CN109055242A - 一种紫红曲霉菌株及其发酵工艺与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种紫红曲霉菌株及其发酵工艺与应用,所述的紫红曲霉菌株名称为紫红曲霉LF‑914菌株,已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.16087。利用该红曲霉菌通过科学合理的发酵工艺,能够获得产率高、色价高、质量好的红曲成品,能够应用于生产降血脂药物如血脂康和保健功能性食品。
Description
技术领域
本发明涉及微生物发酵技术领域,具体是涉及一种紫红曲霉菌株及其发酵工艺与应用。
背景技术
红曲是曲霉科真菌紫红曲霉菌Monascus purpureus.接种于禾本植物稻的种仁(大米)上,经人工培养发酵而成,米粒呈紫红色或红色,古代称为丹曲,是我国的伟大发明和传统的药食两用发酵产品,最早见于李时珍的《本草纲目》,迄今已有一千多年的应用历史,被中医认为是珍贵的保健功能性食品。
红曲发酵过程中可以产生多种功能性次级代谢产物如红曲色素、γ-氨基丁酸(GABA)、洛伐他汀等。红曲色素作为天然食品色素拥有其他色素无法比拟的优势,在全世界的食品工业中都有着广泛的应用。此外,红曲色素还具有多种生理功能如抗癌、抗诱变、抗菌、抗炎和调节胆固醇水平的活性。γ-氨基丁酸是一类重要的非蛋白质氨基酸,是红曲代谢产物中有效的降压成分,是一种重要的中枢神经系统的神经递质,具有降压、抗焦虑、抗抑郁和改善睡眠提高记忆力的功能,并且对生殖系统也有调节作用。洛伐他汀是西药(如洛伐他汀胶囊、洛伐他汀片)降血脂的主要有效成分,而红曲中也含有洛伐他汀,且以红曲作为原料药在降血脂方面也广泛的应用于医学临床,如血脂康、脂必妥等。正是这些具有特殊功效的生理活性物质赋予了红曲多种功能,从而使其具有极高的商业价值和广阔的发展前景。
功能性红曲在东南亚地区被广泛用在食品、保健品和药品等领域,而在我国大陆地区的利用还局限于调味剂、着色和酿造领域。随着经济的不断发展,人们生活水平的不断提高,三高和心脑血管等疾病的发生率不断增加,有效地利用这一传统产品——功能性红曲,拓宽其应用领域显得很有意义。因此,开发新型功能性红曲应用于医药领域和保健品领域具有显著的经济效益。
发明内容
本发明的目的是提供一种紫红曲霉菌株及其发酵工艺与应用,利用该红曲霉菌通过科学合理的发酵工艺,能够获得产率高、色价高、质量好的红曲成品,能够应用于生产降血脂药物如血脂康和保健功能性食品。
为实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
一种紫红曲霉菌株,所述的紫红曲霉菌株名称为紫红曲霉LF-914菌株,已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.16087。
应用所述的紫红曲霉菌株发酵制备红曲产品的方法,包括以下步骤:A、制备菌株活化液:将所述的紫红曲霉LF-914菌株接种于PDA培养基上,30℃培养7d活化;用无菌生理盐水将培养基上的菌孢子洗脱下来,打散孢子团粒,使之均匀,获得孢子悬浮液;将所述孢子悬浮液接种到液体种子培养基中,培养得到紫红曲霉菌株活化液;B、发酵:在无菌条件下,向培养基质中接入所述的紫红曲霉菌株活化液,封口后移入培养室发酵培养,获得红曲产品。
具体地,所述步骤A中孢子悬浮液按2%的接种量接到液体种子培养基中,在30℃,180r/min条件下,振荡培养48h。
具体地,所述步骤A中的孢子悬浮液的浓度为106cfu/mL。
具体地,所述步骤A中液体种子培养基组分如下:葡萄糖40g/L,蛋白胨20g/L,NaNO3 2g/L,MgSO4 1.0g/L,KH2PO4 1.0g/L,K2HPO4 1.0g/L,ZnSO4 0.02g/L,VB1 10mg/L,VB650mg/L,调节pH 5.0~6.0。
具体地,所述步骤B中的发酵培养采用变温培养,所述变温培养条件如下:30~32℃条件下培养3~5d后,再于25~27℃条件下培养15~17d,湿度均为60%~75%,每天通风30min。
具体地,所述变温培养结束后,将培养基质于40~45℃条件下烘干,即得最终红曲成品。
具体地,所述步骤B中的发酵培养基质采用以下方法制备:将大米用水浸泡1~2h后,清洗2~3次,再用含无机盐添加剂的浸米水浸泡12~16h,沥干,灭菌;所述无机盐添加剂组分如下:NaNO3 4.3g/L,MgSO4 1.4g/L,KH2PO4 0.3g/L,K2HPO4 0.3g/L,ZnSO4 1.4g/L,NH4HCO3 4.3g/L,VB1 10mg/L,VB6 60mg/L,调节pH3.1~3.3。
本发明还保护所述的紫红曲霉菌株在制备降脂药物及保健功能性食品中的应用。
本发明还保护由所述的紫红曲霉菌株发酵制得的红曲产品。
由于采用上述技术方案,本发明至少具有以下优点:
本发明采用从蜂蜜中分离纯化的特殊优良的紫红曲霉作为生产菌株,应用科学合理的发酵工艺,产品产率高,色价高,米粒膨松,手捏易碎质量好的红曲成品。本发明所得的功能性红曲经检测符合药典中血脂康项下红曲的质量标准要求,所以能够作为中成药血脂康的原料药和保健功能性食品,且本发明的工艺科学简单,适合大规模推广应用,具有显著的经济效益。
附图说明
图1是本发明的紫红曲霉菌株发酵生产的功能性红曲样品的薄层鉴别结果图(图中C1为红曲对照药材,C2为对照品洛伐他汀,T1为实施例2.1所得的测试样品)。
图2是本发明的紫红曲霉菌株发酵生产的功能性红曲样品的指纹图谱相似度对比图(图中R为红曲对照指纹图谱,S2、S3、S4分别为实施例2.1、2.2、2.3中所得的测试样品)。
具体实施方式
上述仅是本发明技术方案的概述,为了能够更清楚了解本发明的技术手段,以下结合附图与具体实施方式对本发明作进一步的详细说明。应当理解,以下的实施例便于更好地理解本发明,而不用于限定本发明。
下述实施例中的试验方法,如无特殊说明,均为常规方法;下述实施例中的所用的试剂及原料,如无特殊说明,均通过常规途径购买获得;下述实施例中的%,如无特殊说明,均为质量百分含量。
实施例1:紫红曲霉菌株的分离及鉴定
①、本发明的紫红曲霉菌株是在蜂蜜样品微生物检测培养过程中发现的,发现后保持34℃继续培养48h。
②、用接种环挑取①中培养的紫红曲霉菌落,在PDA培养基中划线分离,34℃培养72h。
③、用接种环挑取②中的紫红曲霉单菌落,在PDA培养基中划线分离,34℃培养48h。
④、将③中紫红曲霉菌落,用无菌生理盐水进行洗脱,得到菌株洗脱液,通过显微镜进行镜检,同时用移液器吸取洗脱液100μL注射于PDA平板中并用涂布棒涂布均匀,34℃培养48h后观察菌落形态、颜色均一致,无杂菌。至此获得纯种紫红曲霉菌株。
形态学特征:
该菌株在MEA培养基平板上,30℃,7d,菌落平坦,稀疏至中度密集,气生菌丝稀疏短小,丛卷毛状,菌丝体初为白色,随菌落成熟而变成橙红色,有皱;在CA培养基平板上,菌落隆起,稀疏,表面质地呈丛毛状,菌丝体白色,背面呈淡红色或橙红色;在PDA培养基平板上,菌落隆起,有大量气生菌丝,表面质地呈丛毛状,背面疮疤状呈橙红色。
显微特征:
菌丝分枝甚繁,且不规律,具有横隔,含有深浅不一的色素,老熟后含有空泡及油滴;分生孢子球形或梨形,着生于菌丝及其分枝的顶端;闭囊壳近球形,有柄;子囊孢子卵形。
⑤、该菌株经安徽中医药大学、安徽省中医科学院微生物与免疫教研室、中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心鉴定为曲霉科真菌紫红曲霉Monascus purpureus,并于2018年07月17日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCCNo.16087,命名为紫红曲霉LF-914菌株。
实施例2:紫红曲霉菌株的发酵生产及产物检测
利用本发明上述的紫红曲霉LF-914菌株进行功能性红曲的发酵生产,主要采用以下方法步骤:
1)菌株活化液的制备
将紫红曲霉LF-914菌株接种于PDA培养基上,30℃培养7d活化。用无菌生理盐水将培养基上菌孢子洗脱下来,打散孢子团粒,使之均匀,即为孢子悬浮液(106cfu/mL)。后将孢子悬浮液按2%的接种量接到液体种子培养基中,在30℃,180r/min条件下,振荡培养48h,得到紫红曲霉菌株活化液。
液体种子培养基组分如下:葡萄糖40g/L,蛋白胨20g/L,NaNO3 2g/L,MgSO4 1.0g/L,KH2PO4 1.0g/L,K2HPO4 1.0g/L,ZnSO4 0.02g/L,VB1 10mg/L,VB6 50mg/L,调节pH 5.0~6.0,121℃灭菌20min。
2)培养基质的制备
将大米(籼米),用自来水浸泡1~2h后,清洗2~3次。再用浸米水(含无机盐添加剂)浸泡12~16h,沥干。称取150g装入500mL三角瓶中,121℃灭菌10~15min。
无机盐添加剂组分如下:NaNO3 4.3g/L,MgSO4 1.4g/L,KH2PO4 0.3g/L,K2HPO40.3g/L,ZnSO4 1.4g/L,NH4HCO3 4.3g/L,VB1 10mg/L,VB6 60mg/L,调节pH 3.1~3.3。
3)接种
在无菌条件下,向每个三角瓶中的大米培养基质中接入2%~5%的紫红曲霉菌株活化液,封口后移入培养室培养。
4)发酵培养
采用变温培养20d左右,即可收获,取出培养基质,40~45℃条件下烘干,即得最终功能性红曲成品。
变温培养条件如下:30~32℃条件下培养3~5d后,再于25~27℃条件下培养15~17d,湿度均为60%~75%,每天通风30min。
经上述发酵工艺所得的功能性红曲经检测,在230nm、237nm与246nm的波长处有最大吸收;薄层鉴别与红曲标准对照药材色谱和洛伐他汀对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点(图1);红曲供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度≥90.0%(图2);含洛伐他汀≥0.28%。
实施例2.1
1)菌株活化液的制备
将紫红曲霉LF-914菌株接种于PDA培养基上,30℃培养7d活化。用无菌生理盐水将培养基上菌孢子洗脱下来,打散孢子团粒,使之均匀,即为孢子悬浮液(106cfu/mL)。后将孢子悬浮液按2%的接种量接到液体种子培养基中,在30℃,180r/min条件下,振荡培养48h,得到紫红曲霉菌株活化液。
液体种子培养基组分如下:葡萄糖40g/L,蛋白胨20g/L,NaNO3 2g/L,MgSO4 1.0g/L,KH2PO4 1.0g/L,K2HPO4 1.0g/L,ZnSO4 0.02g/L,VB1 10mg/L,VB6 50mg/L,调节pH 5.0~6.0,121℃灭菌20min。
2)培养基质的制备
将大米(籼米),用自来水浸泡2h后,清洗3次。再用浸米水(含无机盐添加剂)浸泡12h,沥干。称取150g装入500mL三角瓶中,121℃灭菌10min。
无机盐添加剂组分如下:NaNO3 4.3g/L,MgSO4 1.4g/L,KH2PO4 0.3g/L,K2HPO40.3g/L,ZnSO4 1.4g/L,NH4HCO3 4.3g/L,VB1 10mg/L,VB6 60mg/L,调节pH3.1。
3)接种
在无菌条件下,向每个三角瓶中的大米培养基质中接入2%的紫红曲霉菌株活化液,封口后移入培养室培养。
4)发酵培养
采用变温培养20d左右,即可收获,取出培养基质,40~45℃条件下烘干,即得最终功能性红曲成品。
变温培养条件如下:30~32℃条件下培养5d后,再于25~27℃条件下培养15d,湿度均为60%~75%,每天通风30min。
上述所得的功能性红曲经检测,在230nm、237nm与246nm的波长处有最大吸收;薄层鉴别与红曲对照药材色谱和洛伐他汀对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;红曲供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度为90.3%;含洛伐他汀=0.30%。
实施例2.2
1)菌株活化液的制备
将紫红曲霉LF-914菌株接种于PDA培养基上,30℃培养7d活化。用无菌生理盐水将培养基上菌孢子洗脱下来,打散孢子团粒,使之均匀,即为孢子悬浮液(106cfu/mL)。后将孢子悬浮液按2%的接种量接到液体种子培养基中,在30℃,180r/min条件下,振荡培养48h,得到紫红曲霉菌株活化液。
液体种子培养基组分如下:葡萄糖40g/L,蛋白胨20g/L,NaNO3 2g/L,MgSO4 1.0g/L,KH2PO4 1.0g/L,K2HPO4 1.0g/L,ZnSO4 0.02g/L,VB1 10mg/L,VB6 50mg/L,调节pH 5.0~6.0,121℃灭菌20min。
2)培养基质的制备
将大米(籼米),用自来水浸泡1h后,清洗3次。再用浸米水(含无机盐添加剂)浸泡16h,沥干。称取150g装入500mL三角瓶中,121℃灭菌15min。
无机盐添加剂组分如下:NaNO3 4.3g/L,MgSO4 1.4g/L,KH2PO4 0.3g/L,K2HPO40.3g/L,ZnSO4 1.4g/L,NH4HCO3 4.3g/L,VB1 10mg/L,VB6 60mg/L,调节pH3.3。
3)接种
在无菌条件下,向每个三角瓶中的大米培养基质中接入5%的紫红曲霉菌株活化液,封口后移入培养室培养。
4)发酵培养
采用变温培养20d左右,即可收获,取出培养基质,40~45℃条件下烘干,即得最终功能性红曲成品。
变温培养条件如下:30~32℃条件下培养3d后,再于25~27℃条件下培养17d,湿度均为60%~75%,每天通风30min。
上述所得的功能性红曲经检测,在230nm、237nm与246nm的波长处有最大吸收;薄层鉴别与红曲对照药材色谱和洛伐他汀对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;红曲供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度为93.0%;含洛伐他汀=0.50%。
实施例2.3
1)菌株活化液的制备
将紫红曲霉LF-914菌株接种于PDA培养基上,30℃培养7d活化。用无菌生理盐水将培养基上菌孢子洗脱下来,打散孢子团粒,使之均匀,即为孢子悬浮液(106cfu/mL)。后将孢子悬浮液按2%的接种量接到液体种子培养基中,在30℃,180r/min条件下,振荡培养48h,得到紫红曲霉菌株活化液。
液体种子培养基组分如下:葡萄糖40g/L,蛋白胨20g/L,NaNO3 2g/L,MgSO4 1.0g/L,KH2PO4 1.0g/L,K2HPO4 1.0g/L,ZnSO4 0.02g/L,VB1 10mg/L,VB6 50mg/L,调节pH 5.0~6.0,121℃灭菌20min。
2)培养基质的制备
将大米(籼米),用自来水浸泡2h后,清洗3次。再用浸米水(含无机盐添加剂)浸泡12h,沥干。称150g装入500mL三角瓶中,121℃灭菌10min。
无机盐添加剂组分如下:NaNO3 4.3g/L,MgSO4 1.4g/L,KH2PO4 0.3g/L,K2HPO40.3g/L,ZnSO4 1.4g/L,NH4HCO3 4.3g/L,VB1 10mg/L,VB6 60mg/L,调节pH3.3。
3)接种
在无菌条件下,向每个三角瓶中的大米培养基质中接入3%的紫红曲霉菌株活化液,封口后移入培养室培养。
4)发酵培养
采用变温培养20d左右,即可收获,取出培养基质,40~45℃条件下烘干,即得最终功能性红曲成品。
变温培养条件如下:30~32℃条件下培养3d后,再于25~27℃条件下培养17d,湿度均为65%~85%,每天通风30min。
上述所得的功能性红曲经检测,在230nm、237nm与246nm的波长处有最大吸收;薄层鉴别与红曲对照药材色谱和洛伐他汀对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;红曲供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度为90.9%;含洛伐他汀=0.28%。
综上所述,本发明从蜂蜜中分离纯化的特殊优良的生产菌株紫红曲霉,运用科学合理的发酵工艺,获得了功能性红曲成品。本发明所得的功能性红曲经检测符合药典中血脂康项下红曲的质量标准要求,所以能够作为中成药血脂康的原料药和保健功能性食品。本发明的产品产率高,色价高,米粒膨松,手捏易碎,质量好,工艺科学简单,适合大规模推广应用,具有显著的经济效益。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非对本发明作任何形式上的限制,本领域技术人员利用上述揭示的技术内容做出些许简单修改、等同变化或修饰,均落在本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种紫红曲霉菌株,其特征在于,所述的紫红曲霉菌株名称为紫红曲霉LF-914菌株,已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.16087。
2.应用权利要求1所述的紫红曲霉菌株发酵制备红曲产品的方法,其特征在于,包括以下步骤:
A、制备菌株活化液:
将所述的紫红曲霉LF-914菌株接种于PDA培养基上,30℃培养7d活化;
用无菌生理盐水将培养基上的菌孢子洗脱下来,打散孢子团粒,使之均匀,获得孢子悬浮液;
将所述孢子悬浮液接种到液体种子培养基中,培养得到紫红曲霉菌株活化液;
B、发酵:
在无菌条件下,向培养基质中接入所述的紫红曲霉菌株活化液,封口后移入培养室发酵培养,获得红曲产品。
3.根据权利要求2所述的发酵制备红曲产品的方法,其特征在于,所述步骤A中孢子悬浮液按2%的接种量接到液体种子培养基中,在30℃,180r/min条件下,振荡培养48h。
4.根据权利要求2所述的发酵制备红曲产品的方法,其特征在于,所述步骤A中的孢子悬浮液的浓度为106cfu/mL。
5.根据权利要求2所述的发酵制备红曲产品的方法,其特征在于,所述步骤A中液体种子培养基组分如下:葡萄糖40g/L,蛋白胨20g/L,NaNO3 2g/L,MgSO4 1.0g/L,KH2PO4 1.0g/L,K2HPO4 1.0g/L,ZnSO4 0.02g/L,VB1 10mg/L,VB6 50mg/L,调节pH 5.0~6.0。
6.根据权利要求2所述的发酵制备红曲产品的方法,其特征在于,所述步骤B中的发酵培养采用变温培养,所述变温培养条件如下:30~32℃条件下培养3~5d后,再于25~27℃条件下培养15~17d,湿度均为60%~75%,每天通风30min。
7.根据权利要求6所述的发酵制备红曲产品的方法,其特征在于,所述变温培养结束后,将培养基质于40~45℃条件下烘干,即得最终红曲成品。
8.根据权利要求2所述的发酵制备红曲产品的方法,其特征在于,所述步骤B中的发酵培养基质采用以下方法制备:
将大米用水浸泡1~2h后,清洗2~3次,再用含无机盐添加剂的浸米水浸泡12~16h,沥干,灭菌;
所述无机盐添加剂组分如下:NaNO3 4.3g/L,MgSO4 1.4g/L,KH2PO4 0.3g/L,K2HPO40.3g/L,ZnSO4 1.4g/L,NH4HCO3 4.3g/L,VB1 10mg/L,VB6 60mg/L,调节pH3.1~3.3。
9.权利要求1所述的紫红曲霉菌株在制备降脂药物及保健功能性食品中的应用。
10.一种由红曲霉发酵制得的红曲产品,其特征在于,所述红曲霉采用权利要求1所述的紫红曲霉菌株。
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