TWI614020B - 包含固態培養牛樟芝菌絲體及子實體水及乙醇萃取物之組成物及其作為保健食品之應用 - Google Patents

Abstract

本發明係關於一種包含固態培養牛樟芝菌絲體及子實體水及乙醇萃取物之組成物，及其作為保健食品之應用。本發明之牛樟芝組成物特徵在於，包含50%至99%重量百分比(W/W)之牛樟芝菌絲體及1%至50%之重量百分比(W/W)之牛樟芝子實體水及乙醇萃取物。本發明之牛樟芝組成物經證實據有護肝、抗發炎及免疫調節的功效，可應用於製備保健食品。

Description

包含固態培養牛樟芝菌絲體及子實體水及乙醇萃取物之組成物及其作為保 健食品之應用

本發明係關於一種具有護肝、抗發炎及免疫調節作用之牛樟芝菌絲體固態培養物及子實體水及乙醇萃取物的組成物。更特別地，本發明係關於一種由牛樟芝菌絲體固態培養物與子實體水及乙醇萃取物所組成的組成物，及其用於製備保健食品之應用。

牛樟芝(Antrodia cinnamomea)為台灣特有種真菌，僅生長於台灣特有之牛樟樹(Cinnamomum kanehirae Hayata)。民間認為牛樟芝具有解毒、抗癌及止癢作用，為一本土性非常具有經濟效益的保健食品材料(王等人，2002)。牛樟芝具有許多的生理活性成分，包括多醣體(polysaccharides)、三萜類(triterpenoids)、超氧岐化酶(superoxide dismutase,SOD)、腺苷(adenosine)、蛋白質、維生素、微量元素、核酸、凝集素、胺基酸、固醇類、木質素等(黃，2000；Chang et al.,2001)。

研究指出，牛樟芝子實體及菌絲體萃取物可能具有清除自由基及抗氧化能力、降低酒精所誘發之急性肝損傷、保護四氯化碳誘發之急慢性肝損傷、增強免疫力，以及抑制腫瘤細胞生長等功能。牛樟芝目前的量產方法包括「液態發酵」、「固態培養」及「段木栽培」，而前兩者所得 之產物為「菌絲體」，段木栽培所得之產物為「子實體」，兩者在成份組成及含量上會有不同。

本發明以50%至99%(W/W)之牛樟芝菌絲體固態培養物與1%至50%(W/W)之牛樟芝子實體水及乙醇萃取物組合製成一種牛樟芝活性組成物，將所得之組成物進行HPLC成份分析，並利用細胞及免疫學方法評估該牛樟芝活性組成物之免疫調節功效，及於四氯化碳誘導的肝損傷模式下測試其護肝的保健功效。

本發明基於以上之目的發現，由50%至99%(W/W)之牛樟芝菌絲體固態培養物與1%至50%(W/W)之牛樟芝子實體水及乙醇萃取物所組成的牛樟芝活性組成物，可透過(1)活化免疫T細胞、自然殺手細胞、吞噬細胞之能力；(2)增加IL-2、INF-γ與降低IL-4等細胞激素(cytokine)之分泌；及(3)增加血清抗體免疫球蛋白IgG、OVA-IgG2a與減緩OVA-IgE之分泌等來進行免疫調節；並且可改善四氯化碳引發肝損傷情形、降低肝門脈週邊發炎、減少肝臟細胞壞死及改善肝纖維化的情形，達到護肝功效。

於是，本發明之一方面係關於，一種牛樟芝活性組成物，其係由50%至99%(W/W)之固態培養牛樟芝菌絲體粉末與1%至50%(W/W)之牛樟芝子實體水及乙醇萃取物所組成。

於本發明之一些具體實施態樣，所述之牛樟芝菌絲體係以可食用五穀雜糧進行固態培養，待採收後再經乾燥、研磨製粉等加工程序製得。於本發明之一項具體實施態樣，所述之牛樟芝子實體水及乙醇萃取物係以50-95%酒精進行萃取而得。

於本發明之其他具體實施態樣，所述之牛樟芝活性組成物每公克包含活性成份：4,7-二甲氧基-5-甲基-1,3-苯并二噁茂(2.9mg~17mg)、4-羥基-2,3-二甲氧基-6-甲基-5-[3,7,11-三甲基-2,6,10-十二碳三烯]-2-環己烯酮(0.35mg~21mg)、輔酶Q3(0.23mg~10mg)、樟黃素C(0.24mg~9mg)、樟菇酸B(0.09mg~5mg)、樟菇酸H(0.25mg~13mg)、樟菇酸K(0.15mg~8mg)、樟菇酸A(0.005mg~2mg)、樟菇酸C(0.03mg~2mg)、去氫硫色多孔菌酸(0.14mg~11mg)及去氫齒孔菌酸(0.15mg~15mg)。

本發明之另一方面，係關於一種保健食品組成物，包含本發明所述之由牛樟芝菌絲體固態培養物與牛樟芝子實體水及乙醇萃取物所組成的牛樟芝活性組成物。

於本發明之一些具體實施態樣，所述之牛樟芝活性組成物具有特異性免疫調節功效。於本發明之其他具體實施態樣，所述之牛樟芝活性組成物具有非特異性免疫調節功效。於本發明之一具體實施態樣，所述之免疫調節功效係經由活化免疫T細胞、自然殺手細胞與吞噬細胞之能力來達成。於本發明之另一具體實施態樣，所述之免疫調節功效係經由增加細胞激素(cytokine)IL-2、INF-γ及降低IL-4之分泌來達成。於本發明之又一具體實施態樣，所述之免疫調節功效係經由增加血清抗體免疫球蛋白IgG、OVA-IgG2a及減緩OVA-IgE之分泌來達成。

於本發明之另一些具體實施態樣，所述之牛樟芝活性組成物具有護肝功效。於本發明之一具體實施態樣，所述之護肝功效包含降低血清中丙胺酸轉胺酶(alanine aminotransferase,ALT)和天門冬胺酸轉胺酶(aspartate aminotransferase,AST)之升高趨勢，提高肝臟中抗氧化酵素GPx(榖 胱甘肽過氧化酶)、GRd(榖胱甘肽還原酶)及CAT(過氧化氫分解酶)之活性。於本發明之另一具體實施態樣，所述之護肝功效包含改善肝臟門脈週邊發炎(空泡)、肝臟細胞壞死及肝纖維化等發炎狀況。

圖1為本發明牛樟芝活性組成物之一較佳具體實例之HPLC成分分析結果。

本發明之其他特色及優點將於下列實施範例中被進一步舉例與說明，而該實施範例僅作為輔助說明，並非用於限制本發明之範圍。

實施例一、牛樟芝組成物之製備及成分分析

本發明之牛樟芝活性組成物係由50%至99%(W/W)之牛樟芝菌絲體以及1%至50%(W/W)牛樟芝子實體水及乙醇萃取物所組成。其中，牛樟芝菌絲體固態培養物係以可食用五穀雜糧進行固態培養(接種比率5-15%(v/w))，經18~30℃培養3~5個月後，採收後再加工製得牛樟芝菌絲體粉末；牛樟芝子實體萃取物則係以下列方式獲得：自經植菌之牛樟段木採收子實體，將所採收之子實體於40~50℃下進行烘乾，再將經過烘乾之子實體以水(50~100℃)以及乙醇(35~50℃)依1：8~1：12(W/V)比例分別進行萃取1~10小時，重覆萃取一至二次，萃液濃縮後備用。

將分別製得之牛樟芝菌絲體固態培養物粉末與牛樟芝子實體水及乙醇萃取物，以99：1至1：1之比例組合。組合例一為：80克牛樟芝菌絲體固態培養物粉末混合20克牛樟芝子實體水及乙醇萃取物。組合例二為：90克牛樟芝菌絲體固態培養物粉末混合10克牛樟芝子實體水及乙醇萃取物。

進一步利用HPLC分析本發明組合物之主要組成物質及含量，分析條件如下述：

1. 移動相(Mobil phase)

2. 管柱：Inertsil 5 ODS-2(5μm,4.6mm x 250mm)

3. 流速：1.0mL/min.

4. UV偵測：254nm

5. 注射體積：20μL(10mg/mL)

結果如圖1所示。HPLC指紋圖譜顯示，本發明之牛樟芝活性組成物包含活性成分：4,7-二甲氧基-5-甲基-1,3-苯并二噁茂、4-羥基-2,3-二甲氧基-6-甲基-5-[3,7,11-三甲基-2,6,10-十二碳三烯]-2-環己烯酮、樟黃素C(antrodin C)、樟菇酸B(antcin B)、樟菇酸H(antcin H)、樟菇酸K(antcin K)、輔酶Q3、去氫硫色多孔菌酸(dehydrosulphurenic acid)及去氫齒孔菌酸(dehydroeburicoic acid)。接著進行檢量線的製作，定量各主要活性成分之含量。以去氫齒孔菌酸為例，取去氫齒孔菌酸標準品分別配置5、50、500及 1000μg/ml之濃度，並以前述之條件進行HPLC之測定波鋒面積，依濃度及所得波鋒面積進行檢量線之製作。以此可得到，去氫齒孔菌酸之檢量線為Y=23734x+46955，R²=0.9996。

以相同的方式可得到其他成份之檢量線公式如下：去氫硫色多孔菌酸之檢量線：Y=22907x+74527，R²=0.9994；4,7-二甲氧基-5-甲基-1,3-苯并二噁茂之檢量線：Y=3284.8x+22578，R²=0.9995；樟菇酸A之檢量線：Y=19694x-72090，R²=0.9999；樟菇酸C之檢量線：Y=20451x+66887，R²=1；輔酶Q3之檢量線：Y=13540x-62858，R²=0.9999；樟菇酸K之檢量線：Y=17663x+28700，R²=0.9998；樟黃素C檢量線：Y=16725x-57686，R²=0.9999；樟菇酸H之檢量線：Y=12180x-28269，R²=0.9998；樟菇酸B之檢量線：Y=14703x+25359，R²=0.9996；及4-羥基-2,3-二甲氧基-6-甲基-5-[3,7,11-三甲基-2,6,10-十二碳三烯]-2-環己烯酮之檢量線：Y=19601x-10277，R²=0.9996。

依上述的檢量線進行待測物之測定：自待測物之相同的滯留時間(retention time)確認波鋒之位置及面積，帶入檢量線公式，以計算二個不同批次的混合樣品中活性成分之濃度(mg/g)。計算結果如下表1所示。

實施例二、牛樟芝活性組成物之特異性免疫調節功能評估

本實例主要探討本發明由固態培養牛樟芝菌絲體固態培養物及子實體水及乙醇萃取物組成之牛樟芝活性組成物的特異性免疫調節功效，連續餵食活性組成物後以卵蛋白(ovalbumin,OVA)對老鼠進行腹腔注射。老鼠餵食前，先採血以作實驗基準值。餵食4週後，第一次注射OVA致敏老鼠。每隻老鼠注射6.25μg OVA及CFA(Complete Freunds Adjuvant)，兩週後第二次注射OVA及IFA(Incomplete Freunds Adjuvant)為追加致敏。本試驗所使用受試動物為8週齡BALB/c雌性小鼠，共分為6組，分別為：陰性對照組(滅菌水)、低劑量組(172.2mg/kg)、中劑量組(344.4mg/kg)、高劑量組(861.0mg/kg)、陽性對照組(市售具免疫調節功能之健康食品，633.5mg/kg)及正常組。試驗動物以連續管餵活性組成物8週，於試驗結束後犧牲小鼠，採取檢體進行免疫功能評估分析，包括測定免疫細胞增生、免疫細胞激素分泌、免疫細胞種類及血清抗體濃度等，藉此了解本發明之牛樟芝活性組成物是否具有調節特異性免疫反應之功效。

對於細胞增殖試驗，取出實驗動物脾臟，將脾臟置於細鐵網上研磨，直至成為單一細胞懸浮液。將細胞數定量為1×107cells/well，分別加入伴刀豆球蛋白A(Con A)、脂多醣(LPS)及OVA。於37℃,CO₂培養箱作用72小時，於第72小時加入反應試劑(CellTiter 96^®AQueousOne Solution Cell Proliferation Assay)，利用OD490nm測定吸光值。數據之表示方法為平均值±S.D.(n=10)。

如表2所示，脾臟免疫細胞在Con A、LPS及OVA刺激下，各試驗組及正對照組相較於負對照組有增生的傾向，尤其是中劑量及高劑量組，與負對照組相比有顯著之增生效果(p<0.05)。

利用CellTiter 96^® AQueous One Solution Reagent測定免疫細胞增生能力，相異上標字母表示組間統計有顯著差異(p<0.05)S.I.(stimulation index)=脾臟細胞刺激後的吸光值/脾臟細胞無裂殖原刺激負對照組的吸光值

對於細胞激素分析，取脾臟細胞定量5×105cells/well後，分別加入到24孔平底細胞培養盤中，再加入細胞裂殖素(Con A、LPS)於CO₂培養箱中培養48-72小時。將所有細胞培養液取出移入新的1.5mL微量離心管，離心(250×g，於4 C離心10分鐘)後，取出上清液。以ELISA cytokine assay kit偵測脾臟細胞分泌IL-2(介白素-2)、IL-4(介白素-4)、TNF-α(腫瘤壞死因子-α)、IFN-γ(干擾素-γ)及IL-5(介白素-5)的情形。

如表3所示，在自發性IL-2分泌表現上(未加入細胞裂殖素)，各試驗組與負對照組相比並沒有明顯差異。在Con A及LPS誘導下，相對於未添加細胞裂殖素作用下的結果，各試驗組的IL-2量皆有明顯上升。而活性組成物各劑量組之IL-2分泌相較於負對照組皆有增加之傾向，而高劑量組與負對照組相比具有顯著性差異(p<0.05)。而在OVA刺激作用下，各活性組成物組相較於負對照組並無顯著促進IL-2分泌之功效。

高劑量組及正對照組之IL-4分泌與負對照組相比明顯的減少(p<0.05)；在LPS及OVA的刺激下，各試驗組及正對照組之IL-4分泌相較於負對照組皆具顯著性減少效果(p<0.05)。在OVA刺激作用下，活性組成物中、高劑量組及正對照組相較於負對照組有顯著減緩IL-5分泌之功效(p<0.05)。所示，在LPS及OVA的刺激下，活性組成物高劑量組之TNF-分泌與負對照組相比皆有顯著減少(p<0.05)。而在Con A刺激下，各劑量組相較於負對照組之TNF-α分泌則無顯著改變。以Con A、LPS及OVA刺激後，相對於未添加細胞裂殖素作用下的結果，各試驗組的IFN-γ量皆有明顯上升。而各劑量組及正對照組之IFN-γ分泌相較於負對照組皆有增加的趨勢，但在統計上並無顯著性的差異。

在血清抗體方面，活性組成物各劑量組的血清抗體Anti-OVA IgG2a含量相較於負對照組出現顯著性上升。而活性組成物各劑量組的血清中抗體Anti-OVA IgE含量與負對照組亦有顯著下降的情形。綜合上述結果可得，本發明之牛樟芝活性組成物具有調節特異性免疫功能之成效。

實施例三、牛樟芝活性組成物之非-特異性免疫調節功能評估

本實施例係藉由觀察免疫細胞增生、免疫細胞細胞激素分泌、自然殺手細胞活性、吞噬細胞活性、免疫細胞種類及血清抗體濃度等指標，以評估本發明之牛樟芝活性組成物是否具有非特異性免疫調節功能。

實驗動物為8週齡雌性BALB/c小鼠，馴化1週，每組實驗動物隻數為10隻。動物於試驗開始第一天，經口管餵食試驗物質(陰性對照組為滅菌水、低劑量組(172.2mg/kg)、中劑量組(344.4mg/kg)、高劑量組(861.0mg/kg)、陽性對照組為市售具免疫調節功能之健康食品，633.5mg/kg)連續進行6週，每週的第一天測量體重並調整當週管餵劑量。

對於細胞增殖試驗，在連續餵食6週後，取出試驗動物之脾臟細胞，將細胞數定量為2.0×10⁷個細胞/孔，分別加入伴刀豆球蛋白A(Con A)或脂多醣(LPS)，於37℃,CO₂培養箱作用72小時，於第72小時加入反應試劑(CellTiter 96^®AQueous One Solution Cell Proliferation Assay)，利用OD490nm測定吸光值。如表4所示，免疫細胞在Con A及LPS刺激下，低劑量及中劑量組相較於負對照組雖有增加之傾向，但無統計差異；而高劑量組及正對照組與負對照組相比其脾臟免疫細胞有明顯增加(p<0.05)。

對於自然殺手細胞活性之影響評估，係於餵食試驗物質連續6週後，取脾臟細胞(含自然殺手細胞)，以PKH67 Kit標定之YAC-1細胞株作為標的細胞(target cell)，依一定比例混合作用，在37℃,CO2培養箱培養4小時，以流式細胞儀進行分析，測試自然殺手細胞之毒殺能力。如表5所示，在E/T ratio為5、10及25之混合比例下，活性組成物低、中、高劑量組及正對照組之自然殺手細胞活性相較於負對照組均具有明顯差異(p<0.05)。

另外，餵食試驗物質連續6週後，取出試驗動物之腹腔吞噬 細胞，使其與已標示螢光之E.coli，在37℃下一起進行作用2小時，作用完畢之後利用流式細胞儀分析其吞噬活性。如表6所示，活性組成物低劑量組之吞噬細胞活性與負對照組相比皆有增加趨勢，而活性組成物中、高劑量組及正對照組之吞噬細胞活性相較於負對照組具有顯著性增加(p<0.05)。

綜合上述之試驗結果發現，此牛樟芝菌絲體與子實體之組成物具有促進自然殺手細胞及吞噬細胞之活性。於進行細胞激素分析後，發現在細胞裂殖素刺激作用下，也可增加免疫細胞細胞激素IL-2及IFN-γ之分泌含量，各劑量組之IL-5及TNF-α分泌與負對照組相比有明顯的減少(p<0.05)。活性組成物低劑量組之IFN-γ分泌相較於負對照組有增加的趨勢，而活性組成物中及高劑量組及正對照組之IFN-γ分泌與負對照組具有顯著性增加(p<0.05)。另外，活性組成物劑量組的血清中抗體IgG含量相較於負對照組均出現顯著性上升。活性組成物劑量組的血清中抗體IgE含量與負對照組相較則有明顯的下降。顯示本發明之牛樟芝活性組成物具有調節非特異性免疫功能之成效。

實施例四、牛樟芝活性組成物之護肝功效評估

本試驗係依據根據衛生福利部公告「健康食品之護肝功能評估方法」，以四氯化碳(carbon tetrachloride；CCl₄)誘導化學性肝損傷實驗模式，進行慢性動物實驗，分析血清中丙胺酸轉胺酶(alanine aminotransferase；ALT)和天門冬胺酸轉胺酶(aspartate aminotransferase；AST)；進一步分析血液中三酸甘油酯(triglyceride,TG)與總膽固醇(total cholesterol,TC)的含量，肝臟中抗氧化酵素，並進行肝臟組織病理切片分析，評估活性組成物是否可改善脂肪變性及肝纖維化的作用。

使用Wistar大鼠(七週齡)育養適應一週後，給予連續九週每日管餵低劑量(87.5mg/kg bw/day)、中劑量(175mg/kg bw/day)、高劑量(437.5mg/kg bw/day)之牛樟芝活性組成物，分別為人體劑量的1倍、2倍、5倍，負控制組投予0.5% CMC。於第一週開始每週兩次管灌餵食20% CCl₄/橄欖油1.0ml/kg bw，於第八週結束時犧牲。四氯化碳給予第一、三、六週後，進行大鼠尾部靜脈採血，作為血液生化值ALT、AST、TG、TC測定；於第八週試驗結束後大鼠以心臟採血方式進行犧牲，並剖腹取肝臟等器官標本，秤重後將肝臟依解剖相關位置分成三份，分別檢測肝臟GSH含量與GPx、GRd、CAT、SOD等酵素活性。

血清轉胺酵素(serum aminotransferase)為評估肝功能損傷之重要指標，如AST及ALT，肝臟受損時，肝細胞內之AST、ALT會被釋放出流入血液中，使血清中AST、ALT上升，因此血清中AST、ALT為常用肝臟損傷之生化指標(Sturgill and Lambert,1997)。由於AST存在心臟、腎臟、骨骼肌及大腦等部位，而ALT絕大部分存在肝臟中，因此以ALT對肝臟較具有專一性。本實驗結果可觀察到，自第一週起，給予四氯化碳各組(負對照組、低劑量、中劑量及高劑量)之AST、ALT較正常對照組產生顯著性增 加，於第六至八週可發現中劑量及高劑量之牛樟芝活性組成物具有顯著之改善效果(p<0.05)。顯示長期給予四氯化碳會持續引發肝損傷，而給予牛樟芝活性組成物可改善四氯化碳引發肝損傷情形。而給予四氯化碳各組(負對照組、低劑量、中劑量及高劑量)血清中TG含量較正常對照組低，當中以負對照組最低，而低劑量、中劑量及高劑量之牛樟芝活性組成物組具有幫助其回復之功效。

長期給予四氯化碳會造成體內自由基含量之增加，而本實驗結果顯示，和負對照組相較下，給予中劑量或高劑量牛樟芝活性組成物在肝臟中之抗氧化酵素GPx、GRd、CAT及SOD皆顯著高於負對照組，顯示給予牛樟芝活性組成物顯著提高肝臟中抗氧化酵素之活性，可經由正向調節抗氧化酵素系統達到護肝效果。

對於組織病理學的觀察，為了觀察慢性肝損傷時，肝細胞的受損、脂肪變性、壞死、纖維化等變化，因此除了將肝組織做HE stain之外，還做肝纖維化之膠原經Sirius redstain(染色呈紅色)的特殊染色，以便評估肝纖維化程度。為了避免觀察上的偏差，所有的組織病理切片都是由最大右葉肝的同一位置切取下來，再去做病理染色進行病理的半定量分析。犧牲後所取得之肝臟組織標本修剪成細長條狀後浸泡於10%福馬林中，經由石蠟浸潤、包埋等處理後，以蘇木素伊紅染色(Hematoxylin and Eosin stain)及天狼星紅(Sirius red stain)進行進一步臟器之組織病理變化分析，包括肝細胞空泡化、門脈周邊發炎、肝纖維化等病理變化，為使病變評分客觀化，病理切片委託中興大學獸醫學院動物疾病診斷中心廖俊旺教授進行判讀。下表7為各組大鼠肝臟門脈週邊發炎(空泡)、肝臟細胞壞死及肝纖維化之評分結果及切片結果。

肝細胞空泡化及壞死之組織指標係根據Knodell et al.(1981)方法進行量化。肝損傷依下列程度分為0-4級：無損傷(0)；輕微(1)；輕度(2)；中度(3)；及明顯受損(4)。

肝纖維化之評分係根據Ruwart et al.(1989)的方法分為以下0-4級：無壞死(0)，正常肝臟；輕微(1)，膠原蛋白增加而未形成隔膜；輕度(2)，從門管區到中央血管形成不完整的隔膜(隔膜之間沒有互相連結)；中度(3)，彼此互相連結而成完整但薄的隔膜；及明顯纖維化(4)，具有厚的隔膜(完全肝硬化)。

在肝臟門脈週邊發炎之評估分數方面結果顯示，負對照組(3.4±0.5)顯著高於正常對照組(0)(p<0.05)，低劑量活性組成物組(2.4±0.8)無顯著改善效果，而中劑量及高劑量活性組成物組則顯著降低發炎程度(p<0.05)，且與正常對照組相較並無顯著差異。在肝臟細胞壞死之評估分數方面結果顯示，負對照組(2.3±0.5)顯著高於正常對照組(0)(p<0.05)，低劑量活 性組成物組(1.6±0.7)無顯著改善效果，而中劑量及高劑量活性組成物組則顯著降低肝臟細胞壞死程度(p<0.05)，且與正常對照組相較並無顯著差異。在肝臟肝纖維化之評估分數方面結果顯示，負對照組(3.0±0.9)顯著高於正常對照組(0)(p<0.05)；低劑量活性組成物組(1.8±0.4)無顯著改善效果，而中劑量(1.5±0.5)及高劑量活性組成物組(1.2±0.4)則顯著降低肝纖維化程度(p<0.05)。由此顯示，隨著試驗劑量的增加(由低劑量、中劑量至高劑量)，與負對照組比較則有降低肝纖維化之趨勢，且中劑量及高劑量更達到顯著性差異。可得知牛樟芝活性組成物對四氯化碳所誘導之肝損傷具有良好改善之情形。

綜合上述實驗結果，給予中劑量、高劑量牛樟芝活性組成物皆能有效降低肝損傷之情形，表示其對大鼠肝臟具有保護作用，可減輕四氯化碳對大鼠肝臟之傷害。本發明牛樟芝活性組成物對於改善大鼠動物模式中之四氯化碳所誘導肝損傷之劑量，應為175mg/kg體重/天(中劑量組)及437.5mg/kg體重/天(高劑量組)，且在試驗第八週時具有最顯著之肝臟保護效果，相對於人體約是每人每日攝取1680mg以上之牛樟芝活性組成物，持續攝取九週以上。

Claims (12)

1. 一種牛樟芝活性組成物，其係由50%至99%(W/W)之牛樟芝菌絲體固態培養物與1%至50%(W/W)之牛樟芝子實體水及乙醇萃取物所組成，且該組成物包含下列成份：4,7-二甲氧基-5-甲基-1,3-苯并二噁茂、4-羥基-2,3-二甲氧基-6-甲基-5-[3,7,11-三甲基-2,6,10-十二碳三烯]-2-環己烯酮、輔酶Q3、樟黃素C(antrodin C)、樟菇酸B(antcin B)、樟菇酸H(antcin H)、樟菇酸K(antcin K)、樟菇酸A、樟菇酸C、去氫硫色多孔菌酸(dehydrosulphurenic acid)及去氫齒孔菌酸(dehydroeburicoic acid)。
2. 如請求項1項所述之牛樟芝活性組成物，其中該牛樟芝子實體水及乙醇萃取物係將經乾燥之牛樟芝子實體以水(50~100℃)以及乙醇(35~50℃)依1：8~1：12(W/V)比例分別進行萃取1~10小時，重覆萃取一至二次而得。
3. 如請求項1項所述之牛樟芝活性組成物，其中該組成物每公克包含活性成份：4,7-二甲氧基-5-甲基-1,3-苯并二噁茂(2.9mg~17mg)、4-羥基-2,3-二甲氧基-6-甲基-5-[3,7,11-三甲基-2,6,10-十二碳三烯]-2-環己烯酮(0.35mg~21mg)、輔酶Q3(0.23mg~10mg)、樟黃素C(0.24mg~9mg)、樟菇酸B(0.09mg~5mg)、樟菇酸H(0.25mg~13mg)、樟菇酸K(0.15mg~8mg)、樟菇酸A(0.005mg~2mg)、樟菇酸C(0.03mg~2mg)、去氫硫色多孔菌酸(0.14mg~11mg)及去氫齒孔菌酸(0.15mg~15mg)。
4. 一種如請求項1項所述之牛樟芝活性組成物之用途，其係用於製備具有免疫調節功效之醫藥組成物，其中該免疫調節功效為特異性或非特異性免疫調節功效。
5. 如請求項4項所述之牛樟芝活性組成物的用途，其中該醫藥組成物具備活化免疫T細胞、自然殺手細胞與吞噬細胞之能力。
6. 如請求項4項所述之牛樟芝活性組成物的用途，其中該醫藥組成物具備增加細胞激素(cytokine)IL-2、INF-γ及降低IL-4之分泌之能力。
7. 如請求項4項所述之牛樟芝活性組成物的用途，其中該醫藥組成物具備係增加血清抗體免疫球蛋白IgG、OVA-IgG2a及減緩OVA-IgE之分泌之能力。
8. 一種如請求項1項所述之牛樟芝活性組成物的用途，其係用於製備具有護肝功效之醫藥組成物。
9. 如請求項8項所述之牛樟芝活性組成物的用途，其中該護肝功效包含降低血清中丙胺酸轉胺酶(alanine aminotransferase,ALT)和天門冬胺酸轉胺酶(aspartate aminotransferase,AST)之升高趨勢，及提高肝臟中抗氧化酵素GPx(榖胱甘肽過氧化酶)、GRd(榖胱甘肽還原酶)與CAT(過氧化氫分解酶)之活性。
10. 如請求項8項所述之牛樟芝活性組成物的用途，其中該護肝功效包含改善肝臟門脈週邊發炎(空泡)、肝臟細胞壞死及肝纖維化等發炎狀況。
11. 一種具有免疫調節功效之保健食品組成物，包含劑量340mg/kg至861mg/kg之如請求項1項所述之牛樟芝活性組成物。
12. 一種具有護肝功效之保健食品組成物，包含劑量175mg/kg至438mg/kg之如請求項1項所述之牛樟芝活性組成物。