MD4843C8 - Procedeu de cultivare submersă a tulpinii Lentinus edodes (Berk.) Sing. CNMN-FB-01 - Google Patents

Procedeu de cultivare submersă a tulpinii Lentinus edodes (Berk.) Sing. CNMN-FB-01 Download PDF

Info

Publication number
MD4843C8
MD4843C8 MDA20210060A MD20210060A MD4843C8 MD 4843 C8 MD4843 C8 MD 4843C8 MD A20210060 A MDA20210060 A MD A20210060A MD 20210060 A MD20210060 A MD 20210060A MD 4843 C8 MD4843 C8 MD 4843C8
Authority
MD
Moldova
Prior art keywords
cultivation
berk
sing
cnmn
lentinus edodes
Prior art date
Application number
MDA20210060A
Other languages
English (en)
Russian (ru)
Other versions
MD4843C1 (ro
MD4843B1 (ro
Inventor
Александра ЧИЛОЧЬ
Елена ДВОРНИНА
Валериу РУДИК
Ион БУЛХАК
Думитру УРЕКЕ
Мария КОКУ
Original Assignee
Институт Микробиологии И Биотехнологии
институт химии
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Институт Микробиологии И Биотехнологии, институт химии filed Critical Институт Микробиологии И Биотехнологии
Priority to MDA20210060A priority Critical patent/MD4843C8/ro
Publication of MD4843B1 publication Critical patent/MD4843B1/ro
Publication of MD4843C1 publication Critical patent/MD4843C1/ro
Publication of MD4843C8 publication Critical patent/MD4843C8/ro

Links

Landscapes

  • Mushroom Cultivation (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

Invenţia se referă la biotehnologie, şi anume la cultivarea submersă a tulpinii de fungi Lentinus edodes (Berk.) Sing. CNMN-FB-01, producătoare de biomasă care poate fi utilizată pentru fabricarea preparatelor medicamentoase cu proprietăţi curative şi nutraceutice.Procedeul de cultivare submersă a tulpinii de fungi Lentinus edodes (Berk) Sing CNMN-FB-01 prevede inocularea materialului semincer în cantitate de 10% v/v pe mediul nutritiv, care conţine, g/L: NH4NO3 0,20, KH2PO4 1,30, MgSO4·7H2O 0,35, tris(2,6-dimetil piridindicarboxilat-1kONO)-di-µ-(izotiocianato-1,2kN)-(diizotiocianato-2kN)bariu(II)cobalt(II) 0,005-0,015, malţ de 5° Balling restul, şi cultivarea la agitare continuă la temperatura de 28-30°C în decurs de 144 de ore.Rezultatul tehnic al invenţiei constă în reducerea ciclului de cultivare cu 48 de ore şi sporirea producţiei de biomasă.

Description

Invenţia se referă la biotehnologie, şi anume la cultivarea submersă a tulpinii de fungi Lentinus edodes (Berk.) Sing. CNMN-FB-01, producătoare de biomasă care poate fi utilizată pentru fabricarea preparatelor medicamentoase cu proprietăţi curative şi nutraceutice.
Bazidiomicetele se referă la obiecte micologice de perspectivă pentru cultivarea în profunzime în calitate de sursă suplimentară de proteine şi substanţe bioactive valoroase.
Totodată, fungii Lentinus edodes se caracterizează prin viteză mică de creştere, fapt ce provoacă scăderea productivităţii culturii ca urmare a asimilării neefective a substratului. Pentru elaborarea tehnologiilor intensive de cultivare şi sporire a productivităţii sunt necesare cercetări de stabilire a particularităţilor fiziologice ale speciei în raport cu diverşi biostimulatori specifici de diferită origine (Усачёва Р. В. Физиолого-биохимические особенности некоторых штаммов культивируемого гриба Lentinus edodes (Berk.) Sing. Дисс. кбн, Воронеж, 2003).
În ultimele decenii în scopul modificării biosintezei substanţelor bioactive la microorganisme intensiv se studiază compuşii coordinativi ai elementelor 3d, dintre care unii, alăturat sporirii biosintezei principiilor bioactive manifestă şi capacitate de intensificare (accelerare) a proceselor biosintetice exprimate în reducerea ciclului de dezvoltare a microorganismului (MD 2837 G2 2005.08.31).
Este cunoscut procedeul de obţinere a masei miceliale la cultivarea diferitor variante ale speciei Lentinus edodes pe medii ce conţin în calitate de stimulatori ai sintezei biomasei tărâţe şi melasă, şi, selectiv, săruri minerale [1].
Dezavantajul acestui procedeu constă în calitatea nesatisfăcătoare a biomasei, în particular, aromă slab pronunţată de ciuperci, perioada lungă de cultivare 10-13 zile.
Mai este cunoscut procedeul de obţinere a biomasei miceliale la cultivarea ciupercii Lentinus edodes timp de 8-10 zile pe medii ce conţin în calitate de stimulatori ai sintezei biomasei must de bere (4° Balling) la pH 5,0-6,0 [2].
Dezavantajul acestui procedeu constă în cantitatea mică de biomasă sintetizată - 10 g/L. Maxima biosintezei (10 g/L) se atinge în ziua a 7-a de cultivare. Procesul de acumulare a biomasei este însoţit de scăderea pH-ului mediului până l valoarea 3,0-3,05, ceea ce inhibă creşterea activă a culturii, provocând ”îmbătrânirea” ei. În aceste condiţii continuarea cultivării până la 8-10 zile nu este oportună, deoarece la pH-ul 3,0 acumularea biomasei nu are loc şi cultura trece în faza staţionară.
Cea mai apropiată soluţie după esenţa tehnică şi rezultatul obţinut este procedeul de cultivare a tulpinii Lentinus edodes (Berk.) Sing. CNMN-FB-01, utilizată în calitate de produs alimentar, care se realizează timp de 8-10 zile, pe un mediu nutritiv ce conţine ca ingrediente de bază must de bere, melasă, ulei de floarea soarelui. Temperatura de cultivare este de 20-27°C, pH iniţial 5,0-5,5. Cantitatea maximală de biomasă acumulată în condiţiile soluţiei proxime constituie 22,4 g/L [3].
Dezavantajul procedeului constă în durata lungă de cultivare - 10 zile, instabilitatea manifestării maximei de biosinteză la 8-10 zile, iar în condiţiile nutritive simplificate de mediu potenţialul de sinteză intensivă a biomasei miceliale a producătorului se realizează parţial.
Problema pe care o rezolvă invenţia constă în reducerea duratei de cultivare a bazidiomicetei Lentinus edodes (Berk.) Sing. CNMN-FB-01 cu asigurarea unui nivel înalt de sinteză a biomasei miceliale.
Problema este rezolvată prin procedeul de cultivare submersă a tulpinii Lentinus edodes (Berk.) Sing. CNMN-F-01, care constă în obţinerea materialului semincer, inocularea lui în cantitate de 10% v/v pe un mediu nutritiv, care conţine, g/L: NH4NO3 0,20, KH2PO4 1,30, MgSO4·7H2O 0,35, tris(2,6-dimetil piridindicarboxilat-1kONO)-di-µ-(izotiocianato-1,2kN)-(diizotiocianato-2kN)bariu(II)cobalt(II) 0,005-0,015, malţ de 5° Balling restul, pH iniţial 5,0-5,5, şi cultivarea la agitare continuă la 180-200 rot/min la temperatura de 25-28°C în decurs de 144 de ore.
Rezultatul tehnic al invenţiei constă în reducerea ciclului de cultivare a tulpinii de bazidiomicete Lentinus edodes (Berk.) Sing. CNMN-FB-01 cu 48 de ore: 144 ore în varianta experimentală faţă de 192 ore în varianta proximă (în lipsa compusului coordinativ) şi sporirea producţiei de biomasă micelială cu 35,7-38, 2% faţă de varianta proximă.
Rezultatele obţinute pot fi condiţionate de îmbogăţirea mediului nutritiv cu cationi bivalenţi ai metalelor cu rol biologic semnificativ pentru dezvoltarea microorganismelor (Co2+, Ba2+).
Avantajele invenţiei:
- Biomasa se obţine la etapa creşterii vegetale a miceliului ce permite în termen redus obţinerea unui produs standard calitativ la nivelul produsului din corpi fructiferi.
- Obţinerea unei cantităţi sporite de biomasă micelială valoroasă de Lentinus edodes cu spectru larg de activitate biologică.
Exemple de realizare a invenţiei
Exemplul 1
Materialul semincer (miaua) se obţine la cultivarea în profunzime pe mediul nutritiv de bază timp de 8-10 zile a miceliului tulpinii Lentinus edodes (Berk.) Sing. CNMN-FB-01 de 20 de zile crescut pe suprafeţe înclinate de malţ-agar.
Se prepară mediul nutritiv cu compoziţia, g: NH4NO3 - 0,20; KH2PO4 - 1,30; MgSO4·7H2O - 0,35, malţ de 5° Balling până la 1L, pH-ul 5,0-5,5.
Mediul pregătit se repartizează a câte 200 ml în colbe Erlenmeyer cu volumul de 0,75 L. După sterilizare (1 oră, 1 atm.) şi răcire până la temperatura de cameră, mediul se inoculează cu maiaua obţinută preventiv în raport de 10% v/v. Cultivarea se realizează în condiţii de agitare continuă (200 rot.·min.-1), timp de 8 zile, la temperatura de 28ºC.
Soluţia apoasă a compusullui coordinativ tris(2,6-dimetil piridindicarboxilat-1kONO)-di-µ-(izotiocianato-1,2kN)-(diizotiocianato-2kN)bariu(II)cobalt(II) cu formula [BaL3-µ-(NCS)2-Co(NCS)2], unde L reprezintă esterul dimetilic al acidului 2,6-piridindicarboxilic, cu concentraţii de 0, 0025, 0, 005, 0,010 şi 0,015 g/L, prealabil tratată în baie cu ultrasunet tipul DA-96 DADI timp de 1-2 minute până la dizolvare completă, se adiţionează la mediul de cultivare steril simultan cu materialul de inoculare. Biomasa micelială sintetizată se separă din lichidul cultural prin filtrare mecanică. Masa uscată de miceliu sintetizat s-a determină prin cântărire. Monitorizarea biomasei s-a efectuat în dinamică pe parcursul zilelor a 6-a, a7-a şi a 8-a de cultivare, perioadă în care cultura la cultivare clasică manifestă maxima de biosinteză (Tabel).
Tabel
Influenţa compusului coordinativ tris(2,6-dimetil piridindicarboxilat-1kONO)-
di-µ-(izotiocianato-1,2kN)-(diizotiocianato-2kN)bariu(II)cobalt(II) asupra acumulării biomasei
Variante Concen., g/L Ziua a 6-a Ziua a 8-a g/L %/martor** g/L %/martor Procedeul revendicat 0,0025 24,27 118,8 23,67 115,7 0,005 28,15 137,6 25,23 123,3 0,010 27,76 135,7 24,98 122,1 0,015 27,13 132,6 24,70 120,7 Soluţia proximă* 17,32 100 20,46 100
*Mediul nutritiv, g/L: must de bere 270-320; melasă 50-70; ulei de floarea soarelui 0,5-1,5; apă restul, pH iniţial 4,5-5,0.
**Calculele sunt efectuate faţă de maxima soluţiei proxime (ziua a 8-a).
Procedeul de obţinere a compusului tris(2,6-dimetil piridindicarboxilat-1kONO)-di-µ-(izotiocianato-1,2kN)-(diizotiocianato-2kN)bariu(II)cobalt(II):
Tiocianatul de bariu dihidrat cu masa de 0,08 g (0,025 mmoli) şi tiocianatul de cobalt trihidrat cu masa de 0,06 g (0,025 mmoli) s-au dizolvat în 7 mL de metanol (soluţia 1). 2,6-piridindicarbonildiclorura cu masa de 0,16 g (0,075 mmoli) s-a dizolvat în 15 mL de metanol (soluţia 2) (raportul molar Ba2+:Co2+:2,6-piridindicarbonildiclorură este 1:1:3). La agitare permanentă soluţia 1 se adaugă la soluţia 2, după care soluţia obţinută de culoare albastră a fost refluxată timp de 3 ore. După refluxare, soluţia a fost filtrată şi lăsată la temperatura camerei pentru cristalizare. În două zile, în soluţia filtrată s-au format cristale albastre sub forma unor prisme. Randamentul constituie 43% (0,11 g).
Găsit, %: C 36,75; H 2,76; Ba 13,51; Co 5,84; N 9,74.
Pentru C31H27BaCoN7O12S4 calculat, %: C 36,71; H 2,68; Ba 13,54; Co 5,81; N 9,67.
Nivelul maximal de biomasă micelială în varianta experimentală s-a marcat în ziua a 6-a de cultivare şi a constituit 28,15 g/L la concentraţia complexului [BaL3-µ-(NCS)2-Co(NCS)2] de 0,005g/L şi 27,76 g/L la concentraţia de 0,010 g/L, depăşind maxima soluţiei proxime (20,46 g/L în ziua a 8-a de cultivare) cu 37,6% şi, respectiv, 35,7%.
Exemplul 2
Tulpina Lentinus edodes (Berk.) Sing. CNMN-FB-01 se cultivă în colbe Erlenmeyer cu capacitate de 0,5 L cu 100 mL de mediu nutritiv în restul condiţiilor egale exemplului 1.
Nivelul maximal de biomasă micelială în varianta experimentală s-a marcat în ziua a 6-a de cultivare a producătorului şi a constituit 29,30 g/L la concentraţia complexului [BaL3-µ-(NCS)2-Co(NCS)2] de 0,005 g/L şi 28,70 g/L la concentraţia de 0,010 g/L, depăşind maxima soluţiei proxime (21,2 g/L în ziua a 8-a de cultivare) cu 38,2% şi, respectiv, 35,4%.
Cercetările au fost efectuate în cadrul proiectului 20.80009.5007.28 din Programul de Stat 2020-2023 al Rep. Moldova cu finanţarea de către ANCD.
1. Коробан Л.П., Дворнина А.А. Получение жидкого инокулюма гриба шиитаке Lentinus edodes (Berk.) Sing. методом глубинного культивирования. Депонированные научные работы ВИНИТИ РАН, Москва, 1998, № 12, p. 48
2. Соломко С. Ф., Митропольская Н.Ю. Получение посевного материала Lentinus edodes (Berk.) Sing. глубинным методом. Микология и фитопатология, 1944, nr. 3, p. 34-39
3. MD 2171 F1 2003.05.31

Claims (1)

  1. Procedeu de cultivare submersă a tulpinii Lentinus edodes (Berk.) Sing. CNMN-F-01, care constă în obţinerea materialului semincer la cultivarea în profunzime pe mediu nutritiv de bază timp de 8-10 zile a miceliului de L. edodes de 20 de zile crescut pe suprafeţe înclinate de malţ-agar, inocularea materialului semincer în cantitate de 10% v/v pe un mediu nutritiv, care conţine, g/L: azotat de amoniu (NH4NO3) 0,20, monofosfat de potasiu (KH2PO4) 1,30, sulfat de magneziu (MgSO4·7H2O) 0,35, tris(2,6-dimetil piridindicarboxilat-1kONO)-di-µ-(izotiocianato-1,2kN)-(diizotiocianato-2kN)bariu(II)cobalt(II) 0,005-0,015, malţ de 5° Balling restul, pH iniţial 5,0-5,5, şi cultivarea la agitare continuă la 180-200 rot/min la temperatura de 28-30°C în decurs de 144 de ore.
MDA20210060A 2021-09-09 2021-09-09 Procedeu de cultivare submersă a tulpinii Lentinus edodes (Berk.) Sing. CNMN-FB-01 MD4843C8 (ro)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MDA20210060A MD4843C8 (ro) 2021-09-09 2021-09-09 Procedeu de cultivare submersă a tulpinii Lentinus edodes (Berk.) Sing. CNMN-FB-01

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MDA20210060A MD4843C8 (ro) 2021-09-09 2021-09-09 Procedeu de cultivare submersă a tulpinii Lentinus edodes (Berk.) Sing. CNMN-FB-01

Publications (3)

Publication Number Publication Date
MD4843B1 MD4843B1 (ro) 2023-01-31
MD4843C1 MD4843C1 (ro) 2023-08-31
MD4843C8 true MD4843C8 (ro) 2024-02-29

Family

ID=85035523

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MDA20210060A MD4843C8 (ro) 2021-09-09 2021-09-09 Procedeu de cultivare submersă a tulpinii Lentinus edodes (Berk.) Sing. CNMN-FB-01

Country Status (1)

Country Link
MD (1) MD4843C8 (ro)

Also Published As

Publication number Publication date
MD4843C1 (ro) 2023-08-31
MD4843B1 (ro) 2023-01-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107418902A (zh) 一种香菇发酵用补料培养基及香菇液体深层连续培养方法
CN102381896B (zh) 蟹味菇液体菌种培养基配方及其制备方法
KR20040014360A (ko) 글루타티온을 생산하는 방법
GB2032456A (en) Growth promoting method for basidiomycetes
RU2092547C1 (ru) Способ активации микробиологических процессов, роста растений и клеток растений
MD4843C8 (ro) Procedeu de cultivare submersă a tulpinii Lentinus edodes (Berk.) Sing. CNMN-FB-01
Levine et al. Riboflavin production by Candida yeasts
JPS5824504A (ja) 植物にゲルマニウムを資化吸収せしめる方法
Elisashvili et al. Extracellular polysaccharide production by culinary-medicinal Shiitake mushroom Lentinus edodes (Berk.) Singer and Pleurotus (Fr.) P. Karst. species depending on carbon and nitrogen source
CN109197380A (zh) 一种新型食用菌的种植技术
CN85103034A (zh) 蔗渣拌液体菌种开放栽培香菇技术
US2906670A (en) Process of producing gibberellic acid by two stage cultivation of gibberella fujikuroi
KR19980024611A (ko) 아카르보스 제조를 위한 삼투 조절된 발효 방법
Martin Submerged production of edible mushroom mycelium
EP4581127A1 (en) Method for producing fungal spores, liquid medium used therein and substance produced thereby
RU2631922C1 (ru) Штамм дрожжей Yarrowia lipolytica - продуцент янтарной кислоты (варианты)
CN1320102C (zh) 一种姬松茸富锌液体培养的方法
CN108184547B (zh) 金针菇液体菌种的培养方法
RU2821927C1 (ru) Способ периодического глубинного культивирования мицелия базидиальных грибов
MD1624Z (ro) Procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze
RU1419152C (ru) Способ получения лимонной кислоты
RU1797624C (ru) Способ получени белкового корма
RU2814594C1 (ru) Питательная среда для выращивания продуцента молокосвертывающего фермента Piptoporus betulinus - продуцента молокосвертывающего фермента
US3701715A (en) Method for the production of glucose oxidase
MD4828C8 (ro) Procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze

Legal Events

Date Code Title Description
FG4A Patent for invention issued
TC4A Change of name of proprietor (patent for invention)

Owner name: INSTITUTIA PUBLICA UNIVERSITATEA TEHNICA A MOLDOVEI, MD BD. STEFAN CEL MARE SI SFANT NR. 168, MD-2004, CHISINAU, REPUBLICA MOLDOVAINSTITUTIA PUBLICA UNIVERSITATEA DE STAT DIN MOLDOVA, MD STR. A. MATEEVICI NR. 60, MD-2009, REPUBLICA MOLDOVA

Free format text: PREVIOUS NAME OF PROPRIETOR: INSTITUTUL DE MICROBIOLOGIE SI BIOTEHNOLOGIE, MD STR. ACADEMIEI NR. 1, MD-2028, CHISINAU, REPUBLICA MOLDOVAINSTITUTUL DE CHIMIE, MD STR. ACADEMIEI NR. 3, MD-2028, REPUBLICA MOLDOVA