MX2007001566A

MX2007001566A - Agente antiplaqueta y procedimiento para producir el mismo.

Info

Publication number: MX2007001566A
Application number: MX2007001566A
Authority: MX
Inventors: Tsutomu Yagi; Koji Sato; Syouko Yoshida; Kenji Sakuratani
Original assignee: Daiichi Seiyaku Co
Priority date: 2004-08-06
Filing date: 2005-08-05
Publication date: 2007-04-16
Also published as: AU2005268058A1; IL180988A0; EP1775293A1; NO20070986L; EP1775293A4; CA2574626A1; US20090137600A1; WO2006013962A1; KR20070046099A; RU2007108297A; JPWO2006013962A1; CN101072769A

Abstract

Un compuesto que tiene actividad inhibidora de agregacion de plaqueta y es excelente en propiedades del material y absorbabilidad oral; es el compuesto representado por la formula (Ib) (ver formula (Ib)).

Description

AGENTE ANTIPLAQUETA Y PROCEDIMIENTO PARA PRODUCIR EL MISMO CAMPO TÉCNICO Esta invención describe un derivado de pirazol que es útil como un inhibidor de agregación de plaqueta, y su método de producción.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las plaquetas juegan un papel importante de agregación y formación de trombo para detener el sangrado cuando se daña un vaso sanguíneo. De otra manera, las plaquetas se agregan para formar trombo y émbolo en la parte del vaso sanguíneo donde se daña o se encoge el endotelio vascular. El trombo y émbolo formado causará enfermedades isquémicas tales como infarto de miocardio, angina de pecho, trastorno vascular de cerebro isquémico, y trastorno vascular periférico. En vista de dicha situación, los inhibidores de agregación de plaqueta se han usado para prevenir y tratar enfermedades isquémicas. Entre dichos inhibidores de agregación de plaqueta, la aspirina de dosis baja se ha usado por un largo tiempo, y su efecto se ha provisto mediante ATP (Colaboración de Ensayistas Antiplaquetarios) que ha conducido metaanálisis de una pluralidad de ensayos clínicos en donde la aspirina se administra a 100,000 pacientes (véase Documento 1 no patente). La aspirina sin embargo, es conocida para inducir la llamada "aspirinulcera", un efecto secundario que induce sangrado gastrointestinal. Este efecto secundario ocurre a una velocidad de 1 por 100 pacientes independiente de la cantidad administrada (véase Documento 2 no patente). La acción inhibidora de agregación de plaqueta de la aspirina es conocida por estar basada en la supresión de ciclooxigenasa. Dos ciclooxigenasas, llamadas ciclooxigenasa -1 (COX-1 ) y ciclooxigenasa 2 (COX-2) son conocidas, y la aspirina selectivamente e irreversiblemente inhibe COX 1 en una baja dosis para suprimir la agregación de plaqueta. Sin embargo, esta inhibición de COX-1 también es una causa para la apirinulcera (véase Documentos 3 y 4 no patentes). Como se describe anteriormente, mientras la aspirina es útil como un inhibidor de agregación de plaqueta, se asocia con el efecto secundario de disfunción gastrointestinal causada por la acción inhibidora de COX-1 que es el mecanismo que aumenta la función de aspirina. En consecuencia, un inhibidor de agregación de plaqueta libre de la acción inhibidora de COX-1 es deseado altamente. Los fármacos anrti-inflamatorios no esteroidales son conocidos por exhibir la acción anti-inflamatoria mediante la inhibición selectiva de COX- 2. Sin embargo, algunos inhibidores de COX-2 selectivos son conocidos por inducir los efectos secundarios en el sistema cardiovascular así como la trombosis (Documento 5 a 7 no patentes).

Los derivados de pirazol conocidos tienen acción antitrombótica que incluye el compuesto (A) (véase el documento 1 Patente y documento 8 no patente) y compuesto (B) (véase Documento 2 patente). Sin embargo, la acción inhibidora para la agregación de plaqueta inducida por colágeno de estos compuestos no es fuerte comparada con la acción inhibidora de COX de estos compuestos, y estos compuestos están asociados con un alto riesgo de desarrollo de un efecto secundario similar al de la aspirina.

Documento 1 patente: patente japonesa No. 2586713. Documento 2 patente: Publicación de patente internacional WO 97/29774. Documento 1 no patente: BMJ, vol. 308, páginas 81-106, 1994. Documento 2 no patente: BMJ, vol. 321 , páginas 1183-1187, 2000. Documento 3 no patente: Neurology, vol. 57, suppl. 2, páginas S5-S7, 2001. Documento 4 no patente: Drugs Today, vol 35, páginas 251-265, Documento no patente 5: N. Eng. J. Med. Vol. 343, páginas 1520-1528, 2000. Documento 6 no patente: JAMA vol. 286, páginas 954-959, 2001. Documento 7 no patente: Arthritis Rheum. Vol. 43, páginas 1891-1896, 2000. Documento 8 no patente: Chem. Pharm. Bull., vol. 45, páginas 987-995, 1997.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Problemas a ser resueltos por la invención Un objeto de la presente invención es proveer un compuesto que tiene una fuerte acción de supresión de la agregación de plaqueta así como excelentes propiedades físicas, seguridad, y capacidad de absorción oral. Otro objetivo de la presente invención es proveer un método para producir dicho compuesto.

Medios para resolver el problema Los inventores de la presente invención han hecho un estudio extensivo para encontrar un inhibidor de agregación de plaqueta, y encontrar que las sales particulares de derivados de pirazol exhiben fuerte acción de inhibición de la agregación de plaqueta sin la inhibición de COX-1 y COX-2, y dichos inhibidores de agregación de plaqueta tienen excelentes propiedades para un fármaco que ¡ncluye absorbabilidad y estabilidad oral alta. La presente invención se ha realizado en las bases de dicho descubrimiento. La presente invención provee sal de cloruro de hidrógeno (antes referida como compuesto (1 b)) de [1 -(6-metoxipiridazina-3-il)-5-(piridina-2-il)-1 H-pirazol-3-il](4-metilpiperazina-1-il)metanona representado por la fórmula (la): (antes referido como compuesto (1 a)), y sal de ácido L-tartárico (antes referido como compuesto (1c)) del compuesto (1a). La presente invención también provee un método para la producción de dichos compuestos. La presente invención también provee composiciones farmacéuticas que contienen dicho compuesto y un portador farmacéuticamente aceptable. La presente invención también provee medicamentos para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad isquémica que contiene dicho compuesto como su componente efectivo. La presente invención también provee métodos para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad isquémica mediante la administración de cantidades efectivas de dicho compuesto. La presente invención también provee el uso de dichos compuestos en los medicamentos de producción.

Efectos de la invención Los compuestos (1 b) y (1c) de la presente invención son capaces de suprimir la agregación de plaqueta sin la inhibición de COX-1 y COX-2. Los compuestos (1 b) y (1c) también tienen la acción de inhibición de trombogénesis, estabilidad de cristal alta, y buena absorbabilidad oral. En consecuencia, los compuestos (1 b) y (1c) de la presente invención son útiles en la prevención y/o tratamiento de enfermedades isquémicas causadas por trombo y émbolo tal como infarto de miocardio, angina de pecho (angina estable crónica, angina inestable, etc.), accidente cerebro-vascular isquémico (ataque isquémico transiente (TÍA), infarto cerebral, etc.), disfunción de arterias periféricas, oclusión después del reemplazo de un vaso sanguíneo con un vaso sanguíneo artificial, oclusión por trombo después de la intervención de la arteria coronaria (cirugía de injerto de derivación de arteria coronaria (CAGB), angioplastía coronaria translúmina percutánea (PTCA), vivir con un stent, etc.), retinopatía y nefropatía diabética, y la oclusión después del reemplazo de una válvula cardiaca con una válvula cardiaca artificial. Los compuestos (1 b) y (1c) de la presente invención son útiles en la prevención y/o tratamiento de trombo y émbolo asociado con operaciones vasculares, circulación sanguínea extracorporal, y lo similar. Los compuestos (1 b) y (1c) de la presente invención también son útiles en el mejoramiento de síntomas isquémicos tales como úlcera, dolor, sensación de frío asociada con enfermedad oclusiva de la arteria crónica.

BEVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS Las figuras 1A-1 B muestran los resultados de la difracción de rayos X (FIG. 1A) y análisis térmico (TG/DTA) (FIG. 1B) para el anhídrido del compuesto (1 b). Las figuras 2A-2B muestran los resultados de la difracción de rayos X (FIG 2A) y análisis térmico (TG/DTA) (FIG. 2B) para el dihidrato del compuesto (1 b). Las figuras 3A-3B muestran los resultados de la difracción de rayos X (FIG. 3A) y análisis térmico (TG/DTA) (FIG. 3B) para el anhídrido del compuesto (1c). Las figuras 4A-4C muestran el comportamiento de la absorción y desorción para el compuesto (1a) (FIG. 4A), el compuesto (1 b) (FIG. 4B), y el compuesto (1c) (FIG. 4C). La figura 5 muestra la agregación de plaqueta en PRP de un cerdo de guinea que se induce mediante el colágeno 1 hora después de la administración oral del compuesto (1b).

MODALIDAD PREFERIDA DE LA INVENCIÓN Los compuestos (1a), (1 b), y (1c) de la presente invención (respectivamente representados por las fórmulas (la), (Ib), y (le) se pueden producir mediante los procedimientos de producción como se describe posteriormente.

Procedimientos de producción (le) Estos procedimientos de producción se describen más adelante en detalle adicional.

La acetilpiridina (AP) y oxalato de dimetilo (DMO) se pueden tratar en alcohol (metano o etanol) en la presencia de alcóxido de sodio (metóxido de sodio o etóxido de sodio) para obtener 2,4-dioxo-4-(2-piridinil)butanoato de metilo (MDP). La temperatura de reacción preferiblemente está en la escala de -10 a 100°C. La AP y DMO usados pueden ser disponibles comercialmente o se pueden producir mediante conocimiento común de química orgánica. Después, una cantidad equivalente de 3-cloro-6-hidrazinopiridazina (CHP), y después, una cantidad adecuada de ácido clorhídrico se puede añadir a MDP en metanol a temperatura ambiente, y la mezcla se puede calentar bajo reflujo para producir 1-(6-cloro-3-piridazinil)-5-(2-piridin)-1 H-pirazol-3-carboxilato de metilo (CMP). La 3-cloro-6-hidrazinopiridazina usada puede ser ya sea obtenida comercialmente o se puede producir al hacer reaccionar dicloropiridazina con hidracina o métodos similares. De manera alternativa, después de la adición de la cantidad equivalente de CHP a temperatura ambiente a MDP en metanol, una cantidad adecuada de ácido se puede añadir y la mezcla se puede calentar bajo reflujo. La solución de reacción se puede enfriar a cerca de 40°C a 60°C, y metóxido de sodio, y después, una base se pueden añadir para producir ácido 1-(6-metoxi-3-piridazinil)-5-(2-piridinil)-1 H-pirazol-3-carboxílico (MCP) representado por la fórmula (II). Los ejemplos de ácido añadido incluyen ácido clorhídrico y ácido metanosulfónico, y el ácido es preferiblemente ácido clorhídrico. Se puede usar hidróxido de sodio como base. Este procedimiento es capaz de producir MCP en un alto rendimiento puesto que la purificación de un intermedio tal como CMP es necesaria. Se puede producir CMP en MCP en una etapa y en un alto rendimiento mediante la adición de metóxido de sodio y una base secuencialmente. La base usada preferiblemente es hidróxido de sodio. La temperatura de reacción está preferiblemente en la escala de -20 a 100°C, y especialmente preferiblemente de -5 a 50°C. Se puede cristalizar el MCP mediante la adición de ácido clorhídrico a la solución de reacción en esta etapa. Esta reacción es preferiblemente conducida en metanol. Después, MCP y N-metilpiperazina se condensan para producir el compuesto (1a) o (1b) de la presente invención. Esta condensación se puede realizar mediante el método comúnmente usado en la síntesis de péptido. Los métodos de síntesis de péptido ejemplares incluyen método de azida, método de cloruro ácido, método de anhídrido ácido, método de DCC (diciclohexilcarbodiimida), método de éster activo, método de carbonildiimidazol, método de DCC/HOBT (1-hidroxibenzotriazol), un método que usa carbodiimida soluble en agua, y un método que usa cianofosfato de dietilo, y estos métodos se describen en Bodanszky, M., Klausner, Y.S., and Ondetti, M.A. "Peptide Synthesis" (A Wiley-lnterscience publication, New York, 1976); Pettit, G.R., "Synthetic Peptides" (Elsevier Scientific Publication Company, New York, 1976); y Japanese Society of Chemistry ed., "Lectures on Experimental Chemistry, 4th edition, vol. 22. Organic Synthesis IV" (Maruzen Publishing, 1992), y lo similar. El aditivo preferiblemente es monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol, y el agente de condensación preferible es 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida o diciclohexilcarbodiimida. En otras palabras, el preferido es la combinación de un aditivo y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida y una combinación de un aditivo y diciclohexilcarbodiimida, por ejemplo la combinación de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida y la combinación de monohidrato de 1-hidroxibenzotriazol y diciclohexilcarbodiimida. Se pueden usar varios solventes en esta condensación, y solventes ejemplares incluyen metanol, etanol, isopropanol, N, N-dimetilformamida, piridina, cloroformo, cloruro de metileno, tetrahidrofurano, dioxano, acetonitrilo, agua, y mezclas de dichos solventes. Cuando la combinación de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida se usa, el solvente es preferiblemente etanol que contiene agua, y cuando la combinación de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y diciclohexilcarbodiimida se usa, el solvente es preferiblemente acetonitrilo. La temperatura de reacción es preferiblemente de -20 a 50°C, y más preferiblemente de -10 a 30°C. La N-metilpiperazina usada puede ser comercialmente disponible o se puede producir mediante el método descrito en las referencias o métodos similares. El compuesto (1b) se puede producir como cristales cuando el ácido clorhídrico concentrado también esta presente en la etapa de la condensación. En esta reacción, el compuesto (1 b) se puede obtener en un alto rendimiento puesto que la purificación del compuesto (1 a) no es necesaria. El compuesto (1 b) también se puede producir al tratar el compuesto (1a) con ácido clorhídrico. En este caso, sin embargo, los cristales del compuesto (1a) adaptados para la formación de sal se deberían producir, y la producción del compuesto (1a) adaptada para la formación de sal requiere un tratamiento como lechada usando un solvente orgánico tal como hexano que no es adecuado para el uso en la producción de un medicamento. El hexano es un solvente clasificado en la clase 2 (solventes cuyo residuo en medicamentos debería ser limitado) en el principio de ICH, y un limite de concentración muy estricto de 290 ppm se impone en este solvente. De otra manera, en el caso del método de la presente invención, la producción se puede realizar únicamente usando etanol, isopropanol, u otros solventes de clase 3 (solventes con baja toxicidad y bajo riesgo a la salud humana que se permite usar hasta 5000 ppm). En consecuencia, el compuesto (1b) que se puede producir sin usar el solvente de clase 2 es completamente valioso como un ingrediente farmacéuticamente activo. El compuesto (1 b) de la presente invención exhibe buen comportamiento de absorción y desorción de humedad así como buena solubilidad en toda el agua, la primera disolución de la farmacopea japonesa (solución JP1), y la segunda solución de la farmacopea japonesa (solución JP2). El compuesto (1 b) de la presente invención también muestra fuerte supresión de agregación en las plaquetas de humano y cerdo de guinea. El compuesto (1 b) también exhibe absorbabilidad oral favorable, y muestra supresión remarcable de trombogénesis en el modelo de trombo inducido por cloruro de hierro. El compuesto (1b) no muestra también problemas de seguridad. El compuesto (1 a) también se puede producir al tratar el compuesto (1 b) con hidróxido de sodio. En consecuencia, el compuesto (1 b) también es útil como un intermedio para la producción del compuesto (1 a). El compuesto (1c) se puede producir al disolver el compuesto (1a) en etanol y hacerlo reaccionar con ácido L-tartárico. El compuesto (1c) de la presente invención no exhibe polimorfismo cristalino, y muestra excelente comportamiento de absorción y desorción de humedad. El compuesto (1c) también es altamente soluble en toda el agua, solución JP1 , y solución JP2, y no muestra cambio en la forma cristalina en humedad diferente. El compuesto (1c) también es extremadamente estable bajo calor húmedo, calor seco, e irradiación de haz de luz. En consecuencia, el compuesto (1c) de la presente invención es altamente calificado como un ingrediente farmacéutico activo particularmente en vista de sus propiedades físicas. La presente invención también describe un método para la producción de un compuesto (MCP) representado por la fórmula (II): a un alto rendimiento al hacer reaccionar el compuesto (CMP) representado por la fórmula (lll): con metóxido de sodio en metanol, y al tratar la mezcla de reacción con hidróxido de sodio. Este método es capaz de la producción de MCP a partir de CMP en una etapa y en un alto rendimiento sin necesidad de la purificación de 1-(6-metoxi-3-piridazinil)-5-(2-piridil)pirazol-3-carboxilato de metilo (MMP). El rendimiento de MCP a partir de CMP no es suficiente cuando MCP se produce al tratar CMP con solución de metóxido de sodio-metanol, el aislamiento de MMP, y el tratamiento de MMP con una base. El método de la presente invención es capaz de producir MCP en rendimiento del 97%. La presente invención también describe un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (II): que comprende las etapas de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (IV): con 3-cloro-6-hidrazinopiridazina en metanol en la presencia de ácido clorhídrico concentrado o en la presencia de ácido metanosulfónico, la adición de metóxido de sodio, y el tratamiento de la mezcla de reacción con hidróxido de sodio. Este método puede producir MCP en un alto rendimiento ya que este método es capaz de la producción de MCP a partir de MDP sin necesidad de purificación de los intermedios tales como CMP. La presente invención también provee un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (le): que comprende las etapas de hacer reaccionar MCP representado por la fórmula (II): con N-metilpiperazina en acetonitrilo en la presencia de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida para producir un compuesto representado por la fórmula (la): y seguido por hacer reaccionar este compuesto con ácido L-tartárico. La presente invención también provee un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (Ib): que comprende las etapas de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (II): con N-metilpiperazina en acetonitrilo o etanol que contiene agua en la presencia de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida o en la presencia de monohidrato de 1-hidroxibenzotriazol y diciclohexilcarbodiimida; y al tratar la mezcla de reacción con ácido clorhídrico concentrado. La presente invención también provee un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (Ib): que comprende las etapas de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (lll): con metóxido de sodio en metanol; al tratar la mezcla de reacción con hidróxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (II): al hacer reaccionar este compuesto con N-metilpiperazina en acetonitrilo o etanol que contiene agua en la presencia de monohidrato de 1-hidroxibenzotriazol y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida o en la presencia de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y diciclohexilcarbodiimida; y al tratar la mezcla de reacción con ácido clorhídrico concentrado.

La presente invención también provee un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (Ib): que comprende las etapas de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (IV): o o con 3-cloro-6-hidrazinopiridazina en metanol en la presencia de ácido clorhídrico concentrado para producir un compuesto representado por la fórmula (lll): c al hacer reaccionar este compuesto con metóxido de sodio en metanol; al tratar la mezcla de reacción con hidróxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (II): al hacer reaccionar este compuesto con N-metilpiperazina en acetonitrilo o etanol que contiene agua en la presencia de monohidrato de 1-hidroxibenzotriazol y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida o en la presencia de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y diciciohexilcarbodiimida; y al tratar la mezcla de reacción con ácido clorhídrico concentrado. La presente invención también provee un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (Ib): que comprende las etapas de tratamiento de acetilpiridina y oxalato de dimetilo con metanol en la presencia de metóxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (IV): ( I V ) al hacer reaccionar este compuesto con 3-cloro-6-hidrazinopiridazina en metanol en la presencia de ácido clorhídrico concentrado para producir un compuesto representado por la fórmula (lll): al hacer reaccionar este compuesto con metóxido de sodio en metanol; al tratar este compuesto con hidróxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (II): al hacer reaccionar este compuesto con N-metilpiperazina en acetonitrilo o etanol que contiene agua en la presencia de monohidrato de 1-hidroxibenzotriazol y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida o en la presencia de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y diciciohexilcarbodiimida; y al tratar la mezcla de reacción con ácido clorhídrico concentrado. La presente invención también provee un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (Ib): que comprende las etapas de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (IV): con 3-cloro-6-hidrazinopiridazina en metanol en la presencia de ácido metanosulfónico o en la presencia de ácido clorhídrico concentrado, la adición de metóxido de sodio, y al tratar la mezcla de reacción con hidróxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (II): al hacer reaccionar este compuesto con N-metilpiperazina en acetonitrilo o etanol que contiene agua en la presencia de monohidrato de 1-hidroxibenzotriazol y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida o en la presencia de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y diciciohexilcarbodiimida, y al tratar la mezcla de reacción con ácido clorhídrico concentrado. La presente invención también provee un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (Ib): que comprende las etapas de tratamiento de acetilpiridina y oxalato de dimetilo en metanol en la presencia de metóxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (IV): al hacer reaccionar este compuesto con 3-cloro-6-hidrazinopiridazina en metanol en la presencia de ácido metanosulfónico o en la presencia de ácido clorhídrico concentrado; al añadir metóxido de sodio; al tratar la mezcla de reacción con hidróxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (II): al hacer reaccionar este compuesto con N-metilpiperazina en acetonitrilo o etanol que contiene agua en la presencia de monohidrato de 1-hidroxibenzotriazol y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida o en la presencia de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y diciclohexilcamodiimida; y al tratar la mezcla de reacción con ácido clorhídrico concentrado. Ha sido imposible sintetizar directamente el compuesto (1C) a partir de MCP o para producir el compuesto (1c) a partir del compuesto (1 b) sin el aislamiento del compuesto (1a). El método de la presente invención se ha establecido para producir dicho compuesto (1c) cuya producción ha sido extremadamente difícil. Todos los compuestos (1a), (1 b), y (1c) de la presente invención exhiben inhibición remarcable de la agregación de plaqueta inducida por colágeno. Además, los compuestos (1a) y (1b) exhiben fuerte inhibición in vivo de la agregación de plaqueta mediante colágeno así como una excelente absorción oral. El compuesto (1 b) exhibe inhibición remarcable de la trombogénesis en el modelo de trombosis inducido por alto esfuerzo cortante. En consecuencia, el compuesto (1 b) de la presente invención es útil como un agente profiláctico y/o terapéutico para enfermedades isquémicas causadas por trombo y émbolo tal como infarto de miocardio, angina de pecho (angina estable crónica, angina inestable, etc.) accidente cerebro-vascular isquémico (ataque isquémico transiente (TÍA), infarto cerebral, etc.), trastorno vascular periférico, oclusión después del reemplazo de un vaso sanguíneo con un vaso sanguíneo artificial, oclusión por trombo después de la intervención de la arteria coronaria (cirugía de injerto de derivación de arteria coronaria (CAGB), angioplastía coronaria translúmina percutánea (PTCA), vivir con un stent, etc.), retinopatía y nefropatía diabética, y la oclusión después del reemplazo de una válvula cardiaca con una válvula cardiaca artificial en un humano y otros mamíferos. El compuesto (1b) de a presente invención también es útil como un agente profiláctico y/o terapéutico para trombo y émbolo asociados con operaciones vasculares, circulación sanguínea extracorporal, y lo similar. También es útil en el mejoramiento de síntomas isquémicos tales como úlcera, dolor, sensación de frío asociada con enfermedad oclusiva de arteria crónica. Cuando el compuesto (1a), (1 b), o (1c) de la presente invención se usa como un ingrediente farmacéutico activo, la dosis de estos compuestos puede depender de la edad, sexo, y síntomas del paciente. La dosis es preferiblemente en la escala de de 0.1 mg a 1 g, y especialmente preferiblemente de 0.5 mg a 500 mg por día para un adulto. Esta dosis diaria se puede administrar en varias dosis divididas, y si es necesario, los compuestos se pueden administrar en una dosis que excede dichas dosis diarias. Los medicamentos que contienen el compuesto (1a), (1 b), o (1c) de la presente invención como su componente efectivo se pueden usar en cualquier vía deseada de administración y forma de dosificación. Los medicamentos se pueden preparar por cualquiera de los métodos comúnmente usados en la técnica, opcionalmente al mezclar el componente con cualquier portador farmacéuticamente aceptable, en una forma de dosificación que iguala la vía de administración, y la vía de administración y la forma de dosificación no son particularmente limitadas.

Las preparaciones orales ejemplares incluyen las preparaciones sólidas tales como tableta, polvo, granulo, pildora, y cápsula así como las preparaciones líquidas tales como solución, suero, elíxir, suspensión, y emulsión. Un inyectable se puede preparar al rellenar una solución de compuesto (1a), (1b) o (1c) en un recipiente, o mediante la solidificación de la solución por secado por congelamiento para la reconstitución inmediatamente antes del uso. En la preparación de los medicamentos, los aditivos farmacéuticamente aceptables tales como aglutinante, desintegrante, solubilizador, lubricante, rellenador, y excipiente se pueden añadir como se desee.

EJEMPLOS Después, la presente invención se describe en detalle adicional al hacer referencia a los ejemplos.

EJEMPLO 1 Síntesis de monoclorhidrato de [1-(6-metoxipiridazina-3-¡l)-5-(piridina-2- il)-1 H-pirazol-3-il1(4-metilpiperazina-1-il)metanona (compuesto (1 b)).

EJEMPL0 1-1 2,4-dioxo-4-(2-piridinil)butanoato de metilo (MDP) A un matraz de cuatro cuellos de 10 I se añade metanol (5.3 I), y se disuelve metóxido de sodio (402 g). Entonces se añade oxalato de dimetilo (878 g) y acetilpiridina (600 g, 556 ml). Un embudo de goteo se lava con 200 ml de metanol. La suspensión de reacción se agita a temperatura ambiente durante 16.5 horas, y se mueve la solución de reacción a un recipiente de acero inoxidable. A esta solución se añade 11.1 I de agua, y se enfría la mezcla en hielo. Después, se añade ácido clorhídrico 5N (10 ml) para ajustar la mezcla a un pH de 3.0. Se agita la mezcla de reacción durante 2.5 horas en un baño de hielo, y se colectan los cristales mediante filtración. Se lavan los cristales así obtenidos una vez con 300 ml de agua, y dos veces con 10 I de ¡sopropanol. Se secan los cristales bajo presión reducida para obtener el compuesto del titulo (904 g, 88%). P.f. 86-87°C; 1H RMN (CDCI3) d 3.95 (s, 3H), 7.52 (br, 1 H), 7.64 (br, 1 H), 7.91 (br, 1 H), 8.17 (br, 1 H) 8.73 (br, 1 H).

EJEMPLO 1-2 1-(6-cloro-3-piridazinil)-5-(2-piridinil)-1 H-pirazol-3-carboxilato de metilo A un matraz de cuatro cuellos de 20 I se añade metanol (6.0 I), 3-cloro-6-hidrazinopiridazina (CHP, 425 g), y MDP (600 g) producido en el ejemplo 1-1 , y se calienta bajo reflujo la mezcla durante 2 horas. Se añade 120 ml de ácido clorhídrico concentrado y se calienta a reflujo la mezcla durante 11 horas. Se enfría la solución de reacción a temperatura ambiente, y se añade 2.0 I de agua. A esta mezcla entonces se añaden 360 ml de solución 5N de hidróxido de sodio, y se ajusta la mezcla a un pH de 8.5. Se añade agua (10.0 I) a la mezcla, y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Se separan los cristales precipitados mediante filtración, y se lavan con 1.2 I de agua. Se tratan los cristales resultantes como lechada mediante la adición de 1.2 I de metanol que contiene 67% de agua. Se separan los cristales mediante filtración y se secan bajo presión reducida para obtener el compuesto del titulo (CMP, 665 g, 73%). P.f. 164-165°C; 1H RMN (CDCI3) d 4.00 (s, 3H), 7.25 (s, 1 H), 7.27 (dd, J=4.9, 7.7 Hz, 1 H), 7.64 (d, J= 7.8 Hz, 1 H), 7.70 (d, J= 9.0 Hz, 1 H), 7.79 (dd, J= 7.7, 7.8 Hz, 1 H), 8.09 (d, J= 9.0 Hz, 1 H), 8.40 (d, J= 4.9, 1 H).

EJEMPLO 1-3 Ácido 1-(6-metoxi-3-piridazinil)-5-(2-piridinil)-1H-pirazol-3-carboxílico (MCP) Se disuelve metóxido de sodio (171 g) en 7.5 I de metanol en un matraz de cuatro cuellos de 20 I. Se añade a esta solución CMP (500 g) producido en el ejemplo 1-2, y se agita la mezcla a 40°C durante 1.5 horas. Después se añade una solución acuosa 5N de hidróxido de sodio (250 ml), y se agita la mezcla a 40°C durante 1 hora, y se enfría la solución de reacción a temperatura ambiente. A esta solución de reacción se añade 7.5 I de agua y carbón activo (250 g), y se agita la mezcla durante 30 minutos. Se remueve el carbón activo mediante filtración, y se añade ácido clorhídrico 5N (550 ml) al filtrado para ajustar el pH a 3.3. Se agita la solución de reacción toda la noche a temperatura ambiente, y los cristales precipitados se colectan mediante filtración. Se lavan los cristales con agua fría (1.0 I) y metanol (750 ml). Entonces los cristales se secan bajo presión reducida para obtener el compuesto del titulo (MCP, 455 g, 97%). P.f. 227-8°C (decomp). 1H RMN (CDCI3) d 4.04 (s, 3H), 7.34 (dd, J= 4.7, 7.6 Hz, 1 H), 7.41 (s, 1 H), 7.49 (d, J= 9.3 Hz, 1 H), 7.81 (d, J= 7.8 Hz, 1 H), 7.89 (dd, J= 7.6, 7.8 Hz, 1 H), 7.99 (d, J=9.3 Hz, 1 H), 8.35 (d, J= 4.7 Hz, 1 H), 13.2 (br, 1 H).

EJEMPLO 1-4 monohidroclorhidrato de _1-(6-metoxipiridazina-3-il)-5-(piridina-2-il)-1H- pirazol-3-¡n(4-metilpiperazina-1-il)metanona (compuesto (1b)) A un matraz de cuatro cuellos de 5 I se añade etanol al 95% (1.0 I), y después, el MCP (260 g) producido en el ejemplo 1-3, monohidrato de 1-hidroxibenzotriazol (HOBt H20, 201 g), N-metilpiperazina (175 g), y clorhidrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (carbodiimida soluble en agua: WsCI, 252 g), y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 1.5 horas. Se añade gota a gota ácido clorhídrico concentrado (182 ml) a la solución de reacción, y después de la adición de etanol adicional (1.3 I), la mezcla se agita a 50°C durante 1 hora. Se enfría gradualmente a temperatura ambiente la solución de reacción (a 7°C/hora), y se enfría durante 2 horas en un baño de hielo. Se colectan los cristales resultantes mediante filtración, y se lavan con 600 ml de etanol. Se secan los cristales resultantes bajo presión reducida para obtener el compuesto del titulo crudo (344 g, 95%). Se añade el compuesto del titulo crudo (340 g) a etanol al 70% (112 ml) en un matraz de tres cuellos de 3 I, y se calienta la mezcla a 60°C para disolución, la solución después se filtra a través de un filtro de vidrio. Se lava el matraz con etanol al 70% (68 ml) y etanol (500 ml), y se añade el lavado al filtrado. Se mueve el filtrado a un matraz de cuatro cuellos de 10 I, y después de la adición de 3.4 I de etanol al filtrado, se calienta la mezcla a 60°C y se agita durante 2 horas. Se enfría gradualmente la mezcla a 50°C, y se agita durante 1.5 horas para precipitar cristales gradualmente. Se enfría a temperatura de hielo gradualmente la mezcla, y se colectan los cristales mediante filtración. Después se lavan los cristales con 700 ml de etanol, y se secan bajo presión reducida para obtener el compuesto del titulo (303 g, 89%). P.f. 227-228°C (decomp.) 1H RMN (d30) d 2.95 (s, 3H), 3.2-3.6 (br, a 4H), 4.09 (s, 3H), 7.26 (s, 1 H), 7.47 (d, J= 9.4 Hz, 1 H), 7.48-7.51 (m 1 H), 7.69 (d, J= 7.8 Hz, 1 H), 7.91 (d, J= 9.4 Hz, 1 H), 7.97 (dd, J= 7.8, 7.4 Hz, 1 H), 8.43 (d, J= 5.1 Hz, 1 H).

EJEMPLO 2 Síntesis de 1-(6-metoxipiridazina-3-il)-5-(piridina-2-il)-1 H-pirazol-3-il1(4- metilpiperazina-1-iPmetanona (compuesto (1a)) Método 1 En un matraz de cuatro cuellos de 1 I se coloca acetonitrilo (350 ml), y después se añade MCP (35.0 g) producido en el ejemplo 1-3, HOBt H20 (37.1 g), N-metilpiperazina (23.6 g), y WsCI (30.9 g), y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 16 horas. Se añade trietilamina (58 ml) a la solución de reacción, y después se concentra la mezcla bajo presión reducida, agua (200 ml), y después, 250 ml de solución acuosa saturada de carbonato hidrógeno de sodio se añaden para precipitar los cristales. La suspensión que incluye los cristales precipitados se extraen tres veces con cloroformo (220 ml), y después se lava con 220 ml de solución acuosa de carbonato hidrógeno de sodio y con agua destilada 220 ml. Se seca la capa orgánica sobre sulfato de sodio, se concentra a 45 g, y 450 ml de hexano se añaden para tratamiento como lechada. Después se colectan los cristales mediante filtración, y se secan bajo presión reducida para obtener el compuesto del titulo (41 .7 g, 93%). P.f. 139-140°C (decomp.) 1H RMN (CDCI3) d 2.33 (s, 3H); 2.45 (m, 2H), 2.51 (m, 2H), 3.86 (m, 2H), 4.07 (m, 2H), 4.11 (s, 3H), 7.10 (s, 1 H), 7.13 (d, J= 9.1 Hz, 1 H), 7.22 (dd, J= 4.8, 7.5 Hz, 1 H), 7.58 (d, J=7.8 Hz, 1 H), 7.74 (dd, J= 7.5, 7.8 Hz, 1 H), 7.79 (d, J= 9.1 Hz, 1 H), 8.41 (d, J= 4.8 Hz, 1 H).

Método 2 En un matraz de tres cuellos de 1 I se colocan 126.7 g del compuesto (1 b) producido en el ejemplo 1-4, y después de la adición de agua (640 ml), se agita la mezcla a 50°C y se añade gota a gota una solución acuosa 5N de NaOH (64 ml). Después de la finalización de la adición gota a gota, se enfría la solución de reacción a 2°C. La suspensión de reacción que contiene los cristales precipitados se filtra, y los cristales resultantes se lavan con agua (200 ml), y se secan bajo presión reducida para obtener el compuesto (1a) (95.9 g; 83%).

EJEMPLO 3 Síntesis de mono-1 -tartrato de ,1-(6-metoxipiridazina-3-il)-5-(piridina-2-il)- 1H-pirazol-3-in(4-metilpiperazina-1-il)metanona (compuesto (1c)).

A un matraz de dos cuellos de 50 ml se añade isopropanol al 80% (10 ml), el compuesto (1a) (2.5 g) producido en el ejemplo 2, y ácido L-tartárico (1.0 g), y se calienta la mezcla a 60°C para disolución. Se añade isopropanol (5 ml), y después, isopropanol (10 ml) para precipitar los cristales. Se reduce gradualmente la temperatura a temperatura ambiente, y después, se enfría la mezcla en un baño de hielo para colectar los cristales mediante filtración. Entonces los cristales se secan bajo presión reducida para obtener el compuesto del titulo (3.3 g, 96%). P.f. 180-181 °C (decomp). 1H RMN (D20) d 2.99 (s, 3H), 3.1-3.9 (m a 8H), 4.08 (s, 3H), 4.45 (s, 2H), 7.26 (s, 1 H), 7.46 (d, J= 9.4 Hz, 1 H), 7.47-7.51 (m 1 H), 7.68 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.90 (d, J= 9.4 Hz, 1 H), 7.97 (dd, J= 7.6, 8.0 Hz, 1 H), 8.42 (d, J= 4.9 Hz, 1 H).

En el espectro RMN del ejemplo 1-3, a) significa que TMS se usa para el estándar, y b) significa que TPS ((3-trimetilsilil)-2,2,3,3,-d4-priopionato de sodio) se usa para el estándar.

EJEMPLO 4 Cristales de monoclorhidrato de [1-(6-metoxipiridazina-3-il)-5-(piridina-2- il)-1H-pirazol-3-il)(4-metilpiperazina-1-il)metanona anhidro (compuesto ílb)) El MCP se disuelve en N. N-dimetilformamida, y la solución se hace reaccionar con N-metilpiperazina en la presencia de 1-hidroxibenzotriazol, clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida, y trietilamina. Se separa la solución de reacción mediante la adición de agua y acetato de etilo, y a capa acuosa se extrae con acetato de etilo. Se combinan las capas orgánicas, se lavan con solución de cloruro de sodio saturada, y se secan sobre sulfato de sodio anhidro. Después de la separación mediante filtración, y la remoción del solvente bajo presión reducida, se purifica el residuo mediante cromatografía de columna en gel de sílice para obtener el compuesto (1a). El compuesto resultante (1a) (99.98 mg) se disuelve en etanol que contiene 10% de agua (0.8 ml), y después de la adición de 0.022 ml de ácido clorhídrico concentrado, se calienta la mezcla a 70°C para disolución. Después del enfriamiento a temperatura ambiente, se deja la mezcla de reacción permanecer durante 2 días para precipitar los cristales. Se colectan los cristales precipitados mediante filtración y se secan con aire para obtener 63.4 mg (58%) de los cristales del compuesto anhidro (1 b). Análisis elemental: valor calculado (C-?9H2?N702 HCI); C, 54.87; H, 5.33; N, 23.57; Cl, 8.52. Valor medido C, 54.63; H, 5.33; N, 23.50; Cl, 8.64.

Los cristales se evalúan mediante difracción de rayos X de energía y análisis térmico (TG/DTA) de acuerdo al procedimiento comúnmente usado en la técnica. Los resultados se muestran en las FIGS 1A y 1 B.

EJEMPLO 5 Cristales de monoclorhidrato dihidrato de f1-(6-metoxipiridazina-3-il)-5-(piridina-2-il)-1H-pirazol-3-ill(4-metilp¡perazina-1-¡l)metanona (compuesto übl) El compuesto anhidro (1 b) (200.0 mg) producido en el ejemplo 1- 4 se coloca en un plato, y se coloca en un desecador con solución acuosa saturada de nitrato de potasio (93% RH) a temperatura ambiente durante 7 días para con lo cual se obtienen los cristales desecados (216.1 mg). Análisis elemental: valor calculado (C-?9H2?N702 HCI-2H2O); C, 50.50; H, 5.80; N, 21.70; Cl, 7.85. Valor medido C, 50.42; H, 5.74; N, 21.44; Cl, 7.83. Se evalúan los cristales mediante la difracción de rayos X de energía y análisis térmico (TG/DTA) de acuerdo al procedimiento comúnmente usado en la técnica. Los resultados se muestran en las FIGS 2A y 2B.

EJEMPLO 6 Cristales de mono-1 -tartrato de _1-(6-metoxip¡ridazina-3-il)-5-(piridina-2- il)-1H-pirazol-3-il1(4-metilpiperazina-1-il)metanona anhidro (compuesto Í ) Se disuelve el compuesto (1a) (3.0 g) producido en el ejemplo 2 en etanol que contiene 5% de agua (30 ml), y después de la adición de 1.24 g de ácido tartárico, se calienta la mezcla a 50°C para la disolución. Después del enfriamiento a temperatura ambiente, se agita la mezcla con un agitador durante 15 horas. Los cristales precipitados se colectan y se secan con aire para obtener los cristales del compuesto (1c) (4.0 g, 96%). Análisis elemental: valor calculado (C?gH2?N7?2-C4H6?6); C, 52.17; H, 5.14; N, 18.52. Valor medido; C, 51.91 ; H, 4.95; N, 18.56. Los cristales se evalúan mediante difracción de rayos X de energía y análisis térmico (TG/DTA) de acuerdo al procedimiento comúnmente usado en la técnica. Los resultados se muestran en las FIGS 3A y 3B.

EJEMPLO 7 Ácido 1-(6-metoxi-3-piridazinil)-5-(2-piridinil)-1H-pirazol-3-carboxílico (MCP) A una solución (100 ml) de CHP (3.5 g) en metanol se añade MDP (5.0 g) y ácido clorhídrico concentrado (1 ml), y se calienta bajo reflujo la mezcla durante 14 horas. Se enfría la solución de reacción a 50°C, y solución al 28% (12.0 ml) de metóxido de sodio en metanol se añade a la misma temperatura. Se agita la mezcla durante 1 hora. Se añade una solución acuosa 1 N de hidróxido de sodio (15.0 ml) a la solución de reacción, y se agita la mezcla a 50°C durante 1 hora y se enfría a temperatura ambiente. Se añade a la solución de reacción agua (45 ml) y carbón activo (250 mg), y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Después de la remoción de carbón activo mediante filtración, se añade ácido clorhídrico 5N (8.0 ml) al filtrado para ajustar la solución a un pH de cerca de 3.0. Se agita la solución a temperatura ambiente por otra hora. Los cristales precipitados se colectan mediante filtración, y se secan bajo presión reducida para obtener el compuesto del titulo (5.73 g). Varios datos espectroscópicos obtenidos para este compuesto son completamente consistentes con aquellos del ejemplo 1-3.

EJEMPLO 8 Ácido 1-(6-metoxi-3-piridazinil)-5-(2-piridinil)-1 H-pirazol-3-carboxílico (MCP) A una solución (100 ml) de CHP (3.5 g) en metanol se añade MDP (5.0 g) y ácido metanosulfónico (0.78 ml), y se calienta bajo reflujo la mezcla durante 14 horas. Se enfría la solución de reacción a 50°C, y una solución al 28% (12.0 ml) de metóxido de sodio en metanol se añade a la misma temperatura. Se agita la mezcla durante 1 hora. Se añade una solución acuosa 1 N de hidróxido de sodio (15.0 ml) a la solución de reacción, y se agita la mezcla a 50°C durante 1 hora y se enfría a temperatura ambiente. Se añade a la solución de reacción agua (45 ml) y carbón activo (250 mg), y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante otra hora. Después de la remoción de carbón activo mediante filtración, se añade ácido clorhídrico 5N (8.0 ml) al filtrado para ajustar la solución a un pH de cerca de 3.0. Se agita la solución a temperatura ambiente por otra hora. Los cristales precipitados se colectan mediante filtración, y se secan bajo presión reducida para obtener el compuesto del titulo (5.73 g). Varios datos espectroscópicos obtenidos para este compuesto son completamente consistentes con aquellos del ejemplo 1-3.

EJEMPLO 9 Monoclorhidrato de [1-(6-metoxipiridazina-3-il)-5-(piridina-2-il)-1H-pirazol- 3-il1(4-metilpiperazina-1-il)metanona (compuesto (1b)) Se suspende (5.0 g) de MCP en acetonitrilo (50 ml), y monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol (HOBt H20, 3.4 g), se añade N-metilpiperazina (3.7 ml), y diciciohexilcarbodiimida (DCC, 5.2 g), y se agita la mezcla a 40°C durante 3 horas. Se añade agua a la solución de reacción, y se agita la mezcla a la misma temperatura durante 1 hora. Después se enfría la mezcla a temperatura ambiente, y se separan los cristales precipitados mediante filtración. El filtrado resultante se concentra bajo presión reducida, y se disuelve el residuo en etanol (50 ml). Se añade ácido clorhídrico concentrado (2.8 ml), y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 1 hora. Se colectan los cristales resultantes mediante filtración, y se secan bajo presión reducida para obtener el compuesto del titulo (6.3 g). Varios datos espectroscópicos para este compuesto son consistentes completamente con aquellos del ejemplo 1-4.

EJEMPLO DE PRUEBA 1 Evaluación del comportamiento de adsorción y desorción de humedad Los compuestos (1a), (1 b), y (1c) producidos en los ejemplos como se describe se evalúan para su capacidad de adsorción y desorción de humedad mediante el método comúnmente usado en la técnica. Más específicamente, cerca de 20 mg de cristales se colocan en un microbalance (un sistema de adsorción de vapor automático), y el cambio en el peso con el lapso del tiempo se monitorea en una humedad relativa en la escala de 10 a 90% para evaluar la absorción y desorción de agua. Se ha encontrado que todos los compuestos (1a), (1b) y (1c) exhiben cambio de peso de solamente hasta ±1 % en la RH en la escala de 40 a 60% (FIGS. 4A, 4B y 4C).

EJEMPLO DE PRUEBA 2 Evaluación de cristales para su estabilidad Los compuestos (1a), (1b), y (1c) así como varias sales del compuesto (1a) producidos en los ejemplos como se describe anteriormente se almacenan a 25°C y a una humedad relativa de 0%, 52%, o 93% durante 3 días para evaluar el cambio en peso y la forma de cristal. Los resultados se muestran en el cuadro 1. El cambio en la forma del cristal se mide en el caso de fumarato a una baja humedad, en el caso del compuesto (1a) y su citrato a una alta humedad. Las sales del compuesto (1a) se producen de acuerdo al método del ejemplo 3. El compuesto (1c) se demuestra por se altamente estable ya que muestra solamente un ligero cambio en peso sin cambio en la forma del cristal.

CUADRO 1 1 ) No: sin cambio, 2) Si: algunos cambios EJEMPLO DE PRUEBA 3 Supresión de agregación de plaqueta Se colectan vasos sanguíneos de humano y cerdo de guinea anestesiado al usar 1/10 volumen de 3.13% de citrato de sodio para el anticoagulante, y se colecta la sangre centrifugada a 180 g durante 10 minutos para separar el plasma rico en plaqueta (PRP). Después de la remoción de PRP en la capa superior, la capa inferior además se centrifuga a 1600 g durante 10 minutos para separar el plasma pobre en plaqueta (PPP). Se añade 1 µl de la solución del compuesto (1 ) o ejemplos comparativos 1 a 3 a 200 µl de PRP, y la mezcla se deja permanecer a 37°C durante 2 minutos. La agregación de plaqueta entonces se induce mediante la adición de 2 µl de colágeno a la mezcla. La velocidad de agregación de plaqueta se mide al usar PAM-12C (SSR Engineering). La velocidad de agregación de plaqueta en la presencia de cada compuesto en cada concentración se determina al usar la transmitancia de luz para PPP como el valor de agregación del 100% con lo cual se calcula del valor IC5o para cada compuesto. Los resultados se muestran en el cuadro 2.

EJEMPLO DE PRUEBA 4 Inhibición de ciclooxigenasa -1 (COX-1) y ciclooxigenasa-2 (COX-2) El equipo de ensayo de selección para el inhibidor de COX (Cayman Chemical Company, Catalog Nos. 560101 y 560121 ) se usa para medir la actividad inhibidora de cada compuesto para COX-1 y COX-2. El regulador de pH de reacción, heme, ácido araquídónico, SnCI2, regulador de pH ElA, regulador de pH de lavado, estándar ElA de selección (PG) de prostaglandina, el indicador de acetilcolinesterasa (ArchE) de selección PG (conjugado de una enzima cromogénica y HRP), y antisuero ElA de selección PG se preparan antes de la medición. (1) Producción de PGF?a por COX-1 o COX-2 La solución de reacción que contiene varias concentraciones del compuesto de los ejemplos y COX-1 o COX-2 se dejan permanecer a 37°C durante 10 minutos. Se añade 10 µl de ácido araquidónico, y la solución de reacción se deja permanecer a 37°C durante 2 minutos. Después de la reacción, se añaden 50 µl de ácido clorhídrico 1 N para cesar la reacción, y se añade una solución de 100 µl de SnCI2, y la solución de reacción se deja permanecer a temperatura ambiente durante 5 minutos. (2) Determinación cuantitativa de PGF?a mediante ELISA Se añade 50 µl de un antisuero (anticuerpo anti-PGF2a de conejo) a cada pozo de una placa de 96 pozos que se ha revestido con IgG anti-conejo de ratón, y a cada pozo se añade 50 µl de una dilución de 2000 veces de PGF2a que produce la solución de reacción, y después, 50 µl del indicador de AchE. Se deja permanecer la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 18 horas. Los pozos se lavan 5 veces con regulador de pH de lavado para remover el indicador de AchE excesivo, y 200 µl de reactivo Ellman se añade. Después de dejar permanecer en un cuarto oscuro durante 60 minutos, la absorbancia se mide a 405 nm. (3) Cálculo de actividad inhibidora Se describe la curva estándar al usar estándar de ElA de selección PG, y la cantidad de PGF2a producido se determina a partir de la absorbancia. La velocidad inhibidora de cada compuesto de los ejemplos en cada concentración se determina en términos de IC5u al usar la cantidad de PGF2a producido para la solución de reacción que no contiene los compuestos de los ejemplos como el 100%. Los resultados se muestran en el cuadro 2.

CUADRO 2 ND: No determinado Los compuestos (1a) y (1 b) inhiben la agregación de plaqueta en humano y cerdo de guinea en una baja concentración. De otra manera, estos inhiben IC50 para COX-1 y COX-2 que es 100 veces más alto que la supresión de agregación de plaqueta.

EJEMPLO DE PRUEBA 5 Evaluación de absorción oral Los cerdos de guinea en ayunas que tienen un peso de cuerpo de 290 a 360 g se administran con una suspensión del compuesto (1 b) en metilcelulosa al 0.5% (MC) en una concentración de 2 mg/ml en términos del compuesto (1a), en una dosis de 10 mg/kg oralmente. El grupo de contraste se administra únicamente con 5 ml/ Kg de MC al 0.5% que es el solvente para el compuesto de prueba. Una hora después de la administración, el cerdo de guinea se anestesia con cetamina y xilazina, y después de la sección abdominal, la sangre se colecta de la aorta abdominal al usar 1/10 volumen de citrato de sodio al 3.13%. Se prepara PRP a partir de la sangre así colectada por el mismo procedimiento como el ejemplo de prueba 3 para medir la agregación de plaqueta inducida por colágeno. En la agregación de plaqueta, se usa el colágeno en una concentración final de 0.8 µg a 2.5 µg. Los resultados se muestran en la FIG. 5. En la sangre del cerdo de guinea administrado con el compuesto (1 b) en una dosis de 10 mg/kg, la agregación de plaqueta inducida por colágeno se suprime remarcadamente para demostrar que el compuesto (1 b) es suficientemente absorbido para exhibir su efecto.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1.- Un compuesto representado por la fórmula (Ib):

2.- Monoclorhidrato de [1-(6-metoxipiridazina-3-il)-5-(piridina-2-il)-1 H-pirazol-3-il](4-metilpiperiazina-1 -il)metanona

3.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado además porque el compuesto es un anhídrido.

4.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, caracterizado además porque el compuesto es un dihidrato.

5.- Un compuesto representado por la fórmula (le):

6.- Mono-L-tartrato de [1-(6-metoxipiridazina-3-il)-5-(piridina-2-il)-1 H-pirazol-3-il](4-metilpiperiazina-1 -il)metanona.

7 '.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 5 ó 6, caracterizado además porque el compuesto es un anhídrido.

8.- Un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (Ib): que comprende las etapas de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (II): con N-metilpiperazina en etanol que contiene agua en la presencia de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida; y al tratar la mezcla de reacción con ácido clorhídrico concentrado.

9.- Un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (Ib): que comprende las etapas de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (lll): con metóxido de sodio en metanol, y al tratar la mezcla de reacción con hidróxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (II): al hacer reaccionar este compuesto con N-metilpiperazina en etanol que contiene agua en la presencia de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida; y al tratar la mezcla de reacción con ácido clorhídrico concentrado.

10.- Un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (Ib): que comprende las etapas de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (IV): con 3-cloro-6-hidrazinopiridazina en metanol en la presencia de ácido clorhídrico concentrado para producir un compuesto representado por la fórmula (lll): c al hacer reaccionar este compuesto con metóxido de sodio en metanol y al tratar el producto de reacción con hidróxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (II): al hacer reaccionar este compuesto con N-metilpiperazina en etanol que contiene agua en la presencia de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida; y al tratar la mezcla de reacción con ácido clorhídrico concentrado.

11.- Un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (Ib): que comprende las etapas de hacer reaccionar acetilpiridina con oxalato de dimetilo en metanol en la presencia de metóxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (IV): o o al hacer reaccionar este con 3-cloro-6-hidrazinopiridazina en metanol en la presencia de ácido clorhídrico concentrado para producir un compuesto representado por la fórmula (lll): al hacer reaccionar este compuesto con metóxido de sodio en metanol; al tratar la mezcla de reacción con hidróxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (II): al hacer reaccionar este compuesto con N-metilpiperazina en etanol que contiene agua en la presencia de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida; y al tratar la mezcla de reacción con ácido clorhídrico concentrado.

12.- Un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (Ib): que comprende las etapas de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (IV): con 3-cloro-6-hidrazinopiridazina en metanol en la presencia de ácido metanosulfónico o en la presencia de ácido clorhídrico concentrado, la adición de metóxido de sodio, y al tratar la mezcla de reacción con hidróxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (II): al hacer reaccionar este compuesto con N-metilpiperazina en etanol que contiene agua en la presencia de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida; y al tratar la mezcla de reacción con ácido clorhídrico concentrado.

13.- Un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (Ib): que comprende las etapas de hacer reaccionar acetilpiridina con oxalato de dimetilo en metanol en la presencia de metóxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (IV): al hacer reaccionar este compuesto con 3-cloro-6-hidrazinopiridazina en metanol en la presencia de ácido metanosulfónico o en la presencia de ácido clorhídrico concentrado; al añadir metóxido de sodio; al tratar la mezcla de reacción con hidróxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (II): al hacer reaccionar este compuesto con N-metilpiperazina en etanol que contiene agua en la presencia de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida; y al tratar la mezcla de reacción con ácido clorhídrico concentrado.

14.- Un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (Ib): que comprende las etapas de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (II): con N-metilpiperazina en acetonitrilo en la presencia de monohidrato de 1-hidroxibenzotriazol y diciciohexilcarbodiimida; y al tratar la mezcla de reacción con ácido clorhídrico concentrado.

15.- Un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (Ib): que comprende las etapas de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (lll): con metóxido de sodio en metanol, y al tratar la mezcla de reacción con hidróxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (II): al hacer reaccionar este compuesto con N-metilpiperazina en acetonitrilo en la presencia de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y diciciohexilcarbodiimida; y al tratar la mezcla de reacción con ácido clorhídrico concentrado.

16.- Un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (Ib): que comprende las etapas de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (IV): con 3-cloro-6-hidrazinopiridazina en metanol en la presencia de ácido clorhídrico concentrado para producir un compuesto representado por la fórmula (lll): al hacer reaccionar este compuesto con metóxido de sodio en metanol; al tratar la mezcla de reacción con hidróxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (II): al hacer reaccionar este compuesto con N-metilpiperazina en acetonitrilo en la presencia de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y diciciohexilcarbodiimida; y al tratar esta mezcla de reacción con ácido clorhídrico concentrado.

17.- Un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (Ib): que comprende las etapas de hacer reaccionar acetilpiridina con oxalato de dimetilo en metanol en la presencia de metóxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (IV): al hacer reaccionar este compuesto con 3-cloro-6-hidrazinopiridazina en metanol en la presencia de ácido clorhídrico concentrado para producir un compuesto representado por la fórmula (lll): al hacer reaccionar este compuesto con metóxido de sodio en metanol; al tratar la mezcla de reacción con hidróxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (II): al hacer reaccionar este compuesto con N-metilpiperazina en acetonitrilo en la presencia de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y diciciohexilcarbodiimida; y al tratar este compuesto con ácido clorhídrico concentrado.

18.- Un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (Ib): que comprende las etapas de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (IV): con 3-cloro-6-hidrazinopiridazina en metanol en la presencia de ácido metanosulfónico o en la presencia de ácido clorhídrico concentrado, la adición de metóxido de sodio, y al tratar la mezcla de reacción con hidróxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (II): al hacer reaccionar este compuesto con N-metilpiperazina en acetonitrilo y en la presencia de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y diciciohexilcarbodiimida; y al tratar la mezcla de reacción con ácido clorhídrico concentrado.

19.- Un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (Ib): que comprende las etapas de hacer reaccionar acetilpiridina con oxalato de dimetilo en metanol en la presencia de metóxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (IV): al hacer reaccionar este compuesto con 3-cloro-6-hidrazinopiridazina en metanol en la presencia de ácido metanosulfónico o en la presencia de ácido clorhídrico concentrado; al añadir metóxido de sodio; al tratar la mezcla de reacción con hidróxido de sodio para producir un compuesto representado por la fórmula (II): al hacer reaccionar este compuesto con N-metilpiperazina en acetonitrilo en la presencia de monohidrato de 1 -hidroxibenzotriazol y diciciohexilcarbodiimida; y al tratar la mezcla de reacción con ácido clorhídrico concentrado.

20.- Un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (le): que comprende las etapas de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (II): con N-metilpiperazina en acetonitrilo en la presencia de monohidrato de 1-hidroxibenzotriazol y 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida para producir un compuesto representado por la fórmula (la): y hacer reaccionar este compuesto con ácido L-tartárico.

21.- Un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (II): que comprende las etapas de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (lll): con metóxido de sodio en metanol; y al tratar la mezcla de reacción con hidróxido de sodio.

22.- Un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (II): que comprende las etapas de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (IV): 2 con 3-cloro-6-hidrazinopiridazina en metanol en la presencia de ácido metanosulfónico; al añadir metóxido de sodio; y al tratar la mezcla de reacción con hidróxido de sodio.

23.- Un método para la producción de un compuesto representado por la fórmula (II): que comprende las etapas de hacer reaccionar un compuesto representado por la fórmula (IV): con 3-cloro-6-hidrazinopiridazina en metanol en la presencia de ácido clorhídrico concentrado; al añadir metóxido de sodio; y al tratar la mezcla de reacción con hidróxido de sodio.

24.- Una composición farmacéutica que comprende el compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y un portador farmacéuticamente aceptable.

25.- Un medicamento que contiene la composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 24.

26.- Un medicamento que contiene el compuesto de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 como su componente efectivo.

27.- El medicamento de conformidad con la reivindicación 25 o 26, caracterizado además porque el medicamento es útil en la prevención y/o tratamiento como enfermedad isquémica.

28.- El uso del compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la elaboración de un medicamento útil para la prevención y/o tratamiento de una enfermedad isquémica.