CN106978353A - 特氏炭角菌及其栽培方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种特氏炭角菌及其栽培方法。所述特氏炭角菌为特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM‑130277，保藏编号为：CCTCC M2015746；人工栽培方法包括制作母种、制作生产种以及出菌管理。本发明提供一种特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM‑130277，采集自海南尖峰岭国家级自然保护区雨林谷的阔叶木枯木上，并且还提供了相应的人工栽培方法，利于大批量稳定生产，具有较好的经济效益和社会效益。

Description

特氏炭角菌及其栽培方法
技术领域
本发明属于炭角属真菌领域，具体地，涉及一种特氏炭角菌及其栽培方法。
背景技术
目前食用菌的产业发展迅猛，我国食用菌每年的产量达到2000万吨以上，占全球75％以上，从业人员超过2000万人，食用菌产业在种植业中排在除了粮、棉、油、菜之后的第五位，超过了果、茶叶和蚕桑。
在食用菌产业蓬勃发展的今天，越来越多的珍稀食用菌品种逐渐进入人们的视野，许多原有的珍稀品种逐渐被驯化，如竹荪、茶薪菇、离褶伞等。但是也有大批的野生食药用菌由于未能被人类认识，没有得到研究。据研究，目前世界上约有150万种真菌物种，仅仅有1％的物种被认识，其中已知的大型真菌约14000 种，而当中又只有80种左右的野生食药用菌被人类驯化，规模化栽培的品种更只有20多种。人类距离大型真菌的研究与利用还有相当长的道路要走。随着人们生活水平的逐步上升，对于生活品质的要求更高，而大型真菌由于其富含具有营养及功能作用的各种成分，包括真菌多糖、三萜类、甾醇等，对于人体健康具有非常良好的作用，日益受到人们的重视。
关于炭角菌属真菌，一些研究已经从炭角菌属中其他种类的炭角菌提取分离了很多化合物，并有研究证明其他某些种类的炭角菌具有补气、镇静安神、造血以及提高机体免疫、治疗前列腺炎等功能功效(2014，冯望，贺新生)，目前研究得比较多的是黑柄炭角菌。黑柄炭角菌[Xylaria nigripes(Kl.)Sacc.]生长在土栖白蚁废弃的巢穴中，是一种生态类型极为特殊的真菌(2009，马橙，翁榕安)。其菌核(俗称乌灵参)是一种名贵的中药，具有除湿、镇静安神、造血以及提高机体免疫功能等功效，还可以治疗脾虚食少、产后及手术后失血过多、产后乳少、胃下垂、疝气、心悸失眠及小儿惊风、跌打损伤等症，其养生功能优于其他菌类产品。黑柄炭角菌幼嫩时是可口的食用菌，对于黑柄炭角菌菌核和子实体的大规模人工栽培尚未取得成功,需要对栽培条件进行进一步的摸索。湖南师范大学生命科学学院应用真菌研究室已对该菌进行了人工栽培(2009，翁榕安，陈作红)，子实体产量较高，并产生粉孢子，但目前尚未获得能产生有性孢子的栽培子实体。其他的关于炭角菌属的研究主要有长柄炭角菌(Xylaria longipes)的子实体化学成分分析(2008，麻兵继，阮元)，纵条纹炭角菌(Xylaria striata Pat.)的培养条件的优化(2014，冯望，贺新生)，叉状炭角菌(Xylariapedunculata)的生物学特性的研究(2008，申进文，周素静)，痂状炭角菌[Xylariaescharoidea(Berk.) Sacc.]液体优化培养及其生物活性的研究(2012，邵雪莲，庞杰)。越来越多的学者关注炭角菌属真菌的栽培，液体培养及活性研究等，表明该属真菌的药用性能正在逐渐为大家所熟知，科研人员也正在开展炭角属真菌的各类研究。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种特氏炭角菌，属于炭角属真菌，并提供该特氏炭角菌的人工栽培方法。
本发明通过以下技术方案达到上述目的：
一种特氏炭角菌，所述特氏炭角菌为特氏炭角菌Xylariaceae sp. HMGIM-130277，其保藏编号为：CCTCC NO：M2015746。
本发明所提供的特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277采集自海南尖峰岭国家级自然保护区雨林谷的阔叶木枯木上，经分离鉴定属于炭角属真菌，于 2015年12月14日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M2015746。
特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277的形态特征是：子座不分枝或分枝，单生，圆柱棒形至棒形，顶端可育圆钝，高1.5-3cm，粗0.8-1.3cm，柄较细；外表面土褐色至褐色，内部白色，后期变空；光滑，组织较硬。子囊壳0.5-0.8mm。子囊壳孔口不稍突起。子囊碎裂，不完整，子囊环在Melzer试剂反应蓝色，近瓮形，高4-5μm，宽3-3.5μm。子囊孢子褐色至黑褐色，单胞，椭圆状，不等边，两端圆钝，光滑，18-24×5-8μm，芽缝斜，较短。
经分子生物学鉴定，本申请的特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277的 ITS分子序列与特氏炭角菌Xylaria telfairii(Berk.)Sacc.相似性高达98％以上，但仍存在差异，因而为新菌种。
本发明还提供一种上述特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277的栽培方法，包括以下步骤：
制作母种、制作生产种以及出菌管理。
其中，所述制作母种的步骤具体包括分离菌种、纯化菌种以及母种培养步骤。
其中，所述分离菌种具体为：将综合PDA经湿热灭菌后，取出冷却并摆成斜面，再将特氏炭角菌CCTCC NO：M2015746子实体的内部菌肉组织在无菌条件下接至上述综合PDA斜面，置于25℃培养箱中恒温暗培养，待该斜面上的菌丝长满斜面后则待转接。
其中，在所述分离菌种步骤中，按照质量百分数计，所述综合PDA的配方为：马铃薯20wt％，葡萄糖2wt％，琼脂2wt％，磷酸二氢钾0.3wt％，硫酸镁 0.15wt％，维生素B110ppm，余量为水。
其中，在所述分离菌种步骤中，所述综合PDA进行湿热灭菌的条件具体为：高压高温，如0.11MPa大气压以及121℃的温度条件下。
其中，所述纯化菌种具体为：将孟加拉红培养基经湿热灭菌后，将上述分离菌种步骤中感染细菌的菌种转接至上述孟加拉红培养基中，置于25℃培养箱中恒温暗培养，待菌丝生长而细菌尚未生长时进行尖端菌丝的挑取与转接。
其中，在所述纯化菌种步骤中，所述孟加拉红培养基的配方为：蛋白胨 (peptone)0.5wt％，葡萄糖1wt％，磷酸二氢钾0.1wt％，硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.05wt％，琼脂2wt％，1/3000孟加拉红溶液10wt％，氯霉素0.01wt％，余量为蒸馏水。
其中，在所述纯化菌种步骤中，所述孟加拉红培养基进行湿热灭菌的条件具体为：高压高温，如0.11MPa大气压以及121℃的温度条件下。
其中，所述母种培养具体为：将综合PDA经湿热灭菌后，取出冷却，无菌操作接入待转接的菌丝(包括上述分离菌种步骤中得到的待转接的菌丝和/或上述纯化菌种步骤中得到的待转接的菌丝)，置于25℃培养箱中恒温暗培养，直到菌丝长满斜面后，即得母种，等待转接。
其中，在所述母种培养步骤中，按照质量百分数计，所述综合PDA的配方为：马铃薯20wt％，葡萄糖2wt％，琼脂2wt％，磷酸二氢钾0.3wt％，硫酸镁 0.15wt％，维生素B110ppm，余量为水。
其中，在所述母种培养步骤中，所述综合PDA进行湿热灭菌的条件具体为：高压高温，如0.11MPa大气压以及121℃的温度条件下。
其中，所述制作生产种具体为：制备生产种培养基，并将上述母种培养中得到的母种无菌操作接入所述生产种培养基中，置于25℃培养箱中恒温暗培养，待菌丝吃满料后(45天左右)无菌操作接入栽培袋中，接种后在25℃±1℃、空气相对湿度60-70％的培养室中避光培养至菌丝吃满料后，即得生产种；其中，所述栽培袋中的培养料配方为48-52wt％杂木屑、24-28wt％玉米芯、10wt％玉米粉、8-12wt％麸皮以及1-2wt％碳酸钙，且保持该栽培袋中的含水量达到 55-65wt％。
其中，所述生产种培养基的制作过程为：称取高粱，经水泡湿过夜，再加入小米、碳酸钙后装瓶，密封，在0.147MPa大气压、128℃的温度下湿热灭菌，冷却。
其中，所述生产种培养基的配方为：80wt％高粱、18-19wt％小米以及1-2wt％碳酸钙。
其中，所述栽培袋需经过0.147MPa大气压、128℃的温度下湿热灭菌90min。
其中，所述出菌管理具体包括菌丝后熟期培养、出菇刺激培养、原基形成培养以及子实体生长期培养。
其中，所述菌丝后熟期培养具体为：将得到的生产种继续遮光培养15-20天，菌丝成熟后，置于20℃遮光处，进行后熟处理，待菌丝转色后再经过10-15天的后熟培养。本申请所述的后熟培养对于该菌种的出菇具有良好促进作用，同时确保菌丝营养成熟，出菇产量高。
其中，所述出菇刺激培养具体为：对菌丝成熟的菌棒经搔菌处理后，放置于温差刺激环境下15-20天，进行温差刺激。
其中，所述搔菌处理为：针对菌丝成熟的菌棒，用灭菌的不锈钢长勺刮去表面长有白色菌丝的培养基约0.5cm。
其中，所述温差刺激环境为白天高温25℃保持8小时，晚上低温15℃保持 16小时。
其中，所述原基形成培养具体为：出菇刺激培养结束后，控制温度在25℃，并保持环境中二氧化碳含量在1％(v/v)以下，空气相对湿度调整至90％以上，经5-7天后，菌丝开始扭结并形成淡黄色米柆状原基。
其中，所述子实体生长期培养具体为：原基生长至0.5-1.0cm后，控制温度在28℃，空气相对湿度为85-90％，每天光照8小时，光照强度300-500lx，并保持空气中二氧化碳浓度小于5％(v/v)，培养至子实体成熟，采摘。
其中，在所述子实体生长期培养步骤中，每天向幼菇喷施水雾1-2次，直至子实体大小基本不变，此时，子实体已趋成熟。
其中，所述特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277的栽培方法还包括后续管理：已采摘完特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277的栽培袋于25℃± 1℃、空气相对湿度60-70％的培养室中避光培养，培养10天后，再置于26-28℃、相对湿度85-90％的环境中培养，每天光照8小时，光照强度300-500lx，并保持空气中二氧化碳浓度小于5％(v/v)，直至幼菇再次产生。
本发明所述特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277可应用于食品领域。
综上，本发明的有益效果是：本发明提供一种特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277，采集自海南尖峰岭国家级自然保护区雨林谷的阔叶木枯木上，并且还提供了相应的人工栽培方法，利于大批量稳定生产，同时对其抗氧化能力进行了评估，得出其水提物具有较强的抗氧化能力，具备潜在的应用，具有较好的经济效益和社会效益。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步地的详细说明，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
1.母种制作
1.1分离菌种
将综合PDA(马铃薯20wt％，葡萄糖2wt％，琼脂2wt％，磷酸二氢钾0.3wt％，硫酸镁0.15wt％，维生素B1 10ppm，余量为水)分装试管，在0.11MPa大气压、 121℃高温高压湿热灭菌30min，取出冷却摆成斜面。特氏炭角菌CCTCC NO： M2015746子实体在无菌条件下用75％酒精擦拭表面后，撕开，以无菌操作方式将0.2-0.5mm×0.2-0.5mm的内部菌肉组织接至综合PDA斜面。置于25℃培养箱中恒温暗培养，待菌丝长满斜面后则可进行转接，菌丝长满的时间大概约10-15 天。
1.2纯化菌种
将孟加拉红培养基(蛋白胨(peptone)0.5wt％，葡萄糖1wt％，磷酸二氢钾0.1wt％，硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.05wt％，琼脂2wt％，1/3000孟加拉红溶液10wt％，氯霉素0.01wt％，余量为蒸馏水)，分装试管，在0.11MPa大气压、121℃高温高压湿热灭菌30min后，将上述分离菌种步骤中感染细菌的菌种转接至该孟加拉红培养基中，置于25℃培养箱中恒温暗培养，待菌丝生长而细菌尚未生长时进行尖端菌丝的挑取与转接。
1.3母种培养
将综合PDA(马铃薯20wt％，葡萄糖2wt％，琼脂2wt％，磷酸二氢钾0.3wt％，硫酸镁0.15wt％，维生素B1 10ppm，余量为水)，分装试管，在0.11MPa大气压、 121℃高温高压湿热灭菌30min，取出冷却无菌操作接入分离成功的菌丝(包括上述分离菌种步骤中得到的待转接的菌丝和/或上述纯化菌种步骤中得到的待转接的菌丝)。置于25℃培养箱中恒温暗培养，待菌丝长满斜面后，即得母种，则可进行转接。此阶段，母种长满的时间大概约15-20天。
2.生产种制作
按照生产种培养基的配方为：80wt％高粱、18-19wt％小米以及1-2wt％碳酸钙来称取所需比例的高粱，经水泡湿过夜，按比例混入小米、碳酸钙，装入250ml 锥形瓶中，折合每瓶装干料100-150g。以硅胶塞封口密封。在0.147MPa大气压、 128℃高温高压湿热灭菌90min，取出冷却后将培养基抖散后无菌操作接入生产母种。置于25℃培养箱中恒温暗培养，待菌丝吃满料后(45天左右)则可无菌操作接入栽培袋中，接种时确保母种料块埋入原种料中。接种后在25℃±1℃、空气相对湿度60-70％的培养室中避光培养。待菌丝吃满料后(55天左右)则可进入出菌管理；
其中，栽培袋的制备如下：按照质量百分含量为48-52wt％杂木屑、24-28wt％玉米芯、10wt％玉米粉、8-12wt％麸皮以及1-2wt％碳酸钙的培养料配方称取对应的物料后，充分混合并加水(保持含水量为55-65wt％)，装入17cm×35cm耐高温的透明聚丙烯菌种袋。折合每袋装干料450-500g。装好料后用小木棒在袋料中打洞，洞深至袋底，然后在袋口套上塑料环，扣上配套的盖子，即得一个制好的栽培袋。在0.147MPa大气压、128℃高温高压湿热灭菌90min，冷却。
4出菌管理
4.1菌丝后熟期培养
将得到的生产种继续遮光后熟培养15-20天。菌丝成熟后，置于20℃遮光处，进行后熟处理。约再经30天左右，待菌丝转色(当观察到菌袋肩膀处出现褐色色素，说明菌丝已经完全成熟)后再经10-15天的后熟培养就可以进入出菇刺激培养。
4.2出菇刺激培养
菌丝完全成熟的菌棒，打开菌盖，用灭菌的不锈钢长勺刮去表面长有白色菌丝的培养基约0.5cm，再重新盖上菌盖。经搔菌处理后，放置于温差刺激环境(白天高温25℃保持8小时，晚上低温15℃保持16小时)下15-20天，进行温差刺激。
4.3原基形成培养
出菇刺激结束后，控制温度在25℃，并加大通风量，保持环境中二氧化碳含量在1％(v/v)以下，空气相对湿度调整至90％以上，经5-7天后，去除菌盖，把栽培袋竖直放置(袋与袋之间应留有空隙)，此时菌丝开始扭结并形成淡黄色米柆状原基。
4.4子实体生长期培养
原基生长至0.5-1.0cm后，控制温度在28℃，空气相对湿度85-90％之间，每天光照8小时，光照强度300-500lx，并保持空气中二氧化碳浓度小于5％(v/v)，保持空气湿润。经15-20天，特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277长成成菇，子实体成熟，可采摘。在此子实体生长期培养期间，每天向幼菇喷施水雾 1-2次，直至子实体大小基本不变，说明子实体已趋成熟，此时应采收。
5.后续管理
采摘完特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277的栽培袋于25℃±1℃、空气相对湿度60-70％的培养室中避光培养，培养10天后，再置于26-28℃、相对湿度85-90％的环境中培养，每天光照8小时，光照强度300-500lx，并保持空气中二氧化碳浓度小于5％(v/v)，保持空气湿润。直至幼菇再次产生。
本申请所述的特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277可出菇2潮，出菇期约2个月，每一潮菇大约出菇5-13朵，每潮菇培养时间大约在15-20天。每个菇袋每潮出菇约69.4克，头潮生物转化率在17％左右。人工培养的子实体呈圆柱形或扁平状棒状，新鲜时呈黄色，老熟后呈土褐色，长2-5厘米，中空，内部白色并有透明粘液。初期质地较软，成熟后质地变硬，与野生状态相比，该品种在人工驯化后子实体的肉质厚了许多，个体明显增大。
实施例2抗氧化活性测定
6.1培养基的配制PDA固体培养基含200g马铃薯、20g葡萄糖、20g 琼脂、1000mL水；PDA液体培养基含200g马铃薯、20g葡萄糖、1000mL水。
6.2发酵液和菌丝提取液的制备将特氏炭角菌CCTCC NO：M2015746 菌种转接到斜面试管中，置于28℃恒温培养箱培养5-7天，待长满管后接5块 (0.5cm×0.5cm)到含有100mL培养基的250mL三角瓶中，置于25℃恒温摇床中，于110r·min-1振荡培养，待发酵液澄清后取出，用滤布(100目)过滤分别得到发酵液和菌丝体，备用。
菌丝用滤纸吸干水分并于60℃烘干至恒重，液氮研磨后，取1.5g分别用蒸馏水和无水乙醇浸提，提取条件为：料液比为1∶30、提取温度80℃，提取时间为2h，最后定容至50mL备用。
6.3还原力的测定抗氧化剂通过还原作用自身给出电子而清除自由基，一般说来，还原力越强，抗氧化活性越强。其检测原理是样品将铁氰化钾(K3Fe(CN)6) 还原成亚铁氰化钾(K4Fe(CN)6)，亚铁氰化钾再与Fe3+作用，生成亚铁氰化铁(即普鲁士蓝)，在700nm处检测普鲁士蓝的吸光度，以此表示还原力的大小，吸光度越高，样品的还原力就越强。
具体实施方法：取0.2mol·L-1磷酸缓冲液(pH6.8)和1％K3Fe(CN)6各2.5mL，加入2mL待测液，摇匀后于50℃水浴30min，加入2.5mL10％三氯乙酸，于 4000r·min-1离心10min，取上清液2.5mL，与2.5mL蒸馏水和0.5mL0.1％FeCl3混合，以磷酸缓冲液作参比，于700nm处测定光密度(D)。
还原力＝DX-DX0-D0；式中：D0为空白对照液的D，DX为加入提取液后的D， DX0为提取液的本底D。
表1特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277的还原力(浓度6mg/ml)
样品类型 还原力
特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277菌丝水提物 0.841
特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277菌丝醇提物 0.556
特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277发酵液 0.093
从结果来看，特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277的各种成分都有还原力，其中菌丝水提物的还原力最高，与45种食用菌(浓度为30mg/ml)相比，也已处在第2位，仅次于赤芝。其菌丝醇提物的还原力水平也处于45种食用菌第3位，仅次于赤芝与双孢蘑菇。发酵液的还原力则处于平均水平(有8种其他菌种发酵液还原力为0)。对于特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277而言，其菌丝水提物的还原力最强，其次为菌丝醇提物，最后是发酵液。
6.4羟自由基(-OH)清除率的测定
-OH为高反应性自由基，可以通过电子转移、加成以及脱氢等方式与生物体内的多种分子作用，造成糖类、氨基酸、蛋白质、核酸和脂类等物质的氧化性损伤，使细胞坏死或突变。-OH还与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬等有关，-OH 清除率是反映药物抗氧化作用的重要指标。
具体实施方法：采用羟自由基测定试剂盒(南京建成，货号：A018)，利用Fenton反应是最常见的产生羟自由基的化学反应，H2O2的量和Fenton反应产生的OH-量成正比，当给予电子受体后，用griess试剂，形成红色物质，其呈色与OH-的多少成正比关系。
表2特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277的羟自由基(-OH)清除率
从结果来看，特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277的各种成分都有清除羟自由基的能力，其中，菌丝水提物清除羟自由基的能力最强，其次是发酵液，最后是菌丝醇提物。经计算，菌丝水提物的抑制率(浓度为1.5mg/ml)为47.1％，效果最好。本发明还通过对照实验发现，特氏炭角菌Xylariaceae sp. HMGIM-130277的水提物的羟自由基清除率低于灵芝水提物(1458.45μ/ml)，与灵芝发酵液(830.73μ/ml)接近。
6.4超氧自由基O2 -抑制率的测定
生物体内氧化还原反应中，大致有2％～5％的氧会产生超氧阴离子自由基，(O2 -)，O2 -即可做电子给予体，又可接收电子，化学性质非常活泼。O2 -还可分解形成更强的活性氧物质，如单线态氧和-OH，产生脂质过氧化反应，还能以H2O2的形式产生-OH的前体，从而间接引发脂质过氧化。所以抑制超氧自由基的能力也是评价抗氧化性的重要项目。
具体实施方法：采用抗超氧阴离子自由基及产生超氧阴离子自由基测试盒(南京建成，货号：A052)进行实验，并计算抗超氧阴离子自由基活力单位。在反应系统中，每升样品在37℃反应40分钟所抑制的超氧阴离子自由基相当于1mg的维生素C所抑制的超氧阴离子自由基的变化值为一个活力单位。
结果表明，特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277的菌丝水提物在 20mg/ml的浓度下对O2 -的清除率为51.97％，炭角发酵液在15mg/ml的浓度下对 O2 -的清除率为52.67％，与文献中的26种食用菌子实体水提物的O2-抑制能力相比，具有明显优势。文献中水提液中抑制O2 -能力最强的是滑菇，在30mg/ml的浓度下对O2 -的清除率为50.54％，其次为红菇，在30mg/ml的浓度下对O2 -的清除率为50.27％。由实验数据来看，特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277 的菌丝水提物和发酵液都具有明显的超氧自由基O2 -清除能力。
表3特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277的抗超氧阴离子自由基活力单位
综上所述，特氏炭角菌Xylariaceae sp.HMGIM-130277具备一定的抗氧化性，尤其是菌丝水提物的还原力、清除羟自由基和超氧自由基的能力，其发酵液对于超氧自由基的清除能力也较强。综合来看，菌丝水提物的抗氧化作用较明显，可作为潜在开发的产品。
如上所述，可较好的实现本发明。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，依据本发明的技术实质，在本发明的精神和原则之内，对以上实施例所作的任何简单的修改、等同替换与改进等，均仍属于本发明技术方案的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种特氏炭角菌，其特征在于，所述特氏炭角菌为特氏炭角菌Xylariaceaesp.HMGIM-130277，保藏编号为：CCTCC NO：M2015746。
2.如权利要求1所述的特氏炭角菌的栽培方法，其特征在于，包括以下步骤：
制作母种、制作生产种以及出菌管理。
3.根据权利要求2所述的特氏炭角菌的栽培方法，其特征在于，所述出菌管理包括菌丝后熟期培养、出菇刺激培养、原基形成培养以及子实体生长期培养。
4.根据权利要求3所述的特氏炭角菌的栽培方法，其特征在于，所述菌丝后熟期培养为：将制作生产种步骤得到的生产种继续遮光培养15-20天，菌丝成熟后，置于20℃遮光处，进行后熟处理，待菌丝转色后再经过10-15天的后熟培养。
5.根据权利要求3所述的特氏炭角菌的栽培方法，其特征在于，所述出菇刺激培养为：对菌丝成熟的菌棒经搔菌处理后，放置于温差刺激环境下15-20天，进行温差刺激。
6.根据权利要求5所述的特氏炭角菌的栽培方法，其特征在于，所述温差刺激环境为白天高温25℃保持8小时，晚上低温15℃保持16小时。
7.根据权利要求3所述的特氏炭角菌的栽培方法，其特征在于，所述原基形成培养为：出菇刺激培养结束后，控制温度在25℃，并保持环境中二氧化碳体积浓度在1％以下，空气相对湿度调整至90％以上，经5-7天后，菌丝开始扭结并形成淡黄色米柆状原基。
8.根据权利要求3所述的特氏炭角菌的栽培方法，其特征在于，所述子实体生长期培养为：原基生长至0.5-1.0cm后，控制温度在28℃，空气相对湿度为85-90％，每天光照8小时，光照强度300-500lx，并保持空气中二氧化碳体积浓度小于5％，培养至子实体成熟，采摘。
9.根据权利要求2所述的特氏炭角菌的栽培方法，其特征在于，所述制作母种的步骤包括：
分离菌种：将综合PDA经湿热灭菌后，取出冷却并摆成斜面，再将特氏炭角菌CCTCC NO：M2015746子实体的内部菌肉组织在无菌条件下接至上述综合PDA斜面，置于25℃培养箱中恒温暗培养，至该斜面上的菌丝长满斜面后则待转接；
纯化菌种：将孟加拉红培养基经湿热灭菌后，将上述分离菌种步骤中感染细菌的菌种转接至上述孟加拉红培养基中，置于25℃培养箱中恒温暗培养，待菌丝生长而细菌尚未生长时进行尖端菌丝的挑取与转接；
母种培养步骤：将综合PDA经湿热灭菌后，取出冷却，无菌操作接入上述分离菌种步骤中得到的待转接的菌丝和/或上述纯化菌种步骤中得到的待转接的菌丝，置于25℃培养箱中恒温暗培养，直到菌丝长满斜面后，即得母种。
10.根据权利要求2所述的特氏炭角菌的栽培方法，其特征在于，所述制作生产种为：制备生产种培养基，并将上述母种培养中得到的母种无菌操作接入所述生产种培养基中，置于25℃培养箱中恒温暗培养，待菌丝吃满料后无菌操作接入栽培袋中，接种后在25℃±1℃、空气相对湿度60-70％的培养室中避光培养至菌丝吃满料后，即得生产种；其中，所述栽培袋中的培养料配方为48-52wt％杂木屑、24-28wt％玉米芯、10wt％玉米粉、8-12wt％麸皮以及1-2wt％碳酸钙，且保持该栽培袋中的含水量达到55-65wt％。
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