MD4828C8 - Procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze - Google Patents
Procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipazeInfo
- Publication number
- MD4828C8 MD4828C8 MDA20210070A MD20210070A MD4828C8 MD 4828 C8 MD4828 C8 MD 4828C8 MD A20210070 A MDA20210070 A MD A20210070A MD 20210070 A MD20210070 A MD 20210070A MD 4828 C8 MD4828 C8 MD 4828C8
- Authority
- MD
- Moldova
- Prior art keywords
- cultivation
- lipases
- strain
- cnmn
- rhizopus arrhizus
- Prior art date
Links
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 title claims abstract description 23
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 title claims abstract description 23
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 title claims abstract description 23
- 240000005384 Rhizopus oryzae Species 0.000 title claims abstract description 13
- 235000013752 Rhizopus oryzae Nutrition 0.000 title claims abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 14
- 230000008569 process Effects 0.000 title abstract description 9
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title abstract description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 claims abstract description 6
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims abstract description 5
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 4
- SNQQJEJPJMXYTR-UHFFFAOYSA-N dimethyl pyridine-2,6-dicarboxylate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC(C(=O)OC)=N1 SNQQJEJPJMXYTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000012786 cultivation procedure Methods 0.000 claims description 2
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 claims description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 17
- 230000002366 lipolytic effect Effects 0.000 abstract description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 abstract description 15
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 8
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 abstract description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 abstract description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 abstract 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 abstract 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 abstract 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 abstract 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 abstract 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 abstract 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 abstract 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 5
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 3
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 3
- -1 fluoride anions Chemical class 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N ferrosoferric oxide Chemical compound O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M Fluoride anion Chemical compound [F-] KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N Fluorine Chemical compound FF PXGOKWXKJXAPGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 101100396546 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) tif-6 gene Proteins 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 241000235527 Rhizopus Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 235000005811 Viola adunca Nutrition 0.000 description 1
- 240000009038 Viola odorata Species 0.000 description 1
- 235000013487 Viola odorata Nutrition 0.000 description 1
- 235000002254 Viola papilionacea Nutrition 0.000 description 1
- 241000307523 Xenostegia media Species 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- HOQNOUSJUGLELS-UHFFFAOYSA-L calcium;dithiocyanate;tetrahydrate Chemical compound O.O.O.O.[Ca+2].[S-]C#N.[S-]C#N HOQNOUSJUGLELS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- FDBAIUSFRPWFTD-UHFFFAOYSA-L cobalt(2+) dithiocyanate trihydrate Chemical compound O.O.O.[Co++].[S-]C#N.[S-]C#N FDBAIUSFRPWFTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- JAWGVVJVYSANRY-UHFFFAOYSA-N cobalt(3+) Chemical class [Co+3] JAWGVVJVYSANRY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000011737 fluorine Substances 0.000 description 1
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000320 mechanical mixture Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000007777 multifunctional material Substances 0.000 description 1
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- GWHOGODUVLQCEB-UHFFFAOYSA-N pyridine-2,6-dicarbonyl chloride Chemical compound ClC(=O)C1=CC=CC(C(Cl)=O)=N1 GWHOGODUVLQCEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000000844 transformation Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 235000019871 vegetable fat Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Invenţia se referă la biotehnologie, şi anume la un procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze, şi poate fi utilizată în industria microbiologică pentru producerea enzimelor lipolitice cu aplicare largă în industria alimentară, de producere şi procesare a grăsimilor şi uleiurilor vegetale, în medicină ca mijloc terapeutic şi diagnostic. Procedeul, conform invenţiei, prevede obţinerea suspensiei de spori a tulpinii crescute timp de 30 de zile pe un mediu de malţ-agar, inocularea suspensiei în cantitate de 5% v/v într-un mediu nutritiv apos ce conţine, g/L: făină de soia - 35,0, (NH4)2SO4 - 1,0, KH2PO4 - 5,0, cu adăugarea concomitentă a 0,010 g/L de [Ca(L)3][Co(NCS)4], unde L - dimetilpiridin-2,6-dicarboxilat, şi cultivarea la agitare continuă de 180-200 rot/min la temperatura de 28-30°C în decurs de 24 de ore.Rezultatul invenţiei constă în sporirea biosintezei enzimelor lipolitice şi reducerea duratei de cultivare a tulpinii cu 24 de ore.
Description
Invenţia se referă la biotehnologie, în particular la un procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze, şi poate fi utilizată în industria microbiologică pentru obţinerea lipazelor cu largi aplicări în industria alimentară, de producere şi prelucrare a grăsimilor şi uleiurilor vegetale, în medicină ca mijloc terapeutic şi diagnostic.
Procedeele moderne de cultivare a tulpinilor fungice producătoare de enzime exocelulare se bazează pe aplicarea rezultatelor cercetărilor clasice îmbinate cu realizările tehnologice şi fizico-chimice moderne, precum studiul particularităţilor de creştere şi sinteză a enzimelor în funcţie de regimul termic, aeraţie, dinamica variaţiei pH-ului mediului, raportul optim al componentelor mediilor nutritive, cantitatea şi tipul materialului semincer, cât şi screening-ul inductorilor specifici reprezentaţi de ingrediente naturale (făina de soia, făina de porumb, tărâţe de grâu etc.). Componentele lipidice prezente în cantităţi mici în ingredientele din compoziţia mediului stimulează efectiv biosinteza lipazelor (Рубан Е.Л. Микробные липиды и липазы. Наука, Москва, 1977, p. 132-156; Калунянц К.А., Голгер Л.И. Микробные ферментные препараты. Москва. Пищ. Пром., 1979, p. 14-30).
Pentru cultivarea submersă clasică a tulpinii Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 este cunoscut procedeul, în care se utilizează un mediu nutritiv cu compoziţia, g: făină de soia - 35,0; (NH4)2SO4 -1,0; KH2PO4 -1,0; apă potabilă până la 1L [1].
Dezavantajul constă în faptul că raportul componentelor mediului nu asigură biosinteza lipazelor la un nivel înalt, iar maxima biosintezei lipazelor se manifestă în ziua a 2-a de cultivare.
Se cunoaşte de asemenea un procedeu de cultivare a tulpinii Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 în aceleaşi condiţii, timp de 48 ore, cu utilizarea în calitate de biostimulator a nanoparticulelor de Fe3O4, care asigură obţinerea unei activităţi lipolitice de 70190-125250 U/mL [2].
Deşi aplicarea nanoparticulelor oferă soluţii rapide şi fabuloase în diverse domenii de activitate, inclusiv biotehnologii, impactul acestora asupra mediului şi sănătăţii este imprevezibil, variind semnificativ (benefic sau toxic) de la caz la caz în funcţie de caracteristicile nanomaterialelor şi organismelor ţintă, fiind dificil de prognozat şi controlat. Totodată, nanoparticulele pot suferi diferite transformări (inclusiv biotransformări), care modifică proprietăţile fizico-chimice ale acestora, rezultând un impact asupra mediului diferit de cel pe care îl pot provoca nanoparticulele originale, fiind necesare evaluări individualizate costisitoare (Martínez G., Merinero M., Pérez-Aranda M., Pérez-Soriano E. M., Ortiz T., Begines B., Alcudia A. Environmental Impact of Nanoparticles' Application as an Emerging Technology: A Review. Materials (Basel, Switzerland), 2020, 14(1), p. 166).
Alt dezavantaj constă în faptul că deşi activitatea lipolitică este destul de înaltă, maxima de activitate a tulpinii de fungi miceliali Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 se atinge în a doua zi de cultivare.
La unele microorganisme o parte considerabilă de lipaze exocelulare sunt legate de peretele celular, ce poate inhiba secreţia lipazelor în mediul de cultură şi micşorarea randamentului lipazelor exocelulare. Includerea în mediul nutritiv a substanţelor cu abilităţi de stimulare a eliberării lipazelor legate de peretele celular, spre exemplu, surplusul de ioni ai unor metale, accelerează secreţia lipazelor în mediul de cultură şi favorizează procesul de sinteză a lipazelor exocelulare (Fogarty W.M. Микробные ферменты и биотехнология. Москва, Агропромиздат. 1986, p. 189-190).
În acest context un efect de stimulare a biosintezei lipazelor exocelulare poate asigura şi includerea în mediul nutritiv a anumitor compuşi coordinativi ai unor metale, în special ai metalelor cu rol de microelemente.
În ultimele decenii în scopul sporirii biosintezei enzimelor la micromicete intensiv se studiază compuşii coordinativi ai elementelor 3d, din care unii s-au manifestat promiţător în calitate de biostimulatori ai biosintezei enzimelor lipolitice.
De exemplu, se cunoaşte că utilizarea glioximaţilor de Co(III) cu anioni de fluor [Co(DH)2(An)2]2[ZnF6]·2H2O şi [Co(DH)2(An)2]2[TiF6] în mediul nutritiv de cultivare a micromicetei Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 în calitate de biostimulatori, asigură efect stimulator din prima zi de cultivare, valorile activităţii lipolitice constituind 5071-57500 U/mL în prima zi [3].
Deşi biostimulatorul este activ, el nu este stabil la păstrare şi coroziv în raport cu sticla datorită prezenţei fluorului în anionul de hexafluorzerconat/titanat.
Cea mai apropiată soluţie este procedeul de cultivare submersă tulpinii Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, în care suspensia de spori a culturii crescute pe suprafeţe înclinate de malţ-agar se inoculează într-un mediu nutritiv apos cu compoziţia, g/L: făină de soia - 35,0, (NH4)2SO4 - 1,0, KH2PO4 - 5,0, compusul coordinativ CuGly2·H2O - 0,010, utilizat în calitate de biostimulator al biosintezei lipazelor. Cultivarea se realizează în condiţii de agitare continue (200 rot/min), timp de 48 ore, la temperatura de 28ºC [4].
Dezavantajul constă în faptul că concentraţia maximă admisibilă de aplicare a biostimulatorului CuGly2·H2O nu asigură biosinteză maximă a lipazelor, totodată maxima conţinutului de lipaze în lichidul cultural de 58068 U/mL se atinge în a doua zi de cultivare.
Problema tehnică pe care o rezolvă invenţia constă în elaborarea unui procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 care asigură sporirea capacităţii biosintetice a producătorului faţă de analogul proxim şi reducerea duratei de cultivare.
Problema se rezolvă prin procedeul de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze, care prevede obţinerea suspensiei de spori a tulpinii crescute timp de 30 de zile pe un mediu de malţ-agar înclinat, inocularea suspensiei în cantitate de 5% v/v într-un mediu nutritiv apos ce conţine, g/L: făină de soia - 35,0, (NH4)2SO4 - 1,0, KH2PO4 - 5,0, cu adăugarea concomitentă a 0,010 g/L de [Ca(L)3][Co(NCS)4], unde L este dimetilpiridin-2,6-dicarboxilat, şi cultivarea la agitare continuă de 180-200 rot/min la temperatura de 28-30°C în decurs de 24 de ore.
Rezultatul tehnic al invenţiei constă în sporirea biosintezei enzimelor lipolitice în prima zi de cultivare şi reducerea duratei de cultivare cu 24 de ore.
Rezultatele demonstrează că pe mediul cu biostimulatorul [Ca(L)3][Co(NCS)4] utilizat în concentraţii de 0,005, 0,010 şi 0,015 g/L, sporirea activităţii lipolitice constituie 34,0-78,4% faţă de martor. Maxima de biosinteză a lipazelor la cultivare în condiţii clasice constituie 34167 U/mL faţă de 34708-60958 U/mL în variantele experimentale, concentraţia optimă fiind de 0,010 g/L. S-a relevat inclusiv faptul că activitatea variantelor experimentale deja în prima zi de cultivare prezintă valori ale activităţii lipolitice superioare nivelului maxim al probei martor în ziua a 2-a de cultivare. În varianta cu concentraţia optimă a compusului coordinativ de 0,010 g/L în prima zi de cultivare sporul activităţii lipolitice este superior martorului zilei cu 93,5% şi cu 78,4% faţă de valoarea maximă relevată la proba martor (34167 U/mL) în ziua a 2-a de cultivare, depăşind totodată şi mediul proxim cu 5% (60958 U/mL faţă de 58068 U/mL).
Creşterea activităţii lipolitice în variantele experimentale poate fi condiţionată de prezenţa cationilor cobaltului (Co2+) în compoziţia complexului, care este cunoscut ca unul dintre microelemente cu rol biologic semnificativ pentru dezvoltarea organismelor. Sporirea randamentului lipazelor exocelulare, parţial, poate fi atribuită compoziţiei heterometalice a complexului utilizat, ce poate contribui la crearea unui surplus de ioni metalici cu efect de accelerare a secreţiei lipazelor în mediul de cultură ce favorizează procesul de sinteză a lipazelor exocelulare.
Avantajele invenţiei constau în obţinerea de cantităţi sporite de enzime lipolitice în termen redus.
Exemple de realizare a invenţiei
Exemplul 1
În prealabil se obţine suspensia de spori a tulpinii de fungi prin spălare cu apă distilată sterilă a culturii de 30 de zile, crescută pe suprafeţe înclinate de malţ-agar. Mediul nutritiv se prepară prin dizolvare într-un volum nu prea mare de apă potabilă a cantităţilor recântărite de săruri, urmată de dispersarea minuţioasă a făinii de soia, reieşind din raportul, g/L: făină de soia - 35,0; KH2PO4 - 5,0; (NH4)2SO4 - 1,0. Apoi volumul de apă potabilă se aduce până la 1,0 L, pH-ul iniţial al mediului - 8,0. Tulpina de fungi miceliali Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 se cultivă în baloane Erlenmeyer cu capacitatea de 0,75 L, care conţin 0,2 L de mediu nutritiv. Mediul nutritiv se inoculează cu suspensie de spori şi miceliu în cantitate de 5% v/v. Soluţia apoasă de [Ca(L)3][Co(NCS)4] cu o concentraţie bine determinată, care să asigure valori reieşind din intervalul 0,005-0,015 g/L, se agită discret timp de 2-5 minute pe baie de apă cu ultrasunet de tip DA-968 DADI nemijlocit înainte de utilizare, după care se adaugă la mediul nutritiv concomitent cu materialul semincer. Cultivarea se realizează în condiţii de agitare continuă (200 rot/min) la temperatura de 28ºC timp de 24 ore.
Activitatea lipolitică maximală, determinată după gradul de hidroliză a suspensiei de ulei de măsline în alcool polivinilic până la acid oleic după metoda titrimetrică Otto-Iamada (Грачева И.М. ş.a. Лабораторный практикум по технологии ферментных препаратов. Москва, Легкая и пищевая промышленности, 1982, p.75-76), în variantele experimentale cu aplicarea compusului coordinativ [Ca(L)3][Co(NCS)4] s-a marcat în prima zi de cultivare la concentraţia de 0,010 g/L şi constituie 60958 U/mL, faţă de 34167 U/mL maxima variantei control în ziua a doua de cultivare şi faţă de 58068 U/mL în varianta proximă, depăşind cu 78,4% proba control şi cu 5% nivelul analogului proxim. Diferit de martor şi analogul proxim, aplicarea compusului coordinativ reduce ciclul de cultivare a producătorului cu 24 de ore (vezi Tabelul).
Tabel
Influenţa compusului coordinativ de Ca asupra activităţii lipolitice
a tulpinii Rhizopus arrhizus CNMN FD 03
Compuşi coordinativi Conc., g/L 1-a zi a 2-a zi Activitatea, U/mL %, faţă de martor Activitatea, U/mL %, faţă de martor [Ca(L)3Co(SCN)4] 0,005 34708 110,2/101,6 43333 126,8 0,010 60958 193,5/178,4/105,0* 51667 151,2 0,015 45792 145,4/134,0 59167 173,2 Martor - 31500 100,0 34167 100,0 Procedeul conform analogului proxim 58068±162 100,0;*193,5/178,4/105,0- faţă de martorul zilei/faţă de maxima martorului (ziua a 2-a)/faţă de analogul proxim
Sinteza tetra(izotiocianato)cobaltat(II) de tris(dimetilpiridin-2,6-dicarboxilat)calciu
Amestecul mecanic din 0,05 g (0,025 mmol) de tiocianat de calciu tetrahidrat, 0,06 g (0,025 mmol) tiocianat de cobalt trihidrat şi 0,15 g (0,075 mmol) de 2,6-piridindicarbonildiclorură într-un raport molar de 1:1:3 a fost suspendat în 15 mL de metanol şi refluxat timp de 3 ore. Toate componentele sunt solubile în alcool. Soluţia formată are o culoare albastră-violetă. Amestecul s-a filtrat şi s-a lăsat la temperatura camerei pentru cristalizare. Peste 24 de ore în soluţie se formează cristale albastre de forma unor prisme, potrivite pentru analiza roentghenostructurală. Randamentul constituie 47% (0,11 g).
Găsit, %: C 40,57; H 2,88; Ca 4,45; Co 6,45; N 10,74.
Pentru: C31H27CaCoN7O12S4
calculat, %: C 40,61; H 2,97; Ca 4,37; Co 6,43; N 10,70.
Spectru IR (ʋ,cm-1): 3089sl., 3010sl., 2957sl., 2901f.sl. 2095m., 2058f.p., 1709f.p., 1588p., 1463m., 1436p., 1424umăr, 1326f.p., 1271f.p., 1205m., 1179m., 1155m., 1083m., 1013m., 994p., 951m., 871m., 845m., 826m., 796f.sl., 756p., 731p., 693p., 658m., 540sl., 499umăr, 485umăr, 478m., 434m., 429m., 404m. (intensitatea relativă a benzilor de absorbţie: f.p. - foarte puternică; p. - puternică; m. - medie; sl. - slabă).
Exemplul 2
În restul condiţiilor echivalente exemplului 1, determinarea activităţii lipolitice în lichidul cultural, obţinut la cultivarea tulpinii la temperatura de 30°, maxima biosintezei în variantele experimentale cu aplicarea compusului coordinativ [Ca(L)3][Co(NCS)4] similar exemplului 1 s-a marcat în prima zi de cultivare în varianta cu concentraţia de 0,010 g/L, constituind 58333 U/mL, faţă de 33333 U/mL maxima variantei control în ziua a doua de cultivare şi faţă de 58068±162 U/ml în varianta analogului proxim, depăşind cu 75,0% proba control şi cu 0,5% nivelul analogului proxim.
Cercetările au fost efectuate în cadrul Proiectului Program de Stat 2020-2023 al Rep. Moldova cu cifrul 20.80009.5007.28 „Elaborarea noilor materiale multifuncţionale şi tehnologii eficiente pentru agricultură, medicină, tehnică şi sistemul educaţional în baza complecşilor metalelor “s” şi „d” cu liganzi polidentaţi” cu finanţarea de către ANCD.
1. MD 2458 F1 2004.05.31
2. MD 4532 B1 2017.11.30
3. Чилочи А., Тюрина Ж., Клапко С., Stratan-Binzari M., Лаблюк С., Болога О., Коропчану Э., Rija A., Булхак И. Некоторые аспекты биосинтеза внеклеточных гидролаз микромицетов из родов Rhizopus и Aspergillus в присутствии комплексных соединений кобальта(III) c фторсодержащими анионами. Buletinul Academiei de Ştiinţe a Moldovei. Ştiinţele vieţii, 2010, nr. 1(310), p. 121-128, regăsit în Internet la 20.06.2022, URL: <https://ibn.idsi.md/ro/vizualizare_articol/238>
4. MD 2709 F1 2005.02.28
Claims (1)
- Procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze, care prevede obţinerea suspensiei de spori a tulpinii crescute timp de 30 de zile pe un mediu de malţ-agar înclinat, inocularea suspensiei în cantitate de 5% v/v într-un mediu nutritiv apos ce conţine, g/L: făină de soia - 35,0, (NH4)2SO4 - 1,0, KH2PO4 - 5,0, cu adăugarea concomitentă a 0,010 g/L de [Ca(L)3][Co(NCS)4], unde L este dimetilpiridin-2,6-dicarboxilat, şi cultivarea la agitare continuă de 180-200 rot/min la temperatura de 28-30°C în decurs de 24 de ore.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDA20210070A MD4828C8 (ro) | 2021-10-11 | 2021-10-11 | Procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| MDA20210070A MD4828C8 (ro) | 2021-10-11 | 2021-10-11 | Procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| MD4828B1 MD4828B1 (ro) | 2022-10-31 |
| MD4828C1 MD4828C1 (ro) | 2023-05-31 |
| MD4828C8 true MD4828C8 (ro) | 2024-01-31 |
Family
ID=83897939
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| MDA20210070A MD4828C8 (ro) | 2021-10-11 | 2021-10-11 | Procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| MD (1) | MD4828C8 (ro) |
-
2021
- 2021-10-11 MD MDA20210070A patent/MD4828C8/ro active IP Right Grant
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| MD4828B1 (ro) | 2022-10-31 |
| MD4828C1 (ro) | 2023-05-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106244463A (zh) | 富硒高虫草素含量的虫草菌丝体的培养方法 | |
| Lai et al. | Optimization of submerged culture conditions for the production of mycelial biomass and exopolysaccharides from Lignosus rhinocerus | |
| Dashti et al. | Batch culture and repeated-batch culture of Cunninghamella bainieri 2A1 for lipid production as a comparative study | |
| CN109970488A (zh) | 利用氨基酸发酵尾液制作的液体肥料 | |
| CN107619790A (zh) | 一种玉木耳的液体菌种培养基、液体菌种及其制备方法 | |
| MD4828C8 (ro) | Procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze | |
| Elisashvili et al. | Extracellular polysaccharide production by culinary-medicinal Shiitake mushroom Lentinus edodes (Berk.) Singer and Pleurotus (Fr.) P. Karst. species depending on carbon and nitrogen source | |
| KR20120110295A (ko) | 조류 배양용 배지 조성물 및 조류 배양 방법 | |
| CN115141864B (zh) | 一种富硒绣球菌多糖的加工方法 | |
| MD1624Z8 (ro) | Procedeu de cultivare submersă a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03, producătoare de lipaze | |
| Berovic et al. | Engineering aspects of lingzhi or reishi medicinal mushroom Ganoderma lucidum (Agaricomycetes) biomass submerged cultivation in bioreactors: A review | |
| CN107827244A (zh) | 一种用于养殖污水处理的菌藻复合剂及其制备方法 | |
| RU2805058C2 (ru) | Способ получения биомассы микроводорослей с высоким содержанием водорастворимого белка | |
| KR101106198B1 (ko) | 씨지에프 함량이 높은 클로렐라 종균을 배양하는 방법 및 그 방법에 의해 수득된 클로렐라 종균 | |
| Eshonkulov et al. | Technology of deep cultivation of medicinal fungus Schizophyllum commune | |
| CN1320102C (zh) | 一种姬松茸富锌液体培养的方法 | |
| CN108184547B (zh) | 金针菇液体菌种的培养方法 | |
| Kang et al. | Effects of high concentrations of plant oils and fatty acids for mycelial growth and pinhead formation of Hericium erinaceum | |
| Kots et al. | The influence of metal nanocarboxylates on the nitrogen-fixing activity of symbiotic soybean systems grown under field conditions | |
| CN115261356B (zh) | 一种粘土类发酵生产植酸酶增产剂及其制备方法 | |
| MD4532C1 (ro) | Procedeu de cultivare a tulpinii de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 | |
| RU2821927C1 (ru) | Способ периодического глубинного культивирования мицелия базидиальных грибов | |
| MD4831C8 (ro) | Tetra(izotiocianat)cobaltat(II) de tris(dimetil piridin-2,6-dicarboxilat)stronţiu cu proprietăţi de stimulator al activităţii lipolitice la tulpina de fungi Rhizopus arrhizus CNMN FD 03 | |
| CN109964727B (zh) | 一种利用光照提高蛹虫草富硒率的方法 | |
| Ratnapuram et al. | Mixotrophic transition induced lipid productivity in |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG4A | Patent for invention issued | ||
| TC4A | Change of name of proprietor (patent for invention) |
Owner name: INSTITUTIA PUBLICA UNIVERSITATEA TEHNICA A MOLDOVEI, MD BD. STEFAN CEL MARE SI SFANT NR. 168, MD-2004, CHISINAU, REPUBLICA MOLDOVAINSTITUTUL DE CHIMIE, MD STR. ACADEMIEI NR. 3, MD-2028, REPUBLICA MOLDOVA Free format text: PREVIOUS NAME OF PROPRIETOR: INSTITUTUL DE MICROBIOLOGIE SI BIOTEHNOLOGIE, MD STR. ACADEMIEI NR. 1, MD-2028, CHISINAU, REPUBLICA MOLDOVAINSTITUTUL DE CHIMIE, MD STR. ACADEMIEI NR. 3, MD-2028, REPUBLICA MOLDOVA |