CN102643274A

CN102643274A - 水溶性四唑盐

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Publication number: CN102643274A
Application number: CN2012101029741A
Authority: CN
Inventors: J·P·阿尔巴瑞拉; S·W·菲尔曼; J·J·兰蒂; K·L·玛弗特
Original assignee: Bayer Healthcare LLC
Current assignee: Bayer Healthcare LLC
Priority date: 2005-01-14
Filing date: 2006-01-13
Publication date: 2012-08-22
Anticipated expiration: 2026-01-13
Also published as: US7767822B2; JP2008526990A; NO20074133L; CN101115750A; MX2007008565A; JP2013136603A; JP5592058B2; TW200637857A; EP1851215A1; US20100255506A1; HK1174910A1; EP1851215B1; RU2007130854A; CN102643274B; WO2006076619A1; RU2400481C2; US20080125471A1; US7897331B2; BRPI0606698A2; CA2594813A1

Abstract

在水溶液中具有增加的溶解度的噻唑基四唑盐具有在与四唑环连接的苯基环上的烷基铵烷氧基取代基，优选三甲基铵丙氧基取代基。在水溶液中具有增加的溶解度的噻唑基四唑盐具有在与四唑环连接的苯基环上的烷基铵烷氧基取代基，优选三甲基铵丙氧基取代基，例如下面所示通式(A-)_a的化合物。

Description

水溶性四唑盐

本申请是中国专利申请号200680004439.5(PCT/US2006/001307)，申请日2006年1月13日，发明名称为“水溶性四唑盐”的分案申请。

技术领域

本发明涉及用于医学目的的生物样品的分析。

发明背景

生物样品的分析通常涉及其中颜色与样品中分析物的量成比例显示的方法。例如，可以使用酶来氧化所考虑的分析物并且通过指示剂化合物的变色显示反应程度。本文特别感兴趣的是用作指示剂的四唑盐的家族。此类盐被还原物质还原成甲

(formazan)染料。为了测量分析物，酶(例如，NAD-依赖性脱氢酶)将分析物氧化而产生还原形式(例如，NADH)，后者与四唑盐反应产生有色的甲。可能需要媒剂以促进反应。因为由分析物反应产生的NADH的量与所产生的甲

的量成比例，所以可以通过所形成的颜色间接地测量分析物的量。

四唑盐已经用于各种应用。但是，特别地，它们已经用于测量各种生物流体例如血液、尿、血浆和血清中的分析物的医学领域。这些指示剂通常以放在试验条上的反应物体系方式使用，当与流体样品接触时，它们与所考虑的分析物反应并且显示指示所存在的分析物的量的颜色。虽然在某些情况下，可以参考比色图表视觉上读取颜色变化，但是更准确的读取可以通过为这种目的而设计的仪器以分光光度方式进行。通常，将光射到该试验条上并且测量反射光来测定试验条上的变色效果。

四唑盐应该产生甲，所述甲

在避免由于样品中的物质，例如全血中的血红蛋白干扰的波长下吸收光。因此，已经开发出一类噻唑基四唑盐，它们产生吸收波长大于大约640nm的光(例如由用作光源的LED产生的那些光)的甲。LED提供变化仅为大约±5nm的窄波长范围。此类噻唑基四唑盐在若干美国专利如美国专利号5,126,275；5,322,680；5,300,637和5,290,536中进行了公开。

大多数生物样品性质上是水性的，所以希望指示剂可溶于样品。然而，许多四唑盐是不易溶的。四唑盐的一个供应商(DojindoLaboratories)具有一系列指示剂，通过将磺酸基添加到指示剂分子中而使这一系列指示剂变得更可溶。参见美国专利号6,063,587和公开的日本专利申请JP58113181A2和JP58113182A2。它们的WST系列四唑盐指示剂通常在公开分析方法的专利中提到。一个实例参见美国专利号6,586,199。据报道WST系列四唑盐的溶解度为大约10mg/mL水。当使用四唑盐的某些磺酸根和膦酸根平衡离子时，还可以增加溶解度，例如美国专利号5,250,695中公开的那样。

论述四唑盐指示剂的其它专利包括EP 0476455B1；US2004/0132004A1；WO 98/37157；美国专利号6,183,878B1；美国专利号6,207,292B1；美国专利号6,277,307B1；DE 21 47 466；美国专利号5,185,450；美国专利号5,196,314。

本发明发明人想要改进噻唑基四唑盐的溶解性同时保持它们在对由LED提供的入射光作出反应时由它们的甲在600-640nm范围内作出较平缓频谱响应的能力。如将从下面发明说明书中知道的那样，它们已经成功地提供具有更大溶解性同时保持所需频谱响应的噻唑基四唑盐。

发明内容

本发明包括新型噻唑基四唑盐。已经发现其中一些在水中具有比相关专利性噻唑基四唑盐更好的溶解性。改进溶解性使它们变得更容易施加到用于测量生物样品中分析物(例如血样中的葡萄糖)的试验条上。所述四唑盐的特征在于具有增加溶解性的烷基铵烷氧基取代基。根据一个实施方案，所述四唑盐由以下通式限定。

其中：

A＝平衡离子

X＝1-6C烷基或杂烷基

a＝1-3

b＝0-3

R₁＝1-6C烷基

R₂和R₃之一是烷基并且另外一个是XN+H_b(R₁)_3-b，或R₂和R₃形成亚甲二氧基，

R₄和R₅之一是卤素并且另外一个是卤素取代的1-6C烷基，R₄和R₅中一个或两个是XN+H_b(R₁)_3-b，或

R₄和R₅连接形成芳族或杂芳族环或取代的芳族环或取代的杂芳族环。

上面给出的通式表示新型噻唑基四唑盐，即它们包含在2氮位置与四唑环连接的噻唑环。另外，它们各自具有在四唑环上的3氮位置连接的苯基环和在5氮位置连接的另一个苯基环。通过将一个或多个烷基铵烷氧基连接到噻唑基四唑盐上，实现了相对于在此由HTC-045命名的专利性噻唑基四唑盐的溶解性增加。所述烷基铵烷氧基可以作为R₄和/或R₅与噻唑基环连接，或在由R₄和R₅形成的芳族或杂芳族环上进行取代。在优选的实施方案中，所述烷基铵烷氧基是与四唑环连接的苯基环上的取代基。在更优选的实施方案中，本烷基铵烷氧基是三烷基铵丙氧基。苯并噻唑基四唑盐是优选的具有增加的溶解性的化合物。

对于本发明的另一方面，所述噻唑基四唑盐在使用酶氧化分析物的生物样品分析中，如在测定血液的葡萄糖含量中用作检测还原物质(例如NADH)的存在的显色指示剂。

附图简述

图1是制备实施例的化合物的第一种方法的示意图。

图2是制备实施例的化合物的第二种方法的示意图。

图3示出了实施例中报道的对比化合物。

图4a-b示出了在实施例中制备的本发明的化合物。

图5a和b是四唑盐吸光率对光波长的曲线。

具体实施方式

定义

以下定义适用于本发明的噻唑基四唑盐的取代基。

“1-6C”-是指含1-6个碳原子的残基

“烷基”-是指通式C_nH_2n+1的线性和支化烃残基

“杂烷基”-是指包含与相邻碳原子连接的杂原子的线性和支化烃残基

“烷氧基”-是指残基-OR，其中R是烷基

“亚甲二氧基”-是指通式-O-CH₂-O-的二价残基

“卤素”-是指氟、氯、碘和溴

“卤素取代的1-6C烷基”-是指具有通式C_nH_2n-1Y₂的线性或支化残基，其中Y是卤素

“芳族环”-是指苯或萘环

“杂芳族环”-是指吡啶或喹啉环

“平衡离子”-是指来自于制备四唑盐的反应物的离子残基(例如，亚硝酸根、磷酸根、磷酸氢根、磷酸二氢根、硫酸氢根、硫酸根、碳酸氢根、碳酸根、甲烷磺酸根、氟硼酸根、溴离子、氯离子、碘离子或它们的结合物)

“tet盐”是四唑盐的缩写

噻唑基四唑盐

如美国专利号5,126,275中所公开的那样，来自噻唑基四唑盐的甲

的特征在于具有在大于大约600-650nm显示延长的平稳段的反射谱，这在使用LED作为光源的设备中是有用的。使样品与产生颜色的反应体系接触，该颜色指示存在于样品中的分析物的量。检测从试验区返回的光并与分析物含量进行关联。在一个重要的实施例中，在NAD+的存在下葡糖脱氢酶催化在血样中的葡萄糖氧化。通过酶媒剂如黄递酶将还原的NADH再氧化，所述酶媒剂催化四唑盐还原成甲

。所产生的变色与由葡萄糖的氧化制备的NADH的量成比例并且间接地与存在于样品中的葡萄糖的量成比例。从噻唑基四唑盐转化成有色甲

的变色可以通过将它暴露在光源下来测量。检测从有色试验区返回的光并通过适合的算法转化成样品中分析物的量。虽然在此对于NAD-NADH进行了描述，但是本发明的四唑盐具有更宽广的应用，包括它们与具有其它补助因子如PQQ和FAD的脱氢酶一起使用。

因为噻唑基四唑盐和它们相应的甲

应该可溶于施加到用来检测分析物的试验条上的反应混合物，所以发明人的目的是改进噻唑四唑盐的溶解性，同时维持它们提供在600-640nm范围中具有较平缓反射谱的甲的能力。发明人已经发现包括满足它们的目的的化合物的一类新型噻唑基四唑盐。这些盐由以下通式表示：

其中：

A＝平衡离子

X＝1-6C烷基或杂烷基

a＝1-3

b＝0-3

R₁＝1-6C烷基

R₄和R₅之一是卤素并且另外一个是卤素取代的1-6C烷基，R4和R5中一个或两个是XN+H_b(R₁)_3-b，或

本发明的四唑盐也可以分离成取代的噻唑基四唑盐和取代的苯并噻唑基四唑盐，如以下所特别考虑的通式所示。

其中：

A＝平衡离子

X＝1-6C烷基

a＝1-3

b＝0-3

R₁＝1-3C烷基

R₂和R₃之一是1-4C烷基并且另外一个是XN+H_b(R₁)_3-b，或R₂和R₃连接成为亚甲二氧基，

R₄＝CHF₂

R₅＝卤素

A＝平衡离子

X＝1-6C烷基

a＝1-3

b＝0-3

R₁＝1-3C烷基

R₄和R₅是H，或R₄和R₅连接形成芳族环

R₆＝1-4C烷氧基，氢或卤素。

这些化合物(I和II)的溶解性将在下面实施例中说明。改进噻唑基四唑盐的溶解性应该减少获得试验结果所需要的时间并且在高分析物水平下提供更好的线性度。此外，改进的水溶性应该促进配制一个反应物的混合物，它制造起来将更容易和更廉价。

本发明四唑盐的制备方法

在美国专利号5,126,275中，描述了噻唑基四唑盐的制备方法。该方法包括使腙与重氮化苯胺起反应以制备甲

，然后将该甲

氧化成四唑盐。发展了待描述的用于制造本发明化合物的新方法，将一个(方案1)或两个(方案2)极性基团引入化合物I和II的优选的四唑盐中。图1和2说明了这两种方法。以下实施例将进一步说明本发明。

方案1用来制备其中在四唑环上的5位置处的苯基取代基具有亚甲二氧基取代基的四唑盐。在方案1中，三甲基铵丙氧基在四唑环上的3位置处的苯基取代基上进行取代。在方案1中，邻硝基苯酚与溴化3-溴代丙基三甲基铵起反应以形成溴化3-(2-硝基苯氧基)丙基三甲基铵然后经氢化形成等同的苯胺。该化合物与含取代的噻唑基环和具有亚甲二氧基取代基的苯基环的腙起反应产生甲

。然后将该甲

氧化成四唑盐。该腙由取代的苯甲醛与取代的肼的反应而形成，所述取代的肼包含该四唑盐所需的取代基。

方案2用来制备这样的四唑盐，其中在四唑环上的5位置处的苯基取代基具有在3或4位置(或两者)取代的三甲基铵丙氧基。如在方案1中那样，三甲基铵丙氧基在四唑环上的3位置处的苯基取代基上进行取代。在方案2中，4-羟基-3-甲氧基苯甲醛与溴化3-溴代丙基三甲基铵起反应以将三甲基铵丙氧基添加到该苯甲醛上。该产物与取代的肼起反应产生腙。该腙与方案1的第一步中制备的溴化3-(2-氨基苯氧基)丙基三甲基铵起反应而产生甲

，将该甲

变为四唑盐。

从下面的结果中将看出，溶解性似乎受与四唑盐有关的平衡离子的影响。平衡离子由方法中所使用的反应物产生并且可以进行改变以提供优选的平衡离子。或者，平衡离子可以被替代，例如通过离子交换法替代。

在以下非限制性实施例中，通过分光光度分析法鉴定每个步骤的产物并且为每个产物给出结果。

实施例1

5-苯并[1，3-间二氧杂环戊烯-5-基]-3-[2-(3-三甲基铵)丙氧基-苯基]-2-(5-氯-4-二氟甲基-噻唑-2-基)-2H-四唑溴代亚硝酸盐的制备

如方案1所示，使邻硝基苯酚与溴化3-溴代丙基三甲基铵起反应以形成溴化3-(2-硝基苯氧基)丙基三甲基铵，然后将它氢化形成等同的苯胺。使该苯胺与含取代的噻唑基环和苯基环的腙起反应以制备甲

，所述苯基环具有亚甲二氧基取代基。然后将该甲

氧化成四唑盐。在以下实施例中将更完全地描述该方法：向在氮气下的250mL干燥的一颈圆底烧瓶中的邻硝基苯酚(Aldrich，6.3g，45mmol)在DMF(150mL)中的黄色溶液中，添加碳酸钾(6.6g，48mmol)。该混合物转变成橙色。在搅拌10分钟之后，添加溴化3-溴代丙基三甲基铵(Aldrich，12.9g，45mmol)。在125℃下加热所得的混合物3小时。在将该反应混合物冷却到室温之后，将残留物过滤并用DMF(2×2φmL)洗涤该沉淀。将滤液缓慢地添加到EtOAc(750mL)中，引起沉淀形成。搅拌所得的混合物30分钟。将沉淀过滤并用EtOAc∶DMF，5∶1(3×100mL)的溶液，然后用EtOAc(100mL)和己烷(100mL)洗涤。在将该浅黄色固体风干5分钟之后，将产物添加到EtOAc∶DMF，10∶1(550mL)的溶液中并搅拌1小时。将该固体过滤，用EtOAc(100mL)和己烷(100mL)洗涤。将所得的固体过滤而产生通过以下性能鉴定的淡米黄色产物(14.54g，＞100％)，mp(178°-181℃)。¹³C NMR(400MHz，DMSO d₆)：δ151，139.45，134.71，125.14，121，115.39，66.59，62.84，52.39，22.48 ¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ7.90(dd，J＝8.1Hz，J＝1.7Hz，1H)，7.58(dt，J＝8.2Hz，J＝1.7Hz，1H)，7.39(d，J＝8.2Hz，1H)，7.15(d，J＝1.7Hz，1H)，4.25(t，J＝6Hz，2H)，3.45(m，2H)，3.11(s，9H)，2.23(m，2H)。ES I-MS：m/z 239(100％，M²⁺)。

在35psi下在Parr氢化装置中，将溴化3-(2-硝基苯氧基)丙基三甲基铵(7g，21.94mmol)、10％Pd/C(725mg)、MeOH(70mL)和水(70mL)的浆料氢化2.5小时。在30分钟之后，压力降至22psi。将所得的混合物滤过521Celite垫。用MeOH(2×10mL)洗涤该黑色催化剂/Celite的垫子。在旋转蒸发器上在减压并40-45℃下将该滤液浓缩。当不再形成馏出液时，将该淡粉红色溶液输送到另一个烧瓶中并通过冷冻干燥浓缩2天而产生通过以下光谱性能鉴定的淡米黄色苯胺衍生物(5.92g，93％)。¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ145.19，137.76，121.39，116.15，114.09，111.86，64.79，63.27，52.36，22.78¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ6.78(d，J＝4Hz，1H)，6.66(m，2H)，6.53(d，J＝6Hz，1H)，4.82(br s，2H)，3.99(t，J＝6Hz，2H)，3.54(m，2H)，3.11(s，9H)，2.17(m，2H)。ESI-MS：m/z 209(100％，M²⁺)。

在冰水浴中，向上述苯胺衍生物(7.7g，26.64mmol)在水(80ml)中的溶液中逐滴添加浓HCl(7.2ml)。在搅拌该溶液5分钟之后，逐滴添加亚硝酸钠(2.2g，32mmol)在水(16mL)中的溶液。该溶液的颜色从浅棕色变成金黄色。搅拌所得的溶液30分钟。在盐/冰/水浴(-15°至-20℃)中的装备有机械搅拌器和夹套添加漏斗的3颈2升烧瓶中，将腙(Bayer，9.8g，27.98mmol)在吡啶(400mL)中的溶液搅拌。经由用冰/水填充的夹套添加漏斗，逐滴将刚才制备的重氮溶液添加到该腙溶液中。在开头几滴之后，反应物颜色从黄色变成深蓝色。在1/3添加之后，该深蓝色反应混合物变得非常粘。当完成添加时，搅拌该混合物30分钟。然后，经由冰/水浴使该反应物温热到3-5℃。搅拌反应物1小时。将该混合物转移至装有甲醇(500mL)的2升圆底烧瓶中。在旋转蒸发器上在减压和45℃下将该混合物浓缩直到不再形成馏出液。再次添加MeOH(500mL)并将混合物浓缩。重复该过程。在真空下干燥所得的固体一整夜。然后，用MeOH(100mL)冲洗该烧瓶并用EtOAc(500mL)稀释。在冰/水浴中搅拌该浆料30分钟。将产物过滤并用EtOAc(100mL)，冷MeOH(50mL)、EtOAc(150mL)和己烷(150mL)洗涤。将所得的深蓝色产物转移至淡黄色瓶子中并在真空下干燥而获得通过以下光谱性能鉴定的所需的甲

(13，11.3g，67％)。¹⁹F NMR：(376mHz，DMSO d₆)：δ-177.77(d，J＝59.2Hz)，¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ169.57，153.6，148.1，147.8，144.81，141.9，137.1，132.74，128.82，121.53，121.5，121.1，115.89，113.96，108.8，108.22，106.68，101.33，66.21，63.03，51.99，22.351HNMR(400MHz，DMSO-d6)：δ11.78(br s，1H)，8.05(dd，J＝8.1Hz，J＝1.5Hz，1H)，7.55(dd，J＝8.2Hz，J＝1.6Hz，1H)，7.48(dd，J＝8.2Hz，J＝1.7Hz，1H)，7.43(d，J＝1.7Hz，1H)，7.32(dd，J＝8Hz，J＝＜1Hz，1H)，7.16(t，J＝7.9Hz，1H)，7.15(t，J_HF＝59.2，1H)，7.04(d，J＝8.2Hz，1H)，6.11(s，2H)，4.32(t，J＝6Hz，2H)，3.49(m，2H)，3.05(s，9H)，2.38(m，2H)。ES I-MS：m/z 611(100％，M-Ms)，258(26％，M²⁺)。

向上述甲

(2.16g，3.4mmol)、水(1.4mL)和THF(40mL)的混合物中添加甲烷磺酸(0.68mL，10.24mmol)。搅拌该混合物5分钟。然后，按一份添加亚硝酸钠(720mg，10.24mmol)。搅拌该混合物3天。浆料颜色从深蓝色变成橙色。将该橙色沉淀物过滤并用THF(2×10mL)洗涤。在真空下干燥该产物一整夜。然后，用MeOH(80mL)将该固体制浆，过滤并用MeOH(2×5mL)洗涤残留物。在旋转蒸发器上在减压和40℃下将该滤液浓缩。在真空下干燥所得的产物2天而获得通过以下光谱性能鉴定的橙色tet盐(2.86g，＞100％)。

¹⁹F NMR：(376MHz，DMSO-d₆)：δ-181.13(d，J＝52.1Hz)，¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ165.1，152.52，152.27，148.85，146.68，142.72，142.45，137.07，135.95，128.44，123.87，121.87，121.86，121.39，115.57，114.68，110.80，109.84，108.43，107.14，106.06，102.78，100.49，66.92，62.23，52.21，22.08¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ7.98(dd，J＝8.0Hz，J＝1.5Hz，1H)，7.91(m，2H)，7.82(d，J＝1.8Hz，1H)，7.53(d，J＝8.2Hz，1H)，7.37(m，1H)，7.31(d，J＝8.2Hz，1H)，7.25(t，J_HF＝59.2，1H)，6.27(s，2H)，4.17(t，J＝6Hz，2H)，3.49(m，2H)，2.93(2，9H)，2.02(m，2H)。ES I-MS：m/z 663(22％，M²⁺+TFA)，645(17％，M⁺)，275(100％，M²⁺)。

实施例2

5-苯并[1，3-间二氧杂环戊烯-5-基]-3-[2-(3-三甲基铵)丙氧基-苯基]-2-(5-氯-4-二氟甲基噻唑-2-基)-2H-四唑溴代四氟硼酸盐的制备。

如实施例1那样制备盐，不同在于使用48％四氢氟代硼酸与相同的甲

而产生所需的橙色四唑盐。¹³C NMR(400MHz，DMSO d₆)：

¹³C NMR(400MHz，DMSO d₆)：δ137，128，124，121，114，111，110，108，107，106，103，68，63，53，28 ¹⁹F NMR：(376MHz，DMSO-d₆)：δ-181.13(d，J＝59.2Hz)，¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ7.92(m，3H)，7.82(d，J＝1.8Hz，1H)，7.52(bd，J＝8.2Hz，1H)，7.37(m，1H)，7.31(d，J＝8.2Hz，1H)，7.25(t，J_HF＝59.2，1H)，6.27(s，2H)，4.17(t，J＝6Hz，2H)，3.35(m，2H)，2.93(2，9H)，2.02(m，2H)。ESI-MS：m/z 637(100％，M⁺-Br)。

实施例3

5-苯并[1，3-间二氧杂环戊烯-5-基]-3-[2-(3-二甲基氢铵)丙氧基- 苯基]-2-(5-氯-4-二氟甲基噻唑-2-基)-2H-四唑溴代亚硝酸盐的制备

向在氮气下的100mL干燥的一颈圆底烧瓶中的邻硝基苯酚(Aldrich，2.1g，45mmol)在DMF(50mL)中的黄色溶液中，添加碳酸钾(4.4g，32mmol)。该混合物转变成橙色。在搅拌10分钟之后，添加3-氯代丙基二甲基铵氯化氢(Aldrich，2.4g，16.5mmol)。在125℃下加热所得的混合物一天。在将该反应混合物冷却到室温之后，将残留物过滤并用MeOH(2×10mL)洗涤该沉淀。在真空和40℃下浓缩该滤液直到5mL。然后添加EtOAc(100mL)。沉淀形成并过滤。将水(100mL)和EtOAc(150mL)添加到该滤液中，层混合并分离。用EtOAc(3×25mL)萃取水层。用饱和的氯化钠水溶液(25mL)洗涤合并的EtOAc萃取物，在硫酸镁(5g)上干燥，过滤并浓缩而获得黄色油(2.55g，81％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ7.80(dd，J＝8.1Hz，J＝1.7Hz，1H)，7.58(dt，J＝8.2Hz，J＝1.7Hz，1H)，7.05(d，J＝8.2Hz，1H)，6.65(d，J＝1.7Hz，1H)，4.25(t，J＝6Hz，2H)，2.45(m，2H)，2.15(s，9H)，1.9(m，2H)。ESI-MS：m/z 225(100％，M+1)。

按与实施例1相同的方式处理该烷基化的硝基苯酚而产生所需的tet盐。

¹³C NMR(400MHz，DMSO d₆)：δ127，124，121，115，110，109，108，107，104，102，64，48，36，28 ¹⁹F NMR：(376MHz，DMSO-d₆)(d，J＝59.2Hz)：δ-119.13，¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ7.95(m，3H)，7.80(d，J＝1.8Hz，1H)，7.50(d，J＝8.2Hz，1H)，7.35(t，J＝8.2Hz，1H)，7.31(d，J＝8.2Hz，1H)，7.25(t，J_HF＝59.2，1H)，6.27(s，2H)，4.20(t，J＝6Hz，2H)，3.45(m，2H)，2.65(d，j＝1.8Hz，6H)，1.98(m，2H)。ESI-MS：m/z 535(100％，M²⁺)。

实施例4

5-苯并[1，3-间二氧杂环戊烯-5-基]-3-[2-(3-三甲基铵)丙氧基-苯基]-2-(苯并噻唑-2-基)-2H-四唑溴代亚硝酸盐的制备

如实施例1中那样使胡椒醛-苯并噻唑-2-基腙与溴化3-(2-氨基苯氧基)丙基三甲基铵起反应以制备甲

，然后将它转化成相应的四唑盐。

在与实施例1中制备甲

所使用的相似的条件下，使胡椒醛苯并噻唑-2-基腙(Bayer，2.5g，10.5mmol)与实施例1的苯胺衍生物(2.85g，9.6mmol)起反应而获得通过以下光谱性能鉴定的暗紫色固体(4.7g，82％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ11.78(br s，IH)，7.98(dd，2H)，7.73(m，1H)，7.60(m，2H)，7.50(m，1H)，7.41(m，2H)，7.29(m，1H)，7.05(d，1H)，6.14(s，2H)，4.39(t，2H)，3.55(m，2H)，3.05(s，9H)，2.48(m，2H)。ESI-MS：m/z 517(100％，M⁺)。

在与实施例1相同的条件下，将上述甲

(600mg，1.01mmol)转变成四唑盐(870mg，＞100％)。通过以下光谱性能鉴定该四唑盐。¹3C NMR(100MHz，DMSO-d₆)：δ164.98，152.59，152.26，148.91，136.64，132.74，135.08，129.27，128.88，128.24，124.77，123.97，123.7，122.6，121.97，115.81，114.56，109.86，107.12，102.82，66.88，62.26，52.2，22.02。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.42(dd，J＝8.2Hz，J＝0.8Hz，1H)，8.03(dd，J＝7.7Hz，3＝1.6Hz，1H)，8.02(dd，J＝8.1Hz，J＝0.9Hz，1H)，7.97(dd，J＝8.2Hz，J＝1.8Hz，1H)，7.93(m，1H)，7.86(d，J＝1.7Hz，1H)，7.76(m，1H)，7.73(m，1H)，7.55(dd，J＝8.6Hz，J＝0.9Hz，1H)，7.39(m，1H)，7.32(d，J＝8.1Hz，1H)，6.28(s，2H)，4.12(t，J＝6Hz，2H)，3.16(m，2H)，2.91(s，9H)。ESI-MS：m/z 561.2(100％，M⁺)。

实施例5

5-苯并[1，3-间二氧杂环戊烯-5-基]-3-[2-(3-三甲基铵)丙氧基-苯基]-2-(6-甲氧基萘基噻唑-2-基)-2H-四唑溴代亚硝酸盐的制备

使用6-甲氧基-2-肼基-萘基噻唑代替实施例4中的2-肼基-苯并噻唑以制备合适的腙。然后，在相同的条件下处理该腙而产生所需的甲

(44％总)。

¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ135，130，125，122，121，120，115，114，113，110，65，64，55，52，38，22 ¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.61(d，J＝8.1Hz，1H)，8.29(d，J＝8.2Hz，1H)，8.05(dd，J＝8.1Hz，J＝1.8Hz，1H)，7.82(dt，J＝8.2Hz，J＝1.7Hz，1H)，7.68(m，2H)，7.61(dd，J＝8.1Hz，J＝1.6Hz，1H)，7.55(d，J＝1.8Hz)，7.37(dd，J＝8.2Hz，J＝1.8Hz，1H)，7.31(dd，J＝8.2Hz，J＝1.8Hz，1H)，7.27(dt，J＝8.1Hz，J＝1.7Hz，1H)，7.08(d，J＝8.1Hz，1H)，6.12(s，2H)，4.45(t，J＝6Hz，2H)，4.10(s，3H)，3.60(m，2H)，2.95(s，9H)，2.65(m，2H)。ESI-MS：m/z 597(100％，M⁺)。

向在冰/盐/水浴中的乙酸(5mL)和四氢呋喃(5mL)的溶液中，添加亚硝酸钠(143mg，2.08mmol)。在搅拌10分钟之后，添加上述甲

(340mg，0.051mmol)。在1小时之后，允许反应物回升到室温并搅拌一整夜。将暗栗色混合物过滤并用乙酸(3×5mL)、乙酸乙酯(2×10mL)和己烷(10mL)洗涤固体。在旋转蒸发器上在30℃下浓缩该滤液然后在真空下干燥一整夜。用乙酸乙酯(15mL)将该残留物制浆、沉积并滗析。重复该过程。然后添加己烷(10mL)。将产物过滤并干燥一整夜而获得所需的栗色tet盐(260mg，75％)。

¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ129，128，126，123，121，119，115，114，112，108，105，101，98，66，63，57，51，22 ¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.32(m，1H)，8.02(m，4H)，7.87(d，J＝1.8Hz，1Hz)，7.78(m，3H)，7.66(d，8.2Hz，1H)，7.47(t，J＝8.2Hz，1H)，7.33(d，J＝8.2Hz，1H)，6.28(s，2H)，4.13(s，3H)，3.15(m，2H)，2.85(s，9H)，1.87(m，2H)。ES I-MS：m/z 298(100％，M²⁺)，709(20％，M⁺+TFA)，

实施例6

5-[4-(3-三甲基铵)丙氧基-3-甲氧基-苯基]-3-[2-(3-三甲基铵) 丙氧基-苯基]-2-(5-氯-4-二氟甲基-噻唑-2-基)-2H-四唑二溴代亚硝酸盐的制备

使4-羟基-3-甲氧基苯甲醛与溴化3-溴代丙基三甲基铵反应以引入另一个三甲基铵丙氧基取代基。使该产物与5-氯-4-二氟甲基-2-肼基-噻唑起反应以产生腙。该腙与如实施例1所述的溴化3-(2-氨基苯氧基)丙基三甲基铵起反应而产生甲

，将该甲

转变为相应的四唑盐。在与实施例1中所使用的相同的条件下用溴化3-溴代丙基三甲基铵(8.8g，34mmol)将4-羟基-3-甲氧基-苯甲醛(香草醛，Aldrich，4.56g，30mmol)烷基化以制备通过以下光谱性能鉴定的灰白色产物(9.73g，97％)。

¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ192.5，155，150，130，125.75，112.6，110，66.5，63.4，56，25.5。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ9.88(s，1H)，7.58(dd，J＝8.2Hz，J＝1.9Hz，1H)，7.41(d，J＝1.9Hz，1H)，7.22(d，J＝8.2Hz，1H)，4.35(t，J＝6.4Hz，2H)，3.49(m，2H)，3.14(s，9H)，2.30(m，2H)。ESI-MS：m/z 252.2(100％，M⁺)。

向上述烷基化的苯甲醛(6.8g，20.5mmol)和5-氯-4-二氟甲基-2-肼基-噻唑(Bayer，3.72g，18.6mmol)在MeOH(60mL)中的浆料中添加乙酸(0.55mL)。在5分钟之后该浆料几乎溶解。在80℃下加热所得的混合物一整夜。在冷却反应物到室温之后，将该溶液缓慢地添加到EtOAc(650mL)中。形成淡灰色沉淀。搅拌该混合物30分钟。将固体过滤并用EtOAc和己烷洗涤。将该淡灰色产物转移至淡黄色的瓶子中并在真空下干燥一整夜而获得通过以下性能鉴定的所需腙(8.7g，87％)。

¹⁹F NMR：(376MHz，DMSO-d₆)：δ111.08(d，J＝47Hz)，¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ143，121，114，109，108.5，66，63，55，53，39，22。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：12.37(s，1H)，7.29(d，J＝1.9Hz，1H)，7.19(dd，J＝10Hz，J＝1.8Hz，1H)，7.06(t J＝7.7Hz，1H)，7.18(mm，1H)，6.95(t，J_HF＝47，1H)，4.09(t，J＝6.1Hz，2H)，3.83(s，3H)，3.47(m，2H)，3.47(m，2H)，3.29(s，9H)，2.50(m，2)，2.20(m，2H)。ESI-MS：m/z433.1(100％，M⁺)。

在与实施例1相似的条件下使上述腙(7.08g，13.86mmo l)与实施例1的苯胺衍生物(6g，20.76mmol)起反应而获得通过以下光谱性能鉴定的深蓝色甲

(8.56g，76％)。

¹⁹F NMR：(376MHz，DMSO-d₆)：δ177.77(d，J＝59.2Hz)¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ153，148.98，148.63，144.5，136.5，132.73，132.74，127，121.59，119.53，115.54，113.96，113.58，110.98，108.92，66.10，65.79，62.77，55.54，52.15，22.45，22.25。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ：11.78(br s，1H)，8.03(dd，J＝8.1bHz，J＝1.5Hz，1H)，7.56(m，IH)，7.52(dt，J＝8.5Hz，J＝2Hz，1H)，7.50(d，J＝2Hz，1H)，7.35(dd，J＝8.5Hz，J＝1Hz，1H)，7.30(d，J＝7.9Hz，1H)，7.18(mm，1H)，7.17(t，J_HF＝59.2，1H)，4.35(t，J＝5.8Hz，2H)，4.13(t，J＝6.1Hz，2H)，3.88(s，3H)，3.55(m，2H)，3.50(m，2H)，3.14(s，9H)，3.07(s，9H)，2.50(m，2H)，2.30(m，2H)。ES I MS：m/z652.2(45％，M⁺)，326.8(100％，M⁺)。

在与实施例1中所使用的相似的条件下将上述甲

(2.44g，3mmol)转变成四唑盐，不同之处在于在40℃下加热该反应混合物15小时。通过以下光谱性能鉴定该产物。

¹³C NMR(100MHz，DMSO-d₆)：δ136.7，128.5，121.9，121.8，114.5，113.5，110.2，108.1，105.7，66.7，66.1，62.5，62.1，56.1，52.1，51.8，21.8，21.2。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.06(dd，J＝8.1Hz，J＝1.5Hz，1H)，7.93(m，8H)，7.77(d，J＝2Hz，1H)，7.53(d，J＝8.6Hz，1H)，7.38(t，J＝8.5Hz，2H)，7.26(d，J＝52.2Hz，1H)，4.23(t，J＝6H，2H)，4.17(t，J＝6.1Hz，2H)，3.94(s，3H)，3.53(m，2H)，3.32(m，2H)，3.14(s，9H)，3.01(s，9H)，2.26(m，2H)，2.03(m，2H)，ESI MS：m/z 652.2(45％，M⁺)，326.8(100％，M⁺)，326.8(100％，M²⁺)。

实施例7

5-[4-(3-三甲基铵)丙氧基-3-甲氧基-苯基]-3-[2-(3-三甲基铵) 丙氧基-苯基]-2-(6-乙氧基-苯并噻唑-2-基)-2H-四唑二溴代亚硝酸盐的制备

使6-乙氧基-2-肼基-苯并噻唑与实施例6中制备的烷基化苯甲醛起反应以形成腙，然后使该腙与实施例1中制备的取代的苯胺起反应以制备甲

。将该甲

转变成等同的四唑盐。

在与实施例6相似的条件下使6-乙氧基-2-肼基-苯并噻唑(Acros，4.62g，22mmol)与4-(3-三甲基铵丙氧基)-3-甲氧基-苯甲醛起反应而获得通过以下性能鉴定的淡灰色产物(10.23g，95％)。

¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ165.58，153.82，153.74，149.24，148.96，142.42，128.01，120.16，118.24，113.62，113.54，108.66，106.49，101.33，65.83，63.51，62.86，55.32，52.16，22.51，14.6。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ11.98(br s，1H)，8.03(s，1H)，7.38(d，J＝2.2Hz，1H)，7.34(d，J＝8.7Hz，1H)，7.32(d，J＝1.8Hz，1H)，7.20(dd，J＝8.4Hz，J＝1.8Hz，1H)，7.07(d，J＝8.4Hz，1H)，6.89(dd，J＝8.7Hz，J＝2.5Hz，1H)，4.09(t，J＝6.1H，2H)，4.03(t，J＝7Hz，2H)，3.84(m，3H)，3.49(m，2H)，3.12(s，9H)，2.22(m，2H)，1.33(t，J＝7Hz)。ESI-MS：m/z 561.2(100％，M⁺).ES I-MS：m/z 443.1(78％，M⁺)，222.1(100％，M⁺²)。

在与实施例1中所使用的相似的条件下使上面制备的腙(3.6g，6.93mmol)与实施例1的苯胺(3g，10.38mmol)起反应以制备甲，不同在于使用吡啶和DMF的3∶1混合物作为溶剂，以产生通过以下光谱性能鉴定的所需深蓝色产物(3.8g，66％)。

¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ130.5，123.2，121.8，118.8，116，115.3，114.1，113.8，109.8，106.3，67.1，66.5，63.6，52.5，22.6，22.5，14.2。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ11.78(br s，1H)，8.01(br d，J＝8Hz，1H)，7.81(br s，1H＝8.8Hz，1H)，7.62(m，3H)，7.48(t，J＝8Hz，1H)，7.33(d，J＝8.3Hz，1H)，7.16(m，1H)，7.10(dd，J＝8.8Hz，J＝2.4Hz，1H)，4.38(t，J＝5.8Hz，2H)，4.13(m，2H)，3.91(s，3H)，3.55(m，2H)，3.50(m，2H)，3.13(s，9H)，3.08(s，9H)，2.54(m，2H)，2.25(m，2H)，1.38(t，J＝7Hz，3H)。ESI MS：m/z 776(12％，M⁺′+TFA)662.2(45％，M⁺)，331.8(100％，M⁺²)。

在与实施例1中所使用的相似的条件下，将上述甲

(1.24g，1.5mmol)转变成四唑盐(2g，＞100％)。通过以下光谱性能鉴定该产物。

¹³C NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ136.8，128.1，125.4，121.5，121.4，114，113.5，109.8，106.8，66.6，66.2，64.5，62.5，62.2，56.1，52.2，52.1，22.1，21.5，13.5。¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.04(dd，J＝8Hz，J＝1.5Hz，1H)，7.95(m，4H)，7.78(d，J＝2Hz，3H)，7.54(d，J＝8.5Hz，1H)，7.40(t，J＝7.8Hz，1H)，7.38(d，J＝8.6Hz，1H)，4.23(t，J＝6.1H，2H)，4.1(q，J＝8Hz，2H)，4.12(m，2H)，3.96(s，3H)，3.53(m，2H)，3.50(m，2H)，3.18(m，2H)，3.15(s，9H)，2.92(2，9H)，2.30(m，2H)，1.89(m，2H)，1.40(t，J＝7Hz，2H)。ES I MS：m/z 220.8(100％，M⁺³)。

实施例8

5-[4-(3-三甲基铵)丙氧基-3-甲氧基-苯基]-3-[2-(3-三甲基铵) 丙氧基-苯基]-2-(6-溴苯并噻唑-2-基)-2H-四唑二溴代亚硝酸盐的制备

使用6-溴-2-肼基-苯并噻唑代替实施例8中的6-乙氧基-2-肼基-苯并噻唑以制备合适的腙。然后，在相同的条件下处理该腙而产生所需的甲

(44％总)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)，δ7.90(dd，J＝8.1Hz，J＝1.7Hz，1H)，7.58(dt，J＝8.2Hz，J＝1.7Hz，1H)，7.39(d，J＝8.2Hz，1H)，7.15(d，J＝1.7Hz，1H)，4.25(t，J＝6Hz，2H)，3.45(m，2H)，3.11(s，9H)，2.48(m，2H)，2.25(m，2H)。ES I-MS：m/z 249(100％，M²⁺)。

在与实施例8相同的条件下处理该甲

(322mg，0.375mmol)以形成四唑盐，不同之处在于在40℃下加热反应物一整夜以产生所需的四唑盐(478mg，＞100％)。

¹³C NMR(100MHz，DMSO d₆)：δ151，139.45，134.71，125.14，121，115.39，66.59，62.84，52.39，22.48：δ7.90 ¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)，8.74(d，J＝2.1Hz，1H)，7.95(m，5H)，7.78(d，J＝2.1Hz，1H)，7.51(d，J＝7.8Hz，1H)，7.39(m，2H)，4.2(m，2H)，4.08(m，2H)，3.96(s，3H)，3.53(m，2H)，3.19(m，2H)，3.11(s，9H)，2.91(s，9H)，2.24(m，2H)，1.87(m，2H)。ESI-MS：m/z 233(100％，M³⁺)。

实施例9

三溴化5-[4-(3-三甲基铵)丙氧基-3-甲氧基-苯基]-3-[2-(3-三甲基铵)丙氧基-苯基]-2-(6-乙氧基-苯并噻唑-2-基)-2H-四唑盐的制备

在室温下，向甲

(得自实施例7，1.18g，1.43mmol)在乙腈(15mL)中的浆料中添加正溴代琥珀酰亚胺(300mg，1.69mmol)。在1小时之后，所有物质溶解。在3小时之后，橙色沉淀物形成。搅拌反应物一整夜。将沉淀物过滤并用乙腈(3×5mL)洗涤。在真空下干燥所得的橙色产物一整夜。(1.07g，83％)

¹³C NMR(100MHz，DMSO d₆)：δ151，139.45，134.71，125.14，121，115.39，66.59，62.84，52.39，22.48¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)：δ8.08(d，J＝8.2Hz，1H)，8.04(d，J＝I.7Hz，1H)，7.94(m，3H)，7.79(b s，1H)，7.55(d，J＝8.2Hz，1H)，7.40(d，J＝8.2Hz，1H)，7.30(dd，J＝8.2Hz，J＝I.7Hz，1H)，4.23(t，J＝6Hz，2H)，4.15(q，J＝8.2Hz，2H)，4.10(m，2H)，3.95(s，3H)，3.57(m，2H)，3.22(m，2H)，3.15(s，9H)，2.95(s，9H)，2.30(m，2H)，1.90(m，2H)，1.4(t，J＝8.2Hz)。ES I-MS：m/z 221(100％，M³⁺)。

实施例1-9中制备的四唑盐的溶解性如下测定：在室温下将0.2M磷酸盐缓冲液(pH值～7.5)添加到已知量的每个化合物中直到该化合物溶解。结果中表1中示出，其中将它们与WST-4(DojindoLaboratories的噻唑基四唑盐)、HTC-045(Bayer Corp.的噻唑基四唑盐)和改性的HTC-045(其中甲氧基被3-磺酸酯丙氧基替代)比较(参见图3)。

表1

实施例编号(平衡离子)	溶解度(mM)

1(溴代亚硝酸根)	33
		2(溴代四氟硼酸根)	5
3(溴代亚硝酸根)	9
		4(溴代亚硝酸根)	167
5(溴代亚硝酸根)	5
		6(二溴代亚硝酸根)	181
7(二溴代亚硝酸根)	169
		8(二溴代亚硝酸根)	290
9(三溴离子)	260
		WST-4	118
HTC-045	21
		改性的HTC-045	8

虽然通过将三烷基铵丙氧基取代基添加到噻唑基四唑盐上而实现了四唑盐的溶解性的改进，但是基于现有技术这种改进是不易预知的。现有技术将预知将3-磺酸酯丙氧基添加到该分子中将提高该分子的水溶性。Dojindo Laboratories使用了将磺酸基引入分子中。然而，3-磺酸酯丙氧基替代与四唑环连接的苯基上的甲氧基(参见改性的HTC-045，图3)导致比HTC-045(21mM)低的溶解度(8mM)。因此在我们的分子结构中，这种现象不明显。我们发现不同的极性基团将改进水溶性。然而，观察到其它出乎意料的效果，将在下面论述这些效果。

三甲基铵丙氧基替代甲氧基使溶解度从21mM(HTC-045)增加到33mM(实施例1)并且添加第二个三甲基铵丙氧基(实施例6)显著地将溶解度增加到181mM。然而，当用四氟硼酸根平衡离子替代硝酸根时，溶解度显著地降低。(比较实施例2与实施例1)。当将三甲基铵丙氧基改变为二甲基铵丙氧基时，实施例1中的四唑盐的溶解度降低(实施例3)。

出人意料地，在其中仅包括一个三甲基铵丙氧基的实施例4(167mM)中也发现了由于添加两个三甲基铵丙氧基(实施例6)获得的溶解度的显著增加，但是取代的噻唑基被未取代的苯并噻唑基替代。然而，再添加噻唑基发现具有差的溶解度(5mM)，如其中使用取代的萘基噻唑基的实施例5所示。在另一个出乎意料的结果中，如实施例7所示，添加两个三甲基铵基团和一个苯并噻唑基(它们都导致溶解度方面的显著增加)看来似乎没有互补效果。实施例7具有167mM的溶解度。

当实施例7的苯并噻唑基上的乙氧基被实施例8中的溴基替代时，获得溶解度的另一个显著增加。溶解度从169mM增加290mM，在此示出的最高值。当实施例7中的平衡离子(亚硝酸根离子)被实施例9中的溴离子替代时，发现类似的结果。溶解度从169mM增加到260mM。看来包括溴似乎是改进这类四唑盐的溶解度的有效手段。

制备并测试它们溶解度的化合物具有稍微不同的光谱性能。表1中的由四唑盐形成的并测试了溶解度的每种甲

的吸收谱用HewlettPackard Model 8453二极管阵列UV可见光分光光度计测量。在100mM磷酸钾缓冲物中制备100μM四唑盐的溶液。在添加5倍过量的抗坏血酸盐以将tet盐转化成它们的甲

之后，测量甲光谱。结果在图5a和b中给出。

如此前指出，来自噻唑基四唑盐的甲

旨在吸收波长大于640nM的光，并且平缓响应是希望的。为了对比，已经在图5a和b中绘制了HTC-045和WST-4的吸光率曲线。WST-4在大约560nM的范围中表现出峰吸光率，而HTC-045在大约460nM-660nM之间显示较平缓的吸光率。然而，它的溶解度小于WST-4。添加三甲基铵丙氧基改变了光谱曲线。实施例1、2、3、4、6、7和8具有比HTC-045低的吸光率，但是曲线在整个所示的范围内都较平缓。可以看出，包括萘基噻唑基的实施例5tet盐不但具有低的溶解度，而且显示上升的吸光率对波长曲线，这表明没有与HTC-045或实施例1、2、3、4、6、7和8的经改性的化合物可比的平缓区域。实施例9显示在400-640nM之间具有较平缓响应的光谱曲线并且显示是高度可溶的。

理想地，四唑盐应该产生在宽泛波长内具有高吸光率的甲以致当分析物起反应时显示的颜色可以容易且可靠地测量。因此，较平缓的曲线是非常合乎需要的。从得自经测试的tet盐的甲

的溶解度可以看出，它们都(实施例5可能例外)显示作为有用的指示剂的前景。实施例5的四唑盐是新型化合物并且可以用作指示剂，但是与具有更均匀光谱曲线和更大溶解度的那些相比它可能不是优选的。

四唑盐的用途

虽然四唑盐是用于许多应用的有用的指示剂，但是它们当在用于测量生物样品中的分析物的试验条中使用时是尤其有价值的。一个重要的应用是测量血液的葡萄糖含量。

试验条通常包含载体和反应物组合物。反应物(例如葡糖脱氢酶)和补助因子(例如NAD或PQQ)与生物样品中的分析物(例如葡萄糖)反应并且媒剂(例如PMS或黄递酶)将该噻唑基四唑盐还原成其相应的有色的甲

。所得的颜色通常使用为那种目的而设计的测量计最精确地测量。光源(例如LED)将入射光提供到试验条上。通过光检测器测量从该试验条反射的光并与已经起反应的分析物的量进行关联。

本发明的噻唑基四唑指示剂提供宽的可从美国专利号5,126,275和早先提及的其它文献中公开的指示剂获得的谱。但是，如实施例所示，许多新型噻唑基四唑指示剂与HTC-045相比具有改进的溶解性，从而提供更快速的测试时间和更精确的结果。

将在以下备选实施方案中概述本发明。

备选实施方案A

具有以下通式的化合物

其中：

A＝平衡离子

a＝1-3

b＝0-3

X＝1-6C烷基或杂烷基

R₁＝1-6C烷基

R₂和R₃之一是烷基并且另外一个是XN+H_b(R₁)_3-b，或R₂和R₃形成亚甲二氧基

R₄和R₅之一是卤素并且另外一个是卤素取代的1-6C烷基，R₄和R₅中一个或两个是XN+H_b(R₁)_3-b，或R₄和R₅连接形式芳族或杂芳族环或取代的芳族环或取代的杂芳族环。

备选实施方案B

具有以下通式的备选实施方案A的化合物

其中：

A＝平衡离子

X＝1-6C烷基

a＝1-3

b＝0-3

R₁＝1-3C烷基

R₂和R₃之一是1-4C烷基并且另外一个是XN+H_b(R₁)_3-b，或R₂和R₃形成亚甲二氧基，

R₄＝CHF₂

R₅＝卤素。

备选实施方案C

备选实施方案B的化合物，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂和R₃形成亚甲二氧基

R₄是CHF₂

R₅是Cl。

备选实施方案D

备选实施方案B的化合物，其中

X是丙基

b是1

R₁是甲基

R₂和R₃形成亚甲二氧基

R₄是CHF₂

R₅是Cl。

备选实施方案E

备选实施方案B的化合物，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲氧基

R₄是CHF₂

R₅是Cl。

备选实施方案F

具有以下通式的备选实施方案A的化合物

其中：

a＝1-3

A＝平衡离子

X＝1-6C烷基

b＝0-3

R₁＝1-3C烷基

R₂和R₃中一个是烷基并且另外一个是XN+H_b(R₁)_3-b，或R₂和R₃形成亚甲二氧基，

R₄和R₅中一个是卤素并且另外一个是卤素取代的1-6C烷基，或R₄和R₅是氢

R₆＝1-4C烷氧基，氢或卤素。

备选实施方案G

备选实施方案F的化合物，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲氧基

R₄、R₅和R₆是氢。

备选实施方案H

备选实施方案F的化合物，其中

X是丙基

R₁是甲基

b是0

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲基

R₄和R₅形式芳环

R₆是甲氧基。

备选实施方案I

备选实施方案F的化合物，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲基

R₄和R₅是氢

R₆是乙氧基。

备选实施方案J

备选实施方案F的化合物，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲基

R₄和R₅是氢

R₆是溴。

备选实施方案K

备选实施方案A的化合物，其中所述至少一种平衡离子是亚硝酸根、磷酸根、磷酸氢根、磷酸二氢根、硫酸氢根、硫酸根、碳酸氢根、碳酸根、甲烷磺酸根、氟硼酸根、溴离子、氯离子、碘离子或它们的结合物。

备选方法L

包含在生物流体中的分析物的测量方法，所述分析物适合于在反应后产生比例性变色，所述方法包括以下措施：

提供四唑盐作为指示剂，所述四唑盐具有以下通式：

其中：

A＝平衡离子

a＝1-3

b＝0-3

X＝1-6C烷基或杂烷基

R₁＝1-6C烷基

R₄和R₅之一是卤素并且另外一个是卤素取代的1-6C烷基，R₄和R₅中一个或两个是XN+H_b(R₁)_3-b，或R₄和R₅连接形成芳族或杂芳族环或取代的芳族环或取代的杂芳族环；和

借助作为指示剂的所述四唑盐测定所述分析物在所述生物流体中的浓度。

备选方法M

备选方法L的方法，其中所述分析物是葡萄糖。

备选方法N

备选方法M的方法，其中所述生物流体是全血。

备选方法O

备选方法M的方法，其中所述四唑盐具有通式

其中：

A＝平衡离子

X＝1-6C烷基

a＝1-3

b＝0-3

R₁＝1-3C烷基

R₄＝CHF₂

R₅＝卤素。

备选方法P

备选方法O的方法，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂和R₃形成亚甲二氧基

R₄是CHF₂

R₅是Cl。

备选方法Q

备选方法O的方法，其中

X是丙基

b是1

R₁是甲基

R₂和R₃形成亚甲二氧基

R₄是CHF₂

R₅是Cl。

备选方法R

备选方法O的方法，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲氧基

R₄是CHF₂

R₅是Cl。

备选方法S

具有以下通式的备选方法L的方法

其中：

a＝1-3

A＝平衡离子

X＝1-6C烷基

b＝0-3

R₁＝1-3C烷基

R₆＝1-4C烷氧基，氢或卤素。

备选方法T

备选方法S的方法，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲氧基

R₄、R₅和R₆是氢。

备选方法U

备选方法S的方法，其中

X是丙基

R₁是甲基

b是0

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲基

R₄和R₅形式芳环

R₆是甲氧基。

备选方法V

备选方法S的方法，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲基

R₄和R₅是氢

R₆是乙氧基。

备选方法W

备选方法S的方法，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲基

R₄和R₅是氢

R₆是溴。

备选方法X

备选方法L的方法，其中所述至少一种平衡离子是亚硝酸根、磷酸根、磷酸氢根、磷酸二氢根、硫酸氢根、硫酸根、碳酸氢根、碳酸根、甲烷磺酸根、氟硼酸根、溴离子、氯离子、碘离子或它们的结合物。

备选方法Y

噻唑基四唑盐的溶解度的增加方法，所述噻唑基四唑盐的噻唑基与四唑环的第三个氮原子连接，该方法包括将至少一个三烷基铵烷氧基作为取代基添加到噻唑基四唑盐中。

备选方法Z

备选方法Y的方法，其中所述噻唑基四唑盐在四唑环的第三个氮原子处和碳原子处具有苯基取代基。

备选方法AA

备选方法Z的方法，其中所述至少一个三烷基铵烷氧基是三甲基铵丙氧基。

备选方法BB

备选方法Z的方法，其中所述至少一个三烷基铵烷氧基是所述苯基的取代基。

备选方法CC

备选方法Z的方法，其中至少一个三烷基铵烷氧基是所述两个苯基取代基的取代基。

备选方法DD

备选方法Z的方法，其中所述噻唑基是苯并噻唑基。

备选方法EE

备选方法Z的方法，其中所述噻唑基四唑盐具有亚硝酸根、磷酸根、磷酸氢根、磷酸二氢根、硫酸氢根、硫酸根、碳酸氢根、碳酸根、甲烷磺酸根、氟硼酸根、溴离子、氯离子、碘离子或它们的结合物的平衡离子。

备选方法FF

备选方法EE的方法，其中所述平衡离子是溴代亚硝酸根、二溴代亚硝酸根或三溴离子。

Claims

1.具有以下通式的化合物：

其中：

A＝平衡离子

a＝1-3

b＝0-3

X＝1-6C烷基或杂烷基

R₁＝1-6C烷基

R₄和R₅之一是卤素并且另外一个是卤素取代的1-6C烷基，R₄和R₅中两个是XN+H_b(R₁)_3-b，或R₄和R₅连接形成芳族或杂芳族环或取代的芳族环或取代的杂芳族环。

2.权利要求1的化合物，具有以下通式：

其中：

A＝平衡离子

X＝1-6C烷基

a＝1-3

b＝0-3

R₁＝1-3C烷基

R₂和R₃中一个是1-4C烷基并且另外一个是XN+H_b(R₁)_3-b，或R₂和R₃形成亚甲二氧基，

R₄＝CHF₂

R₅＝卤素。

3.权利要求2的化合物，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂和R₃形成亚甲二氧基

R₄是CHF₂

R₅是Cl。

4.权利要求2的化合物，其中

X是丙基

b是1

R₁是甲基

R₂和R₃形成亚甲二氧基

R₄是CHF₂

R₅是Cl。

5.权利要求2的化合物，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲氧基

R₄是CHF₂

R₅是Cl。

6.权利要求1的化合物，具有以下通式：

其中：

a＝1-3

A＝平衡离子

X＝1-6C烷基

b＝0-3

R₁＝1-3C烷基

R₇和R₈中一个是卤素并且另外一个是卤素取代的1-6C烷基，或R₇和R₈是氢，或R₇和R₈形成芳环

R₉＝1-4C烷氧基，氢或卤素。

7.权利要求6的化合物，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲氧基

R₇、R₈和R₉是氢。

8.权利要求6的化合物，其中

X是丙基

R₁是甲基

b是0

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲基

R₇和R₈形式芳环

R₉是甲氧基。

9.权利要求6的化合物，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲基

R₇和R₈是氢

R₉是乙氧基。

10.权利要求6的化合物，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲基

R₇和R₈是氢

R₉是溴。

11.权利要求1的化合物，其中所述至少一种平衡离子是亚硝酸根、磷酸根、磷酸氢根、磷酸二氢根、硫酸氢根、硫酸根、碳酸氢根、碳酸根、甲烷磺酸根、氟硼酸根、溴离子、氯离子、碘离子或它们的结合物。

12.四唑盐在制备用于测定包含在生物流体中的分析物的产品中的应用，所述分析物适合于在反应后产生比例性变色，所述四唑盐具有以下通式：

其中：

A＝平衡离子

a＝1-3

b＝0-3

X＝1-6C烷基或杂烷基

R₁＝1-6C烷基

R₄和R₅之一是卤素并且另外一个是卤素取代的1-6C烷基，R₄和R₅中两个是XN+H_b(R₁)_3-b，或R₄和R₅连接形成芳族或杂芳族环或取代的芳族环或取代的杂芳族环；和

13.权利要求12的应用，其中所述分析物是葡萄糖。

14.权利要求13的应用，其中所述生物流体是全血。

15.权利要求13的应用，其中所述四唑盐具有通式

其中：

A＝平衡离子

X＝1-6C烷基

a＝1-3

b＝0-3

R_i＝1-3C烷基

R₄＝CHF₂

R₅＝卤素。

16.权利要求15的应用，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂和R₃形成亚甲二氧基

R₄是CHF₂

R₅是Cl。

17.权利要求15的应用，其中

X是丙基

b是1

R₁是甲基

R₂和R₃形成亚甲二氧基

R₄是CHF₂

R₅是Cl。

18.权利要求15的应用，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲氧基

R₄是CHF₂

R₅是Cl。

19.权利要求12的应用，具有以下通式：

其中：

a＝1-3

A＝平衡离子

X＝1-6C烷基

b＝0-3

R₁＝1-3C烷基

R₇和R₈之一是卤素并且另外一个是卤素取代的1-6C烷基，或R₇和R₈是氢，或R₇和R₈形成芳环

R₉＝1-4C烷氧基，氢或卤素。

20.权利要求19的应用，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲氧基

R₇、R₈和R₉是氢。

21.权利要求19的应用，其中

X是丙基

R₁是甲基

b是0

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲基

R₇和R₈形成芳环

R₉是甲氧基。

22.权利要求19的应用，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲基

R₇和R₈是氢

R₉是乙氧基。

23.权利要求19的应用，其中

X是丙基

b是0

R₁是甲基

R₂是三甲基铵丙基

R₃是甲基

R₇和R₈是氢

R₉是溴。

24.权利要求12的应用，其中所述至少一种平衡离子是亚硝酸根、磷酸根、磷酸氢根、磷酸二氢根、硫酸氢根、硫酸根、碳酸氢根、碳酸根、甲烷磺酸根、氟硼酸根、溴离子、氯离子、碘离子或它们的结合物。