CN102687639B - 一种分离羊肚菌菌种的方法 - Google Patents
一种分离羊肚菌菌种的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102687639B CN102687639B CN201110427089.6A CN201110427089A CN102687639B CN 102687639 B CN102687639 B CN 102687639B CN 201110427089 A CN201110427089 A CN 201110427089A CN 102687639 B CN102687639 B CN 102687639B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- hickory chick
- fresh
- stem
- antibiotic
- cutter
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Cultivation Of Plants (AREA)
- Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
Abstract
本发明涉及一种分离羊肚菌菌种的方法，包括以下步骤：将胶带封闭的羊肚菌用75％消毒酒精均匀擦拭后，用烧灼的刀具从菌柄顶端在火焰上方切割掉子实体头部，露出的新鲜菌柄横切面，在火焰上轻快过2-4下，用刀具在新鲜菌柄内侧环割菌柄新鲜菌肉组织并送入抗生素平板培养基上，于20-30℃的温度下培养，待萌发出菌丝后及时转接。本发明的整个操作过程不用消毒液，全用火焰消毒，萌发率较高，既保证了容易萌发，同时也能降低污染，并能较顺利的分离到羊肚菌菌种。
Description
技术领域
本发明涉及一种利用菌柄内侧环割法分离羊肚菌菌种的方法，属于生物技术领域。
技术背景
羊肚菌隶属真菌界(Kingdom Fungi)子囊菌门(Ascomycota)盘菌纲(Discomycetes)盘菌目(Peziales)羊肚菌科(Morchellaceae)羊肚菌属(Morchella)，一种珍贵的野生食药兼用大型真菌，营养丰富，风味奇鲜，是食用菌中的佳品，被认为是仅次于块菌的美味食用菌，深受人们的喜爱。
羊肚菌最早记载于《本草纲目》，中医认为“性平、味甘，具有益肠胃、消化助食、化痰理气、补肾、壮阳、补脑、提神之功能，对脾胃虚弱、消化不良、痰多气短、头晕失眠有良好的治疗作用。羊肚菌有机锗含量较高，具有强健身体、预防感冒、增强人体免疫力的功效。羊肚菌含有大量人体必需的矿质元素，每百克干样钾、磷含量是冬虫夏草的7倍和4倍，锌的含量是香菇的4.3倍、猴头的4倍；铁的含量是香菇的31倍、猴头的12倍等”。除富含蛋白质、多糖、核酸、各种微量元素和维生素等活性物质外，还含有丰富的脂肪酸，故其在食品、保健品、医药、化妆品、化工、纺织等领域有广阔的应用前景。现代医学研究又表明，羊肚菌能增强人体免疫力、抗辐射、抗肿瘤、抗疲劳，并且能够减轻癌症患者放疗、化疗引起的毒副作用。由于羊肚菌药食同源，需求量大，价位高，对其进行研究很有必要。野生羊肚菌资源分布较广，我国陕西、甘肃、青海、四川、云南、河北、内蒙、吉林、黑龙江等20多个省份均有分布，但近年来羊肚菌自然采收量越来越少。十多年前，羊肚菌国外有栽培成功报道，已申请技术专利，国内也有栽培成功的报道，但基本处于试验性阶段。
羊肚菌目前报道的分离菌种的方法主要有以下几种：黄保敬对采用羊肚菌茵柄基部土壤分离羊肚菌菌种的方法进行了初探，对土壤中菌丝量大，湿度保持较好的成功率较大。董雪采用单孢分离得到了60株黑脉羊肚菌菌株，赵丹丹等在尖顶羊肚菌孢子悬液分离到了菌种。还有一种为陈吉岳等将子实体掰开，用刀尖轻轻挑取内表面约大小的菌块接入平板培养基，经过多次纯化获得分离菌株。王仲勇用无菌刀片把子实体切成绿豆大小的组织块在0.1％的升汞溶液消毒后分离到了菌种。任桂梅等则用陕北野生羊肚菌子实体进行了的组织和孢子母种分离研究，证明组织分离成功率高于孢子分离。而他采用的组织分离方法则是用无菌眼科剪分别剪取菌盂和菌柄内带无菌组织(如绿豆)，但这样的前提是柄基部没有孔口和裂缝。
孢子分离法由于变异因素的影响，单核菌丝即使双核化，仍然对后续栽培结实不可预测。大多数科技工作者仍然以组织分离的方法获得菌种。但是，羊肚菌与其他大型真菌的子实体在结构上有一些特殊地方，子实体中空，菌肉比较薄，分离时污染率较高。另外，羊肚菌对消毒液具有较强的吸附作用，一旦吸附了消毒剂，萌发就会困难，甚至对羊肚菌的菌丝有致死作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种不用消毒剂，既容易萌发，同时也能降低污染，并能较顺利的分离到羊肚菌菌种的分离羊肚菌菌种方法。
为了实现上述目的，本发明的技术方案采用了一种分离羊肚菌菌种的方法，包括以下步骤：将胶带封闭的羊肚菌用75％消毒酒精均匀擦拭后，用烧灼的刀具从菌柄顶端在火焰上方切割掉子实体头部，露出的新鲜菌柄横切面，在火焰上轻快过2-4下，用刀具在新鲜菌柄内侧环割菌柄新鲜菌肉组织并送入抗生素平板培养基上，于20-30℃的温度下培养，待萌发出菌丝后，及时转接。
所述的刀具为手术刀片。
羊肚菌子实体在切割前要基部菌柄完整，用透明胶把羊肚菌整个缠绕密封，中间不留空隙。
所述的抗生素平板培养基为：马铃薯400g，草炭100g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，酵母膏50g，琼脂20g、水1000mL，链霉素30U/mL，青霉素30U/mL，pH6.5。
所述抗生素平板培养基的制作方法为：土豆削皮切薄皮加3000mL水煮30min，过滤取2000mL，加入草炭，小火浸煮20min，过滤取滤液1000mL，在此滤液中加入葡萄糖、酵母膏、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁，小火煮至琼脂溶解，定容至1000mL，分装于三角瓶，在高温121℃-126℃、高压0.1-0.14MPa灭菌30min。待冷却至50℃左右加入青霉素钠、硫酸链霉素复合抗生素母液，使抗生素终浓度在30U/mL左右，将配好的培养基倒入培养皿中或直接冷却成固体培养基。
本发明的分离方法，先是对羊肚菌进行封闭式消毒，防止消毒酒精浸入菌组织，有利分离成功。另外，割掉子实体头部后，露出的菌柄内侧为无菌组织，环割取内侧菌肉组织防杂效果较好。采用抗生素培养基也有利于防止杂菌污染，培养基的组分营养非常全面，特别是加入草炭和酵母膏，为羊肚菌菌丝生长提供了保证。本发明的整个操作过程不用消毒液，全用火焰消毒，萌发率较高，既保证了容易萌发，同时也能降低污染，并能较顺利的分离到羊肚菌菌种。
附图说明
图1为本发明的羊肚菌菌柄内侧环割取组织片示意图。
具体实施方式
本实施例的分离羊肚菌菌种的方法，包括以下步骤：将胶带封闭的羊肚菌用75％消毒酒精均匀擦拭后，用烧灼的手术刀片从菌柄顶端在火焰上方切割掉子实体头部，见图1中2，露出的新鲜菌柄横切面，在火焰上轻快过两下。用手术刀在新鲜菌柄内侧环割菌柄新鲜菌肉组织送入抗生素平板培养基上，见图1中1所示，25℃培养，待萌发出菌丝后，及时转接。抗生素平板培养基为：马铃薯400g，草炭100g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，酵母膏50g，琼脂20g、水1000mL，链霉素30U/mL，青霉素30U/mL，pH6.5，其制作方法为：土豆削皮切薄皮加3000mL水煮30min，过滤取2000mL，加入草炭，小火浸煮20min，过滤取滤液1000mL，在此滤液中加入葡萄糖、酵母膏、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁，小火煮至琼脂溶解，定容至1000mL，分装于三角瓶，在高温121℃-126℃、高压0.1-0.14MPa灭菌30min。待冷却至50℃左右加入青霉素钠、硫酸链霉素复合抗生素母液，使抗生素终浓度在30U/mL左右，将配好的培养基倒入培养皿中或直接冷却成固体培养基。
其中，羊肚菌子实体在切割前要基部菌柄完整，用透明胶把羊肚菌整个缠绕密封，中间不留空隙。
Claims (3)
1.一种分离羊肚菌菌种的方法，其特征在于：包括以下步骤：将胶带封闭的羊肚菌用75％消毒酒精均匀擦拭后，用烧灼的刀具从菌柄顶端在火焰上方切割掉子实体头部，露出的新鲜菌柄横切面，在火焰上轻快过2-4下，用刀具在新鲜菌柄内侧环割菌柄新鲜菌肉组织并送入抗生素平板培养基上，于20-30℃的温度下培养，待萌发出菌丝后，及时转接；羊肚菌子实体在切割前要基部菌柄完整，用透明胶把羊肚菌整个缠绕密封，中间不留空隙；所述的抗生素平板培养基为：马铃薯400g，草炭100g，葡萄糖20g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，酵母膏50g，琼脂20g、水1000mL，链霉素30U/mL，青霉素30U/mL，pH 5-7。
2.根据权利要求1所述的分离羊肚菌菌种的方法，其特征在于：所述的刀具为手术刀片。
3.根据权利要求1所述的分离羊肚菌菌种的方法，其特征在于：所述抗生素平板培养基的制作方法为：土豆削皮切薄皮加3000mL水煮30min，过滤取2000mL，加入草炭，小火浸煮20min，过滤取滤液1000mL，在此滤液中加入葡萄糖、酵母膏、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁，小火煮至琼脂溶解，定容至1000mL，分装于三角瓶，在高温121℃-126℃、高压0.1-0.14MPa灭菌30min；待冷却至50℃加入青霉素钠、硫酸链霉素复合抗生素母液，使抗生素终浓度在30U/mL，将配好的培养基倒入培养皿中或直接冷却成固体培养基。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110427089.6A CN102687639B (zh) | 2011-12-19 | 2011-12-19 | 一种分离羊肚菌菌种的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201110427089.6A CN102687639B (zh) | 2011-12-19 | 2011-12-19 | 一种分离羊肚菌菌种的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102687639A CN102687639A (zh) | 2012-09-26 |
| CN102687639B true CN102687639B (zh) | 2015-05-13 |
Family
ID=46853525
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201110427089.6A Expired - Fee Related CN102687639B (zh) | 2011-12-19 | 2011-12-19 | 一种分离羊肚菌菌种的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102687639B (zh) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104686196B (zh) * | 2015-01-29 | 2017-04-12 | 重庆市中药研究院 | 一种通过阴干子实体保存和分离羊肚菌菌种的方法 |
| CN107810786A (zh) * | 2017-10-20 | 2018-03-20 | 四川三点水生物科技有限公司 | 一种简易羊肚菌菌种一次性提纯方法 |
| CN108812079B (zh) * | 2018-05-30 | 2020-05-19 | 江苏徐淮地区徐州农业科学研究所(江苏徐州甘薯研究中心) | 一种羊肚菌菌种分离方法 |
| CN109055230B (zh) * | 2018-07-05 | 2021-07-13 | 上海市农业科学院 | 一种珍稀药用安络小皮伞野生菌种的获得方法 |
| CN109105143A (zh) * | 2018-08-02 | 2019-01-01 | 望谟县郊纳八步农业综合投资开发有限公司 | 一种木耳种植方法 |
| CN110604004B (zh) * | 2019-09-20 | 2021-08-03 | 新疆农垦科学院 | 一种通过羊肚菌干燥子实体分离菌种的方法 |
| CN111937676A (zh) * | 2020-08-11 | 2020-11-17 | 南京康之春生物科技有限公司 | 一种羊肚菌菌丝体培养基及其制备方法 |
| CN113455287A (zh) * | 2021-07-07 | 2021-10-01 | 重庆市酉阳县琦睿峰食用菌有限责任公司 | 一种pda平板直接分离羊肚菌组织获得纯菌种的方法 |
| CN114667887A (zh) * | 2022-04-26 | 2022-06-28 | 重庆师范大学 | 一种简单快速分离羊肚菌母种的方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1383075A (fr) * | 1963-11-12 | 1964-12-24 | Royal Champignon Sa | Procédé de préparation de blanc de champignon sous forme liquide et blanc de champignon liquide obtenu par ce procédé |
| CN101438667A (zh) * | 2009-01-06 | 2009-05-27 | 朱斗锡 | 野生羊肚菌大田商业化栽培新方法 |
| CN101628834B (zh) * | 2009-08-20 | 2011-12-14 | 成都金邑房地产置业有限责任公司 | 羊肚菌培养料配方及羊肚菌天然栽培方法 |
-
2011
- 2011-12-19 CN CN201110427089.6A patent/CN102687639B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102687639A (zh) | 2012-09-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102687639B (zh) | 一种分离羊肚菌菌种的方法 | |
| CN103330258B (zh) | 一种液体深层发酵制备的蛹虫草保健饮料及其制备方法 | |
| DK1713333T3 (en) | Modulators of the development of arbuscular mycorrhizal fungi and their applications | |
| CN101215527A (zh) | 一种蚕蛹虫草的培育方法 | |
| CN106978353B (zh) | 特氏炭角菌及其栽培方法 | |
| CN102763560A (zh) | 以蝉幼虫为寄主的蝉花子实体及其培育方法 | |
| CN103563655A (zh) | 培育活体蛹化冬虫草的工艺 | |
| CN101333550B (zh) | 一种环二肽类化合物制备方法及其应用 | |
| CN106479903B (zh) | 一种活体灵芝盆景的制作方法 | |
| CN104522812B (zh) | 一种冬虫夏草活菌饮料及其生产方法 | |
| CN107593955A (zh) | 发酵食用菌茶制作工艺及发酵食用菌茶 | |
| CN106810366A (zh) | 一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法 | |
| CN103858676A (zh) | 一种北虫草液体菌种的制备方法 | |
| CN108727096A (zh) | 一种富硒木耳的种植培养基 | |
| CN1005525B (zh) | 食用菌菌丝体快速固体培养法 | |
| CN104381023A (zh) | 一种干巴菌菌种的分离培养方法 | |
| KR20030040681A (ko) | 식용부산물을 이용하여 제조된 배지에서의 버섯 균사체배양방법 | |
| CN104945129A (zh) | 一种香菇培养基质 | |
| CN109937795B (zh) | 一种以茉莉花为基质培育虫草菌丝体的方法 | |
| CN109762745A (zh) | 一种虎奶菇的发酵培养方法以及从培养物中提取活性成分的方法 | |
| CN105248148A (zh) | 一种提高羊肚菌胞外多糖含量的培养方法 | |
| KR100762819B1 (ko) | 호박벌(땅뒤영벌)을 이용한 동충하초의 대량 재배방법 | |
| CN107047067A (zh) | 一种食用菌的栽培方法 | |
| CN102690146B (zh) | 一种培养药用真菌竹黄的培养基配方及制备工艺 | |
| KR20110058928A (ko) | 식용 또는 약용버섯균을 배양한 수세미 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C53 | Correction of patent for invention or patent application | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Hou Jun Inventor after: Lin Xiaomin Inventor after: Mu Liuqi Inventor after: Wu Zufeng Inventor after: Liu Baoguo Inventor after: Du Ailing Inventor after: Wang Dongdong Inventor before: Hou Jun Inventor before: Lin Xiaomin Inventor before: Du Ailing Inventor before: Wu Zufeng Inventor before: Liu Baoguo |
|
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: HOU JUN LIN XIAOMIN DU AILING WU ZUFENG LIU BAOGUO TO: HOU JUN LIN XIAOMIN MU LIUQI WU ZUFENG LIU BAOGUO DU AILING WANG DONGDONG |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20150513 Termination date: 20151219 |
|
| EXPY | Termination of patent right or utility model |