CN107475128A - 一种富硒柞蚕蛹虫草的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种富硒柞蚕蛹虫草的生产方法，具体操作步骤为：将硒试剂加入到柞蚕蛹虫草液体培养基中，然后将野生蛹虫草菌种接种到培养基中，获得液体富硒柞蚕蛹虫草菌种，再将液体富硒柞蚕蛹虫草菌种接种到柞蚕蛹体上即可。该方法不仅能够生产出富硒柞蚕蛹虫草，提高柞蚕蛹虫草的药用功效，而且还能够提高柞蚕蛹虫草生物产量，大大降低生产成本，提高经济效益。
Description
技术领域
本发明涉及富硒柞蚕蛹虫草生产领域，具体的说是一种富硒柞蚕蛹虫草的生产方法。
背景技术
蛹虫草是1958年在吉林省首次被发现，通过鉴定，认为它与冬虫夏草是同一个属，定名为蛹虫草。1986年在我国首次成功的将野生蛹虫草菌接种到柞蚕蛹体上，培养出了柞蚕蛹虫草。
柞蚕蛹虫草源自野生蛹虫草，却在品质上优于野生蛹虫草和野生冬虫夏草。经权威部门检测分析表明：柞蚕蛹虫草所含虫草素（3’-脱氧腺苷）、虫草酸、虫草多糖、甘露醇、SOD（超氧化物歧化酶）及磷、钾、锌、硒等矿质元素均达到或超过野生冬虫夏草，其中主要功效成分--虫草素含量是野生冬虫夏草的30多倍，虫草多糖含量是野生冬虫夏草的1.5倍，SOD活性是野生冬虫夏草的5.2倍，具有很高的药用和食用保健价值。
柞蚕蛹虫草中含有丰富的生物活性物质，经药理、药化、“三致”(致畸、致癌、致突变)试验及临床应用显示柞蚕蛹虫草对人体有以下功效。
（1）能平喘止咳，对肺气肿、气管炎有较好疗效；
（2）具有补肾壮阳，治疗慢性肾炎和肾功能衰竭；
（3）能明显降低血糖、尿糖；对糖尿病患者有明显疗效；
（4）能降低血压、调节血脂，治疗脑血栓、冠心病、手足麻木等病症；
（5）具有保肝护肝作用；
（6）具有抗菌、抗炎、抗癌、抑癌，明显增强机体免疫功能，增强体力、提高大脑记忆力的功效；
（7）润肌美容，尤其可快速消除“蝴蝶”斑。
柞蚕蛹虫草现已广泛用于制药、保健食品、饮料、制酒等多种行业，已成为替代野生冬虫夏草的理想代用品。可长期食用，无毒副作用。
为了满足市场的需求，现在通过对野生蛹虫草菌种分离驯化培养，以柞蚕蛹为寄主，已经能够批量规模生产出人工栽培的柞蚕蛹虫草，但截至目前尚未见富硒柞蚕蛹虫草的研究报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种富硒柞蚕蛹虫草的生产方法。该方法不仅能够生产出富硒柞蚕蛹虫草，提高柞蚕蛹虫草的药用功效，而且还能够提高柞蚕蛹虫草生物产量，降低生产成本，提高经济效益。
为实现上述目的，本发明提供的富硒柞蚕蛹虫草的生产方法包括以下步骤：
一、富硒柞蚕蛹虫草液体菌种获取
（1）柞蚕蛹虫草液体培养基制作：在现有柞蚕蛹虫草液体培养基中加入硒试剂，所述硒试剂的加入量为50-100mg/L，然后将柞蚕蛹虫草液体培养基分装于玻璃输液瓶中，放入高压灭菌器中灭菌，取出放入超净工作台下自然降温，待用；
（2）富硒柞蚕蛹虫草液体菌种制作：在步骤（1）装有液体培养基的玻璃输液瓶中接入野生蛹虫草菌种，在23℃条件下培养5-7天,待菌丝充满液体培养基后即可使用；
二、柞蚕蛹体接种
在超净工作台下将制备的富硒柞蚕蛹虫草液体菌种接种到柞蚕蛹体内即可。
作为本发明的优选，所述步骤（1）柞蚕蛹虫草液体培养基的具体制作步骤为：取去皮马铃薯200g，切成2cm×2cm×2cm方块，加自来水1000ml煮至熟而不烂程度，过滤，取上清液用之，加入葡萄糖20g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾0.5g，硒试剂50-100mg，搅拌溶解后，加自来水定容至1000ml,pH值自然，分装于500ml玻璃输液瓶中，每瓶分装300ml，瓶口用脱脂棉塞上，用牛皮纸封口，121℃高压蒸汽灭菌30分钟，晾至30℃以下进行接种。
所述步骤（2）富硒柞蚕蛹虫草液体菌种的具体制作步骤为：在步骤（1）装有液体培养基的玻璃输液瓶中接入野生蛹虫草固体菌种，每瓶接入5mm×5mm菌块4块，在23℃条件下旋转式摇床振荡培养5-7天,待菌丝充满液体培养基后即可使用；所述的振荡培养参数为80-120r/min。
作为本发明的进一步优选，所述柞蚕蛹体接种的具体方法为：在超净工作台下将步骤（2）装有富硒柞蚕蛹虫草液体菌种的玻璃输液瓶瓶口打开，用橡胶塞封口；然后将医用一次性无菌输液管一端插入橡胶塞上，另一端与兽医用连续可调注射器密闭连接，使玻璃输液瓶内的富硒柞蚕蛹虫草液体菌种通过无菌输液管流到兽医用连续可调注射器内，最后通过调整注射器并将针头扎进柞蚕蛹体内来实现定量注射接种，每个柞蚕蛹注射0.2ml液体菌种。
本发明步骤（2）中所用的野生蛹虫草菌种，其具体制备时包括以下步骤：
（a）蛹虫草斜面培养基制作：按照现有蛹虫草斜面培养基的制作方法进行制作。具体步骤为：取去皮马铃薯200g，切成2cm×2cm×2cm方块，加自来水1000ml煮至熟而不烂程度，过滤，取上清液用之，加入葡萄糖20g、琼脂18g，搅拌溶解后，加自来水定容至1000ml,pH值自然，121℃高压蒸汽灭菌30分钟，分装于Φ15×150试管中，每只试管分装培养基15ml，摆成斜面待用；
（b）野生蛹虫草菌种分离培养：将采集到的野生蛹虫草进行消毒处理，切成小块，接种到步骤（a）的蛹虫草斜面培养基上进行培养，得固体菌种，保存备用。具体步骤为：在长白山区采集野生蛹虫草；将野生蛹虫草用75%酒精消毒处理，切成0.5cm×0.5cm小块，接种到步骤（a）蛹虫草斜面培养基试管中，在23℃条件下培养10天，得固体菌种。
本发明的优点和积极效果
1、本发明通过在柞蚕蛹虫草液体培养基中加入硒试剂，然后将培养好的野生蛹虫草固体菌种在加入硒试剂的柞蚕蛹虫草液体培养基中进行培养，制作富硒柞蚕蛹虫草液体菌种，再将富硒柞蚕蛹虫草液体菌种接种到柞蚕蛹上，即可生产出富硒柞蚕蛹虫草，该方法简单易行。
2、本发明制备的富硒柞蚕蛹虫草中含有人和动物所必需的微量元素硒，硒元素对人体生命活动起着重要作用，能够抗疲劳，提高机体免疫力，提高抗病能力，延缓衰老。在柞蚕蛹虫草中添加硒元素，可以进一步提高柞蚕蛹虫草的药用功效。
3、本发明通过在液体菌种制剂中合理控制硒试剂的加入量，不仅可以保证生产出富硒柞蚕蛹虫草，还可以提高僵化出草率，提高柞蚕蛹虫草生物产量，提高经济效益。
具体实施方式
为使本领域技术人员能够清楚明白本发明所述技术方案及其优点和效果，下面结果实施对本发明进行详细说明，但并不用于限定本发明的保护范围。
实施例1
一、富硒柞蚕蛹虫草液体菌种获取
（1）蛹虫草斜面培养基制作：取去皮马铃薯200g，切成2cm×2cm×2cm方块，加自来水1000ml煮至熟而不烂程度，过滤，取上清液用之，加入葡萄糖20g、琼脂18g，搅拌溶解后，加自来水定容至1000ml,pH值自然，121℃高压蒸汽灭菌30分钟，分装于Φ15×150试管中，每只试管分装培养基15ml，摆成斜面待用。
（2）野生蛹虫草菌种分离培养：野生蛹虫草在长白山区采集所得；将野生蛹虫草用75%酒精消毒处理，切成0.5cm×0.5cm小块，接种到步骤（1）的蛹虫草斜面培养基试管中，在23℃条件下培养10天，得固体菌种，保存备用。
斜面试管固体菌种保存时可采用定期移植法保藏，即将生长发育成熟的斜面试管固体菌种放在4℃条件下保藏，每隔3个月移植转管一次。
（3）柞蚕蛹虫草液体培养基制作：取去皮马铃薯200g，切成2cm×2cm×2cm方块，加自来水1000ml煮至熟而不烂程度，过滤，取上清液用之，加入葡萄糖20g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾0.5g、硒试剂100mg，搅拌溶解后，加自来水定容至1000ml,pH值自然，分装于500ml玻璃输液瓶中，每瓶分装300ml，瓶口用脱脂棉塞上，用牛皮纸封口，121℃高压蒸汽灭菌30分钟，晾至30℃以下进行接种。
（4）富硒柞蚕蛹虫草液体菌种制作：在步骤（3）装有液体培养基的玻璃输液瓶中接入步骤（2）培养的固体菌种，每瓶接入5mm×5mm菌块4块，在23℃条件下旋转式摇床振荡培养5-7天,菌丝充满液体培养基后备用；所述的振荡培养参数为80-120r/min。
二、柞蚕蛹体接种（参照中国专利CN 106856982A公开的方法进行）
在超净（无菌）工作台下将步骤（4）装有富硒柞蚕蛹虫草液体菌种的玻璃输液瓶瓶口打开，用橡胶塞封口；然后将医用一次性无菌输液管一端插入橡胶塞上，另一端与兽医用连续可调注射器密闭连接，使玻璃输液瓶内的液体蛹虫草菌种通过无菌输液管流到兽医用连续可调注射器内，最后通过调整注射器并将针头扎进柞蚕蛹体内来实现定量注射接种，每个柞蚕蛹注射0.2ml液体菌种，注射接种柞蚕蛹1000个。
结果：僵化出草率为95%，柞蚕蛹虫草生物产量（干品）为162g/100蛹；同时，按照现有硒含量的分析方法对获得的富硒柞蚕蛹虫草进行硒含量分析，柞蚕蛹虫草的硒含量为0.790mg/kg。
实施例2
一、富硒柞蚕蛹虫草液体菌种获取
（1）蛹虫草斜面培养基制作：同实施例1。
（2）野生蛹虫草菌种分离培养：同实施例1。
（3）柞蚕蛹虫草液体培养基制作：加入硒试剂为75mg，其余步骤同实施例1。
（4）液体富硒柞蚕蛹虫草菌种制作：同实施例1。
二、柞蚕蛹体接种：同实施例1。
结果：僵化出草率为95%，柞蚕蛹虫草生物产量为160g/100蛹；硒含量为0.59mg/kg。
实施例3
一、液体富硒柞蚕蛹虫草菌种获取
（1）蛹虫草斜面培养基制作：同实施例1。
（2）野生蛹虫草菌种分离培养：同实施例1。
（3）柞蚕蛹虫草液体培养基制作：加入硒试剂为50mg，其余步骤同实施例1。
（4）液体富硒柞蚕蛹虫草菌种制作：同实施例1。
二、柞蚕蛹体接种：同实施例1。
结果：僵化出草率为95%，柞蚕蛹虫草生物产量为158g/100蛹；硒含量为0.39mg/kg。
对比例1
一、液体富硒柞蚕蛹虫草菌种获取
（1）蛹虫草斜面培养基制作：同实施例1。
（2）野生蛹虫草菌种分离培养：同实施例1。
（3）柞蚕蛹虫草液体培养基制作：不加入硒试剂，其余步骤同实施例1。
（4）液体富硒柞蚕蛹虫草液体菌种制作：同实施例1。
二、柞蚕蛹体接种
同实施例1。
结果：僵化出草率为95%，柞蚕蛹虫草生物产量为145g/100蛹；硒含量为0.249mg/kg。
对比例2
一、液体富硒柞蚕蛹虫草菌种获取
（1）蛹虫草斜面培养基制作：同实施例1。
（2）野生蛹虫草菌种分离培养：同实施例1。
（3）柞蚕蛹虫草液体培养基制作：加入硒试剂40mg，其余步骤同实施例1。
（4）液体富硒柞蚕蛹虫草液体菌种制作：同实施例1。
二、柞蚕蛹体接种
同实施例1。
结果：僵化出草率为95%，柞蚕蛹虫草生物产量为142g/100蛹；硒含量为0.32mg/kg。
对比例3
一、液体富硒柞蚕蛹虫草菌种获取
（1）蛹虫草斜面培养基制作：同实施例1。
（2）野生蛹虫草菌种分离培养：同实施例1。
（3）柞蚕蛹虫草液体培养基制作：加入硒试剂30mg，其余步骤同实施例1。
（4）液体富硒柞蚕蛹虫草液体菌种制作：同实施例1。
二、柞蚕蛹体接种
同实施例1。
结果：僵化出草率为95%，柞蚕蛹虫草生物产量为141g/100蛹；硒含量为0.29mg/kg。
对比例4
一、富硒柞蚕蛹虫草液体菌种获取
（1）蛹虫草斜面培养基制作：同实施例1。
（2）野生蛹虫草菌种分离培养：同实施例1。
（3）柞蚕蛹虫草液体培养基制作：加入硒试剂为110mg，其余步骤同实施例1。
（4）液体富硒柞蚕蛹虫草菌种制作：同实施例1。
二、柞蚕蛹体接种
同实施例1。
结果：僵化出草率为90%，柞蚕蛹虫草生物产量为141.5g/100蛹；硒含量为0.87mg/kg。
对比例5
一、液体富硒柞蚕蛹虫草菌种获取
（1）蛹虫草斜面培养基制作：同实施例1。
（2）野生蛹虫草菌种分离培养：同实施例1。
（3）柞蚕蛹虫草液体培养基制作：加入硒试剂为120mg，其余步骤同实施例1。
（4）液体富硒柞蚕蛹虫草菌种制作：同实施例1。
二、柞蚕蛹体接种
同实施例1。
结果：僵化出草率为85%，柞蚕蛹虫草生物产量为139.7g/100蛹；硒含量为0.95mg/kg。
对比例6
一、液体富硒柞蚕蛹虫草菌种获取
（1）蛹虫草斜面培养基制作：同实施例1。
（2）野生蛹虫草菌种分离培养：同实施例1。
（3）柞蚕蛹虫草液体培养基制作：加入硒试剂为130mg，其余步骤同实施例1。
（4）液体富硒柞蚕蛹虫草菌种制作：同实施例1。
二、柞蚕蛹体接种
同实施例1。
结果：僵化出草率为80%，柞蚕蛹虫草生物产量为128.6g/100蛹；硒含量为1.03mg/kg。
结论：本发明通过制作富硒柞蚕蛹虫草液体菌种，然后将富硒柞蚕蛹虫草菌种接种到柞蚕蛹体上即可生产出富硒柞蚕蛹虫草；然而在制作富硒柞蚕蛹虫草液体菌种时，柞蚕蛹虫草液体培养基中硒试剂的加入量直接影响柞蚕蛹虫草的僵化出草率、生物产量以及硒元素的含量；在一定浓度范围内，当硒试剂加入量低时，无法生产出目的硒含量的富硒柞蚕蛹虫草；当硒试剂加入量高时，虽然柞蚕蛹虫草硒含量略有增加，但对其僵化出草率有影响，正常生长受到抑制以至于完全不能生长；只有在硒试剂加入量为50-100mg/L时才能保证既能够生产出目的硒含量的富硒柞蚕蛹虫草，又能够提高其生物产量。从实施例1与对比例1对比可以看出，本发明提供的方法能够使柞蚕蛹虫草硒含量比空白对照提高3.17倍，柞蚕蛹虫草生物产量提高10%以上。
Claims (6)
1.一种富硒柞蚕蛹虫草的生产方法，其特征在于：包括以下步骤：
一、富硒柞蚕蛹虫草液体菌种获取
（1）柞蚕蛹虫草液体培养基制作：在现有柞蚕蛹虫草液体培养基中加入硒试剂，所述硒试剂的加入量为50-100mg/L，然后将柞蚕蛹虫草液体培养基分装于玻璃输液瓶中，放入高压灭菌器中灭菌，取出放入超净工作台下自然降温，待用；
（2）富硒柞蚕蛹虫草液体菌种制作：在步骤（1）装有液体培养基的玻璃输液瓶中接入野生蛹虫草菌种，在23℃条件下培养5-7天,待菌丝充满液体培养基后即可使用；
二、柞蚕蛹体接种
在超净工作台下将制备的富硒柞蚕蛹虫草液体菌种接种到柞蚕蛹体内即可。
2.根据权利要求1所述的一种富硒柞蚕蛹虫草的生产方法，其特征在于：步骤（1）柞蚕蛹虫草液体培养基的具体制作步骤为：取去皮马铃薯200g，切成2cm×2cm×2cm方块，加自来水1000ml煮至熟而不烂程度，过滤，取上清液用之，加入葡萄糖20g、蛋白胨2g、磷酸二氢钾0.5g，硒试剂50-100mg，搅拌溶解后，加自来水定容至1000ml,pH值自然，分装于500ml玻璃输液瓶中，每瓶分装300ml，瓶口用脱脂棉塞上，用牛皮纸封口，121℃高压蒸汽灭菌30分钟，晾至30℃以下进行接种。
3.根据权利要求1所述的一种富硒柞蚕蛹虫草的生产方法，其特征在于：步骤（2）富硒柞蚕蛹虫草液体菌种的具体制作步骤为：在步骤（1）装有液体培养基的玻璃输液瓶中接入野生蛹虫草固体菌种，每瓶接入5mm×5mm菌块4块，在23℃条件下旋转式摇床振荡培养5-7天,待菌丝充满液体培养基后即可使用。
4.根据权利要求1所述的一种富硒柞蚕蛹虫草的生产方法，其特征在于：所述柞蚕蛹体接种的具体方法为：在超净工作台下将步骤（2）装有液体富硒柞蚕蛹虫草菌种的玻璃输液瓶瓶口打开，用橡胶塞封口；然后将医用一次性无菌输液管一端插入橡胶塞上，另一端与兽医用连续可调注射器密闭连接，使玻璃输液瓶内的富硒柞蚕蛹虫草液体菌种通过无菌输液管流到兽医用连续可调注射器内，最后通过调整注射器并将针头扎进柞蚕蛹体内来实现定量注射接种，每个柞蚕蛹注射0.2ml液体菌种。
5.根据权利要求1所述的一种富硒柞蚕蛹虫草的生产方法，其特征在于：步骤（2）中所用的野生蛹虫草菌种的制备方法包括以下步骤：
（a）蛹虫草斜面培养基制作：取去皮马铃薯200g，切成2cm×2cm×2cm方块，加自来水1000ml煮至熟而不烂程度，过滤，取上清液用之，加入葡萄糖20g、琼脂18g，搅拌溶解后，加自来水定容至1000ml,pH值自然，121℃高压蒸汽灭菌30分钟，分装于Φ15×150试管中，每只试管分装培养基15ml，摆成斜面待用；
（b）野生蛹虫草菌种分离培养：在长白山区采集野生蛹虫草；将野生蛹虫草用75%酒精消毒处理，切成0.5cm×0.5cm小块，接种到步骤（a）蛹虫草斜面培养基试管中，在23℃条件下培养10天，得固体菌种。
6.根据权利要求3所述的一种富硒柞蚕蛹虫草的生产方法，其特征在于：旋转式摇床振荡培养时，振荡培养参数为80-120r/min。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20171215 |
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