MD4645C1 - Mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Fusarium gibbosum CNMN-FD-12 - Google Patents
Mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Fusarium gibbosum CNMN-FD-12 Download PDFInfo
- Publication number
- MD4645C1 MD4645C1 MDA20180019A MD20180019A MD4645C1 MD 4645 C1 MD4645 C1 MD 4645C1 MD A20180019 A MDA20180019 A MD A20180019A MD 20180019 A MD20180019 A MD 20180019A MD 4645 C1 MD4645 C1 MD 4645C1
- Authority
- MD
- Moldova
- Prior art keywords
- cultivation
- cnmn
- nutrient medium
- bis
- water
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la biotehnologie, în particular la un mediu nutritiv de cultivare a tulpinii de fungi Fusarium gibbosum CNMN-FD-12 producător de proteaze, xilanaze şi β -glucozidaze şi poate fi utilizată în industria microbiologică pentru obţinerea preparatelor enzimatice hidrolitice complexe.Mediul nutritiv, conform invenţiei, conţine în % mas.: făină de porumb 2,0, făină de soia 1,0, CaCO3 0,2, (NH4)2SO4 0,1, în calitate de biostimulator compuşi coordinativi ai fierului (III) [Fe(H2L1)(H2O)2](NO3)3·1.5H2O] sau [Fe(H2L2)(H2O)2](NO3)3·5H2O 0,0010…0,0015 şi restul apă.
Description
Invenţia se referă la biotehnologie, în particular la un mediu de cultivare a tulpinii de fungi Fusarium gibbosum CNMN-FD-12 producătoare de proteaze, xilanaze şi β -glucozidaze şi poate fi utilizată în industria microbiologică pentru obţinerea preparatelor enzimatice hidrolitice complexe, în medicină, industria farmaceutică, în producerea detergenţilor, precum şi în cercetări ştiinţifice.
Pentru cultivarea tulpinilor fungice producătoare de enzime proteolitice se utilizează medii care conţin ca parte minerală diferite modificări ale mediului Czapek şi inductori ai sintezei proteazelor (ingrediente naturale cu conţinut înalt de proteine - făină de fasole, făină de porumb, tărâţe de grâu etc.) şi, în dependenţă de particularităţile fiziologo-biochimice ale tulpinii, diferiţi biostimulatori [1].
Sunt cunoscute două variante de medii de cultivare a tulpinii de fungi Fusarium gibbosum CNMN-FD-12, care conţin, (%): făină de porumb 2,0, făină de soia 1,0, CaCO3 0,2, (NH4)2SO4 - 0,1, unul dintre compuşii coordinativi [Fe(H2L1)(H2O)3](NO3)3·2H2O sau [Fe(H2L2)(H2O)3](NO3)3·2H2O, restul apă, pH-ul iniţial al mediului fiind de 6,25 [2].
Mediul asigură sporirea biosintezei proteazelor acide şi neutre.
În calitate de mediu proxim s-a utilizat mediul nutritiv pentru cultivarea submersă a tulpinii Fusarium gibbosum CNMN- FD-12 cu următoarea componenţă, (%): făină de porumb 2,0, făină de soia 1,0, CaCO3 - 0,2, (NH4)2SO4 0,1, restul apă, pH-ul iniţial al mediului fiind de 6,25 [3].
Dezavantajul mediilor menţionate constă în faptul că la cultivarea tulpinii-producătoare pe aceste medii nu se asigură realizarea potenţialului posibil de sinteză a proteazelor neutre - componenta principală a complexului proteolitic sintetizat de tulpină şi biosinteza enzimei nu atinge valori maxime.
Problema pe care o rezolvă prezenta invenţie constă în elaborarea unui mediu nutritiv pentru cultivarea submersă a tulpinii de fungi Fusarium gibbosum CNMN-FD-12, utilizarea căruia intensifică biosinteza proteazelor neutre, fapt ce permite extinderea sferei de aplicare a complexului enzimatic.
Invenţia soluţionează problema prin aceea că se propune un mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Fusarium gibbosum CNMN-FD-12, care conţine făină de porumb, făină de soia, carbonat de calciu, sulfat de amoniu, compuşi coordinativi ai fierului (III) şi apă potabilă în următorul raport al componentelor, % mas.: făină de porumb 2,0, făină de soia 1,0, carbonat de calciu 0,2, sulfat de amoniu 0,1, azotat de (2,6-diacetilpiridină-bis-izonicotinoilhidrazonă)-bis-aqua)fier(III) - apă(1/1.5) (I) sau azotat de (2,6-diacetilpiridină-bis-nicotinoilhidrazonă)-bis-aqua)fier(III) - apă (1/5) (II) 0,0010…0,0015, apă restul, având un pH iniţial de 6,25.
Rezultatul tehnic al invenţiei constă în stimularea biosintezei proteazelor neutre, componenta principală a complexului proteolitic sintetizat de tulpină, cu sporirea activităţii acesteia şi în posibilitatea reducerii, în funcţie de scop, a duratei de cultivare a tulpinii cu 24 ore.
Activitatea componentelor neproteolitice a complexului enzimatic (xilanaze, β-glucozidaze) sintetizate de tulpina-producătoare Fusarium gibbosum CNMN-FD-12 se păstrează la nivelul variantei martor.
Efectul biostimulator mai pronunţat asupra proteazelor neutre al compuşilor coordinativi propuşi poate fi determinat de specificul structurii şi activităţii ligandului heterociclic (2,6-diacetilpiridina) în componenţa complecşilor I şi II faţă de ligandul alifatic (2,3-butandiona) în componenţa complecşilor [Fe(H2L*)(H2O)3](NO3)3·2H2O şi [Fe(H2L**)(H2O)3](NO3)3·2H2O din mediile cunoscute.
Procedeele de sinteză a compuşilor coordinativi ai fierului(III) - azotat de (2,6-diacetilpiridină-bis-izonicotinoilhidrazonă)-bis-aqua)fier(III) - apă(1/1.5) (I), [Fe(H2L1)(H2O)2](NO3)3·1,5H2O şi azotat de (2,6-diacetilpiridină-bis-nicotinoilhidrazonă)-bis-aqua)fier(III) - apă (1/5) (II), [Fe(H2L2)(H2O)2](NO3)3·5H2O.
[Fe(H2L1)(H2O)2](NO3)3·1,5H2O*
Soluţia obţinută prin dizolvarea Fe(NO3)3·9H2O (0,2 g, 0,5 mmol) în 10 mL apă a fost adăugată la suspensia de bază Schiff - 2,6-diacetilpiridină bis(izonicotinoilhidrazonă) (0,2 g, 0,5 mmol) în 20 mL metanol. Amestecul a fost agitat continuu până la dizolvarea completă a agentului de coordinaţie (bazei Schiff). Soluţia a fost filtrată şi refluxată timp de 2 ore, după care aceasta a fost lăsată la evaporare la temperatura camerei. În 4 zile s-au format cristale cubice de culoare neagră. S-a obţinut 0,18 g de produs cristalin. Randamentul (η) calculat după sarea metalului constituie 50,8%.
Analiza elementală pentru C21H25FeN10O14.50.
Calculat, %: С 35.36; H 3.53; N 19.64; Fe 7.83.
Găsit, %: С 35.28; H 3.51; N 19.55; Fe 7.80.
Spectrul IR (ν, cm-1): 3522 m*, 3151 s, 3117 s*, 3080 m, 2990 m, 2894 m, 2793 m, 2762 m, 2652 m, 2581 m, 2452 m, 2342 s, 1744 s, 1637 i*, 1612 m, 1584 s, 1567 m, 1548 m, 1535 s, 1498 m, 1409 i, 1379 s, 1365i, 1345 i, 1306 f.i*, 1291 f.i, 1273 i, 1207 m, 1186 m, 1170 m, 1161 i, 1094 m, 1080 m, 1059 m, 1050 m, 1043 m, 1034 m, 1019 s, 1004 s, 996 m, 913 m, 843 i, 827 i, 754 i, 722 s, 713 s, 691 m, 684 i, 651 s, 569 s, 556 s, 534 s, 500 s, 487 s, 442 m.
[Fe(H2L2)(H2O)2](NO3)3·5H2O**
Soluţia de Fe(NO3)3·9H2O (0,2 g, 0,5 mmol) dizolvat în 10 mL apă a fost adăugată la suspensia de bază Schiff (2,6-diacetilpiridină bis(nicotinoilhidrazonă)) (0,2 g, 0.5 mmol) în 20 mL metanol. Amestecul a fost agitat continuu până la dizolvarea completă a agentului de coordinaţie (bazei Schiff), după ce soluţia a fost filtrată, refluxată 2 ore şi lăsată pentru evaporare la temperatura camerei. În 4 zile s-au format cristale negre în formă de prisme alungite cu masa de 0.23 g. Randamentul (η) calculat după sarea metalului constituie 61%.
Analiza elementală pentru C21H33FeN10O18.
Calculat, %: С 32.78; H 4.32; N 18.20; Fe 7.26.
Găsit, %: С 32.66; H 4.76; N 18.15; Fe 7.14.
Spectrul IR (ν, cm-1): 3381 m*, 3193 m, 3124 m, 3085 m, 3063 m, 2988 m, 2750 m, 2650 m, 2420 s*, 2350 s, 2106 s, 2006 s, 1752 s, 1737 s, 1630 m, 1617s, 1595 s, 1566 m, 1533 i*, 1507 m, 1395 f.i*, 1380 f.i, 1357 f.i, 1313 f.i, 1272 s, 1212 s, 1165 i, 1148 m, 1108 m, 1075 s, 1056 i, 1039 i, 1020 m, 997 m, 978 s, 958 s, 920 m, 885 s, 874 s, 820 s, 773 s, 752 s, 731 i, 702 m, 689 s, 678 m, 664 s, 621 m, 565 m, 554 s, 533 i, 495 s, 445 i.
*- intensitatea apreciată calitativ: f.i - foarte intensivă; i - intensivă; m - medie; s - slabă.
Exemple de realizare a invenţiei
Exemplul 1
Tulpina Fusarium gibbosum CNMN-FD-12 s-a cultivat în baloane Erlenmayer cu capacitatea de 0,75 L, care conţineau 0,2 L mediu nutritiv cu următoarea compoziţie, %: făină de porumb 2,0; făină de soia 1,0; CaCO3 0,2; (NH4)2SO4 0,1; [Fe(H2L1)(H2O)2](NO3)3·1,5H2O (I) 0,0005…0,0015; restul apă de robinet; pH-ul iniţial al mediului fiind de 6,25. Mediul nutritiv se însămânţează cu suspensie de spori şi miceliu în cantitate de 5% v/v, obţinută prin spălare cu apă distilată sterilă a culturii de 12…14 zile, crescută pe suprafeţe înclinate de malţ-agar. Cultivarea s-a realizat în condiţii de agitare continuă (180 rot.·min.-1), timp de 144 ore, la temperatura de 28°C.
Activitatea maximă a proteazelor în variantele optimizate de mediu, determinată în lichidul cultural prin metoda Anson după acţiunea asupra cazeinatului de sodiu la pH-ul 7, s-a înregistrat în ziua a 6-a de cultivare a tulpinii-producătoare, în varianta cu concentraţia compusului coordinativ al Fe(III) de 0,0010%, constituind 109,4 U·ml-1 faţă de 33,6 U·ml-1 în varianta proximă, ceea ce depăşeşte proba de referinţă cu 225,6%.
La aceiaşi concentraţie a compusului [Fe(H2L1)2(H2O)2](NO3)3·1,5H2O activitatea proteazelor în varianta experiment constituie 58,5 U·ml-1 după 120 ore de cultivare (ziua a 5-a) comparativ cu 33,6 U·ml-1 în varianta proximă în ziua de biosinteză maximă (ziua a 6-a), depăşind proba de referinţă cu 74,1%, ceea ce face posibil, la preferinţă, reducerea ciclului de cultivare cu 24 ore.
Exemplul 2
Tulpina Fusarium gibbosum CNMN-FD-12 s-a cultivat în baloane Erlenmayer cu capacitatea de 0,5 L care conţineau 0,1 L mediu, la temperatura de 30°C, [Fe(H2L2)(H2O)2](NO3)3·5H2O (II), cu restul condiţiilor echivalente exemplului 1.
Activitatea maximă a proteazelor înregistrată în lichidul cultural al tulpinii-producătoare, în ziua a 6-a de cultivare, determinată la pH-ul 7,4, în varianta cu concentraţia compusului coordinativ de 0,0010%, a constituit 95,9 U·ml-1 în comparaţie cu 33,6 U·ml-1 în varianta proxim (ziua a 6-a de cultivare), depăşind proba de referinţă cu 185,4%.
La reducerea duratei de cultivare cu 24 ore (a 5-a zi de cultivare), activitatea proteazelor în varianta optimizată constituie 94,6 U·ml-1 (concentraţia 0,0015%), depăşind nivelul mediului proxim (33,6 U·ml-1 ) în ziua a 6-a, cu 181,5% (vezi Tabelul).
Tabel
Mediul conform invenţiei, compusul coordinativ (CC) Concen-traţia CC % Activitatea proteolitică (pH 7,4) Ziua a 5-a Ziua a 6-a U/ml % U/ml % [Fe(H2L1)(H2O)2](NO3)3·1.5H2O (I) 0,0005 43,5 172,6 92,9 276,5 0,0010 58,5 232,1 109,4 325,6 0,0015 46,4 184,1 52,5 156,3 [Fe(H2L2)(H2O)2](NO3)3·5H2O (II) 0,0005 52,5 208,3 79,4 263,3 0,0010 58,5 232,1 95,9 285,4 0,0015 94,6 375,4 55,5 165,2 Mediul proxim - 25,2 100 33,60 100
(Calculele sunt efectuate în raport cu maximul de biosinteză a mediului proxim - ziua a VI-a de cultivare)
1. Грачева И. М. Технология ферметных препаратов. Москва, Агропромиздат, 1975, р. 325-327
2. MD 4509 B1 2017.08.31
3. MD 4186 B1 2012.11.30
Claims (1)
- Mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Fusarium gibbosum CNMN-FD-12, care conţine făină de porumb, făină de soia, carbonat de calciu, sulfat de amoniu, compuşi coordinativi ai fierului (III) şi apă potabilă în următorul raport al componentelor, % mas.:făină de porumb 2,0 făină de soia 1,0 carbonat de calciu 0,2 sulfat de amoniu 0,1 azotat de (2,6-diacetilpiridină-bis-izonicotinoilhidrazonă)-bis-aqua)fier(III) - apă(1/1.5) sau azotat de (2,6-diacetilpiridină-bis-nicotinoilhidrazonă)-bis-aqua)fier(III) - apă (1/5) 0,0010…0,0015 apă restul, având un pH iniţial de 6,25.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDA20180019A MD4645C1 (ro) | 2018-03-21 | 2018-03-21 | Mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Fusarium gibbosum CNMN-FD-12 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDA20180019A MD4645C1 (ro) | 2018-03-21 | 2018-03-21 | Mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Fusarium gibbosum CNMN-FD-12 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| MD4645B1 MD4645B1 (ro) | 2019-08-31 |
| MD4645C1 true MD4645C1 (ro) | 2020-03-31 |
Family
ID=67874161
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| MDA20180019A MD4645C1 (ro) | 2018-03-21 | 2018-03-21 | Mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Fusarium gibbosum CNMN-FD-12 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| MD (1) | MD4645C1 (ro) |
-
2018
- 2018-03-21 MD MDA20180019A patent/MD4645C1/ro not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MD4645B1 (ro) | 2019-08-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Matkawala et al. | Microbial alkaline serine proteases: production, properties and applications | |
| Yadav et al. | Phosphate solubilization and mobilization in soil through microorganisms under arid ecosystems | |
| CN102061273B (zh) | 一株具有解磷作用的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| RU2134252C1 (ru) | Средство для внекорневой обработки масличных культур | |
| Chandrasekaran et al. | Isolation, characterization and molecular three-dimensional structural predictions of metalloprotease from a phytopathogenic fungus, Alternaria solani (Ell. and Mart.) Sor. | |
| MD4645C1 (ro) | Mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Fusarium gibbosum CNMN-FD-12 | |
| Gudzenko et al. | Мixed-ligand complexes of germanium–3d-metal with 1-hydroxyethane-1, 1-diphosphonic acid аnd 2, 2′-bipyridine as modulators of Bacillus sp. IMV B-7883 elastase and fibrinogenase activity | |
| MD4234C1 (ro) | Mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Fusarium gibbosum CNMN-FD-12 | |
| Gudzenko et al. | Modification of Bacillus sp. IMV B-7883 Elastase Activity by the Hetero-Metallic Carboxylatogermanates/Stannates | |
| MD4827C1 (ro) | Nitrat de 2,6-diacetilpiridin-bis(picolinoilhidrazon)-bis(aqua)fier(III)-hidrat(1/2,5) cu proprietăţi de stimulator al sintezei lipazelor la tulpina de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 şi mediu nutritiv pentru cultivare | |
| Arya et al. | Thermostable alkaline proteases from bacteria: A review | |
| MD4445C1 (ro) | Procedeu de cultivare a tulpinii de fungi Trichoderma koningii CNMN-FD-15 | |
| MD4654C1 (ro) | Mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Trichoderma koningii Oudemans CNMN FD 15 - producătoare de proteaze neutre | |
| Tanner et al. | The photosynthetic function of manganese and chloride | |
| Ichishima et al. | Studies on the Proteolytic Enzymes of Black Aspergilli: Part VII. Effect of Inorganic Nitrogen Compounds for the Production of Acid-Protease by Kuro-Koji Mold Group in Solid Cultivation (Koji-Culture) Part VIII. Effect of Inorganic Nitrogen Compounds for the Production of Acid Protease by Kuro-Koji Mold Group in Submerged Cultivation | |
| MD4847C1 (ro) | Tris(2,6-dimetil piridindicarboxilat-1kONO)-di-m-(izotiocianato-1,2kN)-(diizotiocianato-2kN)bariu(II)cobalt(II) cu proprietăţi de stimulator al sintezei principiilor biologic active la fungi | |
| MD4831C1 (ro) | Tetra(izotiocianat)cobaltat(II) de tris(dimetil piridin-2,6-dicarboxilat)stronţiu cu proprietăţi de stimulator al activităţii lipolitice la tulpina de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 | |
| MD4874C1 (ro) | Perclorat de 2,6-diacetilpiridin-bis(picolinoilhidrazon)-bis(aqua)fier(III)-hidrat(1/2,5) cu proprietăţi de stimulator al sintezei lipazelor la tulpina de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 | |
| KR100640548B1 (ko) | 폐백토를 이용한 비타민 ｂ2의 생산 방법 | |
| MD4853C1 (ro) | Tetra(izotiocianat)cobaltat(II) de tris(dimetil piridin-2,6-dicarboxilat)calciu cu proprietăţi de stimulator al activităţii lipolitice la tulpina de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 | |
| MD4285C1 (ro) | Tulpină de fungi Trichoderma koningii Oudemans - producătoare de proteaze acide, neutre şi alcaline | |
| MD4509C1 (ro) | Azotaţi de (2,3-butandionă-bis((izo)nicotinoilhidrazonă)-tris-aqua)fier(III) dihidraţi şi mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi miceliali Fusarium gibbosum CNMN FD 12 | |
| MD4803C1 (ro) | Aplicarea compusului coordinativ diaqua-nitrato-(2,4,6-tris(2-piridil)-s-triazină)-mangan(II) nitrat în calitate de stimulator al activităţii proteolitice la tulpina Fusarium gibbosum CNMN FD 12 | |
| Gudzenko et al. | Effect of Germanium (IV) and Tin (IV) Biocoordination Compounds on the Elastase Activity of Bacillus licheniformis IMB B-8008 | |
| MD1624Z8 (ro) | Procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG4A | Patent for invention issued | ||
| TC4A | Change of name of proprietor (patent for invention) |
Owner name: INSTITUTIA PUBLICA UNIVERSITATEA TEHNICA A MOLDOVEI, MD BD. STEFAN CEL MARE SI SFANT NR. 168, MD-2004, CHISINAU, REPUBLICA MOLDOVAINSTITUTUL DE CHIMIE, MD STR. ACADEMIEI NR. 3, MD-2028, REPUBLICA MOLDOVA Free format text: PREVIOUS NAME OF PROPRIETOR: INSTITUTUL DE MICROBIOLOGIE SI BIOTEHNOLOGIE, MD STR. ACADEMIEI NR. 1, MD-2028, CHISINAU, REPUBLICA MOLDOVAINSTITUTUL DE CHIMIE, MD STR. ACADEMIEI NR. 3, MD-2028, REPUBLICA MOLDOVA |
|
| KA4A | Patent for invention lapsed due to non-payment of fees (with right of restoration) | ||
| MM4A | Patent for invention definitely lapsed due to non-payment of fees |