MD1067Z - Metodă de modelare a leziunilor de tip pemfigus - Google Patents

Metodă de modelare a leziunilor de tip pemfigus Download PDF

Info

Publication number
MD1067Z
MD1067Z MDS20160016A MDS20160016A MD1067Z MD 1067 Z MD1067 Z MD 1067Z MD S20160016 A MDS20160016 A MD S20160016A MD S20160016 A MDS20160016 A MD S20160016A MD 1067 Z MD1067 Z MD 1067Z
Authority
MD
Moldova
Prior art keywords
mucosa
lyophilized
centrifuged
phosphate buffer
pemphigus
Prior art date
Application number
MDS20160016A
Other languages
English (en)
Russian (ru)
Inventor
Ольга МАКАГОНОВА
Виорел НАКУ
Георге МУШЕТ
Адриан КОЧУГ
Марианна ЖИАН
Виталие КОБЗАК
Original Assignee
ОП ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ им. НИКОЛАЯ ТЕСТЕМИЦАНУ РЕСПУБЛИКИ МОЛДОВА
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ОП ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ им. НИКОЛАЯ ТЕСТЕМИЦАНУ РЕСПУБЛИКИ МОЛДОВА filed Critical ОП ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ им. НИКОЛАЯ ТЕСТЕМИЦАНУ РЕСПУБЛИКИ МОЛДОВА
Priority to MDS20160016A priority Critical patent/MD1067Z/ro
Publication of MD1067Y publication Critical patent/MD1067Y/ro
Publication of MD1067Z publication Critical patent/MD1067Z/ro

Links

Landscapes

  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Invenţia se referă la medicina experimentală, în special la o metodă de modelare a unei maladii autoimune cutanate, cum este pemfigusul cu scop de studiere a patogenezei maladiei şi de elaborare a noilor metode de tratament.Esenţa invenţiei constă în separarea mucoasei de pe esofagul de bovină, fărâmiţarea şi omogenizarea mucoasei de trei ori în soluţie tampon fosfat cu pH=7 în raport de 1:2, la temperatura de 4°C, apoi omogenizatul se centrifughează, sedimentul se spală de trei ori cu soluţie tampon fosfat, se liofilizează şi este supus extragerii în alcool etilic de 70% cu adăugarea a câte 5 ml de alcool la fiecare gram de masă uscată, se agită timp de 60 min şi se centrifughează, extractul alcoolic se decantează şi se supune dializei timp de 8 ore, apoi se liofilizează, după care se amestecă în volume egale extract proteic, glicerină sterilă şi soluţie uleioasă de vitamine, care conţine la 1 ml: A - 50000 UI, D3 - 25000 UI, E - 20 mg, F - 5 mg, ulterior amestecul se administrează la şobolani câte 0,1 ml intradermal în diferite locuri, odată la două săptămâni, procedura fiind repetată de 12 ori.

Description

Invenţia se referă la medicina experimentală, în special la o metodă de modelare a unei maladii autoimune cutanate, cum este pemfigusul cu scop de studiere a patogenezei maladiei şi de elaborare a noilor metode de tratament.
Sunt cunoscute metode de modelare a diferitor maladii la animale de laborator (experimentale), conform patologiei clinice apropiate afecţiunii analogice omului. Aceste metode ajută cercetătorilor de a studia evoluţia maladiei concrete şi de a aborda metode noi de tratament. Este cunoscută metoda de producere experimentală a anticorpilor de tipul pemfigusului şi a leziuniiilor de tipul bulos la iepuri prin inocularea fracţiei 5 a extractului etanolic de proteine din mucoasa de bovină în concentraţie 10 mg/ml, emulsionat în volum egal cu adjuvantul Freund. Aproximativ 1,5 ml de emulsie au fost injectate intradermal la fiecare animal în pielea spatelui, utilizând 10…12 locuri pentru inoculare. Douăsprezece injectări au fost efectuate câte una la interval de 14 zile în perioada de aproximativ 8 luni [1].
Dezavantajele acestei metode constau în aceea că introducerea adjuvantului Freund care conţine micobacterii de tuberculoză suspendate în faza uleioasă a emulsiei apoase se caracterizează prin toxicitate şi alergenicitate înaltă, producerea leziunilor numai în locurile de injectare a amestecului, fără generalizarea manifestărilor, caracteristice pentru maladiile autoimune cutanate şi costul înalt al adjuvantului Freund.
Problema pe care o soluţionează invenţia constă în elaborarea unei metode de modelare a leziunilor autoimune cutanate de tipul pemfigusului la animale de laborator, după caracteristicile clinice, morfologice şi imunologice apropiate de leziunile analogice la oameni.
Esenţa invenţiei constă în separarea mucoasei de pe esofagul de bovină, fărâmiţarea şi omogenizarea mucoasei de trei ori în soluţie tampon fosfat cu pH=7 în raport de 1:2, la temperatura de 4°C, apoi omogenizatul se centrifughează, sedimentul se spală de trei ori cu soluţie tampon fosfat, se liofilizează şi este supus extragerii în alcool etilic de 70% cu adăugarea a câte 5 ml de alcool la fiecare gram de masă uscată, se agită timp de 60 min şi se centrifughează, extractul alcoolic se decantează şi se supune dializei timp de 8 ore, apoi se liofilizează, după care se amestecă în volume egale extract proteic, glicerină sterilă şi soluţie uleioasă de vitamine, care conţine la 1 ml: A - 50000 UI, D3 - 25000 UI, E - 20 mg, F - 5 mg, ulterior amestecul se administrează la şobolani câte 0,1 ml intradermal în diferite locuri, odată la două săptămâni, procedura fiind repetată de 12 ori.
Avantajele acestei metode constau în faptul că condiţiile şi parametrii invenţiei propuse sunt necesare pentru rezolvarea sarcinii studiului, în special formarea procesului autoimun cu manifestările caracteristice generalizate. Astfel la utilizarea glicerinei - componentul natural conţinut în ţesuturile animalelor, fiind sursă de lipide şi uleiuri, este ca vector de transport prin membranele celulare, emulsionează antigenul cu soluţia de vitamine, condiţionează absorbţia lui pe suprafaţa membranei şi îl menţine un timp îndelungat în organism, ceea ce creşte durata efectului său asupra sistemului imunitar, servind ca imunopotenţiator în amplificarea efectului imun al antigenului introdus intradermal.
Studiile acţiunii vitaminelor la formarea anticorpilor au arătat rolul lor în stimularea limfocitelor T-helper şi răspunsului imun T-dependent. În afara de aceasta, vitamina E, inactivând radicalii liberi, inhibă expresia genelor antiinflamatoare a citochinelor: IL-1, IL-6, IL-8 şi receptorilor pentru citochine. La studierea acţiunii vitaminei A asupra organismului s-a observat rolul ei favorabil în stimularea celulelor formatoare de anticorpi, în special a fagocitelor din splină şi inhibarea proceselor de atrofie a timusului (A.B. Кудрин, A.B. Скальный, А.A Жаворонков и др. Имунофармакология микроэлементов. 2000).
Rezultatul constă în amplificarea şi prelungirea efectului imun al antigenului, lipsa toxicităţii, disponibiltatea preparatelor chimico-farmaceutice utilizate, simplitatea preparării amestecului şi simplitatea metodei.
Metoda se efectuează în modul următor.
În calitate de animale de laborator s-au folosit şobolanii Winstar cu masa de 230…350 g (n=15). Esofagele folosite ca sursă pentru prepararea extractului proteic în studiul dat au fost obţinute de la bovine (n=3). Esofagul bovin nefixat a fost înlăturat imediat după sacrificarea animalului în abator. Mucoasa a fost separată de adventiţia supradiacentă, incluzând ţesut conjunctiv şi vase, cu ajutorul foarfecelor şi bisturiului. Examenul histologic a confirmat lipsa ţesutului conjunctiv la 50% din totalul materialului necesar pentru extragerea antigenelor.
Mucoasa a fost tăiată în bucăţi mici şi omogenizată în fărâmiţătorul de ţesuturi (KlKA® WERKE, GMBH &CO.KG) cu soluţie tampon fosfat salină cu pH=7,0 în proporţie de 1:2. Omogenizarea a fost repetată de trei ori. Toate etapele ulterioare s-au efectuat la temperatura de 4°C. Omogenizatul obţinut a fost centrifugat la 4000 rot./min, timp de 60 min. După aceasta sedimentul a fost spălat de trei ori în soluţie tampon fosfat salină (PBS-0,115M NaCl, 0,001M Na2HPO4, şi 0,00ЗМ КН2PO4, рН 7,0), liofilizat şi supus extragerii prin adăugarea ulterioară a 5 ml de alcool etilic de 70% la fiecare gram de masă uscată obţinută. Amestecul obţinut a fost supus agitării într-un agitator magnetic (MS 3000, BIOSAN), timp de 60 min şi centrifugat la 4000 rot./mim, timp de 60 min. În supernatantul rezultat prin examenul cu spectrofotometrul şi metoda Lowry a fost evaluata concentraţia proteică.
Extractul etanolic a fost decantat şi dializat prin membrana de dializă (Sigma, flat width 35 mm, MWCO 12,000 Da =25EA) contra apei distilate timp de 8 ore. Precipitatul format la dializă a fost definit drept fracţia 5 a extractului etanolic de proteine din mucoasa de bovină (BEM-F5). Dializatul obţinut a fost liofilizat.
Bazându-ne pe studiile efectuate de C.А.Староверов şi alţi coautori cu privire la efectul vitaminelor asupra celulelor formatoare de anticorpi, rolul lor în stimularea limfocitelor T-helperi şi răspunsul imun T-dependent pentru obţinerea substratului imunogenic, extractul proteic solubil a fost emulsionat cu glicerină sterilă (HIMEDIA Laboratories Pvt. Ltd. Company, certified for ISO 9001:2006, LOT 000020994, data producerii 2015, termen de valabilitate 3 ani) şi un volum egal de vitamine (soluţie sterilă de Tetravit, preparat complex cu conţinut de vitamine la 1 cm3 soluţie: A- 50000 ME; D3 -25000 ME; E - 20 mg şi F - 5 mg, №: ПВР-2 - 4.0100453 din 15.03.2008, OCT 12.1.007-76, NITA-FARM (Rusia), data producerii 2015, termen de valabilitate 2 ani).
Amestecul pregătit proaspăt în doză de 0,1 ml a fost injectat intradermal şobolanilor în diferite locuri ale pielii spatelui, o dată la fiecare două săptămâni. Şobolanii au fost injectaţi de 12 ori conform protocolului.
Exemplu
În calitate de obiect de studiu au servit 15 şobolani linia Wistar de culoare aibă, cu vârsta cuprinsă între 4…6 luni şi masa de 230…350 g. Inocularea zonelor epidermale la şobolani a marcat apariţia leziunilor neregulate de aspect bulos-eroziv cu diametrul de aproximativ 0,5 cm. Numărul leziunilor a variat între 2…3 în diferite zone ale corpului, preponderent în locurile injectărilor efectuate. În comparaţie cu aceasta, leziuni cutanate nu au fost observate la grupul de control. În acest grup, 15 animale au fost injectate numai cu soluţie fiziologică. Absenţa afecţiunilor cutanate comparativ cu animalele inoculate cu extractul etanolic obţinut din mucoasa de bovină a fost documentată prin studii histologice ale bioptatelor pielii obţinute de la grupul experimental.
Metoda propusă asigură o modelare a leziunilor de tipul pemfigusului mai efectivă, lejeră şi operativă, cu mult mai calitativă prin utilizarea glicerinei şi a soluţiei de vitamine decât adjuvanţii şi poate fi utilizată ca model experimental în elaborarea noilor metode de tratament.
Metoda dată a fost efectuată în cadrul laboratorului de Inginerie Tisulară şi Culturi Celulare.
1. ABLIN R.J., PH.D. Immunopathologic studies of experimental pemphigus-like autoantibodies and bullous-like lesions. J. of Investigative Dermatology, 1968, vol. 53, Nr.6, p. 463-469

Claims (1)

  1. Metodă de modelare a leziunilor de tip pemfigus, care constă în separarea mucoasei de pe esofag de bovină, fărâmiţarea şi omogenizarea mucoasei de trei ori în soluţie tampon fosfat cu pH=7 în raport de 1:2, la temperatura de 4°C, apoi omogenizatul se centrifughează, sedimentul se spală de trei ori cu soluţie tampon fosfat, se liofilizează şi este supus extragerii în alcool etilic de 70% cu adăugarea a câte 5 ml de alcool la fiecare gram de masă uscată, se agită timp de 60 min şi se centrifughează, extractul alcoolic se decantează şi se supune dializei timp de 8 ore, apoi se liofilizează, după care se amestecă în volume egale extract proteic, glicerină sterilă şi soluţie uleioasă de vitamine, care conţine la 1 ml: A - 50000 UI, D3 - 25000 UI, E - 20 mg, F - 5 mg, ulterior amestecul se administrează la şobolani câte 0,1ml intradermal în diferite locuri, odată la două săptămâni, procedura fiind repetată de 12 ori.
MDS20160016A 2016-02-11 2016-02-11 Metodă de modelare a leziunilor de tip pemfigus MD1067Z (ro)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MDS20160016A MD1067Z (ro) 2016-02-11 2016-02-11 Metodă de modelare a leziunilor de tip pemfigus

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MDS20160016A MD1067Z (ro) 2016-02-11 2016-02-11 Metodă de modelare a leziunilor de tip pemfigus

Publications (2)

Publication Number Publication Date
MD1067Y MD1067Y (ro) 2016-08-31
MD1067Z true MD1067Z (ro) 2017-03-31

Family

ID=56855226

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MDS20160016A MD1067Z (ro) 2016-02-11 2016-02-11 Metodă de modelare a leziunilor de tip pemfigus

Country Status (1)

Country Link
MD (1) MD1067Z (ro)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2316033C1 (ru) * 2006-06-05 2008-01-27 Владимир Васильевич Маркин Способ изготовления голографического проекционного экрана для демонстрации трехмерных цветных изображений
RU2316005C1 (ru) * 2006-09-07 2008-01-27 Государственное учреждение Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского (МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского) Способ оценки эффективности лечения пузырчатки
RU2316006C1 (ru) * 2006-09-07 2008-01-27 Государственное учреждение Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского (МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского) Способ оценки характера течения пузырчатки
RU2429482C1 (ru) * 2010-06-03 2011-09-20 Государственное учреждение Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского (ГУ МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского) Способ прогнозирования характера течения аутоиммунной пузырчатки
RU2473911C1 (ru) * 2011-05-16 2013-01-27 Николай Львович Шимановский Способ выявления стероидной резистентности у больных истинной акантолитической пузырчаткой на основании исследования системы вторичных мессенджеров

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2316033C1 (ru) * 2006-06-05 2008-01-27 Владимир Васильевич Маркин Способ изготовления голографического проекционного экрана для демонстрации трехмерных цветных изображений
RU2316005C1 (ru) * 2006-09-07 2008-01-27 Государственное учреждение Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского (МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского) Способ оценки эффективности лечения пузырчатки
RU2316006C1 (ru) * 2006-09-07 2008-01-27 Государственное учреждение Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского (МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского) Способ оценки характера течения пузырчатки
RU2429482C1 (ru) * 2010-06-03 2011-09-20 Государственное учреждение Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского (ГУ МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского) Способ прогнозирования характера течения аутоиммунной пузырчатки
RU2473911C1 (ru) * 2011-05-16 2013-01-27 Николай Львович Шимановский Способ выявления стероидной резистентности у больных истинной акантолитической пузырчаткой на основании исследования системы вторичных мессенджеров

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ABLIN R.J., PH.D. Immunopathologic studies of experimental pemphigus-like autoantibodies and bullous-like lesions. J. of Investigative Dermatology, 1968, vol. 53, Nr.6, p. 463-469 *

Also Published As

Publication number Publication date
MD1067Y (ro) 2016-08-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2007305076B2 (en) Immune modulators, preparations and compositions including immune modulators, tests for evaluating the activity of immune modulators and preparations and compositions including the same, and methods
CN105198988B (zh) 抗灿烂弧菌卵黄抗体及其制备方法
JP2013543519A (ja) 腫瘍組織に由来するナノベシクル、及びこれを用いた癌ワクチン
RU2156621C1 (ru) Нейротропное лекарственное средство
KR20080048536A (ko) 생물활성물질을 포함하는 토끼 피부 및 그의 용도
CN103316045B (zh) 一种畜禽用多联特异性转移因子及制备方法
Olivier The use of allergoids and adjuvants in allergen immunotherapy
CN101703771B (zh) 一种水包油型复方疫苗佐剂及其制备方法
Er et al. Effects of Tarantula cubensis alcoholic extract and Nerium oleander distillate on experimentally induced colon cancer
CN109336987A (zh) 一种羊肚菌和牛肝菌复方粗多糖及制备方法和医用用途
RU2493873C1 (ru) Инъекционный препарат для повышения спермопродукции у производителей сельскохозяйственных животных и петухов и способ его применения
TWI614020B (zh) 包含固態培養牛樟芝菌絲體及子實體水及乙醇萃取物之組成物及其作為保健食品之應用
CN104306399A (zh) 一种鹿脾提取物提取方法及在提高免疫力药物中的应用
CN109134613A (zh) 一种促进疫苗免疫反应的法氏囊七肽及其应用
CN102764435B (zh) 一种猪用亚洲i型口蹄疫病毒灭活疫苗佐剂及制备方法
MD1067Z (ro) Metodă de modelare a leziunilor de tip pemfigus
CN111569059B (zh) 一种禽类用抗原-抗体复相疫苗及制备方法
WO2002098437A1 (en) Korean acanthopanax senticosus extract, protein extract, crude protein-polysaccharide which were extracted from korean acanthopanax senticosus, and immunoregulating compositions comprising the same and use thereof
JP2019527191A (ja) 免疫増強剤、口蹄疫不活化ワクチンおよびその製造方法
CN105497889A (zh) 一种鸡新城疫、禽流感二联复合灭活疫苗的制备方法
CN120857942A (zh) 疫苗佐剂及其制备方法、应用
US20200222531A1 (en) Methods of populating precipitated particles of a modified or synthesized substance in a tissue
RU2348427C2 (ru) Адъювантная композиция для инъекционных вакцин против тканевых гельминтозов
RU2222337C1 (ru) Способ получения иммуностимулятора
Verma et al. Exploring the medicinal and ecological significance of earthworms: A comprehensive review of their antimicrobial properties and traditional uses

Legal Events

Date Code Title Description
FG9Y Short term patent issued
KA4Y Short-term patent lapsed due to non-payment of fees (with right of restoration)