MD1624Z - Procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze - Google Patents
Procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze Download PDFInfo
- Publication number
- MD1624Z MD1624Z MDS20210053A MDS20210053A MD1624Z MD 1624 Z MD1624 Z MD 1624Z MD S20210053 A MDS20210053 A MD S20210053A MD S20210053 A MDS20210053 A MD S20210053A MD 1624 Z MD1624 Z MD 1624Z
- Authority
- MD
- Moldova
- Prior art keywords
- cultivation
- strain
- cnmn
- lipases
- rhizopus arrhizus
- Prior art date
Links
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 title claims abstract description 23
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 title claims abstract description 23
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 title claims abstract description 23
- 240000005384 Rhizopus oryzae Species 0.000 title claims abstract description 15
- 235000013752 Rhizopus oryzae Nutrition 0.000 title claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title abstract 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 claims abstract description 6
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 5
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 claims description 4
- SNQQJEJPJMXYTR-UHFFFAOYSA-N dimethyl pyridine-2,6-dicarboxylate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC(C(=O)OC)=N1 SNQQJEJPJMXYTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 19
- 239000002609 medium Substances 0.000 abstract description 15
- 230000002366 lipolytic effect Effects 0.000 abstract description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 9
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 abstract description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 abstract 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 abstract 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 abstract 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 abstract 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 abstract 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 abstract 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 abstract 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 3
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 3
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 3
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 230000001764 biostimulatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- JAWGVVJVYSANRY-UHFFFAOYSA-N cobalt(3+) Chemical compound [Co+3] JAWGVVJVYSANRY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000306 component Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N ferrosoferric oxide Chemical compound O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 101100396546 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) tif-6 gene Proteins 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 235000005811 Viola adunca Nutrition 0.000 description 1
- 240000009038 Viola odorata Species 0.000 description 1
- 235000013487 Viola odorata Nutrition 0.000 description 1
- 235000002254 Viola papilionacea Nutrition 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- KJNGJIPPQOFCSK-UHFFFAOYSA-N [H][Sr][H] Chemical compound [H][Sr][H] KJNGJIPPQOFCSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- SOIFLUNRINLCBN-UHFFFAOYSA-N ammonium thiocyanate Chemical compound [NH4+].[S-]C#N SOIFLUNRINLCBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- 150000001869 cobalt compounds Chemical class 0.000 description 1
- FDBAIUSFRPWFTD-UHFFFAOYSA-L cobalt(2+) dithiocyanate trihydrate Chemical compound O.O.O.[Co++].[S-]C#N.[S-]C#N FDBAIUSFRPWFTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000012786 cultivation procedure Methods 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 1
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- GWHOGODUVLQCEB-UHFFFAOYSA-N pyridine-2,6-dicarbonyl chloride Chemical compound ClC(=O)C1=CC=CC(C(Cl)=O)=N1 GWHOGODUVLQCEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229910052712 strontium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001631 strontium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- AHBGXTDRMVNFER-UHFFFAOYSA-L strontium dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Sr+2] AHBGXTDRMVNFER-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- -1 titanate anion Chemical class 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 235000019871 vegetable fat Nutrition 0.000 description 1
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la biotehnologie, şi anume la un procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze şi poate fi utilizată în industria microbiologică pentru producerea enzimelor lipolitice cu aplicare largă în industria alimentară, de producere şi procesare a grăsimilor şi uleiurilor vegetale, în medicină ca mijloc terapeutic şi diagnostic. Procedeul, conform invenţiei prevede obţinerea suspensiei de spori a tulpinii crescute timp de 30 zile pe un mediu de malţ-agar, inocularea suspensiei în cantitate de 5% v/v într-un mediu nutritiv apos ce conţine, g/L: făină de soia - 35,0, (NH4)2SO4 - 1,0, KH2PO4 - 5,0, cu adăugarea concomitentă a 0,005 g/L de [SrL3][Co(NCS)4], unde L - dimetilpiridin-2,6-dicarboxilat, şi cultivarea la agitare continuă de 180-200 rot/min în decurs de 24 de ore la temperatura de 28-30°C.Rezultatul invenţiei constă în sporirea biosintezei enzimelor lipolitice şi reducerea duratei de cultivare a tulpinii cu 24 de ore.
Description
Invenţia se referă la biotehnologie, în particular, la un procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de enzime lipolitice şi poate fi utilizată în industria microbiologică pentru obţinerea lipazelor cu largi aplicări în industria alimentară, de producere şi prelucrare a grăsimilor şi uleiurilor vegetale, în medicină ca mijloc terapeutic şi de diagnostică.
Procedeele moderne de cultivare a tulpinilor fungice producătoare de enzime exocelulare se bazează pe aplicarea rezultatelor cercetărilor clasice îmbinate cu realizările tehnologice şi fizico-chimice moderne, precum studiul particularităţilor de creştere şi sinteză a enzimelor în funcţie de regimul termic, aeraţie, dinamica variaţiei pH-ului mediului, raportul optim al componentelor mediilor nutritive, cantitatea şi tipul materialului semincer, cât şi screening-ul inductorilor specifici reprezentaţi de ingrediente naturale (făina de soia, porumb, tărâţe de grâu, etc.). Componentele lipidice prezente în cantităţi mici în ingredientele din compoziţia mediului stimulează efectiv biosinteza lipazelor (Рубан Е.Л. Микробные липиды и липазы. Изд. Наука, Москва, 1977, p. 132-156; Калунянц К.А., Голгер Л.И. Микробные ферментные препараты. Москва. Пищ. Пром., 1979, p. 14-30).
Pentru cultivarea submersă clasică a tulpinii Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 este cunoscut procedeul, în care se utilizează mediul nutritiv cu compoziţia, g: făină de soia - 35,0; (NH4)2SO4 -1,0; KH2PO4 -1,0; apă potabilă până la 1L [1].
Dezavantajul constă în faptul că raportul componentelor mediului nu asigură realizarea pe deplin a potenţialului biosintetic al culturii, biosinteza lipazelor nu atinge nivelul maxim, iar maxima biosintezei lipazelor se manifestă în ziua a 2-a de cultivare.
De asemenea, se cunoaşte un procedeu de cultivare a tulpinii Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 în aceleaşi condiţii, timp de 48 ore, cu utilizarea în calitate de biostimulator a nanoparticulelor de Fe3O4 care asigură obţinerea unei activităţi lipolitice mult mai mari faţă de invenţie [2] .
Deşi aplicarea nanoparticulelor oferă soluţii rapide şi fiabile în diverse domenii de activitate, inclusiv biotehnologii, impactul acestora asupra mediului şi sănătăţii este imprevizibil, variind semnificativ (benefic sau toxic) în funcţie de caracteristicile nanomaterialelor şi organismelor ţintă şi fiind dificil de prognozat şi controlat. Totodată, nanoparticulele pot suferi diferite transformări (inclusiv biotransformări), care modifică proprietăţile fizico-chimice ale acestora, rezultând un impact asupra mediului diferit de cel pe care îl pot provoca nanoparticulele originale, fiind necesare evaluări individualizate costisitoare (Martínez G., Merinero M., Pérez-Aranda M., Pérez-Soriano E. M., Ortiz T., Begines B., Alcudia A. Environmental Impact of Nanoparticles' Application as an Emerging Technology: A Review. Materials (Basel, Switzerland), 2020, 14(1), p. 166).
Alt dezavantaj constă în faptul că deşi activitatea lipolitică este destul de înaltă, maximul de activitate al tulpinii de fungi miceliali Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 se atinge în a doua zi de cultivare.
La unele microorganisme o parte considerabilă de lipaze exocelulare sunt legate de peretele celular, ce poate inhiba secreţia lipazelor în mediul de cultură şi micşorarea randamentului lipazelor exocelulare. Includerea în mediul nutritiv a substanţelor cu abilităţi de stimulare a eliberării lipazelor legate de peretele celular, spre exemplu, surplusul de ioni ai unor metale, accelerează secreţia lipazelor în mediul de cultură şi favorizează procesul de sinteză a lipazelor exocelulare (Fogarty W.M. Микробные ферменты и биотехнология. Москва: Агропромиздат. 1986, p. 189-190).
În acest context un efect de stimulare a biosintezei lipazelor exocelulare poate asigura şi includerea în mediul nutritiv a anumitor compuşi coordinativi ai unor metale, în special ai metalelor cu rol de microelemente.
În ultimele decenii în scopul sporirii biosintezei enzimelor la micromicete intensiv se studiază compuşii coordinativi ai elementelor 3d, din care unii s-au manifestat promiţător în calitate de biostimulatori ai biosintezei lipazelor. De exemplu, este cunoscută utilizarea în calitate de biostimulator al sintezei enzimelor lipolitice la tulpina Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 a compusului de cobalt: bis(trietanolamin)-cobalt(II)diizobutirat). Dezavantajul acestui complex constă în faptul că sinteza necesită utilizarea unui compus auxiliar mai puţin accesibil ca 3,6-di-2-piridil-1,3,4,5,-tetrazină şi efectul biostimulator se manifestă mai mult în a doua şi a treia zi de cultivare [3].
De asemenea se cunoaşte că utilizarea în mediul nutritiv a compuşilor coordinativi ai cobaltului(III) - [Co(DH)2(An)2]2[ZnF6]·2H2O şi [Co(DH)2(An)2]2[TiF6] în calitate de biostimulatori asigură creşterea capacităţii biosintetice a micromicetei Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 producătoare de lipaze cu efect biostimulator din prima zi de cultivare [4].
Deşi biostimulatorul este activ, el nu este stabil la păstrare şi coroziv în raport cu sticla datorită prezenţei fluorului în anionul de hexafluorzirconat/titanat.
Cea mai apropiată soluţie de obiectul revendicat este procedeul de cultivare submersă a tulpinii Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, în care suspensia de spori, obţinută prin spălare cu apă distilată sterilă a culturii crescute timp de 30 de zile pe suprafeţe înclinate de malţ-agar, se inoculează într-un mediu nutritiv apos cu compoziţia, g/L: făină de soia - 35,0, (NH4)2SO4 - 1,0, KH2PO4 - 5,0, compusul coordinativ CuGly2·H2O - 0,010, utilizat în calitate de biostimulator al biosintezei lipazelor. Cultivarea se realizează în condiţii de agitare continuă (200 rot/min), timp de 48 ore, la temperatura de 28ºC [5].
Dezavantajul acestei soluţii constă în faptul că concentraţia maximă admisibilă de aplicare a biostimulatorului CuGly2·H2O nu asigură realizarea maximă a potenţialului de biosinteză a lipazelor, totodată maximul de conţinut de lipaze în lichidul cultural se atinge în a doua zi de cultivare.
Problema tehnică pe care o rezolvă invenţia constă în elaborarea unui procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 cu aplicarea unui compus coordinativ în calitate de biostimulator al biosintezei lipazelor, care asigură sporirea capacităţii biosintetice a tulpinii şi reducerea duratei de cultivare submersă cu 24 de ore.
Problema se rezolvă prin procedeul de cultivare submersă a tulpinii Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze, care prevede obţinerea suspensiei de spori a tulpinii crescute timp de 30 de zile pe un mediu de malţ-agar înclinat, inocularea suspensiei în cantitate de 5% v/v într-un mediu nutritiv apos ce conţine, g/L: făină de soia - 35,0, (NH4)2SO4 - 1,0, KH2PO4 - 5,0, cu adăugarea concomitentă a 0,005 g/L de [SrL3][Co(NCS)4, unde L este dimetilpiridin-2,6-dicarboxilat, şi cultivarea la agitare continuă de 180-200 rot/min în decurs de 24 de ore la temperatura de 28-30°C.
Rezultatul tehnic al invenţiei constă în sporirea biosintezei enzimelor lipolitice faţă de martor şi reducerea duratei de cultivare cu 24 de ore.
Rezultatele demonstrează că pe mediul cu biostimulatorul tetra(izotiocianat)cobaltat(II) de tris(dimetilpiridin-2,6-dicarboxilat)stronţiu [SrL3][Co(NCS)4], utilizat în concentraţie de 0,005, 0,010 şi 0,015 g/L, sporirea activităţii lipolitice constituie 13,1-79,5% faţă de martor (maximă de biosinteză a lipazelor la cultivare în condiţii clasice - 34167 U/mL faţă de 28413-61321 U/mL în variantele experimentale), concentraţia optimă fiind de 0,005 g/L. S-a relevat inclusiv faptul că activitatea variantelor experimentale în prima zi de cultivare prezintă valori ale activităţii lipolitice superioare nivelului maximal al probei de referinţă (a 2-a zi). Cea mai favorabilă concentraţie a compusului coordinativ este cea de 0,005 g/L, care asigură în prima zi de cultivare un spor al activităţii lipolitice cu 94,6% faţă de martorul din aceeaşi zi şi 79,5% faţă de valoarea maximă relevată la proba martor în ziua a 2-a de cultivare, depăşind analogul proxim cu 5,6% (61321 U/mL faţă de 58068 U/mL).
Exemplu de realizare a invenţiei
Procedeul de sinteză a biostimulatorului [SrL3][Co(NCS)4]
Clorura de stronţiu cu masa de 0,16 g (0,001 mol), tiocianatul de cobalt trihidrat cu masa de 0,23 g (0,001 mol) şi tiocianatul de amoniu cu masa de 0,16 g (0,002 mol) au fost dizolvate în 10 mL metanol (soluţia 1). 2,6-piridindicarbonildiclorură cu masa de 0,61 g (0,003 moli) s-a dizolvat în 12 mL metanol (soluţia 2). Soluţia 1, la o agitare permanentă, se adaugă la soluţia 2, după care, soluţia obţinută de culoare albastră-violetă a fost refluxată timp de 3 ore. După refluxare, soluţia obţinută a fost filtrată şi lăsată la temperatura camerei pentru cristalizare. Peste 24 de ore s-au format cristale de culoare albastră. S-au obţinut 0,11 g de produs. Randamentul constituie 44%.
Găsit, %: C 38,68; H 2,89: Sr 9,13: Co 6,19: N 10,23.
Pentru C31H27SrCoN7O12S4
calculat, %: C 38,60; H 2,82; Sr 9,08; Co 6,11; N 10,17.
Procedeul de cultivare submersă a tulpinii Rhizopus arrhizus CNMN FD 03
În prealabil se obţine suspensia de spori a tulpinii de fungi prin spălare cu apă distilată sterilă a culturii de 30 zile, crescute pe suprafeţe înclinate de malţ-agar. Mediul nutritiv se prepară prin dizolvare într-un volum nu prea mare de apă potabilă a cantităţilor precântărite de săruri, urmată de dispersarea minuţioasă a făinii de soia, în raportul masic, g/L: făină de soia - 35,0; KH2PO4 - 5,0; (NH4)2SO4 - 1,0. După care volumul de apă potabilă se aduce până la 1,0 L, pH-ul iniţial al mediului - 8,0. Tulpina de fungi miceliali Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 se cultivă în baloane Erlenmeyer cu capacitatea de 0,75 L, care conţin 0,2 L de mediu nutritiv. Mediul nutritiv se inoculează cu suspensie de spori şi miceliu în cantitate de 5% v/v. Soluţia apoasă de biostimulator [SrL3][Co(NCS)4] cu o concentraţie bine determinată, reieşind din intervalul 0,0025-0,015 g/L, nemijlocit înainte de utilizare, se agită discret timp de 2-5 minute pe baie de apă cu ultrasunet de tip DA-968 DADI, după care se adaugă la mediul nutritiv concomitent cu materialul semincer. Cultivarea se realizează în condiţii de agitare continuă (200 rot/min), timp de 24 ore, la temperatura de 28ºC.
Activitatea lipolitică, determinată după gradul de hidroliză în alcool polivinilic a suspensiei de ulei de măsline până la acid oleic după metoda titrimetrică Otto-Iamad (Graceva I.M., şi al., 1982), în variantele experimentale cu aplicarea compusului coordinativ [SrL3][Co(NCS)4] a constituit 39233 U/mL la concentraţia de 0,0025 g/L, 61321 U/mL la concentraţia de 0,005 g/L, 38634 U/mL la concentraţia de 0,010 g/L, şi 28413 U/mL la concentraţia de 0,015 g/L. Maxima biosintezei se manifestă în varianta cu concentraţia metalocomplexului de 0,005 g/L şi constituie 61321 U/mL (Tabel).
Tabel
Influenţa diferitor concentraţii de stimulator ([SrL3][Co(NCS)4]) asupra
activităţii lipolitice a tulpinii Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 la cultivarea submersă
Procedeul de cultivare Conc. de stimulator, g/L 1-a zi a 2-a zi Activitatea, U/mL %, de referinţă* Activitatea, U/mL %, faţă de martor Revendicat 0,0025 39233 124,5/114,8/ 40678 119,1 0,005 61321 194,6/179,5/105,6 35397 103,6 0,010 38634 122,6/113,1/ 33723 98,7 0,015 28413 90,2 27334 80,0 Martor (control) - 31500 100,0 34167 100,0 Analogul proxim 58068 100,0;*194,6/179,5/105,6 - faţă de martorul zilei/faţă de valoarea maximă a martorului (ziua a 2-a) /faţă de analogul proxim.
Cercetările au fost efectuate în cadrul Programei de Stat 2020-2023 a Rep. Moldova prin proiectele 20.80009.5007.28 şi 20.80009.5007.15 cu finanţarea de către ANCD.
1. MD 2458 F1 2004.05.31
2. MD 4532 B1 2017.11.30
3. MD a2020 0002 A2 2020.08.31
4. Десятник А., Тюрина Ж., Клапко С., Стратан M., Лаблюк С., Болога О., Коропчану Э., Рижа A., Булхак И. Некоторые аспекты биосинтеза внеклеточных гидролаз микромицетов из родов Rhizopus и Aspergillus в присутствии комплексных соединений кобальта(III) c фторсодержащими анионами. Buletinul Academiei de Ştiinţe a Moldovei. Ştiinţele vieţii, 2010, nr. 1(310), p. 121-128
5. MD 2709 F1 2005.02.28
Claims (1)
- Procedeu de cultivare submersă a tulpinii Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze, care prevede obţinerea suspensiei de spori a tulpinii crescute timp de 30 de zile pe un mediu de malţ-agar înclinat, inocularea suspensiei în cantitate de 5% v/v într-un mediu nutritiv apos ce conţine, g/L: făină de soia - 35,0, (NH4)2SO4 - 1,0, KH2PO4 - 5,0, cu adăugarea concomitentă a 0,005 g/L de [SrL3][Co(NCS)4], unde L este dimetilpiridin-2,6-dicarboxilat, şi cultivarea la agitare continuă de 180-200 rot/min în decurs de 24 de ore la temperatura de 28-30°C.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDS20210053A MD1624Z8 (ro) | 2021-06-23 | 2021-06-23 | Procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDS20210053A MD1624Z8 (ro) | 2021-06-23 | 2021-06-23 | Procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| MD1624Y MD1624Y (ro) | 2022-05-31 |
| MD1624Z true MD1624Z (ro) | 2022-12-31 |
| MD1624Z8 MD1624Z8 (ro) | 2024-01-31 |
Family
ID=81845635
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| MDS20210053A MD1624Z8 (ro) | 2021-06-23 | 2021-06-23 | Procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| MD (1) | MD1624Z8 (ro) |
-
2021
- 2021-06-23 MD MDS20210053A patent/MD1624Z8/ro active IP Right Grant
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MD1624Y (ro) | 2022-05-31 |
| MD1624Z8 (ro) | 2024-01-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Park et al. | Stimulatory effect of plant oils and fatty acids on the exo-biopolymer production in Cordyceps militaris | |
| CN106244463A (zh) | 富硒高虫草素含量的虫草菌丝体的培养方法 | |
| Dashti et al. | Batch culture and repeated-batch culture of Cunninghamella bainieri 2A1 for lipid production as a comparative study | |
| AU2020102899A4 (en) | A Method for Producing Glutathione by Fermentation of s. cerevisiae L5267 | |
| Nadia et al. | Optimization of lipase synthesis by Mucor racemosus-Production in a triple impeller bioreactor | |
| MD1624Z (ro) | Procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze | |
| Dedyukhina et al. | Biosynthesis of arachidonic acid by micromycetes | |
| Elisashvili et al. | Extracellular polysaccharide production by culinary-medicinal Shiitake mushroom Lentinus edodes (Berk.) Singer and Pleurotus (Fr.) P. Karst. species depending on carbon and nitrogen source | |
| RU2220590C1 (ru) | Способ получения кормового белкового продукта на основе зернового сырья | |
| MD4828C8 (ro) | Procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze | |
| CN115141864B (zh) | 一种富硒绣球菌多糖的加工方法 | |
| WO2024068640A1 (en) | Method for producing fungal spores, liquid medium used therein and substance produced thereby | |
| CN102660493B (zh) | 木霉菌产孢培养基及产孢方法 | |
| Eshonkulov et al. | Technology of deep cultivation of medicinal fungus Schizophyllum commune | |
| MD4831C8 (ro) | Tetra(izotiocianat)cobaltat(II) de tris(dimetil piridin-2,6-dicarboxilat)stronţiu cu proprietăţi de stimulator al activităţii lipolitice la tulpina de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 | |
| Madanayake et al. | Fungi-based synthesis of nanoparticles and its large-scale production possibilities | |
| Makhsumkhanov et al. | Conditions for cultivation of the fungus Penicillium melinii UzLM-4 and its biosynthesis of lipases | |
| Kang et al. | Effects of high concentrations of plant oils and fatty acids for mycelial growth and pinhead formation of Hericium erinaceum | |
| MD4843C8 (ro) | Procedeu de cultivare submersă a tulpinii Lentinus edodes (Berk.) Sing. CNMN-FB-01 | |
| KR100398088B1 (ko) | ｐＨ조절하에서 교반 및 통기 영향에 의한 영지의액체배양을 이용한 세포외 다당의 대량 생산방법 | |
| MD4870C1 (ro) | Tetra(izotiocianat)cobaltat(II) de tris(dietil piridin-2,6-dicarboxilat)calciu cu proprietăţi de stimulator al activităţii lipolitice la tulpina de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 | |
| Moguel | Production of L-asparaginase of pharmaceutical nterest from yeasts isolated from the Antarctic continent | |
| MD4532C1 (ro) | Procedeu de cultivare a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 | |
| MD4853C1 (ro) | Tetra(izotiocianat)cobaltat(II) de tris(dimetil piridin-2,6-dicarboxilat)calciu cu proprietăţi de stimulator al activităţii lipolitice la tulpina de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 | |
| MD4234C1 (ro) | Mediu nutritiv pentru cultivarea tulpinii de fungi Fusarium gibbosum CNMN-FD-12 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG9Y | Short term patent issued |