CN106244463A - 富硒高虫草素含量的虫草菌丝体的培养方法 - Google Patents

富硒高虫草素含量的虫草菌丝体的培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种富硒高虫草素含量的虫草菌丝体的培养方法，包括菌种的活化、液体一级菌种的制备、液体二级菌种的制备、小型菌种发酵罐、生产发酵罐、浓缩、喷粉干燥、成品菌粉等步骤。本发明用白海参研磨液作为培养蛹虫草培养基的添加剂，利用液体发酵的方法，可以培育出高硒、高虫草素含量的蛹虫草菌丝体，硒含量可达到98.5微克/克以上，虫草素含量可达到3.15毫克/克以上。

Description

富硒高虫草素含量的虫草菌丝体的培养方法
技术领域
本发明涉及一种虫草菌丝体的培养方法。
背景技术
现有的虫草菌丝体的培养方法普遍存在虫草素含量低、硒含量低等问题，需要进一步加以改进。
发明内容
本发明的目的在于提供一种方法简便、虫草素含量高、硒含量高的富硒高虫草素含量的虫草菌丝体的培养方法。
本发明的技术解决方案是：
一种富硒高虫草素含量的虫草菌丝体的培养方法，其特征是：包括下列步骤：
（1）菌种的活化：将蛹虫草菌种接在以下培养基中进行活化和优化：葡萄糖15-20克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-2克，维生素B10.1-0.5毫克，白海参研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，琼脂粉15-20克，加水至1000毫升；将上述营养液在121℃，0.1MPa条件下灭菌30分钟，待冷却后倒入培养皿中；将蛹虫草菌种接入培养皿中，22℃黑暗条件下培养5-10天，选取生长速度快，菌丝致密，颜色纯正的菌落，再转接到斜面培养基上，22℃黑暗条件下培养5-10天，所得菌种即所需虫草菌种；
（2）液体一级菌种的制备：按以下配方制备液体培养基
首先按下列配方配制营养液I：葡萄糖15-20克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-2克，维生素B10.1-0.5毫克，白海参研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，加水至1000毫升；将上述营养液I分装在500毫升的锥形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121℃，0.1MPa条件下，灭菌30分钟，待冷却后在超净台上接入活化的虫草菌种，再在130转/分钟，22℃的摇床中震荡培养5-9天，待液体中出现均匀的菌球且较粘稠状可用；
（3）液体二级菌种的制备
首先按以下配方配置营养液Ⅱ：葡萄糖15-20克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-2克，维生素B10.1-0.5毫克，白海参研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，加水至1000毫升；将营养液Ⅱ分装在500毫升的锥形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121℃，0.1MPa条件下，灭菌30分钟，待冷却后在超净台上接入一级液体虫草菌种，每瓶5毫升，在130转/分钟，22℃的摇床中震荡培养5-9天，待液体中出现均匀的菌球且较粘稠状可用；
（4）小型菌种发酵罐
首先按下列配方配置发酵液I：去皮马铃薯8%，蔗糖2%，玉米淀粉2%，酵母浸粉0.5%，硫酸镁0.1%，磷酸二氢钾0.1%，白海参研磨液4-5%，维生素B10.01%，自然pH值；
将上述发酵液I按70%的容量装入50升的液体发酵罐中，按10%的接种量接入二级液体菌种，22℃、通气量0.5-1.0m3/h，搅拌速度150-180r/min,培养72-96h，得到生产用液体菌种；
（5）生产发酵罐
按下列配方配置发酵液Ⅱ：去皮马铃薯8%，蔗糖2%，玉米淀粉2%，酵母浸粉0.5%，硫酸镁0.1%，磷酸二氢钾0.1%，白海参研磨液4-5%，维生素B 10.01%，自然PH值。
将上述发酵液Ⅱ按70%的容量装入200升的液体发酵罐中，按10%的接种量接入生产用液体菌种，22℃，通气量0.5-1.0m3/h，搅拌速度150-180r/min，培养72-96h；
（6）浓缩：
将发酵液过滤，使菌丝体和营养液分离，用蒸馏水冲洗2次；
（7）喷粉干燥
将获得的菌丝体在70-80℃干燥箱中烘干至恒重；
（8）成品菌粉
将干燥后的菌粉在-20℃避光保存。
白海参研磨液的制作：将新鲜的白海参去除内脏或泡发好的白海参放入料理机中打成匀浆。
本发明用白海参研磨液作为培养蛹虫草培养基的添加剂，利用液体发酵的方法，可以培育出高硒、高虫草素含量的蛹虫草菌丝体，硒含量可达到98.5微克/克以上，虫草素含量可达到3.15毫克/克以上。
本发明用高硒含量的白海参作为蛹虫草培养基的添加剂，
本发明利用液体发酵的方法，可以培育出富硒蛹虫草菌丝体，高效安全。同时利用了海参营养成分极其丰富这一特点，可以培育出高虫草素含量的蛹虫草菌丝体。用该发明培育出的蛹虫草不仅富硒，而且虫草素含量也很高，使蛹虫草的药用价值成倍增加，达到了事半功倍的效果。
本发明用白海参作为硒源，避免了加亚硒酸钠的不安全性，培养出的虫草子实体不仅硒元素的含量高，还能使海参中丰富的蛋白质、氨基酸及其它微量元素作为虫草的营养源，使培养出的虫草药用价值更高。
富硒的白海参虽然珍贵稀有，但目前已经能够规模化人工养殖，生产成本并不高。
本发明重新组合了有利于菌丝体生长的配方，不仅加快了菌丝体的生长速度，同时也提高了虫草素和硒的含量。
本发明借助食品工业液体发酵技术培养菌种来实现工业化生产，具有方法先进，成本低廉，劳动效率高，减少污染等优点。
白海参又名白玉参，是极为稀有的海参，是由刺参遗传变异而来，在自然界极为罕见。据检验其体内硒的含量高达630微克/100克以上，是普通海参的10多倍，并且90%以上为有机硒。目前硒普遍被科学家称为人体微量元素中的“防癌之王”，因此白海参对肿瘤的生长有很好的抑制作用，能有效抗癌。另外，海参中钙、锌等各种元素含量也很高，蛋白质、各种氨基酸含量丰富，尤其是可以补充人体内各种必需氨基酸。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
具体实施方式
一种富硒高虫草素含量的虫草菌丝体的培养方法，包括下列步骤：
（1）菌种的活化：将蛹虫草菌种接在以下培养基中进行活化和优化：葡萄糖15-20克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-2克，维生素B10.1-0.5毫克，白海参研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，琼脂粉15-20克，加水至1000毫升；将上述营养液在121℃，0.1MPa条件下灭菌30分钟，待冷却后倒入培养皿中；将蛹虫草菌种接入培养皿中，22℃黑暗条件下培养5-10天，选取生长速度快，菌丝致密，颜色纯正的菌落，再转接到斜面培养基上，22℃黑暗条件下培养5-10天，所得菌种即所需虫草菌种；
（2）液体一级菌种的制备：按以下配方制备液体培养基
首先按下列配方配制营养液I：葡萄糖15-20克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-2克，维生素B10.1-0.5毫克，白海参研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，加水至1000毫升；将上述营养液I分装在500毫升的锥形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121℃，0.1MPa条件下，灭菌30分钟，待冷却后在超净台上接入活化的虫草菌种，再在130转/分钟，22℃的摇床中震荡培养5-9天，待液体中出现均匀的菌球且较粘稠状可用；
（3）液体二级菌种的制备
首先按以下配方配置营养液Ⅱ：葡萄糖15-20克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-2克，维生素B10.1-0.5毫克，白海参研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，加水至1000毫升；将营养液Ⅱ分装在500毫升的锥形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121℃，0.1MPa条件下，灭菌30分钟，待冷却后在超净台上接入一级液体虫草菌种，每瓶5毫升，在130转/分钟，22℃的摇床中震荡培养5-9天，待液体中出现均匀的菌球且较粘稠状可用；
（4）小型菌种发酵罐
首先按下列配方配置发酵液I：去皮马铃薯8%，蔗糖2%，玉米淀粉2%，酵母浸粉0.5%，硫酸镁0.1%，磷酸二氢钾0.1%，白海参研磨液4-5%，维生素B10.01%，自然pH值；
将上述发酵液I按70%的容量装入50升的液体发酵罐中，按10%的接种量接入二级液体菌种，22℃、通气量0.5-1.0m3/h，搅拌速度150-180r/min,培养72-96h，得到生产用液体菌种；
（5）生产发酵罐
按下列配方配置发酵液Ⅱ：去皮马铃薯8%，蔗糖2%，玉米淀粉2%，酵母浸粉0.5%，硫酸镁0.1%，磷酸二氢钾0.1%，白海参研磨液4-5%，维生素B 10.01%，自然PH值。
将上述发酵液Ⅱ按70%的容量装入200升的液体发酵罐中，按10%的接种量接入生产用液体菌种，22℃，通气量0.5-1.0m3/h，搅拌速度150-180r/min，培养72-96h；
（6）浓缩：
将发酵液过滤，使菌丝体和营养液分离，用蒸馏水冲洗2次；
（7）喷粉干燥
将获得的菌丝体在70-80℃干燥箱中烘干至恒重；
（8）成品菌粉
将干燥后的菌粉在-20℃避光保存。
白海参研磨液的制作：将新鲜的白海参去除内脏或泡发好的白海参放入料理机中打成匀浆。

Claims (2)

1.一种富硒高虫草素含量的虫草菌丝体的培养方法，其特征是：包括下列步骤：
（1）菌种的活化：将蛹虫草菌种接在以下培养基中进行活化和优化：葡萄糖15-20克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-2克，维生素B10.1-0.5毫克，白海参研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，琼脂粉15-20克，加水至1000毫升；将上述营养液在121℃，0.1MPa条件下灭菌30分钟，待冷却后倒入培养皿中；将蛹虫草菌种接入培养皿中，22℃黑暗条件下培养5-10天，选取生长速度快，菌丝致密，颜色纯正的菌落，再转接到斜面培养基上，22℃黑暗条件下培养5-10天，所得菌种即所需虫草菌种；
（2）液体一级菌种的制备：按以下配方制备液体培养基
首先按下列配方配制营养液I：葡萄糖15-20克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-2克，维生素B10.1-0.5毫克，白海参研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，加水至1000毫升；将上述营养液I分装在500毫升的锥形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121℃，0.1MPa条件下，灭菌30分钟，待冷却后在超净台上接入活化的虫草菌种，再在130转/分钟，22℃的摇床中震荡培养5-9天，待液体中出现均匀的菌球且较粘稠状可用；
（3）液体二级菌种的制备
首先按以下配方配置营养液Ⅱ：葡萄糖15-20克，硫酸镁1-2克，磷酸二氢钾1-2克，维生素B10.1-0.5毫克，白海参研磨液45-55克，酵母浸粉3-5克，加水至1000毫升；将营养液Ⅱ分装在500毫升的锥形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121℃，0.1MPa条件下，灭菌30分钟，待冷却后在超净台上接入一级液体虫草菌种，每瓶5毫升，在130转/分钟，22℃的摇床中震荡培养5-9天，待液体中出现均匀的菌球且较粘稠状可用；
（4）小型菌种发酵罐
首先按下列配方配置发酵液I：去皮马铃薯8%，蔗糖2%，玉米淀粉2%，酵母浸粉0.5%，硫酸镁0.1%，磷酸二氢钾0.1%，白海参研磨液4-5%，维生素B10.01%，自然pH值；
将上述发酵液I按70%的容量装入50升的液体发酵罐中，按10%的接种量接入二级液体菌种，22℃、通气量0.5-1.0m3/h，搅拌速度150-180r/min,培养72-96h，得到生产用液体菌种；
（5）生产发酵罐
按下列配方配置发酵液Ⅱ：去皮马铃薯8%，蔗糖2%，玉米淀粉2%，酵母浸粉0.5%，硫酸镁0.1%，磷酸二氢钾0.1%，白海参研磨液4-5%，维生素B 10.01%，自然PH值；
将上述发酵液Ⅱ按70%的容量装入200升的液体发酵罐中，按10%的接种量接入生产用液体菌种，22℃，通气量0.5-1.0m3/h，搅拌速度150-180r/min，培养72-96h；
（6）浓缩：
将发酵液过滤，使菌丝体和营养液分离，用蒸馏水冲洗2次；
（7）喷粉干燥
将获得的菌丝体在70-80℃干燥箱中烘干至恒重；
（8）成品菌粉
将干燥后的菌粉在-20℃避光保存。
2.根据权利要求1所述的富硒高虫草素含量的虫草菌丝体的培养方法，其特征是：白海参研磨液的制作：将新鲜的白海参去除内脏或泡发好的白海参放入料理机中打成匀浆。
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