子受体和发色色素的血糖值测定试剂中，进一步含有具有至少1个磺酸基的芳香族烃。
由此，可以抑制血液滴加前的发色，可以提高血液滴加后的发色速度。
应予说明，本说明书中，“芳香族烃”被定义为与杂环式化合物不同的碳环式化合物(环式化合物中，环上仅含有碳原子的化合物)的一种，不具有胺。
作为本发明的1个实施方式，优选上述芳香族烃具有2个以上的磺酸基。
这里，通过遍及上述芳香族烃中的芳香族环的周围整体地配置磺酸基，上述芳香族烃分子内的亲水性部分和疏水性部分各自不会分布不均，因此试剂容易被血液湿润(容易融合)。
这里，作为上述芳香族烃，更优选为1,3-苯二磺酸二钠或萘-1,3,6-三磺酸三钠。
另外，1,3-苯二磺酸二钠和萘-1,3,6-三磺酸三钠不具有缓冲能力，但可利用血液自身所具备的中性附近的缓冲性能。
作为本发明的1个实施方式，优选上述芳香族烃的含量为30mol％以上。
作为本发明的1个实施方式，优选进一步含有四唑
Figure GDA0001753426000000021
盐作为上述发色试剂。
作为本发明的第2方式的血糖值测定芯片的特征在于，具备供给血液的供给口、在一端形成有该供给口的流路、以及设置于该流路内的试剂，且能够安装于测定上述血液中的血糖值的血糖值测定装置，上述试剂是作为本发明的第1方式的血糖值测定试剂。
作为本发明的第3方式的血糖值测定装置套组的特征在于，具备作为本发明的第2方式的血糖值测定芯片和测定血液中的血糖值的血糖值测定装置，上述血糖值测定装置具备对上述血液与上述试剂的反应产物照射光的照射部、接收透过上述反应产物或从上述反应产物反射的测定光的光接收部和处理从上述测定光得到的信号的处理部。
根据本发明，可以提供一种可抑制血液滴加前的发色，并且可以提高血液滴加后的发色速度的血糖值测定试剂，血糖值测定芯片和血糖值测定装置套组。
附图说明
图1是表示本发明的一个实施方式涉及的血糖值测定芯片的俯视图。
图2是沿着图1中的线I-I得到的截面图。
图3是表示本发明的一个实施方式涉及的血糖值测定装置套组的俯视图。
图4是表示图3所示的血糖值测定装置套组的血糖值测定装置和血糖值测定芯片的纵截面图。
图5是表示各试剂(实施例1～4，比较例1～5)的发色速度的图表，纵轴表示吸光度指标(将30s后的发色量设为100％时的指标)，横轴表示滴加后的时间(ms：毫秒)。
图6是表示各试剂(实施例1～4，比较例1～5)的血液滴加前的保存稳定性的图表，纵轴表示吸光度(abs)。
具体实施方式
(血糖值测定试剂)
本发明涉及的血糖值测定试剂至少含有酶、电子受体(Mediator)、发色色素和芳香族烃。此外，本发明涉及的血糖值测定试剂根据需要进一步含有过渡金属盐等其它成分而成。
另外，血液中的D-葡萄糖和电子受体(例如，后述的m-PMS)通过酶(例如，后述的GDH)而反应，通过该反应而发色色素(例如，后述的WST-4)发色。
＜芳香族烃＞
作为上述芳香族烃，只要是具有至少1个磺酸基的芳香族烃，则没有特别限制，可以根据目的适当选择，例如，可举出苯磺酸钠(参照下述结构式(1))、1,3-苯二磺酸二钠(参照下述结构式(2))、1,3,5-苯三磺酸三钠(参照下述结构式(3))、萘-1,3,6-三磺酸三钠(参照下述结构式(4))、蒽-1,3,6-三磺酸三钠(参照下述结构式(5))等。它们可以单独使用1种，也可以并用2种以上。
这些芳香族烃中，具有2个以上的磺酸基的芳香族烃(例如，1,3-苯二磺酸二钠、萘-1,3,6-三磺酸三钠)在以可进一步提高血液滴加后的发色速度的方面优选。这里，磺酸基(离子)的数量多，可以提高上述芳香族烃的亲水性，同时减少作为表面活性剂的作用，因此即使在以全血为试样的情况下，也可以进一步提高发色速度，此外，以少的含量就得到本申请发明的效果。此外，即使芳香族烃所具有的磺酸基的数量多，对稳定性也不会产生不良影响。
Figure GDA0001753426000000041
作为上述芳香族烃的含量，没有特别限制，可以根据目的适当选择，优选为30mol％以上，更优选为50mol％以上，特别优选为70mol％～80mol％。
作为上述芳香族烃的血液样本反应时的浓度，没有特别限制，可以根据目的适当选择，优选为50mM以上，更优选为100mM以上，特别优选为250mM～400mM。
若上述芳香族烃的含量或血液样本反应时的浓度为优选的范围内、更优选的范围内、或特别优选的范围内，则可以确实地抑制血液滴加前的发色，并且可以确实地提高血液滴加后的发色速度。
＜酶＞
上述酶例如发挥与血液中的葡萄糖反应而从葡萄糖提取电子等作用。
作为上述酶，只要以葡萄糖为底物，则没有特别限制，可以根据目的适当选择，例如，可举出葡萄糖脱氢酶(GDH)、葡萄糖氧化酶(GOD)等。它们可以单独使用1种，也可以并用2种以上。
这些酶中，葡萄糖脱氢酶(GDH)在容易与四唑
Figure GDA0001753426000000051
盐组合的方面优选。
另外，顺利进行葡萄糖脱氢酶(GDH)的反应的pH区域(即，最佳pH区域)为中性附近(约pH6.5～7.0)，最佳pH区域因酶而不同。例如，专利文献2(日本专利4381463号)的实施例中使用的作为缓冲剂(Buffer)的“甘氨酸-盐酸”和“乙酸钠”为酸性，因此不适合于最佳pH区域为中性附近(约pH6.5～7.0)的葡萄糖脱氢酶(GDH)。
作为上述酶的血液样本反应时的浓度，没有特别限制，可以根据目的适当选择，优选为1U/μL以上，更优选为4U/μL以上，特别优选为8U/μL～20U/μL。
若上述血液样本反应时的浓度为优选的范围内、更优选的范围内、或特别优选的范围内，则可以快速地结束反应。
＜电子受体(Mediator)＞
上述电子受体(Mediator)发挥(i)促进酶与血液中的葡萄糖的反应，(ii)酶暂时接受从葡萄糖提取的电子而传递给发色色素等作用。
作为上述电子受体，没有特别限制，可以根据目的适当选择。上述电子受体可以选择5-甲基吩嗪硫酸甲酯盐(PMS)、1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸甲酯盐(mPMS)、NAD、FAD、PQQ、铁氰化钾等。它们可以单独使用1种，也可以并用2种以上。
这些电子受体中，1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸甲酯盐(mPMS)在反应性、稳定性均优异的方面优选。
作为上述电子受体的含量，没有特别限制，可以根据目的适当选择。上述电子受体的含量优选为0.01mol％以上，更优选为0.1mol％以上，特别优选为0.3mol％～3mol％。
作为上述电子受体的血液样本反应时的浓度，没有特别限制，可以根据目的适当选择。作为上述电子受体的血液样本反应时的浓度，优选为0.1mM以上，更优选为0.5mM以上，特别优选为1mM～10mM。
若上述电子受体的含量或血液样本反应时的浓度为优选的范围内、更优选的范围内、或特别优选的范围内，则可以快速地结束反应。
＜发色色素＞
上述发色色素(还原系发色试剂)例如发挥接受通过酶与葡萄糖的反应而产生的电子、过氧化氢而(被还原)发色等作用。
作为上述发色色素，没有特别限制，可以根据目的适当选择，例如，可举出四唑
Figure GDA0001753426000000062
盐(例如，WST-4、WST-1、WST-5、MTS、MTT、四唑
Figure GDA0001753426000000063
盐(A))、磷钼酸钠、靛蓝胭脂红、二氯靛酚、刃天青等。它们可以单独使用1种，也可以并用2种以上。
这些发色色素中，优选为具有苯并噻唑基的四唑
Figure GDA0001753426000000064
盐，四唑
Figure GDA0001753426000000065
盐(A)、2-(2-苯并噻唑基)-3-(4-羧基-2-甲氧基苯基)-5-[4-[(2-钠磺乙基)氨基甲酰基]苯基]-2H-四唑-3-
Figure GDA0001753426000000066
(WST-4)在发色光谱良好、溶解性高的方面特别优选。
以下示出四唑
Figure GDA0001753426000000067
盐(A)的化学式。
Figure GDA0001753426000000061
式中X＝Na。
作为上述发色色素的含量，可以根据目的适当选择，优选为5mol％以上，更优选为15mol％以上，特别优选为30mol％～50mol％。
作为上述发色色素的血液样本反应时的浓度，可以根据目的适当选择，优选为10mM以上，更优选为50mM以上，特别优选为100mM～200mM。
若上述发色色素的含量或血液样本反应时的浓度为优选的范围内、更优选的范围内、或特别优选的范围内，则可以对应至高浓度的血糖值。
＜过渡金属盐＞
在上述发色色素为四唑
Figure GDA0001753426000000071
盐的情况下，可以使过渡金属盐(过渡金属离子)与四唑
Figure GDA0001753426000000072
盐进行螯合反应，生成螯合络合物使其发色。作为过渡金属盐，只要在水性液体(例如，水、缓冲液、血液、体液)中生成离子，则可以根据目的适当选择，优选为镍或钴的氯化物、溴化物、硝酸盐、硫酸盐、有机酸盐。
(血糖值测定芯片)
以下，详细地说明本发明涉及的血糖值测定芯片。
图1是表示本发明的一个实施方式涉及的血糖值测定芯片的俯视图。此外，图2是沿着图1中的线I-I得到的截面图。
如图1和图2所示，本实施方式中的血糖值测定芯片100具备供给口10、流路20和试剂层30，且能够安装于后述的血糖值测定装置。
以下，对本实施方式中的血糖值测定芯片100的各部件和由各部件构成的特征部的详细内容进行说明。
＜＜供给口10、流路20和试剂层30＞＞
如图1和图2所示，血糖值测定芯片100具备形成底面部的第1基材1，形成顶面部的第2基材2，以及在这些第1基材与第2基材2之间且在与芯片厚度方向垂直的宽度方向的两端设置的粘接部3、4。
如此，粘接部3、4中，通过在第1基材1与第2基材2之间夹持具有任意厚度的隔板(未图示)的状态下粘接第1基材1和第2基材2，在第1基材1与第2基材2之间形成规定大小的空隙。该规定大小的空隙成为在一端形成有供给口10的流路20，可以使血液流入血糖值测定芯片100内。进而，在流路20内设置有试剂层30。在图1和图2中，试剂层30在第1基材1上形成，但不限于此，只要不堵塞流路20地设置于流路20内即可。
作为第1基材1的材质，可以根据目的(光的照射·接收)适当选择，例如，可举出聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)、聚甲基丙烯酸甲酯、聚苯乙烯、环状聚烯烃、环状烯烃共聚物、聚碳酸酯等透明的有机树脂材料；玻璃，石英等透明性的无机材料；等。
作为第2基材2的材质，可以根据目的(光的照射·接收)适当选择，例如，可举出亲水处理聚酯膜(3M亲水化膜)等透明的有机树脂材料等。
为了使流路20的芯片厚度方向的距离为所期望的值，可适当调整粘接部3、4的厚度。例如，可以在第1基材与第2基材之间配置具有任意厚度的隔板后进行粘接或熔合，或者使用兼有隔板的功能的双面胶带作为使第1基材与第2基材粘接的粘接部件。
-试剂层30-
试剂层30由本发明涉及的血糖值测定试剂构成。
-试剂层30的制造方法-
上述试剂层结构的制造方法至少包括涂布工序和干燥工序，根据需要包括其它工序。
--涂布工序--
上述涂布工序是将含有本发明涉及的血糖值测定试剂的涂布液进行涂布的工序。
作为上述涂布方法，没有特别限制，可以根据目的适当选择，例如，可举出喷涂法、喷墨法、丝网印刷法、凹版印刷法等。它们可以单独使用1种，也可以并用2种以上。
--干燥工序--
上述干燥工序是将涂布后的涂布液干燥的工序。
作为上述干燥工序中的干燥温度和干燥时间，可以根据目的适当选择。
(血糖值测定装置套组)
接着，对作为本发明的一个实施方式的血糖值测定装置套组进行说明。
作为本发明的一实施方式的血糖值测定装置套组具备上述血糖值测定芯片以及安装有该血糖值测定芯片且测定血液中的葡萄糖成分的血糖值测定装置。
以下，对具备对透过血液与作为血糖值测定试剂的发色试剂的反应产物的光进行测定的透过型的血糖值测定装置的血糖值测定装置套组进行说明，但本发明不限定于此，例如，也可以是具备测定从上述反应产物反射的光的反射型的血糖值测定装置的血糖值测定装置套组。
图3表示本发明的一个实施方式涉及的血糖值测定装置套组500。血糖值测定装置套组500具备血糖值测定装置110和血糖值测定芯片100。
该血糖值测定芯片100安装于血糖值测定装置110的前端部。血糖值测定装置110具备显示测定结果、操作内容等的显示器111，指示血糖值测定装置110的启动和终止的电源按钮112，操作按钮113，以及拆卸血糖值测定芯片100的拆卸杆(取外レバー)114。显示器111由液晶或LED等构成。
图4是分别表示血糖值测定装置套组500的血糖值测定装置110的前端部和血糖值测定芯片100的纵截面图。为了在血糖值测定装置110中安装血糖值测定芯片100，在血糖值测定装置110的前端设置形成有开口部21的安装部22，在血糖值测定装置110的内部划分安装血糖值测定芯片100的安装孔23。此外，在血糖值测定装置110的内部设置用于测定血糖值测定芯片100上采取的血液的葡萄糖成分(血糖值)的光学测定部24。此外，血糖值测定装置110具备对从测定光得到的信号进行处理并算出血糖值的处理部25、以及与拆卸杆114(参照图3)连动并拆卸血糖值测定芯片100的顶针26。以下，对各构成进行说明。
测定时血糖值测定芯片100安装于安装孔23。安装操作由用户以手动操作进行。虽然未图示，但是为了使由手动操作产生的安装位置的偏差为最小限度，优选设置用于将血糖值测定芯片100固定于安装孔23内的规定位置的锁定机构等。
光学测定部24具备对作为血糖值测定试剂的发色试剂与血液的反应产物照射光的照射部31、以及将透过反应产物的光作为测定光进行接收的光接收部32。本实施方式中，照射部31使用发光二极管(LED)，也可以是卤素灯、激光等。光接收部32例如使用光电二极管(PD)。光接收部32只要能够将接收的光变换为规定的信号即可，可以是CCD、CMOS等。
本实施方式中，照射部31包含发出具有第1波长的光的第1发光元件51、以及发出具有与第1波长不同的第2波长的光的第2发光元件52。这里，第1波长是用于检测血糖量所对应的发色程度的波长，例如位于600～900nm的波长带。第2波长是用于检测血液中的红血球浓度的波长，例如位于510～590nm的波长带。
对照射部31和光接收部32的配置以及两者的位置关系进行说明。在血糖值测定装置110的内部形成有第1空间41和第2空间42。照射部31配置于该第1空间41，光接收部32配置于该第2空间42。在血糖值测定芯片100未安装于血糖值测定装置110的状态下，该第1空间41与该第2空间42隔着安装孔23对置(参照图4)。在血糖值测定芯片100安装于血糖值测定装置110的状态下，该第1空间41与该第2空间42夹持该血糖值测定芯片100上的保持有试剂层30的位置而对置。另外，为了减小照射光33的能量损失，照射部31优选配置于照射光33能够垂直地照射至血糖值测定芯片100的底面的位置。
虽然未图示，但在照射部31使用照射白色的卤素灯的情况下，可以是为了仅提取特定的波长作为照射光33而设置分光滤光器的方法。此外，为了以低能量的照射就有效地实施，也优选具有聚光透镜的方法。
以下，举出实施例进一步详细地说明本发明，但本发明不限定于下述实施例。
实施例
(实施例1)
＜试剂水溶液的制备＞
首先，制备含有作为酶的葡萄糖脱氢酶(GDH，东洋纺织株式会社生产)4U/μL、作为电子受体(Mediator)的1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸甲酯盐(mPMS，株式会社同仁化学研究所生产)1mM、作为发色色素的2-苯并-噻唑基-3-(4-羧基-2-甲氧基苯基)-5-〔4-(2-磺乙基氨基甲酰基)苯基〕-2H-四唑
Figure GDA0001753426000000101
(WST-4，株式会社同仁化学研究所生产)100mM和作为芳香族烃的萘-1,3,6-三磺酸三钠(TSN，东京化成工业株式会社生产)250mM的试剂水溶液(pH6.5)。
＜血糖值测定芯片的制作＞
将制备的试剂水溶液涂布于聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)膜(制造公司名：东丽株式会社，商品名：Lumirror T60，厚度188μm)上，在25℃干燥10分钟。干燥后，在形成有试剂层的PET膜夹持隔板和作为粘接部的双面胶带(制造公司名：3M公司，商品名：聚酯膜基材，双面粘接胶带9965，厚度：80μm)的状态下，安装材质为亲水处理聚酯膜(制造公司名：3M公司，商品名：亲水处理聚酯膜9901P，厚度：100μm)的覆盖膜，制作图1和2所示的血糖值测定芯片。
＜血液样本的制备＞
在血液(全血，红细胞比容(Ht)40)中添加高浓度的葡萄糖溶液(40g/dL)，制备葡萄糖浓度为100mg/dL的血液样本。
＜样本滴加后的吸光度测定＞
将所制备的血液样本3mm3滴加至所制作的血糖值测定芯片，使用紫外可见分光光度计进行吸光度测定(测定波长：650nm)。将结果示于表1和图5。
应予说明，图5是表示发色速度(时间进程)的图表，纵轴表示吸光度指标(以30s后的发色量为100％)，横轴表示滴加后的时间(ms：毫秒)。发色结束为止的时间是以0s至发色量成为100％为止的时间进行评价。
＜热加速试验后的吸光度测定＞
对于刚制作(Initial)的血糖值测定芯片、常温保存(3天)和热加速试验(60℃，3天)后的血糖值测定芯片，使用紫外可见分光光度计测定滴加蒸馏水3mm2后的吸光度(测定波长：650nm～750nm)。作为这些血糖计测定芯片的吸光度相对于刚制成后(Initial)的血糖测定芯片的吸光度的差，将结果示于表1和图6。
另外，图6是表示血液滴加前中的血糖值测定芯片的保存稳定性的图表，纵轴表示吸光度(abs)。
(实施例2)
在实施例1中使用1,3-苯二磺酸二钠(DSB，Alfa Aear生产)进行试剂水溶液的制备来代替使用萘-1,3,6-三磺酸三钠(TSN，东京化成工业株式会社生产)进行试剂水溶液的制备，除此以外，与实施例1同样地进行试剂水溶液的制备、血糖值测定芯片的制作、样本的制备、样本滴加后的吸光度测定和热加速试验后的吸光度测定。将评价结果示于图5和6。
(实施例3)
在实施例1中使用苯磺酸钠(BS，东京化成工业株式会社生产)进行试剂水溶液的制备来代替使用萘-1,3,6-三磺酸三钠(TSN，东京化成工业株式会社生产)进行试剂水溶液的制备，除此以外，与实施例1同样地进行试剂水溶液的制备、血糖值测定芯片的制作、样本的制备、样本滴加后的吸光度测定和热加速试验后的吸光度测定。将评价结果示于表1、图5和6。
(实施例4)
在实施例1中，按照下述方式进行“试剂水溶液的制备”，在630nm～900nm进行“样本滴加后的吸光度测定”中的吸光度测定，除此以外，与实施例1同样地进行血糖值测定芯片的制作、样本的制备、样本滴加后的吸光度测定和热加速试验后的吸光度测定。将评价结果示于表1、图5和6。
在使用四唑
Figure GDA0001753426000000121
盐A作为发色色素的情况下，与测定开始同时地一次性进行反应，以约5秒完成发色。实施例4的发色速度和灵敏度均良好。
＜试剂水溶液的制备＞
首先，制备含有作为酶的葡萄糖脱氢酶(GDH，东洋纺织株式会社生产)4U/μL、作为电子受体(Mediator)的1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸甲酯盐(mPMS，株式会社同仁化学研究所生产)1mM、作为发色色素的四唑
Figure GDA0001753426000000122
盐A(泰尔茂株式会社生产)100mM、作为过渡金属离子的镍离子200mM和作为芳香族烃的1,3-苯二磺酸二钠(DSB)(Alfa Aear生产)250mM的试剂水溶液(pH6.5)。
(比较例1)
在实施例1中不添加萘-1,3,6-三磺酸三钠(TSN，东京化成工业株式会社生产)而进行试剂水溶液的制备来代替添加萘-1,3,6-三磺酸三钠(TSN，东京化成工业株式会社生产)而进行试剂水溶液的制备，除此以外，与实施例1同样地进行试剂水溶液的制备、血糖值测定芯片的制作、样本的制备、样本滴加后的吸光度测定和热加速试验后的吸光度测定。将评价结果示于表1、图5和6。
(比较例2)
在实施例1中使用3-吗啉代丙烷磺酸(MOPS，株式会社同仁化学研究所生产)进行试剂水溶液(pH7.0)的制备来代替使用萘-1,3,6-三磺酸三钠(TSN，东京化成工业株式会社生产)进行试剂水溶液(pH6.5)的制备，除此以外，与实施例1同样地进行试剂水溶液的制备、血糖值测定芯片的制作、样本的制备、样本滴加后的吸光度测定和热加速试验后的吸光度测定。将评价结果示于表1、图5和6。
若如比较例2那样使用MOPS等Good's缓冲液(在中性附近具有缓冲能力且具有游离胺的缓冲液)，则存在从试剂水溶液的制备中开始缓缓地发色，滴加血液前的状态(空白)中吸光度显著上升的趋势。
(比较例3)
实施例1中使用羟乙基磺酸钠(东京化成工业株式会社生产)进行试剂水溶液的制备来代替使用萘-1,3,6-三磺酸三钠(TSN，东京化成工业株式会社生产)进行试剂水溶液(pH6.5)的制备，除此以外，与实施例1同样地进行试剂水溶液的制备、血糖值测定芯片的制作、样本的制备、样本滴加后的吸光度测定和热加速试验后的吸光度测定。将评价结果示于表1、图5和6。
(比较例4)
实施例1中使用磷酸缓冲液(和光纯药工业株式会社生产)进行试剂水溶液(pH7.0)的制备来代替使用萘-1,3,6-三磺酸三钠(TSN，东京化成工业株式会社生产)进行试剂水溶液(pH6.5)的制备，除此以外，与实施例1同样地进行试剂水溶液的制备、血糖值测定芯片的制作、样本的制备、样本滴加后的吸光度测定和热加速试验后的吸光度测定。将评价结果示于表1、图5和6。
若如比较例4那样使用不是Good's缓冲液的磷酸缓冲液(不具有游离胺)，则存在血液滴加前的保存稳定性良好，但发色速度变慢的趋势。
(比较例5)
实施例1中使用海藻糖(株式会社林原生产)进行试剂水溶液的制备来代替使用萘-1,3,6-三磺酸三钠(TSN，东京化成工业株式会社生产)进行试剂水溶液(pH6.5)的制备，除此以外，与实施例1同样地进行试剂水溶液的制备、血糖值测定芯片的制作、样本的制备、样本滴加后的吸光度测定和热加速试验后的吸光度测定。将评价结果示于表1、图5和6。
若如比较例5那样使用容易溶于水且没有缓冲能力的海藻糖，则存在血液滴加前的保存稳定性良好，但发色速度变慢的趋势。
(比较例6)
在实施例4中使用8-甲氧基芘-1,3,6-三磺酸三钠盐(MPTS，Sigma Aldrich生产)70mM进行试剂水溶液的制备来代替使用1,3-苯二磺酸二钠(DSB，Alfa Aear生产)250mM进行试剂水溶液(pH6.5)的制备，除此以外，与实施例4同样地进行试剂水溶液的制备。这里，在试剂水溶液(涂布液)中产生析出物，因此无法制作血糖值测定芯片。将评价结果示于表1。
应予说明，以下示出8-甲氧基芘-1,3,6-三磺酸三钠盐(MPTS)的化学式。
Figure GDA0001753426000000141
表1
Figure GDA0001753426000000142
应予说明，表1中的“样本滴加后的吸光度(发色量)测定(时间进程)”和“热加速试验后的吸光度测定”的结果的评价基准如下。
＜样本滴加后的吸光度(时间进程(发色量))测定＞
◎：10秒内反应终点的90％以上发生反应
○：10秒内反应终点的60％以上且小于90％发生反应
×：10秒内反应终点的小于60％发生反应
＜热加速试验后的吸光度测定＞
○：在60℃保存3天后的空白上升小于0.1
×：在60℃保存3天后的空白上升为0.1以上
通过将使用含有具有至少1个磺酸基的芳香族烃的血糖值测定试剂的实施例1～4与不使用含有至少具有1个磺酸基的芳香族烃的血糖值测定试剂的比较例1～6进行比较可知，通过使用含有具有至少1个磺酸基的芳香族烃的血糖值测定试剂，可抑制血液滴加前的发色。
通过将使用含有具有2个以上的磺酸基的芳香族烃的血糖值测定试剂的实施例1、2和4与使用含有具有1个磺酸基的芳香族烃的血糖值测定试剂的实施例3进行比较可知，通过使用含有具有2个以上的磺酸基的芳香族烃的血糖值测定试剂，不仅抑制血液滴加前的发色，而且血液滴加后的发色速度更加提高。此外，通过将实施例1、2和4与比较例2进行比较可知，实质上不添加缓冲剂且含有具有2个以上的磺酸基的芳香族烃的血糖值测定试剂不仅抑制血液滴加前的发色，而且血液滴加后的发色速度更加提高。
产业上的可利用性
本发明涉及血糖值测定试剂、血糖值测定芯片和血糖值测定装置套组，特别涉及即使在作为样本的血液为全血的情况下，也可以抑制血液滴加前的发色，并且可以提高血液滴加后的发色速度的血糖值测定试剂，血糖值测定芯片以及血糖值测定装置套组。
符号说明
1：第1基材
2：第2基材
3：粘接部
4：粘接部
10：供给口
20：流路
21：开口部
22：安装部
23：安装孔
24：光学测定部
25：处理部
26：顶针
30：试剂层(试剂)
31：照射部
32：光接收部
33：照射光
41：第1空间
42：第2空间
51：第1发光元件
52：第2发光元件
100：血糖值测定芯片
110：血糖值测定装置
111：显示器
112：电源按钮
113：操作按钮
114：拆卸杆
500：血糖值测定装置套组

Claims (6)

1.一种血糖值测定试剂，其特征在于，
在含有以葡萄糖为底物的酶、电子受体和发色色素的血糖值测定试剂中，进一步含有具有至少1个磺酸基的芳香族烃，
所述芳香族烃为1,3-苯二磺酸二钠或萘-1,3,6-三磺酸三钠。
2.根据权利要求1所述的血糖值测定试剂，其特征在于，所述血糖值测定试剂实质上不含缓冲剂。
3.根据权利要求1所述的血糖值测定试剂，其特征在于，所述芳香族烃的含量为30mol％以上。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的血糖值测定试剂，其特征在于，进一步含有四唑
Figure FDA0002966124670000011
盐作为所述发色色素。
5.一种血糖值测定芯片，其特征在于，具备供给血液的供给口、在一端形成有该供给口的流路、以及设置于该流路内的试剂，所述血糖值测定芯片可安装于测定所述血液中的血糖值的血糖值测定装置，
所述试剂为权利要求1～4中任一项所述的血糖值测定试剂。
6.一种血糖值测定装置套组，其特征在于，具备权利要求5所述的血糖值测定芯片和测定血液中的血糖值的血糖值测定装置，
所述血糖值测定装置具备对所述血液与所述试剂的反应产物照射光的照射部、接收透过所述反应产物或从所述反应产物反射的测定光的光接收部、和处理从所述测定光得到的信号的处理部。
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