MD4192829T2 - Modulatori ai reglatorilor conductanței transmembranare a fibrozei chistice - Google Patents

Modulatori ai reglatorilor conductanței transmembranare a fibrozei chistice

Info

Publication number
MD4192829T2
MD4192829T2 MDE20230621T MDE20230621T MD4192829T2 MD 4192829 T2 MD4192829 T2 MD 4192829T2 MD E20230621 T MDE20230621 T MD E20230621T MD E20230621 T MDE20230621 T MD E20230621T MD 4192829 T2 MD4192829 T2 MD 4192829T2
Authority
MD
Moldova
Prior art keywords
compound
independently selected
optionally substituted
halogen
alkyl
Prior art date
Application number
MDE20230621T
Other languages
English (en)
Inventor
Jeremy J Clemens
Brett C Bookser
Thomas Cleveland
Timothy R Coon
Michel Gallant
Peter Grootenhuis
Ruah Sara Sabina Hadida
Julie Laterreur
Vito Melillo
Mark Thomas Miller
Prasuna Paraselli
Yeeman K Ramtohul
Thumkunta Jagadeeswar Reddy
Claudio Sturino
Lino Valdez
Jinglan Zhou
William Schulz Bechara
Minson Baek
Original Assignee
Vertex Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vertex Pharma filed Critical Vertex Pharma
Publication of MD4192829T2 publication Critical patent/MD4192829T2/ro

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/439—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom the ring forming part of a bridged ring system, e.g. quinuclidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/443—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with oxygen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D498/18—Bridged systems

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Amplifiers (AREA)
  • Oscillators With Electromechanical Resonators (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Această dezvăluire oferă modulatori ai Regulatorului de Conductanţă Transmembranară al Fibrozei Chistice (CFTR), compoziţii farmaceutice care conţin cel puţin un astfel de modulator, metode de tratament al fibrozei chistice utilizând astfel de modulatori şi compoziţii farmaceutice şi procese pentru fabricarea unor astfel de modulatori.

Description

Descriere
Invenţia se referă la modulatori ai Reglatorului de Conductanţă Transmembranară al Fibrozei Chistice (CFTR), compoziţii farmaceutice care conţin modulatorii, metode de tratare a fibrozei chistice şi a tulburărilor mediate de CFTR utilizând astfel de modulatori şi compoziţii farmaceutice şi procedee de fabricare a acestor modulatori.
Fibroza chistică (FC) este o boală genetică recesivă care afectează aproximativ 83.000 de copii şi adulţi din întreaga lume. În ciuda progreselor înregistrate în tratamentul FC, nu există niciun tratament.
La pacienţii cu fibroză chistică, mutaţiile genei CFTR, exprimate endogen în epiteliile respiratorii, duc la o secreţie anionică apicală redusă, provocând un dezechilibru în transportul de ioni şi fluide. Scăderea rezultată a transportului de anioni contribuie la acumularea crescută de mucus în plămâni şi la infecţiile microbiene asociate, care în cele din urmă cauzează decesul la pacienţii cu fibroză chistică. Pe lângă bolile respiratorii, pacienţii cu fibroză chistică suferă în mod tipic de probleme gastrointestinale şi insuficienţă pancreatică care, dacă nu sunt tratate, duc la deces. În plus, majoritatea bărbaţilor cu fibroză chistică sunt infertili, iar fertilitatea este redusă în rândul femeilor cu fibroză chistică.
Analiza secvenţei genei CFTR a relevat o varietate de mutaţii cauzatoare de boli (Cutting, G. R. şi colab. (1990) Nature 346:366-369; Dean, M. şi colab. (1990) Cell 61:863:870 şi Kerem, B-S. şi colab. (1989) Science 245:1073-1080; Kerem, B-S şi colab. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:8447-8451). Până în prezent, au fost identificate peste 2000 de mutaţii în gena CF; în prezent, baza de date CFTR2 conţine informaţii numai despre 322 dintre aceste mutaţii identificate, cu suficiente dovezi pentru a defini 281 de mutaţii ca fiind cauzatoare de boală. Cea mai răspândită mutaţie cauzatoare de boală este o deleţie a fenilalaninei la poziţia 508 a secvenţei de aminoacizi CFTR şi este denumită în mod uzual mutaţia F508del. Această mutaţie apare în multe dintre cazurile de fibroză chistică şi este asociată cu o formă severă a bolii.
CFTR este un canal anionic mediat de cAMP/ATP, exprimat într-o varietate de tipuri de celule, inclusiv celule epiteliale absorbtive şi secretorii, unde reglează fluxul anionic prin membrană, precum şi activitatea altor canale ionice şi proteine. În celulele epiteliale, funcţionarea normală a CFTR este esenţială pentru menţinerea transportului de electroliţi în tot organismul, inclusiv în ţesutul respirator şi digestiv. CFTR este compus din 1480 de aminoacizi care codifică o proteină alcătuită dintr-o unitate de repetiţie în tandem de domenii transmembranare, fiecare conţinând şase helixuri transmembranare şi un domeniu de legare a nucleotidelor. Cele două domenii transmembranare sunt legate printr-un domeniu de reglare (R) larg, polar, cu multiple site-uri de fosforilare care reglează activitatea canalului şi traficul celular.
Transportul clorurii are loc prin activitatea coordonată a ENaC (canal epitelial de sodiu) şi CFTR prezente pe membrana apicală şi Pompa Na+-K+-ATPază şi canale Cl- exprimate pe suprafaţa bazolaterală a celulei. Transportul activ secundar al clorurii din partea luminală duce la acumularea de clorură intracelulară, care poate apoi părăsi pasiv celula prin intermediul canalelor Cl-, rezultând un transport vectorial. Aranjamentul co-transportator Na+/2Cl-/K+, pompa Na+-K+-ATPază şi canalele K+ membranei bazolaterale de pe suprafaţa bazolaterală şi CFTR de pe partea luminală coordonează secreţia de clorură. Deoarece apa probabil nu este transportată niciodată activ, fluxul său prin epitelii depinde de gradienţi osmotici transepiteliali minusculi generaţi de fluxul masiv de sodiu şi clorură.
Recent a fost identificată o serie de modulatori CFTR. Aceşti modulatori pot fi caracterizaţi, de exemplu, ca fiind potenţatori, corectori, amplificatori/co-potenţatori de potenţare, amplificatori, agenţi de re-citire şi terapii cu acid nucleic. Modulatorii CFTR care cresc activitatea de închidere a canalelor de proteine (CFTR) mutant şi de tip sălbatic la suprafaţa celulelor epiteliale sunt cunoscuţi sub numele de potenţatori. Corectorii îmbunătăţesc procesarea aberantă a proteinei şi traficul rezultat către suprafaţa epitelială. Ghelani şi Schneider-Futschik (2020) ACS Pharmacol. Transl. Sci. 3:4-10. Există trei corectori CFTR aprobaţi de FDA din SUA pentru tratamentul fibrozei chistice. Cu toate acestea, monoterapia cu unii corectori CFTR nu s-a dovedit a fi suficient de eficientă şi, prin urmare, este necesară o terapie combinată cu un potenţator CFTR pentru a spori activitatea CFTR. În prezent, există un singur potenţator CFTR aprobat pentru tratamentul fibrozei chistice. Astfel, deşi tratamentul fibrozei chistice a fost transformat de aceşti noi modulatori CFTR cu molecule mici, sunt necesari modulatori noi şi mai eficienţi pentru a preveni progresia bolii, a reduce severitatea fibrozei chistice şi a altor boli mediate de CFTR şi pentru a trata formele mai severe ale acestor boli.
Un aspect al invenţiei furnizează compuşi noi, inclusiv compuşi cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77, sărurile acestora acceptabile farmaceutic şi derivaţii deuteraţi ai oricăruia dintre cei menţionaţi anterior.
De exemplu, Compuşii cu Formula I poate fi reprezentat ca:
şi derivaţi deuteraţi şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora,
în care:
X este selectat dintre -O-, -S-, -SO- şi -SO2-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O-, -CO- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C3-C8 cicloalchil, C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1, -CO2RY1, - CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două exemple de RY pe acelaşi atom sunt luate împreună pentru a forma un ciclu selectat dintre C3-C8 cicloalchil şi heterociclil cu 3 până la 6 membri; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi;
fiecare RY1 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil, sau două exemple de RY1 legate de acelaşi atom de azot luate împreună formează un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
Ciclul B este selectat dintre:
▪ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, C1-C6 alchil şi C1-C6 alcoxi),
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri şi
▪ heterociclil cu 3 până la 6 membri (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil);
fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C1-C6 alchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ oxo,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi -OCF3), şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C3-C8 cicloalchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, -NH2 şi -NHCOMe),
∘ C1-C6 alcoxi,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil) şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi),
∘ C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-4 grupări selectate independent dintre:
▪ halogen,
▪ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu CF3),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, CF3, OCF3 şi C1-C6 alchil) şi
∘ C6-C10 aril,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări CF3), şi
heterociclil cu 3 până la 10 membri,
▪ heterociclil cu 3 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre oxo şi C3-C8 cicloalchil) şi
∘ oxo;
fiecare R1 este selectat independent dintre halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi), -OR2, -N(R2)2, -CO2R2, -CO-N(R2)2, -CN, fenil, benzil, C1-C6 alcoxi, C3-C8 cicloalchil, heteroaril cu 5 până la 6 membri, heterociclil cu 3 până la 6 membri, -SO2R2, -SR2, -SOR2, -PO(OR2)2 şi -PO(R2)2;
fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen);
Z este selectat din
în care Ciclul C este selectat din C6-C10 aril şi heteroaril cu 5 până la 10 membri;
RZ1 este selectat dintre hidrogen, -CN, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen sau 1-3 hidroxi), heterociclil cu 3 până la 6 membri, cicloalchil cu 3 până la 6 membri, aril cu 5 până la 6 membri şi heteroaril cu 5 până la 6 membri;
RZ2 este selectat dintre hidrogen, halogen şi hidroxi sau RZ1 şi RZ2 luaţi împreună formează o grupare selectată dintre oxo şi =N-OH;
fiecare RZ3 este selectat independent dintre hidroxi, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil, C1-C6 haloalchil şi C6-C10 aril; sau două exemple de RZ3 sunt luate împreună pentru a forma un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
n este selectat dintre 4, 5, 6, 7 şi 8; şi
m este selectat dintre 0, 1, 2 şi 3.
În unele variante de realizare, X este -O-.
În unele variante de realizare, fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C3-C8 cicloalchil şi -ORY1, unde Q şi RY1 sunt aşa cum sunt definite mai sus. În unele variante de realizare, -ORY1 este -OH.
În unele variante de realizare, fiecare Q este selectat independent din C3-C8 cicloalchil şi C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi C1-C6 alchil. În unele variante de realizare, fiecare Q este selectat independent dintre:
În unele variante de realizare, fiecare RY este selectat independent dintre: hidrogen, fluor,
În unele variante de realizare, Ciclul B este selectat din C3-C8 cicloalchil şi fenil opţional substituiţi cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen. În unele variante de realizare, Ciclul B este selectat dintre:
În unele variante de realizare, n este selectat dintre 4, 5 şi 6.
În unele variante de realizare, -(Y)n.- este un grup selectat dintre:
În unele variante de realizare, fiecare R1 este selectat independent din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi), -N(R2)2 şi -CO2R2, în care R2 este aşa cum este definit mai sus. În unele variante de realizare, fiecare R1 este selectat independent din -CF3, -NH2, -NH(CH2CH3), CO2H şi CH2OH.
În unele variante de realizare, fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil.
În unele variante de realizare, Z este selectat din
în care RZ1, RZ2 şi Ciclul C sunt aşa cum sunt definite mai sus. În unele variante de realizare, Z este
în care RZ1 şi RZ2 sunt aşa cum sunt definite mai sus. În unele variante de realizare, Z este
în care RZ1 şi RZ2 sunt aşa cum sunt definite mai sus. În unele variante de realizare, Z este
în care RZ1 şi RZ2 sunt aşa cum sunt definite mai sus. În unele variante de realizare, Z este
în care RZ1 şi RZ2 sunt aşa cum sunt definite mai sus şi în care (R) se referă la denumirea stereochimică a atomului de carbon central conform convenţiei Cahn-Ingold-Prelog. În unele variante de realizare, Z este
în care RZ1 şi RZ2 sunt aşa cum sunt definite mai sus, şi în care (S) se referă la denumirea stereochimică a atomului de carbon central conform convenţiei Cahn-Ingold-Prelog.
În unele variante de realizare, grupul:
este selectat dintre:
şi
În unele variante de realizare, grupul:
este selectat dintre:
În unele variante de realizare, RZ1 este selectat dintre hidrogen şi C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate dintre halogen). În unele variante de realizare, RZ1 este selectat dintre hidrogen şi -CF3. În unele variante de realizare, RZ1 este -CF3.
În unele variante de realizare, RZ2 este hidroxi.
În unele variante de realizare, Z este selectat dintre:
În unele variante de realizare, Z este
În unele variante de realizare, Z este
În unele variante de realizare, Z este
În unele variante de realizare, Z este
În unele variante de realizare, m este selectat dintre 1 şi 2.
În unele variante de realizare, compuşii invenţiei sunt cuprinşi cu Formula I
şi derivaţi deuteraţi şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora, în care:
X este -O-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q);
Ciclul B este selectat din grupări C3-C8 cicloalchil:
fiecare Q este selectat independent din C3-C8 cicloalchil şi C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi C1-C6 alchil,
fiecare R1 este selectat independent din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen) şi -NH2;
Z este
RZ1 este selectat din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen);
RZ2 este hidroxi;
n este selectat dintre 5 şi 6; şi
m este 2.
În unele variante de realizare, fiecare Q cu Formula I este selectat independent dintre:
În unele variante de realizare, fiecare RY cu Formula I este selectat independent dintre: hidrogen,
În unele variante de realizare, Ciclul B în Formula I este
În unele variante de realizare, -(Y)n.- cu Formula I este un grup selectat dintre:
În unele variante de realizare, RZ1 în Formula I' este -CF3.
În unele variante de realizare, Z în Formula I este
În unele variante de realizare, Z în Formula I este
În unele variante de realizare, n în Formula I este 5. În unele variante de realizare, n în Formula I este 6.
În unele variante de realizare, compuşii invenţiei sunt cuprinşi cu Formula I":
şi derivaţi deuteraţi şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora, în care:
X este selectat dintre -O-, -S-, -SO- şi -SO2-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O-, -CO- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1, -CO2RY1, -CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două exemple de RY pe acelaşi atom sunt luate împreună pentru a forma un ciclu selectat dintre C3-C8 cicloalchil şi heterociclil cu 3 până la 6 membri; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi;
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1, -CO2RY1, -CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi;
fiecare RY1 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil, sau două exemple de RY1 legate de acelaşi atom de azot luate împreună formează un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
Ciclul B este selectat dintre:
▪ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, C1-C6 alchil şi C1-C6 alcoxi),
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri şi
▪ heterociclil cu 3 până la 6 membri (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil);
fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C1-C6 alchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ oxo,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi -OCF3), şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C3-C8 cicloalchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, -NH2 şi -NHCOMe),
∘ C1-C6 alcoxi,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil) şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi),
∘ C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-4 grupări selectate independent dintre:
▪ halogen,
▪ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu CF3),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, CF3, OCF3 şi C1-C6 alchil) şi
∘ C6-C10 aril,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări CF3), şi
heterociclil cu 3 până la 10 membri,
▪ heterociclil cu 3 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre oxo şi C3-C8 cicloalchil) şi
∘ oxo;
fiecare R1 este selectat independent dintre halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen), -OR2, -N(R2)2, -CO2R2, -CO-N(R2)2, -CN, fenil, benzil, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil, C3-C8 cicloalchil, heteroaril cu 5 până la 6 membri, heterociclil cu 3 până la 6 membri, -SO2R2, -SR2, -SOR2, -PO(OR2)2 şi -PO(R2)2;
fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen);
Z este selectat din
RZ1 este selectat dintre hidrogen, -CN, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen sau 1-3 hidroxi), heterociclil cu 3 până la 6 membri, cicloalchil cu 3 până la 6 membri, aril cu 5 până la 6 membri şi heteroaril cu 5 până la 6 membri;
RZ2 este selectat dintre hidrogen, halogen şi hidroxi sau RZ1 şi RZ2 luaţi împreună formează o grupare selectată dintre oxo şi =N-OH;
fiecare RZ3 este selectat independent dintre hidroxi, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil şi C6-C10 aril; sau două exemple de RZ3 sunt luate împreună pentru a forma un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
n este selectat dintre 4, 5, 6 şi 7; şi
m este selectat dintre 0, 1, 2 şi 3.
În unele variante de realizare, X în Formula I" este -O-.
În unele variante de realizare, fiecare Y în Formula I" este selectat independent dintre -C(RY)2-, -CO- şi
în care RY şi Ciclul B sunt aşa cum sunt definite pentru Formula I".
În unele variante de realizare, fiecare Y în Formula I" este -C(RY)2-, în care RY este aşa cum este definit pentru Formula I".
În unele variante de realizare, fiecare RY în Formula I" este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q) şi -ORY1, în care RY1 şi Q sunt aşa cum sunt definite pentru Formula I".
În unele variante de realizare, fiecare RY în Formula I" este selectat independent dintre:
hidrogen,
în care Q este aşa cum este definit pentru Formula I".
În unele variante de realizare, fiecare Q în Formula I" este selectat independent dintre:
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi C1-C6 alchil.
În unele variante de realizare, fiecare Q în Formula I" este selectat independent dintre:
În unele variante de realizare, Ciclul B în Formula I" este selectat din C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen.
În unele variante de realizare, Ciclul B în Formula I" este selectat dintre:
În unele variante de realizare, -(Y)n.- în Formula I" este un grup selectat dintre:
şi
În unele variante de realizare, fiecare R1 în Formula I" este selectat independent din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen) şi -N(R2)2, în care R2 este aşa cum este definit pentru Formula I". În unele variante de realizare, fiecare R1 în Formula I" este selectat independent din -CF3 şi -N(R2)2, în care R2 este aşa cum este definit pentru Formula I".
În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formula I" este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen). În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formula I" este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil. În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formula I" este hidrogen.
În unele variante de realizare, Z în Formula I" este
în care RZ1 şi RZ2 sunt aşa cum sunt definite pentru Formula I". În unele variante de realizare, Z în Formula I" este
în care RZ1 şi RZ2 sunt aşa cum sunt definite pentru Formula I". În unele variante de realizare, Z în Formula I" este
În unele variante de realizare, RZ1 în Formula I" este selectat din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate dintre halogen). În unele variante de realizare, RZ1 în Formula I" este -CF3.
În unele variante de realizare, RZ2 în Formula I" este hidroxi.
În unele variante de realizare, n în Formula I, I', şi/sau I" este selectat dintre 4, 5 şi 6. În unele variante de realizare, n în Formula I, I', şi/sau I" este 5. În unele variante de realizare, n în Formula I, I', şi/sau I" este 6.
În unele variante de realizare, m în Formula I, I', şi/sau I" este selectat dintre 1 şi 2. În unele variante de realizare, m în Formula I, I', şi/sau I" este 1. În unele variante de realizare, m în Formula I, I', şi/sau I" este 2.
Un alt aspect al invenţiei furnizează compoziţii farmaceutice care cuprind cel puţin un compus ales dintre noii compuşi descrişi în conţinut, săruri farmaceutic acceptabile ale acestora şi derivaţi deuteraţi ai oricăruia dintre cei de mai sus şi cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic, compoziţii care pot include în plus cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar. Astfel, un alt aspect al invenţiei furnizează metode de tratare a fibrozei chistice mediate de CFTR, cuprinzând administrarea a cel puţin unuia dintre compuşii aleşi dintre noii compuşi descrişi în conţinut, săruri farmaceutic acceptabile ale acestora şi derivaţi deuteraţi ai oricăruia dintre cei de mai sus şi cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic, opţional ca parte a unei compoziţii farmaceutice care cuprinde cel puţin o componentă suplimentară, unui subiect care are nevoie de aceasta.
În anumite variante de realizare, compoziţiile farmaceutice ale invenţiei cuprind cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic. În unele variante de realizare, compoziţiile cuprind cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora pot cuprinde opţional în plus cel puţin un compus ales dintre Compusul II, Compus IV, Compus V, Compus VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora.
Un alt aspect al invenţiei furnizează metode de tratare a bolii mediate de CFTR, fibroză chistică, cuprinzând administrarea către un pacient care are nevoie de aceasta a cel puţin unui compus ales dintre noii compuşi descrişi în conţinut, săruri acceptabile farmaceutic ale acestora şi derivaţi deuteraţi ai oricăruia dintre cei de mai sus şi, opţional, administrarea suplimentară a unuia sau mai multor agenţi modulatori CFTR suplimentari selectaţi dintre (R)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-dihidroxipropil)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropancarboxamidă (Compus II), N-[2,4-bis(1,1-dimetiletil)-5-hidroxifenil]-1,4-dihidro-4-oxochinolină-3-carboxamidă (Compus III) sau N-(2-(terţ-butil)-5-hidroxi-4-(2-(metil-d3)propan-2-il-1,1,1,3,3,3-d6)fenil)-4-oxo-1,4-dihidrochinolină-3-carboxamidă (Compus III-d), acid 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropancarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)benzoic (Compus IV), N-(1,3-dimetilpirazol-4-il)sulfonil-6-[3-(3,3,3-trifluoro-2,2-dimetil-propoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (Compus V), N-(benzensulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (Compus VI), (14S)-8-[3-(2-{dispiro[2.0.2.1]heptan-7-il}etoxi)-1H-pirazol-1-il]-12,12-dimetil-2λ6-tia-3,9,11,18,23-pentaazatetraciclo [17.3.1.111,14.05,10]tetracoza-1(22),5,7,9,19(23),20-hexaen-2,2,4-trionă (Compus VII), (11R)-6-(2,6-dimetilfenil)-11-(2-metilpropil)-12-{spiro[2.3]hexan-5-il}-9-oxa-2λ6-tia-3,5,12,19-tetraazatriciclo[12.3.1.14,8]nonadeca-1(17),4(19),5,7,14(18),15-hexaen-2,2,13-trionă (Compus VIII); N-(benzensulfonil)-6-(3-fluoro-5-izobutoxi-fenil)-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (Compus IX), şi N-[(6-amino-2-piridil)sulfonil]-6-(3-fluoro-5-izobutoxi-fenil)-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (Compus X).
Un alt aspect al invenţiei furnizează metode de tratare a bolii mediate de CFTR, fibroză chistică, cuprinzând administrarea la un pacient care are nevoie de aceasta a cel puţin unui compus ales dintre noii compuşi descrişi în conţinut, săruri farmaceutic acceptabile ale acestora şi derivaţi deuteraţi ai oricăruia dintre cei de mai sus şi, opţional, administrarea suplimentară a unuia sau mai multor agenţi modulatori CFTR suplimentari selectaţi dintre:
dezvăluit în Journal de Cystic Fibrosis (2018), 17(5), 595-606 şi:
dezvăluit în WO 2016/105485. Într-o realizare, agentul modulator CFTR suplimentar este ASP-11. Într-o realizare, agentul modulator CFTR suplimentar este PTI-428.
Un alt aspect al invenţiei furnizează metode de tratare a bolii mediate de CFTR, fibroză chistică, cuprinzând administrarea la un pacient care are nevoie de aceasta a cel puţin unui compus ales dintre noii compuşi descrişi în conţinut, săruri farmaceutic acceptabile ale acestora şi derivaţi deuteraţi ai oricăruia dintre cei de mai sus şi, opţional, administrarea suplimentară a unuia sau mai multor agenţi modulatori CFTR suplimentari selectaţi dintre:
dezvăluit în Publicaţia Cererii de Brevet de Invenţie U.S. Nr. 2016-0120841;
dezvăluit în WO 2018/065921;
dezvăluit în WO 2017/062581ABBV-2851, dezvăluit în WO 2017/009804; GLPG2737, descris în publicaţia Cererii de Brevet de Invenţie U.S. Nr.. 2017-0101405ABBV-3748; ABBV-3903; şi ABBV-119.
Un alt aspect al invenţiei prevede compuşi cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic, pentru utilizare în oricare dintre metodele descrise în conţinut.
Descrierea pe Scurt a Figurilor
FIG. 1 furnizează un model de difracţie cu raze X (XRPD) a solvatului heptan al Compusului 11.
FIG. 2 furnizează o suprapunere a modelelor de difracţie cu raze X (XRPD) ale solvatului heptan al Compusului 11 preparat în trei condiţii diferite de uscare.
FIG. 3 furnizează o analiză DSC a solvatului heptan al Compusului 11.
FIG. 4 furnizează un spectru 13C RMN în stare solidă al solvatului heptan al Compusului 11.
FIG. 5 furnizează un spectru 19F RMN în stare solidă al solvatului heptan al Compusului 11.
FIG. 6A furnizează o curbă de analiză termogravimetrică (TGA) pentru solvatul heptan al Compusului 11 (Condiţia 1 de uscare). FIG. 6B furnizează o curbă de analiză termogravimetrică (TGA) pentru solvatul heptan al Compusului 11 (Condiţie 2 de uscare). FIG. 6C furnizează o curbă de analiză termogravimetrică (TGA) pentru solvatul heptan al Compusului 11 (Condiţie 3 de uscare).
Definiţii
Publicaţia cererii internaţionale de brevet de invenţie WO2013/038386 se referă la derivaţi de piridin-oxadiazol/tiadiazol.
"Compus II" aşa cum este utilizat în conţinut, se referă la (R)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-dihidroxipropil)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropancarboxamidă, care poate fi reprezentată cu următoarea structură:
Compus II. poate fi sub formă de sare acceptabilă farmaceutic. Compusul II şi metode de fabricare şi utilizare a Compusului II. sunt dezvăluite în publicaţiile cererilor internaţionale de brevet de invenţie WO 2010/053471, WO 2011/119984, WO 2011/133751, WO 2011/133951 şi WO 2015/160787.
"Compus III" aşa cum este folosit în această dezvăluire se referă la N-(5-hidroxi-2,4-di-terţ-butil-fenil)-4-oxo-1H-chinolin-3-carboxamidă, care este reprezentată prin structura:
Compusul III poate fi, de asemenea, sub formă de sare acceptabilă farmaceutic. Compusul III şi metode de fabricare şi utilizare a Compusului III sunt dezvăluite în publicaţiile cererilor internaţionale de brevet de invenţie WO 2006/002421, WO 2007/079139, WO 2010/108162 şi WO 2010/019239.
În unele variante de realizare, un derivat deuterat al Compusului III (Compus III-d) este utilizat în compoziţiile şi metodele descrise în conţinut. O denumire chimică pentru Compusul III-d este N-(2-(terţ-butil)-5-hidroxi-4-(2-(metil-d3)propan-2-il-1,1,1,3,3,3-d6)fenil)-4-oxo-1,4-dihidrochinolină-3-carboxamidă, aşa cum este reprezentat de structura:
Compusul III-d poate fi sub formă de sare acceptabilă farmaceutic. Compusul III-d şi metode de fabricare şi utilizare a Compusului III-d sunt dezvăluite în publicaţiile cererilor internaţionale de brevet de invenţie WO 2012/158885, WO 2014/078842 şi Brevet de invenţie US Nr. 8.865.902.
"Compus IV", aşa cum este utilizat în conţinut, se referă la acid 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropancarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)benzoic, care este reprezentat prin structura chimică:
Compusul IV poate fi sub formă de sare acceptabilă farmaceutic. Compusul IV şi metode de fabricare şi utilizare a Compusului IV sunt dezvăluite în publicaţiile cererilor internaţionale de brevet de invenţie WO 2007/056341, WO 2009/073757 şi WO 2009/076142.
"Compus V" aşa cum este folosit în conţinut, se referă la N-(1,3-dimetilpirazol-4-il)sulfonil-6-[3-(3,3,3-trifluoro-2,2-dimetil-propoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă, care este reprezentată prin structura chimică:
Compusul V poate fi sub formă de sare acceptabilă farmaceutic. Compusul V şi metode de fabricare şi utilizare a Compusului V sunt dezvăluite în publicaţiile cererilor internaţionale de brevet de invenţie WO 2018/107100 şi WO 2019/113476.
"Compus VI" aşa cum este folosit în conţinut, se referă la N-(benzensulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă, care este reprezentată prin structura chimică:
Compusul VI poate fi sub formă de sare acceptabilă farmaceutic. Compusul VI şi metode de fabricare şi utilizare a Compusului VI sunt dezvăluite în publicaţia cererii internaţionale de brevet de invenţie WO 2018/064632.
"Compus VII" aşa cum este utilizat în conţinut, se referă la (14S)-8-[3-(2-{dispiro[2.0.2.1]heptan-7-il}etoxi)-1H-pirazol-1-il]-12,12-dimetil-2λ6-tia-3,9,11,18,23-pentaazatetraciclo[17.3.1.111,14.05,10]tetracosa-1(22),5,7,9,19(23),20-hexaen-2,2,4-trionă, care este reprezentată prin structura chimică:
Compusul VII poate fi sub formă de sare acceptabilă farmaceutic. Compusul VII şi metode de fabricare şi utilizare a Compusului VII sunt dezvăluite în publicaţia cererii internaţionale de brevet de invenţie WO 2019/152940 şi Cererea de brevet de invenţie Provizorie U.S. Nr. 62/886.660.
"Compus VIII" aşa cum este folosit în conţinut, se referă la (11R)-6-(2,6-dimetilfenil)-11-(2-metilpropil)-12-{spiro[2.3]hexan-5-il}-9-oxa-2λ6-tia-3,5,12,19-tetraazatriciclo[12.3.1.14,8]nonadeca-1(17),4(19),5,7,14(18),15-hexaen-2,2,13-trionă, care este reprezentată prin structura chimică:
Compusul VIII poate fi sub formă de sare acceptabilă farmaceutic. Compusul VIII şi metode de fabricare şi utilizare a Compusului VIII sunt dezvăluite în PCT/US2020/026331.
"Compus IX", aşa cum este folosit în conţinut, se referă la N-(benzensulfonil)-6-(3-fluoro-5-izobutoxi-fenil)-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă, care este reprezentată prin structura chimică:
Compusul IX poate fi sub formă de sare acceptabilă farmaceutic. Compusul IX şi metode de fabricare şi utilizare a Compusului IX sunt dezvăluite în publicaţia cererii internaţionale de brevet de invenţie WO 2016/057572.
"Compus X" aşa cum este folosit în conţinut, se referă la N-[(6-amino-2-piridil)sulfonil]-6-(3-fluoro-5-izobutoxi-fenil)-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă, care este reprezentată prin structura chimică:
Compusul X poate fi sub formă de sare acceptabilă farmaceutic. Compusul X şi metode de fabricare şi utilizare a Compusului X sunt dezvăluite în publicaţia cererii internaţionale de brevet de invenţie WO 2016/057572.
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "alchil" se referă la o hidrocarbură alifatică saturată, ramificată sau neramificată, care conţine atomi de carbon (cum ar fi, de exemplu, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 sau 20 de atomi de carbon). Grupările alchil pot fi substituite sau nesubstituite.
Aşa cum este folosit în conţinut, termenul "legătură pi" se referă la o legătură covalentă formată de orbitalii p ai atomilor adiacenţi. Legăturile pi există acolo unde există o legătură multiplă, adică o legătură dublă sau triplă, între doi atomi. De exemplu, o legătură dublă carbon-carbon constă dintr-o legătură pi, iar o legătură triplă carbon-carbon constă din două legături pi.
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "grupare haloalchil" se referă la o grupare alchil substituită cu unul sau mai mulţi atomi de halogen.
Termenul "alcoxi", aşa cum este utilizat în conţinut, se referă la un alchil sau cicloalchil legat covalent de un atom de oxigen. Grupările alcoxi pot fi substituite sau nesubstituite.
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "grupare haloalcoxil" se referă la o grupare alcoxi substituită cu unul sau mai mulţi atomi de halogen.
Aşa cum este utilizat în conţinut, "cicloalchil" se referă la grupări hidrocarbonate nearomatice ciclice, biciclice, triciclice sau policiclice având 3 până la 12 atomi de carbon (cum ar fi, de exemplu, 3-10 atomi de carbon). Grupările "cicloalchil" cuprind cicluri monociclice, biciclice, triciclice, punte, condensate şi spiro, inclusiv cicluri monospiro şi dispiro. Exemple nelimitative de grupări cicloalchil sunt ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil, adamantil, norbornil şi dispiro[2.0.2.1]heptan. Grupările cicloalchil pot fi substituite sau nesubstituite.
Termenul "ciclu heteroaril", aşa cum este utilizat în conţinut, se referă la un ciclu aromatic care cuprinde cel puţin un atom de ciclu care este un heteroatom, cum ar fi O, N sau S.
Aşa cum sunt utilizaţi în conţinut, termenii "ciclu heterociclic" şi "heterociclil" se referă la o hidrocarbură nearomatică care conţine 3 până la 12 atomi într-un ciclu (cum ar fi, de exemplu, 3-10 atomi) cuprinzând cel puţin un atom în ciclu care este un heteroatom, cum ar fi O, N, S sau Si. Ciclurile "heterociclil" cuprind cicluri monociclice, biciclice, triciclice, policiclice, cu punte, condensate şi spiro, inclusiv cicluri monospiro şi dispiro.
"Substituit" indică faptul că cel puţin un atom de hidrogen al grupării "substituite" este înlocuit cu un substituent. Dacă nu se specifică altfel, o grupare "opţional substituită" poate avea un substituent adecvat la fiecare poziţie substituibilă a grupării, iar atunci când mai mult de o poziţie din orice structură dată poate fi substituită cu mai mult de un substituent ales dintr-o grupare specificată, substituentul poate fi fie acelaşi, fie diferit la fiecare poziţie.
Exemple de grupări protectoare pentru azot includ, de exemplu, carbamat de t-butil (Boc), benzil (Bn), para-metoxibenzil (PMB), tetrahidropiranil (THP), 9-fluorenilmetil carbamat (Fmoc), benzil carbamat (Cbz), metil carbamat, etil carbamat, 2,2,2-tricloroetil carbamat (Troc), 2-trimetilsililetil carbamat (Teoc), alil carbamat (Aloc sau Alloc), formamidă, acetamidă, benzamidă, alilamină, trifluoroacetamidă, trifenilmetilamină, benzilidenamină şi p-toluensulfonamidă. O listă completă a grupărilor protectoare de azot poate fi regăsită în Wuts, P. G. M. "Greene's Protective Groups in Organic Synthesis: a cincea ediţie", 2014, John Wiley and Sons.
Aşa cum se utilizează în conţinut, "derivat(i) deuterat(i)" semnifică aceeaşi structură chimică, cu unul sau mai mulţi atomi de hidrogen înlocuiţi de un atom de deuteriu. În unele variante de realizare, derivaţii deuteraţi sunt compuşi în care unul sau mai mulţi atomi de hidrogen ai unei grupări alchil sunt înlocuiţi de un atom de deuteriu.
Aşa cum este utilizat în conţinut, "CFTR" semnifică reglator de conductanţă transmembranară al fibrozei chistice.
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "modulator CFTR" se referă la un compus care creşte activitatea CFTR. Creşterea activităţii rezultată în urma unui modulator CFTR include, dar nu se limitează la, compuşi care corectează, potenţează, stabilizează şi/sau amplifică CFTR.
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "corector CFTR" se referă la un compus care facilitează procesarea şi traficul CFTR pentru a creşte cantitatea de CFTR la suprafaţa celulei.
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "potenţiator CFTR" se referă la un compus care creşte activitatea canalului proteinei CFTR situată la suprafaţa celulei, rezultând un transport îmbunătăţit de ioni. Noii compuşi descrişi în conţinut sunt potenţiatori CFTR.
Aşa cum sunt utilizaţi în conţinut, termenii "amplificator de potenţare CFTR", "amplificator potenţiator CFTR" şi "co-potenţator CFTR" sunt utilizaţi interschimbabil şi se referă la un compus care amplifică potenţarea CFTR.
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "ingredient farmaceutic activ" ("API") sau "agent terapeutic" se referă la un compus biologic activ.
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind" include posibilitatea ca există un singur agent terapeutic.
Termenii "pacient" şi "subiect" sunt utilizaţi interschimbabil şi se referă la un animal, inclusiv la oameni.
Termenii "doză eficientă" şi "cantitate eficientă" sunt utilizaţi interschimbabil în conţinut şi se referă la acea cantitate dintr-un compus care produce efectul dorit pentru care este administrat (de exemplu, ameliorarea fibrozei chistice sau a unui simptom al fibrozei chistice sau diminuarea severităţii fibrozei chistice sau a unui simptom al fibrozei chistice). Cantitatea exactă a unei doze eficiente va depinde de scopul tratamentului şi va putea fi stabilită de către o persoană de specialitate în domeniu folosind tehnici cunoscute (vezi, de exemplu, Lloyd (1999) The Art, Science and Technology de Pharmaceutical Compounding).
Aşa cum sunt utilizaţi în conţinut, termenii "tratament", "tratare" şi altele asemenea semnifică, în general, ameliorarea unuia sau mai multor simptome ale fibrozei chistice sau diminuarea severităţii fibrozei chistice sau a unuia sau mai multor simptome ale fibrozei chistice la un subiect. "Tratamentul", aşa cum este utilizat în conţinut, include, dar nu se limitează la, următoarele: creşterea accentuată a subiectului, creştere în greutate, reducerea mucusului în plămâni, îmbunătăţirea funcţiei pancreatice şi/sau hepatice, reducerea infecţiilor toracice şi/sau reducerea tusei sau a dificultăţilor de respiraţie. Îmbunătăţirile sau diminuarea severităţii oricăruia dintre aceste simptome pot fi uşor evaluate conform metodelor şi tehnicilor standard cunoscute în domeniu.
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "în combinaţie cu", atunci când se referă la doi sau mai mulţi compuşi, agenţi sau ingrediente farmaceutice active suplimentare, semnifică administrarea a doi sau mai mulţi compuşi, agenţi sau ingrediente farmaceutice active pacientului înainte, concomitent sau ulterior unul faţă de celălalt.
Termenii "aproximativ" şi "circa", atunci când sunt utilizaţi în legătură cu doze, cantităţi sau procente în greutate ale ingredientelor unei compoziţii sau unei forme de dozare, includ valoarea unei doze, cantităţi sau procente în greutate specificate sau un interval al dozei, cantităţii sau procentului în greutate care este recunoscut de o persoană de specialitate în domeniu ca oferind un efect farmacologic echivalent cu cel obţinut din doza, cantitatea sau procentul în greutate specificat. Termenii "aproximativ" şi "circa" se pot referi la o eroare acceptabilă pentru o anumită valoare, aşa cum este determinată de o persoană de specialitate în domeniu, care depinde parţial de modul în care valorile sunt măsurate sau determinate. În unele variante de realizare, termenii "aproximativ" şi "circa" semnifică în limita a 20%, 15%, 10%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% sau 0,5% dintr-o anumită valoare sau un anumit interval. Aşa cum este utilizat în conţinut, simbolul "~" care apare imediat înaintea unei valori numerice are aceeaşi semnificaţie ca termenii "aproximativ" şi "circa".
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "solvent" se referă la orice lichid în care produsul este cel puţin parţial solubil (solubilitatea produsului >1 g/L).
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "temperatura camerei" sau "temperatura ambiantă" semnifică între 15 °C şi 30 °C.
Se va înţelege faptul că anumiţi compuşi ai acestei invenţii pot exista ca stereoizomeri sau enantiomeri separaţi şi/sau amestecuri ale acestor stereoizomeri sau enantiomeri. Aşa cum este utilizat în structurile chimice descrise în conţinut, o legătură "pană" ( ) sau "hash" ( ) la un atom stereogenic indică un centru chiral cu stereochimie absolută cunoscută (adică un stereoizomer). Aşa cum este utilizată în structurile chimice descrise în conţinut, o legătură "ondulată" ( ) la un atom stereogenic indică un centru chiral cu stereochimie absolută necunoscută (adică un stereoizomer). Aşa cum este utilizat în structurile chimice descrise în conţinut, o legătură "ondulată" ( ) la un carbon cu legătură dublă indică un amestec de izomeri E/Z. Aşa cum este utilizat în structurile chimice descrise în conţinut, o legătură ("liniară") la un atom stereogenic indică locul în care există un amestec (de exemplu, un racemat sau o îmbogăţire). Aşa cum se utilizează în conţinut, două legături ("liniare") la un carbon cu legătură dublă indică faptul că legătura dublă posedă stereochimia E/Z aşa cum este desenată. Aşa cum este utilizat în structurile chimice descrise în conţinut, (o linie "ondulată" perpendiculară pe o legătură "liniară" la gruparea "A") indică faptul că gruparea "A" este un substituent al cărui punct de ataşare este la capătul legăturii care se termină la linia "ondulată". Aşa cum este utilizat în conţinut, un atom stereogenic care este notat cu un (R) sau (S) indică denumirea stereochimică a atomului stereogenic conform convenţiei Cahn-Ingold-Prelog.
Anumiţi compuşi descrişi în conţinut pot exista ca tautomeri şi ambele forme tautomerice sunt intenţionate, chiar dacă este reprezentată o singură structură tautomerică. De exemplu, o descriere a Compusului A este înţeleasă ca incluzând tautomerul său, Compusul B, şi invers, precum şi amestecuri ale acestora:
Aşa cum este utilizat în conţinut, "mutaţii ale funcţiei minime (MF)" se referă la mutaţiile genei CFTR asociate cu funcţia minimă a CFTR (proteină CFTR cu funcţionare redusă sau inexistentă) şi includ, de exemplu, mutaţii asociate cu defecte severe în capacitatea canalului CFTR de a se deschide şi închide, cunoscute sub numele de închidere defectuoasă a canalului sau "mutaţii de închidere"; mutaţii asociate cu defecte severe în procesarea celulară a CFTR şi livrarea acestuia la suprafaţa celulei; mutaţii asociate cu absenţa (sau sinteza minimă) a CFTR; şi mutaţii asociate cu defecte severe în conductanţa canalului.
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "sare acceptabilă farmaceutic" se referă la o formă de sare a unui compus conform acestei dezvăluiri, în care sarea este netoxică. Sărurile acceptabile farmaceutic ale compuşilor conform acestei dezvăluiri includ cele derivate din acizi şi baze anorganice şi organice adecvate. O formă de "bază liberă" a unui compus, de exemplu, nu conţine o sare legată ionic.
Expresia "şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora" este utilizată interschimbabil cu "şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora şi derivaţi deuteraţi ai oricăruia dintre cei menţionaţi anterior" cu referire la unul sau mai mulţi compuşi sau formule ale invenţiei. Aceste expresii sunt destinate să includă săruri farmaceutic acceptabile ale oricăruia dintre compuşii la care se face referire, derivaţi deuteraţi ai oricăruia dintre compuşii la care se face referire şi săruri farmaceutic acceptabile ale acelor derivaţi deuteraţi.
Un specialist domeniu ar recunoaşte faptul că, atunci când este descrisă o cantitate de "compus sau o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia", cantitatea formei de sare farmaceutic acceptabilă a compusului este cantitatea echivalentă cu concentraţia bazei libere a compusului. Se observă faptul că, cantităţile descrise de compuşi sau săruri farmaceutic acceptabile ale acestora, prezentate în conţinut, se bazează pe forma lor de bază liberă.
Sărurile farmaceutic acceptabile adecvate sunt, de exemplu, cele descrise în S. M. Berge şi colab., J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19. De exemplu, Tabelul 1 din articolul respectiv prezintă următoarele săruri acceptabile din punct de vedere farmaceutic:
Tabelul 1:
Acetat Iodură Benzatină Benzensulfonat Izetionat Cloroprocaină Benzoat Lactat Colină Bicarbonat Lactobionat Dietanolamină Bitartrat Malat Etilendiamină Bromură Maleat Meglumină Edetat de calciu Mandelat Procaină Camsilat Mesilat Aluminiu Carbonat Bromură de metil Calciu Clorură Metilnitrat Litiu Citrat Metilsulfat Magneziu Diclorhidrat Mucat Potasiu Edetat Napsilat Sodiu Edisilat Nitrat Zinc Estolat Pamoat (Embonat) Esilat Pantotenat Fumarat Fosfat/difosfat Gluceptat Poligalacturonat Gluconat Salicilat Glutamat Stearat Glicolilarsanilat Subacetat Hexilrezorcinat Succinat Hidrabamină Sulfat Bromhidrat Tanat Clorhidrat Tartrat Hidroxinaftoat Teociat Trietiodură
Exemple nelimitative de săruri de adiţie acidă acceptabile farmaceutic includ: săruri formate cu acizi anorganici, cum ar fi acidul clorhidric, acidul bromhidric, acidul fosforic, acidul sulfuric sau acidul percloric; săruri formate cu acizi organici, cum ar fi acidul acetic, acidul oxalic, acidul maleic, acidul tartric, acidul citric, acidul succinic sau acidul malonic; şi săruri formate prin utilizarea altor metode utilizate în domeniu, cum ar fi schimbare de ioni. Exemple nelimitative de săruri acceptabile farmaceutic includ adipat, alginat, ascorbat, aspartat, benzensulfonat, benzoat, bisulfat, borat, butirat, camforat, camforsulfonat, citrat, ciclopentanpropionat, digluconat, dodecilsulfat, etansulfonat, formiat, fumarat, glucoheptonat, glicerofosfat, gluconat, hemisulfat, heptanoat, hexanoat, iodhidratură, 2-hidroxi-etansulfonat, lactobionat, lactat, laurat, lauril sulfat, malat, maleat, malonat, metansulfonat, 2-naftalensulfonat, nicotinat, nitrat, oleat, oxalat, palmitat, pamoat, pectinat, persulfat, 3-fenilpropionat, fosfat, picrat, pivalat, propionat. săruri stearat, succinat, sulfat, tartrat, tiocianat, p-toluensulfonat, undecanoat şi valerat. Sărurile acceptabile farmaceutic derivate din baze adecvate includ metale alcaline, metale alcalino-pământoase, amoniu şi săruri N+(C1-4alchil)4. Această dezvăluire are în vedere, de asemenea, cuaternizarea oricăror grupări care conţin azot bazic ale compuşilor descrişi în conţinut. Exemple adecvate, nelimitative, de săruri ale metalelor alcaline şi alcalino-pământoase includ sodiu, litiu, potasiu, calciu şi magneziu. Alte exemple nelimitative de săruri acceptabile farmaceutic includ cationi de amoniu, amoniu cuaternar şi amină formaţi folosind contraioni precum halogenură, hidroxid, carboxilat, sulfat, fosfat, nitrat, sulfonat de alchil inferior şi sulfonat de aril. Alte exemple adecvate, nelimitative, de săruri acceptabile farmaceutic includ săruri de besilat şi glucozamină.
Aşa cum este folosit în conţinut, termenul "amorf" se referă la un material solid care nu are o ordine pe distanţe lungi în poziţia moleculelor sale. Solidele amorfe sunt în general lichide super-răcite în care moleculele sunt aranjate aleatoriu, astfel încât să nu existe un aranjament bine definit, de exemplu, împachetare moleculară şi nicio ordine pe distanţe lungi. Solidele amorfe sunt în general izotrope, adică prezintă proprietăţi similare în toate direcţiile şi nu au puncte de topire definite. De exemplu, un material amorf este un material solid care nu are vârfuri cristaline ascuţite caracteristice în modelul său de difracţie de putere cu raze X (XRPD) (adică nu este cristalin aşa cum este determinat prin XRPD). În schimb, în modelul său XRPD apar unul sau mai multe vârfuri largi (de exemplu, halouri). Vârfurile largi sunt caracteristice unui solid amorf. Vezi, US 2004/0006237 pentru o comparaţie a XRPD unui material amorf şi ale unui material cristalin. În unele variante de realizare, un material solid poate cuprinde un compus amorf, iar materialul poate fi caracterizat, de exemplu, prin lipsa unui/unor vârf(uri) cristalin(e) caracteristic(e) ascuţit(e) în spectrul său XRPD (adică, materialul nu este cristalin, dar este amorf, aşa cum s-a determinat prin XRPD). În schimb, în modelul XRPD al materialului pot apărea unul sau mai multe vârfuri largi (de exemplu, halouri). Vezi US 2004/0006237 pentru o comparaţie a XRPD unui material amorf şi ale unui material cristalin. Un material solid, care cuprinde un compus amorf, poate fi caracterizat, de exemplu, printr-o temperatură de tranziţie vitroasă care este mai mică decât punctul de topire al unui solid cristalin pur. Alte tehnici, cum ar fi, de exemplu, RMN în stare solidă, pot fi, de asemenea, utilizate pentru a caracteriza formele cristaline sau amorfe.
Aşa cum sunt utilizaţi în conţinut, termenii "formă cristalină", "formă de cristal" şi "formă" se referă interschimbabil la o structură cristalină (sau polimorf) având un anumit aranjament de împachetare moleculară în reţeaua cristalină. Formele cristaline pot fi identificate şi deosebite una de cealaltă prin una sau mai multe tehnici de caracterizare, inclusiv, de exemplu, difracţia cu raze X pe pulbere (XRPD), difracţia cu raze X pe monocristal şi rezonanţă magnetică nucleară în stare solidă 13C (13C SSRMN). Prin urmare, aşa cum sunt utilizaţi în conţinut, termenii "formă cristalină [X] a Compusului I" se referă la forme cristaline unice care pot fi identificate şi deosebite de alte forme cristaline prin una sau mai multe tehnici de caracterizare, inclusiv, de exemplu, XRPD, difracţie de raze X pe monocristal şi 13C SSRMN. În unele variante de realizare, noile forme cristaline sunt caracterizate printr-o difractogramă de raze X pe pulbere având unul sau mai multe semnale la una sau mai multe valori specificate de doi-teta (°2θ).
Aşa cum este folosit în conţinut, termenul "formă liberă" se referă la o versiune neionizată a compusului în stare solidă. Exemple de forme libere includ baze libere şi acizi liberi.
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "solvat" se referă la o formă cristalină care cuprinde una sau mai multe molecule ale unui compus conform prezentei dezvăluiri şi, încorporate în reţeaua cristalină, una sau mai multe molecule ale unui solvent sau solvenţi în cantităţi stoichiometrice sau nestoichiometrice. Când solventul este apa, solvatul este denumit "hidrat".
În unele variante de realizare, un material solid poate cuprinde un amestec de solide cristaline şi solide amorfe. Un material solid care cuprinde un compus amorf poate conţine, de asemenea, de exemplu, până la 30% dintr-un solid cristalin. În unele variante de realizare, un material solid preparat pentru a cuprinde un compus amorf poate conţine, de asemenea, de exemplu, până la 25%, 20%, 15%, 10%, 5% sau 2% dintr-un solid cristalin. În variantele de realizare în care materialul solid conţine un amestec de solide cristaline şi solide amorfe, datele de caracterizare, cum ar fi XRPD, pot conţine indicatori atât pentru solidele cristaline, cât şi pentru cele amorfe. În unele variante de realizare, o formă cristalină a acestei dezvăluiri poate conţine până la 30% compus amorf. În unele variante de realizare, un preparat cristalin al unui compus cu Formula I poate conţine până la 25%, 20%, 15%, 10%, 5% sau 2% dintr-un solid amorf.
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "substanţial amorf" se referă la un material solid care are o ordine pe distanţe lungi mică sau deloc în poziţia moleculelor sale. De exemplu, materialele substanţial amorfe au o cristalinitate mai mică de 15% (de exemplu, mai puţin de 10% cristalinitate, mai puţin de 5% cristalinitate sau mai puţin de 2% cristalinitate). De asemenea, se observă că termenul "substanţial amorf" include descriptorul "amorf", care se referă la materiale care nu au cristalinitate (0%).
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "substanţial cristalin" se referă la un material solid care are puţine sau deloc molecule amorfe. De exemplu, materialele substanţial cristaline au mai puţin de 15% molecule amorfe (de exemplu, mai puţin de 10% molecule amorfe, mai puţin de 5% molecule amorfe sau mai puţin de 2% molecule amorfe). De asemenea, se observă că termenul "substanţial cristalin" include descriptorul "cristalin", care se referă la materiale care sunt 100% în formă cristalină.
Aşa cum este utilizat în conţinut, o formă cristalină este "substanţial pură" atunci când reprezintă o cantitate în greutate egală sau mai mare de 90% din suma tuturor formelor solide dintr-o probă, determinată printr-o metodă conformă cu stadiul tehnicii, cum ar fi XRPD cantitativ. În unele variante de realizare, forma solidă este "substanţial pură" atunci când reprezintă o cantitate în greutate egală sau mai mare de 95% din suma tuturor formelor solide dintr-o probă. În unele variante de realizare, forma solidă este "substanţial pură" atunci când reprezintă o cantitate în greutate egală sau mai mare de 99% din suma tuturor formelor solide dintr-o probă. De asemenea, se observă că termenul "substanţial pur" include descriptorul "pur", care se referă la materiale care sunt 100% pure.
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "XRPD" se referă la metoda de caracterizare analitică a difracţiei de raze X pe pulbere. Modelele XRPD descrise în conţinut au fost înregistrate în condiţii ambientale în geometrie de transmisie sau reflexie utilizând un difractometru.
În sensul prezentului document, termenul "condiţii ambientale" semnifică temperatura camerei, condiţii de aer liber şi condiţii de umiditate necontrolată. Termenii "temperatura camerei" şi "temperatura ambientală" semnifică între 15 °C şi 30 °C.
Aşa cum sunt utilizaţi în conţinut, termenii "difractogramă de raze X pe pulbere", "model de difracţie de raze X pe pulbere", "model XRPD", "spectru XRPD" se referă interschimbabil la un model obţinut experimental care reprezintă poziţiile semnalului (pe abscisă) în funcţie de intensităţile semnalului (pe ordonată). Pentru un material amorf, o difractogramă de raze X pe pulbere poate include unul sau mai multe semnale largi; iar pentru un material cristalin, o difractogramă de raze X pe pulbere poate include unul sau mai multe semnale, fiecare identificat prin valoarea sa unghiulară măsurată în grade 2θ (° 2θ), reprezentată pe abscisa unei difractograme de raze X pe pulbere, care poate fi exprimată ca "un semnal la ... grade doi-theta", "un semnal la [o] valoare (valori) doi-theta de ... " şi/sau "un semnal la cel puţin ... valoare (i) doi-theta selectată dintre ... ".
Un "semnal" sau "vârf", aşa cum este folosit în conţinut, se referă la un punct din modelul XRPD unde intensitatea măsurată în numărătoare este la un maxim local. Un specialist în domeniu ar recunoaşte faptul că unul sau mai multe semnale (sau vârfuri) dintr-un model XRPD se pot suprapune şi, de exemplu, pot să nu fie evidente cu ochiul liber. Într-adevăr, o persoană de specialitate în domeniu ar recunoaşte faptul că unele metode recunoscute în domeniu sunt capabile şi adecvate pentru a determina dacă un semnal există într-un model, cum ar fi rafinarea Rietveld.
Aşa cum este folosit în conţinut, "un semnal la ... grade doi-teta" se referă la poziţiile de reflexie a razelor X, aşa cum sunt măsurate şi observate în experimentele de difracţie cu raze X pe pulbere (° 2θ).
Repetabilitatea valorilor unghiulare măsurate este în intervalul ±0,2° 2θ, adică valoarea unghiulară poate fi la valoarea unghiulară indicată + 0,2 grade 2-theta, valoarea unghiulară - 0,2 grade 2-theta sau orice valoare între aceste două puncte finale (valoare unghiulară +0,2 grade 2-theta şi valoare unghiulară -0,2 grade 2-theta).
Termenii "intensităţi ale semnalului" şi "intensităţi ale vârfurilor" se referă interschimbabil la intensităţile relative ale semnalului dintr-o anumită difractogramă de raze X pe pulberi. Factorii care pot afecta intensităţile relative ale semnalului sau ale vârfurilor includ grosimea probei şi orientarea preferată (de exemplu, particulele cristaline nu sunt distribuite aleatoriu).
Aşa cum este utilizată în conţinut, o difractogramă cu raze X pe pulbere este "substanţial similară cu cea dintr-o [anumită] Figură" atunci când cel puţin 90%, cum ar fi cel puţin 95%, cel puţin 98% sau cel puţin 99%, din semnalele din cele două difractograme se suprapun. În determinarea "similarităţii substanţiale", o persoană de specialitate în domeniu va înţelege faptul că pot exista variaţii ale intensităţilor şi/sau poziţiilor semnalului în difractogramele XRPD chiar şi pentru aceeaşi formă cristalină. Astfel, persoanele de specialitate în domeniu vor înţelege faptul că valorile maxime ale semnalului în difractogramele XRPD (în grade doi-teta) semnifică, în general, faptul că valoarea este identificată ca ±0,2 grade doi-theta din valoarea raportată, o varianţă recunoscută în domeniu.
Aşa cum este utilizat în conţinut, un spectru de rezonanţă magnetică nucleară în stare solidă (SSRMN) este "substanţial similar cu cel dintr-o [anumită] Figură" atunci când cel puţin 90%, cum ar fi cel puţin 95%, cel puţin 98% sau cel puţin 99%, din semnalele din cele două spectre se suprapun. În determinarea "similarităţii substanţiale", o persoană de specialitate în domeniu va înţelege faptul că pot exista variaţii ale intensităţilor şi/sau poziţiilor semnalului în spectrele SSRMN chiar şi pentru aceeaşi formă cristalină. Astfel, persoanele de specialitate în domeniu vor înţelege faptul că deplasările chimice din spectrele SSRMN (în părţi per milion (ppm) menţionate în conţinut) semnifică, în general, că valoarea este identificată ca ± 0,2 ppm din valoarea raportată, o varianţă recunoscută în domeniu.
Termenul "difractogramă cu raze X pe pulbere având un semnal la ... valori de doi teta", aşa cum este utilizat în conţinut, se referă la un model XRPD care conţine poziţiile de reflexie a razelor X, aşa cum sunt măsurate şi observate în experimentele de difracţie cu raze X pe pulbere (°doi teta).
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "DSC" se referă la metoda analitică a calorimetriei diferenţiale cu scanare.
Aşa cum este folosit în conţinut, termenul "debutul descompunerii" se referă la punctul de intersecţie dintre linia de bază înainte de tranziţie şi tangenta de interflecţie.
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "temperatură de tranziţie vitroasă" sau "Tg" se referă la temperatura peste care un solid amorf "sticlos" dur şi fragil devine vâscos sau cauciucat.
Aşa cum este utilizat în conţinut, termenul "TGA" se referă la metoda analitică de analiză termogravimetrică (sau termogravimetrică).
Descrierea Detaliată a Variantelor de Realizare
Pe lângă Compuşii cu Formula I, I, şi I", sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora şi derivaţii deuteraţi ai acestor compuşi şi săruri, invenţia furnizează compuşi cu Formulele I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora, acceptabili farmaceutic.
De exemplu, în unele variante de realizare, compusul cu Formula I este selectat dintre Compuşii cu Formula Ia:
şi derivaţi deuteraţi şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora, în care:
X este selectat dintre -O-, -S-, -SO- şi -SO2-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O-, -CO- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1, -CO2RY1, -CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două exemple de RY pe acelaşi atom sunt luate împreună pentru a forma un ciclu selectat dintre C3-C8 cicloalchil şi heterociclil cu 3 până la 6 membri; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi;
fiecare RY1 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil, sau două exemple de RY1 legate de acelaşi atom de azot luate împreună formează un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
Ciclul B este selectat dintre:
▪ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, C1-C6 alchil şi C1-C6 alcoxi),
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri şi
▪ heterociclil cu 3 până la 6 membri (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil);
fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C1-C6 alchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ oxo,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi -OCF3), şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C3-C8 cicloalchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, -NH2 şi -NHCOMe),
∘ C1-C6 alcoxi,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil) şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi),
∘ C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-4 grupări selectate independent dintre:
▪ halogen,
▪ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu CF3),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, CF3, OCF3 şi C1-C6 alchil) şi
∘ C6-C10 aril,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 CF3 grupuri), şi
heterociclil cu 3 până la 10 membri,
▪ heterociclil cu 3 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre oxo şi C3-C8 cicloalchil) şi
∘ oxo;
fiecare R1 este selectat independent dintre halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen), -OR2, -N(R2)2, -CO2R2, -CO-N(R2)2, -CN, fenil, benzil, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil, C3-C8 cicloalchil, heteroaril cu 5 până la 6 membri, heterociclil cu 3 până la 6 membri, -SO2R2, -SR2, -SOR2, -PO(OR2)2 şi -PO(R2)2;
fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen);
Z este selectat din
RZ1 este selectat dintre hidrogen, -CN, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen sau 1-3 hidroxi), heterociclil cu 3 până la 6 membri, cicloalchil cu 3 până la 6 membri, aril cu 5 până la 6 membri şi heteroaril cu 5 până la 6 membri;
RZ2 este selectat dintre hidrogen, halogen şi hidroxi sau RZ1 şi RZ2 luaţi împreună formează o grupare selectată dintre oxo şi =N-OH;
fiecare RZ3 este selectat independent dintre hidroxi, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil şi C6-C10 aril; sau două exemple de RZ3 sunt luate împreună pentru a forma un heterociclil cu 3 până la 6 membri; şi
n este selectat dintre 4, 5, 6 şi 7.
În unele variante de realizare, X în Formula Ia este -O-.
În unele variante de realizare, fiecare Y în Formula Ia este selectat independent dintre -C(RY)2-, -CO- şi
în care RY şi Ciclul B sunt aşa cum sunt definite pentru Formula Ia.
În unele variante de realizare, fiecare Y în Formula Ia este -C(RY)2-, în care RY este aşa cum este definit pentru Formula Ia.
În unele variante de realizare, fiecare RY în Formula Ia este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q) şi -ORY1, în care Q şi RY1 sunt aşa cum sunt definite pentru Formula Ia.
În unele variante de realizare, fiecare RY în Formula Ia este selectat independent dintre:
hidrogen,
În unele variante de realizare, fiecare Q în Formula Ia este selectat independent dintre:
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi C1-C6 alchil.
În unele variante de realizare, fiecare Q în Formula Ia este selectat independent dintre:
În unele variante de realizare, Ciclul B în Formula Ia este selectat din C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen.
În unele variante de realizare, Ciclul B în Formula Ia este selectat dintre:
În unele variante de realizare, -(Y)n.- în Formula Ia este un grup selectat dintre:
şi
În unele variante de realizare, fiecare R1 în Formula Ia este independent C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen) şi -N(R2)2, în care R2 este aşa cum este definit pentru Formula Ia. În unele variante de realizare, fiecare R1 în Formula Ia este selectat independent din -CF3 şi -N(R2)2, în care R2 este aşa cum este definit pentru Formula Ia.
În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formula Ia este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen). În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formula Ia este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil. În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formula Ia este hidrogen.
În unele variante de realizare, Z în Formula Ia este
în care RZ1 şi RZ2 sunt aşa cum sunt definite pentru Formula Ia.
În unele variante de realizare, RZ1 în Formula Ia este selectat din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate dintre halogen). În unele variante de realizare, RZ1 în Formula Ia este -CF3.
În unele variante de realizare, RZ2 în Formula Ia este hidroxi.
În unele variante de realizare, n în Formula Ia este selectat dintre 4, 5 şi 6. În unele variante de realizare, n în Formula Ia este 6.
În unele variante de realizare, compusul cu Formula I este selectat dintre Compuşii cu Formulele IIa, IIb, şi IIc:
şi derivaţi deuteraţi şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora,
în care:
X este selectat dintre -O-, -S-, -SO- şi -SO2-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O-, -CO- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1, -CO2RY1, -CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două exemple de RY pe acelaşi atom sunt luate împreună pentru a forma un ciclu selectat dintre C3-C8 cicloalchil şi heterociclil cu 3 până la 6 membri; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi;
fiecare RY1 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil, sau două exemple de RY1 legate de acelaşi atom de azot luate împreună formează un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
Ciclul B este selectat dintre:
▪ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, C1-C6 alchil şi C1-C6 alcoxi),
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri şi
▪ heterociclil cu 3 până la 6 membri (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil);
fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C1-C6 alchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ oxo,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi -OCF3), şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C3-C8 cicloalchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, -NH2 şi -NHCOMe),
∘ C1-C6 alcoxi,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil) şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi),
∘ C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-4 grupări selectate independent dintre:
▪ halogen,
▪ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu CF3),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, CF3, OCF3 şi C1-C6 alchil) şi
∘ C6-C10 aril,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări CF3), şi
heterociclil cu 3 până la 10 membri,
▪ heterociclil cu 3 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre oxo şi C3-C8 cicloalchil) şi
∘ oxo;
fiecare R1 este selectat independent dintre halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen), -OR2, -N(R2)2, -CO2R2, -CO-N(R2)2, -CN, fenil, benzil, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil, C3-C8 cicloalchil, heteroaril cu 5 până la 6 membri, heterociclil cu 3 până la 6 membri, -SO2R2, -SR2, -SOR2, -PO(OR2)2 şi -PO(R2)2;
fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen);
Z este selectat din
RZ1 este selectat dintre hidrogen, -CN, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen sau 1-3 hidroxi), heterociclil cu 3 până la 6 membri, cicloalchil cu 3 până la 6 membri, aril cu 5 până la 6 membri şi heteroaril cu 5 până la 6 membri;
RZ2 este selectat dintre hidrogen, halogen şi hidroxi sau RZ1 şi RZ2 luaţi împreună formează o grupare selectată dintre oxo şi =N-OH;
fiecare RZ3 este selectat independent dintre hidroxi, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil şi C6-C10 aril; sau două exemple de RZ3 sunt luate împreună pentru a forma un heterociclil cu 3 până la 6 membri; şi
m este selectat dintre 0, 1, 2 şi 3.
În unele variante de realizare, m în Formulele IIa, IIb OR IIc este selectat dintre 1 şi 2. În unele variante de realizare, m în Formulele IIa, IIb OR IIc este 2.
În unele variante de realizare, compusul cu Formula I este selectat dintre Compuşii cu Formulele IId, IIe, şi IIf:
şi derivaţi deuteraţi şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora,
în care:
X este selectat dintre -O-, -S-, -SO- şi -SO2-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O-, -CO- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1, -CO2RY1, -CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două exemple de RY pe acelaşi atom sunt luate împreună pentru a forma un ciclu selectat dintre C3-C8 cicloalchil şi heterociclil cu 3 până la 6 membri; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi;
fiecare RY1 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil, sau două exemple de RY1 legate de acelaşi atom de azot luate împreună formează un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
Ciclul B este selectat dintre:
▪ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, C1-C6 alchil şi C1-C6 alcoxi),
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri şi
▪ heterociclil cu 3 până la 6 membri (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil);
fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C1-C6 alchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ oxo,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi -OCF3), şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C3-C8 cicloalchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, -NH2 şi -NHCOMe),
∘ C1-C6 alcoxi,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil) şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi),
∘ C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-4 grupări selectate independent dintre:
▪ halogen,
▪ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu CF3),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, CF3, OCF3 şi C1-C6 alchil) şi
∘ C6-C10 aril,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări CF3), şi
heterociclil cu 3 până la 10 membri,
▪ heterociclil cu 3 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre oxo şi C3-C8 cicloalchil) şi
∘ oxo;
fiecare R1 este selectat independent dintre halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen), -OR2, -N(R2)2, -CO2R2, -CO-N(R2)2, -CN, fenil, benzil, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil, C3-C8 cicloalchil, heteroaril cu 5 până la 6 membri, heterociclil cu 3 până la 6 membri, -SO2R2, -SR2, -SOR2, -PO(OR2)2 şi -PO(R2)2;
fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen);
Z este selectat din
RZ1 este selectat dintre hidrogen, -CN, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen sau 1-3 hidroxi), heterociclil cu 3 până la 6 membri, cicloalchil cu 3 până la 6 membri, aril cu 5 până la 6 membri şi heteroaril cu 5 până la 6 membri;
RZ2 este selectat dintre hidrogen, halogen şi hidroxi sau RZ1 şi RZ2 luate împreună formează o grupare selectată dintre oxo şi =N-OH; şi
fiecare RZ3 este selectat independent dintre hidroxi, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil şi C6-C10 aril; sau două exemple de RZ3 sunt luate împreună pentru a forma un heterociclil cu 3 până la 6 membri.
În unele variante de realizare, X în Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf este -O-.
În unele variante de realizare, fiecare Y în Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf este selectat independent dintre -C(RY)2-, -CO- şi
în care RY şi Ciclul B este aşa cum este definit pentru Formule IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf.
În unele variante de realizare, fiecare Y în Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf este -C(RY)2-, în care RY este aşa cum este definit pentru Formule IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf.
În unele variante de realizare, fiecare RY în Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q) şi -ORY1, în care Q şi RY1 sunt aşa cum sunt definite pentru Formule IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf.
În unele variante de realizare, fiecare RY în Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf este selectat independent dintre:
hidrogen,
în care Q este aşa cum este definit pentru Formule IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf.
În unele variante de realizare, fiecare Q în Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf este selectat independent dintre:
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi C1-C6 alchil.
În unele variante de realizare, fiecare Q în Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf este selectat independent dintre:
În unele variante de realizare, Ciclul B în Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf este selectat din C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen.
În unele variante de realizare, Ciclul B în Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf este selectat dintre:
În unele variante de realizare, fiecare R1 în Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf este independent C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen) şi -N(R2)2 în care R2 este aşa cum este definit pentru Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf. În unele variante de realizare, fiecare R1 în Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf este selectat independent din -CF3 şi -N(R2)2 în care R2 este aşa cum este definit pentru Formule IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf.
În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen). În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe sau IIIf este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil. În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf este hidrogen.
În unele variante de realizare, Z în Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf este
în care RZ1 şi RZ2 sunt aşa cum sunt definite pentru Formule IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf.
În unele variante de realizare, RZ1 în Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf este selectat din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate dintre halogen). În unele variante de realizare, RZ1 în Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf este -CF3.
În unele variante de realizare, RZ2 în Formulele IIa, IIb, IIc, IId, IIe, sau IIf este hidroxi.
În unele variante de realizare, compusul cu Formula I este selectat dintre Compuşii cu Formulele IIIa, IIIb, şi IIIc:
şi derivaţi deuteraţi şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora,
în care:
X este selectat dintre -O-, -S-, -SO- şi -SO2-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O-, -CO- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1, -CO2RY1, -CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două exemple de RY pe acelaşi atom sunt luate împreună pentru a forma un ciclu selectat dintre C3-C8 cicloalchil şi heterociclil cu 3 până la 6 membri; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi;
fiecare RY1 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil, sau două exemple de RY1 legate de acelaşi atom de azot luate împreună formează un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
Ciclul B este selectat dintre:
▪ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, C1-C6 alchil şi C1-C6 alcoxi),
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri şi
▪ heterociclil cu 3 până la 6 membri (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil);
fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C1-C6 alchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ oxo,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi -OCF3), şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C3-C8 cicloalchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, -NH2 şi -NHCOMe),
∘ C1-C6 alcoxi,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil) şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi),
∘ C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-4 grupări selectate independent dintre:
▪ halogen,
▪ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu CF3),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, CF3, OCF3 şi C1-C6 alchil) şi
∘ C6-C10 aril,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări CF3), şi
heterociclil cu 3 până la 10 membri,
▪ heterociclil cu 3 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre oxo şi C3-C8 cicloalchil) şi
∘ oxo;
fiecare R1 este selectat independent dintre halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen), -OR2, -N(R2)2, -CO2R2, -CO-N(R2)2, -CN, fenil, benzil, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil, C3-C8 cicloalchil, heteroaril cu 5 până la 6 membri, heterociclil cu 3 până la 6 membri, -SO2R2, -SR2, -SOR2, -PO(OR2)2 şi -PO(R2)2;
fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen);
Z este selectat din
RZ1 este selectat dintre hidrogen, -CN, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen sau 1-3 hidroxi), heterociclil cu 3 până la 6 membri, cicloalchil cu 3 până la 6 membri, aril cu 5 până la 6 membri şi heteroaril cu 5 până la 6 membri;
RZ2 este selectat dintre hidrogen, halogen şi hidroxi sau RZ1 şi RZ2 luaţi împreună formează o grupare selectată dintre oxo şi =N-OH;
fiecare RZ3 este selectat independent dintre hidroxi, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil şi C6-C10 aril; sau două exemple de RZ3 sunt luate împreună pentru a forma un heterociclil cu 3 până la 6 membri; şi
m. este selectat dintre 0, 1, 2 şi 3.
În unele variante de realizare, m în Formulele IIIa, IIIb sau IIIc este selectat dintre 1 şi 2. În unele variante de realizare, m în Formulele IIIa, IIIb, şi IIIc este 2.
În unele variante de realizare, compusul cu Formula I este selectat dintre compuşii cu Formulele IIId, IIIe, şi IIIf:
şi derivaţi deuteraţi şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora,
în care:
X este selectat dintre -O-, -S-, -SO- şi -SO2-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O-, -CO- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1, -CO2RY1, -CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două exemple de RY pe acelaşi atom sunt luate împreună pentru a forma un ciclu selectat dintre C3-C8 cicloalchil şi heterociclil cu 3 până la 6 membri; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi;
fiecare RY1 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil, sau două exemple de RY1 legate de acelaşi atom de azot luate împreună formează un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
Ciclul B este selectat dintre:
▪ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, C1-C6 alchil şi C1-C6 alcoxi),
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri şi
▪ heterociclil cu 3 până la 6 membri (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil);
fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C1-C6 alchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ oxo,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi -OCF3), şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C3-C8 cicloalchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, -NH2 şi -NHCOMe),
∘ C1-C6 alcoxi,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil) şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi),
∘ C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-4 grupări selectate independent dintre:
▪ halogen,
▪ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu CF3),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, CF3, OCF3 şi C1-C6 alchil) şi
∘ C6-C10 aril,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări CF3), şi
heterociclil cu 3 până la 10 membri,
▪ heterociclil cu 3 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre oxo şi C3-C8 cicloalchil) şi
∘ oxo;
fiecare R1 este selectat independent dintre halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen), -OR2, -N(R2)2, -CO2R2, -CO-N(R2)2, -CN, fenil, benzil, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil, C3-C8 cicloalchil, heteroaril cu 5 până la 6 membri, heterociclil cu 3 până la 6 membri, -SO2R2, -SR2, -SOR2, -PO(OR2)2 şi -PO(R2)2;
fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen);
Z este selectat din
RZ1 este selectat dintre hidrogen, -CN, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen sau 1-3 hidroxi), heterociclil cu 3 până la 6 membri, cicloalchil cu 3 până la 6 membri, aril cu 5 până la 6 membri şi heteroaril cu 5 până la 6 membri;
RZ2 este selectat dintre hidrogen, halogen şi hidroxi sau RZ1 şi RZ2 luaţi împreună formează o grupare selectată dintre oxo şi =N-OH;
fiecare RZ3 este selectat independent dintre hidroxi, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil şi C6-C10 aril; sau două exemple de RZ3 sunt luate împreună pentru a forma un heterociclil cu 3 până la 6 membri.
În unele variante de realizare, X în Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf este -O-.
În unele variante de realizare, fiecare Y în Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf este selectat independent dintre -C(RY)2-, -CO- şi
în care RY şi Ciclul B aşa cum este definit pentru Formule IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf.
În unele variante de realizare, fiecare Y în Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf este -C(RY)2-, în care RY este aşa cum este definit pentru Formule IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf.
În unele variante de realizare, fiecare RY în Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q ) şi -ORY1, în care Q şi RY1 sunt aşa cum sunt definite pentru Formule IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf.
În unele variante de realizare, fiecare RY în Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf este selectat independent dintre:
hidrogen,
în care Q este aşa cum este definit pentru Formule IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf.
În unele variante de realizare, fiecare Q în Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf este selectat independent dintre:
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi C1-C6 alchil.
În unele variante de realizare, fiecare Q în Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf este selectat independent dintre:
În unele variante de realizare, Ciclul B în Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf este selectat din C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen.
În unele variante de realizare, Ciclul B în Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf este selectat dintre:
În unele variante de realizare, fiecare R1 în Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf este independent C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen) şi -N(R2)2, în care R2 este aşa cum este definit pentru Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf. În unele variante de realizare, fiecare R1 în Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf este selectat independent din -CF3 şi -N(R2)2, în care R2 este aşa cum este definit pentru Formule IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf.
În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen). În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil.
În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf este hidrogen.
În unele variante de realizare, Z în Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf este
în care Z este aşa cum este definit pentru Formule IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf.
În unele variante de realizare, RZ1 în Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf este selectat din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate dintre halogen). În unele variante de realizare, RZ1 în Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf este -CF3.
În unele variante de realizare, RZ2 în Formulele IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, sau IIIf este hidroxi.
În unele variante de realizare, compusul cu Formula I este selectat dintre compuşii cu Formula I:
şi derivaţi deuteraţi şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora,
în care:
X este selectat dintre -O-, -S-, -SO- şi -SO2-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O-, -CO- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C3-C8 cicloalchil, C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1,-CO2RY1,-CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două exemple de RY pe acelaşi atom sunt luate împreună pentru a forma un ciclu selectat dintre C3-C8 cicloalchil şi heterociclil cu 3 până la 6 membri; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi;
fiecare RY1 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil, sau două exemple de RY1 legate de acelaşi atom de azot luate împreună formează un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
Ciclul B este selectat dintre:
▪ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, C1-C6 alchil şi C1-C6 alcoxi),
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri şi
▪ heterociclil cu 3 până la 6 membri (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil);
fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C1-C6 alchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ oxo,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi -OCF3), şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C3-C8 cicloalchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, -NH2 şi -NHCOMe),
∘ C1-C6 alcoxi,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil) şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi),
∘ C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-4 grupări selectate independent dintre:
▪ halogen,
▪ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu CF3),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, CF3, OCF3 şi C1-C6 alchil) şi
∘ C6-C10 aril,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări CF3), şi
heterociclil cu 3 până la 10 membri,
▪ heterociclil cu 3 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre oxo şi C3-C8 cicloalchil) şi
∘ oxo;
fiecare R1 este selectat independent dintre halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi), -OR2, -N(R2)2, -CO2R2, -CO-N(R2)2, -CN, fenil, benzil, C1-C6 alcoxi, C3-C8 cicloalchil, heteroaril cu 5 până la 6 membri, heterociclil cu 3 până la 6 membri, -SO2R2, -SR2, -SOR2, -PO(OR2)2 şi -PO(R2)2;
fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dint
re halogen);
RZ1 este selectat dintre hidrogen, -CN, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen sau 1-3 hidroxi), heterociclil cu 3 până la 6 membri, cicloalchil cu 3 până la 6 membri, aril cu 5 până la 6 membri şi heteroaril cu 5 până la 6 membri;
RZ2 este selectat dintre hidrogen, halogen şi hidroxi sau RZ1 şi RZ2 luaţi împreună formează o grupare selectată dintre oxo şi =N-OH;
n este selectat dintre 4, 5, 6, 7 şi 8; şi
m este selectat dintre 0, 1, 2 şi 3.
În unele variante de realizare, X în Formula I‴ este -O-.
În unele variante de realizare, fiecare RY în Formula I‴ este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C3-C8 cicloalchil şi -ORY1, unde Q şi RY1 sunt aşa cum sunt definite pentru Formula I"'. În unele variante de realizare, -ORY1 în Formula I‴ este -OH.
În unele variante de realizare, fiecare Q în Formula I‴ este selectat independent din C3-Cs cicloalchil şi C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi C1-C6 alchil. În unele variante de realizare, fiecare Q în Formula I‴ este selectat independent dintre:
În unele variante de realizare, fiecare RY în Formula I‴ este selectat independent dintre:
hidrogen, fluor,
În unele variante de realizare, Ciclul B în Formula I‴ este selectat din C3-C8 cicloalchil şi fenil opţional substituiţi cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen. În unele variante de realizare, Ciclul B în Formula I‴ este selectat dintre:
În unele variante de realizare, n. în Formula I‴ este selectat dintre 4, 5 şi 6.
În unele variante de realizare, -(Y)n.- în Formula I‴ este un grup selectat dintre:
În unele variante de realizare, fiecare R1 în Formula I‴ este selectat independent din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi), -N(R2)2 şi -CO2R2, în care R2 este aşa cum este definit pentru Formula I‴. În unele variante de realizare, fiecare R1 în Formula I‴ este selectat independent din -CF3, -NH2, -NH(CH2CH3), CO2H şi CH2OH.
În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formula I‴ este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil.
În unele variante de realizare, RZ1 în Formula I‴ este selectat dintre hidrogen şi C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate dintre halogen). În unele variante de realizare, RZ1 în Formula I‴ este -CF3.
În unele variante de realizare, RZ2 în Formula I‴ este hidroxi.
În unele variante de realizare, RZ1 în Formula I‴ este C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate dintre halogen) şi RZ2 în Formula I‴ este hidroxi. În unele variante de realizare, RZ1 în Formula I‴ este -CF3 şi RZ2 în Formula I‴ este hidroxi.
În unele variante de realizare, m. în Formula I‴ este selectat dintre 1 şi 2.
În unele variante de realizare, compusul cu Formula I este selectat dintre Compuşii cu Formula a II-a':
şi derivaţi deuteraţi şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora,
în care:
X este selectat dintre -O-, -S-, -SO- şi -SO2-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O-, -CO- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1, -CO2RY1, -CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două exemple de RY pe acelaşi atom sunt luate împreună pentru a forma un ciclu selectat dintre C3-C8 cicloalchil şi heterociclil cu 3 până la 6 membri; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi;
fiecare RY1 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil, sau două exemple de RY1 legate de acelaşi atom de azot luate împreună formează un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
Ciclul B este selectat dintre:
▪ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, C1-C6 alchil şi C1-C6 alcoxi),
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri şi
▪ heterociclil cu 3 până la 6 membri (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil);
fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C1-C6 alchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ oxo,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi -OCF3), şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C3-C8 cicloalchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, -NH2 şi -NHCOMe),
∘ C1-C6 alcoxi,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil) şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi),
∘ C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-4 grupări selectate independent dintre:
▪ halogen,
▪ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu CF3),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, CF3, OCF3 şi C1-C6 alchil) şi
∘ C6-C10 aril,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu grupări 1-3 CF3), şi
heterociclil cu 3 până la 10 membri,
▪ heterociclil cu 3 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre oxo şi C3-C8 cicloalchil) şi
∘ oxo;
fiecare R1 este selectat independent dintre halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen), -OR2, -N(R2)2, -CO2R2, -CO-N(R2)2, -CN, fenil, benzil, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil, C3-C8 cicloalchil, heteroaril cu 5 până la 6 membri, heterociclil cu 3 până la 6 membri, -SO2R2, -SR2, -SOR2, -PO(OR2)2 şi -PO(R2)2;
fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen);
RZ1 este selectat dintre hidrogen, -CN, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen sau 1-3 hidroxi), heterociclil cu 3 până la 6 membri, cicloalchil cu 3 până la 6 membri, aril cu 5 până la 6 membri şi heteroaril cu 5 până la 6 membri;
RZ2 este selectat dintre hidrogen, halogen şi hidroxi sau RZ1 şi RZ2 luate împreună formează o grupare selectată dintre oxo şi =N-OH; şi
m este selectat dintre 0, 1, 2 şi 3.
În unele variante de realizare, m în Formula IIa' este selectat dintre 1 şi 2. În unele variante de realizare, m în Formula IIa' este 2.
În unele variante de realizare, X în Formula IIa' este -O-.
În unele variante de realizare, fiecare Y în Formula IIa' este selectat independent dintre -C(RY)2-, -CO- şi
în care RY şi Ciclul B sunt aşa cum sunt definite pentru Formula IIa'.
În unele variante de realizare, fiecare Y în Formula IIa' este -C(RY)2-, în care RY este aşa cum este definit pentru Formula IIa'.
În unele variante de realizare, fiecare RY în Formula IIa' este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q) şi -ORY1 în care Q şi RY 1 sunt aşa cum sunt definite pentru Formula IIa'.
În unele variante de realizare, fiecare RY în Formula IIa' este selectat independent dintre:
hidrogen,
în care Q este aşa cum este definit pentru Formula IIa'.
În unele variante de realizare, fiecare Q în Formula IIa' este selectat independent dintre:
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi C1-C6 alchil.
În unele variante de realizare, fiecare Q în Formula IIa' este selectat independent dintre:
În unele variante de realizare, Ciclul B în Formula IIa' este selectat din C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen.
În unele variante de realizare, Ciclul B în Formula IIa' este selectat dintre:
În unele variante de realizare, fiecare R1 în Formula IIa' este independent C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen) şi -N(R2)2 în care R2 este aşa cum este definit pentru Formula IIa'. În unele variante de realizare, fiecare R1 în Formula IIa' este selectat independent din -CF3 şi -N(R2)2 în care R2 este aşa cum este definit pentru Formula IIa'.
În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formula IIa' este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen). În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formula IIa' este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil. În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formula IIa' este hidrogen.
În unele variante de realizare, RZ1 în Formula IIa' este selectat din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate dintre halogen). În unele variante de realizare, RZ1 în Formula IIa' este -CF3.
În unele variante de realizare, RZ2 în Formula IIa' este hidroxi.
În unele variante de realizare, RZ1 în Formula IIa' este C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate dintre halogen) şi RZ2 în Formula IIa' este hidroxi. În unele variante de realizare, RZ1 în Formula IIa' este -CF3 şi RZ2 în Formula IIa' este hidroxi.
În unele variante de realizare, compusul cu Formula I este selectat dintre Compuşii cu Formula IIIa':
şi derivaţi deuteraţi şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora,
în care:
X este selectat dintre -O-, -S-, -SO- şi -SO2-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O-, -CO- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1, -CO2RY1, -CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două exemple de RY pe acelaşi atom sunt luate împreună pentru a forma un ciclu selectat dintre C3-C8 cicloalchil şi heterociclil cu 3 până la 6 membri; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi;
fiecare RY1 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil, sau două exemple de RY1 legate de acelaşi atom de azot luate împreună formează un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
Ciclul B este selectat dintre:
▪ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, C1-C6 alchil şi C1-C6 alcoxi),
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri şi
▪ heterociclil cu 3 până la 6 membri (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil);
fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C1-C6 alchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ oxo,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi -OCF3), şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C3-C8 cicloalchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, -NH2 şi -NHCOMe),
∘ C1-C6 alcoxi,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil) şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi),
∘ C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-4 grupări selectate independent dintre:
▪ halogen,
▪ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu CF3),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, CF3, OCF3 şi C1-C6 alchil) şi
∘ C6-C10 aril,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări CF3), şi
heterociclil cu 3 până la 10 membri,
▪ heterociclil cu 3 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre oxo şi C3-C8 cicloalchil) şi
∘ oxo;
fiecare R1 este selectat independent dintre halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen), -OR2, -N(R2)2, -CO2R2, -CO-N(R2)2, -CN, fenil, benzil, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil, C3-C8 cicloalchil, heteroaril cu 5 până la 6 membri, heterociclil cu 3 până la 6 membri, -SO2R2, -SR2, -SOR2, -PO(OR2)2 şi -PO(R2)2;
fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen);
RZ1 este selectat dintre hidrogen, -CN, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen sau 1-3 hidroxi), heterociclil cu 3 până la 6 membri, cicloalchil cu 3 până la 6 membri, aril cu 5 până la 6 membri şi heteroaril cu 5 până la 6 membri;
RZ2 este selectat dintre hidrogen, halogen şi hidroxi sau RZ1 şi RZ2 luate împreună formează o grupare selectată dintre oxo şi =N-OH; şi
m este selectat dintre 0, 1, 2 şi 3.
În unele variante de realizare, X în Formula IIIa' este -O-.
În unele variante de realizare, fiecare Y în Formula IIIa' este selectat independent dintre -C(RY)2-, -CO- şi
în care RY şi Ciclul B aşa cum este definit pentru Formula A III'.
În unele variante de realizare, fiecare Y în Formula IIIa' este -C(RY)2-, în care RY este aşa cum este definit pentru Formula IIIa'.
În unele variante de realizare, fiecare RY în Formula IIIa' este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q) şi -ORY 1 în care Q şi RY 1 sunt aşa cum sunt definite pentru Formula IIIa'.
În unele variante de realizare, fiecare RY în Formula IIIa' este selectat independent dintre:
hidrogen,
în care Q este aşa cum este definit pentru Formula IIIa'.
În unele variante de realizare, fiecare Q în Formula IIIa' este selectat independent dintre:
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi C1-C6 alchil.
În unele variante de realizare, fiecare Q în Formula IIIa' este selectat independent dintre:
În unele variante de realizare, Ciclul B în Formula IIIa' este selectat din C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen.
În unele variante de realizare, Ciclul B în Formula IIIa' este selectat dintre:
În unele variante de realizare, fiecare R1 în Formula IIIa' este independent C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen) şi -N(R2)2, în care R2 este aşa cum este definit pentru Formula A III'. În unele variante de realizare, fiecare R1 în Formula IIIa' este selectat independent din -CF3 şi -N(R2)2, în care R2 este aşa cum este definit pentru Formula IIIa'.
În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formula IIIa' este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen). În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formula IIIa' este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil.
În unele variante de realizare, fiecare R2 în Formula IIIa' este hidrogen.
În unele variante de realizare, RZ1 în Formula IIIa' este selectat din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate dintre halogen). În unele variante de realizare, RZ1 în Formula IIIa' este -CF3.
În unele variante de realizare, RZ2 în Formula IIIa' este hidroxi.
În unele variante de realizare, RZ1 în Formula IIIa' este C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate dintre halogen) şi RZ2 în Formula IIIa' este hidroxi. În unele variante de realizare, RZ1 în Formula IIIa' este -CF3 şi RZ2 în Formula IIIa' este hidroxi.
Compuşii conform invenţiei includ Compuşii 1-53 şi 54-77, precum şi derivaţi deuteraţi şi săruri acceptabile farmaceutic ale acestora.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Enantiomer 2 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 diastereomer 1
Referinţele la metodele de tratament din paragrafele următoare ale acestei descrieri trebuie interpretate ca referinţe la compuşii, compoziţiile farmaceutice şi medicamentele prezentei invenţii pentru utilizare într-o metodă de tratament a corpului uman (sau animal) prin terapie (sau pentru diagnostic).
Metode de Tratament
Oricare dintre Compuşii noi descrişi în conţinut, cum ar fi, de exemplu, Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77, sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora şi derivaţii deuteraţi ai acestor compuşi şi săruri pot acţiona ca un modulator CFTR, adică modulează activitatea CFTR în organism. Persoanele care suferă de o mutaţie în gena care codifică CFTR pot beneficia de primirea unui modulator CFTR. O mutaţie CFTR poate afecta cantitatea de CFTR, adică numărul de canale CFTR de la suprafaţa celulei, sau poate afecta funcţia CFTR, adică capacitatea funcţională a fiecărui canal de a deschide şi transporta ioni. Mutaţiile care afectează cantitatea de CFTR includ mutaţii care provoacă sinteză defectuoasă (defect de clasa I), mutaţii care provoacă procesare şi trafic defectuos (defect de clasa II), mutaţii care provoacă sinteză redusă a CFTR (defect de clasa V) şi mutaţii care reduc stabilitatea suprafeţei CFTR (defect de clasa VI). Mutaţiile care afectează funcţia CFTR includ mutaţii care provoacă activare defectuoasă (defect de clasa III) şi mutaţii care provoacă conductanţă defectuoasă (defect de clasa IV). Unele mutaţii CFTR prezintă caracteristici ale mai multor clase. Anumite mutaţii ale genei CFTR duc la fibroză chistică.
Astfel, în unele variante de realizare, invenţia furnizează metode de tratare, reducere a severităţii sau tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient, cuprinzând administrarea la un pacient a unei cantităţi eficiente din oricare dintre compuşii noi descrişi în conţinut, cum ar fi, de exemplu, compuşii cu Formulele I, I', I", I‴,Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77, sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora şi/sau derivaţi deuteraţi ai unor astfel de compuşi şi săruri, singuri sau în combinaţie cu un alt ingredient activ, cum ar fi un alt agent modulator CFTR. În unele variante de realizare, pacientul are un genotip F508del/funcţie minimă (MF), un genotip F508del/F508del (homozigot pentru mutaţia F508del), un genotip F508del/de poartă sau un genotip F508del/funcţie reziduală (RF). În unele variante de realizare, pacientul este heterozigot şi are o mutaţie F508del. În unele variante de realizare, pacientul este homozigot pentru mutaţia N1303K.
În unele variante de realizare, se administrează zilnic între 1 mg şi 1000 mg dintr-un compus descris în acest document, o sare farmaceutic acceptabilă a acestuia sau un derivat deuterat al unui astfel de Compus sau sare.
În unele variante de realizare, pacientul este heterozigot şi are o mutaţie F508del pe o alelă şi o mutaţie pe cealaltă alelă selectată din Tabelul 2:
Tabelul 2: Mutaţii CFTR
Mutaţie Q2X L218X Q525X R792X E1104X S4X Q220X G542X E822X W1145X W19X Y275X G550X W882X R1158X G27X C276X Q552X W846X R1162X Q39X Q290X R553X Y849X S1196X W57X G330X E585X R851X W1204X E60X W401X G673X Q890X L1254X R75X Q414X Q685X S912X S1255X L88X S434X R709X Y913X W1282X E92X S466X K710X Q1042X Q1313X Q98X S489X Q715X W1089X Q1330X Y122X Q493X L732X Y1092X E1371X E193X W496X R764X W1098X Q1382X W216X C524X R785X R1102X Q1411X 185+1G→T 711+5G→A 1717-8G→A 2622+1G→A 3121-1G→A 296+1G→A 712-1G→T 1717-1G→A 2790-1G→C 3500-2A→G 296+1G→T 1248+1G→A 1811+1G→C 3040G→C 3600+2insT 405+1G→A 1249-1G→A 1811+1,6kbA→G (G970R) 3850-1G→A 405+3A→C 1341+1G→A 1811+1643G→T 3120G→A 4005+1G→A 406-1G→A 1525-2A→G 1812-1G→A 3120+1G→A 4374+1G→T 621+1G→T 1525-1G→A 1898+1G→A 3121-2A→G 711+1G→T 1898+1G→C 182delT 1078delT 1677delTA 2711delT 3737delA 306insA 1119delA 1782delA 2732insA 3791delC 306delTAGA 1138insG 1824delA 2869insG 3821delT 365-366insT 1154insTC 1833delT 2896insAG 3876delA 394delTT 1161delC 2043delG 2942insT 3878delG 442delA 1213delT 2143delT 2957delT 3905insT 444delA 1259insA 2183AA→G 3007delG 4016insT 457TAT→G 1288insTA 2184delA 3028delA 4021dupT 541delC 1343delG 2184insA 3171delC 4022insT 574delA 1471delA 2307insA 3171insC 4040delA 663delT 1497delGG 2347delG 3271delGG 4279insA 849delG 1548delG 2585delT 3349insT 4326delTC 935delA 1609del CA 2594delGT 3659delC CFTRdele1 CFTRdele16-17b 1461ins4 CFTRdele2 CFTRdele17a,17b 1924del7 CFTRdele2,3 CFTRdele17a-18 2055del9→A CFTRdele2-4 CFTRdele19 2105-2117del13insAGAAA CFTRdele3-10,14b-16 CFTRdele19-21 2372del8 CFTRdele4-7 CFTRdele21 2721del11 CFTRdele4-11 CFTRdele22-24 2991del32 CFTR50kbdel CFTRdele22,23 3667ins4 CFTRdup6b-10 124del23bp 4010del4 CFTRdele11 602del14 4209TGTT→AA CFTRdele13,14a 852del22 CFTRdele14b-17b 991del5 A46D V520F Y569D N1303K G85E A559T L1065P R347P R560T R1066C L467P R560S L1077P I507del A561E M1101K
În unele variante de realizare, dezvăluirea se referă, de asemenea, la metode de tratament care utilizează compuşi marcaţi cu izotopi ai compuşilor menţionaţi anterior sau săruri acceptabile farmaceutic ale acestora, în care compuşii cu formula şi variabilele acestor compuşi şi săruri sunt fiecare şi independent aşa cum s-a descris mai sus sau în orice alte variante de realizare descrise mai sus, cu condiţia ca unul sau mai mulţi atomi din aceştia să fi fost înlocuiţi cu un atom sau atomi având o masă atomică sau un număr de masă care diferă de masa atomică sau de numărul de masă al atomului care apare tipic în mod natural (marcat cu izotopi). Exemple de izotopi disponibili comercial şi adecvaţi pentru dezvăluire includ izotopii hidrogenului, carbonului, azotului, oxigenului, fosforului, fluorului şi clorului, de exemplu. 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F şi respectiv, 36C.
Compuşii şi sărurile marcate cu izotopi pot fi utilizate în mai multe moduri benefice. Pot fi potrivite pentru medicamente şi/sau diverse tipuri de teste, cum ar fi testele de distribuţie a substratului în ţesuturi. De exemplu, tritiul (3H)- şi/sau carbon-14 (compuşii marcaţi cu 14C) sunt deosebit de utili pentru diverse tipuri de teste, cum ar fi testele de distribuţie a substratului în ţesuturi, datorită preparării relativ simple şi a detectabilităţii excelente. De exemplu, deuteriul (cele marcate cu 2H) sunt utile din punct de vedere terapeutic, având potenţiale avantaje terapeutice faţă de cele nemarcate. În general, compuşi marcaţi cu 2H deuteriu (compuşii şi sărurile marcate cu 2H) pot avea o stabilitate metabolică mai mare în comparaţie cu cei care nu sunt marcaţi cu izotopi, datorită efectului izotopic cinetic descris mai jos. O stabilitate metabolică mai mare se traduce direct într-un timp de înjumătăţire in vivo crescut sau în doze mai mici, ceea ce ar putea fi de dorit. Compuşii şi sărurile marcate cu izotopi pot fi în mod tipic preparaţi prin efectuarea procedurilor descrise în schemele de sinteză şi descrierea aferentă, în partea de exemplu şi în partea de preparare din prezentul text, înlocuind un reactant nemarcat cu izotopi cu un reactant marcat cu izotopi uşor disponibil.
În unele variante de realizare, Compuşii şi sărurile marcate cu izotopi sunt unele marcate cu deuteriu (2H). În unele variante specifice, compuşii şi sărurile marcate cu izotopi sunt unele marcate cu deuteriu (2H), în care unul sau mai mulţi atomi de hidrogen au fost înlocuiţi cu deuteriu. În structurile chimice, deuteriul este reprezentat ca "2H" sau "D".
Atunci când descoperă şi dezvoltă agenţi terapeutici, persoana de specialitate în domeniu încearcă să optimizeze parametrii farmacocinetici, păstrând în acelaşi timp proprietăţile in vitro dorite. Se poate presupune în mod rezonabil faptul că mulţi compuşi cu profiluri farmacocinetice slabe sunt susceptibili la metabolismul oxidativ.
Compuşii şi sărurile marcate cu deuteriu (2H) pot modula metabolismul oxidativ al compusului prin intermediul efectului izotopic cinetic primar. Efectul izotopic cinetic primar este o modificare a vitezei unei reacţii chimice care rezultă din schimbul de nuclee izotopice, care, la rândul său, este cauzată de modificarea energiilor stării fundamentale necesare pentru formarea legăturii covalente după acest schimb izotopic. Schimbul unui izotop mai greu are ca rezultat, în mod tipic, o scădere a energiei stării fundamentale pentru o legătură chimică şi, prin urmare, determină o reducere a ruperii legăturii limitatoare de viteză. Dacă ruperea legăturii are loc în sau în vecinătatea unei regiuni de tip punct de şa de-a lungul coordonatei unei reacţii cu mai mulţi produse, rapoartele de distribuţie a produselor pot fi modificate substanţial. Pentru explicaţie: dacă deuteriul este legat de un atom de carbon într-o poziţie neschimbabilă, diferenţele de viteză de kM./kD. = 2-7 sunt tipice. Pentru o discuţie mai detaliată, vezi S. L. Harbeson şi R. D. Tung, Deuterium In Drug Discovery and Development, Ann. Rep. Med. Chem. 2011, 46, 403-417.
Concentraţia izotopului (izotopilor) (de exemplu, deuteriu) încorporat(i) în compuşii şi sarea marcaţi cu izotopi conform dezvăluirii poate fi definită prin factorul de îmbogăţire izotopică. Termenul "factor de îmbogăţire izotopică", aşa cum este utilizat în conţinut, semnifică raportul dintre abundenţa izotopică şi abundenţa naturală a unui izotop specificat. În unele variante de realizare, dacă un substituent dintr-un compus al dezvăluirii este denumit deuteriu, un astfel de compus are un factor de îmbogăţire izotopică pentru fiecare atom de deuteriu desemnat de cel puţin 3500 (încorporare de deuteriu 52,5% la fiecare atom de deuteriu desemnat), cel puţin 4000 (încorporare de deuteriu 60%), cel puţin 4500 (încorporare de deuteriu 67,5%), cel puţin 5000 (încorporare de deuteriu 75%), cel puţin 5500 (încorporare de deuteriu 82,5%), cel puţin 6000 (încorporare de deuteriu 90%), cel puţin 6333,3 (încorporare de deuteriu 95%), cel puţin 6466,7 (încorporare de deuteriu 97%), cel puţin 6600 (încorporare de deuteriu 99%) sau cel puţin 6633,3 (încorporare de deuteriu 99,5%).
Terapii Combinate
Un aspect dezvăluit în conţinut furnizează metode de tratare a fibrozei chistice şi a altor boli mediate de CFTR utilizând oricare dintre noii compuşi dezvăluiţi în conţinut, cum ar fi, de exemplu, compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77, sărurile acestora acceptabile farmaceutic şi derivaţii deuteraţi ai acestor compuşi şi săruri în combinaţie cu cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar.
Astfel, în unele variante de realizare, invenţia furnizează metode de tratare, reducere a severităţii sau tratare simptomatică a fibrozei chistice la un pacient, cuprinzând administrarea la un pacient a unei cantităţi eficiente din oricare dintre compuşii noi descrişi în conţinut, cum ar fi, de exemplu, compuşii cu Formulele I, I', I", I‴,Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77, sărurile acestora acceptabile farmaceutic şi/sau derivaţi deuteraţi ai unor astfel de compuşi şi săruri, singuri sau în combinaţie cu cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar, cum ar fi, de exemplu, un agent de modulare CFTR.
În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este selectat dintre agenţi mucolitici, bronhodilatatoare, antibiotice, agenţi antiinfecţioşi şi agenţi antiinflamatori.
În unele variante de realizare, agentul terapeutic suplimentar este un antibiotic. Printre antibioticele exemplificative utile în acest document se numără tobramicina, inclusiv tobramicina sub formă de pulbere inhalatorie (TIP), azitromicina, aztreonam, inclusiv forma aerosolizată de aztreonam, amikacina, inclusiv formulările lipozomale ale acesteia, ciprofloxacina, inclusiv formulările acesteia adecvate pentru administrare prin inhalare, levoflaxacina, inclusiv formulările acesteia sub formă aerosolizată, şi combinaţii de două antibiotice, de exemplu, fosfomicină şi tobramicină.
În unele variante de realizare, agentul suplimentar este un mucolit. Exemplele de mucoliţi utili în conţinut includ Pulmozyme®.
În unele variante de realizare, agentul suplimentar este un bronhodilatator. Printre exemplele de bronhodilatatoare se numără albuterol, sulfat de metaprotenerol, acetat de pirbuterol, salmeterol sau sulfat de tetrabulină.
În unele variante de realizare, agentul suplimentar este un agent antiinflamator, adică un agent care poate reduce inflamaţia din plămâni. Printre astfel de agenţi utili în acest document se numără ibuprofen, acid docosahexanoic (DHA), sildenafil, glutation inhalat, pioglitazona, hidroxiclorochina sau simavastatina.
În unele variante de realizare, agentul suplimentar este un agent nutriţional. Agenţii nutriţionali exemplificaţi includ pancrelipază (înlocuitor de enzime pancreatice), inclusiv Pancrease®, Pancreacarb®Ultrase®, sau Creon®, Liprotomază® (fosta Trizytek)®, Aquadeks® sau inhalare de glutation. Într-o realizare, agentul nutriţional suplimentar este pancrelipaza.
În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este selectat dintre agenţii modulatori CFTR. În unele variante de realizare, agentul modulator CFTR este un corector CFTR. În unele variante de realizare, agentul modulator CFTR este un amplificator/co-potenţator al potenţatorului CFTR (de exemplu, ASP-11). În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este un amplificator CFTR. În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este un agent de citire CFTR. În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este o terapie cu acid nucleic CFTR.
În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este un inhibitor ENaC. În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este un modulator TMEM16A. În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este un agonist GPR39.
În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este ales dintre (a) Compus II. şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora; (b) Compus IV. şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora; (c) Compus V. şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora; (d) Compus VI şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora; (e) Compus VII. şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora; şi (f) Compus VIII şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora. Astfel, în unele variante de realizare, terapiile combinate furnizate în conţinut cuprind un compus selectat dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora; şi cel puţin un Compus ales dintre Compus II, Compus IV, Compus V, Compus VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora. În unele variante de realizare, terapiile combinate furnizate în conţinut cuprind (a) cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴,Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa',IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora; (b) cel puţin un compus ales dintre Compusul II, Compus IV, şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora; şi (c) cel puţin un compus ales dintre Compusul V, Compus al VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora. În unele variante de realizare, terapiile combinate furnizate în conţinut cuprind (a) cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora; (b) cel puţin un compus selectat dintre Compusul II şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora; şi (c) cel puţin un compus ales dintre Compusul VII şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora.
În unele variante de realizare, terapiile combinate furnizate în conţinut cuprind (a) un compus selectat dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora; (b) cel puţin un compus ales dintre Compusul II, Compus IV, Compus V, Compus VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora; şi (c) cel puţin un compus ales dintre Compuşii descrişi în WO 2016/105485, Publicaţia Cererii de Brevet de Invenţie U.S. Nr. 2016-0120841, Publicaţia Cererii de Brevet de Invenţie U.S. Nr. 2017-0101405, publicaţiile de cereri internaţionale de brevet de invenţie WO 2017/009804, WO 2018/065921, WO 2017/062581, sau Journal de Cystic Fibrosis (2018), 17(5), 595-606.
În unele variante de realizare, terapiile combinate furnizate în conţinut cuprind (a) un compus selectat dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴,Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa',IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora; (b) cel puţin un compus ales dintre Compusul II, Compus IV, Compus V, Compus VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora; şi (c) cel puţin un Compus ales dintre PTI-428, ASP-11, ABBV-2222, ABBV-2851, GLPG2737, ABBV-3221, ABBV-3748, ABBV-3903, ABBV-119 şi PTI-801.
În unele variante de realizare, terapiile combinate furnizate în conţinut cuprind (a) un compus selectat dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴,Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa',IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic; şi (b) cel puţin doi compuşi ale şi dintre Compuşii descrişi în publicaţiile de cereri internaţionale de brevet de invenţie WO 2019/195739, WO 2019/200246, WO 2021/030555, WO 2021/030556, WO 2017/173274, WO 2019/010092, WO 2019/018353, WO 2010/053471, WO 2011/119984, WO 2011/133751, WO 2011/133951, WO 2015/160787, WO 2007/056341, WO 2009/073757, WO 2009/076142, WO 2018/107100, WO 2019/113476, WO 2018/064632, WO 2019/152940, WO 2016/057572, WO 2021/030554, WO 2020/206080, WO 2016/105485, Publicaţiile Cererilor de Brevet de Invenţie U.S. Nr. 2016-0120841, U.S. Nr. 2017-0101405, WO 2017/009804, WO 2018/065921, WO 2017/062581, Jurnalul de Fibroză Chistică (2018), 17(5), 595-606, Pedemonte, N. şi colab. Sci. Adv. 2020, 6 (8), eaay9669, Phuan, P.-W. şi colab., Sci. Rep. 2019, 9 (1), 17640, Bose, S. şi colab., J. Cyst. Fibros. 2020, 19 Suppl 1, S25-S32, Crawford, D.K. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2020, 374 (2), 264-272, Brasell, E.J. şi colab. PLoS One 2019, 14 (12), e0223954, Smith, N.J., Solovay, C.F., Pharm. Pat. Anal 2017, 6 (4), 179-188, Kunzelmann, K. şi colab., Front. Pharmacol. 2019, 10 3, sau Son, J.-H. şi colab., Eur. J. din Med. Chim. 2020, 112888.
În unele variante de realizare, terapiile combinate furnizate în conţinut cuprind (a) un compus selectat dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic; şi (b) cel puţin doi compuşi ale şi dintre Compus II, Compus IV, Compus V, Compus VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, PTI-428, ASP-11, ABBV-2222, ABBV-2851, GLPG2737, ABBV-3221, ABBV-3748, ABBV-3903, ABBV-119 şi PTI-801, precum şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora, acceptabili farmaceutic.
În unele variante de realizare, terapiile combinate furnizate în conţinut cuprind (a) un compus selectat dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora; (b) cel puţin un compus ales dintre Compusul II, Compus III, Compus III-d, Compus IV, Compus V, Compus VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, PTI-428, ASP-11, ABBV-2222, ABBV-2851, GLPG2737, ABBV-3221, ABBV-3748, ABBV-3903, ABBV-119, FDL-169, ARN5562, ARN21586, ARN21586, ARN21586, ARN21586, ARN ARN23765, ARN23766, PTI-801, FDL-176, PTI-808 (dirocaftor), GLPG1837, GLPG2451/ABBV-2451, QBW251 (icenticaftor), GLPG3067/ABBV-3067/ABBV-3061, (ELBBV-306-3067), (ELBBV-306-306) MRT5005, Lunar-CF, RCT223, amilorid, ETD001, CF552, GS-9411, GS-5737, P-1037 (VX-371), P-1055 (VX-551), AZD5634, SPX-101, Ionis-ENaC-2.5 Rx, BI 1265162, AZ5634, ARO-ENaC1001, ETD002 şi DS-1039, precum şi săruri şi derivaţi deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic; şi (c) cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic.
În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora sunt administraţi în combinaţie cu cel puţin un compus ales dintre Compusul II. şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora sunt administraţi în combinaţie cu cel puţin un compus ales dintre Compusul IV. şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴,Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora sunt administraţi în combinaţie cu cel puţin un compus ales dintre Compusul V. şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora sunt administraţi în combinaţie cu cel puţin un compus ales dintre Compusul VI şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora sunt administraţi în combinaţie cu cel puţin un compus ales dintre Compusul VII şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora sunt administraţi în combinaţie cu cel puţin un compus ales dintre Compusul VIII şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora.
Fiecare dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77, Compusul al II-lea, Compus IV, Compus V, Compus VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, şi sărurile lor farmaceutic acceptabile şi derivaţii deuteraţi ai acestora, pot fi administraţi independent o dată pe zi, de două ori pe zi sau de trei ori pe zi. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile farmaceutic acceptabile şi derivaţii deuteraţi ai acestora se administrează o dată pe zi. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile farmaceutic acceptabile şi derivaţii deuteraţi ai acestora se administrează de două ori pe zi. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic şi cel puţin un compus ales dintre Compusul II. şi sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora sunt administrate o dată pe zi. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic şi cel puţin un compus ales dintre Compusul II. şi sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora sunt administrate de două ori pe zi. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic şi cel puţin un compus ales dintre Compusul IV. şi sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora sunt administrate o dată pe zi. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic şi cel puţin un compus ales dintre Compusul IV. şi sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora sunt administrate de două ori pe zi. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I"', Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora şi cel puţin un compus ales dintre Compusul V. şi sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora sunt administrate o dată pe zi. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora şi cel puţin un compus ales dintre Compusul V. şi sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora sunt administrate de două ori pe zi. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic şi cel puţin un compus ales dintre Compusul VI şi sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora sunt administrate o dată pe zi. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic şi cel puţin un compus ales dintre Compusul VI şi sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora sunt administrate de două ori pe zi. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora şi cel puţin un compus ales dintre Compusul VII. şi sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora sunt administrate o dată pe zi. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora şi cel puţin un compus ales dintre Compusul VII. şi sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora sunt administrate de două ori pe zi. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic şi cel puţin un compus ales dintre Compusul VIII şi sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora sunt administrate o dată pe zi. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic şi cel puţin un compus ales dintre Compusul VIII şi sărurile acestora acceptabile farmaceutic sunt administrate de două ori pe zi.
În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I"', Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic; cel puţin un compus ales dintre Compusul II, Compus IV, şi sărurile acestora acceptabile farmaceutic; şi cel puţin un compus ales dintre Compusul V, Compus VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, şi sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora sunt administrate o dată pe zi. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora; cel puţin un compus ales dintre Compusul al II-lea, Compus IV, şi sărurile acestora acceptabile farmaceutic; şi cel puţin un compus ales dintre Compusul V, Compus al VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, şi sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora sunt administrate de două ori pe zi. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora; cel puţin un compus ales dintre Compusul II. şi sărurile acestora acceptabile farmaceutic; şi cel puţin un compus ales dintre Compusul VII. şi sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora sunt administrate o dată pe zi. În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora; cel puţin un compus ales dintre Compusul II. şi sărurile acestora acceptabile farmaceutic; şi cel puţin un compus ales dintre Compusul VII. şi sărurile acestora acceptabile farmaceutic sunt administrate de două ori pe zi.
Compuşi cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77, Compusul al II-lea, Compus IV, Compus V, Compus VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, şi sărurile lor farmaceutic acceptabile şi derivaţii deuteraţi ai acestora pot fi administraţi într-o singură compoziţie farmaceutică sau în compoziţii farmaceutice separate. Astfel de compoziţii farmaceutice pot fi administrate o dată pe zi sau de mai multe ori pe zi, cum ar fi de două ori pe zi. Aşa cum este utilizată în conţinut, sintagma conform căreia o cantitate dată de API (de exemplu, Compusul II, Compus VII, sau săruri farmaceutic acceptabile ale acestora) este administrată o dată sau de două ori pe zi sau pe zi semnifică că respectiva cantitate dată este administrată per doză, care poate avea loc o dată sau de două ori pe zi.
În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora sunt administraţi într-o primă compoziţie farmaceutică; şi cel puţin un compus ales dintre Compusul VII şi sărurile acestora acceptabile farmaceutic se administrează într-o a doua compoziţie farmaceutică.
În unele variante de realizare, cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I"', Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora sunt administraţi într-o primă compoziţie farmaceutică; cel puţin un compus ales dintre Compusul II. şi sărurile farmaceutic acceptabile ale acestora sunt administrate într-o a doua compoziţie farmaceutică; şi cel puţin un compus ales dintre Compusul VII şi sărurile acestora acceptabile farmaceutic sunt administrate într-o a treia compoziţie farmaceutică.
Orice compoziţii farmaceutice adecvate cunoscute în domeniu pot fi utilizate pentru Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77, Compusul II, Compus IV, Compus V, Compus VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora. Câteva compoziţii farmaceutice exemplificative pentru Compusul II şi sărurile sale acceptabile farmaceutic pot fi găsite în WO 2011/119984 şi WO 2014/014841. Câteva exemple de compoziţii farmaceutice pentru Compus III şi sărurile sale acceptabile farmaceutic pot fi regăsite în publicaţiile de cereri internaţionale de brevet de invenţie WO 2007/134279, WO 2010/019239, WO 2011/019413, WO 2012/027731 şi WO 2013/130669 şi câteva compoziţii farmaceutice exemplificative pentru Compusul III-d şi sărurile sale acceptabile farmaceutic pot fi regăsite în brevetele de invenţie US 8.865.902, US 9.181.192, US 9.512.079, WO 2017/053455 şi WO 2018/080591. Câteva exemple de compoziţii farmaceutice pentru Compus IV şi sărurile sale acceptabile farmaceutic pot fi regăsite în publicaţiile de cereri internaţionale de brevet de invenţie WO 2010/037066, WO 2011/127421 şi WO 2014/071122. Câteva exemple de compoziţii farmaceutice pentru Compus V şi sărurile sale acceptabile farmaceutic pot fi găsite în WO 2019/152940. Câteva exemple de compoziţii farmaceutice pentru Compus VI şi sărurile sale acceptabile farmaceutic pot fi găsite în WO 2019/079760.
Compoziţii Farmaceutice
Un alt aspect al invenţiei prevede o compoziţie farmaceutică care cuprinde cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic şi cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic.
În unele variante de realizare, invenţia furnizează compoziţii farmaceutice care cuprind cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I"', Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora în combinaţie cu cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar. În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este un modulator CFTR. În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este un corector CFTR. În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este un potenţator CFTR. În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este un compus care amplifică potenţarea CFTR, adică un amplificator/copotenţator al potenţatorului CFTR. În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este un amplificator CFTR. În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este un agent de citire CFTR. În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este o terapie cu acid nucleic CFTR. În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este un inhibitor ENaC. În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este un modulator TMEM16A. În unele variante de realizare, cel puţin un ingredient farmaceutic activ suplimentar este un agonist GPR39. În unele variante de realizare, compoziţia farmaceutică cuprinde cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I, I", I"', I, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora şi cel puţin două ingrediente farmaceutice active suplimentare, fiecare dintre aceştia fiind un corector CFTR. În unele variante de realizare, compoziţia farmaceutică cuprinde cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I, I", I"', I, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora şi cel puţin două ingrediente farmaceutice active suplimentare, dintre care unul este un corector CFTR şi unul este un potenţator CFTR.
În unele variante de realizare, invenţia furnizează o compoziţie farmaceutică care cuprinde (a) cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I, I", I, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora, (b) cel puţin un compus ales dintre Compusul II, Compus IV, Compus V, Compus VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, şi săruri ale acestora acceptabile farmaceutic şi (c) cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic.
În unele variante de realizare, invenţia furnizează o compoziţie farmaceutică care cuprinde (a) cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora, (b) cel puţin un compus ales dintre Compusul II. şi săruri ale acestora acceptabile farmaceutic şi (c) cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic.
În unele variante de realizare, invenţia furnizează o compoziţie farmaceutică care cuprinde (a) cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I, I", I, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora, (b) cel puţin un compus ales dintre Compusul VII şi săruri ale acestora acceptabile farmaceutic şi (c) cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic.
În unele variante de realizare, dezvăluirea furnizează o compoziţie farmaceutică care cuprinde (a) cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I, I", I, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora, (b) cel puţin un compus ales dintre Compusul II, Compus IV, şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora, (c) cel puţin un compus ales dintre Compusul V, Compus VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, şi săruri ale acestora acceptabile farmaceutic şi (d) cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic.
În unele variante de realizare, dezvăluirea furnizează o compoziţie farmaceutică care cuprinde (a) cel puţin un compus ales dintre Compuşii cu Formulele I, I, I", I, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora, (b) cel puţin un compus ales dintre Compusul II. şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora, (c) cel puţin un compus ales dintre Compusul VII şi săruri ale acestora acceptabile farmaceutic şi (d) cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic.
În unele variante de realizare, compoziţiile farmaceutice furnizate în conţinut cuprind (a) un compus selectat dintre Compuşii cu Formulele I, I, I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora; (b) cel puţin un compus ales dintre Compusul II, Compus IV, Compus V, Compus VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora; (c) cel puţin un compus ales dintre compuşii descrişi în WO 2016/105485, Publicaţiile de Cereri de Brevet de Invenţie U.S. Nr. 2016-0120841, U.S. Nr. 2017-0101405, publicaţiile de cereri internaţionale de brevet de invenţie WO 2017/009804, WO 2018/065921, WO 2017/062581, Journal de Cystic Fibrosis (2018), 17(5), 595-606, Pedemonte, N. şi colab. Sci. Adv. 2020, 6 (8), eaay9669, Phuan, P.-W. şi colab., Sci. Rep. 2019, 9 (1), 17640, Bose, S. şi colab., J. Cyst. Fibros. 2020, 19 Suppl 1, S25-S32, Crawford, D.K. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2020, 374 (2), 264-272, Brasell, E.J. şi colab. PLoS One 2019, 14 (12), e0223954, Smith, N.J., Solovay, C.F., Pharm. Pat. Anal. 2017, 6 (4), 179-188, Kunzelmann, K. şi colab., Front. Pharmacol. 2019, 10 3, sau Fiul, J.-H. şi colab., Eur. J. din Med. Chim. 2020, 112888 şi (d) cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic.
În unele variante de realizare, compoziţiile farmaceutice furnizate în conţinut cuprind (a) un compus selectat dintre Compuşii cu Formulele I, I, I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora; (b) cel puţin un compus ales dintre Compusul II, Compus IV, Compus V, Compus VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, şi săruri farmaceutic acceptabile şi derivaţi deuteraţi ai acestora; (c) cel puţin un Compus ales dintre PTI-428, ASP-11, ABBV-2222, ABBV-2851, GLPG2737, ABBV-3221, ABBV-3748, ABBV-3903, ABBV-119 şi PTI-801; şi (d) cel puţin un purtător farmaceutic acceptabil.
În unele variante de realizare, compoziţiile farmaceutice furnizate în conţinut cuprind (a) un compus selectat dintre Compuşii cu Formulele I, I, I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic; (b) cel puţin doi compuşi ale şi dintre compuşii descrişi în publicaţiile cererilor internaţionale de brevet de invenţie WO 2019/195739, WO 2019/200246, WO 2021/030555, WO 2021/030556, WO 2017/173274, WO 2019/010092, WO 2019/018353, WO 2010/053471, WO 2011/119984, WO 2011/133751, WO 2011/133951, WO 2015/160787, WO 2007/056341, WO 2009/073757, WO 2009/076142, WO 2018/107100, WO 2019/113476, WO 2018/064632, WO 2019/152940, WO 2016/057572, WO 2021/030554, WO 2020/206080, WO 2016/105485, Publicaţia Cererii de Brevet de Invenţie U.S. Nr. 2016-0120841, Publicaţia Cererii de Brevet de Invenţie U.S. Nr. 2017-0101405, publicaţiile cererilor internaţionale de brevet de invenţie WO 2017/009804, WO 2018/065921, WO 2017/062581, Journal de Cystic Fibrosis (2018), 17(5), 595-606, Pedemonte, N. şi colab. Sci. Adv. 2020, 6 (8), eaay9669, Phuan, P.-W. et al. Sci. Rep. 2019, 9 (1), 17640, Bose, S. şi colab., J. Cyst. Fibros. 2020, 19 Suppl 1, S25-S32, Crawford, D.K. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2020, 374 (2), 264-272, Brasell, E.J. şi colab. PLoS One 2019, 14 (12), e0223954, Smith, N.J., Solovay, C.F., Pharm. Pat. Anal 2017, 6 (4), 179-188, Kunzelmann, K. şi colab., Front. Pharmacol. 2019, 10 3, sau Fiul, J.-H. şi colab., Eur. J. din Med. Chim. 2020, 112888 şi (c) cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic.
În unele variante de realizare, compoziţiile farmaceutice furnizate în conţinut cuprind (a) un compus selectat dintre Compuşii cu Formulele I, I, I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic; (b) cel puţin doi compuşi ale şi dintre Compusul II, Compus IV, Compus V, Compus VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, PTI-428, ASP-11, ABBV-2222, ABBV-2851, GLPG2737, ABBV-3221, ABBV-3748, ABBV-3903, ABBV-119 şi PTI-801, precum şi sărurile şi derivaţii deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic; şi (c) cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic.
În unele variante de realizare, compoziţiile farmaceutice furnizate în conţinut cuprind (a) un compus selectat dintre Compuşii cu Formulele I, I, I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile şi derivaţii deuteraţi acceptabili farmaceutic ai acestora; (b) cel puţin un compus ales dintre Compusul II, Compus III, Compus III-d, Compus IV, Compus V, Compus VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, PTI-428, ASP-11, ABBV-2222, ABBV-2851, GLPG2737, ABBV-3221, ABBV-3748, ABBV-3903, ABBV-119, FDL-169, ARN5562, ARN21586, ARN21586, ARN21586, ARN21586, ARN ARN23765, ARN23766, PTI-801, FDL-176, PTI-808 (dirocaftor), GLPG1837, GLPG2451/ABBV-2451, QBW251 (icenticaftor), GLPG3067/ABBV-3067/ABBV-3061, (ELBBV-306-3067), (ELBBV-306-306) MRT5005, Lunar-CF, RCT223, amilorid, ETD001, CF552, GS-9411, GS-5737, P-1037 (VX-371), P-1055 (VX-551), AZD5634, SPX-101, Ionis-ENaC-2.5 Rx, BI 1265162, AZ5634, ARO-ENaC1001, ETD002 şi DS-1039, precum şi săruri şi derivaţi deuteraţi ai acestora acceptabili farmaceutic; şi (c) cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic.
Orice compoziţie farmaceutică descrisă în acest document poate cuprinde cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic. În unele variante de realizare, cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic este ales dintre purtători acceptabile farmaceutic şi adjuvanţi acceptabili farmaceutic. În unele variante de realizare, cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic este ales dintre agenţi de umplutură, dezintegranţi, surfactanţi, lianţi, lubrifianţi acceptabili farmaceutic.
Compoziţiile farmaceutice descrise în conţinut sunt utile pentru tratarea fibrozei chistice şi a altor boli mediate de CFTR.
Aşa cum s-a descris mai sus, compoziţiile farmaceutice descrise în conţinut pot cuprinde opţional în plus cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic. Cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic poate fi ales dintre adjuvanţi şi purtători. Cel puţin un purtător acceptabil farmaceutic, aşa cum este utilizat în conţinut, include oricare şi toţi solvenţii, diluanţii, alţi purtători lichizi, adjuvanţi de dispersie, adjuvanţi de suspensie, agenţi tensioactivi, agenţi izotonici, agenţi de îngroşare, agenţi de emulgare, conservanţi, lianţi solizi şi lubrifianţi, în funcţie de forma de dozare dorită. Remington: The Science and Practice de Pharmacy, ediţia a 21-a, 2005, ed. D.B. Troy, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, and Encyclopedia de Pharmaceutical Technology, ed. J. Swarbrick şi J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York dezvăluie diverşi purtători utilizaţi în formularea compoziţiilor farmaceutice şi tehnici cunoscute pentru prepararea acestora. Cu excepţia cazului în care orice purtător convenţional este incompatibil cu compuşii din această dezvăluire, cum ar fi prin producerea oricărui efect biologic nedorit sau prin interacţiunea dăunătoare cu orice altă componentă (alte componente) a compoziţiei farmaceutice, utilizarea sa este avută în vedere ca fiind în sfera de protecţie a acestei dezvăluiri. Exemple nelimitative de purtători farmaceutic acceptabili adecvaţi includ, dar nu se limitează la, schimbători de ioni, alumină, stearat de aluminiu, lecitină, proteine serice (cum ar fi albumina serică umană), substanţe tampon (cum ar fi fosfaţi, glicină, acid sorbic şi sorbat de potasiu), amestecuri parţiale de gliceride de acizi graşi vegetali saturaţi, apă, săruri şi electroliţi (cum ar fi sulfat de protamină, fosfat disodic, fosfat disodic, clorură de sodiu şi săruri de zinc), silice coloidală, trisilicat de magneziu, polivinilpirolidonă, poliacrilaţi, ceruri, polimeri bloc polietilen-polioxipropilenă, grăsime de lână, zaharuri (cum ar fi lactoză, glucoză şi zaharoză), amidonuri (cum ar fi amidon de porumb şi amidon de cartofi), celuloză şi derivaţii acesteia (cum ar fi carboximetilceluloză sodică, etilceluloză şi acetat de celuloză), tragacant pudră, malţ, gelatină, talc, excipienţi (cum ar fi unt de cacao şi ceruri pentru supozitoare), uleiuri (cum ar fi ulei de arahide, ulei de seminţe de bumbac, ulei de şofrănaş, ulei de susan, ulei de măsline, ulei de porumb şi ulei de soia), glicoli (cum ar fi propilen glicol şi polietilen glicol), esteri (cum ar fi oleat de etil şi laurat de etil), agar, agenţi de tamponare (cum ar fi hidroxid de magneziu şi hidroxid de aluminiu), acid alginic, apă apirogenă, soluţie salină izotonică, soluţie Ringer, alcool etilic, soluţii tampon fosfat, lubrifianţi compatibili netoxici (cum ar fi laurilsulfat de sodiu şi stearat de magneziu), agenţi de colorare, agenţi de eliberare, agenţi de acoperire, îndulcitori, agenţi de aromatizare, agenţi de parfumare, conservanţi şi antioxidanţi.
Solvat Heptan al Compusului 11
În unele variante de realizare, invenţia furnizează forme cristaline solvatate ale Compusului 11. În unele variante de realizare, forma cristalină solvatată este un solvat heptan. În unele variante de realizare, invenţia furnizează solvat heptan al Compusului 11. FIG. 1 furnizează o difractogramă cu raze X pe pulbere a solvatului heptan al Compusului 11 la temperatura camerei.
În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este substanţial pur. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este substanţial cristalin. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat printr-o difractogramă de raze X pe pulbere generată printr-o analiză de difracţie de raze X pe pulbere cu un fascicul incident de radiaţii Cu Kα. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 are multe molecule într-o unitate asimetrică. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este un amestec fizic de reţele cristaline. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 are o cantitate variabilă heptan în reţeaua cristalină. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 are o cantitate stoichiometrică heptan în reţeaua cristalină. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 are o cantitate nesteichiometrică heptan în reţeaua cristalină.
În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat printr-o difractogramă de raze X pe pulbere având un semnal la 5,8 ± 0,2 grade doi-theta. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat printr-o difractogramă de raze X pe pulbere având un semnal la 10,1 ± 0,2 grade doi-theta. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat printr-o difractogramă de raze X pe pulbere având un semnal la 11,7 ± 0,2 grade doi-theta. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat printr-o difractogramă de raze X pe pulbere având unul, două sau trei semnale selectate dintre 5,8 ± 0,2 grade doi-theta, 10,1 ± 0,2 grade doi-theta şi 11,7 ± 0,2 grade doi-theta.
În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat printr-o difractogramă de raze X pe pulbere având (a) unul, două sau trei semnale selectate dintre 5,8 ± 0,2 grade doi-theta, 10,1 ± 0,2 grade doi-theta şi 11,7 ± 0,2 grade doi-theta şi (b) unul, două, trei sau patru semnale selectate dintre 5,6 ± 0,2 grade doi-theta, 18,1 ± 0,2 grade doi-theta, 20,5 ± 0,2 grade doi-theta şi 20,9 ± 0,2 grade doi-theta. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat printr-o difractogramă de raze X pe pulbere având semnale la 5,6 ± 0,2 grade doi-theta, 5,8 ± 0,2 grade doi-theta, 10,1 ± 0,2 grade doi-theta, 11,7 ± 0,2 grade doi-theta, 18,1 ± 0,2 grade doi-theta, 20,5 ± 0,2 grade doi-theta şi 20,9 ± 0,2 grade doi-theta.
În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat printr-o difractogramă de raze X pe pulbere substanţial similară cu FIG. 1.
În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 166,3 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 165,8 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 164,6 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 163,4 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 154,8 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 154,0 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 152,1 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 151,6 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 140,2 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 139,4 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 138,5 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 138,0 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 135,1 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 134,6 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 131,3 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 130,2 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 129,6 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 128,5 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 125,7 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 123,7 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 123,2 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 122,9 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 121,1 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 120,2 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 119,2 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 117,8 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 76,2 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 74,4 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 73,7 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 73,3 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 40,0 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 38,6 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 37,6 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 36,9 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 35,7 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 33,6 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 32,5 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 32,0 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 30,4 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 30,1 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 29,5 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 28,8 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 28,1 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 27,1 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 25,3 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 23,1 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 22,7 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 22,0 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 21,6 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 20,3 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 19,6 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 18,3 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 17,6 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 13,8 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu un vârf la 13,1 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13 C SSRMN cu un vârf la 12,5 ± 0,2 ppm.
În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 13C SSRMN cu unul, două, trei, patru, cinci, şase, şapte, opt, nouă, zece sau mai multe vârfuri selectate dintre 166,3 ± 0,2 ppm, 165,8 ± 0,2 ppm, 164,6 ± 0,2 ppm, 163,4 ± 0,2 ppm, 154,8 ± 0,2 ppm, 154,0 ± 0,2 ppm, 152,1 ± 0,2 ppm, 151,6 ± 0,2 ppm, 140,2 ± 0,2 ppm, 139,4 ± 0,2 ppm, 138,5 ± 0,2 ppm, 138,0 ± 0,2 ppm, 135,1 ± 0,2 ppm, 134,6 ± 0,2 ppm, 131,3 ± 0,2 ppm, 130,2 ± 0,2 ppm, 129,6 ± 0,2 ppm, 128,5 ± 0,2 ppm, 125,7 ± 0,2 ppm, 123,7 ± 0,2 ppm, 123,2 ± 0,2 ppm, 122,9 ± 0,2 ppm, 121,1 ± 0,2 ppm, 120,2 ± 0,2 ppm, 119,2 ± 0,2 ppm, 117,8 ± 0,2 ppm, 76,2 ± 0,2 ppm, 74,4 ± 0,2 ppm, 73,7 ± 0,2 ppm, 73,3 ± 0,2 ppm, 40,0 ± 0,2 ppm, 38,6 ± 0,2 ppm, 37,6 ± 0,2 ppm, 36,9 ± 0,2 ppm, 35,7 ± 0,2 ppm, 33,6 ± 0,2 ppm, 32,5 ± 0,2 ppm, 32,0 ± 0,2 ppm, 30,4 ± 0,2 ppm, 30,1 ± 0,2 ppm, 29,5 ± 0,2 ppm, 28,8 ± 0,2 ppm, 28,1 ± 0,2 ppm, 27,1 ± 0,2 ppm, 25,3 ± 0,2 ppm, 23,1 ± 0,2 ppm, 22,7 ± 0,2 ppm, 22,0 ± 0,2 ppm, 21,6 ± 0,2 ppm, 20,3 ± 0,2 ppm, 19,6 ± 0,2 ppm, 18,3 ± 0,2 ppm, 17,6 ± 0,2 ppm, 13,8 ± 0,2 ppm, 13,1 ± 0,2 ppm şi 12,5 ± 0,2 ppm.
În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat printr-un spectru 13C SSRMN substanţial similar cu FIG. 3.
În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu un vârf la -63,5 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu un vârf la -63,8 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu un vârf la -65,1 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu un vârf la -65,8 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu un vârf la -66,3 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu un vârf la -67,0 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu un vârf la -74,0 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu un vârf la -74,9 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu un vârf la -76,6 ± 0,2 ppm.
În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu unul, două sau trei vârfuri selectate dintre -65,1 ± 0,2 ppm, -67,0 ± 0,2 ppm şi -76,6 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu unul, două, trei, patru sau cinci vârfuri selectate dintre -63,5 ± 0,2 ppm, -65,1 ± 0,2 ppm, -67,0 ± 0,2 ppm, -74,9 ± 0,2 ppm şi -76,6 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu unul, două, trei, patru, cinci sau mai multe vârfuri selectate dintre -63,5 ± 0,2 ppm, -63,8 ± 0,2 ppm, -65,1 ± 0,2 ppm, -65,8 ± 0,2 ppm, -66,3 ± 0,2 ppm, -67,0 ± 0,2 ppm, -74,0 ± 0,2 ppm, -74,9 ± 0,2 ppm şi -76,6 ± 0,2 ppm. În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu unul, două, trei, patru, cinci sau mai multe vârfuri selectate dintre -63,5 ± 0,2 ppm, -63,8 ± 0,2 ppm, -65,1 ± 0,2 ppm, -65,8 ± 0,2 ppm, -66,3 ± 0,2 ppm, -67,0 ± 0,2 ppm, -74,0 ± 0,2 ppm, -74,9 ± 0,2 ppm, -76,6 ± 0,2 ppm şi -77,6 ± 0,2 ppm.
În unele variante de realizare, solvatul heptan al Compusului 11 este caracterizat printr-un spectru 19F SSRMN substanţial similar cu FIG. 4.
Un alt aspect al invenţiei prevede un procedeu pentru prepararea unei forme solide cristaline solvatate a Compusului 11, care cuprinde dizolvarea Compusului 11 în unul sau mai mulţi solvenţi pentru a forma un amestec şi cristalizarea Compusului din amestec. Într-un exemplu de realizare, unul sau mai mulţi solvenţi cuprind heptan. Într-un exemplu de realizare, unul sau mai mulţi solvenţi cuprind heptan şi diclormetan.
Un alt aspect al invenţiei furnizează o metodă de preparare a solvatului heptan al Compusului 11. În unele variante de realizare, metoda de preparare a solvatului heptan al Compusului 11 cuprinde: (i) dizolvarea Compusului 11 în heptan şi diclormetan pentru a forma un amestec; (ii) concentrarea amestecului; (iii) colectarea solidelor din amestec; şi (iv) uscarea solidelor colectate. În unele variante de realizare, (ii) cuprinde opţional agitarea amestecului la temperatura camerei. În unele variante de realizare, (iii) cuprinde opţional clătirea solidelor colectate cu heptan rece. În unele variante de realizare, metoda de preparare a solvatului heptan al Compusului 11 cuprinde dizolvarea Compusului 11 în heptan şi diclormetan, concentrarea sub evaporare rotativă, agitarea la temperatura camerei, filtrarea solidelor, spălarea solidelor cu heptan rece şi uscarea sub vid pentru a da solvatul heptan al Compusului 11.
Exemple de Realizare Ne-limitative
1. Un compus selectat dintre Compuşii cu Formula I:
şi derivaţi deuteraţi şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora,
în care:
X este selectat dintre -O-, -S-, -SO- şi -SO2-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O-, -CO- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C3-C8 cicloalchil, C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1, -CO2RY1, -CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două exemple de RY pe acelaşi atom sunt luate împreună pentru a forma un ciclu selectat dintre C3-C8 cicloalchil şi heterociclil cu 3 până la 6 membri; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi;
fiecare RY1 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil, sau două exemple de RY1 legate de acelaşi atom de azot luate împreună formează un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
Ciclul B este selectat dintre:
▪ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, C1-C6 alchil şi C1-C6 alcoxi),
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri şi
▪ heterociclil cu 3 până la 6 membri (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil);
fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C1-C6 alchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ oxo,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi -OCF3), şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C3-C8 cicloalchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, -NH2 şi -NHCOMe),
∘ C1-C6 alcoxi,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil) şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi),
∘ C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-4 grupări selectate independent dintre:
▪ halogen,
▪ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu CF3),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, CF3, OCF3 şi C1-C6 alchil) şi
∘ C6-C10 aril,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări CF3), şi
heterociclil cu 3 până la 10 membri,
▪ heterociclil cu 3 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre oxo şi C3-C8 cicloalchil) şi
∘ oxo;
fiecare R1 este selectat independent dintre halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi), -OR2, -N(R2)2, -CO2R2, -CO-N(R2)2, -CN, fenil, benzil, C1-C6 alcoxi, C3-C8 cicloalchil, heteroaril cu 5 până la 6 membri, heterociclil cu 3 până la 6 membri, -SO2R2, -SR2, -SOR2, -PO(OR2)2 şi -PO(R2)2;
fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen);
Z este selectat din
în care Ciclul C este selectat din C6-C10 aril şi heteroaril cu 5 până la 10 membri;
RZ1 este selectat dintre hidrogen, -CN, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen sau 1-3 hidroxi), heterociclil cu 3 până la 6 membri, cicloalchil cu 3 până la 6 membri, aril cu 5 până la 6 membri şi heteroaril cu 5 până la 6 membri;
RZ2 este selectat dintre hidrogen, halogen şi hidroxi sau RZ1 şi RZ2 luaţi împreună formează o grupare selectată dintre oxo şi =N-OH;
fiecare RZ3 este selectat independent dintre hidroxi, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil, C1-C6 haloalchil şi C6-C10 aril; sau două exemple de RZ3 sunt luate împreună pentru a forma un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
n este selectat dintre 4, 5, 6, 7 şi 8; şi
m este selectat dintre 0, 1, 2 şi 3.
2. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform Realizării 1, în care:
X este selectat dintre -O-, -S-, -SO- şi -SO2-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O-, -CO- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1, -CO2RY1, -CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două exemple de RY pe acelaşi atom sunt luate împreună pentru a forma un ciclu selectat dintre C3-C8 cicloalchil şi heterociclil cu 3 până la 6 membri; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi;
fiecare RY1 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil, sau două exemple de RY1 legate de acelaşi atom de azot luate împreună formează un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
Ciclul B este selectat dintre:
▪ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, C1-C6 alchil şi C1-C6 alcoxi),
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri şi
▪ heterociclil cu 3 până la 6 membri (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil);
fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C1-C6 alchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ oxo,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi -OCF3), şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C3-C8 cicloalchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, -NH2 şi -NHCOMe),
∘ C1-C6 alcoxi,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil) şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi),
∘ C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-4 grupări selectate independent dintre:
▪ halogen,
▪ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu CF3),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, CF3, OCF3 şi C1-C6 alchil) şi
∘ C6-C10 aril,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări CF3), şi
heterociclil cu 3 până la 10 membri,
▪ heterociclil cu 3 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre oxo şi C3-C8 cicloalchil) şi
∘ oxo;
fiecare R1 este selectat independent dintre halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen), -OR2, -N(R2)2, -CO2R2, -CO-N(R2)2, -CN, fenil, benzil, C1-C6 alcoxi, C3-C8 cicloalchil, heteroaril cu 5 până la 6 membri, heterociclil cu 3 până la 6 membri, -SO2R2, -SR2, -SOR2, -PO(OR2)2 şi -PO(R2)2;
fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen);
Z este selectat din
RZ1 este selectat dintre hidrogen, -CN, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen sau 1-3 hidroxi), heterociclil cu 3 până la 6 membri, cicloalchil cu 3 până la 6 membri, aril cu 5 până la 6 membri şi heteroaril cu 5 până la 6 membri;
RZ2 este selectat dintre hidrogen, halogen şi hidroxi sau RZ1 şi RZ2 luaţi împreună formează o grupare selectată dintre oxo şi =N-OH;
fiecare RZ3 este selectat independent dintre hidroxi, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil şi C6-C10 aril; sau două exemple de RZ3 sunt luate împreună pentru a forma un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
n este selectat dintre 4, 5, 6 şi 7; şi
m este selectat dintre 0, 1, 2 şi 3.
3. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform Realizării 1 sau 2, în care X este -O-.
4. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-3, în care fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -CO- şi
5. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-4, în care fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q) şi -ORY1.
6. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-5, în care fiecare RY este selectat independent dintre:
hidrogen,
7. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-6, în care fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi C1-C6 alchil.
8. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-7, în care fiecare Q este selectat independent dintre:
9. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-8, în care Ciclul B este selectat din C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen.
10. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-9, în care Ciclul B este selectat dintre:
11. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-10, în care -(Y)n.- este un grup selectat dintre:
şi
12. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-11, în care fiecare Y este -C(RY)2-.
13. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-12, în care fiecare R1 este selectat independent dintre - CF3 şi -N(R2)2.
14. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-13, în care fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil.
15. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-14, în care fiecare R2 este hidrogen.
16. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-15, în care Z este
17. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-16, în care RZ1 este selectat din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate dintre halogen).
18. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-17, în care RZ1 este -CF3.
19. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-18, în care RZ2 este hidroxi.
20. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-19, în care n este selectat dintre 4, 5 şi 6.
21. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-20, în care n este 6.
22. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-21, în care m este selectat dintre 1 şi 2.
23. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1-22, în care m este 2.
24. Un compus selectat dintre Compuşii cu Formula Ia:
şi derivaţi deuteraţi şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora,
în care:
X este selectat dintre -O-, -S-, -SO- şi -SO2-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O-, -CO- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1, -CO2RY1, -CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două exemple de RY pe acelaşi atom sunt luate împreună pentru a forma un ciclu selectat dintre C3-C8 cicloalchil şi heterociclil cu 3 până la 6 membri; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi;
fiecare RY1 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil, sau două exemple de RY1 legate de acelaşi atom de azot luate împreună formează un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
Ciclul B este selectat dintre:
▪ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, C1-C6 alchil şi C1-C6 alcoxi),
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri şi
▪ heterociclil cu 3 până la 6 membri (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil);
fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C1-C6 alchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ oxo,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi -OCF3), şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C3-C8 cicloalchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, -NH2 şi -NHCOMe),
∘ C1-C6 alcoxi,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil) şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi),
∘ C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-4 grupări selectate independent dintre:
▪ halogen,
▪ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu CF3),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, CF3, OCF3 şi C1-C6 alchil) şi
∘ C6-C10 aril,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări CF3), şi
heterociclil cu 3 până la 10 membri,
▪ heterociclil cu 3 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre oxo şi C3-C8 cicloalchil) şi
∘ oxo;
fiecare R1 este selectat independent dintre halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen), -OR2, -N(R2)2, -CO2R2, -CO-N(R2)2, -CN, fenil, benzil, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil, C3-C8 cicloalchil, heteroaril cu 5 până la 6 membri, heterociclil cu 3 până la 6 membri, -SO2R2, -SR2, -SOR2, -PO(OR2)2 şi -PO(R2)2;
fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen);
Z este selectat din
RZ1 este selectat dintre hidrogen, -CN, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen sau 1-3 hidroxi), heterociclil cu 3 până la 6 membri, cicloalchil cu 3 până la 6 membri, aril cu 5 până la 6 membri şi heteroaril cu 5 până la 6 membri;
RZ2 este selectat dintre hidrogen, halogen şi hidroxi sau RZ1 şi RZ2 luaţi împreună formează o grupare selectată dintre oxo şi =N-OH;
fiecare RZ3 este selectat independent dintre hidroxi, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil şi C6-C10 aril; sau două exemple de RZ3 sunt luate împreună pentru a forma un heterociclil cu 3 până la 6 membri; şi
n este selectat dintre 4, 5, 6 şi 7.
25. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform Realizării 24, în care X este -O-.
26. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform Realizării 24 sau 25, în care fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -CO- şi
27. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 24-26, în care fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q) şi -ORY1,
28. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 24-27, în care fiecare RY este selectat independent dintre:
hidrogen,
29. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 24-28, în care fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi C1-C6 alchil.
30. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 24-29, în care fiecare Q este selectat independent dintre:
31. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 24-30, în care Ciclul B este selectat din C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen.
32. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 24-31, în care Ciclul B este selectat dintre:
33. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 24-32, în care -(Y)n.- este un grup selectat dintre:
şi
34. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 24-33, în care fiecare Y este -C(RY)2-.
35. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 24-34, în care fiecare R1 este selectat independent dintre - CF3 şi -N(R2)2.
36. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 24-35, în care fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil.
37. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 24-36, în care fiecare R2 este hidrogen.
38. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 24-37, în care Z este
39. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 24-38, în care RZ1 este selectat din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate dintre halogen).
40. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 24-39, în care RZ1 este -CF3.
41. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 24-40, în care RZ2 este hidroxi.
42. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 24-41, în care n este selectat dintre 4, 5 şi 6.
43. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 24-42, în care n este 6.
44. Un compus selectat dintre Compuşii cu Formulele IIa, IIb, şi IIc:
şi derivaţi deuteraţi şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora,
în care:
X este selectat dintre -O-, -S-, -SO- şi -SO2-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O-, -CO- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1, -CO2RY1, -CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două exemple de RY pe acelaşi atom sunt luate împreună pentru a forma un ciclu selectat dintre C3-C8 cicloalchil şi heterociclil cu 3 până la 6 membri; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi;
fiecare RY 1 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil, sau două exemple de RY 1 legate de acelaşi atom de azot luate împreună formează un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
Ciclul B este selectat dintre:
▪ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, C1-C6 alchil şi C1-C6 alcoxi),
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri şi
▪ heterociclil cu 3 până la 6 membri (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil);
fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C1-C6 alchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ oxo,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi -OCF3), şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C3-C8 cicloalchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, -NH2 şi -NHCOMe),
∘ C1-C6 alcoxi,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil) şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi),
∘ C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-4 grupări selectate independent dintre:
▪ halogen,
▪ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu CF3),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, CF3, OCF3 şi C1-C6 alchil) şi
∘ C6-C10 aril,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări CF3), şi
heterociclil cu 3 până la 10 membri,
▪ heterociclil cu 3 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre oxo şi C3-C8 cicloalchil) şi
∘ oxo;
fiecare R1 este selectat independent dintre halogen, -CF3, -OR2, -N(R2)2, -CO2R2, -CO-N(R2)2, -CN, fenil, benzil, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil, C3-C8 cicloalchil, heteroaril cu 5 până la 6 membri, heterociclil cu 3 până la 6 membri, -SO2R2, -SR2, -SOR2, -PO(OR2)2 şi -PO(R2)2;
fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen);
Z este selectat din
RZ1 este selectat dintre hidrogen, -CN, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate dintre halogen şi hidroxi), heterociclil cu 3 până la 6 membri, cicloalchil cu 3 până la 6 membri, aril cu 5 până la 6 membri şi heteroaril cu 5 până la 6 membri;
RZ2 este selectat dintre hidrogen, halogen şi hidroxi sau RZ1 şi RZ2 luaţi împreună formează o grupare selectată dintre oxo şi =N-OH;
fiecare RZ3 este selectat independent dintre hidroxi, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil şi C6-C10 aril; sau două exemple de RZ3 sunt luate împreună pentru a forma un heterociclil cu 3 până la 6 membri; şi
m este selectat dintre 0, 1, 2 şi 3.
45. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform Realizării 44, în care m este selectat dintre 1 şi 2.
46. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform Realizării 44 sau 45, în care m este 2.
47. Un compus selectat dintre Compuşii cu Formulele IId, IIe, şi IIf:
şi derivaţi deuteraţi şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora,
în care:
X este selectat dintre -O-, -S-, -SO- şi -SO2-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O-, -CO- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1, -CO2RY1, -CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două exemple de RY pe acelaşi atom sunt luate împreună pentru a forma un ciclu selectat dintre C3-C8 cicloalchil şi heterociclil cu 3 până la 6 membri; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi;
fiecare RY1 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil, sau două exemple de RY1 legate de acelaşi atom de azot luate împreună formează un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
Ciclul B este selectat dintre:
▪ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, C1-C6 alchil şi C1-C6 alcoxi),
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri şi
▪ heterociclil cu 3 până la 6 membri (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil);
fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C1-C6 alchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ oxo,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi -OCF3), şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C3-C8 cicloalchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, -NH2 şi -NHCOMe),
∘ C1-C6 alcoxi,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil) şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi),
∘ C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-4 grupări selectate independent dintre:
▪ halogen,
▪ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu CF3),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, CF3, OCF3 şi C1-C6 alchil) şi
∘ C6-C10 aril,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări CF3), şi
heterociclil cu 3 până la 10 membri,
▪ heterociclil cu 3 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre oxo şi C3-C8 cicloalchil) şi
∘ oxo;
fiecare R1 este selectat independent dintre halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen), -OR2, -N(R2)2, -CO2R2, -CO-N(R2)2, -CN, fenil, benzil, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil, C3-C8 cicloalchil, heteroaril cu 5 până la 6 membri, heterociclil cu 3 până la 6 membri, -SO2R2, -SR2, -SOR2, -PO(OR2)2 şi -PO(R2)2;
fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen);
Z este selectat din
RZ1 este selectat dintre hidrogen, -CN, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen sau 1-3 hidroxi), heterociclil cu 3 până la 6 membri, cicloalchil cu 3 până la 6 membri, aril cu 5 până la 6 membri şi heteroaril cu 5 până la 6 membri;
RZ2 este selectat dintre hidrogen, halogen şi hidroxi sau RZ1 şi RZ2 luate împreună formează o grupare selectată dintre oxo şi =N-OH; şi
fiecare RZ3 este selectat independent dintre hidroxi, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil şi C6-C10 aril; sau două exemple de RZ3 sunt luate împreună pentru a forma un heterociclil cu 3 până la 6 membri.
48. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 44-47, în care X este -O-.
49. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 44-48, în care fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -CO- şi
50. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 44-49, în care fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), şi -ORY 1.
51. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 44-50, în care fiecare RY este selectat independent dintre:
hidrogen,
52. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 44-51, în care fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi C1-C6 alchil.
53. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 44-52, în care fiecare Q este selectat independent dintre:
54. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 44-53, în care Ciclul B este selectat din C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen.
55. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 44-54, în care Ciclul B este selectat dintre:
56. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 44-55, în care fiecare Y este
-C(RY)2-.
57. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 44-56, în care fiecare R1 este selectat independent dintre - CF3 şi -N(R2)2.
58. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 44-57, în care fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil.
59. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 44-58, în care fiecare R2 este hidrogen.
60. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 44-59, în care Z este
61. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 44-60, în care RZ1 este selectat din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate dintre halogen).
62. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 44-61, în care RZ1 este -CF3.
63. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 44-62, în care RZ2 este hidroxi.
64. Un compus selectat dintre Compuşii cu Formulele IIIa, IIIb, şi IIIc:
şi derivaţi deuteraţi şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora,
în care:
X este selectat dintre -O-, -S-, -SO- şi -SO2-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O-, -CO- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1, -CO2RY1, -CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două instanţe ale RY pe acelaşi atom sunt luate împreună pentru a forma un ciclu selectat dintre C3-C8 cicloalchil şi heterociclil cu 3 până la 6 membri; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi;
fiecare RY1 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil, sau două exemple de RY1 legate de acelaşi atom de azot luate împreună formează un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
Ciclul B este selectat dintre:
▪ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, C1-C6 alchil şi C1-C6 alcoxi),
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri şi
▪ heterociclil cu 3 până la 6 membri (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil);
fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C1-C6 alchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ oxo,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi -OCF3), şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C3-C8 cicloalchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, -NH2 şi -NHCOMe),
∘ C1-C6 alcoxi,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil) şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi),
∘ C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-4 grupări selectate independent dintre:
▪ halogen,
▪ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu CF3),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, CF3, OCF3 şi C1-C6 alchil) şi
∘ C6-C10 aril,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări CF3), şi
heterociclil cu 3 până la 10 membri,
▪ heterociclil cu 3 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre oxo şi C3-C8 cicloalchil) şi
∘ oxo;
fiecare R1 este selectat independent dintre halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen), -OR2, -N(R2)2, -CO2R2, -CO-N(R2)2, -CN, fenil, benzil, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil, C3-C8 cicloalchil, heteroaril cu 5 până la 6 membri, heterociclil cu 3 până la 6 membri, -SO2R2, -SR2, -SOR2, -PO(OR2)2 şi -PO(R2)2;
fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen);
Z este selectat din
RZ1 este selectat dintre hidrogen, -CN, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen sau 1-3 hidroxi), heterociclil cu 3 până la 6 membri, cicloalchil cu 3 până la 6 membri, aril cu 5 până la 6 membri şi heteroaril cu 5 până la 6 membri;
RZ2 este selectat dintre hidrogen, halogen şi hidroxi sau RZ1 şi RZ2 luaţi împreună formează o grupare selectată dintre oxo şi =N-OH;
fiecare RZ3 este selectat independent dintre hidroxi, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil şi C6-C10 aril; sau două exemple de RZ3 sunt luate împreună pentru a forma un heterociclil cu 3 până la 6 membri; şi
m este selectat dintre 0, 1, 2 şi 3.
65. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform Realizării 64, în care m este selectat dintre 1 şi 2.
66. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform Realizării 64 sau 65, în care m este 2.
67. Un compus selectat dintre Compuşii cu Formulele IIId, IIIe, şi IIIf:
şi derivaţi deuteraţi şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora,
în care:
X este selectat dintre -O-, -S-, -SO- şi -SO2-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O-, -CO- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1, -CO2RY1, -CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două exemple de RY pe acelaşi atom sunt luate împreună pentru a forma un ciclu selectat dintre C3-C8 cicloalchil şi heterociclil cu 3 până la 6 membri; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi;
fiecare RY1 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil, sau două exemple de RY1 legate de acelaşi atom de azot luate împreună formează un heterociclil cu 3 până la 6 membri;
Ciclul B este selectat dintre:
▪ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, C1-C6 alchil şi C1-C6 alcoxi),
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri şi
▪ heterociclil cu 3 până la 6 membri (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil);
fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C1-C6 alchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ oxo,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi -OCF3), şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C3-C8 cicloalchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, -NH2 şi -NHCOMe),
∘ C1-C6 alcoxi,
∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil) şi
∘ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ CN,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi),
∘ C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-4 grupări selectate independent dintre:
▪ halogen,
▪ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu CF3),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, CF3, OCF3 şi C1-C6 alchil) şi
∘ C6-C10 aril,
▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ halogen,
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen),
∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări CF3), şi
heterociclil cu 3 până la 10 membri,
▪ heterociclil cu 3 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre:
∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre oxo şi C3-C8 cicloalchil) şi
∘ oxo;
fiecare R1 este selectat independent dintre halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen), -OR2, -N(R2)2, -CO2R2, -CO-N(R2)2, -CN, fenil, benzil, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil, C3-C8 cicloalchil, heteroaril cu 5 până la 6 membri, heterociclil cu 3 până la 6 membri, -SO2R2, -SR2, -SOR2, -PO(OR2)2 şi -PO(R2)2;
fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen);
Z este selectat din
RZ1 este selectat dintre hidrogen, -CN, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen sau 1-3 hidroxi), heterociclil cu 3 până la 6 membri, cicloalchil cu 3 până la 6 membri, aril cu 5 până la 6 membri şi heteroaril cu 5 până la 6 membri;
RZ2 este selectat dintre hidrogen, halogen şi hidroxi sau RZ1 şi RZ2 luaţi împreună formează o grupare selectată dintre oxo şi =N-OH;
fiecare RZ3 este selectat independent dintre hidroxi, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil şi C6-C10 aril; sau două exemple de RZ3 sunt luate împreună pentru a forma un heterociclil cu 3 până la 6 membri.
68. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 64-67, în care X este -O-.
69. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 64-68, în care fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -CO- şi
70. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 64-69, în care fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), şi -ORY1.
71. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 64-70, în care fiecare RY este selectat independent dintre:
hidrogen,
72. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 64-71, în care fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi C1-C6 alchil.
73. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 64-72, în care fiecare Q este selectat independent dintre:
74. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 64-73, în care Ciclul B este selectat din C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen.
75. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 64-74, în care Ciclul B este selectat dintre:
76. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 64-75, în care fiecare Y este -C(RY)2-.
77. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 64-76, în care fiecare R1 este selectat independent dintre - CF3 şi -N(R2)2.
78. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 64-77, în care fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil.
79. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 64-78, în care fiecare R2 este hidrogen.
80. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 64-79, în care Z este
81. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 64-80, în care RZ1 este selectat din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate dintre halogen).
82. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 64-81, în care RZ1 este -CF3.
83. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 64-82, în care RZ2 este hidroxi.
84. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform Realizării 1, în care X este -O-.
85. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform Realizării 1 sau 84, în care fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C3-C8 cicloalchil şi -ORY1.
86. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1, 84 şi 85, în care -ORY1 este -OH.
87. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1 şi 84-86, în care fiecare Q este selectat independent dintre:
▪ C3-C8 cicloalchil,
▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi C1-C6 alchil.
88. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1 şi 84-87, în care fiecare Q este selectat independent dintre:
89. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1 şi 84-88, în care fiecare RY este selectat independent dintre:
hidrogen, fluor,
90. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1 şi 84-89, în care Ciclul B este selectat din C3-C8 cicloalchil şi fenil opţional substituiţi cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen.
91. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1 şi 84-90, în care Ciclul B este selectat dintre:
92. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1 şi 84-91, în care n este selectat dintre 4, 5 şi 6.
93. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1 şi 84-92, în care -(Y)n.- este un grup selectat dintre:
şi
94. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1 şi 84-93, în care fiecare R1 este selectat independent din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi), -N(R2)2 şi -CO2R2.
95. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1 şi 85-94, în care fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil.
96. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1 şi 84-95, în care fiecare R1 este selectat independent din -CF3, -NH2, -NH(CH2CH3), CO2H şi CH2OH.
97. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1 şi 84-96, în care Z este selectat din
şi
98. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1 şi 84-97, în care gruparea:
este selectat dintre:
şi
99. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1 şi 84-98, în care gruparea:
este selectat dintre:
100. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1 şi 84-99, în care RZ1 este selectat dintre hidrogen şi C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate dintre halogen).
101. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1 şi 84-100, în care RZ1 este selectat dintre hidrogen şi -CF3.
102. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1 şi 84-101, în care RZ2 este hidroxi.
103. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1 şi 84-102, în care Z este selectat dintre:
104. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1 şi 84-103, în care m. este selectat dintre 1 şi 2.
105. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1, 2 şi 84-104, în care:
X este -O-;
fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q);
Ciclul B este selectat din C3-C8 grupări cicloalchil:
fiecare Q este selectat independent dintre: C3-C8 cicloalchil şi C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi C1-C6 alchil,
fiecare R1 este selectat independent din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen) şi -NH2;
Z este
RZ1 este selectat din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen);
RZ2 este hidroxi;
n este selectat dintre 5 şi 6; şi
m este 2.
106. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1, 2 şi 84-105, în care fiecare Q este selectat independent dintre:
107. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1, 2 şi 84-106, în care fiecare RY este selectat independent dintre:
hidrogen,
108. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1, 2 şi 84-107, în care Ciclul B este
109. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1, 2 şi 84-108, în care -(Y)n.- este un grup selectat dintre:
110. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1, 2 şi 84-109, în care RZ1 este -CF3.
111. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1, 2 şi 84-110, în care n este 5.
112. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre Realizările 1, 2 şi 84-110, în care n este 6.
113. Un compus selectat dintre Compuşii din Tabelul 12, sărurile acestora acceptabile farmaceutic şi derivaţii deuteraţi ai oricăruia dintre cei menţionaţi anterior.
114. Un compus selectat dintre Compuşii din Tabelul 13, sărurile acestora acceptabile farmaceutic şi derivaţii deuteraţi ai oricăruia dintre cei menţionaţi anterior.
115. Un compus conform Realizării 113, în care Compusul este selectat dintre:
Comp. Nr. Structură 5 11 14 36 37 47 49 50 52
derivaţi deuteraţi ai acestora şi săruri farmaceutic acceptabile ale oricăruia dintre cei de mai sus.
116. Un compus conform Realizării 114, în care Compusul este selectat dintre:
Comp. Nr. Structură 59 61 63 64
derivaţi deuteraţi ai acestora şi săruri farmaceutic acceptabile ale oricăruia dintre cei de mai sus.
117. O compoziţie farmaceutică care cuprinde un Compus, un derivat deuterat sau o sare acceptabilă farmaceutic a oricăreia dintre Realizările 1-116 şi un purtător acceptabil farmaceutic.
118. Compoziţia farmaceutică conform Realizării 117, care cuprinde în plus unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari.
119. Compoziţia farmaceutică conform Realizării 118, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind un Compus cu activitate de modulare a CFTR sau o sare sau un derivat deuterat al acestuia.
120. Compoziţia farmaceutică conform Realizării 118 sau 119, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind un corector CFTR.
121. Compoziţia farmaceutică conform oricăreia dintre Realizările 118-120, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind (R)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-dihidroxipropil)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropancarboxamidă (Compus II):
122. Compoziţia farmaceutică conform oricăreia dintre Realizările 118-121, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind acid 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropancarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)benzoic (Compus IV):
123. Compoziţia farmaceutică conform oricăreia dintre Realizările 118-122, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind N-(1,3-dimetilpirazol-4-il)sulfonil-6-[3-(3,3,3-trifluoro-2,2-dimetil-propoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (Compus V):
124. Compoziţia farmaceutică conform oricăreia dintre Realizările 118-123, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind N-(benzensulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (Compus VI):
125. Compoziţia farmaceutică conform oricăreia dintre Realizările 118-124, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind (14S)-8-[3-(2-{dispiro[2.0.2.1]heptan-7-il}etoxi)-1H-pirazol-1-il]-12,12-dimetil-2λ6-tia-3,9,11,18,23-pentaazatetraciclo[17.3.1.111,14.05,10]tetracoza-1(22),5,7,9,19(23),20-hexaen-2,2,4-trionă (Compus VII):
126. Compoziţia farmaceutică conform oricăreia dintre Realizările 118-125, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind (11R)-6-(2,6-dimetilfenil)-11-(2-metilpropil)-12-{spiro[2.3]hexan-5-il}-9-oxa-2λ6-tia-3,5,12,19-tetraazatriciclo[12.3.1.14,8]nonadeca-1(17),4(19),5,7,14(18),15-hexaen-2,2,13-trionă (Compus VIII):
127. Compoziţia farmaceutică conform oricăreia dintre Realizările 118-126, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind cel puţin un compus selectat dintre PTI-428, ABBV-2222, ABBV-2851, GLPG2737, ABBV-3221, ABBV-3748, ABBV-3903, ABBV-119 şi PTI-801.
128. Compoziţia farmaceutică conform oricăreia dintre Realizările 118-127, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind un potenţator CFTR.
129. Compoziţia farmaceutică conform oricăreia dintre Realizările 118-128, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind ASP-11.
130. O metodă de tratare a fibrozei chistice, cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente de Compus, sare sau derivat deuterat conform oricăreia dintre Realizările 1-116 sau compoziţie farmaceutică conform oricăreia dintre Realizările 117-129 unui pacient care are nevoie de aceasta.
131. Metoda conform Realizării 130, cuprinzând în plus administrarea unuia sau mai multor agenţi terapeutici suplimentari.
132. Metoda conform Realizării 131, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind un Compus cu activitate de modulare a CFTR sau o sare sau un derivat deuterat al acestuia.
133. Metoda conform Realizării 131 sau 132, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind un corector CFTR.
134. Metoda conform oricăreia dintre Realizările 131-133, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind (R)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-dihidroxipropil)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropancarboxamidă (Compus II):
135. Metoda conform oricăreia dintre Realizările 131-134, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind acid 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropancarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)benzoic (Compus IV):
136. Metoda conform oricăreia dintre Realizările 131-135, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind N-(1,3-dimetilpirazol-4-il)sulfonil-6-[3-(3,3,3-trifluoro-2,2-dimetil-propoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (Compus V):
137. Metoda conform oricăreia dintre Realizările 131-136, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind N-(benzensulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil) ciclopropil]etoxi|pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (Compus VI):
138. Metoda conform oricăreia dintre Realizările 131-137, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind (14)S)-8-[3-(2-{dispiro[2.0.2.1]heptan-7-il}etoxi)-1H-pirazol-1-il]-12,12-dimetil-2λ6-tia-3,9,11,18,23-pentaazatetraciclo [17.3.1.111,14.05,10]tetracoza-1(22),5,7,9,19(23),20-hexaen-2,2,4-trionă (Compus VII):
139. Metoda conform oricăreia dintre Realizările 131-138, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind (11R)-6-(2,6-dimetilfenil)-11-(2-metilpropil)-12-{spiro[2.3]hexan-5-il}-9-oxa-2λ6-tia-3,5,12,19-tetraazatriciclo[12.3.1.14,8]nonadeca-1(17),4(19),5,7,14(18),15-hexaen-2,2,13-trionă (Compus VIII):
140. Metoda conform oricăreia dintre Realizările 131-139, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind cel puţin un compus selectat dintre PTI-428, ABBV-2222, ABBV-2851, GLPG2737, ABBV-3221, ABBV-3748, ABBV-3903, ABBV-119 şi PTI-801.
141. Metoda conform oricăreia dintre Realizările 131-140, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind un potenţator CFTR.
142. Metoda conform oricăreia dintre Realizările 131-141, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind ASP-11.
143. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic a oricăreia dintre Realizările 1-116 sau compoziţia farmaceutică conform oricăreia dintre Realizările 117-129 pentru utilizare în tratamentul fibrozei chistice.
144. Utilizarea Compusului, derivatului deuterat sau sării acceptabile farmaceutic ale oricăreia dintre Realizările 1-117 în fabricarea unui medicament pentru tratamentul fibrozei chistice.
145. Utilizarea compoziţiei farmaceutice conform oricăreia dintre Realizările 117-129 în fabricarea unui medicament pentru tratamentul fibrozei chistice.
146. Solvat heptan al Compusului 11 substanţial cristalin (adică, în care mai puţin de 15% din Compusul 11 este în formă amorfă, în care mai puţin de 10% din Compusul 11 este în formă amorfă, în care mai puţin de 5% din Compusul 11 este în formă amorfă).
147. Compusul 11 conform Realizării 146, în care Compusul 11 este 100% solvat cristalin heptan.
148. Solvatul heptan al Compusului 11 cristalin conform Realizării 146 sau 147, caracterizat printr-o difractogramă de raze X pe pulbere având unul, două sau trei semnale selectate dintre 5,8 ± 0,2 grade doi-theta, 10,1 ± 0,2 grade doi-theta şi 11,7 ± 0,2 grade doi-theta.
149. Solvatul heptan al Compusului 11 cristalin conform oricăreia dintre Realizările 146-148, caracterizat printr-o difractogramă de raze X pe pulbere având (a) unul, două sau trei semnale selectate dintre 5,8 ± 0,2 grade doi-theta, 10,1 ± 0,2 grade doi-theta şi 11,7 ± 0,2 grade doi-theta şi (b) unul, două, trei sau patru semnale selectate dintre 5,6 ± 0,2 grade doi-theta, 18,1 ± 0,2 grade doi-theta, 20,5 ± 0,2 grade doi-theta şi 20,9 ± 0,2 grade doi-theta.
150. Solvatul heptan al Compusului 11 cristalin conform oricăreia dintre Realizările 146-149, caracterizat printr-o difractogramă de raze X pe pulbere având semnale la 5,6 ± 0,2 grade doi-theta, 5,8 ± 0,2 grade doi-theta, 10,1 ± 0,2 grade doi-theta, 11,7 ± 0,2 grade doi-theta, 18,1 ± 0,2 grade.
151. Solvatul cristalin al Compusului 11 heptan conform oricăreia dintre Realizările 146-150, caracterizat printr-o difractogramă de raze X pe pulbere substanţial similară cu FIG. 1.
152. Solvatul heptan al Compusului 11 cristalin conform oricăreia dintre Realizările 146-151, caracterizat printr-un spectru 13C ssRMN având unul, două, trei, patru, cinci, şase, şapte, opt, nouă, zece sau mai multe vârfuri selectate dintre 166,3 ± 0,2 ppm, 165,8 ± 0,2 ppm, 164,6 ± 0,2 ppm, 163,4 ± 0,2 ppm, 154,8 ± 0,2 ppm, 154,0 ± 0,2 ppm, 152,1 ± 0,2 ppm, 151,6 ± 0,2 ppm, 140,2 ± 0,2 ppm, 139,4 ± 0,2 ppm, 138,5 ± 0,2 ppm, 138,0 ± 0,2 ppm, 135,1 ± 0,2 ppm, 134,6 ± 0,2 ppm, 131,3 ± 0,2 ppm, 130,2 ± 0,2 ppm, 129,6 ± 0,2 ppm, 128,5 ± 0,2 ppm, 125,7 ± 0,2 ppm, 123,7 ± 0,2 ppm, 123,2 ± 0,2 ppm, 122,9 ± 0,2 ppm, 121,1 ± 0,2 ppm, 120,2 ± 0,2 ppm, 119,2 ± 0,2 ppm, 117,8 ± 0,2 ppm, 76,2 ± 0,2 ppm, 74,4 ± 0,2 ppm, 73,7 ± 0,2 ppm, 73,3 ± 0,2 ppm, 40,0 ± 0,2 ppm, 38,6 ± 0,2 ppm, 37,6 ± 0,2 ppm, 36,9 ± 0,2 ppm, 35,7 ± 0,2 ppm, 33,6 ± 0,2 ppm, 32,5 ± 0,2 ppm, 32,0 ± 0,2 ppm, 30,4 ± 0,2 ppm, 30,1 ± 0,2 ppm, 29,5 ± 0,2 ppm, 28,8 ± 0,2 ppm, 28,1 ± 0,2 ppm, 27,1 ± 0,2 ppm, 25,3 ± 0,2 ppm, 23,1 ± 0,2 ppm, 22,7 ± 0,2 ppm, 22,0 ± 0,2 ppm, 21,6 ± 0,2 ppm, 20,3 ± 0,2 ppm, 19,6 ± 0,2 ppm, 18,3 ± 0,2 ppm, 17,6 ± 0,2 ppm, 13,8 ± 0,2 ppm, 13,1 ± 0,2 ppm şi 12,5 ± 0,2 ppm.
153. Solvatul heptan al Compusului 11 cristalin conform oricăreia dintre Realizările 146-152, caracterizat printr-un spectru 13C SSRMN substanţial similar cu FIG. 3.
154. Solvatul heptan al Compusului 11 cristalin conform oricăreia dintre Realizările 146-153, caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu unul, două, trei, patru, cinci sau mai multe vârfuri selectate dintre -63,5 ± 0,2 ppm, -63,8 ± 0,2 ppm, -65,1 ± 0,2 ppm, -65,8 ± 0,2 ppm, -66,3 ± 0,2 ppm, -67,0 ± 0,2 ppm, -74,0 ± 0,2 ppm, -74,9 ± 0,2 ppm şi -76,6 ± 0,2 ppm.
155. Solvatul heptan al Compusului 11 cristalin conform oricăreia dintre Realizările 146-154, caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu unul, două, trei, patru, cinci sau mai multe vârfuri selectate dintre -63,5 ± 0,2 ppm, -63,8 ± 0,2 ppm, -65,1 ± 0,2 ppm, -65,8 ± 0,2 ppm, -66,3 ± 0,2 ppm, -67,0 ± 0,2 ppm, -74,0 ± 0,2 ppm, -74,9 ± 0,2 ppm, -76,6 ± 0,2 ppm şi -77,6 ± 0,2 ppm.
156. Solvatul heptan al Compusului 11 cristalin conform oricăreia dintre Realizările 146-155, caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu un vârf la -67,0 ± 0,2 ppm.
157. Solvatul heptan al Compusului 11 cristalin conform oricăreia dintre Realizările 146-156, caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu un vârf la -65,1 ± 0,2 ppm.
158. Solvatul heptan al Compusului 11 cristalin conform oricăreia dintre Realizările 146-157, caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu un vârf la -76,6 ± 0,2 ppm.
159. Solvatul heptan al Compusului 11 cristalin conform oricăreia dintre Realizările 146-158, caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu un vârf la -63,5 ± 0,2 ppm.
160. Solvatul heptan al Compusului 11 cristalin conform oricăreia dintre Realizările 146-159, caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu un vârf la -74,9 ± 0,2 ppm.
161. Solvatul heptan al Compusului 11 cristalin conform oricăreia dintre Realizările 146-160, caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu cel puţin un vârf selectat dintre -65,1 ± 0,2 ppm, -67,0 ± 0,2 ppm şi -76,6 ± 0,2 ppm.
162. Solvatul heptan al Compusului 11 cristalin conform oricăreia dintre Realizările 146-161, caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu vârfuri la -65,1 ± 0,2 ppm, -67,0 ± 0,2 ppm şi -76,6 ± 0,2 ppm.
163. Solvatul heptan al Compusului 11 cristalin conform oricăreia dintre Realizările 146-162, caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu cel puţin un vârf selectat dintre -63,5 ± 0,2 ppm, -65,1 ± 0,2 ppm, -67,0 ± 0,2 ppm, -74,9 ± 0,2 ppm şi -76,6 ± 0,2 ppm.
164. Solvatul heptan al Compusului 11 cristalin conform oricăreia dintre Realizările 146-163, caracterizat ca având un spectru 19F SSRMN cu vârfuri la -63,5 ± 0,2 ppm, -65,1 ± 0,2 ppm, -67,0 ± 0,2 ppm, -74,9 ± 0,2 ppm şi -76,6 ± 0,2 ppm.
165. Solvatul heptan al Compusului 11 cristalin conform oricăreia dintre Realizările 146-164, caracterizat printr-un spectru 19F SSRMN substanţial similar cu FIG. 4.
166. Solvatul heptan al Compusului 11 cristalin, conform oricăreia dintre Realizările 146-165, preparat printr-un procedeu care cuprinde dizolvarea Compusului 11 în heptan şi diclormetan, concentrarea sub evaporare rotativă, agitarea la temperatura camerei, filtrarea solidelor, spălarea solidelor cu heptan rece şi uscarea sub vid pentru a da solvatul heptan al Compusului 11.
167. O metodă de preparare a solvatului heptan al Compusului 11 cristalin conform oricăreia dintre Realizările 146-166, preparată printr-un procedeu care cuprinde dizolvarea Compusului 11 în heptan şi diclormetan, concentrarea sub evaporare rotativă, agitarea la temperatura camerei, filtrarea solidelor, spălarea solidelor cu heptan rece şi uscarea sub vid pentru a da solvatul heptan al Compusului 11.
168. Compoziţia farmaceutică conform oricăreia dintre Realizările 118-126, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind cel puţin un compus selectat dintre Compusul II, Compus III, Compus III, Compus IV, Compus V, Compus VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, PTI-428, ASP-11, ABBV-2222, ABBV-2851, GLPG2737, ABBV-3221, ABBV-3748, ABBV-3903, ABBV-119, FDL-169, ARN5562, ARN21586, ARN21586, ARN21586, ARN21586, ARN ARN23765, ARN23766, PTI-801, FDL-176, PTI-808 (dirocaftor), GLPG1837, GLPG2451/ABBV-2451, QBW251 (icenticaftor), GLPG3067/ABBV-3067/ABBV-3061, (ELBBV-306-3067), (ELBBV-306-306) MRT5005, Lunar-CF, RCT223, amilorid, ETD001, CF552, GS-9411, GS-5737, P-1037 (VX-371), P-1055 (VX-551), AZD5634, SPX-101, Ionis-ENaC-2.5 Rx, BI 1265162, AZ5634, ARO-ENaC1001, ETD002 şi DS-1039.
169. Metoda conform oricăreia dintre Realizările 131-139, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind cel puţin un compus selectat dintre Compusul II, Compus III, Compus III-d, Compus IV, Compus V, Compus VI, Compus VII, Compus VIII, Compus IX, Compus X, PTI-428, ASP-11, ABBV-2222, ABBV-2851, GLPG2737, ABBV-3221, ABBV-3748, ABBV-3903, ABBV-119, FDL-169, ARN5562, ARN21586, ARN21586, ARN21586, ARN21586, ARN ARN23765, ARN23766, PTI-801, FDL-176, PTI-808 (dirocaftor), GLPG1837, GLPG2451/ABBV-2451, QBW251 (icenticaftor), GLPG3067/ABBV-3067/ABBV-3061, (ELBBV-306-3067), (ELBBV-306-306) MRT5005, Lunar-CF, RCT223, amilorid, ETD001, CF552, GS-9411, GS-5737, P-1037 (VX-371), P-1055 (VX-551), AZD5634, SPX-101, Ionis-ENaC-2.5 Rx, BI 1265162, AZ5634, ARO-ENaC1001, ETD002 şi DS-1039.
170. Compusul 6 substanţial cristalin (formă liberă) (adică, în care mai puţin de 15% din Compusul 6 este în formă amorfă, în care mai puţin de 10% din Compusul 6 este în formă amorfă, în care mai puţin de 5% din Compusul 6 este în formă amorfă).
171. Compusul 6 (formă liberă) conform Realizării 170, în care Compusul 6 este Compusul 6 100% cristalin (formă liberă).
172. Compusul cristalin 6 (formă liberă) conform variantei de realizare 170 sau 171, caracterizat printr-un sistem cristalin monoclinic, un grup spaţial P21 şi dimensiunile celulei unitare măsurate la 100 K pe un difractometru Bruker echipat cu radiaţia CuKα (λ=1,5478 Å) de:
a 9,6 ± 0,1 Å α 90° b 13,6 ± 0,1 Å β 105,3° ± 0,1° c. 13,8 ± 0,1 Å γ 90°
173. Compusul 19 substanţial cristalin (formă liberă) (adică, în care mai puţin de 15% din Compusul 19 este în formă amorfă, în care mai puţin de 10% din Compusul 19 este în formă amorfă, în care mai puţin de 5% din Compusul 19 este în formă amorfă).
174. Compusul 19 (formă liberă) conform Realizării 173, în care Compusul 19 este Compusul 19 100% cristalin (formă liberă).
175. Compusul cristalin 19 (formă liberă) conform variantei de realizare 173 sau 174, caracterizat printr-un sistem cristalin tetragonal, un grup spaţial P41212 şi dimensiunile celulei unitare măsurate la 100 K pe un difractometru Bruker echipat cu radiaţia MoKα (λ=0,71073 Å) a:
a 9,8 ± 0,1 Å α 90° b 9,8 ± 0,1 Å β 90° c. 37,1 ± 0,1 Å γ 90°
176. Compusul 20 substanţial cristalin (formă liberă) (adică, în care mai puţin de 15% din Compusul 20 este în formă amorfă, în care mai puţin de 10% din Compusul 20 este în formă amorfă, în care mai puţin de 5% din Compusul 20 este în formă amorfă).
177. Compusul 20 (formă liberă) conform Realizării 176, în care Compusul 20 este Compusul 20 100% cristalin (formă liberă).
178. Compusul cristalin 20 (formă liberă) conform Realizării 176 sau 177, caracterizat printr-un sistem cristalin ortorombic, un grup spaţial P212121 şi dimensiunile celulei unitare măsurate la 100 K pe un difractometru Bruker echipat cu radiaţia MoKα (λ=0,71073 Å) de:
a 10,7 ± 0,1 Å α 90° b 13,7 ± 0,1 Å β 90° c. 25,5 ± 0,1 Å γ 90°
Exemple
Proceduri Experimentale Generale
Abrevieri
ACN: Acetonitril
AcOH: Acid acetic
BCl33: Triclorură de bor
Anhidridă Boc ((Boc)2O): Di-terţ-dicarbonat de butil
CDCl3: Cloroform-d
CDI: 1,1'-Carbonildiimidazol
CD3OD: Metil-d3 alcool-d
CH2Cl2: Diclormetan
CH3CN: Acetonitril
CO2: Dioxid de carbon
Cs2CO3: Carbonat de cesiu
CuBr2: Bromură de cupru(II)
CuI: iodură de cupru(I)
DCE: 1,2-dicloretan
DCM: Diclormetan
DDQ: 2,3-dicloro-5,6-diciano-1,4-benzochinonă
DI: Deionizat
DIAD: Azodicarboxilat de diizopropil
DIEA: DIPEA; N,N-Diizopropiletilamină
DMAP: 4-Dimetilaminopiridină
DMF: N,N-Dimetilformamidă
DMSO: Dimetilsulfoxid
DMSO-d6: Dimetil sulfoxid-d6
EA: Acetat de etil
ELSD: Detector de difuzie a luminii prin evaporare
Et2O: Eter dietilic
EtOAc: Acetat de etil
EtOH: Etanol
ESI-MS: Spectrometrie de masă cu ionizare prin electrospray
Catalizator Grubbs de generaţie 1
Dicloro(benziliden)bis(triciclohexilfosfină)ruteniu(II)
Catalizator Grubbs de generaţie 2: [1,3-Bis(2,4,6-trimetilfenil)imidazolidin-2-iliden]-dicloro-[(2-izopropoxifenil)metilen]ruteniu
H2: Hidrogen
HATU: N-[(Dimetilamino)-1H-1,2,3-triazolo-[4,5-b]piridin-1-ilmetilen]-N-metilmetanaminiu hexafluorofosfat N-oxid
HCl: Acid clorhidric
HFIP: Hexafluoroizopropanol
Catalizator de generaţie 2 Hoveyda-Grubb : Dicloro[1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)-2-imidazolidiniliden](2-izopropoxifenilmetilen)ruteniu(II)
HPLC: Cromatografie lichidă de înaltă performanţă
IPA: Izopropanol
IPAC: Acetat de izopropil
iPrOH: Izopropanol
KHSO4: Bisulfat de potasiu
LC: Cromatografie lichidă
LCMS: Cromatografie lichidă spectrometrie de masă
LDA: Diizopropilamidă de litiu
LiOH: Hidroxid de litiu
MeCN: Acetonitril
MeTHF sau 2-MeTHF: 2-Metiltetrahidrofuran
MeOH: Metanol
MTBE: Eter metil terţ-butilic
MgSO4: Sulfat de magneziu
n.-BuLi: n-Butillitiu
NaBH4: borohidrură de sodiu
NaHCO3: Bicarbonat de sodiu
NaHMDS: Bis(trimetilsilil)amidă de sodiu
NaOH: Hidroxid de sodiu
Na2S2O3: Tiosulfat de sodiu
Na2SO4: Sulfat de sodiu
NBS: N-Bromosuccinimidă
NMP: N-Metil-2-pirolidonă
RMN: Rezonanţă magnetică nucleară
Pd/C: Paladiu pe carbon
Pd(OAc)2: Acetat de paladiu(II)
rt: Temperatura camerei tc
SFC: Cromatografie cu fluide supercritice
Silica Cat Pd: Paladiu pe silice
SilicaMetS: Eliminator de metale pe suport de silice
SiO2: gel de silice
T3P: Anhidridă 1-propanfosfonică
TBAI: Iodură de tetrabutilamoniu
TEA: Trietilamină
TFA: Acid trifluoroacetic
THF: Tetrahidrofuran
UPLC: Cromatografie lichidă ultraperformantă
Xantfos: 4,5-Bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxantenă
XPhos Pd G3: (2-Diciclohexilfosfino-2',4',6'-triizopropil-1,1'-bifenil)[2-(2'-amino-1,1'-bifenil)]paladiu(II) metansulfonat
Catalizator Zhan-1B: Dicloro[1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)-2-imidazolidiniliden][5-[(dimetilamino)sulfonil]-2-(1-metiletoxi-O)fenil]metilen-C]ruteniu(II)
Metode Generale
Reactivii şi materiile prime au fost obţinute din surse comerciale, cu excepţia cazului în care se specifică altfel, şi au fost utilizaţi fără purificare.
Spectrele RMN de protoni şi carbon au fost achiziţionate fie pe un spectrometru FTRMN Bruker Biospin DRX 400 MHz care funcţionează la o Frecvenţa de rezonanţă 1H şi 13C de 400 şi respectiv 100 MHz sau pe un spectrometru RMN de 300 MHz. Spectrele unidimensionale de protoni şi carbon au fost achiziţionate utilizând o sondă de observare în bandă largă (BBFO) cu o rotaţie a probei de 20 Hz la o rezoluţie digitală de 0,1834 şi respectiv 0,9083 Hz/Pt. Toate spectrele de protoni şi carbon au fost achiziţionate cu controlul temperaturii la 30 °C, utilizând secvenţe de impulsuri standard, publicate anterior, şi parametri de procesare de rutină.
Spectrele RMN (1D şi 2D) au fost, de asemenea, înregistrate pe un spectrometru Bruker AVNEO de 400 MHz care funcţionează la 400 MHz şi, respectiv, 100 MHz, echipat cu o sondă Iprobe multinucleară de 5 mm.
Spectrele RMN au fost înregistrate şi pe un instrument RMN Varian Mercury la 300 MHz pentru 1H utilizând un unghi al impulsului de 45 de grade, o lăţime spectrală de 4800 Hz şi 28860 de puncte de achiziţie. FID au fost umplute cu zero până la 32k puncte şi s-a aplicat o lărgire a liniei de 0,3 Hz înainte de transformata Fourier. Spectrele RMN pentru 19F au fost înregistrate la 282 MHz utilizând un unghi de impuls de 30 de grade, o lăţime spectrală de 100 kHz şi au fost achiziţionate 59202 puncte. Detectoarele FID au fost umplute cu zero până la 64k puncte şi s-a aplicat o lărgire a liniei de 0,5 Hz înainte de transformata Fourier.
Spectrele RMN au fost de asemenea înregistrate pe un instrument Bruker Avance III HD RMN la 400 MHz pentru 1H utilizând un unghi al impulsului de 30 de grade, o lăţime spectrală de 8000 Hz şi 128k puncte de achiziţie. FID au fost umplute cu zero până la 256k puncte şi s-a aplicat o lărgire a liniei de 0,3 Hz înainte de transformarea Fourrier. Spectrele RMN de 19F au fost înregistrate la 377 MHz utilizând un unghi de impuls de 30 de grade, o lăţime spectrală de 89286 Hz şi au fost achiziţionate 128k puncte. Detectoarele FID au fost umplute cu zero până la 256k puncte şi s-a aplicat o lărgire a liniei de 0,3 Hz înainte de transformata Fourier.
Spectrele RMN au fost înregistrate şi pe un instrument Bruker AC 250MHz echipat cu o sondă QNP(H1/C13/F19/P31) de 5 mm (tip: 250-SB, s#23055/0020) sau pe un instrument Varian 500MHz echipat cu o sondă ID PFG, 5 mm, 50-202/500 MHz (model/piesă # 99337300).
Dacă nu se specifică altfel în exemplele următoare, puritatea finală a compuşilor a fost determinată prin UPLC cu fază inversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particulă de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350) şi un gradient dublu de la 1-99% fază mobilă B timp de 3,0 minute. Faza mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Faza mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injectat = 1,5 µL şi temperatura coloanei = 60 °C. Puritatea finală a fost calculată prin medierea ariei de sub curbă (AUC) a două urme UV (220 nm, 254 nm). Spectrele de masă cu rezoluţie scăzută au fost raportate ca specii [M+1]+ obţinute folosind un spectrometru de masă cu un singur cuadripol echipat cu o sursă de ionizare prin electrospray (ESI) capabilă să atingă o precizie de masă de 0,1 Da şi o rezoluţie minimă de 1000 (fără unităţi de rezoluţie) pe întregul interval de detecţie.
Spectrele RMN în stare solidă (SSRMN) au fost înregistrate pe un spectrometru Bruker-Biospin cu diametru larg de 400 MHz, echipat cu o sondă Bruker-Biospin HFX de 4 mm. Probele au fost introduse în rotoare de ZrO2 de 4 mm şi centrifugate în condiţii de rotaţie cu unghi magic (MAS), cu o viteză de rotaţie setată în mod tipic la 12,5 kHz. Timpul de relaxare a protonilor a fost măsurat folosind experiment de relaxare a recuperării saturaţiei 1H MAS T1 pentru a configura o întârziere de recirculare adecvată a experimentului MAS cu polarizare încrucişată 13C (CP). Timpul de relaxare al fluorului a fost măsurat folosind experiment de relaxare a recuperării saturaţiei 19F MAS T1 pentru a configura o întârziere de recirculare adecvată a experimentului 19F MAS. Timpul de contact CP al carbonului în experimentul CPMAS a fost setat la 2 ms. S-a utilizat un impuls de proton CP cu rampă liniară (de la 50% la 100%). Ajustarea Hartmann-Hahn a carbonului a fost optimizată pe o probă de referinţă externă (glicină). Atât spectrul carbonului, cât şi cel al fluorului au fost înregistrate cu decuplare de protoni folosind secvenţa de decuplare TPPM15 cu o intensitate a câmpului de aproximativ 100 kHz.
Scheme Generale de Sinteză
Un alt aspect al dezvăluirii furnizează metode pentru obţinerea compuşilor cu Formulele I, I', I", I‴, Ia, IIa, IIa', IIb, IIc, IId, IIe, IIf, IIIa, IIIa', IIIb, IIIc, IIId, IIIe, şi IIIf, Compuşii 1 până la 53, Compuşii 54 până la 77 şi sărurile acceptabile farmaceutic ale oricăruia dintre aceşti compuşi, derivaţi deuteraţi ai oricăruia dintre cei menţionaţi anterior şi intermediari pentru fabricarea oricăruia dintre cei menţionaţi anterior. În unele variante de realizare ale următoarelor Scheme şi Exemple, fiecare atom de azot şi oxigen poate avea opţional, pe lângă sau în locul unui substituent variabil specificat, una sau mai multe grupări protectoare selectate din gama de grupări protectoare descrise în conţinut. În unele variante de realizare ale următoarelor Scheme şi Exemple, fiecare compus poate fi înlocuit cu derivatul său deuterat.
Schema 1 se referă la procedeele de preparare a unui compus intermediar cu Formula S1-7 dintr-un compus cu Formula S1-1. Alc. este selectat din grupări C1-C6 alchil liniare sau ramificate. X1 este selectat dintre atomi de halogen precum Cl, I sau Br. Y şi RY sunt aşa cum sunt definite pentru Formula I mai sus.
Orice condiţii adecvate pentru o adiţie Grignard pot fi utilizate pentru a reacţiona un compus cu Formula S1-1 cu un compus cu Formula S1-2 pentru a forma un compus cu Formula S1-3. De exemplu, adiţia Grignard a unui compus cu Formula S1-1 cu un compus cu Formula S1-2 poate fi efectuată în Et2O la -78 °C, urmată de adăugarea de HCl apos 1 N pentru a da un compus cu Formula S1-3. Conversia unui compus cu Formula S1-3 la un compus cu Formula S1-4 se poate realiza prin orice procedură de benzilare adecvată. Conversia unui ester cu Formula S1-4 la un acid carboxilic cu Formula S1-5 se poate realiza prin orice condiţii de hidroliză adecvate. De exemplu, conversia unui acid carboxilic cu Formula S1-5 la un compus cu Formula S1-6 se poate realiza prin reacţia unui compus cu Formula S1-5 cu HATU şi Et3N în DMF, urmată de adăugarea de terţ-butil N-aminocarbamat. Orice condiţii adecvate de hidroliză pot fi utilizate pentru a converti un carbamat cu Formula S1-6 la o hidrazidă cu Formula S1-7. De exemplu, un compus cu Formula S1-7 poate fi obţinut prin reacţia unui compus cu Formula S1-6 cu HCl în CH2Cl2 la temperatura ambiantă.
Schema 2 se referă la procedeele de preparare a unui compus intermediar cu Formula S2-3 dintr-un compus cu Formula S2-1. RA1 este selectat dintre -X-(Y)2-4-C(RY)=C(RY)2, - OH, -OPG (în care PG este o grupare protectoare adecvată) şi halogen. R1, m, X, Y, şi RY sunt aşa cum sunt definite pentru Formula I mai sus.
Orice condiţii adecvate pentru formarea unei legături amidice pot fi utilizate pentru a produce un compus cu Formula S2-2 dintr-un compus cu Formula S2-1 şi un compus cu Formula S1-7. De exemplu, un compus cu Formula S2-1 poate reacţiona cu CDI în acetonitril şi DMF, urmată de adăugarea unui compus cu Formula S1-7, pentru a da un compus cu Formula S2-2. Un compus cu Formula S2-2 poate fi transformat într-un compus cu Formula S2-3 utilizând orice condiţii adecvate pentru a forma oxadiazol. De exemplu, un compus cu Formula S2-2 poate reacţiona cu DIPEA în acetonitril, urmată de adăugarea de clorură de p toluensulfonil, pentru a produce un oxadiazol cu Formula S2-3.
Schema 3 se referă la procedeele de preparare a unui compus cu Formula S3-8 dintr-un compus cu Formula S3-1. Alc. este selectat din grupări C1-C6 alchil liniare sau ramificate. LG este selectat dintre atomi de halogen şi grupări scindabile pe bază de oxigen, cum ar fi OTf. R1, m, Y şi RY sunt aşa cum sunt definite pentru Formula I mai sus.
Reacţia unui compus cu Formula S3-1 cu un compus cu Formula S3-2 pentru a da un compus cu Formula S3-3 se poate realiza prin orice condiţii adecvate de substituţie aromatică. De exemplu, un compus cu Formula S3-2 poate reacţiona cu hidrură de sodiu în DMF, urmată de adăugarea la un compus cu Formula S3-1, pentru a da un compus cu Formula S3-3. Conversia unui ester cu Formula S3-3 la un acid carboxilic cu Formula S3-4 se poate realiza prin orice condiţii de hidroliză adecvate. Un compus cu Formula S3-5 poate fi preparat dintr-un compus cu Formula S3-4 şi un compus cu Formula S1-7 utilizând orice condiţii adecvate de formare a legăturii amidice. Un compus cu Formula S3-5 poate fi transformat într-un compus cu Formula S3-6 utilizând orice condiţii adecvate pentru formarea oxadiazolului. De exemplu, un compus cu Formula S3-5 poate reacţiona cu metoxicarbonil-(trietilamonio)sulfonil-azanida în THF pentru a produce un oxadiazol cu Formula S3-6. Macrociclizarea unui compus cu Formula S3-6 se poate realiza prin orice condiţii adecvate de metateză de închidere a ciclului. De exemplu, un compus cu Formula S3-6 poate reacţiona în prezenţa [1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)imidazolidin-2-iliden]-dicloro-[(2-izopropoxi-5-nitro-fenil)metilen]ruteniu în DCE pentru a produce un macrociclu cu Formula S3-7 ca un amestec de izomeri E/Z (aşa cum este notat cu legătura ).
Conversia unui compus nesaturat cu Formula S3-7 la un macrociclu cu Formula S3-8 se poate realiza folosind orice procedură adecvată pentru reducerea olefinelor şi deprotejarea grupării benzil.
Schema 4 se referă la procedeele de preparare a unui compus cu Formula S4-4 dintr-un compus cu Formula S4-1. LG este selectat dintre atomi de halogen, hidroxi şi grupări scindabile pe bază de oxigen, cum ar fi OTf. R1, m, Y şi RY sunt aşa cum sunt definite pentru Formula I de mai sus.
Reacţia unui compus cu Formula S4-1 cu un compus cu Formula S3-2 pentru a da un compus cu Formula S4-2 se poate realiza prin orice condiţii de substituţie aromatică adecvate sau condiţii Mitsunobu. De exemplu, un compus cu Formula S4-1 poate reacţiona cu un alcool cu Formula S3-2 cu carbonat de cesiu şi iodocupru în DMSO. Macrociclizarea unui compus cu Formula S4-2 se poate realiza prin orice condiţii adecvate de metateză de închidere a ciclului. De exemplu, un compus cu Formula S4-2 poate reacţiona în prezenţa unui catalizator de generaţia 2 Grubbs în DCE pentru a produce un macrociclu cu Formula S4-3 ca un amestec de izomeri E/Z (aşa cum este notat cu legătura ).
Conversia unui compus nesaturat cu Formula S4-3 la un macrociclu cu Formula S4-4 se poate realiza folosind orice procedură adecvată pentru reducerea olefinelor şi deprotejarea grupării benzil.
Schema 5 se referă la procedeele de preparare a unui compus cu Formula S5-3, un compus cu Formula S5-6 şi un compus cu Formula S5-7 dintr-un compus cu Formula S5-1. R1, m, şi Y sunt aşa cum sunt definite pentru Formula I mai sus.
Conversia unui compus cu Formula S5-1 la un compus deuterat cu Formula S5-2 se poate realiza prin orice condiţii de deuterare catalitică adecvate. De exemplu, un compus cu Formula S5-1 poate reacţiona cu 10% paladiu pe carbon în CD3OD sub atmosferă de deuteriu gazos pentru a produce un compus cu Formula S5-2. Conversia unui compus protejat cu benzil cu Formula S5-2 la un alcool liber cu Formula S5-3 se poate realiza prin orice condiţii de deprotejare adecvate.
Conversia unui compus nesaturat cu Formula S5-1 la un alcool cu Formula S5-4 se poate realiza prin orice condiţii adecvate de hidroborare/oxidare. De exemplu, un compus cu Formula S5-1 poate reacţiona cu complexul de dimetilsulfură de boran în THF, urmat de stingere cu NaOH apos şi adăugarea ulterioară de peroxid de hidrogen pentru a produce un alcool cu Formula S5-4 ca amestec de regioizomeri. Debenzilarea unui compus cu Formula S5-4 pentru a da un compus cu Formula S5-5 se poate realiza utilizând orice condiţii adecvate de deprotejare a grupării benzil. Conversia unui compus cu Formula S5-5 la o formulă compusă S5-7 se poate realiza prin orice condiţii de oxidare adecvate. De exemplu, un compus cu Formula S5-5 poate reacţiona cu NaHCO3 şi periodinan Dess-Martin în CH2Cl2 pentru a da un compus cu Formula S5-7.
Într-o cale alternativă, conversia unui compus cu Formula S5-4 la un compus cu Formula S5-6 se poate realiza prin orice condiţii de oxidare adecvate. De exemplu, un compus cu Formula S5-4 poate reacţiona cu periodinan Dess-Martin în CH2Cl2 pentru a da un compus cu Formula S5-6. Debenzilarea unui compus cu Formula S5-6 pentru a da un compus cu Formula S5-7 se poate realiza folosind orice condiţii adecvate de deprotejare a grupării benzil.
Schema 6 se referă la procedeele de preparare a unui compus cu Formula S6-5 dintr-un compus cu Formula S6-1. LG este selectat dintre atomi de halogen şi grupări scindabile pe bază de oxigen, cum ar fi OTf. R1, m, Y, şi RY sunt aşa cum sunt definite pentru Formula I de mai sus.
Conversia unui compus cu Formula S6-1 şi un compus cu Formula S6-2 la un compus cu Formula S6-3 se poate realiza prin orice condiţii adecvate de substituţie aromatică. De exemplu, un compus cu Formula S6-1 poate reacţiona cu un compus cu Formula S6-2 şi DMSO. Macrociclizarea unui compus cu Formula S6-3 se poate realiza prin orice condiţii adecvate de metateză de închidere a ciclului. De exemplu, un compus cu Formula S6-3 poate fi reacţionat în prezenţa benziliden-[1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)imidazolidin-2-iliden]-diclor-ruteniu;triciclohexilfosfan în DCE pentru a produce un macrociclu cu Formula S6-4 ca un amestec de izomeri E/Z (aşa cum este notat cu legătura ).
Conversia unui compus nesaturat cu Formula S6-4 la un macrociclu cu Formula S6-5 se poate realiza folosind orice procedură adecvată pentru reducerea olefinelor şi deprotejarea grupării benzil.
Schema 7 se referă la procedeele de preparare a unui compus cu Formula S7-6 dintr-un compus cu Formula S7-1. R1, m, Y, şi RY sunt aşa cum sunt definite pentru Formula I mai sus. LG este selectat dintre atomi de halogen şi grupări scindabile pe bază de oxigen, cum ar fi OTf.
Reacţia unui compus cu Formula S7-1 cu un compus cu Formula S7-2 pentru a forma un compus cu Formula S7-3 se poate realiza prin orice procedură de litiere adecvată. De exemplu, reacţia unui compus cu Formula S7-1 cu un compus cu Formula S7-2 se poate realiza în eter la -78 °C cu n-BuLi pentru a forma un compus cu Formula S7-3. Conversia unui compus cu Formula S7-3 la un compus cu Formula S7-4 se poate realiza prin orice procedură adecvată de metateză de închidere a ciclului. De exemplu, reacţia de metateză de închidere a ciclului a compusului cu Formula S7-3 se poate realiza în prezenţa benziliden-[1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)imidazolidin-2-iliden]-diclor-ruteniu;triciclohexilfosfanului în DCE pentru a produce un compus cu Formula S7-4 ca un amestec de izomeri E/Z (aşa cum sunt notaţi prin legătura ).
Conversia unui compus cu Formula S7-4 la un compus cu Formula S7-5 poate fi realizată prin orice procedură adecvată pentru reducerea olefinelor şi deprotejarea grupării benzil. Conversia unui compus cu Formula S7-5 la un compus cu Formula S7-6 se poate realiza prin orice procedură adecvată pentru oxidarea unui tioeter la un sulfoxid.
Schema 8 se referă la procedeele de preparare a unui compus cu Formula S8-8 dintr-un compus cu Formula S8-1. Alc. este selectat din C1-C6 grupări alchil liniare sau ramificate. LG este selectat dintre grupări scindabile pe bază de oxigen, cum ar fi OTf şi atomi de halogen, cum ar fi Cl, I şi Br. R1, m, Y, RY, şi Ciclu B sunt aşa cum sunt definite pentru Formula I mai sus.
Orice condiţii adecvate pentru sintetizarea unui eter aril dintr-un alcool şi o halogenură de aril pot fi utilizate pentru a reacţiona un compus cu Formula S8-1 cu un compus cu Formula S8-2 pentru a da un compus cu Formula S8-3. Orice condiţii adecvate pentru condensarea unei hidrazide cu un acid carboxilic pot fi utilizate pentru a reacţiona un compus cu Formula S8-3 cu un compus cu Formula S8-4 pentru a forma un compus cu Formula S8-5. Orice condiţii adecvate pentru formarea oxadiazol dintr-o hidrazidă pot fi utilizate pentru a converti un compus cu Formula S8-5 la un compus cu Formula S8-6. Conversia unui compus cu Formula S8-6 la un compus cu Formula S8-7 se poate realiza prin orice procedură adecvată de metateză de închidere a ciclului. De exemplu, reacţia de metateză de închidere a ciclului a compusului cu Formula S8-6 se poate realiza în prezenţa benziliden-[1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)imidazolidin-2-iliden]-diclor-ruteniu;triciclohexilfosfan în DCE pentru a produce un compus cu Formula S8-7 ca un amestec de izomeri E/Z (aşa cum sunt notaţi prin legătura ).
Conversia unui compus cu Formula S8-7 la un compus cu Formula S8-8 se poate realiza prin orice procedură adecvată pentru reducerea olefinelor şi deprotejarea grupării benzil.
Schema 9 se referă la procedeele de preparare a unui compus cu Formula S9-6 şi un compus cu Formula S9-7 dintr-un compus cu Formula S9-1. R1, m, Y, RY, şi Inel B. sunt aşa cum sunt definite pentru Formula I mai sus. LG este selectat dintre grupări scindabile pe bază de oxigen, cum ar fi OTf şi halogeni, cum ar fi Cl, I şi Br. Lx este selectat dintre atomi de halogen precum Cl, I sau Br.
Orice condiţii adecvate pentru sintetizarea unui eter aril dintr-un alcool şi o halogenură de aril pot fi utilizate pentru a reacţiona un compus cu Formula S9-1 cu un compus cu Formula S9-2 pentru a forma un compus cu Formula S9-3. Conversia unui compus cu Formula S9-3 la un compus cu Formula S9-4 şi/sau un compus cu Formula S9-5 poate fi realizată prin orice procedură de cuplare încrucişată adecvată. De exemplu, reacţia de macrociclizare a compusului cu Formula S9-3 se poate realiza în prezenţa acetatului de paladiu (II), tris-o-tolilfosfan şi trietilamină în acetonitril pentru a produce compusul cu Formula S9-4 şi/sau compusul cu Formula S9-5. Conversia unui compus cu Formula S9-4 la un compus cu Formula S9-6 şi conversia unui compus cu Formula S9-5 la un compus cu Formula S9-7 se poate realiza prin orice procedură adecvată, reducerea olefinelor şi deprotejarea grupării benzil.
Schema 10 se referă la procedeele de preparare a unui compus cu Formula S10-6 dintr-un compus cu Formula S10-1. R1, m, Y, RYşi Ciclul B sunt aşa cum sunt definite pentru Formula I mai sus. Lx este selectat dintre atomi de halogen precum Cl, I sau Br.
Reacţia unui compus cu Formula S10-1 cu un compus cu Formula S10-2 pentru a da un compus cu Formula S10-3 se poate realiza utilizând orice procedură adecvată de formare a oxadiazolului. De exemplu, un compus cu Formula S10-1 poate reacţiona cu un compus cu Formula S10-2 şi (izocianoimino)trifenilfosforan pentru a produce un compus cu Formula S10-3. Conversia unui compus cu Formula S10-3 la un compus cu Formula S10-4 poate fi realizată prin orice procedură de cuplare încrucişată adecvată. De exemplu, reacţia de macrociclizare a compusului cu Formula S10-3 se poate realiza în prezenţa acetatului de paladiu (II), tris-o-tolilfosfanului şi trietilamină i în acetonitril pentru a produce un compus cu Formula S10-4 ca un amestec de izomeri E/Z (aşa cum sunt notaţi prin legătura ).
Conversia unui compus cu Formula S10-4 la un compus cu Formula S10-5 se poate realiza prin orice procedură adecvată pentru reducerea olefinelor.
Proceduri pentru Sinteza Intermediarilor Comuni
Intermediar 1: Preparare metil 6-clor-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
Etapa 1: Metil 1-oxido-5-(trifluormetil)-1-ium-2-carboxilat
Peroxid acid de uree (62,7 g, 646,53 mmol) s-a adăugat în porţii la o soluţie agitată de metil 5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (40 g, 191,09 mmol) în 1,2-dicloretan (300 mL) la 0 °C. Anhidridă trifluoracetică (107,70 g, 72 mL, 507,65 mmol) a fost apoi adăugat[ timp de 30 minute la o temperatură de -10 °C, pe baie de răcire (baie CO2/acetonă). Amestecul de reacţie a fost apoi agitat timp de încă 30 minute la o temperatură de 0 °C şi apoi timp de 1 oră la temperatura mediului. Amestecul de reacţie a fost apoi turnat pe apă răcită cu gheaţă (600 mL). Amestecul a fost diluat cu diclormetan (300 mL) şi apoi straturile au fost separate. Faza de soluţie apoasă a fost extrasă cu diclormetan (2 X 200 mL). Faza organică combinată a fost spălată cu apă (2 X 300 mL) şi soluţie salină (1 X 200 mL), uscată peste sulfat de sodiu anhidru, filtrată şi concentrată sub presiune redusă pentru a da metil 1-oxido-5-(trifluormetil)piridin-1-ium-2-carboxilat (47,6 g, 90%) ca un solid galben pal. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,89 (s, 1H), 8,02 - 7,90 (m, 1H), 7,86 - 7,72 (m, 1H), 3,89 (s, 3H) ppm. 19F RMN (282 MHz, DMSO-d6) δ -62,00 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 221,02998, găsit 222,1 (M+1)+; Timp retenţie: 1,24 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 3 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 2: Metil 6-hidroxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
Anhidridă trifluoracetică (291,62 g, 193 mL, 1,3885 mol) s-a adăugat în picătură la un amestec de metil 1-oxido-5-(trifluormetil)piridin-1-ium-2-carboxilat (51,058 g, 230,66 mmol) în DMF (305 mL) la 0 °C. Amestecul a fost apoi agitat la temperatura camerei peste noapte. Amestecul a fost concentrat sub presiune redusă pentru a îndepărta excesul de acid trifluoracetic. Soluţia de DMF rezidual a fost turnată în picătură la 0 °C răcită şi agitată cu un volum de apă (1000 mL). Solidul precipitat a fost colectat prin filtrare şi apoi spălat cu apă (300 mL). Solidul a fost uscat sub vid înaintat pentru a da metil 6-hidroxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (45,24 g, 86%) ca solid alb. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 7,90 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 4,02 (s, 3H) ppm. 19F RMN (282 MHz, DMSO-d6) δ -66,39 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 221,03, găsit 222,1 (M+1)+; Timp retenţie: 1,43 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 3 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 3: Metil 6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
La o soluţie răcită pe gheaţă de metil 6-hidroxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (33,04 g, 149,41 mmol) în acid sulfuric (200 mL de 18,4 M, 3,6800 mol) s-a adăugat acid azotic (13 mL de 15,8 M, 205,40 mmol) în picătură. După 5 min, baia de gheaţă a fost îndepărtată, şi amestecul de reacţie a fost agitat la 38 °C peste noapte. Reacţia nu a fost completată, acid azotic (3 mL de 15,8 M, 47,400 mmol) s-a adăugat în picătură la temperatura camerei şi reacţia a fost încălzită la 38 °C timp de 4,5 ore. Reacţia a fost turnat lent în apă răcită pe gheaţă (900 mL) şi amestecul a fost răcit la 0 °C timp de 15 minute. Apoi solidul rezultat a fost izolat prin filtrare şi spălat cu apă (600 mL). Solidul a fost uscat peste noapte sub vid înaintat pentru a da metil 6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (39,49 g, 99%) ca solid alb. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,54 (s, 1H), 3,95 (s, 3H) ppm. 19F RMN (282 MHz, DMSO-d6) δ -64,56 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 266,0151, găsit 267,1 (M+1)+; Timp retenţie: 1,64 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 3 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 4: Metil 6-clor-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
Un amestec de metil 6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (10 g, 37,575 mmol) şi fenil diclorfosfat (48,008 g, 34 mL, 227,55 mmol) a fost încălzit la 170 °C timp de 90 minute. După răcire la temperatura camerei, amestecul a fost diluat cu etil acetat (400 mL) şi spălat cu soluţie salină (2 X 200 mL). Faza organică a fost uscată pe sulfat de sodiu anhidru, filtrată şi concentrată sub presiune redusă. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (0% până la 15% etil acetat în heptani) a dat metil 6-clor-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (5,45 g, 50%) ca un solid galben. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8,75 (s, 1H), 4,07 (s, 3H) ppm. 19F RMN (282 MHz, CDCl3) δ -64,12 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 283,9812, găsit 285,0 (M+1)+; Timp retenţie: 1,95 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 3 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Intermediar 2: Preparare acid 6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic
Etapa 1: acid 6-Hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic
Un amestec de metil 6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (32 g, 120,24 mmol) în THF (180 mL) şi apă (180 mL) a fost tratat cu hidroxid de litiu monohidrat (15,14 g, 360,79 mmol) şi agitat la 27 °C peste noapte. Amestecul de reacţie brut a fost răcit la temperatura camerei şi pH ajustat la 2 cu o soluţie apoasă de 0,5 M acid clorhidric (380 mL), apoi transferat la o pâlnie 1-L de separare cu 2-metil THF şi extras. Straturile au fost separate şi stratul organic a fost apoi spălat cu apă (150 mL), soluţie salină (150 mL), uscat peste sulfat de sodiu, filtrat şi concentrat sub presiune redusă pentru a da acid 6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (29,61 g, 96%) ca un solid alb mat. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 8,45 (s, 1H) ppm. 19F RMN (282 MHz, DMSO-d6) δ -64,53 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 251,9994, găsit 253,0 (M+1)+; Timp retenţie: 0,79 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 3 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Intermediar 3: Preparare acid 6-clor-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic
Etapa 1: acid 6-Clor-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic
La o soluţie de metil 6-clor-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (1,14 g, 4,006 mmol) în THF (48,51 mL) şi apă (24,26 mL) la 0 °C s-a adăugat hidroxid de litiu monohidrat (201,7 mg, 4,807 mmol). Reacţia a fost lăsată la încălzire până la temperatura camerei apoi agitată timp de 2 ore. Soluţia a fost acidulată până la pH ~2 - 3 prin adiţie de 1 N HCl, apoi extrasă cu EtOAc. Faza organică a fost spălată cu apă şi soluţie salină, apoi uscată peste sulfat de sodiu, filtrată şi concentrată pentru a da, ca un sirop limpede, acid 6-clor-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (1,05 g, 97%). ESI-MS m/z calc. 269,9655, găsit 271,0 (M+1)+; Timp retenţie: 0,37 minute determinat prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60°C.
Intermediar 4: Preparare metil 3-[bis(terţ-butoxicarbonil)amino]-6-brom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
Etapa 1: Metil 3-(benzhidrilidenamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
Un amestec de metil 3-clor-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (47,3 g, 197,43 mmol), difenilmetanimină (47 g, 259,33 mmol), Xantphos (9,07 g, 15,675 mmol), şi carbonat de cesiu (131 g, 402,06 mmol) în dioxan (800 mL) a fost degazat cu barbotare cu azot timp de 30 minute. Pd(OAc)2 (3,52 g, 15,679 mmol) s-a adăugat şi sistemul a fost purjat cu azot de trei ori. Amestecul de reacţie a fost încălzit la 100 °C timp de 18 h. Reacţia a fost răcită până la temperatura camerei şi filtrată pe un pat de celită. Turta a fost spălată cu EtOAc şi solvenţii au fost evaporaţi sub presiune redusă pentru a da metil 3-(benzhidrilidenamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (90 g, 84%) ca solid galben. ESI-MS m/z calc. 384,10855, găsit 385,1 (M+1)+; Timp retenţie: 2,24 minute. Metodă LCMS: Kinetex C18 4,6 X 50 mm 2,6 µM, 2,0 mL/min, 95% H2O (0,1% acid formic) + 5% acetonitril (0,1% acid formic) la un gradient 95% acetonitril (0,1% acid formic) (2,0 min) apoi menţinut la 95% acetonitril (0,1% acid formic) timp de 1,0 min.
Etapa 2: Metil 3-amino-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
La o suspensie de metil 3-(benzidrilidenamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (65 g, 124,30 mmol) în metanol (200 mL) s-a adăugat HCl (3 M în metanol) (146 mL de 3 M, 438,00 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 1,5 oră apoi solventul a fost îndepărtat sub presiune redusă. Reziduul a fost preluat în etil acetat (2 L) şi diclormetan (500 mL). Faza organică a fost spălată cu 5% soluţie apoasă de bicarbonat de sodiu (3 X 500 mL) şi soluţie salină (2 X 500 mL), uscată pe sulfat de sodiu anhidru, filtrată şi solventul a fost îndepărtat sub presiune redusă. Reziduul a fost triturat cu heptani (2 X 50 mL) şi lichiorul mamă a fost îndepărtat. Solidul obţinut fost triturat cu un amestec de diclormetan şi heptani (1:1, 40 mL) şi filtrată pentru a da metil 3-amino-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (25,25 g, 91%) ca solid galben. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8,24 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 5,98 (br. s, 2H), 4,00 (s, 3H) ppm. 19F RMN (282 MHz, CDCl3) δ -63,23 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 220,046, găsit 221,1 (M+1)+; Timp retenţie: 1,62 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 3 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 3: Metil 3-amino-6-brom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
La o soluţie de metil 3-amino-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (18,75 g, 80,91 mmol) în acetonitril (300 mL) la 0 °C s-a adăugat în porţii N-bromsuccinimidă (18,7g, 105,3 mmol). Amestecul a fost agitat peste noapte la 25 °C. Etil acetat (1000 mL) s-a adăugat. Stratul organic a fost spălat cu 10% soluţie de tiosulfat de sodiu (3 X 200 mL) care a fot re-extrasă cu etil acetat (2 X 200 mL). Extractele organice combinate au fost spălate cu soluţie saturată de bicarbonat de sodiu (3 X 200 mL), soluţie salină (200 mL), uscate peste sulfat de sodiu şi concentrate în vid pentru a da metil 3-amino-6-brom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (25,46 g, 98%). 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 3,93-4,03 (m, 3H), 6,01 (br. s., 2H), 7,37 (s, 1H) ppm. 19F RMN (282 MHz, CDCl3) ppm -64,2 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 297,9565, găsit 299,0 (M+1)+; Timp retenţie: 2,55 minute. Metodă LCMS: Kinetex C18 4,6 X 50 mm 2,6 µM. Temp: 45 °C, Flux: 2,0 mL/min, Timp Rulare: 6 min. Fază Mobilă: Iniţial 95% H2O (0,1% acid formic) şi 5% acetonitril (0,1% acid formic) gradient liniar până la 95% acetonitril (0,1% acid formic) timp de 4,0 min apoi menţinut la 95% acetonitril (0,1% acid formic) timp de 2,0 min.
Etapa 4: Metil 3-[bis(terţ-butoxicarbonil)amino]-6-brom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
Un amestec de metil 3-amino-6-brom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (5 g, 15,549 mmol), (Boc)2O (11 g, 11,579 mL, 50,402 mmol), DMAP (310 mg, 2,5375 mmol) şi CH2Cl2 (150 mL) a fost agitat la temperatura camerei peste noapte. Amestecul de reacţie a fost concentrat sub presiune redusă şi purificat prin cromatografie pe gel de silice (0 - 15% etil acetat în heptan) a dat metil 3-[bis(terţ-butoxicarbonil)amino]-6-brom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (6,73 g, 87%) ca un solid galben pal. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,42 (s, 18H), 3,96 (s, 3H), 7,85 (s, 1H) ppm. 19F RMN (282 MHz, CDCl3) δ -63,9 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 498,06134, Timp retenţie: 2,34 minute. Metodă LCMS: Kinetex C18 4,6 X 50 mm 2,6 µM. Temp: 45 °C, Flux: 2,0 mL/min, Timp Rulare: 3 min. Fază Mobilă: Iniţial 95% H2O (0,1% acid formic) şi 5% acetonitril (0,1% acid formic) gradient liniar până la 95% acetonitril (0,1% acid formic) timp de 2,0 min apoi menţinut la 95% acetonitril (0,1% acid formic) timp de 1,0 min.
Intermediar 5: Preparare acid 6-brom-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic
Etapa 1: acid 6-Bromo-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic
La un amestec de metil 3-[bis(terţ-butoxicarbonil)amino]-6-brom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (247 g, 494,7 mmol) în THF (1,0 L) s-a adăugat o soluţie de LiOH (47,2 g, 1,971 mol) în apă (500 mL). Amestecul a fost agitat la temperatura mediului timp de 18 h pentru a da o suspensie galbenă. Amestecul a fost răcit pe o baie de gheaţă şi lent acidulat cu HCl (1000 mL de 2 M, 2,000 mol) cu menţinerea temperaturii de reacţie < 15 °C. Amestecul a fost diluat cu heptan (1,5 L), amestecat şi faza organică separată. Faza de soluţie apoasă a fost extrasă cu heptan (500 mL). Fazele organice combinate au fost spălate cu soluţie salină, uscate peste MgSO4, filtrate şi concentrate în vid. Uleiul brut a fost dizolvat în heptan (600 mL), însămânţat şi agitat la temperatura mediului timp de 18 h pentru a da o suspensie îngroşată. Suspensia a fost diluată cu heptan răcit (500 mL) şi precipitatul colectat utilizând un mediu de frită. Turta de filtrare a fost spălată cu heptan răcit şi uscată sub curent de aer timp de 1 h, apoi în vid la 45 °C timp de 48 h pentru a da acid 6-brom-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (158,3 g, 83%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,38 (s, 1H), 9,01 (s, 1H), 1,50 (s, 9H) ppm. ESI-MS m/z calc. 383,99326, găsit 384,9 (M+1)+; Timp retenţie: 2,55 minute. Detaliu Metodă LCMS: Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 4,5 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Intermediar 6: Preparare metil 3-amino-6-brom-5-fluor-piridin-2-carboxilat
Etapa 1: Metil 3-amino-5-fluor-piridin-2-carboxilat
Într-o autoclavă (600 mL) s-au adăugat 2-brom-5-fluor-piridin-3-amină (22 g, 115,18 mmol), metanol (250 mL), trietilamină (23,232 g, 32 mL, 229,59 mmol) şi [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]diclorpaladiu(II) (2,1 g, 2,8700 mmol). Autoclava a fost purjată cu azot, apoi cu monoxid de carbon. Amestecul a fost încălzit până la 130 °C şi presiunea monoxidului de carbon a fost ajustată la 120 psi. Amestecul a fost agitat timp de 3 h la 130 °C, apoi răcit până la 25 °C. Amestecul a fost purjat cu azot şi concentrat sub vid. Solidul rezultat a fost diluat cu etil acetat (500 mL). Apă (200 mL) şi carbonat de sodiu (15 g) au fost adăugate şi amestecul a fost agitat viguros timp de 20 minute. Straturile au fost separate. Stratul organic a fost spălat cu apă (100 mL) şi soluţie salină (100 mL), uscat peste sulfat de sodiu, filtrat şi evaporat sub presiune redusă pentru a da metil 3-amino-5-fluor-piridin-2-carboxilat (14,4 g, 53%) ca solid maron. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,90 (s, 1H), 6,72 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 5,94 (br. s, 2H), 3,96 (s, 3H) ppm. ESI-MS m/z calc. 170,04915, găsit 171,1 (M+1)+; Timp retenţie: 1,35 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 3 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 2: Metil 3-amino-6-brom-5-fluor-piridin-2-carboxilat
La o soluţie de metil 3-amino-5-fluor-piridin-2-carboxilat (2,03 g, 11,931 mmol) în acetonitril (40 mL), N-bromsuccinimidă (2,34 g, 13,147 mmol) s-a adăugat în porţii. După agitare la temperatura camerei timp de 2 h, amestecul de reacţie a fost diluat cu EtOAc (150 mL), spălat cu a soluţie saturată apoasă de NaHCO3 (150 mL) şi soluţie salină (150 mL), apoi uscat peste sulfat de sodiu şi concentrat sub presiune redusă. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (20% până la 60% etil acetat în heptani) a dat metil 3-amino-6-brom-5-fluor-piridin-2-carboxilat (2,9 g, 98%) ca solid alb. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 6,80 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 5,98 (br. s., 2H), 4,22 - 3,72 (m, 3H) ppm. 19F RMN (282 MHz, CDCl3) δ -105,70 (d, J = 9,2 Hz, 1F) ppm. ESI-MS m/z calc. 247,9597, găsit 248,9 (M+1)+; Timp retenţie: 1,73 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 3 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Intermediar 7: Preparare 2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enhidrazidă (sare clorhidrat)
Etapa 1: Etil 2-hidroxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoat
La o soluţie de etil 3,3,3-trifluor-2-oxo-propanoat (25,15 g, 147,87 mmol) în Et2O (270 mL) la -78 °C s-a adăugat brom(but-3-enil)magneziu în THF (190 mL de 0,817 M, 155,23 mmol) în picătură timp de o perioadă de 1,5 h (temperatură internă-72 °C la -76 °C). Amestecul a fost agitat la -78 °C timp de 20 min. Baia de acetonă răcită pe gheaţă a fost îndepărtată. Amestecul a fost lent încălzit la 5 °C timp de 1 h, adăugat la un amestec de 1 N soluţie apoasă de HCl (170 mL) şi gheaţă mărunţită (150 g) (pH = 4). Cele două straturi au fost separate. Stratul organic a fost concentrat, şi reziduul a fost combinat cu faza de soluţie apoasă şi extras cu EtOAc (2 x 150 mL). Faza organică combinată a fost spălată cu 5% soluţie apoasă de NaHCO3 (50 mL) şi soluţie salină (20 mL), uscată cu Na2SO4. Amestecul a fost filtrat şi concentrat, şi co-evaporat cu THF (2 X 40 mL) pentru a da etil 2-hidroxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoat (37,44 g, 96%) ca ulei incolor. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 5,77 (ddt, J = 17,0, 10,4, 6,4 Hz, 1H), 5,15 - 4,93 (m, 2H), 4,49 - 4,28 (m, 2H), 3,88 (s, 1H), 2,35 - 2,19 (m, 1H), 2,17 - 1,89 (m, 3H), 1,34 (t, J = 7,0 Hz, 3H) ppm. 19F RMN (282 MHz, CDCl3) δ -78,74 (s, 3F) ppm.
Etapa 2: Etil 2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoat
La o soluţie de etil 2-hidroxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoat (24,29 g, 87,6% puritate, 94,070 mmol) în DMF (120 mL) la 0 °C s-a adăugat NaH (60% în ulei mineral, 5,64 g, 141,01 mmol) în porţii. Amestecul a fost agitat la 0 °C timp de 10 min. Au fost adăugate bromură de benzil (24,13 g, 141,08 mmol) şi TBAI (8,68 g, 23,500 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei peste noapte. NH4Cl (3 g, 0,6 echiv.) s-a adăugat. Amestecul a fost agitat timp de 10 min. 30 mL de EtOAc s-a adăugat, apoi s-a adăugat gheaţă-apă (400 g). Amestecul a fost extras cu CH2Cl2 şi straturile organice combinate au fost concentrate. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (0 - 20% CH2Cl2 în heptani) a dat etil 2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoat (26,05 g, 88%) ca ulei roz. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,34 (t, J =7,2 Hz, 3H), 2,00-2,19 (m, 3H), 2,22-2,38 (m, 1H), 4,33 (q, J =7,2 Hz, 2H), 4,64 (d, J =10,6 Hz, 1H), 4,84 (d, J =10,9 Hz, 1H), 4,91-5,11 (m, 2H), 5,62-5,90 (m, 1H), 7,36 (s, 5H) ppm. 19F RMN (282 MHz, CDCl3) δ -70,5 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 316,12863, găsit 317,1 (M+1)+; Timp retenţie: 2,47 minute. Metodă LCMS: Kinetex C18 4,6 X 50 mm 2,6 µM. Temp: 45 °C, Flux: 2,0 mL/min, Timp Rulare: 3 min. Fază Mobilă: Iniţial 95% H2O (0,1% acid formic) şi 5% acetonitril (0,1% acid formic) gradient liniar până la 95% acetonitril (0,1% acid formic) timp de 2,0 min apoi menţinut la 95% acetonitril (0,1% acid formic) timp de 1,0 min.
Etapa 3: acid 2-Benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoic
O soluţie de hidroxid de sodiu (7,86 g, 196,51 mmol) în apă (60 mL) s-a adăugat la o soluţie de etil 2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoat (24,86 g, 78,593 mmol) în metanol (210 mL). Reacţia a fost încălzită la 50 °C peste noapte. Reacţia a fost concentrată pentru a îndepărta metanol, diluat cu apă (150 mL) şi sarea de carboxilat de sodiu a fost spălată cu heptan (1 X 100 mL). Soluţia apoasă a fost acidulată la pH = 2 cu soluţie apoasă de 3N HCl. Acidul carboxilic a fost extras cu diclormetan (3 X 100 mL) şi uscat peste sulfat de sodiu. Soluţia a fost filtrată şi concentrată pentru a da acid 2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoic (22,57 g, 97%) ca un ulei galben pal. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,31 (br. s., 1H), 7,55 - 7,20 (m, 5H), 5,93 - 5,70 (m, 1H), 5,17 - 4,91 (m, 2H), 4,85 - 4,68 (m, 1H), 4,67 - 4,55 (m, 1H), 2,32 - 1,94 (m, 4H) ppm. 19F RMN (282 MHz, DMSO-d6) δ -70,29 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 288,09732, găsit 287,1 (M-1); Timp retenţie: 3,1 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 4: terţ-Butil N-[[2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]amino]carbamat
La o soluţie de acid 2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoic (21,92 g, 92,4% puritate, 70,263 mmol) în DMF (130 mL) s-au adăugat HATU (37,2 g, 97,836 mmol) şi Et3N (15 g, 148,24 mmol). Amestecul a fost agitat timp de 10 minute apoi s-a adăugat terţ-butil N-aminocarbamat (12,2 g, 92,312 mmol). Amestecul a fost agitat la 25 °C peste noapte şi la 40 °C timp de 1 h. Amestecul a fost diluat cu gheaţă-apă (500 g) şi extras cu CH2Cl2. Stratul organic uscat pe sulfat de sodiu anhidru şi concentrat. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (0-30% EtOAc în heptani) a dat terţ-butil N-[[2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]amino]carbamat (26,08 g, 92%) ca solid alb. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,46 (s, 9H), 2,10-2,31 (m, 3H), 2,34-2,51 (m, 1H), 4,60-4,72 (m, 1H), 4,73-4,86 (m, 1H), 4,95-5,19 (m, 2H), 5,83 (ddt, J =16,7, 10,4, 6,1 Hz, 1H), 6,28 (br. s., 1H), 7,30-7,51 (m, 5H), 8,34 (d, J =2,6 Hz, 1H) ppm. 19F RMN (282 MHz, CDCl3) ppm -73,6 (s, 3F) ppm.
Etapa 5: 2-Benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enhidrazidă
La o soluţie de terţ-butil N-[[2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]amino]carbamat (43,12 g, 107,2 mmol) în CH2Cl2 (200 mL) s-a adăugat HCl (100 mL de 4 M, 400,0 mmol) şi amestecul a fost agitat la temperatura mediului timp de 7 h. Solventul a fost îndepărtată în vid, reziduul stripat de 2 ori din heptan şi solidul rezultat a fost uscat în vid utilizând vid înaintat timp de 20 h pentru a da 2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enhidrazidă (Sare clorhidrat) (35 g, 96%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 9,92 (s, 2H), 7,41 - 7,31 (m, 2H), 7,30 - 7,24 (m, 2H), 7,24 - 7,16 (m, 1H), 5,72 - 5,57 (m, 1H), 5,02 - 4,87 (m, 2H), 4,71 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 4,62 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,70 (s, 2H), 2,34 - 1,85 (m, 4H) ppm. ESI-MS m/z calc. 302,1242, găsit 303,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,5 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Intermediar 8: Preparare [6-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-nitro-3-(trifluormetil)-2-piridil]trifluormetansulfonat
Etapa 1: N'-[2-Benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]-6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă
La o soluţie de acid 6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (29,92 g, 102,66 mmol) în acetonitril (300 mL) şi DMF (60 mL) s-a adăugat CDI (17,48 g, 107,80 mmol). Amestecul a fost agitat timp de 0,5 h la temperatura camerei, apoi s-a adăugat în porţii 2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enhidrazidă (sare clorhidrat) (33,04 g, 97,534 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 26 °C timp de 19 ore. Amestecul de reacţie a fost transferat la o pâlnie de separare spălată cu apă (300 mL) şi 2-Me THF (400 mL). Amestecul a fost extras cu 2-Me THF (3 X 400 mL). Stratul organic combinat a fost spălat cu 0,5 N soluţie apoasă de HCl (3 X 300 mL), soluţie salină (3 X 250 mL), uscat peste sulfat de sodiu anhidru Na2SO4, filtrat şi concentrat prin evaporare sub presiune redusă. Acesta a fost apoi solubilizat de două ori în diclormetan (2 X 300 mL) şi volatilele au fost îndepărtată prin evaporare sub presiune redusă pentru a da N'-[2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]-6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă (58,5 g, 94%) ca un reziduu spumă maronie. ESI-MS m/z calc. 536,11304, găsit 537,2 (M+1)+. Timp retenţie: 2,03 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 3 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 2: [6-[5-[1-Benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-nitro-3-(trifluormetil)-2-piridil] trifluormetansulfonat
La o soluţie 0 °C de N'-[2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]-6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă (9,76 g, 16,922 mmol) în diclormetan (190 mL) s-a adăugat DIPEA (8,0136 g, 10,8 mL, 62,004 mmol) urmat de trifluormetilsulfonil trifluormetansulfonat (12,410 g, 7,4 mL, 43,985 mmol). Baia de apă răcită cu gheaţă a fost îndepărtată după 20 min şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 2,5 ore. Amestecul a fost transferat la o pâlnie de separare cu soluţie apoasă răcită cu gheaţă de 1,0 N HCl, şi EtOAc (300 mL). Stratul organic a fost separat, şi faza de soluţie apoasă extrasă cu etil acetat (2 X 150 mL). Stratul organic combinat a fost spălată din nou cu soluţie apoasă răcită pe gheaţă HCl 1,0 N (60 mL) şi soluţie salină (3 X 40 mL), uscată peste sulfat de sodiu anhidru Na2SO4, filtrate şi concentrate sub presiune redusă. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (0-10% EtOAc în heptani) a dat [6-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-nitro-3-(trifluormetil)-2-piridil]trifluormetansulfonat (5,334 g, 40%) ca un ulei oranj. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8,74 (s, 1H), 7,50 - 7,27 (m, 5H), 5,87 - 5,68 (m, 1H), 5,12 - 4,96 (m, 2H), 4,88 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 4,67 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 2,60 - 2,16 (m, 4H) ppm. 19F RMN (282 MHz, CDCl3) δ -62,68 (s, 3F), -71,80 (s, 3F), -73,04 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 650,0518, găsit 651,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,94 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Intermediar 9: Preparare terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[[[2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La un amestec de acid 6-brom-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (239,2 g, 621,1 mmol) şi 2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enhidrazidă (sare clorhidrat) (230,1 g, 761,2 mmol) în EtOAc (2.2 L) la temperatura mediului s-a adăugat piridină (200 mL, 2,473 mol) care a dat un precipitat. La amestec s-a adăugat anhidridă 1-propanfosfonică (500 g de 50 % g/g, 785,7 mmol) şi amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura mediului timp de 12 h. Reacţia a fost temperată cu adiţie lentă de NaOH (149 g de 50 % g/g, 1,863 mol) în apă (2 L) şi amestecul a fost agitat timp de 15 min. Faza organică a fost separată, şi faza de soluţie apoasă extrasă cu EtOAc (1 L). Fazele organice combinate spălate cu soluţie salină, uscate peste MgSO4, filtrate şi concentrate în vid. După ce o jumătate din cantitatea de solvent a fost îndepărtată, faza organică a fost spălată de 2 ori cu soluţie apoasă de HCl (1000 mL de 1 M, 1,000 mol). Faza organică a fost uscată peste MgSO4, filtrată şi concentrată în vid. Produsul brut a fost suspendat în heptan răcit (2,5 L) şi MTBE (0,25 L) şi amestecul agitat la temperatura mediului timp de 12 h pentru a da o suspensie galben pal. Suspensia fost filtrată, şi turta de filtrare rezultată a fost spălată de 2 ori cu 1L 10% MTBE/heptan. Solidul alb mat a fost uscat sub curent de aer timp de 2 h, apoi în vid la 40 °C timp de 20 h pentru a da terţ-butil N-[2-[[[2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (379,9 g, 91%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,09 (s, 1H), 10,92 (s, 1H), 10,35 (s, 1H), 9,15 (s, 1H), 7,50 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,36 (dt, J = 24,4, 7,2 Hz, 3H), 5,87 (ddt, J = 16,0, 10,4, 5,2 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 16,9 Hz, 1H), 5,02 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 4,84 (q, J = 11,4 Hz, 2H), 2,35 - 2,12 (m, 4H), 1,49 (s, 9H) ppm. ESI-MS m/z calc. 668,1069, găsit 670,9 (M+1)+; Timp retenţie: 3,5 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 5,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
terţ-Butil N-[2-[[[2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (102 g, 150,8 mmol) a fost dizolvat în acetonitril anhidru (1000 mL) şi DIPEA (92 mL, 528,2 mmol) s-a adăugat. Soluţia oranj rezultată a fost încălzită până la 70 °C (temp. internă) din care rezultă o soluţie galben clar. Apoi clorură de p-toluensulfonil (37,4 g, 196,2 mmol) s-a adăugat în 3 porţii egale de 12,47 g separate timp de 10 minute şi apoi reacţia a fost încălzită timp de alte 30 min. Reacţia a fost răcită până la temperatura camerei şi acetonitril a fost concentrat sub presiune redusă. La amestec s-au adăugat 1000 mL MTBE, apoi 800 mL apă, şi amestecul a fost agitat, şi straturile au fost separate. Stratul organic a fost spălat cu o soluţie de acid citric (36,3 g, 188,9 mmol) în 700 mL apă, apoi soluţie saturată 400 mL NaHCO3, apoi 300 mL soluţie salină. Stratul organic a fost apoi uscat peste sulfat de sodiu anhidru MgSO4 şi concentrat sub presiune redusă. Materialul a fost purificat utilizând cromatografie pe silica gel utilizând un gradient de 15% până la 50% de 8% EtOAc în hexani (B) şi Hexani (A) pentru a da terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (91,7 g, 93%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 10,18 (s, 1H), 9,35 (s, 1H), 7,55 - 7,47 (m, 2H), 7,45 - 7,37 (m, 2H), 7,36 - 7,28 (m, 1H), 5,83 - 5,68 (m, 1H), 5,10 - 4,93 (m, 2H), 4,82 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 4,69 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 2,59 - 2,13 (m, 4H), 1,56 (s, 9H) ppm. ESI-MS m/z calc. 650,0963, găsit 651,0 (M+1)+; Timp retenţie: 3,81 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 4,5 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Intermediar 10: Preparare terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
Într-o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (30 g, 41,910 mmol) în MTBE (300 mL) s-au adăugat DIEA (6,6780 g, 9 mL, 51,670 mmol), DMAP (0,28 g, 2,2919 mmol) şi anhidridă Boc (20,1 g, 21,158 mL, 92,097 mmol). Soluţia galben opac rezultată fost agitată la 35 °C peste noapte. După răcire la temperatura camerei, solventul a fost evaporat. Reziduul galben uleios a fost apoi dizolvat în 300 mL DCM şi a fost spălat cu apă (300 mL), urmat de soluţie salină (300 mL). Stratul organic a fost separat, uscat pe sulfat de sodiu anhidru, filtrat şi concentrat. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (0% până la 20% EtOAc în hexani) a dat terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (28,68 g, 87%) ca solid alb. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 8,89 (s, 1H), 7,51 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,43 (t, J = 7,5 Hz, 2H), 7,35 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 5,96 - 5,76 (m, 1H), 5,11 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 5,01 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 4,73 (d, J = 10,7 Hz, 1H), 4,66 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 2,65 - 2,51 (m, 2H), 2,36 - 2,17 (m, 2H), 1,27 (d, J = 23,5 Hz, 18H) ppm.
Intermediar 11: Preparare 2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enhidrazidă (sare clorhidrat)
Etapa 1: Etil 2-hidroxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoat
La o soluţie de etil 3,3,3-trifluor-2-oxo-propanoat (30 g, 176,38 mmol) în dietil eter (300 mL) la -78 °C s-a adăugat alil(brom)magneziu (185 mL de 1 M, 185,00 mmol) în picătură timp de o perioadă de 3 ore (temperatură internă: -74 °C - -76 °C). Amestecul a fost agitat la -78 °C timp de 45 min. Baia de uscare gheaţă-acetonă a fost îndepărtată. Amestecul a fost încălzit până la aproximativ 10 °C timp de o perioadă de 1 h şi adăugat la un amestec de 1 N soluţie apoasă de HCl (210 mL) şi gheaţă spartă (400 g) (pH 4). Amestecul a fost extras cu EtOAc, spălat cu 5% soluţie apoasă de NaHCO3, soluţie salină şi uscat peste sulfat de sodiu anhidru Na2SO4. Amestecul a fost filtrat, concentrat şi co-evaporat cu hexan pentru a da etil 2-hidroxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoat (42,2 g, 90%) ca ulei galben clar. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 1,33 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 2,60 - 2,79 (m, 2H), 3,84 (br. s., 1H), 4,24 - 4,48 (m, 2H), 5,09 - 5,33 (m, 2H), 5,59 - 5,82 (m, 1H) ppm. 19F RMN (282 MHz, CDCl3) δ -78,5 (s, 3F) ppm.
Etapa 2: Etil 2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoat
La o soluţie de etil 2-hidroxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoat (18,56 g, 83,105 mmol) în DMF (100 mL) s-a adăugat NaH (5,3 g, 60 % g/g, 132,51 mmol) la 0 °C. Reacţia a fost agitat timp de 15 minute şi au fost adăugate bromură de benzil (21,14 g, 15 mL, 121,12 mol) şi iodură de tetrabutil amoniu (8,5 g, 23,012 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei peste noapte. Reacţia a fost temperată cu apă (300 mL) şi extrasă cu etil acetat (3 X 300 mL) înainte de spălare cu soluţie salină (500 mL) şi uscată peste sulfat de sodiu. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (20 la 60% DCM în hexani) a dat etil 2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoat (22,01 g, 70%) ca ulei incolor. 1H RMN (250 MHz, CDCl3) δ 7,55 - 7,25 (m, 5H), 6,00 - 5,80 (m, 1H), 5,30 - 5,10 (m, 2H), 4,86 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 4,68 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 4,33 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 2,81 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 1,34 (t, J = 7,1 Hz, 3H) ppm. ESI-MS m/z calc. 302,113, găsit 303,5 (M+1)+; Timp retenţie: 4,14 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5-100% fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 3: acid 2-Benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoic
Într-o soluţie de etil 2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoat (28,99 g, 95,902 mmol) în metanol (150 mL) s-a adăugat o soluţie de NaOH (7,6714 g, 191,80 mmol) în apă (50 mL). Amestecul de reacţie a fost agitat la 40 °C timp de 3 ore. Amestecul de reacţie a fost concentrată sub vid, reziduul a fost diluat cu apă (200 mL) şi spălat cu dietil eter (200 mL). Stratul de soluţie apoasă a fost acidulat cu HCl concentrat până la pH 1 şi extras cu dietil eter (3 X 200 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu soluţie salină, uscate pe sulfat de sodiu anhidru, şi concentrate sub vid pentru a da acid 2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoic (28,04 g, 99%) ca un lichid galben pal. 1H RMN (250 MHz, CDCl3) δ 7,55 - 7,28 (m, 5H), 5,97 - 5,69 (m, 1H), 5,33 - 5,17 (m, 2H), 4,95 - 4,66 (m, 2H), 2,91 (d, J = 7,1 Hz, 2H) ppm.
Etapa 4: terţ-Butil N-[[2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamat
La o soluţie de acid 2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoic (300 g, 1,094 mol) în DMF (2 L) s-au adăugat HATU (530 g, 1,394 mol) şi DIEA (400 mL, 2,296 mol) şi amestecul a fost agitat la temperatura mediului timp de 10 min. La amestec s-a adăugat terţ-butil N-aminocarbamat (152 g, 1,150 mol) şi amestecul agitat la temperatura mediului timp de 36 h. Reacţia a fost temperată cu apă răcită (4 L) şi amestecul extras 2X cu EtOAc (2 L). Faza organică a fost spălată cu soluţie salină, uscată peste MgSO4, filtrată şi concentrată în vid. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (0 - 40% EtOAc/hexani) a dat terţ-butil N-[[2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamat (386,49 g, 91%) ca un ulei care a cristalizat lent la un solid alb mat. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 10,00 (d, J = 37,9 Hz, 1H), 8,93 (s, 1H), 7,46 - 7,39 (m, 2H), 7,38 - 7,29 (m, 3H), 6,01 - 5,64 (m, 1H), 5,32 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,17 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 4,77 (s, 2H), 2,96 (qd, J = 15,4, 6,8 Hz, 2H), 1,39 (d, J = 17,3 Hz, 9H) ppm. ESI-MS m/z calc. 388,16098, găsit 389,0 (M+1)+; Timp retenţie: 2,51 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 4,5 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 5: 2-Benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enhidrazidă (sare clorhidrat)
La o soluţie de terţ-butil N-[[2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamat (98,5 g, 240,94 mmol) în DCM (400 mL) s-a adăugat HCl în dioxan (200 mL de 4 M, 800,00 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 2 ore, concentrat şi co-evaporat cu DCM şi hexani pentru a da 2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enhidrazidă (sare clorhidrat) (81,15 g, 97%) ca un solid alb mat. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 11,07 (s, 1H), 7,70 - 7,16 (m, 5H), 5,87 - 5,61 (m, 1H), 5,45 - 5,09 (m, 2H), 4,79 (s, 2H), 3,6 - 3,4 (m, 2H), 3,23 - 3,07 (m, 1H), 3,04 - 2,87 (m, 1H) ppm. ESI-MS m/z calc. 288,10855, găsit 289,2 (M+1)+; Timp retenţie: 2,0 minute. Metodă LCMS: Waters Cortex 2,7u C18 (3,0 mm X 50 mm), 55 °C; Flux: 1,2 mL/min; fază mobilă: 100% apă cu 0,1% acid trifluoracetic apoi 100% acetonitril cu 0,1% acid trifluoracetic, gradient de 5% până la 100% B timp de 4 min, cu echilibrare la 100% B timp de 0,5 min, apoi 5% B timp de 1,5 min.
Intermediar 12: Preparare [6-[5-[1-Benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-nitro-3-(trifluormetil)-2-piridil]trifluormetansulfonat
Etapa 1: N'-[2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]-6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă
La o soluţie de acid 6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (8,5 g, 29,165 mmol) în acetonitril (90 mL) şi DMF (18 mL) s-a adăugat CDI (5 g, 30,836 mmol). Amestecul a fost agitat timp de 0,5 h la temperatura camerei, apoi s-a adăugat 2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enhidrazidă (sare clorhidrat) (9 g, 27,716 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura camerei peste noapte. Amestecul de reacţie a fost transferat la o pâlnie de extracţie spălată cu apă (300 mL) şi 2-Me THF (400 mL). Amestecul a fost extras cu 2-metil tetrahidrofuran (3 X 400 mL). Stratul organic combinat a fost spălat cu soluţie apoasă 0,5 N de HCl (3 X 300 mL), soluţie salină (3 X 250 mL), uscat peste sulfat de sodiu anhidru Na2SO4, filtrat şi concentrat sub presiune redusă. Acesta a fost apoi solubilizat de două ori în diclormetan (2 X 300 mL) şi volatilele au fost îndepărtată sub presiune redusă pentru a da N'-[2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]-6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă (14,7 g, 75%) ca solid galben. ESI-MS m/z calc. 522,0974, găsit 523,1 (M+1)+; Timp retenţie: 2,08 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 3 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 2: [6-[5-[1-Benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-nitro-3-(trifluormetil)-2-piridil]trifluormetansulfonat
Trifluormetilsulfonil trifluormetansulfonat (14,758 g, 8,8 mL, 52,308 mmol) s-a adăugat la N'-[2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]-6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă (14,7 g, 20,712 mmol) şi DIPEA (9,79 g, 13,2 mL, 75,783 mmol) în diclormetan (175 mL) la 0 °C. Baia de apă răcită cu gheaţă a fost îndepărtată după 20 min şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 2,5 h. Amestecul a fost transferat la o pâlnie de separare cu soluţie apoasă răcită cu gheaţă de 1,0 N HCl (180 mL), şi EtOAc (500 mL). Stratul organic a fost separat, şi fazei soluţiei apoase extrasă cu etil acetat (2 X 120 mL). Stratul organic separat a fost spălat din nou cu soluţie apoasă răcită pe gheaţă de HCl 1,0 N (120 mL) şi soluţie salină (3 X 120 mL), uscat peste sulfat de sodiu anhidru Na2SO4, filtrat şi concentrat prin evaporare sub presiune redusă. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (0% până la 20% de etil acetat în heptani) a dat [6-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-nitro-3-(trifluormetil)-2-piridil] trifluormetansulfonat (5,425 g, 40%) ca un ulei vâscos oranj. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8,65 (s, 1H), 7,36 - 7,21 (m, 5H), 5,93 - 5,74 (m, 1H), 5,28 - 5,10 (m, 2H), 4,78 (d, J= 10,9 Hz, 1H), 4,60 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 3,21 - 3,05 (m, 2H) ppm. 19F RMN (282 MHz, CDCl3) δ -62,69 (s, 3F), -71,82 (s, 3F), -73,32 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 636,03613, găsit 637,1 (M+1)+; Timp retenţie: 4,0 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Intermediar 13: Preparare terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[[[2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La un amestec de acid 6-brom-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (53 g, 137,6 mmol) şi 2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enhidrazidă (sare clorhidrat) (55 g, 169,4 mmol) în EtOAc (500 mL) la temperatura mediului s-a adăugat piridină (44 mL, 544,0 mmol). La amestec s-a adăugat anhidridă 1-propanfosfonică (111 g de 50 % g/g, 174,4 mmol) şi amestecul de reacţie agitat la temperatura mediului timp de 12 h. Reacţia a fost temperată cu adiţie lentă de NaOH (35 g de 50 % g/g, 437,5 mmol) în apă (500 mL) şi amestecul agitat timp de 15 min. Faza organică a fost separată, şi faza de soluţie apoasă extrasă cu EtOAc (500 mL). Fazele organice combinate spălate cu HCl (250 mL de 1 M, 250,0 mmol), soluţie salină, uscate peste MgSO4, filtrate şi concentrate în vid. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (0 - 20% EtOAc/hexani) a dat terţ-butil N-[2-[[[2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (66 g, 73%) ca un solid roz pal. 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 11,11 (s, 1H), 10,91 (s, 1H), 10,40 (s, 1H), 9,16 (s, 1H), 7,47 (d, J= 6,9 Hz, 2H), 7,42 - 7,29 (m, 3H), 5,91 (ddt, J= 17,1, 10,6, 7,1 Hz, 1H), 5,37 (dd, J= 17,2, 1,9 Hz, 1H), 5,22 (dd, J= 10,4, 1,8 Hz, 1H), 4,85 (d, J= 2,1 Hz, 2H), 3,20 - 2,91 (m, 2H), 1,50 (s, 9H) ppm. ESI-MS m/z calc. 654,09125, găsit 657,0 (M+1)+; Timp retenţie: 3,49 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 4,5 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
O soluţie de terţ-butil N-[2-[[[2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (2,15 g, 3,2641 mmol) şi DIPEA (1,12 g, 1,5 mL, 8,6117 mmol) în acetonitril (43 mL) a fost încălzită la 50 °C, apoi s-a adăugat în porţii clorură de p-toluensulfonil (765 mg, 4,0127 mmol) la 50 °C. Amestecul rezultat amestec a fost agitat la 70 °C timp de 2 ore. Amestecul de reacţie a fost răcit, apoi bazificat cu soluţie saturată de bicarbonat de sodiu (100 mL) şi extras cu etil acetat (3 X 50 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu soluţie salină (50 mL), uscate peste sulfat de sodiu, filtrate şi concentrate. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (0% până la 10% de etil acetat în heptani) a dat terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (1,7 g, 80%) ca un ulei vâscos. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 10,18 (br. s, 1H), 9,33 (br. s, 1H), 7,53 - 7,27 (m, 5H), 6,00 - 5,83 (m, 1H), 5,32 - 5,13 (m, 2H), 4,86 - 4,76 (m, 1H), 4,73 - 4,64 (m, 1H), 3,27 - 3,11 (m, 2H), 1,55 (s, 9H) ppm. 19F RMN (282 MHz, CDCl3) δ -63,78 (s, 3F), -72,93 (s, 3F) ppm. Nu a fost observată ionizare prin metoda ESI, dar a fost observată ionizare utilizând o metodă APCI: (M-C4H8+1)++ = 580,8. ESI-MS m/z calc. 636,0807, Timp retenţie: 2,7 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 4 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Intermediar 14: Preparare terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[[[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino] carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
Terţ-butil N-[2-[[[2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat racemic (24,5 g, 37,38 mmol) a fost purificat prin SFC preparativă chirală prin injecţii de 500 µL de soluţie 32 mg/mL pe o coloană ChiralPak IC (250 X 21,2 mm), 5 µm eluat la 40 °C la 70 mL/min cu 8 % MeOH (20 mM NH3) şi 92 % CO2. Prima eluare eluare enantiomer-1 (Vârf 1 la timp retenţie = 4,17 min) pentru a da terţ-butil N-[2-[[[(2S)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (11,73 g, 96%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 10,59 (s, 1H), 9,83 (s, 1H), 9,28 (s, 1H), 9,02 (d, J = 29,6 Hz, 1H), 7,48 - 7,33 (m, 5H), 5,96 - 5,77 (m, 1H), 5,41 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 5,36 - 5,29 (m, 1H), 4,86 (s, 2H), 3,19 (dd, J = 15,5, 5,9 Hz, 1H), 3,03 (dd, J = 15,5, 7,8 Hz, 1H), 1,53 (s, 9H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -63,89, -73,76 ppm. ESI-MS m/z calc. 654,09125, găsit 655,3 (M+1)+; Timp retenţie: 0,53 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 X 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Ultima eluare enantiomer 2 (Vârf 2 la timp de retenţie = 6,63 min) a dat terţ-butil N-[2-[[[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (11,62 g, 95%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 10,59 (s, 1H), 9,74 (s, 1H), 9,28 (s, 1H), 9,06 (s, 1H), 7,39 (d, J = 4,4 Hz, 5H), 6,02 - 5,79 (m, 1H), 5,44 - 5,36 (m, 1H), 5,34 (dd, J = 10,3, 1,3 Hz, 1H), 4,91 - 4,81 (m, 2H), 3,19 (dd, J = 15,4, 5,8 Hz, 1H), 3,03 (dd, J = 15,5, 7,8 Hz, 1H), 1,53 (s, 9H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -63,89, -73,76 ppm. ESI-MS m/z calc. 654,09125, găsit 657,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,53 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 X 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
terţ-Butil N-[2-[[[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (enantiomer 2) (24,97 g, 38,10 mmol) a fost dizolvat în acetonitril anhidru (200 mL) sub azot, care a dat o soluţie galben clar. DIPEA (19,91 mL, 114,3 mmol) s-a adăugat, şi soluţia a virat în portocaliu. Soluţia a fost încălzită până la 70 °C, apoi s-a adăugat în 3 porţii clorură de p-toluensulfonil (7,99 g, 41,91 mmol) la intervale de 30 min şi încălzită timp de aproximativ 3 h. Amestecul de reacţie a fost răcit până la temperatura camerei şi evaporată cantitatea majoritară de acetonitril la 45 °C. S-au adăugat 145 mL MTBE, urmat de o soluţie de acid citric (11,0 g, 57,25 mmol) în 250 mL apă, agitat, apoi adăugat 73 mL hexani. Stratul apos separat extras cu MTBE. Straturile organice combinate uscate peste MgSO4, concentrate în vid la 45 °C. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (15% până la 80% hexani (ca solvent A) în 10% EtOAc/hexani (ca solvent B)) a dat terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (20,47 g, 84%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 10,18 (s, 1H), 9,34 (s, 1H), 7,48 (d, J= 7,1 Hz, 2H), 7,39 (t, J= 7,5 Hz, 2H), 7,31 (t, J= 7,3 Hz, 1H), 6,00 - 5,81 (m, 1H), 5,25 (d, J= 17,1, 1,6 Hz, 1H), 5,20 (d, J= 10,1, 1,5 Hz, 1H), 4,82 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 4,70 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 3,30 - 3,09 (m, 2H), 1,56 (s, 9H) ppm. ESI-MS m/z calc. 636,0807, găsit 637,3 (M+1)+; Timp retenţie: 3,81 minute. LCMS Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 4,5 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Intermediar 15: Preparare terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
La o soluţie agitată de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (5,52 g, 7,485 mmol) în DMSO (35,86 mL) la temperatura camerei s-a adăugat acetat de cesiu (1,437 g, 7,486 mmol) şi amestecul a fost etanşat şi încălzit sub atmosferă de azot la 80 °C peste noapte. Răcită până la temperatura camerei şi diluată cu soluţie saturată apoasă de NH4Cl apoi extrasă cu EtOAc (2X). Fracţiile organice combinate, uscate peste MgSO4, filtrate şi concentrate până la un ulei galben. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (100% hexani până la 100% EtOAc) pentru a da un solid alb, terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1,8 g, 36%). ESI-MS m/z calc. 674,2175, găsit 575,2 (M-Boc)+. Timp retenţie: 0,45 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Intermediar 16: Preparare terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
di-terţ-Butil dicarbonat (208 mg, 0,9530 mmol) şi trietilamină (400 µL, 2,870 mmol) au fost adăugate la o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (500 mg, 0,7531 mmol) dizolvat în dioxan (5 mL) urmat de DMAP (14 mg, 0,1146 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat timp de 3 ore la temperatura camerei. Amestecul a fost concentrată până la jumătate din volumul său şi s-a adăugat apă. Extras cu etil acetat şi straturile organice combinate spălate cu soluţie salină. Straturile organice au fost separate, uscate peste sulfat de sodiu, şi evaporate. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (0 la 50% EtOAc în hexani) a dat terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (487 mg, 88%) ca solid alb. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,90 (s, 1H), 7,49 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,42 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 7,35 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 5,93 (dq, J = 17,1, 7,6 Hz, 1H), 5,38 (d, J = 17,0 Hz, 1H), 5,25 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 4,78 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 4,65 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 2,50 (p, J = 1,8 Hz, 2H), 1,27 (d, J = 21,4 Hz, 18H) ppm. ESI-MS m/z calc. 736,1331, găsit 739,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,66 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Intermediar 17: Preparare acid (2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoic
Etapa-1: acid (2R)-2-Benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoic; (R)-4-chinolil-[(2S,4S)-5-vinilchinuclidin-2-il]metanol
Într-un reactor cu manta purjat cu N2, setat la 20 °C, s-a adăugat acetat de izopropil (IPAC, 100 L, 0,173 M, 20 Vol.), urmat de acid 2-benziloxi-2-(trifluorometil)hex-5-enoic topit anterior (5,00 kg, 17,345 moli) şi cinconidină (2,553 kg, 8,67 moli), transformate într-o suspensie cu o cantitate mică de solvent de reacţie. Reactorul a fost setat să crească temperatura internă la 80 °C timp de 1 oră, solidele intrând în soluţie la încălzirea până la temperatura setată, apoi soluţia a fost menţinută la această temperatură timp de cel puţin 10 minute, apoi răcită la 70 °C şi însămânţată cu sare chirală (50 g, 1,0% în greutate). Amestecul a fost agitat timp de 10 minute, apoi crescut la temperatura internă de 20 °C timp de 4 ore, apoi menţinut peste noapte la 20 °C. Amestecul a fost filtrat, turta a fost spălată cu acetat de izopropil (10,0 L, 2,0 vol.) şi uscată sub vid. Turta a fost apoi uscată în vid (50 °C, vid) pentru a da 4,7 kg de sare. Sarea solidă rezultată a fost returnată în reactor prin prepararea unei suspensii cu o porţie de acetat de izopropil (94 L, 20 vol. pe baza greutăţii curente a sării) şi pompată în reactor şi agitată. Amestecul a fost apoi încălzit la 80 °C intern, suspensia fierbinte a fost agitată timp de cel puţin 10 minute, apoi încălzită treptat la 20 °C timp de 4-6 ore, apoi agitată peste noapte la 20 °C. Materialul a fost apoi filtrat şi turta a fost spălată cu acetat de izopropil (9,4 L, 2,0 vol.), uscată, turta a fost scoasă şi uscată în vid (50 °C, vid) pentru a da 3,1 kg de solid. Solidul (3,1 kg) şi acetatul de izopropil (62 L, 20 vol. raportat la greutatea solidă a sării) au fost suspendate şi adăugate într-un reactor, agitate sub N₂, purjate şi încălzite la 80 °C şi se menţine temperatura timp de cel puţin 10 minute, apoi se creşte treptat temperatura la 20 °C timp de 4-6 ore, apoi se agită peste noapte. Amestecul se filtrează, turta se spală cu acetat de izopropil (6,2 L, 2 vol.), se usucă, se scoate din scruber şi se usucă în vid (50 °C, vid) pentru a se obţine 2,25 kg de sare solidă. Solidul (2,25 kg) şi acetatul de izopropil (45 L, 20 vol. raportat la greutatea solidă a sării) se transformă în suspensie şi se adaugă într-un reactor, se agită sub N2, purjat şi încălzit la 80 °C, menţinut la temperatură cel puţin 10 minute, apoi crescut la 20 °C timp de 4 - 6 ore, apoi agitat peste noapte. Amestecul a fost filtrat, turta a fost spălată cu acetat de izopropil (4,5 L, 2 vol.), uscată, trecută prin scruber şi uscată în vid (50 °C) pentru a da (2R)-2-benziloxi-2-(trifluorometil)hex-5-enoic;(R)-4-chinolil-[(2S.,4S)-5-vinilchinuclidin-2-il]metanol (1,886 kg, > 98,0 % ee) sub formă de solid alb-gălbui până la cafeniu. Puritatea chirală a fost determinată cu instrumentul Agilent 1200 HPLC utilizând o coloană Phenomenex Lux i-Amylose-3 (3 µm, 150 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dublu izocratic de la 30% la 70% fază mobilă B pe o perioadă de 20,0 minute. Faza mobilă A = H2O (0,1 % CF3CO2H). Faza mobilă B = MeOH (0,1 % CF3CO2H). Rată flux = 1,0 mL/min, volum injectat = 2 µL şi temperatură coloană = 30 °C, concentraţie probă: 1 mg/mL în 60% acetonitril/40% apă.
Etapa 2: acid (2R)-2-Benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoic
O suspensie de acid (2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoic; (R)-4-chinolil-[(2S,4S)-5-vinilchinuclidin-2-il]metanol (50 g, 87,931 mmol) în etil acetat (500,00 mL) a fost tratată cu o soluţie apoasă de acid clorhidric (200 mL de 1 M, 200,00 mmol). După agitare 15 minute la temperatura camerei, cele două faze au fost separate. Faza de soluţie apoasă a fost extrasă de două ori cu etil acetat (200 mL). Stratul organic combinat a fost spălat cu 1 N HCl (100 mL). Stratul organic a fost uscat peste sulfat de sodiu, filtrat şi concentrat. Materialul a fost uscat sub vid înaintat peste noapte pentru a da acid (2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoic (26,18 g, 96%) ca un ulei maron deschis. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,46 - 7,31 (m, 5H), 5,88 - 5,73 (m, 1H), 5,15 - 4,99 (m, 2H), 4,88 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 4,70 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 2,37 - 2,12 (m, 4H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -71,63 (br s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 288,0973, găsit 287,0 (M-1)-; Timp retenţie: 2,15 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 3 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Intermediar 18: Preparare (2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enhidrazidă
Etapa 1: terţ-Butil N-[[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]amino]carbamat
La o soluţie de acid (2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoic (365 g, 1,266 mol) în DMF (2 L) s-au adăugat HATU (612 g, 1,610 mol) şi DIEA (450 mL, 2,584 mol) şi amestecul a fost agitat la temperatura mediului timp de 10 min. La amestec s-a adăugat terţ-butil N-aminocarbamat (200 g, 1,513 mol) (slab exoterm în timpul adiţiei) şi amestecul a fost agitat la temperatura mediului timp de 16 h. Reacţia a fost turnată peste gheaţă apă (5 L). Precipitatul rezultat a fost colectat prin filtrare şi spălat cu apă. Solidul a fost dizolvat în EtOAc (2 L) şi spălat cu soluţie salină. Faza organică a fost uscată peste MgSO4, filtrată şi concentrată în vid. Uleiul a fost diluat cu EtOAc (500 mL) urmat de heptan (3 L) şi agitat la temperatura mediului timp de câteva ore pentru a da o suspensie vâscoasă. Suspensia a fost diluată cu heptan suplimentar şi filtrată până la colectarea unui solid alb (343 g). Filtratul a fost concentrat şi purificat prin cromatografie pe gel de silice (0 - 40% EtOAc/hexani) a dat terţ-butil N-[[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]amino]carbamat (464 g, 91%, combinat cu produs din cristalizare). ESI-MS m/z calc. 402,17664, găsit 303,0 (M+1-Boc)+; Timp retenţie: 2,68 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350) şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 4,5 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: (2R)-2-Benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enhidrazidă
La o soluţie de terţ-butil N-[[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]amino]carbamat (464 g, 1,153 mol) în DCM (1,25 L) şi s-a adăugat HCl (925 mL de 4 M, 3,700 mol) şi amestecul agitat la temperatura mediului timp de 20 h. Amestecul a fost concentrat în vid îndepărtând cea mai mare cantitate de DCM. Amestecul a fost diluat cu izopropil acetat (1 L) şi bazificat până la pH = 6 cu NaOH (140 g de 50 % g/g, 1,750 mol) în 1L apă gheaţă. Faza organică a fost separată şi spălată cu 1L soluţie salină şi fazele de soluţie apoasă combinate au fost extrase cu izopropil acetat (1 L). Fazele organice combinate au fost uscate peste MgSO4, filtrate şi concentrate în vid pentru a da a ulei galben închis de (2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enhidrazidă (358 g, cant.). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,02 (s, 1H), 7,44 - 7,29 (m, 5H), 5,81 (ddt, J= 16,8, 10,1, 6,4 Hz, 1H), 5,13 - 4,93 (m, 2H), 4,75 (dd, J= 10,5, 1,5 Hz, 1H), 4,61 (d, J= 10,5 Hz, 1H), 3,78 (s, 2H), 2,43 (ddd, J= 14,3, 11,0, 5,9 Hz, 1H), 2,26 - 1,95 (m, 3H) ppm. ESI-MS m/z calc. 302,1242, găsit 303,0 (M+1)+; Timp retenţie: 2,0 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 4,5 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Intermediar 19: Preparare terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[[[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La un amestec de acid 6-brom-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (304 g, 789,3 mmol) şi (2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enhidrazidă (270 g, 893,2 mmol) în EtOAc (2,25 L) la temperatura mediului s-a adăugat DIEA (425 mL, 2,440 mol). La amestec a fost lent adăugat T3P (622 g de 50 % g/g, 977,4 mmol) utilizând o baie de gheaţă-apă până la menţinerea temperaturii < 35 °C (creştere temperatură până la 34 °C) şi amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura mediului timp de 18 h. S-a adăugat adiţional DIEA (100 mL, 574,1 mmol) şi T3P (95 g, 298,6 mmol) şi agitat la temperatura mediului timp de 2 zile. A fost observat încă material de pornire şi s-a adăugat T3P adiţional (252 g, 792 mmol) şi agitat timp de 5 zile. Reacţia a fost temperată cu adiţie lentă de apă (2,5 L) şi amestecul agitat timp de 30 min. Faza organică a fost separată, şi faza de soluţie apoasă extrasă cu EtOAc (2 L). Fazele organice combinate au fost spălate cu soluţie salină, uscată peste MgSO4, filtrate şi concentrate în vid. Produsul brut a fost dizolvat în MTBE (300 mL) şi diluat cu heptan (3 L), amestecul agitat la temperatura mediului timp de 12 h pentru a da o suspensie galben pal. Suspensia a fost filtrată, şi solidul rezultat a fost uscat sub curent de aer timp de 2 h, apoi în vid la 40 °C timp de 48 h. Filtratul a fost concentrat în vid şi purificat prin cromatografie pe gel de silice (0 - 20% EtOAc/hexani) şi combinat cu material obţinut din cristalizare pentru a da terţ-butil N-[2-[[[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (433 g, 82%). 1HRMN (400 MHz, DMSO) δ 11,07 (s, 1H), 10,91 (s, 1H), 10,32 (s, 1H), 9,15 (s, 1H), 7,53 - 7,45 (m, 2H), 7,45 - 7,28 (m, 3H), 5,87 (ddt, J= 17,0, 10,2, 5,1 Hz, 1H), 5,09 (dq, J= 17,1, 1,3 Hz, 1H), 5,02 (dd, J= 10,3, 1,9 Hz, 1H), 4,84 (q, J= 11,3 Hz, 2H), 2,37 - 2,13 (m, 4H), 1,49 (s, 9H) ppm. ESI-MS m/z calc. 668,1069, găsit 669,0 (M+1)+; Timp retenţie: 3,55 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 4,5 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[[[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (240 g, 358,5 mmol) în acetonitril anhidru (1,5 L) sub azot s-a adăugat DIEA (230 mL, 1,320 mol) şi soluţia oranj încălzită până la 70 °C. La amestec s-a adăugat clorură de p-toluenesulfonil (80,5 g, 422,2 mmol) în 3 porţii egale timp de 1 h. Amestecul a fost agitat la 70 °C timp de 9 h apoi s-a adăugat clorură de p-toluenesulfonil adiţională (6,5 g, 34,09 mmol). Amestecul a fost agitat timp de a total de 24 h apoi menţinut până la răcire la temperatură ambiantă. Acetonitril a fost îndepărtat în vid pentru a da un ulei oranj închis care a fost diluat cu EtOAc (1,5 L) şi apă (1,5 L). Faza organică a fost separată şi spălată cu 500 mL 1 M HCl, 500 mL de soluţie salină, uscată peste MgSO4, filtrată şi concentrată în vid. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (0 - 20% EtOAc/hexani) a dat terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (200 g, 86%). 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 10,11 (s, 1H), 9,10 (s, 1H), 7,55 - 7,48 (m, 2H), 7,47 - 7,28 (m, 3H), 5,87 (ddt, J= 16,7, 10,2, 6,4 Hz, 1H), 5,11 (dt, J= 17,2, 1,7 Hz, 1H), 5,01 (dt, J= 10,2, 1,5 Hz, 1H), 4,74 (d, J= 10,6 Hz, 1H), 4,65 (d, J= 10,6 Hz, 1H), 2,55 - 2,42 (m, 2H), 2,30 (qd, J= 11,3, 10,3, 6,9 Hz, 2H), 1,52 (s, 9H) ppm. ESI-MS m/z calc. 650,0963, găsit 650,0 (M+1)+; Timp retenţie: 3,78 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 4,5 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Intermediar 20: Preparare terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (222 g, 340,8 mmol) în MTBE (1,333 L) s-a adăugat DIPEA (65,3 mL, 374,9 mmol) urmat de DMAP (2,09 g, 17,11 mmol). S-a adăugat o soluţie de di-terţ-butil dicarbonat (111,6 g, 511,3 mmol) în MTBE (250 mL) timp de aprox. 8 minute, şi amestecul rezultat a fost agitat timp de încă 30 min. S-a adăugat 1 L de apă şi s-au separat straturile. Stratul organic a fost spălat cu KHSO4 (886 mL de 0,5 M, 443,0 mmol), 300 mL de saramură, uscată cu MgSO4 şi cea mai mare parte (>95%) din MTBE a fost evaporată prin evaporare rotativă la 45 °C, lăsând un ulei gros. S-au adăugat 1,125 L de heptan, s-a centrifugat în baia de evaporare rotativă la 45 °C până la dizolvare, apoi s-au evaporat 325 mL de solvent prin evaporare rotativă. Temperatura băii de evaporare rotativă a fost lăsată să scadă la temperatura camerei, iar produsul a început să cristalizeze în timpul evaporării. Apoi, balonul s-a plasat peste noapte într-un congelator de -20 °C. Solidul rezultat a fost filtrat şi spălat cu heptan rece şi uscat la temperatura camerei timp de 3 zile pentru a da terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (240,8 g, 94%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,95 (s, 1H), 7,52 - 7,45 (m, 2H), 7,44 - 7,36 (m, 2H), 7,36 - 7,29 (m, 1H), 5,83 - 5,67 (m, 1H), 5,08 - 5,00 (m, 1H), 5,00 - 4,94 (m, 1H), 4,79 (d, J= 10,4 Hz, 1H), 4,64 (d, J= 10,4 Hz, 1H), 2,57 - 2,26 (m, 3H), 2,26 - 2,12 (m, 1H), 1,41 (s, 18H) ppm. ESI-MS m/z calc. 750,14874, găsit 751,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,76 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 4,5 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Intermediar 21: Preparare terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluorometil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-tert-butoxicarbonil-carbamat (280 g, 372,6 mmol) a fost dizolvat în DMSO (1,82 L) (soluţie galbenă) şi tratat cu acetat de cesiu (215 g, 1,120 mol) sub agitare la temperatura camerei. Suspensia galbenă a fost încălzită la 80 °C timp de 5 ore. Amestecul de reacţie a fost răcit la temperatura camerei şi adăugat la o emulsie rece agitată de apă (5,5 L) cu 1 kg de clorură de amoniu dizolvată în aceasta şi un amestec 1:1 de MTBE şi heptan (2 L) (în 20 L). Fazele au fost separate, iar faza organică a fost spălată cu apă (3 X 3 L) şi cu saramură (1 X 2,5 L). Faza organică a fost uscată cu MgSO4, filtrată şi concentrată sub presiune redusă. Soluţia galbenă rezultată a fost diluată cu heptan (~1 L) şi însămânţată cu terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluorometil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-tert-butoxicarbonil-carbamat şi agitat pe rotavap la o presiune de 100 mbar la temperatura camerei timp de 1,5 ore. Masa solidă a fost agitată mecanic timp de 2 ore la temperatura camerei, suspensia fină groasă rezultată a fost filtrată, spălată cu heptan răcit cu gheaţă uscată şi uscată sub vid la 45 °C cu purjare de azot timp de 16 ore pentru a da terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (220 g, 85%) ca un solid alb mat. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,28 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 7,58 - 7,26 (m, 5H), 5,85 (ddt, J= 16,8, 10,3, 6,5 Hz, 1H), 5,10 (dq, J= 17,2, 1,6 Hz, 1H), 5,01 (dq, J = 10,2, 1,3 Hz, 1H), 4,76 (d, J= 11,0 Hz, 1H), 4,65 (d, J= 11,0 Hz, 1H), 2,55 (dd, J= 9,6, 5,2 Hz, 2H), 2,23 (td, J= 13,2, 10,0, 5,7 Hz, 2H), 1,27 (d, J= 3,8 Hz, 18H) ppm. ESI-MS m/z calc. 688,23315, găsit 689,0 (M+1)+; Timp retenţie: 3,32 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 4,5 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Intermediar 22: Preparare (2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enhidrazidă
Etapa 1: 2-Benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enhidrazidă
terţ-Butil N-[[2-benziloxi-2-(trifluorometil)pent-4-enoil]amino]carbamatul (386,49 g, 995,1 mmol) a fost dizolvat în DCM (1,25 L) şi toluen (250 mL) şi tratat cu HCl (750 mL de 4 M, 3,000 mol) la temperatura camerei, iar soluţia galbenă a fost agitată la temperatura camerei timp de 18 ore. Amestecul a fost concentrat în vid şi diluat cu EtOAc (2 L). Amestecul a fost tratat cu NaOH (600 mL de 2 M, 1,200 mol) şi agitat la temperatura ambiantă timp de 10 minute. Faza organică a fost separată, spălată cu 1 L de saramură, uscată peste MgSO4, filtrat şi concentrat în vid şi utilizat direct în etapa următoare (prezente urme de toluen), 2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enhidrazidă (286 g, 100%). 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 9,34 (s, 1H), 7,40 - 7,22 (m, 5H), 5,69 (ddt, J = 17,1, 10,3, 6,9 Hz, 1H), 5,33 - 5,23 (m, 1H), 5,15 (dd, J= 10,3, 1,8 Hz, 1H), 4,73 (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 3,05 - 2,87 (m, 2H) ppm. ESI-MS m/z calc. 288,10855, găsit 289,0 (M+1)+; Timp retenţie: 1,32 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: (2R)-2-Benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enhidrazidă
2-benziloxi-2-(trifluorometil)pent-4-enhidrazida racemică (5,0 g, 17,35 mmol) a fost separată prin SFC chirală utilizând o coloană ChiralPak IG (250 X 21,2 mm; 5 µm) la 40 °C utilizând o fază mobilă 7% MeOH (plus 20 mM NH3), 93% CO2 la un rată flux de 70 mL/min şi o concentraţie a probei de 111 mg/mL în metanol (fără modificator), volumul de injecţie = 160 µL cu o presiune de ieşire de 136 bar, lungimea de undă de detecţie de 210 nm, furnizând ca al doilea enantiomer de eluţie, (2R)-2-benziloxi-2-(trifluorometil)pent-4-enhidrazidă (1,7 g, 68%) sub formă de solid alb. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,31 (s, 1H), 7,48 - 7,39 (m, 2H), 7,39 - 7,25 (m, 3H), 5,77 - 5,62 (m, 1H), 5,28 (dq, J = 17,1, 1,6 Hz, 1H), 5,15 (dq, J = 10,2, 1,5 Hz, 1H), 4,73 (s, 2H), 4,51 (s, 2H), 3,00 (dd, J = 15,3, 7,5 Hz, 1H), 2,91 (dd, J = 15,3, 6,4 Hz, 1H) ppm. ESI-MS m/z calc. 288,10855, găsit 289,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,28 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 30 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Intermediar 23: Preparare terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluorometil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1,089 g, 1,449 mmol) în DMSO (13,61 mL) s-au adăugat (2S)-pent-4-en-2-ol (745,5 µL, 7,244 mmol), carbonat de cesiu (1,496 g, 4,591 mmol) şi iodocupru (63,93 mg, 0,3357 mmol) şi amestecul de reacţie a fost încălzit la 80 °C timp de 1 oră. Amestecul de reacţie a fost turnat în soluţie apoasă saturată de NH4Cl şi extras cu EtOAc. Stratul organic a fost spălat cu saramură, uscat (MgSO4), s-a filtrat şi s-a concentrat până la un ulei portocaliu care s-a dizolvat în THF (10,89 mL) şi s-a adăugat acid formic (10,89 mL, 288,7 mmol), s-a agitat timp de 20 de minute, apoi s-a adăugat acid formic (10,93 mL, 289,7 mmol) şi s-a agitat timp de 45 de minute. Reacţia a fost stinsă prin adăugarea lentă la NaHCO3 apos saturat (s-a observat o degajare viguroasă de gaz) şi EtOAc într-o pâlnie de separare, aducând în cele din urmă stratul apos la un pH de ~2 - 3. Stratul apos a fost îndepărtat, iar stratul de EtOAc a fost spălat cu NaHCO3 apos saturat (încă evoluţie viguroasă de gaz) apoi uscat peste MgSO4, filtrat şi concentrat până la un sirop galben care a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice folosind un gradient superficial de la 100% hexani la 100% EtOAc, rezultând mai multe produse, inclusiv terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluorometil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat într-o formă impură. Acest material impur a fost purificat în continuare prin cromatografie pe un amestec de 275 g coloană C18 cu fază inversă eluând cu 50 - 100% acetonitril/apă, rezultând un sirop limpede, terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluorometil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat (126 mg, 15%). ESI-MS m/z calc. 588,1807, găsit 589,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,51 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 -99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Exemple
Exemplul 1: Preparare 6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol, Compus 1
Etapa 1: Metil 6-brom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
Un amestec de metil 6-oxo-5-(trifluormetil)-1H-piridin-2-carboxilat (21,15 g, 95,64 mmol), POBr3 (41,14 g, 143,5 mmol) şi DMF (350 mg, 4,788 mmol) în toluen (200 mL) a fost încălzit la 110 °C peste noapte. Amestecul a fost răcit până la 0 °C şi turnat pe gheaţă spartă (200 g). Amestecul a fost neutralizat până la pH = 7 cu KHCO3 (100 g, 10,5 echiv.) la < 2 °C şi extras cu EtOAc (2 X 200 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu 5% soluţie apoasă de NaHCO3 (100 mL) şi soluţie salină (100 mL) şi uscate cu Na2SO4. Amestecul a fost filtrat, şi solventul a fost îndepărtată prin evaporare. Reziduul a fost triturat cu heptani/EtOAc (20:1) pentru a da 22,92 g produs pur. Filtratul a fost concentrat pentru a da 4,02 g, care a fost purificat cromatografie cu detentă (heptani/EtOAc 0 - 30%) pentru a da încă 3,32 g produs. Cele două porţii au fost combinate pentru a da metil 6-brom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (26,24 g, 96%) ca un solid alb. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 4,04 (s, 3H), 8,05-8,30 (m, 2H) ppm. 19F RMN (282 MHz, CDCl3) δ -63,8 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 282,9456, găsit 284,0 (M+1)+; Timp retenţie: 4,04 minute. Metodă LCMS: Symmetry, 4,6 X 75 mm 3,5 µm. Temp: 45 °C, Flux: 2,0 mL/min, Timp Rulare: 8 min. Fază Mobilă: Iniţial 95% H2O (0,1% acid formic) şi 5% CH3CN (0,1% acid formic) gradient liniar până la 95% CH3CN (0,1% acid formic) timp de 6,0 min apoi menţinut la 95% CH3CN (0,1% acid formic) timp de 2,0 min.
Etapa 2: acid 6-Bromo-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic
La o soluţie de metil 6-brom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (10,5 g, 36,968 mmol) în THF (100 mL) s-a adăugat o soluţie de hidroxid de litiu monohidrat (1,8 g, 42,894 mmol) în apă (70 mL). Amestecul a fost agitat 45 min la temperatura camerei. The THF a fost evaporat în vid. La soluţia apoasă rămasă s-a adăugat apă (60 mL), iar pH-ul a fost ajustat la 3-4 prin adăugarea de acid clorhidric 3 N (T < 5 °C), ducând la precipitarea produsului dorit. Solidul a fost recuperat prin filtrare şi uscat în vid pentru a da acid 6-bromo-5-(trifluorometil)piridin-2-carboxilic (9,46 g, 95%) sub formă de solid alb. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8,18 - 8,28 (m, 1H), 8,28 - 8,39 (m, 1H) ppm. 19F RMN (282 MHz, CDCl3) δ -63,8 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 268,92993, găsit 270,0 (M+1)+; Timp retenţie: 2,08 minute; Metodă LCMS: Kinetex C18 4,6 X 50 mm 2,6 µM. Temp: 45 °C, Flux: 2,0 mL/min, Timp Rulare: 6 min. Fază Mobilă: Iniţial 95% H2O (0,1% acid formic) şi 5% CH3CN (0,1% acid formic) gradient liniar până la 95% CH3CN (0,1% acid formic) timp de 4,0 min apoi menţinut la 95% CH3CN (0,1% acid formic) timp de 2,0 min.
Etapa 3: acid 6-Pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic
La o soluţie de pent-4-en-1-ol (1,5 mL, 14,79 mmol) în DMF (12 mL) s-a adăugat hidrură de sodiu (1,05 g de 60 % g/g, 26,25 mmol) şi amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura camerei timp de 0,5 h. Amestecul a fost răcit până la 0 °C şi s-a adăugat acid 6-brom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (2 g, 7,407 mmol) în DMF (12 mL). Amestecul de reacţie a fost încălzit până la temperatura camerei şi agitat timp de încă 2 h. Amestecul a fost cu grijă stins cu apă (2 mL). Solventul a fost îndepărtată în vid şi amestecul de reacţie a fost diluat cu MeOH şi filtrat. Filtratul a fost evaporat şi purificat prin cromatografie cu fază reversă pe o coloană C18 utilizând un gradient de eluare de 20% - 70% apă/acetonitril şi o rată flux de 80 mL/min timp de 20 min pentru a da acid 6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (1,73 g, 85%). ESI-MS m/z calc. 275,07693, găsit 274,0 (M-1)+; Timp retenţie: 0,83 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC HSS T3 de la Waters, şi o rulare cu gradient dual de la 15 - 98% fază mobilă B timp de 1,5 minute. Fază mobilă A = apă (cu acid formic). Fază mobilă B = acetonitril (cu acid formic)
Etapa 4: N'-[2-Benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]-6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă
La o soluţie agitată de 6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic acid (427,6 mg, 1,540 mmol) şi HATU (761,2 mg, 2,002 mmol) în DMF (5 mL) s-a adăugat DIPEA (697,4 µL, 4,004 mmol) (exoterm). După 5 min, 2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enhidrazidă (sare clorhidrat) (500 mg, 1,540 mmol) s-a adăugat într-o porţie şi amestecul a fost agitat timp de 30 min. Amestecul de reacţie a fost diluat cu apă (15 mL), extras cu etil acetat (3 X 15 mL) şi extractele combinate au fost spălate cu soluţie salină apoi uscată (MgSO4). Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice prin eluare cu un gradient de acetat de etil în hexani (10% până la 33%) pentru a da N'-[2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]-6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă (725 mg, 86%) ca o gumă incoloră. 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 9,71 (s, 1H), 9,16 (s, 1H), 7,96 (d, J= 7,7 Hz, 1H), 7,77 - 7,70 (m, 1H), 7,38 - 7,26 (m, 5H), 5,88 - 5,72 (m, 2H), 5,36 - 5,22 (m, 2H), 5,05 - 4,90 (m, 2H), 4,85 - 4,73 (m, 2H), 4,40 (t, J= 6,2 Hz, 2H), 3,11 (dd, J= 15,5, 5,9 Hz, 1H), 2,96 (dd, J= 15,5, 7,8 Hz, 1H), 2,25 - 2,13 (m, 2H), 1,87 (dt, J= 7,9, 6,3 Hz, 2H) ppm. ESI-MS m/z calc. 545,1749, găsit 546,21 (M+1)+; Timp retenţie: 1,12 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC HSS T3 de la Waters, şi o rulare cu gradient dual de la 15 - 98% fază mobilă B timp de 1,5 minute. Fază mobilă A = apă (cu acid formic). Fază mobilă B = acetonitril (cu acid formic)
Etapa 5: 2-[1-Benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-5-[6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol
La o soluţie degazată de N-[2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]-6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă (100 mg, 0,1818 mmol) în THF (2 mL) s-a adăugat metoxicarbonil-(trietilamonio)sulfonil-azanidă (130 mg, 0,5455 mmol) într-o porţie. Soluţia rezultată a fost încălzită într-un flacon cu etanşare la 80 °C timp de 2 ore, solvent a fost evaporat apoi reziduul diluat cu etil acetat (10 mL), spălat cu soluţie 2 N NaOH şi 0,5 N HCl, soluţie salină, apoi uscat (MgSO4), filtrat şi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice prin eluare cu un gradient de acetat de etil în hexani (5% până la 26%, 8 volume coloană) care a dat 2-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-5-[6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (76 mg, 79%) ca un ulei. 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 8,07 - 8,03 (m, 1H), 7,84 (dd, J= 7,8, 0,8 Hz, 1H), 7,43 - 7,29 (m, 5H), 6,06 - 5,80 (m, 2H), 5,34 - 5,20 (m, 2H), 5,13 - 5,00 (m, 2H), 4,85 (d, J= 10,8 Hz, 1H), 4,65 (d, J= 10,9 Hz, 1H), 4,56 (t, J= 6,3 Hz, 2H), 3,30 - 3,21 (m, 2H), 2,33 - 2,22 (m, 2H), 2,02 - 1,91 (m, 2H) ppm. ESI-MS m/z calc. 527,16437, găsit 528,21 (M+1)+; Timp retenţie: 1,23 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC HSS T3 de la Waters, şi o rulare cu gradient dual de la 15 - 98% fază mobilă B timp de 1,5 minute. Fază mobilă A = apă (cu acid formic). Fază mobilă B = acetonitril (cu acid formic)
Etapa 6: 6-Benziloxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,8,14(18),15-hexaenă (amestec E/Z)
La o soluţie agitată degazată de 2-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-5-[6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (265 mg, 0,5024 mmol) în DCE (21 mL) s-a adăugat [1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)imidazolidin-2-iliden]-diclor-[(2-izopropoxi-5-nitro-fenil)metilene]ruteniu (68 mg, 0,1012 mmol), amestecul rezultat a fost purjat cu azot şi încălzit la 80 °C timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost concentrat şi reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice prin eluare cu un gradient de acetat de etil în hexani (5% până la 40%, 12 volume coloană) care a dat 6-benziloxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,8,14(18),15-hexaenă (amestec E/Z) (35 mg, 14%) ca un ulei şi urmat de produs secundar dimeric (85 mg) ca solid alb. 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 8,06 (dd, J= 7,7, 0,8 Hz, 1H), 7,86 - 7,79 (m, 1H), 7,28 (d, J= 2,4 Hz, 4H), 7,23 - 7,16 (m, 1H), 6,13 - 5,99 (m, 1H), 5,90 - 5,77 (m, 1H), 4,91 (d, J= 11,6 Hz, 1H), 4,79 - 4,46 (m, 3H), 3,18 (dd, J= 14,6, 5,3 Hz, 1H), 2,81 (dd, J= 14,5, 8,9 Hz, 1H), 2,24 - 1,90 (m, 4H) ppm. ESI-MS m/z calc. 499,13306, găsit 500,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,17 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC HSS T3 de la Waters, şi o rulare cu gradient dual de la 15 - 98% fază mobilă B timp de 1,5 minute. Fază mobilă A = apă (cu acid formic). Fază mobilă B = acetonitril (cu acid formic)
Etapa 7: 6,15-bis(Trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol, Compus 1
La o soluţie de 6-benziloxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,8,14(18),15-hexaenă (amestec E/Z) (30 mg, 0,06007 mmol) în MeOH (3 mL) s-a adăugat Silica CatPd (70 mg de 0,2 mmol/g, 0,01400 mmol) şi agitat timp de 16 ore sub balon de hidrogen. Amestecul a fost diluat cu etil acetat, filtrat printr-un pat de celită prin eluare cu etil acetat şi DCM apoi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice eluat cu un gradient de acetat de etil în hexani (5% până la 40%, 15 volume coloană) urmat de liofilizare utilizând acetonitril şi apă care a dat 6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol racemic (17,5 mg, 70%) ca un solid alb. 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 8,08 (dd, J= 7,7, 0,8 Hz, 1H), 7,85 (dd, J= 7,7, 0,8 Hz, 1H), 4,69 - 4,60 (m, 1H), 4,54 - 4,42 (m, 1H), 3,94 (d, J= 1,3 Hz, 1H), 2,52 - 1,34 (m, 10H) ppm. ESI-MS m/z calc. 411,10175, găsit 411,54 (M+1)+; Timp retenţie: 3,7 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC HSS T3 de la Waters, şi o rulare cu gradient dual de la 5 - 85% fază mobilă B timp de 6,0 minute. Fază mobilă A = apă (cu acid formic). Fază mobilă B = acetonitril (cu acid formic)
Exemplul 2: Preparare 6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 2, şi 6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 3
Etapa 1: 6,15-bis(Trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 2, şi 6,15-bis(Trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 3
6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol racemic (9,5 mg, 0,02310 mmol) a fost separat prin SFC utilizând 3% metanol izocratic timp de 30 min pe o coloană Lux2 10 X 250 mm pentru a da doi enantiomeri separaţi. Primul enantiomer pentru eluare, 3,6 mg de 6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol (enantiomer 1), a fost enantiomeric pur cu toate că LCMS a acestui compus a arătat o impuritate polară. Acest material a fost re-purificat prin cromatografie pe gel de silice prin eluare cu un gradient de acetat de etil în hexani (5% până la 40%, 15 volume coloană) pentru a da 6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol (enantiomer 1) (2,7 mg, 54%), puritate chirală, > 99,9%. ESI-MS m/z calc. 411,10175, găsit 412,21 (M+1)+; Timp retenţie: 3,76 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC HSS T3 de la Waters, şi o rulare cu gradient dual de la 5 - 85% fază mobilă B timp de 6,0 minute. Fază mobilă A = apă (cu acid formic). Fază mobilă B = acetonitril (cu acid formic) Al doilea enantiomer pentru eluare de la separare SFC a fost 6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol (3,3 mg, 69%), puritate chirală, >99,9%, ESI-MS m/z calc. 411,10175, găsit 412,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,96 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC HSS T3 de la Waters, şi o rulare cu gradient dual de la 15 - 98% fază mobilă B timp de 1,5 minute. Fază mobilă A = apă (cu acid formic). Fază mobilă B = acetonitril (cu acid formic)
Exemplul 3: Preparare 17-Amino-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (racemic), Compus 4
Etapa 1: Metil 3,6-dibrom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
La metil 3-amino-6-brom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (aproximativ 2,5 g, 8,36 mmol) şi CuBr2 (aproximativ 2,801 g, 12,54 mmol) în acetonitril (60,90 mL) la temperatura camerei s-a adăugat terţ-butil nitrit (aproximativ 1,293 g, 1,491 mL, 12,54 mmol) în picătură şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 16 h într-o atmosferă închisă. A fost observată consumarea completă a SM. Reacţia s-a diluat cu soluţie saturată apoasă de NH4Cl şi stratul apos a fost extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate peste sulfat de sodiu şi solventul a fost îndepărtat sub presiune redusă. Reziduul brut, metil 3,6-dibrom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (1,6 g, 53%) a fost utilizat în reacţia următoare fără purificare suplimentară.
Etapa 2: acid 3,6-Dibrom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic
La o soluţie de metil 3,6-dibrom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (1 g, 2,755 mmol) în THF (10 mL) s-a adăugat o soluţie de hidroxid de litiu monohidrat (2 mL de 1,7 M, 3,400 mmol) în apă (2,8 mL). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 15 ore, concentrat prin evaporare de rotaţie, acidulat cu soluţie apoasă de 2 N HCl şi extras cu clorură de metilen (3 X 15 mL). Extractele combinate au fost trecute printr-un separator de fază şi concentrate pentru a da acid 3,6-dibrom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (920 mg, 93%) ca un solid maron. 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 8,36 (s, 1H) ppm. ESI-MS m/z calc. 346,84042, găsit 347,91 (M+1)+; Timp retenţie: 0,51 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC HSS T3 de la Waters, şi o rulare cu gradient dual de la 15 - 98% fază mobilă B timp de 1,5 minute. Fază mobilă A = apă (cu acid formic). Fază mobilă B = acetonitril (cu acid formic)
Etapa 3: acid 3 -Bromo-6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic
La o soluţie agitată de hidrură de sodiu (310 mg de 60 % g/g, 7,751 mmol) în DMF (6 mL) s-a adăugat pent-4-en-1-ol (550 µL, 5,421 mmol) în DMF (2 mL) agitat la temperatura camerei timp de 0,5 h. Amestecul a fost răcit până la 0 °C, acid 3,6-dibrom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (920 mg, 2,566 mmol) în DMF (6 mL) s-a adăugat, amestecul de reacţie a fost încălzit până la temperatura camerei şi agitat timp de încă 2 h. Amestecul a fost cu grijă stins cu apă (10 mL). Soluţia apoasă bazică a fost spălată cu hexani şi eter (1:1), acidulată cu soluţie apoasă de 2 N HCl, extrasă cu eter (3 X 20 mL) şi extractele combinate au fost spălate cu soluţie salină, uscate (MgSO4) şi concentrate. Purificarea prin cromatografie pe coloană a dat încă acid 3-brom-6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic impur (600 mg, 66%) ca un ulei care a fost utilizat ca atare în etapa următoare fără purificare suplimentară. ESI-MS m/z calc. 352,98743, găsit 354,01 (M+1)+; Timp retenţie: 0,86 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC HSS T3 de la Waters, şi o rulare cu gradient dual de la 15 - 98% fază mobilă B timp de 1,5 minute. Fază mobilă A = apă (cu acid formic). Fază mobilă B = acetonitril (cu acid formic).
Etapa 4: N'-[2-Benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]-3-brom-6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă
La o soluţie agitată de 3-brom-6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic acid (640 mg, 1,807 mmol) şi HATU (885 mg, 2,328 mmol) în DMF (6 mL) s-a adăugat DIPEA (1,1 mL, 6,315 mmol) (exoterm). După 5 min, 2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enhidrazidă (sare clorhidrat) (600 mg, 1,791 mmol) s-a adăugat într-o porţie şi amestecul a fost agitat timp de 16 h. Amestecul de reacţie a fost diluat cu apă (25 mL), extras cu etil acetat (3 X 25 mL) şi extractele combinate au fost spălate cu soluţie salină şi uscate (MgSO4) apoi filtrate şi concentrate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice prin eluare cu un gradient de acetat de etil în hexani (5% până la 29%, 10 volume coloană) pentru a da N-[2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]-3-brom-6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă (340 mg, 26%) ca o gumă incoloră. 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 9,81 (s, 1H), 9,31 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,40 - 7,35 (m, 5H), 5,88 - 5,75 (m, 2H), 5,38 - 5,26 (m, 2H), 5,07 - 4,95 (m, 2H), 4,83 (s, 2H), 4,43 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 3,20 - 2,97 (m, 2H), 2,28 - 2,19 (m, 2H), 1,96 - 1,87 (m, 2H) ppm. ESI-MS m/z calc. 623,08545, găsit 624,13 (M+1)+; Timp retenţie: 1,1 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC HSS T3 de la Waters, şi o rulare cu gradient dual de la 15 - 98% fază mobilă B timp de 1,5 minute. Fază mobilă A = apă (cu acid formic). Fază mobilă B = acetonitril (cu acid formic)
Etapa 5: 2-[1-Benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-5-[3-brom-6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol
La o soluţie degazată de N-[2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]-3-brom-6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă (340 mg, 0,4609 mmol) în THF (6 mL) s-a adăugat metoxicarbonil-(trietilamonio)sulfonil-azanidă (330 mg, 1,385 mmol) într-o porţie. Soluţia rezultată a fost încălzită într-un flacon cu etanşare la 80 °C timp de 2 ore. Amestecul a fost temperat cu 2 N NaOH (~1,5 mL) şi apă (5 mL), cea mai mare cantitate de solvent a fost evaporată apoi diluat cu etil acetat (20 mL). Soluţia organică a fost spălată cu 0,5 N HCl, soluţie salină, uscată (MgSO4), filtrată şi concentrată. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice prin eluare cu un gradient de acetat de etil în hexani (0% până la 12%, 12 volume coloană) pentru a da 2-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-5-[3-brom-6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (240 mg, 86%) ca un ulei. 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 8,17 (s, 1H), 7,39 - 7,27 (m, 5H), 6,00 - 5,88 (m, 1H), 5,86 - 5,75 (m, 1H), 5,29 - 5,21 (m, 1H), 5,21 - 5,16 (m, 1H), 5,06 - 4,95 (m, 2H), 4,84 (d, J= 10,8 Hz, 1H), 4,63 (d, J= 10,8 Hz, 1H), 4,44 (t, J= 6,3 Hz, 2H), 3,20 (t, J= 6,0 Hz, 2H), 2,20 (q, J= 7,2 Hz, 2H), 1,93 - 1,84 (m, 2H) ppm. ESI-MS m/z calc. 605,0749, găsit 607,12 (M+1)+; Timp retenţie: 1,22 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC HSS T3 de la Waters, şi o rulare cu gradient dual de la 15 - 98% fază mobilă B timp de 1,5 minute. Fază mobilă A = apă (cu acid formic). Fază mobilă B = acetonitril (cu acid formic)
Etapa 6: 6-Benziloxi-17-brom-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,8,14(18),15-hexaenă (amestec E/Z)
La o soluţie agitată degazată de 2-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-5-[3-brom-6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (247 mg, 0,4074 mmol) în DCE (20 mL) s-a adăugat [1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)imidazolidin-2-iliden]-diclor-[(2-izopropoxi-5-nitro-fenil)metilene]ruteniu (50 mg, 0,07445 mmol) şi amestecul rezultat a fost purjat cu azot şi încălzit la 80 °C timp de 30 min. SiliaMetS (150 mg) s-a adăugat, agitat timp de 30 min, filtrat şi spălat cu DCM apoi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice prin eluare cu un gradient de acetat de etil în hexani (0% până la 20%, 15 volume coloană) pentru a da 6-benziloxi-17-brom-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,8,14(18),15-hexaenă (amestec E/Z) (100 mg, 42%) ca un solid alb. 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 8,17 (brs, 1H), 7,25 - 7,24 (m, 2H), 7,24 - 7,23 (m, 2H), 7,18 - 7,12 (m, 1H), 5,88 - 5,80 (m, 2H), 4,88 (d, J= 11,6 Hz, 1H), 4,69 - 4,57 (m, 1H), 4,53 (d, J= 11,6 Hz, 1H), 4,50 - 4,41 (m, 1H), 3,12 (dd, J= 14,4, 4,3 Hz, 1H), 2,72 (dd, J= 14,6, 8,0 Hz, 1H), 2,19 - 1,83 (m, 4H) ppm. ESI-MS m/z calc. 577,0436, găsit 579,97 (M+1)+; Timp retenţie: 1,16 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC HSS T3 de la Waters, şi o rulare cu gradient dual de la 15 - 98% fază mobilă B timp de 1,5 minute. Fază mobilă A = apă (cu acid formic). Fază mobilă B = acetonitril (cu acid formic)
Etapa 7: 6-Benziloxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,8,14(18),15-hexaen-17-amină (amestec E/Z)
La un amestec degazat de 6-benziloxi-17-brom-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,8,14(18),15-hexaenă (amestec E/Z) (35 mg, 0,06052 mmol), Xantphos (4 mg, 0,006913 mmol), difenilmetanimină (14 µL) şi carbonat de cesiu (40 mg, 0,1228 mmol) în dioxan (700 µL) s-a adăugat Pd(OAc)2 (1,8 mg, 0,008017 mmol). S-a degazat utilizând vid/azot şi încălzit într-un flacon cu etanşare la 100 °C timp de 2,5 ore, răcit până la temperatura camerei, diluat cu apă (2 mL), extras cu etil acetat (4 X 5 mL) şi extractele combinate au fost uscate (MgSO4), filtrate şi concentrate pentru a da intermediarul N-[6-benziloxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,8,14(18),15-hexaen-17-il]-1,1-difenil-metanimină ca un lichid galben. ESI-MS m/z calc. 678,20654, găsit 678,38 (M+1)+; Timp retenţie: 2,16 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC HSS T3 de la Waters, şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 100% fază mobilă B timp de 3,0 minute. Fază mobilă A = apă (cu acid formic). Fază mobilă B = acetonitril (cu acid formic) La o soluţie agitată de N-[6-benziloxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,8,14(18),15-hexaen-17-il]-1,1-difenil-metanimină brut (amestec E/Z) (60 mg, 129%) în THF (2 mL) s-a adăugat HCl (2 mL de 2 M, 4,000 mmol) la temperatura camerei, agitat timp de 10 min, concentrată prin evaporare de rotaţie, diluată cu apă (1 mL), extrasă cu clorură de metilen (3 X 5 mL) şi extractele combinate au fost uscate (MgSO4), filtrate şi concentrate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice prin eluare cu un gradient de acetat de etil în hexani (10% până la 40%, 9 volume coloană) care a dat 6-benziloxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,8,14(18),15-hexaen-17-amină (amestec E/Z) (24 mg, 77%) ca un solid maron. 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,40 (brs, 1H), 7,27 - 7,22 (m, 4H), 7,20 - 7,14 (m, 1H), 6,09 - 5,98 (m, 1H), 5,78 (dt, J= 14,9, 7,0 Hz, 1H), 5,32 (s, 2H), 4,86 (d, J= 11,5 Hz, 1H), 4,56 (d, J= 11,5 Hz, 1H), 4,53 - 4,32 (m, 2H), 3,14 (dd, J= 14,6, 5,4 Hz, 1H), 2,78 (dd, J= 14,5, 8,7 Hz, 1H), 2,18 - 1,84 (m, 4H) ppm. ESI-MS m/z calc. 514,144, găsit 515,15 (M+1)+; Timp retenţie: 1,14 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC HSS T3 de la Waters, şi o rulare cu gradient dual de la 15 - 98% fază mobilă B timp de 1,5 minute. Fază mobilă A = apă (cu acid formic). Fază mobilă B = acetonitril (cu acid formic)
Etapa 8: 17-Amino-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 4
La o soluţie de 6-benziloxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,8,14(18),15-hexaen-17-amină (amestec E/Z) (22 mg, 0,04277 mmol) în MeOH (3 mL) s-a adăugat SiliaCat Pd (49 mg, 0,1944 mmol), agitat timp de 2 ore sub balon de hidrogen apoi adăugată o cantitate adiţională de SiliaCat Pd (20 mg de 0,2 mmol/g, 0,004000 mmol). Agitare timp de 2 ore şi apoi amestecul a fost încălzit la 50 °C timp de 2 ore. Reacţia a fost diluată cu etil acetat, filtrată printr-un pat de celită prin eluare cu etil acetat apoi concentrată. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice prin eluare cu un gradient de acetat de etil în hexani (10% până la 50%, 15 volume coloană) urmat de liofilizare utilizând acetonitril şi apă care a dat 17-amino-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (14,5 mg, 77%) ca un solid galben pal. 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,36 (s, 1H), 5,18 (brs, 2H), 4,44 - 4,24 (m, 2H), 3,48 (brs, 1H), 2,35 - 2,11 (m, 2H), 2,09 - 1,94 (m, 1H), 1,92 - 1,69 (m, 1H), 1,67 - 1,33 (m, 6H) ppm. ESI-MS m/z calc. 426,11267, găsit 427,29 (M+1)+; Timp retenţie: 3,83 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC HSS T3 de la Waters, şi o rulare cu gradient dual de la 5 - 85% fază mobilă B timp de 6,0 minute. Fază mobilă A = apă (cu acid formic). Fază mobilă B = acetonitril (cu acid formic)
Exemplul 4: Preparare (6R)-17-amino-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 5
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La o soluţie agitată de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (10 g, 15,69 mmol) în DMSO (64,97 mL) la temperatura camerei s-a adăugat acetat de cesiu (3,012 g, 15,69 mmol) şi amestecul a fost etanşat şi încălzit sub atmosferă de azot până la 80 °C şi agitat timp de 160 min. Reacţia a fost oprită pe măsură ce progresa spre starea nedorită N-produs acetilic. Amestecul de reacţie s-a diluat cu apă şi s-a extras cu EtOAc. Stratul organic s-a spălat cu NaHCO3 apos saturat (1X), NH4Cl apos (1X) şi saramură (1X), apoi uscat (MgSO4), filtrat şi concentrat până la un reziduu care a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând un gradient superficial de la 100% hexani la 100% EtOAc. Fracţiile mixte au fost combinate, concentrate şi purificate prin coloană C18 de cromatografie cu fază inversă utilizând un gradient de rulare de la 50% - 99% fază mobilă B timp de 15,0 minute (fază mobilă A = H2O (5 mM HCl), fază mobilă B = acetonitril. Izolat terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (297,7 mg, 3%) ca produs minoritar, care a fost utilizat direct în etapa următoare.
Etapa 2: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (295 mg, 0,5135 mmol) şi pent-4-en-1-ol (78,14 µL, 0,7702 mmol) în toluen (6,21 mL) s-a adăugat trifenilfosfină (178,4 µL, 0,7700 mmol). După agitare la temperatura camerei timp de 1 min, s-a adăugat DIAD (161,8 µL, 0,8218 mmol) şi amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 5 minute. Amestecul de reacţie diluat cu EtOAc apoi spălat cu soluţie saturată apoasă de NaHCO3 (1X), soluţie saturată apoasă de NH4Cl (1X) şi soluţie salină (1X) apoi uscat peste MgSO4, filtrat şi concentrat până la un ulei galben care a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând gradient de suprafaţă de la 100% hexani până la 100% EtOAc pentru a da un sirop slab gălbui clar, terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-pent-4-enoxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (271,9 mg, 82%). ESI-MS m/z calc. 642,22766, găsit 643,3 (M+1)+; Timp retenţie: 0,83 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 3: terţ-Butil N-[(6R)-6-benziloxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,8,14(18),15-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z)
Într-un balon cu două gâturi în care se barbotează azot s-a adăugat terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluorometil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-pent-4-enoxi-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat (271,9 mg, 0,4231 mmol) în DCE (62,54 mL) şi încălzit la 60 °C. Apoi s-a adăugat, prin seringă, catalizatorul Zhan-1B (77,63 mg, 0,1058 mmol) în dicloretan (1 mL), s-a încălzit reacţia la 60 °C şi s-a agitat în timp ce se barbotează azot prin soluţie. S-a adăugat dicloretan intermitent pe măsură ce reacţia a progresat pentru a menţine volumul. După 80 de minute, s-a adăugat catalizatorul Zhan-1B (46,56 mg, 0,06345 mmol) şi s-a continuat agitarea la 60 °C timp de 160 de minute. Amestecul de reacţie s-a lăsat să se răcească la temperatura camerei, apoi s-a adăugat acid 2-sulfanilpiridin-3-carboxilic (26,26 mg, 0,1692 mmol) şi s-a agitat timp de 5 minute. Amestecul de reacţie s-a concentrat prin evaporare rotativă, apoi s-a purificat prin cromatografie pe gel de silice folosind un gradient superficial de la 100% hexani la 100% EtOAc, rezultând un solid galben, terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,8,14(18),15-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z) (169 mg, 65%). ESI-MS m/z calc. 614,1964, găsit 615,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,75 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 4: terţ-Butil N-[(6R)-6-hidroxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,8,14(18),15-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z) (167 mg, 0,2717 mmol) în AcOH (5,566 mL) s-a adăugat Pd/C (88,83 mg de 10 % g/g, 0,08347 mmol) şi s-a barbotat hidrogen gazos prin amestecul sub agitare timp de 15 minute, apoi reacţia a fost etanşată şi acoperită cu un balon de hidrogen şi agitată timp de 2,5 ore. S-a adăugat paladiu (28,91 mg de 10% g/g, 0,02717 mmol), s-a agitat timp de 1 oră, apoi s-a purjat balonul cu azot şi s-a filtrat peste celită, eluând cu EtOAc. Filtratul a fost concentrat, apoi purificat prin cromatografie pe gel de silice folosind un gradient superficial de la 100% hexani la 100% EtOAc, rezultând o spumă albă, terţ-butil N-[(6R)-6-hidroxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat (143 mg, 100%). ESI-MS m/z calc. 526,1651, găsit 527,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,52 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 5: (6R)-17-Amino-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 5
La o soluţie agitată de terţ-butil N-[(6R)-6-hidroxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat (143 mg, 0,2716 mmol) în DCM (1,43 mL) s-a adăugat TFA (522,9 µL, 6,787 mmol) şi amestecul rezultat a fost agitat la temperatura camerei timp de 2 h apoi concentrată prin evaporare de rotaţie până la un reziduu galben care a fost dizolvat în EtOAc şi spălat cu soluţie saturată apoasă de NaHCO3 (1X), uscat (MgSO4), filtrat şi concentrat până la un reziduu galben pal. Acest material a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând gradient de suprafaţă de la 100% hexani până la 100% EtOAc pentru a da un solid galben pal, (6R)-17-amino-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (88,7 mg, 76%). 1H RMN (400 MHz, DMSO) δ 7,80 - 7,76 (m, 1H), 7,55 (s, 1H), 6,37 (s, 2H), 4,44 - 4,27 (m, 2H), 2,20 (q, J = 7,2 Hz, 1H), 2,10 (dd, J = 14,7, 7,1 Hz, 1H), 2,06 - 1,96 (m, 1H), 1,80 (dd, J = 11,3, 5,8 Hz, 1H), 1,69 - 1,53 (m, 4H), 1,42 (d, J = 7,2 Hz, 2H) ppm. ESI-MS m/z calc. 426,11267, găsit 427,4 (M+1)+; Timp retenţie: 1,86 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Exemplul 5: Preparare (6S)-17-amino-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 6
Etapa 1: (6S)-17-Amino-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 6
17-amino-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol racemic (32,6 mg, 0,07647 mmol) a fost separat prin SFC preparativă utilizând o coloană LUX-4 (25 cm X 2,1 cm, 5 µM) utilizând metanol ca solvent pentru a da eluare ca al doilea enantiomer, (6S)-17-amino-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (11,8 mg, 72%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,78 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 6,39 (s, 2H), 4,35 (s, 2H), 2,18 (s, 1H), 2,08 (d, J= 39,0 Hz, 2H), 1,82 (s, 1H), 1,64 (s, 4H), 1,42 (s, 2H) ppm. ESI-MS m/z calc. 426,11267, găsit 427,0 (M+1)+; Timp retenţie: 1,86 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: Caracterizarea formei solide a Compusului 6 cristalin (formă pură)
Monocristale ale Compusului 6 cristalin (formă pură) au fost crescute prin difuzia de vapori a pentanului într-o soluţie de Compus 6 în 1,2-dicoloretan. Datele de difracţie cu raze X au fost obţinute la 100 K pe un difractometru Bruker echipat cu radiaţie CuKα (λ=1,5478 Å) şi un detector CCD. Structura a fost rezolvată şi rafinată folosind programe SHELX (Sheldrick, G.M., Acta Cryst., (2008) A64, 112-122). Rezultatele sunt rezumate în Tabelul 3 de mai jos.
Tabelul 3: Explicarea structurii monocristaline a Compusului cristalin 6 (formă pură)
Sistem Cristalin Monoclinic Grupare Spaţială P21 a (Å) 9,5564(4) b (Å) 13,5953(5) c (Å) 13,8474(5) α (°) 90 β (°) 105,3070(10) γ (°) 90 V (Å3) 1735,26(12) Z/Z' 4/1 Temperatură 100 K
Exemplul 6: Preparare 17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (sare clorhidrat) (diastereomer 1 pereche), Compus 7, şi 17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (sare clorhidrat) (diastereomer 2 pereche), Compus 8
Etapa 1: Metil 3-clor-1-oxido-5-(trifluormetil)piridin-1-ium-2-carboxilat
La o soluţie de metil 3-clor-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (25 g, 102,26 mmol) în diclormetan (250 mL) răcit până la 0 °C s-a adăugat peroxid acid de uree (34 g, 361,43 mmol) urmat de adiţie lentă e anhidridă triifluoracetică (72,528 g, 48 mL, 345,32 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura camerei timp de 3 h. Amestecul de reacţie a fost apoi turnat în gheaţă-apă (200 mL) şi ajustat la pH = 7 - 8 cu 25 % soluţie apoasă de hidroxid de sodiu. Amestecul a fost diluat cu diclormetan (100 mL) şi apoi straturile au fost separate. Faza de soluţie apoasă a fost extrasă cu diclormetan (2 X 100 mL). Fazele organice combinate au fost spălate cu soluţie salină (250 mL), uscate pe sulfat de sodiu anhidru, filtrate şi concentrate sub presiune redusă pentru a da metil 3-clor-1-oxido-5-(trifluormetil)piridin-1-ium-2-carboxilat (24,5 g, 94%) ca un solid alb care a fost utilizat direct în etapa următoare. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 9,00 (s, 1H), 8,25 (s, 1H), 3,97 (s, 3H) ppm. 19F RMN (282 MHz, DMSO-d6) δ -61,75 (br. s., 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 254,99101, găsit 256,0 (M+1)+; Timp retenţie: 1,66 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 3 min, 5 - 95% acetonitril în apă (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 2: Metil 3,6-diclor-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
S-a adăugat în porţii 3-cloro-1-oxido-5-(trifluorometil)piridin-1-ium-2-carboxilat de metil (18,52 g, 72,463 mmol) la triclorură de fosforil (121,73 g, 74 mL, 793,90 mmol) la 0 °C, iar amestecul rezultat a fost agitat la 50 °C peste noapte. Îndepărtarea solventului în vid a dat un ulei negru care a fost dizolvat în acetat de etil (200 mL) şi neutralizat cu grijă cu o soluţie apoasă saturată de carbonat de sodiu până la pH ~ 8. Amestecul a fost extras cu acetat de etil (2 X 500 mL), iar fazele organice combinate au fost spălate cu saramură (250 mL), uscate peste sulfat de sodiu anhidru, filtrate şi concentrate. Uleiul negru a fost purificat prin cromatografie flash pe silicagel, eluând cu un gradient de la 0% la 20% acetat de etil în heptani pentru a da 3,6-dicloro-5-(trifluorometil)piridin-2-carboxilat de metil (16,43 g, 83%) sub forma unui ulei galben deschis. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8,13 (s, 1H), 4,04 (d, J = 1,8 Hz, 3H) ppm. 19F RMN (282 MHz, CDCl3) ppm -64,2 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 272,95712, găsit 274,0 (M+1)+; Timp retenţie: 2,02 minute; Metodă LCMS: Kinetex C18 4,6 X 50 mm 2,6 µM. Temp: 45 °C, Flux: 2,0 mL/min, Timp Rulare: 3 min. Fază Mobilă: Iniţial 95% H2O (0,1% acid formic) şi 5% acetonitril (0,1% acid formic) gradient liniar până la 95% acetonitril (0,1% acid formic) timp de 2,0 min apoi menţinut la 95% acetonitril (0,1% acid formic) timp de 1,0 min.
Etapa 3: acid 3,6-Diclor-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic
Un amestec de 3,6-dicloro-5-(trifluorometil)piridin-2-carboxilat de metil (14,63 g, 52,428 mmol) în THF (150 mL) şi apă (150 mL) a fost tratat cu hidroxid de litiu monohidrat (4,5 g, 107,24 mmol) adăugat în porţii, iar amestecul a fost agitat energic la temperatura camerei timp de 1,5 ore. Amestecul de reacţie brut a fost transferat într-o pâlnie de separare de 2 L cu acid citric 5% (400 mL) şi acetat de etil (800 mL), iar straturile au fost separate. Faza apoasă a fost extrasă în continuare cu acetat de etil (2 X 200 mL). Straturile organice combinate au fost apoi spălate cu apă (120 mL), saramură (2 X 120 mL), uscate peste sulfat de sodiu, filtrate şi concentrate sub presiune redusă pentru a da acidul 3,6-dicloro-5-(trifluorometil)piridin-2-carboxilic (12,58 g, 92%) sub formă de solid roz pal, care a fost utilizat direct în etapa următoare. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 14,64 (br. s, 1H), 8,68 (s, 1H) ppm. 19F RMN (282 MHz, DMSO-d6) δ -62,62 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 258,94147, găsit 257,9 (M+1)+; Timp retenţie: 1,51 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 3 min, 5 - 95% acetonitril în apă (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 4: N'-[2-Benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]-3,6-diclor-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă
La o soluţie de 3,6-diclor-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic acid (8,5 g, 32,693 mmol) în DMF (80 mL) s-a adăugat trietilamină (10,890 g, 15 mL, 107,62 mmol) şi HATU (15 g, 39,450 mmol). Amestecul a fost agitat timp de 10 min, apoi 2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enhidrazidă (sare clorhidrat) (11,51 g, 33,978 mmol) s-a adăugat. Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 18 h, apoi turnat în apă răcită pe gheaţă (200 g) şi extras cu etil acetat (2 X 220 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu soluţie apoasă de soluţie saturată de bicarbonat de sodiu (2 X 80 mL), apă (1 X 80 mL) şi soluţie salină (2 X 80 mL). Stratul organic a fost concentrat prin evaporare sub presiune redusă pentru a da un reziduu uleios galben închis (19,2 g) care a fost combinat cu diclormetan (100 mL) şi pre-adsorbit pe silica gel. Cromatografie cu detentă pe silica gel (220 g coloană, brut uscat pe 50 g silica gel) utilizând un gradient de la 0% până la 20% EtOAc în heptani a dat N'-[2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]-3,6-diclor-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă (11,37 g, 60%) ca un solid alb. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 9,18 (br. s, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,49 - 7,32 (m, 5H), 5,95 - 5,75 (m, 1H), 5,18 - 5,01 (m, 2H), 4,86 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 4,73 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 2,55 - 2,38 (m, 1H), 2,36 - 2,16 (m, 3H) ppm. 19F RMN (282 MHz, CDCl3) δ -64,15 (s, 3F), -73,62 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 543,0551, găsit 544,1 (M+1)+; Timp retenţie: 2,25 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 3 min, 5 - 95% acetonitril în apă (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 5: 2-[1-Benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-5-[3,6-diclor-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol
La o soluţie de N'-[2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]-3,6-diclor-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă (10,37 g, 17,891 mmol) şi N,N-diizopropiletilamină (6,5378 g, 8,9 mL, 50,079 mmol) în acetonitril (240 mL) la 50 °C s-a adăugat clorură de p-toluensulfonil (4,15 g, 21,768 mmol) în porţii. Amestecul a fost agitat la 70 °C. După completare (1 h), amestecul de reacţie a fost concentrat. Reziduul a fost dizolvat în diclormetan şi spălat cu 5% soluţie apoasă de bicarbonat de sodiu (20 mL), uscat cu sulfat de sodiu anhidru. Cromatografia cu detentă pe silicagel (40 g coloană, gradient de la 0% până la 15% EtOAc în heptani) a dat 2-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-5-[3,6-diclor-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (8,1 g) ca un solid alb, conţinând clorură de p-toluenesulfonil reziduală.
O fracţie de 1,9 g a fost dizolvată în diclormetan (40 mL) şi s-a adăugat hidroxid de amoniu (2,5 mL, 28 - 30% bază NH3) sub agitare. Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 1 oră, apoi transferat într-o pâlnie de separare cu acetat de etil (160 ml) şi separat. Stratul organic a fost spălat în continuare cu apă (2 X 30 ml) şi saramură (30 ml), uscat peste sulfat de sodiu anhidru şi filtrat. Volatilele filtratului au fost îndepărtate prin evaporare sub presiune redusă. Reziduul a fost încărcat uscat pe silicagel (50 g) şi purificat prin cromatografie pe silicagel (coloană de 80 g) utilizând un gradient de la 0% la 10% EtOAc în heptani, rezultând 2-[1-benziloxi-1-(trifluorometil)pent-4-enil]-5-[3,6-dicloro-5-(trifluorometil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (1,7 g, 18%) sub formă de solid alb. Fracţia rămasă de 6,2 g din coloana iniţială de silicagel a fost dizolvată în diclormetan (60 mL) şi s-a adăugat hidroxid de amoniu (5,0 mL, 28,0-30,0% NH3).3 (bază) sub agitare. Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 1 oră, apoi transferat într-o pâlnie de separare cu diclormetan (100 mL) şi separat. Stratul organic a fost spălat cu apă (2 X 30 mL) şi saramură (30 mL), uscat peste sulfat de sodiu anhidru, apoi filtrat. Volatilele filtratului au fost îndepărtate prin evaporare sub presiune redusă. Reziduul a fost încărcat uscat pe silicagel (50 g) şi purificat prin cromatografie pe silicagel pe o coloană de 120 g utilizând un gradient de la 0% la 10% acetat de etil în heptani, rezultând 2-[1-benziloxi-1-(trifluorometil)pent-4-enil]-5-[3,6-dicloro-5-(trifluorometil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (5,87 g, 62%) sub formă de solid alb, randamentul global calculat al produsului din ambele coloane a fost de 80%. 1H RMN (300 MHz, CDCl3) δ 8,25 (s, 1H), 7,53 - 7,28 (m, 5H), 5,87 - 5,68 (m, 1H), 5,13 - 4,94 (m, 2H), 4,85 (d, J= 10,6 Hz, 1H), 4,66 (d, J= 10,9 Hz, 1H), 2,61 - 2,15 (m, 4H) ppm. 19F RMN (282 MHz, CDCl3) δ -64,11 (s, 3F), -72,85 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 525,04456, găsit 526,1 (M+1)+; Timp retenţie: 2,42 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 3 min, 5 - 95% acetonitril în apă (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 6: 2-[1-Benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-5-[3-clor-6-(1-metilbut-3-enoxi)-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol
La o soluţie de 2-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-5-[3,6-diclor-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (1 g, 1,900 mmol) în DMSO (10 mL) s-a adăugat pent-4-en-2-ol (502 mg, 5,828 mmol), Cs2CO3 (3,2 g, 9,821 mmol) şi iodcupru (215 mg, 1,129 mmol) apoi amestecul a fost încălzită la 60 °C timp de 6 h. Amestecul de reacţie a fost turnat pe gheaţă mărunţită şi materialul păstos rezultat a fost dizolvat în etil acetat, spălat cu soluţie salină, uscat peste sulfat de sodiu anhidru, filtrat şi concentrat. Reziduul maron rezultat a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând un gradient de suprafaţă de la 100% hexani până la 50% EtOAc în hexani pentru a da 2-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-5-[3-clor-6-(1-metilbut-3-enoxi)-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (427 mg, 39%). ESI-MS m/z calc. 575,14105, găsit 567,1 (M+1)+; Timp retenţie: 0,79 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 30 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 7: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-(1-metilbut-3-enoxi)-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La o soluţie degazată cu azot de 2-[1-benziloxi-1-(trifluorometil)pent-4-enil]-5-[3-cloro-6-(1-metilbut-3-enoxi)-5-(trifluorometil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (425 mg, 0,7379 mmol) în dioxan (5 mL), s-au adăugat carbamat de terţ-butil (262 mg, 2,237 mmol), XPhos Pd G3 (8,6 mg, 0,01016 mmol), acetat de paladiu (II) (4,2 mg, 0,01871 mmol) şi Cs2CO3 (375 mg, 1,151 mmol) şi amestecul s-a încălzit într-un flacon etanşat la 100 °C peste noapte. S-a răcit la temperatura camerei, s-a diluat cu apă (8 mL), s-a extras cu acetat de etil (3 X 70 mL), apoi extractele combinate au fost spălate cu saramură (15 mL), s-au uscat (sulfat de sodiu), s-au filtrat şi s-au concentrat. Reziduul maron rezultat a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice folosind un gradient superficial de la 100% hexani la 100% EtOAc pentru a da terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-(1-metilbut-3-enoxi)-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (152 mg, 31%) ca un amestec de diastereomeri. ESI-MS m/z calc. 656,24335, găsit 657,4 (M+1)+; Timp retenţie: 0,78 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 8: terţ-Butil N-[6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z)
La o soluţie degazată de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-(1-metilbut-3-enoxi)-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (150 mg, 0,2284 mmol) în DCE (50 mL) s-a adăugat diclor[1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)-2-imidazolidiniliden][[5-[(dimetilamino)sulfonil]-2-(1-metiletoxi-O)fenil]metilen-C]ruteniu(II) (catalizator Zhan-1B, 50 mg, 0,06221 mmol) şi reacţia a fost încălzită la 70 °C peste noapte cu barbotare continuă cu azot în soluţia printr-un orificiu de evacuare a gazului. Amestecul de reacţie a fost apoi răcit la temperatura camerei şi concentrat sub presiune redusă. Diluat cu 1:4 EtOAc/hexani şi filtrat prin celită. Filtratul a fost concentrat, iar reziduul maro rezultat a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice folosind un gradient superficial de la 100% hexani la 30% EtOAc în hexani pentru a da terţ-butil N-[6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z) (52 mg, 36%) ca un ulei galben. ESI-MS m/z calc. 628,21204, găsit 629,3 (M+1)+; Timp retenţie: 0,73 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 9: terţ-Butil N-[6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat
Terţ-butil N-[6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z) (52 mg, 0,08273 mmol), Pd/C (47 mg de 10 % g/g, 0,04416 mmol), şi AcOH (1 mL) combinate într-un vas de presiune Parr şi etanşate. Supuse la vid şi alimentat cu azot gaz de trei ori apoi supus la vid. Filtrare vas cu hidrogen gaz la 150 psi apoi agitat amestecul timp de 15 h. Supus la vid şi alimentat cu azot gaz de trei ori apoi diluat cu etil acetat şi filtrat peste celită. Filtratul a fost concentrată şi purificat prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând un gradient de la 30% până la 99% acetonitril în apă (+ 5 mM HCl) timp de 15,0 minute pentru a da terţ-butil N-[6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (12,7 mg, 28%) ca un solid maron deschis. ESI-MS m/z calc. 540,1807, găsit 541,2 (M+1)+; Timp retenţie: 2,07 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 10: 17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (sare clorhidrat) (diastereomer 1 pereche), Compus 7, şi 17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (sare clorhidrat) (diastereomer 2 pereche), Compus 8
La o soluţie de terţ-butil N-[6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (12 mg, 0,02220 mmol) s-a adăugat TFA (100 µL, 1,298 mmol) şi diclormetan (300 µL) (soluţie preparată anterior de 1:4 TFA/diclormetan) şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de aproximativ 1 h. Solvenţii au fost îndepărtaţi şi dizolvaţi în DMSO (1 mL) şi reziduul a fost purificat prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând un gradient de la 1% până la 99% acetonitril în apă (+ 5 mM HCl) timp de 15,0 minute pentru a da un solid maron deschis şi primul diastereomer pereche prin eluare, 17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (sare clorhidrat) (diastereomer 1 pereche) (2,1 mg, 38%). ESI-MS m/z calc. 440,1283, găsit 441,16 (M+1)+; Timp retenţie: 1,46 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 30 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C. Al doilea diastereomer de eluare pereche, izolat ca un solid maron deschis, a fost 17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (sare clorhidrat) (diastereomer 2 pereche) (3,6 mg, 67%). 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,76 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 6,36 (s, 2H), 4,77 - 4,65 (m, 1H), 2,55 (dd, J = 8,8, 4,4 Hz, 1H), 2,17 (t, J= 12,2 Hz, 1H), 2,09 (ddd, J= 14,2, 10,5, 6,9 Hz, 1H), 1,68 (s, 1H), 1,59 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 1,48 (d, J= 6,6 Hz, 3H), 1,33 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 1,14 (q, J = 9,0, 8,0 Hz, 1H) ppm. ESI-MS m/z calc. 440,1283, găsit 441,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,51 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 30 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Exemplul 7: Preparare (6R)-17-amino-13,13-dioxo-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13λ6-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 9, şi (6S)-17-amino-13,13-dioxo-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13λ6-thia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 10
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-but-3-enilsulfonil-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
Un amestec de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (545 mg, 0,84 mmol), but-3-enă-1-sulfinat (sare de sodiu) (351 mg, 2,47 mmol), şi CuI (472 mg, 2,48 mmol) în DMSO (5 mL) a fost încălzit la 100 °C timp de 3 h, apoi diluat cu eter şi apă, amestecul filtrat, straturile separate şi stratul organic spălat cu apă, soluţie salină, uscat (MgSO4) şi evaporat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (24 g SiO2, 0 - 20% EtOAc în hexani timp de 15 min) pentru a da terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-but-3-enilsulfonil-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (327 mg, 57%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 10,36 (s, 1H), 9,57 (s, 1H), 7,42 - 7,28 (m, 5H), 5,75 (tdt, J= 17,0, 10,2, 6,5 Hz, 2H), 5,06 (dt, J= 17,1, 1,4 Hz, 2H), 5,01 (d, J = 10,2 Hz, 2H), 4,84 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 4,66 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 3,69 (hept, J = 7,0 Hz, 2H), 2,65 - 2,58 (m, 2H), 2,56 - 2,31 (m, 2H), 2,30 - 2,18 (m, 1H), 1,59 (s, 9H), 1,55 - 1,51 (m, 1H)ppm. 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -58,48, -72,86 ppm. ESI-MS m/z calc. 690,1947, găsit 691,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,89 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: terţ-Butil N-[6-(benziloxi)-13,13-dioxo-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13λ6-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z)
O soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-but-3-enilsulfonil-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (300 mg, 0,4344 mmol) în 5 mL DCE s-a adăugat în picătură timp de 5 min la o soluţie de benziliden-[1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)imidazolidin-2-iliden]-diclor-ruteniu;triciclohexilfosfan (55 mg, 0,06478 mmol) în DCE (42 mL) încălzit la 70 °C cu barbotare N2 constantă timp de 1 h. Solventul a fost evaporat şi reziduul purificat prin cromatografie pe gel de silice (24 g SiO2, 0 - 20% EtOAc în hexan timp de 15 min) pentru a da terţ-butil N-[6-(benziloxi)-13,13-dioxo-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13λ6-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z) (157 mg, 55%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 10,05 (s, 1H), 9,54 (s, 1H), 7,36 - 7,20 (m, 5H), 5,67 (q, J= 8,3, 7,8 Hz, 1H), 5,48 (q, J= 9,1, 8,7 Hz, 1H), 4,90 (s, 2H), 3,65 (ddd, J = 14,6, 12,6, 4,4 Hz, 1H), 3,58 - 3,47 (m, 1H), 3,06 - 2,84 (m, 2H), 2,60 - 2,34 (m, 2H), 2,23 (t, J= 10,5 Hz, 1H), 2,12 - 2,06 (m, 1H), 1,58 (d, J = 2,9 Hz, 9H)ppm. 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -58,72, -74,24 ppm. ESI-MS m/z calc. 662,1634, găsit 663,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,85 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 3: terţ-Butil N-[6-hidroxi-13,13-dioxo-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13λ6-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat
Un amestec de terţ-butil N-[6-(benziloxi)-13,13-dioxo-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13λ6-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z) (154 mg, 0,232 mmol), şi Pd/C (74 mg de 10 % g/g, 0,070 mmol) în AcOH (1,5 mL) a fost agitat la temperatura camerei sub 180 psi H2 în vas de oţel inoxidabil sub presiune timp de 15 h. Apoi amestecul a fost filtrat şi filtratul evaporat pentru a da produsul ţintă terţ-butil N-[6-hidroxi-13,13-dioxo-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13λ6-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (136 mg, 96%), ESI-MS m/z calc. 574,1321, găsit 575,1 (M+1)+; Timp retenţie: 0,72 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 4: (6R)-17-Amino-6-hidroxi-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13λ6-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-13,13-dionă (enantiomer 1), Compus 9, şi (6S)-17-amino-6-hidroxi-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13λ6-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-13,13-dionă (enantiomer 2), Compus 10
Un amestec de terţ-butil N-[6-hidroxi-13,13-dioxo-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13λ6-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (134 mg, 0,22 mmol), TFA (2 mL), triizopropilsilan (67 µL, 0,33 mmol) şi apă (100 µL) a fost agitat la temperatura camerei timp de 30 min şi apoi solventul evaporat. Reziduul a fost co-evaporat din acetonitril (2X). Reziduul, dizolvat în 2 mL acetonitril, a fost supus la SFC preparativă cu injecţii de 330 µL prin SFC preparativă prin eluare un gradient de 5 mM NH3 în metanol până la CO2 (5-15% timp de 10 min) prin coloană 21,2 X 250 mm AD, particule de 5 µm pentru a da primul eluent (6R)-17-amino-6-hidroxi-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13λ6-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-13,13-dionă (enantiomer 1) (38 mg, 37%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,93 (s, 1H), 7,66 (s, 3H, D2O modificat), 3,77 - 3,64 (m, 1H), 3,61 - 3,49 (m, 1H), 2,21 (t, J = 12,1 Hz, 2H), 2,08 (d, J= 15,0 Hz, 1H), 1,92 (dd, J= 12,5, 7,2 Hz, 1H), 1,56 (m, 6H) ppm; 19F RMN (376 MHz, DMSO-d6) δ -57,96, -78,11 ppm. ESI-MS m/z calc. 474,07965, găsit 475,0 (M+1)+; Timp retenţie: 1,16 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C. UV/vis λmax 231, 277, 356 nm.
Eluţie suplimentară a dat al doilea eluent (6S)-17-amino-6-hidroxi-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13λ6-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-13,13-dionă (enantiomer 2) (36 mg, 35%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,93 (s, 1H), 7,66 (s, 3H, D2O modificat), 3,77 - 3,63 (m, 1H), 3,56 (td, J = 14,9, 13,7, 4,1 Hz, 1H), 2,21 (t, J = 11,9 Hz, 2H), 2,08 (dd, J= 14,1, 8,0 Hz, 1H), 1,97 - 1,84 (m, 1H), 1,56 (m, 6H) ppm; 19F RMN (376 MHz, DMSO-d6) δ -57,96, -78,11. ESI-MS m/z calc. 474,07965, găsit 475,0 (M+1)+; Timp retenţie: 1,16 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C.
Exemplul 8: Preparare (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 11
Etapa 1: terţ-Butil N [2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
Terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (159,3 g, 231,3 mmol) şi trifenilfosfină (72,9 g, 277,9 mmol) au fost dizolvate în toluen (1 L), apoi s-a adăugat (2S)-pent-4-en-2-ol (28,7 mL, 278,9 mmol). Acest amestec s-a încălzit până la 45 °C, apoi s-a adăugat DIAD (58,3 mL, 296,1 mmol) (exoterm) lent timp de 40 min. Pentru următoarele aproximativ 2 h, amestecul a fost răcit până la temperatura camerei. În timpul perioadei de răcire, după primele 10 minute, s-a adăugat trifenilfosfină (6,07 g, 23,14 mmol). După încă 1 h, s-a adăugat trifenilfosfină adiţională (3,04 g, 11,59 mmol). După încă 23 min, s-a adăugat DIAD (2,24 mL, 11,57 mmol). După perioadă de ~2 h răcire la temperatura camerei, amestecul a fost răcit până la 15 °C, şi au fost adăugate cristale de însămânţare de complex DIAD-oxid de trifenilfosfină care au cauzat precipitarea până la apariţie, apoi s-a adăugat 1000 mL heptan. Amestecul a fost stocat la -20 °C timp de 3 zile. Precipitatul filtrat şi descărcat şi filtratul concentrat pentru a da un ulei reziduu roşu. Reziduul dizolvat în 613 mL heptan la 45 °C, apoi răcit până la 0 °C, însămânţat cu complex DIAD-trifenilfosfin oxid, agitat la 0 °C timp de 30 min, apoi soluţia filtrată. Filtratul a fost concentrată până la un volum mai mic, apoi încărcat pe o coloană cu 1,5 kg silica gel (volum coloană = 2400 mL, Rată flux = 600 mL/min). Rulare la un gradient de 1% până la 6% EtOAc în hexani timp de 32 minute (8 volume coloană), apoi menţinut la 6% EtOAc în hexani până când produsul finalizat prin eluare a dat terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (163,5 g, 93%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,82 (s, 1H), 7,43 - 7,27 (m, 5H), 5,88 - 5,69 (m, 2H), 5,35 (h, J= 6,2 Hz, 1H), 5,16 - 4,94 (m, 4H), 4,81 (d, J= 10,7 Hz, 1H), 4,63 (d, J= 10,7 Hz, 1H), 2,58 - 2,15 (m, 6H), 1,42 (s, 18H), 1,36 (d, J= 6,2 Hz, 3H) ppm. ESI-MS m/z calc. 756,2958, găsit 757,3 (M+1)+; Timp retenţie: 4,0 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 4,5 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z)
Următoarea reacţie a fost efectuată, împărţită în mod egal în două baloane de reacţie de 12 L, operate în paralel. S-a folosit agitarea mecanică, iar reacţiile au fost supuse unei purjări constante de azot gazos folosind un tub de dispersie a gazului cu porozitate specifică. În fiecare balon s-a adăugat terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluorometil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (54 g, 71,36 mmol în fiecare balon) dizolvat în DCE (8 L în fiecare balon) şi ambele baloane au fost purjate puternic cu azot la temperatura camerei. Ambele baloane au fost încălzite la 62 °C şi s-a folosit la fiecare reacţie Catalizator Grubbs 1a generaţie (9 g, 10,94 mmol în fiecare balon) şi s-a agitat la 400 rpm, concomitent cu setarea unui control al temperaturii interne la 75 °C cu purjare puternică cu azot (ambele reacţii au atins ~75 °C după aproximativ 20 min). După 5 h 15 min, controlul temperaturii interne a fost setat la 45 °C. După aproximativ 2 h, s-a adăugat în fiecare balon acid 2-sulfanilpiridin-3-carboxilic (11 g, 70,89 mmol în fiecare balon), urmat de trietilamină (10 mL, 71,75 mmol în fiecare balon). La finalizarea adăugării, purjarea cu azot a fost oprită şi ambele baloane de reacţie au fost agitate la 45 °C, deschise la aer, peste noapte. Reacţiile au fost apoi îndepărtate de la căldură şi s-au adăugat 130 g de silicagel la fiecare reacţie, fiecare fiind agitată la temperatura camerei. După aproximativ 2 h, amestecurile verzi au fost combinate şi filtrate peste celită, apoi concentrate prin evaporare rotativă la 43 °C. Reziduul obţinut a fost dizolvat în diclormetan/heptan 1:1 (400 mL), iar solidul portocaliu format a fost îndepărtat prin filtrare. Soluţia mamă verzuie a fost evaporată pentru a da 115,5 g de spumă verde. Acest material a fost dizolvat în 500 mL de diclormetan/hexani 1:1, apoi încărcat pe o coloană de silicagel de 3 kg (volumul coloanei = 4800 mL, rată flux = 900 mL/min). S-a trecut printr-un gradient de 2% până la 9% EtOAc în hexani timp de 43 de minute (8 volume coloană), apoi s-a trecut prin eluţie la 9% EtOAc până când produsul a terminat de eluat, rezultând 77,8 g de produs impur. Acest material a fost co-evaporat cu metanol (~500 mL), apoi diluat cu metanol (200 mL) pentru a da 234,5 g de soluţie metanolică, care a fost înjumătăţită, iar fiecare jumătate a fost purificată prin coloană C18 de cromatografie în fază inversă (3,8 kg), volumul coloanei = 3300 mL, rată flux = 375 mL/min, încărcată ca soluţie în metanol). Coloana s-a agitat la 55% acetonitril timp de ~5 minute (0,5 volume ale coloanei), apoi la un gradient de 55% până la 100% acetonitril în apă timp de ~170 de minute (19-20 volume coloană), apoi s-a menţinut la 100% acetonitril până când produsul şi impurităţile au terminat de eluat. Fracţiile de produs curate din ambele coloane au fost combinate şi concentrate prin evaporare rotativă, apoi transferate cu etanol într-un balon de 5 L, evaporate şi uscate cu grijă (devin spumă) pentru a da un amestec de izomeri de olefină, terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (55,5 g, 53%). ESI-MS m./z calculat 728,26447, găsit 729,0 (M+1)+Timp de retenţie: 3,82 minute. Puritatea finală a fost determinată prin UPLC cu fază inversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particulă de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350) şi un gradient dublu de la 1 la 99% faza mobilă B timp de 4,5 minute. Faza mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum de injecţie = 1,5 µL şi temperatura coloanei = 60 °C.
Etapa 3: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (E./Z Amestecul) (11,7 g, 16,06 mmol) a fost dizolvat în etanol sub agitare (230 mL) şi balonul a fost rulat ciclic de 3 ori în vid/azot şi tratat cu Pd/C 10% (50% umiditate, 2,2 g de 5% g/g, 1,034 mmol). Amestecul a fost rulat ciclic de 3 ori între vid/azot şi de 3 ori între vid/hidrogen. Amestecul a fost apoi agitat puternic sub hidrogen (balon) timp de 7,5 ore. Catalizatorul a fost îndepărtat prin filtrare, înlocuit cu Pd/C 10% proaspăt (50% umiditate, 2,2 g de 5% g/g, 1,034 mmol) şi agitat energic sub hidrogen (balon) peste noapte. Apoi, catalizatorul a fost îndepărtat din nou prin filtrare, filtratul s-a evaporat, iar reziduul (11,3 g, 1 g pus deoparte) a fost dizolvat în etanol (230 mL) încărcat cu Pd/C proaspăt 10% (50% umiditate, 2,2 g de 5% g/g, 1,034 mmol) şi agitat energic sub hidrogen (balon) timp de 6 ore, reîncărcat din nou cu Pd/C proaspăt 10% (50% umiditate, 2,2 g de 5% g/g, 1,034 mmol) şi agitat energic sub hidrogen (balon) peste noapte. Catalizatorul a fost îndepărtat prin filtrare, iar filtratul a fost evaporat (s-au obţinut 10 g de reziduu). Acest material brut (10 g + 1 g pus deoparte mai sus) a fost purificat prin cromatografie pe silicagel (coloană de 330 g, încărcătură lichidă în diclormetan) cu un gradient liniar de 0% până la 15% acetat de etil în hexan până la eluarea produsului, urmat de 15% până la 100% acetat de etil în hexan pentru a da, sub formă de spumă incoloră, terţ-butil N-[(6R.12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (9,1 g, 78%). ESI-MS m./z calculat 730,2801, găsit 731,0 (M+1)+ Timp de retenţie: 3,89 minute. Puritatea finală a fost determinată prin UPLC cu fază inversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particulă de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350) şi un gradient dublu de la 1 la 99% faza mobilă B timp de 4,5 minute. Faza mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum de injecţie = 1,5 µL şi temperatura coloanei = 60 °C.
Etapa 4: (6R,12R)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 11
terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-Butoxicarbonil-carbamat (8,6 g, 11,77 mmol) a fost dizolvat în etanol (172 mL), apoi balonul a fost rulat ciclic de 3 ori între vid/azot. Amestecul a fost tratat cu 10% Pd/C (50% apă umed, 1,8 g de 5% g/g, 0,8457 mmol), apoi s-a rulat ciclic de 3 ori între vid/azot şi de 3 ori între vid/hidrogen şi apoi s-a agitat energic sub hidrogen (balon) la temperatura camerei timp de 18 ore. Amestecul a fost rulat ciclic de 3 ori între vid/azot, filtrat peste celită spălând cu etanol şi apoi filtratul a fost evaporat pentru a da 7,3 g de terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R,12R)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat, un solid alb-gălbui. Acest material a fost dizolvat în diclormetan (69 mL), răcit într-o baie de gheaţă sub azot şi tratat lent cu TFA (23 mL, 298,5 mmol). Soluţia a fost agitată în baia de gheaţă timp de 5 minute şi apoi la temperatura camerei timp de 1 oră. Soluţia galben pal a fost diluată cu heptan (~100 mL) şi evaporată pentru a da o masă solidă galbenă. Reziduul a fost diluat din nou cu heptan (~100 - 200 mL) şi s-a adăugat diclormetan sub încălzire până când s-a obţinut o soluţie galbenă. Cea mai mare parte a diclormetanului a fost îndepărtată prin evaporare rotativă (baie de apă la 35 °C, presiune 100 mbar) pentru a da o suspensie fină de culoare galbenă. Suspensia a fost agitată timp de ~1 oră la temperatura camerei, filtrată, spălând solidul cu heptan răcit cu gheaţă carbonică şi apoi uscat timp de 3 zile în vid cu o scurgere de azot la 50 °C pentru a da un solid galben pal, (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (4,68 g, 90%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,77 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 6,34 (s, 2H), 4,90 - 4,70 (m, 1H), 2,47 (dd, J = 7,8, 5,5 Hz, 1H), 2,29 (t, J = 11,2 Hz, 1H), 2,11 (ddd, J= 14,4, 8,7, 6,1 Hz, 1H), 1,73 (dt, J= 12,7, 7,6 Hz, 2H), 1,59 - 1,38 (m, 4H), 1,35 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 1,18 (ddt, J = 12,4, 9,6, 6,2 Hz, 1H) ppm. 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,42 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 5,20 (s, 2H), 4,75 (dtt, J = 12,6, 6,3, 3,2 Hz, 1H), 3,98 (s, 1H), 2,68 (dtd, J = 12,9, 7,6, 2,3 Hz, 1H), 2,38 - 2,18 (m, 2H), 2,03 (d, J= 7,9 Hz, 1H), 1,75 - 1,46 (m, 5H), 1,41 (d, J= 6,3 Hz, 3H), 1,35 - 1,27 (m, 1H) ppm. 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -63,95, -77,34 ppm. ESI-MS m/z calc. 440,1283, găsit 441,0 (M+1)+; Timp retenţie: 2,87 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 4,5 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 5: Caracterizarea formei solide a solvatului heptan al Compusului 11
A. Difracţia cu Raze X pe Pulbere
Difractograma de difracţie de raze X pe pulbere (XRPD) a produsului din Etapa 4, solvatul heptan al Compusului 11, a fost obţinută la temperatura camerei în mod de transmisie utilizând un sistem PANalytical Empyrean echipat cu o sursă de tub etanş şi un detector PIXcel 1D Medipix-3 (Malvern PANalytical Inc, Westborough, Massachusetts). Generatorul de raze X a funcţionat la o tensiune de 45 kV şi un curent de 40 mA cu radiaţii de cupru (1,54060 Å). Proba de pulbere a fost plasată pe un suport de probă cu 96 de godeuri cu film de mylar şi încărcată în instrument. Proba a fost scanată pe un unghi de la aproximativ 3° la aproximativ 40°2θ cu o dimensiune a pasului de 0,0131303° şi 49 s pe pas.
Difractograma XRPD pentru solvatul de heptan al Compusului 11 este furnizată în FIG. 1, iar datele XRPD sunt rezumate mai jos în Tabelul 4.
Tabelul 4: Semnale XRPD pentru solvatul heptan al Compusului 11
Vârf XRPD Nr. Unghi (grade 2-Theta ± 0,2) Intensitate % 1 5,8265 100 2 10,1389 30,54 3 5,5705 22,28 4 18,1061 21 5 20,5379 15,76 6 11,7247 12,43 7 20,9306 11,25
Difractogramele XRPD pentru probele de solvat heptan al Compusului 11 preparate în trei condiţii diferite de uscare sunt furnizate în FIG. 2. Difractogramele XRPD au fost înregistrate la temperatura camerei în mod continuu utilizând un difractometru de raze X PANalytical Empyrean (Almelo, Olanda). Razele X au fost generate utilizând un tub de Cu funcţionat la 45 kV şi 40 mA. S-a utilizat un detector Pixel 1d cu fantă anti-împrăştiere P8. Optica de divergenţă este Bragg Brentano High Definition (BBHD) cu o mască de 10 mm, o fantă de divergenţă de 1/8 şi o fantă anti-împrăştiere de 1⁄2. Modul de scanare continuă a utilizat o dimensiune a pasului de 0,0131 grade şi un timp de numărare de 13,77 secunde pe pas, integrat pe intervalul de la 4 la 40 de grade doi-teta. Proba de pulbere a fost plasată pe o zonă indentată într-un suport cu fundal zero şi aplatizată cu o lamă de sticlă.
În condiţiile de uscare 1, solvatul heptan al Compusului 11 a fost uscat în weekend sub vid intern cu o scurgere de azot la 50 °C. În condiţiile de uscare 2, solvatul heptan al Compusului 11 a fost uscat în weekend la 40-45 °C. În condiţiile de uscare 3, solvatul heptan al Compusului 11 a fost uscat timp de 4 zile sub vid intern cu o scurgere de azot la 40-45 °C.
Difractogramele XRPD pentru probele de solvat de heptan al Compusului 11 preparate în Condiţiile 1 de Uscare, Condiţiile 2 de Uscare şi Condiţiile 3 de Uscare sunt furnizate în FIG. 2, iar datele XRPD sunt rezumate mai jos în Tabelele 5, 6, şi 7. În FIG. 2, Curba superioară corespunde Condiţiei 2 de Uscare, curba din mijloc corespunde Condiţiei 1 de Uscare, iar curba inferioară corespunde Condiţiei 3 de Uscare. Fiecare curbă este substanţial similară între ele şi cu XRPD FIG. 1.
Tabelul 5: Semnale XRPD pentru solvatul heptan al Compusului 11, Condiţia 1 de Uscare
Vârf XRPD Nr. Unghi (grade 2-Theta ± 0,2) Intensitate % 1 5,8572 100 2 6,0844 62,33 3 10,189 34,55 4 10,5918 21,42 5 18,5355 10,59 6 18,1599 10,55 7 12,2176 10,14
Tabelul 6: Semnale XRPD pentru solvatul heptan al Compusului 11, Condiţia 2 de Uscare
Vârf XRPD Nr. Unghi (grade 2-Theta ± 0,2) Intensitate % 1 5,9314 100 2 6,1405 52,48 3 10,2746 33,73 4 10,6383 18,32 5 11,9036 10
Tabelul 7: Semnale XRPD pentru solvatul heptan al Compusului 11, Condiţia 3 de Uscare
Vârf XRPD Nr. Unghi (grade 2-Theta ± 0,2) Intensitate % 1 6,0778 100 2 5,812 81,49 3 10,6059 29,34 4 10,1304 21,77 5 12,27 12,64
B. Analiza Calorimetrică cu Scanare Diferenţială
Punctul de topire al produsului din Etapa 4, solvatul heptan al Compusului 11, a fost măsurat utilizând aparatul DSC TA Instruments Q2000.
Termograma DSC pentru solvatul heptan al Compusului 11 este furnizată în FIG. 2. Termograma pentru solvatul de heptan al Compusului 11 prezintă o endotermă la ~93,45 °C şi o recristalizare la ~103 °C.
C. 13C RMN Stare solidă
13C RMN al produsului din Etapa 4, heptan solvat al Compusului 11, a fost obţinut utilizând procedura descrisă în Metodele Generale. Spectrul 13C SSRMN pentru forma solvatului de heptan al Compusului 11 este furnizat în FIG. 3, iar datele sunt rezumate mai jos în Tabelul 8.
Tabelul 8: Semnale 13C SSRMN pentru solvat heptan al Compusului 11
Vârf # Deplasare Chim. [ppm] Intensitate [rel] 1 166,3 26,5 2 165,8 19,3 3 164,6 48,8 4 163,4 18,2 5 154,8 12,9 6 154,0 21,1 7 152,1 24,5 8 151,6 50,5 9 140,2 12,3 10 139,4 17,5 11 138,5 23,1 12 138,0 18,9 13 135,1 17,6 14 134,6 20,4 15 131,3 26,2 16 130,2 24,2 17 129,6 24,3 18 128,5 18,0 19 125,7 31,6 20 123,7 15,1 21 123,2 14,6 22 122,9 16,7 23 121,1 21,9 24 120,2 40,6 25 119,2 15,1 26 117,8 48,6 27 76,2 31,3 28 74,4 84,8 29 73,7 84,5 30 73,3 73,1 31 40,0 22,3 32 38,6 12,0 33 37,6 27,9 34 36,9 32,7 35 35,7 12,6 36 33,6 13,5 37 32,5 57,6 38 32,0 69,7 39 30,4 56,4 40 30,1 50,3 41 29,5 44,7 42 28,8 36,63 43 28,1 21,1 44 27,1 29,6 45 25,3 27,1 46 23,1 90,9 47 22,7 88,1 48 22,0 46,4 49 21,6 48,1 50 20,3 100,0 51 19,6 83,0 52 18,3 24,6 53 17,6 47,9 54 13,8 51,6 55 13,1 39,3 56 12,5 82,3
D. 19F RMN Stare Solidă
19F SSRMN al produsului din Etapa 4, heptan solvat al Compusului 11, a fost obţinut utilizând procedura descrisă în Metodele Generale. Spectrul 13C SSRMN pentru forma solvatului de heptan al Compusului 11 este furnizat în FIG. 4, iar datele sunt rezumate mai jos în Tabelul 9.
Tabelul 9: Semnale 19F SSRMN pentru solvat heptan al Compusul 11
Vârf # Deplasare Chim. [ppm] Intensitate [rel] 1 -63,5 4,4 2 -63,8 3,4 3 -65,1 12,2 4 -65,8 7,6 5 -66,3 7,8 6 -67,0 12,5 7 -74,0 2,1 8 -74,9 4,2 9 -76,6 10,0 10 -77,6 5,9
E. Analiza termogravimetrică (TGA)
TGA a fost utilizată pentru a investiga prezenţa solvenţilor reziduali în loturile caracterizate şi pentru a identifica temperatura la care are loc descompunerea probei. Datele TGA au fost colectate pe un sistem Mettler Toledo TGA/DSC 3+ STARe.
Curba TGA pentru solvatul heptan al Compusului 11 preparat în Condiţia 1 de Uscare este prezentată în FIG. 6A. Curba TGA pentru solvatul heptan al Compusului 11 preparat în Condiţia 2 de Uscare este prezentată în FIG. 6B. Curba TGA pentru solvatul heptan al Compusului 11 preparat în Condiţia 3 de Uscare este prezentată în FIG. 6C. Fiecare dintre curbele din FIG. 6A, 6B, şi 6C sunt substanţial similare între ele.
Exemplul 9: Preparare (6S,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (sare clorhidrat), Compus 12
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (500 mg, 0,6653 mmol) în DMSO (5 mL) s-au adăugat (2R)-pent-4-en-2-ol (350 µL, 3,401 mmol), carbonat de cesiu (751 mg, 2,305 mmol) şi iodcupru (31 mg, 0,1628 mmol) şi amestecul de reacţie a fost încălzită la 100 °C timp de 6 h într-o baie de ulei. Amestecul de reacţie a fost pe o baie de gheaţă spartă şi extras cu etil acetat şi spălat cu soluţie salină. Straturile organice au fost separate, uscate peste sulfat de sodiu, filtrată şi evaporate. Reziduul maron rezultat a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând gradient de suprafaţă 100% hexani până la 50% EtOAc în hexani pentru a da ulei maron vâscos, terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (120 mg, 27%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,71 (s, 1H), 8,86 (s, 1H), 7,46 - 7,28 (m, 5H), 5,91 - 5,72 (m, 2H), 5,24 (qt, J = 6,1, 3,1 Hz, 1H), 5,16 - 4,97 (m, 4H), 4,75 (d, J= 11,0 Hz, 1H), 4,66 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 2,50 - 2,40 (m, 4H), 2,32 (d, J= 8,1 Hz, 2H), 1,49 (s, 9H), 1,32 (d, J= 6,2 Hz, 3H) ppm. ESI-MS m/z calc. 656,24335, găsit 657,3 (M+1)+; Timp retenţie: 0,84 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: terţ-Butil N-[(12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z)
La o soluţie degazată de [1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)imidazolidin-2-iliden]-dicloro-[(2-izopropoxifenil)metilen]ruteniu (32 mg, 0,05107 mmol) (catalizator Grubbs de a doua generaţie) în DCE (50 mL) s-a adăugat o soluţie degazată de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluorometil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat (150 mg, 0,2284 mmol) în DCE (50 mL) picurat lent sub un curent de azot care barbotează prin soluţie timp de 30 de minute, iar amestecul de reacţie a fost apoi încălzit la 50 °C timp de 5 ore. Reacţia a fost oprită, iar solvenţii au fost îndepărtaţi prin evaporare rotativă. Reziduul maro rezultat a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând un gradient superficial de la 100% hexani la 30% EtOAc în hexani pentru a da un amestec de izomeri de olefină, terţ-butil N-[(12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z) (102 mg, 36%) care a co-eluat cu o parte din materialul de pornire nereacţionat. ESI-MS m/z calc. 628,21204, găsit 629,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,36 minute. Acest material a fost utilizat direct în etapa următoare. ESI-MS m/z calc. 628,21204, găsit 629,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,36 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 3: terţ-Butil N-[(12R)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[(12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (E./Z Într-un balon de 250 ml echipat cu un balon de hidrogen, utilizând un adaptor cu 3 căi, s-a adăugat 10% g/g Pd/C (54 mg, 0,05074 mmol) în AcOH (5 ml), într-un balon de 250 ml echipat cu un balon de hidrogen, utilizând un adaptor cu 3 căi. Balonul a fost supus vidului şi umplut din nou cu azot gazos de trei ori, apoi supus vidului. Vasul a fost umplut cu hidrogen gazos, iar amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 15 ore. Vasul a fost supus vidului şi umplut din nou cu azot gazos de trei ori, apoi diluat cu acetat de etil şi filtrat peste celită. Filtratul a fost concentrat pentru a da terţ-butil N-[(12R)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (120 mg, 96%), care a fost utilizat direct în etapa următoare. ESI-MS m/z calc. 540,1807, găsit 541,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,57 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 4: (6S,12R)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (sare clorhidrat), Compus 12
La o soluţie de terţ-butil N-[(12R)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (120 mg, 0,2220 mmol) s-a adăugat TFA (500 mL, 6,490 mol) şi diclormetan (1,5 mL) (soluţie preparată anterior de 1:4 TFA/diclormetan) şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de aproximativ 1 h. Solvenţii au fost îndepărtaţi prin evaporare şi reziduul a fost dizolvat în DMSO (1 mL) şi purificat prin HPLC cu fază reversă utilizând un gradient rulare de la 40% până la 85% acetonitril în apă (+ 5 mM HCl) timp de 30,0 minute pentru a da un solid maron deschis şi al doilea diastereomer pentru eluare, (6S,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (sare clorhidrat) (14,7 mg, 28%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,78 (s, 1H), 4,72 (ddt, J= 11,5, 7,7, 3,8 Hz, 1H), 2,61 - 2,52 (m, 1H), 2,24 - 2,03 (m, 2H), 1,68 (s, 1H), 1,59 (h, J= 7,5, 6,4 Hz, 2H), 1,54 - 1,38 (m, 3H), 1,34 (d, J= 6,3 Hz, 3H), 1,21 - 1,10 (m, 1H) ppm. ESI-MS m/z calc. 440,1283, găsit 441,1 (M+1)+; Timp retenţie: 2,87 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 4,5 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Exemplul 10: Preparare (6S,12S)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (sare clorhidrat), Compus 13
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1S)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (800 mg, 1,065 mmol) în DMSO (10 mL) s-au adăugat (2S)-pent-4-en-2-ol (550 µL, 5,345 mmol), carbonat de cesiu (1,1 g, 3,376 mmol) şi iodcupru (47 mg, 0,2468 mmol) şi amestecul de reacţie a fost încălzită la 80 °C timp de 3 h. Amestecul de reacţie a fost turnat pe gheaţă spartă şi extras cu etil acetat şi faza organică a fost spălată cu soluţie salină. Stratul organic a fost uscat peste sulfat de sodiu, filtrată şi evaporată. Reziduul maron rezultat a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând gradient de suprafaţă de la 100% hexani până la 30% EtOAc în hexani pentru a da terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1S)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (303 mg, 38%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,21 (s, 1H), 7,41 - 7,30 (m, 5H), 5,90 - 5,75 (m, 2H), 5,43 (qt, J= 7,7, 3,9 Hz, 1H), 5,12 - 4,98 (m, 4H), 4,81 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 4,68 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 2,60 - 2,47 (m, 4H), 2,39 - 2,26 (m, 2H), 1,38 - 1,26 (m, 21H) ppm. ESI-MS m/z calc. 756,2958, găsit 757,47 (M+1)+; Timp retenţie: 0,78 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: terţ-Butil N-[(12S)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z)
La o soluţie degazată de [1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)imidazolidin-2-iliden]-dicloro-[(2-izopropoxifenil)metilen]ruteniu (43 mg, 0,06862 mmol) (catalizator Grubbs de a doua generaţie) în DCE (50 mL) s-a adăugat o soluţie degazată de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluorometil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1S)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (200 mg, 0,2643 mmol) în DCE (50 mL) picurându-se lent sub un curent de azot care barbotează prin soluţie timp de 30 de minute, iar la finalizarea adăugării, amestecul de reacţie a fost încălzit la 50 °C timp de 5 ore. Reacţia a fost oprită, iar solvenţii au fost îndepărtaţi prin evaporare rotativă. Reziduul maro rezultat a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând un gradient superficial de la 100% hexani la 30% EtOAc în hexani, obţinându-se un amestec de izomeri de olefină. terţ-butil N-[(12S)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z) (150 mg, 45%) împreună cu o parte din materialul de pornire nereacţionat care a co-eluat cu produsul. Acest material a fost utilizat direct în etapa următoare fără purificare ulterioară. ESI-MS m/z calculat 628,21204, găsit 629,3 (M+1)+. Timp de retenţie: 0,7 minute. Puritatea finală a fost determinată prin UPLC cu fază inversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 coloană (30 × 2,1 mm, particulă de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349) şi un gradient dublu rulat de la 50 - 99% faza mobilă B timp de 1,0 minute. Faza mobilă A = apă (0,05% CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum de injecţie = 1,5 µL şi temperatura coloanei = 60 °C.
Etapa 3: (6S,12S)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (sare clorhidrat), Compus 13
La o soluţie de terţ-butil N-[(12S)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (E./Z Într-un balon de 250 mL echipat cu un balon de hidrogen folosind un adaptor cu 3 căi, s-a adăugat 10% g/g Pd/C (78 mg, 0,07329 mmol) în AcOH (5 mL) într-un balon de 250 mL echipat cu un balon de hidrogen folosind un adaptor cu 3 căi. S-a supus vidului şi s-a umplut din nou cu azot gazos de trei ori, apoi s-a supus vidului. S-a umplut vasul cu hidrogen gazos, iar amestecul s-a agitat la temperatura camerei timp de 15 ore. S-a supus vidului şi s-a umplut din nou cu azot gazos de trei ori, apoi s-a diluat cu acetat de etil şi s-a filtrat peste celită. Filtratul s-a concentrat pentru a da 125 mg de terţ-butil N-[(12S)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat ca amestec de diastereomeri. Acest material a fost dizolvat într-un amestec 1:3 de soluţie pre-amestecată de TFA (500 µL, 6,490 mmol) şi diclormetan (1,5 mL) şi amestecul a fost agitat timp de 30 de minute la temperatura camerei. Solventul a fost îndepărtat prin evaporare rotativă, iar reziduul rezultat a fost purificat prin HPLC în fază inversă utilizând un gradient de la 40% la 85% acetonitril în apă (+ 5 mM HCl) timp de 30,0 minute pentru a da un solid maro deschis şi primul enantiomer care a eluat, (6S.,12S)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (sare clorhidrat) (20,6 mg, 36%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,42 (s, 1H), 4,75 (ddt, J= 10,6, 6,7, 3,4 Hz, 1H), 4,06 - 3,76 (m, 1H), 2,76 - 2,63 (m, 1H), 2,28 (t, J= 7,6 Hz, 2H), 2,01 (d, J= 5,7 Hz, 1H), 1,61 (m, 4H), 1,50 (dd, J = 12,0, 6,5 Hz, 1H), 1,41 (d, J= 6,3 Hz, 3H), 1,33 - 1,26 (m, 1H), 0,89 (m, 1H) ppm. ESI-MS m/z calc. 440,1283, găsit 441,1 (M+1)+; Timp retenţie: 2,82 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 4,5 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Exemplul 11: Preparare (6R,12S)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 14
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1S)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (417,3 mg, 0,7091 mmol) şi (2R)-pent-4-en-2-ol (109,5 µL, 1,064 mmol) în toluen (8,784 mL) s-a adăugat trifenilfosfină (246,6 µL, 1,064 mmol). După agitare la temperatura camerei timp de 1 min, DIAD (223,5 µL, 1,135 mmol) s-a adăugat şi amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 5 min. Amestecul de reacţie a fost diluat cu EtOAc apoi spălat cu soluţie saturată apoasă de bicarbonat de sodiu (1X), soluţie saturată apoasă de NH4Cl (1X) şi soluţie salină (1X) apoi uscat peste sulfat de magneziu, filtrat şi concentrat până la un ulei galben care a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând un gradient de la 100% hexani până la 100% EtOAc pentru a da un sirop slab gălbui clar, terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1S)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (433,8 mg, 93%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 9,81 (s, 1H), 9,16 (s, 1H), 7,42 - 7,37 (m, 2H), 7,36 - 7,28 (m, 3H), 5,90 - 5,72 (m, 2H), 5,26 (q, J = 6,1 Hz, 1H), 5,13 - 4,97 (m, 4H), 4,83 (d, J= 10,8 Hz, 1H), 4,68 (d, J= 10,9 Hz, 1H), 2,51 (m, 2H), 2,46 - 2,36 (m, 3H), 2,27 (d, J= 11,2 Hz, 1H), 1,55 (s, 9H), 1,36 (d, J = 6,2 Hz, 3H) ppm. ESI-MS m/z calc. 656,24335, găsit 657,3 (M+1)+; Timp retenţie: 0,86 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: terţ-Butil N-[(6R,12S)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z)
La o soluţie degazată de [1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)imidazolidin-2-iliden]-dicloro-[(2-izopropoxifenil)metilen]ruteniu (378,2 mg, 0,6036 mmol) (catalizator Hoveyda Grubbs a doua generaţie) în toluen (229 mL), sub agitare la 100 °C cu un condensator de reflux şi barbotare cu azot prin soluţie, s-a adăugat o soluţie degazată de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluorometil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1S)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat (1,5269 g, 2,325 mmol) în toluen (229 mL) în picătură sub un curent de azot care barbotează prin soluţie timp de 10 minute, iar amestecul de reacţie a fost încălzit la 100 °C timp de 60 de minute. Amestecul a fost îndepărtat din baia de încălzire şi s-a adăugat acid 2-sulfanilpiridin-3-carboxilic (180,5 mg, 1,163 mmol). Amestecul rezultat a fost agitat timp de 10 minute, apoi concentrat prin evaporare rotativă până la un reziduu care a fost cromatografiat pe o suprafaţă de 275 g cu fază inversă C18 coloană eluând cu un gradient de la 50% la 100% acetonitril în apă, rezultând o spumă alb-gălbuie, terţ-butil N-[(6R,12S)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z) (324,3 mg, 22%). ESI-MS m/z calc. 628,21204, găsit 629,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,82 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 3: terţ-Butil N-[(6R,12S)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12S)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z) (324,3 mg, 0,5159 mmol) în AcOH (10,81 mL) s-a adăugat Pd/C 10% g/g (168,7 mg, 0,1585 mmol, 50% umed apă) şi hidrogen gazos a fost barbotat prin amestecul sub agitare timp de 15 minute, apoi reacţia a fost sigilată şi acoperită cu un balon de hidrogen şi agitată timp de 16 ore. S-a adăugat Pd/C 10% g/g (54,9 mg, 0,05159 mmol, 50% umed apă), s-a agitat timp de 1 oră, apoi balonul a fost purjat cu azot şi filtrat peste celită, eluând cu EtOAc. Filtratul a fost concentrat apoi purificat prin cromatografie pe gel de silice folosind un gradient de la 100% hexani la 100% EtOAc, rezultând o spumă albă, terţ-butil N-[(6R,12S)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (216 mg, 77%). ESI-MS m/z calc. 540,1807, găsit 541,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,61 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 4: (6R,12S)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 14
La o soluţie agitată de terţ-butil N-[(6R,12S)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (216 mg, 0,3997 mmol) în diclormetan (2,16 mL) s-a adăugat TFA (769,6 µL, 9,989 mmol) şi amestecul rezultat a fost agitat la temperatura camerei timp de 1 h apoi concentrat prin evaporare de rotaţie până la un reziduu galben. Reziduul a fost cromatografiat pe o coloană C18 cu fază reversă 100 g prin eluare cu un gradient de la 50% până la 100% acetonitril în apă pentru a da un solid galben pal, (6R,12S)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (177,1 mg, 100%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,76 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 6,36 (s, 2H), 4,73 (dq, J= 6,4, 3,1, 2,4 Hz, 1H), 2,56 (d, J= 5,5 Hz, 1H), 2,22 - 2,04 (m, 2H), 1,74 - 1,64 (m, 1H), 1,59 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 1,54 - 1,43 (m, 3H), 1,34 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 1,22 - 1,10 (m, 1H) ppm. ESI-MS m/z calc. 440,1283, găsit 441,1 (M+1)+; Timp retenţie: 2,02 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Exemplul 12: Preparare 16-amino-12,12-dioxo-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12λ6-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(17),2,4,13,15-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 15 şi 16-amino-12,12-dioxo-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12λ6-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(17),2,4,13,15-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 16
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-but-3-enilsulfonil-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
Un amestec de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (225 mg, 0,3530 mmol), but-3-en-1-sulfinat (sare de sodiu) (150 mg, 1,055 mmol), şi iodcupru (202 mg, 1,061 mmol) în DMSO (2,2 mL) a fost încălzită la 100 °C timp de 3 h, apoi diluată cu eter şi apă, filtrată prin Celite, straturile partiţionate şi stratul organic spălat cu apă, soluţie salină, uscate (MgSO4) şi evaporate. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (0 - 20% EtOAc în hexani) a dat terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-but-3-enilsulfonil-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (99 mg, 41%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 10,36 (s, 1H), 9,56 (s, 1H), 7,41 - 7,28 (m, 5H), 5,91 (dt, J= 17,0, 8,5 Hz, 1H), 5,74 (ddt, J= 16,8, 10,2, 6,5 Hz, 1H), 5,32 - 5,17 (m, 2H), 5,10 - 5,04 (m, 1H), 5,02 (dq, J= 10,2, 1,3 Hz, 1H), 4,83 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 4,67 (d, J= 10,9 Hz, 1H), 3,80 - 3,60 (m, 2H), 3,29 - 3,14 (m, 2H), 2,65 - 2,56 (m, 2H), 1,54 (s, 9H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -58,49, -73,15 ppm. ESI-MS m/z calc. 676,179, găsit 677,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,87 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: terţ-Butil N-[6-benziloxi-12,12-dioxo-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12λ6-thia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(16),2,4,8,13(17),14-hexaen-16-il]carbamat (amestec E/Z)
Într-un balon cu fund rotund cu trei gâturi, o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifuorometil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-but-3-enilsulfonil-5-(trifuorometil)-3-piridil]carbamat s-a adăugat lent, prin picurare, dintr-o pâlnie de adăugare, timp de 45 de minute, la o soluţie de dicloro[1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)-2-imidazolidiniliden][5-[(dimetilamino)sulfonil]-2-(1-metiletoxi-O)fenil]metilen-C]ruteniu(II) (34 mg, 0,04634 mmol) în DCE (25 mL) încălzită la 70 °C cu N2 barbotând prin soluţie. Amestecul a fost agitat la 70 °C cu N2 barbotare timp de încă 90 de minute, apoi solventul a fost evaporat. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (0 - 20% EtOAc în hexani) a furnizat terţ-butil N-[6-benziloxi-12,12-dioxo-6,14-bis(trifluorometil)-18-oxa-12λ6-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(16),2,4,8,13(17),14-hexaen-16-il]carbamat (amestec E/Z) (92 mg, 44%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 9,46 (s, 1H), 9,42 (s, 1H), 7,37 - 7,27 (m, 2H), 7,25 - 7,16 (m, 3H), 5,88 - 5,64 (m, 2H), 4,92 (d, J= 11,6 Hz, 1H), 4,54 (d, J = 11,6 Hz, 1H), 4,13 - 3,98 (m, 1H), 3,59 (dt, J = 15,6, 5,9 Hz, 1H), 3,12 (dd, J = 14,6, 4,8 Hz, 1H), 2,87 - 2,76 (m, 2H), 2,69 - 2,62 (m, 1H), 1,58 (s, 9H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -58,84, -74,24 ppm; UV/vis λmax 233, 268, 322 nm. ESI-MS m/z calc. 648,1477, găsit 649,1 (M+1)+; Timp retenţie: 0,83 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 3: terţ-Butil N-[6-hidroxi-12,12-dioxo-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12λ6-thia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(16),2,4,13(17),14-pentaen-16-il]carbamat
Un amestec de terţ-butil N-[6-benziloxi-12,12-dioxo-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12λ6-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(16),2,4,8,13(17),14-hexaen-16-il]carbamat (amestec E/Z) (90 mg, 0,1304 mmol) şi Pd/C (42 mg de 10 % g/g, 0,03947 mmol) în AcOH (850 µL) a fost agitat la temperatura camerei sub 180 psi H2 în vas de oţel inoxidabil sub presiune timp de 36 h. Apoi amestecul a fost filtrată şi filtratul a fost evaporat pentru a da terţ-butil N-[6-hidroxi-12,12-dioxo-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12λ6-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(16),2,4,13(17),14-pentaen-16-il]carbamat (81 mg, 102%). ESI-MS m/z calc. 560,1164, găsit 561,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,69 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C; UV/vis λmax 233, 268, 323 nm.
Etapa 4: 16-Amino-12,12-dioxo-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12λ6-thia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(17),2,4,13,15-pentaen-6-ol (enantiomer 1) şi 16-amino-12,12-dioxo-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12λ6-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(17),2,4,13,15-pentaen-6-ol (enantiomer 2)
Carbamat de terţ-Butil N-[6-hidroxi-12,12-dioxo-6,14-bis(trifluorometil)-18-oxa-12λ6-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(16),2,4,13(17),14-pentaen-16-il] (81 mg, 0,13 mmol) a fost dizolvat în TFA (1,27 mL), apă (68 µL) şi triizopropilsilan (40 µL, 0,1953 mmol) şi agitat la temperatura camerei timp de 15 minute, apoi solvenţii s-au evaporat. Reziduul a fost supus separării chirale prin cromatografie SFC utilizând o coloană ChiralPak AD (coloană 250 X 21,2 mm, dimensiunea particulelor de 5 µm) cu 5% până la 30% metanol (5 mM NH3).3)/şi fază mobilă de dioxid de carbon la 10 mL/min timp de 10,0 min (volumul injectării = 330 µL de soluţie de 25 mg/mL în metanol) rezultând ca prim enantiomer pentru eluarea 16-amino-12,12-dioxo-6,14-bis(trifluorometil)-18-oxa-12λ6-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(17),2,4,13,15-pentaen-6-ol (16 mg, 27%) sub formă de solid cristalin alb. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,84 (s, 1H), 7,66 (s, 1H, D2O schimbat), 7,39 (s, 2H, D2O schimbat), 3,87 - 3,69 (m, 1H), 3,57 - 3,41 (m, 1H), 2,30 - 2,02 (m, 4H), 1,70 (m, 2H), 1,58 - 1,45 (m, 2H) ppm; 19F RMN (376 MHz, DMSO-d6) δ -58,27, -77,73; UV/vis λmax 230, 275, 353 nm. ESI-MS m/z calc. 460,064, găsit 461,0 (M+1)+; Timp retenţie: 1,04 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C.
Al doilea enantiomer pentru eluare a fost 16-amino-12,12-dioxo-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12λ6-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(17),2,4,13,15-pentaen-6-ol (14,4 mg, 24%) ca un solid cristalin alb. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,84 (s, 1H), 7,66 (s, 1H, D2O modificat), 7,39 (s, 2H, D2O modificat), 3,84 - 3,70 (m, 1H), 3,55 - 3,43 (m, 1H), 2,31 - 2,00 (m, 4H), 1,70 (s, 2H), 1,56 - 1,45 (m, 2H) ppm; 19F RMN (376 MHz, DMSO-d6) δ -58,27, -77,73 ppm; UV/vis λmax 230, 275, 353 nm. ESI-MS m/z calc. 460,064, găsit 460,9 (M+1)+; Timp retenţie: 1,04 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C.
Exemplul 13: Preparare 21-amino-6,19-bis(trifluormetil)-17,23-dioxa-3,4,22-triazatetraciclo[16.3.1.12,5.011,16]tricosa-1(22),2,4,11(16),12,14,18,20-octaen-6-ol (sare clorhidrat), Compus 17
Etapa 1: Metil 6-(2-alilfenoxi)-3-[bis(terţ-butoxicarbonil)amino]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
La o soluţie de metil 3-[bis(terţ-butoxicarbonil)amino]-6-brom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (1,2 g, 2,403 mmol) în DMSO (12 mL) s-a adăugat 2-alilfenol (380 µL, 2,911 mmol), carbonat de cesiu (2,43 g, 7,458 mmol) şi iodcupru (100 mg, 0,5251 mmol) şi amestecul de reacţie a fost încălzit la 100 °C timp de 30 min într-o baie de ulei. LCMS arată completarea reacţiei. Amestecul de reacţie a fost turnat pe gheaţă spartă şi extras cu etil acetat şi spălat cu soluţie salină. Straturile organice au fost separate, uscate peste sulfat de sodiu, şi evaporate. Reziduul maron rezultat a fost purificat prin cromatografie pe silicagel utilizând un gradient de 100% hexani până la 100% EtOAc pentru a da metil 6-(2-alilfenoxi)-3-[bis(terţ-butoxicarbonil)amino]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (612 mg, 46%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,85 (s, 1H), 7,30 - 7,25 (m, 2H), 7,20 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 5,88 (ddt, J = 16,8, 10,1, 6,6 Hz, 1H), 5,02 - 4,94 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,32 (d, J= 6,7 Hz, 2H), 1,42 (s, 18H) ppm; ESI-MS m/z calc. 552,2083, găsit 453,1 (M+1)+; Timp retenţie: 0,75 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 30 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: acid 6-(2-Alilfenoxi)-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic
La o soluţie de metil 6-(2-alilfenoxi)-3-[bis(terţ-butoxicarbonil)amino]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (612 mg, 1,108 mmol) în THF (8 mL), MeOH (8 mL), şi apă (8 mL) s-a adăugat LiOH (86 mg, 3,591 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 30 min.
THF şi metanol au fost îndepărtate sub presiune redusă şi apoi 10 mL HCl (10%) a fost cu grijă adăugat până la pH ~ 6 şi produsul a fost extras prin EtOAc (2 X 50 mL). Fazele organice au fost combinate, spălate cu soluţie salină (5 mL), uscate pe sulfat de sodiu anhidru, filtrate şi concentrate în vid şi plasate sub vid înaintat timp de 12 ore pentru a da un solid galben acid 6-(2-alilfenoxi)-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (482 mg, 99%). ESI-MS m/z calc. 438,14026, găsit 439,13 (M+1)+; Timp retenţie: 0,69 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 30 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 3: terţ-Butil N-[6-(2-alilfenoxi)-2-[[[2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamoil]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La o soluţie de acid 6-(2-alilfenoxi)-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (394,8 mg, 0,9006 mmol) şi 2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enhidrazidă (312,5 mg, 1,084 mmol) în DMF (5 mL) s-a adăugat DIEA (527,0 µL, 3,026 mmol), urmat de HATU (526,6 mg, 1,385 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura camerei timp de 4 h. Amestecul a fost diluat cu apă şi extras cu etil acetat. Faza organică a fost combinată şi uscată peste MgSO4, filtrată, şi concentrată în vid. Reziduul maron rezultat a fost purificat prin cromatografie pe silicagel utilizând un gradient de 100% hexani până la 30% EtOAc-hexani pentru a da terţ-butil N-[6-(2-alilfenoxi)-2-[[[2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamoil]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (543 mg, 85%). ESI-MS m/z calc. 708,2383, găsit 808,0 (M+1)+; Timp retenţie: 0,7 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 4: terţ-Butil N [6-(2-alilfenoxi)-2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[6-(2-alilfenoxi)-2-[[[2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamoil]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (630 mg, 0,8890 mmol) în acetonitril (75 mL) s-a adăugat DIEA (500 µL, 2,871 mmol) şi a fost încălzită până la 70 °C, apoi s-a adăugat clorură de 4-metilbenzensulfonil (255 mg, 1,338 mmol) în 3 porţii (85 mg fiecare porţie în intervale de 10 min). Amestecul rezultat a fost încălzit la 70 °C timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost răcit şi stins cu soluţie saturată de bicarbonat de sodiu şi extras cu etil acetat. Straturile organice combinate au fost spălate cu soluţie salină, uscate peste sulfat de sodiu, filtrate, şi evaporate în vid. Reziduul maron rezultat a fost purificat prin cromatografie pe silicagel utilizând un gradient de la 100% hexani până la 30% EtOAc pentru a da terţ-butil N-[6-(2-alilfenoxi)-2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (336 mg, 55%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,72 (s, 1H), 8,99 (s, 1H), 7,35 - 7,29 (m, 4H), 7,25 (m, 5H), 5,90 - 5,72 (m, 2H), 5,23 - 5,10 (m, 2H), 4,96 - 4,87 (m, 2H), 4,66 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 4,52 (d, J= 10,9 Hz, 1H), 3,29 (dd, J= 11,3, 6,8 Hz, 2H), 3,10 (d, J = 7,1 Hz, 2H), 1,49 (s, 9H) ppm. ESI-MS m/z calc. 690,22766, găsit 691,3 (M+1)+; Timp retenţie: 0,81 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 5: terţ-Butil N-[6-(benziloxi)-6,19-bis(trifluormetil)-17,23-dioxa-3,4,22-triazatetraciclo[16.3.1.12,5.011,16]tricosa-1(22),2,4,8,11(16),12,14,18,20-nonaen-21-il]carbamat (amestec E/Z)
La o soluţie degazată de benzilidene-[1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)imidazolidin-2-iliden]-diclor-ruteniu;triciclohexilfosfan (6 mg, 0,007067 mmol) (catalizator Grubbs-a doua generaţie) în DCE (30 mL) s-a adăugat o soluţie degazată de terţ-butil N-[6-(2-alilfenoxi)-2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluorometil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat (212 mg, 0,3070 mmol) în DCE (30 mL) în picătură sub un curent de N2 barbotare prin soluţie timp de 30 de minute, iar amestecul de reacţie a fost încălzit la 50 °C timp de 5 ore. Temperatura a fost crescută la 70 °C şi amestecul de reacţie a fost încălzit peste noapte. Reacţia a fost oprită, iar solvenţii au fost îndepărtaţi în vid. Reziduul maro rezultat a fost purificat prin cromatografie pe coloană de silicagel utilizând un gradient superficial de 100% hexani la 30% EtOAc-hexani pentru a da terţ-butil N-[6-(benziloxi)-6,19-bis(trifluorometil)-17,23-dioxa-3,4,22-triazatetraciclo[16.3.1.12,5.011,16]tricosa-1(22),2,4,8,11(16),12,14,18,20-nonaen-21-il]carbamat (amestec E/Z) (126 mg, 62%). ESI-MS. m./z calculat 662,1964, găsit 663,19 (M+1)+Timp de retenţie: 0,74 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 6: terţ-Butil N-[6-hidroxi-6,19-bis(trifluormetil)-17,23-dioxa-3,4,22-triazatetraciclo[16.3.1.12,5.011,16]tricosa-1(22),2,4,11(16),12,14,18,20-octaen-21-il]carbamat
La o soluţie de amestec izomeric ~1:1 de terţ-butil N-[6-(benziloxi)-6,19-bis(trifluormetil)-17,23-dioxa-3,4,22-triazatetraciclo[16.3.1.12,5.011,16]tricosa-1(22),2,4,8,11(16),12,14,18,20-nonaen-21-il]carbamat (amestec E/Z) (120 mg, 0,1811 mmol) şi terţ-butil N-[6-(2-alilfenoxi)-2-[5-[1-hidroxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (120 mg, 0,1998 mmol) în AcOH (5 mL) s-a adăugat Pd/C (42 mg de 10 % g/g, 0,03947 mmol) într-un balon cu fund rotund echipat cu un aparat de filtrare cu balon H₂ folosind un adaptor cu 3 căi. Supus la vid şi umplut din nou cu azot gazos de trei ori, apoi supus la vid. Balonul a fost umplut cu hidrogen gazos, apoi amestecul a fost agitat timp de 15 ore. Supus la vid şi umplut din nou cu azot gazos de trei ori, apoi diluat cu acetat de etil şi filtrat peste celită. Filtratul a fost concentrat şi uscat sub vid înalt. Reziduul maro rezultat a fost purificat prin cromatografie pe coloană de silicagel folosind un gradient superficial de 100% hexani la 30% EtOAc-hexani pentru a da terţ-butil N-[6-hidroxi-6,19-bis(trifluorometil)-17,23-dioxa-3,4,22-triazatetraciclo[16.3.1.12,5.011,16]tricosa-1(22),2,4,11(16),12,14,18,20-octaen-21-il]carbamat (14,2 mg, 27%); ESI-MS m/z calc. 574,1651, găsit 575,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,31 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 7: 21-Amino-6,19-bis(trifluormetil)-17,23-dioxa-3,4,22-triazatetraciclo[16.3.1.12,5.011,16]tricosa-1(22),2,4,11(16),12,14,18,20-octaen-6-ol (sare clorhidrat), Compus 17
La o soluţie de terţ-butil N-[6-hidroxi-6,19-bis(trifluormetil)-17,23-dioxa-3,4,22-triazatetraciclo[16.3.1.12,5.011,16]tricosa-1(22),2,4,11(16),12,14,18,20-octaen-21-il]carbamat (13 mg, 0,02263 mmol) s-a adăugat TFA (100 µL, 1,298 mmol) şi DCM (400 µL) (soluţie preparată anterior de 1: 4 TFA-DCM) şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de aproximativ 1 h. LCMS arată completarea reacţiei. Solvenţii au fost îndepărtaţi şi dizolvaţi în DMSO (1 mL) şi reziduul a fost purificat prin metoda HPLC-MS cu fază reversă utilizând o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 15,0 minute (fază mobilă A = H2O (5 mM HCl); fază mobilă B = CH3CN) pentru a da 21-amino-6,19-bis(trifluormetil)-17,23-dioxa-3,4,22-triazatetraciclo[16.3.1.12,5.011,16]tricosa-1(22),2,4,11(16),12,14,18,20-octaen-6-ol (Sare clorhidrat) (2,6 mg, 22%) ca un solid amorf alb mat. 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,49 (s, 1H), 7,35 - 7,33 (m, 1H), 7,21 - 7,14 (m, 3H), 5,36 (s, 2H), 3,63 (s, 1H), 3,06 - 2,89 (m, 2H), 2,29 (m, 1H), 2,22 - 2,14 (m, 1H), 2,13 - 2,05 (m, 2H), 1,92 (d, J= 5,2 Hz, 2H) ppm. ESI-MS m/z calc. 474,11267, găsit 475,13 (M+1)+; Timp retenţie: 2,76 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 4,5 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Exemplul 14: Preparare (15R)-20-amino-8-fluor-15-metil-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.17,11]tricosa-1(21),2,4,7(22),8,10,17,19-octaen-6-ol (diastereomer pereche), Compus 18
Etapa 1: acid 3-[bis(terţ-Butoxicarbonil)amino]-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic
La o soluţie de metil 3-[bis(terţ-butoxicarbonil)amino]-6-brom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (500 mg, 1,001 mmol) în DMSO (2 mL) s-a adăugat (2R)-pent-4-en-2-ol (160 µL, 1,555 mmol), carbonat de cesiu (504 mg, 1,547 mmol) şi iodcupru (47 mg, 0,2468 mmol) şi amestecul de reacţie a fost încălzit la 100 °C timp de 3 h. Amestecul de reacţie a fost răcit până la RT şi turnat pe gheaţă spartă şi extras cu etil acetat şi spălat cu soluţie salină. Straturile organice au fost separate, uscate peste sulfat de sodiu, şi evaporate. Reziduul maron rezultat a fost purificat prin cromatografie pe silicagel utilizând 100% hexani până la 30% EtOAc-hexani pentru a da 3-[bis(terţ-butoxicarbonil)amino]-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic acid (64 mg, 26%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 10,17 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 5,73 (ddt, J = 17,2, 10,2, 7,1 Hz, 1H), 5,20 (p, J = 6,4 Hz, 1H), 5,17 - 5,07 (m, 2H), 2,48 (dt, J = 13,5, 6,6 Hz, 1H), 2,37 (dt, J= 14,1, 6,9 Hz, 1H), 1,45 (d, J = 3,0 Hz, 18H), 1,34 (d, J= 6,3 Hz, 3H) ppm. ESI-MS m/z calc. 490,1927, găsit 391,2 (M-Boc)+. Timp retenţie: 0,5 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 30 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: terţ-Butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-2-[5-[2,2,2-trifluor-1-(2-fluor-5-iodo-fenil)-1-hidroxi-Etil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La o soluţie preîncălzită la 50 °C, sub agitare, de 3-[bis(terţ-butoxicarbonil)amino]-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluorometil)piridin-2-carboxilic (120 mg, 0,2447 mmol) şi 2,2,2-trifluoro-1-(2-fluoro-5-iod-fenil)etanonă (121 mg, 0,3805 mmol) în DMF (2 mL) s-au adăugat simultan (izocianoimino)trifenilfosforan (113 mg, 0,3738 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei peste noapte, apoi a fost diluat cu EtOAc (50 mL), spălat consecutiv cu apă şi saramură, apoi uscat peste sulfat de sodiu şi filtrat. Filtratul a fost concentrat până la uscare. Reziduul maron rezultat a fost purificat prin cromatografie pe coloană de silicagel folosind 100% hexani până la 50% EtOAc-hexani pentru a da un ulei vâscos maron deschis, terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-2-[5-[2,2,2-trifluor-1-(2-fluor-5-iodo-fenil)-1-hidroxi-etil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (103 mg, 51%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 8,17 (d, J= 2,2 Hz, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,76 (ddd, J= 8,6, 4,6, 2,2 Hz, 1H), 6,83 (ddd, J = 10,4, 8,7, 1,2 Hz, 1H), 5,79 (ddtd, J = 17,4, 10,9, 7,1, 4,0 Hz, 1H), 5,38 (hept, J = 6,2 Hz, 1H), 5,14 - 5,01 (m, 2H), 4,84 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 2,53 (dtd, J = 13,7, 6,7, 2,9 Hz, 1H), 2,42 (dt, J= 13,7, 6,7 Hz, 1H), 1,66 (s, 3H), 1,38 (dd, J= 4,1, 2,1 Hz, 18H) ppm. ESI-MS m/z calc. 832,12036, găsit 733,1 (M-Boc)+. Timp retenţie: 0,79 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 30 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 3: terţ-Butil N-[(15R)-8-fluor-6-hidroxi-15-metil-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.17,11]tricosa-1(21),2,4,7(22),8,10,12,17,19-nonaen-20-il]carbamat (amestec E/Z)
La o soluţie agitată de terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-2-[5-[2,2,2-trifluor-1-(2-fluor-5-iodo-fenil)-1-hidroxi-etil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (100 mg, 0,1201 mmol) în acetonitril (10 mL) s-a adăugat acetat de Paladiu (II) (8 mg, 0,03563 mmol) urmat de tris-o-tolilfosfan (21 mg, 0,06900 mmol) şi trietilamină (60 µL, 0,4305 mmol) şi soluţia a fost barbotată cu N2 timp de 1 min apoi încălzit prin iradiere la microunde la 120 °C timp de 0,5 h. Amestecul a fost răcit până la temperatura camerei apoi diluat cu EtOAc şi spălat cu soluţie saturată apoasă de NH4Cl (1X) şi soluţie salină (1X) apoi uscat peste sulfat de sodiu, filtrat şi concentrat până la un ulei galben. Materialul rezultat a fost dizolvat în DMSO, filtrat şi purificat utilizând o metodă HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Luna C18 (75 × 30 mm, 5 µm dimensiune particulă) comercializată de Phenomenex (pn: 00C-4252-U0-AX), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 15,0 minute (fază mobilă A = H2O (5 mM HCl), fază mobilă B = acetonitril, Rată flux = 50 mL/min, volum injecţie = 950 µL şi temperatură coloană = 25 °C pentru a da un solid galben, terţ-butil N-[(15R)-8-fluor-6-hidroxi-15-metil-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.17,11]tricosa-1(21),2,4,7(22),8,10,12,17,19-nonaen-20-il]carbamat (amestec E/Z) (21 mg, 29%). ESI-MS m/z calc. 604,15564, găsit 605,03 (M+1)+; Timp retenţie: 0,55 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 4: (15R)-20-Amino-8-fluor-15-metil-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.17,11]tricosa-1(21),2,4,7(22),8,10,17,19-octaen-6-ol (diastereomer pereche), Compus 18
Partea 1: La o soluţie de terţ-butil N-[(15R)-8-fluoro-6-hidroxi-15-metil-6,18-bis(trifluorometil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.17,11]tricosa-1(21),2,4,7(22),8,10,12,17,19-nonaen-20-il]carbamat (E/Z într-un balon cu fund rotund echipat cu un amestec de H₂ (20 mg, 0,03309 mmol) în etanol (2 mL) s-a adăugat Pd/C (18 mg de 10 % g/g, 0,01691 mmol)într-un flacon cu fund rotund echipat cu un balon de H2 folosind un adaptor cu 3 căi. Amestecul a fost supus la vid şi umplut din nou cu azot gazos de trei ori, apoi supus vidului. Balonul a fost umplut cu hidrogen gazos, apoi amestecul a fost agitat timp de 15 ore. Amestecul a fost supus la vid şi umplut din nou cu azot gazos de trei ori, apoi diluat cu acetat de etil şi filtrat peste celită. Filtratul a fost concentrat şi uscat sub vid înalt.
Partea 2: Materialul din Etapa 1 a fost dizolvat în TFA (100 µL, 1,298 mmol) şi DCM (400 µL) (soluţie preparată anterior de TFA-DCM 1:4) şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de aproximativ 1 oră. Solvenţii au fost îndepărtaţi şi dizolvaţi în DMSO (1 mL), iar reziduul a fost purificat printr-o metodă HPLC-MS în fază inversă utilizând un gradient dublu de la 30 - 99% fază mobilă B timp de 15,0 minute utilizând o fază mobilă A = H2O (5 mM HCl) şi o fază mobilă B = acetonitril pentru a produce (15R)-20-amino-8-fluoro-15-metil-6,18-bis(trifluorometil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.17,11]tricosa-1(21),2,4,7(22),8,10,17,19-octaen-6-ol (2 mg, 12%) sub formă de amestec diastereomeric. ESI-MS m/z calc. 506,1189, găsit 507,1 (M+1)+; Timp retenţie: 2,93 minute; Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 4,5 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Exemplul 15: Preparare (6R,13S)-17-Amino-13-oxido-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tionia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 19, şi (6R,13R)-17-amino-13-oxido-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tionia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 20
Etapa 1: (6R,13S)-17-Amino-13-oxido-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tionia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 19, şi (6R,13R)-17-amino-13-oxido-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tionia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 20
La o soluţie de (6R)-17-amino-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (56 mg, 0,127 mmol) în EtOAc (1,5 mL) răcită pe baie de gheaţă s-a adăugat 3- acid clorbenzencarboperoxoic (802 µL de 0,11 M, 0,088 mmol) ca o soluţie în EtOAc şi amestecul agitat la 0 °C timp de 15 min. Apoi acid 3-clorbenzencarboperoxoic (227 µL de 0,11 M, 0,025 mmol) ca o soluţie în EtOAc s-a adăugat şi amestecul a fost agitat la 0 °C timp de încă 15 minute. Apoi s-a adăugat mai mult acid 3-clorbenzencarboperoxoic (85 µL de 0,11 M, 0,0094 mmol) ca o soluţie în EtOAc şi amestecul agitat la 0 °C timp de 15 min. Apoi amestecul a fost diluat cu EtOAc (30 mL) şi MeOH (1 mL) şi spălat cu 5% Na2S2O3, 1 M NaHCO3, uscat (MgSO4) şi evaporat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (12 g SiO2, 10-50% din soluţie (10% MeOH în EtOAc) până la hexani timp de 20 min) eluat mai întâi 2,3 mg (4%) material de pornire recuperat (6R)-17-amino-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol. Continuarea eluării a dat (6R,13R)-17-amino-13-oxido-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tionia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (2.6 mg, 4%). Continuarea eluării a dat (6R,13S)-17-amino-13-oxido-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tionia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol şi apoi un amestec de (6R,13S)-17-amino-13-oxido-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tionia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol şi (6R,13R)-17-amino-13-oxido-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tionia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol.
Amestecul de (6R,13S)-17-amino-13-oxido-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tionia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol şi (6R,13R)-17-amino-13-oxido-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tionia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol a fost dizolvat în 1:1 MeOH/acetonitril şi supus la HPLC preparativă prin eluare cu 30-70% acetonitril vs 5 mM HCl în apă la 50 mL/min timp de 14 min printr-o coloană Luna 5 µM C18 100 Å 75 × 30 mm coloană pentru a da primul eluent ca un solid alb (6R,13R)-17-amino-13-oxido-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tionia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (18 mg, 31%): 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 7,82 (s, 1H), 3,80 (td, J = 12,5, 5,1 Hz, 1H), 3,15 (td, J = 12,4, 3,8 Hz, 1H), 2,37 (td, J = 13,0, 11,5, 3,3 Hz, 1H), 2,29 - 2,17 (m, 1H), 2,09 - 1,97 (m, 1H), 1,95 - 1,84 (m, 1H), 1,83 - 1,65 (m, 4H), 1,59 (t, J = 8,6 Hz, 2H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Metanol-d4) δ -60,52, -80,84 ppm; ESI-MS m/z calc. 458,08472, găsit 459,1 (M+1)+; Timp retenţie: 0,94 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C. Continuarea eluării a dat al doilea eluent (6R,13S)-17-amino-13-oxido-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tionia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (19 mg, 33%): 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 7,81 (s, 1H), 3,75 (td, J= 12,7, 4,0 Hz, 1H), 3,28 - 3,17 (m, 1H), 2,48 - 2,27 (m, 3H), 2,25 - 2,11 (m, 1H), 1,72 (dddd, J= 32,5, 20,0, 13,7, 8,0 Hz, 6H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Metanol-d4) δ -60,41, -80,81; ESI-MS m/z calc. 458,08472, găsit 459,0 (M+1)+; Timp retenţie: 1,09 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C.
Etapa 2: Caracterizarea formei solide a Compusului cristalin 19 (formă pură)
Compusul 19 (15 mg) a fost dizolvat în 0,45 mL metanol. Soluţia a fost lăsată temperatura camerei timp de 2 ore. S-au format cuburi cu feţe uşor opace.
Monocristale ale Compusului 19 cristalin (formă pură) au fost crescute prin răcirea lentă a unei soluţii de metanol de la 80 °C la 25 °C. Datele de difracţie cu raze X au fost obţinute la 100 K pe un difractometru Bruker echipat cu radiaţie MoKα (λ=0,71073 Å) şi un detector CCD. Structura a fost rezolvată şi rafinată folosind programe SHELX (Sheldrick, G.M., Acta Cryst., (2008) A64, 112-122). Rezultatele sunt rezumate în Tabelul 10 de mai jos.
Tabelul 10: Explicarea formei monocristaline a Compusului cristalin 19 (formă pură)
Sistem Cristalin Tetragonal Grupare Spaţială P41212 a (Å) 9,8237(4) b (Å) 9,8237(4) c (Å) 37,0548(18) α (°) 90 β (°) 90 γ (°) 90 V (Å3) 3576,0(3) Z/Z' 8/1 Temperatură 100 K
Etapa 3: Caracterizarea formei solide a Compusului cristalin 20 (formă pură)
Compusul 20 (10 mg) a fost dizolvat în 0,3 mL de metanol. Soluţia a fost încălzită, apoi răcită la temperatura camerei timp de 2 ore. S-au obţinut prisme dreptunghiulare transparente.
Monocristalele Compusului 20 (formă pură) au fost crescute prin răcirea lentă a unei soluţii de metanol. Datele de difracţie cu raze X au fost obţinute la 100 K pe un difractometru Bruker echipat cu radiaţie MoKα (λ=0,71073 Å) şi un detector CCD. Structura a fost rezolvată şi rafinată folosind programe SHELX (Sheldrick, G.M., Acta Cryst., (2008) A64, 112-122) şi rezultatele sunt rezumate în Tabelul 11 de mai jos.
Tabelul 11: Explicarea formei monocristaline a Compusului cristalin 20 (formă pură)
Sistem Cristalin Ortorombic Grupare Spaţială P212121 a (Å) 10,6547(4) b (Å) 13,7046(5) c (Å) 25,5376(11) α (°) 90 β (°) 90 γ (°) 90 V (Å3) 3729,0(3) Z/Z' 8/1 Temperatură 100 K
Exemplul 16: (6R)-17-Amino-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-thia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 21
Etapa 1: 1-But-3-enilsulfanilsulfonil-4-metil-benzen
Un amestec de 1-metil-4-sulfidosulfonil-benzen (sare de potasiu) (2000 mg, 8,836 mmol), şi 4-iodobut-1-enă (913 µL, 8,026 mmol) în DMF (20 mL) a fost agitat la 60 °C timp de 30 min, apoi diluat cu eter şi spălat cu apă (2X) şi soluţie salină, uscat (MgSO4) şi evaporat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (0-15% EtOAc în hexani timp de 15 min) pentru a da 1-but-3-enilsulfanilsulfonil-4-metil-benzen (1,516 g, 78%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,87 - 7,78 (m, 2H), 7,35 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 5,68 (ddt, J = 17,0, 10,4, 6,7 Hz, 1H), 5,06 - 4,98 (m, 2H), 3,05 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,46 (s, 3H), 2,40 - 2,29 (m, 2H) ppm. ESI-MS m/z calc. 242,04352, Timp retenţie: 0,6 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-but-3-enilsulfanil-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (57 mg, 0,08750 mmol) în eter (1,15 mL) la -78 °C s-a adăugat n-BuLi (76 µL de 2,5 M, 0,1900 mmol) ca o soluţie în hexani şi amestecul agitat la -78 °C timp de 15 min, apoi o soluţie de 1-but-3-enilsulfanilsulfonil-4-metil-benzen (28 mg, 0,1155 mmol) în eter (285 µL) s-a adăugat în picătură. Amestecul a fost agitat la -78 °C timp de 15 min şi la 0 °C timp de 15 min. Amestecul a fost diluat cu 1 M NH4Cl în apă şi eter apoi partiţionate. Stratul organic a fost separate şi spălat cu 1 M NaHCO3, uscat (MgSO4) şi evaporat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (0-10% EtOAc în hexani timp de 15 min) a dat terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-but-3-enilsulfanil-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (33 mg, 57%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 9,95 (s, 1H), 9,18 (s, 1H), 7,45 - 7,28 (m, 5H), 5,94 - 5,65 (m, 2H), 5,13 - 4,97 (m, 4H), 4,84 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,68 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 3,36 - 3,27 (m, 2H), 2,62 - 2,16 (m, 6H), 1,56 (s, 9H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -63,55, -72,90 ppm. ESI-MS m/z calc. 658,20483, găsit 659,3 (M+1)+; Timp retenţie: 2,09 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 3: terţ-Butil N-[(6R)-6-benziloxi-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-thia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z)
O soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-but-3-enilsulfanil-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (209 mg, 0,3173 mmol) în DCE (15 mL) a fost în picătură adăugat la o soluţie preîncălzită la 80 °C de benziliden-[1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)imidazolidin-2-iliden]-diclor-ruteniu;triciclohexifosfan (40 mg, 0,04712 mmol) în DCE (15 mL) şi amestecul rezultat încălzit la 80 °C timp de 45 min. Apoi solventul a fost evaporat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (0-5% EtOAc în hexani timp de 15 min) pentru a da terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,9,14(18),15-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z) (158 mg, 79%). ESI-MS m/z calc. 630,1735, găsit 631,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,67 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 4: terţ-Butil N-[(6R)-6-benziloxi-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-thia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat
Un amestec de terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,9,14(18),15-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z) (158 mg, 0,2506 mmol) şi Pd/C (50 mg de 10 % g/g, 0,04698 mmol) în EtOAc (800 µL) şi MeOH (800 µL) a fost agitat la temperatura camerei sub 200 psi H2 în vas de oţel inoxidabil sub presiune timp de 23 h. Apoi amestecul a fost filtrat şi filtratul evaporat pentru a da terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat (160 mg, 100%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 9,70 (s, 1H), 9,14 (s, 1H), 7,33 - 7,22 (m, 5H), 4,86 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 4,79 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 3,06 (ddt, J = 13,8, 9,5, 4,8 Hz, 2H), 2,44 (dt, J = 15,8, 8,5 Hz, 1H), 2,27 (dt, J = 14,5, 7,0 Hz, 1H), 2,04 (s, 1H), 1,97 - 1,84 (m, 1H), 1,78 (dq, J = 13,7, 6,7 Hz, 2H), 1,64 (dt, J = 12,8, 6,7 Hz, 1H), 1,59 - 1,51 (m, 13H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -63,64, -74,38 ppm. ESI-MS m/z calc. 632,1892, găsit 633,3 (M+1)+; Timp retenţie: 0,7 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 5: (6R)-17-Amino-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 21
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat (57 mg, 0,090 mmol) în DCM (2 mL) la 0 °C s-a adăugat BCl3 (2 mL de 1 M, 2,00 mmol) ca o soluţie în DCM şi amestecul agitat la temperatura camerei timp de 22 h. Apoi amestecul a fost evaporat, şi reziduul dizolvat în EtOAc (70 mL) şi metanol (0,5 mL) şi spălat cu 1 M NaHCO3, soluţie salină, uscat (MgSO4) şi evaporat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (0-25% EtOAc în hexani timp de 15 min) pentru a da (6R)-17-amino-6,15-bis(trifluormetil)-19-oxa-13-tia-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (61 mg, 62%). 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 7,62 (s, 1H), 3,16 (ddd, J = 13,7, 12,1, 4,2 Hz, 1H), 2,97 (td, J = 13,2, 4,1 Hz, 1H), 2,35 (ddd, J = 14,4, 11,2, 3,3 Hz, 1H), 2,20 (dddt, J = 19,8, 14,3, 10,6, 5,1 Hz, 2H), 1,83 - 1,50 (m, 7H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Metanol-d4) δ -64,96, -80,84 ppm. ESI-MS m/z calc. 442,0898, găsit 443,0 (M+1)+; Timp retenţie: 1,61 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C.
Exemplul 17: (6R)-16-amino-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(17),2,4,13,15-pentaen-6-ol, Compus 22
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-but-3-enilsulfanil-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (96 mg, 0,1506 mmol) în eter (1,8 mL) la -78 °C s-a adăugat n-BuLi (130 µL de 2,5 M, 0,3250 mmol) ca o soluţie în hexani, apoi o soluţie de 1-but-3-enilsulfanilsulfonil-4-metil-benzen (48 mg, 0,1981 mmol) în eter (500 µL) s-a adăugat în picătură. Amestecul a fost agitat la -78 °C timp de 15 min şi la 0 °C timp de 15 min. Amestecul a fost diluat cu 1 M NH4Cl în apă şi eter apoi partiţionat. Stratul organic a fost separate şi spălat cu 1 M NaHCO3, uscată (MgSO4) şi evaporat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (0-5% EtOAc în hexani timp de 15 min) pentru a da terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-but-3-enilsulfanil-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (42 mg, 43%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 9,94 (s, 1H), 9,17 (s, 1H), 7,40 - 7,28 (m, 5H), 6,09 - 5,76 (m, 2H), 5,25 (dd, J = 17,0, 1,5 Hz, 1H), 5,22 - 5,18 (m, 1H), 5,07 (dd, J = 17,2, 1,7 Hz, 1H), 5,01 (dd, J = 10,2, 1,6 Hz, 1H), 4,83 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 4,68 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 3,31 (td, J = 7,1, 2,8 Hz, 2H), 3,21 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,48 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 1,56 (s, 9H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -63,56, -73,16 ppm. ESI-MS m/z calc. 644,1892, găsit 645,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,7 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: terţ-Butil N-[(6R)-6-benziloxi-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(17),2,4,8,13,15-hexaen-16-il]carbamat (amestec E/Z)
O soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluorometil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-but-3-enilsulfanil-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat (140 mg, 0,2172 mmol) în toluen (10 mL) a fost adăugat prin picurare la o soluţie preîncălzită la 120 °C de 1,3-bis(o-tolil)-4,5-dihidroimidazol;dicloro-[(2-izopropoxifenil)metilen]ruteniu (19 mg, 0,03330 mmol) în toluen (10 mL) şi amestecul a fost încălzit la 120 °C timp de 45 de minute. Apoi s-a adăugat mai mult 1,3-bis(o-tolil)-4,5-dihidroimidazol;dicloro-[(2-izopropoxifenil)metilen]ruteniu (12 mg, 0,02103 mmol) şi încălzirea a continuat la 120 °C timp de 55 de minute, iar acest proces a fost efectuat încă o dată cu precizie. Apoi s-a adăugat mai mult 1,3-bis(o-tolil)-4,5-dihidroimidazol;dicloro-[(2-izopropoxifenil)metilen]ruteniu (2,7 mg, 0,004733 mmol) -tolil)-4,5-dihidroimidazol şi s-a continuat încălzirea la 120 °C timp de 60 de minute, iar acest proces a fost efectuat de încă două ori cu precizie. Solventul a fost evaporat, iar reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (12 g SiO2), 0-30% dintr-o soluţie de 10% EtOAc în hexani din 100% hexani pe parcursul a 20 de minute) pentru a furniza terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-6,14-bis(trifluorometil)-18-oxa-12-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(16),2,4,8,13(17),14-hexaen-16-il]carbamat (amestec E/Z) (20 mg, 13%). ESI-MS m./z calculat 616,1579, găsit 617,1 (M+1)+Timp de retenţie: 0,62 minute. Puritatea finală a fost determinată prin UPLC cu fază inversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 coloană (30 × 2,1 mm, particulă de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349) şi un gradient dublu rulat de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minut. Faza mobilă A = H2O2 (0,05 % CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum de injecţie = 1,5 µL şi temperatura coloanei = 60 °C.
Etapa 3: terţ-Butil N-[(6R)-6-benziloxi-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(17),2,4,13,15-pentaen-16-il]carbamat
Un amestec de terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(16),2,4,8,13(17),14-hexaen-16-il]carbamat (amestec E/Z) (24 mg, 0,03309 mmol), şi paladiu pe cărbune (11 mg de 10 % g/g, 0,01034 mmol) în EtOAc (300 µL) şi MeOH (300 µL) a fost agitat la temperatura camerei sub 200 psi H2 timp de 40 h, filtrată şi solventul evaporat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (0-30% de o soluţie de 10% EtOAc în hexani de la 100% hexani timp de 18 min) pentru a da terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(16),2,4,13(17),14-pentaen-16-il]carbamat (16 mg, 78%). ESI-MS m/z calc. 618,1735, găsit 619,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,64 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 4: (6R)-16-Amino-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(17),2,4,13,15-pentaen-6-ol, Compus 22
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(16),2,4,13(17),14-pentaen-16-il]carbamat (16 mg, 0,02587 mmol) în DCM (160 µL) la 0 °C s-a adăugat BCl3 (520 µL de 1 M, 0,5200 mmol) ca o soluţie în DCM şi amestecul agitat la temperatura camerei timp de 24 h. Apoi amestecul a fost evaporat şi reziduul dizolvat în EtOAc (20 mL) şi metanol (2 mL) şi spălat cu 1 M NaHCO3, soluţie salină, uscată (MgSO4) şi evaporat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (5-25% EtOAc în hexani timp de 15 min) pentru a da (6R)-16-amino-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(17),2,4,13,15-pentaen-6-ol (4,5 mg, 41%). 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 7,47 (s, 1H), 3,05 (td, J = 13,1, 4,3 Hz, 1H), 2,87 (td, J = 13,6, 13,1, 4,5 Hz, 1H), 2,25 - 2,00 (m, 3H), 1,91 - 1,84 (m, 1H), 1,79 (dq, J = 10,9, 6,3, 5,9 Hz, 2H), 1,50 (p, J = 5,5 Hz, 2H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Metanol-d4) δ -64,87, -80,28 ppm. ESI-MS m/z calc. 428,07416, găsit 429,0 (M+1)+; Timp retenţie: 1,49 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C.
Exemplul 18: Preparare (6R)-16-amino-12-oxido-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12-tionia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(17),2,4,13,15-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 23, şi (6R)-16-amino-12-oxido-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12-tionia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(17),2,4,13,15-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 24
Etapa 1: (6R)-16-Amino-12-oxido-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12-tionia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(17),2,4,13,15-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 23, şi (6R)-16-amino-12-oxido-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12-tionia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(17),2,4,13,15-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 24
La o soluţie de (6R)-16-amino-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12-tia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(17),2,4,13,15-pentaen-6-ol (3,7 mg, 0,0086 mmol) în EtOAc (222,0 µL) răcită pe baie de gheaţă s-a adăugat acid 3-clorbenzencarboperoxoic (44 µL de 0,11 M, 0,0048 mmol) ca o soluţie în EtOAc şi amestecul agitat la 0 °C timp de 15 min. Apoi acid 3-clorbenzencarboperoxoic (20 µL de 0,11 M, 0,0022 mmol) ca o soluţie în EtOAc s-a adăugat şi amestecul agitat la 0 °C timp de încă 15 minute. Apoi s-a adăugat mai mult acid 3-clorbenzencarboperoxoic (8 µL de 0,11 M, 0,00088 mmol) ca o soluţie în EtOAc cu amestecul agitat la 0 °C timp de 15 min. Apoi amestecul a fost diluat cu EtOAc (30 mL) şi MeOH (1 mL) şi spălat cu 5% Na2S2O3, 1 M NaHCO3, uscat (MgSO4) şi evaporat. Reziduul de amestec a fost dizolvat în 1:1 MeOH/acetonitril şi supus la HPLC preparativă prin eluare cu 30 - 99% acetonitril vs 5 mM HCl în apă la 50 mL/min timp de 14 min printr-o coloană Luna 5 µM C18 100 Å 75X30 mm pentru a da primul izomer prin eluare ca un solid alb (6R)-16-amino-12-oxido-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12-tionia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(17),2,4,13,15-pentaen-6-ol (enantiomer 1) (2 mg, 52%). 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 7,77 (s, 1H), 3,83 (ddd, J = 13,1, 11,3, 5,5 Hz, 1H), 3,06 (ddd, J = 13,2, 11,1, 3,8 Hz, 1H), 2,38 (dt, J = 15,3, 7,8 Hz, 2H), 2,14 - 2,04 (m, 1H), 2,01 - 1,87 (m, 3H), 1,85 - 1,67 (m, 2H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Metanol-d4) δ -60,67, -80,30 ppm. ESI-MS m/z calc. 444,0691, găsit 445,0 (M+1)+; Timp retenţie: 1,0 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C.
Continuarea eluării a dat un solid alb (6R)-16-amino-12-oxido-6,14-bis(trifluormetil)-18-oxa-12-tionia-3,4,17-triazatriciclo[11.3.1.12,5]octadeca-1(17),2,4,13,15-pentaen-6-ol (enantiomer 2) (1,6 mg, 42%). 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 7,76 (s, 1H), 3,64 (td, J = 12,5, 5,0 Hz, 1H), 3,22 (dd, J = 13,1, 3,8 Hz, 1H), 2,43 (dp, J = 9,1, 6,4, 4,3 Hz, 1H), 2,28 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,09 - 1,87 (m, 2H), 1,75 (ddt, J = 34,2, 7,8, 3,7 Hz, 3H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Metanol-d4) δ -60,71, -80,20 ppm. ESI-MS m/z calc. 444,0691, găsit 445,0 (M+1)+; Timp retenţie: 0,81 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C.
Exemplul 19: Preparare (6R,12R)-17-amino-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-10-onă (sare clorhidrat), Compus 25, şi (6R,12R)-17-amino-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-9-onă (sare clorhidrat), Compus 26
Etapa 1: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-9-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat şi terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-10-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec de diastereomeri regiozomerici)
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9, 14, 16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (190 mg, 0,2607 mmol) în THF (3 mL) la 0 °C s-a adăugat în picătură complex dimetilsulfură de bor (200 µL de 2 M, 0,4000 mmol) şi amestecul rezultat menţinut sub agitare timp de 15 min la 0 °C. Reacţia a fost lăsată la încălzit la temperatura camerei şi agitată timp de 1 h. S a adăugat complex dimetilsulfură de bor suplimentar (200 µL de 2 M, 0,4000 mmol) şi agitat la temperatura camerei timp de încă 30 minute. Răcită reacţia până la 0 °C înainte de stingere cu soluţie apoasă de NaOH (1,5 mL de 1 M, 1,500 mmol) urmat de adiţie de hidrogen peroxid (600 µL de 30 % w/v, 5,292 mmol). Amestecul rezultat agitat timp de 30 min la temperatura camerei apoi amestecul a fost extras cu etil acetat (2 × 80 mL). Straturile organice au fost combinate, spălate cu soluţie salină (80 mL), uscate peste sulfat de sodiu, filtrate şi concentrate. Reziduul brut a fost apoi purificat prin cromatografie pe gel de silice (80 gram coloană) utilizând un gradient de la 100% hexani până la 100% etil acetat pentru a colecta ca amestec ~1:1 neseparabil de diastereoizomeri regioizomerici, terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-9-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat şi terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-10-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec de diastereoizomeri regioizomerici) (128 mg, 66%). ESI-MS m/z calc. 746,275, găsit 747,4 (M+1)+; Timp retenţie: 1,89 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 30 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-9-oxo-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat şi terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-10-oxo-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
La o soluţie de amestec de diastereoizomeri regioizomerici ~1:1, terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-9-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat şi terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-10-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec de diastereoizomeri regioizomerici) (106 mg, 0,142 mmol) în diclormetan (2 mL) s-a adăugat Dess-Martin Periodinan (92 mg, 0,2169 mmol) la 0 °C şi amestecul a fost agitat timp de 1 h cu menţinerea reacţiei la încălzire la temperatura camerei. Reacţia a fost diluat cu eter (10 mL) şi filtrată prin Celite. Filtratul a fost spălată cu soluţie saturată apoasă de bicarbonat de sodiu şi cu soluţie salină, uscat peste sulfat de sodiu, filtrat şi concentrat. Materialul rezultat a fost dizolvat în 2 mL de DMSO, filtrată şi filtratul a fost purificat prin HPLC cu fază reversă utilizând un gradient de la 50% până la 99% acetonitril în apă (+5 mM HCl) pentru a da amestec de regioizomeri neseparabili ~1:1, terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-9-oxo-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat şi terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-10-oxo-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (44 mg, 42%). ESI-MS m/z calc. 744,2594, găsit 645,2 (M-Boc+1)+; Timp retenţie: 2,05 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 30 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 3: (6R,12R)-17-Amino-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-10-onă, Compus 25, şi (6R,12R)-17-amino-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-9-onă, Compus 26
La o soluţie de amestec de regioizomeri ~1:1, terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-9-oxo-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat şi terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-10-oxo-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (34 mg, 0,0457 mmol) în etanol (5 mL) s-a adăugat Pd/C (116 mg de 10 % g/g, 0,1090 mmol) într-un flacon echipat cu un balon de hidrogen utilizând un adaptor cu 3 intrări. Materialul a fost supus la vid şi alimentat cu azot gaz de trei ori apoi supus la vid. Balonul a fost umplut cu hidrogen gaz apoi amestecul agitat timp de 15 h. Vasul a fost supus la vid şi alimentat cu azot gaz de trei ori apoi diluat cu etil acetat şi filtrat peste celită. Filtratul a fost concentrat şi uscat sub presiune redusă. Reziduul rezultat a fost dizolvat în TFA (1,5 mL, 19,47 mmol) şi diclormetan (4,5 mL) (soluţie preparată anterior de 1:3 TFA/diclormetan) şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de aproximativ 1 h. Solvenţii au fost îndepărtată prin evaporare de rotaţie şi reziduul a fost dizolvat în DMSO (1 mL) apoi purificat prin HPLC cu fază reversă utilizând un gradient de la 30% până la 99% acetonitril în apă (+5 mM HCl) pentru a da primul regioizomer prin eluare (bazat pe H RMN AB model -O CH (CH3)-CH2-CO) ca (6R,12R)-17-amino-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-10-one (Sare clorhidrat) (2,3 mg, 41%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,61 (s, 1H), 6,92 (dq, J = 16,0, 6,9 Hz, 1H), 6,13 (dq, J = 15,8, 1,7 Hz, 1H), 2,67 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 2,46 (ddd, J = 15,1, 10,2, 5,7 Hz, 1H), 2,13 (ddd, J = 14,7, 10,3, 5,0 Hz, 1H), 1,90 (dd, J = 6,9, 1,6 Hz, 3H), 1,83 (dd, J = 10,4, 4,8 Hz, 2H), 1,71 - 1,42 (m, 2H) ppm. ESI-MS m/z calc. 454,10757, găsit 455,1 (M+1)+; Timp retenţie: 1,34 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C şi ultimul prin eluare regioizomer ca (6R,12R)-17-amino-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-9-onă (Sare clorhidrat) (3,0 mg, 54%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,41 (s, 1H), 6,27 (s, 1H), 5,42 - 5,35 (m, 1H), 2,99 (ddd, J = 18,3, 11,2, 2,1 Hz, 1H), 2,89 - 2,80 (m, 1H), 2,79 - 2,63 (m, 2H), 2,52 (ddd, J = 18,1, 7,2, 2,2 Hz, 1H), 2,35 - 2,26 (m, 1H), 2,13 - 2,01 (m, 1H), 1,99 - 1,89 (m, 1H), 1,42 (d, J = 6,4 Hz, 3H) ppm. ESI-MS m/z calc. 454,10757, găsit 455,0 (M+1)+; Timp retenţie: 1,7 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Exemplul 20: Preparare 20-amino-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 27, 20-amino-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 28, 19-amino-9-metil-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaen-6-ol (diastereomer 1 pereche), Compus 29, şi 19-amino-9-metil-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaen-6-ol (diastereomer 2 pereche), Compus 30
Etapa 1: 2-[1-Benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-5-[6-(3-iodofenoxi)-3-nitro-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol
Reactivul 3-iodfenol (30 mg, 0,1364 mmol) s-a adăugat la un amestec de [6-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-nitro-3-(trifluormetil)-2-piridil] trifluormetansulfonat (69 mg, 0,1061 mmol) şi Cs2CO3 (35 mg, 0,1074 mmol) în DMF (1,4 mL) şi a fost agitat la 0 °C timp de 1 h şi apoi la temperatura camerei timp de 2 h. Amestecul a fost diluat cu eter, spălat cu apă (2X), soluţie salină, uscat (MgSO4) şi evaporat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (12 g SiO2, 0-10% EtOAc în hexani timp de 20 min) pentru a da 2-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-5-[6-(3-iodofenoxi)-3-nitro-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (51 mg, 67%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 8,76 (s, 1H), 7,67 - 7,56 (m, 2H), 7,40 - 7,28 (m, 5H), 7,23 (ddd, J = 8,3, 2,3, 1,0 Hz, 1H), 7,12 (t, J = 8,0 Hz, 1H), 5,71 (ddt, J = 16,7, 10,1, 6,3 Hz, 1H), 5,00 (dd, J = 17,1, 1,6 Hz, 1H), 4,94 (dd, J = 10,3, 1,6 Hz, 1H), 4,77 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 4,61 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 2,55 - 2,25 (m, 3H), 2,24 - 2,11 (m, 1H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -64,07, -73,02 ppm. ESI-MS m/z calc. 720,03046, găsit 721,0 (M+1)+; Timp retenţie: 0,56 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: (9E)-6-(Benziloxi)-20-nitro-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,9,11(22),12,14,17,19-nonaene şi 6-(benziloxi)-9-metiliden-19-nitro-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaenă (amestec de izomeri neseparabili)
Un amestec de 2-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-5-[6-(3-iodofenoxi)-3-nitro-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (126 mg, 0,1749 mmol), paladiu (II) acetat (10 mg, 0,04454 mmol), tris-o-tolilfosfan (27 mg, 0,08871 mmol) şi trietilamină (51 µL, 0,3659 mmol) în acetonitril (6,3 mL) a fost barbotat cu N2 timp de 1 min apoi încălzit la 100 °C timp de 1 h. Amestecul a fost diluat cu eter şi spălat cu 1 M NH4Cl, 1 M NaHCO3, soluţie salină, apoi uscat (MgSO4) şi evaporat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (24 g SiO2, 0-50% soluţie (20% EtOAc în hexani) până la hexani timp de 20 min) pentru a da a 2:1 amestec de izomeri neseparabili, (9E)-6-(benziloxi)-20-nitro-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,9,11(22),12,14,17,19-nonaenă (69 mg, 66% puritate, 44%). ESI-MS m/z calc. 592,11816, găsit 593,1 (M+1)+; Timp retenţie: 0,55 minute şi 6-(benziloxi)-9-metiliden-19-nitro-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaenă (69 mg, 33% puritate, 22%). ESI-MS m/z calc. 592,11816, găsit 593,1 (M+1)+; Timp retenţie: 0,54 minute. Purităţile finale au fost determinate prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 3: 20-Amino-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 27, 20-amino-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 28, 19-amino-9-metil-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaen-6-ol (diastereomer 1 pereche), Compus 29, şi 19-amino-9-metil-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaen-6-ol (diastereomer 2 pereche), Compus 30
Un amestec de izomeri neseparabili 2:1, (9iE)-6-(benziloxi)-20-nitro-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,9,11(22),12,14,17,19-nonaenă (47 mg, 66% puritate, 0,052 mmol) şi 6-(benziloxi)-9-methiliden-19-nitro-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaenă (23 mg, 33% puritate, 0,013 mmol) şi Pd/C (38 mg de 10 % g/g, 0,03571 mmol) în EtOAc (1,3 mL) a fost agitat la temperatura camerei sub 200 psi H2 în vas de oţel inoxidabil sub presiune timp de 16 h. Apoi amestecul a fost filtrat şi filtratul evaporat. Reziduul a fost amestecat cu fier (50 mg, 0,8953 mmol), THF (0,5 mL), EtOH (0,25 mL) şi HCl (125 µL de 4 M, 0,5000 mmol) ca o soluţie în apă la 60 °C timp de 30 min apoi diluat cu EtOAc, filtrat şi filtratul spălat cu 1 M NaHCO3, uscat (MgSO4) şi evaporat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (24 g SiO2, 5-40% soluţie (20% EtOAc în hexani) până la hexani timp de 20 min) pentru a da, prin primă eluare, un amestec neseparabil de 6-(benziloxi)-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-20-amină (30 mg, 92%) şi primul amestec de diastereomer pereche de izomeri ca 6-(benziloxi)-9-metil-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaen-19-amină (diastereomer 1 pereche) într-un raport nedeterminat. Eluarea continuată a dat a doua pereche de izomeri diastereomerici ca 6-(benziloxi)-9-metil-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaen-19-amină (diastereomer 2 pereche) (10 mg, 34%).
Amestecul neseparabil de 6-(benziloxi)-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-20-amină şi prima pereche de izomeri diastereomerici de 6-(benziloxi)-9-metil-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaen-19-amină (diastereomer 1 pereche) a fost dizolvat în TFA (0,3 mL) şi apă (0,015 mL) şi încălzit la 60 °C timp de 1 h, apoi diluat cu EtOAc şi spălat cu 1 M NaHCO3, uscat şi evaporat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (12 g SiO2, 5-40% EtOAc în hexani timp de 20 min) pentru a da primul, 20-amino-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-6-ol racemic, a cărei separare în enantiomeri separaţi este descrisă mai jos. ESI-MS m/z calc. 474,11267, găsit 475,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,71 minute. Eluarea continuată a dat prima pereche de izomeri diastereomerici ca 19-amino-9-metil-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaen-6-ol (diastereomer 1 pereche) (1,4 mg, 6%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,50 (s, 1H), 7,32 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,09 - 7,00 (m, 2H), 5,17 (s, 2H), 3,74 - 3,59 (m, 1H), 2,88 - 2,69 (m, 1H), 2,26 - 1,94 (m, 3H), 1,49 - 1,35 (m, 1H), 1,25 (d, J = 7,0 Hz, 3H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -63,36, -80,78 ppm. ESI-MS m/z calc. 474,11267, găsit 475,1 (M+1)+; Timp retenţie: 1,54 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o Coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C.
Amestecul racemic de 20-amino-6,18-bis(trifluorometil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-6-ol obţinut mai sus a fost dizolvat în acetonitril/MeOH 1:1 şi purificat prin SFC preparativă eluând cu un gradient de 5 mM NH3 în metanol până la CO2 (5-15% timp de 10 minute la 60 mL/min) printr-o coloană AS3 de 21,2 × 250 mm, particulă de 5 µm, furnizând ca prim enantiomer care eluează, 20-amino-6,18-bis(trifluorometil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-6-ol (enantiomer 1) (3,5 mg, 14%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,51 (s, 1H), 7,48 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,31 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,98 (dd, J = 8,1, 2,3 Hz, 1H), 5,45 (s, 2H), 3,71 (s, 1H), 2,82 (ddd, J = 14,1, 6,7, 3,8 Hz, 1H), 2,70 (ddd, J = 13,7, 8,7, 4,0 Hz, 1H), 2,29 (ddd, J = 14,3, 12,6, 5,1 Hz, 1H), 2,07 - 2,03 (m, 1H), 2,00 - 1,92 (m, 1H), 1,86 - 1,66 (m, 3H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -63,64, -78,87 ppm. ESI-MS m/z calc. 474,11267, găsit 475,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,57 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C şi ca al doilea enantiomer pentru eluare, 20-amino-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-6-ol (enantiomer 2) (2,9 mg, 12%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,52 (s, 1H), 7,48 (d, J = 2,0 Hz, 1H), 7,31 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,06 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,02 - 6,95 (m, 1H), 5,45 (s, 2H), 3,69 (d, J = 6,2 Hz, 1H), 2,82 (ddd, J = 14,0, 6,7, 3,8 Hz, 1H), 2,70 (ddd, J = 13,7, 8,7, 4,0 Hz, 1H), 2,29 (td, J = 13,4, 12,9, 5,1 Hz, 1H), 2,08 - 1,91 (m, 3H), 1,87 - 1,64 (m, 2H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -63,64, -78,87 ppm. ESI-MS m/z calc. 474,11267, găsit 475,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,58 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C.
A doua pereche de izomeri diastereomerici descrisă mai sus, 6-(benziloxi)-9-metil-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaen-19-amină (diastereomer 2 pereche) a fost dizolvat în TFA (0,3 mL) şi apă (0,015 mL) şi încălzit la 60 C timp de 1 h, apoi diluat cu EtOAc şi spălat cu 1 M NaHCO3, uscată şi evaporată. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (12 g SiO2, 5-40% EtOAc în hexani timp de 20 min) pentru a da 19-amino-9-metil-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaen-6-ol (diastereomer 2 pereche) (2,6 mg, 10%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,49 (s, 1H), 7,34 (t, J= 2,2 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,07 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,01 (dd, J = 8,1, 2,2 Hz, 1H), 5,16 (s, 2H), 3,54 (s, 1H), 2,93 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 2,25 (t, J = 13,4 Hz, 1H), 2,08 (td, J = 13,3, 4,6 Hz, 1H), 1,98 (dt, J = 13,0, 10,7 Hz, 1H), 1,81 (t, J = 13,2 Hz, 1H), 1,33 (d, J = 7,1 Hz, 3H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -63,34, -77,95 ppm. ESI-MS m/z calc. 474,11267, găsit 475,1 (M+1)+; Timp retenţie: 1,54 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C.
Exemplul 21: Preparare 20-amino-13-fluor-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 31, şi 20-amino-13-fluor-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 32
Etapa 1: 2-[1-Benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-5-[6-(3-fluor-5-iodo-fenoxi)-3-nitro-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol
Reactivul Cs2CO3 (127 mg, 0,3898 mmol) s-a adăugat la un amestec de [6-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-nitro-3-(trifluormetil)-2-piridil] trifluormetansulfonat (230 mg, 0,3536 mmol) şi 3-fluor-5-iodo-fenol (134 mg, 0,565 mmol) în DMF (4 mL) şi a fost agitat la 0 °C timp de 1 h. Amestecul a fost diluat cu eter, spălat cu apă (2X), soluţie salină, uscat (MgSO4) şi evaporat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (12 g SiO2, 0-30% soluţie (20% EtOAc în hexani) până la hexani timp de 15 min) pentru a da 2-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-5-[6-(3-fluor-5-iodo-fenoxi)-3-nitro-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (180 mg, 55%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 8,76 (s, 1H), 7,43 - 7,41 (m, 1H), 7,39 (dd, J = 7,7, 1,6 Hz, 1H), 7,36 - 7,29 (m, 5H), 7,01 (dt, J = 8,7, 2,3 Hz, 1H), 5,73 (ddd, J = 17,0, 10,4, 6.4 Hz, 1H), 5,01 (d, J = 17,4 Hz, 1H), 4,95 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 4,80 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 4,62 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 2,54 - 2,28 (m, 3H), 2,20 (dt, J = 17,3, 7,9 Hz, 1H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -63,97, -73,02, -108,26 ppm. ESI-MS m/z calc. 738,021, găsit 739,0 (M+1)+; Timp retenţie: 0,6 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: 6-(Benziloxi)-13-fluor-20-nitro-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,9,11(22),12,14,17,19-nonaene (amestec E/Z)
Un amestec de 2-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-5-[6-(3-fluor-5-iodo-fenoxi)-3-nitro-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (180 mg, 0,2438 mmol), acetat de paladiu (II) (10 mg, 0,04454 mmol), tris-o-tolilfosfan (27 mg, 0,08871 mmol) şi trietilamină (51 µL, 0,3659 mmol) în acetonitril (6,3 mL) a fost barbotat cu N2 timp de 1 min apoi încălzit până la 100 °C timp de 1 h. Amestecul a fost diluat cu eter şi spălat cu 1 M NH4Cl, 1 M NaHCO3, soluţie salină, apoi uscat (MgSO4) şi evaporat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (24 g SiO2, 0-50% soluţie (20% EtOAc în hexani) până la hexani timp de 20 min) pentru a da 6-(benziloxi)-13-fluor-20-nitro-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,9,11(22),12,14,17,19-nonaene (amestec E/Z) (35 mg, 18%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 8,79 (s, 1H), 7,35 - 7,27 (m, 6H), 6,89 - 6,77 (m, 2H), 6,50 (d, J = 11,5 Hz, 1H), 5,79 - 5,65 (m, 1H), 4,90 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,67 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 2,88 - 2,71 (m, 1H), 2,66 - 2,52 (m, 1H), 2,39 (td, J = 13,5, 3,2 Hz, 1H), 2,34 - 2,14 (m, 1H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -63,53, -63,87, -73,43, -73,64, -110,37, -110,61 ppm. ESI-MS m/z calc. 610,1087, găsit 611,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,55 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 3: 20-Amino-13-fluor-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 31, şi 20-amino-13-fluor-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 32
Partea 1: Un amestec de 6-(benziloxi)-13-fluor-20-nitro-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,9,11(22),12,14,17,19-nonaenă (amestec E/Z) (35 mg, 0,05734 mmol) şi Pd/C (15 mg de 10 % g/g, 0,01410 mmol) în AcOH (400 µL), MeOH (400 µL) şi EtOAc (800 µL) a fost agitat la temperatura camerei sub 200 psi H2 în vas de oţel inoxidabil sub presiune timp de 20 h. Apoi amestecul a fost filtrată şi filtratul evaporat pentru a da 6-(benziloxi)-13-fluor-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-20-amină care a fost preluat direct pentru reacţia următoare. ESI-MS m/z calc. 582,1502, găsit 583,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,58 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Partea 2: 6-(Benziloxi)-13-fluor-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-20-amină a fost dizolvat în TFA (300 µL) şi apă (15 µL) şi încălzit la 60 °C timp de 1 h, apoi diluat cu EtOAc şi spălat cu 1 M NaHCO3, uscat şi evaporat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (12 g SiO2, 5-40% EtOAc în hexani timp de 20 min) pentru a da 20-amino-13-fluor-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-6-ol (2,4 mg, 9%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,53 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 6,79 (dd, J = 9,2, 2,2 Hz, 1H), 6,73 (dd, J = 9,2, 2,3 Hz, 1H), 5,51 (s, 2H), 3,68 (s, 1H), 2,80 (ddd, J = 14,0, 6,9, 3,7 Hz, 1H), 2,69 (ddd, J = 13,8, 8,8, 3,8 Hz, 1H), 2,29 (td, J = 13,3, 5,1 Hz, 1H), 2,05 (d, J = 13,1 Hz, 1H), 2,01 - 1,91 (m, 1H), 1,85 - 1,67 (m, 3H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -63,62, -78,86, -112,30 ppm. ESI-MS m/z calc. 492,10324, găsit 493,1 (M+1)+; Timp retenţie: 1,62 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C.
Partea 3: 20-amino-13-fluor-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-6-ol racemic a fost dizolvat în 1: 1 acetonitril/MeOH şi purificat prin SFC preparativă prin eluare un gradient de 5 mM NH3 în metanol până la CO2 (5-15% timp de 10 min la 60 mL/min) printr-o coloană 21,2 × 250 mm AS3, particule 5 µm, pentru a da primul eluent 20-amino-13-fluor-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-6-ol, (enantiomer 1) (1,7 mg, 5%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,53 (s, 1H), 7,28 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 6,79 (dt, J = 9,3, 2,0 Hz, 1H), 6,73 (dt, J = 9,1, 2,3 Hz, 1H), 5,51 (s, 2H), 3,67 (s, 1H), 2,80 (ddd, J = 14,1, 6,8, 3,7 Hz, 1H), 2,68 (ddd, J = 20,2, 9,7, 5,0 Hz, 1H), 2,29 (ddd, J = 14,1, 12,5, 5,1 Hz, 1H), 2,10 - 2,02 (m, 2H), 2,01 - 1,89 (m, 1H), 1,85 - 1,67 (m, 2H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -63,62, - 78,86, -112,30 ppm; ESI-MS m/z calc. 492,10324, găsit 493,1 (M+1)+; Timp retenţie: 1,61 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C.
Continuarea eluării a dat ca al doilea eluent 20-amino-13-fluor-6,18-bis(trifluormetil)-16,23-dioxa-3,4,21-triazatetraciclo[15.3.1.12,5.111,15]tricosa-1(21),2,4,11(22),12,14,17,19-octaen-6-ol (enantiomer 2) (1,4 mg, 7%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,53 (s, 1H), 7,28 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 6,79 (dt, J = 9,1, 2,0 Hz, 1H), 6,73 (dt, J = 9,2, 2,3 Hz, 1H), 5,51 (s, 2H), 3,63 (s, 1H), 2,80 (ddd, J = 14,0, 6,8, 3,7 Hz, 1H), 2,69 (ddd, J = 13,8, 8,7, 3,8 Hz, 1H), 2,29 (ddd, J = 14,1, 12,4, 5,1 Hz, 1H), 2,11 - 2,02 (m, 2H), 2,01 - 1,89 (m, 1H), 1,85 - 1,66 (m, 2H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -63,62, - 78,87, -112,30 ppm; ESI-MS m/z calc. 492,10324, găsit 493,1 (M+1)+; Timp retenţie: 1,62 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C.
Exemplul 22: Preparare 19-amino-12-fluor-9-metil-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaen-6-ol (diastereomer 1 pereche), Compus 33
Etapa 1: 6-(Benziloxi)-12-fluor-9-metiliden-19-nitro-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaenă
Un amestec de 2-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-5-[6-(3-fluor-5-iodo-fenoxi)-3-nitro-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (180 mg, 0,2438 mmol), acetat de paladiu (II) (10 mg, 0,04454 mmol), tris-o-tolilfosfan (27 mg, 0,08871 mmol) şi trietilamină (51 µL, 0,3659 mmol) în acetonitril (6,3 mL) a fost barbotat cu N2 timp de 1 min apoi încălzit la 100 °C timp de 1 h. Amestecul a fost diluat cu eter şi spălat cu 1 M NH4Cl, 1 M NaHCO3, soluţie salină, apoi uscat (MgSO4) şi evaporat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (24 g SiO2, 0-50% soluţie (20% EtOAc în hexani) până la hexani timp de 20 min) pentru a da 6-(benziloxi)-12-fluor-9-metiliden-19-nitro-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaenă (9,4 mg, 6%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 8,65 (s, 1H), 7,32 - 7,27 (m, 2H), 7,23 (d, J = 15,5 Hz, 4H), 6,84 (dt, J = 8,9, 2,4 Hz, 2H), 5,94 - 5,76 (m, 1H), 5,53 (dt, J = 14,9, 6,7 Hz, 1H), 4,83 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 4,41 (d, J = 11,3 Hz, 1H), 3,37 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 3,11 (dd, J = 14,9, 5,6 Hz, 1H), 2,78 (dd, J = 15,2, 7,9 Hz, 1H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -63,81, -73,39, -110,54 ppm. ESI-MS m/z calc. 610,1087, găsit 611,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,52 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: 19-Amino-12-fluor-9-metil-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaen-6-ol (diastereomer 1 pereche), Compus 33
Partea 1: Un amestec de 6-(benziloxi)-12-fluor-9-methiliden-19-nitro-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaenă (9,4 mg, 0,01540 mmol) şi Pd/C (15 mg de 10 % g/g, 0,01410 mmol) în AcOH (400 µL), MeOH (400 µL) şi EtOAc (800 µL) a fost agitat la temperatura camerei sub 200 psi H2 în vas de oţel inoxidabil sub presiune timp de 20 h. Apoi amestecul a fost filtrat şi filtratul evaporat pentru a da 6-(benziloxi)-12-fluor-9-metil-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaen-19-amină. ESI-MS m/z calc. 582,1502, găsit 583,2 (M+1)+; Timp retenţie: 0,59 minute (fără randament). Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (30 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002349), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 1,0 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,5 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Partea 2: 6-(Benziloxi)-12-fluor-9-metil-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaen-19-amină a fost dizolvat în TFA (300 µL) şi apă (15 µL) şi încălzit la 60 °C timp de 1, apoi diluat cu EtOAc şi spălat cu 1 M NaHCO3, uscat şi evaporat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (12 g SiO2, 5-40% EtOAc în hexani timp de 20 min) pentru a da diastereomer 1 pereche, 19-amino-12-fluor-9-metil-6,17-bis(trifluormetil)-15,22-dioxa-3,4,20-triazatetraciclo[14.3.1.12,5.110,14]docosa-1(20),2,4,10(21),11,13,16,18-octaen-6-ol (1,3 mg, 4%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,50 (s, 1H), 7,13 (d, J = 2,1 Hz, 1H), 6,82 (dt, J = 9,6, 1,9 Hz, 1H), 6,77 (dt, J = 9,1, 2,2 Hz, 1H), 5,20 (s, 2H), 3,44 (s, 1H), 2,95 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 2,25 (t, J = 13,3 Hz, 1H), 2,13 - 1,90 (m, 2H), 1,79 (t, J = 13,3 Hz, 1H), 1,32 (d, J = 7,1 Hz, 3H) ppm; 19F RMN (376 MHz, Cloroform-d) δ -63,31, -78,21, -112,26 ppm. ESI-MS m/z calc. 492,10324, găsit 493,1 (M+1)+; Timp retenţie: 1,83 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C.
Exemplul 23: Preparare (6R)-17-amino-12-izopropil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1) (sare clorhidrat), Compus 34, şi (6R)-17-amino-12-izopropil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2) (sare clorhidrat), Compus 35
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-(1-izopropilbut-3-enoxi)-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (200 mg, 0,2904 mmol) şi 2-metilhex-5-en-3-ol (104 mg, 0,9108 mmol) în toluen (2 mL) s-a adăugat trifenilfosfină (162 mg, 0,6176 mmol). După agitare la temperatura camerei timp de 1 min, s-a adăugat DIAD (120 µL, 0,6095 mmol) şi amestecul agitat la temperatura camerei timp de 30 min. Amestecul de reacţie a fost diluat cu EtOAc apoi spălat cu soluţie saturată apoasă de bicarbonat de sodiu (1X), soluţie saturată apoasă de NH4Cl (1X) şi soluţie salină (1X) apoi uscat pe sulfat de magneziu, filtrat şi concentrat până la ulei galben care a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând un gradient de 0% până la 50% EtOAc în hexani pentru a da un amestec diastereomeric şi sirop slab gălbui, terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-(1-izopropilbut-3-enoxi)-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (168 mg, 74%). ESI-MS m/z calc. 784,3271, găsit 785,3 (M+1)+; Timp retenţie: 2,23 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: terţ-Butil N-[(6R)-6-benziloxi-12-izopropil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z)
La o soluţie degazată de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-(1-izopropilbut-3-enoxi)-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (164 mg, 0,2090 mmol) în DCE (100 mL) s-a adăugat diclor[1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)-2-imidazolidiniliden][[5-[(dimetilamino)sulfonil]-2-(1-metiletoxi-O)fenil]metilene-C]ruteniu(II) (catalizator Zhan-1B, 18 mg, 0,02453 mmol) într-o porţie şi amestecul de reacţie a fost încălzit la 60 °C timp de ~6 h. Reacţia a fost temperată câteva picături de DMSO şi solvenţii au fost îndepărtată prin evaporare de rotaţie. Reziduul maron rezultat a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând un gradient de 0 la 50% EtOAc în hexani pentru a da un amestec de diastereomeri şi un ulei incolor vâscos, terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-12-izopropil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (97 mg, 61%). ESI-MS m/z calc. 756,2958, găsit 757,3 (M+1)+; Timp retenţie: 2,08 minute şi 2,17 (fragment major 657,3 (M-Boc)+. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 3: terţ-Butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R)-6-hidroxi-12-izopropil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-12-izopropil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (97 mg, 0,1282 mmol) în EtOH (5 mL) s-a adăugat Pd/C (46 mg de 10 % g/g, 0,04322 mmol, 50% în greutate apă) în într-un flacon de 250 mL echipat cu un balon de hidrogen utilizând un adaptor cu 3 intrări. Balonul a fost supus la vid şi alimentat cu azot gaz de trei ori apoi din nou supus la vid. Vasul a fost umplut cu hidrogen gaz şi amestecul a fost agitat la temperatura camerei peste noapte. Balonul a fost supus la vid şi alimentat cu azot gaz de trei ori apoi diluat cu etil acetat şi filtrată peste celită. Filtratul a fost concentrat pentru a un ulei incolor vâscos şi un amestec de diastereomeri, terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R)-6-hidroxi-12-izopropil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (85 mg, 99%); ESI-MS m/z calc. 668,26447, găsit 569,2 (M-Boc+1)+; Timp retenţie: 1,62 minute şi Timp retenţie: 1,65 minute (diastereomeri neseparabili). Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 4: (6R)-17-Amino-12-izopropil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1) (sare clorhidrat), Compus 34, şi (6R)-17-amino-12-izopropil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2) (sare clorhidrat), Compus 35
Terţ-Butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R)-6-hidroxi-12-izopropil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (80 mg, 0,1196 mmol) a fost dizolvat într-o soluţie preparată anterior (1:3 TFA/diclormetan) de TFA (250 µL, 3,245 mmol) şi diclormetan (750 µL). Reacţia a fost agitată timp de ~1 h şi solvenţii au fost evaporaţi. Reziduul rezultat a fost dizolvat în 2 mL de MeOH şi purificat prin HPLC cu fază reversă utilizând un gradient de la 40% până la 80% acetonitril în apă (+5 mM HCl) timp de 30,0 minute pentru a da un solid alb mat şi primul enantiomer pentru eluare, (6R)-17-amino-12-izopropil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (sare clorhidrat, enantiomer 1) (18,3 mg, 61%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,77 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 6,35 (s, 2H), 4,59 (dt, J= 5,9, 2,7 Hz, 1H), 2,34 - 2,22 (m, 2H), 2,18 - 2,07 (m, 1H), 2,01 - 1,88 (m, 1H), 1,69 (m, 2H), 1,58 - 1,35 (m, 5H), 0,99 (d, J= 2,7 Hz, 3H), 0,98 (d, J= 2,7 Hz, 3H) ppm; ESI-MS m/z calc. 468,1596, găsit 469,1 (M+1)+; Timp retenţie: 1,74 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 30 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C. Al doilea enantiomer pentru eluare, ca un solid alb mat, a fost (6R)-17-amino-12-izopropil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (sare clorhidrat, enantiomer 2) (19,0 mg, 63%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,77 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 6,35 (s, 2H), 4,60 - 4,39 (m, 1H), 2,34 - 2,24 (m, 1H), 2,18 (d, J= 8,6 Hz, 1H), 2,14 - 2,04 (m, 1H), 1,99 - 1,89 (m, 1H), 1,63 (s, 3H), 1,42 (d, J= 23,7 Hz, 4H), 1,00 (d, J= 2,5 Hz, 3H), 0,98 (d, J= 2,4 Hz, 3H) ppm; ESI-MS m/z calc. 468,1596, găsit 469,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,79 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 30 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = apă (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Exemplul 24: Preparare (6R,12R)-17-amino-12-(hidroximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 36
Etapa 1: (2S)-1-Benziloxipent-4-en-2-ol
La o soluţie de brom(vinil)magneziu (37 mL de 1 M, 37,000 mmol) s-a adăugat bromură de cupru (350 mg, 2,4399 mmol) la 0 °C, apoi amestecul negru a fost agitat la - 78 °C. După 5 min, o soluţie de (2S)-2-(benziloximetil)oxiran (2 g, 12,180 mmol) în THF (20 mL) s-a adăugat în picătură timp de 30 min la -78 °C. Apoi amestecul negru a fost agitat la -78 °C timp de 30 min. Apoi metanol (5 mL) s-a adăugat la -78 °C, urmat de soluţie apoasă de acid clorhidric (2M, 24 mL) şi apoi amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 5 min. MTBE (40 mL) a fost apoi adăugat, stratul apos a fost separate şi extras cu MTBE (2 × 20 mL). Straturile organice au fost spălate cu soluţie apoasă de acid clorhidric (1M, 40 mL), apă (40 mL), soluţie apoasă de tiosulfat de sodiu (10%, 40 mL) şi din nou cu apă (40 mL). Straturile organice au fost uscate peste sulfat de sodiu şi concentrate sub vid pentru a da (2S)-1-benziloxipent-4-en-2-ol (2,46 g, 102%) brut ca un ulei galben. ESI-MS m/z calc. 192,11504, găsit 193,0 (M+1)+; Timp retenţie: 1,92 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18, 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 3 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 ml/min.
Etapa 2: terţ-Butil N-[6-[(1R)-1-(benziloximetil)but-3-enoxi]-2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
O soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1,2 g, 1,7426 mmol) şi (2S)-1-benziloxipent-4-en-2-ol (1,42 g, 7,3861 mmol) în toluen (12 mL) a fost tratat cu trifenilfosfină (1,35 g, 5,1471 mmol) urmat de DIAD (1,0815 g, 1,03 mL, 5,3485 mmol) la tc. Soluţia galbenă a fost agitată la temperatura camerei peste noapte. Suspensia galbenă a fost concentrată sub vid, apoi uscată pe silice cu DCM. Purificarea prin cromatografie peste 120 g silica (1 - 30% EtOAc/heptani) a dat terţ-butil N-[6-[(1R)-1-(benziloximetil)but-3-enoxi]-2-[5-[1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1,5 g, 99%) ca un ulei galben. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,85 (s, 1H), 7,41 - 7,24 (m, 10H), 5,78 (m, 2H), 5,61 - 5,52 (m, 1H), 5,14 - 4,95 (m, 4H),4,80 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 4,66 - 4,51 (m, 3H), 3,80 - 3,64 (m, 2H), 2,64 - 2,16 (m, 6H), 1,43 (d, J = 2,3 Hz, 18H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -64,05 (s, 3F), -73,04 (s, 3F) ppm.
Etapa 3: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-(benziloximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,9,14(18),15-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z)
Azot a fost barbotat printr-o soluţie de terţ-butil N-[6-[(1R)-1-(benziloximetil)but-3-enoxi]-2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (200 mg, 0,2304 mmol) în DCE (62 mL) timp de 30 min. Catalizator Zhan-1B (18 mg, 0,0245 mmol) a fost apoi adăugat la tc., şi azot a fost barbotat din nou timp de 5 min. Soluţia galben deschis a fost agitată la 60 °C (baie de ulei preîncălzită) timp de 2,5 ore. Soluţia maron a fost răcită la temperatura camerei, apoi s-a adăugat DMSO (~5 picături) pentru a stinge catalizatorul. Solventul a fost îndepărtat sub vid, iar reziduul a fost compactat uscat pe silice cu DCM. Produsul a fost purificat prin cromatografie pe o coloană de silice de 40 g (1 - 30% EtOAc/heptani) pentru a da terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-(benziloximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,9,14(18),15-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (134 mg, 46%) ca un ulei galben pal. ESI-MS m/z calc. 834,30634, Timp retenţie: 4,54 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 4: terţ-Butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R,12R)-6-hidroxi-12-(hidroximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat
Paladiu pe cărbune (280 mg, 10 % g/g, 0,2631 mmol) s-a adăugat la o soluţie degazată de terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-(benziloximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,9,14(18),15-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (880 mg, 0,8296 mmol) în metanol (40 mL) la tc. Suspensia neagră a fost degazat cu azot timp de 5 min, apoi hidrogen a fost barbotat prin suspensie timp de 5 min. Apoi amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 3 zile sub atmosferă de hidrogen. Suspensia neagră fost filtrată prin Celite cu DCM, şi concentrată sub vid pentru a da terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R,12R)-6-hidroxi-12-(hidroximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat brut (630 mg, 87%) ca un solid alb. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,73 (s, 3F), -80,72 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 656,2281, găsit 501,0 (M-155)+; Timp retenţie: 3,47 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 5: (6R,12R)-17-Amino-12-(hidroximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 36
terţ-Butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R,12R)-6-hidroxi-12-(hidroximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat (630 mg, 0,7196 mmol) a fost dizolvat într-o soluţie de acid clorhidric în 1,4-dioxan (4 mL de 4 M, 16,000 mmol) la tc. Soluţia a fost agitată la temperatura camerei peste noapte. Solventul a fost evaporat sub vid şi reziduul uleios oranj a fost purificat prin cromatografie cu fază reversă peste coloană 50 g C18 (5-80% acetonitril/0,1% acid formic în apă) pentru a da (6R,12R)-17-amino-12-(hidroximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (199 mg, 59%) ca un solid galben pal. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,77 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 6,38 (br s, 2H), 4,68 (t, J = 5,3 Hz, 1H), 4,65 - 4,57 (m, 1H), 3,68 - 3,56 (m, 2H), 2,28 - 2,05 (m, 3H), 1,69 - 1,30 (m, 7H) ppm. 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,23 (s, 3F), -79,01 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 456,12323, găsit 457,1 (M+1)+; Timp retenţie: 2,91 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Exemplul 25: Preparare (6R,12S)-17-amino-12-(hidroximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 37
Etapa 1: (2R)-1-Benziloxipent-4-en-2-ol
La o soluţie de brom(vinil)magneziu în THF (92 mL de 1 M, 92,000 mmol) s-a adăugat bromură de cupru (870 mg, 6,0648 mmol) la 0 °C, apoi amestecul negru a fost agitat la -78 °C. După 5 min, o soluţie de (2R)-2-(benziloximetil)oxiran (5 g, 30,450 mmol) în THF (50 mL) s-a adăugat în picătură cu pâlnie de picurare timp de 15 min la - 78 °C. Apoi amestecul negru a fost agitat la -78 °C timp de 40 min. Apoi metanol (13 mL) s-a adăugat la -78 °C, urmat de soluţie apoasă de acid clorhidric (2M, 80 mL) şi apoi agitat la temperatura camerei timp de 5 min. MTBE (80 mL) a fost apoi adăugat, stratul apos a fost separat şi extras cu MTBE (2 × 40 mL). Stratul organic a fost spălat cu soluţie apoasă de acid clorhidric (1M, 50 mL), apă (50 mL), soluţie apoasă de tiosulfat de sodiu (10%, 50 mL) şi din nou cu apă (50 mL). Stratul organic a fost uscat peste sulfat de sodiu, filtrat şi concentrat sub vid pentru a da ulei galben (6,01 g). Uleiul brut a fost purificat prin cromatografie peste 129 g silice (1-50% MTBE/heptani) pentru a da (2R)-1-benziloxipent-4-en-2-ol (5,89 g, 97%) ca un ulei galben pal. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,42 - 7,28 (m, 5H), 5,84 (ddt, J = 17,2, 10,1, 7,1 Hz, 1H), 5,20 - 5,05 (m, 2H), 4,57 (s, 2H), 3,90 (qd, J = 6,7, 3,5 Hz, 1H), 3,53 (dd, JJ 9,5, 3,4 Hz, 1H), 3,39 (dd, J = 9,5, 7,4 Hz, 1H), 2,35 (br s, 1H), 2,28 (t, J = 6,7 Hz, 2H) ppm. ESI-MS m/z calc. 192,11504, găsit 193,2 (M+1)+; Timp retenţie: 2,51 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 2: terţ-Butil N-[6-[(1S)-1-(benziloximetil)but-3-enoxi]-2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
O soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1 g, 1,4522 mmol) şi (2R)-1-benziloxipent-4-en-2-ol (837 mg, 4,3536 mmol) în toluen (10 mL) a fost tratată cu trifenilfosfină (796 mg, 3,0349 mmol) urmată de DIAD (616,20 mg, 0,6 mL, 3,0474 mmol) la temperatura camerei. Soluţia galbenă a fost agitată la temperatura camerei peste noapte. Suspensia galbenă a fost concentrată sub vid, apoi uscată pe silice cu DCM. Purificarea prin cromatografie peste 129 g silice (0-30% etil acetat în heptani) a dat terţ-butil N-[6-[(1S)-1-(benziloximetil)but-3-enoxi]-2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1,21 g, 96%) ca un ulei galben. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,85 (s, 1H), 7,41 - 7,27 (m, 10H), 5,85 - 5,69 (m, 2H), 5,59 - 5,52 (m, 1H), 5,14 - 4,94 (m, 4H), 4,80 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 4,62 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,60 - 4,51 (m, 2H), 3,78 - 3,64 (m, 2H), 2,65 - 2,14 (m, 6H), 1,43 (s, 18H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -64,05 (s, 3F), -73,00 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 862,33765, găsit 864,1 (M+1)+; Timp retenţie: 4,65 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 3: terţ-Butil N-[(6R,12S)-6-benziloxi-12-(benziloximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,9,14(18),15-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z)
O soluţie agitată de terţ-butil N-[6-[(1S)-1-(benziloximetil)but-3-enoxi]-2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1,21 g, 1,3911 mmol) în 1,2-dicloretan (500 mL) a fost degazat cu barbotare cu azot gaz timp de 20 ore. La soluţie s-a adăugat catalizator Zhan-1B (118 mg, 0,1608 mmol) apoi reacţia a fost încălzită într-o baie de ulei setată la 60 °C timp de 5,5 ore. Odată răcit la temperatura camerei, catalizatorul a fost temperat cu câteva picături de DMSO (aproximativ 5-6 picături) şi reacţia a fost concentrată sub presiune redusă. Reziduul a fost uscat pe silica gel şi purificat prin cromatografie lichidă pe silicagel prin eluare de la 0% până la 30% etil acetat în heptan, pentru a da terţ-butil N-[(6R,12S)-6-benziloxi-12-(benziloximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,9,14(18),15-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z)(543 mg, 45%) ca ulei incolor. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,93 - 7,84 (m, 1H), 7,42 - 7,23 (m, 10H), 5,65 - 5,40 (m, 2H), 5,16 - 4,93 (m, 1H), 4,76 - 4,67 (m, 3H), 4,67 - 4,44 (m, 1H), 3,91 - 3,71 (m, 2H), 3,54 - 3,43 şi 2,83 - 2,70 (m, 1H), 2,65 - 2,08 (m, 5H), 1,53 - 1,38 (m, 18H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,45 până la -63,84 (m, 3F), -73,75 până la -74,24 (m, 3F) ppm. Timp retenţie: 4,51 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic), Flux = 1,2 mL/min.
Etapa 4: terţ-Butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R,12S)-6-hidroxi-12-(hidroximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat
Paladiu pe cărbune (214 mg, 10 % g/g, 0,2011 mmol) s-a adăugat la o soluţie degazată de terţ-butil N-[(6R,12S)-6-benziloxi-12-(benziloximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,9,14(18),15-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (543 mg, 0,6264 mmol) în metanol (25 mL) la temperatura camerei. Suspensia neagră a fost degazată cu azot timp de 5 min, apoi hidrogen a fost barbotat prin suspensie timp de 5 min. Apoi amestecul a fost agitat la temperatura camerei peste noapte sub atmosferă de hidrogen. Suspensia neagră a fost filtrată prin Celite cu DCM, şi concentrată sub vid pentru a da brut terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R,12S)-6-hidroxi-12-(hidroximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat (446 mg, 96%) ca un ulei galben pal. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,88 (s, 1H), 4,92 - 4,83 (m, 1H), 3,96 - 3,82 (m, 2H), 3,60 (br. s, 1H), 2,59 - 2,47 (m, 1H), 2,38 - 2,12 (m, 3H), 2,08 - 1,93 (m, 2H), 1,73 - 1,33 (m, 23H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,78 (s, 3F), -77,56 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 656,2281, găsit (M+)+;501,1 (M-155)+; Timp retenţie: 3,54 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18, 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic), Flux = 1,2 mL/min.
Etapa 5: (6R,12S)-17-Amino-12-(hidroximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 37
La o soluţie 0 °C agitată de terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R,12S)-6-hidroxi-12-(hidroximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat (65 mg, 0,0483 mmol) în 1,4-dioxan (2 mL) s-a adăugat în picătură o soluţie de HCl în 1,4-dioxan (0,5 mL de 4 M, 2,0000 mmol). Baia de răcire apă-gheaţă a fost îndepărtată 2 minute după adiţie şi amestecul a fost agitat la temperatura camerei peste noapte. Apoi, mai multă soluţie de HCl în 1,4-dioxan (1,5 mL de 4 M, 6,0000 mmol) s-a adăugat la temperatura camerei şi agitarea continuată timp de 4 ore. Volatilele au fost îndepărtate prin evaporare sub presiune redusă şi s-a adăugat HCl (2 mL de 4 M, 8,0000 mmol) la temperatura camerei. Amestecul a fost agitat peste noapte cu încălzire blândă la 30 °C. Volatilele au fost îndepărtate prin evaporare sub presiune redusă. Materialul brut a fost solubilizat în diclormetan (3 mL) şi a fost concentrat suplimentar prin evaporare sub presiune redusă. Loturi combinate de (6R,12S)-17-amino-12-(hidroximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol brut au fost purificat prin cromatografie pe coloană cu fază reversă C18 50 g, prin eluare cu un gradient de acetonitril (0 - 50%) în apă conţinând 0,1 g/g % acid formic. Fracţiile pure au fost combinate şi concentrate prin evaporare sub presiune redusă, apoi transferat într-un balon de 25 mL supus uscării prin liofilizare (acetonitril/apă) peste noapte până la izolare finală (6R,12S)-17-amino-12-(hidroximetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (127 mg, 49%) ca un solid galben pal. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,77 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 6,44 - 6,27 (m, 2H), 4,78 - 4,60 (m, 2H), 3,74 - 3,52 (m, 2H), 2,35 - 2,24 (m, 1H), 2,21 - 2,08 (m, 2H), 1,82 - 1,33 (m, 7H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,24 (s, 3F), -76,43 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 456,12323, găsit 457,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,02 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic), Flux = 1,2 mL/min.
Exemplul 26: Preparare (6R,12R)-17-amino-9,10-dideuterio-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 38
Etapa 1: terţ-Butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R,12R)-9,10-dideuterio-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9, 14, 16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (200 mg, 0,2745 mmol) în CD3OD (8 mL) sub azot s-a adăugat 10% paladiu pe cărbune (50 mg, 0,0470 mmol). Azotul a fost înlocuit cu deuteriu gaz prin vid timp de 3 ori. Amestecul a fost agitat la temperatura camerei sub atmosferă de deuteriu (balon) peste noapte. Amestecul a fost filtrat prin pământ de diatomee şi spălat EtOAc şi concentrat pentru a da terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R,12R)-9,10-dideuterio-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (184 mg, 100%) ca un ulei incolor. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,82 (s, 1H), 4,97 - 4,86 (m, 1H), 3,72 - 3,54 (m, 1H), 2,71 - 2,59 (m, 1H), 2,34 - 2,24 (m, 1 H), 2,21 - 2,11 (m, 1H), 2,08 - 1,96 (m, 1H), 1,67 - 1,19 (m, 25H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,99 (s, 3F), -77,58 (s, 3F) ppm.
Etapa 2: (6R,12R)-17-Amino-9,10-dideuterio-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 38
La o soluţie de terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R,12R)-9,10-dideuterio-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (184 mg, 0,2749 mmol) în CH2Cl2 (2 mL) s-a adăugat TFA (2,9600 g, 2 mL, 25,960 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 1,5 h. Amestecul a fost concentrat şi co-evaporat cu EtOAc (3 × 5 mL). Reziduul a fost dizolvat în EtOAc (20 mL), spălat cu NaHCO3 saturat (5 mL) şi uscat cu Na2SO4, filtrat şi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (24 g SiO2, prin eluare 0 la 30% EtOAc/heptani) şi produsul a fost dizolvat în minimum de acetonitril şi apă şi uscat prin congelare peste noapte pentru a da (6R,12R)-17-amino-9,10-dideuterio-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (103 mg, 83%) ca un solid galben. ESI-MS m/z calc. 442,1409, găsit 443,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,63 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,76 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 6,35 (s, 2H), 4,84 - 4,74 (m, 1H), 2,49 - 2,42 (m, 1H), 2,33 - 2,21 (m, 1H), 2,15 - 2,04 (m, 1H), 1,77 - 1,65 (m, 1H), 1,56 - 1,36 (m, 3H), 1,34 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,25 - 1,12 (m, 1H) ppm. 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,50 (s, 3F), -76,38 (br s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 442,14087, găsit 443,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,63 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Exemplul 27: Preparare (6R,12R)-17-amino-11,11,12-trideuterio-12-(trideuteriometil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 39
Etapa 1: (S)-2-(Metil-d3)oxiran-2,3,3-d3
Acid acetic (0,94 mL, 16,41 mmol, 0,021 echiv.) s-a adăugat la o soluţie de (1S,2S)-(+)-[1,2-ciclohexandiamino-N,N'-bis-(3,5-di-terţ-butilsaliciliden)]cobalt(II) ((S,S)-Co(salen) catalizator Jacobsen) (0,943 g, 1,56 mmol) în toluen (25 mL). Soluţia rezultată a fost agitată la temperatura camerei la flux de aer timp de 30 minute până la schimbarea culorii de la oranj-roşu până la maron închis. Soluţia a fost concentrată sub presiune redusă pentru a da un solid maron. 2-(metil-d3)oxiran-2,3,3-d3 (50 g, 781,25 mmol, 1 echiv) racemic s-a adăugat la dizolvarea catalizatorului brut la temperatura camerei şi apoi răcit pe o baie de gheaţă până la 0 °C. Oxid de deuteriu (8,6 mL, 429,69 mmol, 0,55 echiv) s-a adăugat în picătură timp de 10 minute. Amestecul de reacţie a fost lăsat la încălzire până la temperatura camerei şi agitat peste noapte. Distilarea amestecului sub presiune atmosferică a dat (S)-2-(metil-d3)oxiran-2,3,3-d3 (17,23 g, punct fierbere = 31,5-34,5 °C, 34,5% randament) ca un ulei incolor care a fost stocat în congelator.
Etapa 2: (S)-Pent-4-en-1,1,1,2,3,3-d6-2-ol
O soluţie de 1M bromură de vinil magneziu în THF (100 mL, 100 mmol) s-a adăugat în picătură cu menţinerea temperaturii sub -10 °C la un amestec de clorură de cupru(I) (0,20 g, 2 mmol) şi clorură de litiu (0,17 g, 4 mmol) în THF anhidru (40 mL). Amestecul a fost agitat la -5 până la -10 °C timp de 15 minute, şi apoi răcit până la -15 °C. O soluţie de (S)-2-(metil-d3)oxiran-2,3,3-d3 (6,4 g, 100 mmol) în THF anhidru (100 mL) s-a adăugat în picătură cu menţinerea temperaturii sub -5 °C. Amestecul rezultat a fost agitat la -10 °C până la 0 °C timp de 4 ore. S-a adăugat lent clorură de amoniu saturată în oxid de deuteriu (50 mL) până la stingerea reacţiei cu menţinerea temperaturii sub 10 °C. Oxid de deuteriu (50 mL) s-a adăugat şi amestecul a fost agitat pe o baie de gheaţă timp de 30 minute. Straturile au fost separate, şi stratul organic a fost spălat cu clorură de amoniu saturat în oxid de deuteriu (30 mL). Straturile combinate de soluţie apoasă au fost extrase cu dietil eter (3 × 50 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu soluţie salină saturată (50 mL), uscate peste sulfat de sodiu, filtrate şi concentrate prin distilare sub presiune atmosferică pentru a da (S)-pent-4-en-1,1,1,2,3,3-d6-2-ol dorit ca un ulei incolor (Fracţia A: 1,29 g, punct fierbere = 80-100 °C; Fracţia B: 2,27 g, punct fierbere = 100-80 °C; Fracţia C: 0,40 g, punct fierbere = 80-65 °C, 40% randament combinat). 1H RMN a indicat faptul că fracţia A a conţinut 0,25 raport molar de THF, ambele fracţii B şi C au fost fără solvent. Compus Adiţional (S)-2-(metil-d3)oxiran-2,3,3-d3 (2 × 5 g) a fost procesat astfel descris mai sus pentru a da Compus (S)-pent-4-en-1,1,1,2,3,3-d6-2-ol ca un ulei incolor (Fracţia A: 1,46 g, punct fierbere = 75-95 °C; Fracţia B: 4,30 g, punct fierbere = 95-100-75 °C; Fracţia C: 0,83 g, punct fierbere = 80-65 °C, 40% randament combinat). 1H RMN a indicat faptul că fracţia A a conţinut 0,50 raport molar de THF, ambele fracţii B şi C au fost fără solvent.
Etapa 3: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1R)-1,2,2-trideuterio-1-(trideuteriometil)but-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
O soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (6,2 g, 9,04 mmol), trifenilfosfină (2,9 g, 10,9 mmol) şi (S)-pent-4-en-1,1,1,2,3,3-d6-2-ol (1,0 g, 10,9 mmol) în toluen (45,0 mL) agitată sub o atmosferă de azot a fost încălzită până la 45 °C. Diizopropil azodicarboxilat (2,3 mL, 11,8 mmol) s-a adăugat lent timp de 20 minute, cu menţinerea temperaturii interne mai puţin de 55 °C. Amestecul de reacţie a fost răcit până la temperatura camerei şi diluat cu etil acetat (50 mL) şi apă (50 mL). Stratul organic a fost separat, spălat cu apă (50 mL), soluţie salină saturată (50 mL), uscat peste sulfat de sodiu, filtrat şi concentrate sub presiune redusă. Produsul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (120 g SiO2), prin eluare cu un gradient de 0 la 10% etil acetat în hexani pentru a da terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1R)-1,2,2-trideuterio-1-(trideuteriometil)but-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat ca un ulei incolor limpede (5,7 g, 83% randament). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,56 (d, J = 0,7 Hz, 1H), 7,44 - 7,29 (m, 5H), 5,92 - 5,70 (m, 2H), 5,10 (dd, J = 4,5, 1,9 Hz, 1H), 5,06 (dd, J = 4,5, 1,9 Hz, 1H), 5,01 (ddd, J = 9,7, 7,7, 1,9 Hz, 2H), 4,77 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 4,67 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 2,63 - 2,52 (m, 1H), 2,47 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 2,27 (ddt, J = 16,0, 10,4, 6,0 Hz, 2H), 1,28 (d, J = 12,6 Hz, 18H) ppm. 2H RMN (400 MHz, DMSO) δ 5,33 (bs, 1D), 1,28 (s, 6D) ppm. 19F RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ -62,70, -73,26 ppm. ESI-MS m/z calc. 762,33, găsit 785,3 (M+Na)+; Timp retenţie: 14,5 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC cu fază reversă utilizând an Atlantis T3, 3 µm, 2,1 × 50 mm fabricată de Waters (pn: 186003717), şi o rulare cu gradient dual de la 5 - 95% fază mobilă B timp de 14 minute cu a 4 min menţinut la 95% B. Fază mobilă A = H2O (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H). Rată flux = 0,7 mL/min, volum injecţie = 2 µL şi temperatură coloană = 40 °C.
Etapa 4: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-11,11,12-trideuterio-12-(trideuteriometil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z)
Într-un balon cu 3 gâturi cu o baghetă de agitare, un ajutaj de dispersie gaz, un condensator şi un cap de barbotare, terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1R)-1,2,2-trideuterio-1-(trideuteriometil)but-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (5,4 g, 7,079 mmol) în DCE (810 mL, 0,009 M) a fost purjat cu N2 timp de 1 h. Amestecul a fost încălzită până la 75 °C, apoi benziliden-bis(triciclohexilfosfină)diclorruteniu (1,201 g, 1,416 mmol) s-a adăugat ca un solid. Reacţia a fost agitată la 75 °C cu purjare de N2. După 5 ore s-a adăugat adiţional benziliden-bis(triciclohexilfosfină)diclorruteniu (0,45 g, 0,531 mmol) şi amestecul a fost încălzit la 75 °C timp de încă 2 ore. Temperatura internă a fost redusă până la 50 °C, şi s-a adăugat acid 2-sulfanilpiridin-3-carboxilic (1,091 g, 7,033 mmol, 0,993 echiv.) urmat de trietilamină (0,72 g, 7,115 mmol) şi temperatura de reacţie a fost setată până la 45 °C. Materialul a fost menţinut cu agitare peste noapte. Amestecul a fost îndepărtat de la încălzire şi s-a adăugat 13 g silica gel şi agitat timp de 0,5 h la temperatura mediului. Amestecul a fost filtrat peste Celite, spălat cu DCE, şi concentrat sub presiune redusă. La reziduu s-a adăugat DCM/heptan (1:3, 50 mL), urmat de filtrare şi precipitatul insolubil a fost spălat cu heptan. Filtratul a fost concentrat pentru a da materialul brut. Compusul brut a fost dizolvat în DCM/heptan (1:1, 4 vol), şi cromatografiat pe o coloană de 120 g fază silice utilizând un gradient de 0 % până la 5 % EtOAc/hexani timp de 13 min, urmat de un gradient de 5% EtOAc timp de 23 min pentru a da produsul brut ca ulei incolor. Uleiul colectat a fost apoi dizolvat în MeOH (3 vol) şi încărcat într-o coloană C18 50 g cu fază reversă cu eluare utilizând un gradient de 40% până la 100% acetonitril/apă timp de 20 min. Fracţiile pure colectate au fost concentrate şi uscate sub vid peste noapte pentru a da terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-11,11,12-trideuterio-12-(trideuteriometil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) ca o spumă albă (2,21 g, 42,5 %) care a fost utilizată direct în etapa următoare.
Etapa 5: (6R,12R)-17-Amino-11,11,12-trideuterio-12-(trideuteriometil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 39
terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-11,11,12-trideuterio-12-(trideuteriometil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (2,21 g, 3,008 mmol) a fost dizolvat în EtOH (44,2 mL, 0,068 M), şi vidul şi azot a fost ciclizat 3X apoi tratat cu 10 % Pd/C (50% umiditate paladiu) (0,445 g, 4,181 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura mediului sub un balon de hidrogen timp de 23 h. Amestecul a fost supus sub vid şi hidrogen a fost ciclizat 3X, apoi filtrat peste celită, spălat cu etanol şi evaporat sub presiune redusă pentru a da terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R,12R)-11,11,12-trideuterio-6-hidroxi-12-(trideuteriometil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat brut. Spuma albă a fost dizolvată în DCM (17,68 mL, 0,17 M), răcită pe o baie de gheaţă şi tratată cu acid trifluoracetic (5,294 mL, 69,182 mmol) sub N2. Apoi baia de gheaţă a fost îndepărtată şi soluţia galben pal a fost agitată timp de 2 h. Soluţia galbenă a fost diluată cu heptan (10 mL), filtrată, şi filtratul a fost evaporat sub presiune redusă. Materialul brut a fost tratat cu DCM (2,4 ml) într-o baie de apă la 50 °C, apoi soluţia galbenă limpede a fost diluată cu heptan fierbinte (60 °C) (12 ml), agitată în baia de apă caldă şi lăsată să se răcească lent la temperatura ambiantă. Suspensia formată a fost agitată la temperatura ambiantă peste noapte, iar solidul alb a fost colectat şi clătit cu heptan pentru a da prima cantitate de produs. Compusul a fost uscat în etuva cu vid la 40 °C, purjând cu azot peste noapte. Soluţia mamă a fost concentrată şi încărcată pe o coloană C18 de cromatografie cu fază inversă (50 g) eluând cu acetonitril/apă (30 - 80%) timp de 25 de minute. Solidul galben pal obţinut a fost tratat cu DCM/heptan fierbinte (1 mL/5 mL), apoi lăsat să se răcească la temperatura ambiantă peste noapte. Solidul format a fost colectat şi clătit cu heptan pentru a da 0,5 g de produs ca a doua recoltă. Recoltele combinate au fost uscate în cuptorul cu vid la 45 °C sub azot N₂ dând solidul alb-gălbui (6R,12R)-17-amino-11,11,12-trideuterio-12-(trideuteriometil)-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (1,14 g, 84,9%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,76 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 6,35 (s, 2H), 2,29 (t, J= 11,7 Hz, 1H), 2,16 - 2,04 (m, 1H), 1,73 (s, 2H), 1,56 - 1,44 (m, 1H), 1,44 (s, 3H) ppm. ESI-MS m/z calc. 446,166, găsit 447,225 (M+1)+; Timp retenţie: 2,895 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 4,5 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Exemplul 28: Preparare (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,11-diol (diastereomer 1), Compus 40, şi (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,11-diol (diastereomer 2), Compus 41
Etapa 1: Metil (2S)-2-triizopropilsililoxipropanoat
Într-un balon cu fund rotund de 500 mL s-a adăugat o soluţie de metil (2S)-2-hidroxipropanoat (10,702 g, 10 mL, 100,74 mmol) şi imidazol (16,5 g, 242,37 mmol) în DCM (220 mL). Soluţia a fost răcită până la 0 °C, şi clor(triizopropil)silan (22,957 g, 26 mL, 116,69 mmol) s-a adăugat la amestecul de reacţie în picătură timp de 30 minute. Amestecul de reacţie a fost încălzit până la temperatura camerei pe măsură ce gheaţa se topea şi agitat peste noapte. Amestecul de reacţie a fost turnat într-o pâlnie de separare şi spălat cu apă (100 mL), bicarbonat de sodiu saturat (100 mL), soluţie salină (100 mL), 1 N HCl (100 mL) şi soluţie salină (100 mL). Stratul organic a fost uscat pe sulfat de sodiu anhidru şi concentrat sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0 la 5% eter în hexan pentru a da metil (2S)-2-triizopropilsililoxipropanoat (25,4 g, 97%) ca un lichid clar. 1H RMN (500 MHz, Cloroform-d) δ 4,44 (q, J = 6,7, 6,7, 6,7 Hz, 1H), 3,72 (s, 3H), 1,43 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,19 - 0,99 (m, 21H) ppm.
Etapa 2: (2S)-2-Triizpropilsililoxipropanal
Într-o soluţie de metil (2S)-2-triizopropilsililoxipropanoat (1,008 g, 3,8703 mmol) în DCM anhidru (18 mL) s-a adăugat 1,0 M DIBAL-H în toluen (7,8 mL de 1 M, 7,8000 mmol) în picătură la -78 °C. După adiţie, reacţia a fost agitată la aceeaşi temperatură timp de 0,5 h. A fost stinsă cu acetat de etil (4 mL) la aceeaşi temperatură şi reacţia a fost încălzită la 0 °C într-o baie de gheaţă. S-a adăugat o soluţie apoasă saturată de tartrat de sodiu şi potasiu (10 mL). Reacţia a fost agitată peste noapte. Două straturi au fost separate. Stratul apos a fost extras cu DCM (3 × 15 mL). Straturile organice combinate au fost uscate peste sulfat de sodiu anhidru şi concentrate sub vid. Reziduul a fost încărcat direct pe o coloană şi purificat prin cromatografie pe gel de silice folosind 0 până la 10% eter dietilic în hexan pentru a da (2S)-2-triizopropilsililoxipropanal (838 mg, 94%) sub forma unui lichid limpede. 1H RMN (500 MHz, Cloroform-d) δ 9,66 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 4,18 (qd, J = 6,8, 6,8, 6,8, 1,7 Hz, 1H), 1,30 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,17 - 0,97 (m, 21H) ppm.
Etapa 3: (2S)-2-Triizopropilsililoxihex-5-en-3-ol
Într-o soluţie de (2S)-2-triizopropilsililoxipropanal (18,24 g, 79,160 mmol) în DCM anhidru (350 mL) s-a adăugat alil(brom)magneziu în dietil eter (90 mL de 1 M, 90,000 mmol) în picătură la -30 °C. Reacţia a fost agitată la aceeaşi temperatură timp de 45 minute, apoi urcată până la 0 °C şi agitată timp de alte 15 minute. Reacţia a fost temperată cu 10% clorură de amoniu (300 mL). Cele două straturi au fost separate, şi stratul apos a fost extras cu DCM (2 × 250 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu soluţie salină (150 mL), uscate peste sulfat de sodiu sulfat de magneziu anhidru şi concentrate sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0 la 20% eter în hexan pentru a da a 1:1 amestec de diastereomeri, (2S)-2-triizopropilsililoxihex-5-en-3-ol (18 g, 83%) ca un lichid clar. 1H RMN (500 MHz, Cloroform-d) δ 6,01 - 5,75 (m, 1H), 5,21 - 4,99 (m, 2H), 4,00 - 3,82 (m, 1H), 3,75 - 3,37 (m, 1H), 2,53 - 2,03 (m, 3H), 1,28 - 0,90 (m, 24H) ppm.
Etapa 4: [(1S)-2-Benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-triisopropil-silan
O suspensie de NaH (110 mg, 60 % g/g, 2,7503 mmol) în DMF anhidru (10 mL) a fost răcit până la 0 °C. O soluţie de (2S)-2-triizopropilsililoxihex-5-en-3-ol (672 mg, 2,4661 mmol) în DMF anhidru (10 mL) s-a adăugat la amestecul de reacţie în picătură. Amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura camerei timp de 4 ore. Bromometilbenzen (504,00 mg, 0,35 mL, 2,9468 mmol) s-a adăugat la amestecul de reacţie la 0 °C în picătură. Reacţia a fost apoi agitată la temperatura camerei timp de 2 ore. Reacţia a fost turnat timp de 10% clorură de amoniu soluţie apoasă (30 mL) şi extrasă cu dietil eter (3 × 30 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu soluţie salină (3 × 30 mL), uscate peste sulfat de sodiu anhidru magneziu şi concentrate sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0 la 50% DCM în hexan pentru a da a 1:1 amestec de diastereomeri, [(1S)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-triizopropil-silan (957 mg, 100%) ca un lichid clar. 1H RMN (500 MHz, Cloroform-d) δ 7,42 - 7,22 (m, 5H), 6,01 - 5,78 (m, 1H), 5,15 - 4,88 (m, 2H), 4,85 - 4,53 (m, 2H), 4,20 - 3,90 (m, 1H), 3,63 - 3,35 (m, 1H), 2,58 - 2,08 (m, 2H), 1,31 - 1,10 (m, 3H), 1,11 - 0,78 (m, 21H) ppm.
Etapa 5: (2S)-3-Benziloxihex-5-en-2-ol
Într-o soluţie de [(1S)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-triizopropil-silan (14,76 g, 40,704 mmol) în THF anhidru (140 mL) s-a adăugat 1M TBAF în THF (41 mL de 1 M, 41,000 mmol) în picătură la 0 °C. Reacţia a fost lent adusă până la temperatura camerei şi agitată peste noapte. Reacţia a fost concentrată sub vid pentru a îndepărta THF. Reziduul a fost diluat cu etil acetat (400 mL) şi spălat cu apă (100 mL). Stratul organic a fost uscat pe sulfat de sodiu anhidru şi concentrat sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0 la 20% etil acetat în hexan pentru a da un amestec de diastereomeri, (2S)-3-benziloxihex-5-en-2-ol (7,363 g, 88%) ca un lichid clar. 1H RMN (500 MHz, Cloroform-d) δ 7,45 - 7,20 (m, 5H), 5,96 - 5,77 (m, 1H), 5,20 - 4,99 (m, 2H), 4,78 - 4,44 (m, 2H), 3,98 - 3,67 (m, 1H), 3,47 - 3,20 (m, 1H), 2,56 - 1,94 (m, 3H), 1,24 - 1,12 (m, 3H) ppm.
Etapa 6: Metil 6-[(1R)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
Un flacon de reacţie a fost încărcat cu metil 6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (67 mg, 0,2518 mmol), (2S)-3-benziloxihex-5-en-2-ol (71 mg, 0,3442 mmol) şi trifenilfosfină (99 mg, 0,0875 mL, 0,3775 mmol) în THF anhidru (1 mL). DIAD (69,948 mg, 0,067 mL, 0,3459 mmol) s-a adăugat la amestecul de reacţie în picătură la 0 °C. Reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 24 ore. Solventul a fost îndepărtat sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice direct utilizând 0 la 10% etil acetat în hexan pentru a da metil 6-[(1R)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (71 mg, 60%) ca un gel clar. 1H RMN (500 MHz, Cloroform-d) δ 8,73 - 8,46 (m, 1H), 7,43 - 7,16 (m, 5H), 5,98 - 5,72 (m, 1H), 5,72 - 5,50 (m, 1H), 5,19 - 4,93 (m, 2H), 4,73 - 4,61 (m, 1H), 4,61 - 4,54 (m, 1H), 4,12 - 3,91 (m, 3H), 3,84 - 3,61 (m, 1H), 2,54 - 2,26 (m, 2H), 1,47 - 1,35 (m, 3H) ppm. ESI-MS m/z calc. 454,13516, găsit 455,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,96 minute; Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5-100% fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 7: Metil 3-amino-6-[(1R)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
Într-o soluţie de metil 6-[(1R)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (1,255 g, 2,6514 mmol) în acid acetic (15 mL) s-a adăugat fier (740,34 mg, 13,257 mmol) la tc. Reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 3 ore. Amestecul de reacţie a fost diluat cu metanol (15 mL) şi filtrat printr-un pat de celită. Filtratul a fost concentrat sub vid. Reziduul a fost diluat cu etil acetat (50 mL) şi bicarbonat de sodiu saturat (100 mL). Soluţia a fost filtrată printr-un pat de celită. Cele două straturi au fost separate şi stratul apos a fost extras cu etil acetat (2 × 50 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu soluţie salină (50 mL), uscate pe sulfat de sodiu anhidru şi concentrate sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0 la 15% etil acetat în hexan pentru a da metil 3-amino-6-[(1R)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (1,073 g, 93%) ca un gel galben. ESI-MS m/z calc. 424,161, găsit 425,0 (M+1)+; Timp retenţie: 3,89 minute; Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 × 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5-100% fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 8: Metil 6-[(1R)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
Într-o soluţie de metil 3-amino-6-[(1R)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (1,073 g, 2,4776 mmol) şi Boc2O (1,34 g, 6,1398 mmol) în THF anhidru (20 mL) s-a adăugat 1,0 M NaHMDS în THF (5 mL de 1 M, 5,000 mmol) în picătură la -78 °C. Reacţia a fost agitată la aceeaşi temperatură timp de 1 h. Reacţia a fost temperată la rece cu 10% clorură de amoniu (20 mL). Reacţia a fost încălzită până la temperatura camerei şi extrasă cu etil acetat (3 × 30 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu soluţie salină (20 mL), uscate pe sulfat de sodiu anhidru şi concentrate sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0 la 15% etil acetat în hexan pentru a da metil 6-[(1R)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (1,328 g, 100%) ca un gel clar. ESI-MS m/z calc. 524,21344, găsit 525,3 (M+1)+; Timp retenţie: 4,51 minute; Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 × 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5-100% fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 9: acid 6-[(1R)-2-Benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic
Într-o soluţie de metil 6-[(1R)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (1,328 g, 2,4812 mmol) în THF (15 mL) s-a adăugat o soluţie de LiOH (299 mg, 12,485 mmol) în apă (5 mL). Reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 1 h. Reacţia a fost acidulată cu 1 N HCl până la pH 1. Reacţia a fost diluată cu etil acetat (30 mL) şi apă (10 mL). Cele două straturi au fost separate, şi stratul apos a fost extras cu etil acetat (2 × 30 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu soluţie salină (30 mL), uscate pe sulfat de sodiu anhidru şi concentrate sub vid pentru a da 6-[(1R)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic acid (1,067 g, 83%) ca un gel galben pal. ESI-MS m/z calc. 510,19778, găsit 511,2 (M+1)+; Timp retenţie: 4,21 minute; Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 × 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5-100% fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 10: terţ-Butil N-[6-[(1R)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-2-[[[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamoil]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
Într-o soluţie de acid 6-[(1R)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (1,067 g, 2,0483 mmol), (2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enhidrazidă (600 mg, 2,0814 mmol) şi piridină (733,50 mg, 0,75 mL, 9,2731 mmol) în etil acetat (10 mL) s-a adăugat anhidridă 1-propanfosfonică (T3P) (913,99 mg, 1,71 mL de 50 % g/g, 1,4363 mmol) în etil acetat. Reacţia a fost apoi încălzită până la 50 °C şi agitată timp de 1 h. Reacţia a fost diluată cu etil acetat (100 mL) şi spălată cu 10% clorură de amoniu (30 mL) şi soluţie salină (30 mL). Soluţia organică a fost uscată pe sulfat de sodiu anhidru şi concentrată sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0 la 30% etil acetat în hexan pentru a da terţ-butil N-[6-[(1R)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-2-[[[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamoil]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (1,506 g, 92%) ca un solid alb. ESI-MS m/z calc. 780,2958, găsit 781,7 (M+1)+; Timp retenţie: 4,54 minute; Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 × 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5-100% fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 11: terţ-Butil N-[6-[(1R)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[6-[(1R)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-2-[[[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamoil]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (1,506 g, 1,8903 mmol) şi DIEA (742,00 mg, 1 mL, 5,7411 mmol) în acetonitril (25 mL) s-a adăugat clorură de p-toluensulfonil (440 mg, 2,3079 mmol) la 50 °C. Reacţia a fost încălzită până la 70 °C şi agitată timp de 3 ore. Reacţia a fost răcită până la temperatura camerei şi diluată cu etil acetat (100 mL). Soluţia organică a fost spălată cu 10% clorură de amoniu (30 mL) şi soluţie salină (30 mL), uscată pe sulfat de sodiu anhidru şi concentrată sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0 la 5% etil acetat în hexan pentru a da terţ-butil N-[6-[(1R)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (1,278 g, 87%) ca un gel galben. ESI-MS m/z calc. 762,2852, găsit 763,6 (M+1)+; Timp retenţie: 4,79 minute; Merck Millipore Chromolith, SpeedROD C18 (50 × 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5-100% fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril.
Etapa 12: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6,11-dibenziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z)
Un flacon de reacţie a fost încărcat cu terţ-butil N-[6-[(1R)-2-benziloxi-1-metil-pent-4-enoxi]-2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (108 mg, 0,1388 mmol) şi DCE anhidru (20 mL). Amestecul de reacţie a fost purjat cu argon timp de 2 minute. Flaconul a fost etanşat şi încălzit până la 50 °C. S-a adăugat catalizator Zhan -1B (10 mg, 0,0131 mmol) la amestecul de reacţie. Reacţia a fost agitată la 70 °C timp de 2 zile. Reacţia a fost concentrată sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0 la 10% etil acetat în hexan pentru a da terţ-butil N-[(6R,12R)-6,11-dibenziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z) (88 mg, 56%) ca un gel clar. ESI-MS m/z calc. 734,2539, găsit 735,0 (M+1)+; Timp retenţie: 4,77 minute; Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 × 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5-100% fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 13: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6,11-dihidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat
Un flacon de reacţie a fost încărcat cu terţ-butil N-[(6R,12R)-6,11-dibenziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z) (88 mg, 0,0779 mmol) în etanol (5 mL). Apoi 10% Pd/C (50 mg, 10 % g/g, 0,0470 mmol) s-a adăugat la amestecul de reacţie. Reacţia a fost hidrogenată sub 1 atm de hidrogen gaz peste noapte. Catalizatorul a fost îndepărtat prin filtrare printr-un pat de celită. Solventul a fost evaporat sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (0 la 20% etil acetat în hexan) pentru a da primul izomer pentru eluare, terţ-butil N-[(6R,12R)-6,11-dihidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 1) (20 mg, 46%). ESI-MS m/z calc. 556,1757, găsit 557,2 (M+1)+; Timp retenţie: 3,61 minute şi ca al doilea izomer pentru eluare, terţ-butil N-[(6R,12R)-6,11-dihidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 2) (12 mg, 28%). ESI-MS m/z calc. 556,1757, găsit 557,3 (M+1)+; Timp retenţie: 3,65 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 × 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5-100% fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H.
Etapa 14: (6R,12R)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,11-diol (diastereomer 1), Compus 40
Un flacon de microunde a fost încărcat cu terţ-butil N-[(6R,12R)-6,11-dihidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 1) (133 mg, 0,2295 mmol) şi hexafluorizopropanol (5 mL). Flaconul a fost etanşat şi încălzit la 100 °C timp de 2,5 ore în reactor cu microunde. Solventul a fost îndepărtat sub vid. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (0 la 30% etil acetat în hexan) a dat (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaene-6,11-diol (diastereomer 1) (75,8 mg, 71%) ca un ulei galben. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,77 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 6,35 (s, 2H), 4,88 - 4,69 (m, 1H), 4,59 - 4,52 (m, 1H), 4,50 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 2,36 (t, J = 12,5 Hz, 1H), 2,12 - 1,99 (m, 1H), 1,76 - 1,60 (m, 3H), 1,54 - 1,40 (m, 2H), 1,35 - 1,27 (m, 1H), 1,24 (d, J = 6,6 Hz, 3H) ppm. ESI-MS m/z calc. 456,12323, găsit 457,3 (M+1)+; Timp retenţie: 2,17 minute; Metodă LCMS: Waters Cortex 2,7µ C18 (3,0 mm × 50 mm), 55 °C; Flux: 1,2 mL/min; fază mobilă: 100% apă cu 0,1% acid trifluoracetic apoi 100% acetonitril cu 0,1% acid trifluoracetic, gradient de 5% până la 100% B timp de 4 min, cu echilibrare la 100% B timp de 0,5 min, apoi 5% B timp de 1,5 min.
Etapa 15: (6R,12R)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,11-diol (diastereomer 2), Compus 41
Un flacon de microunde a fost încărcat cu terţ-butil N-[(6R,12R)-6,11-dihidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 2) (75 mg, 0,1321 mmol) şi hexafluorizopropanol (5 mL). Reacţia a fost încălzită la 100 °C într-un reactor cu microunde timp de 2,5 ore. Solventul a fost îndepărtat sub vid. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (0 la 30% etil acetat în hexan) a dat (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaene-6,11-diol (diastereomer 2) (39,2 mg, 63%) ca un ulei galben. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,75 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 6,37 (s, 2H), 5,09 - 4,92 (m, 1H), 4,50 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 3,75 - 3,58 (m, 1H), 2,36 - 2,26 (m, 1H), 2,24 - 2,13 (m, 1H), 2,08 - 1,95 (m, 1H), 1,75 - 1,62 (m, 1H), 1,62 - 1,50 (m, 1H), 1,44 - 1,35 (m, 2H), 1,34 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 1,22 - 1,07 (m, 1H) ppm. ESI-MS m/z calc. 456,12323, găsit 457,3 (M+1)+; Timp retenţie: 2,23 minute; Metodă LCMS: Waters Cortex 2.7u C18 (3,0 mm × 50 mm), 55 °C; Flux: 1,2 mL/min; fază mobilă: 100% apă cu 0,1% acid trifluoracetic apoi 100% acetonitril cu 0,1% acid trifluoracetic, gradient de 5% până la 100% B timp de 4 min, cu echilibrare la 100% B timp de 0,5 min, apoi 5% B timp de 1,5 min.
Exemplul 29: Preparare (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,9-diol (diastereomer 1), Compus 42
Etapa 1: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-9-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 1)
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-9-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat şi terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-10-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec de diastereoizomeri regioizomerici) (0,45 g, 0,6027 mmol) în DCM (30 mL) s-a adăugat silica gel (4,5 g, 74,895 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 2 zile. Amestecul a fost concentrată şi purificat prin cromatografie pe gel de silice (80 g SiO2, prin eluare 0 la 10% EtOAc/DCM) de două ori şi cromatografie pe silica gel (80 g SiO2, prin eluare 10% până la 30% EtOAc/heptani) pentru a da a 1:3 amestec de doi izomeri regionali, terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-9-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer minor) şi terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-10-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer major) (215 mg, 55%) ca a semi solid. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,29 - 9,17 (m, 1H), 9,16 - 9,11 (m, 1H), 7,38 - 7,28 (m, 5H), 4,92 - 4,79 (m, 1H), 4,79 - 4,67 (m, 2H), 4,16 - 3,92 (m, 1H), 2,77 (br dd, J = 13,1, 3,8 Hz, 1H), 2,67 - 2,55 (m, 1H), 2,48 - 2,25 (m, 1H), 1,98 - 1,80 (m, 2H), 1,78 - 1,63 (m, 3H), 1,59 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,56 (s, 9H), 1,50 - 1,46 (m, 1H) ppm. 19F RMN pentru produs majoritar (377 MHz, CDCl3) δ -63,88 (s, 3F), -74,11 (s, 3F). 19F RMN pentru produs minoritar (377 MHz, CDCl3) δ -63,86 (s, 3F), -74,07 (s, 3F) ppm; precum şi terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-9-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat pur (diastereomer 1) (175 mg, 45%) ca un ulei incolor. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,17 - 9,08 (m, 2H), 7,37 - 7,28 (m, 5H), 5,07 - 4,96 (m, 1H), 4,79 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,47 (d, J= 10,8 Hz, 1H), 4,40 - 4,29 (m, 1H), 2,69 - 2,56 (m, 1H), 2,30 (dt, J = 14,8, 5,8 Hz, 1H), 2,24 - 2,14 (m, 1H), 2,06 - 1,89 (m, 2H), 1,77 - 1,60 (m, 3H), 1,57 (s, 9H), 1,53 - 1,50 (m, 1H), 1,48 (d, J = 6,1 Hz, 3H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,84 (s, 3F), -73,91 (s, 3F) ppm.
Etapa 2: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6,9-dihidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 1)
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-9-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 1) (60 mg, 0,0928 mmol) în MeOH (5 mL) s-a adăugat 10% paladiu pe cărbune 50% umiditate (30 mg, 0,0141 mmol). Amestecul a fost agitat sub hidrogen (balon) la temperatura camerei peste noapte. Amestecul a fost filtrată prin pământ de diatomee şi spălat cu EtOAc. Filtratul a fost concentrată şi reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (24 g SiO2, prin eluare 10 la 30% EtOAc/CH2Cl2) pentru a da terţ-butil N-[(6R,12R)-6,9-dihidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 1) (48 mg, 93%) ca un solid alb. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,15 (s, 1H), 9,07 (s, 1H), 6,65 (br s, 1H), 5,07 - 4,94 (m, 1H), 4,15 - 4,06 (m, 1H), 3,29 (br d, J = 10,0 Hz, 1H), 2,58 (br t, J = 11,9 Hz, 1H), 2,52 - 2,37 (m, 2H), 2,21 - 2,08 (m, 1H), 2,05 - 1,96 (m, 1H), 1,82 - 1,66 (m, 2H), 1,56 (s, 9H), 1,54 - 1,47 (m, 4H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,96 (s, 3F), -78,47 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 556,17566, găsit 557,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,62 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 3: (6R,12R)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,9-diol (diastereomer 1), Compus 42
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6,9-dihidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 1) (38 mg, 0,0683 mmol) în DCM (2 mL) s-a adăugat TFA (2 mL) în picătură. Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 1 h. Amestecul a fost concentrat sub presiune redusă la temperatura camerei şi co-evaporat cu MeOH (2 × 3 mL). Reziduul a fost dizolvat în EtOAc (20 mL) şi spălat cu NaHCO3 saturat (5 mL), uscat cu Na2SO4, filtrat şi concentrat. Reziduul a fost purificat cromatografie cu detentă (12 g SiO2, prin eluare 10 la 50% EtOAc/CH2Cl2) pentru a da (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaene-6,9-diol (diastereomer 1) (23 mg, 74%) ca solid galben pal. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,76 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 6,35 (s, 2H), 5,00 - 4,89 (m, 1H), 4,57 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 3,98 - 3,87 (m, 1H), 2,37 - 2,23 (m, 3H), 2,07 - 1,98 (m, 1H), 1,62 - 1,48 (m, 2H), 1,42 - 1,28 (m, 5H) ppm. 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,51 (s, 3F), -76,36 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 456,12323, găsit 457,1 (M+1)+; Timp retenţie: 2,94 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Exemplul 30: Preparare (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,10-diol (diastereomer 1), Compus 43
Etapa 1: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6,10-dihidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 1 regioizomeric)
La o soluţie amestec 1:3 de terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-9-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat şi terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-10-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (amestec 1:3 de diastereoizomeri regioizomerici) (80 mg, 0,1237 mmol) în MeOH (3 mL) s-a adăugat 10% paladiu pe cărbune 50% umiditate (30 mg, 0,0141 mmol). Aerul a fost înlocuit cu azot prin vid de 3 ori. Amestecul a fost agitat sub hidrogen (balon) la temperatura camerei peste noapte. Amestecul a fost filtrat prin pământ de diatomee şi spălat cu EtOAc. Filtratul a fost concentrat şi purificat prin cromatografie pe gel de silice (40 g SiO2).2, eluând de două ori între 0 şi 30% EtOAc şi heptani) pentru a da terţ-butil N-[(6R,12R)-6,10-dihidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 1 regioizomeric) (30 mg, 44%) ca un ulei incolor. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,11 (s, 1H), 9,06 (s, 1H), 4,87 - 4,74 (m, 1H), 4,25 - 4,09 (m, 1H), 3,94 (br s, 1H), 2,85 (br dd, J = 13,3, 3,8 Hz, 1H), 2,47 - 2,25 (m, 2H), 2,01 - 1,79 (m, 3H), 1,73 - 1,65 (m, 1H), 1,62 - 1,47 (m, 14H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,88 (s, 3F), -77,40 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 556,17566, găsit 557,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,62 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 2: [(6R,12R)-17-Amino-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-10-il] 2,2,2-trifluoracetat (diastereomer 1 regioizomeric)
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6,10-dihidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 1 regioizomeric) (30 mg, 0,0539 mmol) în DCM (2 mL) s-a adăugat TFA (2,9600 g, 2 mL, 25,960 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 1 h. Amestecul a fost concentrată sub presiune redusă la 40 °C. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (24 g SiO2, prin eluare 0 la 30% EtOAc/heptani) pentru a da [(6R,12R)-17-amino-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-10-il]2,2,2-trifluoracetat (diastereomer 1 regioizomeric) (27 mg, 91%) ca ulei galben pal. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,46 (s, 1H), 5,59 (tdd, J = 8,5, 3,9, 2,3 Hz, 1H), 5,37 (s, 2H), 4,58 (quin, J = 6,7 Hz, 1H), 3,82 (s, 1H), 3,01 (dd, J = 14,3, 3,8 Hz, 1H), 2,64 (br t, J= 12,2 Hz, 1H), 2,39 - 2,28 (m, 1H), 2,11 - 2,01 (m, 1H), 2,00 - 1,71 (m, 4H), 1,51 (d, J = 6,4 Hz, 3H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -64,00 (s, 3F), -75,28 (s, 3F), -77,43 (s, 3F) ppm.
Etapa 3: (6R,12R)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,10-diol (diastereomer 1), Compus 43
La o soluţie de [(6R,12R)-17-amino-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-10-il] 2,2,2-trifluoracetat (diastereomer 1 regioizomeric) (27 mg, 0,0489 mmol) în THF (2 mL) la 0 °C s-a adăugat o soluţie de NaOH (8,6 mg, 0,2150 mmol) în H2O (0,5 mL). Amestecul a fost agitat la 0 °C timp de 1 h, tratat cu NaHCO3 saturat (5 mL) şi soluţie salină (3 mL). Amestecul a fost extras cu EtOAc (3 × 10 mL). Straturile organice combinate au fost uscate cu Na2SO4, filtrate şi concentrate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (12 g SiO2, prin eluare 20 la 50% EtOAc/CH2Cl2) pentru a da (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaene-6,10-diol (diastereomer 1) (17 mg, 76%) ca solid galben pal. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,77 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 6,37 (s, 2H), 4,76 - 4,65 (m, 1H), 4,52 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 3,97 - 3,84 (m, 1H), 2,60 (br dd, J = 12,3, 4,5 Hz, 1H), 2,43 - 2,32 (m, 1H), 2,16 - 2,02 (m, 1H), 1,75 - 1,50 (m, 4H), 1,44 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,31 - 1,22 (m, 1H) ppm. 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,55 (s, 3F), -76,26 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 456,12323, găsit 457,1 (M+1)+; Timp retenţie: 2,87 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Exemplul 31: Preparare (6R,12R)-17-amino-8,9-dideuterio-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol, Compus 44
Etapa 1: (2S)-Hex-5-en-2-ol
La o soluţie galbenă de alil(brom)magneziu (103 mL de 1 M, 103,00 mmol) în dietil eter s-a adăugat bromură de cupru (975 mg, 6,7968 mmol) la 0 °C, apoi amestecul negru a fost agitat la -78 °C. După 5 min, o soluţie de (2S)-2-metiloxiran (1,9896 g, 2,4 mL, 34,257 mmol) în THF (30 mL) s-a adăugat în picătură cu pâlnie de picurare timp de 20 min la -78 °C. Apoi amestecul negru a fost agitat la -78 °C timp de 30 min. Apoi metanol (16 mL) s-a adăugat la -78 °C, urmat de soluţie apoasă de acid clorhidric (2M, 80 mL) şi apoi agitat la temperatura camerei timp de 5 min. MTBE (120 mL) a fost apoi adăugat, stratul apos a fost separat şi extras cu MTBE (2 × 120 mL). Straturile organice au fost spălate cu soluţie apoasă de acid clorhidric (1M, 50 mL), apă (50 mL), soluţie apoasă de tiosulfat de sodiu (10%, 50 mL) şi din nou cu apă (50 mL). Straturile organice au fost uscate pe sulfat de sodiu şi concentrate sub vid. Reziduul uleios a fost uscat cu silica gel şi purificat prin cromatografie lichidă pe silica gel prin eluare cu porţii de etil acetat (0-30%) în heptani pentru a da (2S)-hex-5-en-2-ol (1,66 g, 44%) ca un ulei galben pal. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 5,93 - 5,75 (m, 1H), 5,14 - 4,89 (m, 2H), 3,92 - 3,72 (m, 1H), 2,28 - 2,01 (m, 2H), 1,66 - 1,45 (m, 2H), 1,24 - 1,18 (m, 3H) ppm.
Etapa 2: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiaziol-2-il]-6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (325 mg, 0,4818 mmol) şi (2S)-hex-5-en-2-ol (160 mg, 1,4377 mmol) în toluen (4 mL) a fost tratat cu trifenilfosfină (264 mg, 1,0065 mmol) urmat de DIAD (205,40 mg, 0,2 mL, 1,0158 mmol) la temperatura camerei. Soluţia galbenă a fost agitat la temperatura camerei timp de peste noapte. Suspensia galbenă a fost concentrată sub vid, apoi uscată pe silice cu DCM. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (0 - 30% EtOAc/heptani) a dat terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (320 mg, 74%) ca un ulei galben. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,83 (s, 1H), 7,35 (d, J = 8,3 Hz, 5H), 5,93 (td, J = 17,0, 7,1 Hz, 1H), 5,86 - 5,74 (m, 1H), 5,37 - 5,28 (m, 1H), 5,28 - 5,15 (m, 2H), 5,03 - 4,88 (m, 2H), 4,82 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,63 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 3,28 - 3,11 (m, 2H), 2,27 - 2,02 (m, 2H), 1,97 - 1,84 (m, 1H), 1,79 - 1,66 (m, 1H), 1,43 (s, 18H), 1,38 (d, J = 6,1 Hz, 3H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ - 64,13 până la -64,28 (m, 3F), -73,32 până la -73,43 (m, 3F) ppm.
Etapa 3: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z)
La o soluţie agitată de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (320 mg, 0,3582 mmol) în 1,2-dicloretan (175 mL) a fost degazat cu barbotare cu azot gaz timp de 24 ore. La soluţie la 60 °C s-a adăugat catalizator Zhan-1B (18 mg, 0,0245 mmol) apoi reacţia a fost agitată la această temperatură timp de 40 minute. Apoi, s-a adăugat o cantitate egală de catalizator Zhan-1B (18 mg, 0,0245 mmol) şi agitarea a continuat la 60 °C timp de 2,5 ore. După răcire la temperatura camerei, catalizatorul a fost stins cu câteva picături de DMSO (aproximativ 5-6) şi reacţia a fost concentrată sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice folosind un gradient de la 0% la 90% acetat de etil în heptani pentru a da terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (290 mg, 73%) ca solid alb care conţinea încă o cantitate mică dintr-o impuritate necunoscută. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,82 (s, 1H), 7,34 - 7,24 (m, 5H), 5,84 (dt, J = 14,9, 7,2 Hz, 1H), 5,76 - 5,64 (m, 1H), 5,28 - 5,15 (m, 1H), 4,79 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,50 (d, J= 11,2 Hz, 1H), 3,13 (dd, J = 14,4, 7,3 Hz, 1H), 2,77 (dd, J = 14,4, 6,8 Hz, 1H), 2,33 (dt, J = 13,7, 6,8 Hz, 1H), 2,13 - 2,03 (m, 1H), 1,98 (dd, J = 13,0, 7,1 Hz, 1H), 1,72 - 1,60 (m, 1H), 1,50 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,46 (s, 18H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,96 (s, 3F), -74,55 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 728,26447, găsit 573,2 (M-155, -Boc, -tBu)+; Timp retenţie: 4,48 minute; Metodă LCMS: Coloană XBridge C18 4,6 × 75 mm 5 µm, Iniţial gradient la 95% NH4HCO3/5% acetonitril 6 min rulare cu 1 min echilibrare, gradient 0 la 3 min la 95% acetonitril şi menţinere timp de 3 minute, cu o Rată flux de 1,5 mL/min.
Etapa 4: terţ-Butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R,12R)-8,9-dideuterio-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8, 14, 16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (140 mg, 0,1921 mmol) în CD3OD (5,6 mL) sub azot s-a adăugat 10% paladiu pe cărbune (36 mg, 0,0338 mmol). Azotul a fost înlocuit cu deuteriu gazos prin vid timp de 3 cicluri. Amestecul a fost agitat la temperatura camerei sub atmosferă de deuteriu (balon) peste noapte. Amestecul a fost filtrat printr-un pat de celită şi spălat cu EtOAc (30 mL) şi apoi concentrat prin evaporare sub presiune redusă pentru a da terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R,12R)-8,9-dideuterio-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat (127 mg, 88%) ca un ulei incolor. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,83 (s, 1H), 5,00 - 4,85 (m, 1H), 3,95 - 3,65 (m, 1H), 2,73 - 2,55 (m, 1H), 2,34 - 2,22 (m, 1H), 2,21 - 2,10 (m, 1H), 2,08 - 1,96 (m, 1H), 1,67 - 1,19 (m, 25H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ - 63,99 (s, 3F), -77,58 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 642,2457, găsit 487,1 (M-155)+; Timp retenţie: 4,01 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) la 1,2 mL/min.
Etapa 5: (6R,12R)-17-Amino-8,9-dideuterio-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol, Compus 44
La o soluţie de terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R,12R)-8,9-dideuterio-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat (127 mg, 0,1682 mmol) în diclormetan (1,4 mL) s-a adăugat acid 2,2,2-trifluoracetic (2,0720 g, 1,4 mL, 18,172 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 2,5 ore. Amestecul a fost apoi diluat cu diclormetan (5 mL), apoi concentrat prin evaporare sub presiune redusă. Reziduul a fost dizolvat în etil acetat (100 mL), spălat cu soluţie apoasă saturată de bicarbonat de sodiu (3 × 15 mL) şi soluţie salină (1 × 15 mL) apoi uscat cu sulfat de sodiu anhidru, filtrat şi concentrat prin evaporare sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (12 g SiO2, 0 la 25% porţii de etil acetat în heptani). Produsul a fost dizolvat într-o cantitate minimă de acetonitril şi apă, şi uscat prin congelare peste noapte pentru a da (6R,12R)-17-amino-8,9-dideuterio-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol (70 mg, 94%) ca un solid galben. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,77 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 6,35 (s, 2H), 4,85 - 4,73 (m, 1H), 2,49 - 2,43 (m, 1H), 2,32 - 2,20 (m, 1H), 2,14 - 2,04 (m, 1H), 1,73 - 1,66 (m, 1H), 1,58 - 1,37 (m, 3H), 1,34 (d, J = 6,1 Hz, 3H), 1,22 - 1,12 (m, 1H) ppm. 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,50 (s, 3F), -76,40 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 442,1409, găsit 443,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,53 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Exemplul 32: Preparare (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,9-diol (diastereomer 2), Compus 45
Etapa 1: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-9-oxo-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-9-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (147 mg, 0,2274 mmol) în DCM (12 mL) s-a adăugat NaHCO3 (320 mg, 3,8092 mmol). Amestecul a fost răcit până la 0 °C şi s-a adăugat Dess-Martin Periodinan (108 mg, 0,2546 mmol). Amestecul a fost lent încălzit până la temperatura camerei şi agitat la temperatura camerei peste noapte. Amestecul a fost tratat cu NaHCO3 saturat (8 mL) şi extras cu CH2Cl2 (3 × 10 mL). Straturile organice combinate au fost uscate cu Na2SO4, filtrate şi concentrate. Reziduul a fost purificat cromatografie cu detentă (24 g SiO2, prin eluare 10 la 30% EtOAc/heptani) pentru a da terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-9-oxo-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (120 mg, 82%) ca un ulei incolor. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,48 (s, 1H), 9,14 (s, 1H), 7,36 - 7,27 (m, 5H), 5,10 - 5,00 (m, 1H), 4,73 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 4,57 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,06 - 2,91 (m, 3H), 2,71 (ddd, J = 16,9, 10,1, 2,3 Hz, 1H), 2,60 - 2,47 (m, 2H), 2,29 - 2,18 (m, 1H), 1,88 - 1,76 (m, 1H), 1,55 (s, 9H), 1,48 (d, J = 6,4 Hz, 3H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,85 (s, 3F), -74,57 (s, 3F) ppm.
Etapa 2: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-9-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 2)
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-9-oxo-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (120 mg, 0,1862 mmol) în EtOH (10 mL) la 0 °C s-a adăugat o soluţie de NaBH4 (4,8 mg, 0,1269 mmol) în EtOH (1 mL) în picătură. Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 1 h. S-a adăugat mai mult NaBH4 (4 mg, 0,1057 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 20 min. Acetonă (1 mL) s-a adăugat. Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 5 min. S-a adăugat NaHCO3 sat. (1 mL). Amestecul a fost concentrat pentru a îndepărta EtOH. Reziduul a fost tratat cu apă (2 mL) şi extras cu CH2Cl2 (3 × 10 mL). Straturile organice combinate au fost uscate cu Na2SO4, filtrate şi concentrate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (80 g SiO2, prin eluare 10 la 30% EtOAc/heptani) pentru a da doi diastereomeri. Diastereomerul 2 dorit, terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-9-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 2) (60 mg, 50%) ca un ulei incolor. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,18 (s, 1H), 9,12 (s, 1H), 7,36 - 7,27 (m, 5H), 4,85 - 4,67 (m, 3H), 4,01 - 3,90 (m, 1H), 2,79 (t, J = 12,3 Hz, 1H), 2,51 - 2,31 (m, 2H), 2,25 - 2,12 (m, 1H), 1,97 - 1,78 (m, 2H), 1,73 - 1,63 (m, 2H), 1,56 (s, 9H), 1,54 - 1,51 (m, 1H), 1,49 (d, J = 6,4 Hz, 3H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,87 (s, 3F), -74,08 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 646,2226, găsit 647,2 (M+1)+; Timp retenţie: 4,14 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Celălalt enantiomer, diastereomer 1, a fost primul pentru eluare terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-9-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (60 mg, 50%) ca un ulei incolor. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,16 - 9,07 (m, 2H), 7,36 - 7,28 (m, 5H), 5,01 (ddd, J = 9,5, 6,4, 3,2 Hz, 1H), 4,79 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,47 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 4,40 - 4,27 (m, 1H), 2,63 (dt, J = 14,7, 7,7 Hz, 1H), 2,30 (dt, J = 14,8, 5,7 Hz, 1H), 2,24 - 2,14 (m, 1H), 2,05 - 1,92 (m, 2H), 1,77 - 1,68 (m, 3H), 1,57 (s, 9H), 1,54 - 1,51 (m, 1H), 1,48 (d, J = 6,4 Hz, 3H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,85 (s, 3F), -73,92 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 646,2226, găsit 647,2 (M+1)+; Timp retenţie: 4,16 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 3: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6,9-dihidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 2)
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-9-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 2) (60 mg, 0,0928 mmol) în MeOH (5 mL) s-a adăugat 10% paladiu pe cărbune 50% umiditate (30 mg, 0,0141 mmol). Amestecul a fost agitat sub hidrogen (balon) la temperatura camerei peste noapte. Amestecul a fost filtrat prin pământ de diatomee şi spălat cu EtOAc. Filtratul a fost concentrat şi purificarea prin cromatografie pe gel de silice (24 g SiO2, prin eluare 10 la 30% EtOAc/CH2Cl2) a dat terţ-butil N-[(6R,12R)-6,9-dihidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 2) (48 mg, 93%) ca un solid alb. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,15 (s, 1H), 9,07 (s, 1H), 6,65 (br s, 1H), 5,07 - 4,94 (m, 1H), 4,15 - 4,06 (m, 1H), 3,29 (br d, J = 10,0 Hz, 1H), 2,58 (br t, J = 11,9 Hz, 1H), 2,52 - 2,37 (m, 2H), 2,21 - 2,08 (m, 1H), 2,05 - 1,96 (m, 1H), 1,82 - 1,66 (m, 2H), 1,56 (s, 9H), 1,54 - 1,47 (m, 4H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,96 (s, 3F), -78,47 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 556,17566, găsit 557,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,62 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 4: (6R,12R)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,9-diol (diastereomer 2), Compus 45
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6,9-dihidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 2) (38 mg, 0,0683 mmol) în CH2Cl2 (2 mL) la 0 °C s-a adăugat TFA (1,4800 g, 1 mL, 12,980 mmol). Amestecul a fost agitat la 13-15 °C timp de 1 h. S-a adăugat MeOH (2 mL). Amestecul a fost concentrat şi co-evaporat cu MeOH (2 × 3 mL). Reziduul a fost dizolvat în EtOAc (20 mL) şi spălat cu NaHCO3 saturat (4 mL), uscat cu Na2SO4, filtrat şi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (12 g SiO2, 10 la 30% EtOAc/CH2Cl2) şi produsul a fost uscat prin congelare pentru a da (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,9-diol (diastereomer 2) (19 mg, 57%) ca solid galben pal. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,75 (s, 1H), 7,61 (s, 1H), 6,33 (s, 2H), 4,70 - 4,55 (m, 2H), 3,73 - 3,62 (m, 1H), 2,46 - 2,29 (m, 2H), 2,19 - 2,08 (m, 1H), 2,02 - 1,90 (m, 1H), 1,71 - 1,45 (m, 3H), 1,35 (d, J = 6,1 Hz, 3H), 1,30 - 1,21 (m, 1H) ppm. 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,47 (s, 3F), -76,20 (br. s., 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 456,1232, găsit 457,1 (M+1)+; Timp retenţie: 2,89 minute; Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Exemplul 33: Preparare (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,10-diol (diastereomer 2), Compus 46
Etapa 1: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-hidroxi-12-metil-10-oxo-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6,10-dihidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (65 mg, 0,1168 mmol) în CH2Cl2 (8 mL) s-a adăugat NaHCO3 (168 mg, 1,9998 mmol). Amestecul a fost răcit până la 0 °C şi s-a adăugat Dess-Martin periodinan (51 mg, 0,1202 mmol). Amestecul a fost lăsat la încălzire lentă la temperatura camerei şi agitat la temperatura camerei peste noapte. Amestecul a fost tratat cu NaHCO3 saturat (10 mL) şi extras cu CH2Cl2 (3 × 10 mL). Straturile organice combinate au fost uscate cu Na2SO4, filtrate şi concentrate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (12 g SiO2, prin eluare 10 la 60% EtOAc/heptani) pentru a da terţ-butil N-[(6R,12R)-6-hidroxi-12-metil-10-oxo-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (38 mg, 59%) ca un solid alb. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,24 (s, 1H), 9,14 (s, 1H), 5,24 (quind, J = 6,4, 2,0 Hz, 1H), 4,75 (s, 1H), 3,56 (dd, J = 18,3, 1,7 Hz, 1H), 2,75 - 2,59 (m, 3H), 2,47 (dd, J = 18,3, 6,1 Hz, 1H), 2,25 - 2,07 (m, 2H), 2,00 - 1,87 (m, 1H), 1,55 (s, 9H), 1,53 (d, J = 6,6 Hz, 3H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,83 (s, 3F), -78,16 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 554,16003, găsit 499,1 (M-55)+; Timp retenţie: 2,36 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 3 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 2: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6,10-dihidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 2)
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6-hidroxi-12-metil-10-oxo-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (33 mg, 0,0595 mmol) în EtOH (4 mL) la 0 °C s-a adăugat o soluţie de NaBH4 (2,1 mg, 0,0555 mmol) în EtOH (0,5 mL). Amestecul a fost la 0 °C timp de 4 h. S-a adăugat acetonă (1 mL). Amestecul a fost agitat la 0 °C timp de 5 min. S-a adăugat NaHCO3 Sat. (5 mL). Amestecul a fost extras cu EtOAc (3 × 10 mL). Straturile organice combinate au fost uscate cu Na2SO4, filtrate şi concentrate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (12 g SiO2, prin eluare 0 la 50% EtOAc/heptani) pentru a da terţ-butil N-[(6R,12R)-6,10-dihidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 2) (10 mg, 30%) ca solid galben pal. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,13 (s, 2H), 5,27 - 5,16 (m, 1H), 4,06 - 3,95 (m, 1H), 3,85 (s, 1H), 2,58 - 2,38 (m, 3H), 2,34 - 2,23 (m, 1H), 2,04 - 1,90 (m, 1H), 1,78 - 1,63 (m, 4H), 1,56 (s, 9H), 1,49 (d, J = 6,4 Hz, 3H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,85 (s, 3F), -77,65 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 556,17566, găsit 557,2 (M+1)+; Timp retenţie: 3,5 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 3: (6R,12R)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,10-diol (diastereomer 2), Compus 46
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6,10-dihidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 2) (20 mg, 0,0359 mmol) în CH2Cl2 (2 mL) la 0 °C s-a adăugat TFA (740,00 mg, 0,5 mL, 6,4899 mmol) în picătură. Amestecul a fost agitat la 0 °C timp de 1 h şi la 9-13 °C timp de 1 h. Amestecul a fost tratat cu MeOH (1 mL) şi concentrată la tc., co-evaporată cu MeOH (2 × 2 mL). Reziduul a fost tratat cu NaHCO3 saturat (5 mL) şi extras cu CH2Cl2 (3 × 10 mL). Straturile organice combinate au fost uscate cu Na2SO4, filtrate şi concentrate. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (24 g SiO2, prin eluare 10 la 30% EtOAc/CH2Cl2) a dat trifluoracetat format cu alcool secundar (aproximativ 3 mg) şi prima serie a produsului dorit. Trifluoracetat a fost dizolvat în THF (1 mL) şi tratat cu 1 N soluţie apoasă de NaOH (0,1 mL) la temperatura camerei timp de 20 min. Amestecul a fost tratat cu NaHCO3 saturat (1 mL) şi extras cu CH2Cl2 (2 × 5 mL). Straturile organice combinate au fost uscate cu Na2SO4, filtrate şi concentrate. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (24 g SiO2, prin eluare 10 la 30% EtOAc/CH2Cl2) a dat a doua serie. Cele două serii au fost combinate şi uscate prin congelare pentru a da (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaene-6,10-diol (diastereomer 2) (10 mg, 59%) ca solid galben pal. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,76 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 6,37 (s, 2H), 5,23 - 5,14 (m, 1H), 4,38 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 3,63 - 3,52 (m, 1H), 2,47 - 2,42 (m, 1H), 2,34 - 2,25 (m, 1H), 2,14 - 2,00 (m, 2H), 1,84 - 1,70 (m, 1H), 1,55 -1,65 (m, 1H), 1,45 - 1,37 (m, 1H), 1,35 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 1,32 - 1,25 (m, 1H) ppm. 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,50 (s, 3F), -77,01 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 456,12323, găsit 457,1 (M+1)+; Timp retenţie: 2,76 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Exemplul 34: Preparare (6R)-17-amino-12-(ciclopropilmetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 47, şi (6R)-17-amino-12-(ciclopropilmetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 48
Etapa 1: 2-Ciclopropil-N-metoxi-N-metil-acetamidă
La o soluţie agitată de acid 2-ciclopropilacetic (10 g, 99,884 mmol) în DCM (100 mL) s-a adăugat CDI (18,5 g, 114,09 mmol) în porţii şi amestecul de reacţie a fost agitat timp de 2 h la 25 °C. Apoi, s-a adăugat N,O-dimetil hidroxilamină (sare clorhidrat) (10,000 g, 102,52 mmol) într-o porţie. Amestecul de reacţie a fost agitat timp de 12 h la 25 °C, turnat în apă răcită pe gheaţă (100 mL) şi extras cu etil acetat (300 × 2). Stratul organic combinat a fost spălat cu soluţie salină (100 mL), uscat peste sulfat de sodiu anhidru Na2SO4 şi concentrat sub presiune redusă. Produsul brut a fost purificat cromatografie pe coloană peste silicagel (230-400 mesh) utilizând 12% (etil acetat-hexan) ca eluent pentru a da 2-ciclopropil-N-metoxi-N-metil-acetamidă (12 g, 84%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 3,63 (s, 3H), 3,08 (s, 3H), 2,29 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 0,991-0,92 (m, 1H), 0,46 - 0,42 (m, 2H), 0,12 - 0,09 (m, 2H) ppm. ESI-MS m/z calc. 143,09464, găsit 144,0 (M+1)+; Timp retenţie: 2,29 minute; Metodă LCMS: Metodă TCG 10: Zorbax Ext C18, 50 × 4,6 mm 5 µm, rulare 5 min, 10 - 90% acetonitril în apă (10 µM modificator pentru NH4OAc), 1,2 mL/min.
Etapa 2: 1-Ciclopropilpent-4-en-2-onă
O soluţie de 2-ciclopropil-N-metoxi-N-metil-acetamidă (0,5 g, 3,4920 mmol) în THF (10,5 mL) a fost răcit până la -78 °C şi tratat cu o soluţie de bromură de alilmagneziu (5 mL de 1 M, 5,0000 mmol) în Et2O la -78 °C timp de 22 minute. Reacţia a fost menţinută la această temperatură timp de 2 h şi 10 min. şi apoi tratată cu soluţie saturată apoasă de NH4Cl (50 mL) la -78° C. Stratul organic a fost decantat, şi faza de soluţie apoasă a fost extrasă cu DCM (4 × 40 mL). Fazele organice combinate au fost spălate cu NH4Cl (30 mL), uscate pe Na2SO4 şi concentrate în vid cu grijă la 25 °C, pentru a da un reziduu brut (0,564 g). Reziduul a conţinut produsul 1-ciclopropilpent-4-en-2-onă (564 mg, 77%) ca un ulei clar. 1H RMN (500 MHz, Cloroform-d) δ 6,00 - 5,86 (m, 1H), 5,22 - 5,08 (m, 2H), 3,22 (d, J = 7,0 Hz, 2H), 2,32 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 1,07 - 0,93 (m, 1H), 0,61 - 0,53 (m, 2H), 0,11 (q, J = 5,2 Hz, 2H) ppm.
Etapa 3: 1-Ciclopropilpent-4-en-2-ol
O suspensie de hidrură de litiu aluminiu (1,24 g, 32,671 mmol) în THF (36 mL) a fost răcită până la -78 °C sub azot. Suspensia a fost tratată în picătură cu o soluţie de 1-ciclopropilpent-4-en-2-onă (3 g, 21,743 mmol) în THF (7 mL) timp de 40 minute şi menţinută la această temperatură încă 2 h. Suspensia a fost tratată cu grijă în picătură cu H2O (20 mL) la -78 °C şi apoi diluată cu DCM (150 mL) şi încălzită până la temperatura camerei prin îndepărtarea băii, şi agitată timp de 30 minute la tc. Un gel alb a fost generat ca al doilea component al amestecului bifazic. Amestecul a fost filtrat prin Celite şi spălat cu CH2Cl2 (2 × 200 mL). Filtratul a fost concentrat în vid (28° C, 140 mmHg) pentru a da un ulei galben pal brut (2,99 g). Reziduul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (120 g SiO2, încărcat în hexani, eluat cu 0 - 10% Et2O în hexani timp de a 40 minute gradient). Fracţiile pure au fost combinate şi solvenţii au fost cu grijă îndepărtaţi sub presiune redusă (28 °C, 140 mm Hg) pentru a da produsul ţintă 1-ciclopropilpent-4-en-2-ol (1,41 g, 51%) ca un ulei incolor transparent. 1H RMN (500 MHz, Cloroform-d) δ 5,85 (dddd, J = 17,0, 10,4, 7,8, 6,5 Hz, 1H), 5,18 - 5,10 (m, 2H), 3,77 (tt, J = 7,6, 4,7 Hz, 1H), 2,40 - 2,31 (m, 1H), 2,19 (dtt, J = 14,0, 7,8, 1,2 Hz, 1H), 1,47 - 1,31 (m, 2H), 0,82 - 0,70 (m, 1H), 0,55 - 0,41 (m, 2H), 0,12 (dtd, J = 9,2, 4,8, 3,3 Hz, 1H), 0,08 - 0,03 (m, 1H) ppm.
Etapa 4: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[1-(ciclopropilmetil)but-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
O soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (500 mg, 0,7116 mmol) şi 1-ciclopropilpent-4-en-2-ol (200 mg, 1,7830 mmol) în toluen (5 mL) a fost tratată cu DIAD (261,00 mg, 0,25 mL, 1,2908 mmol) în picătură timp de un minut urmat de trifenilfosfină (289 mg, 1,1019 mmol) într-o porţie la temperatura camerei sub argon. Reacţia agitată timp de un total de 24 h la tc. Reacţia a fost tratat cu NaHCO3 (20 mL) şi diluat cu EtOAc (100 mL). Apoi stratul organic a fost spălat cu soluţie saturată apoasă de NaHCO3 (1 × 20 mL), soluţie saturată apoasă de NH4Cl (1 × 20 mL) şi soluţie salină (1 × 20 mL) apoi uscată peste Na2SO4, filtrată şi concentrată în vid pentru a da un ulei galben brut (1,13 g). Reziduul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (80 g SiO2, uscat, eluat cu 0-50% EtOAc în hexani cu un gradient de 20 min.). Fracţiile pure au fost combinate şi solventul a fost evaporat în vid pentru a da produsul terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[1-(ciclopropilmetil)but-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (465 mg, 76%) ca un ulei incolor. ESI-MS m/z calc. 796,3271, găsit 797,8 (M+1)+; Timp retenţie: 9,44 minute; Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 × 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 - 100% fază mobilă B timp de 12 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 5: terţ-Butil N-[(6R)-6-benziloxi-12-(ciclopropilmetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,9,14(18),15-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z)
un flacon a fost încărcat cu terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[1-(ciclopropilmetil)but-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (465 mg, 0,5836 mmol) urmat de 1,2-dicloretan (280 mL) sub argon. Soluţia de reacţie a fost tratată cu catalizator Zhan-1B (52 mg, 0,0708 mmol) la temperatura camerei. Reacţia a fost încălzită la 70 °C timp de 16 ore. LCMS a indicat o conversie mai mare de 95% a materiei prime în produse. LCMS nu a indicat nicio conversie suplimentară a vârfului provizoriu al materiei prime. Reacţia a fost tratată cu o picătură de DMSO, iar conţinutul vasului de reacţie a fost concentrat pe SiO2. Materialul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (40 g SiO2, încărcat uscat, eluat cu 0 - 15% EtOAc în hexani pe un gradient de 20 de minute). Materialul a fost recuperat impur, iar fracţiile care conţineau ţinta au fost combinate şi solventul a fost evaporat în vid pentru a da produsul terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-12-(ciclopropilmetil)-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,9,14(18),15-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (272 mg, 52%) sub formă de amestec de diastereomeri; materialul a apărut ca un ulei transparent. Ambele vârfuri au loc la 9,10 şi, respectiv, 9,25 min.: ESI-MS m/z calc. 768,2958, găsit 769,8 (M+1)+; Timp retenţie: 9,1 minute; Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 × 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 - 100% fază mobilă B timp de 12 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 6: terţ-Butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R)-12-(ciclopropilmetil)-6-hidroxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat
Un flacon a fost încărcat cu terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-12-(ciclopropilmetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,9,14(18),15-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (88 mg, 0,1145 mmol) în EtOH (4,8 mL). Apoi a fost barbotat N2 prin soluţia timp de 5 minute. Apoi soluţia a fost tratată cu Pd/C (24 mg, 10 % g/g, 0,0226 mmol) la temperatura camerei şi N2 a fost barbotat prin soluţie timp de 5 minute. Apoi gaz H2 a fost barbotat prin amestec timp de 20 min. şi menţinere sub o atmosferă de H2 cu un balon. Reacţia a fost completă în 11 h. Amestecul a fost diluat cu EtOAc şi filtrat prin Celite. Filtratul a fost concentrată în vid pentru a da produsul terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R)-12-(ciclopropilmetil)-6-hidroxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat (74 mg, 94%) ca un amestec de diastereomeri; materialul a apărut ca un ulei galben deschis care a devenit o spumă asemănătoare răşinii după uscarea completă. ESI-MS m/z calc. 680,26447, găsit 581,3 (M-99)+; Timp retenţie: 8,01 minute; Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 × 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 - 100% fază mobilă B timp de 12 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 7: (6R)-17-Amino-12-(ciclopropilmetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (sare trifluoracetat)
Un flacon a fost încărcat cu terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R)-12-(ciclopropilmetil)-6-hidroxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat (155 mg, 0,2277 mmol) şi tratat cu o soluţie de TFA (518,00 mg, 0,35 mL, 4,5429 mmol) în DCM (1,4 mL) la 0 °C. Reacţia a fost încălzit până la temperatura camerei timp de 3 ore. LCMS a indicat faptul că transformarea a fost completă. Reacţia a fost concentrată în vid pentru a da a reziduu brut al produsului ţintă (128 mg). Materialul a fost purificat în plus prin HPLC cu fază reversă (Higgins Analytical C18 250 × 20 mm (50-95% B pentru un gradient de 70 min.), 25 mL/min, 254 nm, Tampon A: 0,1% CF3CO2H în H2O, Tampon B: 0,1% CF3CO2H în acetonitril). Fracţiile pure au fost combinate şi solventul a fost evaporat în vid pentru a da produsul (6R)-17-amino-12-(ciclopropilmetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (sare trifluoracetat) (71 mg, 51%) ca o răşină galben închis. ESI-MS m/z calc. 480,1596, găsit 481,3 (M+1)+; Timp retenţie: 3,27 minute; Metodă LCMS: Water Cortex 2,7u C18 (3,0mm × 50 mm), temp.: 55 °C; Flux: 1,2mL/min; fază mobilă: 100% apă cu 0,1% CF3CO2H apoi 100% acetonitril cu 0,1% CF3CO2H, grad: 5% până la 100% B timp de 4 min, menţinut la 100% B timp de 0,5 min, apoi echilibrat la 5% B timp de 1,5 min.
Etapa 8: (6R)-17-Amino-12-(ciclopropilmetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 47, şi (6R)-17-amino-12-(ciclopropilmetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 48
Cei doi diastereomeri ai (6R)-17-amino-12-(ciclopropilmetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (sare trifluoracetat) (83 mg, 0,1728 mmol) au fost separaţi prin cromatografie cu lichid supercritic (SFC) utilizând 0,1% dietilamină în EtOH drept co-solvenţii. Fracţiile conţinând fiecare diastereomer au fost apoi concentrate sub presiune redusă şi uscate prin congelare (amestec acetonitril/apă) pentru a da (6R)-17-amino-12-(ciclopropilmetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1) (45 mg) şi (6R)-17-amino-12-(ciclopropilmetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2) (31 mg). Co-evaporarea enantiomerului 1 (2 mg) cu acetonitril (2 × 3 mL) nu a îndepărtat izopropanol. Enantiomer 1 (2 mg) a fost dizolvat în EtOAc şi spălarea cu cu 1 N HCl a îndepărtat izopropanol dar a fost observat un produs secundar 1H RMN. Enantiomer 1 (aproximativ 39 mg) a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (24 g SiO2, prin eluare 10 la 30% EtOAc/CH2Cl2) şi uscate prin congelare pentru a da (6R)-17-amino-12-(ciclopropilmetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1) (34 mg, 40%) ca solid galben pal. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,77 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 6,36 (s, 2H), 4,69 - 4,58 (m, 1H), 2,48 - 2,43 (m, 1H), 2,26 - 2,15 (m, 1H), 2,12 - 2,00 (m, 1H), 1,79 (ddd, J = 14,5, 9,0, 5,3 Hz, 1H), 1,72 - 1,54 (m, 3H), 1,54 - 1,40 (m, 3H), 1,35 (ddd, J = 14,5, 8,2, 2,4 Hz, 1H), 1,30 - 1,21 (m, 1H), 0,94 - 0,83 (m, 1H), 0,50 - 0,41 (m, 1H), 0,35 (tt, J = 8,7, 4,4 Hz, 1H), 0,16 (dq, J = 9,0, 4,6 Hz, 1H), 0,08 până la -0,01 (m, 1H) ppm. 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,38 (s, 3F), -79,03 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 480,1596, găsit 481,2 (M+1)+; Timp retenţie: 3,83 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Produs enantiomer 2 (aproximativ 29 mg) a fost purificat cromatografie cu detentă (24 g SiO2, prin eluare 10 la 30% EtOAc/CH2Cl2) şi uscare prin congelare pentru a da (6R)-17-amino-12-(ciclopropilmetil)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2) (27 mg, 32%) ca solid galben pal. ESI-MS m/z calc. 480,1596, găsit 481,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,81 minute. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,77 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 6,36 (s, 2H), 4,70 (t, J = 9,3 Hz, 1H), 2,44 - 2,35 (m, 1H), 2,35 - 2,24 (m, 1H), 2,15 - 2,03 (m, 1H), 1,84 - 1,64 (m, 3H), 1,58 - 1,33 (m, 5H), 1,32 - 1,21 (m, 1H), 0,94 - 0,82 (m, 1H), 0,51 - 0,42 (m, 1H), 0,35 (tt, J = 8,5, 4,5 Hz, 1H), 0,16 (dq, J = 9,0, 4,6 Hz, 1H), 0,08 până la -0,01 (m, 1H) ppm. 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,39 (s, 3F), -76,37 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 480,1596, găsit 481,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,81 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Exemplul 35: Preparare (6R)-17-amino-12-[(4-fluorfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 49, şi (6R)-17-amino-12-[(4-fluorfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 50
Etapa 1: 1-(4-Fluorofenil)pent-4-en-2-ol
Un flacon cu fund plat a fost încărcat cu 2-(4-fluorfenil)acetaldehidă (7,0224 g, 6,6 mL, 48,294 mmol) şi dietil eter (57 mL) şi răcit până la 0 °C. Apoi alil(brom)magneziu (60,4 mL de 1 M, 60,400 mmol) s-a adăugat în picătură timp de 30 minute. Baia de răcire a fost îndepărtată şi amestecul de reacţie a fost lăsat la încălzire la temperatura camerei şi agitat timp de 1 h. S-a adăugat o soluţie saturată apoasă de clorură de amoniu la flacon până ce a dispărut precipitatul. Straturile au fost separate şi stratul apos a fost spălată cu etil acetat (3 × 200 mL). Straturile organice au fost combinate şi spălate cu a soluţie salină (2 × 50 mL). Stratul organic a fost uscat pe sulfat de sodiu anhidru, filtrat, şi concentrat în vid. Amestecul de reacţie brut a fost uscat pe silica gel şi purificat prin cromatografie lichidă pe silica gel, prin eluare cu porţii de etil acetat (0 - 30%) în heptani. Izolat 1-(4-fluorfenil)pent-4-en-2-ol (4,034 g, 44%) ca ulei galben clar. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,24 - 7,15 (m, 2H), 7,06 - 6,95 (m, 2H), 5,94 - 5,78 (m, 1H), 5,23 - 5,10 (m, 2H), 3,86 (qd, J = 7,9, 4,6 Hz, 1H), 2,85 - 2,66 (m, 2H), 2,40 - 2,28 (m, 1H), 2,27 - 2,15 (m, 1H), 1,66 (d, J = 3,4 Hz, 1H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -116,73 până la -116,86 (m, 1F) ppm. ESI-MS m/z calc. 180,095, găsit 163,1 (M-17)+; Timp retenţie: 2,65 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18, 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min. O a doua fracţie a fost izolată, de asemenea, puţin mai puţin pură, 1-(4-fluorfenil)pent-4-en-2-ol (0,575 g, 6%) ca ulei galben clar. ESI-MS m/z calc. 180,095, găsit 163,1 (M-17)+; Timp retenţie: 2,65 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18, 3,0 × 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Etapa 2: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[1-[(4-fluorfenil)metil]but-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (250 mg, 0,3630 mmol) şi 1-(4-fluorfenil)pent-4-en-2-ol (102 mg, 0,5660 mmol) în toluen (3 mL) s-a adăugat trifenilfosfină (204 mg, 0,7778 mmol). După agitare la temperatura camerei timp de 1 min, s-a adăugat DIAD (150 µL, 0,7618 mmol) şi amestecul agitat la temperatura camerei timp de 30 minute. Amestecul de reacţie a fost diluat cu EtOAc apoi spălat cu soluţie saturată apoasă de NaHCO3 (1X), soluţie saturată apoasă de NH4Cl (1X) şi soluţie salină (1X) apoi uscat peste MgSO4, filtrate şi concentrate până la un ulei galben care a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând gradient de suprafaţă de la 100% hexani până la 50% EtOAc-hexani pentru a da diastereomeric amestec, un, sirop slab gălbui clar, terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[1-[(4-fluorfenil)metil]but-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (160 mg, 52%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,80 (s, 1H), 7,35 (ddd, J = 6,9, 5,2, 1,9 Hz, 2H), 7,33 - 7,25 (m, 3H), 7,16 (ddd, J = 8,8, 5,4, 2,1 Hz, 2H), 6,90 - 6,84 (m, 2H), 5,88 - 5,69 (m, 2H), 5,61 - 5,48 (m, 1H), 5,11 - 4,97 (m, 4H), 4,79 (dd, J = 10,8, 1,9 Hz, 1H), 4,60 (dd, J = 10,7, 7,1 Hz, 1H), 3,05 (ddd, J = 13,8, 6,9, 5,3 Hz, 1H), 2,91 (dd, J = 13,9, 6,0 Hz, 1H), 2,64 - 2,08 (m, 5H), 1,40 (d, J = 6,8 Hz, 19H) ppm. ESI-MS m/z calc. 850,3176, găsit 851,5 (M+1)+; Timp retenţie: 2,16 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 3: terţ-Butil N-[(6R)-6-benziloxi-12-[(4-fluorfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,9,14(18),15-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z)
La o soluţie degazată de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[1-[(4-fluorfenil)metil]but-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (150 mg, 0,1763 mmol) în DCE (75 mL) s-a adăugat catalizator Zhan-1B (24 mg, 0,03271 mmol) într-o porţie şi amestecul de reacţie a fost încălzit la 60 °C timp de aproximativ 1 h. Amestecul de reacţie a fost răcit până la temperatura camerei şi reacţia stinsă cu câteva picături de DMSO şi solvenţii au fost îndepărtaţi. Reziduul maron rezultat a fost purificat prin cromatografie pe silicagel utilizând gradient de suprafaţă 100% hexani până la 50% EtOAc pentru a da un amestec diastereomeric de terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-12-[(4-fluorfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,9,14(18),15-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (92 mg, 63%). ESI-MS m/z calc. 822,2864, găsit 823,5 (M+1)+; Timp retenţie: 2,03 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 50 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 4: terţ-Butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R)-12-[(4-fluorfenil)metil]-6-hidroxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-12-[(4-fluorfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,9,14(18),15-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (92 mg, 0,1118 mmol) în EtOH (3 mL) s-a adăugat, Pd/C (38 mg de 10 % g/g, 0,03571 mmol) (50% apă) într-un vas de 250 mL echipat cu un H2-balon folosind un adaptor cu 3 căi. Supus la vid şi umplut din nou cu azot gazos de trei ori, apoi supus la vid. Vasul a fost umplut cu hidrogen gazos, iar amestecul a fost agitat la temperatura camerei peste noapte. Supus la vid şi umplut cu azot gazos de trei ori, apoi diluat cu acetat de etil şi filtrat peste celită. Filtratul a fost concentrat pentru a da un ulei vâscos incolor sub formă de amestec diastereomeric terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R)-12-[(4-fluorfenil)metil]-6-hidroxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat (72 mg, 88%). ESI-MS m/z calc. 734,25507, găsit 735,4 (M+1)+; Timp retenţie: 2,07 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 30 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 5: (6R)-17-Amino-12-[(4-fluorfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol
Terţ-butil N-tert-butoxicarbonil-N-[(6R)-12-[(4-fluorofenil)metil]-6-hidroxi-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-17-il]carbamat (72 mg, 0,09800 mmol) a fost dizolvat într-o soluţie pre-preparată de TFA (250 µL, 3,245 mmol) şi DCM (750 µL). Reacţia s-a agitat timp de aproximativ 0,5 ore, iar solvenţii s-au îndepărtat. Reziduul rezultat a fost dizolvat în 2 mL de MeOH şi a fost purificat printr-o metodă HPLC-MS în fază inversă utilizând un gradient dublu de la 30 - 99% faza mobilă B timp de 15,0 minute. Fază mobilă A = H2O (5 mM acid formic) a dat (6R)-17-amino-12-[(4-fluorfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (42 mg, 80%); ESI-MS m/z calc. 534,1502, găsit 535,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,71 minute ca solid amorf galben pal. ESI-MS m/z calc. 534,1502, găsit 535,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,71 minute. Puritatea a fost determinată prin UPLC cu fază reversă utilizând o coloană Acquity UPLC BEH C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 30 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 6: (6R)-17-Amino-12-[(4-fluorfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 49, şi (6R)-17-amino-12-[(4-fluorfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 50
Amestecul diastereomeric de (6R)-17-amino-12-[(4-fluorfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (60 mg, 0,1123 mmol) a fost purificat prin SFC preparativă prin eluare cu 15% metanol la CO2 printr-o coloană 2 × 25 cm OJ-H, pentru a da primul eluent (6R)-17-amino-12-[(4-fluorfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1) (3,6 mg, 6%). 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 7,62 (s, 1H), 7,36 - 7,29 (m, 2H), 7,03 - 6,93 (m, 2H), 4,86 - 4,78 (m, 1H), 3,13 (dd, J = 14,3, 2,9 Hz, 1H), 2,95 (dd, J = 14,5, 8,6 Hz, 1H), 2,66 - 2,52 (m, 1H), 2,40 (dd, J = 14,4, 9,0 Hz, 1H), 2,15 (dt, J = 14,5, 8,0 Hz, 1H), 1,77 - 1,57 (m, 6H), 1,41 - 1,29 (m, 1H) ppm. 19F RMN (376 MHz, Metanol-d4) δ -64,79, -81,78, -119,61 ppm. ESI-MS m/z calc. 534,1502, găsit 535,4 (M+1)+; Timp retenţie: 2,21 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C.
Continuarea eluării a dat al 2 lea eluent, (6R)-17-amino-12-[(4-fluorfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2) (2,8 mg, 5%). 1H RMN (400 MHz, Metanol-d4) δ 7,63 (s, 1H), 7,32 (dd, J = 8,6, 5,6 Hz, 2H), 7,06 - 6,91 (m, 2H), 5,02 - 4,91 (m, 1H), 3,14 (dd, J = 14,4, 2,9 Hz, 1H), 2,95 (dd, J = 14,5, 8,7 Hz, 1H), 2,54 (ddd, J = 13,9, 8,5, 6,2 Hz, 1H), 2,40 (t, J = 12,0 Hz, 1H), 2,21 (dt, J = 14,5, 7,7 Hz, 1H), 1,94 - 1,72 (m, 3H), 1,68 - 1,52 (m, 3H), 1,41 (ddd, J = 13,0, 9,7, 6,5 Hz, 1H) ppm. 19F RMN (376 MHz, Metanol-d4) δ -64,76, -78,82, -119,60 ppm. ESI-MS m/z calc. 534,1502, găsit 535,2 (M+1)+; Timp retenţie: 2,23 minute. Puritatea a fost determinată prin HPLC-MS cu fază reversă utilizând o coloană Onyx Monolithic C18 (50 × 4,6 mm) comercializată de Phenomenex (pn: CH0-7644), şi o rulare cu gradient dual de la 1 - 99% fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 12 mL/min, volum injecţie = 50 µL, şi temperatură coloană = 25 °C.
Exemplul 36: Preparare (6R)-17-amino-12-[(3-terţ-Butilfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 51, şi (6R)-17-amino-12-[(3-terţ-Butilfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 52
Etapa 1: 1-(3-terţ-Butilfenil)pent-4-en-2-ol
La un flacon uscat la flacără încărcat cu 2-(3-terţ-butilfenil)acetaldehidă (140 mg, 0,7546 mmol) s-a adăugat dietil eter anhidru (4 mL). Soluţia a fost răcită până la 0 °C înainte de adiţie de alil(brom)magneziu (1 mL de 1 M, 1,0000 mmol) în picătură. După adiţie, soluţia a fost lăsată la încălzire până la temperatura camerei şi agitată timp de 1 h. S-a adăugat o soluţie saturată apoasă de NH4Cl până a dispărut precipitatul alb. Stratul de soluţie apoasă a fost apoi extras cu EtOAc (3 × 10 mL). Straturile organice au fost apoi combinate, spălate cu soluţie salină, uscate cu sulfat de sodiu anhidru, filtrate, şi concentrate sub presiune redusă. Produsul brut a fost purificat prin cromatografie pe coloană cu (prin eluare 0 - 20% EtOAc în hexani) până la randament 1-(3-terţ-butilfenil)pent-4-en-2-ol (100 mg, 58%) ca un ulei clar. 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,25 - 7,15 (m, 3H), 7,02 - 6,98 (m, 1H), 5,95 - 5,79 (m, 1H), 5,03 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 5,02 - 4,99 (m, 1H), 4,58 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 3,74 - 3,68 (m, 1H), 2,63 (dd, J = 13,1, 6,3 Hz, 2H), 2,19 - 2,04 (m, 2H), 1,27 (d, J = 1,2 Hz, 9H) ppm.
Etapa 2: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[1-[(3-terţ-Butilfenil)metil]but-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
Un balon a fost încărcat cu terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluorometil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (100 mg, 0,1452 mmol), 1-(3-terţ-butilfenil)pent-4-en-2-ol (30 mg, 0,1374 mmol), trifenilfosfină (76 mg, 0,2898 mmol) şi spălat cu N2 gaz. Apoi, amestecul a fost tratat cu toluen (0,3 mL). Soluţia a fost tratată cu DIAD (62,640 mg, 0,06 mL, 0,3098 mmol) în toluen (0,2 mL) timp de 2 ore la temperatura camerei. Reacţia a fost agitată încă 1 oră la temperatura camerei; LCMS a indicat că aproape nu este prezent alcool. Reacţia a fost agitată încă 72 de ore; LCMS a indicat că nu este prezent alcool. Reacţia a fost diluată cu EtOAc (15 mL) şi spălată cu NaHCO3 saturat (4 mL), apoi spălat cu NH4Cl saturat (4 mL), apoi spălat cu saramură (4 mL). Substanţele organice au fost uscate peste Na2SO4, filtrat, concentrat în vid pentru a da un reziduu brut. Reziduul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (12 g SiO2, încărcat cu DCM minim, eluat cu 0 - 10% EtOAc în hexani pe un gradient de 10% volume pe coloană). Fracţiile pure au fost combinate şi solventul a fost evaporat în vid pentru a da produsul terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluorometil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[1-[(3-terţ-butilfenil)metil]but-3-enoxi]-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-tert-butoxicarbonil-carbamat (59 mg, 43%) sub formă de reziduu transparent incolor. ESI-MS m/z calculat 888,3897, găsit 789,7 (M-99)+; Timp de retenţie: 9,77 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 × 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5 - 100% faza mobilă B timp de 12 minute. Faza mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 3: terţ-Butil N-[(6R)-6-benziloxi-12-[(3-terţ-Butilfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z)
Un flacon a fost încărcat cu terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[1-[(3-terţ-butilfenil)metil]but-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (25 mg, 0,0281 mmol) urmat de 1,2-dicloretan (15 mL) sub argon. Soluţia de reacţie a fost tratată cu catalizator Zhan-1B (2,5 mg, 0,0034 mmol) la temperatura camerei. Reacţia a fost încălzită la 70 °C timp de 15 h. Vasul a fost îndepărtată de la căldură. LCMS a indicat SM rămas 15%. Reacţia a fost încălzită la 70 °C timp de un total de 24 h. LCMS a indicat fără conversie suplimentară a materialului de pornire la produşi. Conţinutul vasului de reacţie a fost concentrat în SiO2. Materialul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (4 g SiO2, uscat, eluat cu 0 - 15% EtOAc în hexani timp de un gradient de 20 min.). Materialul a fost recuperat impur şi fracţiile au fost combinate şi solventul a fost evaporat în vid pentru a da produsul, terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-12-[(3-terţ-butilfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (10,7 mg, 38%) ca un amestec de diastereomeri ca un ulei transparent. Materialul a fost utilizat fără purificare suplimentară în etapa următoare. ESI-MS m/z calc. 860,3584, găsit 789,7 (M-OtBu)+; Timp retenţie: 9,58 minute; Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 × 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 - 100% fază mobilă B timp de 12 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 4: terţ-Butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R)-12-[(3-terţ-Butilfenil)metil]-6-hidroxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat
Un flacon a fost încărcat cu terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-12-[(3-terţ-butilfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (11 mg, 0,0109 mmol) în EtOH (0,61 mL). Apoi a fost barbotat N2 prin soluţie timp de 5 minute. Apoi soluţia a fost tratată cu Pd/C (2,4 mg, 10 % g/g, 0,0023 mmol) la temperatura camerei şi N2 a fost barbotat prin soluţie timp de 5 minute. Apoi gaz H2 a fost barbotat prin amestec timp de 20 min. şi menţinere sub o atmosferă de H2 cu un balon. Reacţia a fost completă în 13 h. Amestecul a fost diluat cu EtOAc şi filtrat prin Celite. Filtratul a fost concentrat în vid pentru a da produsul terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R)-12-[(3-terţ-butilfenil)metil]-6-hidroxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (10 mg, 100%) ca un ulei galben pal care a devenit o spumă de tip răşină prin uscare. ESI-MS m/z calc. 772,3271, găsit 673,5 (M-99)+; Timp retenţie: 8,89 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 × 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 - 100% fază mobilă B timp de 12 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 5: (6R)-17-Amino-12-[(3-terţ-Butilfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol
Un flacon de microunde de sticlă cu perete subţire a fost încărcat cu terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R)-12-[(3-terţ-butilfenil)metil]-6-hidroxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (10 mg, 0,0129 mmol) într-o soluţie de hexafluor-2-propanol (0,25 mL). Reacţia a fost încălzită la 100 °C într-un vas de microunde timp de 3 ore. LCMS a indicat faptul că transformarea a fost completă. Reacţia a fost concentrată în vid pentru a da un reziduu brut al produsului ţintă (6R)-17-amino-12-[(3-terţ-butilfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo(12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (7,4 mg, 98%) ca o răşină galben închis. ESI-MS m/z calc. 572,2222, găsit 573,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,68 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 × 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 - 100% fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 6: (6R)-17-Amino-12-[(3-terţ-Butilfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 51, şi (6R)-17-amino-12-[(3-terţ-Butilfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 52
(6R)-17-Amino-12-[(3-terţ-butilfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (79,3 mg, 0,1338 mmol) a fost purificat prin SFC preparativă prin eluare cu 15% metanol la CO2 prin pat de Cellulose-4 (40 °C; 100 Bar; Rată flux: 4 mL/min; 10% MeOH; rulare 8,5 min), pentru a da cei doi diastereoizomeri. Prima eluare a dat (6R)-17-amino-12-[(3-terţ-butilfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1) (30,0 mg, 39%) ca un solid alb mat cu o puritate de 99,3%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,72 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,24 - 7,12 (m, 2H), 7,11 - 7,02 (m, 1H), 6,41 - 6,32 (m, 2H), 4,93 - 4,70 (m, 1H), 3,07 (d, J= 14,1 Hz, 1H), 2,96 - 2,81 (m, 1H), 2,55 - 2,39 (m, 1H), 2,29 - 2,15 (m, 1H), 2,14 - 1,98 (m, 1H), 1,73 - 1,43 (m, 6H), 1,36 - 1,14 (m, 10H) ppm. 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,12 (s, 3F), -79,06 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 572,2222, găsit 573,0 (M+1)+; Timp retenţie: 3,95 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Continuarea eluării a dat (6R)-17-amino-12-[(3-terţ-butilfenil)metil]-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2) (28,6 mg, 37%) ca un solid alb mat cu o puritate de 99,9%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,72 (s, 1H), 7,59 (br. s, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,24 - 7,15 (m, 2H), 7,13 - 7,00 (m, 1H), 6,42 - 6,28 (m, 2H), 4,87 (t, J = 9,0 Hz, 1H), 3,09 (d, J= 12,8 Hz, 1H), 2,89 (dd, J = 14,4, 8,4 Hz, 1H), 2,42 - 2,26 (m, 2H), 2,15 - 1,99 (m, 1H), 1,83 - 1,59 (m, 3H), 1,57 - 1,39 (m, 3H), 1,37 - 1,28 (m, 1H), 1,25 (s, 9H) ppm. 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,12 (s, 3F), -76,37 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 572,2222, găsit 573,0 (M+1)+; Timp retenţie: 3,94 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic) 1,2 mL/min.
Exemplul 37: Preparare (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,8-diol (diastereomer 1), Compus 53
Etapa 1: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-8-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 1)
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8, 14, 16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (230 mg, 0,2964 mmol) în THF (3,7 mL) la 0 °C sub azot s-a adăugat în picătură complex dimetil sulfură de bor (80,100 mg, 0,1 mL, 1,0544 mmol). Amestecul a fost agitat la 0 °C timp de 10 min şi la temperatura camerei timp de 1 h şi re-răcit până la 0 °C. NaOH în apă (1,8 mL de 1 M, 1,8000 mmol) s-a adăugat, urmat de H2O2 în apă (688,93 mg, 0,6207 mL de 30% g/g, 6,0762 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 50 min. Au fost adăugate o soluţie apoasă 10% tiosulfat de sodiu (9 mL) şi soluţie salină (7 mL). Amestecul a fost agitat la 0 °C timp de 10 min şi extras cu etil acetat (3 X 20 mL). Straturile organice combinate au fost uscate cu sulfat de sodiu anhidru, filtrate şi concentrate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (24 g SiO2, prin eluare 0% până la 10% etil acetat/diclormetan) pentru a da a amestec conţinând diastereomeri mono-boc, terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-8-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (59 mg, 16%) ca un ulei clar cu unele impurităţi încă prezente, ESI-MS m/z calc. 646,2226, găsit 647,2 (M+1)+; Timp retenţie: 4,16 minute (Kinetex polar C18 (3,0 X 50 mm) 2,6 µm, 6 min, 5% - 95% acetonitril în H2O (0,1% acid formic), Flux = 1,2 mL/min). Acest material a fost uscat pe silica gel şi purificat prin cromatografie lichidă pe o coloană de 12 g silica gel coloană prin eluare cu 0% până la 30% porţii de etil acetat în heptani. La 16% etil acetat în heptani, produsul ţintă eluat, terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-8-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 1) (17 mg, 26%) şi a fost izolat ca o spumă vâscoasă albă care încă a conţinut unele impurităţi minore. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,28 (s, 1H), 9,13 (s, 1H), 7,40 - 7,28 (m, 5H), 5,10 - 4,99 (m, 1H), 4,73 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,65 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 4,24 - 4,15 (m, 1H), 2,72 - 2,61 (m, 1H), 2,57 - 2,48 (m, 1H), 2,47 - 2,36 (m, 1H), 2,25 - 2,13 (m, 1H), 1,85 - 1,61 (m, 5H), 1,56 (s, 9H), 1,46 (d, J = 6,1 Hz, 3H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,93 (s, 3F), -74,31 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 646,2226, găsit 647,2 (M+1)+; Timp retenţie: 4,15 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm) 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% MeCN în H2O (0,1% acid formic), Flux = 1,2 mL/min.
Etapa 2: [(6R,12R)-6-Benziloxi-17-(terţ-butoxicarbonilamino)-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-8-il]acetat (diastereomer 1)
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-8-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 1) (15 mg, 0,0232 mmol) în CH2Cl2 (1 mL) la 0 °C s-a adăugat DMAP (8 mg, 0,0655 mmol), urmat de anhidridă acetică (6 mg, 0,0055 mL, 0,0588 mmol). Amestecul a fost agitat la tc. timp de 2,5 h şi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (12 g SiO2, prin eluare 0 la 25% EtOAc/heptani) pentru a da [(6R,12R)-6-benziloxi-17-(terţ-butoxicarbonilamino)-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-8-il]acetat (diastereomer 1) (14 mg, 88%) ca ulei galben pal. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,23 (s, 1H), 9,13 (s, 1H), 7,36 - 7,27 (m, 5H), 5,44 - 5,33 (m, 1H), 4,95 - 4,84 (m, 1H), 4,78 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,60 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 2,68 - 2,56 (m, 2H), 2,55 - 2,45 (m, 1H), 2,20 - 2,10 (m, 1H), 2,01 (s, 3H), 1,74 - 1,64 (m, 1H), 1,56 (s, 9H), 1,53 - 1,46 (m, 1H), 1,44 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,41 - 1,30 (m, 2H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,94 (s, 3F), -74,58 (s, 3F) ppm.
Etapa 3: [(6R,12R)-17-Amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-8-il] acetat (diastereomer 1)
La o soluţie de [(6R,12R)-6-benziloxi-17-(terţ-butoxicarbonilamino)-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-8-il]acetat (diastereomer 1) (14 mg, 0,0203 mmol) în CH2Cl2 (2 mL) la 0 °C s-a adăugat TFA (740,00 mg, 0,5 mL, 6,4899 mmol). Amestecul a fost agitat la 10 - 13 °C timp de 1,5 h. Solvenţii au fost îndepărtaţi printr-un flux slab de azot. Reziduul a fost tratat cu 2 picături de 28% soluţie apoasă de amoniu şi purificat prin cromatografie pe gel de silice (4 g SiO2, prin eluare 10% până la 40% EtOAc/heptani) pentru a da [(6R,12R)-17-amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-8-il] acetat (diastereomer 1) (9 mg, 75%) ca ulei galben pal. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,45 (s, 1H), 7,37 - 7,28 (m, 5H), 5,45 - 5,37 (m, 1H), 5,34 (s, 2H), 4,90 - 4,80 (m, 1H), 4,77 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,61 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 2,70 - 2,46 (m, 3H), 2,23 - 2,12 (m, 1H), 2,01 (s, 3H), 1,73 - 1,62 (m, 1H), 1,55 - 1,43 (m, 2H), 1,41 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,37 - 1,29 (m, 1H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -64,02 (s, 3F), -74,67 (s, 3F) ppm.
Etapa 4: (6R,12R)-17-Amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-8-ol (diastereomer 1)
La o soluţie de [(6R,12R)-17-amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-8-il] acetat (diastereomer 1) (9 mg, 0,0153 mmol) în THF (2 mL) s-a adăugat soluţie apoasă de NaOH (0,4 mL de 1 M, 0,4000 mmol). Amestecul a fost agitat la tc. timp de 1 h. MeOH (395,50 mg, 0,5 mL, 12,343 mmol) s-a adăugat. Amestecul a fost agitat la temperatura camerei peste noapte. Amestecul a fost concentrat şi reziduul a fost tratat cu soluţie saturată apoasă de NaHCO3 (3 mL). Amestecul a fost extras cu EtOAc (3 X 8 mL). Straturile organice combinate au fost uscate cu Na2SO4, filtrate şi concentrate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (4 g SiO2, prin eluare 20% până la 50% EtOAc/heptani) pentru a da (6R,12R)-17-amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-8-ol (diastereomer 1) (8 mg, 96%) ca ulei galben pal. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,45 (s, 1H), 7,38 - 7,28 (m, 5H), 5,36 (s, 2H), 5,04 - 4,92 (m, 1H), 4,76 - 4,69 (m, 1H), 4,68 - 4,61 (m, 1H), 4,27 - 4,17 (m, 1H), 2,71 - 2,62 (m, 1H), 2,56 - 2,38 (m, 2H), 2,29 - 2,18 (m, 1H), 1,85 - 1,69 (m, 2H), 1,67 - 1,61 (m, 1H), 1,54 - 1,47 (m, 1H), 1,43 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,39 - 1,33 (m, 1H) ppm. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,99 (s, 3F), -74,38 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 546,17017, găsit 546,9 (M+1)+; Timp retenţie: 2,22 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm), 2,6 µm, 3 min, 5 - 95% MeCN în H2O (0,1% acid formic), Flux = 1,2 mL/min.
Etapa 5: (6R,12R)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,8-diol (diastereomer 1), Compus 53
Un amestec de (6R,12R)-17-amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-8-ol (diastereomer 1) (8 mg, 0,0146 mmol) şi paladiu pe cărbune 5% umiditate (7 mg, 0,0033 mmol) în MeOH (2 mL) a fost agitat sub hidrogen (balon) la temperatura camerei peste noapte. Amestecul a fost filtrat prin pământ de diatomee şi spălat cu EtOAc. Filtratul a fost concentrat şi reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (12 g SiO2, prin eluare 30% până la 50% EtOAc/pentan) şi uscat prin congelare pentru a da (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaene-6,8-diol (diastereomer 1) (4,6 mg, 68%) ca solid galben pal. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,76 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 6,37 (s, 2H), 5,01 - 4,89 (m, 1H), 4,55 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 3,94 - 3,79 (m, 1H), 2,39 - 2,09 (m, 4H), 1,83 - 1,69 (m, 1H), 1,45 - 1,37 (m, 1H), 1,34 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,27 - 1,13 (m, 2H) ppm. 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,51 (s, 3F), -76,79 (s, 3F) ppm. ESI-MS m/z calc. 456,12323, găsit 456,9 (M+1)+; Timp retenţie: 2,78 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm), 2,6 µm, 6 min, 5 - 95% MeCN în H2O (0,1% acid formic), Flux = 1,2 mL/min.
Exemplul 38: Preparare (6R)-17-amino-12-Etil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 54, şi (6R)-17-amino-12-Etil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 55
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-(1-Etilpent-4-enoxi)-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
O soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1 g, 1,4824 mmol), hept-6-en-3-ol (260 mg, 2,2770 mmol), şi trifenilfosfină (800 mg, 0,7067 mL, 3,0501 mmol) în THF (40 mL) la 0 °C a fost agitată timp de 30 min şi DIAD (626,40 mg, 0,6 mL, 3,0978 mmol) s-a adăugat în picătură. Amestecul de reacţie a fost încălzit până la rt şi agitat timp de 2 h. Amestecul de reacţie a fost concentrat şi reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (40 g coloană, 0 la 15 % EtOAc în hexani timp de 30 min) a dat un ulei clar, terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-(1-etilpent-4-enoxi)-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1,07 g, 94 %). 1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 7,82 (s, 1H), 7,41 - 7,18 (m, 5H), 5,98 - 5,86 (m, 1H), 5,85 - 5,72 (m, 1H), 5,32 - 5,21 (m, 2H), 5,18 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 4,99 - 4,93 (m, 1H), 4,91 (dd, J = 10,2, 2,4 Hz, 1H), 4,80 (dd, J = 10,7, 2,7 Hz, 1H), 4,62 (dd, J = 10,6, 5,7 Hz, 1H), 3,28 - 3,08 (m, 2H), 2,22 - 2,03 (m, 2H), 1,93 - 1,83 (m, 1H), 1,81 - 1,70 (m, 3H), 1,42 (s, 18H), 0,96 - 0,88 (m, 3H). ESI-MS m/z calc. 770,3114, găsit 671,5 (M+H-Boc)+; Timp retenţie: 4,74 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 % până la 100 % fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 2: terţ-Butil N-[(6R)-6-benziloxi-12-Etil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z)
O soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-(1-etilpent-4-enoxi)-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (0,88 g, 1,0846 mmol) în DCE (200 mL) a fost degazat timp de 15 min şi încălzită la 50 °C sub atmosferă de azot timp de 15 min. Catalizator Zhan-1B (200 mg, 0,2722 mmol) a fost apoi adăugat şi amestecul a fost încălzit la 70 °C peste noapte. Amestecul de reacţie a fost răcit şi concentrat sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (40 g coloană, 0-10 % EtOAc în hexani) pentru a da un solid alb, terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-12-etil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (0,85 g, 91 %). ESI-MS m/z calc. 742,2801, găsit 643,3 (M+H-Boc)+; Timp retenţie: 4,68 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 % până la 100 % fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 3: terţ-Butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R)-12-Etil-6-hidroxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat
O soluţie de terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-12-etil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (0,746 g, 1,0044 mmol) în MeOH (40 mL) a fost purjat cu azot de trei ori. Apoi a fost reumplut cu hidrogen de două ori înainte de a fi supus hidrogenării la 60 psi timp de 22 de ore folosind un agitator Parr. După terminarea reacţiei, amestecul de reacţie a fost filtrat peste un strat de celită, iar turta de filtrare a fost clătită cu MeOH (3 X 20 mL). Filtratul combinat a fost concentrat, iar reziduul a fost uscat în vid peste noapte, rezultând sub forma unui ulei limpede, terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R)-12-etil-6-hidroxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (660 mg, 98 %). ESI-MS m/z calc. 654,24884, găsit 555,3 (M+H-Boc)+.
Etapa 4: (6R)-17-Amino-12-Etil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol
La o soluţie de terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R)-12-etil-6-hidroxi-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (660 mg, 0,9881 mmol) în DCM (50 mL) s-a adăugat TFA (14,800 g, 10 mL, 129,80 mmol). Soluţia galbenă rezultată a fost agitată la temperatura camerei timp de 2 h. Amestecul de reacţie a fost concentrat şi purificat prin cromatografie cu fază reversă (tampon A: apă tamponată cu 5 mM HCl; Tampon B: 100 % ACN, 55 % până la 100 % timp de 40 min) a dat după liofilizare o pulbere galbenă, (6R)-17-amino-12-etil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (sare clorhidrat) (255,7 mg, 51 %). 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6) δ 7,76 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 6,36 (s, 2H), 4,52 (dt, J = 26,9, 9,2 Hz, 1H), 2,48 - 2,39 (m, 1H), 2,18 (t, J = 11,4 Hz, 1H), 2,12 - 2,01 (m, 1H), 1,83 - 1,72 (m, 1H), 1,70 - 1,54 (m, 4H), 1,55 - 1,37 (m, 3H), 1,29 - 1,15 (m, 1H), 0,96 (t, J = 7,3 Hz, 3H). ESI-MS m/z calc. 454,14395, găsit 97,27 (M+1)+; Timp retenţie: 3,16 minute. Metodă LCMS: Waters Cortex 2,7 µm dimensiune particulă C18 (3,0 mm X 50 mm), 55 °C; Flux: 1,2 mL/min; fază mobilă: 100 % apă cu 0,1 % acid trifluoracetic apoi 100 % acetonitril cu 0,1 % acid trifluoracetic, gradient de 5 % până la 100 % B timp de 4 min, cu echilibrare la 100 % B timp de 0,5 min, apoi 5 % B timp de 1,5 min.
Etapa 5: (6R)-17-Amino-12-Etil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 54, şi (6R)-17-amino-12-Etil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 55
Amestecul diastereomeric, (6R)-17-amino-12-etil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (255,7 mg, 0,5622 mmol) a fost purificat prin SFC utilizând Cellulose 4 (250 X 30 mm, 5 µm dimensiune particulă) utilizând o rulare cu gradient dual de la 10 % EtOH (0,1 % dietilamină) şi 90 % CO2. Ambii izomeri au fost redizolvaţi în EtOAc (5 mL) apoi spălaţi cu 1 M HCl (1 X 10 mL), bicarbonat de sodiu saturat (1 X 10 mL) şi soluţie salină (1 X 10 mL). Stratul organic a fost uscat pe sulfat de sodiu anhidru, concentrat sub vid şi liofilizat. Vârful 1 SFC a dat un solid galben pal, (6R)-17-amino-12-etil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1) (134 mg, 52%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,77 (s, 1H), 7,60 (s, 1H), 6,36 (s, 2H), 4,51 (t, J = 9,0 Hz, 1H), 2,54 - 2,41 (m, 1H), 2,24 - 2,14 (m, 1H), 2,12 - 2,00 (m, 1H), 1,85 - 1,73 (m, 1H), 1,71 - 1,38 (m, 7H), 1,31 - 1,16 (m, 1H), 0,97 (t, J = 7,2 Hz, 3H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,45 (s, 3F), -79,05 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 454,144, găsit 455,2 (M+1)+; Timp retenţie: 3,54 minute. Vârful 2 SFC a dat un solid galben pal (6R)-17-amino-12-etil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2) (126 mg, 49%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,78 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 6,36 (s, 2H), 4,56 (t, J = 9,4 Hz, 1H), 2,46 - 2,36 (m, 1H), 2,35 - 2,24 (m, 1H), 2,14 - 2,05 (m, 1H), 1,87 - 1,66 (m, 3H), 1,64 - 1,35 (m, 5H), 1,33 - 1,20 (m, 1H), 0,97 (t, J = 7,2 Hz, 3H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,46 (s, 3F), -76,36 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 454,144, găsit 455,2 (M+1)+; Timp retenţie: 3,5 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Exemplul 39: Preparare (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,7-diol (enantiomer 1), Compus 56, şi (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,7-diol (enantiomer 2), Compus 57
Etapa 1: Etil 3-terţ-butoxi-2-hidroxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoat
Un flacon uscat la flacără a fost încărcat cu 2-aliloxi-2-metilpropan (5,55 g, 43,259 mmol), THF (100 mL) şi TMEDA (4,4175 g, 5,7 mL, 38,015 mmol). Balonul a fost răcit într-o baie de acetonă răcită pe gheaţă şi tratat în picătură cu o soluţie ciclohexan de sec-butillitiu (27 mL de 1,4 M, 37,800 mmol). După 45 minute, s-a adăugat soluţie de trimetilaluminu heptan (19 mL de 2 M, 38,000 mmol) şi amestecul de reacţie a fost agitat timp de încă 45 minute. Etil 3,3,3-trifluor-2-oxo-propanoat (5,1320 g, 4 mL, 30,173 mmol) s-a adăugat şi reacţia a fost agitată timp de aproximativ 4,0 ore într-o baie rece. Reacţia a fost temperată lent cu 1 N soluţie apoasă de HCl (150 mL) şi agitată viguros la temperatura camerei timp de câteva minute. Transferată la o pâlnie de separare de 1,0 L cu 1 N HCl (200 mL) şi extrasă cu dietil eter (1 X 300 mL, 2 X 150 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu soluţie saturată apoasă de bicarbonat de sodiu (200 mL), soluţie salină (200 mL), uscate peste sulfat de sodiu, filtrate, şi concentrate sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (330-g coloană, prin eluare de la 0 % până la 20 % etil acetat în heptani) pentru a da un ulei incolor şi o pereche de diastereomer singular, etil 3-terţ-butoxi-2-hidroxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoat (3,24 g, 38 %). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 5,87 (ddd, J = 17,7, 10,1, 7,9 Hz, 1H), 5,32 - 5,21 (m, 2H), 4,55 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 4,39 - 4,23 (m, 2H), 3,85 (s, 1H), 1,33 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 1,23 (s, 9H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ - 73,35 (s, 3F).
Etapa 2: Etil 2-benziloxi-3-terţ-butoxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoat
O soluţie de etil 3-terţ-butoxi-2-hidroxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoat (3,24 g, 11,398 mmol) în DMF (50 mL) a fost răcită într-o baie de gheaţă şi tratată cu o suspensie de ulei mineral hidrură de sodiu (563 mg, 60 % g/g, 14,076 mmol). După 40 minute, s-a adăugat brommetil benzen (2,6459 g, 1,84 mL, 15,470 mmol) şi reacţia a fost gradual încălzită la temperatura camerei şi agitată peste noapte. Transferată la o pâlnie de separare de 1,0 L cu apă (450 mL) şi stratul apos a fost extras cu MTBE (4 X 150 mL). Straturile organice combinate spălate cu apă (2 X 150 mL), soluţie salină (150 mL), uscate peste sulfat de sodiu, filtrate, şi concentrate sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (220 g coloană, prin eluare de la 0 % până la 20 % etil acetat în heptani) pentru a da un ulei incolor, etil 2-benziloxi-3-terţ-butoxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoat (3,86 g, 83 %). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,46 - 7,41 (m, 2H), 7,39 - 7,32 (m, 2H), 7,32 - 7,28 (m, 1H), 5,98 (ddd, J = 17,9, 9,3, 8,6 Hz, 1H), 5,27 - 5,22 (m, 1H), 5,21 (s, 1H), 4,92 - 4,85 (m, 1H), 4,79 - 4,73 (m, 1H), 4,59 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 4,28 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,32 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,20 (s, 9H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -65,50 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 374,1705, găsit 397,2 (M+23)+; Timp retenţie: 2,45 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 3: acid 2-Benziloxi-3-terţ-butoxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoic
O soluţie de hidroxid de sodiu (1,13 g, 28,252 mmol) în apă (10 mL) s-a adăugat la o soluţie de etil 2-benziloxi-3-terţ-butoxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoat (3,4 g, 8,6908 mmol) în metanol (30 mL). Amestecul de reacţie a fost agitat într-o baie de ulei la 70 °C timp de 4 zile. Reacţia a fost răcită până la temperatura camerei şi concentrată sub presiune redusă pentru a îndepărta metanol. S-a adăugat apă (100 mL) şi s-a acidulat la pH de 1-2 cu 1 N soluţie apoasă de HCl. Transferată la o pâlnie de separare de 500 mL şi stratul apos a fost extras cu etil acetat (3 X 100 mL). Straturile organice combinate spălate cu apă (100 mL), soluţie salină (100 mL), uscate peste sulfat de sodiu, filtrate şi concentrate sub presiune redusă pentru a da ulei galben, acid 2-benziloxi-3-terţ-butoxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoic (3,29 g, 97 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 14,11 (br. s., 1H), 7,45 - 7,26 (m, 5H), 5,86 (ddd, J = 17,6, 10,0, 8,1 Hz, 1H), 5,34 - 5,20 (m, 2H), 4,88 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 4,67 - 4,56 (m, 2H), 1,15 (s, 9H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -64,77 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 346,1392, nu s-a găsit ionizare; Timp retenţie: 2,15 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 4: 2-Benziloxi-3-terţ-butoxi-2-(trifluormetil)pent-4-enhidrazidă
O soluţie de acid 2-benziloxi-3-terţ-butoxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoic (3,29 g, 8,4354 mmol) şi trietilamină (2,5410 g, 3,5 mL, 25,111 mmol) în DMF (50 mL) a fost tratată cu HATU (6,46 g, 16,990 mmol) şi agitată la temperatura camerei timp de 20 minute. Răcită pe o baie de gheaţă şi adăugat hidrazin H2O (6,7080 g, 10 mL, 87,099 mmol). După aproximativ 10 minute, s-a îndepărtat baia de gheaţă şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de aproximativ 18 ore. Transferată la o pâlnie de separare de 1,0 L cu apă (450 mL) şi stratul apos a fost extras cu etil acetat (4 X 150 mL). Straturile organice combinate spălate cu apă (2 X 250 mL), soluţie salină (200 mL), uscate peste sulfat de sodiu, filtrate, şi concentrate sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (220 g coloană, prin eluare de la 0 % până la 50 % etil acetat în heptani) pentru a da un ulei incolor, 2-benziloxi-3-terţ-butoxi-2-(trifluormetil)pent-4-enhidrazidă (2,836 g, 91 %) care s-a solidificat în repaus. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,08 (br. s., 1H), 7,45 - 7,25 (m, 5H), 5,81 (ddd, J = 17,4, 10,5, 7,1 Hz, 1H), 5,27 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,21 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 5,11 - 4,99 (m, 2H), 4,90 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,36 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 1,18 (s, 9H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -67,28 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 360,1661, găsit 305,1 (M-55)+; Timp retenţie: 2,13 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particule, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (modificator 0,1 % acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 5: terţ-Butil N-[2-[[[2-benziloxi-3-terţ-butoxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil] amino] carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil] carbamat
Un amestec de acid 6-brom-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (661 mg, 1,7163 mmol) şi 2-benziloxi-3-terţ-butoxi-2-(trifluormetil)pent-4-enhidrazidă (601 mg, 1,6260 mmol) în etil acetat (10 mL) a fost tratat succesiv cu piridină (508,56 mg, 0,52 mL, 6,4293 mmol) şi soluţie etil acetat de T3P (1,86 g, 50 % g/g, 2,9229 mmol) la temperatura camerei., Amestecul de reacţie a fost agitat timp de 23 ore, transferat la o pâlnie de separare de 250 mL cu soluţie saturată apoasă de clorură de amoniu (100 mL) şi extras cu etil acetat (2 X 75 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu soluţie saturată apoasă de bicarbonat de sodiu (100 mL), soluţie salină (100 mL), uscate peste sulfat de sodiu, filtrate, şi concentrate sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (80-g coloană, prin eluare de la 0 % până la 50 % etil acetat în heptani) pentru a da un ulei pal auriu, terţ-butil N-[2-[[[2-benziloxi-3-terţ-butoxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (1,1 g, 92 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,04 (s, 1H), 10,84 (s, 1H), 10,10 (s, 1H), 9,13 (s, 1H), 7,47 - 7,41 (m, 2H), 7,40 - 7,33 (m, 2H), 7,33 - 7,28 (m, 1H), 6,02 (ddd, J = 17,1, 10,6, 6,4 Hz, 1H), 5,46 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,35 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 5,19 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 5,10 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 4,95 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 1,49 (s, 9H), 1,22 (s, 9H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,86 (s, 3F), -67,31 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 726,1488, găsit 571,0 (M-155)+; Timp retenţie: 2,85 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (modificator 0,1 % acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 6: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2-terţ-butoxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
O soluţie de terţ-butil N-[2-[[[2-benziloxi-3-terţ-butoxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (1,1 g, 1,4969 mmol) şi DIPEA (682,64 mg, 0,92 mL, 5,2818 mmol) în acetonitril (24 mL) a fost încălzită într-o baie de ulei la 60 °C. S-a adăugat p-TsCl (322 mg, 1,6890 mmol) şi reacţia a fost încălzită în baia de ulei timp de 90 minute. Odată răcită până la temperatura camerei, reacţia a fost concentrată sub presiune redusă pentru a îndepărta acetonitril. Se transferă la o pâlnie de separare de 250 mL cu soluţie saturată apoasă de bicarbonat de sodiu (100 mL) şi stratul apos a fost extras cu etil acetat (2 X 75 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu soluţie salină (100 mL), uscate peste sulfat de sodiu, filtrate, şi concentrate sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (80 g coloană, prin eluare de la 0 % până la 30 % etil acetat în heptani) pentru a da un ulei auriu pal, terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2-terţ-butoxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (0,96 g, 88 %). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 10,26 (s, 1H), 9,37 (s, 1H), 7,57 - 7,51 (m, 2H), 7,46 - 7,38 (m, 2H), 7,36 - 7,30 (m, 1H), 6,01 (ddd, J = 17,5, 9,4, 8,3 Hz, 1H), 5,32 - 5,20 (m, 2H), 4,90 - 4,83 (m, 1H), 4,83 - 4,75 (m, 2H), 1,58 (s, 9H), 1,12 (s, 9H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,73 (s, 3F), -66,73 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 708,1382, găsit 597,0 (M-111)+; Timp retenţie: 4,85 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge C18 (4,6 X 75 mm, 5 mm dimensiune particulă, 6 minute rulare cu 1 minute echilibrare, Iniţial fază mobilă la 95 % soluţie apoasă de NH4HCO3/5 % acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95 % MeCN şi menţinere timp de 3 minute, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 7: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2-terţ-butoxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
O soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2-terţ-butoxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (1,21 g, 1,6697 mmol), DIPEA (237,44 mg, 0,32 mL, 1,8372 mmol) şi DMAP (10 mg, 0,0819 mmol) în MTBE (25 mL) a fost tratată cu di-terţ-butil dicarbonat (479 mg, 0,5042 mL, 2,1948 mmol) şi agitată la temperatura camerei timp de aproximativ 5 ore. Amestecul de reacţie a fost transferat la o pâlnie de separare de 125 mL cu apă (75 mL) şi MTBE (100 mL). După extracţie, straturile au fost separate, şi stratul organic a fost spălat cu soluţie salină (75 mL). Stratul organic a fost uscat peste sulfat de sodiu, filtrate, şi concentrat sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (80 mg coloană, prin eluare de la 0 % până la 25 % etil acetat în heptani) pentru a da un ulei incolor, terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2-terţ-butoxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1,26 g, 91 %) care a solidificat în repaus până la un solid alb. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,95 (s, 1H), 7,57 - 7,48 (m, 2H), 7,45 - 7,37 (m, 2H), 7,36 - 7,30 (m, 1H), 5,98 (ddd, J = 17,4, 9,7, 7,9 Hz, 1H), 5,28 - 5,15 (m, 2H), 4,86 - 4,72 (m, 3H), 1,44 (s, 18H), 1,08 (s, 9H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,74 (s, 3F), -66,63 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 808,1906, găsit 597,0 (M-211)+; Timp retenţie: 4,57 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge C18 (4,6 X 75 mm, 5 mm dimensiune particulă, 6 minute rulare cu 1 minute echilibrare, Iniţial fază mobilă la 95 % soluţie apoasă de NH4HCO3/5 % acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95 % MeCN şi menţinere timp de 3 minute, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 8: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2-terţ-butoxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
La un amestec de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2-terţ-butoxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1,18 g, 1,4575 mmol) în DMSO (12 mL) s-a adăugat acetat de cesiu (899 mg, 4,6835 mmol). Amestecul a fost agitat la 85 °C timp de 5 h şi răcit până la rt. Amestecul a fost transferat la o pâlnie de separare de 250 mL cu soluţie saturată apoasă de clorură de amoniu (25 mL) şi apă (125 mL) şi extras cu 1:1 amestec de MTBE şi heptani (3 X 50 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu apă (2 X 50 mL), soluţie salină (50 mL), uscate peste sulfat de sodiu, filtrate şi concentrate sub presiune redusă pentru a da un solid spumos alb mat, terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2-terţ-butoxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1,2 g, 105 %, contaminat cu MTBE rezidual). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,75 (s, 1H), 7,45 - 7,30 (m, 5H), 7,16 - 7,08 (m, 1H), 6,03 - 5,91 (m, 1H), 5,31 - 5,21 (m, 2H), 4,91 - 4,75 (m, 3H), 1,47 (s, 9H), 1,42 (s, 9H), 1,07 (s, 9H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -65,88 (br. s., 3F), -66,39 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 746,275, găsit 535,2 (M-211)+; Timp retenţie: 3,35 minute. Metodă LCMS: SunFire C18 (75 X 4,6 mm, 3,5 mm dimensiune particulă, 6 minute rulare, condiţii fază mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril timp de 4 min, apoi menţinut timp de 2 min la 95 % acetonitril, temperatură = 45 °C, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 9: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2-terţ-butoxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
O soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2-terţ-butoxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1,0883 g, 1,4575 mmol) şi (2S)-hex-5-en-2-ol (494 mg, 4,4389 mmol) în toluen (24 mL) a fost tratată succesiv cu trifenilfosfină (883 mg, 3,3666 mmol) şi DIAD (677,82 mg, 0,66 mL, 3,3521 mmol) şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 19 ore. Concentrare sub presiune redusă şi purificarea prin cromatografie pe gel de silice (80 g coloană, prin eluare de la 0 % până la 20 % etil acetat în heptani) pentru a da un ulei incolor, terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2-terţ-butoxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1,07 g, 68 %). ESI-MS m/z calc. 828,3533, găsit 617,2 (M-211)+; Timp retenţie: 5,09 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge C18 (4,6 X 75 mm, 5 mm dimensiune particulă, 6 minute rulare cu 1 minut echilibrare, fază mobilă iniţial la 95 % soluţie apoasă de NH4HCO3/5 % acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95 % MeCN şi menţinere timp de 3 minute, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 10: 4-[5-[3-Amino-6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-4-benziloxi-5,5,5-trifluor-pent-1-en-3-ol
O soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2-terţ-butoxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1,07 g, 1,2910 mmol) în diclormetan (15 mL) şi TFA (22,200 g, 15 mL, 194,70 mmol) a fost agitată la temperatura camerei timp de 4,5 ore. Reacţia a fost concentrată sub presiune redusă şi reziduul a fost transferat la o pâlnie de separare de 250 mL cu diclormetan (50 mL) şi soluţie saturată apoasă de bicarbonat de sodiu (75 mL). După extracţie, straturile au fost separate, şi stratul apos a fost extras din nou cu diclormetan (2 X 50 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu soluţie salină (50 mL), uscate peste sulfat de sodiu, filtrate, şi concentrate sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (40 g coloană, prin eluare de la 0 % până la 30 % etil acetat în heptani) pentru a da ca ulei galben şi amestec diastereomeric 1:1 de 4-[5-[3-amino-6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-4-benziloxi-5,5,5-trifluor-pent-1-en-3-ol (585 mg, 72 %). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,51 - 7,43 (m, 3H), 7,41 - 7,31 (m, 3H), 6,06 - 5,92 (m, 1H), 5,91 - 5,76 (m, 1H), 5,63 (br. s., 2H), 5,36 (d, J = 17,1 Hz, 1H), 5,25 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 5,22 - 5,14 (m, 1H), 5,13 - 5,04 (m, 1H), 5,04 - 4,85 (m, 3H), 4,84 - 4,76 (m, 1H), 3,01 - 2,75 (m, 1H), 2,29 - 2,07 (m, 2H), 1,93 - 1,82 (m, 1H), 1,76 - 1,64 (m, 1H), 1,37 (d, J = 6,1 Hz, 3H, diastereomer A), 1,32 (d, J = 6,1 Hz, 3H, diastereomer B). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -64,19 (s, 3F), -68,24 (s, 3F, diastereomer A), -68,30 (s, 3F, diastereomer B). ESI-MS m/z calc. 572,1858, găsit 573,2 (M+1)+; Timp retenţie: 4,12 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge C18 (4,6 X 75 mm, 5 mm dimensiune particulă, 6 minute rulare cu 1 minute echilibrare, Iniţial fază mobilă la 95 % soluţie apoasă de NH4HCO3/5 % acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95 % MeCN şi menţinere timp de 3 minute, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 11: (12R)-17-Amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-7-ol (amestec E/Z, diastereomer 1 pereche)
O soluţie de 4-[5-[3-amino-6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-4-benziloxi-5,5,5-trifluor-pent-1-en-3-ol (98,7 mg, 0,1572 mmol) în dicloretan (50 mL) a fost barbotat cu azot gaz timp de 21 ore. Soluţia a fost încălzită într-o baie de ulei la 70 °C şi tratată cu catalizator Zhan-1B (8 mg, 0,0109 mmol). După 30 minute s-a adăugat o a doua porţie de catalizator Zhan-1B (8 mg, 0,0109 mmol) şi încălzit timp de 3 ore. Amestecul de reacţie a fost răcit până la temperatura camerei, s-a adăugat DMSO (4 picături) şi concentrat sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (24 g coloană, prin eluare de la 0 % până la 40 % etil acetat în heptani) pentru a da un ulei auriu închis, (12R)-17-amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-7-ol (amestec E/Z, diastereomer 1 pereche) (79,6 mg, 76 %). ESI-MS m/z calc. 544,1545, găsit 545,2 (M+1)+; Timp retenţie: 3,85 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge C18 (4,6 X 75 mm, 5 mm dimensiune particulă, 6 minute rulare cu 1 minute echilibrare, Iniţial fază mobilă la 95 % soluţie apoasă de NH4HCO3/5 % acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95 % MeCN şi menţinere timp de 3 minute, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 12: (12R)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,7-diol (enantiomer 1), Compus 56, şi (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,7-diol (enantiomer 2), Compus 57
O soluţie de (12R)-17-amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-7-ol (amestec E/Z, diastereomer 1 pereche) (25 mg, 0,0459 mmol) în metanol (2 mL) a fost purjată de trei ori cu azot gaz. S-a adăugat paladiu pe cărbune (30 mg, 5 % g/g, 0,0141 mmol), reacţia purjată de trei ori cu hidrogen gaz şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 5 ore. Reacţia a fost purjată de două ori cu azot, filtrată pe un pat de celită şi spălată cu metanol. Solventul a fost îndepărtat sub presiune redusă şi reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (4 g coloană, prin eluare de la 0 % până la 40 % etil acetat în heptani). Solidul rezultat a fost purificat prin SFC utilizând Cellulose 4 (150 X 12,2 mm, 5 µm dimensiune particulă) utilizând o rulare cu gradient dual de la 10 % MeOH (fără modificare) şi 90 % CO2 cu Rată flux de 75 mL/min pentru a da solid galben pal, (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaene-6,7-diol (enantiomer 1) (10,5 mg, 48 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,75 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 6,32 (s, 2H), 5,38 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 4,83 - 4,66 (m, 1H), 4,42 - 4,25 (m, 1H), 2,48 - 2,40 (m, 1H), 1,84 - 1,71 (m, 1H), 1,66 - 1,56 (m, 2H), 1,55 - 1,46 (m, 1H), 1,45 - 1,37 (m, 2H), 1,34 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,21 - 1,10 (m, 1H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,50 (s, 3F), -73,40 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 456,1232, găsit 457,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,38 minute. De asemenea, izolat ca un solid alb mat, (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaene-6,7-diol (enantiomer 2) (9 mg, 42 %). 1 H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,74 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 6,24 (s, 2H), 5,62 (d, J = 6,6 Hz, 1H), 5,04 - 4,86 (m, 1H), 4,19 - 3,99 (m, 1H), 2,43 - 2,29 (m, 1H), 2,20 - 2,08 (m, 1H), 2,07 - 1,95 (m, 1H), 1,64 - 1,43 (m, 3H), 1,32 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,30 - 1,20 (m, 2H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,46 (s, 3F), -73,70 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 456,1232, găsit 457,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,47 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge C18 (4,6 X 75 mm, 5 mm dimensiune particulă, 6 minute rulare cu 1 minute echilibrare, Iniţial fază mobilă la 95 % soluţie apoasă de NH4HCO3/5 % acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95 % MeCN şi menţinere timp de 3 minute, Flux = 1,5 mL/min).
Exemplul 40: Preparare (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,8-diol (diastereomer 2), Compus 58
Etapa 1: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-8-oxo-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-8-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (diastereomer 1) (120 mg, 0,1856 mmol) în CH2Cl2 (20 mL) la 0 °C s-a adăugat NaHCO3 (294 mg, 3,4997 mmol), urmat de Dess-Martin periodinan (102 mg, 0,2405 mmol) şi amestecul a fost agitat la tc. peste noapte. Amestecul a fost tratat cu 10 % Na2S2O3 apos (5 mL) şi agitat la tc. timp de 5 min. Amestecul rezultat a fost extras cu CH2Cl2 (3 X 15 mL). Straturile organice combinate au fost uscate peste Na2SO4, filtrate şi concentrate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (24 g coloană, prin eluare de la 0 % până la 30 % EtOAc/heptani) pentru a da un ulei incolor, terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-8-oxo-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (110 mg, 92 %). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 9,10 (br. s, 1H), 9,09 (s, 1H), 7,34 - 7,23 (m, 5H), 4,91 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,89 - 4,81 (m, 1H), 4,49 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,41 (d, J = 15,2 Hz, 1H), 3,16 (ddd, J = 19,1, 10,2, 2,7 Hz, 1H), 3,08 (d, J = 15,2 Hz, 1H), 2,64 - 2,54 (m, 1H), 2,43 - 2,32 (m, 1H), 1,98 - 1,86 (m, 1H), 1,56 (s, 9H), 1,50 - 1,35 (m, 5H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,89 (s, 3F), -74,36 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 644,207, găsit 589,1 (M-55)+; Timp retenţie: 5,46 minute. Metodă LCMS: SunFire C18 (75 X 4,6 mm, 3,5 mm dimensiune particulă, 6 minute rulare, condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril timp de 4 min, apoi menţinere timp de 2 min la 95 % acetonitril, temperatură = 45 °C, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 2: (6R,12R)-17-Amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-8-onă
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-8-oxo-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (26 mg, 0,0403 mmol) în CH2Cl2 (2 mL) la 0 °C s-a adăugat TFA (740,00 mg, 0,5 mL, 6,4899 mmol) în picătură. Amestecul a fost agitat la 8 până la 13 °C timp de 1 h. Solvenţii au fost îndepărtaţi sub flux slab de azot 10 °C cu agitare. Reziduul a fost tratat cu NaHCO3 sat. (5 mL) şi extras cu CH2Cl2 (3 X 8 mL). Straturile organice combinate au fost peste Na2SO4, filtrate şi concentrate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (12 g coloană, prin eluare de la 0 % până la 35 % EtOAc/heptani) pentru a da solid galben pal, (6R,12R)-17-amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-8-onă (21 mg, 96 %). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,43 (s, 1H), 7,35 - 7,27 (m, 5H), 5,27 (br. s, 2H), 4,89 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 4,87 - 4,80 (m, 1H), 4,47 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,39 (d, J = 15,2 Hz, 1H), 3,30 - 3,20 (m, 1H), 3,06 (d, J = 14,9 Hz, 1H), 2,62 - 2,53 (m, 1H), 2,43 - 2,32 (m, 1H), 1,98 - 1,87 (m, 1H), 1,47 - 1,41 (m, 1H), 1,39 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,37 - 1,32 (m, 1H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,99 (s, 3F), -74,33 (s, 3F).
Etapa 3: (6R,12R)-17-Amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-8-ol (diastereomer 2)
La o soluţie de (6R,12R)-17-amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-8-one (21 mg, 0,0386 mmol) în MeOH (3 mL) la 0 °C s-a adăugat borohidrură de tetrametilamoniu (9,6 mg, 0,1079 mmol). Amestecul a fost agitat la 0 °C timp de 1,5 h. S-a adăugat acetonă (0,5 mL) şi amestecul de reacţie a fost agitat la 0 °C timp de 5 min. Amestecul a fost tratat cu NaHCO3 sat. (5 mL) şi extras cu EtOAc (3 X 10 mL). Straturile organice combinate au fost uscate cu Na2SO4, filtrate şi concentrate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (24 g coloană, prin eluare de la 0 % până la 35 % EtOAc/heptani) pentru a da ulei galben pal, (6R,12R)-17-amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-8-ol (diastereomer 2) (20 mg, 95 %). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,45 (s, 1H), 7,33 - 7,27 (m, 2H), 7,27 - 7,20 (m, 3H), 5,25 (br. s, 2H), 5,04 - 4,94 (m, 2H), 4,93 - 4,82 (m, 1H), 4,57 (d, J= 11,2 Hz, 1H), 2,79 (br. s, 1H), 2,57 (dd, J= 15,2, 8,3 Hz, 1H), 2,35 - 2,24 (m, 1H), 2,12 (d, J = 15,2 Hz, 1H), 1,90 - 1,74 (m, 2H), 1,71 - 1,58 (m, 3H), 1,40 (d, J = 6,4 Hz, 3H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -64,03 (s, 3F), -74,22 (s, 3F).
Etapa 4: (6R,12R)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,8-diol (diastereomer 2), Compus 58
Un amestec de (6R,12R)-17-amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-8-ol (diastereomer 2) (23 mg, 0,0421 mmol) şi paladiu pe cărbune (9 mg, 10 % 50 % umiditate, 0,0042 mmol) în MeOH (4 mL) a fost agitat sub hidrogen balon la tc. peste noapte. Amestecul a fost filtrată prin Celite şi spălat cu EtOAc. Filtratul a fost concentrată şi reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (24 g coloană, prin eluare de la 20 % până la 50 % EtOAc/pentan) şi uscare prin congelare pentru a da solid galben pal (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,8-diol (diastereomer 2) (15 mg, 78 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,76 (s, 1H), 7,69 (s, 1H), 6,29 (s, 2H), 5,06 - 4,97 (m, 1H), 4,82 (d, J = 5,1 Hz, 1H), 4,47 - 4,37 (m, 1H), 2,29 - 2,20 (m, 1H), 2,13 - 1,92 (m, 3H), 1,72 - 1,52 (m, 2H), 1,49 - 1,37 (m, 1H), 1,33 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,30 - 1,23 (m, 1H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,48 (s, 3F), -78,47 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 456,1232, găsit 457,2 (M+1)+; Timp retenţie: 3,04 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Exemplul 41: Preparare (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-10,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 59
Etapa 1: terţ-Butil N-[[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamat
Un flacon de reacţie a fost încărcat cu (2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enhidrazidă (3,479 g, 12,069 mmol) şi TEA (3,7026 g, 5,1 mL, 36,591 mmol) în DCM (30 mL). Boc2O (3,26 g, 14,937 mmol) s-a adăugat şi amestecul de reacţie a fost agitat la tc. peste noapte. Reacţia a fost diluată cu DCM (100 mL) şi spălat cu 1 N HCl (30 mL), bicarbonat de sodiu saturat (30 mL) şi soluţie salină (30 mL). Stratul organic a fost uscat pe sulfat de sodiu anhidru şi concentrat sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0 % până la 30 % etil acetat în hexan pentru a da un solid alb, terţ-butil N-[[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamat (3,914 g, 84 %). ESI-MS m/z calc. 388,161, găsit 333,2 (M-55)+; Timp retenţie: 3,46 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 % până la 100 % fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 2: terţ-Butil N-[[(2R)-2-benziloxi-5-hidroxi-2-(trifluormetil)pentanoil] amino]carbamat
Într-o soluţie de terţ-butil N-[[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)pent-4-enoil]amino]carbamat (3,75 g, 9,6555 mmol) în THF anhidru (53 mL) s-a adăugat 9-Borabiciclo[3.3.1]nonan (105 mL de 0,5 M în THF, 52,500 mmol) în picătură la tc. şi reacţia a fost agitată la tc. timp de 80 minute. Reacţia a fost temperată cu metanol (16 mL) la 0 °C lent şi s-au adăugat NaOH (105 mL de 1 M, 105,00 mmol), H2O2 (17,649 g, 53 mL de 30 % g/g, 155,66 mmol). Reacţia a fost agitată la tc. timp de 1 oră şi diluată cu etil acetat (320 mL). Cele două straturi au fost separate, şi stratul apos a fost extras cu etil acetat (2 X 95 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu tiosulfat de sodiu saturat (130 mL) şi soluţie salină (130 mL), uscate peste sulfat de sodiu anhidru şi concentrate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 10 % până la 50 % acetonă în hexan pentru a da un solid alb, terţ-butil N-[[(2R)-2-benziloxi-5-hidroxi-2-(trifluormetil)pentanoil]amino]carbamat (3,76 g, 96 %). ESI-MS m/z calc. 406,1716, găsit 407,5 (M+1)+; Timp retenţie: 3,02 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 % până la 100 % fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 3: terţ-Butil N-[[(2R)-2-benziloxi-5-[(2S)-2-hidroxipropoxy]-2-(trifluormetil)pentanoil]amino]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[[(2R)-2-benziloxi-5-hidroxi-2-(trifluormetil)pentanoil] amino]carbamat (3,34 g, 8,2186 mmol) în THF (35 mL) s-a adăugat t-BuOK în THF (33 mL de 1 M, 33,000 mmol) la 0 °C şi agitat timp de 10 minute. S-a adăugat lent (2S)-2-metiloxiran (994,80 mg, 1,2 mL, 17,128 mmol) la 0 °C şi agitat timp de 10 minute. Amestecul de reacţie a fost agitat la 45 °C timp de 1,5 ore. Amestecul de reacţie a fost răcit până la temperatura camerei şi stins cu soluţie saturată apoasă de NH4Cl (70 mL). Amestecul a fost extras cu EtOAc (3 X 50 mL), spălat cu soluţie salină (70 mL), uscat peste Na2SO4, filtrat, şi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0 % până la 50 % EtOAc în hexan pentru a da un ulei galben pal, terţ-butil N-[[(2R)-2-benziloxi-5-[(2S)-2-hidroxipropoxy]-2-(trifluormetil)pentanoil]amino]carbamat (1,65 g, 42 %) ESI-MS m/z calc. 464,2134, găsit 465,4 (M+1)+; Timp retenţie: 3,06 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 % până la 100 % fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 4: terţ-Butil N-[[(2R)-2-benziloxi-5-[(2S)-2-[terţ-Butil(dimetil)silil]oxipropoxi]-2-(trifluormetil)pentanoil]amino]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[[(2R)-2-benziloxi-5-[(2S)-2-hidroxipropoxi]-2-(trifluormetil)pentanoil]amino]carbamat (1,65 g, 3,4458 mmol) în DMF (35 mL) s-a adăugat TBSCl (1,08 g, 7,1655 mmol) urmat de Imidazol (972,5 mg, 14,285 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura camerei timp de 3 ore. Amestecul de reacţie a fost temperat cu soluţie saturată apoasă de NH4Cl (70 mL), extras cu EtOAc (3 X 50 mL), spălat cu soluţie salină (70 mL), uscat peste Na2SO4, filtrat, şi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0 % până la 15 % EtOAc în hexan pentru a da un gel galben pal, terţ-butil N-[[(2R)-2-benziloxi-5-[(2S)-2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxipropoxi]-2-(trifluormetil)pentanoil]amino]carbamat (1,683 g, 84 %). ESI-MS m/z calc. 578,2999, găsit 579,7 (M+1)+; Timp retenţie: 4,47 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 % până la 100 % fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 5: (2R)-2-Benziloxi-5-[(2S)-2-[terţ-Butil(dimetil)silil]oxipropoxi]-2-(trifluormetil)pentanhidrazidă
O soluţie de terţ-butil N-[[(2R)-2-benziloxi-5-[(2S)-2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxipropoxi]-2-(trifluormetil)pentanoil]amino]carbamat (1,772 g, 3,0618 mmol) în HFIP (32 mL) a fost încălzită în reactor cu microunde la 100 °C timp de 1,5 h. Reacţia a fost concentrată şi reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0 % până la 80 % EtOAc în hexani pentru a da un gel clar (2R)-2-benziloxi-5-[(2S)-2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxipropoxi]-2-(trifluormetil)pentanhidrazidă (1,442 g, 98 %). ESI-MS m/z calc. 478,2475, găsit 479,2 (M+1)+; Timp retenţie: 3,96 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 % până la 100 % fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 6: terţ-Butil N-[2-[[[(2R)-2-benziloxi-5-[(2S)-2-[terţ-Butil(dimetil)silil]oxipropoxi]-2-(trifluormetil)pentanoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
Într-o soluţie de (2R)-2-benziloxi-5-[(2S)-2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxipropoxi]-2-(trifluormetil)pentanehidrazidă (1,44 g, 3,0086 mmol) şi acid 6-brom-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (1,38 g, 3,5832 mmol) în DMF anhidru (50 mL) s-a adăugat TEA (3,6518 g, 5,03 mL, 36,089 mmol), urmat de T3P (2,213 g, 2,07 mL de 50 % g/g, 3,4776 mmol) în etil acetat. Reacţia a fost agitată la tc. peste noapte. Din nou, la amestecul de reacţie s-a adăugat TEA (3,6518 g, 5,03 mL, 36,089 mmol), urmat de T3P (2,213 g, 2,07 mL de 50 % g/g, 3,4776 mmol) în etil acetat. Amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura camerei timp de 2 ore. Reacţia a fost temperată cu clorură de amoniu saturată (100 mL) şi etil acetat (150 mL). Stratul de soluţie apoasă a fost extras cu etil acetat (2 X 100 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu soluţie salină (2 X 100 mL), uscate pe sulfat de sodiu anhidru şi concentrate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0 % până la 20 % acetonă în hexan pentru a da o spumă albă mată terţ-butil N-[2-[[[(2R)-2-benziloxi-5-[(2S)-2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxipropoxi]-2-(trifluormetil)pentanoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (1,4724 g, 56 %). ESI-MS m/z calc. 844,2302, găsit 845,5 (M+1)+; Timp retenţie: 4,88 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 % până la 100 % fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 7: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-4-[(2S)-2-[terţ-Butil(dimetil)silil]oxipropoxi]-1-(trifluormetil)Butil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
Într-o soluţie de terţ-butil N-[2-[[[(2R)-2-benziloxi-5-[(2S)-2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxipropoxi]-2-(trifluormetil)pentanoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (1,457 g, 1,6711 mmol) şi DIEA (934,92 mg, 1,26 mL, 7,2338 mmol) în acetonitril (25 mL) s-a adăugat p-TsCl (359,8 mg, 1,8873 mmol). Reacţia a fost agitată la 70 °C timp de 1,5 ore. Solventul a fost îndepărtat şi reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0 % până la 20 % etil acetat în hexan pentru a da un gel galben, terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-4-[(2S)-2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxipropoxi]-1-(trifluormetil)butil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (1,2036 g, 87 %). ESI-MS m/z calc. 826,2196, găsit 827,5 (M+1)+; Timp retenţie: 5,25 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 % până la 100 % fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 8: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-4-[(2S)-2-[terţ-Butil(dimetil)silil]oxipropoxi]-1-(trifluormetil)Butil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
La un amestec de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-4-[(2S)-2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxipropoxi]-1-(trifluormetil)butil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (1,2036 g, 1,4541 mmol) şi DIEA (296,80 mg, 0,4 mL, 2,2964 mmol) în MTBE (14 mL) la temperatura camerei s-a adăugat DMAP (17,8 mg, 0,1457 mmol) urmat de (Boc)2O (539,8 mg, 2,4733 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura camerei timp de 17 ore. Amestecul a fost diluat cu EtOAc (60 ml), spălat cu apă (30 mL), soluţie salină (30 mL), uscat peste Na2SO4, filtrat şi concentrate Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (40 g coloană, de la 0 % până la 10 % EtOAc în Hexani,) pentru a da un gel galben slab, terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-4-[(2S)-2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxipropoxi]-1-(trifluormetil)butil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1,34 g, 99 %). ESI-MS m/z calc. 926,272, găsit 827,3 (M+H-Boc)+; Timp retenţie: 5,01 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 % până la 100 % fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 9: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-4-[(2S)-2-[terţ-Butil(dimetil)silil]oxipropoxi]-1-(trifluormetil)Butil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-4-[(2S)-2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxipropoxi]-1-(trifluormetil)butil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1,3 g, 1,4011 mmol) în DMSO (14 mL) s-a adăugat acetat de cesiu (808,8 mg, 4,2136 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 80 °C timp de 7 ore. Amestecul de reacţie a fost răcit până la temperatura camerei şi diluat cu EtOAc (120 mL) şi apă (40 mL). Straturile au fost separate, şi stratul organic a fost spălat cu apă (3 X 30 mL), soluţie salină (30 mL), uscată peste Na2SO4, filtrat, şi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0 % până la 50 % EtOAc în hexani pentru a da o spumă albă, terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-4-[(2S)-2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxipropoxi]-1-(trifluormetil)butil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1,0947 g, 90 %). 1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 7,75 (s, 1H), 7,35 - 7,28 (m, 5H), 4,84 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 4,62 (d, J= 10,8 Hz, 1H), 4,00 - 3,91 (m, 1H), 3,51 - 3,42 (m, 2H), 3,37 (dd, J= 9,5, 6,1 Hz, 1H), 3,24 (dd, J = 9,5, 5,1 Hz, 1H), 2,51 (t, J = 8,2 Hz, 2H), 1,86 - 1,77 (m, 1H), 1,76 - 1,67 (m, 1H), 1,40 (d, J = 4,5 Hz,18H), 1,15 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 0,88 (s, 9H), 0,07 (d, J = 7,2 Hz, 6H). ESI-MS m/z calc. 864,3564, găsit 765,8 (M+H-Boc)+; Timp retenţie: 4,75 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 % până la 100 % fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 10: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-4-[(2S)-2-hidroxipropoxy]-1-(trifluormetil)Butil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-4-[(2S)-2-[terţ-butil(dimetil)silil]oxipropoxi]-1-(trifluormetil)butil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1,079 g, 1,2475 mmol) în THF (10 mL) s-a adăugat TBAF în THF (12,5 mL de 1 M, 12,500 mmol), şi agitat la 35 °C timp de 3 ore. La amestecul de reacţie s-a adăugat soluţie apoasă saturată de NH4Cl (80 mL) şi extras cu EtOAc (3 X 50 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu apă (50 mL), soluţie salină (50 mL), uscate peste Na2SO4, filtrate, şi concentrate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0 % până la 80 % etil acetat în hexan pentru a da o spumă albă, terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-4-[(2S)-2-hidroxipropoxi]-1-(trifluormetil)butil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (916,6 mg, 98 %). 1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 7,81 (s, 1H), 7,36 - 7,27 (m, 5H), 4,90 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,78 (d, J = 10,8 Hz, 1H), 4,17 - 4,10 (m, 1H), 3,57 - 3,51 (m, 1H), 3,47 (dd, J = 9,0, 3,0 Hz, 1H), 3,45 - 3,39 (m, 1H), 3,24 (t, J = 8,9 Hz, 1H), 2,64 - 2,44 (m, 2H), 1,70 - 1,59 (m, 2H), 1,40 (d, J = 7,0 Hz, 18H), 1,23 (d, J = 6,4 Hz, 3H). ESI-MS m/z calc. 750,2699, găsit 651,4 (M+H-Boc)+; Timp retenţie: 3,75 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 % până la 100 % fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 11: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-10,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-4-[(2S)-2-hidroxipropoxy]-1-(trifluormetil)butil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (845,7 mg, 1,1266 mmol) şi PPh3 (778,2 mg, 2,9670 mmol) în THF (75 mL) la temperatura camerei s-a adăugat DIAD (605,52 mg, 0,58 mL, 2,9945 mmol) în picătură. Amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura camerei timp de 5 ore. Amestecul de reacţie a fost concentrat şi reziduul a fost purificat direct prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0 % până la 15 % etil acetat în hexan pentru a da o spumă albă, terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-10,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (416,8 mg, 50 %). ESI-MS m/z calc. 732,2594, găsit 733,5 (M+1)+; Timp retenţie: 4,36 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 % până la 100 % fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 12: terţ-Butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R,12R)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-10,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-10,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (391,2 mg, 0,5339 mmol) în etanol (45 mL) s-a adăugat 10 % Pd/C (200,3 mg, 1,8822 mmol). Amestecul de reacţie a fost degazat şi reumplut cu hidrogen gaz (X 2), şi amestecul de reacţie a fost agitat sub atmosferă de hidrogen la temperatura camerei timp de 16 ore. Amestecul de reacţie a fost filtrat prin Celite, spălat cu EtOAc (30 mL), şi concentrată pentru a da o spumă albă, terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R,12R)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-10,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (352,4 mg, 100 %). ESI-MS m/z calc. 642,2124, găsit 643,2 (M+1)+; Timp retenţie: 3,85 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 % până la 100 % fază mobilă B timp de 6 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 13: (6R,12R)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-10,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 59
O soluţie de terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R,12R)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-10,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (352,4 mg, 0,5320 mmol) în HFIP (15 mL) a fost plasată într-o fiolă de microunde şi etanşată. Acesta a fost încălzit la 100 °C într-un sintetizator de microunde timp de 2 ore. Reacţia a fost concentrată, iar reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând 0% până la 35% EtOAc în hexani pentru a da un solid alb-gălbui, (6R,12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-10,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (212,6 mg, 88 %). 1H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 7,43 (s, 1H), 5,20 (s, 2H), 4,90 (q, J = 6,9 Hz, 1H), 4,49 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 3,97 - 3,88 (m, 1H), 3,62 - 3,53 (m, 2H), 3,19 (t, J = 8,5 Hz, 1H), 2,45 (t, J = 12,1 Hz, 1H), 2,30 - 2,14 (m, 2H), 1,77 - 1,68 (m, 1H), 1,52 (d, J = 6,4 Hz, 3H). ESI-MS m/z calc. 442,10757, găsit 443,2 (M+1)+; Timp retenţie: 2,59 minute. Metodă LCMS: Cortess C18 2,7 µm dimensiune particulă (3,0 X 50 mm) comercializată de Waters (pn: 186007370), şi o rulare cu gradient dual de la 5 % până la 100 % fază mobilă B timp de 6,0 minute. Fază mobilă A = apă (+ 0,1% CF3CO2H), fază mobilă B = acetonitril (0,1% CF3CO2H), Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 2 µL şi temperatură coloană = 55 °C.
Exemplul 42: Preparare (6R,12R)-17-amino-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-8-onă, Compus 60
Etapa 1: (6R,12R)-17-Amino-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-8-onă, Compus 60
La o soluţie de (6R,12R)-17-amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-8-one (32 mg, 0,0588 mmol) în MeOH (4 mL) s-a adăugat paladiu pe cărbune (9,5 mg, 10 %, 50 % umiditate 0,0045 mmol). Amestecul a fost agitat sub atmosferă de hidrogen la tc. peste noapte. Amestecul a fost filtrat prin pământ de diatomee şi spălat cu EtOAc. Filtratul a fost concentrat şi reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (24 g coloană, prin eluare 20 % până la 40 % EtOAc/pentane) pentru a da solid galben pal, (6R,12R)-17-amino-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4, 14, 16-pentaen-8-onă (21 mg, 76 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,03 (s, 1H), 7,76 (s, 1H), 6,38 (s, 2H), 4,94 - 4,81 (m, 1H), 3,50 (d, J= 15,4 Hz, 1H), 3,30 - 3,23 (m, 1H), 3,01 (d, J= 15,4 Hz, 1H), 2,70 (ddd, J = 19,0, 6,4, 2,9 Hz, 1H), 2,35 - 2,20 (m, 1H), 1,89 - 1,74 (m, 1H), 1,44 - 1,27 (m, 5H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,58 (s, 3F), -76,69 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 454,1076, găsit 455,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,02 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Exemplul 43: Preparare (6R)-17-amino-11,11-dimetil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 61
Etapa 1: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-(2,2-dimetilpent-4-enoxi)-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
O soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (1,38 g, 1,8473 mmol) şi 2,2-dimetilpent-4-en-1-ol (630 mg, 5,5174 mmol) în toluen (17 mL) a fost tratată cu trifenilfosfină (998 mg, 3,8050 mmol) urmat de DIAD (770,25 mg, 0,75 mL, 3,8092 mmol) la temperatura camerei. Soluţia galbenă a fost agitată la temperatura camerei timp de 24 ore. Suspensia galbenă a fost concentrată şi reziduul a fost purificat prin cromatografie cu fază reversă (100 g C18 coloană, prin eluare cu 0 % până la 90 % acetonitril în apă cu 0,1 g/g % de acid formic timp de 5 volume coloană urmat de eluţie izocratică cu 90 % acetonitril în apă cu 0,1 g/g % de acid formic timp de 10 volume coloană) pentru a da un ulei galben pal, terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-(2,2-dimetilpent-4-enoxi)-5-(trifluormetil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (730 mg, 51 %). ESI-MS m/z calc. 770,3114, găsit 615,2 (M-155)+; Timp retenţie: 4,87 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge C18 (4,6 X 75 mm, 5 mm dimensiune particulă, 6 minute rulare cu 1 minute echilibrare, Iniţial fază mobilă la 95 % soluţie apoasă de NH4HCO3/5 % acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95 % MeCN şi menţinere timp de 3 minute, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 2: terţ-Butil N-[(6R)-6-benziloxi-11,11-dimetil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z)
Un balon uscat de 250 mL a fost încărcat cu toluen (100 mL) şi solventul a fost barbotat cu azot timp de 30 de minute. Catalizatorul Zhan 1B (40 mg, 0,0545 mmol) a fost adăugat sub un flux uşor de azot. Amestecul a fost barbotat cu azot timp de încă 10 minute şi încălzit la 110 °C. O soluţie barbotată cu azot de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluorometil)but-3-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-(2,2-dimetilpent-4-enoxi)-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (200 mg, 0,2595 mmol) în toluen (20 mL) s-a adăugat în picătură timp de 0,5 ore. După finalizarea adăugării, amestecul a fost barbotat cu azot timp de 5 minute. Amestecul a fost continuat să fie agitat la 110 °C timp de 1,5 ore. Din nou, s-a adăugat catalizator Zhan 1B (40 mg, 0,0545 mmol) în două porţii, încălzind amestecul de reacţie la 111 °C timp de 2 ore. Amestecul a fost apoi răcit la temperatura camerei, iar catalizatorul a fost stins prin adăugarea de DMSO (4-5 picături). Amestecul a fost concentrat, iar reziduul a fost purificat prin cromatografie în fază inversă (50 g coloană C18, eluând cu 5% până la 90% acetonitril în apă conţinând 0,1% g/g acid formic timp de 10 CV, apoi cu 90% acetonitril în apă cu 0,1% g/g acid formic timp de 10 CV) pentru a da ulei maron, terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-11,11-dimetil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (23 mg, 10 %). ESI-MS m/z calc. 742,2801, găsit 587,2 (M-155)+; Timp retenţie: 4,61 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge C18 (4,6 X 75 mm, 5 mm dimensiune particulă, 6 minute rulare cu 1 minute echilibrare, Iniţial fază mobilă la 95 % soluţie apoasă de NH4HCO3/5 % acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95 % MeCN şi menţinere timp de 3 minute, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 3: terţ-Butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R)-6-hidroxi-11,11-dimetil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat
O soluţie de terţ-butil N-[(6R)-6-benziloxi-11,11-dimetil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8, 14, 16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (21 mg, 0,0283 mmol) în metanol (5 mL) a fost purjat de trei ori (vid apoi azot gaz). Adăugat paladiu pe cărbune (5 mg, 10% g/g, 50 % umiditate 0,0023 mmol), purjat de două ori cu hidrogen gaz şi agitat sub atmosferă de hidrogen timp de peste noapte. Amestecul de reacţie a fost purjat cu azot gaz, filtrat cu un filtru de nylon 0,45 micron şi concentrat pentru a da un ulei incolor, terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R)-6-hidroxi-11,11-dimetil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (14 mg, 76 %). ESI-MS m/z calc. 654,2488, găsit 499,2 (M-155)+; Timp retenţie: 4,23 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge C18 (4,6 X 75 mm, 5 mm dimensiune particulă, 6 minute rulare cu 1 minute echilibrare, Iniţial fază mobilă la 95 % soluţie apoasă de NH4HCO3/5 % acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95 % MeCN şi menţinere timp de 3 minute, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 4: (6R)-17-Amino-11,11-dimetil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5|nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 61
La o soluţie de terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(6R)-6-hidroxi-11,11-dimetil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (14 mg, 0,0214 mmol) în diclormetan (1 mL) s-a adăugat acid 2,2,2-trifluoracetic (1,4800 g, 1 mL, 12,980 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 2 ore. Amestecul a fost diluat cu diclormetan (5 mL) şi concentrat. Reziduul a fost dizolvat în etil acetat (40 mL), spălat cu soluţie apoasă de bicarbonat de sodiu (3 X 10 mL), soluţie salină (1 X 20 mL), uscat peste sulfat de sodiu anhidru, filtrat şi concentrat. Materialul a fost purificat prin cromatografie cu fază reversă (15,5 g coloană C18, utilizând un gradient de la 0 % până la 95 % apă (+0,1 v% FA) şi MeCN) pentru a da un solid alb mat, (6R)-17-amino-11,11-dimetil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (2,6 mg, 26 %). 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 7,65 (s, 1H), 4,47 (br. s., 1H), 4,17 (br. s., 1H), 2,44 - 2,30 (m, 2H), 2,14 - 2,09 (m, 1H), 2,05 - 1,92 (m, 2H), 1,46 - 1,40 (m, 2H), 1,26 - 1,21 (m, 1H), 0,98 (s, 3H), 0,96 (s, 3H). 19F RMN (377 MHz, CD3OD) δ -65,62 (s, 3F), -80,82 (br. s., 3F). ESI-MS m/z calc. 454,144, găsit 455,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,95 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge C18 (4,6 X 75 mm, 5 mm dimensiune particulă, 6 minute rulare cu 1 minute echilibrare, Iniţial fază mobilă la 95 % soluţie apoasă de NH4HCO3/5 % acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95 % MeCN şi menţinere timp de 3 minute, Flux = 1,5 mL/min).
Exemplul 44: Preparare (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,7-diol (enantiomer 3), Compus 62
Etapa 1: (12R)-17-Amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-7-onă (amestec E/Z)
La o soluţie de (12R)-17-amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-7-ol (E/Z amestec, diastereomer 1 pereche) (30 mg, 0,0551 mmol) în CH2Cl2 (3 mL) s-a adăugat NaHCO3 (90 mg, 1,0713 mmol), urmat de Dess-Martin periodinan (30 mg, 0,0707 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 3 h. Au fost adăugate NaHCO3 saturat (3 mL) şi 10 %. Na2S2O3 apos (3 mL). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 5 min şi extras cu CH2Cl2 (3 X 10 mL). Straturile organice combinate au fost uscate cu Na2SO4, filtrate şi concentrate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (prin eluare de la 0 % până la 30 % EtOAc/heptani) pentru a da ulei galben pal, (12R)-17-amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-7-one (amestec E/Z) (24 mg, 80 %). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,45 - 7,26 (m, 4H), 7,27 - 7,13 (m, 3H), 7,06 - 6,76 (m, 1H), 5,35 - 5,19 (m, 2H), 5,07 - 4,88 (m, 2H), 4,76 - 4,69 (m, 1H). 2,51 - 2,08 (m, 3H), 1,76 - 1,66 (m, 1H), 1,47 - 1,42 (m, 3H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,98 până la -64,01 (m, 3F), -70,18 până la -70,70 (m, 3F).
Etapa 2: (12R)-17-Amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-7-ol (amestec E/Z, diastereomer 2 pereche)
La o soluţie de (12R)-17-amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-7-one (amestec E/Z) (28 mg, 0,0516 mmol) în MeOH (2,5 mL) la -5 °C s-a adăugat borohidrură de tetrametilamoniu (10 mg, 0,1124 mmol). Amestecul a fost agitat la -5 °C timp de 10 min. Acetonă (0,5 mL) s-a adăugat. Amestecul a fost agitat la -5 °C timp de 5 min şi apoi tratat cu soluţie saturată apoasă de NaHCO3 (5 mL). Amestecul a fost extras cu EtOAc (3 X 10 mL). Straturile organice combinate au fost uscate cu Na2SO4, filtrate şi concentrate. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (prin eluare 5 % EtOAc/CH2Cl2) pentru a da ulei galben pal, (12R)-17-amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-7-ol (amestec E/Z, diastereomer 2 pereche) (22 mg, 78 %). ESI-MS m/z calc. 544,15454, găsit 545,2 (M+1)+; Timp retenţie: 3,49 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 3: (12R)-17-Amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-7-ol (amestec E/Z, enantiomer 3)
(12R)-17-amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-7-ol (E/Z amestec, diastereomer 2 pereche) (40 mg, 0,0735 mmol) a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (prin eluare 10 la 30 % EtOAc/heptani) pentru a da doi produşi. Diastereomerul cu polaritate mai mică a fost izolat ca ulei galben pal, (12R)-17-amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-7-ol (amestec E/Z, enantiomer 3) (16 mg, 37 %). ESI-MS m/z calc. 544,15454, găsit 545,2 (M+1)+; Timp retenţie: 3,5 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 4: (12R)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6,7-diol (enantiomer 3), Compus 62
(12R)-17-Amino-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaen-7-ol (amestec E/Z, enantiomer 3) (16 mg, 0,0272 mmol) şi 10 % paladiu pe cărbune (50 % umiditate, 6 mg, 0,0028 mmol) în EtOAc (3 mL) a fost agitat sub hidrogen (balon) la temperatura camerei peste noapte. Amestecul a fost filtrat prin pământ de diatomee şi turta a fost spălată cu EtOAc (aproximativ 10 mL). Filtratul a fost concentrat şi reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (prin eluare 20 % până la 50 % EtOAc/pentan) şi uscare prin congelare pentru a da (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaene-6,7-diol (enantiomer 3) (7 mg, 52 %) ca solid galben pal. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,75 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 6,27 (s, 2H), 5,51 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 4,88 - 4,78 (m, 1H), 4,35 - 4,26 (m, 1H), 2,63 - 2,51 (m, 2H), 1,96 - 1,83 (m, 1H), 1,75 - 1,64 (m, 1H), 1,63 - 1,53 (m, 1H), 1,52 - 1,43 (m, 1H), 1,37 - 1,28 (m, 5H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,43 (s, 3F), -73,86 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 456,12323, găsit 457,2 (M+1)+; Timp retenţie: 2,99 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Exemplul 45: Preparare (6R,13R)-18-amino-13-metil-6,16-bis(trifluormetil)-14,20-dioxa-3,4,19-triazatetraciclo[13.3.1.12,5.09,11]icosa-1(19),2,4,15,17-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 63, şi (6R,13R)-18-amino-13-metil-6,16-bis(trifluormetil)-14,20-dioxa-3,4,19-triazatetraciclo[13.3.1.12,5.09,11]icosa-1(19),2,4,15,17-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 64
Etapa 1: terţ-Butil N-[(6R,13R)-6-benziloxi-13-metil-6,16-bis(trifluormetil)-14,20-dioxa-3,4,19-triazatetraciclo[13.3.1.12,5.09,11]icosa-1(19),2,4,15,17-pentaen-18-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
Un balon a fost încărcat cu hidroxid de potasiu (800 mg, 14,259 mmol) şi s-a adăugat apă (3,4 mL). Amestecul a fost agitat timp de 2 minute până când KOH s-a dizolvat. S-a adăugat eter dietilic (14 mL). Amestecul a fost răcit la 0 °C şi s-a adăugat 1-metil-1-nitrozo-uree (700 mg, 6,1118 mmol). Amestecul a fost agitat la 0 °C timp de 30 de minute. Agitarea a fost oprită şi amestecul a fost răcit la -78 °C. După ce faza apoasă a fost congelată, stratul eteric galben a fost transferat cu o pipetă de plastic într-un alt balon cu două pelete (aproximativ 220 mg) de hidroxid de potasiu. Balonul a fost menţinut la 0 °C timp de 5 minute. Jumătate din soluţia de diazometan formată în eter (~7 mL) a fost adăugată cu o pipetă de plastic la o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (amestec E/Z) (200 mg, 0,2536 mmol) în THF (10 mL) la 0 °C. O soluţie de diacetat de paladiu (12 mg, 0,0535 mmol) în THF (3,4 mL) a fost adăugată prin picurare. Amestecul rezultat a fost agitat la 0 °C timp de 15 minute, apoi s-a adăugat restul soluţiei eterice de diazometan (~7 mL). Soluţia maron a fost lăsată să se încălzească la temperatura camerei şi agitată timp de 1 oră. Pentru a doua oară, un balon a fost încărcat cu hidroxid de potasiu (800 mg, 14,259 mmol) şi s-a adăugat apă (4 mL). Amestecul a fost agitat timp de 2 minute până când KOH s-a dizolvat. S-a adăugat eter dietilic (14 mL). Amestecul a fost răcit la 0 °C şi s-a adăugat 1-metil-1-nitrozo-uree (700 mg, 6,7908 mmol). Amestecul a fost agitat la 0 °C timp de 30 de minute. Agitarea a fost oprită şi amestecul a fost răcit la -78 °C. După ce faza apoasă a fost congelată, stratul eteric galben a fost transferat într-un alt balon cu 220 mg de hidroxid de potasiu. Balonul a fost menţinut la 0 °C timp de 5 minute. Jumătate din această soluţie de diazometan în eter (~7 mL) a fost adăugată la soluţia de reacţie anterioară. O soluţie de diacetat de paladiu (12 mg, 0,0535 mmol) în THF (3 mL) a fost adăugată în picătură la amestecul de reacţie. Amestecul rezultat a fost agitat la 0 °C timp de 15 minute, apoi s-a adăugat restul soluţiei eterice de diazometan (~7 mL). Soluţia maron a fost lăsată să se încălzească la temperatura camerei şi agitată timp de 1 oră. Pentru a treia oară, un balon a fost încărcat cu hidroxid de potasiu (800 mg, 14,259 mmol) şi s-a adăugat apă (3,5 mL). Amestecul a fost agitat timp de 2 minute până când KOH s-a dizolvat. S-a adăugat eter dietilic (14 mL). Amestecul a fost răcit la 0 °C şi s-a adăugat 1-metil-1-nitrozo-uree (700 mg, 6,7908 mmol). Amestecul a fost agitat la 0 °C timp de 30 de minute. Agitarea a fost oprită şi amestecul a fost răcit la -78 °C. După ce faza apoasă a fost congelată, stratul eteric galben a fost transferat într-un alt balon cu 220 mg de hidroxid de potasiu. Balonul a fost menţinut la 0 °C timp de 5 minute. Jumătate din această soluţie de diazometan în eter (~7 mL) a fost adăugată cu o pipetă de plastic la soluţia de reacţie anterioară. O soluţie de diacetat de paladiu (12 mg, 0,0535 mmol) în THF (3 mL) a fost adăugată în picătură. Amestecul rezultat a fost agitat la 0 °C timp de 15 minute, apoi s-a adăugat restul soluţiei eterice de diazometan (~7 mL). Soluţia maron a fost lăsată să se încălzească la temperatura camerei şi agitată timp de 1 oră. Azotul a fost barbotat prin amestecul negru timp de 10 minute, apoi solvenţii au fost îndepărtaţi sub vid (la 25 °C). Reziduul a fost purificat prin cromatografie în fază inversă pe o coloană de silice de 50 g (5% până la 90% CH3CN /0,01 % acid formic în apă) pentru a da un amestec diastereomeric de terţ-butil N-[(6R,13R)-6-benziloxi-13-metil-6,16-bis(trifluorometil)-14,20-dioxa-3,4,19-triazatetraciclo[13.3.1.12,5.09,11]icosa-1(19),2,4,15,17-pentaen-18-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (123 mg, 64 %) sub formă de solid alb. ESI-MS m./z calculat 742,2801, găsit 587,2 (M-155)+Timp de retenţie: 4,6 minute. Metodă LCMS: coloană XBridge C18 (4,6 x 75 mm, dimensiunea particulelor de 5 µm, rulare de 6 minute cu echilibrare de 1 minut, fază mobilă iniţială la 95% NH4HCO3 apos/5% acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95% MeCN şi menţinut timp de 3 minute, rată flux = 1,5 mL/min).
Etapa 2: (6R,13R)-6-Benziloxi-13-metil-6,16-bis(trifluormetil)-14,20-dioxa-3,4,19-triazatetraciclo[13.3.1.12,5.09,11]icosa-1(19),2,4,15,17-pentaen-18-amină
Acid trifluoroacetic (740,00 mg, 0,5 mL, 6,4899 mmol) a fost adăugat la o soluţie galbenă de terţ-butil N-[(6R,13R)-6-benziloxi-13-metil-6,16-bis(trifluorometil)-14,20-dioxa-3,4,19-triazatetraciclo[13.3.1.12,5.09,11]icosa-1(19),2,4,15,17-pentaen-18-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (120 mg, 0,1582 mmol) în DCM (2,4 mL) la temperatura camerei, iar amestecul a fost agitat timp de 1 oră. Soluţia portocalie a fost concentrată sub vid. TFA rezidual a fost co-evaporat cu CH3CN (3 x 4 mL), CH3CN/toluen (1 X 4 mL) şi toluen (3 X 4 mL) apoi uscate sub vid înalt pentru a da (6R,13R)-6-benziloxi-13-metil-6,16-bis(trifluorometil)-14,20-dioxa-3,4,19-triazatetraciclo[13.3.1.12,5.09,11]icosa-1(19),2,4,15,17-pentaen-18-amină brută (103 mg, cantitativ) sub formă de ulei portocaliu deschis. ESI-MS m./z calculat 542,17523, găsit 543,2 (M+1)+Timp de retenţie: 4,35 minute. Metodă LCMS: coloană XBridge C18 (4,6 x 75 mm, dimensiunea particulelor de 5 µm, rulare de 6 minute cu echilibrare de 1 minut, fază mobilă iniţială la 95% NH4HCO3 apos/5% acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95% MeCN şi menţinut timp de 3 minute, rată flux = 1,5 mL/min).
Etapa 3: (6R,13R)-18-Amino-13-metil-6,16-bis(trifluormetil)-14,20-dioxa-3,4,19-triazatetraciclo[13.3.1.12,5.09,11]icosa-1(19),2,4,15,17-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 63, şi (6R,13R)-18-amino-13-metil-6,16-bis(trifluormetil)-14,20-dioxa-3,4,19-triazatetraciclo[13.3.1.12,5.09,11]icosa-1(19),2,4,15,17-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 64
Paladiu pe carbon (10 % g/g, 18 mg, 0,0169 mmol) a fost adăugat la o soluţie degazată de (6R,13R)-6-benziloxi-13-metil-6,16-bis(trifluorometil)-14,20-dioxa-3,4,19-triazatetraciclo[13.3.1.12,5.09,11]icosa-1(19),2,4,15,17-pentaen-18-amină (90 mg, 0,1659 mmol) în metanol (2 mL) la temperatura camerei. Suspensia neagră a fost purjată cu azot timp de 5 minute, apoi s-a barbotat hidrogen prin suspensie timp de 5 minute. Apoi, amestecul a fost agitat la temperatura camerei peste noapte sub atmosferă de hidrogen. Suspensia neagră a fost filtrată peste celită, iar turta a fost spălată cu DCM (3 X 5 mL), apoi filtratul a fost concentrat sub vid pentru a da un ulei galben fluorescent. S-a purificat prin cromatografie în fază inversă peste 50 g coloană C18 (5% până la 90% CH3CN/0,02 % HCl în apă) pentru a da un solid galben (57 mg, puritate 98,6%). Acest solid a fost supus separării SFC utilizând următoarele condiţii: coloană Lux Cellulose 3 (250 X 21,2 mm), coloană de 5 µm la 40 °C, eluant: etanol 10 % (dietilamină 0,1 %), CO 90 %2, rată flux: 75 mL/min, concentraţie: 5,7 mg/mL în etanol (0,1% dietilamină), volum de injecţie: 200 uL, presiune: 100 bar, lungime de undă: 250 nm. Evaporarea solvenţilor a furnizat doi izomeri. Ambii au fost redizolvaţi în EtOAc (5 mL), apoi spălaţi cu soluţie apoasă de clorură de hidrogen 0,5 M (1 X 10 mL), soluţie apoasă saturată de bicarbonat de sodiu (1 X 10 mL) şi saramură (1 X 10 mL). Stratul organic al fiecăruia a fost uscat peste sulfat de sodiu anhidru şi apoi concentrat sub vid. Ambii izomeri au fost apoi liofilizaţi pentru a da, ca prim compus care eluează în condiţii SFC, un solid galben deschis, (6R,13R)-18-amino-13-metil-6,16-bis(trifluorometil)-14,20-dioxa-3,4,19-triazatetraciclo[13.3.1.12,5.09,11]icosa-1(19),2,4,15,17-pentaen-6-ol (enantiomer 1) (15,6 mg, 20%). 1H RMN (400 MHz, MeOD) δ 7,66 (s, 1H), 5,34 - 5,19 (m, 1H), 2,96 - 2,79 (m, 1H), 2,52 (dd, J = 15,2, 8,1 Hz, 1H), 1,96 - 1,81 (m, 2H), 1,45 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,04 - 0,96 (m, 2H), 0,91 (t, J = 12,5 Hz, 1H), 0,59 - 0,44 (m, 1H), 0,36 - 0,27 (m, 1H), 0,26 - 0,17 (m, 1H). 19F RMN (377 MHz, MeOD) δ -65,42 (s, 3F), -80,26 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 452,1283, găsit 453,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,8 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge C18 (4,6 X 75 mm, 5 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare cu 1 minute echilibrare, Iniţial fază mobilă la 95 % soluţie apoasă de NH4HCO3/5 % acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95 % MeCN şi menţinere timp de 3 minute, Flux = 1,5 mL/min).
Al doilea vârf care a fost eluat în condiţiile SFC de mai sus a fost repurificat prin SFC utilizând următoarele condiţii: coloană Lux Cellulose 3 (250 X 21,2 mm), coloană de 5 µm la 40 °C, eluant: etanol 10% (dietilamină 0,1%), CO2 90%.2, rată flux: 75 mL/min, concentraţie: 21 mg/mL în etanol (0,1% dietilamină), volum de injecţie: 200 µL, presiune: 100 bar, lungime de undă: 250 nm. Evaporarea solventului şi liofilizarea au rezultat sub formă de solid galben deschis, (6R,13R)-18-amino-13-metil-6,16-bis(trifluorometil)-14,20-dioxa-3,4,19-triazatetraciclo[13.3.1.12,5.09,11]icosa-1(19),2,4,15,17-pentaen-6-ol (enantiomer 2) (9,61 mg, 13%). 1H RMN (400 MHz, MeOD) δ 7,64 (s, 1H), 5,56 - 5,38 (m, 1H), 2,63 - 2,48 (m, 1H), 2,41 - 2,17 (m, 2H), 2,09 - 1,87 (m, 1H), 1,32 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 1,24 - 1,14 (m, 1H), 1,13 - 1,04 (m, 1H), 0,94 - 0,68 (m, 2H), 0,27 - 0,10 (m, 2H). 19F RMN (377 MHz, MeOD) δ -65,27 (s, 3F), -78,81 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 452,1283, găsit 453,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,79 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge C18 (4,6 X 75 mm, 5 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare cu 1 minute echilibrare, Iniţial fază mobilă la 95 % soluţie apoasă de NH4HCO3/5 % acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95 % MeCN şi menţinere timp de 3 minute, Flux = 1,5 mL/min).
Exemplul 46: Preparare (6R)-12-ciclopropil-17-(Etilamino)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 65, şi (6R)-12-ciclopropil-17-(Etilamino)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 66
Etapa 1: 1-Ciclopropilbut-3-en-1-ol
La o soluţie agitată de ciclopropancarbaldehidă (5,0427 g, 5,6 mL, 69,068 mmol) în dietil eter (50 mL) într-un balon cu trei gâturi de 250 mL s-a adăugat o soluţie de alil(brom)magneziu (69,5 mL de 1 M, 69,5 mmol) în dietil eter la -20 °C. Soluţia rezultată a fost agitată timp de 1 h de la -20 °C până la 0 °C. Reacţia a fost apoi stinsă cu adiţie de 25 mL soluţie apoasă saturată de clorură de amoniu şi extrasă cu 2 X 50 mL de dietil eter. Extractele organice combinate au fost spălate cu 1 X 50 mL soluţie salină, uscată pe sulfat de sodiu anhidru şi concentrată sub vid pentru a da un ulei galben pal, 1-ciclopropilbut-3-en-1-ol (6,008 g, 74 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 5,88 (ddt, J = 17,2, 10,2, 7,1 Hz, 1H), 5,08 - 4,94 (m, 2H), 4,54 - 4,35 (m, 1H), 2,91 (q, J = 6,5 Hz, 1H), 2,28 - 2,14 (m, 2H), 0,84 - 0,73 (m, 1H), 0,40 - 0,28 (m, 2H), 0,27 - 0,19 (m, 1H), 0,18 - 0,09 (m, 1H).
Etapa 2: N'-[(2R)-2-Benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]-6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă
Acid 6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluorometil)piridin-2-carboxilic (203 mg, 0,8052 mmol) şi (2R)-2-benziloxi-2-(trifluorometil)hex-5-enhidrazidă (sare clorhidrat) (260 mg, 0,7675 mmol) au fost dizolvate într-un amestec de acetat de etil (5 mL) şi trietilamină (326,7 mg, 0,45 mL, 3,2286 mmol). Apoi, la temperatura camerei (20 până la 25 °C) s-a adăugat o soluţie de anhidridă propilfosfonică (0,7 mL de 1,68 M, 1,176 mmol) în acetat de etil, iar reacţia a fost agitată timp de 3,5 ore la temperatura camerei. Apoi, reacţia a fost stinsă cu o soluţie apoasă saturată de clorură de amoniu (5 mL). Fazele au fost separate, iar faza organică a fost spălată cu o soluţie apoasă saturată de clorură de amoniu (5 mL) şi apoi cu o soluţie apoasă (5% g/v) de bicarbonat de sodiu (2 X 5 mL), uscată peste sulfat de sodiu anhidru, filtrată şi concentrată prin evaporare la presiune redusă. Uscarea peste noapte pe o pompă de vid a dat un solid galben, N'-[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluorometil)hex-5-enoil]-6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluorometil)piridin-2-carbohidrazidă (430 mg, 96%). ESI-MS m/z calculat 536,1131, găsit 537,2 (M+1)+Timp de retenţie: 3,04 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar coloană C18 (3,0 X 50 mm, dimensiunea particulelor de 2,6 µm, timp de analiză de 6 minute, 5% până la 95% acetonitril în apă (0,1% modificator de acid formic), rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 3: 6-[5-[(1R)-1-Benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-nitro-3-(trifluormetil)piridin-2-ol
La o soluţie de N'-[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]-6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă (6,47 g, 8,4557 mmol) şi N,N-diizopropiletilamină (5,8618 g, 7,9 mL, 45,355 mmol) în acetonitril (200 mL) la 0 °C s-a adăugat clorură de 4-metilbenzensulfonil (3,71 g, 19,460 mmol) în porţii. După adiţie, baia de răcire a fost îndepărtată şi reacţia a fost agitată la 26 °C timp de 44 ore. Volatilele au fost îndepărtate prin evaporare sub presiune redusă. Reziduul a fost dizolvat în etil acetat (180 mL) şi spălat cu 0,5 N soluţie apoasă de acid clorhidric (3 X 25 mL) şi soluţie salină (2 X 15 mL). Stratul organic a fost uscat pe sulfat de sodiu anhidru, filtrat şi concentrat prin evaporare sub presiune redusă care a dat 6-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-nitro-3-(trifluormetil)piridin-2-ol (6,67 g, 70 %) ca un reziduu maron vâscos. ESI-MS m/z calc. 518,1025, găsit 519,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,1 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge C18 (4,6 X 75 mm, 5 mm dimensiune particulă, 6 minute rulare cu 1 minute echilibrare, Iniţial fază mobilă la 95 % soluţie apoasă de NH4HCO3/5 % acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95 % MeCN şi menţinere timp de 3 minute, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 4: 2-[(1R)-1-Benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-5-[6-(1-ciclopropilbut-3-enoxi)-3-nitro-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol
Într-un balon cu fund rotund de 25 mL care conţine 6-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluorometil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-nitro-3-(trifluorometil)piridin-2-ol (418 mg, 0,7395 mmol) s-au adăugat trifenilfosfină (395 mg, 1,506 mmol) şi 1-ciclopropilbut-3-en-1-ol (245,1 mg, 0,2 mL, 2,0758 mmol), apoi toluen (8,5 mL). La amestec, sub agitare la temperatura camerei, s-a adăugat în picătură DIAD (308,1 mg, 0,3 mL, 1,5237 mmol), apoi s-a continuat agitarea timp de 4 ore. După ce s-a lăsat la temperatura camerei timp de 72 de ore, amestecul a fost concentrat prin evaporare sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie în fază inversă pe un amestec apos de coloană C18 50 g, eluând cu un gradient de 5% până la 80% de acetonitril în apă bazică (pH = 10, bicarbonat de amoniu) timp de 8 volume de coloană, apoi cu 80% acetonitril în apă bazică (pH = 10, bicarbonat de amoniu) timp de 10 volume coloană. Fracţiile selectate au fost concentrate prin evaporare sub presiune redusă pentru a da 2-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluorometil)pent-4-enil]-5-[6-(1-ciclopropilbut-3-enoxi)-3-nitro-5-(trifluorometil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (250 mg, 54 %) sub formă de solid galben deschis. ESI-MS m./z calculat 612,1807, găsit 613,2 (M+1)+Timp de retenţie: 4,08 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 coloană (3,0 X 50 mm, dimensiunea particulelor de 2,6 µm, timp de analiză de 6 minute, 5% până la 95% acetonitril în apă (0,1% modificator de acid formic), rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 5: (6R)-6-Benziloxi-12-ciclopropil-17-nitro-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,9,14(18),15-hexaenă (amestec E/Z)
Un balon uscat de 250 ml a fost încărcat cu 1,2-dicloroetan (98 ml). Solventul a fost barbotat cu azot timp de 30 de minute. Catalizatorul Zhan-1B (29 mg, 0,0395 mmol) a fost adăugat sub un flux uşor de azot. Amestecul a fost barbotat cu azot timp de 10 minute şi încălzit la 60 °C. O soluţie barbotată cu azot de 2-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluorometil)pent-4-enil]-5-[6-(1-ciclopropilbut-3-enoxi)-3-nitro-5-(trifluorometil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (98 mg, 0,1578 mmol) a fost adăugat în picătură timp de 1 oră. Amestecul a fost agitat la 70 °C timp de 1,25 ore şi apoi răcit la temperatura camerei. Apoi, s-au adăugat 5 picături de DMSO pentru a stinge catalizatorul. Amestecul a fost concentrat pe silicagel (3 g) şi purificat prin cromatografie pe silicagel (eluând cu un gradient de 5% până la 25% acetat de etil în heptani) pentru a da (6R)-6-benziloxi-12-ciclopropil-17-nitro-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,9,14(18),15-hexaenă (amestec E/Z) (60 mg, 59 %) sub formă de solid galben deschis. ESI-MS m./z calculat 584,1494, găsit 585,2 (M+1)+Timp de retenţie: 4,22 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge coloană C18 (4,6 x 75 mm, dimensiunea particulelor de 5 mm, rulare de 6 minute cu echilibrare de 1 minut, fază mobilă iniţială la 95% NH4HCO3 apos/ 5% acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95% MeCN şi menţinut timp de 3 minute, rată flux = 1,5 mL/min).
Etapa 6: (6R)-12-Ciclopropil-17-(Etilamino)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol
O soluţie de (6R)-6-benziloxi-12-ciclopropil-17-nitro-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,9,14(18),15-hexaenă (amestec E/Z) (60 mg, 0,1027 mmol) în etanol (4 mL) a fost barbotată cu azot gaz timp de 5 minute. După adiţie de paladiu pe cărbune (63 mg, 5 % g/g, 0,0296 mmol), hidrogen gaz a fost barbotat în amestecul de reacţie timp de 5 minute şi apoi reacţia a fost lăsată cu agitare sub o atmosferă hidrogen timp de aproximativ 22 ore. Reacţia a fost purjată de două ori cu azot gaz apoi filtrată peste un pat de celită şi turta a fost spălată cu etanol (30 mL). Volatilele au fost îndepărtate sub presiune redusă pentru a da a 54 mg reziduu ca un ulei galben intens. Reziduul a fost uscat pe silica gel şi purificat prin cromatografie pe gel de silice prin eluare cu gradient de etil acetat (0 % până la 30 %) în heptani care a dat (6R)-12-ciclopropil-17-(etilamino)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol (22 mg, 43 %) ca un solid galben pal. ESI-MS m/z calc. 494,1753, găsit 495,2 (M+1)+; Timp retenţie: 3,8 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 7: (6R)-12-Ciclopropil-17-(Etilamino)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 65, şi (6R)-12-ciclopropil-17-(Etilamino)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 66
Un amestec diastereomeric de (6R)-12-ciclopropil-17-(etilamino)-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol (22 mg, 0,0438 mmol) a fost supus separării SFC utilizând următoarele condiţii: coloană Lux 5 µm Cellulose 4, (250 X 21,2 mm, 6,67 mg/injecţie) la 40 °C, eluant: 7% EtOH (0,1% dietilamină), 93% CO2, rată flux: 55 mL/min, volum de injecţie: 400 µL, presiune: 100 bar, lungime de undă: 250 nm. Evaporarea solvenţilor şi liofilizarea au furnizat doi izomeri:
Primul izomer pentru eluare a fost izolat ca un solid galben, (6R)-12-ciclopropil-17-(etilamino)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol (enantiomer 1) (3,8 mg, 17 %, 98,4 % de). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,63 (s, 1H), 7,59 (s, 1H), 6,37 (t, J = 5,5 Hz, 1H), 4,17 - 4,06 (m, 1H), 3,46 - 3,35 (m, 2H), 2,62 - 2,53 (m, 1H), 2,21 - 2,04 (m, 2H), 1,77 - 1,41 (m, 7H), 1,23 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,17 - 1,11 (m, 1H), 0,64 - 0,55 (m, 1H), 0,52 - 0,39 (m, 2H), 0,31 - 0,23 (m, 1H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,11 (s, 3F), - 79,02 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 494,17526, găsit 495,2 (M+1)+; Timp retenţie: 3,81 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Al doilea vârf pentru eluare a fost izolat ca un solid galben, (6R)-12-ciclopropil-17-(etilamino)-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,14(18),15-pentaen-6-ol (enantiomer 2) (4,6 mg, 21 %, 99,9 % de). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,63 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 6,36 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 4,26 - 4,15 (m, 1H), 3,48 - 3,33 (m, 2H), 2,48 - 2,44 (m, 1H), 2,31 - 2,22 (m, 1H), 2,17 - 2,06 (m, 1H), 1,83 - 1,61 (m, 3H), 1,57 - 1,36 (m, 4H), 1,24 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 1,18 - 1,14 (m, 1H), 0,66 - 0,58 (m, 1H), 0,52 - 0,37 (m, 2H), 0,32 - 0,23 (m, 1H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,13 (s, 3F), -76,35 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 494,17526, găsit 495,2 (M+1)+; Timp retenţie: 3,8 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Exemplul 47: Preparare (6R,12R)-17-amino-15-(difluormetil)-12-metil-6-(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 67
Etapa 1: Metil 5-(difluormetil)piridin-2-carboxilat
Într-o autoclavă s-au adăugat 2-bromo-5-(difluorometil)piridină (24 g, 115,38 mmol), metanol (240 mL), trietilamină (27,588 g, 38 mL, 272,64 mmol) şi [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dicloropaladiu(II) (2,4 g, 3,28 mmol). Autoclava a fost purjată cu azot, apoi cu monoxid de carbon. Amestecul a fost încălzit la 130 °C, iar presiunea monoxidului de carbon a fost ajustată la 120 psi. Amestecul a fost agitat timp de 3 ore la 130 °C, apoi răcit la 25 °C peste noapte. Amestecul a fost purjat cu azot şi concentrat sub vid. Solidul rezultat a fost diluat cu acetat de etil (500 mL). S-au adăugat apă (200 mL) şi carbonat de sodiu (20 g) şi amestecul a fost agitat energic timp de 10 minute. Straturile au fost separate, iar stratul organic a fost spălat cu apă (200 mL) şi saramură (200 mL), uscat peste sulfat de sodiu, apoi filtrat şi evaporat sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe coloană de silicagel (eluând de la 20% la 50% acetat de etil în heptani) pentru a da 5-(difluorometil)piridin-2-carboxilat de metil (8,1 g, 38%) sub formă de solid alb. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,89 (s, 1H), 8,25 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,97 - 6,61 (m, 1H), 4,05 (s, 3H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -113,58 (d, J = 54,5 Hz, 2F). ESI-MS m/z calc. 187,04448, găsit 188,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,48 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 2: Metil 5-(difluormetil)-1-oxido-piridin-1-ium-2-carboxilat
Peroxid de hidrogen ureic (13,7 g, 145,64 mmol) a fost amestecat sub agitare într-o soluţie de metil 5-(difluorometil)piridin-2-carboxilat (8,1 g, 43,282 mmol) în DCE (70 mL). Apoi, a fost adăugată anhidridă trifluoroacetică (24,025 g, 15,9 mL, 114,39 mmol) timp de 20 de minute la o temperatură de -10 °C, utilizând o baie de răcire (CO2/baie de acetonă). Amestecul de reacţie a fost apoi agitat timp de încă 30 de minute la o temperatură de 0 °C şi apoi timp de 1 oră la temperatura ambiantă. Amestecul de reacţie a fost turnat în apă cu gheaţă (150 mL) şi ajustat la pH = 2 - 3 cu aproximativ 150 mL de soluţie apoasă de hidroxid de sodiu 1N. Amestecul a fost diluat cu diclormetan (200 mL) şi apoi straturile au fost separate. Faza apoasă a fost extrasă cu diclormetan (2 X 150 mL). Faza organică combinată a fost spălată cu saramură (150 mL), uscată peste sulfat de sodiu anhidru, filtrată şi concentrată sub presiune redusă pentru a da metil 5-(difluormetil)-1-oxido-piridin-1-ium-2-carboxilat (8,39 g, 87 %) ca un solid galben. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,41 (s, 1H), 7,72 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,43 - 7,36 (m, 1H), 6,84 - 6,47 (m, 1H), 4,03 (s, 3H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -115,27 (d, J = 55,9 Hz, 2F). ESI-MS m/z calc. 203,0394, găsit 204,1 (M+1)+; Timp retenţie: 0,73 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 3: Metil 5-(difluormetil)-6-hidroxi-piridin-2-carboxilat
Anhidridă trifluoracetică (84,616 g, 56 mL, 402,87 mmol) s-a adăugat în picătură la un amestec de metil 5-(difluormetil)-1-oxido-piridin-1-ium-2-carboxilat (11,63 g, 47,06 mmol) în DMF (130 mL) la o temperatură de 0 °C timp de 30 minute. Amestecul a fost apoi încălzit la 48 °C şi a fost agitat timp de încă 4 ore apoi reacţia a fost agitată la temperatura camerei peste noapte. Amestecul de reacţie a fost concentrată sub presiune redusă pentru a îndepărta anhidrida trifluoracetică. Soluţia de DMF reziduală a fost turnată în apă (1 L) la 0 °C. Precipitatul solid a fost colectat prin filtrare şi spălat cu apă (200 mL). Solidul a fost uscat sub vid înaintat care a dat un solid alb mat, metil 5-(difluormetil)-6-hidroxi-piridin-2-carboxilat (5,74 g, 60 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,29 (br. s., 1H), 7,88 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,13 (s, 1H), 7,07 - 6,76 (m, 1H), 3,87 (s, 3H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -118,60 (br. s., 2F). ESI-MS m/z calc. 203,0394, găsit 204,1 (M+1)+; Timp retenţie: 1,34 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 4: Metil 5-(difluormetil)-6-hidroxi-3-nitro-piridin-2-carboxilat
La o soluţie răcită pe gheaţă de metil 5-(difluormetil)-6-hidroxi-piridin-2-carboxilat (7,43 g, 36,575 mmol) în acid sulfuric (48 mL de 18,4 M, 883,2 mmol) s-a adăugat acid azotic (2,5 mL de 15,8 M, 39,5 mmol) în picătură. După 5 min, baia de gheaţă a fost îndepărtată şi amestecul de reacţie a fost agitat la 45 °C peste noapte. Reacţia a fost precipitată pe gheaţă-apă (300 mL). Soluţia a fost răcită la 0 °C timp de 15 minute apoi solidul a fost izolat prin filtrare şi spălat cu apă (200 mL). Solidul a fost uscat peste noapte sub vid înaintat pentru a da metil 5-(difluormetil)-6-hidroxi-3-nitro-piridin-2-carboxilat (5,47 g, 56 %) ca un solid alb mat. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,41 (s, 1H), 7,19 - 6,75 (m, 1H), 3,94 (s, 3H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -118,87 (d, J = 54,5 Hz, 2F). ESI-MS m/z calc. 248,02448, găsit 249,1 (M+1)+; Timp retenţie: 1,6 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 5: Metil 5-(difluormetil)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-3-nitro-piridin-2-carboxilat
La o soluţie de metil 5-(difluormetil)-6-hidroxi-3-nitro-piridin-2-carboxilat (1,6 g, 6,448 mmol) şi (2S)-pent-4-en-2-ol (837 mg, 1 mL, 9,7176 mmol) în toluen (31 mL) s-a adăugat trifenil fosfină (2,5 g, 9,5316 mmol). După agitare la temperatura camerei timp de 10 minute, s-a adăugat DIAD (1,9513 g, 1,9 mL, 9,65 mmol) şi amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 16 h. Aproximativ jumătate din toluen a fost evaporat sub presiune redusă, iar produsul brut a fost încărcat direct pe un cartuş de silice de 120 g. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice a fost efectuată utilizând un gradient de 0% până la 5% EtOAc în heptani. Evaporarea substanţelor volatile din fracţiile care conţin produsul a dat metil 5-(difluormetil)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-3-nitro-piridin-2-carboxilat (1,7 g, 82 %) ca un ulei galben pal. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,61 (s, 1H), 6,80 (t, J = 54,5 Hz, 1H), 5,86 - 5,72 (m, 1H), 5,51 (m, J = 6,2 Hz, 1H), 5,20 - 5,07 (m, 2H), 4,03 (s, 3H), 2,58 - 2,42 (m, 2H), 1,41 (d, J = 6,4 Hz, 3H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ - 118,39 (s, 2F). Timp retenţie: 2,1 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 6: Metil 3-amino-5-(difluormetil)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]piridin-2-carboxilat
Fier (2,4 g, 42,976 mmol) şi clorură de amoniu (300 mg, 5,6084 mmol) au fost adăugate la o soluţie de metil 5-(difluorometil)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-3-nitropiridină-2-carboxilat (1,4 g, 4,3471 mmol) în etanol (40 mL) şi apă (12 mL) la temperatura camerei. Amestecul a fost încălzit la 80 °C timp de 16 ore, apoi răcit la temperatura camerei. Reacţia a fost filtrată peste celită, spălând turta cu EtOH (100 mL). Volatilele au fost îndepărtate sub presiune redusă. Reziduul brut a fost purificat prin cromatografie în fază inversă pe un amestec de cartuş 120 g C18 folosind un gradient de 40% până la 100% CH3CN în apă acidulată (0,1 % v/v acid formic în apă). Fracţiile care conţineau produsul au fost concentrate sub presiune redusă până când a rămas doar apă ca solvent. Faza apoasă rămasă a fost extrasă cu EtOAc (4 X 30 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu saramură, uscate peste sulfat de sodiu, filtrate şi concentrate sub presiune redusă, rezultând metil 3-amino-5-(difluorometil)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]piridin-2-carboxilat (727 mg, 58 %) sub formă de ulei maron. ESI-MS m./z calculat 286,11288, găsit 287,2 (M+1)+Timp de retenţie: 2,05 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar coloană C18 (3,0 X 50 mm, dimensiunea particulelor de 2,6 µm, timp de analiză de 3 minute, 5% până la 95% acetonitril în apă (0,1% modificator de acid formic), rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 7: Metil 3-[bis(terţ-butoxicarbonil)amino]-5-(difluormetil)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]piridin-2-carboxilat
La o soluţie de metil 3-amino-5-(difluormetil)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]piridin-2-carboxilat (100 mg, 0,3409 mmol) în DCM (3 mL) s-a adăugat (Boc)2O (298 mg, 1,3654 mmol) urmat de DMAP (4 mg, 0,0327 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura camerei timp de 20 h şi volatilele au fost îndepărtate sub presiune redusă. Reziduul brut a fost purificat prin cromatografie cu detentă pe un cartuş de 24 g silica gel, utilizând un gradient de 0 % până la 10 % etil acetat în heptani care a dat metil 3-[bis(terţ-butoxicarbonil)amino]-5-(difluormetil)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]piridin-2-carboxilat (64 mg, 25 %) ca un ulei galben pal. ESI-MS m/z calc. 486,21774, găsit 387,2 (M-99)+; Timp retenţie: 2,29 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 8: acid 3-(terţ-Butoxicarbonilamino)-5-(difluormetil)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]piridin-2-carboxilic
La o soluţie de metil 3-[bis(terţ-butoxicarbonil)amino]-5-(difluormetil)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]piridin-2-carboxilat (800 mg, 1,6444 mmol) în MeOH (6 mL) şi THF (6 mL) s-a adăugat o soluţie de hidroxid de litiu monohidrat (300 mg, 7,1491 mmol) în apă (3 mL). Amestecul a fost agitat la 50 °C timp de 16 h. Amestecul de reacţie a fost apoi răcit până la temperatura camerei şi s-a adăugat 5 mL de soluţie apoasă de 1 N HCl. Volatilele au fost îndepărtate sub presiune redusă şi s-a adăugat apă (5 mL). pH a fost ajustat la 2 utilizând soluţie apoasă de 1 N HCl şi produsul a fost extras cu EtOAc (3 X 15 mL). Fazele organice combinate au fost spălate cu soluţie salină (15 mL), uscate peste sulfat de sodiu, filtrate şi concentrate sub presiune redusă care a dat 3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(difluormetil)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]piridin-2-carboxilic acid (650 mg, 98 %) ca un ulei galben. Timp retenţie: 2,23 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 9: terţ-Butil N-[2-[[[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]amino]carbamoil]-5-(difluormetil)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-3-piridil]carbamat
HATU (790 mg, 2,0777 mmol) s-a adăugat la o soluţie oranj de acid 3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(difluormetil)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]piridin-2-carboxilic (650 mg, 1,7334 mmol), (2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enhidrazidă (sare clorhidrat) (705 mg, 2,0812 mmol) şi DIPEA (1,1872 g, 1,6 mL, 9,1858 mmol) în DMF (11 mL) la temperatura camerei. Soluţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 2 h. Reacţia a fost direct încărcată pe o coloană cu cartuş 275 g C18 şi purificarea a fost rulată prin eluare cu un gradient de 50 % până la 100 % CH3CN în apă acidulată (0,1 % v/v acid formic în apă). Fracţiile conţinând produsul au fost concentrate sub presiune redusă, co-evaporate cu amestec 1:1 CH3CN/apă şi liofilizate care au dat terţ-butil N-[2-[[[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]amino]carbamoil]-5-(difluormetil)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-3-piridil]carbamat (690 mg, 61 %) ca un solid alb. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,74 (s, 1H), 10,66 (s, 1H), 10,30 (s, 1H), 8,91 (s, 1H), 7,55 - 7,48 (m, 2H), 7,42 - 7,35 (m, 2H), 7,35 - 7,30 (m, 1H), 7,07 (t, J = 54,5 Hz, 1H), 6,03 - 5,79 (m, 2H), 5,79 - 5,67 (m, 1H), 5,15 - 5,06 (m, 2H), 5,05 - 4,99 (m, 2H), 4,91 - 4,77 (m, 2H), 2,39 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 2,36 - 2,27 (m, 2H), 2,26 - 2,14 (m, 2H), 1,47 (s, 9H), 1,26 (d, J = 6,4 Hz, 3H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -71,86 (s, 3F), -117,49 (d, J = 54,5 Hz, 2F). ESI-MS m/z calc. 656,2633, găsit 557,3 (M+1)+; Timp retenţie: 5,36 minute. Metodă LCMS: SunFire C18 (75 X 4,6 mm, 3,5 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril timp de 4 min, menţinere timp de 2 min la 95 % acetonitril, temperatură = 45 °C, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 10: terţ-Butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(difluormetil)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-3-piridil]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[[[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]amino]carbamoil]-5-(difluormetil)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-3-piridil]carbamat (490 mg, 0,7455 mmol) în 1,2-dicloretan (15 mL) şi N,N-diizopropiletilamină (742 mg, 1 mL, 5,7411 mmol) s-a adăugat clorură de toluensulfonil (430 mg, 2,2555 mmol). Reacţia a fost agitată la 50 °C timp de 20 h apoi răcită până la temperatura camerei. Volatilele au fost îndepărtate sub presiune redusă şi reziduul brut a fost purificat prin cromatografie cu fază reversă pe un cartuş C18 50 g utilizând un gradient de 50 % până la 100 % CH3CN în apă acidulată (0,1 % v/v de acid formic în apă). Fracţiile conţinând produsul au fost concentrate sub presiune redusă care au dat terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(difluormetil)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-3-piridil]carbamat (351 mg, 73 %) ca un ulei cafeniu. ESI-MS m/z calc. 638,25275, găsit 639,3 (M+1)+; Timp retenţie: 4,82 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge C18 (4,6 X 75 mm, 5 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare cu 1 minute echilibrare, Iniţial fază mobilă la 95 % soluţie apoasă de NH4HCO3/5 % acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95 % MeCN şi menţinere timp de 3 minute, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 11: terţ-Butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-15-(difluormetil)-12-metil-6-(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z)
O soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-5-(difluormetil)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-3-piridil]carbamat (350 mg, 0,5442 mmol) în dicloretan (180 mL) a fost barbotată cu azot gaz timp de 1,5 h. Soluţia a fost apoi plasată într-o baie de ulei setată la 60 °C şi s-a adăugat o primă porţie de catalizator Zhan-1B (28 mg, 0,0382 mmol). După 1 oră, s-a adăugat un al doilea lot de catalizator Zhan-1B (20 mg, 0,0273 mmol) şi încălzirea a fost continuată timp de încă 1 oră. După răcire la temperatura camerei, reacţia a fost stinsă cu DMSO (8 picături), substanţele volatile au fost îndepărtate sub presiune redusă, iar reziduul a fost purificat direct prin cromatografie în fază inversă pe o suprafaţă de cartuş 50 g C18, eluând cu un gradient de 65% până la 100% CH3CN în apă acidulată (0,1 % v/v acid formic în apă). Fracţiile care conţineau produsul au fost concentrate sub presiune redusă, ceea ce a dat terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-15-(difluormetil)-12-metil-6-(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z) (87 mg, 26 %) ca un ulei maron. ESI-MS m/z calc. 610,22144, găsit 611,3 (M+1)+; Timp retenţie: 4,55 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge C18 (4,6 X 75 mm, 5 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare cu 1 minute echilibrare, Iniţial fază mobilă la 95 % soluţie apoasă de NH4HCO3/5 % acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95 % MeCN şi menţinere timp de 3 minute, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 12: terţ-Butil N-[(6R,12R)-15-(difluormetil)-6-hidroxi-12-metil-6-(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat
La paladiu pe cărbune (85 mg, 5 % g/g, 0,0399 mmol) sub azot s-a adăugat o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-6-benziloxi-15-(difluormetil)-12-metil-6-(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]carbamat (amestec E/Z) (85 mg, 0,1357 mmol) în THF (10 mL) acidulat cu o picătură de acid acetic (1,056 mg, 1 µL, 0,0176 mmol). Hidrogen a fost barbotat timp de 1 min şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 16 h. Azot a fost barbotat timp de 5 min şi amestecul de reacţie a fost filtrat peste celită, turta spălată cu CH3CN (40 mL). Filtratul a fost filtrat din nou şi filtratul rezultat a fost concentrat sub presiune redusă care a dat terţ-butil N-[(6R,12R)-15-(difluormetil)-6-hidroxi-12-metil-6-(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (77 mg, 99 %) ca un solid cafeniu. ESI-MS m/z calc. 522,1902, găsit 467,2 (M-56)+; Timp retenţie: 2,37 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 13: (6R,12R)-17-Amino-15-(difluormetil)-12-metil-6-(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 67
La o soluţie de terţ-butil N-[(6R,12R)-15-(difluormetil)-6-hidroxi-12-metil-6-(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (75 mg, 0,1397 mmol) în DCM (10 mL) s-a adăugat TFA (2,96 g, 2 mL, 25,96 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura camerei timp de 1 h. Volatilele au fost îndepărtate sub presiune redusă şi materialul brut a fost co-evaporat de două ori cu toluen (10 mL de fiecare dată). Uleiul rezultat a fost purificat prin cromatografie cu fază reversă pe un cartuş 15,5 g C18, prin eluare de la 5 % până la 100 % acetonitril în apă (pH = 7). Fracţiile conţinând produsul au fost concentrate sub presiune redusă şi liofilizate care au dat (6R,12R)-17-amino-15-(difluormetil)-12-metil-6-(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (39 mg, 65 %) ca un solid galben. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,60 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,01 (t, J = 54,5 Hz, 1H), 6,29 (s, 2H), 4,81 - 4,70 (m, 1H), 2,48 - 2,42 (m, 1H), 2,35 - 2,23 (m, 1H), 2,16 - 2,05 (m, 1H), 1,73 (br. s., 2H), 1,60 - 1,39 (m, 4H), 1,35 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,22 - 1,11 (m, 1H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -76,38 (s, 3F), -115,10 la -116,53 (m, 1F), - 116,69 până la -118,00 (m, 1F). ESI-MS m/z calc. 422,13773, găsit 423,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,22 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Exemplul 48: Preparare (6R)-17-amino-12-ciclopropil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 68, şi (6R)-17-amino-12-ciclopropil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 69
Etapa 1: (6R)-17-Amino-12-ciclopropil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol
O soluţie de (6R)-6-benziloxi-12-ciclopropil-17-nitro-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(17),2,4,9,14(18),15-hexaenă (amestec E/Z) (48 mg, 0,0812 mmol) în tetrahidrofuran (3 mL) a fost purjat cu azot gaz timp de 5 minute, apoi adăugat paladiu pe cărbune (53 mg, 5 % g/g, 0,0249 mmol) şi hidrogen gaz a fost barbotat timp de 5 minute. Reacţia a fost lăsată sub agitare sub o atmosferă de hidrogen timp de aproximativ 22 ore. Reacţia a fost purjată cu azot gaz apoi filtrată peste un pat de celită şi turta a fost spălată cu etil acetat (30 mL). Volatilele au fost îndepărtate sub presiune redusă. Reziduul a fost solubilizat în tetrahidrofuran (3 mL) şi soluţia rezultată a fost purjată cu azot gaz timp de 5 minute. S-a adăugat paladiu pe cărbune (53 mg, 5 % g/g, 0,0249 mmol) apoi hidrogen gaz a fost barbotat timp de 5 minute. Reacţia a fost lăsată cu agitare sub o atmosferă de hidrogen timp de încă 22 ore. Reacţia a fost purjată din nou cu azot gaz, apoi adăugat mai mult paladiu pe cărbune (25 mg, 5 % g/g, 0,0117 mmol) şi hidrogen gaz a fost barbotat timp de 5 minute. Reacţia a fost lăsată sub agitare sub o atmosferă de hidrogen timp de încă 4 ore. Reacţia a fost purjată cu azot gaz apoi filtrată peste un pat de celită şi turta a fost spălată cu etil acetat (30 mL). Volatilele au fost îndepărtată sub presiune redusă şi reziduul uleios galben rezultat a fost uscat pe silica gel şi purificat prin cromatografie pe gel de silice prin eluare cu a 0 % până la 30 % gradient de etil acetat în heptani care a dat (6R)-17-amino-12-ciclopropil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (24 mg, 63 %) ca un solid galben pal. ESI-MS m/z calc. 466,14395, găsit 467,2 (M+1)+; Timp retenţie: 3,48 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 2: (6R)-17-Amino-12-ciclopropil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1), Compus 68, şi (6R)-17-amino-12-ciclopropil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2), Compus 69
Un amestec diastereomeric de (6R)-17-amino-12-ciclopropil-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (24 mg, 0,0514 mmol) a fost supus separării SFC utilizând următoarele condiţii: coloană Lux 5 µm Cellulose 4, (250 X 21,2 mm, 4,8 mg/injecţie) la 40 °C, eluant: 7% alcool reactiv (+ 0,1% dietilamină)/ 93% CO22, rată flux: 75 mL/min, volum de injecţie: 400 µL, presiune: 100 bar, lungime de undă: 250 nm. Evaporarea solvenţilor şi liofilizarea au furnizat doi izomeri.
Primul izomer care a eluat în condiţiile SFC de mai sus a fost purificat în continuare folosind cromatografie în fază inversă, eluând cu 70% acetonitril în apă acidulată (conţinând 0,1% v/v acid formic), rezultând un solid galben (6R)-17-amino-12-ciclopropil-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 1) (7,1 mg, 29%, 98,6% de). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,75 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 6,34 (s, 2H), 4,15 - 4,07 (m, 1H), 2,61 - 2,53 (m, 1H), 2,22 - 2,03 (m, 2H), 1,80 - 1,37 (m, 7H), 1,18 - 1,08 (m, 1H), 0,63 - 0,55 (m, 1H), 0,52 - 0,38 (m, 2H), 0,31 - 0,22 (m, 1H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,51 (s, 3F), -79,02 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 466,14395, găsit 467,1 (M+1)+; Timp retenţie: 4,9 minute. Metodă LCMS: SunFire C18 (75 X 4,6 mm, 3,5 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril timp de 4 min, apoi menţinere timp de 2 min la 95 % acetonitril, temperatură = 45 °C, Flux = 1,5 mL/min).
Al doilea vârf care a eluat a dat vârful SFC 2, urmat de cromatografie în fază inversă, eluând cu 70% acetonitril în apă acidă (conţinând 0,1% v/v acid formic), rezultând un solid galben deschis (6R)-17-amino-12-ciclopropil-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (enantiomer 2) (5,36 mg, 22%, 97,7% de). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,75 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 6,33 (s, 2H), 4,24 - 4,14 (m, 1H), 2,48 - 2,42 (m, 1H), 2,31 - 2,21 (m, 1H), 2,17 - 2,07 (m, 1H), 1,82 - 1,62 (m, 3H), 1,57 - 1,38 (m, 4H), 1,19 - 1,08 (m, 1H), 0,67 - 0,56 (m, 1H), 0,52 - 0,36 (m, 2H), 0,32 - 0,22 (m, 1H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,53 (s, 3F), -76,34 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 466,14395, găsit 467,1 (M+1)+; Timp retenţie: 4,85 minute. Metodă LCMS: SunFire C18 (75 X 4,6 mm, 3,5 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, condiţii fază mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril timp de 4 min, apoi menţinere timp de 2 min la 95 % acetonitril, temperatură = 45 °C, Flux = 1,5 mL/min).
Exemplul 49: Preparare (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-8,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (diastereomer 1), Compus 70, şi (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-8,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (diastereomer 2), Compus 71
Etapa 1: Benzil 2-(trifluormetil)oxiran-2-carboxilat
2-(trifluorometil)prop-2-enoat de benzil (50,45 g, 214,79 mmol) a fost dizolvat într-un amestec de dioxan (1000 mL) şi apă (200 mL). Amestecul a fost răcit într-o baie de apă cu gheaţă. Sub agitare energică, s-a diluat NaHCO33 (91,2 g, 1,0856 mol), urmat de adăugarea în porţii de oxonă (135,5 g). Adăugarea a durat 80 de minute, apoi amestecul a fost agitat la aceeaşi temperatură timp de 20 de minute, urmat de 90 de minute de agitare la temperatura camerei. S-au adăugat apă (300 mL) şi acetat de etil (300 mL) şi straturile au fost separate. Stratul organic a fost spălat cu saramură, uscat peste MgSO4 anhidru, filtrat şi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice utilizând un gradient de la 5% la 50% acetat de etil în hexani pentru a da produsul sub formă de ulei incolor, 2-(trifluorometil)oxiran-2-carboxilat de benzil (57,49 g, 98%). 1H RMN (500 MHz, Cloroform-d) δ 7,62 - 7,28 (m, 5H), 5,33 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 5,28 (d, J = 12,2 Hz, 1H), 3,30 - 3,18 (m, 2H).
Etapa 2: Benzil 3,3,3-trifluor-2-hidroxi-2-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]propanoat
La o soluţie de (4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentan-1-ol (1,48 g, 6,5918 mmol) în EtOAc (6,5 mL) s-a adăugat benzil 2-(trifluormetil)oxiran-2-carboxilat (2,2 g, 8,9364 mmol) apoi magneziu triflat (2,13 g, 6,6058 mmol) şi amestecul agitat la 85 °C timp de 24 h. La reacţie s-a adăugat EtOAc (60 mL) şi apă (20 mL) şi apoi amestecul extras cu EtOAc (2 X 50 mL), fracţiile organice spălate cu soluţie salină (25 mL), uscate peste Na2SO4, filtrate şi concentrate sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie cu detentă pe gel de silice (încărcare pe silica gel cu benzen şi eluat cu 0 % până la 15 % EtOAc în hexani timp de un gradient de 45 min) pentru a da un ulei incolor, benzil 3,3,3-trifluor-2-hidroxi-2-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]propanoat (1,1 g, 35 %). ESI-MS m/z calc. 470,1916, găsit 471,1 (M+1)+; Timp retenţie: 6,5 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 - 100 % fază mobilă B timp de 12 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 3: Benzil 2-benziloxi-3,3,3-trifluor-2-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]propanoat
O soluţie de benzil 3,3,3-trifluoro-2-hidroxi-2-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]propanoat (1,1 g, 2,3380 mmol) în DMF (5,5 mL) a fost răcită la 0 °C şi apoi s-au adăugat bromură de benzil (720 mg, 0,5 mL, 4,21 mmol) şi iodură de tetrabutil amoniu (171 mg, 0,463 mmol) urmate de hidrură de sodiu (125 mg, 3,1253 mmol) într-o singură porţie, iar amestecul rezultat a fost agitat timp de 4 ore la 0 °C. Amestecul s-a încălzit la temperatura camerei şi s-a agitat timp de 12 ore. S-a adăugat mai multă hidrură de sodiu (38 mg, 0,9501 mmol) şi bromură de benzil (288 mg, 0,2 mL, 1,6839 mmol) la 0 °C, apoi s-a agitat la temperatura camerei timp de 30 de minute. Reacţia a fost stinsă cu NH4Cl (30 mL) la temperatura camerei şi extrasă cu EtOAc (3 X 75 mL). Fazele organice combinate au fost apoi spălate cu saramură (1 X 100 mL), uscate peste Na2SO4, filtrate şi concentrate sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie flash pe gel de silice (eluat cu un gradient de la 0% la 10% EtOAc în hexani timp de 50 de minute) pentru a da, sub formă de ulei incolor, benzil 2-benziloxi-3,3,3-trifluoro-2-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]propanoat (1 g, 76%). ESI-MS m/z calculat 560,2386, găsit 561,2 (M+1)+. Timp de retenţie: 7,88 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5 - 100 % fază mobilă B timp de 12 minute. Faza mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 4: 2-Benziloxi-3,3,3-trifluor-2-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]propanhidrazidă
La o soluţie de benzil 2-benziloxi-3,3,3-trifluor-2-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]propanoat (1,64 g, 2,9254 mmol) în metanol (1 mL) s-a adăugat 3,4,6,7,8,9-hexahidro-2H-pirimido[1,2-a]pirimidină (164 mg, 1,1782 mmol), apoi hidrat de hidrazină (193,99 mg, 0,19 mL, 3,8751 mmol) şi agitată la temperatura camerei timp de 10 min. Reacţia a fost agitată timp de 14 h la temperatura camerei apoi s-a adăugat hidrat de hidrazină adiţională (204,20 mg, 0,2 mL, 4,0791 mmol) şi amestecul a fost agitat timp de 30 minute. Reacţia a fost apoi stinsă cu apă (30 mL), extrasă cu TBME (3 X 40 mL) şi straturile organice combinate au fost spălate cu soluţie saturată apoasă de NaHCO3 (50 mL), soluţie salină (100 mL) uscate peste MgSO4, filtrate şi concentrate sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie cu detentă pe gel de silice(încărcat cu benzen/DCM şi eluat cu un gradient de la 0 % până la 10 % MeOH în DCM timp de 40 min) pentru a da un produs clar şi fracţii amestecate conţinând produsul. Fracţiile mixate au fost concentrate şi repurificate prin cromatografie cu detentă pe silicagel (încărcată cu benzen şi eluată cu un gradient de la 0% la 5% metanol în diclormetan timp de 40 de minute) şi combinate cu produsul curat din prima coloană pentru a obţine, sub formă de ulei de culoare gălbuie, 2-benziloxi-3,3,3-trifluor-2-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]propanhidrazidă (500 mg, 35 %). ESI-MS m/z calc. 484,2185, găsit 485,5 (M+1)+; Timp retenţie: 5,52 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 X 4,6 mm) şi o rulare cu gradient dual de la 5 - 100 % fază mobilă B timp de 12 minute. Fază mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 5: terţ-Butil N-[2-[[[2-benziloxi-3,3,3-trifluor-2-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]propanoil]amino]carbamoil]-6-brom-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La o soluţie de acid 6-bromo-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluorometil)piridin-2-carboxilic (416 mg, 1,0801 mmol) şi 2-benziloxi-3,3,3-trifluoro-2-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]propanhidrazidă (520 mg, 1,0733 mmol) în EtOAc (5,2 mL), s-a adăugat T3P (1,13 g, 50 % g/g, 1,7757 mmol), apoi piridină (391,2 mg, 0,4 mL, 4,9456 mmol) la temperatura camerei şi reacţia a fost agitată timp de 5 ore. Reacţia a fost diluată cu EtOAc (20 mL), spălată cu soluţie apoasă saturată de NH4Cl (5 mL), apoi NaHCO33 (20 mL) şi straturile apoase au fost extrase din nou cu EtOAc (2 X 40 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu saramură, uscate peste Na2SO4, filtrate şi concentrate sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie flash pe gel de silice (eluat cu un gradient de la 0% la 20% EtOAc în hexani timp de 40 de minute) pentru a da, sub formă de ulei galben pal, terţ-butil N-[2-[[[2-benziloxi-3,3,3-trifluoro-2-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]propanoil]amino]carbamoil]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat (586,2 mg, 64%). ESI-MS m/z calculat 850,2012, găsit 851,6 (M+1)+Timp de retenţie: 8,46 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5 - 100 % fază mobilă B timp de 12 minute. Faza mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 6: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2,2,2-trifluoro-1-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]etil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[[[2-benziloxi-3,3,3-trifluoro-2-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]propanoil]amino]carbamoil]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat (586 mg, 0,6881 mmol) în acetonitril (7,6 mL), s-au adăugat clorură de tosil (152 mg, 0,7973 mmol), apoi DIPEA (267,12 mg, 0,36 mL, 2,0668 mmol) şi amestecul de reacţie a fost agitat timp de 5 ore la temperatura camerei. Reacţia a fost diluată cu EtOAc (40 mL), spălată cu soluţie apoasă saturată de NH4Cl (15 mL) şi saramură (30 mL), apoi uscată peste Na2SO4, filtrat şi concentrat sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie flash pe gel de silice (încărcat cu benzen şi eluat cu 0% până la 10% EtOAc în hexani pe un gradient de 30 de minute) pentru a se obţine un ulei incolor, terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2,2,2-trifluoro-1-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]etil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat (425 mg, 73%). ESI-MS m/z calculat 832,1906, găsit 833,5 (M+1)+Timp de retenţie: 9,08 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5 - 100 % fază mobilă B timp de 12 minute. Faza mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 7: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2,2,2-trifluoro-1-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]etil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2,2,2-trifluoro-1-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]etil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat (425 mg, 0,5098 mmol) în TBME (4,35 mL) s-au adăugat DIPEA (161,76 mg, 0,218 mL, 1,2516 mmol) şi DMAP (22 mg, 0,1801 mmol). Apoi s-a adăugat dicarbonat de di-terţ-butil (351,5 mg, 0,37 mL, 1,6106 mmol) şi reacţia a fost agitată timp de 12 ore la temperatura camerei. Reacţia a fost adăugată la apă (10 mL) şi apoi substanţele organice au fost extrase cu TBME (50 mL). Soluţia organică a fost spălată cu apă (50 mL), saramură (50 mL), uscată peste Na2SO4, filtrată şi concentrată sub vid. Reziduul a fost purificat prin cromatografie flash pe gel de silice (încărcat cu benzen şi eluat cu 0% până la 10% EtOAc în hexani pe un gradient de 30 de minute) pentru a da sub formă de ulei incolor, terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2,2,2-trifluoro-1-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]etil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (476 mg, 99%). ESI-MS m/z calculat 932,2431, găsit 933,7 (M+1)+. Timp de retenţie: 8,76 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5 - 100 % fază mobilă B timp de 12 minute. Faza mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 8: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2,2,2-trifluoro-1-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]etil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2,2,2-trifluoro-1-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]etil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (476 mg, 0,5098 mmol) în DMSO (4,75 mL) s-a adăugat acetat de cesiu (395 mg, 2,0578 mmol) şi s-a plasat pe o placă de reacţie la 86 °C timp de 6 ore. Reacţia a fost răcită la temperatura camerei şi diluată cu TBME (20 mL) şi NH4Cl apos (15 mL) şi extras cu TBME (5 X 20 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu saramură (2 X 15 mL), uscate peste Na2SO4, filtrate şi concentrate sub vid pentru a da un ulei incolor, terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2,2,2-trifluoro-1-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]etil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (444 mg, 95%). ESI-MS m/z calculat 870,3275, găsit 871,8 (M+1)+Timp de retenţie: 7,85 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5 - 100 % fază mobilă B timp de 12 minute. Faza mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 9: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2,2,2-trifluoro-1-[[(4S)-4-hidroxipentoxi]metil]etil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2,2,2-trifluoro-1-[[(4S)-4-[(4-metoxifenil)metoxi]pentoxi]metil]etil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (128 mg, 0,5639 mmol) s-a adăugat DDQ (440 mg, 0,5053 mmol) în DCM (3,9 mL), apoi apă (0,22 mL). Soluţia de reacţie incoloră a devenit instantaneu o suspensie gri la adăugarea de DDQ. Amestecul a fost agitat timp de 1,5 ore la 30 °C, apoi diluat cu DCM (20 mL), spălat cu NaHCO3 apos satura. (15 mL), uscat peste MgSO44, filtrat şi concentrat sub vid (s-au obţinut 400 mg de produs brut). Reziduul a fost purificat prin cromatografie cu detentă pe gel de silice (încărcat cu benzen şi eluat cu 0% până la 50% EtOAc în hexani pe un gradient de 30 de minute) pentru a da terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2,2,2-trifluoro-1-[[(4S)-4-hidroxipentoxi]metil]etil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (310 mg, 81%). ESI-MS m/z calculat 750,2699, găsit 651,3 (M-100+H)+. Timp de retenţie: 6,95 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5 - 100 % fază mobilă B timp de 12 minute. Faza mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 10: terţ-Butil N-[(12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-8,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-2,2,2-trifluoro-1-[[(4S)-4-hidroxipentoxi]metil]etil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (274 mg, 0,3650 mmol) în toluen (60 mL), s-a adăugat trifenilfosfină (196 mg, 0,7473 mmol) urmată de DIAD (146,16 mg, 0,14 mL, 0,7228 mmol) la temperatura camerei. După 6 ore, reacţia a fost diluată cu EtOAc (30 mL) şi spălată cu NaHCO3 apos saturat. (20 mL), soluţie apoasă saturată de NH4Cl (20 mL) şi saramură (2 x 50 mL), apoi uscată peste Na2SO4, filtrată şi concentrată sub vid (s-au obţinut 650 mg de produs brut). Reziduul a fost purificat prin cromatografie flash pe gel de silice (încărcat cu benzen minim şi eluat cu 0% până la 5% EtOAc în hexani pe un gradient de 80 de minute, apoi 5% până la 10% EtOAc în hexani pe un gradient de 10 minute) pentru a da ambii diastereomeri de terţ-butil N-[(12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-8,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (160 mg, 59%). ESI-MS m/z calculat 732,2594, găsit 733,6 (M+1)+Timp de retenţie: 8,57 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5 - 100 % fază mobilă B timp de 12 minute. Faza mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 11: terţ-Butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(12R)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-8,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[(12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-8,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (40 mg, 0,0546 mmol) în etanol (1,36 mL) s-a adăugat paladiu pe carbon 10% (22 mg, 0,0207 mmol) sub atmosferă de azot, apoi atmosfera de reacţie a fost schimbată cu hidrogen gazos. Reacţia a fost agitată la temperatura camerei sub un balon cu hidrogen timp de 45 de minute. Reacţia a fost filtrată prin celită compactată, iar filtratul a fost concentrat sub vid pentru a se obţine o spumă galbenă. terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(12R)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-8,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (17 mg, 48%). ESI-MS m/z calculat 642,2124, găsit 543,1 (M-100+H)+Timp de retenţie: 7,39 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5 - 100 % fază mobilă B timp de 12 minute. Faza mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa: (12R)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-8,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol
O soluţie de terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(12R)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-8,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (17,5 mg, 0,0272 mmol) a fost încălzită la 100 °C într-un reactor cu microunde timp de 2 ore. Reacţia a fost concentrată sub vid pentru a se obţine o spumă galbenă, (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-8,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (12 mg, 95%). ESI-MS m/z calculat 442,1076, găsit 443,5 (M+1)+Timp de retenţie: 6,08 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5 - 100 % fază mobilă B timp de 12 minute. Faza mobilă A = apă (0,1 % CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 13: (12R)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-8,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (diastereomer 1), Compusul 70, şi (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-8,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (diastereomer 2), Compusul 71
(12R)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-8,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (19 mg, 0,04296 mmol) a fost separat în diastereomeri individuali prin SFC chirală utilizând o metodă SFC-MS în fază normală cu o coloană Phenomenex LUX-4 (250 X 10 mm; 5□m) la 50 °C (faza mobilă a fost 8% MeOH (+ 20 mM NH3)/92% CO2 la o rată flux de 10 mL/min, concentraţia probei a fost de 20,3 mg/mL în metanol, volumul injectat = 70 µL cu o presiune de ieşire de 128 bar şi o lungime de undă de detecţie de 224 nm). Primul vârf care a eluat s-a produs sub forma unui solid galben deschis, (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-8,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (diastereomer 1) (2,5 mg, 26%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,41 (d, J = 0,8 Hz, 1H), 5,16 (s, 2H), 4,85 - 4,71 (m, 1H), 4,12 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 3,99 - 3,88 (m, 2H), 3,64 (ddd, J = 8,9, 6,5, 4,6 Hz, 1H), 2,85 - 2,77 (m, 1H), 2,07 - 1,96 (m, 2H), 1,78 - 1,67 (m, 1H), 1,40 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,35 - 1,20 (m, 1H). ESI-MS m/z calc. 442,10757, găsit 443,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,76 minute. ESI-MS m/z calc. 442,10757, găsit 443,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,76 minute. Metodă LCMS: Acquity UPLC BEH coloană C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 % până la 99 % fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Al doilea vârf pentru eluare a dat un solid galben pal, (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-8,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1,12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (diastereomer 2) (1,9 mg, 19 %). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,45 - 7,38 (m, 1H), 5,21 (s, 2H), 4,86 - 4,77 (m, 1H), 4,16 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 4,02 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 3,97 - 3,91 (m, 1H), 3,74 - 3,67 (m, 1H), 2,79 - 2,67 (m, 1H), 1,96 - 1,87 (m, 1H), 1,87 - 1,75 (m, 1H), 1,41 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 1,39 - 1,34 (m, 1H), 1,34 - 1,24 (m, 1H). ESI-MS m/z calc. 442,10757, găsit 443,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,78 minute. Metodă LCMS: Acquity UPLC BEH coloană C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 % până la 99 % fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = acetonitril (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Exemplul 50: Preparare (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-9,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (diastereomer 1), Compus 72, şi (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-9,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (diastereomer 2), Compus 73
Etapa 1: 1,1,1-Trifluor-2-(2-furil)pent-4-en-2-ol
Clorura de alilmagneziu în THF (53 mL de 2 M, 106 mmol) a fost diluată cu eter (60 mL) şi răcită într-o baie de apă cu gheaţă sub azot. Sub agitare rapidă, s-a adăugat rapid 2,2,2-trifluoro-1-(2-furil)etanonă (4,2 g, 20,478 mmol) în eter (10 mL). Amestecul a fost agitat la 0 °C timp de 30 de minute, apoi răcit la -20 °C. S-a adăugat acid clorhidric apos (10 mL, 2 N) şi straturile au fost separate. Stratul eteric a fost spălat cu saramură, uscat peste MgSO4 anhidru, filtrat şi concentrat pentru a da, sub formă de ulei brut galben, 1,1,1-trifluoro-2-(2-furil)pent-4-en-2-ol (5 g, cantitativ). 1H RMN (500 MHz, Cloroform-d) δ 7,45 (s, 1H), 6,48 (d, J = 3,4, 1H), 6,41 (d, J = 3,3, 1H), 5,70 - 5,57 (m, 1H), 5,29 - 5,15 (m, 2H), 3,05 (s, 1H), 3,00 - 2,89 (m, 1H), 2,81 - 2,71 (m, 1H).
Etapa 2: 2-[1-Benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]furan
1,1,1-Trifluoro-2-(2-furil)pent-4-en-2-ol (3 g, 11,641 mmol) a fost dizolvat în DMF (30 mL) şi soluţia a fost răcită într-o baie de apă cu gheaţă. S-a adăugat hidrură de sodiu în ulei mineral (822 mg, 20,552 mmol) şi soluţia a devenit un amestec maroniu deschis. Amestecul a fost agitat timp de 5 minute, apoi s-a adăugat bromometilbenzen (3,024 g, 2,1 mL, 17,681 mmol) urmat de iodură de tetrabutilamoniu (878 mg, 2,377 mmol). Amestecul a fost agitat la 30 °C timp de 16 ore. S-a adăugat soluţie apoasă saturată de NH4Cl (15 mL) urmat de EtOAc (30 mL). Straturile au fost separate, iar stratul organic a fost spălat cu apă, apoi cu saramură, uscat peste MgSO4 anhidru, filtrat şi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (coloană de 40 g), utilizând un gradient de la 0% la 15% EtOAc în hexani, obţinându-se sub formă de ulei galben pal, 2-[1-benziloxi-1-(trifluorometil)but-3-enil]furan (3,4 g, 89%). 1H RMN (500 MHz, Cloroform-d) δ 7,59 - 7,44 (m, 1H), 7,43 - 7,23 (m, 5H), 6,60 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 6,51 - 6,36 (m, 1H), 5,26 - 5,03 (m, 3H), 4,55 - 4,35 (m, 2H), 3,17 - 2,91 (m, 2H).
Etapa 3: 3-Benziloxi-4,4,4-trifluor-3-(2-furil)butanal
2-[1-Benziloxi-1-(trifluormetil)but-3-enil]furan (5,3 g, 16,994 mmol) a fost amestecat cu THF (40 mL) şi apă (20 mL) la temperatura camerei. NaIO4 (10,9 g, 50,960 mmol), 2,6 lutidină (4,4304 g, 4,8 mL, 41,346 mmol) şi OsO4 în terţ-butanol (1,2 g, 2,5 % g/g, 0,118 mmol) au fost adăugate. După 10 minute de agitare, s-a adăugat mai multă apă (5 mL). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 15 h. EtOAc (15 mL) şi a fost adăugată apă (15 mL) şi straturile au fost separate. Stratul organic a fost spălat cu soluţie salină, uscat peste sulfat de sodiu anhidru MgSO4, filtrat şi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (80 g coloană), utilizând un gradient de la 0 % până la 15 % EtOAc în hexani, pentru a da un ulei galben pal, 3-benziloxi-4,4,4-trifluor-3-(2-furil)butanal (3,72 g, 70 %). 1H RMN (500 MHz, Cloroform-d) δ 9,87 (t, J = 2,2 Hz, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,44 - 7,12 (m, 5H), 6,69(d, J = 3,1 Hz, 1H), 6,60 - 6,41 (m, 1H), 4,57 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,39 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 3,12 (d, J= 2,7 Hz, 2H).
Etapa 4: 3-Benziloxi-4,4,4-trifluor-3-(2-furil)butan-1-ol
3-Benziloxi-4,4,4-trifluoro-3-(2-furil)butanal (3,72 g, 11,849 mmol) a fost dizolvat în MeOH (40 mL) şi răcit într-o baie de apă cu gheaţă. S a adăugat NaBH4 (480 mg, 0,5079 mL, 12,688 mmol) şi amestecul a fost agitat la aceeaşi temperatură timp de 15 minute. S-a adăugat soluţie apoasă saturată de NH4Cl (5 mL) şi amestecul a fost concentrat la 1/3 din volumul său iniţial. S-au adăugat EtOAc (40 mL) şi apă (40 mL) şi straturile rezultate au fost separate. Stratul organic a fost spălat cu saramură, uscat peste MgSO4 anhidru, filtrat şi concentrat pentru a da, sub formă de ulei incolor, 3-benziloxi-4,4,4-trifluoro-3-(2-furil)butan-1-ol (3,7 g, 94%). 1H RMN (500 MHz, Cloroform-d) δ 7,52 (s, 1H), 7,41 - 7,27 (m, 5H), 6,67 - 6,54 (m, 1H), 6,51 - 6,39 (m, 1H), 4,54 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 4,43 (d, J = 10,9 Hz, 1H), 3,95 - 3,80 (m, 2H), 2,57 - 2,40 (m, 2H), 2,00 (s, 1H).
Etapa 5: [(1S)-3-[3-Benziloxi-4,4,4-trifluor-3-(2-furyl)butoxi]-1-metil-propoxy]-terţ-Butil-dimetil-silan
3-Benziloxi-4,4,4-trifluoro-3-(2-furil)butan-1-ol (980 mg, 2,9373 mmol) a fost dizolvat în DMF (8 mL) şi amestecul a fost răcit pentru scurt timp cu o baie de apă cu gheaţă. S-a adăugat hidrură de sodiu în ulei mineral (202 mg, 5,0505 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 15 minute. S a adăugat terţ-Butil-[(1S)-3-iodo-1-metil-propoxi]-dimetil-silan (2,15 g, 6,499 mmol) în DMF (2 mL) şi amestecul a fost agitat la temperatura camerei sub balon de azot timp de 72 h. S-a adăugat soluţie apoasă saturată de NH4Cl (5 mL) urmat de EtOAc (20 mL) şi apă (20 mL). Straturile au fost separate, iar stratul organic a fost spălat cu mai multă apă (2 x 20 mL) şi saramură, apoi uscat peste MgSO4 anhidru, filtrat şi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (coloană de 40 g), utilizând un gradient de la 0% la 10% EtOAc în hexani, obţinându-se sub formă de ulei incolor, [(1S)-3-[3-benziloxi-4,4,4-trifluoro-3-(2-furil)butoxi]-1-metil-propoxi]-terţ-butil-dimetil-silan (760 mg, 51 %). 1H RMN (500 MHz, Cloroform-d) δ 7,49 (s, 1H), 7,37 până la 7,25 (m, 5H), 6,58 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 6,47 până la 6,36 (m, 1H), 4,55 până la 4,36 (m, 2H), 3,98 până la 3,85 (m, 1H), 3,61 până la 3,51 (m, 2H), 3,51 până la 3,37 (m, 2H), 2,69 până la 2,35 (m, 2H), 1,60 la 1,50 (m, 2H), 1,15 până la 1,09 (m, 3H), 0,94 până la 0,84 (m, 9H), 0,06 până la -0,02 (m, 6H).
Etapa 6: acid 2-Benziloxi-4-[(3S)-3-[terţ-Butil(dimetil)silil]oxybutoxi]-2-(trifluormetil)butanoic
[(1S)-3-[3-benziloxi-4,4,4-trifluoro-3-(2-furil)butoxi]-1-metil-propoxi]-terţ-butil-dimetil-silan (700 mg, 1,2946 mmol) a fost amestecat în CH3CN (5,5 mL), CCl4 (5,5 mL) şi apă (9 mL) la temperatura camerei. S-au adăugat NaIO4 (1,68 g, 7,8544 mmol), urmat de clorură de ruteniu(III) (15 mg, 0,0723 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 15 ore, apoi s-a adăugat mai mult NaIO4 (278 mg, 1,2997 mmol) şi amestecul a fost agitat timp de încă o oră. S-au adăugat acetat de etil (30 mL) şi apă (30 mL) şi straturile au fost separate. Stratul organic a fost spălat cu saramură, uscat peste MgSO4 anhidru, filtrat şi concentrat pentru a da acid 2-benziloxi-4-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-2-(trifluorometil)butanoic brut (800 mg, cantitativ). ESI-MS m/z calculat 464,2206, găsit 465,6 (M+1)+. Timp de retenţie: 4,33 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5% la 100% fază mobilă B timp de 6 minute. Faza mobilă A = apă (0,1% CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 7: terţ-Butil N-[[2-benziloxi-4-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-2-(trifluorometil)butanoil]amino]carbamat
Acid 2-Benziloxi-4-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-2-(trifluorometil)butanoic (610 mg, 1,116 mmol) a fost dizolvat în DMF (15 mL) la temperatura camerei. S-a adăugat terţ-Butil N-aminocarbamat (221 mg, 1,6722 mmol), urmat de HATU (638 mg, 1,6779 mmol) şi TEA (217,8 mg, 0,3 mL, 2,1524 mmol). După 30 de minute, s-au adăugat apă (40 mL) şi EtOAc (40 mL) şi straturile au fost separate. Stratul organic a fost spălat cu mai multă apă (3 X 30 mL) şi saramură, apoi uscat peste MgSO4 anhidru, filtrat şi concentrat pentru a se obţine un ulei brut incolor, terţ-butil N-[[2-benziloxi-4-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-2-(trifluorometil)butanoil]amino]carbamat (260 mg, 38%). ESI-MS m/z calculat 578,2999, găsit 579,7 (M+1)+. Timp de retenţie: 5,1 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5% la 100% fază mobilă B timp de 6 minute. Faza mobilă A = apă (0,1% CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 8: 2-Benziloxi-4-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-2-(trifluorometil)butanhidrazidă
terţ-Butil N-[[2-benziloxi-4-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-2-(trifluorometil)butanoil]amino]carbamat (268 mg, 0,4399 mmol) şi 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (32 g, 20 mL, 190,43 mmol) au fost sigilate într-un tub pentru microunde şi încălzite la 100 °C timp de 110 minute. Amestecul a fost apoi concentrat, iar reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (coloană de 40 g) utilizând un gradient de la 0% la 15% EtOAc în hexani pentru a da, sub formă de spumă albă, 2-benziloxi-4-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-2-(trifluorometil)butanhidrazidă (127 mg, 57%). ESI-MS m/z calculat 478,2475, găsit 479,3 (M+1)+. Timp de retenţie: 3,89 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5% la 100% fază mobilă B timp de 6 minute. Faza mobilă A = apă (0,1% CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 9: terţ-Butil N-[2-[[2-benziloxi-4-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-2-(trifluorometil)butanoil]amino]carbamoil]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat
2-Benziloxi-4-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-2-(trifluorometil)butanhidrazidă (127 mg, 0,2521 mmol) a fost dizolvată în EtOAc (2 mL) la temperatura camerei. S-a adăugat acid 6-Bromo-3-(terţ-butoxicarbonilamino)-5-(trifluorometil)piridin-2-carboxilic (118 mg, 0,3064 mmol), urmat de piridină (97,8 mg, 0,1 mL, 1,2364 mmol) şi T3P în EtOAc (160,35 mg, 0,3 mL de 50% g/g, 0,2520 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 14 ore. Amestecul a fost concentrat, iar reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (coloană de 40 g) utilizând un gradient de la 0% la 50% EtOAc în hexani, obţinându-se o spumă albă. terţ-butil N-[2-[[2-benziloxi-4-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-2-(trifluorometil)butanoil]amino]carbamoil]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat (200 mg, 84%). ESI-MS m/z calculat 844,2302, găsit 791,5 (M-53)+. Timp de retenţie: 5,09 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5% la 100% fază mobilă B timp de 6 minute. Faza mobilă A = apă (0,1% CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 10: terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-3-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-1-(trifluorometil)propil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat
terţ-Butil N-[2-[[2-benziloxi-4-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-2-(trifluorometil)butanoil]amino]carbamoil]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat (200 mg, 0,2128 mmol) a fost dizolvat în CH3CN (2 mL) la temperatura camerei. S-a adăugat DIEA (96,46 mg, 0,13 mL, 0,7463 mmol) urmat de TsCl (60 mg, 0,3147 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 5 ore, apoi concentrat la 1/3 din volumul său şi diluat cu EtOAc (20 mL) şi soluţie apoasă saturată de NH4Cl (20 mL). Straturile rezultate au fost separate, iar stratul organic a fost spălat cu saramură, uscat peste MgSO4 anhidru, filtrat şi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (coloană de 40 g) utilizând un gradient de la 0% la 10% EtOAc în hexani pentru a se obţine un ulei incolor, terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-3-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-1-(trifluorometil)propil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat (110 mg, 59%). ESI-MS m/z calculat 826,2196, găsit 771,5 (M-55)+Timp de retenţie: 5,25 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5% la 100% fază mobilă B timp de 6 minute. Faza mobilă A = apă (0,1% CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 11: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-3-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-1-(trifluorometil)propil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-3-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-1-(trifluorometil)propil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat (110 mg, 0,1262 mmol) s-a amestecat la temperatura camerei cu MTBE (2 mL). S-a adăugat dicarbonat de di-terţ-butil (51 mg, 0,0537 mL, 0,2337 mmol), urmat de DMAP (1 mg, 0,0082 mmol) şi DIEA (22,26 mg, 0,03 mL, 0,1722 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 14 ore şi apoi a fost concentrat şi purificat prin cromatografie pe gel de silice (coloană de 24 g) utilizând un gradient de la 0% la 20% EtOAc în hexani pentru a se obţine o spumă albă, terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-3-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-1-(trifluorometil)propil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (122 mg, 99%). ESI-MS m/z calculat 926,272, găsit 773,5 (M-154)+. Timp de retenţie: 5,17 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5% la 100% fază mobilă B timp de 6 minute. Faza mobilă A = apă (0,1% CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 12: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-3-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-1-(trifluorometil)propil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-3-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-1-(trifluorometil)propil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-bromo-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (122 mg, 0,1249 mmol) a fost dizolvat în DMSO (1 mL). S-a adăugat acetat de cesiu (72 mg, 0,3751 mmol) şi amestecul a fost plasat într-o baie de ulei la 70 °C şi agitat sub un balon de azot timp de 20 de ore. Amestecul a fost răcit la temperatura camerei şi diluat cu EtOAc (20 mL) şi NaHCO3 apos saturat (20 mL). Straturile au fost separate, iar stratul organic a fost spălat cu mai multă apă (2 X 20 mL) şi saramură, apoi uscat peste MgSO4 anhidru, filtrat şi concentrat pentru a se obţine un ulei galben pal, terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-3-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-1-(trifluorometil)propil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (120 mg, 94%). ESI-MS m/z calculat 864,3564, găsit 765,7 (M-99)+. Timp de retenţie: 4,86 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5% la 100% fază mobilă B timp de 6 minute. Faza mobilă A = apă (0,1% CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 13: terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-3-[(3S)-3-hidroxibutoxi]-1-(trifluorometil)propil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-3-[(3S)-3-[terţ-butil(dimetil)silil]oxibutoxi]-1-(trifluorometil)propil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (120 mg, 0,1179 mmol) a fost dizolvat în THF (2 mL) la temperatura camerei. S-a adăugat fluorură de tetrabutilamoniu în THF (88,7 mg, 0,1 mL, 0,3392 mmol). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 5 ore şi apoi plasat într-o baie de ulei la 40 °C. Agitarea a continuat timp de 14 ore, apoi s-a adăugat mai multă fluorură de tetrabutilamoniu în THF (354,8 mg, 0,4 mL, 1,357 mmol). După 6 ore, s-a adăugat DMF (2 mL) şi agitarea a continuat timp de 15 ore. S-a adăugat mai multă fluorură de tetrabutilamoniu în THF (354,8 mg, 0,4 mL, 1,357 mmol). După încă 16 ore, amestecul a fost diluat cu EtOAc (30 mL) şi apă (40 mL) şi straturile au fost separate. Stratul organic a fost spălat cu saramură, uscat peste MgSO4 anhidru, filtrat şi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (coloană de 12 g), utilizând un gradient de la 10% la 90% EtOAc în hexani, pentru a se obţine o spumă albă, terţ-butil N-[2-[5-[1-benziloxi-3-[(3S)-3-hidroxibutoxi]-1-(trifluorometil)propil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (73 mg, 81%). ESI-MS m/z calculat 750,2699, găsit 651,7 (M-99)+Timp de retenţie: 3,8 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5% la 100% fază mobilă B timp de 6 minute. Faza mobilă A = apă (0,1% CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 14: terţ-Butil N-[(12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-9,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat
terţ-Butil N-[2-[5-[1-benziloxi-3-[(3S)-3-hidroxibutoxi]-1-(trifluorometil)propil]-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-hidroxi-5-(trifluorometil)-3-piridil]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamatul (70 mg, 0,0914 mmol) a fost dizolvat în toluen (9 mL) la temperatura camerei şi PPh3 (77 mg, 0,068 mL, 0,2936 mmol) a fost adăugat într-o singură porţie, urmat de DIAD (62,64 mg, 0,06 mL, 0,3098 mmol) cu o seringă. Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 7 ore, apoi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (coloană de 12 g), utilizând un gradient de la 0% la 15% EtOAc în hexani, pentru a se obţine un solid alb, terţ-butil N-[(12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-9,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-butoxicarbonil-carbamat (40 mg, 57%). ESI-MS m/z calculat 732,2594, găsit 733,6 (M+1)+. Timp de retenţie: 4,75 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5% la 100% fază mobilă B timp de 6 minute. Faza mobilă A = apă (0,1% CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 15: terţ-Butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(12R)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-9,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat
terţ-Butil N-[(12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-9,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]-N-terţ-Butoxicarbonil-carbamat (40 mg, 0,0519 mmol) a fost dizolvat în EtOH (2 mL) şi s-a adăugat paladiu pe carbon 10% (20 mg, 0,1879 mmol). Amestecul a fost purjat de mai multe ori cu hidrogen gazos şi hidrogenat la 50 psi pe un agitator Parr timp de 20 de ore. Amestecul a fost apoi filtrat printr-un strat de celită, spălat cu MeOH (~15 mL), iar filtratul a fost concentrat complet pentru a se obţine un solid alb brut, terţ-butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(12R)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-9,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (33 mg, 94%). ESI-MS m/z calculat 642,2124, găsit 643,4 (M+1)+. Timp de retenţie: 4,88 minute. Metodă LCMS: Merck Millipore Chromolith SpeedROD coloană C18 (50 x 4,6 mm) şi un gradient dublu de la 5% la 100% fază mobilă B timp de 6 minute. Faza mobilă A = apă (0,1% CF3CO2H). Faza mobilă B = acetonitril (0,1 % CF3CO2H).
Etapa 16: (12R)-17-Amino-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-9,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol
terţ-Butil N-terţ-butoxicarbonil-N-[(12R)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-9,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-il]carbamat (33 mg, 0,0488 mmol) a fost amestecat cu 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol (3,192 g, 2 mL, 18,996 mmol) într-un vas pentru microunde, apoi sigilat şi încălzit la 100 °C timp de 130 de minute. Amestecul a fost apoi răcit la temperatura camerei şi concentrat. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (coloană de 12 g), utilizând un gradient de la 5% la 60% EtOAc în hexani, obţinându-se un solid galben pal, (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-9,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (21 mg, 89%). ESI-MS m/z calculat 442,1076, găsit 443,5 (M+1)+. Timp de retenţie: 2,71 minute (media a două vârfuri diastereomerice). Metodă LCMS: Waters Cortex, dimensiunea particulelor de 2,7 µm C18 (3,0 mm X 50 mm), 55 °C; rată flux: 1,2 mL/min; fază mobilă: 100% apă cu 0,1% acid trifluoracetic, apoi 100% acetonitril cu 0,1% acid trifluoracetic, gradient de 5% până la 100% B timp de 4 minute, cu echilibrare la 100% B timp de 0,5 minute, apoi 5% B timp de 1,5 minute.
Etapa 17: (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-9,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (diastereomer 1), Compusul 72 şi (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-9,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (diastereomer 2), Compusul 73
(12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-9,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (20 mg, 0,04522 mmol) a fost separat în diastereomeri individuali prin SFC chirală utilizând o metodă SFC-MS în fază normală, utilizând o coloană ChiralCel OJ (250 X 10 mm; dimensiunea particulelor de 5 µm) la 50 °C (fază mobilă = 7 % MeOH (+ 20 mM NH3)3)/93 % CO22 la un rată flux de 10 mL/min, concentraţia probei a fost de 22,0 mg/mL în metanol, volumul de injecţie = 70 µL cu o presiune de ieşire de 140 bar, lungimea de undă de detecţie de 224 nm). Primul vârf care a eluat s-a produs sub forma unui solid galben pal, (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-9,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (diastereomer 1) (7,2 mg, 69%). 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,40 (s, 1H), 5,39 (pd, J = 6,5, 4,3 Hz, 1H), 5,14 (s, 2H), 3,99 (s, 1H), 3,86 - 3,78 (m, 1H), 3,67 - 3,61 (m, 1H), 3,60 - 3,51 (m, 2H), 2,68 (ddd, J = 14,9, 8,9, 5,9 Hz, 1H), 2,52 (dt, J = 15,2, 4,0 Hz, 1H), 2,40 - 2,30 (m, 1H), 1,64 - 1,58 (m, 1H), 1,42 (d, J = 6,5 Hz, 3H). ESI-MS m/z calc. 442,10757, găsit 443,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,76 minute. Metodă LCMS: Acquity UPLC BEH coloană C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 % până la 99 % fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Al doilea vârf care a eluat s-a produs sub forma unui solid galben pal, (12R)-17-amino-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-9,13,19-trioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (diastereomer 2) (5,2 mg, 51%) 1H RMN (400 MHz, Cloroform-d) δ 7,42 (s, 1H), 5,25 (ddt, J = 10,2, 6,5, 3,3 Hz, 1H), 5,10 (s, 2H), 4,51 (s, 1H), 3,95 (td, J = 9,2, 4,5 Hz, 1H), 3,86 (ddd, J = 12,1, 10,3, 1,7 Hz, 1H), 3,62 - 3,51 (m, 2H), 2,75 - 2,62 (m, 2H), 2,35 (dt, J = 14,9, 4,7 Hz, 1H), 1,49 - 1,37 (m, 4H). ESI-MS m/z calc. 442,10757, găsit 443,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,76 minute. Metodă LCMS: Acquity UPLC BEH coloană C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 1 % până la 99 % fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Exemplul 51: Preparare (15R)-15-metil-18-(trifluormetil)-16,22-dioxa-3,4,7,8,21-pentazatetraciclo[15.3.1.12,5.06,10]docosa-1(21),2,4,6,9,17,19-heptaen-20-amină, Compus 74
Etapa 1: Metil 3-[bis(terţ-butoxicarbonil)amino]-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
La o soluţie de metil 3-[bis(terţ-butoxicarbonil)amino]-6-brom-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (500 mg, 1,001 mmol) în DMSO (5 mL) s-au adăugat (2R)-pent-4-en-2-ol (160 µL, 1,555 mmol), carbonat de cesiu (521 mg, 1,599 mmol) şi iodcupru (54 mg, 0,2835 mmol) şi amestecul de reacţie a fost încălzit la 100 °C timp de 3 h. Amestecul de reacţie a fost răcit până la temperatura camerei şi turnat pe gheaţă spartă şi extras cu etil acetat şi spălate cu soluţie salină. Straturile organice au fost separate, uscate peste sulfat de sodiu, filtrate şi evaporate. Reziduul maron rezultat a fost purificat prin cromatografie pe silicagel utilizând gradient de suprafaţă de la 100 % hexani până la 30 % etil acetat în hexani pentru a da un ulei incolor, metil 3-[bis(terţ-butoxicarbonil)amino]-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (216 mg, 43 %). ESI-MS m/z calc. 504,20834, găsit 505,0 (M+1)+; Timp retenţie: 1,73 minute. Metodă LCMS: Acquity UPLC BEH coloană C18 (50 × 2,1 mm, particule de 1,7 µm) fabricată de Waters (pn: 186002350), şi o rulare cu gradient dual de la 30 - 99 % fază mobilă B timp de 2,9 minute. Fază mobilă A = H2O (0,05 % CF3CO2H). Fază mobilă B = CH3CN (0,035 % CF3CO2H). Rată flux = 1,2 mL/min, volum injecţie = 1,5 µL, şi temperatură coloană = 60 °C.
Etapa 2: acid 3-(terţ-Butoxicarbonilamino)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic
La o soluţie de metil 3-[bis(terţ-butoxicarbonil)amino]-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (3,3 g, 6,5412 mmol) în MeOH (24 mL) şi THF (24 mL) s-a adăugat o soluţie de hidroxid de litiu monohidrat (1,2 g, 28,596 mmol) în apă (12 mL). Amestecul a fost agitat la 50 °C timp de 16 h. Amestecul de reacţie a fost apoi răcit până la temperatura camerei şi soluţie apoasă de 1N HCl s-a adăugat până s-a obţinut pH = 2. Volatilele au fost îndepărtate sub presiune redusă şi produsul a fost extras cu etil acetat (3 X 20 mL). Fazele organice combinate au fost spălate cu soluţie salină (20 mL), uscate peste sulfat de sodiu, filtrate şi concentrate sub presiune redusă care au dat un ulei galben, acid 3-(terţ-butoxicarbonilamino)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (2,66 g, 89 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 12,12 - 11,38 (m, 1H), 8,78 (s, 1H), 5,92 - 5,69 (m, 1H), 5,42 - 5,33 (m, 1H), 5,14 - 5,06 (m, 1H), 5,06 - 5,01 (m, 1H), 2,44 - 2,37 (m, 2H), 1,46 (s, 9H), 1,25 (d, J = 6,4 Hz, 3H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,33 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 390,1403, găsit 389,0 (M-1)-; Timp retenţie: 2,28 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 3: Etil 1-benzilpirazol-3-carboxilat
La o suspensie de etil 1H-pirazol-5-carboxilat (20 g, 142,71 mmol) şi carbonat de potasiu (60 g, 434,13 mmol) în dimetil formamidă (200 mL) s-a adăugat bromură de benzil (25,92 g, 18 mL, 151,55 mmol) la temperatura camerei şi amestecul a fost agitat timp de 3 ore la temperatura camerei. Amestecul a fost diluat cu etil acetat (500 mL) şi spălat cu apă (500 mL). Stratul de soluţie apoasă a fost extras cu etil acetat (250 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu apă (500 mL), soluţie salină (500 mL), uscate peste sulfat de sodiu, filtrate, şi concentrate sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe silicagel (eluat cu un gradient de 100 % heptan până la 30 % etil acetat în heptan) pentru a da al doilea produs de eluare regioizomeric şi un solid alb, etil 1-benzilpirazol-3-carboxilat (21,5 g, 65 %). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,40 - 7,30 (m, 4H), 7,26 - 7,21 (m, 2H), 6,83 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,40 (s, 2H), 4,42 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 1,41 (t, J = 7,1 Hz, 3H). ESI-MS m/z calc. 230,1055, găsit 231,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,85 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 3,0 X 50 mm, 2,6 µm, 3 min, 5 - 95 % acetonitril în apă (0,1 % acid formic), Rată Flux = 1,2 mL/min.
Etapa 4: Etil 1-benzil-4-brom-pirazol-3-carboxilat
La o soluţie de etil 1-benzilpirazol-3-carboxilat (7 g, 30,4 mmol) în acetonitril (140 mL) s-a adăugat bromură (9,3069 g, 3 mL, 58,238 mmol) la temperatura camerei. După agitare la temperatura camerei peste noapte, s-a adăugat bromură suplimentară (4,9637 g, 1,6 mL, 31,06 mmol) şi amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 1 zi. Amestecul a fost concentrat sub presiune redusă, diluat cu etil acetat (20 mL), şi spălat cu soluţie apoasă de 10 % tiosulfat de sodiu (200 mL). Stratul de soluţie apoasă a fost extras cu etil acetat/tetrahidrofuran (1/1, 200 mL). Stratul organic combinat a fost uscat peste sulfat de sodiu, filtrat, şi concentrat sub presiune redusă. Reziduul a fost purificat prin cromatografie pe silicagel (eluat cu un gradient de la 0 % până la 35 % etil acetat în heptan) pentru a da un solid alb, etil 1-benzil-4-brom-pirazol-3-carboxilat (9,1 g, 97 %); 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,44 - 7,33 (m, 4H), 7,29 - 7,24 (m, 2H), 5,36 (s, 2H), 4,45 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 1,43 (t, J = 7,1 Hz, 3H). ESI-MS m/z calc. 308,016, găsit 309,1 (M+1)+; Timp retenţie: 1,98 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 5: Etil 4-alil-1-benzil-pirazol-3-carboxilat
O soluţie de etil 1-benzil-4-bromo-pirazol-3-carboxilat (8,7 g, 28,141 mmol) în tetrahidrofuran (130 mL) şi apă (25 mL) a fost degazată prin barbotare de azot timp de 15 minute. S-au adăugat 1-alil-3,3,4,4-tetrametil-borolan (5,6 g, 6,25 mL, 34,127 mmol) şi clorură de paladiu(II) 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen, complexată cu diclormetan (3 g, 3,6736 mmol), urmată de adăugarea de carbonat de cesiu (42 mL de 2 M, 84 mmol) sub azot. Amestecul de reacţie a fost încălzit peste noapte la 100 °C. După răcire la temperatura camerei, amestecul de reacţie a fost diluat cu acetat de etil (150 mL), filtrat printr-un strat de celită şi clătit cu acetat de etil (2 X 100 mL). Filtratul a fost spălat cu apă (2 X 200 mL) şi saramură (400 mL). Faza organică a fost apoi uscată peste sulfat de sodiu anhidru, filtrată şi concentrată în vid. Amestecul rezultat a fost purificat prin cromatografie pe coloană cu gel de silice (gradient de 0% până la 30% acetat de etil în heptani). Fracţiile dorite au fost colectate şi solventul a fost concentrat sub presiune redusă pentru a da, sub formă de solid alb, etil 4-alil-1-benzil-pirazol-3-carboxilat (5,02 g, 64%). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,41 - 7,31 (m, 3H), 7,26 - 7,21 (m, 2H), 7,15 (s, 1H), 5,94 (ddt, J = 17,0, 10,2, 6,6 Hz, 1H), 5,35 (s, 2H), 5,09 - 4,98 (m, 2H), 4,42 (q, J = 7,2 Hz, 2H), 3,50 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 1,41 (t, J = 7,2 Hz, 3H). ESI-MS m/z calc. 270,1368, găsit 271,2 (M+1)+; Timp retenţie: 2,0 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 6: acid 4-Alil-1-benzil-pirazol-3-carboxilic
O soluţie de hidroxid de litiu (5 g, 208,78 mmol) în apă (10 mL) a fost adăugată la o soluţie de etil 4-alil-1-benzil-pirazol-3-carboxilat (5 g, 18,015 mmol) în metanol (50 mL) şi tetrahidrofuran (25 mL). Reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 3 ore. Reacţia a fost apoi concentrată pentru a îndepărta metanolul. Materialul brut a fost diluat în apă (100 mL), iar sarea de sodiu a carboxilatului a fost spălată cu heptan (50 mL) şi MTBE (50 mL). Soluţia apoasă a fost acidulată la pH = 2 cu o soluţie apoasă de acid clorhidric 3 N. Acidul carboxilic a fost extras cu diclormetan (4 X 100 mL) şi uscat peste sulfat de sodiu. Soluţia a fost filtrată şi concentrată pentru a da, sub formă de solid galben deschis, acid 4-alil-1-benzil-pirazol-3-carboxilic (4,45 g, 99%). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 12,40 - 10,19 (m, 1H), 7,48 - 7,39 (m, 3H), 7,37 - 7,31 (m, 2H), 7,27 (s, 1H), 6,01 (ddt, J = 17,0, 10,2, 6,6 Hz, 1H),5,43 (s, 2H), 5,20 - 5,04 (m, 2H), 3,59 (d, J = 6,6 Hz, 2H). ESI-MS m/z calc. 242,1055, găsit 243,1 (M+1)+; Timp retenţie: 1,79 minute; Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 7: 4-Alil-1-benzil-pirazol-3-carbohidrazidă
O soluţie de acid 4-alil-1-benzil-pirazol-3-carboxilic (4,15 g, 16,616 mmol) şi trietilamină (5,0820 g, 7 mL, 50,222 mmol) în DMF (60 mL) a fost tratată cu HATU (13 g, 34,19 mmol) şi agitată la temperatura camerei timp de 20 de minute. Amestecul de reacţie a fost răcit într-o baie de gheaţă şi s-a adăugat hidrat de hidrazină (13,416 g, 20 mL, 174,2 mmol). După aproximativ 10 minute, baia de gheaţă a fost îndepărtată şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de aproximativ 18 ore. Amestecul de reacţie a fost transferat într-o pâlnie de separare de 1 L cu apă (450 mL) şi stratul apos a fost extras cu acetat de etil (4 X 100 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu apă (2 X 200 mL), saramură (250 mL), uscate peste sulfat de sodiu, filtrate şi concentrate sub presiune redusă. Cromatografia pe gel de silice (gradient de la 0% la 60% acetat de etil în heptani) a obţinut sub formă de ulei incolor, 4-alil-1-benzil-pirazol-3-carbohidrazidă (2,45 g, 52%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,11 (s, 1H), 7,66 (s, 1H), 7,44 - 7,15 (m, 5H), 5,95 (ddt, J = 17,0, 10,2, 6,6 Hz, 1H), 5,30 (s, 2H), 5,10 - 4,89 (m, 2H), 4,34 (s, 2H), 3,45 (d, J = 6,6 Hz, 2H). ESI-MS m/z calc. 256,1324, găsit 257,2 (M+1)+; Timp retenţie: 3,23 minute. Metodă LCMS: SunFire C18 (75 X 4,6 mm, 3,5 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril timp de 4 min, apoi menţinere timp de 2 min la 95 % acetonitril, temperatură = 45 °C, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 8: terţ-Butil N-[2-[[(4-alil-1-benzil-pirazol-3-carbonil)amino]carbamoil]-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La o soluţie de acid 3-(terţ-butoxicarbonilamino)-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluorometil)piridin-2-carboxilic (200 mg, 0,5088 mmol) în DMF (1,5 mL) s-au adăugat 4-alil-1-benzil-pirazol-3-carbohidrazidă (160 mg, 0,5662 mmol), HATU (235 mg, 0,618 mmol) şi DIEA (371 mg, 0,5 mL, 2,8706 mmol) la temperatura camerei. Soluţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 2 ore şi încărcată direct pe o coloană reactor C18 preparativă cu fază inversă. Purificarea a fost efectuată prin cromatografie în fază inversă (coloană de 100 grame. Gradient de la 5% la 100% acetonitril în apă cu 0,1% acid formic) pentru a se obţine o spumă albă, terţ-butil N-[2-[[(4-alil-1-benzil-pirazol-3-carbonil)amino]carbamoil]-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat (238 mg, 71%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,83 (s, 1H), 10,65 (s, 1H), 10,15 (s, 1H), 9,01 (s, 1H), 7,77 (s, 1H), 7,50 - 7,18 (m, 5H), 5,97 (ddt, J = 17,0, 10,2, 6,6 Hz, 1H), 5,89 - 5,74 (m, 2H), 5,39 (s, 2H), 5,18 - 4,94 (m, 4H), 3,46 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 2,47 - 2,32 (m, 2H), 1,47 (s, 9H), 1,25 (d, J = 6,1 Hz, 3H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -63,11 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 628,2621, găsit 529,3 (M-99)+; Timp retenţie: 4,3 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge C18 (4,6 X 75 mm, 5 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare cu 1 minute echilibrare, Iniţial fază mobilă la 95 % soluţie apoasă de NH4HCO3/5 % acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95 % MeCN şi menţinere timp de 3 minute, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 9: terţ-Butil N-[2-[5-(4-allyl-1-benzyl-pyrazol-3-il)-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat
La o soluţie de terţ-butil N-[2-[[(4-alil-1-benzil-pirazol-3-carbonil)amino]carbamoil]-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (235 mg, 0,3577 mmol) şi clorură de toluensulfonil (220 mg, 1,154 mmol) în DCE (7 mL) s-au adăugat N,N-diizopropiletilamină (0,5 mL, 2,8706 mmol) şi clorură de toluensulfonil (220 mg, 1,154 mmol). Reacţia a fost agitată la 50 °C timp de 20 h apoi răcită până la temperatura camerei. Volatilele au fost îndepărtate sub presiune redusă. Purificarea a fost efectuată prin cromatografie cu fază reversă (50 g coloană. Gradient de la 5 % până la 95 % acetonitril în apă cu 0,1 % acid formic) pentru a da un ulei maron, terţ-butil N-[2-[5-(4-alil-1-benzil-pirazol-3-yl)-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-3-piridil]carbamat (202 mg, 81 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,93 (s, 1H), 8,92 (s, 1H), 7,96 (s, 1H), 7,42 - 7,26 (m, 5H), 6,04 (ddt, J = 16,8, 10,2, 6,4 Hz, 1H), 5,84 (ddt, J = 17,2, 10,1, 7,0 Hz, 1H), 5,46 (s, 2H), 5,34 (m, J = 6,1 Hz, 1H), 5,20 - 5,13 (m, 1H), 5,12 - 5,00 (m, 3H), 3,59 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 2,50 - 2,38 (m, 2H), 1,50 (s, 9H), 1,34 (d, J = 6,1 Hz, 3H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,80 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 610,2515, găsit 555,2 (M-55)+; Timp retenţie: 2,56 minute. Metodă LCMS: Luna C18 (50 X 3 mm, 3 µm dimensiune particulă, temperatură = 45 °C, Flux = 1,5 mL/min, Timp Rulare = 3,5 minute. Condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril + 0,1 % acid formic timp de 1,3 minute apoi menţinere timp de 2,2 minute la 95 % acetonitril + 0,1 % acid formic.
Etapa 10: terţ-Butil N-[(15R)-8-benzyl-15-metil-18-(trifluormetil)-16,22-dioxa-3,4,7,8,21-pentazatetraciclo[15.3.1.12,5.06,10]docosa-1(21),2,4,6,9,12,17,19-octaen-20-il]carbamat (amestec E/Z)
Azot gazos a fost barbotat printr-o soluţie galben deschis de terţ-butil N-[2-[5-(4-alil-1-benzil-pirazol-3-il)-1,3,4-oxadiazol-2-il]-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluorometil)-3-piridil]carbamat (200 mg, 0,2879 mmol) în dicloretan (100 mL) timp de 2 ore. Soluţia a fost apoi plasată într-o baie de ulei la 70 °C şi s-a adăugat o primă porţie de catalizator Zhan-1B (20 mg, 0,0273 mmol). Reacţia a fost agitată timp de 2 ore. S-a adăugat DMSO (2 picături) şi amestecul de reacţie a fost răcit la temperatura camerei. Volatilele au fost îndepărtate sub presiune redusă. Purificarea prin cromatografie pe silicagel (gradient de la 0% la 30% acetat de etil în heptani) a dat sub formă de ulei galben, terţ-butil N-[(15R)-8-benzil-15-metil-18-(trifluorometil)-16,22-dioxa-3,4,7,8,21-pentazatetraciclo[15.3.1.12,5.06,10]docosa-1(21),2,4,6,9,12,17,19-octaen-20-il]carbamat (amestec E/Z) (65 mg, 37%). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,17 - -62,44 (m, 3F). ESI-MS m/z calculat. 582,2202, găsit 583,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 4,51 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge coloană C18 (4,6 x 75 mm, dimensiunea particulelor de 5 µm, rulare de 6 minute cu echilibrare de 1 minut, fază mobilă iniţială la 95% NH4HCO3 apos/ 5% acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95% MeCN şi menţinut timp de 3 minute, rată flux = 1,5 mL/min).
Etapa 11: terţ-Butil N-[(15R)-8-benzil-15-metil-18-(trifluorometil)-16,22-dioxa-3,4,7,8,21-pentazatetraciclo[15.3.1.12,5.06,10]docosa-1(21),2,4,6,9,17,19-heptaen-20-il]carbamat
La hidroxid de paladiu pe carbon (21 mg, 20 % g/g, 0,0299 mmol) sub azot s-a adăugat o soluţie de terţ-butil N-[(15R)-8-benzil-15-metil-18-(trifluorometil)-16,22-dioxa-3,4,7,8,21-pentazatetraciclo[15.3.1.12,5.06,10]docosa-1(21),2,4,6,9,12,17,19-octaen-20-il]carbamat (amestec E/Z) (60 mg, 0,0987 mmol) în metanol (5 mL). S-a barbotat hidrogen gazos în amestec timp de 5 minute, apoi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 4 ore sub atmosferă de hidrogen (balon). Amestecul a fost filtrat prin celită, spălând cu acetat de etil (50 mL), iar filtratul a fost concentrat sub presiune redusă. Purificarea reziduului prin cromatografie pe gel de silice (gradient de la 5% la 60% acetat de etil în heptani) a dat un solid alb-gălbui, terţ-butil N-[(15R)-8-benzil-15-metil-18-(trifluorometil)-16,22-dioxa-3,4,7,8,21-pentazatetraciclo[15.3.1.12,5.06,10]docosa-1(21),2,4,6,9,17,19-heptaen-20-il]carbamat (55 mg, 88%). ESI-MS m/z calculat 584,2359, găsit 585,3 (M+1)+; Timp de retenţie: 4,6 minute. Metoda LCMS: Coloană XBridge coloană C18 (4,6 x 75 mm, dimensiunea particulelor de 5 µm, rulare de 6 minute cu echilibrare de 1 minut, fază mobilă iniţială la 95%/NH4HCO3 apos 5% acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95% MeCN şi menţinut timp de 3 minute, rată flux = 1,5 mL/min).
Etapa 12: terţ-Butil N-[(15R)-15-metil-18-(trifluorometil)-16,22-dioxa-3,4,7,8,21-pentazatetraciclo[15.3.1.12,5.06,10]docosa-1(21),2,4,6,9,17,19-heptaen-20-il]carbamat
La paladiu pe carbon (60 mg, 5 % g/g, 0,0282 mmol) sub azot s-a adăugat o soluţie de terţ-butil N-[(15R)-8-benzil-15-metil-18-(trifluorometil)-16,22-dioxa-3,4,7,8,21-pentazatetraciclo[15.3.1.12,5.06,10]docosa-1(21),2,4,6,9,17,19-heptaen-20-il]carbamat (50 mg, 0,0787 mmol) în tetrahidrofuran (10 mL). Tubul a fost etanşat şi presurizat cu hidrogen gazos (50 psi). Amestecul de reacţie a fost agitat la 50 °C timp de 24 de ore. Amestecul a fost apoi răcit, degazat prin purjare de azot, apoi filtrat prin celită, spălând cu acetat de etil (25 mL). Filtratul a fost concentrat sub presiune redusă. Purificarea reziduului prin cromatografie pe gel de silice (gradient de la 0% la 90% acetat de etil în heptani) a dat sub formă de solid galben. terţ-butil N-[(15R)-15-metil-18-(trifluorometil)-16,22-dioxa-3,4,7,8,21-pentazatetraciclo[15.3.1.12,5.06,10]docosa-1(21),2,4,6,9,17,19-heptaen-20-il]carbamat (18 mg, 45%).1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 13,31 - 12,26 (m, 1H), 9,21 (s, 1H), 9,10 (s, 1H), 7,92 (s, 1H), 5,07 - 4,91 (m, 1H), 3,12 - 2,95 (m, 1H), 2,69 - 2,51 (m, 2H), 2,42 - 2,25 (m, 1H), 1,72 - 1,62 (m, 3H), 1,60 (s, 9H), 1,55 - 1,48 (m, 1H), 1,45 (d, J = 6,1 Hz, 3H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,70 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 494,1889, găsit 495,2 (M+1)+; Timp retenţie: 4,21 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge Coloană C18 (4,6 X 75 mm, 5 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare cu 1 minute echilibrare, Iniţial fază mobilă la 95 % soluţie apoasă de NH4HCO3/5 % acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95 % MeCN şi menţinere timp de 3 minute, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 13: (15R)-15-Metil-18-(trifluormetil)-16,22-dioxa-3,4,7,8,21-pentazatetraciclo[15.3.1.12,5.06,10]docosa-1(21),2,4,6,9,17,19-heptaen-20-amină, Compus 74
La o soluţie de terţ-butil N-[(15R)-15-metil-18-(trifluormetil)-16,22-dioxa-3,4,7,8,21-pentazatetraciclo[15.3.1.12,5.06,10]docosa-1(21),2,4,6,9,17,19-heptaen-20-il]carbamat (18 mg, 0,0357 mmol) în diclormetan (1,8 mL) s-a adăugat TFA (0,6 mL, 7,7879 mmol) şi amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 2 ore. O soluţie saturată apoasă de NaHCO3 a fost apoi adăugată în picătură până s-a obţinut pH = 6 - 7. s-a adăugat apă (10 mL) şi DCM (10 mL) fazele au fost separate. Faza de soluţie apoasă a fost extras cu DCM (3 X 10 mL). Straturile organice combinate au fost concentrată sub presiune redusă. Purificarea reziduului prin cromatografie ci fază reversă (15,5 g coloană, Gradient de la 5 % până la 90 % acetonitril în apă) a dat un solid galben după liofilizare, (15R)-15-metil-18-(trifluormetil)-16,22-dioxa-3,4,7,8,21-pentazatetraciclo[15.3.1.12,5.06,10]docosa-1(21),2,4,6,9,17,19-heptaen-20-amină (11,7 mg, 83 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,44 (br. s., 1H), 7,86 (br. s., 1H), 7,74 (s, 1H), 6,34 (s, 2H), 4,95 - 4,80 (m, 1H), 2,99 - 2,81 (m, 1H), 2,62 - 2,52 (m, 1H), 2,47 - 2,37 (m, 1H), 2,34 - 2,17 (m, 1H), 1,65 - 1,41 (m, 3H), 1,40 - 1,28 (m, 4H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,32 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 394,1365, găsit 395,1 (M+1)+; Timp retenţie: 3,53 minute. Metodă LCMS: Coloană XBridge Coloană C18 (4,6 X 75 mm, 5 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare cu 1 minute echilibrare, Iniţial fază mobilă la 95 % soluţie apoasă de NH4HCO3/5 % acetonitril, gradient de la 0 la 3 minute până la 95 % MeCN şi menţinere timp de 3 minute, Flux = 1,5 mL/min).
Exemplul 52: Preparare acid (6R,12R)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-carboxilic, Compus 75
Etapa 1: (2R)-2-Benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enhidrazidă (sare clorhidrat)
La 0 °C o soluţie de (2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enhidrazidă (3,672 g, 11,722 mmol) în dietil eter (30 mL) s-a adăugat în picătură o soluţie de acid clorhidric (8,8 mL de 2 M, 17,6 mmol) în dietil eter. Mai mult dietil eter (40 mL) a fost apoi adăugat la 0 °C. După adiţie, baia de răcire gheaţă-apă a fost îndepărtată şi amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 20 ore. Suspensia a fost filtrată pe o pâlnie de fritare şi precipitatul alb a fost spălat cu dietil eter (2 X 15 mL), colectat şi uscat sub vid pentru a da un solid alb, (2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enhidrazidă (sare clorhidrat) (3,71 g, 90 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 10,95 (br s, 1H), 10,45 - 8,71 (m, 3H), 7,51 - 7,28 (m, 5H), 5,90 - 5,77 (m, 1H), 5,12 - 4,97 (m, 2H), 4,79 (s, 2H), 2,40 - 1,92 (m, 4H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -72,72 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 302,1242, găsit 303,1 (M+1)+; Timp retenţie: 2,83 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 2: Metil 3-brom-6-hidroxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
1-Bromopirolidin-2,5-dionă (18,3 g, 102,82 mmol) s-a adăugat în trei porţii egale aproximativ 15 minute fiecare la metil 6-hidroxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (20,6 g, 93,157 mmol) dizolvat în DMF (160 mL) şi amestecul a fost menţinut sub agitare la temperatura camerei 60 minute după adiţia a fost completă. S-a adăugat apă deionizată (1 L) şi precipitatul rezultat a fost filtrat şi spălat cu apă deionizată (3 X 100 mL) apoi uscat sub vid înaintat pentru a da o pulbere albă, metil 3-brom-6-hidroxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (26,61 g, 95 %). 1H RMN (300 MHz, CDCl3) ppm 4,03 (s, 3H), 7,98 (s, 1H), 11,53 (br. s., 1H). 19F RMN (282 MHz, CDCl3) ppm -66,4 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 298,9405, găsit 300,0 (M+1)+; Timp retenţie: 1,64 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (4,6 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 2,0 mL/min).
Etapa 3: Metil 3-brom-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
La o soluţie de metil 3-brom-6-hidroxi-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (1 g, 3,3297 mmol) şi (2S)-pent-4-en-2-ol (420 mg, 4,8762 mmol) în toluen (20 mL) s-a adăugat trifenil fosfină (1,3 g, 4,9564 mmol). După agitare la temperatura camerei timp de 10 minute, s-a adăugat DIAD (1,1297 g, 1,1 mL, 5,5868 mmol) şi amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 2,5 h. Toluenul a fost evaporat sub presiune redusă. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (40 g coloană, Gradient: 0 % până la 5 % etil acetat în heptani) a dat metil 3-brom-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (1,15 g, 94 %) ca un ulei galben pal. 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,04 (s, 1H), 5,89 - 5,76 (m, 1H), 5,37 (m, J = 6,1 Hz, 1H), 5,15 - 5,04 (m, 2H), 4,00 (s, 3H), 2,55 - 2,38 (m, 2H), 1,36 (d, J = 6,1 Hz, 3H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -64,41 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 367,0031, găsit 368,0 (M+1)+; Timp retenţie: 2,11 minute. Metodă LCMS: Luna C18 (50 X 3 mm, 3 µm dimensiune particulă, temperatură = 45 °C, Flux = 1,5 mL/min, Timp Rulare = 2,5 minute. Condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril + 0,1 % acid formic timp de 1,3 minute apoi menţinere timp de 1,2 minute la 95 % acetonitril + 0,1 % acid formic.
Etapa 4: acid 3-Bromo-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic
La o soluţie de metil 3-brom-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (1,11 g, 3,0151 mmol) în MeOH (10 mL) şi THF (10 mL) s-a adăugat o soluţie de hidroxid hidrat de litiu (550 mg, 13,107 mmol) în apă (5 mL). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 2 ore. La amestec s-a adăugat soluţie apoasă de 1 N HCl până s-a obţinut pH = 2. Volatilele au fost îndepărtate sub presiune redusă şi produsul a fost extras cu etil acetat (3 X 40 mL). Fazele organice combinate au fost spălate cu soluţie salină (40 mL), uscate peste sulfat de sodiu, filtrate şi concentrate sub presiune redusă care a dat un solid galben, acid 3-brom-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (1,1 g, 98 %). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,21 (s, 1H), 5,89 - 5,76 (m, 1H), 5,28 (m, J = 6,2 Hz, 1H), 5,19 - 5,09 (m, 2H), 2,61 - 2,43 (m, 2H), 1,43 (d, J = 6,1 Hz, 3H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -64,44 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 352,9874, găsit 354,1 (M+1)+; Timp retenţie: 2,02 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 5: N'-[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]-3-brom-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă
La o soluţie de acid 3-brom-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilic (1,709 g, 4,7619 mmol) şi (2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enhidrazidă (sare clorhidrat) (1,7 g, 5,0184 mmol) în etil acetat (30 mL) s-a adăugat trietilamină (1,8876 g, 2,6 mL, 18,654 mmol) şi o soluţie de T3P (5,2 mL de 50 % w/v, 8,1714 mmol) în etil acetat. Reacţia a fost agitată la temperatura camerei (20 - 25 °C) timp de 72 ore. Amestecul a fost temperat cu o soluţie apoasă saturată de clorură de amoniu (20 mL). Etil acetat (70 mL) s-a adăugat la amestec. Fazele au fost separate şi faza organică a fost spălată cu o soluţie apoasă saturată de clorură de amoniu (20 mL) şi cu o soluţie apoasă saturată de bicarbonat de sodiu (2 X 20 mL), uscate pe sulfat de sodiu anhidru, filtrate şi concentrate sub presiune redusă pentru a da un solid alb, N'-[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]-3-brom-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă (2,856 g, 94 %). ESI-MS m/z calc. 637,1011, găsit 638,1 (M+1)+; Timp retenţie: 2,14 minute. Metodă LCMS: Luna C18 (50 X 3 mm, 3 µm dimensiune particulă, temperatură = 45 °C, Flux = 1,5 mL/min, Timp Rulare = 2,5 minute. Condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril + 0,1 % acid formic timp de 1,3 minute apoi menţinere timp de 1,2 minute la 95 % acetonitril + 0,1 % acid formic.
Etapa 6: 2-[(1R)-1-Benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-5-[3-brom-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol
La o soluţie de N'-[(2R)-2-benziloxi-2-(trifluormetil)hex-5-enoil]-3-brom-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă (1,49 g, 2,1753 mmol) în 1,2-dicloroetan (25 mL) şi N,N-diizopropiletilamină (2,59 g, 3,5 mL, 20,04 mmol) s-a adăugat clorură de toluensulfonil (1,3 g, 6,8189 mmol). Reacţia a fost apoi agitată la 50 °C timp de 22 h. Reacţia a fost răcită până la temperatura camerei şi volatilele au fost îndepărtate sub presiune redusă. Reziduul brut a fost purificat prin cromatografie cu fază reversă (cartuş C18 50 gram gel) utilizând un gradient de 5 % - 100 % acetonitril în apă (+ 0,1 % v/v de acid formic în apă). Fracţiile conţinând produsul au fost concentrate sub presiune redusă pentru a da ca ulei galben, 2-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluormetil)pent-4-enil]-5-[3-brom-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (1,3 g, 86 %). ESI-MS m/z calc. 619,0905, găsit 620,2 (M+1)+; Timp retenţie: 2,596 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 7: (6R,12R)-6-Benziloxi-17-brom-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaenă (amestec E/Z)
La o soluţie purjată cu azot de 2-[(1R)-1-benziloxi-1-(trifluorometil)pent-4-enil]-5-[3-bromo-6-[(1R)-1-metilbut-3-enoxi]-5-(trifluorometil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (525 mg, 0,7591 mmol) în dicloroetan (350 mL) la 60 °C s-a adăugat o primă porţie de catalizator Zhan-1B (25 mg, 0,0341 mmol). După 1 oră, s-a adăugat un al doilea lot de catalizator Zhan-1B (25 mg, 0,0341 mmol) şi încălzirea a continuat timp de încă 1 oră. S-a adăugat DMSO (2 picături) şi amestecul de reacţie a fost răcit la temperatura camerei. Volatilele au fost îndepărtate sub presiune redusă. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie în fază inversă (coloană C18, gradient: 0 % până la 100 % acetonitril în apă conţinând 0,1 % acid formic). Fracţiile conţinând produsul au fost concentrate sub presiune redusă şi liofilizate care au dat ca un solid cafeniu, (6R,12R)-6-benziloxi-17-brom-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaenă (amestec E/Z) (210 mg, 47 %). ESI-MS m/z calc. 591,0592, găsit 592,0 (M+1)+; Timp retenţie: 2,31 minute. Metodă LCMS: Luna C18 (50 X 3 mm, 3 µm dimensiune particulă, temperatură = 45 °C, Flux = 1,5 mL/min, Timp Rulare = 2,5 minute. Condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril + 0,1 % acid formic timp de 1,3 minute apoi menţinere timp de 1,2 minute la 95 % acetonitril + 0,1 % acid formic.
Etapa 8: Metil (6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaenă-17-carboxilat (amestec E/Z)
La o soluţie de (6R,12R)-6-benziloxi-17-bromo-12-metil-6,15-bis(trifluorometil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaenă (amestec E/Z) (200 mg, 0,3262 mmol) în metanol anhidru (6 mL) într-o autoclavă s-a adăugat Pd(dppf)Cl2 aduct de diclormetan (40 mg, 0,0482 mmol) şi trietilamină (108,9 mg, 0,15 mL, 1,0762 mmol). Autoclava a fost purjată cu azot, apoi cu monoxid de carbon. Amestecul a fost încălzit la 100 °C, iar presiunea monoxidului de carbon a fost ajustată la 80 psi. Amestecul a fost agitat timp de 17 ore. Soluţia a fost răcită la 25 °C, purjată cu azot şi concentrată sub presiune redusă. Materialul brut a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (coloană de 40 g, gradient: 0% până la 20% acetat de etil în heptani) pentru a obţine, sub formă de ulei incolor, metil (6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaenă-17-carboxilat (amestec E/Z) (144 mg, 77 %). ESI-MS m/z calc. 571,1542, găsit 572,2 (M+1)+; Timp retenţie: 2,2 minute. Metodă LCMS: Luna C18 (50 X 3 mm, 3 µm dimensiune particulă, temperatură = 45 °C, Flux = 1,5 mL/min, Timp Rulare = 2,5 minute. Condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril + 0,1 % acid formic timp de 1,3 minute apoi menţinere timp de 1,2 minute la 95 % acetonitril + 0,1 % acid formic.
Etapa 9: Metil (6R,12R)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-carboxilat
La o soluţie de metil (6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaenă-17-carboxilat (amestec E/Z) (165 mg, 0,2887 mmol) în MeOH (8 mL) sub atmosferă de azot s-a adăugat paladiu pe cărbune (62 mg, 10 % g/g, 0,0583 mmol). Hidrogen gaz a fost barbotat timp de 5 minute şi reacţia a fost agitat la temperatura camerei timp de 24 h. Amestecul a fost purjat cu azot, filtrat peste celite, spălat cu metanol (40 mL) şi concentrat sub presiune redusă pentru a da un ulei maron deschis, metil (6R,12R)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-carboxilat (121 mg, 85 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,53 (s, 1H), 7,75 (s, 1H), 5,10 - 5,00 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 2,34 - 2,27 (m, 1H), 2,20 - 2,13 (m, 2H), 1,67 - 1,57 (m, 1H), 1,39 (d, J = 6,6 Hz, 9H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,63 (s, 3F), -76,86 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 483,1229, găsit 484,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,99 minute. Metodă LCMS: coloană Luna C18 (50 X 3 mm, 3 µm dimensiune particulă, temperatură = 45 °C, Flux = 1,5 mL/min, Timp Rulare = 2,5 minute. Condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril + 0,1 % acid formic timp de 1,3 minute apoi menţinere timp de 1,2 minute la 95 % acetonitril + 0,1 % acid formic % CH3CN 0,1 % FA,. T: 45C, Flux: 1,5 mL/min.
Etapa 10: acid (6R,12R)-6-Hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-carboxilic, Compus 75
La o soluţie de metil (6R,12R)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-17-carboxilat (21 mg, 0,0434 mmol) în THF (0,75 mL) s-a adăugat o soluţie de hidroxid de litiu monohidrat (20 mg, 0,4766 mmol) în apă (0,25 mL). Amestecul a fost agitat la 0 °C timp de 15 minute. La amestec s-a adăugat soluţie saturată apoasă de clorură de amoniu (2 mL) şi soluţie apoasă de 10 % acid citric până s-a obţinut pH = 4. Produsul a fost extras cu etil acetat (3 X 15 mL). Fazele organice combinate au fost spălate cu soluţie salină (20 mL), uscate peste sulfat de sodiu, filtrate şi concentrate sub presiune redusă. Purificarea reziduului prin cromatografie cu fază reversă (15,5 g coloană C18, gradient: 5 % până la 100 % acetonitril în apă conţinând 0,1 % acid formic) a dat un solid alb după liofilizare, acid (6R,12R)-6-hidroxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaene-17-carboxilic (7,3 mg, 36 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,96 (br. s., 1H), 8,49 (s, 1H), 7,77 (s, 1H), 5,04 - 4,96 (m, 1H), 2,31 - 2,25 (m, 1H), 2,20 - 2,12 (m, 2H), 1,60 - 1,53 (m, 1H), 1,49 - 1,43 (m, 1H), 1,41 - 1,29 (m, 8H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,63 (s, 3F), -77,03 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 469,1072, găsit 468,1 (M-1)-; Timp retenţie: 4,69 minute. Metodă LCMS: SunFire C18 (75 X 4,6 mm, 3,5 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril timp de 4 min, apoi menţinere timp de 2 min la 95 % acetonitril, temperatură = 45 °C, Rată Flux = 1,5 mL/min).
Exemplul 53: Preparare (6R,12R)-17-(hidroximetil)-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 76
Etapa 1: [(6R,12R)-6-Benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]metanol (amestec E/Z)
La o soluţie de (6R,12R)-6-benziloxi-17-brom-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaenă (amestec E/Z) (150 mg, 0,2532 mmol) în 1,4-dioxan (3 mL) s-a adăugat tributilstanilmetanol (163 mg, 0,5077 mmol) şi Pd(dppf)Cl2 diclormetan aduct (30 mg, 0,0367 mmol). Azot a fost barbotat timp de 5 minute. tubul a fost etanşat şi amestecul de reacţie a fost agitat la 95 °C timp de 16 ore. Volatilele au fost îndepărtate sub presiune redusă şi reziduul a fost purificat prin cromatografie pe gel de silice (24 g coloană, gradient: 0 % până la 20 % etil acetat în heptani) care a dat un solid alb, [(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]metanol (amestec E/Z) (58 mg, 42 %). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,08 (s, 1H), 7,36 - 7,28 (m, 5H), 5,67 - 5,57 (m, 1H), 5,54 - 5,44 (m, 1H), 5,07 - 4,93 (m, 2H), 4,92 - 4,82 (m, 1H), 4,81 - 4,72 (m, 2H), 4,05 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 3,67 - 3,58 (m, 1H), 2,80 - 2,68 (m, 1H), 2,48 - 2,40 (m, 2H), 2,36 - 2,25 (m, 1H), 1,90 - 1,81 (m, 1H), 1,53 (s, 3H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -63,81 (s, 3F), -73,92 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 543,1593, găsit 544,2 (M+1)+; Timp retenţie: 2,13 minute. Metodă LCMS: Luna C18 (50 X 3 mm, 3 µm dimensiune particulă, temperatură = 45 °C, Flux = 1,5 mL/min, Timp Rulare = 2,5 minute. Condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril + 0,1 % acid formic timp de 1,3 minute apoi menţinere timp de 1,2 minute la 95 % acetonitril + 0,1 % acid formic.
Etapa 2: (6R,12R)-17-(Hidroximetil)-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol, Compus 76
La o soluţie de [(6R,12R)-6-benziloxi-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,9,14,16-hexaen-17-il]metanol (amestec E/Z) (69 mg, 0,1268 mmol) în metanol (5 mL) sub atmosferă de azot s-a adăugat paladiu pe cărbune (30 mg, 10 % g/g, 0,0282 mmol). Azot a fost barbotat timp de 5 minute urmat de hidrogen gaz barbotat timp de 5 minute şi reacţia a fost agitată la temperatura camerei timp de 16 ore. Amestecul a fost purjat cu azot gaz, filtrată peste celită, spălat cu metanol (40 mL) şi concentrat sub presiune redusă. Purificare prin cromatografie cu fază reversă (15,5 g coloană C18, Gradient: 5 % până la 100 % acetonitril în apă conţinând 0,1 % acid formic) a dat un solid alb, (6R,12R)-17-(hidroximetil)-12-metil-6,15-bis(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (19,7 mg, 33 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,34 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 5,66 (t, J = 5,6 Hz, 1H), 5,06 - 4,94 (m, 3H), 2,48 - 2,43 (m, 1H), 2,31 - 2,21 (m, 1H), 2,16 - 2,08 (m, 1H), 1,77 - 1,63 (m, 2H), 1,53 - 1,42 (m, 4H), 1,40 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,32 - 1,22 (m, 1H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,28 (s, 3F), -76,50 (s, 3F). ESI-MS m/z calc. 455,128, găsit 456,2 (M+1)+; Timp retenţie: 4,5 minute. Metodă LCMS: SunFire C18 (75 X 4,6 mm, 3,5 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril timp de 4 min, apoi menţinere timp de 2 min la 95 % acetonitril, temperatură = 45 °C, Rată Flux = 1,5 mL/min).
Exemplul 54: Preparare (12R)-17-amino-7,7-difluor-12-metil-15-(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (diastereomer 1), Compus 77
Etapa 1: Metil 6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat
La o suspensie de metil 6-hidroxi-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (5 g, 18,675 mmol), (2S)-hex-5-en-2-ol (6,45 g, 46,559 mmol) şi trifenilfosfină (10,2 g, 38,889 mmol) în toluen (150 mL) s-a adăugat DIAD (9,5 g, 46,981 mmol) în picătură. Amestecul de reacţie a fost agitat la 22 °C peste noapte. Trifenilfosfină (1,95 g) s-a adăugat pentru a stinge excesul de DIAD. Amestecul a fost agitat la 22 °C timp de 15 min şi concentrat pe silica gel (50 g). Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (220 g coloană; gradient: 0 % până la 10 % tBuOCH3 în heptani) a dat un ulei incolor, metil 6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (6,32 g, 92 %, > 95 % ee). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,64 (s, 1H), 5,87 - 5,73 (m, 1H), 5,55 - 5,44 (m, 1H), 5,05 - 4,93 (m, 2H), 4,03 (s, 3H), 2,26 - 2,07 (m, 2H), 1,99 - 1,87 (m, 1H), 1,83 - 1,71 (m, 1H), 1,41 (d, J = 6,4 Hz, 3H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ - 64,58 (s, 3F). Timp retenţie: 4,82 minute. Metodă LCMS: SunFire C18 (75 X 4,6 mm, 3,5 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril timp de 4 min, apoi menţinere timp de 2 min la 95 % acetonitril, temperatură = 45 °C, Flux = 1,5 mL/min). Măsurarea purităţii optice a fost efectuată în următoarele condiţii: mod izocratic, coloană: ChiralCel OJ-H, număr de serie: OJH0CE-MJ029, debit 1 mL/min. Condiţii iniţiale: 90% hexani + DEA: 10%: (10% IPA/Hexan), timp de rulare = 16 minute, injecţie = 3 µl, temperatură cameră = 24°C, lungime de undă: 215 + 280 nm.
Etapa 2: 6-[(1R)-1-Metilpent-4-enoxi]-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă
La o soluţie de metil 6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carboxilat (660 mg, 1,8022 mmol) în metanol (14 mL) într-un tub de presiune s-a adăugat monohidrat de hidrazină (670 mg, 13,384 mmol). Tubul de presiune a fost clătit cu azot şi etanşat. Amestecul de reacţie a fost agitat la 80 °C timp de 30 de minute şi răcit la temperatura camerei, apoi concentrat sub presiune redusă la aproximativ 5 g. Reziduul a fost purificat prin cromatografie în fază inversă (100 g coloană C18; gradient: 5% până la 80% acetonitril în apă). Fracţiile dorite au fost concentrate sub presiune redusă la 30 °C/38 Torr până la apariţia unui precipitat alb. Reziduul a fost extras cu tBuOCH3 (3 X 30 mL). Straturile organice combinate au fost spălate cu saramură (5 mL), uscate cu Na2SO4, filtrate şi concentrate sub presiune redusă pentru a obţine sub formă de solid galben pal, 6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă (550 mg, 85 %). ESI-MS m/z calc. 348,1045, găsit 267,2 (M-81)+; Timp retenţie: 4,1 minute. Metodă LCMS: SunFire (75 X 4,6 mm, 3,5 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril timp de 4 min, apoi menţinere timp de 2 min la 95 % acetonitril, temperatură = 45 °C, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 3: Etil 3,3-difluor-2-hidroxi-pent-4-enoat
La o soluţie de 3-brom-3,3-difluor-prop-1-enă (4,8 g, 30,582 mmol) şi etil 2-oxoacetat în toluen (5,9 mL de 50 % w/v, 28,896 mmol) în DMF (60 mL) şi apă (18 mL) la 10 °C s-a adăugat indiu (7 g, 60,966 mmol, mărunţit înainte de utilizare). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei peste noapte. S-a adăugat apă răcită cu gheaţă (200 mL). Amestecul rezultat a fost agitat timp de 30 min, diluat cu tBuOCH3 (100 mL), filtrat prin pământ de diatomee şi turta a fost spălată cu tBuOCH3. Faza de soluţie apoasă a fost re-extrasă cu tBuOCH3 (2 X 100 mL). Straturile organice combinate au fost uscate cu Na2SO4, filtrate şi concentrate. Reziduul (5,8 g) a fost purificat prin cromatografie cu detentă pe gel de silice(gradient de la 50 % până la 100 % diclormetan/pentane) pentru a da un ulei incolor, etil 3,3-difluor-2-hidroxi-pent-4-enoat (4,283 g, 82 %). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 6,10 - 5,93 (m, 1H), 5,82 - 5,72 (m, 1H), 5,58 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,43 - 4,27 (m, 3H), 3,22 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 1,34 (t, J = 7,1 Hz, 3H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -107,00 la -107,85 (m, 1F), -108,89 până la -109,75 (m, 1F). ESI-MS m/z calc. 180,0598, găsit 181,2 (M+1)+; Timp retenţie: 1,47 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 4: Etil 2-benziloxi-3,3-difluor-pent-4-enoat
La o soluţie de etil 3,3-difluor-2-hidroxi-pent-4-enoat (2,45 g, 11,832 mmol) în diclormetan (19 mL) şi heptan anhidru (38 mL) la 0 °C s-a adăugat benzil 2,2,2-tricloracetimidat (7 g, 27,72 mmol). Amestecul a fost agitat la 0 °C timp de 5 min şi acid triflic (400 mg, 2,6653 mmol) s-a adăugat în picătură, a apărut o cantitate mare de precipitat alb. Amestecul a fost lăsat la încălzire lentă până la temperatura camerei şi agitat la temperatura camerei (5 - 19 °C) peste noapte şi apoi răcit până la 0 °C. A fost diluat cu diclormetan (50 mL) apoi s-a adăugat NaHCO3 saturat (20 mL). Cele două straturi au fost separate şi stratul apos a fost extras cu diclormetan (2 X 30 mL). Straturile organice combinate au fost uscate cu Na2SO4, filtrate şi concentrate sub presiune redusă. Purificarea prin cromatografie pe gel de silice (gradient de la 0 % până la 10 % etil acetat în heptani) a dat etil 2-benziloxi-3,3-difluor-pent-4-enoat ca un ulei car (1,56 g, 46 %). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,45 - 7,31 (m, 5H), 6,16 - 6,00 (m, 1H), 5,80 - 5,71 (m, 1H), 5,56 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 4,79 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,61 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 4,33 - 4,16 (m, 3H), 1,31 (t, J = 7,1 Hz, 3H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -102,91 până la -103,81 (m, 1F), -106,39 până la -107,27 (m, 1F). Timp retenţie: 4,4 minute. Metodă LCMS: SunFire C18 (75 X 4,6 mm, 3,5 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril timp de 4 min, apoi menţinere timp de 2 min la 95 % acetonitril, temperatură = 45 °C, Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 5: acid 2-Benziloxi-3,3-difluor-pent-4-enoic
La o soluţie de etil 2-benziloxi-3,3-difluor-pent-4-enoat (1,55 g, 5,735 mmol) în DCE (60 mL) s-a adăugat hidroxid de trimetilstaniu (1,88 g, 10,397 mmol). Amestecul a fost agitat la 82 °C timp de 30 h şi răcit până la temperatura camerei. S-a adăugat silica gel (8 g). Amestecul a fost concentrat sub presiune redusă apoi purificat prin cromatografie pe gel de silice (gradient de la 0 % până la 15 % metanol în diclormetan) pentru a da un ulei incolor, acid 2-benziloxi-3,3-difluor-pent-4-enoic (1,14 g, 78 %). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 7,42 - 7,31 (m, 5H), 6,13 - 5,97 (m, 1H), 5,77 (dt, J = 17,4, 2,2 Hz, 1H), 5,58 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 4,83 - 4,70 (m, 2H), 4,25 (t, J = 9,4 Hz, 1H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ - 103,47 până la -104,44 (m, 1F), -106,04 până la -106,95 (m, 1F). Timp retenţie: 1,86 minute. Metodă LCMS: Kinetex Polar C18 (3,0 X 50 mm, 2,6 µm dimensiune particulă, 3 minute rulare, 5 % până la 95 % acetonitril în apă (0,1 % modificator de acid formic), Rată flux = 1,2 mL/min).
Etapa 6: N'-(2-Benziloxi-3,3-difluor-pent-4-enoil)-6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă
La o soluţie de acid 2-benziloxi-3,3-difluor-pent-4-enoic (850 mg, 3,3338 mmol) în diclormetan (24 mL) s-a adăugat clorură de oxalil (549 mg, 0,3773 mL, 4,3254 mmol), urmat de DMF (291 mg, 0,3083 mL, 3,9812 mmol) în picătură. Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 2 h şi concentrat sub presiune redusă până la aproximativ 14 mL. Reziduul s-a adăugat timp de o perioadă de 15 min la o soluţie de 6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă (1,57 g, 4,3817 mmol) şi DIPEA (1,75 g, 2,3585 mL, 13,54 mmol) în diclormetan (24 mL) la 0 °C. Amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura camerei timp de 1 h şi răcit până la 0 °C. S-a adăugat NaHCO3 saturat (25 mL). Amestecul a fost extras cu diclormetan (3 X 40 mL). Straturile organice combinate au fost uscate cu Na2SO4, filtrate şi concentrate sub presiune redusă. Purificarea reziduului prin cromatografie cu fază reversă (150 g coloană C18; gradient: 5 % până la 95 % acetonitril în apă) a dat ca ulei galben pal, N'-(2-benziloxi-3,3-difluor-pent-4-enoil)-6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă (1,32 g, 69 %). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,35 (s, 1H), 7,43 - 7,32 (m, 5H), 6,11 - 5,95 (m, 1H), 5,88 - 5,71 (m, 2H), 5,57 (d, J = 11,0 Hz, 1H), 5,50 - 5,39 (m, 1H), 5,05 - 4,94 (m, 2H), 4,86 - 4,76 (m, 2H), 4,23 (t, J = 9,8 Hz, 1H), 2,28 - 2,08 (m, 2H), 2,00 - 1,87 (m, 1H), 1,84 - 1,73 (m, 1H), 1,43 (d, J = 6,1 Hz, 3H). Nu au fost observaţi doi protoni de hidrazidă. 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -64,54 (s, 3F), - 104,49 până la -105,35 (m, 1F), -106,38 până la -107,26 (m, 1F). ESI-MS m/z calc. 572,1694, găsit 573,2 (M+1)+; Timp retenţie: 2,02 minute. Metodă LCMS: coloană Luna C18 (50 X 3 mm, 3 µm dimensiune particulă, temperatură = 45 °C, Flux = 1,5 mL/min, Timp Rulare = 2,5 minute. Condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril + 0,1 % acid formic timp de 1,3 minute apoi menţinere timp de 1,2 minute la 95 % acetonitril + 0,1 % acid formic.
Etapa 7: 2-(1-Benziloxi-2,2-difluor-but-3-enil)-5-[6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-3-nitro-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol
La o soluţie de N'-(2-benziloxi-3,3-difluor-pent-4-enoil)-6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-3-nitro-5-(trifluormetil)piridin-2-carbohidrazidă (573 mg, 0,9739 mmol) în diclormetan (17 mL) la 0 °C s-a adăugat DIPEA (761 mg, 1,0256 mL, 5,8881 mmol), urmat de anhidridă trifluormetansulfonică (420 mg, 1,4886 mmol) în picătură. Amestecul a fost agitat la 0 °C timp de 30 min. S-a adăugat morfolină (520 mg) pentru a stinge reacţia. Amestecul a fost agitat la 0 °C timp de 5 min apoi s-a adăugat NaHCO3 saturat (20 mL). Cele două straturi au fost separate şi stratul apos a fost extras cu diclormetan (2 X 20 mL). Straturile organice combinate au fost uscate cu Na2SO4, filtrate şi concentrate sub presiune redusă. Purificarea reziduului prin cromatografie pe gel de silice (gradient: 0 % până la 30 % etil acetat în heptani) a dat ca ulei galben pal, 2-(1-benziloxi-2,2-difluor-but-3-enil)-5-[6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-3-nitro-5-(trifluormetil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (430 mg, 80 %). 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 8,67 (s, 1H), 7,40 - 7,31 (m, 5H), 6,16 - 6,01 (m, 1H), 5,86 - 5,73 (m, 2H), 5,60 (d, J = 11,2 Hz, 1H), 5,57 - 5,48 (m, 1H), 5,07 (dd, J = 10,0, 7,6 Hz, 1H), 5,03 - 4,93 (m, 2H), 4,81 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 4,60 (d, J = 11,7 Hz, 1H), 2,26 - 2,08 (m, 2H), 2,01 - 1,89 (m, 1H), 1,85 - 1,74 (m, 1H), 1,43 (d, J = 6,4 Hz, 3H). 19F RMN (377 MHz, CDCl3) δ -64,62 (s, 3F), -103,56 până la - 104,43 (m, 1F), -107,41 până la -108,26 (m, 1F). ESI-MS m/z calc. 554,1589, găsit 555,2 (M+1)+; Timp retenţie: 2,17 minute. Metodă LCMS: Luna C18 (50 X 3 mm, 3 µm dimensiune particulă, temperatură = 45 °C, Rată Flux = 1,5 mL/min, Timp Rulare = 2,5 minute. Condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril + 0,1 % acid formic timp de 1,3 minute apoi menţinere timp de 1,2 minute la 95 % acetonitril + 0,1 % acid formic.
Etapa 8: (12R)-6-benziloxi-7,7-difluor-12-metil-17-nitro-15-(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaenă (amestec E/Z, diastereomer 1)
Un balon uscat de 1 litru a fost încărcat cu 2-(1-benziloxi-2,2-difluoro-but-3-enil)-5-[6-[(1R)-1-metilpent-4-enoxi]-3-nitro-5-(trifluorometil)-2-piridil]-1,3,4-oxadiazol (400 mg, 0,7185 mmol) şi DCE (400 mL). Amestecul a fost barbotat cu azot timp de 1 oră şi apoi agitat la 75 °C timp de 10 minute. O soluţie de catalizator Grubbs de a doua generaţie (200 mg, 0,2356 mmol) în DCE (4 mL) a fost adăugată rapid cu o seringă. După ce amestecul a fost agitat la 75 °C timp de 15 minute, o soluţie de catalizator Grubbs de a doua generaţie (80 mg, 0,0942 mmol) în DCE (2 mL) a fost adăugată rapid cu o seringă. Amestecul a fost agitat la 75 °C timp de 40 de minute şi răcit la temperatura camerei. S-a adăugat DMSO (0,3 mL). Amestecul a fost agitat la temperatura camerei timp de 1 oră şi apoi concentrat pe silicagel (2 g). Purificarea prin cromatografie pe silicagel (gradient: 0% până la 20% acetat de etil în heptani) a produs un produs brut (225 mg) care a fost purificat în continuare prin cromatografie în fază inversă (120 g coloană C18; gradient: 5% până la 95% acetonitril în apă). Fracţiile dorite au fost colectate şi concentrate pentru a îndepărta cea mai mare parte a acetonitrilului. Reziduul a fost extras cu acetat de etil (3 X 20 mL). Straturile organice combinate au fost uscate cu Na2SO4, filtrat şi concentrat sub presiune redusă pentru a obţine un ulei incolor, (12R)-6-benziloxi-7,7-difluor-12-metil-17-nitro-15-(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaenă (amestec E/Z, diastereomer 1) (127 mg, 30 %). Notă: s-a obţinut un singur rezultat chiral la carbonul alcoolului benzilic, stereochimia acelui centru fiind necunoscută. ESI-MS m/z calculat 526,1276, găsit 527,2 (M+1)+Timp de retenţie: 4,96 minute. Metodă LCMS: SunFire coloană C18 (75 X 4,6 mm, dimensiunea particulelor de 3,5 µm, timp de reacţie de 6 minute, condiţii pentru faza mobilă: iniţial 95% apă + 0,1% acid formic/5% acetonitril + 0,1% acid formic, gradient liniar până la 95% acetonitril timp de 4 minute, apoi menţinută timp de 2 minute la 95% acetonitril, temperatură = 45 °C, Rată Flux = 1,5 mL/min).
Etapa 9: (12R)-17-Amino-7,7-difluor-12-metil-15-(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (diastereomer 1), Compus 77
La o soluţie de (12R)-6-benziloxi-7,7-difluor-12-metil-17-nitro-15-(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,8,14,16-hexaenă (amestec E/Z, diastereomer 1) (250 mg, 0,4165 mmol) în metanol (6 mL) şi etil acetat (2 mL) într-un flacon s-a adăugat 10 % paladiu pe cărbune (86 mg, 50 % umiditate, 5 % g/g, 0,0404 mmol). Amestecul a fost răcit pe baie de gheaţă-apă. Aerul din balon a fost înlocuit de două ori cu azot prin vid. Azotul din balon a fost înlocuit de cinci ori cu hidrogen prin vid. S-a adăugat amoniac în metanol (0,4 mL de 2 M, 0,8 mmol) cu o seringă. Amestecul de reacţie a fost agitat la temperatura camerei timp de 20 de ore. Amestecul a fost filtrat prin celită, spălând cu acetat de etil, iar filtratul a fost concentrat sub presiune redusă. Purificarea reziduului prin cromatografie pe silicagel în aceleaşi condiţii de două ori succesiv (gradient: 0% până la 40% acetat de etil în heptani) a dat ca solid galben pal, (12R)-17-amino-7,7-difluor-12-metil-15-(trifluormetil)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatriciclo[12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol (diastereomer 1) (76 mg, 44 %). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,75 (s, 1H), 7,21 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 6,27 (s, 2H), 5,24 - 5,15 (m, 1H), 5,01 - 4,90 (m, 1H), 2,32 - 2,09 (m, 3H), 2,04 - 1,87 (m, 1H), 1,75 - 1,62 (m, 1H), 1,59 - 1,47 (m, 1H), 1,45 - 1,37 (m, 1H), 1,34 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 1,32 - 1,22 (m, 1H). 19F RMN (377 MHz, DMSO-d6) δ -62,41 (s, 3F), -92,20 la -93,10 (m, 1F), -99,62 până la -100,68 (m, 1F). ESI-MS m/z calc. 408,1221, găsit 409,2 (M+1)+; Timp retenţie: 4,42 minute. Metodă LCMS: SunFire C18 (75 X 4,6 mm, 3,5 µm dimensiune particulă, 6 minute rulare, condiţii faza mobilă: Iniţial 95 % apă + 0,1 % acid formic/5 % acetonitril + 0,1 % acid formic, gradient liniar până la 95 % acetonitril timp de 4 min, apoi menţinere timp de 2 min la 95 % acetonitril, temperatură = 45 °C, Flux = 1,5 mL/min).
Exemplul 55: Test de bioactivitate
Utilizarea Testului în Cameră pentru curenţii de scurt-circuit mediaţi de CFTR
Experimentele efectuate în cameră au fost efectuate folosind celule epiteliale bronşice umane (HBE) derivate de la subiecţi cu fibroză chistică heterozigote pentru F508del şi o mutaţie CFTR cu funcţie minimă (F508del/MF-HBE) şi cultivate aşa cum s-a descris anterior (Neuberger T, Burton B, Clark H, Van Goor F. Methods Mol Biol 2011:741:39-54). După patru zile, mediul apical a fost îndepărtat, iar celulele au fost cultivate la o interfaţă aer-lichid timp de >14 zile înainte de utilizare. Acest lucru a dus la obţinerea unui monostrat de celule columnare complet diferenţiate, ciliate, caracteristici epiteliilor căilor respiratorii bronşice umane.
Pentru a izola curentul de scurt-circuit mediat de CFTR (ISC), F508del/MF-HBE cultivate pe inserturile de cultură celulară Costar® Snapwell™ au fost montate într-o cameră Ussing, iar Isc transepitelial a fost măsurat în condiţii de înregistrare cu voltaj-clamp (Vţine= 0 mV) la 37 °C. Soluţia bazolaterală conţinea (în mM) 145 NaCl, 0,83 K2HPO4, 3,3 KH2O4, 1,2 MgCl2, 1,2 CaCl2, 10 Glucoză, 10 HEPES (pH ajustat la 7,4 cu NaOH) şi soluţia apicală conţinea (în mM) 145 Na Gluconat, 1,2 MgCl2, 1,2 CaCl32, 10 glucoză, 10 HEPES (pH ajustat la 7,4 cu NaOH) şi 30 µM amilorid pentru a bloca canalul epitelial de sodiu. Forskolin (20 µM) a fost adăugat pe suprafaţa apicală pentru a activa CFTR, urmată de adăugarea apicală a unui cocktail inhibitor CFTR format din BPO, GlyH-101 şi inhibitor CFTR 172 (fiecare la o concentraţie finală de analiză de 20 µM) pentru a izola specific curenţii CFTR specific izolat. ISC mediat de CFTR (µA/cm2) pentru fiecare condiţie a fost determinată din răspunsul maxim al forskolinei la curentul în stare staţionară după inhibare.
Identificarea Compuşilor Potenţatori
Activitatea compuşilor potenţatori CFTR asupra ISC mediată de CFTR a fost determinată în studiile în camera Ussing, aşa cum s-a descris mai sus. Culturile celulare F508del/MF-HBE au fost incubate cu compuşii potenţatori la o gamă de concentraţii în combinaţie cu 10 µM (14S)-8-[3-(2-{dispiro[2.0.2.1]heptan-7-il}etoxi)-1H-pirazol-1-il]-12,12-dimetil-2λ6-tia-3,9,11,18,23-pentaazatetraciclo[17.3.1.111,14.05,10]tetracosa-1(22),5,7,9,19(23),20-hexaen-2,2,4-trionă timp de 18 - 24 ore la 37 °C şi în prezenţa a 20% ser uman. Concentraţia compuşilor potenţatori (14S)-8-[3-(2-{dispiro[2.0.2.1]heptan-7-il}etoxi)-1H-pirazol-1-il]-12,12-dimetil-2λ6-tia-3,9,11,18,23-pentaazatetraciclo[17.3.1.111,14.05,10]tetracosa-1(22),5,7,9,19(23),20-hexaen-2,2,4-trionă utilizaţi în timpul incubărilor de 18-24 de ore a fost menţinută constantă pe parcursul măsurătorii în camera Ussing a ISC mediată de CFTR pentru a se asigura prezenţa compuşilor pe tot parcursul experimentului. Eficacitatea şi potenţa presupuşilor potenţatori F508del au fost comparate cu cele ale potenţatorului Vertex cunoscut, ivacaftor (N-[2,4-bis(1,1-dimetiletil)-5-hidroxifenil]-1,4-dihidro-4-oxochinolin-3-carboxamidă).
Tabelul 12 şi Tabelul 13 reprezintă activitatea de modulare a CFTR pentru Compuşii reprezentativi ai invenţiei generaţi utilizând testul descris în acest exemplu (EC50: +++ este < 500 nM; ++ este 500 nM - 1 µM; + este > 1 µM; şi ND "nu este determinat în acest test").
Tabelul 12: Bioactivitate
Comp. Nr. Structură CE50 1 + 2 ND 3 + 4 +++ 5 +++ 6 + 7 +++ 8 +++ 9 +++ 10 ND 11 +++ 12 +++ 13 +++ 14 +++ 15 +++ 16 ND 17 +++ 18 +++ 19 +++ 20 ++ 21 +++ 22 +++ 23 + 24 + 25 + 26 +++ 27 +++ 28 + 29 +++ 30 +++ 31 +++ 32 + 33 +++ 34 +++ 35 +++ 36 +++ 37 +++ 38 +++ 39 +++ 40 +++ 41 +++ 42 +++ 43 +++ 44 +++ 45 +++ 46 +++ 47 +++ 48 +++ 49 +++ 50 +++ 51 +++ 52 +++ 53 +++
Tabelul 13: Bioactivitate
Comp. Nr. Structură CE50 54 ND 55 ND 56 + 57 +++ 58 +++ 59 + 60 ND 61 +++ 62 +++ 63 +++ 64 +++ 65 ND 66 ND 67 ND 68 ND 69 ND 70 ND 71 ND 72 ND 73 ND 74 ND 75 ND 76 ND 77 ND
Alte realizări
Discuţia anterioară dezvăluie şi descrie doar variante de realizare exemplare ale acestei dezvăluiri. O persoană de specialitate în domeniu va recunoaşte cu uşurinţă din această discuţie şi din desenele şi revendicările însoţitoare faptul că se pot efectua diverse modificări, schimbări şi variaţii fără a se abate de la sfera de întindere a protecţiei al acestei dezvăluiri, aşa cum este definit în revendicări.

Claims (21)

1. Compus selectat dintre compuşii cu Formula I:
şi derivaţi deuteraţi şi săruri farmaceutic acceptabile ale acestora, în care: X este selectat dintre -O-, -S-, -SO- şi -SO2-; fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O-, -CO- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C3-C8 cicloalchil, C6-C10 aril, heteroaril cu 5 până la 10 membri, -ORY1, -CO2RY1, -CORY1, -CON(RY1)2 şi -NRY1-; sau două exemple de RY pe acelaşi atom sunt luate împreună pentru a forma un ciclu selectat dintre C3-C8 cicloalchil şi heterociclil cu 3 până la 6 membri; sau două exemple de RY, dintre care unul se află pe un atom şi al doilea pe un atom adiacent, sunt luate împreună pentru a forma o legătură pi; fiecare RY1 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil, sau două exemple de RY1 legate de acelaşi atom de azot luate împreună formează un heterociclil cu 3 până la 6 membri; Ciclul B este selectat dintre: ▪ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, C1-C6 alchil şi C1-C6 alcoxi), ▪ C3-C8 cicloalchil, ▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri şi ▪ heterociclil cu 3 până la 6 membri (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil); fiecare Q este selectat independent dintre: ▪ C1-C6 alchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre: halogen, ∘ oxo, ∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi -OCF3), şi ∘ C3-C8 cicloalchil, ▪ C3-C8 cicloalchil opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre: ∘ halogen, ∘ CN, ∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, -NH2 şi -NHCOMe), ∘ C1-C6 alcoxi, ∘ C6-C10 aril (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre C1-C6 alchil) şi ∘ C3-C8 cicloalchil, ▪ C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre: ∘ halogen, ∘ CN, ∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi), ∘ C1-C6 alcoxi opţional substituit cu 1-4 grupări selectate independent dintre: ▪ halogen, ▪ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu CF3), ∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen, CF3, OCF3 şi C1-C6 alchil) şi ∘ C6-C10 aril, ▪ heteroaril cu 5 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre: ∘ halogen, ∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen), ∘ C3-C8 cicloalchil (opţional substituit cu 1-3 grupări CF3), şi heterociclil cu 3 până la 10 membri, ▪ heterociclil cu 3 până la 10 membri, opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre: ∘ C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre oxo şi C3-C8 cicloalchil) şi ∘ oxo; fiecare R1 este selectat independent dintre halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi), -OR2, -N(R2)2, - CO2R2, -CO-N(R2)2, -CN, fenil, benzil, C1-C6 alcoxi, C3-C8 cicloalchil, heteroaril cu 5 până la 6 membri, heterociclil cu 3 până la 6 membri, -SO2R2, -SR2, -SOR2, -PO(OR2)2 şi -PO(R2)2; fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen) şi C6-C10 aril (opţional substituit cu C1-C6 alcoxi, care este opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen); Z este selectat din
în care Ciclul C este selectat din C6-C10 aril şi heteroaril cu 5 până la 10 membri; RZ1 este selectat dintre hidrogen, -CN, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen sau 1-3 hidroxi), heterociclil cu 3 până la 6 membri, cicloalchil cu 3 până la 6 membri, aril cu 5 până la 6 membri şi heteroaril cu 5 până la 6 membri; RZ2 este selectat dintre hidrogen, halogen şi hidroxi sau RZ1 şi RZ2 luaţi împreună formează o grupare selectată dintre oxo şi =N-OH; fiecare RZ3 este selectat independent dintre hidroxi, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alchil, C1-C6 haloalchil şi C6-C10 aril; sau două exemple de RZ3 sunt luate împreună pentru a forma un heterociclil cu 3 până la 6 membri; n este selectat dintre 4, 5, 6, 7 şi 8; şi m este selectat dintre 0, 1, 2 şi 3.
2. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform revendicării 1, în care X este -O-.
3. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform revendicării 1 sau revendicării 2, în care: (a) fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen, halogen, C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q), C3-C8 cicloalchil şi -ORY1 sau (b) fiecare RY este selectat independent dintre: hidrogen, fluor,
4. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre revendicările 1 până la 3, în care n este selectat dintre 4, 5 şi 6; şi/sau în care -(Y)n.- este un grup selectat dintre:
5. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre revendicările 1 până la 4, în care fiecare R1 este selectat independent din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen şi hidroxi), -N(R2)2 şi -CO2R2; şi/sau în care fiecare R2 este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil.
6. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre revendicările 1 până la 5, în care fiecare R1 este selectat independent din -CF3, -NH2, - NH(CH2CH3), CO2H şi CH2OH.
7. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre revendicările 1 până la 6, în care: (a) Z este selectat din
şi/sau (b) RZ1 este selectat dintre hidrogen şi C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate dintre halogen); şi/sau (c) RZ1 este selectat dintre hidrogen şi -CF3; şi/sau (d) RZ2 este hidroxi; şi/sau (e) Z este selectat dintre:
şi/sau (f) m este selectat dintre 1 şi 2; şi/sau (g) X este -O-; fiecare Y este selectat independent dintre -C(RY)2-, -O- şi
fiecare RY este selectat independent dintre hidrogen şi C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre hidroxi şi Q); Ciclul B este selectat din grupări C3-C8 cicloalchil: fiecare Q este selectat independent dintre: C3-C8 cicloalchil şi C6-C10 aril opţional substituit cu 1-3 grupări selectate independent dintre halogen şi C1-C6 alchil, fiecare R1 este selectat independent din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen) şi -NH2; Z este
RZ1 este selectat din C1-C6 alchil (opţional substituit cu 1-6 grupări selectate independent dintre halogen); RZ2 este hidroxi; n este selectat dintre 5 şi 6; şi m este 2.
8. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre revendicările 1 până la 7, în care: (a) fiecare RY este selectat independent dintre: hidrogen,
şi/sau (b) -(Y)n.- este un grup selectat dintre:
şi
şi/sau (c) RZ1 este -CF3; şi/sau (d) n este 6.
9. Compus conform revendicării 1, selectat dintre:
Comp. Nr. Structură 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 săruri farmaceutic acceptabile ale acestora şi derivaţi deuteraţi ai oricăruia dintre cei de mai sus; opţional, în care Compusul este:
Comp. Nr. Structură 5 11 14 36 37 47 49 50 52 sărurile acestora acceptabile farmaceutic şi derivaţii deuteraţi ai oricăruia dintre cei menţionaţi anterior.
10. Compus conform revendicării 1, selectat dintre:
Comp. Nr. Structură 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 săruri farmaceutic acceptabile ale acestora şi derivaţi deuteraţi ai oricăruia dintre cei de mai sus; opţional, în care Compusul este:
Comp. Nr. Structură 59 61 63 64 sărurile acestora acceptabile farmaceutic şi derivaţii deuteraţi ai oricăruia dintre cei menţionaţi anterior.
11. Compoziţie farmaceutică care cuprinde un compus, un derivat deuterat sau o sare acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre revendicările 1 până la 10 şi un purtător acceptabil farmaceutic.
12. Compoziţia farmaceutică conform revendicării 11, care cuprinde în plus unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari; opţional, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind un compus cu activitate de modulare a CFTR sau o sare sau un derivat deuterat al acestuia; şi/sau în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind un corector CFTR.
13. Compoziţia farmaceutică conform revendicării 12, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind: (a) (R)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-dihidroxipropil)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropancarboxamidă (Compus II.):
şi/sau (b) acid 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropancarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)benzoic (Compus IV.):
(c) N-(1,3-dimetilpirazol-4-il)sulfonil-6-[3-(3,3,3-trifluoro-2,2-dimetil-propoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (Compus V.):
şi/sau (d) N-(benzensulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (Compus VI):
şi/sau (e) (14S)-8-[3-(2-{dispiro[2.0.2.1]heptan-7-il}etoxi)-1H-pirazol-1-il]-12,12-dimetil-2λ6-tia-3,9,11,18,23-pentaazatetraciclo[17.3.1.111,14.05,10]tetracoza-1(22),5,7,9,19(23),20-hexaen-2,2,4-trionă (Compus VII.):
şi/sau (f) (11)R)-6-(2,6-dimetilfenil)-11-(2-metilpropil)-12-{spiro[2.3]hexan-5-il}-9-oxa-2λ6-tia-3,5,12,19-tetraazatriciclo[12.3.1.14,8]nonadeca-1(17),4(19),5,7,14(18),15-hexaen-2,2,13-trionă (Compus VIII):
şi/sau (g) cel puţin un compus selectat dintre PTI-428, ABBV-2222, ABBV-2851, GLPG2737, ABBV-3221, ABBV-3748, ABBV-3903, ABBV-119 şi PTI-801.
14. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform oricăreia dintre revendicările 1 până la 10 sau compoziţia farmaceutică conform oricăreia dintre revendicările 11 până la 13 pentru utilizare într-o metodă de tratare a fibrozei chistice, cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente din respectivul compus, derivat deuterat, sare acceptabilă farmaceutic sau compoziţie farmaceutică unui pacient care are nevoie de aceasta.
15. Compusul, derivatul deuterat, sarea acceptabilă farmaceutic sau compoziţia farmaceutică pentru utilizare conform revendicării 14, care cuprinde în plus administrarea unuia sau mai multor agenţi terapeutici suplimentari; opţional, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind un compus cu activitate de modulare a CFTR sau o sare sau un derivat deuterat al acestuia; şi/sau în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind un corector CFTR.
16. Compusul, derivatul deuterat, sarea acceptabilă farmaceutic sau compoziţia farmaceutică pentru utilizare conform revendicării 15, în care unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari cuprind: (a) (R)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)-N-(1-(2,3-dihidroxipropil)-6-fluoro-2-(1-hidroxi-2-metilpropan-2-il)-1H-indol-5-il)ciclopropancarboxamidă (Compus II.):
şi/sau (b) acid 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-il)ciclopropancarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)benzoic (Compus IV.):
şi/sau (c) N-(1,3-dimetilpirazol-4-il)sulfonil-6-[3-(3,3,3-trifluoro-2,2-dimetil-propoxi)pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (Compus V.):
şi/sau (d) N-(benzensulfonil)-6-[3-[2-[1-(trifluorometil)ciclopropil]etoxi]pirazol-1-il]-2-[(4S)-2,2,4-trimetilpirolidin-1-il]piridin-3-carboxamidă (Compus VI):
şi/sau (e) (14S)-8-[3-(2-{dispiro[2.0.2.1]heptan-7-il}etoxi)-1H-pirazol-1-il]-12,12-dimetil-2λ6-tia-3,9,11,18,23-pentaazatetraciclo[17.3.1.111,14.05,10]tetracoza-1(22),5,7,9,19(23),20-hexaen-2,2,4-trionă (Compus VII.):
şi/sau (f) (11)R)-6-(2,6-dimetilfenil)-11-(2-metilpropil)-12-{spiro[2.3]hexan-5-il}-9-oxa-2λ6-tia-3,5,12,19-tetraazatriciclo[12.3.1.14,8]nonadeca-1(17),4(19),5,7,14(18),15-hexaen-2,2,13-trionă (Compus VIII):
şi/sau (g) cel puţin un compus selectat dintre PTI-428, ABBV-2222, ABBV-2851, GLPG2737, ABBV-3221, ABBV-3748, ABBV-3903, ABBV-119 şi PTI-801.
17. Compus conform revendicării 1 cu formula:
un derivat deuterat al acestuia sau o sare acceptabilă farmaceutic a oricăruia dintre cele menţionate anterior.
18. Compoziţie farmaceutică care cuprinde compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform revendicării 17 şi un purtător acceptabil farmaceutic.
19. Compoziţia farmaceutică conform revendicării 18, care cuprinde în plus unul sau mai mulţi agenţi terapeutici suplimentari.
20. Compusul, derivatul deuterat sau sarea acceptabilă farmaceutic conform revendicării 17 sau compoziţia farmaceutică conform revendicării 18, pentru utilizare într-o metodă de tratare a fibrozei chistice, cuprinzând administrarea unei cantităţi eficiente din respectivul compus, derivat deuterat, sare acceptabilă farmaceutic sau compoziţie farmaceutică unui pacient care are nevoie de aceasta.
21. Compusul pentru utilizare conform revendicării 20, în care metoda cuprinde în plus administrarea unuia sau mai multor agenţi terapeutici suplimentari.
MDE20230621T 2020-08-07 2021-08-06 Modulatori ai reglatorilor conductanței transmembranare a fibrozei chistice MD4192829T2 (ro)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063063194P 2020-08-07 2020-08-07
PCT/US2021/044895 WO2022032068A1 (en) 2020-08-07 2021-08-06 Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MD4192829T2 true MD4192829T2 (ro) 2025-10-31

Family

ID=77595627

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MDE20230621T MD4192829T2 (ro) 2020-08-07 2021-08-06 Modulatori ai reglatorilor conductanței transmembranare a fibrozei chistice

Country Status (35)

Country Link
US (2) US12269831B2 (ro)
EP (1) EP4192829B1 (ro)
JP (1) JP2023537484A (ro)
KR (1) KR20230066348A (ro)
CN (1) CN116171154A (ro)
AR (1) AR123183A1 (ro)
AU (1) AU2021322301A1 (ro)
BR (1) BR112023002210A2 (ro)
CA (1) CA3190583A1 (ro)
CL (1) CL2023000375A1 (ro)
CO (1) CO2023002072A2 (ro)
CR (1) CR20230120A (ro)
DK (1) DK4192829T3 (ro)
DO (1) DOP2023000024A (ro)
EC (1) ECSP23015370A (ro)
ES (1) ES3032183T3 (ro)
FI (1) FI4192829T3 (ro)
GE (2) GEP20257825B (ro)
HR (1) HRP20250694T1 (ro)
HU (1) HUE071975T2 (ro)
IL (1) IL300224A (ro)
LT (1) LT4192829T (ro)
MA (1) MA60597B1 (ro)
MD (1) MD4192829T2 (ro)
MX (1) MX2023001465A (ro)
PE (1) PE20231377A1 (ro)
PH (1) PH12023550238A1 (ro)
PL (1) PL4192829T3 (ro)
PT (1) PT4192829T (ro)
RS (1) RS66953B1 (ro)
SI (1) SI4192829T1 (ro)
SM (1) SMT202500214T1 (ro)
UY (1) UY39374A (ro)
WO (1) WO2022032068A1 (ro)
ZA (1) ZA202301228B (ro)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2939775T3 (es) 2018-02-15 2023-04-26 Vertex Pharma Macrociclos como moduladores del regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística, composiciones farmacéuticas de los mismos, su uso en el tratamiento de la fibrosis quística, y procesos para elaborarlos
AR118555A1 (es) 2019-04-03 2021-10-20 Vertex Pharma Agentes moduladores del regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística
TWI899097B (zh) 2019-08-14 2025-10-01 美商維泰克斯製藥公司 製備cftr調節劑之方法
TWI867024B (zh) 2019-08-14 2024-12-21 美商維泰克斯製藥公司 囊腫纖維化跨膜傳導調節蛋白之調節劑
AU2020328028B2 (en) 2019-08-14 2025-03-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Crystalline forms of CFTR modulators
CR20230120A (es) 2020-08-07 2023-09-01 Vertex Pharma Moduladores del regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística
US12324802B2 (en) 2020-11-18 2025-06-10 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
MX2023006770A (es) 2020-12-10 2023-08-14 Vertex Pharma Metodos de tratamiento para fibrosis quistica.
WO2023150237A1 (en) 2022-02-03 2023-08-10 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods of treatment for cystic fibrosis
EP4472983A1 (en) 2022-02-03 2024-12-11 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods of preparing and crystalline forms of (6a,12a)-17-amino-12-methyl-6,15-bis(trifluoromethyl)-13,19-dioxa-3,4,18-triazatricyclo[ 12.3.1.12,5]nonadeca-1(18),2,4,14,16-pentaen-6-ol
AU2023218262A1 (en) * 2022-02-08 2024-08-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
GEAP202516620A (en) 2022-04-06 2025-04-10 Vertex Pharma Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
AU2023272562A1 (en) * 2022-05-16 2024-11-07 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Solid forms of a macrocyclic compounds as cftr modulators and their preparation
AU2023273614A1 (en) * 2022-05-16 2024-11-07 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods of treatment for cystic fibrosis
WO2024054851A1 (en) * 2022-09-07 2024-03-14 Sionna Therapeutics Macrocyclic compounds, compositions and methods of using thereof
WO2024054845A1 (en) * 2022-09-07 2024-03-14 Sionna Therapeutics Macrocycic compounds, compositions, and methods of using thereof
KR20250091331A (ko) * 2022-09-07 2025-06-20 시오나 테라퓨틱스 인크. 거대환식 화합물, 조성물, 및 이의 사용 방법
WO2024097355A1 (en) * 2022-11-02 2024-05-10 Vicinitas Therapeutics, Inc. Deubiquitinase-targeting chimeras and related methods
WO2025076235A1 (en) 2023-10-04 2025-04-10 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
WO2025076240A1 (en) 2023-10-04 2025-04-10 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Solid forms of modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
WO2025129104A1 (en) * 2023-12-15 2025-06-19 Sionna Therapeutics Inc. Compounds, compositions, and methods of using thereof

Family Cites Families (147)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2234451T1 (es) 2001-11-14 2005-07-01 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Formas cristalinas y amorfas de losartan potasio y procedimiento para su preparacion.
EP1572660B1 (en) 2002-12-20 2011-01-26 X-Ceptor Therapeutics, Inc. Isoquinolinone derivatives and their use as therapeutic agents
EP1601657A1 (en) 2003-03-12 2005-12-07 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyrazole modulators of atp-binding cassette transporters
DE602004022819D1 (de) 2003-06-06 2009-10-08 Vertex Pharma Von atp-bindende kassette transportern
US7973169B2 (en) 2003-09-06 2011-07-05 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of ATP-Binding Cassette transporters
KR20060121909A (ko) 2003-10-08 2006-11-29 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 사이클로알킬 또는 피라닐 그룹을 포함하는 ａｔｐ-결합카세트 수송자의 조절자
CN1925854A (zh) 2003-11-14 2007-03-07 沃泰克斯药物股份有限公司 可用作atp－结合弹夹转运蛋白调控剂的噻唑和噁唑
US7977322B2 (en) 2004-08-20 2011-07-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of ATP-binding cassette transporters
WO2005075435A1 (en) 2004-01-30 2005-08-18 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of atp-binding cassette transporters
US20140343098A1 (en) 2004-06-24 2014-11-20 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of atp-binding cassette transporters
RS56873B1 (sr) 2004-06-24 2018-04-30 Vertex Pharma Modulatori atp-vezujućih kasetnih transportera
US8354427B2 (en) 2004-06-24 2013-01-15 Vertex Pharmaceutical Incorporated Modulators of ATP-binding cassette transporters
EP2363128B1 (en) 2005-03-11 2016-02-17 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Indole modulators of ATP-binding cassette transporters
JP5426878B2 (ja) 2005-05-24 2014-02-26 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ａｔｐ−結合カセットトランスポーターのモジュレーター
MX2008002019A (es) 2005-08-11 2008-04-16 Vertex Pharma Moduladores del regulador de conductancia transmembrana de fibrosis quistica.
US8314256B2 (en) 2005-10-06 2012-11-20 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of ATP-binding cassette transporters
US20120232059A1 (en) 2005-11-08 2012-09-13 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of ATP-Binding Cassette Transporters
KR101561482B1 (ko) 2005-11-08 2015-10-20 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 Ａｔｐ 결합 카세트 수송체의 헤테로사이클릭 조정제
CA2634113A1 (en) 2005-12-24 2007-07-05 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Quinolin- 4 - one derivatives as modulators of abc transporters
CA2635214A1 (en) 2005-12-27 2007-07-05 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds useful in cftr assays and methods therewith
US7691902B2 (en) 2005-12-28 2010-04-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of ATP-binding cassette transporters
EP3219705B1 (en) 2005-12-28 2020-03-11 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceutical compositions of the amorphous form of n-[2,4-bis(1,1-dimethylethyl)-5-hydroxyphenyl]-1,4-dihydro-4-oxoquinoline-3-carboxamide
US7671221B2 (en) 2005-12-28 2010-03-02 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of ATP-Binding Cassette transporters
JP2009530416A (ja) 2006-03-20 2009-08-27 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 医薬組成物
WO2007109604A2 (en) 2006-03-20 2007-09-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceutical compositions
PT2674428T (pt) 2006-04-07 2016-07-14 Vertex Pharma Modeladores de transportadores de cassetes de ligação de atp
US7645789B2 (en) 2006-04-07 2010-01-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Indole derivatives as CFTR modulators
US10022352B2 (en) 2006-04-07 2018-07-17 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of ATP-binding cassette transporters
CA2652072A1 (en) 2006-05-12 2007-11-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions of n-[2,4-bis(1,1-dimethylethyl)-5-hydroxyphenyl]-1,4-dihydro-4-oxoquinoline-3-carboxamide
RU2009120976A (ru) 2006-11-03 2010-12-10 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед (Us) Производные азаиндола в качестве модуляторов cftr
US8563573B2 (en) 2007-11-02 2013-10-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Azaindole derivatives as CFTR modulators
US7754739B2 (en) 2007-05-09 2010-07-13 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of CFTR
KR101444489B1 (ko) 2007-02-01 2014-09-24 리스버로직스 코퍼레이션 심혈관 질환을 예방 및 치료하기 위한 화합물
NZ581259A (en) 2007-05-09 2012-07-27 Vertex Pharma Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
WO2008147952A1 (en) 2007-05-25 2008-12-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
WO2009023509A2 (en) 2007-08-09 2009-02-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Therapeutic combinations useful in treating cftr related diseases
NZ583420A (en) 2007-08-24 2012-06-29 Vertex Pharma Isothiazolopyridinones useful for the treatment of (inter alia) cystic fibrosis
CA2699292A1 (en) 2007-09-14 2009-03-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Solid forms of n-[2,4-bis(1,1-dimethylethyl)-5-hydroxyphenyl]-1,4-dihydro-4-oxoquinoline-3-carboxamide
EP2201010B1 (en) 2007-09-14 2013-11-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
HUE026334T2 (en) 2007-11-16 2016-06-28 Vertex Pharma Isokinoline modulators of ATP-binding cassette (ABC) transporters
EP2237768A2 (en) 2007-12-07 2010-10-13 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Formulations of 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl) cyclopropanecarboxamido)-3-methylpyridin-2-yl)benzoic acid
HUE031913T2 (en) 2007-12-07 2017-08-28 Vertex Pharma Solid forms of 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl) cyclopropanecarboxamido)-3-methylpyridin-2-yl) benzoic acid
US20100036130A1 (en) 2007-12-07 2010-02-11 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes for producing cycloalkylcarboxamido-pyridine benzoic acids
NZ585794A (en) 2007-12-07 2012-05-25 Vertex Pharma Processes for producing cycloalkylcarboxamido-pyridine benzoic acids
ES2422741T3 (es) 2007-12-13 2013-09-13 Vertex Pharma Moduladores del regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística
ES2647531T3 (es) 2008-02-28 2017-12-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Derivados de heteroarilo como moduladores de CFTR
CN101981011B (zh) 2008-03-31 2014-05-07 沃泰克斯药物股份有限公司 作为cftr调节剂的吡啶基衍生物
SMT202100077T1 (it) 2008-08-13 2021-05-07 Vertex Pharma Composizione farmaceutica e sue somministrazioni
US20100256184A1 (en) 2008-08-13 2010-10-07 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceutical composition and administrations thereof
US20100074949A1 (en) 2008-08-13 2010-03-25 William Rowe Pharmaceutical composition and administration thereof
MX2011003249A (es) 2008-09-29 2011-05-19 Vertex Pharma Unidades de dosificacion del acido 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1 ,3]dioxol-5-il)ciclopropancarboxamido)-3-metilpiridin-2-il)benzoi co.
CN102227430A (zh) 2008-10-23 2011-10-26 沃泰克斯药物股份有限公司 囊性纤维化跨膜传导调节因子的调节剂
AU2009308241B2 (en) 2008-10-23 2016-01-07 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Solid forms of N-(4-(7-azabicyclo[2.2.1]heptan-7-yl)-2-(trifluoromethyl) phenyl)-4-oxo-5-(trifluoromethyl)-1,4-dihydroquinoline-3-carboxamide
US20110257223A1 (en) 2008-10-23 2011-10-20 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator
JP5645833B2 (ja) 2008-10-23 2014-12-24 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッドＶｅｒｔｅｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ 嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子の修飾因子
UA104876C2 (uk) 2008-11-06 2014-03-25 Вертекс Фармасьютікалз Інкорпорейтед Модулятори atф-зв'язувальних касетних транспортерів
HRP20150288T1 (hr) 2008-11-06 2015-04-24 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulatori atp-vezujuä†ih kasetnih transportera
WO2010078103A1 (en) 2008-12-30 2010-07-08 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
NZ595151A (en) 2009-03-20 2013-11-29 Vertex Pharma Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
PT2408750E (pt) 2009-03-20 2015-10-15 Vertex Pharma Processo para a produção de modeladores do regulador de condutância transmembranar da fibrose cística
WO2010151747A1 (en) 2009-06-26 2010-12-29 Cystic Fibrosis Foundation Therapeutics, Inc. Pyrimine compounds and methods of making and using same
JP5793496B2 (ja) 2009-09-17 2015-10-14 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッドＶｅｒｔｅｘ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｅｄ アザ二環式化合物を調製するプロセス
WO2011050325A1 (en) 2009-10-22 2011-04-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions for treatment of cystic fibrosis and other chronic diseases
MX2012004790A (es) 2009-10-23 2013-02-01 Vertex Pharma Proceso para preparar moduladores del regulador de conductancia transmembrana de fibrosis quistica.
US8389727B2 (en) 2009-10-23 2013-03-05 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Solid forms of N-(4-(7-Azabicyclo[2.2.1]Heptan-7-yl)-2-Trifluoromethyl)Phenyl)-4-Oxo-5-(Trifluoromethyl)-1,4-Dihydroquinoline-3-Carboxamide
AU2011227021A1 (en) 2010-03-19 2012-10-18 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Solid forms of N-[2,4-bis(1,1-dimethylethyl)-5-hydroxyphenyl]-1,4-dihydro-4-oxoquinoline-3-carboxamide
US8802868B2 (en) 2010-03-25 2014-08-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Solid forms of (R)-1(2,2-difluorobenzo[D][1,3]dioxo1-5-yl)-N-(1-(2,3-dihydroxypropyl-6-fluoro-2-(1-hydroxy-2-methylpropan2-yl)-1H-Indol-5-yl)-Cyclopropanecarboxamide
EP3181561B1 (en) 2010-03-25 2020-05-20 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Synthetic intermediate of (r)-1(2,2 -difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5yl)-n-(1-(2,3-dihydroxypropyl)-6-fluoro-2-(1-hydroxy-2-methylpropan-2yl)-1h-indol-5yl)cyclopropanecarboxamide
LT3150198T (lt) 2010-04-07 2021-12-10 Vertex Pharmaceuticals Incorporated 3-(6-(1-(2,2-difluorbenzo[d][1,3]dioksol-5-il) ciklopropankarboksamido)-3-metilpiridin-2-il)benzoinės rūgšties farmacinė kompozicija ir jos įvedimas
ME02446B (me) 2010-04-07 2016-09-20 Vertex Pharma Čvrste forme 3-(6-(1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioksol-5-il)ciklopropankarboksiamido)-3-metilpiridin-2-il)benzoeve kiseline
CA2796088C (en) 2010-04-09 2018-02-06 Ekso Bionics Exoskeleton load handling system and method of use
EP2560650A1 (en) 2010-04-22 2013-02-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceutical compositions and administrations thereof
EP3138563A1 (en) 2010-04-22 2017-03-08 Vertex Pharmaceuticals Inc. Pharmaceutical compositions and administrations thereof
CA2796646A1 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceutical compositions and administrations thereof
JP2013525371A (ja) 2010-04-22 2013-06-20 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド シクロアルキルカルボキサミド−インドール化合物の製造方法
AR081920A1 (es) 2010-05-20 2012-10-31 Vertex Pharma Procesos de produccion de moduladores del regulador de conductancia transmembrana de fibrosis quistica
AU2011255237A1 (en) 2010-05-20 2012-11-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceutical compositions and administrations thereof
US8563593B2 (en) 2010-06-08 2013-10-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Formulations of (R)-1-(2,2-difluorobenzo[D] [1,3] dioxol-5-yl)-N-(1-(2,3-dihydroxypropyl)-6-fluoro-2-(1-hydroxy-2-methylpropan-2-yl)-1H-indol-5-yl)cyclopropanecarboxamide
WO2012027247A2 (en) 2010-08-23 2012-03-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceutical composition of (r)-1-(2,2-difluorobenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)-n-(1-(2,3-dihydroxy propyl)-6-fluoro-2-(1-hydroxy-2-methylpropan-2-yl)-1h-indol-5-yl) cyclopropanecarboxamide and administration therof
RU2013113627A (ru) 2010-08-27 2014-10-10 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед Фармацевтическая композиция и ее введения
US8802700B2 (en) 2010-12-10 2014-08-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of ATP-Binding Cassette transporters
HUE047354T2 (hu) 2011-05-18 2020-04-28 Vertex Pharmaceuticals Europe Ltd Ivacaftor deuterizált származékai
MX349159B (es) 2011-05-18 2017-07-14 Concert Pharmaceuticals Inc Derivados deuterados de ivacaftor.
CN103946221B (zh) * 2011-09-16 2016-08-03 诺华股份有限公司 用于治疗囊性纤维化的杂环化合物
AU2012332225A1 (en) 2011-11-02 2014-05-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Use of (N- [2, 4 -bis (1, 1 -dimethylethyl) - 5 - hydroxyphenyl] - 1, 4 - dihydro - 4 - oxoquinoline - 3 - ca rboxamide) for treating CFTR mediated diseases
US20140127901A1 (en) 2012-11-08 2014-05-08 Taiwan Semiconductor Manufacturing Company, Ltd. Low-k damage free integration scheme for copper interconnects
CA2852991C (en) 2011-11-08 2019-12-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of atp-binding cassette transporters
CN108066306B (zh) 2012-01-25 2021-09-07 沃泰克斯药物股份有限公司 药物制剂及其制备方法
EP2819670A1 (en) 2012-02-27 2015-01-07 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceutical composition and administration thereof
US8674108B2 (en) 2012-04-20 2014-03-18 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Solid forms of N-[2,4-bis(1,1-dimethylethy)-5-hydroxyphenyl]-1,4-dihydro-4-oxoquinoline-3-carboxamide
CA2869847A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Solid forms of n-[2,4-bis(1,1-dimethylethyl)-5-hydroxyphenyl]-1,4-dihydro-4-oxoquinoline-3-carboxamide
WO2013185112A1 (en) 2012-06-08 2013-12-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceuticl compositions for the treatment of cftr -mediated disorders
HK1209318A1 (en) 2012-07-16 2016-04-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceutical compositions of (r)-1-(2,2-diflurorbenzo[d][1,3]dioxol-5-yl)-n-(1-(2,3-dihydroxypropyl)-6-fluoro-2-(1-hydroxy-2-methylpropan-2-yl)-1h-indol-5-yl) cyclopropanecarboxamide and administration thereof
SMT202500078T1 (it) 2012-11-02 2025-03-12 Vertex Pharma Composizioni farmaceutiche per il trattamento di malattie mediate da cftr
WO2014078842A1 (en) 2012-11-19 2014-05-22 Concert Pharmaceuticals, Inc. Deuterated cftr potentiators
US20140221424A1 (en) 2013-01-30 2014-08-07 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceutical compositions for use in the treatment of cystic fibrosis
WO2015048301A1 (en) 2013-09-26 2015-04-02 Pharmakea, Inc. Autotaxin inhibitor compounds
NZ720958A (en) 2013-11-12 2022-02-25 Vertex Pharma Process of preparing pharmaceutical compositions for the treatment of cftr mediated diseases
HUE039062T2 (hu) 2014-04-15 2018-12-28 Vertex Pharma Gyógyszerészeti készítmények cisztás fibrózis transzmembrán konduktancia regulátor által mediált betegségek kezelésére
MX2017004543A (es) 2014-10-06 2017-10-04 Vertex Pharma Moduladores de regulador de conductancia transmembranal de fibrosis quística.
US9701639B2 (en) 2014-10-07 2017-07-11 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Co-crystals of modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
LT3212189T (lt) 2014-10-31 2020-11-25 Abbvie Overseas S.A R.L. Pakeisti chromanai ir naudojimo būdas
PT3221692T (pt) 2014-11-18 2021-09-10 Vertex Pharma Processo de realização de testagem de alta produtividade por cromatografia líquida de alta eficiência
MA41253A (fr) 2014-12-23 2017-10-31 Proteostasis Therapeutics Inc Composés, compositions et procédés pour augmenter l'activité du cftr
EP3277647A1 (en) 2015-03-31 2018-02-07 Vertex Pharmaceuticals (Europe) Limited Deuterated vx-661
US9840513B2 (en) 2015-07-16 2017-12-12 Abbvie S.Á.R.L. Substituted tricyclics and method of use
JP6849686B2 (ja) 2015-09-21 2021-03-24 バーテックス ファーマシューティカルズ （ヨーロッパ） リミテッド 重水素化されたｃｆｔｒ増強剤の投与
EP3352758A2 (en) 2015-09-25 2018-08-01 Vertex Pharmaceuticals (Europe) Limited Deuterated cftr potentiators
NZ741093A (en) 2015-10-06 2022-12-23 Proteostasis Therapeutics Inc Compounds, compositions, and methods for modulating cftr
US9890158B2 (en) 2015-10-09 2018-02-13 Abbvie S.Á.R.L. N-sulfonylated pyrazolo[3,4-b]pyridin-6-carboxamides and method of use
PL3436446T3 (pl) 2016-03-31 2023-09-11 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulatory mukowiscydozowego przezbłonowego regulatora przewodnictwa
PT3519401T (pt) 2016-09-30 2021-12-27 Vertex Pharma Modulador de regulador de condutância transmembranar de fibrose quística, composições farmacêuticas, métodos de tratamento e processo para fazer o modulador
US10399940B2 (en) 2016-10-07 2019-09-03 Abbvie S.Á.R.L. Substituted pyrrolidines and methods of use
CA3041819A1 (en) 2016-10-27 2018-05-03 Vertex Pharmaceuticals (Europe) Limited Methods of treatment with deuterated cftr potentiators
US20180125838A1 (en) 2016-10-27 2018-05-10 Vertex Pharmaceuticals (Europe) Limited Methods of treatment with deuterated cftr potentiators
WO2018107100A1 (en) 2016-12-09 2018-06-14 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulator of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator, pharmaceutical compositions, methods of treatment, and process for making the modulator
US20180280349A1 (en) 2017-03-28 2018-10-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods of treating cystic fibrosis in patients with residual function mutations
US11253509B2 (en) 2017-06-08 2022-02-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods of treatment for cystic fibrosis
WO2019010092A1 (en) 2017-07-01 2019-01-10 Vertex Pharmaceuticals Incorporated COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING CYSTIC FIBROSIS
ES3008911T3 (en) 2017-07-11 2025-03-25 Vertex Pharma Carboxamides as modulators of sodium channels
US20200171015A1 (en) 2017-07-17 2020-06-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods of treatment for cystic fibrosis
AU2018304168B2 (en) 2017-07-17 2023-05-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods of treatment for cystic fibrosis
WO2019026075A1 (en) 2017-07-31 2019-02-07 Technion Research & Development Foundation Limited METHODS OF DETECTING MODIFIED AND UN-MODIFIED DNA
AR112467A1 (es) 2017-08-02 2019-10-30 Vertex Pharma Procesos para preparar compuestos
IL273831B2 (en) 2017-10-19 2024-10-01 Vertex Pharma Crystalline forms and compositions of cftr modulators
KR102720000B1 (ko) 2017-12-01 2024-10-21 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 낭포성 섬유증 막관통 조절 인자의 제조 방법
US20210228489A1 (en) 2017-12-04 2021-07-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions for treating cystic fibrosis
EP3720849A2 (en) 2017-12-08 2020-10-14 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes for making modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
TWI810243B (zh) 2018-02-05 2023-08-01 美商維泰克斯製藥公司 用於治療囊腫纖化症之醫藥組合物
ES2939775T3 (es) 2018-02-15 2023-04-26 Vertex Pharma Macrociclos como moduladores del regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística, composiciones farmacéuticas de los mismos, su uso en el tratamiento de la fibrosis quística, y procesos para elaborarlos
WO2019191620A1 (en) 2018-03-30 2019-10-03 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Crystalline forms of modulators of cftr
US20210139514A1 (en) 2018-04-05 2021-05-13 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
WO2019200246A1 (en) 2018-04-13 2019-10-17 Alexander Russell Abela Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator, pharmaceutical compositions, methods of treatment, and process for making the modulator
MA54227B1 (fr) 2018-11-14 2023-03-31 Vertex Pharma Méthodes de traitement de la fibrose kystique
CA3119656A1 (en) * 2018-12-21 2020-06-25 Novartis Ag Macrocyclic compounds and their use in the treatment of disease
AR118555A1 (es) 2019-04-03 2021-10-20 Vertex Pharma Agentes moduladores del regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística
WO2020214921A1 (en) 2019-04-17 2020-10-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Solid forms of modulators of cftr
WO2020242935A1 (en) 2019-05-29 2020-12-03 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods of treatment for cystic fibrosis
AU2020328028B2 (en) 2019-08-14 2025-03-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Crystalline forms of CFTR modulators
TWI899097B (zh) 2019-08-14 2025-10-01 美商維泰克斯製藥公司 製備cftr調節劑之方法
TWI867024B (zh) 2019-08-14 2024-12-21 美商維泰克斯製藥公司 囊腫纖維化跨膜傳導調節蛋白之調節劑
AU2020328568A1 (en) 2019-08-14 2022-03-03 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
CR20230120A (es) 2020-08-07 2023-09-01 Vertex Pharma Moduladores del regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística
KR20230051216A (ko) 2020-08-13 2023-04-17 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 Cftr 조절제의 결정질 형태
US20230365587A1 (en) 2020-10-07 2023-11-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
IL301755A (en) 2020-10-07 2023-05-01 Vertex Pharma Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
JP2023549547A (ja) 2020-11-18 2023-11-27 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子のモジュレーターとして使用するための１，３，４－オキサジアゾール環を含有する大環状化合物

Also Published As

Publication number Publication date
AR123183A1 (es) 2022-11-02
CO2023002072A2 (es) 2023-05-19
MX2023001465A (es) 2023-04-27
TW202221004A (zh) 2022-06-01
GEAP202516158A (en) 2025-05-27
RS66953B1 (sr) 2025-07-31
LT4192829T (lt) 2025-06-25
ZA202301228B (en) 2025-05-28
PE20231377A1 (es) 2023-09-07
CL2023000375A1 (es) 2023-09-29
US20220041621A1 (en) 2022-02-10
CR20230120A (es) 2023-09-01
DK4192829T3 (da) 2025-06-02
PH12023550238A1 (en) 2024-04-29
KR20230066348A (ko) 2023-05-15
ECSP23015370A (es) 2023-05-31
EP4192829A1 (en) 2023-06-14
SMT202500214T1 (it) 2025-07-22
AU2021322301A1 (en) 2023-04-06
US20250179091A1 (en) 2025-06-05
PL4192829T3 (pl) 2025-08-25
IL300224A (en) 2023-03-01
ES3032183T3 (en) 2025-07-16
SI4192829T1 (sl) 2025-07-31
CN116171154A (zh) 2023-05-26
HUE071975T2 (hu) 2025-10-28
FI4192829T3 (fi) 2025-06-25
JP2023537484A (ja) 2023-09-01
DOP2023000024A (es) 2023-06-30
HRP20250694T1 (hr) 2025-08-15
CA3190583A1 (en) 2022-02-10
PT4192829T (pt) 2025-06-17
US12269831B2 (en) 2025-04-08
GEP20257825B (en) 2025-11-10
WO2022032068A1 (en) 2022-02-10
BR112023002210A2 (pt) 2023-05-02
AU2021322301A8 (en) 2023-04-13
MA60597B1 (fr) 2025-06-30
EP4192829B1 (en) 2025-05-07
UY39374A (es) 2022-02-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP4192829B1 (en) Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
CN116601158B (zh) 囊性纤维化跨膜传导调控因子的调节剂
EP4247817A1 (en) Macrocycles containing a 1,3,4-oxadiazole ring for use as modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
TW202233635A (zh) 囊腫纖維化跨膜傳導調節蛋白之調節劑
TW202229296A (zh) 囊腫纖維化跨膜傳導調節蛋白之調節劑
TWI908847B (zh) 囊腫纖維化跨膜傳導調節蛋白之調節劑
EP4525986A1 (en) Solid forms of a macrocyclic compounds as cftr modulators and their preparation
HK40093614A (en) Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
HK40093614B (en) Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
TWI912411B (zh) 囊腫纖維化跨膜傳導調節蛋白之調節劑
OA21166A (en) Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator.
EA049659B1 (ru) Модуляторы регулятора трансмембранной проводимости при муковисцидозе
US12324802B2 (en) Modulators of cystic fibrosis transmembrane conductance regulator
EA049998B1 (ru) Макроциклы, содержащие 1,3,4-оксадиазольное кольцо для применения в качестве модуляторов регулятора трансмембранной проводимости при муковисцидозе
OA21688A (en) Macrocycles Containing A 1, 3, 4Oxadiazole Ring For Use As Modulators Of Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator.