MD4243C1 - Tulpină de drojdii Saccharomyces cerevisiae - sursă de superoxiddismutază - Google Patents

Abstract

Invenţia se referă la biotehnologie, în special la o tulpină de drojdii Saccharomyces cerevisiae şi poate fi utilizată în industria microbiologică pentru obţinerea enzimelor cu proprietăţi antioxidante, şi anume a superoxiddismutazei.Tulpina de drojdii este depozitată în Colecţia Naţională de Microorganisme Nepatogene a Institutului de Microbiologie şi Biotehnologie al AŞM cu numărul CNMN-Y-11 şi poate fi utilizată în calitate de sursă de superoxiddismutază.

Description

Invenţia se referă la biotehnologie, în special la o tulpină de drojdii Saccharomyces cerevisiae şi poate fi utilizată în industria microbiologică pentru obţinerea enzimelor cu proprietăţi antioxidante, şi anume a superoxiddismutazei.

Este cunoscută tulpina de drojdii Hansenula polymorpha CBS 4732 ce posedă activitate superoxiddismutazică de 42,9…63,67 U/mg de proteină [1]. Dezavantajul acestei tulpini constă în nivelul scăzut al activităţii acestei enzime.

Mai este cunoscută o tulpină de drojdii Saccharomyces cerevisiae, la care activitatea superoxiddismutazei constituie 86,2 U/mg de proteină [2]. Dezavantajul acestei tulpini constă în activitatea redusă a superoxiddismutazei.

Problema pe care o rezolvă prezenta invenţie constă în obţinerea unei tulpini noi de Saccharomyces cerevisiae care ar asigura o activitate sporită a superoxiddismutazei.

Esenţa invenţiei constă în faptul că se propune tulpina de drojdii Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-11 în calitate de sursă de superoxiddismutază.

Tulpina Saccharomyces cerevisiae este izolată în cultură pură şi depozitată în Colecţia Naţională de Microorganisme Nepatogene a Institutului de Microbiologie şi Biotehnologie al AŞM ca producător de proteine cu numărul CNMN-Y-11.

Caracterele morfo-culturale ale tulpinii.

Celulele sunt ovale sau rotunde care înmuguresc, ocazional formează pseudohife şi asce persistente direct din celula diploidă, ascospori neeliberaţi, rotunzi sau ovali, netezi, modul de reproducere - prin înmugurire. Pe medii solide formează colonii S-formă, de culoare albă, consistenţă păstoasă. Tipul respiraţiei - aerob, nu formează peliculă.

Caractere fiziologo-biochimice ale tulpinii.

Tulpina creşte bine pe medii lichide ce conţin must de malţ sau melasă cu adaos de săruri nutritive. Se dezvoltă pe medii ce conţin hexoze, precum D-glucoză, D-manoză, D-fructoză. Dintre dizaharide asimilează zaharoza, D-maltoza. Fermentaţia +; nitrat -; ureaza -; testul - Diazonium Blue B (DBB) -.

Temperatura optimă de dezvoltare este de 28…30°C, pH-ul optim - 4,5…5,0.

Pentru asigurarea activităţii sporite a superoxiddismutazei, tulpina Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-11 se cultivă pe următoarele medii de cultură:

1) Mediul Rieder care conţine, în g/L: glucoză - 30,0; (NH4)2SO4 -3,0; MgSO4 ·7H2O - 0,7; KH2PO4 - 1,0; NaCl - 0,5; Ca(NO3)2 - 0,4; autolizat de drojdie - 10 ml; apă potabilă -1 L.

La cultivare în profunzime pe mediul Rieder timp de 72 ore, activitatea superoxiddismutazei la tulpina dată constituie 185 U/mg de proteină, ceea ce este cu 115% mai mult faţă de soluţia cea mai apropiată.

2) Mediul YPD care conţine, g/L: peptonă - 20,0; glucoză - 20,0; extract de drojdie - 10; apă potabilă - 1 L.

La cultivare în profunzime pe mediul YPD timp de 72 ore, activitatea superoxiddismutazei la tulpina dată constituie 220 U/mg de proteină, ceea ce este cu 155% mai mult faţă de cea mai apropiată soluţie.

Rezultatul tehnic obţinut constă în asigurarea unei majorări a activităţii superoxiddismutazei până la 185...220 U/mg de proteină.

Rezultatul obţinut se datorează particularităţilor fiziologo-biochimice ale tulpinii, în special proceselor anabolice şi catabolice.

Exemple de realizare a invenţiei

Exemplul 1

Materialul semincer se obţine prin cultivarea tulpinii de drojdii pe must de bere de 7%, în condiţii aseptice, timp de 24 ore, la agitator (200…250 rpm), la temperatura de 20...25ºC. Inoculul obţinut se utilizează pentru mediile de fermentaţie în volum de 5%. Cultivarea în profunzime se realizează în baloane Erlenmayer cu capacitatea de 1 L ce conţin 0,2 L de mediu nutritiv Rieder, g/L: glucoză - 30,0; (NH4)2SO4 - 3,0; MgSO4 ·7H2O - 0,7; KH2PO4 - 1,0; NaCl - 0,5; Ca(NO3)2 - 0,4; autolizat de drojdie - 10; apă potabilă -1L, pH 5,5. Durata de cultivare - 72 ore la temperatura de 25…28ºC.

Activitatea superoxiddismutazei la cultivarea tulpinii de drojdii în condiţiile indicate constituie 185 U/mg de proteină.

Exemplul 2

Materialul semincer se obţine prin cultivarea tulpinii de drojdii pe must de bere de 7%, în condiţii aseptice, timp de 24 ore, la agitator (200…250 rpm), la temperatura de 20...25ºC. Inoculul obţinut se utilizează pentru mediile de fermentaţie în volum de 5%. Cultivarea în profunzime se realizează în baloane Erlenmayer cu capacitatea de 1 L ce conţin 0,2 L de mediu nutritiv YPD, g/L: extract de drojdii - 10, peptonă - 20, glucoză - 20, apă potabilă - 1L, pH 5,5. Durata de cultivare - 72 ore la temperatura de 25…28ºC.

Activitatea superoxiddismutazei la cultivarea tulpinii de drojdii în condiţiile indicate constituie 220 U/mg de proteină.

1. Hristozova T., Rasheva T., Nedeva T. and Kujumdzieva A. Superoxide dismutase during glucose repression of Hansenula polymorpha CBS 4732. Biosciences, 2002, 57, p. 313-318

2. Lushchak V., Gospodaryov D. Catalases protect proteins from oxidative modification in Saccharomyces cerevisiae. Cell Biology International, 2005, 29, p. 187-192

Claims (1)

1. Tulpină de drojdii Saccharomyces cerevisiae CNMN-Y-11 în calitate de sursă de superoxiddismutază.