CN106810366A - 一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法 - Google Patents

一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于食用菌栽培领域，具体涉及一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法，包括蛹虫草菌丝培养和蚕蛹虫草培养，所述蛹虫草菌丝培养包括以下步骤：在固体培养基中进行菌种的活化和在液体培养基中进行液体菌种的培养，所述固体培养基和所述液体培养基分别含有重量百分比0.083‑0.81％的微量元素组合物，所述微量元素组合物选自四水硫酸铁、八水硫酸锌、五水硫酸铜、一水硫酸锰和二水钴酸钠中的一种或多种；本发明公开的技术方案具有方法简单、效率高的优点。

Description

一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法
技术领域
本发明涉及蛹虫草栽培领域，具体涉及一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法。
背景技术
蛹虫草为子囊菌门，肉座目，虫草菌科、虫草属的模式种。英文学名为Cordycepsmilitaris，又名北冬虫夏草、北虫草等，有部分地区亦称为踊虫草，世界性分布，天然资源数量很少。1950年，德国科学家Cunningham观察到被蛹虫草寄生的昆虫组织不易腐烂，进而从中分离出一种抗菌性物质，3'-脱氧腺苷，定名为虫草素。由子座(即草部分，又称子实体)与菌核(即昆虫的尸体部分)两部分组成的复合体，多感染鳞翅目昆虫的蛹。
虫草素一种天然来源的药物，具有中医医理中冬虫夏草一样的阴阳同补和双向调节人体平衡的功能；它在护肝、保肾、润肺方面由于成分更纯效果更好，而且大补气血，能消除现在不能治愈的痛经、偏头痛、颈椎增生等疾病。从西医医理角度看虫草素具有抗肿瘤、抗衰老、抗菌、抗病毒、免疫调节、改善新陈代谢、清除自由基等多种药理作用，有良好的临床应用前景。目前虫草素的研究现正成为药物化学、抗衰老、美容、保健品领域中一个极其活跃的领域。
发明内容
本发明的目的在于提供一种蛹虫草人工培育方法，用以解决现有蛹虫草人工培育方法得到的蛹虫草的虫草素含量较低的问题。
为实现上述目的，本发明公开了以下技术方案：
本发明公开了一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法，所述蛹虫草菌丝培养和所述蚕蛹虫草培养均包括以下步骤：在固体培养基中进行菌种的活化和在液体培养基中进行液体菌种的培养，其特征在于，所述固体培养基和所述液体培养基分别含有重量百分比0.083-0.81％的微量元素组合物，所述微量元素组合物选自四水硫酸铁、八水硫酸锌、五水硫酸铜、一水硫酸锰和二水钴酸钠中的一种或多种。
本发明公开的上述一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法中，所述液体培养基包括以下重量百分比的组分：土豆15-25％、果糖1-2％、玉米肽0.5-1.0％、酵母浸膏粉0.3-0.8％、磷酸二氢钾0.15-0.5％、硫酸镁0.1-0.5％、维生素B1 0.001-0.01％、微量元素组合物0.083-0.81％，其余为纯净水或蒸馏水。
本发明公开的上述一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法中，所述液体培养基包括以下重量百分比的组分：土豆15-25％、果糖1-2％、玉米肽0.5-1.0％、酵母浸膏粉0.3-0.8％、磷酸二氢钾0.15-0.5％、硫酸镁0.1-0.5％、维生素B1 0.001-0.01％、四水硫酸铁0.01-0.1％、八水硫酸锌0.05-0.5％、五水硫酸铜0.003-0.01％、一水硫酸锰0.01-0.1％和二水钴酸钠0.01-0.1％，其余为纯净水或蒸馏水。
本发明公开的上述一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法中，所述固体培养基包括以下重量百分比的组分：土豆15-25％、果糖1-2％、玉米肽0.5-1.0％、酵母浸膏粉0.3-0.8％、磷酸二氢钾0.15-0.5％、硫酸镁0.1-0.5％、维生素B1 0.001-0.01％、琼脂粉1.5％、微量元素组合物0.083-0.81％，其余为纯净水或蒸馏水。
本发明公开的上述一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法中，所述固体培养基包括以下重量百分比的组分：土豆15-25％、果糖1-2％、玉米肽0.5-1.0％、酵母浸膏粉0.3-0.8％、磷酸二氢钾0.15-0.5％、硫酸镁0.1-0.5％、维生素B10.001-0.01％、琼脂粉1.5％、四水硫酸铁0.01-0.1％、八水硫酸锌0.05-0.5％、五水硫酸铜0.003-0.01％、一水硫酸锰0.01-0.1％和二水钴酸钠0.01-0.1％，其余为纯净水或蒸馏水。
本发明公开的上述一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法中，所述蛹虫草菌丝培养还包括以下步骤：在发酵罐培养基中进行发酵罐培养，所述发酵罐培养基分别含有重量百分比0.083-0.81％的微量元素组合物，所述微量元素组合物选自四水硫酸铁、八水硫酸锌、五水硫酸铜、一水硫酸锰和二水钴酸钠中的一种或多种。
本发明公开的上述一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法中，所述发酵罐培养基包括以下重量百分比的组分：土豆15-25％、果糖1-2％、玉米肽0.5-1.0％、酵母浸膏粉0.3-0.8％、磷酸二氢钾0.15-0.5％、硫酸镁0.1-0.5％、维生素B10.001-0.01％、四水硫酸铁0.01-0.1％、八水硫酸锌0.05-0.5％、五水硫酸铜0.003-0.01％、一水硫酸锰0.01-0.1％和二水钴酸钠0.01-0.1％。
本发明公开的上述一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法中，所述蚕蛹虫草培养还包括以下步骤：接种：将鲜活蚕蛹用臭氧水清洗消毒，将菌种用注射器注入蚕蛹的气孔处，注射针头插入不宜过深，避免碰到蚕蛹肠道；暗培养：接种后的蚕蛹避光培养，温度控制在15℃，期间挑出污染坏蛹，10天蚕蛹僵化，25天蚕蛹表面长出白色菌丝；光培养：待蚕蛹表面菌丝长满蛹体2/3时，将蚕蛹每天给予18h的光照，光照强度为150Lx左右，继续培养25天，蚕蛹虫草孢子成熟，即可采收。
本发明具有如下优点：
本发明通过在固体培养基和液体培养基加入微量元素组合物，其中，钴离子是一些酶的激活剂，加入钴离子可以提高蛹虫草的产量；锰离子与糖代谢的多种的活性酶有关，同时对于羧化作用是必须的，高浓度的锰能诱导高虫草素的产生；真菌有富锌作用，高浓度的锌能诱导高虫草素的产生。另外，液体培养基中使用玉米肽，我国是农业大国，玉米是主要的经济作物，玉米深加工产品的研发和利用对我国农业发展至关重要，玉米肽是从玉米中提取的蛋白质，经过定向酶切及特定小肽分离技术获得的小分子多肽物质，玉米肽富含疏水性氨基酸，又成疏水性肽，摄取后能促进高血糖素的分泌，保持高运动量者的能量需要，有利运动成绩提高，玉米肽氨基酸的组成中谷氨酰胺含量很高，谷氨酰胺是构成蛋白质的氨基酸。本发明公开的技术方案培养方法简单且效率高。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
本实施例中的一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法，包括蛹虫草菌丝培养和蚕蛹虫草培养，所述发酵罐蛹虫草菌丝培养包括以下步骤：
1、在固体培养基中进行菌种的活化。
2、固体培养基每升中含以下物质：土豆201g、果糖20g、玉米肽10g、酵母浸膏粉3g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.3g、维生素B1 0.013g、琼脂粉1.5g、微量元素组合物1.53g，其余为纯净水，其中，微量元素组合物具体为四水硫酸铁0.1g、八水硫酸锌0.5g、五水硫酸铜0.03g、一水硫酸锰0.8g、二水钴酸钠0.1g的混合物。
3、将所述固体培养基分装于试管中，将蛹虫草菌种在无菌条件下接入试管斜面20～25℃避光培养6～10天。
4、在液体培养基中进行液体菌种的培养。
5、液体培养基每升中含以下物质：土豆200g、果糖20g、玉米肽10g、酵母浸膏粉3g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1g、维生素B1 0.01g、微量元素组合物1.53g，其余为纯净水，其中，微量元素组合物具体为四水硫酸铁0.1g、八水硫酸锌0.5g、五水硫酸铜0.03g、一水硫酸锰0.8g和二水钴酸钠0.1g的混合物。
6、将液体培养基每瓶250ml分装于500ml三角瓶中，高压灭菌121℃、20min，待培养基温度冷却到25℃以下，在无菌条件下每瓶接入活化的斜面菌种，。将接好的菌种三角瓶放在培养室避光培养，先静置24h后，放入摇床，120r/min，4天后即可得到用于生产发酵罐的菌种。
7、在发酵罐中培养：
当菌丝体静置，达到培养基2/3时，转入发酵罐培养，所述50L发酵罐培养基包括土豆10kg、果糖1kg、玉米肽0.5kg、酵母浸膏粉0.4kg、磷酸二氢钾0.2kg、硫酸镁0.2kg、维生素B1 1g、四水硫酸铁5g、八水硫酸锌200g、五水硫酸铜1.5g、一水硫酸锰5g和二水钴酸钠50g。Ph调至6.5左右，发酵罐封盖，打开加热开关，温度调至120℃，高压灭菌1h，打开冷却水开关，使其降温降压，待温度降至25℃以下，即可接种。23℃避光培养5天即可收集菌丝体。
经测试，实施例1中所制得的蛹虫草菌丝体含虫草素8.96mg/g、腺苷1.68mg/g、多糖4.01mg/g。
用普通培养基所培养出菌丝体含虫草素0.89mg/g左右、腺苷未检出、多糖3.98mg/g左右。
实施例2
本实施例中的一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法，包括蛹虫草菌丝培养和蚕蛹虫草培养，所述蚕蛹虫草培养包括以下步骤：
1、在固体培养基中进行菌种的活化和在液体培养基中进行液体菌种的培养。
2、液体培养基每升中含以下物质：土豆250g、果糖20g、玉米肽10g、酵母浸膏粉3g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁3g、维生素B1 0.01g、微量元素组合物1.83g，其余为纯净水，其中，微量元素组合物具体为四水硫酸铁0.5g、八水硫酸锌0.5g、五水硫酸铜0.03g、一水硫酸锰0.3g、二水钴酸钠0.5g的混合物。
3、固体培养基每升中含以下物质：土豆200g、果糖18g、玉米肽10g、酵母浸膏粉5g、磷酸二氢钾1.5g、硫酸镁5g、维生素B1 0.01g、琼脂粉1.5g、微量元素组合物6.13g，其余为纯净水，微量元素为四水硫酸铁0.5g、八水硫酸锌5g、五水硫酸铜0.03g、一水硫酸锰0.1g、二水钴酸钠0.5g的混合物。
4、将液体培养基每瓶250ml分装于500ml三角瓶中，高压灭菌121℃、20min，待培养基温度冷却到25℃以下，在无菌条件下每瓶接入活化的斜面菌种，。将接好的菌种三角瓶放在培养室避光培养，先静置24h后，放入摇床，120r/min,每天平均摇瓶5次，每次10min，5天后即可得到用于生产的菌种。
5、蚕蛹虫草培养包括以下步骤：
接种：将鲜活蚕蛹用臭氧水清洗消毒，将菌种用注射器注入蚕蛹的气孔处，注射针头插入不宜过深，避免碰到蚕蛹肠道。
暗培养：接种后的蚕蛹避光培养，温度控制在15℃左右，期间挑出污染坏蛹，10天左右蚕蛹僵化，25天左右蚕蛹表面长出白色菌丝。
光培养：待蚕蛹表面菌丝长满蛹体2/3时，将蚕蛹每天给予18h的光照，光照强度为150Lx左右，继续培养25天左右，蚕蛹虫草孢子成熟，即可采收。
经测试，实施例2中所制得的蚕蛹虫草含虫草素8.80mg/g、腺苷1.98mg/g、多糖3.81mg/g。
用普通培养基所培养出蚕蛹虫草含虫草素1.02mg/g左右、腺苷0.78mg/g、多糖3.72mg/g左右。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (8)

1.一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法，所述蛹虫草菌丝培养和所述蚕蛹虫草培养均包括以下步骤：在固体培养基中进行菌种的活化和在液体培养基中进行液体菌种的培养，其特征在于，所述固体培养基和所述液体培养基分别含有重量百分比为0.083-0.81％的微量元素组合物，所述微量元素组合物选自四水硫酸铁、八水硫酸锌、五水硫酸铜、一水硫酸锰和二水钴酸钠中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法，其特征在于，所述液体培养基包括以下重量百分比的组分：土豆15-25％、果糖1-2％、玉米肽0.5-1.0％、酵母浸膏粉0.3-0.8％、磷酸二氢钾0.15-0.5％、硫酸镁0.1-0.5％、维生素B10.001-0.01％、微量元素组合物0.083-0.81％，其余为纯净水或蒸馏水。
3.根据权利要求1或2所述一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法，其特征在于，所述液体培养基包括以下重量百分比的组分：土豆15-25％、果糖1-2％、玉米肽0.5-1.0％、酵母浸膏粉0.3-0.8％、磷酸二氢钾0.15-0.5％、硫酸镁0.1-0.5％、维生素B10.001-0.01％、四水硫酸铁0.01-0.1％、八水硫酸锌0.05-0.5％、五水硫酸铜0.003-0.01％、一水硫酸锰0.01-0.1％和二水钴酸钠0.01-0.1％，其余为纯净水或蒸馏水。
4.根据权利要求1所述一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法，其特征在于，所述固体培养基包括以下重量百分比的组分：土豆15-25％、果糖1-2％、玉米肽0.5-1.0％、酵母浸膏粉0.3-0.8％、磷酸二氢钾0.15-0.5％、硫酸镁0.1-0.5％、维生素B10.001-0.01％、琼脂粉1.5％、微量元素组合物0.083-0.81％，其余为纯净水或蒸馏水。
5.根据权利要求1所述一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法，其特征在于，所述固体培养基包括以下重量百分比的组分：土豆15-25％、果糖1-2％、玉米肽0.5-1.0％、酵母浸膏粉0.3-0.8％、磷酸二氢钾0.15-0.5％、硫酸镁0.1-0.5％、维生素B10.001-0.01％、琼脂粉1.5％、四水硫酸铁0.01-0.1％、八水硫酸锌0.05-0.5％、五水硫酸铜0.003-0.01％、一水硫酸锰0.01-0.1％和二水钴酸钠0.01-0.1％，其余为纯净水或蒸馏水。
6.根据权利要求1所述一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法，其特征在于，所述蛹虫草菌丝培养还包括以下步骤：在发酵罐培养基中进行发酵罐培养，所述发酵罐培养基分别含有重量百分比0.083-0.81％的微量元素组合物，所述微量元素组合物选自四水硫酸铁、八水硫酸锌、五水硫酸铜、一水硫酸锰和二水钴酸钠中的一种或多种。
7.根据权利要求6所述一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法，其特征在于，所述发酵罐培养基包括以下重量百分比的组分：土豆15-25％、果糖1-2％、玉米肽0.5-1.0％、酵母浸膏粉0.3-0.8％、磷酸二氢钾0.15-0.5％、硫酸镁0.1-0.5％、维生素B10.001-0.01％、四水硫酸铁0.01-0.1％、八水硫酸锌0.05-0.5％、五水硫酸铜0.003-0.01％、一水硫酸锰0.01-0.1％和二水钴酸钠0.01-0.1％。
8.根据权利要求1所述一种提高蛹虫草菌丝及蚕蛹虫草中虫草素含量的培养方法，其特征在于，所述蚕蛹虫草培养还包括以下步骤：
接种：将鲜活蚕蛹用臭氧水清洗消毒，将菌种用注射器注入蚕蛹的气孔处，注射针头插入不宜过深，避免碰到蚕蛹肠道；
暗培养：接种后的蚕蛹避光培养，温度控制在15℃，期间挑出污染坏蛹，10天蚕蛹僵化，25天蚕蛹表面长出白色菌丝；
光培养：待蚕蛹表面菌丝长满蛹体2/3时，将蚕蛹每天给予18h的光照，光照强度为150Lx左右，继续培养25天，蚕蛹虫草孢子成熟，即可采收。
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